ES2248315T3 - Procedimiento de inhibicion de la agregacion de proteinas amiloides y de formacion de imagenes de depositos de amiloides usando derivados aminoindanos. - Google Patents

Procedimiento de inhibicion de la agregacion de proteinas amiloides y de formacion de imagenes de depositos de amiloides usando derivados aminoindanos.

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ES2248315T3
ES2248315T3 ES01928832T ES01928832T ES2248315T3 ES 2248315 T3 ES2248315 T3 ES 2248315T3 ES 01928832 T ES01928832 T ES 01928832T ES 01928832 T ES01928832 T ES 01928832T ES 2248315 T3 ES2248315 T3 ES 2248315T3
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Abstract

Un compuesto de la Fórmula I en el que: R1 y R2 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, fenilo (CH2)n o fenilo sustituido (CH2)n, siempre que uno de R1 y R2 sea diferente de hidrógeno; R4 y R5 son independientemente hidrógeno, halo, alquilo C-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, fenilo (CH2)n o fenilo sustituido (CH2)n, NO2, CN, CF3, alcoxi C1-C8, CO2R6, tetrazolilo, NH(alquilo C1-C8), N(alquilo C-C8)2 o SO2R6, R3 es hidrógeno o alquilo C1-C8; R6 es hidrógeno, alquilo C1-C8, fenilo (CH2)n o fenilo sustituido (CH2)n; n es un entero desde 0 hasta 4 inclusive; o una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptables del mismo.

Description

Procedimiento de inhibición de la agregación de proteínas amiloides y de formación de imágenes de depósitos de amiloides usando derivados aminoindanos.
Campo de la invención
Esta invención se refiere al uso de los compuestos de la invención para la fabricación de composiciones farmacéuticas para inhibir la agregación de proteína amiloide y para detectar por medio de imágenes los depósitos de amiloide. Más particularmente, la invención se refiere al uso de derivados de aminoindano en la fabricación de composiciones farmacéuticas para inhibir la agregación de proteína amiloide con la finalidad de tratar la enfermedad de Alzheimer.
Antecedentes de la invención
La amiloidosis es una afección caracterizada por la acumulación de varias proteínas fibrilares insolubles en los tejidos de un paciente. Las proteínas fibrilares que comprenden la acumulación o depósito son llamadas proteínas amiloides. Mientras que las proteínas particulares o los péptidos hallados en los depósitos varían, resulta común a muchos tipos de amiloide la presencia de morfología fibrilar y una gran cantidad de estructura secundaria de lámina \beta. Un depósito amiloide está formado por la agregación de proteínas amiloides, seguida de la posterior combinación de los agregados y/o proteínas amiloides.
La presencia de depósitos de amiloide fue demostrada en varias enfermedades, cada una asociada con su proteína asociada particular, tal como la fiebre del Mediterráneo, síndrome de Muckle-Wells, mieloma idiopático, polineuropatía amiloide, cardiomiopatía amiloide, amiloidosis senil sistémica, amiloidosis con hemorragia cerebral hereditaria, enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, enfermedad de Scrapie, Creutzfeldt-Jacob, síndrome de Kuru, Gerstmann-Straussler-Scheinker, carcinoma medular de tiroides, amiloide atrial aislado, amiloide \beta_{2}-microglobulina en pacientes en diálisis, miositis por cuerpos de inclusión, depósitos de \beta_{2}-amiloide en enfermedad de atrofia muscular, anemia falciforme, enfermedad de Parkinson y diabetes tipo 2 por insulinoma en Islotes de Langerhans.
Se buscó con afán un procedimiento simple, no invasivo para detectar y cuantificar depósito de amiloide en un paciente. Actualmente, la detección de depósitos de amiloide involucra el análisis histológico de materiales de biopsia o autopsia. Ambos procedimientos tienen desventajas importantes. Por ejemplo, una autopsia solo puede usarse para un diagnóstico post mortem.
La detección por imágenes de los depósitos de amiloide in vivo es difícil, ya que los depósitos tienen muchas propiedades físicas (es decir, densidad y contenido acuoso) iguales a las de los tejidos normales. Los intentos para detectar por imágenes los depósitos de amiloide directamente usando imágenes por resonancia magnética (MRI) y tomografía asistida por ordenador (CAT) fueron desalentadores y sólo detectaron depósitos de amiloide bajo ciertas condiciones favorables. Además, los esfuerzos para marcar los depósitos de amiloide con anticuerpos, proteína P amiloide sérica u otras moléculas sonda otorgó alguna selectividad en la periferia de los tejidos, pero dio como resultado imágenes pobres de las partes internas de los tejidos.
Así, sería útil contar con una técnica no invasiva para detectar por medio de imágenes y cuantificar depósitos de amiloide en un paciente. Además sería de utilidad tener compuestos que inhiban la agregación de proteínas amiloides para formar depósitos de amiloide.
El documento US 6.001.331 se refiere a derivados de benzotiazolio involucrados en la detección por imágenes de depósitos de amiloide.
El documento EP 0 538 134 se refiere a compuestos propargilamina, inhibidores de la monoamino oxidasa.
Una de las enfermedades más devastadoras asociada con depósitos de amiloide es la enfermedad de Alzheimer. La enfermedad de Alzheimer es un desorden degenerativo cerebral caracterizado clínicamente por una progresiva pérdida de memoria, cognición, razonamiento, juicio y estabilidad emocional que lleva gradualmente al deterioro mental y en definitiva a la muerte. Dado que la enfermedad de Alzheimer y los desórdenes degenerativos cerebrales relacionados son un tema médico importante en una población de edad cada vez mayor, son necesarios nuevos tratamientos y procedimientos para diagnosticar los desórdenes.
Varias clases de compuestos han demostrado tener actividad contra la enfermedad de Alzheimer. Los dos únicos agentes actualmente aprobados para tratamiento clínico de la enfermedad de Alzheimer son los inhibidores de acetilcolinesterasa, tacrina y donezepil (ver la Patente de EEUU Nº 4.816.456). Las Patentes de EEUU Nº 5.716.975 y 5.523.314 se refieren a derivados de rodanina útiles como agentes hipoglucemiantes y para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
La presente invención provee un grupo de análogos de aminoindanilo que son inhibidores de la agregación de amiloide y, de esta manera, útiles para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. Los compuestos son también útiles como agentes de imagen por su capacidad de unirse selectivamente a las proteínas amiloides.
Resumen de la invención
La presente invención provee compuestos de la Fórmula I
1
en los que:
R^{1} y R^{2} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n}, siempre que uno de R^{1} y R^{2} sea diferente de hidrógeno;
R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno, halo, alquilo C_{1}- C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n}, NO_{2}, CN, CF_{3}, alcoxi C_{1}-C_{8}, CO_{2}R^{6}, tetrazolilo, NH(alquilo C_{1}-C_{8}), N(alquilo C_{1}- C_{8})_{2} o SO_{2}R^{6},
R^{3} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{8};
R^{6} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n};
n es un entero desde 0 hasta 4 inclusive;
o una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Los compuestos de preferencia tienen la Fórmula I en la que uno de entre R^{1} y R^{2} es fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n} y R^{5} es CO_{2}R^{6}, tetrazolilo, o SO_{2}R^{6} y R^{6} es hidrógeno.
Un grupo de compuestos de preferencia tienen la Fórmula II
2
donde R^{1}, R^{2}, R^{4} y R^{6} son como se los definió anteriormente.
Otro grupo de compuestos de preferencia tienen la Fórmula III
3
En los que R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se los definió anteriormente, y R^{7} es hidrógeno, halo, NO_{2}, CN, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, CF_{3}, NH_{2}, NH(alquilo C_{1}-C_{8}) o N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}.
Otra forma de realización de esta invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I junto con un vehículo, excipiente o diluyente.
Otra forma de realización de esta invención es el uso de los compuestos de la invención para la fabricación de compuestos farmacéuticos para inhibir la agregación de amiloide en un mamífero mediante la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I. Un uso posterior provisto es el uso de los compuestos de la invención para la fabricación de compuestos farmacéuticos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y síndromes centrales y/o periféricos de amiloidosis en mamíferos mediante la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I.
También se provee un uso que consiste en generar la imagen de depósitos de amiloide, este uso comprende las etapas de:
a.: introducir en un paciente una cantidad detectable de un compuesto de Fórmula I marcado;
b.: dejar el compuesto marcado el tiempo suficiente para que se asocie con los depósitos de amiloide; y
c.: detectar el compuesto marcado asociado con los depósitos de amiloide.
En una forma de realización de preferencia del uso, el paciente tiene o se sospecha que tiene enfermedad de Alzheimer.
En otra forma de realización de preferencia, el compuesto marcado es un compuesto marcado radiactivamente.
En otra forma de realización de preferencia, el compuesto marcado se detecta usando MRI.
También se provee una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I.
Descripción detallada de la invención
El término "alquilo" significa una cadena carbonada lineal o ramificada. Son ejemplos representativos de grupos alquilo: metilo, etilo, propilo, isopropilo, isobutilo, butilo, tert-butilo, sec-butilo, pentilo y hexilo.
Los grupos alquilo de preferencia son alquilo C_{1}-C_{8}.
"Alquenilo" significa una cadena carbonada que tiene uno o dos puntos de insaturación en forma de dobles enlaces. Son ejemplos etenilo, prop-2-enilo y hex-2,4-dienilo.
"Alquinilo" significa una cadena carbonada que tiene uno o dos enlaces triples, por ejemplo, 2-butinilo, octa-3,5-diinilo y similares.
El término "alcoxi" significa un grupo alquilo tal como alquilo C_{1}-C_{8} unido a un átomo de oxígeno. Son ejemplos representativos de grupos alcoxi: metoxi, etoxi, tert-butoxi, propoxi e isobutoxi.
El término "halógeno" incluye cloro, flúor, bromo e iodo.
Los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo y alcoxi pueden estar sustituidos.
El término "sustituido" significa que uno o más átomos de hidrógeno en una molécula se han remplazado con otro átomo o grupo de átomos. Por ejemplo, los sustituyentes incluyen halógeno, -OH, -CF_{3}, -NO_{2}, -NH_{2}, -NH(alquilo C_{1}-C_{8}), -N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}, alquilo C_{1}-C_{8}, alquilo -OC_{1}-C_{8}, -CN, -CF_{3}, -CO_{2}H, alquilo -CO_{2}C_{1}-C_{8}, SO_{2}H y alquilo SO_{2}C_{1}-C_{8}.
El término "fenilo sustituido" significa un anillo fenilo en el que desde 1 hasta 4 átomos de hidrógeno se reemplazaron independientemente con un sustituyente, de preferencia uno seleccionado de la lista anterior. Ejemplos de fenilo sustituido incluyen: 2,6-diclorofenilo, 2-metoxicarbonilfenilo, 3-cianofenilo, 2,3,4,5- tetrafluorofenilo, 3-aminofenilo, 2-hidroxifenilo y similares.
El símbolo "-" significa un enlace covalente.
Los términos "sal, éster y amida aceptable farmacéuticamente" como se usan en este documento se refieren a aquellas sales carboxiladas, sales de adición ácidas de amina, ésteres y amidas de los compuestos de la presente invención que son, dentro del alcance del criterio médico, adecuados para usarse en contacto con tejidos de pacientes sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similar, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable y efectiva para el uso deseado, como así también las formas zwiteriónicas, donde son posibles, de los compuestos de la invención. El término "sales" se refiere a sales de adición ácidas inorgánicas y orgánicas de los compuestos de la presente invención relativamente no tóxicas. Estas sales pueden prepararse in situ durante el asilamiento final y purificación de los compuestos o mediante reacción por separado del compuesto purificado en su forma basal libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislando la sal así formada. Sales representativas incluyen sales de hidrobromuro, hidrocloruro, sulfato, bisulfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laureato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato y similares. Estas pueden incluir cationes basados en metales alcalinos y alcalinotérreos, tales como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares, así como, amonio no tóxico, amonio cuaternario y cationes de amina incluyendo, pero no limitado a amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares. (Ver, por ejemplo, Berge S.M., y col., Pharmaceutical Salts, J.Pharm. Sci., 66:1-19 (1977)).
Ejemplos de ésteres no tóxicos de los compuestos de esta invención farmacéuticamente aceptables incluyen ésteres de alquilo C_{1}-C_{8} en los que el grupo alquilo es una cadena lineal o ramificada. Los ésteres aceptables también incluyen ésteres de cicloalquilo C_{5}-C_{7} como así también ésteres de arilalquilo tales como, pero no limitados a bencilo. Son de preferencia los ésteres de alquilo C_{1}-C_{4}. Los ésteres de los compuestos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con procedimientos convencionales.
Ejemplos de amidas no tóxicas de los compuestos de esta invención farmacéuticamente aceptables incluyen amidas derivadas de amonio, aminas primarias de alquilo C_{1}-C_{8} y aminas secundarias de dialquilo C_{1}-C_{8} en las que los grupos alquilo son cadenas lineales o ramificadas. En el caso de aminas secundarias, la amina puede estar en la forma de un heterociclo de 5 ó 6 miembros conteniendo un átomo de nitrógeno. Son de preferencia amidas derivadas de amonio, amidas primarias de alquilo C_{1}-C_{3} y amidas secundarias de dialquilo C_{1}-C_{2}. Las amidas de los compuestos de la invención pueden prepararse de acuerdo con procedimientos convencionales.
Además, los compuestos de la presente invención pueden existir en forma solvatada así como en forma no solvatada con solventes aceptables farmacéuticamente tales como agua, etanol y similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas para los fines de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención pueden existir en diferentes formas estereoisométricas en virtud de la presencia de centros de asimetría en los compuestos. Se contempla que todas las formas estereoisométricas de los compuestos, así como las mezclas de las mismas, incluyendo mezclas racémicas, forman parte de esta invención.
En la primera etapa del presente uso para generar imagen, se introduce un compuesto de Fórmula I marcado en un tejido de un paciente en una cantidad detectable. El compuesto es típicamente parte de una composición farmacéutica y se administra al tejido o al paciente por medio de procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.
En la presente invención, un compuesto puede ser administrado tanto por vía oral, rectal, parenteral (intravenoso, intramuscular o subcutáneo) intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intravesical, local (polvos, ungüentos o gotas) o por medio de un vaporizador bucal o nasal.
Las composiciones adecuadas para inyección parenteral pueden comprender soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas, estériles aceptables fisiológicamente y polvos estériles para ser reconstituidos en soluciones o dispersiones inyectables estériles. Ejemplos de vehículos, diluyentes o solventes acuosos o no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol y similares), mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales (tal como aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables tal como oleato de etilo. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, por medio del uso de un recubrimiento tal como lecitina, manteniendo el tamaño de partículas requerido en el caso de dispersiones y por medio del uso de tensioactivos.
Estas composiciones pueden también contener adyuvantes tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y de administración. La prevención de la acción de microorganismos puede asegurarse mediante varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. Puede ser también deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, cloruro de sodio y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse mediante el uso de agentes de absorción retardada, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólida, el compuesto activo es mezclado con al menos un excipiente (o vehículo) habitual inerte tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico o (a) agentes de relleno o expansores, como por ejemplo, almidones, lactosa, sucrosa, glucosa, manitol y ácido silícico; (b) aglutinantes, como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sucrosa y acacia; (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol; (d) agentes de desintegración, como por ejemplo, agar agar, carbonato de calcio, almidón de patata o de tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos complejos y carbonato de sodio; (e) retardadores de solución, como por ejemplo parafina; (f) aceleradores de absorción como por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario; (g) agentes humectantes, como por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; (h) adsorbentes, como por ejemplo, caolín y bentonita; y (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio o mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las formas de dosificación pueden también comprender agentes tamponadores.
Pueden emplearse también como agentes de relleno composiciones sólidas de un tipo similar en cápsulas blandas o duras de gelatina rellenas usando excipientes tales como lactosa o azúcar de leche, así como también polietilenglicoles de elevado peso molecular y similares.
Las formas de dosificación sólidas tales como comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos pueden prepararse con revestimientos, tales como revestimientos intestinales y otros bien conocidos en la técnica. Pueden contener agentes de opacidad, y pueden ser también de una composición tal que la liberación del compuesto o compuestos activos se realice en una cierta parte del tracto intestinal de manera retardada. Son ejemplos de composiciones de inclusión que pueden usarse las ceras y sustancias poliméricas. Los compuestos activos pueden también estar en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o más de los excipientes mencionados anteriormente.
Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires aceptables farmacéuticamente. Además de los compuestos activos, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como agua y otros solventes, agentes solubilizantes y emulsificantes, como por ejemplo, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, en particular, aceite de semilla de algodón, aceite de maní, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de sésamo, glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán o mezclas de estas sustancias y similares.
Aparte de tales diluyentes inertes, la composición puede también incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsificantes y de suspensión, endulzantes, saborizantes y agentes perfumantes.
Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión, como por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto o mezclas de estas sustancias y similares.
Las composiciones para administración por vía rectal son de preferencia supositorios que pueden prepararse mezclando los compuestos de la presente invención con excipientes no irritantes adecuados o vehículos tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorios, las que son sólidas a temperaturas ordinarias pero líquidas a la temperatura corporal y por consiguiente, se derriten en el recto o cavidad vaginal liberando el componente activo.
Las formas de dosificación para administración tópica de un compuesto de esta invención incluyen ungüentos, polvos, vaporizadores o inhalantes. El componente activo es mezclado bajo condiciones estériles con un vehículo aceptable fisiológicamente y cualquier conservante, tampón o propelente que se necesite. Las formulaciones oftálmicas, ungüentos oculares, polvos y soluciones están también contempladas dentro del alcance de esta invención.
En una forma de realización de preferencia de la invención, el compuesto marcado es introducido en un paciente en una cantidad detectable y tras un tiempo suficiente para que el compuesto se asocie con los depósitos de amiloide, el compuesto marcado se detecta dentro del paciente de una manera no invasiva. En otra forma de realización de la invención, un compuesto marcado de Fórmula I se introduce en un paciente, se permite que el compuesto se asocie con el depósito de amiloide el tiempo suficiente y posteriormente se remueve una muestra del tejido del paciente y se detecta el compuesto marcado en el tejido fuera del paciente. En una tercera forma de realización de la invención, se retira una muestra de tejido de un paciente y se introduce un compuesto de Fórmula I marcado en esa muestra de tejido. Una vez transcurrido el tiempo suficiente para que el compuesto se una a los depósitos de amiloides, se detecta el compuesto.
La administración del compuesto marcado a un paciente puede ser por una vía de administración general o local. Por ejemplo, el compuesto marcado puede ser administrado al paciente de manera que es liberado en todo el cuerpo. Alternativamente, el compuesto marcado puede ser administrado a un órgano específico o tejido de interés. Por ejemplo, es deseable localizar y cuantificar depósitos de amiloide en el cerebro con el fin de diagnosticar o estadificar el progreso de la enfermedad de Alzheimer en un paciente.
El término "tejido" significa una parte del cuerpo del paciente. Ejemplos de tejidos incluyen el cerebro, corazón, hígado, vasos sanguíneos y arterias. Una cantidad detectable es una cantidad de compuesto marcado necesaria para ser detectada por el procedimiento de detección elegido. La cantidad de un compuesto marcado para introducir en un paciente con el fin de obtener la cantidad suficiente para la detección puede ser determinada fácilmente por los expertos en la técnica. Por ejemplo, se pueden administrar cantidades crecientes del compuesto marcado a un paciente hasta que el compuesto es detectado por el procedimiento de detección elegido. Se introduce un marcador en los compuestos para que puedan ser detectados.
El término "paciente" significa ser humano y otros animales. Los expertos en la técnica están también familiarizados en la determinación de la cantidad de tiempo que requiere un compuesto para asociarse con los depósitos de amiloide.
La cantidad de tiempo necesaria puede determinarse fácilmente introduciendo una cantidad detectable de un compuesto de Fórmula I marcado en un paciente y detectando el compuesto marcado en varios tiempos tras la administración.
El término "asociado" significa una interacción química entre el compuesto marcado y el depósito de amiloide. Ejemplos de asociaciones incluyen enlaces covalentes, enlaces iónicos, interacciones hidrofílica-hidrofílica, interacciones hidrofóbica-hidrofóbica y complejos.
Los expertos en la técnica están familiarizados con las variadas formas de detección de compuestos marcados. Por ejemplo, pueden usarse para detectar componentes marcados radiactivamente MRI, tomografía de emisión de positrones (PET) o tomografía computada de emisión de fotones (SPECT). El marcador que se introduce en el compuesto dependerá del procedimiento de detección deseado. Si por ejemplo se selecciona PET como procedimiento de detección, el compuesto debe poseer un átomo emisor de positrones, tal como ^{11}C o ^{18}F.
Otro ejemplo de marcador adecuado en un compuesto de Fórmula I es un átomo como ^{13}C, ^{15}N o ^{19}F que pueden detectarse usando MRI el que también es llamado a veces resonancia magnética nuclear (NMR). Además, los compuestos de Fórmula I marcados pueden también detectarse por MRI usando agentes de contraste paramagnéticos.
Otro ejemplo de detección es la resonancia paramagnética electrónica (EPR). En este caso, pueden usarse las sondas EPR que son bien conocidas en la técnica, tales como nitróxidos.
Las imágenes de los depósitos de amiloide pueden también llevarse a cabo cuantitativamente de manera que puede determinarse la cantidad de depósitos de amiloide.
La presente invención también provee el uso de compuestos de Fórmula I para la fabricación de compuestos farmacéuticos para inhibir la agregación de proteínas amiloides para formar depósitos de amiloide, administrando a un paciente que necesita la inhibición de la agregación de proteína amiloide una cantidad de compuesto de Fórmula I que inhibe la proteína amiloide. Los expertos en la técnica son capaces de determinar la cantidad inhibitoria de amiloide simplemente administrando un compuesto de Fórmula I a un paciente en cantidades crecientes hasta que el crecimiento de los depósitos de amiloide disminuye o se detiene. La velocidad de crecimiento puede ser evaluada usando imágenes o tomando una muestra de tejido de un paciente y observando los depósitos de amiloide en la misma.
Un paciente que necesite inhibir la agregación de proteínas amiloides es un paciente que tiene una enfermedad central o periférica o una afección en la que se agregan proteínas amiloides. Ejemplos de tales enfermedades y afecciones incluyen fiebre del Mediterráneo, síndrome de Muckle-Wells, mieloma idiopático, polineuropatía amiloide, cardiomiopatía amiloide, amiloidosis senil sistémica, amiloidosis con hemorragia cerebral hereditaria, enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, enfermedad de Scrapie, Creutzfeldt-Jacob, síndrome de Kuru, Gerstmann-Straussler-Scheinker, carcinoma medular de tiroides, amiloide atrial aislado, amiloide \beta_{2}-microglobulina en pacientes en diálisis, miositis por cuerpos de inclusión, depósitos de \beta_{2}-amiloide en enfermedad de atrofia muscular, anemia falciforme, enfermedad de Parkinson y diabetes tipo 2 por insulinoma en Islotes de Langerhans.
La presente invención también provee compuestos de Fórmula I en los que uno o más átomos en el compuesto fueron reemplazados por un radioisótopo. El radioisótopo puede ser cualquier radioisótopo. Sin embargo, los de preferencia son ^{3}H, ^{123}I, ^{1}I, ^{131}I, ^{11}C y ^{18}F. Los expertos en la técnica están familiarizados con el procedimiento usado para introducir un radioisótopo en un compuesto. Por ejemplo, se producen compuestos de Fórmula I en los que un átomo de ^{12}C se reemplaza con un átomo de ^{13}C.
Los compuestos de la presente invención pueden ser administrados a un paciente en niveles de dosificación en el intervalo desde aproximadamente 0,1 hasta aproximadamente 1.000 mg por día, las que son "cantidades efectivas" para inhibir la formación de amiloide y para tratar las enfermedades citadas anteriormente, especialmente la enfermedad de Alzheimer. Para un ser humano adulto normal con un peso corporal de aproximadamente 70 Kg, es suficiente una dosis en el intervalo desde aproximadamente 0,01 hasta aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal por día. La dosis específica usada, sin embargo, puede variar. Por ejemplo, la dosis puede depender de un número de factores incluyendo los requerimientos del paciente, la severidad de la afección en tratamiento y la actividad farmacológica del compuesto que se está usando. La determinación de la dosificación óptima para un paciente en particular es bien conocida por los expertos en la técnica.
Los compuestos de Fórmula I pueden prepararse por cualquiera de varios procedimientos, usando reactivos de inicio fácilmente disponibles y procedimientos bien conocidos en química orgánica. El esquema 1 a continuación ilustra un procedimiento típico para producir los reactivos de inicio y los productos finales de Fórmula I. Los compuestos de la invención son preparados generalmente haciendo reaccionar un aminoindano con un haluro de fenilo tal como yoduro de fenilo o bromuro de fenilo.
El esquema 1 empieza con 2-amino-5-nitro-indano, que puede prepararse haciendo reaccionar 2-amino-5-indano con ácido nítrico y ácido sulfúrico, generalmente en un solvente tal como ácido trifluoroacético.
El 2-amino-5-nitro-indano es fácilmente reducido al 2,5-diaminoindano correspondiente, por ejemplo por hidrogenación en presencia de un catalizador tal como niquel Raney. El grupo 5-amino es posteriormente fenilado fácilmente por reacción con un compuesto fenilo 4 que lleva un grupo L que se libere fácilmente, por ejemplo donde L es halo tal como yodo. La reacción se lleva a cabo bajo condiciones estándar de acoplamiento mediado por paladio, tales como en un solvente orgánico (por ej. tolueno) y en presencia de una base débil (por ej. carbonato de cesio). El producto, un 2-amino-5-fenilaminoindano, es posteriormente alquilado o fenilado en la posición 2-amino, nuevamente usando procedimientos estándar de alquilación.
Los esquemas 2, 3 y 4 ilustran la alquilación o fenilación inicial del grupo 2-amino de un 2-amino-5-nitro-indano, seguida por reducción del grupo nitro y fenilación del grupo 5-amino. Todas estas reacciones se llevan a cabo bajo condiciones estándar, por ejemplo en un solvente orgánico no reactivo, en presencia de un a base débil y generalmente a una temperatura elevada desde aproximadamente 60ºC hasta aproximadamente 150ºC. Los productos son aislados fácilmente por la simple eliminación del solvente, por ej. mediante evaporación bajo presión reducida y pueden ser purificados, si se desea, por procedimientos estándar tales como cromatografía, cristalización, destilación y
similares.
Esquema 1
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Esquema 2
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Esquema 3
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Esquema 4
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Los siguientes ejemplos detallados ilustran además la síntesis de compuestos típicos que tienen Fórmula I. Los ejemplos son solamente representativos y no tienen la intención de limitar la invención en ningún caso.
Preparación 1
Sulfato de 2-amino-5-nitro-indano
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Se agregó ácido trifluoroacético (60 ml) en un matraz, se enfrió en un baño de hielo/agua y se agregó cuidadosamente clorhidrato de 2-aminoindano (10,08 g), seguido de H_{2}SO_{4} (6,0 ml) y HNO_{3} (3,0 ml). Se eliminó el baño de hielo y se permitió que la mezcla se caliente hasta temperatura ambiente y se la agitó durante 2 horas. Luego la mezcla se puso en un baño de agua helada para lentamente agregar éter dietílico (300 ml) durante 35 minutos. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche, se filtraron luego los sólidos y se secó en vacío para dar 15,43 g de sulfato de 2-amino-5-nitro-indano.
Preparación 2
2-(4-Fluorobencil)amino-5-nitro-indano y 2-[bis-(4-fluorobencil)amino]-5-nitro-indano
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Se disolvió el sulfato de 2-amino-5-nitro-indano (3 g) de la Preparación 1 en 10 ml de agua y 20 ml de NaOH 2M. Se realizaron tres extracciones de la mezcla con 40 ml de éter metílico de t-butilo y se combinaron las capas orgánicas y se secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró y concentró por medio de evaporación rotativa. El aceite residual se recuperó en 30 ml de CH_{3}CN, al que se le agregó bromuro de 4-fluorobencilo (2,26 g), seguido de K_{2}CO_{3}. Se calentó la mezcla a reflujo durante 18 horas, se la enfrió hasta temperatura ambiente, se la filtró y concentró. El aceite residual se purificó por medio de cromatografía en columna líquida de media presión en gel de sílice (MPLC, columna Biotage, gradiente de solvente 99:1 a 85:15 (CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH 1% en MeOH). Se obtuvo el aminoindano monoalquilado deseado con un rendimiento de 35% (1,10 g) y también se aisló el aminoindano bis-dialquilado (1,38 g, rendimiento 32%). MS (APCI) m/z 287 (M^{+}+1) monoalquilado, MS (APCI) m/z 395 (M^{+}+1) dialquilado.
Preparación 3
Condiciones generales para la reducción del grupo nitro
11
Se hicieron reaccionar los indanos nitro sustituidos con hidrógeno en presencia de niquel Raney para dar los correspondientes 2-alquilo y 2-dialquilamino-5-aminoindanos. El sulfato de 2-amino-5-nitro-indano de la Preparación 1 puede ser hidrogenado de manera similar para dar 2,5-diamino-indano.
Preparación 4
2-n-Pentilamino-5-nitro-indano y 2-N,N-di-n-pentilamino-5-nitro-indano
12
Se disolvió sulfato de 2-amino-5-nitro-indano (2 g) de la Preparación 1 en 20 ml de agua y se lo llevó a pH = 11 con NaOH 2N. La solución acuosa se extrajo con 3x30 ml de éter metílico de t-butilo, se combinaron las fases orgánicas, se secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró y concentró. El aceite residual se disolvió en 30 ml de acetonitrilo, se agregaron carbonato de potasio (1 g) y 1-bromopentano (1,79 ml). Se agitó la mezcla a reflujo durante 18 horas, luego se filtró, concentró y purificó por cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 1;1 a 3:1 acetato de etilo en hexanos) para dar la amina monoalquilada (0,26 g, rendimiento 14%) y la amina dialquilada (0,99 g, rendimiento 43%). MS monoalquilado (APCI) m/z 249,1 (M^{+}+1). MS dialquilado (APCI) m/z 319,2 (M^{+}+1).
Preparación 5
2-(3,4-Diclorobencil)amino-5-nitro-indano
13
Se agregó ácido sulfúrico (10 ml) en un matraz conteniendo clorhidrato de 2-amino-5-nitro-indano (1,68 g) y se lo enfrió en un baño de hielo/agua, luego se agregó HNO_{3} (0,39 ml). Se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, posteriormente se volvió a enfriar en un baño de hielo/agua. Se agregó cuidadosamente hidróxido de sodio (solución al 25%) hasta pH = 11. Luego se sometió la solución a extracción con 4x60 ml de éter dietílico. Las fases orgánicas combinadas se filtraron a través de celite, se secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró y concentró. El aceite negro residual se disolvió en THF (25 ml), se enfrió hasta 0ºC para agregar de NaH (0,4 g, 60% dispersión en aceite mineral). Tras 5 minutos, se agregó bromuro de diclorobencilo (3,0 g)
y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con 20 ml de agua y 40 ml de Et_{2}O, se separaron las capas y las orgánicas se lavaron con 20 ml de agua. Se combinaron las fases acuosas y se lavaron con 30 ml de Et_{2}O, se combinaron las fases orgánicas, se las secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró sobre celite y concentró. El aceite negro se purificó por cromatografía en columna (MPLC, columna de sílice Isco ReadiSep, gradiente de solvente 80:20 a 50:50 Hexano/EtOAc) para dar 2-(3,4-diclorobencil)amino-5-nitro-indano (1,05 g, rendimiento 32%). MS (APCI) m/z 336,1 (M^{+}-1). El nitro indano se redujo por reacción con hidrógeno y niquel Raney para dar 2-(3,4-diclorobencil)amino-5-amino-indano.
Preparación 6
2-Amino-5-(3,4-diclorofenilamino)-indano 
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Se retomó 2,5-diamino-indano (0,77 g) (de la Preparación 3) en tolueno (0,25 M) y se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-(-)-2,2'-bis(di-p-tolil-fosfino)-1,1'-binaftil [(S)-tol-BINAP] (0,176 g) y dibenciliden paladio acetona (Pd_{2}(dba)_{3}) (0,123 g), Cs_{2}CO_{3} (2,37 g) y 3,4-dicloro-1-iodo benceno (1,42 g) y la mezcla se calentó a reflujo durante 36 horas. Posteriormente se enfrió la mezcla, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y purificó por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 20% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron para dar 2-amino-5-(3,4-diclorofenilamino)-indano (0,54 g, rendimiento 35%). MS (APCI) m/z 293,1 (M^{+}+1).
Ejemplo 1 Ácido 2-[(2-N,N-di-n-pentilamino)-indán-5-il]amino-5-nitro-benzoico 
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Se disolvió 2-N,N-di-n-pentilamino-5-amino-indano (preparado como se describe en Preparación 3) (0,88 g) en tolueno (0,25 M) y se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-tol-BINAP (0,16 g) y Pd_{2}(dba)_{2} (0,073 g), Cs_{2}CO_{3} (1,39 g) y 1-bromo-4-nitrobenzoato de metilo (0,66 g), la mezcla se calentó a reflujo durante 18 horas. Posteriormente se enfrió la mezcla, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y purificó por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 10% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron para dar 2-[(2-N,N-di-n-pentilamino)-indano-5-il]amino-5-nitro benzoato de metilo (1,28 g, rendimiento 90%). MS (APCI) m/z 468,1 (M^{+}+1). El benzoato de metilo (0,5 g) se disolvió en 20 ml deTHF/MeOH 1:1; se trató esta solución con 4 ml de LiOH y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Cuando por espectrometría de masa no se observaron más reactivos de inicio, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó por medio de cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 98:2 a 80:20) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH + NH_{4}OH 1%). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante toda la noche para dar ácido 2-[(2-N,N-di-n-pentilamino)-indán-5-il]amino-5-nitro-benzoico (0,240 g, rendimiento 49%). MS (APCI) m/z 454,2 (M^{+}+1). CHN para (C_{26}H_{35}N_{3}O_{4}) calculado: C 68,85, H 7,78, N 9,26; hallado C 69,37 H 7,49, N 8,91.
Ejemplo 2 2-[2-(3,4-Dicloro-bencilamino)-indán-5-ilamino]-benzoato de metilo
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Se disolvió 2-(3,4-dicloro-bencilamino)-5-amino-indano (1,08 g) en tolueno (0,25 M), se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-tol-BINAP (0,12 g) y Pd_{2}(dba)_{2} (0,08 g), Cs_{2}CO_{3} (1,6 g) y 1-bromo benzoato de metilo (0,76 g), se calentó la mezcla a reflujo durante 24 horas. Posteriormente la mezcla se enfrió, diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y purificó por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 10% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron para dar 2-[2-(3,4-dicloro-bencilamino)-indán-5-ilamino]-benzoato de metilo (0,98 g, rendimiento 63%). MS (APCI) m/z 441,2 (M^{+}+1). CHN para (C_{24}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{2}\cdot0,13CH_{3}OH) calculado: C 65,05, H 5,09, N 6,29; hallado C 64,72, H 4,96, N 6,35.
Ejemplo 3 Ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indano-5-ilamino]-benzoico
17
Se disolvió 2-[2-(3,4-dicloro-bencilamino)-indán-5-ilamino]-benzoato de metilo (0,98 g) en 20 ml de THF/MeOH 1:1, se trató esta solución con 9 ml de NaOH 50% y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Una vez que no se observó más la presencia de reactivos de inicio por espectrometría de masa, la mezcla se concentró para eliminar el MeOH, se extrajo con éter dietílico y se recogió el precipitado por filtración, se secó bajo vacío durante la noche para dar ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indano-5-ilamino]-benzoico (0,09 g, rendimiento 10%). MS (APCI) m/z 427,1 (M^{+}+1). CHN para (C_{23}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{2}\cdot1,85HCl) calculado: C 55,83, H 4,45, N 5,66; hallado C 55,45, H 4,22, N 5,50.
Ejemplo 4 Ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 2, se hizo reaccionar 2-(3,4-dicloro-bencilamino)-5-amino-indano con 2-bromo-5-nitro benzoato de metilo para dar 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-il-amino]-5-nitro-benzoato de metilo (0,65 g, rendimiento 69%). MS (APCI) m/z 486,0 (M^{+}+1).
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Se disolvió el benzoato de metilo (0,65 g) en 10 ml de THF/MeOH 1:1 y se trató a esta solución con 2 ml de NaOH 50% y 1 ml de agua, se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Una vez que no se observó más la presencia de reactivos de inicio por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y se disolvieron los sólidos en acetato de etilo/agua 1:1. Se separaron las fases y se sometió a la fase acuosa a extracción con 2 x 20 ml de acetato de etilo. Se combinaron las fases orgánicas y se lavaron con 10 ml de NaCl saturado 50%, se secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró y concentró. El aceite residual se purificó por cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 98:2 a 80:20) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH + NH_{4}OH 1%). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico (0,38 g, rendimiento 60%). MS (APCI) m/z 470,0 (M^{+}-1). CHN para (C_{23}H_{19}Cl_{2}N_{3}O_{4}\cdotCH_{2}Cl_{2}) calculado: C 55,58, H 3,94, N 8,31; hallado C 55,25, H 3,88, N 8,32.
Ejemplo 5 Ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-metoxi-benzoico
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 2, se hizo reaccionar 2-(3,4-dicloro-bencilamino)-5-amino-indano con 2-bromo-5-metoxi benzoato de metilo para dar 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-metoxi-benzoato de metilo (0,130 g, rendimiento 11%). MS (APCI) m/z 471,0 (M^{+}+1).
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Se retomó el benzoato de metilo (0,130 g) en 20 ml de THF/MeOH 1:1 y se lo trató con LiOH 1M (3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. Posteriormente se concentró la mezcla y el aceite residual se purificó por cromatografía (MPLC, sílice, gradiente 95:5 a 75:25) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-metoxi-benzoico (0,03 g, rendimiento 24%). MS (APCI) m/z 457,0 (M^{+}+1). CHN para (C_{24}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{3}\cdot0,6H_{2}O) calculado: C 61,57, H 4,98, N 5,98; hallado C 61,23, H 4,88, N 5,69.
Ejemplo 6 Ácido 2-(2-dipentilamino-indán-5-il-amino)-5-metil-benzoico
20
Se retomó 2-(2-dipentilamino)-5-amino-indano (0,5 g) en THF (8,7 ml) y se enfrió hasta -78ºC para agregar LiHMDS (4,0 ml, 1M en THF). Tras 5 minutos se agregó ácido 2-fluoro-5-metil benzoico (0,27 g), y se eliminó el baño frío. Se permitió a la mezcla alcanzar la temperatura ambiente y se la agitó durante 16 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico y agua. Se separaron las fases y se sometió a la fase acuosa a extracción con 2 x 20 ml de éter dietílico. Se combinaron las fases orgánicas y se secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró y concentró. El aceite residual se purificó por cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 95:5 a 75:25) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar ácido 2-(2-dipentilamino-indán-5-il-amino)-5-metil-benzoico (0,029 g, rendimiento 4%). MS (APCI) m/z 421,2 (M^{+}+1).
Ejemplo 7 Ácido 4-(2-dipentilamino-indán-5-il-amino)-3-nitro-benzoico
21
Se retomó 2-(2-dipentilamino)-5-amino-indano (0,5 g) en THF (8,7 ml) y se enfrió hasta -78ºC para agregar LiHMDS (4,0 ml, 1M en THF). Tras 5 minutos se agregó ácido 4-fluoro-3-nitro benzoico (0,32 g), y se eliminó el baño frío. Se permitió a la mezcla alcanzar la temperatura ambiente y se la agitó durante 16 horas. La mezcla se diluyó con éter dietílico y agua. Se separaron las fases y se sometió a la fase acuosa a extracción con 2x20 ml de éter dietílico. Se combinaron las fases orgánicas y se secó sobre MgSO_{4}/Na_{2}SO_{4}, se filtró y concentró. El aceite residual se purificó por cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 95:5 a 75:25) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar ácido 4-(2-dipentilamino-indán-5-il-amino)-3-nitro-benzoico (0,300 g, rendimiento 38%). MS (APCI) m/z 454,1 (M^{+}+1).
Ejemplo 8 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoato de metilo
22
Se retomó 2-amino-5-(3,4-diclorofenilamino)-indano (0,20 g) en tolueno (0,25 M) y se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-tol-BINAP (0,023 g) y Pd_{2}(dba)_{2} (0,05 g), Cs_{2}CO_{3} (0,31 g) y 2-bromo-4-nitro benzoato de metilo (0,18 g) y la mezcla se calentó a reflujo durante 18 horas. Posteriormente se enfrió la mezcla, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y purificó por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 20% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron para dar 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoato de metilo (0,10 g, rendimiento 26%). MS (APCI) m/z 472,0 (M^{+}+1).
Ejemplo 9 Ácido 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoico
23
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 4, se hizo reaccionar 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoato de metilo con hidróxido de sodio en THF/MeOH para dar ácido 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoico (0,017 g, rendimiento 18%). MS (APCI) m/z 457,9 (M^{+}+1).
Ejemplo 10 Ácido 2-[2-(4-fluorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico
24
Se retomó 2-(4-fluorobencilamino)-5-amino-indano (0,90 g) en tolueno (0,25 M) y se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-tol-BINAP (0,18 g) y Pd_{2}(dba)_{2} (0,08 g), Cs_{2}CO_{3} (1,59 g) y 1-bromo-4-nitro benzoato de metilo (0,75 g) y la mezcla se calentó a reflujo durante 48 horas. Posteriormente se enfrió la mezcla, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y purificó parcialmente por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 10% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron. El aceite crudo residual se disolvió en 10 ml de THF:MeOH 1:1 con 1 ml de NaOH 2N y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Una vez que no se observó más la presencia de reactivos de inicio por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó por medio de cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 95:5 a 75:25) (CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH 1% en MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar 0,83 g de ácido 2-[2-(4-fluorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico. MS (APCI) m/z 422,0 (M^{+}+1). CHN para (C_{23}H_{20}F_{1}N_{3}O_{4}\cdot0,68[H_{2}O]) calculado: C 63,70, H 4,96, N 9,69; hallado C 63,32, H 4,69, N 9,65.
Ejemplo 11 Ácido 2-{2-[bis-(4-fluorobencil)amino]indán-5-ilamino}-5-nitro benzoico
25
Se retomó 2[bis-(4-fluorobencil)amino]-5-amino-indano (1,28 g) en tolueno (0,25 M) y se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-tol-BINAP (0,17 g) y Pd_{2}(dba)_{2} (0,12 g), Cs_{2}CO_{3} (1,6 g) y 1-bromo-4-nitro benzoato de metilo (0,76 g) y la mezcla se calentó a reflujo durante 48 horas. Posteriormente se enfrió la mezcla, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y purificó parcialmente por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 10% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron para dar 1,89 g de éster acoplado. El aceite crudo residual se disolvió en 30 ml de THF y 20 ml de esta solución se trataron con 5 ml de NaOH 2N, se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez que no se observó más la presencia de reactivos de inicio por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó por medio de cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 95:5 a 75:25) (CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH 1% en MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar 0,063 g de ácido 2-{2-[bis-(4-fluorobencil)amino]indán-5-ilamino}-5-nitro benzoico puro. MS (APCI) m/z 530,0 (M^{+}+1). CHN para (C_{30}H_{25}F_{2}N_{3}O_{4}\cdotCH_{3}OH) calculado: C 66,22, H 5,23, N 7,46; hallado C 66,56, H 5,26, N 6,97.
Ejemplo 12 Ácido 2-[2-(n-pentilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico
26
Se retomó 2-n-pentilamino-5-amino-indano (0,32 g) en tolueno (0,2 M) y se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos. Se agregaron (S)-tol-BINAP (0,76 g) y Pd_{2}(dba)_{2} (0,04 g), Cs_{2}CO_{3} (0,68 g) y 1-bromo-4-nitro benzoato de metilo (0,32 g) y la mezcla se calentó a reflujo durante 48 horas. Posteriormente se enfrió la mezcla, se diluyó con éter dietílico, se filtró a través de celite, se concentró y se purificó parcialmente por medio de cromatografía líquida de media presión (columna de gel de sílice, eluida con CH_{2}Cl_{2}/MeOH gradiente 1% MeOH a 10% MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo cualquier traza del producto deseado (espectro de masa) y se concentraron para dar 0,42 g de éster acoplado. El aceite crudo residual se disolvió en 16 ml de THF/MeOH 1:1; esta solución se trató con 1 ml de NaOH 2N, se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez que no se observó más la presencia de reactivos de inicio por espectrometría de masa, la mezcla se concentró y el aceite residual se purificó por medio de cromatografía en columna (MPLC, sílice, gradiente 98:2 a 80:20) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH). Se combinaron las fracciones conteniendo el producto deseado, se concentró y secó en vacío durante la noche para dar ácido 2-[2-(n-pentilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico. MS (APCI) m/z 382,0 (M^{+}-1). CHN para (C_{21}H_{25}N_{3}O_{4}\cdot0,35CH_{2}Cl_{2}) calculado: C 62,06, H 6,27, N 10,17; hallado C 61,67, H 6,34, N 10,15.
Ejemplos biológicos
Los compuestos de la invención de Fórmula I pueden evaluarse en varios ensayos estándar in vitro e in vivo los que son bien reconocidos como indicativos de utilidad clínica en el tratamiento en la enfermedad de Alzheimer y otras afecciones asociadas con la formación de amiloide.
Ensayos de amiloide BASSR (Radioensayo de Amiloide Beta con Autosembrado)
Un ensayo para inhibidores de crecimiento de amiloide fibrilar autosembrado
Materiales
Soluciones Stock:
Tampón de ensayo - fosfato de sodio 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, NaN_{3} 0,02%, urea 1 M (filtrar y almacenar a 4ºC).
El Péptido soluble A\beta(1-40) (Bachem, Torrance, California)-2,2 mg/ml en H_{2}O desionizada (almacenada en alícuotas a -20ºC, mantener en hielo cuando se descongela) se autosembrará tras una semana de almacenamiento. Típicamente, la solución debería almacenarse hasta que no se observe una fase que cubra el ensayo.
A\beta(1-40) marcado con ^{125}I- 150 a 350 K cpm/\mul en 100% aceto nitrilo-ácido trifluoroacético (TFA) 0,1% - \beta-mercaptoetanol 1% (alícuotas almacenadas a -20ºC).
El A\beta(1-40) marcado con ^{125}I puede elaborarse con el procedimiento expuesto por H. Levine, III in Neurobiol. Aging; 16:755 (1995), o puede adquirirse a Amersham, Arlington Heights, Illinois.
Condiciones finales del ensayo: 30 \muM A\beta(1-40) soluble en agua desionizada en tampón de ensayo + 20 a 50 K cpm A\beta(1-40) marcado con ^{125}I por ensayo. El compuesto que se quiere probar se disuelve en dimetilsulfóxido (DMSO), típicamente 5 a 50 mM stock, de manera que la concentración final de DMSO es <1% v/v en el ensayo.
Ensayo: la mezcla de reacción para 50 ensayos (en hielo) comprende 0,1 a 0,2 \mul de A marcado con ^{125}I A\beta(1-40) marcado con ^{125}I + 1 \mul A\beta(1-40) soluble + 13,5 \mul tampón de ensayo por ensayo. Las siguientes son las cantidades de los componentes de la mezcla de reacción suficientes para 50 pocillos de ensayo.
5 a 10 \mul de A\beta(1-40) marcado con ^{125}I seco
675 \mul de tampón de ensayo
50 \mul de A\beta(1-40) soluble
Procedimiento del ensayo
1) Preparar la mezcla de reacción mencionada anteriormente mezclando los componentes y manteniéndolos en hielo.
2) Pipetear 14,5 \mul de la mezcla de reacción en cada uno de los 50 pocillos en una placa de microtitulación de 96 pocillos con fondo en U en hielo (Costar 3794).
3) Agregar 1,7 \mul del compuesto que se quiere probar diluido a cada pocillo en una columna de 8, incluyendo solvente como control. Realizar diluciones seriales 3 veces desde 1 mM (100 \muM final) en tampón de ensayo-urea = 7 diluciones + cero. Cada placa de 96 pocillos puede de esta manera alojar 11 muestras más control Rojo Congo (en etapas al doble desde 0,039 hasta 5 \muM final).
4) Sellar la placa con película de aluminio (Beckman 538619) e incubar en hielo durante 10 minutos.
5) Elevar la temperatura hasta 37ºC e incubar durante 3 a 5 horas (dependiendo de la cantidad del péptido).
6) Eliminar la película de aluminio y agregar 200 \mul/pocillo de tampón de ensayo helado con urea, recolectando las fibrillas radiomarcadas por filtración en vacío a través de filtros GVWP de poro de tamaño 0,2 \mum en placas de 96 pocillos (Millipore MAGV N22, Bedford, Massachusetts). Determinar la radiactividad en los filtros usando procedimientos estándar bien conocidos por los expertos en la técnica.
BASST (Amiloide Beta con Autosembrado, Tioflavina T)
Un ensayo para inhibidores de crecimiento de amiloide fibrilar autosembrado
Procedimientos Materiales
Soluciones Stock:
Tampón de ensayo - fosfato de sodio 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, NaN_{3} 0,02%, urea 1 M (filtrar y almacenar a 4ºC).
El A\beta(1-40) soluble - 2,2 mg/ml en H_{2}O desionizada (almacenada en alícuotas a -20ºC, mantener en hielo cuando se descongela) se autosembrará tras 1 semana de almacenamiento. Típicamente, la solución debería almacenarse hasta que no se observe una fase que cubra el ensayo.
Condiciones finales del ensayo: 30 \muM A\beta(1-40) soluble en agua desionizada en tampón de ensayo. El compuesto que se quiere probar se disuelve en (DMSO), típicamente 5 a 50 mM stock, de manera que la concentración final de DMSO es <1% v/v en el ensayo.
Ensayo: la mezcla de reacción para 50 ensayos (en hielo) comprende 1 \mul de A\beta(1-40) soluble + 13,5 \mul tampón de ensayo por ensayo. Las siguientes son las cantidades de los componentes de la mezcla de reacción suficientes para 50 pocillos de ensayo.
50 \mul de A\beta(1-40) soluble
675 \mul de tampón de ensayo
Procedimiento del ensayo
1) Preparar la mezcla de reacción mencionada anteriormente mezclando los componentes y manteniéndolos en hielo.
2) Pipetear 14,5 \mul de la mezcla de reacción en cada uno de los 50 pocillos en una placa de microtitulación de poliestireno de 96 pocillos con fondo en U (Corning 258881-96) en hielo.
3) Agregar 1,7 \mul del compuesto que se quiere probar diluido a cada pocillo en una columna de 8, incluyendo solvente como control. Realizar diluciones seriales 3 veces desde 1 mM (100 \muM final) en tampón de ensayo-urea = 7 diluciones + cero. Cada placa de 96 pocillos puede de esta manera alojar 11 muestras + control Rojo Congo (en etapas al doble desde 0,039 hasta 5 \muM final).
4) Sellar la placa con película de aluminio e incubar en hielo durante 10 minutos.
5) Elevar la temperatura hasta 37ºC e incubar durante 3 a 5 horas (dependiendo de la cantidad del péptido).
6) Eliminar la película de aluminio y agregar 250 \mul/pocillo de tioflavina T (ThT) 5 \muM [T-3516, Sigma-Aldrich] en glicina-NaOH 50 mM, pH 8,5. Leer la fluorescencia en un lector de placas (ex = 440 nm/20 nm; em = 485 nm/ 20 nm) dentro de los 5 minutos. Determinar la radiactividad en los filtros usando procedimientos estándar bien conocidos por los expertos en la técnica.
BAPA (Agregación de Péptido Beta Amiloide)
Este ensayo se usa para proveer una medida de inhibición por medio de un compuesto contra la tendencia del péptido \beta-amiloide a agregarse.
La finalidad de este ensayo es proveer un procedimiento para ensayar con grandes volúmenes la cantidad de agregación de \beta-amiloide usando un ensayo de punto final basado en filtración. En este ensayo se usa hexafluoroisopropanol (HFIP) para romper el péptido amiloide inicial hasta un estado de monómero y se usa una concentración 33 \muM, la que es suficiente para que la agregación se produzca a pH 6,0 en varias horas.
Procedimientos Agregación de Péptido Beta Amiloide, pH 6,0 (BAPA)
En una placa de 96 pocillos (Costar 3794), agregamos 25 \mul de tampón fosfato 50 mM, pH 6,0, 10 \mul de péptido A\beta(1-40) 0,5 mg/ml en 20% HFIP + 0,1 \mul/ensayo ^{125}I A\beta(1-40) [^{125}I A\beta(1-40)] radioiodinado y 1 \mul del compuesto que se quiere probar empezando en 50 mM con una concentración de DMSO <1%. A continuación incubamos durante 2 a 4 horas a temperatura ambiente. Detenemos la reacción con 200 \mul de tampón fosfato 50 mM, pH 6,0 y la filtramos a través de una placa filtro de 96 pocillos 0,2 de \mum (Millipore, MAGU N22). Lavamos la placa filtro con 100 \mul del mismo tampón fosfato. Se detectó la agregación en un contador Microbeta tras impregnar los filtros con Meltilex (1450-441) y se corrigió el fondo.
Ensayo BATYM Procedimientos
Se secó el A\beta(1-42) (California Peptide) necesario desde su solución stock HFIP. Se disolvió el A\beta(1-42) en DMSO y luego se mezcló con solución salina tamponada con fosfato (PBS) (pH 7,4). La solución de A\beta(1-42) mezclada se filtró con una filtro jeringa con membrana Omnipore 0,2 \mum (Millipore, Bedford, Massachusetts). Se agregó el compuesto a probar en DMSO (concentrado 50x) en cada pocillo (0,5 \mul/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Se agregó la solución de A\beta(1-42) a cada pocillo (24,5 \mul/pocillo). Se centrifugó la placa a 1.000 g durante 5 minutos y se incubó a 37ºC durante 1 día (A\beta1-42; concentración final 100 \muM).
Tras la incubación, se agregó solución de Tioflavina T (ThT) (30 \muM) en tampón glicina-NaOH (pH 8,5, 50 mM) a cada pocillo (250 \mul/pocillo), se midió la fluorescencia (ex = 440/20 nm, em = 485/20 nm) usando un lector de fluorescencia de placas. La actividad inhibitoria se calculó como la reducción de fluorescencia con la fórmula siguiente:
Inhibición \ (%) = \{(F(A\beta)-F(A\beta+compuesto)\}/\{F(A\beta)- F(solvente+compuesto)\} \ x \ 100
Las IC_{50}s se calcularon con un programa de ajuste de curvas usando la siguiente ecuación. Los datos se obtuvieron de dos experimentos diferentes en triplicado.
Inhibición \ (x) = 100 - 100/ \{1+(x/IC_{50})^{n}\}
x = concentración del compuesto probado (M).
IC_{50} = (M).
n = coeficiente de Hill.
Compuestos representativos de Fórmula I exhibieron actividad inhibitoria (IC_{50}) en el intervalo desde aproximadamente 0,1 hasta >100 \muM en los ensayos precedentes. Los resultados de estos ensayos para compuestos específicos representativos de la presente invención se muestran en la tabla a continuación.
Inhibición de Amiloide
Ejemplo Nº BASST BAYTM BASSR BAPA
IC_{50} \muM IC_{50} \muM IC_{50} \muM IC_{50} \muM
1 40 >100 >100,>100,>100 33
3 40 >100 >100
4 1,1 16 >100,>100, 7,5, 8,9 28
5 30 >100 >100,>100, 30 (ppt), 100 165
6 21,>100 >100 (2x) >100 (5x) 118
7 8 >100 >100,>100, 15, >100 118
9 0,25 >100, 8 (v), 7 (v), 6 (ppt) 5
10 30 53,8 >100,>100, 90, 10 >100
11 1 7,12 >100, 20 (ppt), 1,2 (ppt), >100 7
12 >100 >100 >100,>100 5
Los compuestos de la invención pueden también ser evaluados en ensayos estándar in vivo comúnmente usados para evaluar agentes para el tratamiento de afecciones asociadas con la agregación de amiloide tal como la enfermedad de Alzheimer. En un ensayo, la proteína amiloide es inducida en el bazo de ratones por medio de inyecciones subcutáneas de nitrato de plata, adyuvante de Freund completo y una inyección intravenosa de factor de incremento de amiloide. El nitrato de plata se administra cada día hasta el Día 11. Los compuestos que se quieren probar se administran a los ratones diariamente empezando en el Día 1 hasta el Día 11. En el Día 12 los animales se sacrifican, se extraen los bazos, se los prepara histológicamente, se someten a tinción con Rojo Congo y se cuantifica por medio de microscopía el porcentaje de área del bazo ocupada por birrefringencia del amiloide teñido con Rojo Congo. Los compuestos de la invención inhibirán la deposición de amiloide esplénico.
Otro ensayo in vivo en el que pueden evaluarse los compuestos de la invención usa ratones transgénicos. Los ratones llevan una proteína transgénica precursora de \beta-amiloide humano con un promotor prión, como describe Hsiao y col., "Correlative memory deficits, A\beta elevation, and amyloid plaques in transgenic mice", Science 1996; 274:99-102. Estos ratones transgénicos desarrollan depósitos de \beta-amiloide aproximadamente a los 9 meses de edad. A los 15 meses, son abundantes placas seniles difusas y compactas, primeramente en el neocórtex, bulbo olfatorio e hipocampo. Los compuestos de la invención se administran por vía oral a los ratones comenzando en la edad de 8 meses (justo antes del inicio de los depósitos de amiloide) y se continúan durante varios meses (hasta aproximadamente la edad de 14-18 meses). Posteriormente se sacrifican los animales y se extraen los cerebros. Se cuantifica la cantidad de amiloide en el cerebro tanto histológica como bioquímicamente. Los compuestos de la invención inhibirán la acumulación de amiloide en el córtex e hipocampo de los animales de prueba.
Los datos anteriores establecen que los compuestos de la invención de Fórmula I son potentes inhibidores de la agregación proteica y son útiles en el tratamiento de enfermedades asociadas con depósitos de amiloide y en la generación de imagen de depósitos de amiloide para uso diagnóstico. Los compuestos típicamente se usarán en la forma
de formulaciones farmacéuticas para uso terapéutico, los siguientes ejemplos además ilustran composiciones típicas.
Ejemplo 13
Formulación del Comprimido
Ingrediente Cantidad
Compuesto del Ejemplo I 50 mg
Lactosa 80 mg
Almidón de maíz (para mezcla) 10 mg
Almidón de maíz (para pasta) 8 mg
Estearato de Magnesio (1%) 2 mg
150 mg
El compuesto del Ejemplo 1 se mezcla con la lactosa y el almidón de maíz (para mezcla) y se mezcla hasta lograr un polvo uniforme. Se suspende el almidón de maíz (para pasta) en 6 ml de agua y se calienta mientras se lo agita para formar una pasta. La pasta se agrega al polvo mezclado y la mezcla se granula. Los gránulos húmedos se pasan a través de un tamiz duro Nº 8 y se secan a 50ºC. Se lubrica la mezcla con estearato de magnesio 1% y se comprime para formar un comprimido. Se administran a un paciente 1 a 4 comprimidos por día para prevenir la formación de amiloide y tratar la enfermedad de Alzheimer.
Ejemplo 14 Solución Parenteral
En una solución de 700 ml de propilenglicol y 200 ml de agua para inyección se agregan 20,0 g del compuesto del Ejemplo 9. Se agita la mezcla y se ajusta el pH hasta 5,5 con ácido clorhídrico. Se ajusta el volumen hasta 1000 ml con agua para inyección. Se esteriliza la solución, se llenan ampollas de 5,0 ml, cada una conteniendo 2,0 ml (40 mg del compuesto del Ejemplo 9) y se sellan bajo nitrógeno. La solución 10 se administra por inyección a un paciente que sufre carcinoma medular de tiroides que necesita el tratamiento.
Ejemplo 15 Formulación en Parche
Se mezclan diez miligramos de ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-il-amino]-benzoico con 1 ml de propilenglicol y 2 mg de adhesivo polimérico basado en acrílico conteniendo un agente resinoso para enlaces cruzados. La mezcla se aplica a un parche impermeable (30 cm^{2}) y se aplica a la parte superior de la espalda para lograr un tratamiento de polineuropatía amiloide de liberación sostenida.
La manera y procedimiento para realizar y usar la invención están ahora descritos de manera clara, completa, concisa y con términos exactos de manera que cualquier persona experta en la técnica a la que pertenece esta invención, puede realizarla y usarla de la misma forma.

Claims (12)

1. Un compuesto de la Fórmula I
27
en el que:
R^{1} y R^{2} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n}, siempre que uno de R^{1} y R^{2} sea diferente de hidrógeno;
R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno, halo, alquilo C_{1}- C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n}, NO_{2}, CN, CF_{3}, alcoxi C_{1}-C_{8}, CO_{2}R^{6}, tetrazolilo, NH(alquilo C_{1}-C_{8}), N(alquilo C_{1}- C_{8})_{2} o SO_{2}R^{6},
R^{3} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{8};
R^{6} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, fenilo (CH_{2})_{n} o fenilo sustituido (CH_{2})_{n};
n es un entero desde 0 hasta 4 inclusive;
o una sal, éster o amida farmacéuticamente aceptables del mismo.
2. Un compuesto de la Reivindicación 1 que tiene Fórmula II
28
3. Un compuesto de la Reivindicación 2 en el que R^{6} es hidrógeno.
4. Un compuesto de la Reivindicación 1 que tiene Fórmula III
29
en el que R^{7} es hidrógeno, halo, NO_{2}, CN, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, CF_{3}, NH_{2}, NH(alquilo C_{1}-C_{8}) o N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}.
5. Un compuesto de la Reivindicación 1 seleccionado del grupo constituido por
ácido 2-[(2-N,N-di-n-pentilamino)-indán-5-il]amino-5-nitro-benzoico;
2-[2-(3,4-Dicloro-bencilamino)-indán-5-ilamino]-benzoato de metilo;
ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indano-5-ilamino]-benzoico;
ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico;
ácido 2-[2-(3,4-diclorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-metoxi-benzoico;
ácido 2-(2-dipentilamino-indán-5-il-amino)-5-metil-benzoico;
ácido 4-(2-dipentilamino-indán-5-il-amino)-3-nitro-benzoico;
2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoato de metilo;
ácido 2-[5-(3,4-diclorofenilamino)-indán-2-ilamino]-5-nitro-benzoico;
ácido 2-[2-(4-fluorobencilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico;
ácido 2-{2-[bis-(4-fluorobencil)amino]indán-5-ilamino}-5-nitro benzoico; y
ácido 2-[2-(n-pentilamino)-indán-5-ilamino]-5-nitro-benzoico.
6. El uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5 para la fabricación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer o la inhibición de la agregación de proteínas amiloides.
7. El uso de un compuesto marcado de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5 para la fabricación de preparaciones para diagnóstico mediante la formación de imágenes de depósitos de amiloide.
8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7 para la detección de depósitos de amiloide en pacientes en los que se sospecha que sufren la enfermedad de Alzheimer.
9. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 7 u 8 en el que el compuesto marcado es un compuesto marcado radiactivamente.
10. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 7 a 9 en el que el compuesto marcado se detecta por medio de MRI.
11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las reivindicaciones 1 a 5 junto con un excipiente, diluyente o vehículo del mismo.
12. Una composición para diagnóstico que comprende un compuesto marcado de las reivindicaciones 1 a 5 junto con un excipiente, diluyente o vehículo del mismo.
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007522077A (ja) * 2003-08-21 2007-08-09 アクセス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 粘膜の疾患および障害の予防および処置のための液体製剤
EP2121633A2 (en) 2007-02-12 2009-11-25 Merck & Co., Inc. Piperazine derivatives for treatment of ad and related conditions
JP2009084254A (ja) * 2007-10-03 2009-04-23 Sumitomo Chemical Co Ltd アミロイドβタンパク質の蓄積を抑制するための医薬組成物
WO2009079566A2 (en) 2007-12-18 2009-06-25 Acumen Pharmaceuticals, Inc. Novel addl receptor polypeptides, polynucleotides and host cells for recombinant production
US9447461B2 (en) 2009-03-24 2016-09-20 California Institute Of Technology Analysis devices, kits, and related methods for digital quantification of nucleic acids and other analytes
CA2756463C (en) 2009-03-24 2019-01-22 University Of Chicago Slip chip device and methods
US10196700B2 (en) 2009-03-24 2019-02-05 University Of Chicago Multivolume devices, kits and related methods for quantification and detection of nucleic acids and other analytes
US9464319B2 (en) 2009-03-24 2016-10-11 California Institute Of Technology Multivolume devices, kits and related methods for quantification of nucleic acids and other analytes
US9808798B2 (en) 2012-04-20 2017-11-07 California Institute Of Technology Fluidic devices for biospecimen preservation
JP6196661B2 (ja) 2012-04-20 2017-09-13 スリップチップ， エルエルシー サンプル調製または自律分析のための流体デバイスおよびシステム
US9803237B2 (en) 2012-04-24 2017-10-31 California Institute Of Technology Slip-induced compartmentalization
HUE043663T2 (hu) * 2012-10-31 2019-08-28 Fujifilm Toyama Chemical Co Ltd Új aminszármazék vagy sója TNF-alfa inhibitorként
CN107949383B (zh) * 2015-08-18 2022-08-23 加利福尼亚大学董事会 用于成像的含氮氧化合物的淀粉样蛋白结合剂
WO2018111805A1 (en) 2016-12-13 2018-06-21 St. Jude Children's Research Hospital Tetrahydroquinoline-based bromodomain inhibitors

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816456A (en) 1986-10-01 1989-03-28 Summers William K Administration of monoamine acridines in cholinergic neuronal deficit states
GB8707123D0 (en) * 1987-03-25 1987-04-29 Pfizer Ltd Antiarrhythmic agents
US5280032A (en) 1989-02-14 1994-01-18 Toyama Chemical Co., Ltd. 1,2-ethanediol derivative and salt thereof, process for producing the same, and cerebral function-improving agent comprising the same
EP0535496A1 (en) * 1991-09-25 1993-04-07 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Incorporated (1-Indanon-2yl)methylpiperidines, intermediates and a process for their preparation and their use as medicaments
IL99759A (en) 1991-10-16 1997-06-10 Teva Pharma Mono-fluorinated derivatives of n-propargyl-1-aminoindan, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
CZ181493A3 (en) 1992-09-10 1994-03-16 Lilly Co Eli The use of rhodanine derivative for the preparation of a pharmaceutical composition reducing level of sugar in blood and for treating alzheimer's disease
WO1997026919A2 (en) * 1996-01-24 1997-07-31 Warner-Lambert Company Method of imaging amyloid deposits
SE9802360D0 (sv) * 1998-07-01 1998-07-01 Wikstroem Hakan Vilhelm New 2-aminothiazol-fused 2-aminoindans and 2-aminotetralins ((basic)-N-substituted and (basic)-N,N-disubstituted derivatives of 2,6-diamino-thiazolo(4,5-f)indan and 2,7-di-amino-thiazolo(4,5-g)tetralin

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