ES2247187T3 - Sales oralmente activas conactividad tirosina quinasa. - Google Patents
Sales oralmente activas conactividad tirosina quinasa.Info
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Abstract
Se ilustra una realización de la invención por una sal mesilato de 3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol- 2-il]-1H-quinolin-2-ona. Otra realización es una sal cloruro de 3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona. También está incluida dentro del alcance de la invención la sal mesilato de 3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)- 1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona conforme a una forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo de que tiene ángulos de difracción de: 7, 39, 8, 20, 9, 03, 9, 90, 10, 94, 15, 45, 17, 12, 17, 84, 18, 29, 18, 64, 19, 24, 19, 77, 20, 28, 21, 73, 22, 49, 23, 27, 24, 15, 24, 73, 25, 40, 26, 79 y 27, 50. Otra realización es la sal mesilato de 3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona en forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene ángulos de difracción de: 6, 94, 8, 01, 9, 74, 10, 47, 10, 77, 11, 75, 12, 61, 14,02, 15, 28, 15, 86, 16, 93, 17, 61, 18, 69, 19, 04, 19, 47, 20, 11, 21, 56, 21, 94, 22, 53, 23, 85 y 27, 22. Otra realización es la sal cloruro de 3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona en forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene ángulos de difracción de: 7, 08, 7, 86, 8, 99, 14, 54, 15, 40, 16, 14, 16, 81, 18, 06, 19, 91, 20, 72, 22, 72, 24, 11, 26, 09, 28, 67 y 29, 89. Y otra realización más es la sal cloruro de 3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quino-lin- 2-ona en forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene varios picos de difracción entre 5º y 30º 2-theta y una endotermia de fusión de 284, 08ºC a una velocidad de 10ºC por minuto.
Description
Sales oralmente activas con actividad tirosina
quinasa.
La presente invención se refiere a sales
oralmente activas de compuestos que inhiben, regulan y/o modulan la
transducción de señal de tirosina quinasa, a composiciones que
contienen estos compuestos y a procedimientos de uso de los mismos
para tratar enfermedades y estados patológicos dependientes de
tirosina quinasa, tales como angiogénesis, cáncer, crecimiento
tumoral, aterosclerosis, degeneración macular relacionada con la
edad, retinopatía diabética, enfermedades inflamatorias y similares
en mamíferos.
Las tirosina quinasas son una clase de enzimas
que catalizan la transferencia del fosfato terminal de trifosfato de
adenosina a residuos tirosina en sustratos de proteínas. Las
tirosina quinasas desempeñan funciones críticas en la transducción
de señal para una diversidad de funciones celulares a través de la
fosforilación de sustratos y han demostrado ser importantes factores
de contribución en la proliferación celular, la carcinogénesis y la
diferenciación celular.
Las tirosina quinasas se pueden clasificar como
de tipo de receptor o como de tipo de no receptor. Las tirosina
quinasas del tipo receptor tienen una porción extracelular, una
transmembrana y una intracelular, mientras que las tirosina quinasas
del tipo no receptor son totalmente intracelulares.
Ambas tirosina quinasas, tipo receptor y tipo de
no receptor están implicadas en las vías de señalización celular que
conducen a numerosos estados patológicos patógenos incluyendo
cáncer, psoriasis y respuestas hiperinmunes.
Algunas tirosina quinasas de tipo receptor y los
factores de crecimiento que se unen a las mismas desempeñan una
función en la angiogénesis, aunque algunas pueden promover
angiogénesis indirectamente (Mustonen and Alitalo, J. Cell
Biol. 129:895-898, 1995). Una tirosina quinasa
de tipo receptor es la quinasa 1 de hígado fetal o
FLK-1. El análogo humano de la
FLK-1 es el receptor KDR que contiene el dominio
inserto quinasa, que también es conocido como receptor 2 del factor
de crecimiento de células del endotelio vascular o
VEGFR-2, puesto que se une a VEGF con una alta
afinidad. Finalmente, la versión murina de este receptor también se
ha denominado NYK (Oelrichs et al., Oncogene
8(1):11-15, 1993). VEGF y KDR son una pareja
ligando-receptor que desempeña una importante
función en la proliferación de células del endotelio vascular, y en
la formación y crecimiento de vasos sanguíneos, denominadas
vasculogénesis y angiogénesis, respectivamente.
La angiogénesis está caracterizada por una
excesiva actividad del factor de crecimiento del endotelio vascular
(VEGF). El VEGF está compuesto en la actualidad por una familia de
ligandos (Klagsburn and D'Amore, Cytokine & Growth Factor
Reviews 7:259-270, 1996). El VEGF se une al
receptor de tirosina quinasa que se extiende por la membrana KDR con
alta afinidad y a la tirosina quinasa 1 tipo fms relacionada,
también conocida como Flt-1 o receptor 1 del factor
de crecimiento de células del endotelio vascular
(VEGFR-1). Experimentos de cultivo de células y de
eliminación génica indican que cada receptor contribuye a diferentes
aspectos de la angiogénesis. KDR media la función mitógena de VEGF
mientras que Flt-1 parece modular funciones no
mitógenas tales como las asociadas con la adhesión celular. La
inhibición de KDR modula así el nivel de actividad de VEGF
mitógeno. De hecho, se ha demostrado que el crecimiento tumoral es
susceptible a los efectos angiogénicos de antagonistas del receptor
de VEGF. (Kim et al., Nature 362, páginas
841-844, 1993).
Los tumores sólidos pueden tratarse por tanto por
inhibidores de tirosina quinasa puesto que estos tumores dependen de
la angiogénesis para la formación de los vasos sanguíneos necesarios
para soportar su crecimiento. Estos tumores sólidos incluyen linfoma
histiocítico, cánceres del cerebro, tracto genitourinario, sistema
linfático, estómago, laringe y pulmón, incluyendo adenocarcinoma de
pulmón y cáncer de pulmón de células pequeñas. Otros ejemplos
incluyen cánceres en los que se observa sobreexpresión o activación
de oncogenes que activan Raf (por ejemplo K-ras,
erb-B). Tales cánceres incluyen cáncer de páncreas y
carcinoma de mama. Por consiguiente, los inhibidores de estas
tirosina quinasas son útiles para la prevención y tratamiento de
enfermedades proliferativas dependientes de estas enzimas.
La actividad angiogénica de VEGF no está limitada
a tumores. El VEGF influye en la mayoría de actividad angiogénica
producida en, o cerca de la retina en retinopatía diabética. Este
crecimiento vascular en la retina conduce a degeneración visual que
culminará en ceguera. Los niveles de ARNm y de las proteínas de VEGF
ocular son altos por condiciones tales como oclusión de la vena de
la retina en primates y menores niveles de pO_{2} en ratones que
conduce a neovascularización. Inyecciones intraoculares de
anticuerpos monoclonales anti-VEGF o inmunofusiones
de receptor de VEGF inhiben la neovascularización en ambos modelos
de primates y roedores. Independientemente de la causa de inducción
de VEGF en retinopatía diabética humana, la inhibición de VEGF
ocular es útil para tratar la enfermedad.
La expresión de VEGF también se incrementa de
forma significativa en regiones hipóxicas de tumores de animales y
seres humanos adyacentes a áreas de necrosis. También se eleva el
número de receptores de VEGF por la expresión de los oncogenes ras,
raf, src y p53 mutante (los cuales son todos relevantes para
localizar el cáncer). Anticuerpos monoclonales
anti-VEGF inhiben el crecimiento de tumores humanos
en ratones atímicos. Aunque estas mismas células tumorales continúan
expresando VEGF en cultivo, los anticuerpos no disminuyen sus tasa
de mitosis. El VEGF derivado de tumores no funciona como un factor
mitógeno autocrino. Por tanto, VEGF contribuye al crecimiento
tumoral in vivo promoviendo angiogénesis a través de sus
actividades quimiotácticas de células endoteliales vasculares
paracrinas y mitógenas. Estos anticuerpos monoclonales también
inhiben el crecimiento de cánceres de colon humano típicamente menos
vascularizados en ratones atímicos y disminuyen el número de tumores
que se derivan de células inoculadas.
La expresión viral de una construcción unida a
VEGF de Flk-1, Flt-1, el homólogo
del receptor KDR de ratón, truncado para eliminar los dominios de
tirosina quinasa citoplasmática pero manteniendo un anclaje de
membrana, elimina prácticamente el crecimiento de un glioblastoma
transplantable en ratones, presumiblemente por el mecanismo negativo
dominante de formación de heterodímero con receptores de VEGF de
células endoteliales que se extienden por la membrana. Las células
madre embrionarias, que normalmente crecen como tumores sólidos en
ratones atímicos, no producen tumores detectables si se ha realizado
eliminación génica de alelos de VEGF. Considerados conjuntamente,
estos datos indican la función de VEGF en el crecimiento de tumores
sólidos. La inhibición de KDR o Flt-1 está
relacionada con la angiogénesis patológica y estos receptores son
útiles en el tratamiento de enfermedades en las cuales la
angiogénesis es parte de la patología global, por ejemplo,
inflamación, vascularización diabética de la retina, así como
diversas formas de cáncer puesto que el crecimiento tumoral es
conocido por ser dependiente de la angiogénesis. (Weidner et
al., N. Engl. J. Med., 324, páginas 1-8,
1991).
Aunque se han descrito con anterioridad
compuestos de quinolinil-indol por ser útiles como
inhibidores de tirosina quinasa (véase el documento WO 01/29025;
publicado el 26 de abril de 2001), existe todavía la necesidad de
formas de estos compuestos que puedan administrarse fácilmente a
pacientes, en especial, formas solubles oralmente activas de estos
compuestos. Por consiguiente, la identificación de sales oralmente
activas de compuestos que inhiben, regulan y/o modulan de forma
específica la transducción de señal de tirosina quinasas es deseable
y es un objeto de la invención. Las sales de la presente invención
tienen, de forma inesperada, propiedades farmacocinéticas mejoradas
al compararlas con compuestos descritos con anterioridad.
La presente invención se refiere a sales de
compuestos que pueden inhibir, modular y/o regular la transducción
se señal de tirosina quinasas del tipo receptor y del tipo no
receptor. Las sales de la presente invención comprenden sales de
Fórmula I genérica:
Fig. 1: Patrón de difracción de rayos X de polvo
de la base libre de
3-[5-(4-metanosulfonill-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
(1-10).
Fig. 2: Patrón de difracción de rayos X de polvo
de formas cristalinas de la sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
(A) Sal 1-10A (B) Sal 1-10B.
Fig. 3: Patrón de difracción de rayos X de polvo
de la sal HCl cristalina de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
(1-11C).
Se ilustra una realización de la invención por
una sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
Otra realización es una sal cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
También está incluida dentro del alcance de la
invención la sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
conforme a una forma cristalina caracterizada por un patrón de
difracción de rayos X de polvo de que tiene ángulos de difracción
de: 7,39, 8,20, 9,03, 9,90, 10,94, 15,45, 17,12, 17,84, 18,29,
18,64, 19,24, 19,77, 20,28, 21,73, 22,49, 23,27, 24,15, 24,73,
25,40, 26,79 y 27,50.
Otra realización es la sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
en forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de
rayos X de polvo que tiene ángulos de difracción de: 6,94, 8,01,
9,74, 10,47, 10,77, 11,75, 12,61, 14,02, 15,28, 15,86, 16,93, 17,61,
18,69, 19,04, 19,47, 20,11, 21,56, 21,94, 22,53, 23,85 y 27,22.
Otra realización es la sal cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
en forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de
rayos X de polvo que tiene ángulos de difracción de: 7,08, 7,86,
8,99, 14,54, 15,40, 16,14, 16,81, 18,06, 19,91, 20,72, 22,72, 24,11,
26,09, 28,67 y 29,89.
Y otra realización más es la sal cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
en forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de
rayos X de polvo que tiene varios picos de difracción entre 5º y 30º
2-theta y una endotermia de fusión de 284,08ºC a una
velocidad de 10ºC por minu-
to.
to.
También se incluye en el alcance de la invención
una sal mesilato de
3-[5-(4-metil-5-oxo-[1,4]diazepan-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
Y otra realización adicional es una sal cloruro
de
3-[5-(4-metil-5-oxo-[1,4]diazepan-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
Y otra realización más es una sal mesilato de
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona.
Una realización adicional es una sal cloruro de
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona.
Otra realización es la sal cloruro de
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona
en forma cristalina caracterizada por una endotermia reversible a
235ºC a una velocidad de barrido de 10ºC por minuto.
Y una realización adicional es una sal mesilato
de
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metilamino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona.
Una realización adicional es la sal mesilato de
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metilamino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona
en forma cristalina, caracterizada por varias endotermias
reversibles a 82ºC, 151,4ºC, y 229ºC a una velocidad de barrido de
10ºC por minuto.
Y otra realización es una sal mesilato o cloruro
de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona;
3-[5-(4-metil-5-oxo-[1,4]
diazepan-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona;
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona;
o
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metil
amino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona.
También se incluye dentro del alcance de las
reivindicaciones una composición farmacéutica que está formada por
una sal de la presente invención que está compuesta por una sal de
la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La
presente invención también incluye un procedimiento para tratar o
prevenir cáncer en un mamífero que necesita dicho tratamiento que
comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente
eficaz de una sal descrita en la presente. Cánceres preferidos para
el tratamiento se seleccionan de cánceres de cerebro, tracto
genitourinario, sistema linfático, estómago, laringe y pulmón. Otro
grupo de formas preferidas de cáncer son linfoma histiocítico,
adenocarcinoma de pulmón, cánceres de pulmón de células pequeñas,
cáncer de páncreas, gioblastomas y carcinoma de mama.
También se incluye un procedimiento para tratar o
prevenir una enfermedad en la que está implicada angiogénesis, que
comprende administrar a un mamífero que necesita dicho tratamiento
una cantidad terapéuticamente eficaz de una sal de Fórmula I. Dicha
enfermedad en la que está implicada angiogénesis es una enfermedad
ocular tal como vascularización de la retina, retinopatía diabética,
degeneración macular relacionada con la edad y similares.
También se incluye en el alcance de la presente
invención un procedimiento para tratar o prevenir enfermedades
inflamatorias que comprende administrar a un mamífero que necesite
dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de una sal de
Fórmula I. Ejemplos de tales enfermedades inflamatorias son artritis
reumatoide, psoriasis, dermatitis por contacto, reacciones de
hipersensibilidad retardada y similares.
También se incluye un procedimiento para tratar o
prevenir una enfermedad o estado patológico dependiente de tirosina
quinasa en un mamífero que comprende administra a un paciente
mamífero que necesita dicho tratamiento una cantidad
terapéuticamente eficaz de una sal de Fórmula I. La cantidad
terapéutica varía conforme a la enfermedad específica y puede
determinarse por un experto en la técnica sin experimentación
innecesaria.
También está incluido por la presente invención
un procedimiento para tratar o prevenir vascularización de la retina
que comprende administrar a un mamífero que necesita dicho
tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de una sal de
Fórmula I. Procedimientos para tratar o prevenir enfermedades
oculares, tales como retinopatía diabética y degeneración macular
relacionada con la edad son también parte de la invención. También
se incluye dentro del alcance de la presente invención un
procedimiento para tratar o prevenir enfermedades inflamatorias,
tales como artritis reumatoide, psoriasis, dermatitis por contacto y
reacciones de hipersensibilidad retardada, así como tratamiento o
prevención de patologías asociadas con los huesos seleccionadas de
osteosarcoma, osteoartritis y raquitismo.
La invención también contempla el uso de las
sales reivindicadas en la presente memoria en combinación con un
segundo compuesto seleccionado de:
- 1)
- un modulador del receptor de estrógenos,
- 2)
- un modulador del receptor de andrógenos,
- 3)
- modulador del receptor retinoide,
- 4)
- un agente citotóxico,
- 5)
- un agente antiproliferativo,
- 6)
- un inhibidor de prenil-proteína transferasa,
- 7)
- un inhibidor de HMG-CoA reductasa,
- 8)
- un inhibidor de la proteasa del VIH,
- 9)
- un inhibidor de la transcriptasa inversa, y
- 10)
- otro inhibidor de la angiogénesis.
Inhibidores de angiogénesis preferidos se
seleccionan del grupo consistente en un inhibidor de tirosina
quinasa, un inhibidor de factor de crecimiento derivado de la
epidermis, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de
fibroblastos, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de
plaquetas, un inhibidor de MMP (metaloproteasas de matriz), un
bloqueador de integrinas, interferon-\alpha,
interleuquina-12, polisulfato de pentosan, un
inhibidor de ciclooxigenasa, carboxiamidotriazol,
combreta-estatina A-4, escualamina,
6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol,
talidomida, angiostatina, troponina-1 y un
anticuerpo frente a VEGF. Moduladores del receptor de estrógenos
preferidos son tamoxifeno y raloxifeno.
También se incluye en el alcance de las
reivindicaciones un procedimiento para tratar cáncer que comprende
administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una sal de
Fórmula I en combinación con terapia de radiación y/o en combinación
con un compuesto seleccionado de:
- 1)
- un modulador del receptor de estrógenos,
- 2)
- un modulador del receptor de andrógenos,
- 3)
- modulador del receptor retinoide,
- 4)
- un agente citotóxico,
- 5)
- un agente antiproliferativo,
- 6)
- un inhibidor de prenil-proteína transferasa,
- 7)
- un inhibidor de HMG-CoA reductasa,
- 8)
- un inhibidor de la proteasa del VIH,
- 9)
- un inhibidor de la transcriptasa inversa, y
- 10)
- otro inhibidor de la angiogénesis.
Y otra realización más de la invención es un
procedimiento para tratar cáncer que comprende administrar una
cantidad terapéuticamente eficaz de una sal de Fórmula I en
combinación con paclitaxel o trastuzumab.
También dentro del alcance de la invención está
un procedimiento para reducir o prevenir lesión en los tejidos
después de un suceso isquémico cerebral que comprende administrar
una cantidad terapéuticamente eficaz de una sal de Fórmula I.
Estos y otros aspectos de la invención serán
evidentes a partir de las descripciones contenidas en la presente
memoria.
"Enfermedades o estados patológicos
dependientes de tirosina quinasa" se refiere a estados
patológicos que dependen de la actividad de una o más tirosina
quinasas. Las tirosina quinasas, bien directa o indirectamente,
participan en las vías de transducción de señal de una diversidad de
actividades celulares que incluyen proliferación, adhesión y
migración y diferenciación. Las enfermedades asociadas con
actividades tirosina quinasa incluyen la proliferación de células
tumorales, la neovascularización patológica que soporta el
crecimiento de tumores sólidos, la neovascularización ocular
(retinopatía diabética, degeneración macular relacionada con la edad
y similares) y la inflamación (psoriasis, artritis reumatoide y
similares).
Las sales de la presente invención pueden tener
centros asimétricos, ejes quirales y planos quirales (como se
describe en: E.L. Eliel and S.H. Wilen, Stereochemistry of Carbon
Compounds, John Wiley & Sons, Nueva York, 1994, páginas
1119-1190), y presentarse en forma de racematos,
mezclas racémicas y diastereoisómeros individuales, con todos los
posibles isómeros y mezclas de los mismos, incluyendo los isómeros
ópticos, estando todos incluidos en la presente invención. Además,
las sales descritas en la presente memoria pueden existir como
tautómeros y ambas formas tautómeras se pretende que estén incluidas
en el alcance de la invención, aunque solo se represente una
estructura tautomérica. Por ejemplo, se sobreentiende que cualquier
reivindicación al compuesto A siguiente incluye la estructura
tautómera B y viceversa, así como a las mezclas de los
mismos.
Las presentes sales son útiles como agentes
farmacéuticos para mamíferos, en especial para seres humanos, en el
tratamiento de enfermedades dependientes de tirosina quinasa. Tales
enfermedades incluyen la proliferación de células tumorales, la
neovascularización patológica (o angiogénesis) que soporta el
crecimiento de tumores sólidos, la neovascularización ocular
(retinopatía diabética, degeneración macular relacionada con la edad
y similares) y la inflamación (psoriasis, artritis reumatoide y
similares). En base a estudios farmacocinéticos en animales, las
sales reivindicadas en el presente documento tienen un perfil de
actividad oral inesperadamente superior al compararlas con la base
libre correspondiente y, por tanto, son particularmente adecuadas
para administración oral. Sin embargo, éstas se pueden administrar
por otras vías como se describe en la presente memoria.
Las sales de la presente invención se pueden
administrar a pacientes para usar en el tratamiento de cáncer. Las
presentes sales inhiben la angiogénesis tumoral, afectando de este
modo al crecimiento de tumores (J. Rak et al. Cancer
Research, 55:4575-4580, 1995). Las propiedades
antiangiogénesis de las presentes sales son también útiles en el
tratamiento de ciertas formas de ceguera relacionada con
vascularización de la retina.
Las sales descritas son también útiles en el
tratamiento de ciertas patologías relacionadas con los huesos tales
como osteosarcoma, osteoartritis y raquitismo, también conocido como
osteomalacia oncogénica. (Hasegawa et al., Skeletal Radiol.,
28, páginas 41-45, 1999; Gerber et
al., Nature Medicine, Vol. 5, Nº. 6, páginas
623-628, junio de 1999). Y puesto que el VEGF
promueve directamente la resorción ósea osteoclástica a través de
KDR/Flk-1 expresado en osteoclastos maduros (FEBS
Let. 473:161-164 (2000); Endocrinology, 141:1667
(2000)), las presentes sales son también útiles para tratar y
prevenir estados patológicos relacionados con la resorción ósea,
tales como osteoporosis y enfermedad de Paget.
Las sales reivindicadas se pueden usar también
para reducir o prevenir lesión a los tejidos que se produce después
de sucesos isquémicos cerebrales tales como ictus, reduciendo el
edema cerebral, la lesión tisular y la lesión por reperfusión
después de la isquemia. (Drug News Perspect
11:265-270 (1998); J. Clin. Invest.
104:1613-1620 (1999).)
Las sales de esta invención se pueden administrar
a mamíferos, con preferencia seres humanos, bien solas o, con
preferencia, combinadas con vehículos o diluyentes farmacéuticamente
aceptables, opcionalmente con adyuvantes conocidos, tales como
hidróxido de aluminio, en una composición farmacéutica conforme a la
práctica farmacéutica convencional.
Para uso oral de un compuesto quimioterápico
conforme a esta invención, el compuesto se puede administrar, por
ejemplo, en forma de comprimidos o cápsulas, o como una solución o
suspensión acuosa. En el caso de comprimidos para uso oral, se
añaden habitualmente vehículos que se usan corrientemente incluyen
lactosa y almidón de maíz, y agentes lubricantes tales como
estearato de magnesio. Para administración oral en forma de cápsula,
diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz secado. Cuando
las suspensiones acuosas se requieren para uso oral, el ingrediente
activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se
desea, se pueden añadir ciertos edulcorantes y/o aromatizantes.
Las sales de la presente invención también se
pueden administrar junto con otros agentes terapéuticos bien
conocidos que se seleccionan por su utilidad particular contra el
estado patológico que se está tratando. Por ejemplo, en el caso de
trastornos relacionados con los huesos, las combinaciones que serían
útiles incluirán bisfosfonatos antiresorción, tales como alendronato
y risedronato; bloqueadores de integrinas (definidos más adelante
con más detalle) tales como antagonistas \alphav\beta_{3};
estrógenos conjugados usados en terapia de reposición hormonal,
tales como PREMPRO®, PREMARIN® y ENDOMETRION®; moduladores
selectivos del receptor de estrógenos (SERM), tales como raloxifeno,
droloxifeno, CP-336.156 (Pfizer) y lasofoxifeno;
inhibidores de catespina K; e inhibidores de la bomba de protones
ATP.
Las presentes sales también son útiles en
combinación con agentes anticancerígenos conocidos. Tales agentes
anticancerígenos conocidos incluyen los siguientes: moduladores del
receptor de estrógenos, moduladores del receptor de andrógenos,
moduladores del receptor de retinoides, agentes citotóxicos, agentes
antiproliferativos, inhibidores de prenil-proteína
transferasa, inhibidores de HMG-CoA reductasa,
inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores de transcriptasa
inversa y otros inhibidores angiogénicos.
"Moduladores del receptor de estrógenos" se
refiere a compuestos que interfieren o inhiben la unión de
estrógenos al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos
de moduladores del receptor de estrógenos incluyen, aunque sin
quedar limitados a los mismos, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno,
LY353381, LY117081, toremifeno, fulvestrant,
4-[7-(2,2-dimetil-1-oxopropoxi-4-metil-2-[4-[2-(1-piperidinil)etoxi]fenil]-2H-1-benzopiran-3-il]-fenil-2,2-dimetilpropanoato,
4,4'-dihidroxibenzofenona-2,4-dinitrofenilhidrazona
y SH646.
"Moduladores del receptor de andrógenos" se
refiere a compuestos que interfieren o inhiben la unión de
andrógenos al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos
de moduladores del receptor de andrógenos incluyen finasterida y
otros inhibidores de 5\alpha-reductasa,
nilutamida, flutamida, bicalutamida, liarozol y acetato de
abiraterona.
"Moduladores del receptor de retinoides" se
refiere a compuestos que interfieren o inhiben la unión de retinodes
al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos de tales
moduladores del receptor de retinoides incluyen bexaroteno,
tretinoina, ácido 13-cis-retinoico,
ácido 9-cis-retinoico,
\alpha-difluorometilornitina,
ILX23-7553,
trans-N-(4'-hidroxifenil)retinamida
y N-4-carboxifenil retinamida.
"Agentes citotóxicos" se refieren a
compuestos que provocan muerte celular, fundamentalmente
interfiriendo directamente con el funcionamiento de las células o
inhibiendo o interfiriendo en la miosis celular, incluyendo agentes
alquilantes, factores de necrosis tumoral, intercalantes,
inhibidores de microtubulina e inhibidores de topoisomerasa.
Ejemplos de agentes citotóxicos incluyen, aunque
sin quedar limitados a los mismos, tirapazimina, sertenef,
caquectina, ifosfamida, tasonermina, lonidamina, carboplatino,
altretamina, prednimustina, dibromodulcitol, ranimustina,
fotemustina, nedaplatino, oxaliplatino, temozolomida, heptaplatino,
estramustina, tosilato de improsulfano, trofosfamida, nimustina,
cloruro de dibrospidio, pumitepa, lobaplatino, satraplatino,
profiromicina, cisplatino, irofulveno, dexifosfamida,
cis-aminadicloro(2-metil-iridina)
platino, bencilguanina, glufosfamida, GPX100, tetracloruro de
(trans, trans,
trans)-bis-mu-(hexano-1,6-diamina)-mu-[diamina-platino(II)]bis[diamina(cloro)platino
(II)], diarizidinilespermina, trióxido de arsenio,
1-(11-dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina,
zorubicina, idarubicina, bisantreno, mitoxantrona, pirarubicina,
pinafida, valrubicina, amrubicina, antineoplaston,
3'-desamino-3'-morfolino-13-desoxo-10-hidroxicarminomicina,
annamicina, galarubicina, elinafida, MEN10755 y
4-desmetoxi-3-desamino-3-aziridinil-4-metilsulfonil-daunorubicina.
Ejemplos de inhibidores de microtubulina incluyen
paclitaxel, sulfato de vindesina,
3',4'-dideshidro-4'-desoxi-8'-norvincaleucoblastina,
docetaxol, rizoxina, dolastatina, isetionato de mivobulina,
auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunina,
criptoficina,
2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)
enceno sulfonamida, anhidrovinblastina,
N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolina-t-butilamida,
TDX258 y BMS188797.
Algunos ejemplos de inhibidores de topoisomerasa
son topotecan, hicaptamina, irinotecan, rubitecan,
6-etoxipropionil-3',4'-O-exo-bencilideno-chartreusina,
9-metoxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo[3,4,5-kl]acridina-2-(6H)
propanamina,
1-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':b,7]indolizino[1,2b]quinolina-10,13(9H,15H)diona,
lurtotecan,
7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S)camptotecina,
BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, etopósido fosfato, tenipósido,
sobuzoxano,
2'-dimetilamino-2'-desoxi-etopósido,
GL331,
N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidroxi-5,6-dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida,
asulacrina, (5a, 5aB,
8aa,9b)-9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a,9-hexohidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol-6-ona,
2,3-(metilendioxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridinio,
6,9-bis[(2-aminoetilamino]benzo[g]isoquinolina-5,10-diona,
5-(3-aminopropilamino)-7,10-dihidroxi-2-(2-hidroxietilaminometil-6H-pirazolo[4,5,1-de]acridin-6-ona,
N-[1-[2(dietilamino)etilamino]-7-metoxi-9-oxo-9H-tioxanten-4-ilmetil]formamida,
N-(2-(dimetilamino)etilacridina-4-carboxamida,
6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3-hidroxi-7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-ona
y dimesna.
"Agentes antiproliferativos" incluyen
oligonucleótidos ARN y ADN antisentido tales como G3139, ODN698,
RVASKRAS, GEM231 e INX3001, y antimetabolitos tales como
enocitabina, carmofur, tegafur, pentostatina, doxifluridina,
trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, citarabina
ocfosfato, fosteabina sódica hidratada, raltitrexed, paltitrexid,
emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexed, pemetrexed,
nelzarabina,
2'-desoxi-2'-metilidencitidina,
2'-fluorometilen-2'-desoxicitidina,
N-[5-(2,3-dihidro-benzofuril)sulfonil]-N'-(3,4-diclorofenil)
urea,
N6-[4-desoxi-4-[N2-[2(E),4(E)-tetradecadienoil]glicilamino]-L-glicero-B-L-manno-heptopiranosil]adenina,
aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido
4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimidino[5,4-b][1,4]tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-L-glutámico,
aminopterina, 5-flurouracilo, alanosina, éster del
ácido
11-acetil-8-(carbamoiloximetil-4-formil-6-metoxi-14-oxa-1,11-diazatetraciclo(7,4,1,0,0)-tetradeca-2,4,6-trien-9-il
acético, swainsonina, lometrexol, dexrazoxano, metioninasa,
2'-ciano-2'-desoxi-N4-palmitoil-1-B-D-arabino
furanosil citosina, y
3-aminopiridin-2-carboxaldehído
tiosemicarbazona. "Agentes antiproliferativos" también incluye
anticuerpos monoclonales frente a factores de crecimiento, distintos
de los enumerados bajo el epígrafe "inhibidores de
angiogénesis", tales como trastuzumab y genes supresores de
tumores, tales como p53, que se pueden liberar a través de
transferencia génica mediada por virus recombinantes (véase la
patente de Estados Unidos nº 6.069.134, por ejemplo).
"Inhibidores de HMG-CoA
reductasa" se refiere a inhibidores de
3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA
reductasa. Los compuestos que tienen actividad inhibidora para la
HMG-CoA reductasa se pueden identificar fácilmente
usando ensayos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, véase los
ensayos descritos o citados en la patente de Estados Unidos
4.231.938 en la columna 6, y el documento WO 84/02131 en las páginas
30-33. Los términos "inhibidor de
HMG-CoA reductasa" e "inhibidor de
HMG-CoA reductasa" tienen el mismo significado
cuando se usan en la presente memoria.
Ejemplos de inhibidores de
HMG-CoA reductasa que se pueden usar incluyen,
aunque sin quedar limitados a los mismos, lovastatina (MEVACOR®;
véanse las patentes de Estados Unidos números 4.231.938, 4.294.926 y
4.319.039), simvastatina (ZOCOR®; véanse las patentes de Estados
Unidos números 4.444.784, 4.820.850 y 4.916.239), pravastatina
(PRAVACHOL®; véanse las patentes de Estados Unidos números
4.346.227, 4.537.859, 4.410.629, 5.030.447 y 5.180.589),
fluvastatina (LESCOL®; véanse las patentes de Estados Unidos números
5.354.772, 4.911.165, 4.929.437, 5.189.164, 5.118.853, 5.290.946 y
5.356.896), atorvastatina (LIPITOR®; véanse las patentes de Estados
Unidos números 5.273.995, 4.681.893, 5.489.691 y 5.342.952) y
cerivastatina (también conocida como rivastatina y BAYCHOL®; véase
la patente de Estados Unidos número 5.177.080). Las fórmulas
estructurales de estos y otros inhibidores de
HMG-CoA reductasa que se pueden usar en los
presentes procedimientos se describen en la página 87 de M. Yalpani,
"Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry,
páginas. 85-89 (5 de febrero de 1996) y en las
patentes de Estados Unidos números 4.782.084 y 4.885.314. El término
inhibidor de HMG-CoA reductasa tal y como se usa en
la presente memoria incluye todas las formas lactona y ácido abierta
(es decir, cuando el anillo lactona está abierto formando el ácido
libre) farmacéuticamente aceptables, así como las formas salinas y
éster de los compuestos que tienen actividad inhibidora de
HMG-CoA reductasa, y por tanto, el uso de tales
sales, ésteres, formas ácido abiertas y lactona está incluido en el
alcance de esta invención. A continuación se muestra como
estructuras I y II una ilustración de la porción lactona y su forma
correspondiente ácido abierta.
En inhibidores de HMG-CoA
reductasa en los que puede existir forma ácido abierta, las formas
sal y éster pueden estar formadas preferiblemente a partir del ácido
abierto y tales formas están todas incluidas en el significado del
término "inhibidor de HMG-CoA reductasa" tal y
como se usa en la presente memoria. Con preferencia, el inhibidor de
HMG-CoA reductasa se selecciona de lovastatina y
simvastatina y, lo más preferible, simvastatina. En la presente, el
término "sales farmacéuticamente aceptables" con respecto al
inhibidor de HMG-CoA reductasa significará sales no
tóxicas de los compuestos empleados en esta invención que por lo
general se preparan haciendo reaccionar el ácido libre con una base
orgánica o inorgánica adecuada, en particular las formadas con
cationes tales como sodio, potasio, aluminio, calcio, litio,
magnesio, cinc y tetrametilamonio, así como las sales formadas a
partir de aminas tales como amoníaco, etilendiamina,
N-metilglucamina, lisina, arginina, ornitina,
colina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaina,
dietanolamina, procaina, N-bencifenetilamina,
1-p-clorobencil-2-pirrolidin-1'-il-metilbencimidazol,
dietilamina, piperazina y tris(hidroximetil) aminometano.
Otros ejemplos de formas salinas de inhibidores de
HMG-CoA reductasa pueden incluir, aunque sin quedar
limitadas a las mismas, acetato, bencenosulfonato, benzoato,
bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de
calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato,
diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato,
gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato,
hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato,
hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato,
malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato,
napsilato, nitrato, oleato, oxalato, pamaoto, palmitato,
pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato,
estearato, subacetato, succinato, tannato, tartrato, teoclato,
tosilato, trietioduro y valerato.
Derivados éster de los compuestos inhibidores de
HMG-CoA reductasa descritos pueden actuar como
profármacos que, cuando son absorbidos en el torrente sanguíneo de
un animal de sangre caliente, pueden escindirse de una forma tal que
liberan la forma farmacéutica y permitan que el fármaco proporcione
una eficacia terapéutica mejorada.
"Inhibidor de prenil-proteína
transferasa" se refiere a un compuesto que inhiben una cualquiera
o cualquier combinación de las enzimas
prenil-proteína transferasa, incluyendo
farnesil-proteína transferasa (FPTasa),
geranilgeranil-proteína transferasa tipo I
(GGPTasa-I) y
geranilgeranil-proteína transferasa
tipo-II (GGPTasa-II, también
denominada Rab GGPTasa). Ejemplos de compuestos que inhiben
prenil-proteína transferasa incluyen
(\pm)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona,
(-)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona,
(+)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona,
5(S)-n-butil-1-(2,3-dimetilfenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona,
(S)-1-(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-5-[2-(etanosulfonil)metil-2-piperazinona,
5(S)-n-butil-1-(2-metilfenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona,
1-(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobencil)-2-metil-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona,
1-(2,2-difeniletil-3-[N-(1-(4-cianobencil)-1H-imidazol-5-iletilcarbamoil]piperidina,
4-{5-[4-hidroximetil-4-(4-cloropiridin-2-ilmetil)-piperidina-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}
benzonitrilo,
4-{5-[4-hidroximetil-4-(3-clorobencil)-piperidina-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}benzonitrilo,
4-{3-[4-(2-oxo-2H-piridin-1-il)bencil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
4-{3-[4-(5-cloro-2-oxo-2H-[1,2']bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
4-{3-[4-(2-oxo-2H-[1,2']bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
4-[3-(2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridin-4-ilmetil)-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
18,19-dihidro-19-oxo-5H,17H-6,10:12,16-dimeten-1H-imidazo[4,3-c][1,11,4]dioxaazaciclo-nonadecin-9-carbonitrilo,
(\pm)-19,20-dihidro-19-oxo-5H-18,21-etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo[d]imidazo[4,3-k][1,6,9,12]oxatriaza-ciclooctadecin-9-carbonitrilo,
19,20-dihidro-19-oxo-5H,17H-18,21-etano-6,10:12,16-dimeteno-22H-imidazo[3,4-h][1,8,11,14]oxatriazacicloeicosina-9-carbonitrilo
y
(\pm)-19,20-dihidro-3-metil-19-oxo-5H-18,21-etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo
[d]imidazo[4,3-k][1,6,9,12]oxa-triazaciclooctadecin-9-carbonitrilo.
Otros ejemplos de inhibidores de
prenil-proteína transferasa se pueden encontrar en
las siguientes publicaciones y patentes: documentos WO 96/30343, WO
97/18813, WO 97/21701, WO 97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO
98/29119, WO 95/32987, patente de Estados Unidos número 5.420.245,
patente de Estados Unidos número 5.523.430, patente de Estados
Unidos número 5.532.359, patente de Estados Unidos número 5.510.510,
patente de Estados Unidos número 5.589.485, patente de Estados
Unidos número 5.602.098, publicación de patente europea 0 618 221,
publicación de patente europea 0 675 112, publicación de patente
europea 0 604 181, publicación de patente europea 0 696 593,
documentos WO 94/19357, WO 95/08542, WO 95/11917, WO 95/12612, WO
95/12572, WO 95/10514, patente de Estados Unidos número 5.661.152,
documentos WO 95/10515, WO 95/10516, WO 95/24612, WO 95/34535, WO
95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO 96/06193, WO 96/16443, WO
96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO 96/24611, WO 96/24612, WO
96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736, patente de Estados Unidos número
5.571.792, documentos WO 96/17861, WO 96/33159, WO 96/34850, WO
96/34851, WO 96/30017, WO 96/30018, WO 96/30362, WO 96/30363, WO
96/31111, WO 96/31477, WO 96/31478, WO 96/31501, WO 97/00252, WO
97/03047, WO 97/03050, WO 97/04785, WO 97/02920, WO 97/17070, WO
97/23478, WO 97/26246, WO 97/30053, WO 97/44350, WO 98/02436 y
patente de Estados Unidos número 5.532.359. Puede encontrarse un
ejemplo de la función de un inhibidor de
prenil-proteína transferasa sobre la angiogénesis en
European J. of Cancer, Vol. 35, número 9, páginas
1394-1401 (1999).
Ejemplos de inhibidores de proteasa del VIH
incluyen amprenavir, abacavir, CGP-73547,
CGP-61755, DMP-450, indinavir,
nelfinavir, tipranavir, ritonavir, saquinavir,
ABT-378, AG 1776 y BMS-232,632.
Ejemplos de inhibidores de transcriptasa inversa incluyen
delaviridina, efavirenz, GS-840, HB Y097,
lamivudina, nevirapina, AZT, 3TC, ddC y ddI.
"Inhibidores de la angiogénesis" se refiere
a compuestos que inhiben la formación de nuevos vasos sanguíneos,
independientemente del mecanismo. Ejemplos de inhibidores de
angiogénesis incluyen, aunque sin quedar limitados a los mismos,
inhibidores de tirosina quinasa, tales como inhibidores de los
receptores de tirosina quinasa Flt-1
(VEGFR1) y Flk-1/KDR (VEGFR20), inhibidores de factores de crecimiento derivados de la epidermis, de fibroblastos o de plaquetas, inhibidores de MMP (metaloproteasa de matriz), bloqueadores de integrinas, interferon-\alpha, interleuquina-12, polisulfato de pentosan, inhibidores de ciclooxigenasa, incluyendo los antiinflamatorios no esteroideos (AINE) como la aspirina y el ibuprofeno, así como inhibidores selectivos de ciclooxigenasa-2 como celecoxib y rofecoxib (PNAS, Vol. 89, página 7384 (1992); JNCI, Vol. 69, página 475 (1982); Arch. Opthalmol., Vol. 108, página 573 (1990); Anat. Rec., Vol. 238, página 68 (1994); FEBS Letters, Vol. 372, página 83 (1995); Clin, Orthop. Vol. 313, página 76 (1995); J. Mol. Endocrinol., Vol. 16, página 107 (1996); Jpn. J. Pharmacol., Vol. 75, página 105 (1997); Cancer Res., Vol. 57, página 1625 (1997); Cell, Vol. 93, página 705 (1998); Intl. J. Mol. Med., Vol. 2, página 715 (1998); J. Biol. Chem., Vol. 274, página 9116 (1999)), carboxiamidotriazol, combretastatina A-4, escualamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol, talidomida, angiostatina, troponina-1, antagonistas de angiotensina II (véase Fernandez et al., J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)) y anticuerpos frente a VEGF (véase, Nature Biotechnology, Vol. 17, páginas 963-968 (Octubre de 1999); Kim et al., Nature, 362, 841-844 (1993)).
(VEGFR1) y Flk-1/KDR (VEGFR20), inhibidores de factores de crecimiento derivados de la epidermis, de fibroblastos o de plaquetas, inhibidores de MMP (metaloproteasa de matriz), bloqueadores de integrinas, interferon-\alpha, interleuquina-12, polisulfato de pentosan, inhibidores de ciclooxigenasa, incluyendo los antiinflamatorios no esteroideos (AINE) como la aspirina y el ibuprofeno, así como inhibidores selectivos de ciclooxigenasa-2 como celecoxib y rofecoxib (PNAS, Vol. 89, página 7384 (1992); JNCI, Vol. 69, página 475 (1982); Arch. Opthalmol., Vol. 108, página 573 (1990); Anat. Rec., Vol. 238, página 68 (1994); FEBS Letters, Vol. 372, página 83 (1995); Clin, Orthop. Vol. 313, página 76 (1995); J. Mol. Endocrinol., Vol. 16, página 107 (1996); Jpn. J. Pharmacol., Vol. 75, página 105 (1997); Cancer Res., Vol. 57, página 1625 (1997); Cell, Vol. 93, página 705 (1998); Intl. J. Mol. Med., Vol. 2, página 715 (1998); J. Biol. Chem., Vol. 274, página 9116 (1999)), carboxiamidotriazol, combretastatina A-4, escualamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol, talidomida, angiostatina, troponina-1, antagonistas de angiotensina II (véase Fernandez et al., J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)) y anticuerpos frente a VEGF (véase, Nature Biotechnology, Vol. 17, páginas 963-968 (Octubre de 1999); Kim et al., Nature, 362, 841-844 (1993)).
Otros ejemplos de inhibidores de angiogénesis
incluyen, aunque sin quedar limitados a los mismos, endostation,
ucraina, ranpirnasa, IM862,
5-metoxi-4-[2-metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1-oxaespiro[2,5]oct-6-il(cloroacetil)carbamato,
acetildinanalina,
5-amino-1-[[3,5-dicloro-4-(4-clorobenzoil)fenil]metil]-1H-1,2,3-triazol-4-carboxamida,
CM101, escualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, manopentaosa
fosfato sulfatado,
7,7-(carbonil-bis[imino-N-metil-4,2-pirrolocarbonil-imino[N-metil-4,2-pirrol]-carbonilimino]-bis-(1,3-naftaleno
disulfonato) y
3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilen]-2-indolinona
(SU5416).
Tal y como se usa en la presente memoria,
"bloqueadores de integrina", se refiere a compuestos que
antagonizan, inhiben o contrarrestan de forma selectiva la unión de
un ligando fisiológico a la integrina \alphav\beta3, a
compuestos que antagonizan, inhiben o contrarrestan de forma
selectiva la unión de un ligando fisiológico a la integrina
\alphav\beta5, a compuestos que antagonizan, inhiben o
contrarrestan de forma selectiva la unión de un ligando fisiológico
a la integrina \alphav\beta3 y a la integrina \alphav\beta5
y a compuestos que antagonizan, inhiben o contrarrestan la actividad
de la(s) integrina(s) particular(es) expresada
en células del endotelio capilar. El término también se refiere a
antagonistas de las integrinas \alphav\beta6, \alphav\beta8,
\alpha1b1, \alpha2b1, \alpha5b1, \alpha6b1 y \alpha6b4. El
término también se refiere a antagonistas de cualquier combinación
de integrinas \alphav\beta3, \alphav\beta5,
\alphav\beta6, \alphav\beta8, \alpha1b1, \alpha2b1,
\alpha5b1, \alpha6b1 y a6b4.
Algunos ejemplos específicos de inhibidores de
tirosina quinasa incluyen
N-(trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida,
3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil)indolin-2-ona,
17-(alilamino)-17-desmetoxigeldanamicina,
4-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-metoxi-6-[3-(4-morfolinil)propoxil]quinazolina,
N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)-4-quinazolinamina,
BIBX1382,
2,3,9,10,11,12-hexahidro-10-(hidroximetil-10-hidroxi-9-metil-9,12-epoxi-1H-diindolo[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]pirrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocin-1-ona,
SH268, genisteina, STI571, CEP2563,
4-(3-clorofenilamino)-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinmetano
sulfonato,
4-(3-bromo-4-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina,
4-(4'-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina,
SU6668, STI571A,
N-4-clorofenil-4-(4-piridilmetil-1-ftalazinamina
y EMD121974.
Las sales reivindicadas en la presente también
son útiles, solas o en combinación con antagonistas del receptor de
fibrinógeno plaquetario (GP IIb/IIIa), tales como tirofiban, para
inhibir la metástasis de células cancerosas. Las células tumorales
pueden activar las plaquetas en gran medida a través de la
generación de trombina. Esta activación se asocia con la liberación
de VEGF. La liberación de VEGF potencia la metástasis aumentando la
extravasación a puntos de adhesión al endotelio vascular
(Amirkhosravi, Platelets 10, 285-292, 1999).
Por tanto, los presentes compuestos pueden servir para inhibir
metástasis, solos o combinados con antagonistas de GP IIb/IIIa.
Ejemplos de otros antagonistas del receptor de fibrinógeno incluyen
abciximab, eptifibatida, sibrafiban, lamifiban, lotrafiban,
cromofiban y CT50352.
Si se formula como una dosis fija, tales
productos de combinación emplean las sales de esta invención en el
intervalo de dosis descrito más adelante y el otro agente o agentes
farmacéuticamente activos en su intervalo de dosis aprobado. Los
compuestos de la presente invención pueden usarse de forma
alternativa secuencialmente con agente(s) farmacéuticamente
aceptables conocidos cuando sea inapropiada una formulación de
combinación.
El término "administración" y sus variantes
(por ejemplo, "administrar un compuesto" en referencia a un
compuesto de la invención se refiere a introducir el compuesto o un
profármaco del compuesto en el sistema del animal que necesita
tratamiento. Cuando un compuesto de la invención o uno de sus
profármacos se proporciona en combinación con uno o más agentes
activos (por ejemplo, un agente citotóxico, etc.)
"administración" y sus variantes se sobreentienden cada una que
incluye la introducción concurrente y secuencial del compuesto o su
profármaco y otros agentes.
Tal y como se usa en la presente memoria, el
término "composición" se pretende que incluya un producto que
comprende los ingredientes especificados en las cantidades
especificadas, así como cualquier producto que se origine, directa o
indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados
en las cantidades especificadas.
La expresión "cantidad terapéuticamente
eficaz" tal y como se usa en la presente memoria se refiere a la
cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que consigue la
respuesta biológica o medicinal en un tejido, sistema, animal o ser
humano que se esté observando por un investigador, veterinario,
doctor en medicina u otro médico.
El término "tratar el cáncer" o
"tratamiento de cáncer" se refiere a la administración a un
mamífero afectado de un estado patológico canceroso y se refiere a
un efecto que alivia el estado canceroso eliminando las células
cancerosas, pero también a un efecto que origina la inhibición del
crecimiento y/o metástasis del cáncer.
La presente invención también incluye una
composición farmacéutica útil en el tratamiento de cáncer, que
comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz
de las sales de esta invención, con o sin vehículos o diluyentes
farmacéuticamente aceptables. Composiciones adecuadas de esta
invención incluyen soluciones acuosas que comprenden compuestos de
esta invención y vehículos farmacológicamente aceptables, por
ejemplo solución salina, a un nivel de pH de por ejemplo 7,4.
Cuando se administra un compuesto conforme a esta
invención a un sujeto humano, la dosis diaria se determinará
normalmente por el médico encargado, variando la dosis por lo
general conforme a la edad, peso y respuesta del paciente
particular, así como de la intensidad de los síntomas del
paciente.
En una aplicación ejemplo, se administra una
cantidad adecuada de compuesto a un mamífero que se somete a
tratamiento de cáncer. La administración se produce en una cantidad
que varía de aproximadamente 0,1 mg/kg de peso corporal a
aproximadamente 60 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente
de 0,5 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 40 mg/kg de peso
corporal por día.
Los compuestos de la presente invención descritos
en los ejemplos se ensayaron por los ensayos descritos a
continuación y se encontró que tenían actividad inhibidora de
quinasa. Se conocen en la bibliografía otros ensayos y se podrían
realizar fácilmente por los expertos en la técnica (véase, por
ejemplo, Dhanabal et al., Cancer Res.
59:189-197; Xin et al., J. Biol. Chem.
274:9116-9121; Sheu et al., Anticancer
Res. 18:4435-4441; Ausprunk et al.,
Dev. Biol. 38:237-248; Gimbrone et
al., J. Natl. Cancer Inst. 52:413-427;
Nicosia et al., In Vitro
18:538-549).
Se midió la actividad quinasa de receptor de VEGF
mediante la incorporación de fosfato marcado radiactivamente en
sustrato de ácido poliglutámico, tirosina, 4:1 (pEY). El producto
pEY fosforilado se atrapa en una membrana de filtro y se cuantifica
el fosfato marcado radiactivamente por recuento de centelleo.
Se clonaron los dominios de tirosina quinasa
intracelular de KDR humano (Terman, B.I. et al. Oncogene
(1991) vol. 6, páginas 1677-1683.) y
Flt-1 (Shibuya, M. et al. Oncogene (1990)
vol. 5, páginas 519-524) como proteínas de fusión
génica de glutatión S-transferasa (GST). Esto se
lleva a cabo clonando el dominio citoplásmico de la quinasa KDR a
modo de un marco de fusión en el extremo carboxilo terminal del gen
GST. Las proteínas de fusión del dominio GST-quinasa
recombinante soluble se expresaron en células de insecto
Spodoptera frugiperda (Sf21) (Invitrogen) usando un vector de
expresión de baculovirus (pAcG2T, Pharmingen).
El resto de materiales usados y sus composiciones
fueron como sigue:
Tampón de lisis: Tris 50 mM pH 7,4, NaCl
0,5 M, DTT 5 mM, EDTA 1 mM, triton X-100 al 0,5%,
glicerol al 10%, 10 mg/ml de cada uno de leupeptina, pepstatina y
aprotinina y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM (todos de
Sigma).
Tampón de lavado: Tris 50 mM pH 7,4, NaCl
0,5 M, DTT 5 mM, EDTA 1 mM, triton X-100 al 0,05%,
glicerol al 10%, 10 mg/ml de cada uno de leupeptina, pepstatina y
aprotinina y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM.
Tampón de diálisis: Tris 50 mM pH 7,4,
NaCl 0,5 M, DTT 5 mM, EDTA 1 mM, triton X-100 al
0,05%, glicerol al 50%, 10 mg/ml de cada uno de leupeptina,
pepstatina y aprotinina y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM.
Tampón de reacción 10 X: Tris 200 mM, pH
7,4, NaCl 1,0 M, MnCl_{2} 50 mM, DTT 10 mM y 5 mg/ml de albúmina
sérica bovina (Sigma).
Tampón de dilución enzimático: Tris 50
mM, pH 7,4, NaCl 0,1 M, DTT 1 mM, glicerol al 10%, 100 mg/ml de
BSA.
Sustrato 10 X: 750 \mug/ml de poli
(ácido glutámico, tirosina; 4:1) (Sigma).
Solución de parada: ácido tricloroacético
al 30%, pirofosfato sódico 0,2 M (ambos de Fisher).
Tampón de lavado: ácido tricloroacético al
15%, pirofosfato sódico 0,2 M.
Placas de filtro: Millipore nº MAFC NOB,
GF/C placa de fibra de vidrio de 96 pocillos.
1. Las células Sf21 se infectaron con virus
recombinantes a una multiplicidad de infección de 5 partículas
virales/célula y se cultivaron a 27ºC durante 48 horas.
2. Todas las etapas se llevaron a cabo a 4ºC.
Las células infectadas se recogieron mediante centrifugación a 1000
X g y se lisaron a 4ºC durante 30 minutos con 1/10 de volumen de
tampón de lisis seguido por centrifugación a 100.000 X g durante 1
hora. El sobrenadante se hizo pasar después por una columna de
glutatión Shefarose (Pharmacia) equilibrada en tampón de lisis y
lavada con 5 volúmenes del mismo tampón seguido por 5 volúmenes del
tampón de lavado. La proteína GST-KDR recombinante
se eluyó con tampón de lavado/glutatión 10 mM reducida (Sigma) y se
dializó frente a tampón de diálisis.
- 1.
- Añadir 5 \mul de inhibidor o control al ensayo en DMSO al 50%.
- 2.
- Añadir 35 \mul de mezcla de reacción que contiene 5 \mul de tampón de reacción 10 X, 5 \mul de ATP 25 mM/10 \muCi [^{33}P]ATP (Amersham) y 5 \mul de sustrato 10 X.
- 3.
- Empezar la reacción mediante la adición de 10 \mul de KDR (25 nM) en el tampón de dilución de enzimas.
- 4.
- Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos.
- 5.
- Detener mediante la adición de 50 \mul de solución de parada.
- 6.
- Incubar durante 15 minutos a 4ºC.
- 7.
- Transferir una alícuota de 90 \mul a la placa de filtro.
- 8.
- Aspirar y lavar 3 veces con solución de lavado.
- 9.
- Añadir 30 \mul de cóctel de centelleo, sellar la placa y contar en un contador de centelleo Wallac Microbeta.
Las células endoteliales de venas umbilicales
humanas (HUVEC) en cultivo proliferan en respuesta a tratamiento con
VEGF y se pueden usar como un sistema de ensayo para cuantificar los
efectos de los inhibidores de KDR quinasa sobre estimulación de
VEGF. En el ensayo descrito, monocapas de HUVEC quiescentes se
tratan con vehículo o compuesto de ensayo 2 horas antes de la
adición de VEGF o factor de crecimiento de fibroblastos básico
(bFGF). La respuesta mitógena a VEGF o bFGF se determina midiendo
la incorporación de [^{3}H]timidina en DNA
celular.
celular.
HUVEC: se obtuvieron HUVEC congeladas en
forma de aislados de cultivo primario de Clonetics Corp. Las
células se mantienen en Medio de Crecimiento Endotelial (EGM;
Clonetics) y se usan para ensayos mitógenos descritos en las etapas
1-5 más adelante.
Placas de Cultivo: placas de cultivo de
tejidos de poliestireno de 96 pocillos NUNCLON (NUNC nº 167008).
Medio de Ensayo: la modificación de
Dulbecco de medio de Eagle que contiene 1 mg/ml de glucosa (DMEM
bajo en glucosa; Mediatech) más suero fetal bovino al 10% (v/v)
(Clonetics).
Compuestos de ensayo: Se diluyen
soluciones madre de trabajo de compuestos de ensayo en serie en
dimetil sulfóxido (DMSO) al 100% hasta 400 veces más grande que sus
concentraciones finales deseadas. Las diluciones finales a
concentración 1X se hacen directamente en Medio de Ensayo
inmediatamente antes de la adición a célu-
las.
las.
Factores de Crecimiento 10X: Se preparan
soluciones de VEGF165 humano (500 ng/ml; R&D Systems) y bFGF (10
ng/ml; R&D Systems) en Medio de Ensayo.
[^{3}H]Timidina 10X: se
diluye [metil-^{3}H]timidina (20 Ci/mmol;
Dupont-NEN) a 80 \muCi/ml en DMEM bajo en
glucosa.
Medio de Lavado de Células: solución de
sal equilibrada de Hank (Mediatech) que contiene 1 mg/ml de
seoralbúmina bovina (Boehringer-Mannheim).
Solución de Lisis Celular: NaOH 1 N,
Na_{2}CO_{3} al 2% (p/v).
1. Las monocapas de HUVEC mantenidas en EGM se
recogen mediante tripsinización y se cultivan en placa a una
densidad de 4000 células por 100 \mul de Medio de Ensayo por
pocillo en placas de 96 pocillos. Las células se someten a parada
en su crecimiento durante 24 horas a 37ºC en una atmósfera
humidificada que contiene CO_{2} al 5%.
2. El medio de parada del crecimiento se
reemplaza por 100 \mul de Medio de Ensayo que contiene bien
vehículo (DMSO al 0,25% [v/v]) o bien la concentración final deseada
de compuesto de ensayo. Todas las determinaciones se llevan a cabo
por triplicado. Las células se incuban después a 37ºC con CO_{2}
al 5% durante 2 horas para permitir a los compuestos de ensayo
entrar en las células.
3. Después del periodo de pretratamiento de 2
horas, las células se estimularon mediante adición de 10
\mul/pocillo de bien Medio de Ensayo, solución de VEGF 10X o bien
solución de bFGF 10X. Las células se incubaron después a 37ºC y con
CO_{2} al 5%.
4. Después de 24 horas en presencia de factores
de crecimiento, se añadió [^{3}H]timidina 10X (10
\mul/pocillo).
5. Tres días después de la adición de
[^{3}H]timidina, el medio se elimina mediante aspiración, y
las células se lavan dos veces con Medio de Lavado de Células (400
\mul/pocillo seguidos por 200 \mul/pocillo). Las células
lavadas, adherentes se solubilizan después mediante adición de
Solución de Lisis Celular (100 \mul/célula) y calentamiento a 37ºC
durante 30 minutos. Los lisados celulares se transfieren a viales
de centelleo de vidrio de 7 ml que contienen 150 \mul de agua. Se
añade cóctel de centelleo (5 ml/vial), y la radiactividad asociada a
células se determinó mediante espectroscopía de centelleo
líquido.
En base a los ensayos precedentes los compuestos
de la presente invención son inhibidores de VEGF y así son útiles
para la inhibición de la angiogénesis, tal como en el tratamiento de
enfermedad ocular, por ejemplo, retinopatía diabética y en el
tratamiento de cánceres, por ejemplo, tumores sólidos. Los
compuestos actuales inhiben mitogénesis estimulada mediante VEGF de
células de endotelio vascular humano en cultivo con valores
CI_{50} entre 0,01-5,0 \muM. Estos compuestos
pueden mostrar también selectividad sobre tirosina quinasas
relacionadas (por ejemplo, FGFR1 y la familia Src; para las
relaciones entre Src quinasas y VEGFR quinasas, véase Eliceiri y
col., Molecular Cell, vol. 4, páginas
915-924, diciembre de 1999).
Flt-1 se expresó como una fusión
de GST al dominio de quinasa Flt-1 y se expresó en
baculovirus/células de insecto. El siguiente protocolo se empleó
para someter a ensayo compuestos respecto a su actividad inhibidora
de la quinasa Flt-1:
- 1.
- Se diluyeron inhibidores para dar cuenta de la dilución final en el ensayo, 1:20.
- 2.
- La cantidad apropiada de mezcla de reacción se preparó a temperatura ambiente:
- Tampón 10X (Tris pH 7,4 20 mM/NaCl 0,1 M/DTT 1 mM final)
- MnCl_{2} 0,1 M (5 mM final)
- sustrato pEY (75 \mug/ml)
- ATP/[^{33}P]ATP (2,5 \muM/1 \muCi final)
- BSA (500 \mug/ml final).
- 3.
- Se añadieron 5 \mul del inhibidor diluido a la mezcla de reacción. (Volumen final de 5 \mul en DMSO al 50%). A los pocillos del control positivo, se añadió DMSO blanco (50%).
- 4.
- Se añadieron 35 \mul de la mezcla de reacción a cada pocillo de una placa de 96 pocillos.
- 5.
- La enzima se diluyó en tampón de dilución de enzimas (mantenido a 4ºC).
- 6.
- Se añadieron 10 \mul de la enzima diluida a cada pocillo y se mezclaron (5 nM final).
- A los pocillos del control negativo, se añadieron en cambio 10 \mul de EDTA 0,5 M por pocillo (100 mM final).
- 7.
- La incubación se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 30 minutos.
- 8.
- Se paró mediante la adición de un volumen igual (50 \mul) de TCA al 30%/pirofosfato de Na 0,1 M.
- 9.
- La incubación se llevó a cabo durante 15 minutos para permitir precipitación.
- 10.
- Se transfirió a placa de filtro Millipore.
- 11.
- Se lavó 3X con TCA al 15%/pirofosfato de Na 0,1 M (125 \mul por lavado).
- 12.
- Se dejó secar a vacío durante 2-3 minutos.
- 13.
- Se secó en campana durante \simeq 20 minutos.
- 14.
- Se montó en adaptador Wallac Millipore y se añadieron 50 \mul de centelleante a cada pocillo y se contó.
Flt-3 se expresó como una fusión
de GST al dominio quinasa Flt-3, y se expresó en
baculovirus/células de insecto. El siguiente protocolo se empleó
para someter a ensayo compuestos para actividad inhibidora de
quinasa Flt-3:
- 1.
- Se diluyen inhibidores (explica la dilución final en el ensayo, 1:20)
- 2.
- Se prepara la cantidad apropiada de mezcla de reacción a temperatura ambiente.
- Tampón 10X (Tris pH 7,4 20 mM/NaCl 0,1 M/DTT 1 mM final)
- MnCl_{2} 0,1 M (5 mM final)
- sustrato pEY (75 \mug/ml)
- ATP/[^{33}P]ATP (0,5 \muM/l \muCi final)
- BSA (500 \mug/ml final)
- 3.
- Se añaden 5 \mul del inhibidor diluido a la mezcla de reacción. (Volumen final de 5 \mul en DMSO al 50%). Pocillos de control positivo-añadir DMSO blanco (50%).
- 4.
- Se añaden 35 \mul de la mezcla de reacción a cada pocillo de una placa de 96 pocillos.
- 5.
- Se diluye enzima en tampón de dilución de enzimas (mantenido a 4ºC).
- 6.
- Se añaden 10 \mul de la enzima diluida a cada pocillo y mezclar (5-10 nM final).
- Pocillos de control negativo-añadir en cambio 10 \mul de EDTA 0,5 M por pocillo (100 mM final)
- 7.
- Se incuba a temperatura ambiente durante 60 minutos.
- 8.
- Se para mediante la adición de un volumen igual (50 \mul) de TCA al 30%/pirofosfato de Na 0,1 M.
- 9.
- Se incuba durante 15 minutos para permitir precipitación.
- 10.
- Se transfiera a una de filtro Millipore.
- 11.
- Se lava 3X con TCA al 15%/pirofosfato de Na 0,1 M (125 \mul por lavado).
- 12.
- Se deja secar bajo agitación durante 2-3 minutos.
- 13.
- Se seca en campana durante \simeq 20 minutos.
- 14.
- Se monta un adaptador Wallac Millipore y añadir 50 \mul de centelleante a cada pocillo y se recuenta.
Se pretende que los ejemplos proporcionados
ayuden a la comprensión adicional de la invención. Se pretende que
los materiales particulares empleados, las especies y condiciones
sean ilustrativas de la invención y no limitantes del alcance
razonable de la misma. Las bases libres usadas para preparar las
sales de esta invención se pueden obtener empleando los
procedimientos descritos más adelante así como aquellos descritos en
el documento WO 01/29025, publicado el 26 de abril de 2001,
incorporado en el presente documento como referencia. Además, otros
procedimientos se pueden usar mediante manipulaciones estándar de
reacciones que se conocen en la bibliografía.
Procedimiento isocrático (para estudios de
solubilidad)
| Columna: | BDS HYPESIL, C18 (250 mm x 46 mm), tamaño de partícula 5 \mum |
| Temperatura de la Columna: | ambiente |
| Detector: | 230 nm (longitud de onda de UV) |
| Temperatura de la Columna: | ambiente |
| Caudal: | 1,0 ml/minuto |
| Volumen de Inyección: | 20 \mul |
| Fase Móvil: | A) Ácido Fosfórico al 0,1% |
| B) Acetonitrilo al 100% | |
| Diluyente: | Acetonitrilo al 50%-agua DI |
| Perfil de Gradiente: | (A/B) comienza desde (60/40) y permanece a (60/40) durante 20 minutos. |
| Tiempo de Funcionamiento: | 20 minutos |
Esquema
1
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Esquema 1
(continuación)
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A una solución mecánicamente agitada de ácido
1H-indol-5-carboxílico
(1-1, 20,01 g, 124 mmol) en THF (500 ml) se añadió a
temperatura ambiente lentamente una solución de
LAH-1 M en tolueno (186 ml, 186 mmol, 1,5 equiv.).
La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 hora, se
desactivó con hielo, se fraccionó entre acetato de etilo y
NaHCO_{3} saturado acuoso. La fase orgánica se lavó con salmuera,
se separó, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El producto
bruto solidificó mientras que permanecía bajo presión reducida. El
sólido bruto se suspendió en hexanos (200 ml) y acetato de etilo (10
ml), se agitó durante toda una noche, se recogió mediante filtración
y se secó al aire para proporcionar el producto deseado como un
sólido marrón claro. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
8,24 (s ancho, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,36 (d, 1H, J = 8,4 Hz),
7,23 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 4,75
(s, 2H), 1,68 (s, 1H).
Una solución agitada de
(1H-indol-5-il)-metanol
(1-2, 16,5 g, 112,1 mmol) en diclorometano (300 ml)
se trató a continuación a temperatura ambiente con
diisopropiletilamina (39 ml, 224,2 mmol, 2 equiv.), cloruro de
terc-butildimetilsililo (18,6 g, 123,3 mmol,
1,1 equiv.), y 4-(N,N-dimetilamino)piridina
(1,37g, 11,2 mmol, 0,1 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 30 minutos, se concentró a vacío, se
fraccionó entre acetato de etilo y HCl-0,5 N. La
fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4}),
se concentró a vacío para dar el éter de sililo bruto como un sólido
marrón claro. El producto bruto y bicarbonato
di-terc-butílico (26,9, 123,3
mmol) se disolvieron en diclorometano (300 ml) y se agitaron a
temperatura ambiente en presencia de
4-(N,N-dimetilamino) piridina (1,37g, 11,2 mmol)
durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a vacío, se
fraccionó entre acetato de etilo y HCl-0,5 N. La
fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4})
y se concentró a vacío para dar el aceite bruto. La cromatografía
(SiO_{2}, acetato de etilo al 10% en hexanos) proporcionó éster
terc-butílico del ácido
5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil-indol-1-carboxílico
(1-3) como un sólido blanco; RMN de ^{1}H (400
MHz, CDCl_{3}) \delta 7,97 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,47 (d,
1H, J = 3,2 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,15 (d, 1H, J = 7,7
Hz), 6,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 4,72 (s, 2H), 1,56 (s, 9H),
0,84 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).
A una solución agitada de éster
terc-butílico del ácido
5-(terc-Butil-dimetil-silaniloximetil-indol-1-carboxílico
(1-3, 38,6 g, 106,7 mmol) en tetrahidrofurano (400
ml) se añadió lentamente a -78ºC una solución de
diisopropilamida de litio en tetrahidrofurano (2 M, 80,1 ml, 160,1
mmol, 1,5 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a la misma
temperatura durante 1 hora, se trató con trimetilborato, se calentó
a temperatura ambiente, y se fraccionó entre acetato de etilo y
HCl-0,5 N. La fase orgánica se lavó con salmuera,
se separó, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar el
sólido bruto. La trituración del producto bruto con hexanos seguida
por filtración y secado al aire proporcionó el ácido bórico deseado
(1-4) como un polvo blanco. RMN de ^{1}H (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,96 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,54 (s, 1H),
7,47 (s, 1H), 7,32 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,10 (s, 1H), 4,82
(s, 2H), 1,74 (s, 9H), 0,95 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).
Se pesó
2-cloro-3-yodoquinolina
(1-5, 30,0 g) en un matraz de 250 ml y se suspendió
en ácido acético acuoso al 50% (125 ml). La mezcla se calentó a
100ºC y se dejó a reflujo durante 16 horas hasta la finalización
mediante análisis de TLC de la mezcla de reacción bruto. La mezcla
se dejó enfriar a temperatura ambiente seguido por dilución con 200
ml de agua. La suspensión resultante del producto deseado se aisló
mediante filtración a vacío seguida por lavado con agua (50 ml). El
agua y trazas de ácido acético se retiraron bajo agitación durante 5
horas para proporcionar la quinolinona deseada como un polvo canela
(1-6). RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta 12,13 (s ancho, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,65 (d, 1H, J =
7,5 Hz), 7,54 (m, 1H), 7,31 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,20 (m,
1H).
Una mezcla agitada de la yodoquinolinona
(1-6, 10 g, 36,9 mmol, 1 equiv.), el ácido bórico
(1-4, 7,5 g, 18,45 mmol, 0,5 equiv.), tetrakis
(trifenil-fosfina) paladio (1,71 g, 1,48 mmol, 0,04
equiv.), y cloruro de litio (4,69 g, 110,7 mmol, 3 equiv.) en
dioxano/Na_{2}CO_{3} acuoso-2 M se desgasificó y
calentó a 80ºC hasta que el ácido bórico no se detectó mediante
cromatografía en capa fina. Se añadió el ácido bórico adicional
(0,2 equiv. en un tiempo) a la mezcla de reacción hasta que se
consumió completamente toda la yodoquinolinona (1-6)
(se requirieron 1,5 equivalentes del ácido bórico,
1-4, en total). La mezcla de reacción se fraccionó
entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La fase
orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4}) y se
concentró a vacío. El aceite crudo (1-7) se
disolvió en tetrahidrofurano (100 ml), se transfirió a una botella
de PEG, se trató a 0ºC con piridina-HF (15 ml) y se
agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción
se fraccionó entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado.
La fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó
(MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El sólido bruto se trituró con
acetato de etilo y hexanos, se recogió mediante filtración y se secó
al aire para proporcionar el producto deseado (1-8)
como un sólido amarillo claro; RMN de ^{1}H (500 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,1 (s, 1H), 8,07 (s, 1H),
8,03 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,74 (d, 1H, J = 7,5 Hz),
7,55 (s, 1H), 7,52 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 7,35 (d, 1H, J
= 8,5 Hz), 7,30 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,22 (t, 1H, J =
7,5 Hz), 6,77 (s, 1H), 5,21 (t, 1H, J = 5,5 Hz), 4,60 (d, 2H,
J = 5,5 Hz), 1,35 (s, 9H).
Se pesaron MnO_{2} preactivado (34,5 g, 15
equiv.) y alcohol (1-8, 10,32 g, 1,0 equiv.) en un
matraz de 1 litro y se suspendieron en diclorometano seco (500 ml).
La mezcla de reacción se calentó a 45ºC y se completó mediante
cromatografía en capa fina después de 1 hora. La mezcla se dejó
enfriar a temperatura ambiente y el/los óxido(s) de manganeso
se eliminaron mediante filtración a vacío. El lecho corto de óxidos
sobre el filtro se trituró con THF caliente y el disolvente se
filtró a su través a vacío para eliminar cualquier producto de los
óxidos. El filtrado resultante se concentró a vacío para
proporcionar el aldehído bruto como un sólido amarillo. El sólido
se trituró con metanol (10 ml) y acetato de etilo (15 ml) seguido
por filtración a vacío para aislar el producto puro. El aldehído
amarillo claro se secó a vacío (1-9). RMN de
^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,15 (s,
1H), 10,08 (s, 1H), 8,26 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 8,24 (d, 1H,
J = 8,5 Hz), 8,15 (s, 1H), 7,90 (dd, 1H, J = 8,5, 1,5
Hz), 7,77 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,55 (m, 1H), 7,37 (d, 1H,
J = 8,5 Hz), 7,24 (m, 1H), 7,01 (s, 1H).
A una solución agitada del aldehído
(1-9, 2,01 g, 5,15 mmol, 1 equiv.) y sal
N-metanosulfonilpiperazina de ácido acético (4,62 g,
20,60 mmol, 4 equiv.) en dicloroetano (400 ml) se añadió a
temperatura ambiente ácido acético (1,2 ml). La mezcla de reacción
se trató con triacetoxiborohidruro de sodio y se agitó durante 3
horas. La reacción se detuvo al 76% de conversión y se trató con
MgSO_{4} y 1 g adicional del hidruro. La reacción se completó
después de agitación adicional durante 1 hora. La mezcla de reacción
se fraccionó entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado.
La fase orgánica se lavó una vez más con NaHCO_{3} acuoso
saturado, y después con salmuera, se separó, se secó con
(Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío. El sólido bruto se
disolvió en dimetilformamida y se trató con carbón activo. La
solución filtrada (celite) se concentró a jarabe el cual se trituró
rápidamente con metanol (100 ml). El sólido resultante se recogió
mediante filtración, se redisolvió en dimetilformamida, se concentró
a jarabe, se trituró con metanol (100 ml), se recogió mediante
filtración y se secó a vacío para dar éster
terc-butílico del ácido
5-(4-Metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-2-(2-oxo-1,2-dihidro-quinolin-3-il)-indol-1-carboxílico
(1-10) como un polvo blanco; RMN de ^{1}H (500
MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,06 (s, 1H), 8,06 (s,
1H), 8,04 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,74 (d, 1H, J = 8,0
Hz), 7,55 (s, 1H), 7,53 (dt, 1H, J = 8,0, 1,5 Hz), 7,35 (d,
1H, J = 8,5 Hz), 7,30 (dd, 1H, J = 8,5, 1,5 Hz), 7,22
(t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,76 (s, 1H), 3,62 (s, 2H), 3,16 (m,
4H), 2,87 (s, 3H), 2,48 (m, 4H), 1,35 (s, 9H).
Una mezcla de éster
terc-butílico del ácido
5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-2-(2-oxo-1,2-dihidro-quinolin-3-il)-indol-1-carboxílico
(1-10, 1,02 g, 1,863 mmol), sulfuro de dimetilo (1,2
ml), agua (0,6 ml) y TFA (40 ml) en diclorometano (40 ml) se agitó
durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se concentró a vacío, se
fraccionó entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La
fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó
(Na_{2}SO_{4}), y se concentró a vacío. El sólido bruto
resultante se purificó mediante cromatografía líquida en fase
inversa (gradiente de H_{2}O/CH_{3}CN con TFA al 0,1% presente)
para dar sal del ácido trifluoroacético de 1-11.
Todas las fracciones que contienen el producto deseado se
fraccionaron entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado.
La fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó
(Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío dando
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
(1-11) como un sólido amarillo brillante; RMN de
^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,07 (s,
1H), 11,54 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 7,5 Hz),
7,52 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 7,47-7,46 (m, 2H),
7,38 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,29 (s ancho, 1H), 7,25 (t, 1H,
J = 7,5 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 3,57 (s, 2H),
3,11 (m, 4H), 2,87 (s, 3H), 2,48 (m, 4H).
La solubilidad de 1-11 a
temperatura ambiente se determinó en tampones acuosos 0,05 M, agua y
varios disolventes orgánicos. Los resultados están tabulados en las
Tablas I y II.
| Tampón | pH_{ final} | Solubilidad (mg/ml) |
| Carbonato 0,05M | 11,15 | 0,077 |
| Carbonato 0,05M | 10,09 | 0,079 |
| Fosfato 0,05M | 8,86 | 0,073 |
| Fosfato 0,05M | 7,93 | 0,074 |
| Fosfato 0,05M | 6,96 | 0,071 |
| Citrato 0,05M | 6,01 | 0,071 |
| Citrato 0,05M | 5,07 | 0,070 |
| Citrato 0,05M | 4,15 | 0,073 |
| Citrato 0,05M | 3,23 | 0,092 |
| HCl 0,01N | 2,45 | 0,40 |
| Disolvente | Solubilidad (mg/ml) |
| Agua | 0,00003 |
| Etanol | 0,019 |
| Isopropanol | 0,0065 |
| Acetonitrilo | 0,084 |
| Cartucho acuoso al 50% | 0,060 |
| Disolvente | Solubilidad (mg/ml) |
| HPbCD^{1} al 25% | 0,168 |
| HPbCD^{2} al 25% | 4,56 |
| HPbCD^{2} al 20% | 3,57 |
| HPbCD^{2} al 15% | 2,35 |
| HPbCD^{2} al 10% | 1,74 |
| 1) pH nativo en agua (pH = 7,5) | |
| 2) pH ajustado a aproximadamente 3,0 con HCl. |
Como se puede apreciar a partir de estas tablas,
la base libre tiene una solubilidad muy baja en agua.
Se trató la base libre sólida con una solución
concentrada del ácido apropiado (1,05 a 1,1 equivalentes molares) y
se suspendió en agua durante varios días. Se midió el pH y la
concentración del compuesto en equilibrio con la fase sólida
mediante HPLC (detección UV-visible). Este
procedimiento sobreestima la solubilidad de la sal debido al exceso
del 5 al 10% del ácido que se añade en la preparación de las sales.
Por la misma razón, el pH que se obtiene es más probablemente menor
que el pH de la sal en agua. Los resultados se muestran a
continuación en la Tabla III.
| Sal de 1-11 | Solubilidad (mg/ml) | pH |
| Mesilato | 0,58 | 2,3 |
| Tartrato | 0,90 | 2,4 |
| HCl | 0,43 | 2,3 |
| Citrato | 0,11 | 2,5 |
| Acetato | 0,091 | 3,3 |
| HBr | 0,20 | 2,9 |
| Maleato | 0,16 | 2,5 |
| Sulfato | 0,13 | 1,5 |
| Besilato | 0,0038 | 2,4 |
La sal mesilato de 1-11 tiene una
fórmula molecular C_{24}H_{28}N_{4}O_{6}S_{2} y un peso
molecular de 532,642. Se han observado tres formas de la sal
mesilato de 1-11: una sal amorfa y dos sales
cristalinas. Inicialmente se obtiene un sólido amorfo como se
determina por microscopía óptica bajo la luz polarizada plana.
La sal mesilato amorfa se recristalizó en
Etanol:THF 50:50 dando un polvo cristalino (Sal
1-11A). El patrón de difracción de rayos X de polvo
(XRPD) de la sal mesilato recristalizada 1-11A
(Figura 2) es indicativo de material cristalino con múltiples picos
de difracción entre 5º y 30º 2-theta. La DSC de este
material de 20ºC a 350ºC a una velocidad de calentamiento de
10ºC/minuto muestra una endotermia puntiaguda a 266ºC que se
atribuye a la fusión. La TGA de este material desde 20ºC a 350ºC a
una velocidad de calentamiento de 10ºC/minuto mostró una pérdida de
peso de 1,25% entre 20ºC y 125ºC, atribuible al disolvente residual.
Esta sal mesilato tiene una solubilidad en agua de 0,173 mg/ml.
| Disolvente | Solubilidad (mg/ml) |
| Agua | 0,173 |
| Isopropanol | 0,02 |
| Acetonitrilo | 0,063 |
Se obtuvo una segunda tanda de sal mesilato
cristalina (Sal 1-11B) por el siguiente
procedimiento. Se añadió lentamente a temperatura ambiente (TA) a
una suspensión agitada de 1-11 (4,026 g, 9,22 mmol)
en MeOH un equivalente de una solución 0,3M de ácido metanosulfónico
(30,73 ml). Después de disolverse todo el sólido, se filtró la
mezcla en un matraz y se concentró a presión reducida mientras se
enfriaba hasta aproximadamente 10ºC. El sólido resultante se
suspendió con 200 ml de acetato de etilo, se filtró y se secó
proporcionando la sal mesilato. Se encontró que esta sal era
cristalina por XRPD (Figura 2). Esta forma cristalina es diferente
por XRPD de la recristalizada a partir de la sal amorfa en EtOH/THF
(Sal 1-11A). Esta forma tiene una menor solubilidad
en agua de 0,09 mg/ml que la Sal 1-11A sugiriendo
que es una forma más estable de la sal mesilato. Las solubilidades
de la Sal 1-11B se resumen en la Tabla V
siguiente:
| Disolvente | Solubilidad (mg/ml) |
| Agua | 0,09 |
| Isopropanol | 0,003 |
| Acetonitrilo | 0,03 |
Se han identificado dos sales cristalinas de
1-11: 1-11C y 1-11D.
La XRPD de la sal HCl 1-11C (Figura 3) verifica que
es cristalina. La DSC mostró una endotermia de fusión a 284ºC. El
compuesto contiene 5,4% de humedad hasta 150ºC como se pone de
manifiesto por la TGA. Esta sal también parece descomponerse en la
fusión como se aprecia por una fuerte caída en el peso en la
fusión.
La sal HCl 1-11D también es
cristalina como se evidencia por el patrón de difracción de rayos X
de polvo del material, que tiene múltiples picos de difracción entre
5º y 30º 2-theta. La DSC muestra una endotermia de
fusión de 284,08ºC (velocidad de 10ºC/min). El compuesto es
birrefringente en la luz polarizada plana. Son partículas aciculares
de aproximadamente 5 a 25 micrómetros de tamaño. La solubilidad de
la sal 1-11D se midió en agua y en diversos
disolventes orgánicos. La Tabla VI resume a continuación la
solubilidad de 1-11D suspendida en diversos
disolventes durante 7 días a temperatura ambiente.
| Disolventes | Solubilidad (mg/ml) |
| Agua | 0,62 |
| Etanol | 0,13 |
| Isopropanol | 0,057 |
| ETOH acuoso | 4,34 |
| IPA acuoso | 3,99 |
Los datos de difracción de rayos X de polvo para
1-11D se resumen a continuación:
| 2-Theta° | Angstrom | Recuento | % | |
| d=13,07327 | 6,756 | 13,07327 | 1197 | 62,1 |
| d=10,92179 | 8,089 | 10,92179 | 721 | 37,4 |
| d=8,87959 | 9,953 | 8,87959 | 971 | 50,4 |
| d=7,32324 | 12,075 | 7,32324 | 1376 | 71,4 |
| d=6,88388 | 12,849 | 6,88388 | 1069 | 55,5 |
| d=6,44424 | 13,730 | 6,44424 | 1010 | 52,4 |
| d=6,16135 | 14,364 | 6,16135 | 853 | 44,3 |
| d=5,95917 | 14,854 | 5,95917 | 1056 | 54,8 |
| d=5,81946 | 15,212 | 5,81946 | 1481 | 76,9 |
| d=5,51333 | 16,062 | 5,51333 | 1556 | 80,7 |
| d=5,42028 | 16,340 | 5,42028 | 1009 | 52,4 |
| d=5,27926 | 16,780 | 5,27926 | 1129 | 58,6 |
| d=5,13623 | 17,250 | 5,13623 | 721 | 37,4 |
| d=4,84647 | 18,290 | 4,84647 | 1927 | 100,0 |
| d=4,69650 | 18,880 | 4,69650 | 987 | 51,2 |
| d=4,63537 | 19,131 | 4,63537 | 1010 | 52,4 |
| d=4,49882 | 19,717 | 4,49882 | 1239 | 64,3 |
| d=4,36248 | 20,340 | 4,36248 | 681 | 35,3 |
| d=4,27994 | 20,737 | 4,27994 | 1764 | 91,5 |
| d=4,12084 | 21,547 | 4,12084 | 729 | 37,8 |
| d=3,97380 | 22,354 | 3,97380 | 811 | 42,1 |
| d=3,86205 | 23,009 | 3,86205 | 553 | 28,7 |
| d=3,70294 | 24,013 | 3,70294 | 1012 | 52,5 |
| d=3,66870 | 24,240 | 3,66870 | 842 | 43,7 |
| d=3,53317 | 25,185 | 3,53317 | 1380 | 71,6 |
| d=3,48450 | 25,542 | 3,48450 | 1161 | 60,2 |
| d=3,31645 | 26,860 | 3,31645 | 962 | 49,9 |
| d=3,21463 | 27,728 | 3,21463 | 485 | 25,2 |
| d=3,10080 | 28,767 | 3,10080 | 826 | 42,9 |
| d=3,03001 | 29,454 | 3,03001 | 390 | 20,2 |
| d=2,98281 | 29,931 | 2,98281 | 556 | 28,9 |
| d=2,95392 | 30,231 | 2,95392 | 675 | 35,0 |
| d=2,90366 | 30,767 | 2,90366 | 602 | 31,2 |
| d=2,84488 | 31,419 | 2,84488 | 403 | 20,9 |
| d=2,75928 | 32,420 | 2,75928 | 477 | 24,8 |
| d=2,70643 | 33,071 | 2,70643 | 472 | 24,5 |
| d=2,43879 | 36,824 | 2,43879 | 345 | 17,9 |
Se preparó 2-1 por modificaciones
sencillas de los protocolos descritos más adelante para preparar
3-10.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
RMN de ^{1}H (400 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,16 (s, 1H), 11,53 (s, 1H),
8,52 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,52 (dt, 1H,
J = 8,5, 1,0 Hz), 7,46 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 7,45 (s,
1H), 7,38 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,29 (s, 1H), 7,25 (t, 1H,
J = 7,5 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 8,0, 1,0 Hz), 3,61 (s,
2H), 3,42 (m, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,54-2,50 (m,
6H);
La sal mesilato 2-1A se preparó
por modificaciones sencillas de los protocolos descritos más
adelante para preparar 3-10B.
RMN de ^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,21 (s, 1H), 11,82 (s, 1H),
10,81 (s ancho, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,74 (d, 1H,
J = 8,5 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,54 (t, 1H,
J = 8,0), 7,40 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,31
(dd, 1H, J = 8,5, 1,5 Hz), 7,26 (t, 1H, J = 7,5 Hz),
4,41 (m, 2H), 4,04 (m, 1H), 3,47 (m, 3H), 3,24-3,08
(m, 3H), 2,87 (s, 3H), 2,55 (m, 1H).
La sal HCl 2-1B se preparó por
modificaciones sencillas de los protocolos descritos más adelante
para preparar 3-10A.
RMN de ^{1}H (500 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,21 (s, 1H), 11,82 (s, 1H),
10,81 (s ancho, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,74 (d, 1H,
J = 8,5 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,54 (t, 1H,
J = 8,0), 7,40 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,31
(dd, 1H, J = 8,5, 1,5 Hz), 7,26 (t, 1H, J = 7,5 Hz),
4,41 (m, 2H), 4,04 (m, 1H), 3,47 (m, 3H), 3,24-3,08
(m, 3H), 2,87 (s, 3H), 2,55 (m, 1H).
La base libre 2-1 es un polvo
amarillo. El examen al microscopio óptico con luz polarizada reveló
que los cristales son birrefringentes, indicando cristalinidad. Los
cristales aparecen con forma de placas siendo la mayor parte de las
partículas menores de 10 micrómetros. El análisis por TGA con una
velocidad de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC mostró que el sólido
pierde un 0,51% en peso hasta 125ºC y que pierde peso más
rápidamente después de 275ºC. El análisis de DSC con una velocidad
de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC mostró una endotermia reversible
a 292ºC. La solubilidad en agua se midió usando HPLC para
cuantificar el compuesto en suspensión. La solubilidad a temperatura
ambiente es 0,028 mg/ml.
La sal mesilato 2-1A es un polvo
amarillo. El examen al microscopio óptico con luz polarizada mostró
que el sólido no es birrefringente, indicando que es amorfo. El
análisis por TGA a una velocidad de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC
muestra que el sólido pierde peso en un 2,74% en peso hasta 125ºC y
que se descompone por encima de 250ºC. El análisis por DSC con una
velocidad de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC no muestra ninguna
endotermia reversible confirmando que el sólido es amorfo. Se
atribuye a pérdidas de disolvente/humedad una endotermia no
reversible amplia centrada aproximadamente en 87ºC. La solubilidad
en agua se midió usando HPLC para cuantificar el compuesto. La
solubilidad en agua a temperatura ambiente es mayor que 9,89 mg/ml.
En la misma escala de tiempo del experimento (24 horas) no se
observó cristalización.
La sal HCl 2-1B también es un
polvo amarillo. El examen al microscopio óptico con luz polarizada
mostró que el sólido contenía algunas partículas que eran
birrefringentes y partículas que no lo eran. Esto indica la
presencia tanto de material amorfo como cristalino. El análisis por
TGA con una velocidad de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC muestra que
el sólido pierde un 2,4% en peso hasta 125ºC y se descompone por
encima de 250ºC. El análisis por DSC a una velocidad de barrido de
10ºC/min hasta 350ºC muestra una endotermia reversible a 231ºC
indicando la existencia de algo de material cristalino. La
solubilidad en agua se midió usando HPLC para cuantificar el
compuesto. La solubilidad a temperatura ambiente es mayor que 10,21
mg/ml. En la escala de tiempo del experimento (24 horas) el sólido
no cristalizó fuera de esta solución muy concentrada.
Esquema
3
Se añadió a temperatura ambiente lentamente una
solución de LAH 1M en tolueno (186 ml, 186 mmol, 1,5 equivalentes) a
una solución agitada mecánicamente de ácido
1H-indol-5-carboxílico
(3-1, 20,01 g, 124 mmol) en tetrahidrofurano (500
ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 hora, se
inactivó con hielo, se repartió entre EA y NaHCO_{3} acuoso
saturado. La fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó
(MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El producto bruto solidificó en
reposo a presión reducida. El sólido bruto se suspendió en hexanos
(200 ml) y acetato de etilo (10 ml), se agitó durante la noche, se
recogió por filtración y se secó al aire proporcionando el producto
deseado como un sólido marrón claro. RMN de ^{1}H (400 MHz,
CDCl_{3}). \delta 8,24 (s ancho, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,36 (d, 1H,
J = 8,4 Hz), 7,23 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,20 (s, 1H),
6,54 (s, 1H), 4,75 (s, 2H), 1,68 (s, 1H).
Se trató sucesivamente a temperatura ambiente una
solución agitada de
(1H-Indol-5-il)-metanol
(3-2, 16,5 g, 112,1 mmol) en diclorometano (300 ml)
con diisopropiletilamina (39 ml, 224,2 mmol, 2 equiv), cloruro de
terc-butildimetilsililo (18,6 g, 123,3 mmol,
1,1 equiv) y 4-(N,N-dimetilamino)piridina
(1,37g, 11,2 mmol, 0,1 equiv). La mezcla de reacción se agitó a TA
durante 30 minutos, se concentró a vacío, se repartió entre acetato
de etilo y HCl 0,5N. La fase orgánica se lavó con salmuera, se
separó, se secó (MgSO_{4}), se concentró a vacío dando el éter de
sililo bruto como un sólido marrón claro. El producto bruto y
dicarbonato de di-terc-butilo
(26,9, 123,3 mmol) se disolvieron en diclorometano (300 ml) y se
agitó a temperatura ambiente en presencia de
4-(N,N-dimetilamino)piridina (1,37g, 11,2
mmol) durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío, se
repartió entre acetato de etilo y HCl 0,5 N. La fase orgánica se
lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a
vacío dando el aceite bruto. La cromatografía (SiO_{2}, acetato de
etilo al 10% en hexanos) proporcionó éster
terc-butílico del ácido
5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil-indol-1-carboxílico
(3-3, 38,6 g, 95%) como un sólido blanco; RMN de
^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}). \delta 7,97 (d, 1H, J = 8,0
Hz), 7,47 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,15 (d, 1H,
J = 7,7 Hz), 6,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 4,72 (s, 2H),
1,56 (s, 9H), 0,84 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).
Se añadió lentamente a -78ºC una
solución de diisopropilamida de litio en tetrahidrofurano (2M, 80,1
ml, 160,1 mmol, 1,5 equiv) a una solución agitada de éster
terc-butílico del ácido
5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil-indol-1-carboxílico
(3-3, 38,6 g, 106,7 mmol) en tetrahidrofurano (400
ml). La mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 1
hora, se trató con trimetilborato, se calentó hasta temperatura
ambiente y se repartió entre acetato de etilo y HCl 0,5 N. La fase
orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4}) y se
concentró a vacío dando el sólido bruto. La trituración del producto
bruto con hexanos seguida por filtración y secado al aire
proporcionó el ácido bórico deseado (3-4, 41,3 g,
95%) como un polvo blanco; RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}).
\delta 7,96 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,54 (s, 1H), 7,47 (s,
1H), 7,32 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,10 (s, 1H), 4,82 (s, 2H),
1,74 (s, 9H), 0,95 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).
Se pesó
2-cloro-3-yodoquinolina
(30,0 g) en un matraz de 250 ml y se suspendió en ácido acético
acuoso al 50% (125 ml). La mezcla se calentó hasta 100ºC y se dejó a
reflujo durante 16 horas hasta completar por análisis TLC de la
mezcla de reacción bruta. La mezcla se dejó enfriar hasta
temperatura ambiente seguida por dilución con 200 ml de agua. La
suspensión resultante del producto deseado se aisló por filtración a
vacío seguida por lavado con agua (50 ml). El agua y las trazas de
ácido acético se eliminaron a vacío durante 5 horas proporcionando
la quinolinona deseada como un polvo color castaño
(5-5, 26,5 g, 94%); RMN de ^{1}H (500 MHz,
CDCl_{3}) \delta 12,13 (s ancho, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,65 (d, 1H,
J = 7,5 Hz), 7,54 (m, 1H), 7,31 (d, 1H, J = 8,0 Hz),
7,20 (m, 1H).
Se desgasificó y calentó hasta 80ºC hasta que no
se detectó ácido bórico por cromatografía de capa fina una mezcla
agitada de la yodoquinolinona (5-5, 10 g, 36,9 mmol,
1 equiv), el ácido bórico (5-4, 7,5 g, 18,45 mmol,
0,5 equiv), tetrakis(trifenilfosfina)paladio (1,71 g,
1,48 mmol, 0,04 equiv) y cloruro de litio (4,69 g, 110,7 mmol, 3
equiv) en dioxano/Na_{2}CO_{3} acuoso 2M. Se añadió ácido bórico
adicional (0,2 equivalentes al mismo tiempo) a la mezcla de reacción
hasta que se consumió toda la yodoquinolinona (5-5)
(se necesitaron 1,5 equivalentes del ácido bórico,
5-4, en total). La mezcla de reacción se repartió
entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La fase
orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4}) y se
concentró a vacío. El aceite bruto (5-6) se disolvió
en tetrahidrofurano (100 ml), se transfirió a un frasco de PEG, se
trató a 0ºC con HF-piridina (15 ml) y se agitó
durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se
repartió entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La
fase orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó (MgSO_{4})
y se concentró a vacío. El sólido bruto se trituró con acetato de
etilo y hexanos, se recogió por filtración y se secó al aire
proporcionando el producto deseado (5-7) como un
sólido color amarillo claro (12,4 g, 86%); RMN de ^{1}H (500 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,1 (s, 1H), 8,07 (s, 1H),
8,03 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,74 (d, 1H, J = 7,5 Hz),
7,55 (s, 1H), 7,52 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 7,35 (d, 1H, J
= 8,5 Hz), 7,30 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,22 (t, 1H, J =
7,5 Hz), 6,77 (s, 1H), 5,21 (t, 1H, J = 5,5 Hz), 4,60 (d, 2H,
J = 5,5 Hz), 1,35 (s, 9H).
Se tararon en un matraz de 1 litro y se
suspendieron en diclorometano seco (500 ml) el MnO_{2} previamente
activado (34,5 g, 15 equiv) y el alcohol (5-7, 10,32
g, 1,0 equiv). La mezcla de reacción se calentó hasta 45ºC y se
completó por cromatografía en capa fina después de una hora. La
mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y el (los)
óxido(s) de manganeso se eliminaron por filtración a vacío.
El lecho resultante de óxidos sobre el filtro se trituró con THF
caliente y el disolvente se filtró a vacío para eliminar cualquier
resto de producto de los óxidos. El filtrado resultante se concentró
a vacío proporcionando el aldehído bruto como un sólido amarillo. El
sólido se trituró con metanol (10 ml) y acetato de etilo (15 ml),
seguido por filtración a vacío para aislar el producto bruto. El
aldehído color amarillo claro se secó a vacío (5-8,
9,84 g, 96%); RMN de ^{1}H (500 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,15 (s, 1H), 10,08 (s, 1H),
8,26 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 8,24 (d, 1H, J = 8,5 Hz),
8,15 (s, 1H), 7,90 (dd, 1H, J = 8,5, 1,5 Hz), 7,77 (d, 1H,
J = 7,5 Hz), 7,55 (m, 1H), 7,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz),
7,24 (m, 1H), 7,01 (s, 1H).
Se añadió ácido acético (1,2 ml) a temperatura
ambiente a una solución agitada del aldehído (5-8,
2,01 g, 5,15 mmol, 1 equiv) y
N-(2-hidroxiacetil)piperazina (2,97 g, 20,60
mmol, 4 equiv) en dicloroetano (400 ml). La mezcla de reacción se
trató con triacetoxiborohidruro sódico y se agitó durante 3 horas.
La reacción se detuvo al 76% de conversión y se trató con MgSO_{4}
y 1 g adicional del hidruro. Después de agitación adicional durante
1 hora se completó la reacción. La mezcla de reacción se repartió
entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La fase
orgánica se lavó una vez de nuevo con NaHCO_{3} acuoso saturado y
luego con salmuera, se separó, se secó con (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró a vacío. El sólido bruto se disolvió en
N,N-dimetilformamida y se trató con el carbón
activado. La solución de filtrado (Celite) se concentró hasta un
jarabe que se trituró rápidamente con metanol (100 ml). El sólido
resultante se recogió por filtración, se volvió a disolver en
N,N-dimetilformamida, se concentró hasta un jarabe,
se trituró con metanol (100 ml), se recogió por filtración y se secó
a vacío dando éster terc-butílico del ácido
5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-2-(2-oxo-1,2-dihidro-quinolin-3-il)-indol-1-carboxílico
(5-9, 1,51 g, 57%) como un polvo blanco; RMN de
^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,24 (s
ancho, 1H), 8,21 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,91 (s, 1H), 7,61 (d,
1H, J = 6,9 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,36 (d, 1H,
J = 8,1 Hz), 7,33 (dd, 1H, J = 8,4, 1,5 Hz), 7,24 (m,
1H), 6,67 (s, 1H), 4,15 (s, 2H), 3,69 (m, 2H), 3,65 (s, 2H), 3,28
(m, 2H), 2,49 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
Se agitó durante 1,5 horas una mezcla de éster
terc-butílico del ácido
5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-2-(2-oxo-1,2-dihidro-quinolin-3-il)-indol-1-carboxílico
(5-9, 1,05 g, 2,033 mmol), sulfuro de dimetilo (1,2
ml), agua (0,6 ml) y ácido trifluoroacético (40 ml) en diclorometano
(40 ml). La mezcla de reacción se concentró a vacío, se repartió
entre acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La fase
orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó
(Na_{2}SO_{4}), y se concentró a vacío. El sólido bruto
resultante se purificó por cromatografía líquida de fase inversa
(gradiente de H_{2}O/CH_{3}CN con TFA al 0,1% presente) dando la
sal del ácido trifluoroacético de 5-10. Todas las
fracciones que contenían el producto deseado se repartieron entre
acetato de etilo y NaHCO_{3} acuoso saturado. La fase orgánica se
lavó con salmuera, se separó, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró a vacío dando
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona
(5-10, 737 mg, 87%) como un sólido amarillo claro;
RMN de ^{1}H (500 MHz, DMSO-d_{6}) \delta
12,16 (s ancho, 1H), 11,53 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,73 (d, 1H,
J = 7,5 Hz), 7,52 (dt, 1H, J = 8,5, 1,0 Hz), 7,47 (d,
1H, J = 9,0 Hz), 7,46 (s, 1H), 7,38 (d, 1H, J = 8,0
Hz), 7,29 (d, 1H, J = 1,0 Hz), 7,25 (t, 1H, J = 7,5
Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 8,0, 1,0 Hz), 4,51 (t, 1H, J =
5,5 Hz), 4,06 (d, 1H, J = 5,5 Hz) 3,55 (s, 2H), 3,46 (m, 2H),
3,32 (m, 2H), 2,36 (m, 4H).
Se añadió a TA MsOH 0,3 M (30,73 ml, 1,0 equiv.,
9,22 mmol) a una suspensión agitada de la base libre
(3-10, 9,22 mmol) en MeOH (2 l). Después de
disolverse todo el sólido, la mezcla se filtró en un matraz de fondo
redondo y se concentró a vacío (con el baño de temperatura
aproximadamente a 10ºC). El sólido resultante se suspendió con 200
ml de acetato de etilo, se filtró, se secó proporcionando la sal Ms
deseada (3-10B); RMN de ^{1}H (500 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 12,21 (s, 1H), 11,81 (s, 1H),
9,70 (s ancho, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,75 (d, 1H, J = 8,0 Hz),
7,72 (s, 1H), 7,62 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,54 (t, 1H, J
= 7,5), 7,39 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,27 (t, 1H,
J = 7,5 Hz), 7,22 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 4,83 (s ancho,
1H), 4,42 (s ancho, 3H), 4,17 (d, 1H, J = 15,0 Hz), 4,07 (d,
1H, J = 15,0 Hz), 3,94 (d, 1H, J = 13,5 Hz), 3,34 (s,
3H), 3,10 (m, 1H), 2,97 (m, 2H), 2,30 (m, 3H).
Se añadió lentamente a TA HCl 1N (0,47 ml, 1,0
equiv., 0,465 mmol) a una suspensión agitada de la base libre
(3-10, 0,465 mmol) en MeOH (200 ml). Después de
disolverse todo el sólido, la mezcla se filtró en un matraz de fondo
redondo a vacío (con el baño de temperatura aproximadamente a 10ºC).
El sólido resultante se suspendió con 200 ml de acetato de etilo, se
filtró, se secó proporcionando la sal HCl deseada
(3-10A); RMN de ^{1}H (500 MHz,
DMSO-d_{6}). \delta 12,21 (s, 1H), 11,82 (s,
1H), 10,59 (s ancho, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,74 (d, 1H,
J = 8,5 Hz), 7,61 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,54 (t, 1H,
J = 8,5), 7,40 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,29
(m, 1H), 7,26 (t, 1H, J = 7,0 Hz), 4,40 (m, 3H), 4,16 (d, 1H,
J = 14,5 Hz), 4,06 (d, 1H, J = 14,5 Hz), 3,92 (d, 1H,
J = 13,0 Hz), 3,42 (m, 2H), 3,17 (s, 1H), 3,06 (m, 2H), 2,96
(m, 1H).
La base libre es un polvo amarillo que contiene
partículas que son birrefringentes a la luz polarizada lo que indica
la presencia de material cristalino. El análisis por TGA con una
velocidad de barrido de 10ºC/minuto hasta 350ºC muestra que el
sólido pierde 0,67% de peso hasta 125ºC y se descompone por encima
de 300ºC. El análisis DSC con una velocidad de barrido de 10ºC/min
hasta 350ºC muestra una endotermia reversible a 299ºC, lo que indica
que el sólido se descompone al fundirse. La solubilidad acuosa se
midió usando HPLC para cuantificar el compuesto en una suspensión
acuosa. La solubilidad acuosa a temperatura ambiente es 0,0635
mg/ml.
La sal HCl también es un sólido amarillo que
contiene partículas que son birrefringentes a la luz polarizada, lo
que indica la presencia de material cristalino. El análisis por TGA
con una velocidad de exploración de 10ºC/min hasta 350ºC muestra que
el sólido pierde el 4,92% del peso hasta 125ºC y se descompone por
encima de 300ºC. El análisis por DSC con una velocidad de barrido de
10ºC/min hasta 350ºC muestra una endotermia reversible a 235ºC. La
solubilidad en agua se midió usando HPLC para cuantificar el
compuesto en suspensión. La solubilidad en agua a temperatura
ambiente es 1,31 mg/ml.
La sal mesilato amarilla se examinó a la luz
polarizada por el microscopio óptico. El sólido no muestra
partículas birrefringentes a la luz polarizada, lo que indica la
presencia de material amorfo. El análisis por TGA con una velocidad
de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC muestra que el sólido pierde el
4,89% del peso hasta 125ºC y se descompone por encima de 300ºC. El
análisis DSC con una velocidad de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC
muestra una endotermia reversible a 153ºC. Es posible que la pequeña
cantidad de sólido cristalino fuera detectada por microscopía
óptica. La solubilidad en agua se midió usando HPLC para cuantificar
el compuesto en suspensión. La solubilidad en agua a temperatura
ambiente es 2,43 mg/ml.
Esquema
4
Se agitó a 23ºC en la oscuridad durante 20 horas
una suspensión de ácido
3-(2-cloro)-quinolinbórico
(1-1, 5,05 g, 24,3 mmol, 1 equiv, preparado por el
procedimiento de Marsais, F; Godard, A.; Queguiner, G. J.
Heterocyclic Chem. 1989, 26, 1589-1594) y
N-yodosuccinimida (5,48 g, 24,4 mmol, 1,00 equiv) en
acetonitrilo (300 ml). La mezcla de reacción se concentró hasta
sequedad y el sólido amarillo resultante se repartió entre solución
acuosa saturada de bicarbonato sódico y diclorometano. La fase
orgánica se lavó con agua, luego se secó sobre sulfato de magnesio y
se concentró dando
2-cloro-3-yodo-quinolina
como un sólido amarillo pálido.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
8,67 (s, 1H), 7,99 (d, ancho, 1H, J = 8,4 Hz), 7,75 (t ancho,
1H, J = 7,7 Hz), 7,72 (d, ancho, 1H, J = 7,8 Hz), 7,57
(t ancho, 1H, J = 7,6 Hz).
Se agitó a 23ºC durante 20 horas una solución de
5-hidroxiindol (1-3, 5,50 g, 41,3
mmol, 1 equiv), cloruro de
terc-butildimetilsililo (7,47 g, 49,6 mmol,
1,20 equiv) e imidazol (7,03 g, 103 mmol, 2,50 equiv) en N,
N-dimetilformamida (20 ml). La mezcla de reacción se
concentró y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La
fase orgánica se lavó con agua (3x), luego se secó sobre sulfato de
magnesio y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en
columna ultrarrápida (diclorometano al 40% en hexanos, luego
diclorometano al 60% en hexanos) dando
5-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1H-indol
como un aceite incoloro que solidifica en reposo. RMN de ^{1}H
(400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,00 (s ancho, 1H), 7,22 (d, 1H,
J = 8,7 Hz), 7,17 (t, 1H, J = 2,8 Hz), 7,06 (d, 1H,
J = 2,3 Hz), 6,76 (dd, 1H, J = 8,6, 2,3 Hz), 6,44 (m,
1H), 1,00 (s, 9H), 0,19 (s, 6H).
Se agitó a 23ºC durante 20 horas una solución de
5-(terc-butil-dimetilsilaniloxi)-1H-indol
(1-4, 10,2 g, 41,3 mmol, 1 equiv), dicarbonato de
di-terc-butilo (14,4 g, 66,0
equiv, 1,60 equiv) y 4-dimetilaminopiridina (1,01 g,
8,25 mmol, 0,200 equiv) en diclorometano (100 ml). La mezcla de
reacción se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en
columna ultrarrápida (diclorometano al 40% en hexanos)
proporcionando éster terc-butílico del ácido
5-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-indol-1-carboxílico
(1-5) como un aceite incoloro. RMN de ^{1}H (400
MHz, CDCl_{3}) \delta 7,96 (d, ancho, 1H, J = 7,5 Hz),
7,54 (d, ancho, 1H, J = 3,1 Hz), 6,98 (d, 1H, J = 2,4
Hz), 6,83 (dd, 1H, J = 9,0, 2,4 Hz), 6,45 (d, 1H, J =
3,7 Hz), 1,66 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,20 (s, 6H).
Se añadió una solución de
terc-butilitio en pentano (1,7 M, 20,7 ml,
35,2 mmol, 1,20 equiv) a una solución de éster
terc-butílico del ácido
5-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-indol-1-carboxílico
(1-5, 10,2 g, 29,3 mmol, 1 equiv) en
tetrahidrofurano (100 ml) a -78ºC. La solución marrón
clara resultante se agitó a -78ºC durante 30 minutos,
luego se añadió borato de trimetilo (6,67 ml, 58,7 mmol, 2,00
equiv). La mezcla resultante se calentó hasta 0ºC con solución
acuosa saturada de cloruro amónico (100 ml) y éter etílico (200 ml).
La fase acuosa se acidificó con solución acuosa al 10% de
hidrogenosulfato potásico. La fase orgánica se separó, luego se lavó
con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El
sólido amarillo residual se trituró con hexanos dando ácido
1-(terc-butoxicarbonil)-5-{[terc-butil(dimetilsilil]oxi}-1H-indol-2-ilbórico
(1-6) como un sólido blanquecino. RMN de ^{1}H
(400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,84 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,37
(s, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,97 (s ancho, 2H), 6,88
(dd, 1H, J = 9,0, 2,4 Hz), 1,73 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,20
(s, 6H).
Se calentó a 90ºC durante 20 horas una mezcla
desoxigenada de ácido
1-(terc-butoxicarbonil)-5-{[terc-butil(dimetilsilil]oxi}-1H-indol-2-ilbórico
(1-6, 4,10 g, 10,5 mmol, 1 equiv),
2-cloro-3-yodo-quinolina
(1-2, 3,64 g, 12,6 mmol, 1,20 equiv), sulfato
potásico (6,67 g, 31,4 mmol, 3,00 equiv) y
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0,605 g, 0,524 mmol,
0,050 equiv) en dioxano (100 ml). La mezcla de reacción se enfrió,
luego se repartió entre una mezcla de agua y acetato de etilo. La
fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato
de magnesio y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía
en columna ultrarrápida (diclorometano al 20% en hexanos, aumentando
paulatinamente hasta diclorometano al 90% en hexanos) dando
5-{[terc-butil(dimetilsilil]oxi}-2-(2-cloro-3-quinolinil)-1H-indol-1-carboxilato
de terc-butilo (1-7) como una
espuma color tostado. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
8,16 (s, 1H), 8,15 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,07 (d, 1H, J
= 8,2 Hz), 7,86 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,77 (t ancho, 1H,
J = 8,4 Hz), 7,60 (t ancho, 1H, J = 8,1 Hz), 7,03
(d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,92 (dd, 1H, J = 9,0, 2,4 Hz),
6,55 (s, 1H), 1,26 (s, 9H), 1,02 (s, 9H), 0,23 (s, 6H).
Se agitó a 23ºC durante 20 horas una solución de
5-{[terc-butil(dimetilsilil]oxi}-2-(2-cloro-3-quinolinil)-1H-indol-1-carboxilato
de terc-butilo (1-7, 2,50 g,
4,91 mmol, 1 equiv) y trihidrofluoruro de trietilamina (3,60 ml,
22,1 mmol, 4,50 equiv) en acetonitrilo (100 ml). La mezcla de
reacción se concentró y el residuo se repartió entre solución acuosa
saturada de bicarbonato sódico y acetato de etilo. La fase orgánica
se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se
concentró hasta
2-(2-cloro-3-quinolinil)-5-hidroxi-1H-indol-1-carboxilato
de terc-butilo (1-8) como una
espuma color tostado (2,1 g, 100%). RMN de ^{1}H (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta 8,18 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,17 (s, 1H),
8,07 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,86 (d, 1H, J = 8,1 Hz),
7,77 (t ancho, 1H, J = 8,4 Hz), 7,61 (t ancho, 1H, J
= 8,1 Hz), 7,03 (d, 1H, J = 2,6 Hz), 6,93 (dd, 1H, J
= 8,8, 2,6 Hz), 6,55 (s, 1H), 1,26 (s, 9H).
Se calentó a 70ºC durante 5 horas una mezcla de
2-(2-cloro-3-quinolinil)-5-hidroxi-1H-indol-1-carboxilato
de terc-butilo (1-8, 1,50 g,
3,80 mmol, 1 equiv),
2-cloro-N-(2-metoxietil-N-metiletanamina
(720 mg, 4,75 mmol, 1,25 equiv) y carbonato de cesio (3,09 g, 9,50
mmol, 2,50 equiv) en N,N-dimetilformamida (20
ml). La mezcla de reacción se concentró y el residuo se repartió
entre agua y acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua y
luego salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró
dando una goma marrón. La goma se disolvió en una mezcla 1:1 de agua
y ácido acético (60 ml) y la solución resultante se calentó a 100ºC
durante 18 horas. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se
repartió entre solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y
acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua y luego con
salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró dando un
sólido amarillo. La purificación por cromatografía en columna
ultrarrápida (etanol al 5% saturado con amoníaco/CH_{2}Cl_{2},
aumentando gradualmente hasta etanol al 10% saturado con
amoníaco/CH_{2}Cl_{2}) proporcionó
3-(5-{2-[(2-metoxietil
(metilamino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona
(1-9) como un sólido amarillo. RMN de ^{1}H (400
MHz, CDCl_{3}) d 11,10 (s, 1H), 9,72 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,68
(d, ancho, 1H, J = 7,8 Hz), 7,53 (t ancho, 1H, J = 7,6
Hz), 7,35 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,29 (t ancho, 1H, J =
7,8 Hz), 7,24 (d, ancho, 1H, J = 8,2 Hz), 7,09 (d, 1H,
J = 2,2 Hz), 6,97 (d, 1H, J = 1,4 Hz), 6,89 (dd, 1H,
J = 8,6, 2,2 Hz), 4,16 (t, 2H, J = 5,9 Hz), 3,54 (t,
2H, J = 2,67 (t, 3H, J = 5,7 Hz), 3,38 (s, 3H), 2,92
(t, 3H, J= 6,0 Hz), 2,73 (t, 3H, J = 5,8 Hz), 2,44 (s,
3H).
Se añadió ácido metanosulfónico (0,250 ml, 3,83
mmol, 1,00 equiv) a una solución de
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metilamino]etoxi}-1H-indol-2-il)
quinolin-2(1H)-ona
(4-9, 1,50 g, 3,83 mmol, 1 equiv) en diclorometano
(100 ml) a 23ºC. La mezcla se concentró y el residuo se suspendió
en éter etílico, se filtró y se secó dando metanosulfonato de
2-metoxi-N-metil-N-(2-{[2-(2-oxo-1,2-dihidroquinolin-3-il)-1H-indol-5-il]oxi}etiletanaminio
(1-10) como un sólido amarillo. RMN de ^{1}H (400
MHz, (CD_{3})_{2}SO) \delta 12,17 (s, 1H), 11,53 (s,
1H), 9,55 (s ancho, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,73 (d, ancho, 1H, J
= 7,9 Hz), 7,52 (t ancho, 1H, J = 7,6 Hz), 7,47 (d, 1H,
J = 8,6 Hz), 7,38 (d, ancho, 1H, J = 8,2 Hz), 7,25 (t
ancho, 1H, J = 7,7 Hz), 7,25 (s ancho, 1H), 7,15 (d, 1H,
J = 2,2 Hz), 6,84 (dd, 1H, J = 8,6, 2,2 Hz), 4,35 (t,
2H, J = 4,9 Hz), 3,71 (t, 3H, J = 4,9 Hz), 3,64 (m,
1H), 3,52 (m, 3H), 3,33 (s, 3H), 2,92 (s ancho, 3H), 2,30 (s,
3H).
Esta sal mesilato 4-9A, que es un
polvo amarillo se examinó al microscopio óptico con luz polarizada.
Los cristales parecen ser birrefringentes a la luz polarizada,
indicando cristalinidad. Los cristales aparecen como placas con
pocos aglomerados. El análisis por TGA a una velocidad de barrido de
10ºC/min hasta 350ºC muestra que el sólido pierde 9,91% de su peso
hasta 125ºC y se descompone por encima de 275ºC. El análisis DSC con
una velocidad de barrido de 10ºC/min hasta 350ºC muestra varias
endotermias reversibles (82ºC, 151,4ºC y 229ºC). La solubilidad en
agua se midió usando HPLC para cuantificar el compuesto en
suspensión. La solubilidad de la Sal 4-9A a
temperatura ambiente es 1,5 mg/ml.
Se prepararon dos formas de la sal mesilato: La
Sal 4-9A anterior y la Sal 4-9B
siguiente. Se prepararon numerosas sales de 4-9
in situ y se analizaron usando el procedimiento descrito a
continuación,
- 1)
- Se colocaron 1,25 x 10-5 mol de base libre en un tubo de centrífuga.
- 2)
- Se hizo reaccionar entonces la base libre con 1,05 equivalentes molares de ácido.
- 3)
- Se mezclaron los reactivos con un mezclador Vortex y se dejaron reposar a temperatura ambiente o se calentaron si fue necesario para disolver el sólido.
- 4)
- Se añadieron 100 ml de agua para suspender el sólido.
- 5)
- Se cubrió entonces el tubo con papel de aluminio y se hizo girar durante toda la noche en un removedor.
- 6)
- Se centrifugó seguidamente el tubo en una centrífuga durante 10 minutos a 10.000 RPM.
- 7)
- Se extrajo una alícuota de la muestra y se secó con nitrógeno durante la noche para producir el residuo sólido (sal) que se analizó por microscopía y DCS.
- 8)
- El residuo líquido de la muestra restante se usó para medir pH y determinar la concentración de sal por HPLC.
Las propiedades de solubilidad de estas sales se
resumen en la Tabla VII siguiente.
| Sal | Solubilidad (mg/ml) | pH |
| Base libre | 0,075 | 6,75 |
| Mesilato 4-9B | 22,0 | 5,08 |
| HCl | 22,4 | 2,34 |
| Tartrato | 25,3 | 3,23 |
| Citrato | 19,8 | 3,33 |
| Sulfato | 4,35 | 1,40 |
Claims (39)
1. Una sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
2. Una sal cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
3. La sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
según según la reivindicación 1 en forma cristalina
caracterizada por un patrón de difracción de rayos X de polvo
que tiene ángulos de difracción de: 7,39, 8,20, 9,03, 9,90, 10,94,
15,45, 17,12, 17,84, 18,29, 18,64, 19,24, 19,77, 20,28, 21,73,
22,49, 23,27, 24,15, 24,73, 25,40, 26,79 y 27,50.
4. La sal mesilato de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
según la reivindicación 1 en forma cristalina caracterizada
por un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene ángulos de
difracción de: 6,94, 8,01, 9,74, 10,47, 10,77, 11,75, 12,61, 14,02,
15,28, 15,86, 16,93, 17,61, 18,69, 19,04, 19,47, 20,11, 21,56,
21,94, 22,53, 23,85 y 27,22.
5. La sal cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
según la reivindicación 2 en forma cristalina caracterizada
por un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene ángulos de
difracción de: 7,08, 7,86, 8,99, 14,54, 15,40, 16,14, 16,81, 18,06,
19,91, 20,72, 22,72, 24,11, 26,09, 28,67 y 29,89.
6. La sal cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona
según la reivindicación 2 en forma cristalina caracterizada
por un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene varios
picos de difracción entre 5º y 30º 2-theta y una
endotermia de fusión de 284,08ºC a una velocidad de 10ºC por
minuto.
7. Una sal mesilato de
3-[5-(4-metil-5-oxo-[1,4]diazepan-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
8. Una sal cloruro de
3-[5-(4-metil-5-oxo-[1,4]diazepan-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona.
9. Una sal mesilato de
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona.
10. Una sal cloruro de
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona.
11. La sal cloruro de
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona
según la reivindicación 10 en forma cristalina caracterizada
por una endotermia reversible a 235ºC a una velocidad de barrido de
10ºC por minuto.
12. Una sal mesilato de
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metil
amino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona.
13. La sal mesilato de
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metilamino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona
en forma cristalina según la reivindicación 12 caracterizada
por múltiples endotermias reversibles a 82ºC, 151,4ºC y 229ºC a una
velocidad de barrido de 10ºC por minuto.
14. Una sal mesilato o cloruro de
3-[5-(4-metanosulfonil-piperazin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona;
3-[5-(4-metil-5-oxo-[1,4]diazepan-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-1H-quinolin-2-ona;
3-{5-[4-(2-hidroxi-etanoil)-piperazin-1-ilmetil]-1H-indol-2-il}-1H-quinolin-2-ona;
o
3-(5-{2-[(2-metoxietil(metil
amino]etoxi}-1H-indol-2-il)quinolin-2(1H)-ona.
15. Una composición farmacéutica que está
compuesta por una sal según la reivindicación 14 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
16. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir
cáncer.
17. El uso según la reivindicación 16, en el que
el cáncer se selecciona de los cánceres de cerebro, de tracto
genitourinario, del sistema linfático, de estómago, de laringe y de
pulmón.
18. El uso según la reivindicación 16, en el que
el cáncer se selecciona de linfoma histiocítico, adenocarcinoma de
pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de páncreas,
gioblastomas y carcinoma de mama.
19. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una
enfermedad en la que está implicada angiogénesis.
20. El uso según la reivindicación 19, en el que
la enfermedad es una enfermedad ocular.
21. El uso de una sal según la reivindicación 14
para fabricar un medicamento para tratar o prevenir vascularización
de la retina.
22. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir
retinopatía diabética.
23. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir
degeneración macular relacionada con la edad.
24. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir
enfermedades inflamatorias.
25. El uso según la reivindicación 24, en el que
la enfermedad inflamatoria se selecciona de artritis reumatoide,
psoriasis, dermatitis por contacto y reacciones de hipersensibilidad
retardada.
26. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una
enfermedad o estado patológico dependiente de tirosina quinasa.
27. Una composición farmacéutica realizada
combinando la sal según la reivindicación 14 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
28. Un procedimiento para preparar una
composición farmacéutica que comprende combinar una sal según la
reivindicación 14 con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
29. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir
patologías asociadas con los huesos seleccionadas de osteosarcoma,
osteoartritis y raquitismo.
30. La composición según la reivindicación 15,
que comprende además un segundo compuesto seleccionado de:
- 1)
- un modulador del receptor de estrógenos,
- 2)
- un modulador del receptor de andrógenos,
- 3)
- modulador del receptor retinoide,
- 4)
- un agente citotóxico,
- 5)
- un agente antiproliferativo,
- 6)
- un inhibidor de prenil-proteína transferasa,
- 7)
- un inhibidor de HMG-CoA reductasa,
- 8)
- un inhibidor de la proteasa del VIH,
- 9)
- un inhibidor de la transcriptasa inversa, y
- 10)
- otro inhibidor de la angiogénesis.
31. La composición según la reivindicación 30, en
la que el segundo compuesto es otro inhibidor de angiogénesis
seleccionado del grupo consistente en un inhibidor de tirosina
quinasa, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de la
epidermis, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de
fibroblastos, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de las
plaquetas, un inhibidor de MMP, un bloqueador de integrinas,
interferón a, interleuquina-12, polisulfato de
pentosan, un inhibidor de la ciclooxigenasa, carboxiamidotriazol,
combretastatina A-4, escualamina,
6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol,
talidomida, angiostatina, troponina-1 y un
anticuerpo frente a VEGF.
32. La composición según la reivindicación 30, en
la que el segundo compuesto es un modulador del receptor de
estrógenos seleccionado de tamoxifeno y raloxifeno.
33. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer en
combinación con terapia de radiación.
34. El uso, para la fabricación de un medicamento
para tratar o prevenir cáncer de una sal según la reivindicación 14
en combinación con un compuesto seleccionado de:
- 1)
- un modulador del receptor de estrógenos,
- 2)
- un modulador del receptor de andrógenos,
- 3)
- modulador del receptor retinoide,
- 4)
- un agente citotóxico,
- 5)
- un agente antiproliferativo,
- 6)
- un inhibidor de prenil-proteína transferasa,
- 7)
- un inhibidor de HMG-CoA reductasa,
- 8)
- un inhibidor de la proteasa del VIH,
- 9)
- un inhibidor de la transcriptasa inversa, y
- 10)
- otro inhibidor de la angiogénesis.
35. El uso para la fabricación de un medicamento
para tratar cáncer de una sal según la reivindicación 14 en
combinación con terapia de radiación y un compuesto seleccionado
de:
- 1)
- un modulador del receptor de estrógenos,
- 2)
- un modulador del receptor de andrógenos,
- 3)
- modulador del receptor retinoide,
- 4)
- un agente citotóxico,
- 5)
- un agente antiproliferativo,
- 6)
- un inhibidor de prenil-proteína transferasa,
- 7)
- un inhibidor de HMG-CoA reductasa,
- 8)
- un inhibidor de la proteasa del VIH,
- 9)
- un inhibidor de la transcriptasa inversa, y
- 10)
- otro inhibidor de la angiogénesis.
36. El uso de una sal según la reivindicación 14
y paclitaxel o trastuzumab para la fabricación de un medicamento
para tratar o prevenir cáncer.
37. El uso de una sal según la reivindicación 14
y un antagonista de GPIIb/IIIa para la fabricación de un medicamento
para tratar o prevenir cáncer.
38. El uso según la reivindicación 37, en el que
el antagonista de GPIIb/IIIa es tirofiban.
39. El uso de una sal según la reivindicación 14
para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir lesión
a los tejidos después de un suceso isquémico.
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