ES2248951T3 - Capas difusoras, humectantes para su preparacion y su empleo en tiras de ensayo. - Google Patents
Capas difusoras, humectantes para su preparacion y su empleo en tiras de ensayo.Info
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Abstract
Material difusor formado por una estructura plana porosa impregnada con un humectante, caracterizado porque el humectante es N-oleoil-sarcosinato sódico.
Description
Capas difusoras, humectantes para su preparación
y su empleo en tiras de ensayo.
La presente invención se refiere a capas
difusoras formadas por una estructura plana porosa que está
impregnada con N-oleoil-sarcosinato
sódico, a la preparación de este material difusor mediante el uso de
N-oleoil-sarcosinato sódico y a
tiras de ensayo que llevan el material difusor de la presente
invención.
Para la determinación analítica cualitativa o
cuantitativa de componentes en líquidos corporales, sobre todo en la
sangre, suelen efectuarse ensayos con materiales soporte. En este
caso, los reactivos se hallan sobre o dentro de las correspondientes
capas de un soporte sólido de ensayo, que se pone en contacto con la
muestra. La reacción entre la muestra líquida y los reactivos
produce una señal detectable, concretamente un cambio de color, que
se puede valorar mediante un aparato, casi siempre por fotometría de
reflexión.
Los soportes de ensayo suelen tener forma de
tiras que constan básicamente de una capa soporte alargada de
material plástico, sobre la cual se han aplicado unas capas de
detección como áreas de ensayo. También se conocen soportes de
ensayo en forma de plaquitas cuadradas o rectangulares. En la
siguiente descripción el término "tira de ensayo" también
incluye los soportes de ensayo que no tienen forma de tira.
Los soportes de ensayo del tipo descrito al
comienzo son conocidos, por ejemplo, a través de la patente alemana
21 18 455. Ahí se describen soportes de ensayo diagnósticos para la
detección de analitos en líquidos, que constan de una capa soporte
y, al menos, una capa de detección que contiene los reactivos, cuya
superficie opuesta a la capa soporte va provista de una capa de
acabado. Esta capa de acabado puede ser una malla fina en forma de
tela, tejido de punto o velo. Los tejidos sintéticos se indican como
el tipo de malla preferido para alcanzar una rápida humectación de
la capa detectora con la muestra líquida y evitar efectos
cromatográficos contraproducentes. Para detectar un analito en un
líquido se sumerge uno de dichos soportes de ensayo diagnósticos en
el líquido que corresponda, preferentemente orina. De este modo la
capa detectora entra en contacto con un gran exceso de líquido, que
no puede ser absorbido por el soporte de ensayo. Según la duración
del contacto de la capa detectora con el líquido analizado pueden
observarse distintas intensidades de color.
Generalmente se obtienen resultados más positivos
cuanto mayor es el tiempo de contacto, pero, cuando el exceso de
muestra es muy grande, por este procedimiento no se pueden
determinar cuantitativamente analitos de forma correcta.
Por otra parte, de cara a la elaboración de un
soporte de ensayo, un volumen de muestra demasiado pequeño es una
causa frecuente de valores de medición falsos durante el control de
la diabetes, es decir, el control regular del contenido de glucosa
en la sangre de los enfermos de diabetes.
Los soportes de ensayo con poca demanda de
volumen son por tanto el objetivo de muchos desarrollos
actuales.
A través de la patente
DE-A-3042857 se conocen unas tiras
de ensayo que, sobre sus elementos analíticos de varias capas,
presentan una capa de distribución de la muestra (capa difusora) que
tiene la misión de repartir uniformemente sobre todo el elemento de
ensayo la muestra líquida aplicada en forma de puntos. Esta capa
difusora consta de una tela o de una capa de espuma hidrofilizada
mediante impregnación con un humectante y se puede prensar sobre la
capa superior gelatinosa del elemento analítico o bien fijarse sobre
ella con una capa adicional de adhesivo.
En los ejemplos de ejecución de esta patente se
usa un tejido de algodón o una tela filtrante como capa difusora.
Para la hidrofilización sirve el humectante no iónico
poli-oxietilen-nonilfenoxiéter.
Por la patente
EP-A-0 821 233 se conocen soportes
diagnósticos en forma de tiras de ensayo, que representan un claro
avance en cuanto a la capacidad de reproducción de los resultados de
ensayo, incluso aplicando distintos volúmenes de muestra, y a la
capacidad higiénica de manipulación.
Llevan una capa soporte y, sobre ella, una capa
de detección, que contiene los reactivos necesarios para determinar
analitos en muestras líquidas y está recubierta con una malla de
tamaño superior al de la capa detectora. Esta malla va sobrepuesta
sobre ambas caras de la capa detectora y tiene contacto directo, es
decir sin distanciador, con casi toda la superficie. En cambio va
fijada sobre la capa soporte, preferentemente, mediante un
distanciador. La malla empleada como recubrimiento debe ser
hidrófila, además de poseer actividad capilar. En este caso, la
malla se impregna igualmente con un humectante para hidrofilizarla,
en concreto con dioctilsulfosuccinato sódico.
En dicha estructura, la malla que recubre la capa
detectora está formada preferentemente por un tejido monofilamento
de título grueso y malla bastante gruesa, con anchura suficiente
para que el líquido llegue a la capa detectora a través de la malla
(página 3, línea 12). En el ejemplo de esta patente se usa un tejido
monofilamento con una abertura de malla de 280 \mum, que tiene una
función básica: traspasa rápidamente a la capa detectora subyacente
el líquido de muestra aplicado a su superficie. Si la capa detectora
está saturada, el posible exceso de muestra se desvía hacia los
bordes de la malla que sobresalen por encima de la capa detectora.
De este modo llegan completamente a la capa detectora pequeñas
cantidades de muestra y se evita la acción prolongada de un exceso
de muestra, que puede dar resultados falsamente positivos.
En dicha patente también se describe una forma de
ejecución que presenta dos o más capas detectoras dispuestas unas
junto a otras, para medir el mismo o distintos analitos.
El empleo de soportes de ensayo según esta forma
de ejecución ofrece naturalmente a primera vista ventajas atrayentes
en cuanto al ahorro de trabajo y coste, pues debería permitir la
realización de dos o incluso más mediciones con una sola aplicación
de muestra. Sin embargo, en la práctica, al tratar de usar esta
forma de ejecución surgen dificultades atribuibles al hecho de que,
en las tiras de ensayo formadas por varios campos, la acción
difusora de la malla relativamente amplia no basta para repartir las
muestras de analito a ambas áreas de detección. Solo mediante la
aplicación cuidadosa de una muestra de analito exactamente sobre la
frontera entre ambas áreas de ensayo -lo cual es difícil de lograr
en la práctica- se consigue humectar ambas zonas, pero para su
humectación completa se necesita un volumen mínimo de muestra
superior a 15 \mum.
Tampoco da resultado la tentativa de humectar
ambas áreas de ensayo disponiéndolas directamente una junto a otra,
sin espacio intermedio, sobre el soporte. Se demuestra que la
pequeña distancia entre ambas áreas también existente en este caso,
de 5 hasta 10 \mum, impide que la sangre "salte" de una a
otra zona.
En el estado técnico hay propuestas para
continuar mejorando y economizando los métodos de análisis con tiras
de ensayo, pero su aplicación práctica aún topa con obstáculos
considerables.
Falta conocimiento técnico para distribuir
muestras de analito de manera rápida y uniforme sobre una estructura
de áreas de ensayo, sobre todo cuando se dispone de pequeños
volúmenes de muestra y/o hay varias áreas de ensayo dispuestas una
al lado de otra. Así, entre otras cosas, para determinar
cuantitativamente analitos -como por ejemplo glucosa- en sangre
capilar mediante un ensayo de un solo campo hace falta repartir
uniformemente unos 3 \mul de sangre en menos de 2 segundos sobre
el área relativamente grande de 30 mm^{2}. En el caso de un ensayo
de dos campos hay que repartir unos 5 \mul de sangre sobre dos
áreas de ensayo de unos 30 mm^{2} cada una.
El factor tiempo también tiene una gran
importancia en tales procesos: no se trata en absoluto de acelerar
solamente el proceso de ensayo, sino que interesa distribuir
uniformemente el analito dentro de toda la capa de ensayo con la
menor demora posible, pues un desfase de tiempo puede reflejarse en
un gradiente del resultado de análisis a través del campo de ensayo,
con lo cual la determinación queda lastrada con un factor
considerable de inseguridad.
Los problemas derivados de estas exigencias no se
han resuelto hasta la fecha de modo sencillo y satisfactorio, según
conocimiento del solicitante de esta patente.
Ahora se ha encontrado sorprendentemente que
puede reducirse a unos 4 \mul el volumen de muestra necesario para
la medición y conseguirse un reparto muy uniforme de la muestra,
incluso sobre varias áreas de detección dispuestas una junto a otra,
en un tiempo inferior a 2 segundos, cuando las áreas de detección se
recubren con el material difusor de la presente invención, que se
describe a continuación.
El material difusor de la presente invención
comprende una estructura plana porosa impregnada con un agente
humectante y se caracteriza porque el humectante es
N-oleoil-sarcosinato sódico. El
N-oleoil-sarcosinato sódico se puede
preparar fácilmente por reacción de
N-oleoil-sarcosina (p.ej. el
producto comercial Crodasinic® O de la firma Croda, Nettetal) con
una cantidad equivalente de sosa cáustica.
Respecto a la descripción del material difusor de
la presente invención, el atributo "impregnado" significa que
el material lleva una capa del agente de impregnación sobre su
superficie franqueable por los líquidos, es decir, que los poros y
los intersticios entre los filamentos también están
"revestidos" con dicho agente. La capa del compuesto de la
fórmula I produce una hidrofilización especialmente ventajosa de la
estructura plana porosa, que la hace muy adecuada como material
difusor.
Naturalmente, la concentración local del agente
de impregnación en la superficie depende de la accesibilidad del
elemento superficial en cuestión. Sin embargo esto es de importancia
secundaria para el efecto hidrofilizante de la capa superficial.
En general, para lograr una capa hidrófila sobre
el material difusor de la presente invención basta una cantidad de
0,01 hasta 2,0% en peso, preferentemente de 0,03 hasta 0,5% en peso
de N-oleoil-sarcosinato sódico,
referida al peso del material antes de la impregnación.
El mayor efecto propagador del material difusor
de la presente invención está estrechamente ligado a la presencia de
N-oleoil-sarcosinato sódico en el
material. La superioridad del agente humectante empleado en la
presente invención frente al utilizado en el estado técnico más
comparable, el de la patente EP-A-0
821 233, puede demostrarse mediante una prueba sencilla:
Un velo (Viledon® FO 2451/121 de la firma
Freudenberg) se impregna hasta la saturación en una solución acuosa
al 0,5% en peso de dioctil-sulfosuccinato sódico (el
agente humectante empleado en la patente
EP-A-0 821 233) y se seca al aire.
Sobre un trozo de unos 3 x 3 cm del velo impregnado de este modo y
extendido horizontalmente se pone una muestra de sangre de 5 a 10
\mul. La sangre permanece en forma semiesférica sobre la parte
superior del velo y la parte inferior no se humedece.
Si se pone la misma cantidad de sangre sobre un
trozo del velo impregnado con dioctil-sulfosuccinato
sódico y colocado sobre un film de reactivo, la gota de sangre
también permanece sobre la cara superior del velo, sin humectar el
film y, por tanto, sin que tenga lugar ninguna reacción. Solo
presionando mecánicamente la sangre en un sitio, p.ej. tocando el
velo con la punta de una pipeta, llega sangre a la cara inferior del
velo, produciéndose la difusión y la reacción.
Repitiendo la prueba arriba descrita de modo
exactamente igual, con la única diferencia de usar una solución
acuosa al 0,1% en peso de
N-oleoil-sarcosinato sódico en vez
del dioctil-sulfosuccinato sódico para impregnar el
velo, la sangre depositada atraviesa el velo y cuelga en forma
semiesférica de la cara inferior. Si al aplicar la sangre, el velo
impreg-
nado descansa sobre un film de reactivo, la sangre pasa espontáneamente a la cara inferior y la reacción tiene lugar.
nado descansa sobre un film de reactivo, la sangre pasa espontáneamente a la cara inferior y la reacción tiene lugar.
La demostrada superioridad del
N-oleoil-sarcosinato sódico y su
empleo como agente difusor es muy sorprendente. Se conoce un gran
número de humectantes clasificados en distintos grupos de compuestos
químicos.
Tienen en común la presencia de un fragmento
molecular hidrófilo y de otro hidrófobo.
En el vol. 5 de la "Enciclopedia Ullmann de
química industrial" se describen humectantes de carácter no
iónico, aniónico, catiónico y anfótero. En la página 778 se destacan
del grupo de los humectantes aniónicos los derivados de ácido
succínico, sobre todo los dialquilésteres de ácido succínico, como
humectantes de excelente eficacia que han encontrado un uso
industrial extraordinariamente amplio.
En la página 751 de esta obra capital se
mencionan igualmente como humectantes derivados de ácidos
aminocarboxílicos, entre ellos el ácido aminoacético -que también es
un elemento estructural del compuesto utilizado en la presente
invención- y se clasifican en el grupo de los humectantes anfóteros.
En las páginas 795/796 se añade que solamente han alcanzado una
pequeña importancia técnica, debido sobre todo a que sus propiedades
dependen mucho del pH.
Por consiguiente no era previsible que el
N-oleoil-sarcosinato sódico,
empleado como agente difusor, superara en gran medida a los ésteres
del ácido sulfosuccínico, conocidos como humectantes excelentes.
La estructura plana porosa que sirve de base para
el material difusor de la presente invención es un producto textil
formado por monofilamentos o hilos adecuados de multifilamento, que
no tiene capilaridad, pero es permeable a los líquidos, y cuya
estructura y material y/o apresto hidrofilizante se elige de modo
que, colocado sobre una base, difunda 10 \mul de agua sobre una
superficie superior a 300 mm^{2}.
Las estructuras planas textiles que satisfacen
este requisito se encuentran entre los materiales habituales en el
mercado. La elección aproximada de materiales textiles apropiados
puede tener lugar según la premisa "lo más delgados posible con el
menor gramaje posible". Para afinar la selección puede servir el
siguiente ensayo de difusión:
Sobre el lado mate de una lámina de policarbonato
se depositan unas tiras de 10 mm de anchura y al menos 100 mm de
longitud del material textil ensayado, hidrofilizado si es preciso.
Después se aplican en el medio de la tira 10 \mul de agua en forma
de puntos y se observa su difusión. Si el material es adecuado, el
proceso de difusión debe cesar al cabo de 5 hasta 10 segundos y la
superficie humectada debe ser al menos de 30 x 10 mm.
Con este ensayo se pueden demostrar por ejemplo
las grandes diferencias entre el tejido de poliéster PE 280 HC,
usado como material difusor según la patente
EP-A-0 821 233, y los materiales
textiles empleados según la presente invención, p.ej. el tejido de
poliéster PE 38 HC o el velo Viledon FO 3451/121, del modo
siguiente:
Unas tiras de 10 mm de anchura de los materiales
textiles ensayados se impregnan con la misma capa (aproximadamente
0,25% en peso respecto al peso del material antes de la
impregnación) de
N-oleoil-sarcosinato sódico y se
secan. Estas tiras impregnadas se depositan luego sobre el lado mate
de una lámina de policarbonato. Al aplicar 10 \mul de agua en
forma de puntos, el agua se difunde en 5 a 10 segundos sobre las
superficies indicadas en la tabla siguiente y después se
detiene:
| Según | Material | Superficie |
| EP-A-0 821 233 | PE 280 HC | 8 x 10 mm |
| La presente invención | PE 38 HC | 40 x 10 mm |
| La presente invención | Viledon FO 3451/121 | 50 x 10 mm |
Como materiales textiles para difundir pequeñas
cantidades de sangre han resultado especialmente apropiados los
tejidos, mallas o velos con un grosor de 20 hasta 200 \mum,
preferentemente de 30 hasta 100 \mum, y/o un volumen de poro de 30
hasta 85, preferentemente de 40 hasta 75%. El gramaje de estos
materiales especialmente idóneos para difundir pequeños volúmenes de
sangre es de 10 hasta 200, preferentemente de 10 hasta 50
g/m^{2}.
En este marco se prefieren especialmente los
materiales con espesores por debajo de 100 \mum, sobre todo
menores de 50 \mum, y gramajes por debajo de 50, sobre todo
inferiores a 25 g/m^{2}.
Las estructuras planas preferidas, con las
medidas citadas, son tejidos y velos. Entre los tejidos se prefieren
los que tienen una amplitud de malla inferior a 200 \mum, con
preferencia de 20 hasta 150 \mum, sobre todo de 20 hasta 60
\mum; los que son resistentes al desplazamiento y están elaborados
mediante ligamento de tafetán, a partir de monofilamentos con
títulos comprendidos entre 2 y 20 dtex, preferentemente entre 4 y 15
dtex. Los tejidos pueden llevar un apresto antideslizante después
del tisaje. La resistencia al desplazamiento de los tejidos se
consigue preferentemente dando a los monofilamentos una forma
ondulada durante la fabricación del tejido y/o soldando ligeramente
por fusión los filamentos de trama y urdimbre en los puntos de
cruce, con lo cual se impide que se deslicen.
Los velos empleados en la presente invención son
de tipo no orientado, sobre todo de filamentos continuos unidos.
Están formados por monofilamentos continuos cuyo título está
comprendido entre 0,5 y 2,5 dtex, preferentemente entre 0,8 y 2,0
dtex. La unión se puede realizar tratando los velos con adhesivos,
pero se prefiere la unión "autógena", que consiste en fundir
ligeramente los filamentos en sus puntos de cruce. Naturalmente, los
poros de tales velos tienen diferencias de tamaño considerables y,
sorprendentemente, a pesar de la gran dispersión del tamaño de poro,
los velos con las características arriba indicadas resultan
excelentes para el uso según la presente inven-
ción.
ción.
La escasa capilaridad de la estructura plana o su
inexistencia se manifiesta porque presenta un ascenso de agua a 25ºC
menor de 2 mm en 10 segundos.
Para los materiales textiles de la presente
invención se pueden utilizar fibras naturales como las de celulosa o
albúmina, semisintéticas como la seda al acetato o la seda viscosa,
o totalmente sintéticas como las de poliéster,
poli-amida, poliuretano, poliacrilonitrilo,
polietileno o polipropileno, o bien mezclas de dichos tipos de
fibra.
Como fibras celulósicas se prefieren las de
algodón y como fibras albuminosas la lana y la seda natural. Fibras
de acetato apropiadas son las de 2,5-diacetato o
triacetato, según el grado de hidrofilia deseado. Las fibras
sintéticas preferidas son de poli(etilentereftalato),
poliamida-6,
poli-amida-6,6 o poliacrilonitrilo
modificado.
Por su gran estabilidad frente a los agentes
externos y por la posibilidad de modificar sus propiedades mecánicas
y químicas durante la producción, según convenga, se prefieren las
fibras sintéticas, sobre todo las termoplásticas, a las
naturales.
Productos textiles planos, habituales del
comercio, que, sobre todo después de una hidrofilización, pueden
usarse conforme a la presente invención son, por ejemplo, el tejido
de poliéster monofilamento tipo PE nn HC o el tejido de Nylon
monofilamento tipo NY nn HC o HD de la firma ZBF Mesh + Technology,
Rüschlikon, CH, donde nn varía de 20 hasta 150, especialmente el
tejido de poliéster tipo PE 38 HC o el tejido de Nylon monofilamento
tipo NY 41 HC. Para el uso según la presente invención también son
muy adecuados los velos Viledon® FO 2451, sobre todo el tipo FO
2451/121, de la firma Freudenberg, Weinheim, Alemania.
Naturalmente el uso del material difusor de la
presente invención no está limitado a la fabricación de tiras de
ensayo, aunque esta es una aplicación de especial importancia -
sobre todo en la elaboración de tiras diagnósticas. Antes bien, el
material difusor de la presente invención se puede emplear de manera
general en la industria, cuando se trata de distribuir rápida y
uniformemente líquidos sobre superficies relativamente grandes, como
p.ej. en el revelado de fotografías de haluros de plata de formato
extremadamente grande con una cantidad limitada de revelador y en
determinados procesos de separación de tonos en fotografía
artística.
También es un objeto de la presente invención el
uso de N-oleoil-sarcosinato sódico
para preparar un material difusor.
Para confeccionar el material difusor, el
N-oleoil-sarcosinato sódico puede
utilizarse en forma pura o en forma de preparados, sobre todo en
forma de soluciones o preparados líquidos.
Un preparado puede estar formado por una
disolución o una dispersión finamente dividida de
N-oleoil-sarcosinato sódico en agua
o en un disolvente orgánico inerte, o en una mezcla disolvente/agua.
También puede ser una emulsión de una solución acuosa de
N-oleoil-sarcosinato sódico en un
disolvente inmiscible con agua.
Además del
N-oleoil-sarcosinato sódico los
preparados pueden contener otros aditivos y/o sustancias auxiliares
que tengan un efecto sinérgico con aquél o que actúen, por ejemplo,
como coadyuvantes de impregnación, estabilizantes o coloides
protectores. Asimismo, junto al
N-oleoil-sarcosinato sódico, los
preparados pueden contener sustancias que proporcionen al material
difusor funciones adicionales u otras propiedades ventajosas. Así,
por ejemplo, los preparados también pueden contener materiales
filtrantes o cargas de tipo inorgánico u orgánico, finamente
dispersados. Otros ejemplos de aditivos que pueden contener los
preparados del
N-oleoil-sar-cosinato
sódico utilizado en la presente invención son colorantes que dan un
color característico al material difusor, o que sirven para mejorar
el reconocimiento de las reacciones cromáticas en las capas
detectoras o para empapar totalmente el material difusor, o que
absorben la radiación UV.
Otro objeto de la presente invención es un método
para elaborar un material difusor mediante la impregnación de una
estructura plana porosa con un humectante o con un preparado
humectante, ajustando si es preciso la estructura plana para una
absorción de humectante predeterminada y secando el material. Este
método se caracteriza porque como humectante se emplea
N-oleoil-sarcosinato sódico.
Los preparados humectantes que pueden emplearse
en el método de la presente invención ya se han descrito
anteriormente.
Para la impregnación sirven todas las medidas que
dan como resultado una distribución estadísticamente uniforme del
humectante en la estructura plana porosa. El humectante se aplica
por regla general en forma de una solución o de un preparado
líquido.
Los productos de impregnación empleados llevan
adecuadamente 0,01 hasta 2% en peso, con preferencia 0,03 hasta 1%
en peso, sobre todo 0,07 hasta 0,3% en peso, del agente
humectante.
La aplicación puede efectuarse por cualquier
método corriente, por ejemplo, mediante inmersión, pulverización o
cepillado. También cabe la posibilidad de empolvar los materiales
porosos con polvo fino de
N-oleoil-sarcosinato sódico o con
preparados sólidos del mismo.
El
N-oleoil-sarcosinato sódico se
aplica preferentemente en forma de soluciones acuosas.
La cantidad aplicada de
N-oleoil-sarcosinato sódico o de sus
preparados se ajusta, o si hay un exceso se retira, de tal manera
que sobre el material poroso quede una capa de 0,01 hasta 2,0% en
peso, con preferencia de 0,03 hasta 0,5% en peso del
N-oleoil-sarcosinato sódico,
respecto al peso del material antes de la impregnación.
Dado que el humectante suele aplicarse en forma
de soluciones o preparados líquidos, después de la impregnación es
necesario secar el material impregnado. El secado se puede realizar
de cualquier forma adecuada para materiales textiles o espumas de
poro abierto. Normalmente el material se seca a temperaturas
comprendidas entre 10ºC y el punto de ebullición de la fase líquida
contenida en el producto aplicado, preferentemente entre 20 y 80ºC.
El proceso de secado puede favorecerse mediante vacío o
recirculación de aire. El aporte de calor puede tener lugar por
convección mediante un portador térmico, por contacto con un
calefactor o por radiación. Es conveniente secar las estructuras
planas de manera que estén desplegadas.
Además del material difusor también es objeto de
la presente invención una tira de ensayo formada por un soporte
plano flexible, sobre el cual se ha dispuesto una superficie de
ensayo o varias de ellas, una junto a otra. Estas áreas de ensayo
llevan respectivamente una o varias capas detectoras superpuestas.
Dicha tira de ensayo se caracteriza por estar recubierta con un
material difusor como el descrito anteriormente, conforme a la
presente invención.
La tira de ensayo debe servir preferentemente
para fines diagnósticos.
Las tiras de ensayo especialmente ventajosas
tienen dos áreas de ensayo, de una o más capas, directamente
colindantes -aunque en la práctica también puede existir una
hendidura microscópica de unas 5-10 \mum- o bien
separadas por un corte, para el mismo o distintos analitos. También
es posible que una tira de ensayo lleve más de dos áreas de
ensayo.
Las capas detectoras aplicadas sobre las áreas de
ensayo contienen reactivos para la comprobación de un analito
diagnósticamente valioso. La detección del mismo analito en dos
áreas de ensayo separadas puede ser de interés cuando las capas
detectoras permiten el análisis cualitativo, semicuantitativo o
cuantitativo de concentraciones muy distintas del analito, o bien
cuando se desea simplemente comprobar la precisión del resultado de
la medición. Naturalmente es de especial interés el caso en que
ambas capas detectoras permiten la detección cualitativa simultánea
o una determinación semicuantitativa o cuantitativa de dos analitos
diferentes particularmente interesantes desde el punto de vista
diagnóstico.
El material difusor no está fijado sobre el área
o áreas de detección, sino que va solamente superpuesto de modo
suelto. Contrariamente a lo expuesto sobre la elaboración de tiras
de ensayo en la patente DE-A-30 42
857 (página 10), el material difusor no se presiona sobre las capas
detectoras ni se pega con ellas, pues una unión fija de tal tipo
impide la función difusora antes descrita.
La sujeción del material difusor sobre las tiras
de ensayo se realiza por ambas caras del área o áreas de ensayo,
preferentemente sobre unos distanciadores provistos de capas
adhesivas. En el peor de los casos, con ese tipo de sujeción el
material difusor puede formar una arruga sobre el área de ensayo,
cuando las tiras, generalmente flexibles, se doblan durante el uso.
La formación de arrugas perjudica el reparto de la muestra de
reactivo sobre el área de ensayo, pero puede evitarse cuando el
recubrimiento de material difusor según la presente invención consta
de uno o varios elementos planos, sujetos a la tira de ensayo
flexible de modo que al menos una parte de su superficie, opuesta a
la superficie de la tira de ensayo cubierta por esta parte, pueda
desplazarse libremente siguiendo la dirección de la curvatura
producida al doblar la tira. Este tipo de sujeción preferente para
un elemento del recubrimiento según la presente invención, sobre la
tira de ensayo flexible, tiene lugar con al menos un punto de
sujeción, preferiblemente dos como mínimo, situados en una zona
continua de la superficie (zona de sujeción) del elemento que se
extiende entre los bordes del mismo, en la dirección de la
curvatura, básicamente en línea recta y en sentido transversal a la
curvatura, y está limitada por la parte del elemento que puede
desplazarse libremente.
Cuando la tira tiene dos áreas de ensayo, resulta
especialmente práctico que su recubrimiento con un material difusor
del tipo arriba descrito según la presente invención conste de dos
elementos, fijados a la tira de ensayo de tal modo, que sus partes
desplazables se dirijan una contra otra y se solapen.
La distribución óptima de la muestra se consigue
cuando ambos elementos se solapan sobre la línea de separación de
las dos áreas de ensayo y, preferentemente, de modo simétrico.
El tipo de sujeción de la presente invención, con
la cual se evita la formación de arrugas al doblar la tira,
representa una contribución muy valiosa al uso seguro de las tiras
de ensayo cuyo funcionamiento correcto es de especial importancia y
debe estar garantizado en distintas condiciones de aplicación, y
también para ser empleadas por profanos con mayor o menor
experiencia.
Las áreas de ensayo están montadas
preferentemente sobre el soporte siguiendo su eje longitudinal y los
elementos del recubrimiento difusor, siguiendo la misma dirección,
van fijados sobre el soporte flexible en sendas zonas de la
superficie situadas antes y después de las áreas de ensayo.
También se prefiere que los elementos del
recubrimiento difusor estén fijados sobre distanciadores que tengan
aproximadamente el mismo grosor que las capas detectoras.
Por último, ha resultado conveniente que la
estructura de capas detectoras y recubrimientos sobre la tira de
ensayo esté cubierta con un material plano inerte, que solo deje un
tramo suficiente para la aplicación de la muestra, en general de 2
hasta 5 mm, en la zona de solapamiento de los elementos del
recubrimiento, según el eje longitudinal de la tira de ensayo.
El soporte de la tira de ensayo está formado por
un material transparente y/o presenta unos cortes de forma igual o
diferente, que permiten examinar la parte inferior de las capas
detectoras.
Es ventajoso, sobre todo para automatizar la
valoración del ensayo, que el soporte de la tira de ensayo tenga
marcas de graduación en forma de perforaciones adicionales,
troquelados o incisiones.
Las figuras 1 a 6 sirven para ilustrar la
anterior forma de ejecución y las siguientes.
La figura 1 muestra una perspectiva de una forma
de ejecución de una tira de ensayo según la presente invención, la
figura 2 un corte de la misma a lo largo de la línea
A-A' y la figura 3 una vista de su cara
inferior.
La figura 4 muestra una perspectiva de una forma
de ejecución de una tira de ensayo según la presente invención, cuyo
recubrimiento difusor, conforme a la presente invención, consta de
dos elementos que van fijados preferentemente sobre la tira de
ensayo; la figura 5 un corte longitudinal por la línea
A-A' y la figura 6 una vista de la cara
inferior.
Las referencias empleadas en las figuras tienen
el siguiente significado:
| 1: | Tira de ensayo |
| 2: | Soporte flexible |
| 3 y 3a: | Capas detectoras |
| 4 y 4a: | Distanciadores |
| 5 y 5a: | Capas adhesivas |
| 6: | Recubrimiento de la presente invención |
| 6 y 6a: | Elementos de dicho recubrimiento |
| 7 y 7a: | Zonas de sujeción |
| 8 y 8a: | Parte desplazable |
| 9 y 9a: | Revestimiento protector |
| 10: | Zona de aplicación |
| 11 y 11a: | Marcas del límite de las áreas de detección |
| 12: | Marca del sentido de introducción |
| 13: | Orificio de colocación |
| 14 y 15: | Aberturas de observación y medición |
La figura 1 muestra una perspectiva de una forma
de ejecución de una tira de ensayo según la presente invención, con
un área de detección y un recubrimiento difusor según la presente
invención; la figura 2 un corte longitudinal por la línea
A-A' de la figura 1 y la figura 3 una vista de la
cara inferior. Esta representación no se hace a escala, para
ilustrar claramente la estructura. Las medidas concretas de esta
forma de ejecución pueden tomarse del ejemplo práctico 1.
La tira de ensayo diagnóstico (1) según la
presente invención, que la fig. 1 muestra en perspectiva, la fig. 2
en sección y la fig. 3 vista por debajo, presenta sobre una capa
soporte (2) una capa detectora (3) tapada por el recubrimiento
difusor (6). Junto con la capa detectora (3), el recubrimiento
difusor (6) está fijado sobre la capa soporte (2) por medio de
distanciadores (4, 4a) y de capas adhesivas (5, 5a). En la práctica,
estos distanciadores también pueden ser capas de adhesivo
termofusible o cintas adhesivas de doble cara que fijen el
recubrimiento difusor (6) sobre la capa soporte (2). Lo ideal es que
los distanciadores, con sus capas adhesivas, tengan aproximadamente
el mismo grosor que la capa detectora (3). La estructura aquí
representada lleva además unos revestimientos (9, 9a) fijados a la
capa soporte (2) y al recubrimiento difusor (6), y dispuestos de tal
manera, que tapan las partes del recubrimiento difusor (6) que
sobresalen por encima de la capa detectora (3) y una parte de la
superficie de dicho recubrimiento que descansa sobre la capa
detectora. Sin embargo dejan una zona libre sobre el centro de la
capa detectora, que corresponde al sitio de aplicación de la muestra
(10). En esta zona se deposita la muestra líquida analizada. El
revestimiento izquierdo (9) lleva impresa una flecha (12) que indica
al usuario por qué extremo debe colocarse o introducirse la tira de
ensayo (1) en un aparato medidor. El orificio de colocación (13)
sirve para fijar la tira de ensayo en un sitio exactamente prefijado
del aparato, en el caso de una medición instrumental, por ejemplo
una fotometría de reflexión, lo cual puede realizarse, por ejemplo,
pasando una clavija por dicho orificio (13) de tal manera que la
tira de ensayo (1) quede sujeta en un lugar determinado.
La figura 3 muestra la cara inferior de la tira
de ensayo de la presente invención, con el orificio de colocación
(13) practicado en el soporte (2) y la abertura redonda de
observación (14) a través de la cual se puede inspeccionar y
calibrar la capa detectora.
La figura 4 muestra una perspectiva de una forma
de ejecución de una tira de ensayo según la presente invención, con
dos áreas de detección contiguas y un recubrimiento difusor según la
presente invención, el cual va fijado sobre las áreas de detección
conforme al modo especialmente preferido y anteriormente descrito de
fijación por un lado; la figura 5 un corte longitudinal por la línea
A-A' de la figura 4 y la figura 6 una vista de la
cara inferior. Esta representación tampoco está hecha a escala, a
fin de ilustrar claramente la estructura. Las medidas concretas de
esta forma de ejecución pueden tomarse del ejemplo práctico 2.
La tira de ensayo diagnóstico (1) según la
presente invención, que la fig. 4 muestra en perspectiva, la fig. 5
en sección y la fig. 6 vista por debajo, presenta sobre una capa
soporte (2) dos capas detectoras contiguas (3, 3a) cubiertas por los
elementos del recubrimiento difusor (6, 6a). Junto con las capas
detectoras (3, 3a), los elementos del recubrimiento difusor (6, 6a)
van fijados sobre la capa soporte (2) mediante distanciadores (4,
4a) y capas adhesivas (5, 5a). En la práctica, estos distanciadores
también pueden ser capas de adhesivo termofusible o cintas adhesivas
de doble cara, que fijen los elementos del recubrimiento difusor (6,
6a) sobre la capa soporte (2). Lo ideal es que los distanciadores,
con sus capas adhesivas, tengan aproximadamente el mismo grosor que
las capas detectoras (3, 3a). La estructura aquí representada lleva
además unos revestimientos (9, 9a) fijados a la capa soporte (2) y a
los elementos del recubrimiento difusor (6, 6a), y dispuestos de tal
manera, que tapan las partes de los elementos del recubrimiento
difusor (6, 6a) que sobresalen por encima de las capas detectoras
(3, 3a) y una parte de la superficie de dicho recubrimiento que
descansa sobre las capas detectoras. Sin embargo dejan libre la zona
de solapamiento de los elementos del recubrimiento difusor (6, 6a)
por encima del límite entre las capas detectoras, que corresponde al
sitio de aplicación de la muestra (10). En esta zona se deposita la
muestra líquida analizada. Si los recubrimientos son transparentes
pueden marcarse (11, 11a) sobre los límites externos de las áreas de
detección, para que el usuario pueda comprobar si los recubrimientos
han saturado totalmente las áreas de detección con la muestra
líquida. En caso positivo, la cantidad de muestra ha bastado; si no,
cabe pensar que ha faltado algo de muestra y que la medición puede
ser falsa. El revestimiento izquierdo (9) lleva flechas impresas
(12) que indican al usuario por qué extremo debe colocarse o
introducirse la tira de ensayo (1) en un aparato medidor. El
orificio de colocación (13) sirve para fijar la tira de ensayo en un
sitio exactamente predeterminado del aparato, en el caso de una
medición instrumental, por ejemplo una fotometría de reflexión, lo
cual puede realizarse, por ejemplo, pasando una clavija por dicho
orificio (13) de tal manera que la tira de ensayo (1) quede sujeta
en un lugar determinado.
La figura 6 muestra la cara inferior de la tira
de ensayo de la presente invención, con el orificio de colocación
(13) practicado en el soporte (2) y las aberturas (14 y 15) de
observación, de distinta forma, a través de las cuales se pueden
inspeccionar y calibrar las capas detectoras.
Para un soporte de ensayo diagnóstico según la
presente invención pueden utilizarse aquellos materiales que no
absorben los líquidos analizados. Se trata de los denominados
materiales no absorbentes, con especial preferencia de láminas de
plástico, por ejemplo de poliestireno, poli(cloruro de
vinilo), poliéster, policarbonato o poliamida. No obstante, también
es posible impregnar materiales absorbentes, como por ejemplo
madera, papel o cartón, con productos hidrofobantes o recubrirlos
con una película resistente al agua. Como agentes hidrofobantes se
pueden usar siliconas o grasas duras y como filmógenos, por ejemplo,
nitrocelulosa o acetato de celulosa. Las láminas metálicas o el
vidrio también sirven como materiales soporte.
En cambio, para una capa detectora es necesario
el uso de materiales que puedan absorber el líquido analizado y sus
ingredientes. Son los denominados materiales absorbentes, como por
ejemplo velos, tejidos, mallas, membranas, u otros materiales
sintéticos porosos o hinchables, como los filmes de gelatina o
dispersión, los cuales pueden usarse como capa. Naturalmente, los
materiales utilizables para la capa detectora también deben ser
capaces de contener los reactivos que se necesitan para detectar el
analito determinado. En el caso más simple, todos los reactivos
necesarios para la detección del analito se encuentran sobre o
dentro de una capa, pero también cabe imaginar casos, en los cuales
resulta ventajoso repartir los reactivos sobre varias capas de
material absorbente o hinchable, que luego se disponen unas sobre
otras de tal modo que el contacto entre superficies sea total. En lo
sucesivo el término "capa detectora" también incluye aquellos
casos en que los reactivos se hallan sobre o dentro de una sola capa
o de dos o más capas dispuestas del modo anteriormente descrito.
Los materiales preferidos para la capa detectora
son papeles o materiales sintéticos porosos, como membranas. Entre
ellas se prefieren especialmente las membranas porosas asimétricas.
Gracias a su estructura ventajosa, la muestra líquida analizada
entra por el lado de la membrana que tiene los poros grandes y el
analito se determina al otro lado de la membrana, que tiene los
poros finos. Como membranas porosas se prefieren sobre todo las de
poliamida, poli(difluoruro de vinilideno), poliétersulfona o
polisulfona. Son excelentes en particular las membranas de poliamida
66 y las membranas asimétricas de polisulfona hidrofilizada. Los
reactivos para la identificación del analito suelen incorporarse a
los citados materiales por impregnación o recubrimiento por una sola
cara. En el caso de membranas asimétricas el recubrimiento se
realiza ventajosamente por el lado de poro fino.
No obstante, para la capa detectora también
pueden emplearse los llamados filmes abiertos, por ejemplo los
descritos en la patente EP-B-0 016
387. Para ello, a una dispersión acuosa de sustancias orgánicas
sintéticas de tipo filmógeno se añaden partículas sólidas finamente
divididas de tipo orgánico o inorgánico y además los reactivos
necesarios para la reacción de identificación del analito. Como
filmógenos se prefieren sustancias orgánicas sintéticas, por
ejemplo, poli-(vinilésteres), poli(acetatos de vinilo),
poli(acrilésteres), poli(ácido metacrílico), poliacrilamidas,
poliamidas, poliestireno, copolímeros, por ejemplo de butadieno y
estireno o de ésteres maleicos y acetato de vinilo, u otros
polímeros orgánicos filmógenos, naturales o sintéticos, así como
mezclas de los mismos en forma de dispersiones acuosas. Las
dispersiones pueden extenderse sobre un substrato, formando una capa
uniforme que tras el secado deja un film resistente al agua. Los
filmes secos tienen un espesor de 10 \mum hasta 500 \mum,
preferentemente de 30 hasta 200 \mum. El film puede utilizarse con
el substrato como soporte o se puede poner sobre otro soporte para
la reacción de identificación. Aunque los reactivos necesarios para
dicha reacción se incorporan normalmente a la dispersión empleada en
la elaboración de los filmes abiertos, también puede ser ventajoso
impregnar con los reactivos los filmes ya elaborados y formados.
También cabe la posibilidad de preimpregnar las cargas con los
reactivos. El especialista ya sabe qué reactivos pueden usarse para
comprobar un analito determinado, pero aquí no hay que
detallarlo.
detallarlo.
Otro ejemplo de capa detectora preferida según la
presente invención es un film como el descrito en la patente
WO-A-92 15 879. Esta capa se prepara
partiendo de una dispersión o emulsión de un polímero filmógeno, que
además contiene homogéneamente repartido un pigmento, un agente
hinchante y el reactivo de identificación. Como polímeros filmógenos
son especialmente adecuados poli(vinilésteres),
poli(acetatos de vinilo), poli(acrilésteres),
poli(ácido metacrílico), poli-(vinilamidas), poliamidas y
poliestireno. Además de los homopolímeros también son apropiados los
copolímeros, p.ej. de butadieno, estireno o ésteres maleicos. El
dióxido de titanio es un pigmento especialmente adecuado para el
film. El agente hinchante empleado debe tener buenas propiedades de
esponjamiento, para lo cual se recomiendan especialmente copolímeros
de metilviniléter con ácido maleico. La elección de los reactivos
para la comprobación de un determinado analito se deja en manos del
especialista.
De manera total y especialmente preferida, en un
soporte de ensayo diagnóstico, conforme a la presente invención,
como capa detectora se usa una área de ensayo formada por dos capas.
Esta área de ensayo incluye una lámina transparente, sobre la cual
están superpuestos, por este orden, un primer y un segundo film. Lo
básico es que, en estado húmedo, la primera capa situada sobre la
lámina transparente dispersa mucho menos la luz que la segunda capa
situada por encima. La cara no recubierta de la lámina transparente
se designa como lado detector y la cara de la segunda capa opuesta a
la que descansa sobre la primera capa se denomina lado de entrada de
la muestra.
Los filmes se elaboran partiendo de dispersiones
o emulsiones de polímeros filmógenos. Los filmógenos en dispersión
llevan partículas poliméricas microscópicas insolubles en el medio
líquido (casi siempre agua), pero finamente dispersadas en él. Al
evaporar el líquido durante la formación del film, las partículas se
aproximan y finalmente entran en contacto. Debido a las grandes
fuerzas surgidas y a la ganancia de energía superficial que acompaña
la formación de film, las partículas coalescen hasta formar un film
prácticamente cerrado. Como alternativa también se puede usar una
emulsión del filmógeno disuelto en un disolvente. El polímero
disuelto está emulsionado en un medio líquido inmiscible con el
citado disolvente.
Como polímeros para dichos filmógenos son
especialmente apropiados los poli(vinilésteres), los
poli(acetatos de vinilo), los poli(acrilésteres), el
poli(ácido metacrílico), las poli(vinilamidas), las
poliamidas y el poliestireno. Además de homopolímeros también son
apropiados los copolímeros, p.ej. de butadieno, estireno o ésteres
maleicos.
En el área de ensayo, los dos filmes mencionados
se encuentran sobre una lámina transparente. Para ello entran en
consideración, especialmente, las láminas de plástico que son
impermeables a los líquidos. Se han preferido sobre todo las láminas
de policarbonato.
Ambos filmes pueden elaborarse partiendo de masas
de recubrimiento que contienen el mismo polímero filmógeno o a
partir de masas de recubrimiento que contienen diferentes polímeros
filmógenos.
Para ensayos y/o condiciones de ensayo
especiales, como p.ej. la determinación de glucosa en sangre entera,
es conveniente que las capas estén formadas de tal manera que,
además de permitir una buena separación de los eritrocitos, tengan
unas propiedades ópticas que faciliten la observación de la reacción
de identificación y mejoren la exactitud de la evaluación y el
registro de la medición.
A tal fin, la primera capa contiene
ventajosamente un agente hinchante y, si es preciso, una carga que
disperse débilmente la luz; y la segunda capa un agente hinchante y
al menos un pigmento que disperse fuertemente la luz. Además, la
segunda capa también puede contener pequeñas cantidades de cargas no
porosas o porosas, como tierras de diatomeas, sin que con ello
resulte permeable a los eritrocitos.
Incorporando un agente hinchante con buen efecto
de esponjamiento (es decir, una sustancia que al absorber agua
aumenta su volumen) no solo se obtienen capas a través de las cuales
la muestra líquida penetra con relativa rapidez, sino que, a pesar
de este efecto de apertura del agente hinchante, se alcanzan unas
buenas propiedades para la separación de los eritrocitos y también
de la hemoglobina. El poder de hinchamiento debería ser tan bueno
que, para un ensayo en el cual la velocidad de formación del color
-como por ejemplo en una reacción de detección de glucosa- depende,
sobre todo, de la penetración de la muestra líquida a través de la
capa, la reacción de identificación óptica pueda medirse, como
máximo, al cabo de un minuto. Como agentes hinchantes han resultado
especialmente adecuados la goma xantano y los copolímeros de
metilviniléter con ácido maleico.
La diatomita o tierra de diatomeas está formada
por residuos de las estructuras de ácido silícico procedentes de
especies de algas diatomeas que se degradan en diversos lugares. La
tierra de diatomeas preferida tiene un diámetro medio de partícula
de 5-15 \mum. Estos valores se determinaron con un
granulómetro láser tipo 715 que comercializa la firma Pabisch de
Munich, Alemania.
La proporción de pigmentos fuertemente
dispersantes de la luz en la segunda capa es, como mínimo, del 25%
en peso referido a la doble capa del área de ensayo seca y lista
para el uso. Dado que las cargas débilmente dispersantes de la luz y
los pigmentos fuertemente dispersantes de la luz son esenciales para
las propiedades ópticas de los filmes, la primera y la segunda capa
poseen cargas y pigmentos diferentes.
La primera capa no debe contener ninguna carga, o
solo aquellas que tengan un índice de refracción parecido al del
agua. Para ello han resultado especialmente adecuadas las sílices
precipitadas, el dióxido de silicio, los silicatos y los
aluminosilicatos. Se prefiere particularmente un aluminosilicato
sódico cuya marca comercial es Transpafill®.
La segunda capa debe dispersar lo más fuertemente
posible la luz. Lo ideal es que el índice de refracción de los
pigmentos en la segunda capa sea como mínimo de 2,5. Por lo tanto se
utiliza preferentemente dióxido de titanio. Han resultado
especialmente ventajosas las partículas con un diámetro medio de
unos 0,2 hasta 0,8 \mum. Se prefieren sobre todo los tipos de
dióxido de titanio correspondientes a la modificación anatasa, que
son fáciles de trabajar.
Los sistemas de reactivos para la identificación
de determinados analitos son conocidos del especialista. Todos los
componentes del sistema reactivo pueden encontrarse en un mismo
film, pero también es posible que se distribuyan entre las dos
capas. Es ventajoso que el sistema reactivo cromógeno se encuentre,
al menos parcialmente, en la primera capa.
En el marco de la presente invención, como
formación de color no solo hay que entender el cambio de blanco a
color, sino también cualquier variación de color. Evidentemente se
prefieren, sobre todo, aquellos cambios de color que van acompañados
de un desplazamiento lo más grande posible de la longitud de onda de
absorción máxima (\lambda máx.).
Para optimizar el área de ensayo diagnóstico en
el soporte de la presente invención ha resultado particularmente
ventajoso que ambas capas contengan un humectante no hemolizante.
Para ello son apropiados, sobre todo, los humectantes neutros, es
decir, no cargados. Se prefiere especialmente la
N-octanoíl-N-metil-glucamida.
Los filmes también pueden llevar otros
humectantes que faciliten la homogeneidad de los recubrimientos,
como por ejemplo el
N-metil-N-oleoíltaurato
sódico.
Para elaborar una área de ensayo para un soporte
diagnóstico según la presente invención se preparan una tras otra
las capas respectivas, partiendo de una dispersión homogénea de los
mencionados componentes. Como base para formar la masa de
recubrimiento correspondiente a la primera capa se utiliza la lámina
transparente. Tras aplicar un determinado grosor de la masa de
recubrimiento para la primera capa, se deja secar. Sobre ella se
aplica luego la masa de recubrimiento para la segunda capa, también
con un espesor delgado, y se seca. Tras el secado, el espesor
conjunto de ambas capas debería ser como máximo de 0,2 mm, con
preferencia de 0,12 mm como máximo y sobre todo de 0,08 mm como
máximo.
La fijación se puede efectuar mediante los
métodos conocidos del especialista según la tecnología de los
soportes de ensayo. Puede llevarse a cabo, por ejemplo, empleando
adhesivos termofusibles o adhesivos de endurecimiento frío. Resulta
ventajoso un pegado por puntos o en forma reticular, porque en este
caso el transporte capilar de líquido es especialmente bueno y
factible. También han dado buen resultado las tiras adhesivas de
doble cara. Pero en cualquier caso lo importante es que la fijación
del recubrimiento sobre la capa soporte permita el transporte
capilar del líquido de la capa detectora hacia la parte del
recubrimiento que está fijada a la capa soporte. Este transporte
capilar de líquido debe ser posible, sobre todo, cuando la capa
detectora está saturada de líquido. Para la elaboración han
resultado muy adecuadas las cintas adhesivas con caucho natural o
sintético. Es particularmente ventajoso que el producto empleado
para fijar el recubrimiento sobre la capa soporte tenga
aproximadamente el mismo espesor que la(s) capa(s)
detectora(s). Entonces sirve prácticamente como distanciador,
con el fin de mantener el recubrimiento de la presente invención
totalmente plano sobre una superficie continua, incluso fuera de la
zona de la(s) capa(s) detectora(s).
Para determinar el analito en la muestra líquida
el soporte de ensayo diagnóstico de la presente invención tiene la
capa de detección, en la cual, como mínimo, las áreas de reacción,
es decir, zonas de la(s) capa(s) detectora(s)
que llevan el reactivo, son visibles a través de la capa soporte.
Por tanto, al formarse la señal, pueden observarse y medirse. Como
se ha dicho anteriormente, para lograrlo la capa soporte se hace
transparente, pero también cabe la posibilidad de que tenga un
agujero tapado por la capa o las capas detectoras. Entonces la capa
o las capas detectoras o al menos sus áreas de reacción pueden verse
a través del agujero. En una forma de ejecución preferida del
soporte de ensayo diagnóstico de la presente invención, la capa
soporte tiene un agujero bajo una capa detectora, por el cual puede
observarse esta capa o un área de reacción. Este agujero tiene un
diámetro algo más pequeño que la menor extensión de la capa
detectora, con lo cual la capa detectora descansa sobre la capa
soporte y puede fijarse a ella fuera del agujero. De modo ventajoso,
la capa detectora está fijada suficientemente sobre la capa soporte
con cintas adhesivas de doble cara colocadas a ambos lados y
mediante el recubrimiento de la presente invención, situado por
encima de la capa detectora, y su fijación sobre la capa soporte.
Sin embargo se prefiere que la propia capa detectora vaya también
fijada sobre la capa soporte mediante una cinta adhesiva del-
gada.
gada.
A través de un agujero también puede verse varias
áreas de reacción de una capa detectora.
La abertura de un soporte de ensayo diagnóstico
de la presente invención también puede constar de dos o más
agujeros, que pueden utilizarse para determinar analitos (uno o
varios). Sobre estos agujeros puede haber varias capas detectoras o
una sola capa detectora con varias áreas de reacción, de manera que
por cada agujero se pueda observar una capa de detección o una área
de reacción. También cabe la posibilidad de observar varias áreas de
reacción a través de un agujero.
Sobre el recubrimiento difusor, según la presente
invención, del soporte de ensayo diagnóstico de la presente
invención puede ser útil colocar un revestimiento inerte de material
impermeable a la muestra, generalmente impermeable al agua, y no
absorbente, para que tape la parte del recubrimiento que queda fuera
de la capa detectora. Lo ideal es que el revestimiento también se
extienda hacia la zona de la capa detectora, pero dejando libre en
todo caso una parte central del recubrimiento de la presente
invención que tapa la capa detectora. Esta parte libre del
recubrimiento se designa como zona de aplicación de la muestra.
Para el revestimiento han resultado especialmente
ventajosas las láminas plásticas. Cuando el revestimiento y el
recubrimiento de la presente invención son de colores distintos, por
ejemplo blanco y amarillo o blanco y rojo, puede reconocerse muy
bien la zona donde debe aplicarse la muestra líquida analizada.
Sobre el revestimiento también se pueden
imprimir, por ejemplo, una o varias flechas que señalen en qué
sentido, es decir, con qué extremo, debe colocarse o introducirse
una tira de ensayo en un aparato medidor.
Una zona de aplicación de muestra puede obtenerse
de modo especialmente sencillo, mediante un revestimiento con dos
láminas plásticas en forma de cinta, que dejen libre una parte, en
forma de banda, del recubrimiento según la presente invención que
tapa la capa detectora. Si se prevén dos o más zonas de aplicación
de muestra, hay que utilizar tres o más láminas plásticas en forma
de cinta. Las láminas usadas para el revestimiento van fijadas sobre
el recubrimiento según la presente invención y, si es necesario,
sobre la capa soporte. Para esta fijación son adecuados adhesivos
termofusibles, que preferentemente están aplicados por puntos o en
forma reticular sobre la capa soporte o por debajo del
revestimiento, o bien cintas adhesivas, si las láminas no son
autoadherentes. La zona de aplicación de muestra se encuentra
preferentemente por encima del agujero de la capa soporte, a través
del cual puede observarse una formación de señal en la capa
detectora.
Para llevar a cabo un proceso de determinación de
analitos en muestras líquidas con una tira de ensayo diagnóstica de
la presente invención, la muestra líquida se deposita sobre la cara
del recubrimiento opuesta a la capa detectora, de modo ideal, en
cantidad suficiente para que el líquido que atraviesa el
recubrimiento de la presente invención sature la capa detectora
totalmente. Como muestras líquidas cabe considerar especialmente
líquidos corporales como sangre, plasma, suero, orina, saliva, etc.
La sangre o los líquidos derivados de ella -como el plasma o el
suero y también la orina son las muestras líquidas especialmente
preferidas. Después en la capa detectora puede comprobarse una
señal, si hay presencia del analito investigado. Esta señal
consiste, ventajosamente, en una variación cromática, entendiendo
como tal tanto formación como pérdida o cambio de color. La
intensidad del cambio de color es una medida de la cantidad de
analito presente en la muestra líquida analizada. Se puede valorar
visualmente o mediante un aparato, casi siempre de manera
cuantitativa por fotometría de reflexión, pudiendo usar curvas de
calibración ya establecidas en ensayos previos. Como alternativa
también se puede llevar a cabo una indicación directa del contenido
de analito mediante el programa informático del aparato.
Una gran ventaja del soporte de ensayo
diagnóstico de la presente invención reside en que no hace falta
aplicar ningún volumen prefijado de muestra líquida sobre el soporte
de ensayo.
Precisamente, al usar una tira de ensayo
construida con los materiales preferidos y anteriormente citados, se
ha demostrado que un exceso de muestra no es absorbido por la tira,
sino que permanece estancado sobre la zona de aplicación. Otra
ventaja considerable de las estructuras de la presente invención
reside en que la tira de ensayo es "autodosificadora". Cuando
su zona de aplicación se pone en contacto con una gota de sangre que
está sobre la yema del dedo o que pende de ella, la tira solo toma
la cantidad necesaria para impregnar la(s) capa(s)
detectora(s). El resto permanece en el dedo.
De este modo la intensidad de la señal producida
en presencia de un analito es independiente de la cantidad y de la
duración del contacto de la muestra líquida con la capa de
detección. El color, que una vez acabada la reacción de
identificación suele aparecer dentro de pocos segundos hasta unos
minutos, permanece invariable para la medición, porque viene
sencillamente determinado por la estabilidad del sistema cromógeno.
Asimismo, se eliminan los resultados falsamente positivos y se hace
posible una determinación cuantitativa de los analitos.
Con el revestimiento de partes del recubrimiento
de la presente invención, y por tanto la marcación de la zona de
aplicación de muestra, se procura que el líquido solo pueda llegar
al sitio óptimo de la capa detectora. En combinación con una capa
detectora que absorbe poco líquido y sin embargo garantiza una
formación de señal intensa, se asegura que, aun con muy poco volumen
de muestra, se puedan obtener resultados fiables en la determinación
de analitos. Dado que la tira de ensayo de la presente invención
consta de pocos componentes, que son fáciles y rápidos de reunir, su
fabricación resulta muy económica.
Los siguientes ejemplos prácticos ilustran la
elaboración de los recubrimientos difusores y tiras de ensayo de la
presente invención.
- A.1) A 55 Kg de agua destilada se añaden 55,0 g de N-oleoil-sarcosina ("® Crodasinic O", de la firma Croda, Nettetal) y se ajusta a pH 6,0 añadiendo en agitación 11,0 g de sosa cáustica al 32% en peso. Se obtiene una solución de humectante utilizable en la presente invención, con un contenido de aproximadamente 0,106% en peso de sustancia activa.
- A.2) A través de esta disolución se pasa un velo Viledon® tipo FO 2451/121, de la firma Freudenberg, Weinheim (50 \mum de espesor, 18 g/m^{2} de gramaje), de 1 m de ancho y 700 m de largo, con una velocidad de 5 m/min. El velo impregnado se seca a continuación en un secador horizontal de 30 m de longitud a 80ºC con un caudal de aire de 50 m^{3}/min. El velo absorbió 45 ml/m^{2} del baño; por lo tanto el contenido de sustancia activa en el velo impregnado era aproximadamente de 0,26% en peso.
- B.1) Sobre una capa soporte de poliéster, en forma de cinta de 50 mm de ancho, que contiene dióxido de titanio, se pega en paralelo una cinta adhesiva de doble cara (con soporte de poliéster y adhesivo de caucho sintético) de 5 mm de ancho, a una distancia de 18,6 mm (medida desde el canto izquierdo de la cinta adhesiva) respecto al canto izquierdo de la capa soporte. En este dispositivo se troquelan dos agujeros cada 6 mm, un orificio de colocación y una abertura de inspección y medición, cuyos centros se encuentran sobre rectas perpendiculares al eje longitudinal de la tira soporte. El primer agujero, el orificio de colocación, es circular, tiene un diámetro de 2,6 mm y su centro dista 4 mm del canto izquierdo de la tira soporte. El segundo agujero también es circular y su diámetro es de 4 mm. La distancia entre su centro y el canto izquierdo de la tira soporte es de 21 mm.
- Luego se retira el papel protector de la cinta adhesiva de doble cara.
- Para elaborar una capa detectora formada por 2 filmes se procede como sigue:
- B.2) En un vaso de precipitados se reúnen los componentes siguientes, ya sea como sustancias puras o en forma de soluciones preparadas, según la composición siguiente y se mezclan agitando:
- Agua: 820,0 g
- Ácido cítrico 1-hidrato: 2,5 g
- Cloruro cálcico 2-hidrato: 0,5 g
- Hidróxido sódico: 1,4 g
- Goma xantano: 3,4 g
- Cloruro de tetraetilamonio: 2,0 g
- N-metil-N-oleoil-taurato sódico: 0,29 g
- N-octanoíl-N-metil-glucamida: 2,1 g
- Polivinilpirrolidona (PM 25000): 3,5 g
- Transpafill (aluminosilicato sódico): 62,1 g
- Dispersión de poli(propionato de vinilo) (al 50% en peso en agua): 60,8 g
- Cloruro de bis-(2-hidroxietil)-(4-hidroxiimino-ciclohexa-2,5-dienilidin)-amonio: 1,2 g
- 2,18-Fosfomolibdato hexasódico: 16,1 g
- Pirroloquinolina-quinona: 32 mg
- Glucosa deshidrogenasa rec. de Acinetobacter calcoaceticus, 1,7 MU EC 1.1.99.17: (2,4 g)
- 1-Hexanol: 1,6 g
- 1-Metoxi-2-propanol: 20,4 g
- La masa resultante se ajusta con NaOH a pH 6 aproximadamente y luego se aplica con un gramaje de 89 g/m^{2} sobre una lámina de policarbonato de 125 \mum de espesor y se seca.
- B.3) En un vaso de precipitados se reúnen los componentes siguientes, ya sea como sustancias puras o en forma de soluciones preparadas, según la composición siguiente y se mezclan agitando:
- Agua: 579,7 g
- Hidróxido sódico: 3,4 g
- Gantrez (copolímero de metilviniléter-ácido maleico): 13,8 g
- N-metil-N-oleoil-taurato sódico: 0,25 g
- N-octanoíl-N-metil-glucamida: 3,6 g
- Cloruro de tetraetilamonio: 9,7 g
- Polivinilpirrolidona (PM 25000): 20,2 g
- Dióxido de titanio: 177,1 g
- Tierra de diatomeas: 55,3 g
- Dispersión de poli(propionato de vinilo) (al 50% en peso en agua): 70,6 g
- 2,18-Fosfomolibdato hexasódico: 44,3 g
- Hexacianoferrato (III) potásico: 0,3 g
- 1-Hexanol: 1,6 g
- 1-Metoxi-2-propanol: 20,4 g
- La masa resultante se ajusta con NaOH a pH 6 aproximadamente y luego se aplica con un gramaje de 104 g/m^{2} sobre la lámina de policarbonato recubierta según lo descrito bajo el punto A. y se seca.
- B.4) Una tira de 5 mm de ancho de la capa detectora preparada de esta manera se pega exactamente sobre la capa soporte, con el lado de la lámina sobre la cinta adhesiva de doble cara troquelada.
Directamente a ambos lados de la capa detectora
se pegan unas cintas adhesivas de doble cara (con soporte de PVC y
adhesivo de caucho natural) sobre la lámina soporte, como
distanciadores. En este ejemplo un distanciador tiene 6 mm de
anchura y el otro 9 mm. Después se retira la hoja protectora de
ambas cintas adhesivas de doble cara.
Sobre este dispositivo se coloca una tira de 20
mm de anchura del velo difusor preparado en el apartado A. y se pega
apretando.
Como recubrimiento se pegan dos cintas adhesivas
de una sola cara (con soporte de PVC y adhesivo de caucho natural)
sobre el velo difusor, de manera que los distanciadores queden
totalmente tapados y al menos haya un ligero solapamiento con el
área reactiva. De este modo queda terminado el producto en forma de
cinta.
Esta cinta se corta en tiras de 6 mm de anchura,
de manera que la abertura de medición quede en medio de la tira
soporte.
Preparación de un soporte de ensayo diagnóstico
de la presente invención, con dos áreas de detección para determinar
glucosa en pequeñas y grandes concentraciones.
La preparación de un soporte de ensayo según las
figuras 4, 5 y 6 tiene lugar mediante las siguientes etapas:
Sobre una capa soporte de poliéster, en forma de
cinta de 50 mm de ancho, que contiene dióxido de titanio, se pega en
paralelo una cinta adhesiva de doble cara (con soporte de poliéster
y adhesivo de caucho sintético) de 10 mm de ancho, a una distancia
de 18,6 mm (medida desde el canto izquierdo de la cinta adhesiva)
respecto al canto izquierdo de la capa soporte. En este dispositivo
se troquelan tres agujeros cada 6 mm, un orificio de colocación y
dos aberturas de inspección y medición, cuyos centros se encuentran
sobre rectas perpendiculares al eje longitudinal de la tira soporte.
El primer agujero, el orificio de colocación, es circular, tiene un
diámetro de 2,6 mm y su centro dista 4 mm del canto izquierdo de la
tira soporte. El segundo agujero también es circular y su diámetro
es de 4 mm; el tercer agujero es rectangular, con un lado de 3 mm en
la dirección longitudinal de la tira y de 4 mm en la dirección
transversal. El segundo y tercer agujero están situados sobre la
cinta adhesiva y la distancia entre sus centros es de 5,1 mm; la
distancia entre el centro del segundo agujero y el canto izquierdo
de la tira soporte es de
21 mm.
21 mm.
Después se retira el papel protector de la cinta
adhesiva de doble cara.
Para elaborar la primera capa detectora formada
por 2 filmes se procede como sigue:
- A. En un vaso de precipitados se reúnen los componentes siguientes, ya sea como sustancias puras o en forma de soluciones preparadas, según la composición siguiente y se mezclan agitando:
- Agua: 820,0 g
- Ácido cítrico 1-hidrato: 2,5 g
- Cloruro cálcico 2-hidrato: 0,5 g
- Hidróxido sódico: 1,4 g
- Goma xantano: 3,4 g
- Cloruro de tetraetilamonio: 2,0 g
- N-octanoíl-N-metil-glucamida: 2,1 g
- Polivinilpirrolidona (PM 25000): 3,5 g
- Transpafill (aluminosilicato sódico): 62,1 g
- Dispersión de poli(propionato de vinilo) (al 50% en peso en agua): 60,8 g
- Cloruro de bis-(2-hidroxietil)-(4-hidroxiimino-ciclohexa-2,5-dienilidin)-amonio: 1,2 g
- 2,18-Fosfomolibdato hexasódico: 16,1 g
- Pirroloquinolina-quinona: 32 mg
- Glucosa deshidrogenasa rec. de Acinetobacter calcoaceticus, 1,7 MU EC 1.1.99.17: (2,4 g)
- 1-Hexanol: 1,6 g
- 1-Metoxi-2-propanol: 20,4 g
- La masa resultante se ajusta a pH 6 aproximadamente con NaOH y después se aplica con un gramaje de 89 g/m^{2} sobre una lámina de policarbonato de 125 \mum de espesor y se seca.
- B. En un vaso de precipitados se reúnen los componentes siguientes, ya sea como sustancias puras o en forma de soluciones preparadas, según la composición siguiente y se mezclan agitando:
- Agua: 579,7 g
- Hidróxido sódico: 3,4 g
- Gantrez (copolímero de metilviniléter-ácido maleico): 13,8 g
- N-octanoíl-N-metil-glucamida: 3,6 g
- Cloruro de tetraetilamonio: 9,7 g
- Polivinilpirrolidona (PM 25000): 20,2 g
- Dióxido de titanio: 177,1 g
- Tierra de diatomeas: 55,3 g
- Dispersión de poli(propionato de vinilo) (al 50% en peso en agua): 70,6 g
- 2,18-Fosfomolibdato hexasódico: 44,3 g
- Hexacianoferrato (III) potásico: 0,3 g
- 1-Hexanol: 1,6 g
- 1-Metoxi-2-propanol: 20,4 g
La masa resultante se ajusta a pH 6
aproximadamente con NaOH y luego se aplica con un gramaje de 104
g/m^{2} sobre la lámina de policarbonato recubierta según lo
descrito bajo el punto A. y se seca. El espesor tras el secado es de
60 \mum.
Para elaborar la segunda capa detectora, que
igualmente está formada por 2 filmes, se procede como sigue:
- A. En un vaso de precipitados se reúnen los componentes siguientes, ya sea como sustancias puras o en forma de soluciones preparadas, según las cantidades indicadas y se mezclan agitando:
- Agua: 820,0 g
- Ácido cítrico 1-hidrato: 2,5 g
- Cloruro cálcico 2-hidrato: 0,5 g
- Hidróxido sódico: 1,4 g
- Goma xantano: 3,4 g
- Cloruro de tetraetilamonio: 4,22 g
- N-octanoíl-N-metil-glucamida: 2,1 g
- N-metil-N-oleoil-taurato sódico: 0,29 g
- Polivinilpirrolidona (PM 25000): 3,5 g
- Transpafill (aluminosilicato sódico): 62,1 g
- Dispersión de poli(propionato de vinilo) (al 50% en peso en agua): 60,8 g
- N-(4-nitrosofenil)-N'-carboximetilpiperazina: 1,0 g
- 2,18-Fosfomolibdato hexasódico: 20,9 g
- Pirroloquinolina-quinona: 32 mg
- Glucosa deshidrogenasa rec. de Acinetobacter calcoaceticus, 1,7 MU EC 1.1.99.17: (2,4 g)
- 1-Hexanol: 1,6 g
- 1-Metoxi-2-propanol: 20,4 g
- La masa resultante se ajusta con sosa cáustica a pH 6,0 aproximadamente y después se aplica con un gramaje de 89 g/m^{2} sobre una lámina de policarbonato de 125 \mum de espesor y se seca.
- B. En un vaso de precipitados se reúnen los componentes siguientes, ya sea como sustancias puras o en forma de soluciones preparadas, según las cantidades indicadas y se mezclan agitando:
- Agua: 579,7 g
- Hidróxido sódico: 3,4 g
- Gantrez (copolímero de metilviniléter-ácido maleico): 13,8 g
- Cloruro de tetraetilamonio: 6,71 g
- N-octanoíl-N-metil-glucamida: 2,74 g
- N-metil-N-oleoil-taurato sódico: 0,25 g
- Polivinilpirrolidona (PM 25000): 15,6 g
- Dióxido de titanio: 136,7 g
- Dispersión de poli(propionato de vinilo) (al 50% en peso en agua): 54,6 g
- N(4-nitrosofenil)-N'-carboximetilpiperazina: 1,51 g
- 2,18-Fosfomolibdato hexasódico: 33,13 g
- Hexacianoferrato (III) potásico: 0,28 g
- 1-Hexanol: 1,6 g
- 1-Metoxi-2-propanol: 20,4 g
La masa resultante se ajusta a pH 6,0
aproximadamente con sosa cáustica y luego se aplica con un gramaje
de 102 g/m^{2} sobre la lámina de policarbonato recubierta según
lo descrito bajo el punto A y se seca. El espesor tras el secado es
de 55 \mum.
Una tira de 5 mm de ancho de cada una de las
capas detectoras así preparadas se pega exactamente sobre la capa
soporte, con el lado de la lámina sobre la cinta adhesiva de doble
cara troquelada, de manera que ambas tiras corran paralelas una
junto a otra.
Directamente a ambos lados de las capas
detectoras se pegan cintas adhesivas de doble cara (con soporte de
PVC y adhesivo de caucho natural), del mismo espesor que las tiras
detectoras, sobre la lámina soporte, como distanciadores. En este
ejemplo un distanciador tiene 6 mm de anchura y el otro 9 mm.
Después se retira la hoja protectora de ambas cintas adhesivas de
doble cara.
Luego, sobre el distanciador de 9 mm de anchura
se coloca una tira de 10 mm de ancho del velo difusor preparado
según el apartado A del ejemplo 1, de tal modo que el orillo del
velo sobrepase de 0,5 a 0,6 mm la línea divisoria entre las tiras
detectoras, y se fija apretando. Después, sobre el distanciador de 6
mm de anchura se coloca una tira de 10 mm de ancho del mismo velo
difusor según la presente invención, de tal manera que se solape 1
hasta 1,2 mm sobre el orillo de la primera tira del velo, y se fija
apretando.
Después, sobre ambos lados de este dispositivo se
pegan dos cintas adhesivas de una sola cara (con soporte de PVC y
adhesivo de caucho natural) como recubrimiento, de modo que,
simétricamente respecto a la línea divisoria entre las tiras
detectoras, quede una franja de 2 a 2,5 mm sin tapar. De esta manera
queda listo el producto en forma de cinta.
Esta cinta se corta en tiras de 6 mm de anchura,
de modo que las aberturas de medición e inspección y el orificio de
colocación queden en medio de la tira soporte.
Se preparan tiras de ensayo según el ejemplo 2,
que en ambas áreas de detección presentan las mismas capas
detectoras. Como capa difusora se utiliza un tejido de poliéster
tipo PE 38 HC impregnado con
N-oleoil-N-sarcosinato
sódico al 0,25% en peso. Las tiras se introducen en un aparato
GLUCOTREND, que mide simultáneamente ambas áreas de ensayo y, para
fijarlas en la posición de medida, se doblan un poco.
Sobre dichas tiras se aplican gotas con volúmenes
crecientes de EDTA-sangre venosa con 102 mg/dl de
glucosa. Para cada volumen se midieron 5 series de 10 tiras de
ensayo (n = 5, N = 50). De ahí se calcularon 5 valores VK para cada
volumen. (El valor VK se define como la desviación estándar
relativa
VK = desviación
estándar/valor
medio
y se expresa en
%).
La tabla siguiente muestra las medianas de los
resultados de medición y las medianas de los valores VK de las 5
series por volumen:
| Área 1 | Área 2 | |||
| Volumen | Mediana del valor | Mediana del | Mediana del valor | Mediana del |
| medido [mg/dl] | valor VK [%] | medido [mg/dl] | valor VK [%] | |
| 3 \mul | Fallo* | - | 63,4** | 9,3 |
| 4 \mul | 100 | 2,5 | 102 | 2,7 |
| 5 \mul | 102 | 2,3 | 103 | 2,6 |
| 10 \mul | 101 | 2,2 | 102 | 2,7 |
| 15 \mul | 103 | 2,4 | 102 | 2,7 |
| Observaciones: | ||||
| *: \begin{minipage}[t]{145mm} La óptica 2-LED del aparato (descrito en la patente EP-A-819 943) detecta un color de reacción irregular en el área 1. Por tanto el aparato solo da una señal de error, pero ningún valor de medición.\end{minipage} | ||||
| **: \begin{minipage}[t]{145mm} El área 2 solo está iluminada con un LED y por tanto no se reconoce la coloración irregular del área. Por consiguiente, el valor VK resulta muy alto. Sin embargo, el aparato puede indicar el error "color de reacción con distinta intensidad en ambas áreas" por comparación entre las áreas de ensayo. Esta función estaba desconectada para la medición efectuada en este caso.\end{minipage} |
Los ensayos demuestran que las dos áreas de
ensayo indican la misma coloración, es decir la misma concentración
de glucosa, a partir de un volumen de muestra de 4 \mul. En eso se
reconoce el excelente efecto difusor del recubrimiento de la
presente invención sobre ambas áreas de medición. Cuando los
volúmenes de muestra son mayores no varía el valor, pues el exceso
de material de muestra permanece estancado sobre la zona de
aplicación. Si los volúmenes son pequeños, la humectación y, por
tanto, la coloración de ambas áreas de reacción resulta incompleta,
lo cual puede ser detectado por la óptica 2-LED del
área 1. Mediante unos ajustes adecuados en la programación del
aparato puede evitarse que estas mediciones den lugar a una
indicación de valores (falsamente negativos). En vez de ello se da
una señal de error que avisa al usuario del volumen demasiado bajo
de muestra.
Claims (23)
1. Material difusor formado por una estructura
plana porosa impregnada con un humectante, caracterizado
porque el humectante es
N-oleoil-sarcosinato sódico.
2. Material difusor según la reivindicación 1,
caracterizado porque contiene 0,01 hasta 2,0% en peso, con
preferencia 0,03 hasta 0,5% en peso de
N-oleoil-sarcosinato sódico,
referido al peso del material antes de la impregnación.
3. Material difusor según al menos una de las
reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque la estructura
plana porosa que sirve de base al material difusor de la presente
invención es un producto textil formado por monofilamentos o hilos
adecuados de multifilamento.
4. Material difusor según al menos una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la estructura
plana textil es un tejido, malla o velo con un gramaje de 10 hasta
200, sobre todo de 10 hasta 50 g/m^{2}.
5. Material difusor según al menos una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el material
textil tiene un espesor de 20 hasta 200, sobre todo de 30 hasta 100
\mum y/o un volumen poroso de 30 hasta 85, sobre todo de 40 hasta
75%.
6. Empleo de
N-oleoil-sarcosinato sódico para
preparar un material difusor.
7. Empleo según la reivindicación 6,
caracterizado porque el
N-oleoil-sarcosinato sódico se
utiliza en forma pura o en forma de soluciones o preparados
líquidos.
8. Empleo según al menos una de las
reivindicaciones 6 y 7, caracterizado porque, además del
N-oleoil-sarcosinato sódico, el
preparado utilizado lleva otras sustancias auxiliares y/o
aditivos.
9. Método para elaborar un material difusor por
impregnación de una estructura plana porosa con un humectante o con
un preparado humectante, si es preciso, ajustando la estructura
plana impregnada para una absorción prefijada de humectante y
secando el material, caracterizado porque como humectante se
emplea N-oleoil-sarcosinato
sódi-
co.
co.
10. Método según la reivindicación 9,
caracterizado porque la cantidad aplicada de
N-oleoil-sarcosinato sódico se
regula de tal manera, que sobre el material poroso quede un
recubrimiento de 0,01 hasta 2,0% en peso, con preferencia de 0,03
hasta 0,5% en peso, del compuesto aplicado, respecto al peso del
material antes de la impregnación.
11. Tira de ensayo formada por un soporte plano
flexible, transparente o provisto de aberturas de inspección, sobre
el cual se dispone una o más áreas de ensayo contiguas, que a su vez
llevan superpuestas una o más capas de ensayo, caracterizada
porque las áreas de ensayo van recubiertas con una capa de un
material difusor según al menos una de las reivindicaciones 1 a
5.
12. Tira de ensayo según la reivindicación 11,
caracterizada porque el recubrimiento difusor consta de uno o
más elementos planos, los cuales están fijados sobre la tira de
ensayo de modo que una parte de su superficie, opuesta a la
superficie de la tira de ensayo cubierta por esta parte, pueda
desplazarse libremente siguiendo la dirección de la curvatura
producida al doblar la tira.
13. Tira de ensayo según la reivindicación 12,
caracterizada porque las áreas de ensayo están tapadas por
las superficies desplazables de un recubrimiento formado por dos
elementos.
14. Tira de ensayo según al menos una de las
reivindicaciones 12 y 13, caracterizada porque el
recubrimiento difusor consta de dos elementos, cuyas partes
desplazables se dirigen una hacia otra y se solapan.
15. Tira de ensayo según al menos una de las
reivindicaciones 11 a 14, caracterizada porque el
solapamiento de ambos elementos se halla por encima de la línea de
separación entre ambas áreas de ensayo y preferentemente de manera
simétrica.
16. Tira de ensayo según al menos una de las
reivindicaciones 11 a 15, caracterizada porque posee dos
áreas de ensayo -de una o más capas- directamente contiguas o bien
separadas por un corte, para los mismos o distintos analitos
evaluables diagnósticamente.
17. Tira de ensayo según al menos una de las
reivindicaciones 11 a 16, caracterizada porque el dispositivo
de las capas detectoras y de los recubrimientos sobre la tira de
ensayo se reviste con un material inerte plano, de manera que
solamente en la zona de solapamiento de los elementos, según la
dirección del eje longitudinal de la tira de ensayo, queda libre una
franja suficiente para la aplicación de la muestra.
18. Tira de ensayo según al menos una de las
reivindicaciones 11 a 17, caracterizada porque la hidrofilia,
la permeabilidad y el poder conductor de líquido del material
difusor se ajusta para que una muestra de analito se reparta por
toda el ámbito de la tira de ensayo sensible al analito, para que la
tira de ensayo se autodosifique y el exceso de muestra quede
estancado sobre el punto de aplicación.
19. Tira de ensayo según la reivindicación 11,
caracterizada porque contiene una área de ensayo sobre la
cual se encuentra un material difusor monofilamento según las
reivindicaciones 1 y 3, que es más grande que el área de ensayo y
está fijado sobre el soporte a ambos lados del área de ensayo,
preferentemente mediante un distanciador de igual espesor que el
área de ensayo, de tal modo que la parte del material difusor que
sobresale por encima del área de ensayo está revestida por un
material impermeable a la muestra y por lo tanto solo puede
aplicarse la muestra sobre la parte del material difusor que se
halla sobre el área de ensayo.
20. Método para elaborar una tira de ensayo
diagnóstica, por el cual, sobre un soporte eventualmente
transparente o dotado de aberturas de inspección se disponen unas
áreas detectoras de una o más capas, las cuales se tapan con un
recubrimiento suelto y funcional fijado a ambos lados de las áreas
detectoras, y además, si es necesario, se superpone un revestimiento
inerte que solamente deja libre el sitio de aplicación de la
muestra, caracterizado porque se emplea un recubrimiento
funcional formado por un material textil de las características
indicadas en la reivindicaciones 1 a 5.
21. Método según la reivindicación 20,
caracterizado porque sobre la tira de ensayo -junto a
la(s) área(s) de ensayo- se fija uno o varios
elementos planos, que forman conjuntamente el recubrimiento y se
solapan, de manera que una parte de su superficie tapa la(s)
área(s) de ensayo y puede desplazarse libremente respecto a
la(s) área(s) de ensayo, según la dirección de la
curvatura producida al doblar el objeto.
22. Empleo de una tira de ensayo diagnóstico,
según una de las reivindicaciones 11 a 19, para determinar analitos
en un líquido.
23. Método para determinar analitos en una
muestra líquida, que consiste en aplicar una muestra líquida sobre
la zona de aplicación de muestras y observar la formación de una
señal en la(s) capa(s) detectora(s) que
representa una medida de la presencia o cantidad de analito en la
muestra líquida analizada, caracterizado porque se emplea una
tira de ensayo según una de las reivindicaciones 11 a 19.
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