ES2264508T3 - Procedimiento de preparacion de composiciones con alto contenido en avarol y su uso. - Google Patents

Abstract

Procedimiento para la fabricación de una composición que contiene avarol en una cantidad de 60 a 98%, caracterizado porque se incorpora un material de partida que contiene avarol una o varias veces a un disolvente polar que contiene grupos hidroxilo, y se añade a esta mezcla uno o varios agentes reductores, seleccionados de sales alcalinas de compuestos de ditionito, disulfito, bisulfito, sales de selenita, ácido cítrico, ácido ascórbico, glutation, fosfitas o mezclas de los mismos en una cantidad de 0, 01 a 20% en peso, referida a la cantidad de material de partida, y después se obtiene el producto presente en el disolvente.

Description

Procedimiento de preparación de composiciones con alto contenido en avarol y su uso.

Descripción objeto de la invención

La presente invención se refiere al procedimiento simple descrito en las reivindicaciones para la producción de una composición de avarol con hasta el 98% de avarol, que presenta especialmente una proporción en compuestos antioxidantes especiales. Para ello se disuelve el material de partida que contiene avarol en un disolvente que contiene grupos polares y acto seguido un agente de reducción como sales alcalinas de compuestos de ditionita, bisulfito, bisulfito. Sorprendentemente, éste método simple permite obtener composiciones de avarol en rendimientos elevados, que presentan preferiblemente del 65-95% de avarol y del 5-35% de compuestos antioxidantes. Con esto es posible un mejor efecto en el tratamiento y prevención de trastornos funcionales proliferativos tanto en el hombre como en animales. Además, mediante una extracción líquido-líquido especial se puede obtener en grandes cantidades avarol altamente purificado a partir de esta composición o mediante reacción con un agente oxidante como un compuesto de Cer(IV).

Estado de la técnica

El avarol y el avaron son importantes metabolitos, obtenidos de esponjas marinas, como por ejemplo de la esponja marina Dysidea avara y las conocidas como tales, como por ejemplo las descritas en "Drugs of the Future, 10 (1985) 887-889". Como se evidencia a partir de esta invención, estas sustancias se podrían obtener hasta ahora solamente con grandes costes y en procedimientos cromatográficos de larga duración, ineficientes. En estos casos, se sumergían primeramente las esponjas marinas en disolventes polares como estere acético, acetona o mezclas de los mismos, y se concentraban los extractos líquidos obtenidos. Con esto se obtenía una sustancia aceitosa parda. El motivo para ello es que esencialmente la esponja ya en agua adquiere en las zonas de corte rápidamente un color violeta. Esta coloración en la extracción y coloración se tornaba rápidamente en la exposición al aire de modo que finalmente resulta un extracto de esponja de color pardo oscuro, alquitranado, que también se describe cada vez más en distintas referencias bibliográficas. Por tanto el producto aceitoso obtenido se debe purificar en varias etapas costosas, como series repetidas de cromatografía preparativa en columna en gel de sílice de fase normal o revertida o HPLC preparativa, con recristalizaciones sucesivas subsiguientes. A este respecto no se podía evitar la pérdida de grandes cantidades del producto deseado debido a reacciones químicas secundarias incontroladas e indesea-
das.

El documento US A5.082.865 se refiere al uso del avarol puro para el tratamiento de tumores. A este respecto la sustancia activa se obtiene de la esponja Dysidea avara como se describió, mediante extracción en acetato de etilo y, a continuación cromatografía sobre gel de sílice, en una cantidad de 2,7 g de sustancia pura a partir de 1 Kg de material de partida (esponja fresca). El avarol puede transformarse en avaron mediante reacción con óxido de plata AgO_{2}. Ambos principios activos se pueden transformar de forma conocida en derivados farmacéuticamente compatibles como ésteres o sales de adición, que se liberan con uso de la forma farmacéuticamente activa.

En el documento DE 41 37 093 A1 se describe el uso de un producto de avarol purificado obtenido de esta forma, como agente anti-inflamatorio sistémico o dermatológico, especialmente para el tratamiento de la dermatitis atópica o de enfermedades reumáticas. En estos casos se puede aplicar el principio activo, por ejemplo, en forma de un ungüento, loción, crema pero también por vía oral en una formulación líquida en base acuosa, como comprimido o cápsula con aditivos conocidos usuales. En esta invención se demuestra que el avarol presenta una actividad anti-oxidante para la inhibición de los enzimas que están involucrados en la síntesis de las prostaglandinas y de los leucotrienos (inhibidores de la cicloxigenasa y de 5-lipoxigenasa).

El documento US-A 49 39.177 describe el uso del avarol para el control del SIDA. Aquí el avarol se obtiene como se describió anteriormente.

En J. Org. Chem. 1982, 47, 1727-1731 se describe un procedimiento en varios pasos para la síntesis total de avarol, en el cual se llevan a cabo reacciones costosas debido a que se debe prestar atención a la estereoquímica y el rendimiento de sólo las 8 últimas etapas sin las primeras etapas de reacción es como máximo del 28%.

El documento XP 0022610 22 describe la extracción de avarol puro de un cultivo de primorfos. El documento DE 3621032 describe un procedimiento para la producción de avarol puro a partir de esponjas marinas mediante extracción con acetato etílico.

El documento XP 008024427 da a conocer la actividad del avarol o avaron en la lipo-oxidación inducida
in-vitro.

Los procedimientos citados anteriormente son por tanto poco adecuados para un uso dermatológico/cosmético o medicinal de avarol o avaron ya que son demasiado costosos y/o porque necesitan de tiempos largos para su obtención.

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Objetivo de la invención

El objetivo de la presente invención es por tanto desarrollar un procedimiento con el que se pueda obtener avarol sin elevados costes y duración temporal, de modo que se pueda usar en usos dermatológicos/cosméticos o farmacéuticos. Además se podría obtener de forma sencilla también el avaron farmacéuticamente activo.

Alcance del cometido y objetivo de la invención

Este cometido se alcanza según la invención haciendo reaccionar el material de partida que contiene avarol en un disolvente polar que contiene grupos hidroxilo, especialmente alcoholes mono- o polihidroxílicos o mezclas de los mismos o con agua, añadiendo después un agente reductor y obteniéndose a partir del extracto así obtenido avarol en una composición altamente concentrada. El extracto puede hacerse reaccionar en una o varias etapas de nuevo con agente reductor, lo que sorprendentemente conduce a un aumento de la pureza.

Este extracto puede hacerse reaccionar también en una etapa sencilla adicional hasta avarol de alta pureza o hasta avarol sin el uso de óxido de plata.

Sorprendentemente, se obtiene de este modo a partir de material de partida que contiene avarol el producto deseado en una composición que es aún más eficaz como agente antiinflamatorio o antiviral que los productos de avarol utilizados hasta ahora. Además, se logra el producto con rendimientos muy altos, a saber mucho más del doble que las cantidades conseguidas hasta ahora, de modo poco costoso técnicamente y ante todo muy económico.

Del modo descrito, sorprendentemente pueden reprimirse eficazmente las reacciones secundarias indeseadas que proporcionan productos de reacción fuertemente coloreados mediante la reacción de avarol/avarón con grupos funcionales, por ejemplo, R-NH_{2}, R-SH, R-OH u otras sustancias presentes concomitantes.

Descripción detallada de la invención

Según la invención, se pone a disposición por tanto un procedimiento para la fabricación de una composición que contiene avarol en una cantidad de hasta el 98%, que se caracteriza porque se hace reaccionar un material de partida que contiene avarol una o varias veces en un disolvente polar que contiene grupos hidroxilo, especialmente alcohólico, y se añade a esta mezcla uno o varios agentes reductores, seleccionados de sales alcalinas de compuestos de ditionito, disulfito, bisulfito, sales de selenita como, por ejemplo, selenita de sodio, ácido cítrico, ácido ascórbico, glutation, fosfitas o mezclas de los mismos, en una cantidad de 0,01 a 20% en peso, referida a la cantidad de material de partida, y después se logra el producto presente en el disolvente. Éste puede obtenerse después en forma sólida, por ejemplo, mediante precipitación, por ejemplo, con agua o solución acuosa con agente reductor. A este respecto, se obtienen rendimientos mayores con diferencia que los alcanzados hasta ahora, por ejemplo, más de 1% por kg de material de partida de esponjas húmedas o más de 10% con biomasa seca como material de partida. En el estado de la técnica, no se cita como material de partida biomasa, y en las esponjas húmedas se obtienen únicamente 0,27% (o sea 2,7 g de avarol por kg).

Como material de partida pueden utilizarse ante todo esponjas marinas, extractos de disolvente, especialmente extractos alcohólicos de esponjas marinas o biomasa de células de esponja o biomasa productora de avarol conseguida por ingeniería genética (como algas, etc).

Preferiblemente, se utilizan esponjas marinas o biomasa de células de esponja o biomasa conseguida mediante ingeniería genética. A este respecto, se prefieren especialmente esponjas o biomasa de células de esponja. Como esponjas marinas o extractos de las mismas o biomasa celular son especialmente adecuadas aquellas del tipo Dysidea avara. Éstas son especialmente preferidas. En el uso especialmente preferido de estas esponjas marinas o de la biomasa celular de las mismas se obtienen por tanto extractos nativos, que pueden utilizarse directamente como tales farmacéutica/dermatológica/cosméticamente, en tanto que corresponden al producto original. La biomasa de células de esponja se logra ante todo mediante cultivo de células de esponja o cultivo de tejido de esponja de modo en sí conocido, y puede utilizarse igualmente.

Como agente reductor se utilizan especialmente sales de sodio o potasio de compuestos de ditionito (Na_{2}/K_{2}S_{2}O_{4}), disulfito (Na_{2}/K_{2}S_{2}O_{5}), bisulfito (Na_{2}/K_{2}HSO_{3}), Son muy especialmente preferidas las sales de sodio y de entre ellas ante todo el ditionito de sodio.

La concentración de agente reductor puede variar según la frecuencia con que se lleve a cabo la etapa de extracción según la invención. Se prefieren cantidades de 1 a 15% en peso, especialmente de 3 a 15% en peso, ante todo 3 a 10% en peso (referidas a la cantidad de material de partida).

La cantidad de agente reductor puede variar también según el material de partida. Así, pueden tratarse también extractos concentrados según el estado de la técnica con, por ejemplo, 0,01-10% de agente reductor, especialmente en agua como disolvente polar que contiene grupos hidroxilo, y extraerse el avarol.

De forma especialmente preferida, puede hacerse reaccionar de nuevo del modo citado el extracto logrado, por ejemplo, con 0,01 a 3% en peso de agente reductor, especialmente agente reductor preferido, añadiéndose después éste a disolventes seleccionados, o también a agua y logrando composiciones de avarol puro del tipo descrito.

En caso de llevar a cabo varias reacciones, se prefiere cuando se realiza una primera reacción con una concentración de agente reductor de 3 a 15% en peso y se separa el disolvente con la composición que contiene avarol en la misma, se trata el material de partida de nuevo una o varias veces con agente reductor en una cantidad de respectivamente 0,01 a 3% en peso (referida a la cantidad de material de partida) con disolvente, después se separa respectivamente el extracto de disolvente con composición de avarol contenida en el mismo antes de la siguiente reacción, y eventualmente se combinan los extractos de disolvente logrados y se obtiene la composición que contiene avarol en los
mismos.

La composición de avarol puede lograrse especialmente mediante precipitación del(de los) extracto(s) de disolvente mediante la adición una o varias veces de agua o disolución acuosa preferida que contiene 0,01 a 10% en peso, ante todo 0,01 a 8, especialmente 0,01 a 5 o preferiblemente 0,01 a 1% en peso de agente reductor.

Por consiguiente, la composición de avarol se obtiene en forma muy pura y presenta 60-98% de avarol y 40 a 2% en peso de otros componentes naturales, especialmente sustancias antioxidantes, especialmente del grupo de los derivados de sesquiterpeno.

Como disolvente polar que contiene grupos hidroxilo son adecuados, además de agua, especialmente alcoholes mono- o polihidroxílicos o mezclas de los mismos o con agua en distintas proporciones, como 99:1 a 50:50 (alcohol:agua). Como alcoholes monohidroxílicos, que son especialmente preferidos, son adecuados ante todo alcoholes C_{1-6} como metanol, etanol, n-, isopropanol, butanol (n, iso o terc), pentanol (n, iso) o n-hexanol. Son muy especialmente preferidos metanol y etanol, propanol, isopropanol o mezclas de los mismos o con agua, por ejemplo, en relación como la indicada anteriormente o 95:5 a 70:30 (alcohol:agua o etanol:metanol). Se prefieren especialmente etanol, metanol, especialmente metanol, mezclas de los mismos y con agua.

Como alcoholes polihidroxílicos son adecuados alcoholes di- y trihidroxílicos con C_{2-8} átomos de carbono como etilenglicol, propilenglicol, butilenglicol, glicerol o mezclas de los mismos con agua como se ha indicado. Además, puede ser también ventajoso añadir polietilenglicol a uno o varios de los alcoholes citados o mezclas alcohol/agua.

Los alcoholes sustituidos aromáticos son, por ejemplo, alcohol bencílico, timol; los alcoholes cicloalifáticos son preferiblemente ciclohexanol, ciclopentanol.

El disolvente se utiliza en una cantidad de 1 equivalente a un exceso de 10 veces, referida al peso (cantidad) de material de partida que contiene avarol. Se prefieren utilizar cantidades de 1,5 a 8 veces, especialmente 1,5 a 5 veces.

Los datos porcentuales se refieren generalmente aquí al peso.

De este modo, se obtiene una composición que contiene avarol con hasta 98% de avarol. La composición presenta además una proporción de sustancias adicionales, ante todo compuestos antioxidantes. Especialmente, la composición abarca 60 a 98% en peso de avarol y 2 a 40% en peso de una mezcla de otros componentes, especialmente compuestos antioxidantes del grupo de derivados de sesquiterpeno. Preferiblemente, la composición fabricada según la invención presenta 65 a 95% de avarol, especialmente 65 a 90%, y muy especialmente 70 a 85% de avarol, y como resto los compuestos citados, especialmente compuestos antioxidantes.

A este respecto, se trata especialmente de derivados de sesquiterpeno sustituidos como derivados de (tio)furano como, por ejemplo, tiofurodisinina y derivados acilados de la misma, cuya actividad contra DPPH, y en cuanto al efecto antioxidante en el extracto según la invención, se muestra en los siguientes ejemplos. Además, pueden contener también derivados de avarol y avarón, como 2' ó 5' acilados o 3' ó 4'-aminoalquilados, especialmente están presentes derivados de aminometilo, análogos hidrogenados o estereoisómeros de los mismos. Estos derivados de sesquiterpeno son en sí conocidos. Los derivados de sesquiterpeno se presentan respectivamente en distintas proporciones.

Se ha mostrado que uno de dichos extractos actúa farmacológicamente mejor que los extractos actuales que se han obtenido del modo descrito anteriormente, como se ilustra más detalladamente en los siguientes ejemplos.

La composición de avarol según la invención puede hacerse reaccionar, si se desea, en otra etapa de procedimiento sencilla pero eficaz hasta avarol de alta pureza. El avarol de alta pureza es especialmente deseado para la síntesis de sustancias farmacológicamente eficaces como otros agentes antitumorales a partir de avarol, que con este fin debe presentarse puro. Para ello, se disuelve la composición que contiene avarol sólido lograda en un disolvente orgánico polar y después se añade un disolvente orgánico apolar en una cantidad tal que recristalice avarol de alta pureza a partir de la fase apolar.

Como disolventes polar son adecuados ante todo los disolventes que contienen grupos hidroxilo anteriormente descritos, especialmente etanol, metanol, propanol, isopropanol o mezclas de los mismos o con agua, especialmente etanol, metanol, mezclas de los mismos o con agua como se ha descrito. Como disolventes polares son adecuados ante todo hidrocarburos alifáticos o cicloalifáticos o aromáticos C_{4}-C_{10}. Pertenecen a ellos ante todo n-hexano, ciclohexano, éter de petróleo (punto de ebullición 40-70ºC) o mezclas de los mismos. La relación cuantitativa de disolvente polar:apolar asciende según el aparato utilizado a 1-10:1 ó 1:1-10 y es tal que recristalice avarol puro a partir de la fase apolar. A partir de esto, puede separarse el avarol mediante medidas conocidas como filtración o centrifugación.

Además, es también posible disolver especialmente el avarol así obtenido o la composición que contiene avarol en una etapa adicional en un disolvente seleccionado de disolventes polares que contienen grupos hidroxilo como se describen anteriormente, especialmente etanol, metanol, propanol, isopropanol o mezclas de los mismos o con agua, especialmente etanol, metanol, mezclas de los mismos o con agua, de modo que la concentración de avarol ascienda a 10 a 70%, preferiblemente 10 a 50%, referida a la cantidad=peso, y después se añade por mol de avarol 0,5 a 1,5 mol de un agente oxidante seleccionado de sulfato de cerio (IV), sulfato de cerio (IV) y amonio, yodatos, peryodatos, vanadiatos o dióxido de estaño, y a continuación se logra el compuesto de quinona formado (avarón) del modo habitual.

Se utilizan de forma especialmente preferida compuestos de cerio (IV).

Por tanto, pueden obtenerse de modo sencillo y económico avarol y avarón puros para uso posterior, por ejemplo, para la síntesis eficaz de principios activos como agentes antitumorales, que hasta ahora podían obtenerse sólo de modo costoso.

Ventajas/aplicaciones del objetivo de la invención

Por tanto, es posible por primera vez evitar el costoso procedimiento de purificación cromatográfica en la obtención de avarol y avarón, y lograr los productos deseados de modo sencillo, económico, sin gran coste técnico y con altos rendimientos de 1 a 30%, referidos a los materiales de partida como esponjas o biomasa celular o extracto. Por ejemplo, se obtienen a partir de 3 kg de esponja Dysidea avara 47 g de avarol (al 90%= 42,3 g de avarol puro= 1,4%). Esto corresponde a 6 veces la cantidad de avarol lograda hasta ahora a partir de esponjas marinas según el estado de la técnica, a saber, 2,7 g de avarol a partir de 1 kg de esponja Dysidea avara= 0,27%. En general, se consiguen rendimientos de 5 a 15 veces mejores.

Especialmente, puede obtenerse según la invención una composición de avarol que presente todavía determinados antioxidantes, especialmente del grupo químico de los derivados de sesquiterpeno. Por consiguiente, se utiliza preferiblemente como material de partida esponja o biomasa de células de esponja del tipo Dysidea avara, pero también extractos de los mismos como se han descrito, que conducen al producto descrito. Esta composición se ha reseñado como altamente eficaz o mejor para tratamiento o prevención tópico, oral, subcutáneo, sistémico o dermatológico, tópico cosmético de trastornos proliferativos en hombres o animales. Es especialmente adecuada para el tratamiento/prevención de psoriasis, tumores dérmicos o tumores del tracto gastrointestinal o del tracto urinario eferente, así como enfermedades virales como SIDA, CMV, HSV, inflamaciones como artritis, enfermedades reumatoides, dermatitis, enfermedades del aparato locomotor. Para ello, se formula la composición de avarol como agente farmacéutico o dermatológico o cosmético eficaz en forma de una pomada, crema, loción, solución, gel, composición liposomal o nanoparticulada, comprimidos, glóbulos o cápsulas, con uno o varios aditivos o coadyuvantes farmacéuticos o cosméticos habituales. Por consiguiente, para un agente cosmético puede presentarse una dosis eficaz reducida frente al agente farmacéutico eficaz. Puede presentarse también aquí una combinación con otros principios activos como, por ejemplo, extractos naturales (manzanilla, hamamelis, caléndula, etc.).

Para la fabricación de una forma de administración líquida puede disolverse el producto sólido en un medio deseado, como en agua, alcohol, especialmente etanol, propanol, etilenglicol, propilengicol o mezclas de los mismos, solución de sal común fisiológica u otros vehículos admisibles farmacéuticamente adecuados o mezclas de los mismos, pudiendo ajustarse respectivamente después la concentración deseada. Con vehículos líquidos, se obtienen geles, inyecciones y soluciones. Con el uso de fases grasas adecuadas, pueden fabricarse de modo conocido cremas o pomadas. Como fases grasas son adecuadas, por ejemplo, aceites o ceras naturales como aceite de almendra, aceite de semilla de melocotón, aceite de semilla de trigo, aceite de girasol, de yoyoba o aceite de oliva o hidrocarburos como parafinas líquidas (parafina líquida ligera), isoparafinas, dioctilciclohexano, isohexadecano o escualeno, escualano, especialmente también alcohol oleílico, octildodecanol (Eutanol® G); ésteres de ácido graso, por ejemplo, éster del ácido graso isopropílico (palmitato, miristato, isoestearato, oleato) o similares; además triglicéridos como triglicéridos caprílico/cáprico (Miglyol® 810, 812), dicaprilato/dicaprato de propilenglicol (Miglyol® 840); o aceites y ceras de silicona. Son componentes oleosos especialmente preferidos parafinas líquidas y aceites naturales.

Preferiblemente, no se utilizan emulsionantes. Pero en caso de que sean necesarios, podrían utilizarse productos conocidos y comunes para ello, por ejemplo, emulsionantes de agua en aceite o aceite en agua. A los emulsionantes de agua en aceite pertenecen, por ejemplo, alcohol cetilestearílico, monoestearato de glicerol o Span® 85 (trioleato de sorbitán) u otros derivados de sorbitán farmacéuticos habituales como se encuentran en las farmacopeas comunes, o productos análogos como Arlacel 85, Span 65 (triestearato de sorbitán), Arlacel 65, monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, Span 40, Arlacel 40, Span 20 u otros análogos farmacéuticos tecnológicamente habituales.

Pertenecen a los emulsionantes de aceite en agua adecuados polietilenglicoles con grado de etoxilación adecuado como, por ejemplo, polioxietilenglicol 400-monoestearato, -oleileter, -monolaurato de sorbitán, -triestearato de sorbitán.

Para la fabricación de pomadas se usan preferiblemente hidrocarburos y alcoholes de lanolina.

Para la fabricación de cápsulas o comprimidos se utilizan coadyuvantes corrientes para ello como lactosa, sacarosa, sorbita, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, goma arábiga, almidón de patata, gelatina, PVP, conservantes, así como materiales habituales para revestimientos como PEG 6000, almidón de maíz, azúcar, talco.

Las cantidades de aditivos grasos, eventualmente emulsionantes, y los procedimientos de formación de comprimidos son generalmente conocidos y se describen, por ejemplo, en DAB10 o la farmacopea europea actual.

Eventualmente, el avarol puede transformarse en derivados adecuados que son farmacéuticamente compatibles y liberarse con la aplicación de la forma de principio activo. Pertenecen a ellos ésteres como acetatos, propionatos, butiratos, valeratos, caprilatos, succinatos (C-2 y/o C-5), que son conocidos como tales y, por ejemplo, se describen en el documento US-A 5.082.865 anteriormente citado.

Las cantidades del agente administrado y el plan de dosificación para el tratamiento de un estado patológico o preventivo con el agente descrito dependen de una pluralidad de factores, incluyendo la edad, peso, sexo y estado médico/cosmético del paciente, la gravedad de la enfermedad, la vía de administración y el compuesto usado respectivo, y pueden oscilar por tanto ampliamente. En la fabricación de formulaciones pueden añadirse, eventualmente, uno o varios coadyuvantes que son adecuados para la vía de administración dada. Cuando se administra por vía oral, puede mezclarse el producto seco descrito también con lactosa, sacarosa, almidón en polvo, éster de celulosa o ácidos alcanoicos, alquilésteres de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, gelatina, goma arábiga, alginato de sodio, glicoles, polivinilpirrolidona y/o polivinilalcohol, y después formar comprimidos o encapsularse para una administración sencilla. Las formulaciones para administración parenteral pueden presentarse en forma de soluciones o suspensiones de inyección estéril isotónicas acuosas o no acuosas. Estas soluciones y suspensiones pueden fabricarse a partir del producto cristalino según la invención con uno o varios de los coadyuvantes como se han citado para el uso en las formulaciones para administración oral. Los agentes pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro de sodio y/o distintos tampones (tampones de nitrógeno/fosfato/sulfato/carbonato). Con agua/alcohol como disolvente, se forman de nuevo los geles ya descritos. Pueden presentar también reguladores del pH como HCl, tampón de ácido fosfórico, NaOH, EDTH-Na o NH_{4}OH, K_{2}CO_{3} u otros. Además, los productos de administración tópica pueden contener perfumes, colorantes, a los que pertenecen también los terpenos citados, o filtros de UV como dióxido de titanio, o reforzante.

Eventualmente, pueden contener también estabilizantes y conservantes, pero en general pueden evitarse.

La cantidad de aditivos asciende preferiblemente a 0-10, especialmente 0,1-5% en peso en total.

Especialmente, pueden tratarse o prevenirse estados/enfermedades inflamatorios como artritis, inflamaciones bacterianas y microbianas, psoriasis, enfermedad reumáticas, así como alteraciones degenerativas del aparato locomotor.

Además, pueden realizarse también aplicaciones orales en infecciones virales como se han descrito.

Son muy especialmente preferidas las aplicaciones tópicas en forma de cremas, pomadas, geles, antes todo el uso de cremas.

Para una aplicación oral, son adecuados productos de tipo gel (hidro- o lipogeles), o ante todo glóbulos.

Ejemplos

La invención se ilustrará detalladamente mediante los siguientes ejemplos.

I. Fabricación de composiciones de avarol que contienen 60-98% de avarol Ejemplo 1

Se recubre esponja Dysidea avara recién recogida (peso húmedo aprox. 300 g) con 500 ml de etanol (al 90%) que contienen 30 g de ditionito de sodio, y se agita vigorosamente (conserva de etanol). Así, se disuelve el avarol de las células de esponja, dejándose reposar varios días la mezcla. Precipita de la solución alcohólica mediante la adición de agua y se separa de modo conocido como filtración o separación por filtración con succión. El material de partida original extraído una vez (esponja) puede tratarse de nuevo con etanol/ditionito fresco en menores cantidades que las dadas anteriormente, se tratan los extractos combinados, por ejemplo, con agua que contiene preferiblemente ditionito, y se obtiene así el producto deseado.

A partir del cromatograma de TLC/HPLC según la Fig. 1 (a la izquierda: avarol puro (comp.), en el centro y a la derecha composición según la invención (inv. 1 así como a continuación ej. 3= inv. 3) y de la RMN de la solución de conservación etanólica se proporciona un contenido de aprox. 80% o 85-90% de avarol y aprox. 20% o 10-15% de otros compuestos, a saber antioxidantes como los descritos.

Ejemplo 2

Se repite el procedimiento descrito en el ejemplo 1 con la variación de que se usó como disolvente (agente de extracción) metanol (al 99%, 450 ml) y como reductor sulfito de sodio (50 g).

Ejemplo 3

Se mezclan de nuevo varios extractos de disolvente obtenidos según el ejemplo 1 de los que se ha extraído el avarol mediante la primera extracción descrita, pero todavía no se ha separado (los extractos combinados de aproximadamente 300 g de material de esponja húmeda), con agua que contiene ditionito de sodio (al 0,01% en un litro de agua). La solución se vuelve turbia y en poco tiempo forma un precipitado floculento. Se deja reposar preferiblemente durante una noche en frigorífico y se filtra después. Se obtienen 2,95 g de un polvo blanco-beis cuyo cromatograma en capa fina RP-18 con metanol como fase móvil es idéntico al cromatograma del extracto etanólico original (ej. 1), y presenta avarol en gran medida, aprox. 85-90%, y aprox. 10-15% de sustancias antioxidantes. Esto podría mostrarse también en el ensayo cualitativo del antioxidante radicálico difenilpicrilhidrazilo (DPPH) del modo siguiente:

Se purifican mediante cromatografía el extracto obtenido, así como paralelamente avarol puro, mediante placas de TLC de fase inversa de la compañía Merck, Darmstadt, con metanol. Después del desarrollo del cromatograma, se considera la radiación UV de onda corta y se marcan las sustancias detectables. A continuación, se detecta el cromatograma con 1 x 10^{-6} mol de difenilpicrilhidrazilo (DPPH) en metanol. Mediante la tinción del fondo violeta, se demuestran las sustancias antioxidantes eficaces en el extracto primario según la invención. En la Fig. 2 se observa el cromatograma de avarol puro (comp.) y de composición de avarol según la invención según el ejemplo 3 (inv. 3) (aquí llamado extracto primario), y muestran además de avarol una proporción de compuestos antioxidantes como se han descrito.

Es especialmente adecuado dicho extracto para la aplicación tópica, por ejemplo, en cremas, etc. para el tratamiento concomitante de la psoriasis.

II. Fabricación de avarol puro a partir de composiciones que contienen avarol Ejemplo 4

A partir de los extractos combinados que se lograron en una primera etapa de extracción según el ejemplo 2, con la variación de que se utilizó allí bisulfito de sodio y etanol, precipitó mediante la adición de agua y se logró cristalino. Este cristalizado (10 g) se disolvió el 150 ml de metanol, se añadió a un extractor líquido-líquido y se mezcló con 500 ml de éter de petróleo (40-70ºC). Eventualmente, puede mezclarse aquí la fase polar con agua, en caso de que la separación de fases sea inaceptable. El avarol pasa después a la fase apolar, pudiéndose potenciar ésta mediante calentamiento del éter de petróleo en la muestra. Después de terminar, puede dejarse reposar durante una noche. Al día siguiente, pueden separarse de la fase polar los cristales incoloros con forma de haz precipitados. El avarol obtenido es ya analíticamente puro. P.f.: 152,3ºC (no corr.), bibl. 148-150ºC (según Tetrahedron Letters 1974,
3401).

Ejemplo 5

Como material de partida, se neutraliza un extracto logrado con acetato de etilo a partir de Dysidea avara de tipo alquitrán clásica hasta ahora (200 ml) con una solución acuosa de NaHCO_{3}, y se evapora en rotavapor. Se disuelve el aceite marrón oscuro restante con acetonitrilo y se calienta a reflujo con adición de carbón activo hasta que la solución es casi incolora. Después, se filtra y se mezcla con disulfito de sodio acuoso al 0,01%. Por consiguiente, precipita inmediatamente un precipitado blanco floculento. Se dejar reposar durante una noche en frigorífico y después se separa por filtración con succión mediante un filtro a succión. El precipitado combinado es avarol puro. P.f.: 152,3ºC (no corr.).

III. Ejemplos farmacológicos 1. Ensayo cuantitativo de antioxidante radicálico difenilpicrilhidrazilo (DPPH)

Se pipetean 2,5 x 10^{-7} mol de difenilpicrilhidrazilo (DPPH) en 2,5 ml de metanol en una cubeta de 1 cm. La cubeta comparativa contiene metanol. En la primera cubeta se añaden 3, 10, 30 y 100 \mul de una solución de medida que contiene el antioxidante avarol o un extracto según el ejemplo 3 de la presente invención (extracto nativo o primario) [1 x 10^{-7} mol en metanol], y se mide el desarrollo de la extinción a 515 nm durante 10 minutos en espectrofotómetro de doble haz.

El trazado de las curvas de reacción de avarol y de extracto primario es ciertamente comparable dentro de la precisión de medida del procedimiento. Sin embargo, si se normaliza al contenido de avarol, el extracto primario es superior a la sustancia pura al menos por un factor de 3.

2. Efecto del extracto en pacientes con psoriasis

10 pacientes de psoriasis tratados en hospital debido a lesiones progresivas recibieron en un ensayo de doble ciego para la evaluación del efecto antiinflamatorio una pomada con 1% de avarol puro en eucerina anhidra, o una pomada con el extracto al 1% según el ejemplo 3 de la presente invención en la misma base en forma de una administración de una vez sobre una superficie dérmica de al menos 10 cm^{2} de tamaño. Mediante un cuestionario estandarizado, deben evaluar los efectos de ambos tratamientos sobre el enrojecimiento de sus lesiones psoriásicas.

La valoración del cuestionario proporcionó que el extracto primario fue evaluado coincidentemente por 8 de 10 sujetos de ensayo como la preparación más eficaz

3. Ensayo de 5-lipooxigenasa

Se incubaron granulocitos de donantes voluntarios [5-10 x 10^{6}/ml] en solución de sal común fisiológica tamponada [pH 7,4] con ácido araquidónico [40 \mumol] e ionóforo de calcio [10 \mumol] y concentraciones crecientes [10 nmol a 10 \mumol] de las sustancias de ensayo, avarol o una composición de avarol según el ejemplo 3 a 37ºC durante 10 minutos. A continuación, se terminó la reacción mediante la adición de 1 ml de metanol, se centrifugaron las muestras y se analizó la concentración de productos de biotransformación de 5-lipooxigenasa en el sobrenadante mediante HPLC con UV de 280 a 235 nm. El avarol y la nueva composición con alto contenido de avarol, el extracto nativo de Dysidea avara, inhibieron la formación de productos de biotransformación de 5-lipooxigenasa. Sin embargo, los valores de CI_{50} se diferenciaban claramente de forma notable. Mientras que para el avarol se determinó un valor de CI_{50} de 1,3 \muM, que coincidía con los datos de la bibliografía, la nueva composición inhibía la formación de productos de 5-lipooxigenasa ya a un valor de CI_{50} de 58 nM, y por tanto era sorprendentemente más eficaz que el avarol.

Claims (20)

1. Procedimiento para la fabricación de una composición que contiene avarol en una cantidad de 60 a 98%, caracterizado porque se incorpora un material de partida que contiene avarol una o varias veces a un disolvente polar que contiene grupos hidroxilo, y se añade a esta mezcla uno o varios agentes reductores, seleccionados de sales alcalinas de compuestos de ditionito, disulfito, bisulfito, sales de selenita, ácido cítrico, ácido ascórbico, glutation, fosfitas o mezclas de los mismos en una cantidad de 0,01 a 20% en peso, referida a la cantidad de material de partida, y después se obtiene el producto presente en el disolvente.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque se utiliza como material de partida que contiene avarol esponjas marinas, biomasa de células de esponja o biomasa productora de avarol lograda mediante ingeniería genética.

3. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque se utilizan sales de sodio o potasio de compuestos de ditionito, disulfito o bisulfito como agentes reductores.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se realiza una reacción en disolvente que contiene agente reductor, y la concentración de agente reductor asciende de 3 a 15% en peso, referida a la cantidad de material de partida utilizada.

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque se realiza una reacción con una concentración de agente reductor de 3 a 15% en peso, y el extracto obtenido se separa, el material de partida se trata de nuevo una o varias veces con agente reductor en una cantidad respectiva de 0,01 a 3% en peso con disolvente, y después se separa respectivamente el extracto de disolvente con la composición que contiene avarol en la misma antes de la siguiente reacción, y eventualmente los extractos de disolvente obtenidos se combinan y se logra la composición que contiene avarol en la misma.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la composición de avarol se obtiene a partir del(de los) extracto(s) mediante precipitación por una o varias adiciones de agua o solución acuosa que contiene 0,01 a 10% en peso de agente reductor al(a los) extracto(s) de disolvente.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque se utiliza como disolvente polar que contiene grupos hidroxilo alcoholes C_{1-6} monohidroxílicos alifáticos, cicloalifáticos o alcoholes C_{1-6} sustituidos con grupos aromáticos.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado porque se usan como disolvente alcoholes monohidroxílicos seleccionados de etanol, metanol, propanol, isopropanol, butano, pentanol, hexanol o mezclas de los mismos o con agua.

9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque se añade agua al extracto que contiene avarol, después se logra la composición que contiene avarol en forma sólida, se disuelve ésta en un disolvente orgánico polar que contiene grupos hidroxilo, y después se añade un disolvente orgánico apolar en una cantidad para que recristalice avarol de alta pureza a partir de la fase apolar.

10. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque el disolvente polar se selecciona del grupo que abarca etanol, metanol o mezclas de los mismos o con agua, y el disolvente apolar se selecciona de hidrocarburos C_{4}-C_{10} alifáticos o cicloalifáticos o aromáticos.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque el disolvente apolar se selecciona de hexano, ciclohexano, éter de petróleo o mezclas de los mismos.

12. Procedimiento según una de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque se utiliza como material de partida esponjas marinas, biomasa de células de esponja o extractos de disolvente de esponjas marinas.

13. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque se disuelve la composición que contiene avarol en una etapa adicional en un disolvente que contiene grupos hidroxilo de modo que la concentración de avarol ascienda a 10 a 70%, y después se añaden 0,5 a 1,5 mol por mol de avarol de un agente oxidante seleccionado de sulfato de cerio (IV), sulfato de cerio (IV) y amonio, yodatos, peryodatos, vanadiatos o dióxido de estaño, y a continuación se logra el compuesto de quinolina formado (avarón) mediante precipitación.

14. Composición de avarol que abarca 65 a 95% en peso de avarol y 5 a 35% en peso de compuestos antioxidantes adicionales.

15. Agente farmacéutico o dermatológico eficaz en forma de una pomada, crema, loción, gel, preparación liposomal o nanoparticulada, solución, comprimido o cápsula, que contiene una composición según la reivindicación 14, así como uno o varios aditivos o coadyuvantes habituales.

16. Agente cosmético eficaz en forma de una pomada, crema, loción, gel, preparación liposomal o nanoparticulada, solución, comprimido o cápsula, que contiene una composición según la reivindicación 14, así como uno o varios aditivos o coadyuvantes habituales.

17. Agente tópico eficaz según la reivindicación 15 ó 16, caracterizado porque se presenta en forma de una crema, pomada o gel.

18. Uso de una composición de avarol según la reivindicación 14, 15 ó 17 o de una composición de avarón fabricada según la reivindicación 13, para la fabricación de un agente para el tratamiento o la prevención dermatológico oral, subcutáneo, sistémico o tópico de trastornos proliferativos en hombres y animales.

19. Uso según la reivindicación 18, caracterizado porque se trata o se previene psoriasis, tumores dérmicos o tumores del tracto gastrointestinal o de las vías urinarias eferentes, enfermedades virales, inflamaciones, dermatitis o alteraciones degenerativas del aparato locomotor.

20. Uso de una composición de avarol según la reivindicación 14, o de un agente según la reivindicación 16 ó 17, o de una composición de avarón fabricada según la reivindicación 13, para la fabricación de una composición para aplicación cosmética tópica en trastornos proliferativos en hombres y animales.