ES2259599T3 - Utilizacion de un anticuerpo especifico de los fibroblastos papilares como marcador de calidad de una piel. - Google Patents
Utilizacion de un anticuerpo especifico de los fibroblastos papilares como marcador de calidad de una piel.Info
- Publication number
- ES2259599T3 ES2259599T3 ES00403310T ES00403310T ES2259599T3 ES 2259599 T3 ES2259599 T3 ES 2259599T3 ES 00403310 T ES00403310 T ES 00403310T ES 00403310 T ES00403310 T ES 00403310T ES 2259599 T3 ES2259599 T3 ES 2259599T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- skin
- fibroblasts
- antibody
- dermis
- papillary
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6881—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from skin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, Konjac gum, Locust bean gum or Guar gum
- G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/20—Dermatological disorders
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/971—Capture of complex after antigen-antibody reaction
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Utilización del anticuerpo PG4, siendo el indicado anticuerpo específico de los fibroblastos papilares, como marcador de calidad de una piel para indicar la presencia en la piel de poblaciones de fibroblastos de piel normal.
Description
Utilización de un anticuerpo específico de los
fibroblastos papilares como marcador de calidad de una piel.
La invención tiene por objeto la utilización de
al menos un anticuerpo específico de los fibroblastos papilares como
marcador de calidad de una piel, particularmente de un equivalente
de piel.
La piel está constituida por dos compartimientos
íntimamente ligados, a saber la epidermis y la dermis.
La epidermis está mayoritariamente constituida
por tres tipos celulares, los queratinocitos por si mismos
mayoritarios entre las células de la epidermis, los melanocitos y
las células de Langerhans. Estas células constituyen un epitelio
queratinizado que se diferencia en capas superpuestas sobremontadas
por una capa de células muertas que forman el stratum
corneum.
La dermis proporciona a la epidermis un soporte
sólido. Es igualmente su elemento alimentador. Está principalmente
constituida por fibroblastos y por una matriz extracelular compuesta
ella misma principalmente por colágeno, elastina y una sustancia,
llamada sustancia fundamental. El conjunto de estos componentes
extracelulares se sintetiza por el fibroblasto. Se encuentran en
ella también leucocitos, mastocitos o también macrofagos tisulares.
Está igualmente constituida por vasos sanguíneos y fibras nerviosas.
En una piel normal, es decir ni patológica ni cicatricial, el
fibroblasto se encuentra en estado quiescente, es decir no
proliferativo, poco activo desde un punto de vista metabólico e
inmóvil.
De hecho la dermis se subdivide en dos regiones,
por una parte una dermis superficial fina llamada papilar, por otra
parte la dermis profunda llamada reticular que constituye la gran
mayoría de la dermis.
La dermis papilar es la parte de la dermis
situada en contacto con la epidermis y contiene fibroblastos
llamados papilares.
La dermis reticular es la región de la dermis
que se extiende a continuación hasta la capa grasa subcutánea y
contiene fibroblastos llamados reticulares. Estas dos regiones
presentan en la piel normal diferencias. La dermis papilar es
metabólicamente más activa que la dermis reticular.
Los fibroblastos papilares y reticulares en
cultivo presentan diferencias en su potencial de crecimiento. Por
inmunomarcado es posible mostrar que la decorina, dermatano sulfato
proteoglicano (DSPG) de pequeño tamaño, es más abundante en la
dermis papilar que en la dermis reticular. Los fibroblastos
papilares secretan hasta aproximadamente 6 veces más decorina que
los fibroblastos reticulares.
Por consiguiente en la piel normal la dermis
está constituida por al menos dos poblaciones de fibroblastos lo
cual solo puede tener consecuencias esenciales sobre la piel
propiamente dicha.
En el ámbito de los equivalentes de pieles (o
pieles reconstruidas in vitro), se saben preparar
equivalentes de dermis con cada una de las poblaciones de
fibroblastos previamente aisladas. Se sabe igualmente preparar
equivalentes de la dermis en los cuales se introducen las dos
poblaciones previamente aisladas.
Pero el problema reside en la identificación de
las diferentes poblaciones de fibroblastos en equivalentes de dermis
reconstruidos a partir de una población aleatoria de fibroblastos.
Después del establecimiento en cultivo del equivalente de la dermis,
¿presenta este último al menos las dos poblaciones de fibroblastos,
reticular y papilar, presentes en la dermis de una piel normal?.
Ahora bien se ha visto anteriormente que la piel normal presenta
estas dos poblaciones y se comprende que una piel reconstruida in
vitro será tanto más parecida a una piel normal cuando la misma
presente al menos las dos poblaciones de fibroblastos.
Hasta ahora que sepa la Firma solicitante no
existen medios sencillos y eficaces, particularmente medios que no
invaliden para el equivalente de piel que permitan establecer sin
ambigüedad si una piel reconstruida presenta o no al menos las dos
poblaciones de fibroblastos papilar y reticular. Es este problema el
que trata de resolver la presente invención.
En efecto de forma sorprendente e inesperada la
Firma solicitante ha descubierto ahora que los fibroblastos
papilares expresan un epitopo específico que no está, o poco,
presente en los fibroblastos reticulares. Resulta entonces posible
realizar con la ayuda de anticuerpos, particularmente anticuerpos
monoclonales, específicos de este epitopo un marcado de esta
población particular de fibroblastos dérmicos. Así, es posible con
la ayuda de este anticuerpo determinar si un equivalente de piel
presenta las dos poblaciones de fibroblastos papilar y
reticular.
Así, la invención tiene por objeto la
utilización de al menos un anticuerpo específico de los fibroblastos
papilares como marcador de calidad de una piel, particularmente de
un equivalente de piel.
Por marcador de calidad se entiende según la
invención, todo marcador que indique efectivamente la presencia en
la piel o en el equivalente de piel, de un elemento biológico
presente en la piel normal.
Por marcador se entiende según la invención,
todo elemento cuya presencia, ausencia, modificación de la expresión
o modificación de la distribución puedan ser medidos. Se puede
citar a título de ejemplo marcador, y sin limitación, los epitopos,
los ácidos nucléicos (ácido ribonucléico o desoxirribonucleico), los
anticuerpos, las proteínas o grupo de proteínas ligadas o no, los
iones, los organitos celulares, los lípidos o los poliosidos.
Según la invención, el marcador es un
anticuerpo.
El anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal
o monoclonal. Preferentemente según la invención el anticuerpo es
monoclonal.
El anticuerpo puede ser un anticuerpo procedente
de cualquier origen es decir procedente de cualquier animal como por
ejemplo el caballo, la cabra, el ratón, la rata, el conejo.
Preferentemente el anticuerpo es un anticuerpo
de ratón.
Aún más preferentemente el anticuerpo es un
anticuerpo monoclonal de ratón.
Un anticuerpo preferido según la invención es el
anticuerpo conocido bajo el nombre de PG4, descrito en la
publicación de Sorrell y col. (The Histochemical Journal 31:
549-558, 1999).
Este anticuerpo monoclonal de ratón se describe
como reconocimiento a nivel de la piel al menos un epitopo
específico de los glicosaminoglicanos, particularmente descrito como
un anticuerpo monoclonal anti-condroitina sulfato
(CS) y antidermatano sulfato (DS).
Hasta ahora este anticuerpo no ha sido descrito
como específico de una población particular de fibroblastos dérmicos
a saber los fibroblastos papilares.
Sorrell y col. (Journal of Histochemistry
Cytochemistry, 1990, 393-402) describe anticuerpos
monoclonales que reconocen epitopos de condroitina o dermatano
sulfato y su utilización para el marcado de la piel.
Schönherr y col. (Biochem. 1993, 290,
893-899) se refiere a diferencias de expresión de
algunos proteoglicanos en los fibroblastos papilares y
reticulares.
Hunzelman y col. (J. Invest. Dermatol., 1995,
104, 509-513) describen la expresión alterada de
proteoglicanos en tejidos tumorales.
Así la invención tiene por objeto la utilización
del anticuerpo monoclonal PG4 como marcador de los fibroblastos
papilares, particularmente fibroblastos papilares de la piel, muy
particularmente fibroblastos papilares de la dermis.
Otro objeto de la invención es la utilización
del anticuerpo monoclonal PG4 como marcador de calidad de la piel,
particularmente equivalentes de piel, particularmente equivalentes
de dermis obtenidas in vitro.
Cualquier método de marcado inmunológico que
utilice al menos un anticuerpo conocido de la técnica anterior puede
ser utilizado para realizar los marcados con los anticuerpos de la
invención. Se puede a este respecto citar el método descrito por
Asselineau y col., (J. I. D., 86, 181-186, 1986), o
también por Sorrell y col. (The Histochemical Journal 31:
549-558, 1999).
Otro objeto de la invención es un procedimiento
de determinación de la calidad de una piel, particularmente de un
equivalente de piel obtenido in vitro, caracterizado
porque se realiza sobre la piel y/o el equivalente de piel un
marcado inmunológico con la ayuda de al menos un anticuerpo
específico de los fibroblastos papilares, particularmente del
anticuerpo PG4.
La figura 1 permite ilustrar mejor la invención,
sin no obstante limitar su alcance.
En esta figura, la foto muestra una sección de
piel humana normal después del inmunomarcado realizado en
inmunofluorescencia indirecta con la ayuda del anticuerpo monoclonal
PG4 con contramarcado de los núcleos celulares con yoduro de
propidio. Se aprecia la presencia de un marcado intenso (zona de
gris claro) de la dermis superior a nivel de la epidermis
(reconocible por numerosos núcleos celulares marcados con yoduro de
propidio), que demuestran la presencia en esta zona de fibroblastos
papilares que expresan el epitopo reconocido específicamente por el
anticuerpo monoclonal PG4.
Otras características y ventajas de la invención
se desprenderán mejor de los ejemplos que siguen, dados a título
ilustrativo y no limitativo.
Muestras de piel normal procedentes de plastias
quirúrgicas se incluyen en el Tissue-Tek,
congeladas en nitrógeno líquido y mantenidas en congelador a
-80ºC.
-80ºC.
Se realizaron fracciones de 4 micrones de
espesor en criostato según las técnicas convencionales.
Los marcados se realizaron por una técnica
clásica de marcado en inmunofluorescencia indirecta (ver Asselineau
y col., J.I. D., 86, 181-186, 1986) con 20 \mul
por fracción del anticuerpo monoclonal PG4 utilizado puro
(sobrenadante de cultivo) (ver Sorrell y col. The Histochemical
Journal 31: 549-558, 1999).
Se depositaron entonces 20 \mul por fracción
de un anticuerpo dirigido contra los anticuerpos de ratón (conjugado
de ratón) obtenido de la Sociedad Dako sobre las fracciones y estas
se incubaron según las recomendaciones del proveedor.
Después del aclarado, las fracciones se
sometieron a una solución de PBS conteniendo yoduro de propidio al
0,5% luego se aclararon con PBS y se montaron para observación al
microscopio de fluorescencia con el fin de marcar los núcleos
celulares.
Se aprecia la presencia de un marcado intenso de
la dermis a nivel de la epidermis, que demuestra la presencia en
esta zona de fibroblastos papilares que expresan el epitopo
reconocido específicamente por el anticuerpo monoclonal PG4.
Claims (8)
1. Utilización del anticuerpo PG4, siendo el
indicado anticuerpo específico de los fibroblastos papilares, como
marcador de calidad de una piel para indicar la presencia en la piel
de poblaciones de fibroblastos de piel normal.
2. Utilización del anticuerpo PG4, siendo el
indicado anticuerpo específico de los fibroblastos papilares, como
marcador de calidad de un equivalente de piel para indicar la
presencia en el equivalente de piel de poblaciones de fibroblastos
de piel normal.
3. Utilización según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, caracterizada por el hecho de que el
anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
4. Utilización del anticuerpo PG4 como marcador
de los fibroblastos papilares.
5. Utilización según la reivindicación 4,
caracterizada por el hecho de que los fibroblastos son
fibroblastos papilares de piel.
6. Utilización según una cualquiera de las
reivindicaciones 4 ó 5, caracterizada por el hecho de que los
fibroblastos son fibroblastos papilares de la dermis.
7. Utilización del anticuerpo PG4 según la
reivindicación 1, como marcador de calidad de una dermis o de un
equivalente de la dermis.
8. Procedimiento de determinación de la calidad
de una piel o de un equivalente de piel obtenido in
vitro, caracterizado porque se realiza sobre esta piel o
sobre este equivalente de piel un marcado inmunológico con la ayuda
del anticuerpo PG4, como anticuerpo específico de los fibroblastos
papilares.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9915292 | 1999-12-03 | ||
| FR9915292A FR2801979B1 (fr) | 1999-12-03 | 1999-12-03 | Utilisation d'un anticorps specifique des fibroblastes papillaires comme marqueur de qualite d'une peau |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2259599T3 true ES2259599T3 (es) | 2006-10-16 |
Family
ID=9552884
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES00403310T Expired - Lifetime ES2259599T3 (es) | 1999-12-03 | 2000-12-04 | Utilizacion de un anticuerpo especifico de los fibroblastos papilares como marcador de calidad de una piel. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20010036642A1 (es) |
| EP (1) | EP1111389B1 (es) |
| JP (1) | JP3516263B2 (es) |
| AT (1) | ATE319090T1 (es) |
| CA (1) | CA2326713C (es) |
| DE (1) | DE60026272T2 (es) |
| ES (1) | ES2259599T3 (es) |
| FR (1) | FR2801979B1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9969980B2 (en) * | 2001-09-21 | 2018-05-15 | Garnet Biotherapeutics | Cell populations which co-express CD49c and CD90 |
| US9969977B2 (en) | 2002-09-20 | 2018-05-15 | Garnet Biotherapeutics | Cell populations which co-express CD49c and CD90 |
| NZ582616A (en) * | 2007-06-15 | 2012-07-27 | Garnet Biotherapeutics Inc | Treatment of diseases and disorders using self-renewing colony forming cells cultured and expanded in vitro |
| JP6042904B2 (ja) * | 2011-11-25 | 2016-12-14 | シャネル パフュームズ ビューテ | 乳頭状および網状の線維芽細胞の新規マーカーおよびその使用 |
| GB201721738D0 (en) * | 2017-12-22 | 2018-02-07 | King S College London | Method |
-
1999
- 1999-12-03 FR FR9915292A patent/FR2801979B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-11-29 CA CA002326713A patent/CA2326713C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-29 US US09/725,269 patent/US20010036642A1/en not_active Abandoned
- 2000-12-04 EP EP00403310A patent/EP1111389B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-04 ES ES00403310T patent/ES2259599T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-04 AT AT00403310T patent/ATE319090T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-12-04 DE DE60026272T patent/DE60026272T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-04 JP JP2000368860A patent/JP3516263B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-07-15 US US10/619,188 patent/US7192719B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60026272D1 (de) | 2006-04-27 |
| FR2801979B1 (fr) | 2002-02-08 |
| ATE319090T1 (de) | 2006-03-15 |
| CA2326713A1 (fr) | 2001-06-03 |
| US20040082016A1 (en) | 2004-04-29 |
| DE60026272T2 (de) | 2006-11-23 |
| FR2801979A1 (fr) | 2001-06-08 |
| JP2001215225A (ja) | 2001-08-10 |
| JP3516263B2 (ja) | 2004-04-05 |
| EP1111389A1 (fr) | 2001-06-27 |
| EP1111389B1 (fr) | 2006-03-01 |
| CA2326713C (fr) | 2007-01-02 |
| US7192719B2 (en) | 2007-03-20 |
| US20010036642A1 (en) | 2001-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| König et al. | Multiphoton autofluorescence imaging of intratissue elastic fibers | |
| Martin et al. | Actin cables and epidermal movement in embryonic wound healing | |
| BAKER et al. | Cell replacement in the human stratum corneum in old age | |
| Menon et al. | Ultrastructural localization of calcium in psoriatic and normal human epidermis | |
| Clark et al. | The embryonic rat parietal yolk sac: Changes in the morphology and composition of its basement membrane during development | |
| Faryniarz et al. | Myofibroblasts in the healing lapine medial collateral ligament: possible mechanisms of contraction | |
| Glicksman et al. | Differentiation of motor nerve terminals formed in the absence of muscle fibres | |
| Ochalski et al. | Connexin-43 in rat spinal cord: localization in astrocytes and identification of heterotypic astro-oligodendrocytic gap junctions | |
| Lieb et al. | Description of the intrafollicular delivery of large molecular weight molecules to follicles of human scalp skin in vitro | |
| Amato et al. | Probing the mechanism of incorporation of fluorescently labeled actin into stress fibers. | |
| Severs et al. | Intercellular junctions and the application of microscopical techniques: the cardiac gap junction as a case model | |
| ES2259599T3 (es) | Utilizacion de un anticuerpo especifico de los fibroblastos papilares como marcador de calidad de una piel. | |
| Tahara et al. | Dynamics of cortical granule exocytosis at fertilization in living mouse eggs | |
| Marmor | Mechanisms of retinal adhesion | |
| Page | Tubular systems in Purkinje cells of the cat heart | |
| Oberleithner | Is the vascular endothelium under the control of aldosterone? Facts and hypothesis | |
| Aunis et al. | Immunohistochemical and immunocytochemical localization of myosin, chromogranin A and dopamine-β-hydroxylase in nerve cells in culture and in adrenal glands | |
| Badalamente et al. | Prostaglandins influence myofibroblast contractility in Dupuytren's disease | |
| Viggars et al. | PCM1 labeling reveals myonuclear and nuclear dynamics in skeletal muscle across species | |
| Lu et al. | Fluorescence imaging of reepithelialization from skin explant cultures on acellular dermis | |
| Nakamura | Biochemical, electron microscopic and immunohistological observations of cationic detergent-extracted cells: detection and improved preservation of microextensions and ultramicroextensions | |
| Wood et al. | Tendon creep is potentiated by NKISK and relaxin which produce collagen fiber sliding | |
| Tang et al. | Impaired autophagy flux contributes to enhanced ischemia reperfusion injury in the diabetic heart | |
| Olerud et al. | An assessment of human epidermal repair in elderly normal subjects using immunohistochemical methods | |
| Al-Gubory | Fibered confocal fluorescence microscopy for imaging apoptotic DNA fragmentation at the single-cell level in vivo |