ES2242042T3 - Compuestos generadores de oxido de nigtrogeno para el tratamiento de infecciones subungueales. - Google Patents
Compuestos generadores de oxido de nigtrogeno para el tratamiento de infecciones subungueales.Info
- Publication number
- ES2242042T3 ES2242042T3 ES02747613T ES02747613T ES2242042T3 ES 2242042 T3 ES2242042 T3 ES 2242042T3 ES 02747613 T ES02747613 T ES 02747613T ES 02747613 T ES02747613 T ES 02747613T ES 2242042 T3 ES2242042 T3 ES 2242042T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- acid
- nitrite
- accordance
- nail
- formulations
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q3/00—Manicure or pedicure preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/04—Nitro compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Birds (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
La utilización de componentes generadores de óxido de nitrógeno en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una infección subungueal, en que los componentes consistan en un nitrito y un ácido orgánico, cada uno de los cuales se aplique por separado del otro antes de su utilización.
Description
Compuestos generadores de óxido de nitrógeno para
el tratamiento de infecciones subungueales.
La presente invención versa sobre la utilización
de compuestos generadores de óxido de nitrógeno para el tratamiento
de infecciones de las uñas de los dedos de las manos y de los
pies.
Las infecciones en las uñas son comunes y, cuando
son graves, pueden resultar dolorosas y desfigurantes, y afectan a
la calidad de vida de los pacientes. Los hongos implicados en las
infecciones de las uñas son principalmente los que causan el pie de
atleta (o tinea pedis) que se extiende desde el espacio
interdigital hasta la uña. La infección fúngica de la uña se
denomina onicomicosis, a la que se conoce también con el nombre de
tinea unguium, onicomicosis dermatofítica o "tiña" de
la uña.
Los patógenos aislados con mayor frecuencia en la
onicomicosis son los dermatofitos, en especial el Trichophyton
rubrum (uñas de los dedos de los pies 56%, uñas de los dedos de
las manos 36%) y el Trichophyton mentagrophytes (uñas de los
dedos de los pies 19%, uñas de los dedos de las manos 11%). Las
infecciones por levaduras son menos comunes, pero están normalmente
asociadas con la Candida albicans (uñas de los dedos de los
pies 10%, uñas de los dedos de las manos 30%).
Se calcula que al menos entre el 15 y el 20% de
la población con edades comprendidas entre los 40 y los 60 años
tiene onicomicosis, sufriendo esta situación entre un 25 y un 40%
de las personas que tienen más de 60 años, y únicamente un 3% o
menos de los que tienen menos de 18 años. Sin embargo, resulta
difícil asignar una cifra precisa a la incidencia real de la
onicomicosis, ya que al menos el 50% de los que la padecen no
procuran asistencia médica.
La onicomicosis leve puede estar limitada
simplemente a manchas u hoyitos blancos en la superficie de la uña,
pero, en casos más avanzados de la enfermedad, los síntomas
incluyen la hiperqueratosis del lecho de la uña, el engrosamiento
de la uña, la decoloración y la onicolisis (separación de la uña de
su lecho).
Hay muchos factores que predisponen a los
pacientes a la onicomicosis, incluida la diabetes mellitus, el
envejecimiento, la hiperhidrosis, la onicogrifosis, una lesión, una
circulación periférica pobre y la inmunosupresión. Es más común en
los hombres, y es rara antes de la pubertad y en mujeres
premenopáusicas.
La onicomicosis es una enfermedad fúngica, y las
condiciones que contribuyen al crecimiento de hongos tienden a
fomentar el desarrollo de la onicomicosis. En consecuencia, el 80%
de los casos afectan el hallux, o dedo gordo plantar, y
están generalmente asociados con, por ejemplo, el calzado apretado y
la sudoración excesiva, tales como las que se dan a menudo en las
actividades deportivas. Sin embargo, las lesiones son también un
factor etiológico significativo, especialmente en las uñas podales,
resultando especialmente susceptible el dedo gordo del pie.
No está completamente esclarecido cómo se contrae
la enfermedad, pero la onicomicosis es contagiosa. Las infecciones
pueden proceder de la propagación a las uñas de los hongos de la
piel, o directamente de otras personas con infecciones en la piel o
en las uñas. En el caso de la infección de las uñas podales, el
hongo del pie de atleta puede propagarse a la uña, mediando a menudo
una lesión de la uña, lo que permite la entrada al hongo.
Los tratamientos para la onicomicosis, a pesar de
lo generalizado de la enfermedad, son un tanto limitados, al ser la
enfermedad muy resistente a la medicación tópica. Los tratamientos
tópicos incluyen el Loceryl (amorolfina) y el Penlac (ciclopirox),
pero la proporción de curaciones es baja (< 10%), y los tiempos
de tratamiento largos (hasta de 12 meses), debido a la pobre
penetración a través de la uña, al igual que a la escasa actividad
contra los organismos causantes del trastorno.
Un problema especial en el tratamiento de la
onicomicosis y otras infecciones de las uñas es que la infección
está generalmente localizada en el lecho de la uña, o próxima a él,
al igual que en la propia uña. Por eso, la infección está protegida
del ataque externo por la propia uña que está desfigurando. El
tratamiento puede incluir la eliminación de parte de la uña para
poner al descubierto los organismos infecciosos, aunque no resulta
deseable eliminar demasiada uña. Además, la duración del
tratamiento es por lo general de hasta un año, o más.
En fechas recientes se han desarrollado
tratamientos orales (terbinafina e itraconazole) que han logrado
una proporción más elevada de curación (\sim 70%) y periodos de
tratamiento más breves (12 - 16 semanas). Sin embargo, hay
inquietud en cuanto a la seguridad de estas nuevas terapias orales,
incluyendo cuestiones relativas a su toxicidad para el hígado,
severas reacciones cutáneas e interacciones con otros
medicamentos.
Por todo lo anterior, existe una necesidad de una
terapia tópica o transungueal que proporcione tasas de curación
similares o mejores que las de tales terapias orales, pero que
conlleve menos incertidumbres relativas a su seguridad.
Sorprendentemente, ahora hemos descubierto que
los óxidos de nitrógeno son capaces de penetrar la uña y son
eficaces en el tratamiento de los organismos causantes de las
infecciones subungueales.
Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente
invención presenta un preparado generador de óxido de nitrógeno para
su utilización en el tratamiento de las infecciones
subungueales.
El óxido nítrico (NO) es un producto fundamental
de los compuestos de la invención, y se sabe perfectamente que está
dotado de efectos antimicrobianos y para la curación de heridas
[compárense la patente WO 95/22335, y Hardwick et al.,
(2001), Clin. Sci., 100, 395-400].
La aplicación tópica a la piel de preparados
generadores de óxido nítrico resulta conocida en la especialidad en
casos de tratamiento de infecciones cutáneas fúngicas, como la
Tinea pedis (pie de atleta) [véase, por ejemplo, Weller
et al, (J. Am. Acad. Dermatol., abril de 1998;
38(4): 559-563, XP002111730)], en el
tratamiento de las infecciones víricas cutáneas [WO 99/44622] y en
el tratamiento de situaciones en las que la vasoconstricción es el
problema subyacente, como en el síndrome de Reynaud [véase, por
ejemplo, Tucker et al., (Lancet, 354, 9191, 13 de
noviembre de 1999, 1670-1675)].
La patente EP0630650 presenta una formulación
tópica para el tratamiento local de los cambios en la piel y en la
membrana mucosa. La formulación incorpora ácido nítrico acuoso,
productos de reducción a base de nitratos y un ácido alcanoico
rebajado.
El óxido nítrico se sintetiza en el cuerpo en el
endotelio vascular y en las neuronas, al igual que en los
macrófagos activados. Se observan niveles relativamente elevados de
NO en el sudor. Aunque no se conoce con precisión cómo mata el NO
los microorganismos, se especula que el NO sirve para alterar el ADN
bacteriano, o bien que interfiere con la función de las enzimas
bacterianas que contienen metales de transición.
El óxido nítrico, para usos terapéuticos, es
fácil de producir mediante la reacción de un nitrito con un ácido,
en especial de un nitrito inorgánico con un ácido orgánico. Esto da
por resultado la producción de la forma molecular del ácido
nitroso, que se disocia con facilidad en una molécula de agua y una
molécula de trióxido de dinitrógeno, la cual, a su vez, de disocia
para formar NO y dióxido de nitrógeno. Las reacciones se muestran a
continuación.
NO_{2} + H^{+}
\rightleftharpoons
HNO_{2}
2HNO_{2}
\rightleftharpoons N_{2}O_{3} +
H_{2}O
N_{2}O_{3}
\rightleftharpoons NO +
NO_{2}
Aunque el N_{2}O_{3} es un compuesto
intermedio en esta reacción, existe evidencia de que es capaz de
mantener una existencia independiente, y de que puede ser
responsable al menos en parte de los efectos fungicidas asociados
con los preparados de la presente invención.
En presencia de un agente reductor, tal como el
ácido ascórbico, es más eficiente la reacción del trióxido de
dinitrógeno para formar NO, y puede representarse, por ejemplo, de
la siguiente manera:
N_{2}O_{3} +
C_{6}H_{8}O_{6} \rightarrow 2NO + H_{2}O
+C_{6}H_{6}O_{6}
El ácido nitroso puede generarse con facilidad,
por ejemplo, mediante la acción de un ácido sobre un nitrito, en
especial cuando la sal resultante sea insoluble.
Obsérvese que aunque en la presente invención
puede emplearse cualquier fuente adecuada de óxidos de nitrógeno, en
especial los capaces de proporcionar al menos una fracción de NO,
por lo general se prefiere que los óxidos de nitrógeno que se
generen se atengan a una o varias de las reacciones anteriores.
Las formulaciones de la presente invención pueden
ser cualesquiera que sean adecuadas para proporcionar óxidos de
nitrógeno. En un ejemplo de realización, lo ideal es que la
proporción de NO generada por los preparados de la presente
invención alcance al menos el 50%, o, mejor aún, el 80% como mínimo.
En el caso de que el único ácido utilizado sea un ácido reductor,
entonces la proporción puede elevarse a cualquier cifra hasta
llegar a un contenido del 100% de NO en los óxidos de nitrógeno
generados.
Por "generación de óxido de nitrógeno" debe
entenderse que las formulaciones de la presente invención sirven
para liberar óxido de nitrógeno in situ, o sea, en la
ubicación en la que se apliquen, que por lo general será sobre una
uña infectada. En su forma más simple, y en un ejemplo de
realización, esto puede consistir en una pomada o gel, o, en
realidad, en cualquier otro vehículo tópico que sea apropiado, en
que se haya disuelto NO gaseoso, por ejemplo, y que, una vez
aplicado a la uña, libere NO.
Dado que únicamente se requieren cantidades muy
pequeñas de óxidos de nitrógeno para que este tratamiento resulte
eficaz, carece de importancia que el gas escape en algún otro sitio
que no sea la entreuña, o que en realidad únicamente penetren la
uña pequeñas cantidades, o que la cantidad de óxido de nitrógeno
resulte atenuada en su paso por la uña, siempre y cuando suficientes
óxidos de nitrógeno alcancen el lugar de la acción para que tengan
un efecto fungicida o inhibidor.
Aunque el NO y sus precursores son por lo general
compuestos de duración fugaz, con vidas medias que pueden llegar a
ser solamente de unos segundos, hemos establecido que pueden pasar
a través de las uñas humanas en cantidades suficientes para tratar
infecciones subungueales. Esto resulta tanto más sorprendente,
puesto que no solamente puede llevar varias horas antes de que haya
evidencia alguna de que el NO u otros óxidos de nitrógeno atraviesen
la uña, sino que, una vez que empiezan a liberarse NO u otros
óxidos de nitrógeno, la liberación puede continuar durante hasta 10
horas, o aún más. Sin estar atados a la teoría, parece que la uña
actúa a modo de depósito, o almacén, y que adsorbe y absorbe el NO o
su precursor. El NO o el precursor atraviesan la uña, y al otro
lado se liberan el NO y otros óxidos de nitrógeno. Dada la corta
vida de estos gases, es posible que estén interactuando con las
proteínas de la uña, y difundiéndose lentamente a su través.
Aunque se conoce que el NO tiene un efecto
antifúngico, no está claro que sea necesariamente el NO lo que
penetra la uña, y puede ser que el NO sea simplemente regenerado
una vez que el precursor haya atravesado la uña. De hecho, los
preparados para producir grandes cantidades de NO no tienen
necesariamente el mayor efecto en la presente invención. Sin estar
atados a la teoría, es posible que no resulte ventajoso generar
eficiente y rápidamente NO en la superficie de la uña, puesto que
el NO, debido a su breve vida media, pueda no difundirse en
cantidad a través de la uña. En vez de eso, parecen más eficientes
aquellas composiciones que toman más tiempo para generar NO en lo
que respecta al transporte a través de la uña del elemento
fungicida, ya sea ese elemento NO u otro óxido de nitrógeno.
En esencia, los preparados de la invención que
contienen únicamente ácido ascórbico u otro ácido reductor similar
y un nitrito tienden a producir grandes cantidades de NO con
rapidez. Aunque la uña es un tanto porosa, si el NO se produce con
demasiada rapidez puede haber un tiempo insuficiente para que la uña
adsorba gran parte del NO producido, y los experimentos demuestran
que estos preparados están asociados con un flujo global inferior
de NO a través de la uña.
El nitrito de plata es capaz de producir NO en
presencia de ácidos, pero tiene una eficacia relativamente baja, de
modo que no se le considera idóneo. Sin embargo, se descubrió que
tanto el nitrito de sodio como el nitrito de potasio reaccionan con
los ácidos acético, cítrico, maleico y málico, por ejemplo, para
producir zonas de inhibición en las pruebas de fungicida.
Se descubrió que los niveles de éxito en la
erradicación del micelio fúngico para los nitritos de sodio y de
potasio, cuando se combinan con los ácidos acético, cítrico,
maleico o málico, era similar, produciendo todos ellos grandes
zonas de inhibición. De modo similar, se descubrió que los
experimentos realizados con esporas mostraban efectos antifúngicos
similares para las mismas mezclas de ácidos y nitritos. Los
descubrimientos generales fueron que las disoluciones producían
mayor actividad antifúngica que las cremas, mientras que se
descubrió que los micelios eran más susceptibles a los efectos
antifúngicos que las esporas. Sin embargo, las cremas por lo
general producen óxido de nitrógeno durante más tiempo, lo que puede
suponer una ventaja cuando se desee prolongar la generación de NO u
otro óxido de nitrógeno en la superficie de la uña para potenciar
la penetración a través de la uña.
La cantidad de NO producida por las mezclas de
ácidos y nitritos no se corresponde necesariamente con el tamaño de
la zona de inhibición, aunque hay una correlación general con la
cantidad global de óxidos de nitrógeno producidos. Por ejemplo, las
disoluciones de ácido ascórbico y nitrito que producían grandes
cantidades de NO únicamente tenían una actividad antifúngica
modesta en algunas pruebas, mientras que las combinaciones de
nitrito potásico y de ácido málico producen únicamente la mitad,
aproximadamente, de la cantidad de NO que el ácido cítrico, y, pese
a ello, los tamaños de las zonas de inhibición no fueron
necesariamente nada menores.
La liberación diferida de óxido de nitrógeno
desde el otro lado de la uña resulta particularmente útil, ya que
por lo general requiere al menos 5 minutos de exposición a la
sustancia activa para lograr la muerte del hongo. La tasa más alta
de eliminación se observa con aproximadamente unos 30 minutos,
aunque la actividad antifúngica por lo general continúa aumentando
hasta 2 horas tras la exposición al gas activo.
El preparado generador de óxido de nitrógeno
puede adoptar cualquier forma que resulte apropiada. Sin embargo,
debe observarse que, de cara a la activación de la generación de
óxidos de nitrógeno, los reactivos deberían mantenerse aparte hasta
que en efecto se requiera el óxido de nitrógeno. Aunque, por lo
general, esto es lo ideal, no resulta necesariamente imprescindible
que se dé. Por ejemplo, puede formarse un parche oclusivo con un
gel, o una matriz, en los que se carguen los ingredientes
generadores del óxido de nitrógeno, estando a continuación
protegido el parche por un envoltorio adecuado para evitar el
escape gaseoso.
En un parche semejante, lo ideal es que la matriz
o el gel sean adhesivos, y que la fuerza de adherencia sea
suficiente para sobreponerse a cualquier tendencia que tenga el
óxido de nitrógeno a escapar y salirse del envoltorio, aunque debe
notarse que la fuerza del adhesivo no debería ser tal que el
envoltorio no pueda quitarse de forma satisfactoria para permitir
la aplicación del parche. Además, es preferible suministrar en el
parche o en la matriz de estabilizantes adecuados, tales como
agentes queladores para prolongar la vida del NO o para reducir la
velocidad a la que se produce. Además, dado que el NO es más soluble
en sustancias no acuosas y lipídicas, la adición de tales
sustancias al tratamiento puede prolongar la actividad y la
transferencia del NO a la uña y lecho ungueal afectados.
No obstante, los preparados que ya contienen NO
libre no resultarán estables generalmente durante mucho tiempo, y
deberían ser usados por los pacientes lo antes posible tras su
preparación.
Lo ideal es proporcionar los preparados de la
presente invención en partes múltiples. Cada una de estas partes,
por separado, puede consistir en activos o reactivos, que, al
mezclarse, sirven para generar óxidos de nitrógeno. Por ello, un
primer preparado puede incorporar un nitrito adecuado suministrado
en un vehículo apropiado. Un segundo preparado puede incorporar un
ácido adecuado. A continuación pueden mezclarse los dos preparados,
y lo ideal es que se mezclen de forma íntima, y luego aplicarse a
la uña infectada, o pueden mezclarse in situ. Aunque por lo
general se desea minimizar el número de componentes que es necesario
mezclar para lograr el preparado final generador de óxido de
nitrógeno, debe observarse que pueden suministrarse en un número
cualquiera. En particular, puede ser preferible facilitar, por
ejemplo, un tercer compuesto que contenga un ácido reductor. Sin
embargo, cuando se usa un ácido reducido, tal como el ascorbato,
suele ser preferible usarlo por sí solo como ácido, o suministrarlo
conjuntamente con el ácido primario en un preparado aparte del
nitrito.
El componente con nitrito puede agregarse en una
variedad de excipientes, incluyendo, por ejemplo, el Eudragit L100,
el carbopol, la carboximetilcelulosa, o la hidroximetilcelulosa, y
el componente ácido puede agregarse en otro excipiente adecuado,
tales como el carbopol, la carboximetilcelulosa, la
hidroximetilcelulosa, la metilcelulosa o en una base acuosa. Otros
excipientes, como el alcohol polivinílico, el glicol de propileno,
la polivinilpirrolidona (povidona), la gelatina, la goma guar, y la
goma laca tienen su lugar para contribuir a la formación de
películas, útiles para mantener el preparado in situ.
En especial, los preparados adecuados para
introducir sustancias que atraviesen la dermis y el stratum
corneum pueden no resultar normalmente apropiadas para la uña,
ya que la uña es, de hecho, una sustancia hidrófila, mientras que
el stratum corneum es normalmente hidrófobo. Por eso, puede
ser mejor que las sustancias iónicas e ionizables fácilmente
solubles en agua logren traspasar la uña, y se prefieren los
excipientes que fomentan esto.
Por lo general, es mejor utilizar formulaciones
de base acuosa para contribuir a la penetración. Tales
formulaciones pueden ser disoluciones fáciles de extender, pero,
dado que parece que resulta óptima una cierta duración mínima de
exposición de la uña al NO y/u otros óxidos del nitrógeno, suele
preferirse por lo general que cualquier generación de óxidos de
nitrógeno no acabe con demasiada celeridad para permitir así tiempo
suficiente para que se dé la asimilación por la entreuña, y se
prefiere normalmente que las formulaciones tengan la forma de
geles, cremas, lociones, pomadas u otra forma espesa, tal como las
lacas. Pueden lograrse un adecuado espesamiento y otras
características mediante la utilización de excipientes adecuados,
como se ha descrito con anterioridad. Por ejemplo, se ha demostrado
que el Eudragit tiene la capacidad de alterar el perfil de
liberación de los óxidos de nitrógeno de la formulación.
En un ejemplo de realización ideal, la
composición consiste en preparados acuosos separados de un ácido
orgánico y de un nitrito. Aún mejor es que cada preparado esté en
forma de gel, loción, pomada o tintura que resulte adecuado para
mezclarlo con el otro, que también se escoge de un grupo similar. Se
prefiere en especial que uno o ambos preparados incorporen un
excipiente adecuado para retardar la liberación de óxidos de
nitrógeno al mezclarse. En el caso del nitrito, un excipiente
idóneo es el Eudragit, por ejemplo el Eudragit L100. Otros
excipientes adecuados para ambos son los que se han puesto como
ejemplo anteriormente.
Los excipientes escogidos pueden tener por objeto
simplemente retardar la liberación del óxido, pero por lo general
poseerán también cualidades espesantes, siendo determinada por lo
general la cantidad del excipiente por la cantidad necesaria para
proporcionar un gel adecuado. Esto puede variar dentro de unos
límites perfectamente conocidos, como puede determinarse y
reconocerse con facilidad por parte de las personas versadas en la
especialidad. No obstante, a modo de guía, las cantidades adecuadas
pueden variar entre el 1% y el 40%, aunque se da una gran
disparidad entre distintos excipientes. Por lo general, los
excipientes ideales necesitan ser usados solamente en cantidad de
entre un 2% y un 10%, como, digamos, del 3% al 5%, mientras que los
usados principalmente para la gelificación se usarán en cantidades
adecuadas para conseguir tal fin, ya se usen en combinación, o por
separado. Por ejemplo, el glicol de polietileno se usa debidamente
como agente que aumenta la viscosidad en cantidades que oscilan
entre el 10% y el 50%, pero más preferentemente entre el 20% y el
35% peso/volumen. Los agentes espesantes adecuados incluyen los
carbopoles y los derivados de la celulosa, y los tales se emplean
típicamente en cantidades que oscilan entre el 2% y el 10%,
dependiendo de la naturaleza de la formulación requerida. Una
formulación ideal es un gel fácil de extender.
Debe observarse que los preparados de la
invención pueden incorporar otros componentes, según convenga, tales
como antioxidantes, conservantes, colorantes y perfumes, al igual
que agentes activos superficiales y/o agentes penetrantes, según
sea pertinente, aunque las combinaciones acuosas de nitrito y ácido
son perfectamente capaces de suministrar óxidos de nitrógeno a
través de la uña sin necesidad alguna de tales componentes
adicionales.
Aunque la presente invención se ilustra aquí por
lo general con respecto a dos formulaciones que se mezclan para
proporcionar el preparado final generador de óxido de nitrógeno,
debe observarse que tales referencias incluyen las alusiones a más
de dos formulaciones, a menos que resulte obvio o se indique lo
contrario.
Los preparados de la presente invención pueden
incorporar cualquier vehículo apropiado para realizar mezclas. Lo
que es importante es que el ácido y el nitrito, o el precursor del
nitrito, sean capaces de reaccionar de tal modo que se generen los
óxidos de nitrógeno deseados. Por ello, al menos una de las
formulaciones iniciales que han de dar el preparado final debería
idealmente incorporar un componente acuoso para permitir que tenga
lugar la reacción generadora de óxido de nitrógeno. Aún mejor sería
que las dos formulaciones iniciales incorporasen componentes
acuosos para facilitar la mezcla de los ingredientes, aunque, cuando
se desee que los ingredientes reaccionen lentamente, la cantidad de
agua puede minimizarse en una o ambas formulaciones.
No existe restricción alguna en cuento a los
tipos de los preparados iniciales que puedan mezclarse para lograr
el preparado final, siempre que el preparado final sirva para
generar óxidos de nitrógeno. A este respecto, y en todo el
documento, debe observarse que la referencia a "óxidos de
nitrógeno" incluye la referencia al NO al 100%, aunque esto no
resulte necesariamente deseable ni sea lo ideal.
Por ejemplo, los preparados iniciales pueden
estar en cualquier forma adecuada, como, por ejemplo, líquida, gel
o sólida, aunque, cuando uno sea sólido, entonces lo mejor es que
el otro sea líquido o tenga forma de gel. En la categoría de
líquido se incluyen las disoluciones, las suspensiones y los
coloides, y tales consideraciones se aplican también a los geles,
que por lo general abarcan cualquier estado entre líquido y
sólido.
Más en concreto, los geles incluyen tales estados
como las cremas, las pomadas, las tinturas, las ceras y las
lociones, aunque estas últimas pueden cuadrar en el epígrafe de
líquidos, dependiendo de las propiedades de las mismas. Debe
observarse que no hay ninguna exclusión específica, siempre que el
líquido, el líquido-gel en fase sólida sirva de
vehículo del ingrediente activo.
Los vehículos sólidos pueden incluir matrices en
parches, por ejemplo, o ceras de cadena más larga.
Los preparados iniciales pueden ser mezclados
debidamente, ya sea antes de la aplicación o in situ, para
dar lugar al preparado final para generar óxidos de nitrógeno.
Tales mezclas pueden ser, por ejemplo, sencillas mezclas gel/gel
que pueden luego aplicarse a la uña y dejarlas actuar. Pueden
también consistir en dos líquidos que, conjuntamente, forman un
gel, laca, sólido o tintura, y, de modo similar, dos geles, o un
líquido y un gel, pueden servir para solidificar, formar una laca,
o bien formar un entorno protector para generar, mantener y
administrar óxidos de nitrógeno.
En un ejemplo de realización idóneo, puede
aplicarse un gel a la uña y luego se aplica sobre el gel, a modo de
emplasto, un parche dotado de una matriz que contenga el otro
ingrediente activo, y, una vez en contacto, los ingredientes
activos interactúan lentamente para generar óxido de nitrógeno.
En otro ejemplo de realización idóneo, los
ingredientes activos pueden administrarse a modo de tinturas o
lacas. Un componente, el nitrito por ejemplo, puede aplicarse con
facilidad y dejarse secar, y a continuación pintarse el segundo
encima. El agua que hay en el segundo permite que tenga lugar la
reacción. Si se desea, puede emplearse un disolvente de secado
rápido, como el alcohol o el acetato, aunque una ventaja de la
presente invención es que no son necesarios tales disolventes y
potenciadores de la permeabilidad. Sin embargo, puede resultar
deseable facilitar ingredientes de una película en los preparados
aparte, de modo que se dé, por ejemplo, una reacción de
polimerización al efectuar la mezcla. Puede proporcionarse un
catalizador en un preparado, mientras que puede suministrarse una
selección de monómeros polimerizables en el otro. De forma
alternativa, la evaporación del disolvente puede permitir que un
polímero del preparado se gelifique o endurezca aún más.
La fase de generación de óxido de nitrógeno de
los preparados de la invención va decreciendo, por lo general, a lo
largo de dos o tres horas, y frecuentemente menos, aunque el efecto
de penetración en la uña proporciona óxidos de nitrógeno al otro
lado de la uña por mucho más tiempo, y a menudo hasta que de hecho
cesa la producción de óxido. Durante la producción de óxido, es
preferible mantener in situ el preparado mezclado, lo que
puede lograrse mediante el endurecimiento del preparado. De manera
alternativa, puede resultar deseable proteger la uña, por ejemplo,
con un vendaje oclusivo.
En otro ejemplo de realización idóneo, la matriz
del parche o emplasto es no acuoso, sino hidrófilo, y contiene una
mezcla de los principios activos en forma sustancialmente seca. En
este caso, la expresión "forma seca" puede incluir cristales
que incorporen agua de cristalización, por ejemplo. Por ello, aunque
los dos ingredientes activos están presentes en la matriz del
parche o emplasto, no pueden reaccionar en ausencia de cantidades
adecuadas de agua que actúe como disolvente para proporcionar un
entorno reactivo. Cuando se desee aplicar el parche o emplasto,
puede quitarse cualquier envoltorio protector y puede aplicarse una
cantidad de agua adecuada, como algunas gotas, a la matriz para
activar los ingredientes activos. A continuación el parche activado
puede aplicarse a la uña para permitir que los óxidos de nitrógeno
generados actúen.
Este principio de suministrar un preparado
sustancialmente seco al cual se añade agua puede también aplicarse
a otros preparados. En tales casos, debe observarse que el término
"seco" se aplica al contenido en agua libre, de modo tal que,
aunque el preparado pueda ser, por ejemplo, un gel, el contenido en
agua sea extremadamente bajo, del orden del 1%, o aún menor. Es
preferible que tales preparados sean sustancialmente anhidros.
Los ingredientes activos de los preparados de la
presente invención pueden estar presentes en cualquier cantidad
adecuada, como resultará evidente a los versados en la
especialidad. En general, es preferible que la cantidad de nitrito
sea aproximadamente del 0,5 al 30%, en peso, del preparado final.
Aún mejor es que la cantidad de nitrito, o de su precursor, sea del
1 al 20% y, especialmente, del 1 al 15%, o, mejor, del 5 al 15%.
Unos límites ideales oscilan entre el 1 y el 10%, o entre el 2 y el
10%. Normalmente son preferibles concentraciones más elevadas, y
resulta ideal una concentración mínima del 8 - 10%. En las cremas,
lociones y geles, se prevé que el límite superior es el 13,5%,
aunque una formulación adecuada puede permitir niveles más
elevados.
Por lo general, resulta preferible que los
preparados de la presente invención se suministren en modo de dos
geles acuosos, dos lociones o dos cremas. Lo ideal es que uno
contenga ácido cítrico a una concentración de entre el 0,5% y el
20%, como, por ejemplo, el 0,75%, el 2,25%, el 4,5%, el 9% y el
13,5% en peso, y que el otro contenga nitrito sódico, como se ha
descrito con anterioridad, por ejemplo, al 0,5%, 1,5%, 3,0%, 6% o
9% en peso. Las concentraciones ideales están en torno al 10% para
cada componente activo, lo que proporciona un exceso adecuado de
ácido. También resulta preferible que ambos componentes activos
estén presentes en al menos un 2%, o mejor un 5% o más, en peso
para proporcionar una dosis efectiva de óxidos de nitrógeno que
deban traspasar la uña. En un ejemplo de realización idóneo, el
ácido está presente en una cantidad del 13,5% y el nitrito está al
9%, mientras que, en otra, cada uno está presente en cantidades en
torno al 10%. El ácido ideal es el ácido cítrico, mientras que el
nitrito ideal es el nitrito sódico.
Los geles, lociones o cremas pueden ser mezclados
en cualquier cantidad adecuada, por el paciente, por ejemplo, para
cubrir la parte afectada de la uña o uñas de la mano o del pie. Las
cantidades adecuadas de cada gel, loción o crema pueden estar entre
los límites de 0,05 a 1 g, o mejor entre de 0,1 a 0,5 g,
reaccionando los componentes para producir óxidos de nitrógeno.
Es preferible que el ácido esté presente al menos
en cantidades estoiquiométricas con respecto al nitrito o a su
precursor. Aún mejor es que el ácido esté presente en un exceso
estoiquiométrico, lo bastante para garantizar un entorno acidulante
para que una cantidad suficiente de nitrito genere óxidos de
nitrógeno. Aunque no es necesario que la totalidad del nitrito
genere óxidos de nitrógeno, es normalmente ineficiente permitir que
demasiado nitrito quede sin reaccionar, y resulta preferible que la
mayor parte del nitrito se convierta en óxidos de nitrógeno.
Por lo general, resulta preferible que el ácido
esté presente en una cantidad suficiente para que el preparado
final tenga un pH de 5, o inferior, especialmente un pH de 4, o
inferior. Sin embargo, la reacción generadora de óxido de nitrógeno
puede tener lugar con valores de pH superiores, y un pH de 5,5 o
incluso de 6 puede resultar aceptable, en especial en presencia de
un exceso de ácidos reductores, de modo que debe observarse que el
pH de la composición final no forma parte esencial de la presente
invención.
No hay restricción alguna en cuanto al nitrito,
salvo que sea en general farmacéuticamente aceptable. Este requisito
ni siquiera es una consideración fundamental, ya que los preparados
finales se aplicarán, por lo general, a la uña del paciente, de
modo que el contacto dérmico se minimiza, minimizándose así, en
consecuencia, la exposición sistémica potencial. No obstante, por
consideraciones de seguridad, es preferible que los nitritos, o sus
precursores, sean seguros, en general, para la administración
tópica.
La naturaleza del nitrito, para simplificar, será
generalmente inorgánica y soluble en agua, al menos en parte. Los
ideales son los nitritos de metales alcalinos y los nitritos de
metales alcalinotérreos, aunque pueden usarse también otros
nitritos apropiados, como los compuestos de metales de transición,
según su adecuación, sobre todo su solubilidad. En particular, son
preferibles los compuestos de sodio, potasio, magnesio y bario,
prefiriéndose normalmente los compuestos de sodio y potasio desde
un punto de vista de costes y de disponibilidad.
Los agentes acidulantes adecuados incluyen los
ácidos inorgánicos, pero, debido a su inadecuación farmacéutica
general, no son normalmente los más idóneos. Por ello, resultan más
preferibles los ácidos orgánicos, en especial los capaces de formar
una disolución con agua que dé un pH de 4 o menos. Tales ácidos
incluyen el ácido fórmico, el ácido málico, el ácido maleico, el
ácido acético, el ácido láctico, el ácido cítrico, el ácido
benzoico, el ácido tartárico y el ácido salicílico, y debe
observarse que esta lista es incluyente, no excluyente. Otros
ácidos adecuados incluyen el ácido ascórbico y el ascorbil palmitato
que no forman necesariamente tales disoluciones acidulantes, pero
que son ácidos reductores y presentan la ventaja de aumentar la
cantidad de NO generado, y que pueden también servir para
estabilizar el NO, una vez generado. Debe observarse que la
referencia a los ácidos que aquí se hace incluye una referencia a
cualquier forma de ácido apropiado para proporcionar una disolución
acuosa del ácido, bien con agua sola, o bien, preferentemente, con
un agente desprotector fisiológicamente aceptable, que puede estar
presente inicialmente en la disolución o preparado con el nitrito,
antes de la mezcla. Ejemplos de formas adecuadas incluyen las
formas hidratadas y anhidras del ácido, tal como el ácido cítrico
monohidratado y su forma anhidra.
Debido a las cualidades ventajosas de los ácidos
reductores, en un ejemplo de realización es preferible proporcionar
un ácido reducctor aparte del ácido primario cuando se forme la
composición final. Las proporciones adecuadas están entre el 5% y
el 200% del ácido primario, siendo preferibles los límites entre el
5% y el 150%, y aún más entre el 5 y el 40% del ácido primario, y,
más en especial, entre el 10 y el 20%.
La presente invención también incluye la
utilización de compuestos generadores de óxido de nitrógeno en la
fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de
una infección subungueal.
Debe observarse que la presente invención incluye
juegos de partes que incorporan preparados como los definidos aquí.
En particular, en un ejemplo de realización idóneo, la presente
invención presenta un juego que incorpora un preparado acuoso de un
nitrito y un preparado acuoso de un ácido orgánico, que van por
separado, siendo los dos preparados adecuados para aplicar a una uña
que deba ser tratada de tal modo que el nitrito y el ácido puedan
reaccionar para liberar óxidos de nitrógeno que penetren en la uña.
Lo ideal es que los preparados vayan en concentraciones y/o formas
como se describen en el presente documento, especialmente como
lociones, geles, cremas o lacas, y que se suministren debidamente
en recipientes susceptibles de volver a taparse de modo que cada
juego pueda proporcionar dosis o aplicaciones múltiples.
Cualquier forma de infección subungueal puede ser
tratada usando preparados de la presente invención. Sin embargo,
por lo general es preferible para tratar la onicomicosis.
Las duraciones adecuadas de tratamiento por lo
general serán determinadas fácilmente por parte del médico
especialista. Sin embargo, por lo general es preferible seguir el
tratamiento hasta que se logre bien una cura real, o bien una cura
clínica completa. En el primer caso, los organismos causantes
mueren, pero la uña puede seguir desfigurada, ya que las uñas de
los dedos de las manos pueden requerir 6 meses para crecer,
mientras que las uñas de los dedos de los pies pueden requerir
hasta un año. Se logra una cura clínica cuando la uña afectada no
muestra signos adicionales de infección y, como esto depende del
crecimiento de la uña, puede llevar bastante más que la cura
real.
Es preferible, en general, seguir el tratamiento
durante al menos dos meses, o mejor tres meses, y en especial entre
3 y 6 meses. En realidad, nuestras pruebas indican que es probable
que los organismos causantes mueren a los pocos días del comienzo
del tratamiento, de modo que un tratamiento de una semana puede ser
suficiente, en especial si los preparados se aplican dos o tres
veces por día, por ejemplo. Se prevé que un régimen de tratamiento
de tres meses sea adecuado para efectuar una curación, permitiendo
esto además que el paciente sea capaz de observar que le sale una
uña sana. Sin embargo, debe observarse que el tratamiento puede
continuarse todo lo que se desee, por ejemplo, hasta que se logre
la curación clínica, que puede llegar a 14 meses o más, dando lugar
a la curación y al crecimiento de la uña.
Las dosis y las cantidades de los preparados que
deben aplicarse pueden depender de parámetros tales como la edad y
el peso del paciente, pero, en especial, pueden depender aún más de
las dimensiones, tales como el espesor y el área, de la uña del
receptor, y serán determinadas fácilmente por el médico
especialista. Es una ventaja de la presente invención que solamente
hacen falta pequeñas cantidades de óxidos de nitrógeno para que
resulten efectivas, de modo que no es necesariamente un
requerimiento que haya recetas diferentes para distintos pacientes,
y puede usarse un solo tipo de formulación para todos los pacientes.
Sin embargo, pueden usarse diferentes grados de concentración,
tales como, por ejemplo, formulaciones productoras de más cantidad
de óxido para condiciones persistentes en los dedos de los pies, y
formulaciones de menor concentración para los dedos de las manos.
La concentración no tiene relación necesariamente con la cantidad
de óxidos producidos, pero puede igualmente relacionarse con el
tiempo que son generados los óxidos por un preparado dado.
Administrar los preparados de la invención dos o
más veces al día, preferentemente dos o tres veces al día, forma un
ejemplo de realización ideal de la invención. Esto puede suponer,
en efecto, una contribución de los niveles de óxidos de nitrógeno
en la zona infectada de la uña más o menos en el momento en que el
efecto de la dosis anterior se agote. Pueden elegirse las dosis para
que se mantenga una transferencia continua de óxidos de nitrógeno a
través de la uña, o una transferencia discontinua, según se
desee.
Los preparados de la presente invención pueden
hacerse de cualquier modo adecuado. Cuando los preparados
incorporan componentes acuosos, suele ser preferible disolver en
agua, o en una formulación acuosa, los ingredientes activos, que
pueden luego mantenerse aparte de los otros ingredientes activos
hasta que sea necesario. Por lo general, cualquier excipiente podrá
añadirse después de la disolución del ingrediente activo primario.
Las formulaciones secas pueden formarse sustancialmente completas,
salvo la adición de agua, que se añade cuando se desee activar la
composición.
Cuando el preparado final consista en líquidos o
geles, éstos pueden aplicarse por cualquier medio que sea adecuado,
incluyendo la mezcla manual. Otros medios pueden incluir una
jeringuilla de doble cuerpo o un aplicador de accionamiento dual,
por ejemplo, en que la mezcla final se haga con el dedo o una
espátula, o mediante otros instrumentos que sean apropiados.
Debe observarse que los siguientes Ejemplos no
son limitadores en lo que a la presente invención se refiere. Los
Ejemplos hacen referencia a los dibujos adjuntos, en los que:
La Figura 1 ilustra una prueba usada para medir
las zonas de inhibición;
la Figura 2 muestra la constitución de una célula
de Franz usada para medir la evolución de los óxidos de nitrógeno a
partir de los preparados de la invención;
la Figura 3 muestra la producción de NO con
respecto al tiempo, a partir de una selección de agentes
gelificantes que contienen nitritos y ácidos;
la Figura 4 muestra las zonas de inhibición para
ciertas formulaciones en forma de disoluciones y de gel;
la Figura 5 muestra las zonas de inhibición, para
ciertas formulaciones investigadas, en presencia de agentes
reductores;
la Figura 6 muestra las zonas de inhibición, para
ciertas formulaciones investigadas, en presencia de
\alpha-tocoferol y de otros agentes
reductores;
\newpage
la Figura 7 muestra la máxima media de las
concentraciones de NO y NO_{2}/NO_{3} producidas por diversas
formulaciones;
la Figura 8 muestra el tiempo medio para alcanzar
la producción máxima de NO a partir de las diversas formulaciones
investigadas;
la Figura 9 muestra la cantidad de NO que
atravesó una uña a partir de disoluciones con 10% de ácido y 10% de
nitrito en un periodo de 18 horas;
la Figura 10 muestra la cantidad de NO que
atravesó una uña a partir de disoluciones con 5% de ácido y 5% de
nitrito en un periodo de 18 horas;
la Figura 11 muestra el sistema utilizado para
medir las cantidades de NO que atraviesan la uña en las Figuras 9 y
10;
la Figura 12 muestra la cantidad de NO que
atravesó una uña a partir de una disolución con 10% de ácido
ascórbico y 10% de nitrito en un periodo de 18 horas; y
la Figura 13 muestra la constitución de una
célula de Franz usada para medir las zonas de inhibición logradas
por los preparados de la invención aplicados a una uña humana.
Ejemplo de método
1
El método para ensayar la zona de eficacia en la
eliminación obtenida por diversas cremas fue el presentado en la
Figura 1. La clave muestra los componentes de la prueba. Un tapón
de un tubo Eppendorf de 2 ml se metió en una capa de agar dextrosa
de Sabouraud, y la superficie de agar se recubrió de esporas de
A. niger. Se usaron esporas de Aspergillus niger,
puesto que se sabe que son mucho más resistentes a la actividad
antimicrobiana que el micelio. Los platillos de Petri o bien se
incubaron a continuación para obtener un micelio, o se usaron de
inmediato para comprobar la capacidad de matar esporas de las
mezclas de la invención. Las mezclas de la invención se colocaron
en el tapón del tubo Eppendorf y se agitaron 10 veces con el extremo
de una pipeta. A estos platillos de pruebas también se los denomina
aquí zona de pocillo de las planchas de inhibición. Cada
formulación fue comprobada tres
veces.
veces.
Esta técnica proporciona resultados excelentes,
ya que la mezcla productora de NO no llega a estar en contacto con
el agar, y los controles mostraron que no había inhibición del
crecimiento junto al pocillo vacío. Esta verificación es también
sensible.
Los controles usados fueron los siguientes:
- i)
- un tapón Eppendorf vacío, únicamente en agar dextrosa de Sabouraud;
- ii)
- 0,1 ml de nitrito sódico (10%) en un tapón Eppendorf;
- iii)
- 0,1 ml de ácido cítrico (13,5%) en un tapón Eppendorf;
- iv)
- 0,1 ml de nitrito sódico (9%) en un tapón Eppendorf; y
- v)
- 0,1 ml de ácido cítrico (10%) en un tapón Eppendorf.
No se observó ninguna inhibición al crecimiento
en ninguno de los controles.
Ejemplo de método
2
Los dermatofitos asociados con la onicomicosis
son organismos de crecimiento lento que precisan un mínimo de 5
días para producir una capa completa de proliferación en una
plancha de agar dextrosa de Sabouraud incubada a 25ºC. Éste es un
factor limitante a la hora de explorar las formulaciones activas, ya
que lleva como mínimo una semana producir un juego de resultados.
Por lo tanto se decidió que, por lo general, convenía usar un
organismo indicador de crecimiento más rápido para evaluar la
efectividad de las formulaciones, aunque la efectividad de algunos
preparados fue confirmada en la T. rubrum. El organismo
escogido fue el hongo Aspergillus niger, organismo usado a
menudo para monitorizar la eficiencia de conservación y
antimicrobiana de las formulaciones cosméticas y
tópicas.
tópicas.
Se usó el A. niger como organismo
indicador de los hongos asociados con la onicomicosis, y las pruebas
se desarrollaron tanto sobre las esporas del hongo como sobre el
micelio. Cuando se usa el micelio, la zona de eliminación queda
indicada por la ausencia de desarrollo de las esporas del hongo
(negras/marrones), mostrando una zona blanca la inhibición del
crecimiento. En planchas con esporas de hongo, la inhibición del
crecimiento es indicada por la falta de desarrollo del micelio
(blanco/crema), de modo que únicamente se ve el agar.
Ejemplo de método
3
El NO producido fue medido usando un detector de
NO de WPI (World Precision Instruments, Inc.). Las mediciones de NO
precisan ser efectuadas en un entorno acuoso cuando se utiliza este
sensor, y los experimentos se adaptaron para acomodarse a este
requerimiento. Estos dispositivos tienen también la capacidad de
monitorizar la producción de NO_{2}/NO_{3} mediante la adición
de productos químicos y pequeñas modificaciones en los métodos.
Se montó y se colocó una célula de Franz sobre un
agitador magnético a temperatura ambiente con el agua desionizada
en el receptáculo inferior dotado de un cebo magnético para
garantizar la dispersión del gas que penetra en la membrana. Se
impregnó un disco filtro de papel de ½ pulgada (13 mm) con un
compuesto de nitrito sódico de la formulación productora de NO. El
disco impregnado se colocó en el compartimiento superior de la
célula de Franz encima de la membrana antes de derramar sobre él
con una pipeta un volumen igual de ácido cítrico. La cantidad de NO
producido fue monitorizada usando una sonda WPI para NO. El
experimento se montó como se ilustra en la Figura 2.
Una vez que los niveles medidos de NO hubieron
alcanzado una zona de meseta, se retiró el disco que contenía la
mezcla de nitrito sódico y de ácido cítrico y se añadieron al
compartimiento receptor 0,1 ml de una disolución de 0,1 M
H_{2}SO_{4} + 0,1 M KI, y se midió (por conversión) la cantidad
de NO_{2}/NO_{3} usando el detector WPI.
Los ácidos seleccionados fueron: el cítrico, el
acético, el ascórbico, el maleico y el málico. Los nitritos
seleccionados fueron los de sodio, de potasio y de plata.
Se utilizó el procedimiento de evaluación del
Ejemplo de Método 1. Todos los ejemplos de este documento que tienen
que ver con zonas de eliminación utilizaron el procedimiento del
Ejemplo de Método 1, a no ser que se indique lo contrario.
Se prepararon con agua destilada las siguientes
disoluciones ácidas expresadas en tanto por ciento en
peso/volumen:
- 1)
- Ácido cítrico 2,5%
- 2)
- Ácido cítrico 5%
- 3)
- Ácido cítrico 7,5%
- 4)
- Ácido cítrico 10%
- 5)
- Ácido ascórbico 2,5%
- 6)
- Ácido ascórbico 5%
- 7)
- Ácido ascórbico 7,5%
- 8)
- Ácido ascórbico 10%
- 9)
- Ácido maleico 2,5%
- 10)
- Ácido maleico 5%
- 11)
- Ácido maleico 7,5%
- 12)
- Ácido maleico 10%
- 13)
- Ácido málico 2,5%
- 14)
- Ácido málico 5%
- 15)
- Ácido málico 7,5%
- 16)
- Ácido málico 10%
- 17)
- Ácido acético 2,5%
- 18)
- Ácido acético 5%
- 19)
- Ácido acético 7,5%
- 20)
- Ácido acético 10%
Se quitaron los tapones de micro tubos Eppendorf
de 2 ml, se esterilizaron e incorporaron a una plancha de agar
dextrosa de Sabouraud colocando los tapones en un platillo de Petri
y derramando 25 ml del agar a su alrededor. Se dejó asentarse al
agar y luego se sembró con A. niger. Cada una de las
disoluciones indicadas anteriormente fue mezclada con disoluciones
de nitrito de sodio/potasio/plata al 2,5%, 5%, 7,5% y 10% añadiendo
cantidades de exactamente 0,1 ml de cada disolución en el tapón del
micro tubo y mezclando rotando la plancha con cuidado. Se prepararon
planchas aparte para cada una de las disoluciones ácidas que
aparecen en la lista anterior, y se incubaron a 32ºC. Se midieron
las zonas de inhibición del crecimiento en cada plancha después de
24 horas. Los resultados se muestran en las Tablas 1 y 2 a
continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
| \begin{minipage}[t]{155mm} No se muestra tabla alguna para el nitrito argéntico, dado que no se observó zona alguna de inhibición para ninguno de los ácidos probados con el nitrito argéntico. \end{minipage} |
Algunas mezclas de ácido ascórbico se hincharon
al mezclarse hasta tal extremo que formaban una cúpula por encima
de la parte superior de las paredes, lo que en ocasiones provocó
pequeños derrames sobre el agar durante el movimiento de las
planchas a la incubadora, lo que produjo zonas de inhibición. No se
vio ninguna zona de inhibición con disoluciones de ácido ascórbico
en ausencia de derrame. Ningún otro ácido mostró señal alguna de
derramarse o de hincharse. A partir de estas pruebas, parecería que
todas las mezclas examinadas son efectivas, con excepción de las
relativas al nitrito de plata o del ácido ascórbico.
Se prepararon disoluciones ácidas como se
describe en el Ejemplo 1. Antes de añadir las formulaciones
productoras de gas, las planchas se incubaron a 32ºC la noche
anterior para crear una capa completa de proliferación. A
continuación se añadieron disoluciones a los pocillos tal como se
describe en el Ejemplo 1. Acto seguido, las planchas fueron
incubadas a 32ºC durante 24 horas adicionales. Se midieron las
zonas de inhibición del crecimiento donde se encontraban el área de
formación de esporas (negra) y la carente de formación de esporas
(blanca/crema). Los resultados se muestran en las Tablas 3, 4 y
5.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
| \begin{minipage}[t]{155mm} A partir de estas pruebas, parecería que todas las mezclas examinadas son efectivas, con excepción de la mayoría de las relativas o bien al nitrito argéntico o al ácido ascórbico. \end{minipage} |
Se siguió el mismo procedimiento que el descrito
en el Ejemplo 1, salvo que, en vez de disoluciones, se emplearon
cremas acuosas, utilizando las mismas concentraciones tanto de
ácidos como de nitritos. Los resultados se muestran en las Tablas 6
y 7.
| \begin{minipage}[t]{155mm} No se muestra tabla alguna para el nitrito argéntico, dado que no se observó zona alguna de inhibición para ninguna de las cremas ácidas mezcladas con el nitrito argéntico. A partir de estas pruebas, parecería que todas las mezclas examinadas son efectivas, con excepción de las relativas al nitrito de plata o del ácido ascórbico. \end{minipage} |
Se siguió el mismo procedimiento que el descrito
para el Ejemplo 2, salvo que, en vez de disoluciones, se emplearon
cremas acuosas, utilizando las mismas concentraciones tanto de
ácidos como de nitritos. Los resultados se muestran en las tablas
8, 9 y 10.
| \begin{minipage}[t]{155mm} A partir de estas pruebas, parecería que todas las mezclas examinadas son efectivas, con excepción de las relativas al nitrito de plata o del ácido ascórbico. \end{minipage} |
Se efectuó un cálculo aproximado de las
cantidades producidas por cada disolución de ácido y nitrito
utilizando una sonda WPI para NO, tal como se ha descrito en el
Ejemplo de Método 3. En cada experimento se añadió el componente
con el nitrito (50 \mul) a 10 ml de disolución ácida.
Inicialmente, la sonda de NO se sumergió en el
componente ácido (una disolución al 10% para cada experimento). Se
dejó la sonda en el ácido para que se equilibrase antes de añadir
el nitrito. Una vez que se hubo establecido una línea de base, el
instrumento fue puesto a cero, y se añadió el nitrito. Se añadió
primero la concentración más baja, y las adiciones siguientes se
efectuaron una vez que la curva hubiese empezado a aplanarse. En
esta ocasión, las gráficas producidas proporcionaron una indicación
aproximada del NO producido, al no medirse los valores. Se produjo
una curva de calibración antes de cada juego de lecturas usando el
protocolo normalizado detallado por WPI, con el objeto de tomar en
consideración cualquier pequeño cambio en la detección de NO a
diferentes temperaturas, como sugiere WPI.
En el caso del nitrito sódico y del nitrito
potásico, se añadieron en diversos puntos a cada ácido disoluciones
al 2,5%, 5%, 7,5% y 10%. El nitrito argéntico es muy insoluble y
únicamente podían usarse concentraciones muy bajas, de modo que
solamente se añadieron a los ácidos disoluciones al 0,025%, 0,05%,
0,075% y 0,1%.
Se generaron curvas de calibración y perfiles de
liberación de NO para todos los ácidos y nitritos. Tanto para el
nitrito sódico como para el nitrito potásico mezclados con ácido
ascórbico se formaron burbujas alrededor tanto del cebo magnético
como de la sonda de NO.
Se efectuó un breve estudio para calcular las
cantidades relativas de NO_{2}/NO_{3} en algunas de las
formulaciones. Esto se hizo, como se describió con anterioridad en
el Ejemplo de Método 3, añadiendo 1 ml de 0,1 M H_{2}SO_{4} y
0,1 M KI, una vez que la formulación productora de NO hubiese
alcanzado un máximo de reacción. El 0,1 M H_{2}SO_{4} y 0,1 M KI
convierte el NO_{2}/NO_{3} en NO, lo que se registra utilizando
la sonda WPI para NO. Los resultados obtenidos fueron:
- \bullet
- 10 ml de ácido cítrico (10%) + 50 \mul de NaNO_{2} (10%) produjeron 4000 pA de NO. Tras la adición de 0,1 M H_{2}SO_{4} y 0,1 M KI, el valor superior alcanzó 20000 pA. Se calculó que hay aproximadamente un 20% de producción de NO con respecto a un 80% de NO_{2}/NO_{3}.
- \bullet
- 10 ml de ácido cítrico (10%) + 50 \mul de KNO_{2} (10%) produjeron 2200 pA de NO. Tras la adición de 0,1 M H_{2}SO_{4} y 0,1 M KI, el valor superior alcanzó 10700 pA. Se calculó que hay aproximadamente un 20% de producción de NO con respecto a un 80% de NO_{2}/NO_{3}.
- \bullet
- 10 ml de ácido ascórbico (10%) + 50 \mul de AgNO_{2} (0,1%) produjeron 5200 pA de NO. Tras la adición de 0,1 M H_{2}SO_{4} y 0,1 M KI, no se observó cambio alguno en el valor superior. Se calculó que hubo aproximadamente un 100% de producción de NO, sin ningún NO_{2}/NO_{3}.
- \bullet
- 10 ml de ácido acético (10%) + 50 \mul de AgNO_{2} (0,1%) produjeron 70 pA de NO. Tras la adición de 0,1 M H_{2}SO_{4} y 0,1 M KI, el valor superior alcanzó 2700 pA. Se calculó que hay aproximadamente un 3% de producción de NO con respecto a un 97% de NO_{2}/NO_{3}.
Fue sorprendente observar que, a pesar de los
resultados de los Ejemplos previos, en los que no se identificaban
zonas de inhibición para las mezclas que empleaban ácido ascórbico,
las combinaciones que usaban el ácido ascórbico parecían producir
cantidades considerables de NO. Sin embargo, el ácido ascórbico
produjo poco o ningún NO_{2}/NO_{3} con el nitrito argéntico.
Todos los otros ácidos examinados produjeron cantidades mayores de
NO_{2}/NO_{3} que de
NO.
NO.
También es digno de atención que el perfil de NO
de la combinación de ácido málico y nitrito potásico, así como el
perfil de NO de la combinación de ácido cítrico y nitrito potásico
muestran poca correlación entre las cantidades de NO producido y
los tamaños de las zonas vistas en los Ejemplos anteriores. Estos
dos ácidos produjeron tamaños muy similares en las zonas de
inhibición, pero el ácido málico produjo sólo aproximadamente la
tercera parte de la cantidad de NO con nitrito sódico.
Se investigaron las lacas que tienen el Eudragit
como base por su capacidad de alterar el perfil de liberación de NO
de una formulación. Por lo general, para formulaciones de
tabletas/cápsulas orales se utilizan los polimetacrilatos
(compuestos de tipo Eudragit) como agentes de revestimiento mediante
película. La selección de películas diferentes puede producir
diferentes tasas de liberación de la medicina. Los diferentes tipos
disponibles de Eudragit incluyen: el Eudragit E, el Eudragit L y el
Eudragit S. El Eudragit E se utiliza a modo de formador de película
aislante simple, y es soluble en el jugo gástrico por debajo de un
pH de 5. Los compuestos de Eudragit L y S se utilizan a modo de
agentes de recubrimiento entéricos, y también son resistentes al
jugo gástrico. Diferentes formas de compuestos de Eudragit L y S
son solubles a diferentes niveles de pH. Por ejemplo, el Eudragit
L100 es soluble > pH 6, y el Eudragit S es soluble > pH 7.
Los compuestos de Eudragit pueden combinarse para obtener
diferentes características de liberación de medicinas. Se
realizaron investigaciones en formulaciones de Eudragit que
contenían tanto ácido como nitrito para la producción del gas
activo.
El Eudragit L100 se estudió en combinación con el
nitrito sódico, y prolongó la liberación de NO de 5 a
25-30 minutos (datos no mostrados). Formular el
componente ácido en un Eudragit inverso (E100) pareció tener poco o
ningún efecto en la prolongación de la producción de NO. Por lo
tanto, una formulación adecuada es el nitrito sódico en L100, con
el componente ácido presente en abundancia en un gel.
Se evaluaron visualmente combinaciones de nitrito
y ácido en formulaciones de diversos agentes gelificantes. Los
agentes gelificantes usados fueron los siguientes:
3% carboximetilcelulosa (CMC);
3% metilcelulosa (MC);
3% carbopol 934;
3% gelatina A;
3% gelatina B;
20% glicol de polietileno (PEG, polyethylene
glycol) 400;
20% PEG 600;
20% PEG 1000;
3% hidroximetilcelulosa (HMC); y
3% alcohol de polivinilo (PA, polyvinyl
alcohol).
Todos los geles se prepararon con:
- (i)
- una disolución al 10% de ácido cítrico, y
- (ii)
- una disolución al 10% de nitrito sódico.
También se realizó una evaluación visual y una
prueba de pH (usando papel de pH). Los resultados se muestran en
las Tablas 11 y 12.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
| \begin{minipage}[t]{155mm} A partir de la Tabla 11 puede verse que el CMC, el HMC y el carbopol formaron todos geles estables en presencia de nitrito sódico al 10%. \end{minipage} |
\vskip1.000000\baselineskip
| \begin{minipage}[t]{155mm} A partir de la Tabla 12 puede verse que el HMC, el CMC, el MC y el carbopol formaron todos geles estables en presencia de ácido cítrico al 10%. \end{minipage} |
Estas pruebas proporcionan algunas indicaciones
preliminares. En particular, la gelatina es un agente gelificante
idóneo, y es preferible usarla de modo convencional a niveles más
elevados, como del 20% al 40%, de forma más general alrededor del
30%.
Se adaptó el método descrito con anterioridad, en
el Ejemplo de Método 2, que usaba una zona de pocillo de la plancha
de inhibición, para probar la actividad fungicida sobre los
dermatofitos por parte de diversas formulaciones productoras de NO.
Se realizaron las siguientes formulaciones y fueron añadidas a una
plancha de agar con un pocillo sembrado previamente de T.
rubrum:
- \bullet
- Carbopol que contenía ácido cítrico al 10% (50 \mul) mezclado con el Eudragit L100 que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- CMC que contenía ácido cítrico al 10% (50 \mul) mezclada con CMC que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- Crema acuosa que contenía ácido cítrico al 10% (50 \mul) mezclada con crema acuosa que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- HMC que contenía ácido cítrico al 10% (50 \mul) mezclada con HMC que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- Eudragit E100 que contenía ácido cítrico al 10% (50 \mul) mezclado con el Eudragit L100 que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- MC que contenía ácido cítrico al 10% (50 \mul) mezclada con el Eudragit L100 que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- 50 \mul de ácido cítrico al 10% mezclados con una disolución de nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- 50 \mul de ácido cítrico al 10% mezclados con el Eudragit L100 que contenía nitrito sódico al 10% (50 \mul).
- \bullet
- Control positivo (no se añadió formulación alguna).
| \begin{minipage}[t]{155mm} Estos resultados demuestran que la T. rubrum resulta altamente susceptible a la eliminación mediante las formulaciones de la invención, viéndose grandes zonas de erradicación. \end{minipage} |
Se dispuso un experimento para analizar la
duración del tiempo de liberación de NO a partir de formulaciones
productoras de NO. Colocar la formulación directamente sobre la
superficie de un filtro con poros de 0,2 \mum en una célula de
Franz hizo que las formulaciones se lixiviasen a través del filtro,
teniendo lugar las reacciones en el depósito inferior de la célula
de Franz. En consecuencia, se impregnaron discos antibióticos con
el compuesto con el nitrito sódico de la formulación productora de
NO, colocándose el disco en el compartimiento superior de la célula
de Franz, encima de la membrana, y luego dejando caer con la pipeta
sobre el disco impregnado un volumen igual del componente con el
ácido cítrico. La cantidad de NO producido se monitorizó utilizando
la sonda WPI para NO. El experimento se dispuso como se muestra en
la Figura 2.
Se evaluaron tres formulaciones:
- !
- 10% de ácido cítrico en Carbopol 934 y 10% de nitrito sódico en Eudragit L100
- !
- 10% de ácido cítrico en HMC y 10% de nitrito sódico en Eudragit L100
- !
- 10% de ácido cítrico en disolución y 10% de nitrito sódico en disolución.
Los resultados se ven en la Figura 3, que muestra
la producción de NO respecto al tiempo, a partir de una selección
de agentes gelificantes que contenían nitritos y ácidos. La
formulación productora de NO a base de carbopol y L100 alcanzó un
máximo con 50000 pA, que está por encima del límite de detección del
medidor de WPI. Sin embargo, puede verse a partir del gráfico que
esta formulación liberó NO a un ritmo bastante regular y constante
durante 23 minutos, momento en el que el experimento terminó. En
comparación, el NO producido por las disoluciones empezó a decaer
mucho antes, y es probable que la mayor parte del NO producido
saliese en forma de burbujas de las disoluciones y se liberase a la
atmósfera. Se vieron patrones similares para la muestra que
contenía HMC. Esto demuestra que puede usarse un planteamiento
basado en las formulaciones para obtener diferentes perfiles de
liberación de
NO.
NO.
Se investigaron las formulaciones enumeradas en
la Tabla 14 para determinar la zona de inhibición, los perfiles de
liberación de NO, y la liberación de NO_{2}/NO_{3}. La
concentración de los componentes enumerados en la Tabla 14 son las
correspondientes a las anteriores a la mezcla (% en peso de agua
desionizada).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
| Las combinaciones de la Tabla 15 se evaluaron únicamente para determinar la zona de inhibición. |
\vskip1.000000\baselineskip
| \begin{minipage}[t]{155mm}Los componentes individuales enumerados representan la concentración inicial (% peso en agua desionizada (AD)), antes de la mezcla. \end{minipage} |
| * y ** representan controles positivos y negativos, respectivamente. |
También se evaluaron las zonas de inhibición con
un agente reductor alternativo, el
\alpha-tocoferol. Las combinaciones para la
evaluación que usaban este agente se enumeran en la Tabla 16.
También se incluyeron como comparación formulaciones que contenían
combinaciones de nitrito sódico y ácido cítrico con ácido ascórbico
(Muestra nº 24), con Na_{2}S_{2}O_{4} (Muestra nº 33), o con
ascorbato sódico (Muestra nº 34).
| Los componentes individuales enumerados representan la concentración inicial (% en peso), antes de la mezcla. |
| * representa el control negativo. |
Las Figuras 4, 5 y 6 muestran el efecto de las
formulaciones del Ejemplo 10 en la zona de inhibición. Puede
concluirse claramente que no hay diferencia aparente alguna en la
zona de inhibición observada para la mayoría de las formulaciones
investigadas, aunque la Muestra nº 32 (una baja concentración de
ácido cítrico con una elevada concentración de ácido ascórbico) y la
Muestra nº 39 (\alpha-tocoferol formulado en
etanol) exhibieron menor actividad que otras formulaciones. Sin
embargo, otras formulaciones que contenían combinaciones con una
elevada concentración (20%) de ácido ascórbico (muestras
24-31) no mostraron reducción aparente alguna de la
actividad antifúngica, como se ve en la evaluación de la zona de
inhibición.
La Figura 4 muestra las zonas de inhibición para
formulaciones basadas en disoluciones y geles enumeradas en la
Tabla 14.
La Figura 5 muestra las zonas de inhibición para
formulaciones investigadas en presencia de agentes reductores
enumerados en la Tabla 15.
La Figura 6 muestra las zonas de inhibición para
formulaciones investigadas en presencia de
\alpha-tocoferol y de otros agentes reductores
enumerados en la Tabla 16.
Los datos generados a partir del instrumento de
WPI relativos a la cantidad de NO producido fueron cuantificados en
unidades de pA. Se construyó un trazado de calibración para calcular
la concentración de NO liberado (datos no mostrados). Por lo
general, los perfiles obtenidos muestran que las formulaciones
basadas en disoluciones liberaban el NO con mayor rapidez que las
formulaciones basadas en geles. Entre las formulaciones basadas en
disoluciones, la Muestra nº 20 (una disolución de nitrito sódico y
ácido cítrico) mostró una elevada liberación de NO en el tiempo más
corto. Sin embargo, las combinaciones de formulaciones consistentes
en disoluciones que contenían una disolución de nitrito sódico y de
ácido cítrico en carbopol (Muestra nº 16) y en CMC (Muestra nº 19)
parecieron producir la cantidad más elevada de NO a lo largo de un
periodo extenso. La cantidad más baja de NO liberado se descubrió
que por lo general se daba con formulaciones basadas en CMC.
La Figura 7 muestra el valor máximo medio en
concentraciones de NO y NO_{2}/NO_{3} producidas por las
diversas formulaciones investigadas. De las formulaciones
investigadas basadas en geles, se encontró que las formulaciones
con CMC producían concentraciones más bajas de NO con respecto a las
restantes formulaciones basadas en geles (L100, HMC y carbopol).
Las concentraciones de NO de valor máximo medio producidas en
función del tiempo a partir de las diversas formulaciones
investigadas se muestran en la Figura 8. Con la excepción de la
Muestra nº 19 (que contenía CMC), los datos demostraron que las
disoluciones (Muestras números 5, 10, 16-20) eran
significativamente más rápidas en alcanzar la concentración máxima
de NO en comparación con las formulaciones consistentes en
geles.
La Figura 7 muestra el valor máximo medio en la
concentración de NO y NO_{2}/NO_{3} producida a partir de las
diversas formulaciones investigadas.
La Figura 8 muestra el tiempo medio necesario
para alcanzar la producción máxima de NO a partir de las diversas
formulaciones investigadas.
Se empleó el procedimiento mostrado en la Figura
11. En T_{0} se depositó con una pipeta una aplicación de 100
\mul de nitrito sódico al 10% y 100 \mul de ácido cítrico al
10% sobre la superficie de un trozo de uña humana, montada en la uña
de una célula de Franz (superficie de exposición 0,1963 cm^{2}).
La cantidad de NO que pasó a través de la uña se monitorizó
utilizando el detector de NO de WPI a lo largo de un periodo de 18
horas. Los resultados se muestran en la Figura 9.
Se empleó el procedimiento mostrado en la Figura
11. En T_{0} se depositó con una pipeta una aplicación de 100
\mul de nitrito sódico al 5% y 100 \mul de ácido cítrico al 5%
sobre la superficie de un trozo de uña humana, montada en la uña de
una célula de Franz (superficie de exposición 0,1963 cm^{2}). La
cantidad de NO que pasó a través de la uña se monitorizó utilizando
el detector de NO de WPI a lo largo de un periodo de 18 horas. Los
resultados se muestran en la Figura 10.
El control negativo consistió en 200 \mul de
agua desionizada depositados con una pipeta sobre la superficie de
un trozo de uña humana, montada en la uña de una célula de Franz,
usando en todo lo demás las mismas condiciones que para los
procedimientos de las disoluciones al 10% y al 5%.
Como puede verse en las Figuras, las disoluciones
al 10% proporcionaron una caída inicial aparente en el NO. Sin
embargo, tras unas 4 horas (diferentes experimentos producen
tiempos de demora diferentes; los datos no se muestran), el NO
aumenta de manera brusca y luego se mantiene a niveles elevados
durante un periodo de aproximadamente 10 horas. Las disoluciones al
5% produjeron niveles positivos de NO, aunque algo menor que las
formulaciones al 10%. El control negativo nunca se desvió de la
línea de base, tras un bajón inicial al comienzo del experimento
(datos no mostrados).
En la primera parte del experimento, se preparó
la uña de doble brazo de la célula de Franz de la Figura 11, pero
usando un trozo de membrana permeable al gas en vez de la uña
humana. El sistema se dejó reposar durante 40 minutos
aproximadamente antes de que se añadieran las formulaciones. Se
añadió una disolución de 100 \mul de ácido ascórbico al 10% y 100
\mul de nitrito sódico encima de una célula de Franz como en el
Ejemplo 12, y la parte superior de la célula de Franz se cubrió con
película flexible Parafilm®.
La cantidad de NO producido durante este
experimento excedió el límite de detección del detector de NO, y la
traza se salió de la escala (10 \muM) justo después de una hora.
No se observó ninguna caída inicial en la cantidad máxima. La
cantidad de NO producido fue aproximadamente 20 veces mayor que la
vista con el ácido cítrico (10%) y nitrito sódico (10%).
El experimento fue repetido a continuación,
usando esta vez un trozo de uña humana. Luego se aplicaron
directamente a la superficie superior de la uña 10 \mul de ácido
ascórbico al 10% y 10 \mul de nitrito sódico al 10% y se
mezclaron. La célula de Franz se tapó con película de parafina, y
la cantidad de NO que atravesó la uña se monitorizó usando el
medidor de WPI. Los resultados se muestran en la Figura 12.
La caída en la cantidad máxima parece ser un
artefacto normal en los experimentos que involucran la uña humana y
las formulaciones productoras de NO. El aumento en la cantidad
máxima que sigue al bajón fue muy repentino, sin cambio gradual
alguno del uno al otro.
A partir de la Figura 12 puede verse que, aunque
las mezclas que incorporan ácido ascórbico pueden proporcionar una
liberación sostenida de NO a través de la uña, los niveles son
aproximadamente 10 veces más bajos que cuando se utiliza ácido
cítrico.
Se dispusieron células de Franz según se muestra
en la Figura 13, llenándose la sección inferior con agar dextrosa
de Sabouraud fundida hasta 8 mm por debajo del orificio de salida.
Una vez que el agar se hubo enfriado y reposado, se depositaron
mediante pipeta 25 \mul de una suspensión de esporas a A.
niger sobre la superficie del agar, y se encajó una sección de
uña humana de forma hermética por encima del orificio de salida, y
se fijó en su sitio. Las células se incubaron a continuación a 32ºC
durante 24 horas para obtener una capa de micelio.
Una vez que se hubo desarrollado el micelio, las
células se retiraron de la incubadora, y se depositaron mediante
pipeta 0,1 ml de ácido cítrico y 0,1 ml de nitrito sódico en el
embudo de la célula de Franz, y se mezclaron usando la punta de la
pipeta. Para los controles negativos se añadieron o bien 0,2 ml de
una solución de nitrito sódico al 10% o bien 0,2 ml de ácido cítrico
al 10%. La parte superior del embudo de todas las células de Franz
fue cubierta a continuación con película de parafina. Las células se
dejaron a temperatura ambiente. Tras un periodo de 2 horas y 10
minutos, las disoluciones en cada una de las células de Franz se
retiraron y fueron sustituidas con una disolución equivalente y el
proceso se repitió cada 2 horas y 10 minutos a lo largo de dos
aplicaciones adicionales, lo que dio un total de 4 aplicaciones.
Tras la aplicación final de la disolución, las células se dejaron
tapadas a temperatura ambiente para dar lugar al lento crecimiento
del organismo durante 24 horas.
Después de 24 horas, las seis células con mezclas
de ácido cítrico y nitrito sódico tenían una región central de la
colonia de A. niger, muy próxima a la uña/formulación, que
había sido eliminada por el gas activo. Esto se ponía de manifiesto
por el efecto halo, donde un área de micelio muerto y blanco estaba
rodeado por un anillo de micelio en esporulación. Después de 24
horas adicionales, el A. niger se recuperó extendiéndose
desde la región más exterior, que no había muerto, hacia el
centro.
Todas las células que contenían bien nitrito
sódico o ácido cítrico presentaron una capa completa de micelio
crecido, que había formado esporas, como se ponía de manifiesto por
un círculo negro sólido.
Este resultado demuestra con claridad la
capacidad de las formulaciones de la invención de generar un
componente gaseoso efectivo que atraviesa la uña. Demuestra
definitivamente que el gas activo penetra una uña humana completa de
los dedos de los pies, y que afecta el desarrollo del A.
niger. Además, la formulación penetra la uña y afecta el
crecimiento de un organismo en una distancia adicional de 8 mm,
siendo virtualmente despreciable la separación in vivo. Los
controles confirman que es el gas activo lo que causa el efecto
halo.
Se compuso un juego consistente en dos preparados
de geles acuosos. Los preparados tenían las formulaciones
siguientes:
| Nitrito sódico | 6,6% |
| Hidroximetilcelulosa | 10,0% |
| Polivinilpirrolidona | 5,0% |
| Glicol de polietileno | 20,0% |
| Alcohol benzílico | 1,0% |
| Color | 0,005% |
| Agua | cantidad suficiente hasta 100% |
| Ácido cítrico | 10,0% |
| Carbopol | 5,0% |
| Polivinilpirrolidona | 5,0% |
| Glicol de polietileno | 30,0% |
| Metilparabén | 0,2% |
| Propilparabén | 0,02% |
| Agua | cantidad suficiente hasta 100% |
| Color | 0,005% |
Las formulaciones A y B se suministraron por
separado en tubos susceptibles de volver a taparse y de estrujarse
para su mezcla bien inmediatamente antes de la aplicación a la uña,
o sobre la propia uña.
Claims (17)
1. La utilización de componentes generadores de
óxido de nitrógeno en la fabricación de un medicamento para el
tratamiento o profilaxis de una infección subungueal, en que los
componentes consistan en un nitrito y un ácido orgánico, cada uno
de los cuales se aplique por separado del otro antes de su
utilización.
2. La utilización, en conformidad con la
reivindicación 1, en que el ácido esté presente en cantidad
suficiente, de modo que la composición final tenga un pH de 5,5, o
inferior.
3. La utilización, en conformidad con las
reivindicaciones 1 o 2, en que el ácido se escoja de entre el ácido
fórmico, el ácido málico, el ácido maleico, el ácido acético, el
ácido láctico, el ácido cítrico, el ácido benzoico, el ácido
tartárico, el ácido salicílico, el ácido ascórbico, el ascorbil
palmitato, y mezclas de los mismos.
4. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el nitrito
se escoja entre los nitritos de metales alcalinos y los nitritos
metales alcalinotérreos.
5. La utilización, en conformidad con la
reivindicación 4, en que el nitrito se escoja entre los nitritos de
sodio, potasio, magnesio y bario.
6. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, que consista en
ácido cítrico y nitrito sódico, estando presente al menos uno de
ellos en un vehículo acuoso.
7. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que la
infección subungueal sea la onicomicosis.
8. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el
componente con el nitrito esté formulado con un excipiente escogido
entre los compuestos de tipo Eudragit, el carbopol, la
carboximetilcelulosa, la hidroximetilcelulosa, y mezclas de los
mismos.
9. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el
componente ácido esté formulado con un excipiente escogido entre el
carbopol, la carboximetilcelulosa, la hidroximetilcelulosa, la
metilcelulosa, y mezclas de los mismos.
10. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el ácido y
el nitrito se presenten en formulaciones de base acuosa.
11. La utilización, en conformidad con la
reivindicación 10, en que cada preparado esté en una forma escogida
por separado entre geles, cremas, lociones, pomadas y tinturas
adecuadas para mezclarse entre sí.
12. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que tanto el
ácido como el nitrito estén formulados por separado como gel,
tintura o laca.
13. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que tanto el
ácido como el nitrito estén formulados por separado como líquido o
gel que, al mezclarse, se solidifique o forme un gel o una
tintura.
14. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el nitrito
suponga del 0,5 al 30% en peso de la composición final.
15. La utilización, en conformidad con la
reivindicación 14, en que el nitrito suponga del 5 al 15% en peso
de la composición final.
16. La utilización, en conformidad con
cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el ácido
suponga del 5 al 30% en peso de la composición final.
17. La utilización, en conformidad con la
reivindicación 16, en que el ácido suponga del 10 al 15% en peso de
la composición final.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0119011.5A GB0119011D0 (en) | 2001-08-03 | 2001-08-03 | Treatment of nail infections |
| GB0119011 | 2001-08-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2242042T3 true ES2242042T3 (es) | 2005-11-01 |
Family
ID=9919789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02747613T Expired - Lifetime ES2242042T3 (es) | 2001-08-03 | 2002-08-02 | Compuestos generadores de oxido de nigtrogeno para el tratamiento de infecciones subungueales. |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20050037093A1 (es) |
| EP (1) | EP1411908B1 (es) |
| JP (1) | JP2005501069A (es) |
| KR (1) | KR20040031780A (es) |
| CN (1) | CN1321633C (es) |
| AT (1) | ATE296094T1 (es) |
| AU (1) | AU2002318001B2 (es) |
| BR (1) | BR0211390A (es) |
| CA (1) | CA2453243C (es) |
| DE (1) | DE60204322T2 (es) |
| ES (1) | ES2242042T3 (es) |
| GB (1) | GB0119011D0 (es) |
| HR (1) | HRP20040059B1 (es) |
| HU (1) | HUP0401190A3 (es) |
| IL (2) | IL159724A0 (es) |
| MX (1) | MXPA04000670A (es) |
| NO (1) | NO20040258L (es) |
| NZ (1) | NZ530577A (es) |
| PL (1) | PL213555B1 (es) |
| PT (1) | PT1411908E (es) |
| RU (1) | RU2298403C2 (es) |
| WO (1) | WO2003013489A1 (es) |
| ZA (1) | ZA200400491B (es) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0125222D0 (en) * | 2001-10-19 | 2001-12-12 | Barts & London Nhs Trust | Composition for the treatment of microbial infections |
| JP5564158B2 (ja) * | 2003-07-09 | 2014-07-30 | ザ ガバメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー オブ ザ デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | 亜硝酸塩によって特定の心臓血管状態を処置する方法 |
| US7362274B1 (en) * | 2004-07-09 | 2008-04-22 | Huan-Cheng Lien | Coupled feed-in butterfly shaped left/right hand circularly polarized microstrip antenna |
| EP1871433B1 (en) * | 2005-03-24 | 2009-04-22 | NOLabs AB | Cosmetic treatment with nitric oxide, device for performing said treatment and manufacturing method therefor |
| WO2006125123A2 (en) * | 2005-05-19 | 2006-11-23 | University Of Cincinnati | Methods for treating bacterial respiratory tract infections in an individual using acidified nitrite |
| EP1888510A4 (en) | 2005-05-27 | 2013-01-16 | Univ North Carolina | NITROGEN OXIDE-RELATED PARTICLES FOR NITROGEN OXIDE THERAPEUTICS AND BIOMEDICAL APPLICATIONS |
| JP5165217B2 (ja) * | 2006-07-07 | 2013-03-21 | 生化学工業株式会社 | ゲル状又はフィルム状組成物並びにその製造方法及び用途 |
| GB0618711D0 (en) * | 2006-09-22 | 2006-11-01 | Univ Exeter | Agricultural treatment |
| WO2009055008A1 (en) * | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Wharton Innovative Products, Llc | Two part lotion for the delivery of nitrite ions to the skin |
| AU2008322437B2 (en) | 2007-11-15 | 2013-11-07 | Louisiana State University | Use of nitrite salts in chronic ischemia |
| EP2237788A4 (en) * | 2007-12-27 | 2013-06-05 | Aires Pharmaceuticals Inc | COMPOUNDS FOR OBTAINING AEROSOLIZED NITRITE AND NITRIC OXIDE AND USES THEREOF |
| US8303995B1 (en) * | 2008-06-13 | 2012-11-06 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Nitrite formulations and their use as nitric oxide prodrugs |
| WO2010044875A2 (en) * | 2008-10-16 | 2010-04-22 | Novan, Inc. | Nitric oxide releasing particles for oral care applications |
| CA2740135A1 (en) * | 2008-10-30 | 2010-05-06 | Chris Miller | Wound dressings comprising a nitric oxide gas producing component and an oxygen releasing component |
| WO2011022652A1 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Novan, Inc. | Topical gels |
| BR112012003804B1 (pt) | 2009-08-21 | 2019-02-19 | Novan, Inc. | Curativo para ferimentos, método para formar um curativo para ferimentos, e, kit de curativo para ferimento |
| WO2011047013A1 (en) * | 2009-10-13 | 2011-04-21 | Novan, Inc. | Nitric oxide-releasing coatings |
| ES2633618T3 (es) * | 2009-10-14 | 2017-09-22 | Theravasc Inc. | Formulaciones farmacéuticas de nitrito y sus usos |
| US20130089629A1 (en) * | 2010-06-07 | 2013-04-11 | Topical Pharma Ab | Kit for the treatment of onychomycosis by nitric oxide |
| US8591876B2 (en) | 2010-12-15 | 2013-11-26 | Novan, Inc. | Methods of decreasing sebum production in the skin |
| ES2695173T3 (es) | 2011-02-28 | 2019-01-02 | Novan Inc | Partículas de sílice modificadas con S-nitrosotiol que liberan óxido nítrico y procedimientos de fabricación de las mismas |
| WO2012131412A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Szabo Laszlo Gabor | Pharmaceutical composition containing no, process for the preparation and use thereof |
| ES2804263T3 (es) | 2011-07-05 | 2021-02-05 | Novan Inc | Composiciones tópicas |
| US9737362B2 (en) * | 2011-07-06 | 2017-08-22 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Tissue cutting systems and methods |
| MX388990B (es) | 2011-08-17 | 2025-03-20 | Univ Texas | Método de producción de niveles fisiológicos y terapéuticos de óxido nítrico por medio de un sistema de suministro oral. |
| ES2861439T3 (es) | 2012-03-14 | 2021-10-06 | Novan Inc | Composiciones farmacéuticas que liberan óxido nítrico |
| WO2014130691A2 (en) | 2013-02-20 | 2014-08-28 | Theravasc Inc. | Pharmaceutical formulations of nitrite and uses thereof |
| US9855211B2 (en) | 2013-02-28 | 2018-01-02 | Novan, Inc. | Topical compositions and methods of using the same |
| US12233289B2 (en) | 2013-08-01 | 2025-02-25 | Olaplex, Inc. | Methods for fixing hair and skin |
| US9095518B2 (en) | 2013-08-01 | 2015-08-04 | Liqwd, Inc. | Methods for fixing hair and skin |
| US11813284B2 (en) | 2013-08-08 | 2023-11-14 | Novan, Inc. | Topical compositions and methods of using the same |
| AU2015229626B2 (en) | 2014-03-14 | 2021-05-20 | Sanotize Research And Development Corp. | Treating diseases using nitric oxide releasing solutions |
| MX389718B (es) | 2014-05-16 | 2025-03-20 | Olaplex Inc | Formulaciones y metodos de tratamiento con queratina. |
| US10322082B2 (en) | 2014-07-11 | 2019-06-18 | Novan, Inc. | Topical antiviral compositions and methods of using the same |
| EP3166593B1 (en) | 2014-07-11 | 2020-05-20 | Novan, Inc. | Topical antiviral compositions and methods of using the same |
| US10925689B2 (en) | 2014-07-14 | 2021-02-23 | Novan, Inc. | Nitric oxide releasing nail coating compositions, nitric oxide releasing nail coatings, and methods of using the same |
| EP3177262A4 (en) | 2014-08-08 | 2018-04-18 | Novan Inc. | Topical emulsions |
| US9597273B2 (en) | 2015-04-24 | 2017-03-21 | Liqwd, Inc. | Methods for treating relaxed hair |
| WO2017019614A1 (en) | 2015-07-28 | 2017-02-02 | Novan, Inc. | Combinations and methods for the treatment and/or prevention of fungal infections |
| US10912743B2 (en) | 2016-03-02 | 2021-02-09 | Novan, Inc. | Compositions for treating inflammation and methods of treating the same |
| US11166980B2 (en) | 2016-04-13 | 2021-11-09 | Novan, Inc. | Compositions, systems, kits, and methods for treating an infection |
| US9872821B1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-23 | Liqwd, Inc. | Methods and formulations for curling hair |
| WO2018236803A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Novan, Inc. | Topical compositions and methods of using the same |
| WO2019169221A1 (en) | 2018-03-01 | 2019-09-06 | Novan, Inc. | Nitric oxide releasing suppositories and methods of use thereof |
| US11472705B2 (en) | 2018-03-13 | 2022-10-18 | Sanotize Research And Development Corp. | Nitric oxide releasing compositions |
| RU2704782C1 (ru) * | 2018-10-09 | 2019-10-30 | Елена Владимировна Герасимчук | Способ криогенного лечения онихомикоза |
| GB2599818B (en) | 2019-06-04 | 2024-01-31 | Thirty Respiratory Ltd | Methods and compositions for generating nitric oxide and uses thereof to deliver nitric oxide via the respiratory tract |
| EP3980373A1 (en) * | 2019-06-04 | 2022-04-13 | Thirty Holdings Limited | Methods and compositions for generating nitric oxide and uses thereof |
| BR112022021454A2 (pt) | 2020-04-23 | 2023-01-31 | Thirty Respiratory Ltd | Óxido nítrico ou composições liberadoras de óxido nítrico para uso no tratamento de sars-cov e sars-cov-2 |
| JP2023526583A (ja) | 2020-04-23 | 2023-06-22 | サーティー レスピラトリー リミテッド | 結核を治療及び抑制するための方法及び組成物 |
| BR112023000788A2 (pt) * | 2020-07-16 | 2023-05-09 | Sanotize Res And Development Corp | Métodos de tratamento de condições que respondem à terapia com óxido nítrico |
| RU2769437C1 (ru) * | 2021-07-08 | 2022-03-31 | Светлана Николаевна Абрамова | Способ восстановления роста ногтя |
| GB2644374A (en) * | 2024-09-20 | 2026-04-08 | Thirty Holdings Ltd | Compositions and kits for generating nitric oxide |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY128187A (en) * | 1993-06-23 | 2007-01-31 | Icn Switzerland Ag | Preparation for skin and mucous membrane |
| US6709681B2 (en) * | 1995-02-17 | 2004-03-23 | Aberdeen University | Acidified nitrite as an antimicrobial agent |
| DK0746327T3 (da) | 1994-02-21 | 2004-05-10 | Univ Aberdeen | Forsuret nitrit som antimikrobielt middel |
| GB9804469D0 (en) * | 1998-03-02 | 1998-04-29 | Univ Aberdeen | Antiviral composition |
| US6103275A (en) * | 1998-06-10 | 2000-08-15 | Nitric Oxide Solutions | Systems and methods for topical treatment with nitric oxide |
-
2001
- 2001-08-03 GB GBGB0119011.5A patent/GB0119011D0/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-08-02 DE DE60204322T patent/DE60204322T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-02 PL PL366579A patent/PL213555B1/pl unknown
- 2002-08-02 HR HR20040059A patent/HRP20040059B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-08-02 BR BR0211390-2A patent/BR0211390A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-08-02 AU AU2002318001A patent/AU2002318001B2/en not_active Ceased
- 2002-08-02 AT AT02747613T patent/ATE296094T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-08-02 MX MXPA04000670A patent/MXPA04000670A/es active IP Right Grant
- 2002-08-02 US US10/484,321 patent/US20050037093A1/en not_active Abandoned
- 2002-08-02 WO PCT/GB2002/003575 patent/WO2003013489A1/en not_active Ceased
- 2002-08-02 CA CA2453243A patent/CA2453243C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-08-02 CN CNB028196252A patent/CN1321633C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-08-02 PT PT02747613T patent/PT1411908E/pt unknown
- 2002-08-02 EP EP02747613A patent/EP1411908B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-02 IL IL15972402A patent/IL159724A0/xx active IP Right Grant
- 2002-08-02 KR KR10-2004-7000919A patent/KR20040031780A/ko not_active Ceased
- 2002-08-02 NZ NZ530577A patent/NZ530577A/en unknown
- 2002-08-02 JP JP2003518499A patent/JP2005501069A/ja active Pending
- 2002-08-02 RU RU2004101765/15A patent/RU2298403C2/ru active
- 2002-08-02 HU HU0401190A patent/HUP0401190A3/hu unknown
- 2002-08-02 ES ES02747613T patent/ES2242042T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-01-06 IL IL159724A patent/IL159724A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-01-20 NO NO20040258A patent/NO20040258L/no not_active Application Discontinuation
- 2004-01-22 ZA ZA200400491A patent/ZA200400491B/en unknown
-
2009
- 2009-05-28 US US12/455,141 patent/US9381381B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2298403C2 (ru) | 2007-05-10 |
| CA2453243C (en) | 2012-01-03 |
| JP2005501069A (ja) | 2005-01-13 |
| US9381381B2 (en) | 2016-07-05 |
| CN1564681A (zh) | 2005-01-12 |
| US20050037093A1 (en) | 2005-02-17 |
| MXPA04000670A (es) | 2004-10-27 |
| CA2453243A1 (en) | 2003-02-20 |
| CN1321633C (zh) | 2007-06-20 |
| KR20040031780A (ko) | 2004-04-13 |
| DE60204322T2 (de) | 2006-01-26 |
| AU2002318001B2 (en) | 2007-02-15 |
| GB0119011D0 (en) | 2001-09-26 |
| PL213555B1 (pl) | 2013-03-29 |
| PL366579A1 (en) | 2005-02-07 |
| EP1411908A1 (en) | 2004-04-28 |
| PT1411908E (pt) | 2005-08-31 |
| IL159724A0 (en) | 2004-06-20 |
| EP1411908B1 (en) | 2005-05-25 |
| HRP20040059A2 (en) | 2004-08-31 |
| HUP0401190A2 (hu) | 2004-11-29 |
| RU2004101765A (ru) | 2005-03-10 |
| HRP20040059B1 (hr) | 2008-05-31 |
| IL159724A (en) | 2006-04-10 |
| ZA200400491B (en) | 2005-04-22 |
| ATE296094T1 (de) | 2005-06-15 |
| NZ530577A (en) | 2007-01-26 |
| US20100015253A1 (en) | 2010-01-21 |
| HUP0401190A3 (en) | 2008-08-28 |
| DE60204322D1 (de) | 2005-06-30 |
| NO20040258L (no) | 2004-03-29 |
| WO2003013489A1 (en) | 2003-02-20 |
| BR0211390A (pt) | 2004-08-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2242042T3 (es) | Compuestos generadores de oxido de nigtrogeno para el tratamiento de infecciones subungueales. | |
| AU2002318001A1 (en) | Treatment of nail infections with NO | |
| AU2001284191C1 (en) | Transdermal pharmaceutical delivery composition | |
| JP5084985B2 (ja) | 皮膚虚血症を治療するための硝酸塩源及び酸性化剤を含む医薬組成物 | |
| JP2007534764A (ja) | 抗真菌薬物送達 | |
| JP2025118620A (ja) | 医薬品格納装置および関連する組成物 | |
| Baker et al. | Progress on new therapeuties for fungal nail infections | |
| ES2246888T3 (es) | Tratamiento de infecciones por hongos usando un medio de crecimiento fungico. | |
| ES2652313B1 (es) | Procedimiento de preparación de un producto a base de las hojas de la planta Sedum telephium para el tratamiento de las uñas infectadas de onicomicosis | |
| JP6016085B2 (ja) | 抗真菌外用組成物及び抗真菌外用組成物の適用方法 | |
| WO2007064181A1 (es) | Preparaciones para el cuidado de las uñas que contienen clorhidrato de terbinafina |