ES2258841T3 - Procedimientos para reducir el colesterol con esporas de bacillus coagulans, sistemas y composiciones asociados. - Google Patents

Abstract

Formulación terapéutica para la reducción de los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos, que comprende bacterias viables productoras de ácido láctico, en la que dichas bacterias productoras de ácido láctico son bacterias Bacillus coagulans, en la que cada dosis diaria de dicha formulación comprende más de aproximadamente 500 millones de bacterias Bacillus coagulans.

Description

Procedimiento para reducir el colesterol con esporas de Bacillus coagulans, sistemas y composiciones asociados.

Campo técnico

La presente invención se refiere a la utilización de un organismo probiótico en una composición terapéutica, y específicamente se refiere a la utilización de una bacteria productora de ácido láctico, preferentemente esporas de Bacillus coagulans, para el control y la reducción del colesterol sérico.

Antecedentes de la invención

Los agentes probióticos son organismos que proporcionan un beneficio cuando crecen en un ambiente particular, con frecuencia mediante la inhibición del crecimiento de otros organismos biológicos en el mismo ambiente. Entre los ejemplos de probióticos se incluyen las bacterias y bacteriófagos que pueden crecer en el intestino, por lo menos temporalmente, desplazando o destruyendo patógenos y proporcionando otros beneficios al organismo huésped (Salminen et al., Antonie Van Leeuwenhoek 70(2-4):347-358, 1996; Elmer et al., JAMA 275:870-876, 1996; Rafter, Scand. J. Gastroeriterol. 30:497-502, 1995; Perdigon et al., J. Dairy Sci. 78:1597-1606, 1995; Gandi, Townsend Lett. Doctors & Patients, páginas 108-110, enero de 1994; Lidbeck et al., Eur. J. Cancer Prev. 1:341-353, 1992).

Anteriormente se ha dado a conocer la utilización terapéutica de bacterias probióticas, especialmente de cepas de Lactobacillus, que colonizan el intestino (Winberg et al., Pediatr. Nephrol. 7:509-514, 1993; Malin et al., Ann. Nutr. Metab. 40:137-145, 1996; y patente US No. 5.176.911).

Las bacterias productoras de ácido láctico (por ejemplo las especies de Bacillus, de Lactobacillus y de Streptococcus) se han utilizado como aditivos alimentarios y algunos autores han reivindicado que proporcionan un valor nutricional y terapéutico (Gorbach, Ann. Med. 22:37-41, 1990; Reid et al., Clin. Microbiol. Rev. 3:335-344, 1990).

Bacillus coagulans es una bacteria no patogénica gram-positiva formadora de esporas que produce ácido L(+)-láctico (dextrorrotatorio) en condiciones de homofermentación. Se ha aislado a partir de fuentes naturales, tales como muestras de suelo tratadas por calor inoculadas en medio nutritivo (Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, vol. 2, Sneath, P.H.A. et al., editores, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1986). Las cepas purificadas de B. coagulans han servido como fuente de enzimas, incluyendo las endonucleasas (por ejemplo la patente US No. 5.200.336), la amilasa (patente US No. 4.980.180), la lactasa (patente US No. 4.323.651) y la ciclomaltodextrina glucanotransferasa (patente U No. 5.102.800). Se ha utilizado B. coagulans para producir ácido láctico (patente US No. 5.079.164). Se ha combinado una cepa de B. coagulans (denominada L. sporogenes, Sakaguti & Nakayama (ATCC 31284)) con otras bacterias productoras de ácido láctico y con B. natto con el fin de producir un producto alimentario fermentado a partir de soja vaporizada (patente US No. 4.110.477). Las cepas de B. coagulans también se han utilizado como aditivos de piensos animales para aves de corral y ganado para reducir enfermedades y mejorar la utilización del pienso y, por lo tanto, para incrementar la tasa de crecimiento de los animales (solicitudes de patente PCT internacional No. WO 9314187 y No. WO-9411492).

En particular, las cepas de B. coagulans se han utilizado para reducir el nivel sérico de colesterol en determinadas formulaciones (Mohan et al., Indian J. Medical Research 92:431-432, 1990), aunque este enfoque no redujo el nivel de triglicéridos en grado suficiente y resultó en reducciones excesivas del colesterol "bueno", es decir, la lipoproteína de alta densidad (HDL).

Se ha informado de que la suplementación de la dieta con fructooligosacáridos (FOS) proporciona beneficios de salud, incluyendo la reducción de los triglicéridos séricos (Mitsuoka et al., Nutrition Research 4:961-966, 1984).

La patente EP No. 0 307 158 describe la preparación de fructooligosacáridos ramificados con microorganismos del género Aspergillus o de enzimas producidos por estos organismos. Estos fructooligosacáridos pueden ser descompuestos por Lactobacillus bifidus en ácidos orgánicos, que se ha informado que reducen los niveles de coles-
terol.

Sin embargo, sigue existiendo una necesidad de controlar el colesterol para el tratamiento de las enfermedades relacionadas con el mismo.

Sumario de la invención

Ahora se ha descubierto que los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos pueden controlarse y reducirse, manteniendo o incrementando simultáneamente los HDL mediante la utilización de una composición terapéutica que incluye una bacteria no patogénica productora de ácido láctico, Bacillus coagulans, en una dosis diaria de por lo menos 500 millones de bacterias. Opcionalmente, la composición comprende además una cantidad efectiva de un agente reductor de colesterol y/o de un oligosacárido bifidogénico.

De acuerdo con una realización de la invención, se proporciona una composición terapéutica para la reducción de los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos, que comprende una bacteria viable productora de ácido láctico, en la que dicha bacteria productora de ácido láctico es una bacteria Bacillus coagulans, y en la que cada dosis diaria de dicha composición comprende por lo menos 500 millones de bacterias.

De acuerdo con una realización preferente de la invención, se proporciona una composición que comprende una cepa aislada de Bacillus coagulans en combinación con una cantidad efectiva de un fructooligosacárido (FOS) en un portador farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración en el tracto digestivo de un ser humano. En una realización de la composición, la cepa de Bacillus coagulans se incluye en la composición en la forma de esporas. En otras realizaciones, la cepa de Bacillus coagulans se incluye en la composición en la forma de una masa celular seca.

La invención también describe la utilización de una composición terapéutica en la preparación de un medicamento para la reducción de los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos y para incrementar el nivel sérico de HDL en un paciente, en el que, durante la utilización, el medicamento se administra en el tracto digestivo de dicho paciente. La composición opcionalmente puede incluir un agente acomplejante de ácido cólico, tal como una sal metálica y similares.

La invención también describe un kit para preparar una composición para la reducción del nivel sérico de colesterol, que consta de un recipiente que comprende una etiqueta y una composición tal como se describe en la presente memoria, en el que dicha etiqueta incluye instrucciones para utilizar la composición para la reducción del colesterol sérico.

Debe entenderse que tanto la descripción general anterior como la descripción detallada siguiente únicamente son ejemplares y explicativas, y que no son limitativas de la invención según las reivindicaciones.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere al descubrimiento de que las bacterias no patogénicas productoras de ácido láctico (es decir, las "bacterias probióticas"), tales como la Bacillus coagulans ejemplar, pueden utilizarse en composiciones terapéuticas como un probiótico.

Por lo tanto, la invención describe diversas composiciones terapéuticas, procedimientos para la utilización de las composiciones, y sistemas que contienen las composiciones terapéuticas.

A. Bacterias probióticas productoras de ácido láctico

Una bacteria probiótica para la utilización en los procedimientos y en las composiciones de la invención según se define para utilizarse en la presente invención produce ácido láctico y no es patogénica. Existen muchas bacterias adecuadas, identificadas tal como se describe en la presente memoria, aunque la invención no se encuentra limitada a las especies bacterianas conocidas en la actualidad en el grado en que se describen los fines y objetivos de las bacterias. La propiedad de producción de ácido láctico es crucial para la efectividad de las bacterias probióticas productoras de ácido láctico de la presente invención debido a que la producción de ácido láctico incrementa la acidez del ambiente local de la microflora, no permitiendo el crecimiento de muchas bacterias y hongos perjudiciales y no deseables. Mediante el mecanismo de la producción de ácido láctico, el probiótico inhibe el crecimiento de bacterias competidoras y perjudiciales.

Tal como se utiliza en la presente memoria, "probiótico" se refiere a microorganismos que forman por lo menos una parte de la flora transitoria o endógena, mostrando un efecto beneficioso profiláctico y/o terapéutico sobre el organismo huésped. Es conocido por los expertos en la materia que los probióticos son generalmente seguros (es decir, que no son patogénicos). Aunque sin pretender restringirse a ningún mecanismo particular, el efecto profiláctico y/o terapéutico de una bacteria productora de ácido láctico de la presente invención resulta en parte de la inhibición competitiva del crecimiento de patógenos debida a la superior colonización, al parasitismo de los microorganismos no deseables, a la producción de ácido láctico y/o a otros productos extracelulares con actividad antimicrobiana, o a combinaciones de los mismos. Estos productos y actividades de una bacteria productora de ácido láctico de la presente invención actúan sinérgicamente produciendo el efecto probiótico beneficioso.

Las bacterias productoras de ácido láctico típicas (es decir, las "bacterias del ácido láctico") que resultan útiles como probióticos de la presente invención son productoras eficientes de ácido láctico, incluyendo los miembros no patogénicos del género Bacillus que producen hidrolasas u otros enzimas que desconjugan las sales biliares liberando colesterol en forma de ácido cólico libre, todos los miembros de los géneros Lactobacillus y Sporolactobacillus, y todos los miembros del género Bifidobacterium, aunque determinadas especies son particularmente preferentes, tal como se indica en la presente memoria.

Son especies ejemplares de Bacillus no patogénicas productoras de ácido láctico, Bacillus coagulans, Bacillus coagulans Hammer y Bacillus brevis subespecie coagulans.

Existe una diversidad de especies de Bacillus que resultan útiles en la presente invención, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas, muchas cepas diferentes disponibles de fuentes comerciales y públicas, tales como la American Type Culture Collection (ATCC). Por ejemplo, se encuentran disponibles cepas de Bacillus coagulans con los números de acceso de ATCC, No. 15949, No. 8038, No. 35670, No. 11369, No. 23498, No. 51232, No. 11014, No. 31284, No. 12245, No. 10545 y No. 7050. Las cepas de Bacillus laevolacticus se encuentran disponibles con los números de acceso de ATCC No. 23495, No. 23493, No. 23494, No. 23549 y No. 23492.

Resulta particularmente adecuada para la presente invención una especie de Bacillus, particularmente especies con la capacidad de formar esporas relativamente resistentes al calor y a otras condiciones, haciendo que sean ideales para el almacenamiento (vida de almacenamiento) en formulaciones de producto, e ideales para la supervivencia y la colonización de tejidos bajo condiciones de pH, salinidad y similares presentes en los tejidos del intestino. Entre las propiedades útiles adicionales se incluyen no ser patogénica, ser aeróbica, facultativa y heterotrófica, convirtiendo a estas especies en seguras y capaces de colonizar el intestino.

Debido a que las esporas de Bacillus son resistentes al calor y además pueden almacenarse en forma de polvos secos, resultan particularmente útiles para la formulación y preparación de formulaciones terapéuticas en la forma de productos secos.

Se describen en la presente memoria procedimientos y composiciones ejemplares con Bacillus coagulans como probiótico.

Bacillus coagulans purificado resulta particularmente útil como probiótico en la presente invención. B. coagulans probiótico no es patogénico y se considera generalmente como seguro (es decir, de clasificación GRAS) por la U.S. Federal Drug Administration (FDA) y por el U.S. Department of Agriculture (USDA) y por los expertos en la materia. Los bacilos Gram-positivos de B. coagulans presentan un diámetro celular superior a 1,0 micrómetro (\mum), con hinchado variable del esporangio, sin producción de cristales parasporales.

Debido a que B. coagulans forma esporas resistentes al calor, resulta particularmente útil para preparar composiciones farmacéuticas que requieren calor y presión para su preparación. Las formulaciones que incluyen esporas viables de B. coagulans en un portador farmacéuticamente aceptable resultan particularmente preferentes para preparar y para utilizar las composiciones de acuerdo con la presente invención.

El crecimiento de estas diversas especies de Bacillus para formar cultivos celulares, pastas celulares y preparaciones de esporas es generalmente bien conocido de la técnica. Se describen en la presente memoria procedimientos de cultivo y de preparación ejemplares para Bacillus coagulans y pueden utilizarse y/o modificarse fácilmente para el cultivo de otras bacterias productoras de ácido láctico de la presente invención.

1. Fuentes de B. coagulans

Se encuentran disponibles bacterias purificadas de B. coagulans de la American Type Culture Collection (Rockville, MD) con los siguientes números de acceso: B. coagulans Hammer NRS 727 (ATTC No. 11014), B. coagulans Hammer cepa C (ATCC No. 11369), B. coagulans Hammer (ATCC No. 31284) y B. coagulans Hammer NCA 4259 (ATCC No. 15949). También se encuentran disponibles bacterias purificadas de B. coagulans de la Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkuturen Gmbh (Braunschweig, Alemania) con los siguientes números de acceso: B. coagulans Hammer 1915 (DSM No. 2356), B. coagulans Hammer 1915 (DSM No. 2383, corresponde a ATCC No. 11014), B. coagulans Hammer (DSM No. 2384, corresponde a ATCC No. 11369) y B. coagulans Hammer (DSM No. 2385, corresponde a ATCC No. 15949). También pueden obtenerse bacterias B. coagulans de suministradores comerciales, tales como Sabinsa Corporation (Piscataway, NJ) o de K.K. Fermentation, Kyoto, Japón.

Dichas cepas de B. coagulans y sus requisitos de cultivo han sido descritos con anterioridad (Baker et al., Can. J. Microbiol. 6:557-563, 1960; Blumenstock, "Bacillus coagulans Hammer 1915 und andere thermophile oder mesophile, säuretolerante Bacillus-Arten-eine taxonomische Untersuchung", tesis doctoral, Univ. Göttingen, 1984; Nakamura et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 38:63-73, 1988). También pueden aislarse cepas de B. coagulans a partir de fuentes naturales (por ejemplo a partir de muestras de suelo tratadas por calor) utilizando procedimientos bien conocidos (Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, vol. 2, páginas 1117, Sneath, P.H.A. et al., editores, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1986). Los resultados descritos en la presente memoria se obtuvieron con B. coagulans Hammer obtenida de la American Type Culture Collection (ATCC No. 31284) que se cultivó tal como se describe en la presente memoria y se almacenó en alícuotas liofilizadas a -80ºC. Todas las B. coagulans que muestran propiedades descritas en la presente memoria se consideran equivalentes de esta cepa.

B. coagulans anteriormente se había caracterizado erróneamente como un Lactobacillus, en vista del hecho de que, en su descripción original, esta bacteria se había denominado Lactobacillus sporogenes (ver Nakamura et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 38:63-73, 1988). Sin embargo, esta clasificación inicial era incorrecta debido al hecho de que Bacillus coagulans produce esporas y a través de su metabolismo excreta ácido L(+)-láctico, ambos aspectos que proporcionan características clave para su utilidad. Por el contrario, estos aspectos de desarrollo y metabólicos requerían que la bacteria se clasificase como un Bacillus del ácido láctico, y por lo tanto se nombró nuevamente.

Tampoco se aprecia generalmente que las especies clásicas de Lactobacillus y/o de Bifidobacterium resultan inadecuadas para la colonización del intestino debido a su inestabilidad en el difícil ambiente de pH de la bilis, particularmente de la bilis humana. En contraste, las especies preferentes de Bacillus son capaces de sobrevivir y de colonizar el intestino en el ambiente biliar.

2. Cultivo de B. coagulans

B. coagulans es aeróbica y facultativa, típicamente se cultiva en caldo nutritivo, pH 5,7 a 6,8, que contiene hasta el 2% (en peso) de NaCl, aunque ni NaCl ni KCl resultan necesarios para su crecimiento. Para el inicio del crecimiento a partir de esporas resulta óptimo un pH de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7,5. Se cultiva óptimamente a una temperatura de entre aproximadamente 30ºC y aproximadamente 45ºC, y las esporas son capaces de resistir la pasteurización. Muestra crecimiento facultativo y heterotrófico, utilizando una fuente de nitrato o de sulfato. En la Tabla 1 se resumen características metabólicas adicionales de B. coagulans.

TABLA 1

Característica	Respuesta de B. coagulans
Producción de catalasa	Sí
Ácido a partir de D-glucosa	Sí
Ácido a partir de L-arabinosa	Variable
Ácido a partir de D-xilosa	Variable
Ácido a partir de D-manitol	Variable
Gas a partir de glucosa	Sí
Hidrólisis de caseína	Variable
Hidrólisis de gelatina	No
Hidrólisis de almidón	Sí
Utilización de citrato	Variable
Utilización de propionato	No
Degradación de tirosina	No
Degradación de fenilalanina	No
Nitrato reducido a nitrito	Variable
Necesidad de alantoína o de urato	No

B. coagulans puede cultivarse en una diversidad de medios, aunque se ha descubierto que determinadas condiciones de cultivo producen un cultivo que proporciona un nivel elevado de esporulación. Por ejemplo, se incrementa la esporulación si el medio de cultivo incluye 10 miligramos por litro de sulfato de manganeso, proporcionando una proporción de esporas a células vegetativas de aproximadamente 80:20. Además, determinadas condiciones de cultivo producen una espora bacteriana que contiene un espectro de enzimas metabólicos particularmente adecuados para la presente invención, es decir, la producción de ácido láctico y de enzimas para la actividad probiótica incrementada y la biodegradación. Aunque las esporas producidas por estas condiciones particulares de cultivo resultan preferentes, las esporas producidas por cualquier condición de cultivo compatible resultan adecuadas para producir B. coagulans que resulte útil en la presente invención.

Entre los medios adecuados para el cultivo de B. coagulans se incluye Nutristart 701, PDB (caldo de dextrosa-patata), TSB (caldo de soja tríptica) y NB (caldo nutritivo), todos bien conocidos y disponibles de una diversidad de fuentes. Los suplementos de medios que contienen digeridos enzimáticos de tejido de ave de corral y de pescado, y que contienen levadura alimentaria resultan particularmente preferentes. Un suplemento preferente produce un medio que contiene por lo menos el 60% de proteína y aproximadamente el 20% de carbohidratos complejos y el 6% de lípidos. Los medios pueden obtenerse de una diversidad de fuentes comerciales, notablemente DIFCO (Detroit, MI), Oxoid (Newark, NJ), BBL (Cockeyesville, MD), Advanced Microbial Systems (Shakopee, MN) y Troy Biologicals (Troy, MI).

Se describe un procedimiento preferente para la preparación de B. coagulans en los Ejemplos.

B. Oligosacáridos bifidogénicos

Los oligosacáridos bifidogénicos, tal como se utilizan en el contexto de la presente invención, son una clase de azúcares particularmente útiles para estimular preferentemente el crecimiento de una bacteria del ácido láctico de la presente invención. Entre estos oligosacáridos se incluyen los fructooligosacáridos (FOS), los glucooligosacáridos (GOS), otros polímeros oligosacáridos de cadena larga de la fructosa y/o de la glucosa, y el trisacárido rafinosa, todos los cuales no resultan fácilmente digeridos por las bacterias patogénicas. El crecimiento preferencial se estimula debido a los requisitos nutricionales de esta clase de bacteria del ácido láctico en comparación con los de las bacterias patogénicas. Los oligosacáridos bifidogénicos son polímeros que resultan utilizados casi exclusivamente por las bifidobacterias y Lactobacillus endógenos, y pueden ser utilizados de manera similar por Bacillus. Los microorganismo perjudiciales, tales como Clostridium, Candida, Campylobacter, Klebsiella, Pseudomonas, Staphylococcus, Salmonella y E. coli no pueden metabolizar FOS u otros oligosacáridos bifidogénicos, y por lo tanto, la utilización de estos oligosacáridos bifidogénicos en combinación con una bacteria del ácido láctico de la presente invención, particularmente Bacillus, permite que las bacterias beneficiosas y probióticas crezcan y sustituyan cualquier microorganismo no deseable o patogénico.

La utilización de oligosacáridos bifidogénicos en composiciones de la presente invención proporciona un efecto sinérgico, incrementando de esta manera la efectividad de las composiciones que contienen probióticos de la presente invención. Esta sinergia se manifiesta como mínimo incrementando selectivamente la capacidad de la bacteria probiótica de crecer mediante el incremento del suplemento alimentario para las bacterias probióticas, que preferentemente selecciona para el crecimiento de las bacterias probióticas sobre muchas otras especies bacterianas en el tejido infectado. Además, se entiende que las bifidobaterias y los Lactobacillus también son productores de ácido láctico. Los oligosacáridos bifidogénicos permiten que estos organismos probióticos proliferen preferentemente sobre las bacterias no deseables que puedan encontrarse en el tejido a tratar mediante la presente invención, incrementando de esta manera el estado probiótico del cuerpo. De esta manera, la presencia de oligosacáridos bifidogénicos en la formulación permite la inhibición más efectiva de microbios no deseables mediante el incremento de la capacidad de todas las variedades de bacterias probióticas beneficiosas de crecer y, por lo tanto, de proporcionar un beneficio.

Un oligosacárido bifidogénico preferente y ejemplar es FOS, aunque también pueden utilizarse otros azúcares, sea solos o en combinación.

Pueden obtenerse FOS a partir de una diversidad de fuentes naturales, incluyendo de suministradores comerciales. Como producto aislado a partir de fuentes naturales, los componentes pueden variar ampliamente y todavía proporcionar el agente beneficioso, es decir, FOS. FOS típicamente presenta una longitud de cadena de polímero de entre aproximadamente 4 y 200 unidades de azúcar, siendo preferentes las longitudes mayores. Por ejemplo, el grado de pureza puede variar ampliamente, con la condición de que se encuentre FOS funcional en la formulación. Entre las formulaciones preferentes de FOS que contienen por lo menos 50% en peso de fructooligosacáridos en comparación con azúcares simples (monosacáridos o disacáridos), tales como glucosa, fructosa o sacarosa, preferentemente por lo menos el 80% de los fructooligosacáridos, más preferentemente por lo menos el 90%, y todavía más preferentemente por lo menos el 95% de los fructooligosacáridos. El contenido y composición de azúcares puede determinarse mediante cualquiera de una diversidad de procedimientos analíticos de detección de carbohidratos complejos, como es bien conocido de la técnica.

Entre las fuentes preferentes de FOS se incluyen la inulina, Frutafit IQ (TM), de Imperial Suiker Unie (Sugar Land, Texas), NutraFlora (TM), de Americal Ingredientes, Inc. (Anaheim, CA), Fabrchem, Inc. (Fairfield, CT) y Fruittrimfat Replacers and Sweeteners (Emeryville, CA). Los oligosacáridos bifidogénicos, tales como GOS, y otros oligosacáridos de cadena larga, también se encuentran disponibles de otros suministradores comerciales.

C. Agentes reductores de colesterol 1. Estatinas

Las estatinas son una clase de agentes reductores del colesterol, también conocidos como inhibidores de la HMG-CoA reductasa, que reducen la biosíntesis del colesterol. Estos agentes son inhibidores competitivos de la 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima-A-HMG-CoA reductasa. Tras administrarse en el cuerpo, se modifican o "hidrolizan" las estatinas en una forma activa beta-hidroxiácido que inhibe la HMG-CoA reductasa. Este enzima cataliza la conversión de HMG-CoA en mevalonato, que es una etapa crítica, temprana y limitante de la reacción de la biosíntesis del colesterol. Tras su inhibición, se enlentece la formación del mismo. El nivel de reducción del colesterol se encuentra directamente relacionado con la cantidad de HMG-CoA reductasa que se inhibe. De esta manera, los niveles de colesterol se encuentran directamente relacionados con la inhibición del enzima, y la inhibición del enzima se encuentra directamente relacionada con la dosis de medicación.

Dicha relación entre los niveles de colesterol y la dosis comporta riesgos de efectos secundarios graves conocidos, incluyendo el daño renal y hepático. Las estatinas no son bien toleradas por muchos pacientes. La mayoría de pacientes reciben inicialmente 10 a 20 mg por adulto de 70 kg por día. La dosis se incrementa gradualmente hasta 80 mg al día a condición de que el cardiólogo del paciente no observe ningún incremento de actividad enzimática hepática que pueda estar provocada por la medicación. Se ha informado de complicaciones hepáticas severas entre el 3% y el 5% de los pacientes que reciben estatinas. También se ha informado de otros efectos secundarios graves y potencialmente fatales. Además, muchas medicaciones se contraponen a las estatinas, y estas contraposiciones también presentan el potencial de ser fatales. La adición de cantidades seguras y efectivas de una bacteria del ácido láctico de la presente invención, tal como B. coagulans, a una composición incrementa la acción de las estatinas, lo que permite utilizar dosis menores de estatinas y reducir muchos de los efectos secundarios experimentados a los niveles terapéuticos típicos.

Las estatinas son bien conocidas y se presentan en una diversidad de formas, y por lo tanto, la invención no debe interpretarse como limitada de esta manera. Entre las estatinas preferentes se incluyen cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, simvastatina y similares, y pueden obtenerse de una diversidad de suministradores comerciales, tales como las que se encuentran bajos los nombres comerciales siguientes: Baycor (Bayer), Lescol (Sandoz), Mevacor (Merck), Pravachol (Bristol-Meyers Squibb) o Zocor (Merck).

La fluvastatina presenta la fórmula química: ácido 7-[3-(4-fluorofenil)-1-(1-metiletil)-1H-indol-2-il]-3,5-dihidro-6-heptenoico, sal monosódica. La fluvastatina sódica se presenta en forma de polvos higroscópicos de color blanco a amarillo pálido solubles en agua, etanol y metanol.

La simvastatina se deriva sintéticamente a partir de un producto de fermentación procedente de Aspergillus terreus. Tras la ingestión oral, la simvastatina, que es una lactona inactiva, se hidroliza, formando la forma beta-hidroxiácido correspondiente. La simvastatina presenta la fórmula química: ácido butanoico, 2,2-dimetil-1,2,3,7,8,8a-hexahidro-3,7-dimetil-8-[2-(tetrahidro-4-hidroxi-6-oxo-2H-pirán-2-il)-etil]-1-naftalenil éster, (1S-[1alfa, 3alfa, 7beta, 8beta(2S*, 4S*)-8abeta]]. La fórmula empírica de la simvastatina es C_{25}H_{38}O_{5} y su peso molecular es de 418,57. La simvastatina se presenta en forma de polvos de color blanco a blanquecino, no higroscópicos y cristalinos que son prácticamente insolubles en agua, y libremente solubles en cloroformo, metanol y etanol.

2. Compuestos secuestrantes de la bilis

El colesterol es el precursor principal, y probablemente el único, de los ácidos biliares. Durante la digestión normal, los ácidos biliares se secretan en la bilis desde el hígado y la vesícula biliar hacia el interior del intestino. Los ácidos biliares emulsionan los materiales grasos y lipídicos presentes en los alimentos, facilitando de esta manera la absorción. Una parte importante de los ácidos biliares secretados se reabsorben de los intestinos y retornan a través de la circulación portal al hígado, completando de esta manera el ciclo enterohepático. En el suero normal se detectan sólo cantidades muy reducidas de ácidos biliares.

Los compuestos que se unen a los ácidos biliares en el intestino previenen de esta manera su reabsorción en la sangre y su reciclaje a través del hígado, y los complejos resultan excretados. Debido a que el hígado requiere colesterol para fabricar la bilis, el hígado incrementa su absorción de la sangre, reduciendo de esta manera el colesterol
sérico.

Sin embargo, los agentes secuestrantes de la bilis pueden provocar efectos secundarios que se controlan mediante la utilización en combinación de una bacteria del ácido láctico. Entre estos efectos secundarios se incluyen las heces negras, dolor de estómago con vómitos o náuseas, estreñimiento, pérdida súbita de peso, indigestión gastrointestinal, náuseas y vómitos, dolor de estómago, hinchazón y condiciones similares. Se incluye una bacteria del ácido láctico, que funciona como un agente que alivia el estreñimiento y mejora la función digestiva global.

Entre los agentes que reducen el colesterol actuando en el secuestro de los ácidos biliares se encuentra un agente reductor del colesterol preferente de acuerdo con la presente invención, y se incluyen el colestipol y la colestiramina.

a. Colestipol

El colestipol, habitualmente en la forma de hidrocloruro de colestipol, se une a los ácidos biliares en el intestino formando un complejo que se excreta en las heces. Esta acción no sistémica resulta en una eliminación parcial de los ácidos biliares de la circulación enterohepática, previniendo su reabsorción. Debido a que el hidrocloruro de colestipol es una resina de intercambio aniónica, los aniones cloruro de la resina pueden sustituirse con otros aniones, habitualmente aquellos con una mayor afinidad para la resina que para el ión cloruro.

La pérdida fecal incrementada de ácidos biliares debida a la administración de hidrocloruro de colestipol conduce a una oxidación incrementada de colesterol a ácidos biliares. Ello resulta en un incremento en el número de receptores de lipoproteína de baja densidad (LDL), una asimilación hepática incrementada de LDL y en una reducción de la lipoproteína beta o niveles séricos de lipoproteína de baja densidad, y una reducción de los niveles séricos de colesterol.

El hidrocloruro de colestipol es un copolímero básico de intercambio aniónico de elevado peso molecular de dietilenotriamina y 1-cloro-2,3-epoxipropano, con protonación de aproximadamente 1 de cada 5 nitrógenos de la amina (forma cloruro). Es una resina insoluble en agua de color amarillo pálido que es higroscópica y se hincha al suspenderla en agua o en líquidos acuosos. El colestipol también es insípido e inodoro y típicamente se formula en gránulos con portadores inactivos, tales como dióxido de silicio.

El hidrocloruro de colestipol es hidrofílico, y debido a que es virtualmente insoluble en agua (al 99,75%), no resulta hidrolizado por los enzimas digestivos. El polímero de elevado peso molecular en el hidrocloruro de colestipol aparentemente no resulta absorbido. En el ser humano, se excreta menos del 0,17% de una dosis única de hidrocloruro de colestipo marcado con ^{14}C en la orina administrada tras 60 días de dosificación crónica de 20 gramos de hidrocloruro de colestipol al día.

El colestipol se encuentra disponible de una diversidad de suministradores comerciales, por ejemplo bajo los nombres comerciales: Colestid (Upjohn), Colestipid, Cholestabyl y Lestid.

De esta manera, las dosis típicas de Colestipid para la utilización en la presente invención comprenden administrar una composición de la presente invención que comprende aproximadamente 1 a 20 gramos (g), con preferencia aproximadamente 4 a 15 g, y más preferentemente aproximadamente 6 a 8 g por adulto de 70 kg por día, dependiendo del metabolismo y tolerancia del paciente, y de las evaluaciones del médico.

b. Colestiramina

La colestiramina es un agente reductor del colesterol que se utiliza típicamente en la forma de sal cloruro de una resina básica de intercambio aniónico.

La resina colestiramina adsorbe y se combina con los ácidos biliares en el intestino formando un complejo insoluble que se excreta en las heces. Ello resulta en una eliminación parcial de los ácidos biliares de la circulación enterohepática mediante la prevención de su absorción.

La pérdida fecal incrementada de ácidos biliares debido a la administración de la colestiramina conduce a una oxidación incrementada del colesterol a ácidos biliares, a una reducción de los niveles de lipoproteína beta o de la lipoproteína de baja densidad en plasma, y a una reducción de los niveles séricos de colesterol. Aunque en el ser humano la colestiramina produce un incremento de la síntesis hepática de colesterol, los niveles plasmáticos de colesterol caen.

La resina de colestiramina es bastante hidrofílica, pero insoluble en agua, y no resulta reabsorbida desde el tracto digestivo. La colestiramina se encuentra disponible de una diversidad de suministradores comerciales, por ejemplo bajo los nombres comerciales: Questran (Bristol-Myers Squibb Company), Cuemid, Colestrol, Lismol y Quantalan.

3. Fibrina

La invención contempla además la utilización de productos de fibra (por ejemplo "fibrina"), tales como los derivados del ácido fíbrico, como agentes reductores del colesterol. La acción de estos productos de fibra es de unión al colesterol en la forma de ácido cólico libre y de esta manera la reducción de su biodisponibilidad. Entre las fibrinas ejemplares se incluyen el gemfibrozil (Lopid), el fenofibrato (Tricor), el psilium, el salvado de trigo, el salvado de arroz, el salvado de maíz, la harina de konjak (glucomanan), la harina de aguaturma, la fibra de fruta y cualquier otro producto alimentario funcional que contenga estos productos de fibra, que se ha demostrado que ayudan a reducir los niveles séricos de lípidos.

La combinación de una fibrina con una bacteria productora de ácido láctico de la presente invención en una composición terapéutica proporciona una terapia más efectiva mediante el incremento de la cantidad de ácidos biliares que pueden unirse. Ello ha sido el elemento que ha faltado en los productos de colesterol basados en fibra.

4. Otros agentes

La invención contempla además otros agentes que poseen la capacidad de reducir el colesterol y que se consideran útiles en una composición en combinación con una bacteria del ácido láctico de acuerdo con la presente invención.

El ácido nicotínico (niacina) es un agente reductor del colesterol preferente. La niacina reduce el colesterol total y el colesterol-LDL y eleva el colesterol-HDL, reduciendo asimismo el nivel de triglicéridos. La dosis de niacina requerida para reducir el colesterol es aproximadamente 100 veces superior a la dosis diaria recomendada (DDR) para la niacina y de esta manera potencialmente puede resultar tóxica. Por lo tanto, el fármaco debe administrarse bajo supervisión médica.

También se contempla como agente reductor del colesterol el ácido salicílico (aspirina). Se ha demostrado que la aspirina presenta un efecto protector contra los ataques de corazón en pacientes con vasos sanguíneos obstruidos, y también puede utilizarse en una composición de acuerdo con la presente invención. El mecanismo reductor del nivel de colesterol se cree que se basa en las propiedades ácidas de la aspirina, y como tal, el ácido desconjuga el complejo bilis:colesterol, reduciendo su biodisponibilidad.

D. Composiciones terapéuticas

Las composiciones de la presente invención adecuadas para la utilización en el control o en la reducción del nivel de colesterol comprenden una bacteria productora de ácido láctico, preferentemente B. coagulans, esporas de B. coagulans, o combinaciones de los mismos, y una cantidad efectiva de un agente terapéutico seleccionado de entre el grupo que consiste en un agente reductor de colesterol y un oligosacárido bifidogénico en diversas formulaciones.

El ingrediente activo de bacteria productora de ácido láctico típicamente comprende entre aproximadamente el 0,1% y aproximadamente el 50% en peso de la composición final, preferentemente entre el 1% y el 10% en peso, en una formulación adecuada para la administración oral.

Una composición terapéutica típica contiene en un gramo de formulación de dosificación entre 2 x 10^{5} y 10^{10} unidades formadoras de colonia de bacterias o esporas bacterianas viables productoras de ácido láctico (en el caso de Bacillus coagulans).

Una composición terapéutica típica puede contener uno o más de los siguientes agentes activos además de una bacteria del ácido láctico, tal como se describe adicionalmente en la presente memoria: un oligosacárido bifidogénico y/o un agente reductor de colesterol, en diversas combinaciones dependiendo de la formulación específica.

Una composición preferente incluye entre aproximadamente 10 miligramos (mg) y un gramo de oligosacárido bifidogénico, preferentemente entre 100 y 500 mg por gramo de composición.

Tal como se describe en la presente memoria, una composición terapéutica también puede comprender entre aproximadamente 1 y 80 mg de estatina por gramo de composición.

Una composición terapéutica también puede comprender entre aproximadamente 0,1 y 0,8 g de compuesto secuestrante de bilis por gramo de composición.

Una composición terapéutica también puede comprender entre aproximadamente 10 mg y 0,5 g de fibrina por gramo de composición.

La formulación para una composición terapéutica de la presente invención puede incluir otros agentes probióticos o nutrientes para estimular el crecimiento.

Las composiciones terapéuticas particularmente preferentes además contienen agentes acomplejantes de ácido cólico que inhiben la reabsorción del ácido cólico e incrementan de esta manera la excreción del ácido cólico con la bilis. Entre los agentes acomplejantes ejemplares se incluyen las sales de metales, tales como calcio, cromo, cobre, yodo, hierro, magnesio, manganeso, potasio, sodio, cinc y sales similares. Entre las sales preferentes se encuentran calcio, cromo, magnesio y potasio. Para la administración oral y la absorción, resultan preferentes, aunque no necesarios, determinados compuestos salinos. Las sales particularmente preferentes se forman utilizando citrato, gluconato y picolinato, tal como es bien conocido. Entre los compuestos preferentes se encuentran el citrato de calcio, el gluconato de potasio, el citrato de magnesio y el picolinato de cromo.

Los agentes acomplejantes de ácido cólico resultan particularmente preferentes debido a que añaden aspectos beneficiosos a la invención terapéutica. En particular, incrementan la tasa de excreción del ácido cólico mediante la formación de complejos que no resultan reabsorbidos que, a su vez, reduce la cantidad de precursores de colesterol disponibles para la biosíntesis del colesterol. El agotamiento del ácido cólico mediante esta vía incrementa sinérgicamente la efectividad de los agentes activos al ayudar en el objetivo principal de reducir el colesterol.

Las composiciones también pueden incluir antioxidantes conocidos, agentes tamponadores, y otros agentes, tales como vitaminas o minerales. Los otros agentes en las composiciones también puede ser agentes sinérgicos o activos, pueden ser inactivos, tales como un portador, o pueden ser estéticos, tales como colorantes o saborizantes, tal como se describe en la presente memoria.

Entre los componentes adicionales preferentes de una composición terapéutica de la presente invención pueden incluirse colorantes o saborizantes diversos bien conocidos de la técnica, vitaminas, enzimas y otros nutrientes. Entre las vitaminas preferentes se incluyen las vitaminas B, C, D, E, ácido fólico, K, niacina y vitaminas similares. También pueden incluirse enzimas en la dieta o suplementarios, tales como lactasa, amilasa, glucanasa, catalasa y enzimas similares.

Entre las vitaminas ejemplares utilizadas en la composición se encuentran: colina (160 mg/lb), B-6 (10 mg/lb), B-12 (2 \mug/lb), niacina (120 mg/lb), ácido pantoténico (4 mg/lb), riboflavina (12 mg/lb), inositol (1 g/lb), tiamina (1,5 mg/lb), ácido fólico (0,5 mg/lb) y similares.

Los compuestos químicos utilizados en las presentes composiciones pueden obtenerse de una diversidad de fuentes comerciales, incluyendo Spectrum Quality Products, Inc. (Gardena, CA), Seltzer Chemicals, Inc. (Carlsbad, CA) y Jarchem Industries, Inc. (Newark, NJ).

Los agentes activos se combinan con un portador que es fisiológicamente compatible con el tejido intestinal de un ser humano o animal al que se administra. Es decir, el portador preferentemente es sustancialmente inactivo excepto por las propiedades surfactantes utilizadas en la preparación de una suspensión de los ingredientes activos. Entre las composiciones pueden incluirse otros constituyentes fisiológicamente activos que no interfieran con la eficacia de los agentes activos en la composición.

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Una composición terapéutica preferente también puede contener uno o más de los minerales siguientes: citrato de calcio (15 a 350 mg), gluconato de potasio (5 a 150 mg), citrato de magnesio (5 a 15 mg) y picolinato de cromo (5 a 200 microgramos) con las cantidades especificadas a administrar por día. La formulación puede complementarse en peso utilizando cualquiera de una diversidad de portadores y/o ligantes.

Los portadores pueden ser materiales secos de base sólida para formulaciones de tableta, cápsula o forma de polvos, y pueden ser materiales líquidos o de base gel para formulaciones en forma líquida o gel, dependiendo la forma, en parte, de la vía de administración.

Entre los portadores típicos para las formulaciones secas se incluyen la trehalosa, maltodextrina, harina de arroz, celulosa microcristalina (MCC), estearato de magnesio, inositol, FOS, glucooligosacáridos (GOS), dextrosa, sacarosa y portadores similares.

Los portadores de base líquida o gel que resultan adecuados son bien conocidos de la técnica, tales como el agua y las soluciones salinas fisiológicas, urea, alcoholes y glicoles, tales como metanol, etanol, propanol, butanol, etilenglicol y propilenglicol, y similares. Preferentemente, los portadores de base agua presentan un pH aproximadamente neutro.

Entre los portadores adecuados se incluyen los portadores acuosos y oleaginosos, tales como, por ejemplo, petrolato blanco, miristato de isopropilo, lanolina o alcoholes de lanolina, aceite mineral, monooleato de sorbitán, propilenglicol, alcohol cetilestearílico (junto o en diversas combinaciones), hidroxipropilcelulosa (PM = 100.000 a 1.000.000), detergentes (por ejemplo estearato de polioxilo o lauril sulfato sódico), mezclados con agua formando una loción, gel, crema o composición semisólida. Otros portadores adecuados comprenden emulsiones de agua-en-aceite o de aceite-en-agua y mezclas de emulsionantes y emolientes con disolventes, tales como estearato de sacarosa, cocoato de sacarosa, diestearato de sacarosa, aceite mineral, propilenglicol, 2-etil-1,3-hexanodiol, polioxipropilén-15-estearil éter y agua. Por ejemplo, las emulsiones que contienen agua, estearato de glicerol, glicerina, aceite mineral, espermaceti sintético, alcohol cetílico, butilparabén, propilparabén y metilparabén se encuentran disponibles comercialmente. También pueden incluirse conservantes en el portador, incluyendo metilparabén, propilparabén, alcohol bencílico y sales etilendiamina tetraacetato. También pueden incluirse en el portador saborizantes y/o colorantes bien conocidos. La composición también puede incluir un plastificador, tal como glicerol o polietilenglicol (PM = 800 a 20.000). La composición del portador puede variarse con la condición de que no interfiera significativamente con la actividad farmacológica del ingrediente activo o con la viabilidad de la bacteria del ácido láctico incluida en la composición.

Una composición típica de la presente invención puede contener además cualquiera de los ingredientes activos siguientes: acacia, aspartamo, ácido cítrico, D&C Yellow No. 10, FD&C Yellow No. 6, saborizante (natural y/o artificial), polisorbato 80, alginato de propilenglicol, dióxido de silicio coloidal, y sacarosa y goma xantano.

Una composición también puede contener los ingredientes inactivos siguientes: aspartamo, beta caroteno, ácido cítrico, saborizante (natural o artificial), glicerina, maltol, manitol y metilcelulosa.

Se describen en los Ejemplos, formulaciones ejemplares y preferentes. En los Ejemplos se describen formulaciones particularmente preferentes para una composición terapéutica de la presente invención.

E. Procedimientos terapéuticos para reducir el colesterol

La presente invención contempla un procedimiento para reducir el nivel sérico de colesterol-LDL y de triglicéridos, y para incrementar el nivel sérico de colesterol-HDL. El procedimiento comprende la administración de una composición terapéutica de la presente invención, que contiene los ingredientes activos, a un ser humano o a un animal en diversos regímenes de dosificación, tal como se describe en la presente invención, con el fin de conseguir el resultado terapéutico.

La administración de una composición terapéutica preferentemente es en el intestino utilizando un gel, suspensión, pulverizador de aerosol, cápsula, tableta, polvos, formulación de polvos o semisólida (por ejemplo un supositorio) que contiene una composición terapéutica de la presente invención, todos formulados utilizando procedimientos bien conocidos de la técnica. La administración de las composiciones que contienen los ingredientes activos que resultan efectivos en el control o en la reducción del colesterol generalmente consisten en una a diez dosis unitarias de 10 mg a 10 g por dosis de la composición a lo largo de un periodo de entre un día y un mes. Las dosis unitarias generalmente se administran una vez cada doce horas y hasta una vez cada cuatro horas. Preferentemente dos a cuatro dosis de la composición al día, comprendiendo cada una aproximadamente 0,1 a a 5 g por dosis, durante uno a siete días resultan suficientes para controlar o para reducir el nivel de colesterol.

Un procedimiento preferente implica la administración en el tracto digestivo de entre 10^{4} y 10^{12} bacterias o esporas viables al día, preferentemente entre aproximadamente 10 y 10^{10} bacterias o esporas viables al día, y más preferentemente entre aproximadamente 5 x 10^{8} y 10^{9} bacterias o esporas viables al día.

El procedimiento incluye además la administración de uno o más agentes terapéuticos indicados en la presente memoria y seleccionados de entre el grupo que consiste en un oligosacárido bifidogénico y un agente reductor del colesterol.

Un procedimiento preferente comprende la administración en el tracto digestivo de entre 10 mg y 20 g de fructooligosacárido al día, preferentemente entre aproximadamente 50 mg y 10 g, y más preferentemente entre aproximadamente 150 mg y 5 g de fructooligosacárido al día.

En el grado en que la invención también puede contemplar la administración de un agente reductor del colesterol en una composición terapéutica, una composición administrada de acuerdo con la presente invención también puede contener uno o más agentes terapéuticos indicados en la presente memoria.

De esta manera, una composición puede contener una estatina, tal como se indica en la presente memoria, para la administración en el procedimiento terapéutico. Las dosis típicas de estatinas para la utilización en el presente procedimiento comprenden la administración de una composición de la presente invención en una cantidad de entre aproximadamente 10 y 80 miligramos (mg), preferentemente entre aproximadamente 40 y 80 mg por adulto de 70 kg por día, dependiendo del metabolismo y tolerancia del paciente, y de las evaluaciones del médico.

Una composición puede contener un compuesto secuestrante de la bilis tal como se describe en la presente memoria, para la administración en el procedimiento terapéutico. De esta manera, las dosificaciones típicas de un compuesto secuestrante de la bilis para la utilización en el presente procedimiento comprenden la administración de una composición de la presente invención en una cantidad de entre aproximadamente 1 y 20 gramos (g), preferentemente de entre aproximadamente 4 y 15 g, y más preferentemente entre aproximadamente 6-8 g por adulto de 70 kg por día, dependiendo del metabolismo y tolerancia del paciente, y de las evaluaciones del médico.

Puede utilizarse una fibrina en una diversidad de formulaciones de dosificación, y por lo tanto la invención no debe interpretarse como limitada de esta manera. Las dosificaciones típicas comprende la administración en el tracto digestivo de entre aproximadamente 0,5 y 50 gramos de fibrina por adulto de 70 kg por día, preferentemente entre aproximadamente 5 y 10 gramos al día.

Las dosificaciones típicas de aspirina comprenden la administración de entre aproximadamente 300 mg y 4 g de ácido salicílico por adulto de 70 kg por día, preferentemente entre aproximadamente 0,6 y 1,8 g al día.

El procedimiento típicamente se pone en práctica en cualquier persona con riesgo de condiciones de niveles séricos elevados de colesterol-LDL. Entre estas condiciones se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, aterosclerosis, esclerosis arterial, infarto de miocardio, ataque al corazón, diabetes, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho o angina inestable.

A menos que se indique lo contrario, todos los términos científicos y técnicos utilizados en la presente memoria presentan los mismos significados entendidos comúnmente por los expertos en la materia relevante. A menos que se indique lo contrario, las técnicas utilizadas o contempladas en la presente memoria son metodologías estándares bien conocidas por los expertos ordinarios en la materia. Los ejemplos de realizaciones se presentan únicamente a título ilustrativo.

F. Sistemas terapéuticos para reducir el colesterol

La invención contempla además un sistema terapéutico para reducir el nivel sérico de colesterol, que consta de un recipiente que comprende una etiqueta y una composición terapéutica de acuerdo con la presente invención, en el que dicha etiqueta incluye instrucciones para utilizar la composición para la reducción del nivel sérico de colesterol.

Típicamente, el sistema se presenta en la forma de un paquete que contiene una composición terapéutica de la presente invención, o en combinación con material de empaquetamiento. El material de empaquetamiento incluye una etiqueta o instrucciones de utilización de los componentes del paquete. Las instrucciones indican la utilización contemplada del componente del paquete, tal como se describe en la presente memoria, de los procedimientos o composiciones de la invención.

Por ejemplo, un sistema puede comprender una o más dosis unitarias de una composición terapéutica de acuerdo con la invención. Alternativamente, el sistema puede contener cantidades en masa de una composición terapéutica. La etiqueta contiene instrucciones para la utilización de la composición terapéutica en forma de dosis unitaria o en masa según resulte apropiado, y puede incluir información acerca del almacenamiento de la composición, indicaciones de enfermedades, dosis, vías de administración e información similar.

Ejemplos 1. Formulación de composición terapéutica

Formulación 1

B. coagulans	500.000.000 esporas (-35 mg)
citrato de calcio	35 miligramos (mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	10 mg
picolinato de cromo	50 microgramos (\mug)
fructooligosacáridos	200 mg
celulosa microcristalina	660 mg

Formulación 2

B. coagulans	500.000.000 esporas (-35 mg)
citrato de calcio	35 miligramos (mg)
gluconato de potasio	10 mg
picolinato de cromo	50 microgramos (\mug)
celulosa microcristalina	870 mg

Formulación 3

B. coagulans	500.000.000 esporas (-35 mg)
citrato de calcio	35 miligramos (mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	10 mg
picolinato de cromo	50 microgramos (\mug)
fructooligosacáridos	500 mg
celulosa microcristalina	360 mg

Formulación 4

B. coagulans	500.000.000 esporas (-35 mg)
citrato de calcio	35 miligramos (mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	35 mg
picolinato de cromo	50 microgramos (\mug)
fructooligosacáridos	300 mg
celulosa microcristalina	535 mg

Formulación 5

B. coagulans	Mil millones de esporas (-70 mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	10 mg
colestipol	20 mg
celulosa microcristalina	890 mg

Formulación 6

B. coagulans	Mil millones de esporas (-70 mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	10 mg
fructooligosacáridos	300 mg
colestipol	40 mg
celulosa microcristalina	570 mg

Formulación 7

B. coagulans	Mil millones de esporas (-70 mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	10 mg
simvastatina	20 mg
celulosa microcristalina	890 mg

Formulación 8

B. coagulans	Mil millones de esporas (-70 mg)
gluconato de potasio	10 mg
citrato de magnesio	10 mg
fructooligosacáridos	300 mg
simvastatina	40 mg
celulosa microcristalina	570 mg

2. Preparación de esporas de B. coagulans

Se preparó un cultivo de esporas secas de B. coagulans. Se inocularon diez millones de esporas en un cultivo de un litro que contenía 24 g de caldo de dextrosa-patata, 10 g de digerido enzimático de tejido de ave de corral y pescado, 5 g de FOS y 10 g de MnSO_{4}. El cultivo se mantuvo durante 72 horas en un ambiento rico en oxígeno a 37 grados centígrados con el fin de producir un cultivo con aproximadamente 150 mil millones de células por gramo de cultivo. Seguidamente, el cultivo se filtró con el fin de eliminar el medio de cultivo líquido, y se resuspendió el pellet bacteriano en agua y se liofilizó. Los polvos liofilizados seguidamente se molieron formando unos polvos finos utilizando buenas prácticas de manufacturación estándares (GMP). A continuación, se combinaron los polvos en la Formulación 4 tal como se ha descrito en el Ejemplo 1 y se introdujeron en cápsulas en una cantidad de 0,5 g por cápsula.

3. Efecto de la composición de B. coagulans sobre el nivel sérico de LDL

Se llevó a cabo un estudio controlado con 20 pacientes a los que se administraron diariamente durante 60 días dos tabletas producidas tal como en el Ejemplo 2, y se les realizó un seguimiento de los niveles séricos de LDL, HDL y triglicéridos. Los pacientes mostraron una reducción media del colesterol-LDL de entre el 31% y el 43%, un incremento medio del colesterol-HDL de entre el 7% y el 15%, y una reducción de los niveles séricos de triglicéridos de entre el 11% y el 16%. Durante el tratamiento, 3 pacientes diagnosticados con un bloqueo superior al 85% de la arteria carótida experimentaron una reducción del bloqueo hasta un bloqueo de aproximadamente el 40%. Aunque estos tres pacientes se programaron para cirugía de derivación basándose en el nivel de bloqueo, todas las operaciones quirúrgicas previstas fueron canceladas por sus médicos tras el tratamiento debido a que había disminuido el riesgo de circulación reducida.

En un estudio relacionado, pacientes que habían recibido aproximadamente 150 a 500 millones de células bacterianas al día en combinación con 500 mg de FOS al día demostraron una reducción del colesterol-LDL de entre aproximadamente el 30% y el 40% tras dos semanas de administración diaria.

Se ha descrito la invención en los ejemplos anteriores utilizando una diversidad de formulaciones, aunque debe resultar evidente que pueden sustituirse los agentes portadores en los ejemplos por otros diversos que son compatibles con las composiciones probióticas y que proporcionan resultados similares.

Claims (30)

1. Formulación terapéutica para la reducción de los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos, que comprende bacterias viables productoras de ácido láctico, en la que dichas bacterias productoras de ácido láctico son bacterias Bacillus coagulans, en la que cada dosis diaria de dicha formulación comprende más de aproximadamente 500 millones de bacterias Bacillus coagulans.

2. Formulación según la reivindicación 1, en la que dichas bacterias Bacillus coagulans productoras de ácido láctico son Bacillus coagulans Hammer.

3. Formulación según la reivindicación 1 ó 2, en la que dicha dosis diaria de dicha formulación comprende hasta 10^{10} bacterias viables.

4. Formulación según cualquier reivindicación anterior, que comprende además un oligosacárido bifidogénico seleccionado de entre el grupo que consiste en fructooligosacárido, glucooligosacárido y el trisacárido rafinosa.

5. Formulación según la reivindicación 4, en la que el fructooligosacárido comprende polímeros de fructosa y glucosa con una longitud de cadena de polímero de entre 4 y 100 unidades de azúcar.

6. Formulación según la reivindicación 4 ó 5, en la que dicha formulación comprende entre 10 miligramos y 1 gramo de oligosacárido bifidogénico por gramo de formulación.

7. Formulación según la reivindicación 6, en la que dicha formulación comprende entre 100 y 500 miligramos de oligosacárido bifidogénico por gramo de formulación.

8. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además una cantidad efectiva de un agente reductor del nivel de colesterol que no es una bacteria productora de ácido láctico.

9. Formulación según la reivindicación 8, en la que dicho agente reductor del nivel de colesterol se selecciona de entre el grupo que consiste en estatina, un compuesto secuestrante de bilis, una fibrina capaz de unirse al colesterol, niacina y aspirina.

10. Formulación según la reivindicación 9, en la que dicha estatina se selecciona de entre el grupo que consiste en cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina y simvastatina.

11. Formulación según la reivindicación 9 ó 10, en la que dicha formulación comprende 1 a 80 miligramos de estatina por gramo de formulación.

12. Formulación según la reivindicación 9, en la que dicho compuesto secuestrante de bilis se selecciona de entre el grupo que consiste en colestipol y colestiramina.

13. Formulación según la reivindicación 9 ó 12, en la que dicha formulación comprende entre 0,1 y 0,8 gramos de compuesto secuestrante de bilis por gramo de formulación.

14. Formulación según la reivindicación 9, en la que dicha fibrina se selecciona de entre el grupo que consiste en gemfibrozil, fenofibrato, psilium, salvado, glucomanan y harina de aguaturma.

15. Formulación según la reivindicación 9 ó 14, en la que dicha formulación comprende entre 10 miligramos y 0,5 gramos de fibrina por gramo de formulación.

16. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además un agente acomplejante de ácido cólico.

17. Formulación según la reivindicación 16, en la que dicho agente acomplejante se selecciona de entre el grupo que consiste en una sal metálica de calcio, cromo, cobre, yodo, hierro, magnesio, manganeso, potasio, sodio y cinc.

18. Formulación según la reivindicación 17, en la que dicha sal metálica se proporciona en la forma de citrato de calcio, gluconato de potasio, citrato de magnesio o picolinato de cromo.

19. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además una sustancia alimentaria, saborizante, vitamina o mineral.

20. Formulación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicho agente reductor del nivel de colesterol es un inhibidor de la HMG CoA-reductasa.

21. Utilización de una formulación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la preparación de un medicamento para reducir los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos y para incrementar el nivel sérico de HDL en un paciente, en la que, durante la utilización, el medicamento se administra en el tracto digestivo de dicho paciente.

22. Utilización según la reivindicación 21, en la que dicho medicamento se administra mediante ingestión oral.

23. Utilización según la reivindicación 21 ó 22, en la que se introducen entre 0,1 y 5 gramos al día de dicho medicamento en el tracto digestivo.

24. Utilización según la reivindicación 21 ó 22, en la que se introducen entre 5 x 10^{8} y 10^{10} bacterias viables al día, preferentemente entre 5 x 10^{8} y 10^{9} bacterias viables al día, en el tracto digestivo.

25. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 24, en la que se introducen entre 10 miligramos y 20 gramos de oligosacárido bifidogénico al día, preferentemente entre 150 miligramos y 5 gramos de oligosacárido bifidogénico al día, en el tracto digestivo.

26. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 25, en la que se introducen 10 a 80 miligramos de estatina al día en el tracto digestivo.

27. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 26, en la que se introducen entre 1 y 20 gramos de compuesto secuestrante de bilis al día en el tracto digestivo.

28. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, en la que se introducen entre 500 miligramos y 50 gramos de fibrina al día en el tracto digestivo.

29. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 28, en la que dicho paciente presenta un riesgo de aterosclerosis, esclerosis arterial, infarto de miocardio, ataque al corazón, diabetes, enfermedad cardíaca coronaria, angina de pecho o angina inestable.

30. Kit para la preparación de una formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, o utilización según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 29, que consta de un recipiente, una etiqueta, y una formulación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, en el que dicha etiqueta proporciona instrucciones para utilizar la formulación para la reducción de los niveles séricos de colesterol y de triglicéridos.