ES2270634T3

ES2270634T3 - Conversion de compuestos de inhibicion de cox que no son inhibidores selectivos de cox-2 en derivados que son inhibidores selectivos de cox-2.

Info

Publication number: ES2270634T3
Application number: ES99967416T
Authority: ES
Inventors: Amit S. Kalgutkar; Lawrence J. Marnett
Original assignee: Vanderbilt University
Current assignee: Vanderbilt University
Priority date: 1999-01-07
Filing date: 1999-12-16
Publication date: 2007-04-01
Anticipated expiration: 2019-12-16
Also published as: CN1337851A; CN1227008C; ATE328593T1; AU772705B2; AU2369700A; CA2358241A1; EP1148783A4; DE69931814D1; JP2002534361A; IL144126A0; EP1148783A1; WO2000040087A1; EP1148783B1; DE69931814T2; BR9917001A

Abstract

Procedimiento para alterar la especificidad de un compuesto inhibidor de ciclooxigenasa, que comprende los pasos de: (a)proporcionar un compuesto que tiene actividad inhibidora de ciclooxigenasa, teniendo el compuesto un resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, asociado con la actividad inhibidora de la ciclooxigenasa, estando el compuesto desprovisto de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2; y (b)alterar la especificidad del compuesto en el paso (a), pasando de estar desprovisto de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2 a tener especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2, mediante la conversión del compuesto que tiene el resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en un derivado que tiene un resto éster o un resto amida secundaria.

Description

Conversión de compuestos de inhibición de COX que no son inhibidores selectivos de COX-2 en derivados que son inhibidores selectivos de COX-2.

Interés del gobierno

Esta investigación fue financiada mediante una beca de investigación procedente de los Nacional Institutes of Health (Research Gran Nº. CA47479). Así pues, el gobierno de los Estados Unidos tiene determinados derechos sobre la invención.

Campo de la técnica

La presente invención está, en general, relacionada con derivados éster y derivados amida de diversos fármacos, más específicamente, con derivados de fármacos anti-inflamatorios no esteroides (NSAIDs). Incluso de forma más específica, la presente invención está relacionada con derivados éster y con derivados amida secundaria de NSAIDs, particularmente de indometacina (un NSAID), los cuales muestran un grado de inhibición para ciclooxigenasa-2 (COX-2) que supera con creces el grado de inhibición para ciclooxigenasa-1 (COX-1) y asimismo, todavía muestran los efectos analgésicos, anti-inflamatorios y/o antipiréticos de los NSAIDs, en animales vertebrados de sangre caliente, incluyendo humanos.

TABLA DE ABREVIATURAS

\underline{Abreviaturas}: \underline{Definiciones}

NSAID: Fármaco anti-inflamatorio no esteroide

COOH: Resto ácido carboxílico

COX: Ciclooxigenasa

PGH_{2}: Prostaglandina H_{2}

PGD_{2}: Prostaglandina D_{2}

PGHS: Prostaglandina-endoperóxido-sintasa

PER: Peroxidasa

SAR: Relación estructura-actividad

GI: Gastrointestinal

IC_{50}: Concentración en \muM de indometacina (o de un derivado de indometacina) a la cual se obtiene el 50% de inhibición de la actividad de COX. Cuanto más bajo es el valor de IC_{50}, más potente es el fármaco.

BOC: terc-butoxicarbonilo

DMSO: Dimetilsulfóxido

^{14}C-AA: Ácido [1-^{14}C]-araquidónico

HPLC: Cromatografía líquida de elevado rendimiento

TLC: Cromatografía de capa fina

Mg: miligramo

Kg: Kilogramo

mL: Mililitro

\muM: Micromol/litro

\muL: Microlitro

TABLA (continuación)

\underline{Abreviaturas}: \underline{Definiciones}

N: Normal (cuando se utiliza conjuntamente con concentraciones de ácido)

NMR: Resonancia magnética nuclear

Et_{2}O: Éter dietílico

EtOAc: Acetato de etilo

Et_{3}N: Trietilamina

AcOH: Ácido acético

CDCl_{3}: Cloroformo deuterizado

rt: Temperatura ambiente (aproximadamente 72ºF, 22ºC)

BOP-Cl: Cloruro bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfórico (comercializado por Aldrich en Wisconsin) y ver también el artículo de publicación, Diago-Meseguer; Palomo-Coll; Fernandez-Lizarbe y Zugaza-Bilbao, "New Reagent for Activating Carbonil Groups; Preparation and Reactions of N,N-Bis[2-oxo-3-oxazolidinil]phosphorodiamidic Chloride", Síntesis (1980) pp. 547-551.

mp: Punto de fusión

FBS: Suero bovino fetal

DMEM: Medio esencial modificado por Dulbecco

LPS: Lipopolisacárido

PBS: Solución salina tamponada por fosfato

IFN-g: Interferon gamma

DCC: Diciclohexilcarbodiimida

DMAP: 4-dimetilaminopiridina.

Antecedentes de la invención

Tal y como se discute más adelante con mayor detalle, el enzima COX hace referencia, en realidad, a dos enzimas, COX-1 y COX-2, los cuales desempeñan funciones fisiológicas y patofisiológicas diferentes. Tal y como resulta sabido, a dosis anti-inflamatorias y/o analgésicas, la indometacina, la aspirina y otros NSAIDs llevan a cabo una gran inhibición de COX-1, la cual protege el revestimiento del estómago de los ácidos, además de una relativamente mínima inhibición de COX-2, que provoca inflamación en respuesta a lesiones de articulaciones o enfermedades de tipo artrítico. Asimismo, determinados NSAIDs muestran esencialmente la misma actividad inhibidora frente a COX-1 y COX-2. Así pues, la reducción a cero de únicamente la inhibición de COX-2 ha constituido el objetivo de los que han desarrollado fármacos durante varios años, con vistas a reducir o eliminar la irritación GI provocada por la inhibición de COX-1.

Más específicamente, tal y como se discute en Smith, Garavito y DeWitt, "D.L. Prostaglandin Endoperoxide H Synthases (Cyclooxygenases)-1 and -2", J. Biol. Chem., (1996) Vol. 271, pp. 33157-33160, el paso pertinente en la biosíntesis de prostaglandina y tromboxano conlleva la conversión de ácido araquidónico en PGH_{2}, el cual es catalizado a través de la acción secuencial de las actividades COX y PER de PGHHS, tal y como se refleja en el siguiente esquema:

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El hecho de que la actividad COX procede de dos enzimas distintos regulados de forma independiente, denominados COX-1 y COX-2, es descrito por DeWitt y Smith en "Primary Structure of Prostaglandin G/H Synthase from Sheep Vesicular Gland Determined from the Complementary DNA Sequence", Proc. Natl. Acad. Sci; USA (1988) Vol 85, pp. 1412-1416; Yokohama and Tanabe, "Cloning of Human Gene Encoding Prostaglandin Endoperoxide Synthase and Primary Structure of the Enzyme", Biochem. Biophys. Res. Commun. (1989) Vol. 165, pp 888-894; y Hla and Neilson, "Human Cyclooxigenase-2-cDNA", Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) Vol. 89, pp. 7384-7388.

La COX-1 constituye la isoforma constitutiva y es principalmente responsable de la síntesis de las prostaglandinas protectoras en el tracto GI y de la síntesis de tromboxano, el cual desencadena la agregación plaquetaria en las plaquetas sanguíneas. Ver, Allison, Howatson, Torrence, Lee y Russell, "Gastrointestinal Damage Associated with the Use of Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs", N. Engl. J. Med. (1992) Vol. 327, pp. 749-754.

Por otro lado, la COX-2 resulta inducible y es de vida corta. Su expresión es estimulada en respuesta a endotoxinas, citoquinas y mitógenos. Ver, Kujubu, Fletcher, Varnum, Lim y Herschman, "TIS10, A Phorbol Ester Tumor Promoter Inducible mRNA from Swiss 3T3 Cells, Encodes a Novel Prostaglandin Synthase/Cyclooxygenase Homologue", J. Biol. Chem. (1991) Vol. 266, pp. 12866-12872; Lee, Soyoola, Chanmugam, Hart, Sun, Zhong, Liou, Simmons and Hwang, "Selective Expression of Mitogen-Inducible Cyclooxygenase in Macrophages Stimulated with Lipopolysaccharide", J. Biol. Chem.(1992) Vol. 267, pp. 25934-25938; and O’Sullivan, Huggins, Jr; and Mccall, "Lipopolysaccharide-induced Expression of Prostaglandin H Synthase-2 in Aveolar Macrophages is inhibited by Dexamethasone by not by Aspirin", Biochem. Biophys. Res. Commun. (1993) Vol. 191, pp. 1294-1300.

Es importante mencionar que la COX-2 desempeña un papel importante en la biosíntesis de prostaglandina en células inflamatorias (monocitos/macrófagos) y en el sistema nervioso central. Ver, Masferrer, Zweifel, Manning, Hauser, Leahy, Smith, Isakson y Seibert, "Selective Inhibition of Inducible Cyclooxigenase-2 in vivo is Antiinflammatory and Nonuncleogenic", Proc. Natl. Acad. Sci, USA (1994) Vol 91, pp. 3228-3232; Vane, Mitchell, Appleton, Tomlinson, Bishop-Bailey, Croxtall and Willoughby, "Inducible Isoforms of Cyclooxigenasase and Nitric Oxide Synthase in Inflammation", Proc. Natl. Acad. Sci., USA (1994) Vol 91, pp. 2046-2050; Harada, Hatanaka, Saito, Majima, Ogino, Kawamura, Ohno, Yang, Katori and Yamamoto, "Detection of Inducible Prostaglandin H Synthase-2 in Cells in the Exudate of Rat Carrageenin-induced Pleurisy", Biomed. Res. (1994) Vol 15 pp. 127-130 Katori, Harada, Hatanaka, Kawamura, Ohno, Aizawa and Yamamoto, "Induction of Prostaglandin H Synthase-2 in Rat Carragenin-Induced Pleuresy and Effect of a Selective COX-2 inhibitor", Advances in Prostaglandin, Thromboxane and Leukotriene Research (1995) Vol 23, pp. 345-347; and Kennedy, Chan, Culp and Cromlish, "Cloning and Expression of Rat Prostaglandin Endoperoxide Synthase (Cyclooxygenase-2)cDNA", Biochem. Biophys. Res. Commun. (1994) Vol. 197, pp. 494-500.

Por lo tanto, la distribución tisular diferencial de COX-1 y COX-2 proporciona una base para el desarrollo de fármacos que son inhibidores COX-2 selectivos (a saber, la especificidad para la inhibición de COX-2 supera con creces la inhibición de COX-1), como agentes anti-inflamatorios, analgésicos y/o antipiréticos, con minimización de, o ausencia de, responsabilidades hematológicas y GI derivadas de la inhibición COX-1, que afectan a la mayor parte de los NSAIDs comercializados en la actualidad, muchos de los cuales inhiben tanto a la COX-1 como a la COX-2, con la especificidad para la inhibición COX-1 excediendo con creces la inhibición de COX-2, si bien algunos presentan una actividad inhibidora esencialmente similar frente tanto a COX-1 como a COX-2. Ver, por ejemplo, Meade, Smith y DeWitt, "Differential inhibition of Prostaglandin Indoperoxide Synthase (Cyclooxigenase) Isozymes by Aspirin and other Non-Steroidal Antiinflammatory Drugs", J. Biol. Chem., (1993) Vol 268, pp. 6610-6614.

Se ha informado acerca de estudios SAR detallados para dos clases estructurales generales de inhibidores COX-2 selectivos (la especificidad para la inhibición de COX-2 excede con creces la inhibición COX-1) incluyendo determinadas sulfonamidas ácidas y determinados diarilheterociclos. Las actividades in vivo de estos inhibidores selectivos COX-2 validan el concepto de que la inhibición selectiva COX-2 resulta anti-inflamatoria y no ulcerogénica, tal y como se discute en los siguientes artículos de publicaciones: Gans, Galbraith, Roman, Haber, Kerr, Schmidt, Smith, Hewes y Ackerman, "Anti-inflammatory and Safery Profile of DuP 697, a Novel Orally Effective Prostaglandin Syntesis Inhibitor", J. Pharmacol. Exp. Ther. (1990) Vol. 254, pp. 180-187; Penning, Talley, Bertenshaw, Carter, Collins, Doctor, Graneto, Lee, Malecha, Miyashiro, Rogers, Yu, Anderson, Burton, Cogburn, Gregory, Koboldt, Perkins, Seibert, Veenhuizen, Zhang and Isakson, "Synthesis and Biological Evaluation of the 1,5-Diarylpyrazole Class of Cyclooxigenase-2 inhibitors: Identification of 4-[5-(4-Methylphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1-H-pyrazol-1-yl]benzenesulfonamide (SC-58635, Celecoxib)", J. Med. Chem. (1997) Vol. 40, pp. 1347-1365; Khanna, Weier, Yu, Xu, Kosyk, Collins, Koboldt, Veenhuizen, Perkins, Casler, Masferrer, Zhang, Gregory, Seibert and Isakson, "1,2-Diarylimidazoles as Potent Cyclooxigenase-2 Selective, and Orally Active Antiinflammatory Agents", J. Med. Hem. (1997) Vol. 40, pp. 1634-1647; Khanna, Weier, Yu, Collins, Miyashiro, Koboldt, Veenhuizen, Curie, Siebert and Isakson; "1,2-Diarylpyrroles as Potent and Selective Inhibitors of Cyclooxigenase-2", J. Med. Chem. (1997) Vol. 40, pp. 1619-1633; Tsuji, Nakamura, Konishi, Tojo, Ochi, Senoh and Matsuo, "Synthesis and Pharmacological Properties of 1,5-Diarylazoles and Related Derivatives", Chem. Pham. Bull. (1997) Vol 45, pp. 987-995; Riendeau, Percival, Boyce, Brideau, Charleson, Cromlish, Ethier, Evans, Falgueyret, Ford-Hutchinson, Gordon, Greig, Gresser, Guay, Kargman, Leger, Mancini, O’ Neill, Quellet, Rodger, Therien, Wang, Webb, Wong, Xu, Young, Zamboni, Prasit and Chan, "Biochemical and Pharmacological Profile of a Tetrasubstituted Furanone as a Highly Selective COX-2 inhibitor", Br. J. Pharmacol (1997) Vol 121, pp. 105-117; Roy, Leblanc, Ball, Brideau, Chan, Chauret, Cromlish, Ethier, Gauthier, Gordon, Greig, Guay, Kargman, Lau, O’ Neill, Silva, Therien, Van Staden, Wong, Xu and Prasit, " A New Series of Selective COX-2 Inhibitors: 5,6-Diarylthiazolo[3,2-b][1,2,4]-triazoles", Bioorg. Med. Chem. Lett. (1997) Vol 7, pp. 57-62: Therien, Brideau, Chan, Cromlish, Gauthier, Gordon, Greig, Kargman, Lau, Leblanc, Li, O’ Neill, Riendeau, Roy, Wang, Xu, and Prasit, "Synthesis and Biological Evaluation of 5,6-Diarylimidazo[2,1-b]thiazoles as Selective COX-2 Inhibitors", Bioorg. Med. Chem. Lett. (1997) Vol 7, pp. 47-52; Li, Norton, Reinhard, Anderson, Gregory, Isakson, Koboldt, Masferrer, Perkins, Seibert, Zhang, Zweifel and Reitz, "Novel Terphenyls as Selective Cyclooxygenase-2-inhibitors and Orally Active Antiinflammatory Agents", J. Med. Cem. (1996) Vol 39, pp. 1846-1856; Li, Anderson, Burton, Cogburn, Collins, Garland, Gregory, Huang, Isakson, Koboldt, Logusch, Norton, Perkins, Reinhard, Seibert, Veenheuzen, Zhang and Reitz, "1,2-Diarylcyclopentenes as Selective Cyclooxygenase-2-Inhibitors and Orally Active Antiinfallamtory Agents", J. Med. Chem. (1995) Vol 38, pp. 4570-4578; Reitz, Li, Norton, Reinhard, Huang, Penick, Collins and Garland, "Novel 1,2-Diarylcyclopentenes are Selective Potent and Orally Active Cyclooxygenase Inhibitors", Med. Chem. Res. (1995) Vol. 5, pp. 351-363; Futaki, Yoshikawa, Arai, Higuchi, Lizuka and Otomo, "NS-398, A Novel Nonsteroidal Antiinflammatory Drug with Potent Analgesic and Antipyretic effects, which Causes Minimal Stomach Lesions", Gen. Pharmacol. (1993) Vol 24, pp. 105-110; Wiesenberg-Boetcher, Schweizer, Green, Muller, Maerki, and Pfeilschifter, "The Pharmacological profile of CGP 28238, A Novel Highly Potent Antiinfallamtory Compound", Drugs Exctl. Clin. Es. (1989) Vol XV, pp. 501-509; Futaki, Takahashi, Yokohama, Arai, Higuchi, and Otomo, "NS-398, A New Anti-Inflammatory Agent, Selectively Inhibits Prostaglandin G/H Synthase/Cyclooxygenase (COX-2) Activity in vitro", Prostaglandins (1994), Vol 47, pp. 55-59; Klein, Nusing, Pfeilschifter and Ullrich, "Selective Inhibition of Cyclooxygenase-2", Biochem. Pharmacol. (1994) Vol 48, pp. 1605-1610; Li, Black, Chan, Ford-Hutchinson, Gauthier, Gordon, Guay, Kargman, Lau, Mancini, Quimet, Roy, Vickers, Wong, Young, Zamboni and Prasit, "Cyclooxygenase-2-inhibitors. Synthesis and Pharmacological Activities of 5-Methansulfonamido-1-indanone Derivatives", J. Med. Chem, (1995) Vol 38, pp. 4897-8905; Prasit, Black, Chan, Ford-Hutchinson, Gauthier, Gordon, Guy, Kargman, Lau, Li, Mancini, Quimet, Roy, Tagari, Vickers, Wong, Young, and Zamboni, "L-745,337: A Selective Cyclooxygenase inhibitor", Med. Chem. Res. (1995) Vol 5, pp. 364-374; Tanaka, Shimotori, Makino, Aikawa, Inaba, Yoshida and Takano, "Pharmacological Studies of the New Anti-inflammatory Agent 3-Formylamino-7-methylsulphonylamino-6-phenoxi-4H-1-benzopyran-4-one. 1^{st} Communication: Anti-inflammatory, Analgesic and Other Related Properties", Arzniem-Forsch. IDrug Res. (1992) Vol 42, pp. 935-944; Nakamura, Tsuji, Konishi, Okamura, and Matsuo, "Studies on Anti-Inflammatory Agents. 1-Synthesis and Pharmacological Properties of 2’-(phenylthio)methanesulphonamides and Related Derivatives", Chem Pharm. Bull 1993) Vol 41, pp. 894-906; Chan, Boyce, Brideau, Ford-Hutchinson, Gordon, Guay, Hill, Li, Mancini, Penneton, Prasit, Rasori, Riendeau, Roy, Tagari, Vickers, Wong and Rodger, "Pharmacology of a Selective Cyclooxygenase-2-inhibitor, L-745,337: A novel Nonsteroidal Anti-Inflammatory Agent with an Ulcerogenic Sparing Effect in Rat and Nonhuman Primate Stomach", J. Pharmacol. Exp. Ther. (1995) Vol 274, pp. 1531-1537; and Graedon and Graedon, "Pills Promise Relief without Ulcers", The Raleigh, North Carolina News and Observer, p 8D (September13, 1998) que trata, en términos generales, acerca del desarrollo de celecoxib, meloxicam, y vioxx como inhibidores COX-2 selectivos.

Constituyen sulfonamidas ácidas y diarilheterociclos representativos, acerca de los cuales se ha informado que son inhibidores COX-2 selectivos en los artículos de la publicación mencionada en el párrafo anterior:

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A pesar de que las sulfonamidas ácidas y los diarilheterociclos han sido estudiados de forma intensiva como inhibidores COX-2 selectivos, existen muy pocos informes acerca de la conversión de NSAIDs que son inhibidores COX-1 selectivos en inhibidores COX-2 selectivos. Ver, Black, Bayly, Belley, Chan, Charleson, Denis, Gauthier, Gordon, Guay, Kargman, Lau, Leblanc, Mancini, Quellet, Percival, Roy, Skorey, Tagari, Vickers, Wong, Xu y Prasit, "From Indomethacin to a Selective COX-2 Inhibitor: Development of Indolalkanoic Acids as Potent and Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitors", Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996) Vol. 6, pp. 725-730; Luong, Miller, Barnett, Chow, Ramesha y Browner, "Flexibility of the NSAID Binding Site in the Structure of Human Cyclooxigenase-2", Nature Structural Biol. (1996) Vol. 3, pp. 927-933; y Kalgutkar, Crews, Rowlinson, Garner, Seibert y Marnett, "Aspirin-Like Molecules that Covalently Inactivate Cyclooxigenase-2", Science (1998) Vol 280, pp. 1268-1270; Patente USA Nº. 5.681.964 (concedida en 1997) a Ashton et al, cedentes a la University of Kentucky Research Foundation, la cual muestra la conversión de indometacina (un NSAID) en determinados derivados éster con reducción concomitante de la irritación GI (ver la Fig. 1 de la patente USA nº. 5.681.964, para la estructura de los derivados éster); y las patentes USA nº. 5.607.966 (inicial) (concedida en 1997) y la nº. 5.811.438 (CIP) (concedida en 1998), ambas a favor de Hellberg et al, cedentes a Alcon Laboratoires, las cuales muestran la conversión de diversos NSAIDs (tales como la indometacina) en determinados derivados éster y derivados amida (que resultan de utilidad como antioxidantes e inhibidores de 5-lipoxigenasa), pero que no tratan la inhibición COX-2 selectiva.

Además, si bien las patentes USA nºs. 3.285.908 (concedida en 1966) y 3.336.194 (concedida en 1967), ambas a favor de Shen, cedente para Merck & Co., Inc., describen diversos derivados amida secundaria y terciaria de indometacina, las citadas patentes no se refieren a la inhibición COX, debido probablemente a que la inhibición COX (tanto la COX-1 como la COX-2) no había sido descubierta en la década de 1960 y, por consiguiente, no reconocen que los derivados amida terciaria no inhiben ni a la COX-1 ni a la COX-2. (Ver también los ejemplos comparativos 36 y 37 en el Ejemplo II indicado más adelante). No obstante, las patentes USA nºs. 5.436.265 (concedida en 1995) a favor de Black et al. y la nº. 5.510.368 (concedida en 1996) a favor de Lau et al., ambas cedidas a Merck Frosst Canada, Inc., describen, respectivamente, ácidos 1-aroit-3-indotit-alcanoicos y ácidos N-bencil-3-indolacético como inhibidores COX-2 selectivos.

En la presente investigación, se ha explorado la posibilidad de designar inhibidores COX-2 selectivos utilizando, como plantillas, diversos NSAIDs (1) que son inhibidores COX-1 selectivos o (2) que presentan esencialmente la misma capacidad inhibidora para la COX-1 como para la COX-2. A estos dos tipos de NSAIDs se les conoce como NSAIDs que no son inhibidores COX-2 selectivos.

Más particularmente, el análisis de la estructura cristalina de COX-2 complejada con inhibidores COX-2 selectivos derivados de zomepiraco indica que la base estructural para la selectividad por los compuestos derivados de zomepiraco es diferente que la de los diarilheterociclos. Ver, la referencia Luong et al., mencionada anteriormente. A diferencia de los diarilheterociclos, los análogos de zomepiraco no utilizan el bolsillo lateral, por el contrario, ubican la constricción en la boca del punto activo COX ocupado por Arg 106 y Tyr 341 y se proyectan hacia la región de entrada. La proyección hacia esta región estéricamente no congestionada en el punto activo COX-2 abre la posibilidad de que la preparación de una amplia diversidad de fármacos análogos que contienen COOH, tales como análogos de NSAIDs, cada uno de ellos con un grupo funcional colgante diferente que sustituye al OH o al H del COOH, permitiría obtener muchos de los objetivos relacionados con el descubrimiento o desarrollo de fármacos. Por ejemplo, determinados grupos colgantes podrían mejorar la solubilidad en agua, la biodisponibilidad o la farmacocinética. Otra posibilidad residiría en la unión de un farmacóforo colgante, con la finalidad de poder dirigirse a una proteína completamente diferente que conduzca a compuestos con funciones farmacológicas duales.

Abbott Laboratoires y Parke-Davies han intentado el planteamiento de farmacóforo. Ver, respectivamente, Kolasa, Brooks, Rodrigues, Summers, Dellaria, Hulkower, Bouska, Bell, y Carter, "Non-esteroidal Anti-inflammatory Drugs as Scaffolds for the Design of 5-Lipoxygenase Inhibitors", J. Med. Chem. (1997) Vol 40. pp. 819-824; y Flynn, Capiris, Cetenko, Connor, Dyer, Kostlan, Niese, Schrier y Sircar, "Nonsteroidal Antiinfallamtory Drug Hydroxamic Acids. Dual Inhibitors of both Cyclooxigenase and 5-Lypoxygenase", J. Med. Chem. (1990) Vol 33, pp. 2070-2072. Dyer, Kostian, Niese, Schrier and Sircar, "Nonsteroidal Antiinflammatory Drug Hydroxamic Acids. Dual Inhibitors of Both Cyclooxigenase and 5-Lipoxygenase", J. Med. Che. (1990) Vol. 33. pp. 20270-2072. Tanto Kolasa et al como Flynn et al informaron al respecto de que la sustitución del grupo ácido carboxílico en NSAIDs por un resto ácido hidroxámico o un resto hidroxiurea proporcionaba inhibidores duales de COX y de 5-lipoxigenasa. Sin embargo, ninguno de los análogos desplegaba una inhibición significativa para COX-2 y, además, los hidroxamatos eran susceptibles de sufrir una fácil hidrólisis.

Adicionalmente, resulta interesante destacar que el sulfuro de sulindaco (un NSAID que contiene un resto COOH al igual que un resto sulfuro de metilo) es un inhibidor 40 veces más potente frente a COX-1 que frente a COX-2. Por otro lado, un derivado, particularmente el sulindaco sulfona (que contiene un resto COOH al igual que un resto metilsulfona) no inhibe ni a COX-1 ni a COX-2.

No obstante, nada en la literatura discutida con anterioridad sugiere que la conversión de un NSAID que contiene un COOH que no resulta selectivo para la inhibición de COX-2, en un derivado éster o en un derivado amida secundaria daría lugar a un derivado selectivo para la inhibición COX-2. Por consiguiente, resultaría deseable encontrar determinados fármacos que contienen COOH, tales como NDAIDs, que no fueran inhibidores COX-2 selectivos (o bien mostrasen una inhibición para COX-1 que excediese con creces la inhibición COX-2 o mostrasen esencialmente la misma inhibición para COX-2 que para COX-1), los cuales, una vez convertidos en determinados derivados, se conviertan en inhibidores selectivos COX-2 (muestran una inhibición para COX-2 que sobrepasa holgadamente la inhibición para COX-1), al igual que mantengan el efecto analgésico, anti-inflamatorio y/o antipirético del fármaco, tal como el NSAID, con anterioridad a la derivatizacion.

Resumen y objetivos de la invención

De forma sorprendente en la presente invención, se ha averiguado que la derivatización del resto ácido carboxílico o de la sal farmacéuticamente aceptable del resto de diversos compuestos (por ejemplo, de determinados NSAIDs) que no son inhibidores COX-2 selectivos, tales como la indometacina, hacia análogos éster o hacia análogos de amida secundaria, da lugar a especificidad de isoenzima para COX-2. Además, el derivado éster o amida secundaria resultante no es tan solo un inhibidor COX-2 sino que también conserva los efectos analgésicos, anti-inflamatorios y/o antipiréticos del compuesto, a saber del NSAID.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para alterar la especificidad de un compuesto inhibidor de la ciclooxigenasa, comprendiendo el procedimiento los pasos de: (a) proporcionar un compuesto que tiene actividad inhibidora de ciclooxigenasa, teniendo el compuesto un resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo asociada con la actividad inhibidora de ciclooxigensasa, presentando el compuesto ausencia de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasas-2; y (2) alterar la especificidad del compuesto en el paso (a) de tal forma que pase de tener ausencia de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigensa-2 a presentar especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigensa-2, mediante la conversión del compuesto que tiene el resto ácido carboxílico o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en un derivado que tiene un resto éster o un resto amida secundaria.

Por consiguiente, constituye un objetivo de la presente invención el de proporcionar un fármaco derivado que minimice u obvie la irritación GI. Además, constituye una ventaja de la presente invención la de que el fármaco derivado es también analgésico, anti-inflamatorio, y/o antipirético, en ausencia de la administración concomitante del fármaco no derivatizado o de una sal farmacéuticamente aceptable del fármaco no derivatizado.

Habiendo sido expuestos algunos de los objetivos de la presente invención, resultarán evidentes otros objetivos a medida que se avanza en la descripción, cuando se tomen en consideración en unión de los Ejemplos de Laboratorio descritos más adelante.

Descripción detallada de la invención

La presente invención conlleva un procedimiento para convertir un fármaco en un inhibidor COX-2 selectivo y también para utilizar el inhibidor COX-2 selectivo para el tratamiento de un animal que es un vertebrado de sangre caliente. Por consiguiente, la invención está relacionada con mamíferos y con pájaros.

Se contempla el tratamiento de mamíferos, tales como humanos; al igual que el de aquellos mamíferos que resultan importantes debido a que se encuentran en peligro (tales como los tigres siberianos), que resulten importantes desde el punto de vista económico (animales criados en granjas para el consumo por humanos), y/o de importancia social (animales conservados como animales de compañía o en zoológicos) para los humanos, por ejemplo, carnívoros distintos de los humanos (tales como gatos y perros), porcinos (cerdos, cerdos castrados y jabalíes), rumiantes (tales como reses, bueyes, ovejas, jirafas, ciervos, cabras, bisontes y camellos), y caballos. Se contempla también el tratamiento de pájaros, incluyendo el tratamiento de aquellos tipos de pájaros que se encuentran en peligro, mantenidos en zoos, al igual que el de aves, y más particularmente el de aves domesticadas, a saber, volatería, tales como pavos, pollos, patos, gansos, pintadas y similares, dada su relevancia económica para los humanos. Por consiguiente, se contempla el tratamiento de ganado, incluyendo, sin que ello represente ninguna imitación, el porcino (cerdos y cerdos castrados), rumiantes, caballos, volatería y similares.

Más particularmente, al animal vertebrado de sangre caliente se le tiene que administrar una cantidad eficaz para el tratamiento de un derivado éster o de un derivado amida secundaria de un fármaco que contiene un ácido carboxílico, tal como un derivado de un NSAID. Por consiguiente, la invención comprende el uso médico del derivado en concentraciones que han sido calculadas para proporcionarle al animal que está siendo tratado con el medio adecuado un efecto analgésico, anti-inflamatorio o antipirético.

Por fármaco que contiene ácido carboxílico (tal como un NSAID) o fármaco que contiene COOH (tal como un NSAID), tal y como se utiliza en el presente documento en conexión con la presente invención, se pretende incluir sales de ácido farmacéuticamente aceptables del fármaco. Por consiguiente, el resto COOH incluye COOM, donde M es Na y similar.

Los compuestos derivados preferidos que resultan de utilidad en el uso médico de la presente invención son derivados amida secundaria o derivados éster de fármacos anti-inflamatorios no esteroides que tienen un resto carboxílico o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Se han identificado diversas clases químicas de NSAIDs y listado en el CRC Handbook of Eicosanoids: Prostaglandins and related Lipids, Vol. II, Drugs Actino Via the Eicosanoids, páginas 59-133, CRCPress, Boca Raton, Fla. (1989). Por lo tanto, el NSAID puede ser elegido de entre una diversidad de clases químicas que incluyen, sin que ello represente ninguna limitación, ácidos fenámicos, tales como ácido flufenámico, ácido niflúmico, y ácido mefenámico; indoles, tales como indometacina, sulindaco, y tolmetina; ácidos fenilalcanoicos, tales como suprofeno, ketorolaco, flurbiprofeno e ibuprofeno y ácidos fenilacéticos, tales como diclofenaco. Se proporcionan seguidamente nuevos ejemplos de NSAIDs:

aceloferaco	ácido etodólico	loxoprofeno
alcofenaco	fenbufeno	meclofenamato
amfenaco	fenclofenaco	naproxeno
benoxaprofeno	fencloraco	orpanoxina
bromfenaco	fenoprofeno	pirprofeno
carprofeno	ácido flecózico	pranoprofeno
cicladanaco	indoprofeno	ácido tolfenámico
diflunisal	isofezolaco	zaltoprofeno
ácido efenámico	ketoprofeno	zomopiraco

Mas específicamente, entre los derivados éster y derivados amida secundaria preferidos que resultan de utilidad en la presente invención se incluyen, sin que ello represente ninguna limitación, derivados éster y derivados amida secundaria de los siguientes NSAIDs que contienen COOH: ácido 6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético (y su forma sal ácida de Na, conocida como naproxeno), ácido meclofenámico, y diclofenaco, resultando preferidos los derivados éster y derivados amida secundaria de indometacina. Asimismo, los derivados éster y los derivados amida secundaria de indometacina, en los que el Cl en la posición 4 del resto benzoilo ha sido sustituido por Br o F, deberían funcionar en la presente invención. Incluso más preferidos resultan ser los derivados amida secundaria de indometacina, incluyendo, sin que ello represente ninguna limitación, indometacin-N-metilamida, indometacin-N-etan-2-olamida, indometacin-N-octilamida, indometacin-N-nonilamida, indometacin-N-(2-metilbencil)amida, indometacin-(4-metilbencil)amida, indometacin-N-((R)-4-dimetilbencilamida, indometacin-N-((S)-4-dimetilbencil)amida, indometacin-N-(2-fenetil)amida, indometacin-N-(4-fluorofenil)amida, indometacin-N-(4-clorofenil)amida, indometacin-N-(4-acetamidofenil)amida, indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida, indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida, indometacin-N-(4-metoxifenil)amida, indometacin-N-(3-etoxifenil)amida, indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida, indometacin-N-(3-piridil)amida, indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida, indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida, indometacin-N-(3-cloropropil)amida, indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida, indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-2-(2-D-metoxicarbonilamida), indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida, indometacin-N-(2-piracinil)amida, indometacin-N-2-(4-metiltiazolil)amida, indometacin-N-(4-bifenil)amida, y combinaciones de las mismas.

El derivado éster o el derivado amida secundaria puede ser administrado al animal en forma de supositorio, o como suplemento a los fluidos que son administrados por vía interna o parenteral, por ejemplo, los fluidos nutrientes tales como soluciones de sucrosa intravenosa. Además, se contempla también la administración intraoral (tal como la bucal o sublingual) o la transdérmica (tal como el parche sobre la piel). En las patentes USA nºs. 4.229.447, concedida el 21 de octubre de 1980 a Porter y en la USA nº. 5.504.086, concedida el 2 de abril de 1996 a Ellinwood y Gupta, puede observarse una buena discusión acerca de la administración intraoral. En la patente USA nº. 5.016.652, concedida el 21 de mayo de 1991 a Rose y Jarvik, se contiene una buena discusión acerca de la administración transdérmica.

Adicionalmente, la administración al animal puede ser efectuada a través de diversos procedimientos orales, por ejemplo en forma de comprimido, cápsula, o polvo (forma cristalina) que pueda ser engullido. Asimismo, la administración oral puede también incluir el que el derivado éster o el derivado amida secundaria sea mezclado en un soporte fluido adecuado para que pueda ser administrado como líquido (solución o suspensión) que sea bebible. Cuando el derivado es mezclado en un soporte fluido, entre los fluidos adecuados se incluyen, sin que ello represente ninguna limitación, agua, soluciones de rehidratación ( a saber, agua con electrolitos tales como citrato potásico y cloruro sódico, por ejemplo, la solución disponible bajo la marca RESOL® de Wyeth Laboratoires), fluidos nutricionales (a saber, leche, zumo de fruta), y combinaciones de los mismos. Así pues, la administración oral puede ser aplicada en forma de componente de la dieta, tal como alimento humano, alimento vegetal y combinaciones de los mismos.

Además de la administración oral, tal como a través de la boca, se contempla también la administración de una solución o suspensión al esófago, estómago y/o duodeno, tal como a través de sonda, a saber, a través de tubo de alimentación. La administración a través de sonda resulta de utilidad cuando el animal está muy enfermo y no puede engullir el alimento, medicina, etc, a través de la boca.

Por lo tanto, se contempla también el que, conjuntamente con el derivado, en cualquiera de sus formas, pueden encontrarse presentes ingredientes adicionales, tales como diversos excipientes, soportes, tensioactivos, nutrientes, y similares, al igual que diversos medicamentos, distintos de los derivados éster o de los derivados amida secundaria o de sus combinaciones. Entre los medicamentos distintos a derivados éster o derivados amida secundaria pueden incluirse, sin que ello represente ninguna limitación, polioles osmolíticos y aminoácidos osmolíticos (a saber, mioinositol, sorbitol, glicina, alanina, glutamina, glutamato, aspartato, prolina, y taurina), cardiotónicos (a saber, glicociamina), analgésicos, antibióticos, electrolitos (a saber, electrolitos orgánicos o minerales, tales como sales) y combinaciones de los mismos.

Una dosis adecuada de derivado éster o de derivado amida secundaria para ser administrada al animal debería oscilar entre aproximadamente 0,5 mg y aproximadamente 7,0 mg por Kg de peso corporal del animal, por día, más preferiblemente entre aproximadamente 1,5 mg y aproximadamente 6,0 mg de peso corporal de animal por día, e incluso más preferiblemente entre aproximadamente 2,0 mg y aproximadamente 5,0 mg por kilogramo de peso corporal de animal por día. La administración puede ser llevada a cabo una o más veces por día, hasta alcanzar la dosis total diaria deseada. Naturalmente, la cantidad puede variar en función de la gravedad de la enfermedad y/o de la gravedad del animal.

La presente invención indica que los compuestos que contienen ácido carboxílico que no son inhibidores selectivos COX-2, tales como el NSAID conocido como indometacina, cuando son convertidos en ésteres o en amidas secundarias, dan lugar a especificidad de enzima para COX-2 y presentan, por tanto, una estrategia eficaz para la generación de potentes y selectivos inhibidores COX-2. El estudio SAR extensivo descrito más adelante, llevado a cabo con indometacina, sugiere que se tolera una amplia diversidad de sustituyentes amida secundaria a la hora de sustituir el H en el resto COOH de la indometacina y que se tolera una amplia diversidad de sustituyentes amida secundaria a la hora de sustituir el OH en el resto COOH de la indometacina, y estos derivados resultantes son tan potentes y selectivos como inhibidores COX-2 como lo son los diarilheterociclos discutidos con anterioridad. Por lo tanto, la presente estrategia presenta un elevado potencial en el desarrollo de agentes anti-inflamatorios no ulcerogénicos.

Ejemplos de laboratorio

En relación con los materiales y procedimientos utilizados más adelante, se efectúan los siguientes comentarios.

Los ésteres que fueron preparados y sus propiedades de inhibición selectivas COX-2 se relacionan en la Tabla 1 que se indica más adelante. Se prepararon un total de 29 análogos (29 derivados éster) de indometacina. Las amidas que fueron preparadas y sus propiedades inhibidoras selectivas de COX-2 se relacionan en la Tabla 2 que se indica más adelante. Se prepararon un total de 31 análogos (31 derivados amida) de indometacina.

La mayoría de los ésteres NSAID fueron preparados por medio de tratamiento del NSAID con el fenol o alcohol adecuado, en presencia de DCC y DMAP, descrito en el presente documento como Procedimiento B (más adelante se ofrecen detalles al respecto de la preparación del éster a través del Procedimiento A). El esquema de reacción para la preparación del éster a través del Procedimiento B y el esquema de reacción para la preparación de la amida eran, respectivamente, los siguientes:

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Entre los diversos sustituyentes que contienen nitrógeno (a saber, aminas), que sustituyen al OH del grupo COOH con vistas a crear una amida, se incluyen restos aminoalquilo, aminoarilo, aminoarilalquilo, aminoéteres, o aminopiridinilo, formando parte del sustituyente que contiene nitrógeno. Los análogos de amida más potentes en las series de derivados de indometacina mostraron valores IC_{50} para la inhibición de COX-2 humana purificada en la banda nanomolar baja, con relaciones de selectividad para COX-2 que oscilan entre > 1000-4000. En la síntesis de los derivados amida de indometacina se utilizó una metodología bien establecida, mediante tratamiento de la indometacina con la amina adecuada (designada como R), utilizando BOP-Cl como activador ácido carboxílico para sustituir el OH del grupo COOH por R y crear una amida. Si R era una amina primaria, el derivado resultante era una amida secundaria y si R era una amina secundaria, el derivado resultante era una amida terciaria.

Más específicamente, una mezcla de reacción que contiene indometacina (300 mg, 0,84 mmol) y BOP-Cl (218 mg, 0,84 mmol) en 5 mL de CH_{2}Cl_{2} anhidro fue tratada con Et_{3}N (167 mg, 0,84 mmol) y se mantuvo en agitación a temperatura ambiente durante un período de 10 minutos. La mezcla fue tratada después con la amina adecuada (0,94 mmol), designada como R, y sometida a agitación durante el transcurso de una noche a temperatura ambiente. Después de dilución con CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se lavó la solución resultante con agua (2 x 25 mL), NaOH 3N (2 x 25 mL), agua (2 x 30 mL), se secó (en presencia de MgSO_{4}), filtró y se concentró el disolvente al vacío. La amida cruda fue purificada mediante cromatografía sobre gel de sílice o de recristalización con el disolvente adecuado.

Los valores IC_{50} para la inhibición de COX-2 humana purificada o de COX-1 ovina para los compuestos de prueba fueron determinados mediante los ensayos TLC discutidos más adelante. Se utilizó COX-1 ovina, dado que resulta muy fácil aislar y purificar el enzima obtenido a partir de vesículas seminales de oveja, mientras que la COX-1 humana se obtiene normalmente mediante sobre-expresión en un sistema celular de insecto y resulta muy difícil de manipular y, especialmente, de purificar. La COX-1 procedente de oveja es > 90% similar a la COX-1 obtenida a partir de humanos. Finalmente, se ha informado en la literatura acerca de la inhibición de COX-1 prodecente de estas dos fuentes mediante NSAIDs y los valores IC_{50} resultan similares, sugiriendo que no existen diferencias significativas en los puntos activos. La COX-1 fue purificada a partir de vesículas seminales de carnero obtenidas en Oxford Biomedical Research, Inc. (Oxford, Michigan). La actividad específica de la proteína era de 20 (\muMO_{2}/minuto)/mg, y el porcentaje de holoproteína era del 13,5%. Se obtuvieron muestras de COX-2 humana (1,62 \mug/\mul), mediante la expresión de COX-2 humana clonada en células de insectos, soportada sobre vectores bacilovirus, seguido de purificación. Los enzimas obtenidos después de la purificación eran apo (a saber, carecían del grupo hemprostético). Los mismos fueron reconstituidos con hematina adquirida en Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri) en ensayos para convertirlos en su estado natural, que es holo (a saber, la COX-1 y COX-2 de origen natural contienen el grupo hemprostético), por lo que la inhibición por parte de los compuestos objeto de comprobación tenía relevancia
fisiológica.

HoloCOX-2 (66 nM) u holoCOX-1 (44 nM) en Tris-HCl 100 mM, pH 8,0, conteniendo 500 \muM fenol, fue tratada con diversas concentraciones de indometacina, un éster derivado de indometacina o un derivado amida de indometacina, a 25ºC, por espacio de 20 minutos. Dado que la COX-2 recombinante presentaba una actividad específica más baja que la COX-1 ovina, las concentraciones de proteína fueron ajustadas de tal forma que los porcentajes totales de producto obtenido después de catálisis de ácido araquidónico (adquirido en Nu Check Prep, Elysian, Minnesota) mediante las dos isoformas resultaban comparables. Más específicamente, utilizando el ensayo TLC se determinó, de acuerdo con lo que se indica seguidamente, la inhibición dependiente del tiempo y la concentración de la actividad de ciclooxigenasa para la COX-1 ovina (44 nM) y para la COX-2 humana (66 nM). Las mezclas de reacción de 200 \muL contenían proteína reconstituida con hematina en Tris HCl 100 mM, pH 8,0; 500 \muL fenol y ácido [1-^{14}C]araquidónico (50 \muM, \sim 55-57 mCi/mmol). Para el ensayo de inhibición dependiente del tiempo, la COX-1 reconstituida por hematina (44 nM) o COX-2 (66 nM) fue preincubada a temperatura ambiente durante un período de 20 minutos, con concentraciones variantes de inhibidor en DMSO, seguido de adición de ácido [1-^{14}C]araquidónico (50 \muM), durante un período de 30 segundos a 37ºC. El ácido [1-^{14}C] araquidónico (\sim 55-57 mCi/mmol) fue adquirido en New England Nuclear Dupont, o en American Radiolabeled Chemicals (St. Louis, Missouri).

Las reacciones finalizaron mediante la extracción con disolvente en Et_{2}O/CH_{3}OH/ citrato 1M, pH 4,0 (30:4:1). Las fases fueron separadas mediante centrifugación a 2000 g de fuerza durante un período de 2 minutos y la fase orgánica fue depositada sobre una placa de TLC (obtenida en J.T.Baker, Phillipsburg, New Jersey). La placa fue revelada en EtOAc/CH_{2}Cl_{2}/AcOH glacial (75:25:1) a 4ºC. Los productos prostanoides radiomarcados fueron determinados cuantitativamente con un escáner de radioactividad (obtenido en Bioscan, Inc., Washington, D.C.). El porcentaje de productos totales observados a diferentes concentraciones de inhibidor fue dividido por el porcentaje de productos observado para muestras de proteína preincubadas durante el mismo tiempo con DMSO.

El control de experimentos en ausencia de indometacina indicaba que \sim 25-30% de conversión de sustrato de ácido graso en productos, lo cual resultaba suficiente para valorar las propiedades inhibidoras de la totalidad de compuesto objeto de comprobación. En estas condiciones, la indometacina desplegaba inhibición selectiva de COX-1 en función del tiempo y de la concentración (a saber, IC_{50} (COX-1) \sim 0,050 \muM; IC_{50} (COX-2) \sim 0,75 \muM), mientras que los derivados éster y los derivados amida secundaria mostraban inhibición COX-2 selectiva pero los derivados amida terciaria no inhibían ni a la COX-1 ni a la COX-2 (a saber, la medición de COX-2 se detuvo a una IC_{50} extremadamente elevada y todavía permanecía una inhibición de la actividad de COX-2 > 80%). Asimismo, lo siguiente es valido para NS-398 y 2-metil-4-fenil-5-sulfoamidofeniloxazol, dos de las sulfonamidas ácidas mencionadas anteriormente, es decir, NS-398: IC_{50} (COX-2) \sim 0,12 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM; y 2-metil-4-fenil-5-sulfoamidofeniloxazol: IC_{50} (COX-2) \sim 0,06 \muM; IC_{50} (COX-1)> 66 \muM.

Para determinadas pruebas comparativas, la inhibición de la actividad COX-2 en células RAW264.7 de múrido activadas fue determinada del siguiente modo. Células RAW264.7 de múrido de número de paso bajo fueron cultivadas en DMEM conteniendo un 10% de FBS inactivado por calor. Las células (6,2 x 10^{6} células/matraz T25) fueron activadas con 500 ng/mL de LPS y 10 unidades/mL de IFN-g en DMEM libre de suero, durante un período de 7 horas. Se añadió vehículo (DMSO) o inhibidor en DMSO (de 0 a 1 \muM) durante un período de 30 minutos a 37ºC. La inhibición del metabolismo de ácido araquidónico exógeno o la inhibición de la síntesis de PGD_{2} fue determinada mediante incubación de las respectivas células con ^{14}C-AA 20 \muM, durante un período de 15 minutos a 25ºC. Se extrajeron alícuotas (200 \muL) como solución final y todos los productos fueron determinados cuantitativamente mediante ensayo de TLC.

Los puntos de fusión se determinaron utilizando un aparato Gailenkamp para determinación de puntos de fusión y no se corrigieron. Los rendimientos químicos eran ejemplos específicos no optimizados de una preparación. Los NSAIDs (a saber, indometacina) fueron adquiridos en Sigma (St. Louis, Missouri). La totalidad de productos químicos restantes fueron adquiridos en Aldrich (Milwaukee, Wisconsin). El cloruro de metileno fue adquirido en forma anhidra en Aldrich y se utilizó tal cual se había recibido. La totalidad de disolventes restantes tenían pureza HPLC. Para seguir el transcurso de las reacciones se utilizó analítica TLC (Analtech uniplates ™). Para la columna de cromatografía se utilizó gel de sílice (Fisher, malla 60-100). Los espectros de ^{1}H NMR y de ^{13}C NMR en CDCl_{3} se registraron en un espectrómetro Broker WP-360 o en un espectrómetro AM-400. Los desplazamientos químicos se expresaron en partes por millón (ppm) en relación con tetrametilsilano, como estándar interno. Las multiplicidades de spin fueron reportadas como s (singulete), d (doblete, dd (doblete de dobletes), t (triplete), q (quartete) y m (multiplete). Las constantes de acoplamiento (J) fueron expresadas en hertz (Hz).

Ejemplo 1

Derivados con resto éster. Se prepararon los siguientes derivados éster de indometacina, designados como compuestos 2 a 29.

Procedimiento para la esterificación de NSAIDs

Procedimiento A

A una mezcla de reacción que contenía el NSAID (1 mmol) adecuado en 40 mL del alcohol deseado se le añadieron 2 gotas de HCL concentrado y se calentó la mezcla en condiciones de reflujo durante un período de 2 horas. Se dejó que la mezcla de reacción volviera a la temperatura ambiente y se extrajo el disolvente al vacío. El resto fue diluido con agua y extraído con Et_{2}O (3 x 10 mL). La solución orgánica combinada fue lavada con NaOH 1N (2 x 20 mL), agua (\sim 50 mL), secada (en presencia de MgSO_{4}), filtrada y concentrada al vacío. El resto fue cromatografiado sobre gel de sílice y eluido con el disolvente adecuado.

El éster metílico de indometacina (compuesto 2) fue obtenido en forma de un producto sólido blanco velloso (251 mg, 67%) mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 20:80) seguido de recristalización con Et_{2}O. punto de fusión: 94-96ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,68 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,2 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz, y 2,4 Hz, ArH); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,72 (s, 3H, CH_{3}); 3,67 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).

El éster etílico de indometacina (compuesto 3) fue obtenido en forma de producto sólido blanco de aspecto velloso (300 mg, 81%) mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 10:90) seguido de recristalización con Et_{2}O. Punto de fusión: 100-101ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,12-4,19 (q, 2H, J= 7,1 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,24-1,28 (t, 3H,
J= 7,1 Hz, CH_{3}).

El éster propílico de indometacina (compuesto 4) fue obtenido mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 10:90), en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (321 mg, 83%). Punto de fusión: 74-76ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,44-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,03-4,08 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,70 (m, 2H, CH_{2}; 0,88-0,93 (t, 3H, J= 7,5 Hz, CH_{3}).

El éster isopropílico de indometacina (compuesto 5) fue obtenido en forma de producto sólido cristalino de color blanco (325 mg, 84%) mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 10:90) seguido de recristalización con Et_{2}O. Punto de fusión = 73-75ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,5 z, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,99-5,03 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,62 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}); 1,22-1,24 (d, 6H,
2CH_{3}).

El éster butílico de indometacina (compuesto 6) fue obtenido mediante cromatografía sobre gel de sílice en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (354 mg, 88%). Punto de fusión = 77-78ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,68 (d, 2H, J= 8,7 Hz, ArH); 7,44-7,49 (d, 2H, J= 8,8 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz; ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,07-4,12 (t, 2H, J= 6,6 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,65 (m, 2H, CH_{2}); 1,30-1,40 (m, 2H, CH_{2}); 0,87-0,92 (t, 3H, J= 7,3 Hz, CH_{3}).

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Procedimiento para la esterificación de NSAIDs

Procedimiento B

Una mezcla de reacción conteniendo indometacina (300 mg, 0,84 mmol) en 6 mL de CH_{2}Cl_{2} anhidro fue tratada con diclorohexilcarbodiimida (192 mg, 0,92 mmol), 4-dimetil-aminopiridina (10 mg, 84 \mumol) y el alcohol adecuado (0,92 mmol). Tras agitación a temperatura amiente durante un período de 5 horas, se filtró la mezcla de reacción y se concentró el filtrado al vacío. El resto se diluyó con agua (\sim 30 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mL). La solución orgánica combinada fue lavada con AcOH 5% (2 x 30 mL), NaOH 1N (2 x 30 mL), agua (\sim 100 mL), se secó en presencia de MgSO_{4}), filtró y se concentró el disolvente al vacío. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía sobre gel de sílice.

El éster pentílico de indometacina (compuesto 7) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 20:80), en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (326 mg, 91%). Punto de fusión = 80-81ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H; J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,20-1,30 (m, 4H, CH_{2}); 0,83-0,88 (t, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).

El éster hexílico de indometacina (compuesto 8) se preparó mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 10:90) en forma de goma de color amarillo que solidificó tras congelación (290 mg, 79%). Punto de fusión = 62-64ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 8dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,25-1,33 (m, 6H, CH_{2}); 0,83-0,87 (t, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).

El éster ciclohexílico de indometacina (compuesto 9) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 10:90), en forma de producto sólido de color blanco de aspecto velloso (455 mg, 93%). Punto de fusión = 129-130ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,7 Hz, ArH); 7,45-7,47 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,97-6,98 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,76-4,78 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,63 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}); 1,79-1,83 (m, 2H, CH_{2}); 1,65-1,68 (m, 2H, CH_{2}); 1,28-1,53 (m, 6H, CH_{2}).

El éster ciclohexiletílico de indometacina (compuesto 10) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de producto sólido de color amarillo (390 mg, 96%). Punto de fusión = 94-95ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,10-4,15 (t, 2H, J= 6,8 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,62-1,65 (m, 5H, CH_{2} y CH); 1,46-1,52 (q, 2H, CH_{2}); 1,09-1,27 (m, 4H, CH_{2}); 0,84-0,91 (m, 2H, CH_{2}).

El éster heptílico de indometacina (compuesto 11) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 5:95), en forma de producto sólido de color amarillo (342 mg, 89%). Punto de fusión = 70-72ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,27 (m, 8H, CH_{2}); 0,83-0,88 (t, 3H, J= 7,0 Hz, CH_{3}).

El éster butoxietílico de indometacina (compuesto 12) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de aceite de color amarillo el cual solidificó tras congelación (368 mg, 96%). Punto de fusión = 58-59ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,68 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,45-7,48 (dd, 2H,
J= 6,8 Hz y 2,0 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,24-4,27 (t, 2H, J= 4,8 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 3,60-3,64 (t, 2H, J= 4,7 Hz, CH_{2}); 3,40-3,45 (t, 2H, J= 6,6 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,50-1,56 (m, 2H, CH_{2}); 1,26 (m, 2H, CH_{2}); 0,88-0,92 (t, 3H, J= 7,3 Hz, CH_{3}).

El éster trans-hept-2-enílico de indometacina (compuesto 13) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (380 mg, 97%). Punto de fusión = 76-78ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 5,69-5,77 (m, 1H, H olefínico); 5,49-5,59 (m, 1H, H olefínico); 4,53-4,45 (d, 2H, J= 6,5 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 2,00-2,06 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,36 (m, 4H, CH_{2}); 0,85-0,90 (t, 3H, J= 7,0 Hz, CH_{3}).

El éster hept-2-inílico de indometacina (compuesto 14) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 5:95), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (317 mg, 81%). Punto de fusión = 77-79ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 4,68-4,70 (t, 2H, J= 2,0 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 2,18-2,23 (m, 2H, CH_{2}); 1,31-1,52 (m, 4H, CH_{2}); 0,87-0,91 (t, 3H, J= 6,9 Hz, CH_{3}).

El éster 2-(hept-4-inílico) de indometacina (compuesto 15) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 5:95), en forma de aceite de color amarillo (329 mg, 84%). Punto de fusión = 69-71ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 4,94-5,02 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 2,33-2,47 (m unido con un s, 5H, CH_{2} y CH_{3}); 2,04-2,13 (m, 2H, CH_{2}); 1,29-1,31 (d, 3H, J= 6,3 Hz, CH_{3}); 1,04-1,09 (t, 3H, J= 7,4 Hz, CH_{3}).

El éster octílico de indometacina (compuesto 16) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 5:95), en forma de goma de color amarillo que solidificó tras congelación (355 mg, 90%). Punto de fusión = 56-57ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,10 (t, 2H, J= 6,6 z, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,62 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,24 (m, 10H, CH_{2}); 0,84-0,88 (t, 3H, J= 7,1 Hz, CH_{3}).

El éster fenílico de indometacina (compuesto 17) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 20:80), en forma de producto sólido cristalino de color blanco (155 mg, 43%). Punto de fusión = 138-140ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,33-7,38 (m, 2H, ArH); 6,87-6,90 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,90 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

El éster 3,5-dimetilfenílico de indometacina (compuesto 18) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (219 mg, 54%). Punto de fusión = 143-145ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,67-7,69 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,05-7,06 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,89-6,92 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,85 (s, 1H, ArH); 6,67-6,71 (m, 3H, ArH); 3,88 (s, 2H, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}), 2,29 (s, 6H, 2CH_{3}).

El éster 4-metilmercaptofenílico de indometacina (compuesto 19) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (307 mg, 76%). Punto de fusión = 132-133ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,69 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,22-7,23 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 7,04-7,05 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,97-7,00 (d, 2H, J= 8,6 Hz, ArH); 6,87-6,90 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,89 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,46 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

El éster 2-metilmercaptofenílico de indometacina (compuesto 20) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 15:85), en forma de producto sólido de color blancuzco (335 mg, 85%). Punto de fusión = 147-148ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,67-7,70 (dd, 2H, J= 6,5 Hz y 1,8 Hz, ArH); 7,46-7,49 (dd, 2H, J= 6,8 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,17-7,26 (m, 3H, ArH); 7,02-7,05 (dd, 1H, J= 7,7 Hz y 1,2 Hz, ArH); 6,90-6,93 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,98 (s, 2H, CH_{2}); 3,86 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).

El éster 4-metoxifenílico de indometacina (compuesto 21) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (355 mg, 88%). Punto de fusión = 136-138ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,69 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,46-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,04-7,05 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,98 (m, 5H, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,88 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,78 (s, 3H, CH_{3}); 2,44 (s, 3H, CH_{3}).

El éster 4-acetamidofenílico de indometacina (compuesto 22) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80, después 30:70), en forma de sólido de color amarillo (345 mg, 83%). Punto de fusión = 191-193ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,69 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,8 Hz, ArH); 7,46-7,49 (m, 4H, ArH); 7,16 (bs, 1H, NH); 6,99-7,04 (m, 3H, ArH); 6,87-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,88 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,44 (s, 3H, CH_{3}), 2,04 (s, 3H, CH_{3}).

El éster 4-fluorofenílico de indometacina (compuesto 23) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de producto sólido de color blancuzco (359 mg, 95%). Punto de fusión = 143-144ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,69 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,8 Hz, ArH); 7,46-7,49 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,01-7,04 (m, 5H, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,89 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

El éster 3-piridílico de indometacina (compuesto 24) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (191 mg, 67%). Punto de fusión =
134-136ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 8,46-8,47 (d, 1H, J= 4,6 Hz piridil-H); 8,39-8,40 (d, 1H, J= 2,5 Hz, piridil-H); 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,43-7,48 (d y m 3H, 2ArH, J= 8,5 Hz y 1-piridil-H); 7,28-7,32 (m, 1H, piridil-H); 7,02-7,03 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,70 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,93 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,46 (s, 3H, CH_{3}).

El éster \beta-naftílico de indometacina (compuesto 25) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 20:80), en forma de producto sólido cristalino de color amarillo (166 mg, 41%). Punto de fusión = 70-72ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,82-7,85 (d, 2H, J= 8,9 Hz, ArH); 7,76-7,79 (m, 1H, ArH); 7,68-7,71 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,54-7,55 (d, 1H, J= 1,8 Hz, ArH); 7,46-7,50 (m, 4H, ArH); 7,17-7,21 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,1 Hz,ArH); 7,10-7,11 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 6,90-6,93 (d, 1H, J= 9,1 Hz, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,2 Hz, ArH); 3,97 (s, 2H, CH_{2}); 3,85 (s, 3H, CH_{3}); 2,49 (s, 3H, CH_{3}).

El éster N-4-etilmorfolínico de indometacina (compuesto 26) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 40:60), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (348 mg, 86%). Punto de fusión = 83-84ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,66 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,44-7,47 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,94-6,95 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,81-6,84 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 4,20-4,24 (t, 2H, J= 5,8 Hz, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 3,58-3,61 (t, 4H, J= 4,8Hz, 2CH_{2}); 2,55-2,59 (t, 2H, J= 5,7 Hz, CH_{2}); 2,38-2,40 (s, unido con un t, 7H, CH_{3} y 2 CH_{2}).

El éster 3-fenilpropílico de indometacina (compuesto 27) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (393 mg, 95%). Punto de fusión = 81-83ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,61-7,64 (dd, 2H, J= 8,4 Hz y 1,6 Hz, ArH); 7,41-7,44 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,16-7,24 (m, 2H, ArH); 7,03-7,06 (d, 2H, = 8,0 Hz, ArH); 6,97-6,98 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,08-4,12 (t, 2H, J= 6,4 Hz, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,55-2,60 (t, 2H, J= 8,1 Hz, CH_{2}); 2,39 (s, 3H, CH_{3}); 1,87-1,96 (m, 2H, CH_{2}).

El éster \alpha-naftílico de indometacina (compuesto 28) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 30:70), en forma de producto sólido cristalino de color blanco (378 mg, 93%). ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,82-7,85 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 7,61-7,71 (m, 3H, ArH); 7,41-7,49 (m, 6H, ArH); 7,37-7,39 (m, 1H, ArH); 7,22-7,24 (d, 1H, J= 7,2 Hz, ArH); 6,91-6,94 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,2 Hz, ArH); 4,07 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 2,51 (s, 3H, CH_{3}).

El éster (2-terc-BOC-aminoetílico) de indometacina (compuesto 29) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 30:70 y después 40:60), en forma de aceite de color amarillo pálido que finalmente solidificó tras congelación (221 mg, 53%). ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,5 H, ArH); 6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,65-6,69 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,65 (bs, 1H, NH); 4,14-4,18 (t, 2H, J= 5,4 Hz, CH_{2}); 3,68 (s, 2H, CH_{2}); 3,36-3,38 (s, 2H, CH_{2}); 2,39 (s, 3H, CH_{3}); 1,42 (s, 9H, CH_{3}).

Las estructuras y los valores IC_{50} para la indometacina y para los compuestos 2 a 29 se muestran en la Tabla 1 que sigue a continuación

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1 Inhibición COX-2 selectiva mediante derivados éster de Indometacina

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TABLA 1 (continuación)

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TABLA 1 (continuación)

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^{a} \begin{minipage}[t]{145mm}Los valores IC_{50} fueron determinados incubando diversas concentraciones de inhibidor en DMSO con COX-2 humana (66 nM) o COX-1 ovina (44 nM) durante un período de 20 minutos a temperatura ambiente, seguido de inicio de la reacción de ciclooxigenasa con la adición de ^{14}C\text{-}AA (50 \mu M) a 37^{o}C, durante un período de 30 segundos. El aislamiento y la cuantificación de productos prostanoides fue llevada a cabo tal como se ha descrito anteriormente. Los ensayos se llevaron a cabo por duplicado. ^{b} Relación de IC_{50} (COX-1):IC_{50} (COX-2). Si c > 90% subsiste actividad a estas concentraciones de inhibidor.\end{minipage}

Discusión acerca de derivados con restos éster alifático

La conversión del grupo ácido carboxílico libre en la indometacina en el éster metílico proporcionó el compuesto 2, el cual mostró inhibición COX-2 selectiva. El compuesto 2 era 132 veces selectivo como inhibidor COX-2 (compuesto 2: IC_{50} (COX-2) \sim 0,25 \muM; IC_{50} (COX-1) \sim 33 \muM]. Por lo tanto, la esterificación del ácido carboxílico en la indometacina incrementaba la potencia inhibidora frente a COX-2, pero presentaba un efecto negativo sobre la potencia para la inhibición de COX-1. Estudios relativos a la extensión de la cadena del grupo metilo en el compuesto 2 hasta obtener homólogos alquílicos más elevados revelaron incrementos significativos en la potencia y en la selectividad frente a COX-2. Por ejemplo, el éster heptílico (compuesto 11) mostraba una potencia incrementada (IC_{50} (COX-2) \sim 40 nM) y una selectividad incrementada (> 1650) para la COX-2 en comparación con el éster metílico (compuesto 2). La incorporación de un átomo de oxígeno en la posición 3 (compuesto 12) o un enlace doble trans en la posición 2,3 (compuesto 13) conducía también a una potencia y selectividad incrementada para COX-2. No obstante, el éster ciclohexiletílico (compuesto 10) y el análogo hept-2-inílico (compuesto 14) resultaban menos eficaces como inhibidores COX-2 [compuesto 10: IC_{50} (COX-2) \sim 0,25 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM].

Discusión acerca de derivados con restos éster aromático

La transformación del resto ácido carboxílico en la indometacina en un éster fenílico (compuesto 17) condujo también a un inhibidor COX-2 selectivo [IC_{50} (COX-2) \sim 0,40 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM] (Tabla 1). La introducción de espaciadores metileno entre el anillo fenílico y el oxígeno del éster generaba el éster 3-fenilpropílico (compuesto 27), el cual resultaba ser un inhibidor COX-2 mucho más potente y selectivo que el compuesto 17 [IC_{50} (COX-2) \sim 0,040 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM, mientras que los más voluminosos éster 3,5-dimetilfenílico (compuesto 18) y éster \beta-naftílico (compuesto 25)resultaban menos activos frente a la COX-2 [IC_{50} (COX-2) > 8 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM]. De forma interesante, la inhibición selectiva de COX-2 por parte de los compuestos que tienen un sustituyente éster aromático resultaba extremadamente sensible al tipo y posición de los diversos sustituyentes sobre el anillo de fenilo. Por ejemplo, la presencia de un grupo metilmercapto en la posición 4 del grupo fenilo proporcionó el compuesto 19, el cual resultaba tan solo 8,5 veces selectivo como inhibidor COX-2, mientras que el correspondiente isómero 2-metilmercaptofenilo (compuesto 20) era > 1064 veces selectivo como inhibidor COX-2. Además, la sustitución del grupo 4-metilmercapto por un grupo 4-metoxi proporcionó el compuesto 21, el cual mostraba una extremadamente elevada afinidad para la COX-2 y era > 1650 veces como inhibidor COX-2. Al igual que el éster 4-metilmercaptofenílico (compuesto 19), el éster 4-fluorofenílico (compuesto 23)y el éster 3-piridílico (compuesto 24) resultaban también menos selectivos como inhibidores COX-2.

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Ejemplo II Derivados con resto amida

Se prepararon los siguientes derivados amida de ácido carboxílico de indometacina, designados como compuestos 28 a 58. (Nota: los compuestos 28, 29 y 36 a 40 se describen también en las patentes USA nºs 3.285.908 y 3.336.194, comentadas anteriormente, concedidas a favor de Shen, cedente de Merck & Co., Inc.

La indometacin-N-metilamida (compuesto 28) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 10:90, después 50:50), en forma de producto sólido amarillo brillante (271 mg, 79%). Punto de fusión = 187-189ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (dd, 2H, J= 6,6 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,88-6,89 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 5,22 (bs, 1H, NH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,75-2,76 (d, 3H, J= 4,8 Hz, CH_{3}); 2,39 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-etan-2-olamida (compuesto 29) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc), en forma de producto sólido de color amarillo pálido (143 mg, 39%). Punto de fusión = 162-164ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,68 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,7 Hz, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 6,9 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,85-6,89 (d y s, 2H, J= 9,2 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 6,03 (bs, 1H, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,67 (bs, 4H, 2CH_{2}); 3,35-3,40 (q, 2H, J= 4,8 Hz, CH_{2}); 2,44 bs, 1H, OH); 2,39 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-octilamida (compuesto 30) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (164 mg, 42%). Punto de fusión = 109-111ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,62-7,65 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 6,85-6,89 (m, 2H, ArH); 6,68-6,71 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 5,67 (s, 1H, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 3,16-3,22 (m, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,39 (m, 2H, CH_{2}), 1,19 (m, 10H, 5CH_{2}); 0,83-0,88 (t, J= 6,2 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-nonilamida (compuesto 31) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (191 mg, 47%). Punto de fusión = 128-130ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,47-7,50 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,89 (s, 1H, ArH); 6,85-6,88 (d, J= 8,9 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,60-5,63 (bt, J= 5,3 Hz, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 3,16-3,22 (m, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,36-1,41 (m, 2H, CH_{2}); 1,19-1,28 (m, 12H, 6CH_{2}); 0,84-0,89 (t, J= 6,5 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-(2-metilbencil)amida (compuesto 32) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo (218 mg, 56%). Punto de fusión = 177-179ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,60-7,61 (d, 2H, J= 8,1 Hz, ArH); 7,44-7,46 (d, 2H, J= 8,1 Hz, ArH); 7,06-7,15 (m, 4H, ArH); 6,83-6,89 (m, 2H, ArH); 6,67-6,70 (d, 1H, J= 8,1 Hz, ArH); 5,84 (s, 1H, NH); 4,40-4,41 (d, 2H, J= 5,3 Hz, CH2); 3,79 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}), 2,19 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-metilbencil)amida (compuesto 33) se obtuvo mediante recristalización a partir de metanol, en forma de producto sólido de color amarillo (142 mg, 37%). Punto de fusión = 191-192ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,60 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,46-7,44 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,08-7,01 (m, 4H, ArH); 6,88 (s, 1H, ArH); 6,87-6,85 (d, 1H, J= 6,3 Hz, ArH); 6,71-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,89 (bt, 1H, NH); 4,38-4,36 (d, 2H, J= 5,9 Hz, CH_{2}); 3,78 (s, 3H, CH_{3}); 3,69 (s, 2H, CH_{2}), 2,35 (s, 3H, CH_{3}); 2,30 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-((R)-dimetilbencil)amida (compuesto 34) se obtuvo mediante recristalización a partir de metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (124 mg, 31%). Punto de fusión = 201-202ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,62-7,64 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,6 Hz, ArH); 7,01-7,08 (m, 4H, ArH); 6,87-6,90 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,83-6,84 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,76-5,78 (bd, 1H, J= 8,0 Hz, NH); 5,09-5,14 (m, 1H, CH); 3,76 (s, 3H, CH_{3}); 3,63-3,64 (d, 2H, J=2,8 Hz, CH_{2}); 2,34 (s, 3H, CH_{3}); 2,30 (s, 3H, CH_{3}); 1,35-1,38 (d, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-((S)-dimetilbencil)amida (compuesto 35) se obtuvo mediante recristalización a partir de metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (163 mg, 41%). Punto de fusión = 200-201ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,53-7,55 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH); 7,37-7,40 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,94-7,01 (m, 4H, ArH); 6,76-6,82 (m, 2H, ArH); 6,61-6,64 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 5,77-5,79 (bd, 1H, J= 7,8 Hz, NH); 5,02-5,07 (m, 1H, CH); 3,69 (s, 3H, CH_{3}); 3,58-3,59 (d, 2H, J=2,9 Hz, CH_{2}); 2,27 (s, 3H, CH_{3}); 2,23 (s, 3H, CH_{3}); 1,28-1,30 (d, 3H, J= 6,9 Hz, CH_{3}).

Comparación La indometacin-N-metilfenetilamida (compuesto 36) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo (288 mg, 72%). Punto de fusión = 61-63ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,02 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,81-6,84 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2}); 3,57-3,60 (t, 2H, J=5,4 Hz, CH_{2}); 3,43-3,46 (t, 2H, J= 5,3 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,59-1,61 (m, 2H, CH_{2}); 1,42-1,43 (m, 2H, CH_{2}).

Comparación La indometacin-N-piperidinilamida (compuesto 37) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 40:60), en forma de producto sólido de color amarillo pálido (146 mg, 41%). Punto de fusión =
161-163ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,02 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,81-6,84 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2}); 3,57-3,60 (t, 2H, J=5,4 Hz, CH_{2}); 3,43-3,46 (t, 2H, J= 5,3 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,59-1,61 (m, 2H, CH_{2}); 1,42-1,43 (m, 2H, CH_{2}).

La indometacin-N-(2-fenetil)amida (compuesto 38) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo claro (169 mg, 44%). Punto de fusión = 148-150ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,58-7,60 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,46-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,12-7,14 (m, 3H, ArH); 6,85-6,95 (m, 4H, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,61 (s, 1H, NH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,59 (s, 2H, CH_{2}); 3,43-3,49 (m, 2H, CH_{2}); 2,68-2,72 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 2,04 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-fluorofenil)amida (compuesto 39) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 5:95 a 20:80), en forma de producto sólido de color naranja (217 mg, 57%). Punto de fusión = 200-202ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,65-7,67 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH); 7,47-7,50 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH); 7,32-7,35 (m, 3H, ArH); 6,94-6,99 (m, 3H, ArH, NH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,0 Hz, ArH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,79 (s, 2H, CH_{2}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-clorofenil)amida (compuesto 40) se obtuvo mediante recristalización con metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (234 mg, 56%). Punto de fusión = 209-210ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,58-7,61 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,40-7,42 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,13-7,27 (m, 5H, ArH); 6,84 (s, 1H, NH); 6,77-6,80 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,62-6,65 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 3,72 (s, 2H, CH_{2}); 3,72 (s, 2H, CH_{3}); 2,37 (s, 3H,
CH_{3}).

La indometacin-N-(4-acetamidofenil)amida (compuesto 41) se obtuvo mediante recristalización con metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (221 mg, 54%). Punto de fusión = 256-257ºC; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 10,14 (s, 1H, NH); 9,86 (s, 1H, NH); 7,62-7,70 (m, 4H, ArH); 7,48 (s, 4H, ArH); 7,18 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 7,18 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 6,90-6,93 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,73 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2}); 2,27 (s, 3H, CH_{3}), 1,99 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida (compuesto 42) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo claro (162 mg, 40%). Punto de fusión = 195-196ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,67-7,70 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,48-7,50 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,30-7,33 (d, 2H, J= 8,6 Hz, ArH); 7,17-7,22 (m, 3H, 2ArH y NH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 3,80 (s, 3H, CH_{3}); 3,79 (s, 2H, CH_{2}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}); 2,44 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida (compuesto 43) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 15:85), en forma de producto sólido de color amarillo (218 mg, 54%). Punto de fusión = 129-131ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,62-7,64 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,39 (s, 1H, NH); 7,09-7,18 (m, 2H, ArH); 6,94-6,96 (m, 3H, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz); 6,69-6,72 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 3,80 (s, 3H, CH_{3}); 3,78 (s, 2H, CH_{2}); 2,42 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-metoxifenil)amida (compuesto 44) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 10:90 a 25:75), en forma de producto sólido de color naranja (239 mg, 61%). Punto de fusión = 201-202ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,67-7,70 (dd, 2H, J= 6,8 Hz y 1,8 Hz, ArH); 7,48-7,51 (d, 2H, J= 7,1 Hz, ArH); 7,28-7,29 (d, 1H, J= 2,0 Hz, ArH); 7,20 (s, 1H, NH); 6,94-6,95 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,78-6,84 (m, 2H, ArH), 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,79 (s, 2H, CH_{2}); 3,76 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(3-etoxifenil)amida (compuesto 45) se obtuvo a partir de recristalización con metanol, en forma de producto sólido de color amarillo claro (297 mg, 74%). Punto de fusión = 152-154ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,68-7,70 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,48-7,51 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,24 (s, 1H, NH); 7,13-7,18 (m, 2H, ArH); 6,94-6,82 (m, 3H, ArH); 6,70-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz); 6,61-6,65 (dd, 1H, J= 8,2 Hz y 1,7 Hz, ArH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,80 (s, 2H, CH_{2}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}), 1,36-1,40 (t, 3H, J= 7,0 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida (compuesto 46) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 10:90 a 30:70), en forma de producto sólido de color naranja claro (191 mg, 44%). Punto de fusión = 239-241ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,67-7,69 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,48-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,20 (s, 1H, NH); 6,94 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,70-6,74 (m, 3H, ArH); 3,78-3,81 (m, 14H, 3CH_{3} & CH_{2}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(3-piridil)amida (compuesto 47) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 50:50 a 75:25), en forma de producto sólido de color amarillo (190 mg, 52%). Punto de fusión = 204-205ºC; ^{1}H NMR (COCl_{3})\delta 8,39-8,40 (d, 1H, J= 2,1 Hz, ArH); 8,32-8,34 (d, 1H, J= 4,4 Hz, ArH); 8,04-8,08 (m, 1H, ArH); 7,66-7,70 (m, 2H, ArH); 7,48-7,52 (m, 2H, ArH); 7,38 (s, 1H, NH); 7,22-7,25 (m, 1H, ArH); 6,93-6,94 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,1 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,84 (s, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida (compuesto 48) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 5:95 a 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo pálido (221 mg, 56%). Punto de fusión =
196-198ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 8,19-8,20 (d, 1H, J= 2,8 Hz, ArH); 8,03-8,06 (dd, 1H, J= 8,7 Hz y 2,9 Hz, ArH); 7,59-7,63 (m, 2H, ArH); 7,46-7,51 (m, 3H, ArH); 7,24 (s, 1H, NH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,84 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}), 2,46 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida (compuesto 49) se obtuvo mediante recristalización con metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (153 mg, 40%). Punto de fusión = 193-194ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,99 (bs, 1H, NH); 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,47-7,50 (m, 3H, ArH); 7,00 (s, 1H, ArH); 6,83-6,86 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,69-6,72 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,35 (s, 1H, ArH); 4,01-4,04 (bd, 2H, J= 6,8 Hz, CH_{2}); 3,90 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}), 1,24-1,29 (t, 3H, J= 7,1 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-(3-cloropropil)amida (compuesto 50) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color blancuzco (153 mg, 40%). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,11 (bs, 1H, NH); 7,62-7,69 (m, 4H, ArH): 7,09 (s, 1H, ArH); 6,92-6,95 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,68-6,71 (d, 1H, J= 8,8 Hz, ArH); 3,80 (s, 3H, CH_{3}); 3,58-3,67 (t, 2H, 6,3 Hz, CH_{2}); 3,52 (s, 2H, CH_{2}); 3,15-3,17 (m, 2H, CH_{2}); 2,20 (s, 3H, CH_{3}), 1,81-1,85 (t, 2H, J= 6,5 Hz, CH_{2}).

La indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida (compuesto 51) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (265 mg, 76%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,66-7,68 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,7 z, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 6,9 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,92-6,95 (m, 2H, ArH): 6,70-6,73 (m, 1H, ArH); 6,03 (bs, 1H, NH); 3,98-4,00 (d, 2H, J= 5,5 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 3H, CH_{3}), 3,69 (2, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida (compuesto 52) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 30:70 y después 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo (300 mg, 84%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,67-7,70 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,85 Hz, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 8,4 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,91-6,96 (m, 2H, ArH): 6,69-6,73 (m, 1H, ArH); 6,16-6,18 (d, 1H, J= 7,4 Hz, NH); 4,57-4,62 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}), 1,32-1,34 (d, 3H, J= 7,2 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida (compuesto 53) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 40:60), en forma de producto sólido de color amarillo (803 mg, 67%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,67-7,70 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,85 z, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 8,4 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,91-6,96 (m, 2H, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, ArH); 6,16-6,18 (d, 1H, J= 7,4 Hz, NH); 4,57-4,62 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 3H, CH_{3}), 3,65 (2, 2H, CH_{2}); 2,36 (s, 3H, CH_{3}), 1,32-1,34 (d, 3H, J= 7,2 Hz, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida (compuesto 54) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 40:60), en forma de producto sólido de color amarillo (198 mg, 47%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,91-7,94 (d, 2H, J= 6,8 Hz, ArH); 7,61-7,65 (d, 2H, J=8,7 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH); 7,19-7,21 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH); 6,83-6,88 (m, 2H, ArH): 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,97-5,99 (bt, 1H, J= 5,9 Hz, NH); 4,45-4,47 (d, 2H, J= 6,1 Hz, CH_{2}); 3,90 (s, 3H, CH_{3}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}), 3,72 (2, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida (compuesto 55) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 20:80), en forma de producto sólido de color amarillo (100 mg, 23%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,67-7,70 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,48-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,33-7,36 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);7,18-7,23 (d y bs, 3H, ArH y NH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); ArH): 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,0 Hz, ArH); 3,81 (s, 5H, CH_{2} y CH_{3}); 3,67 (s, 3H, CH_{3}); 3,56 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-(2-pirazinil)amida (compuesto 56) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 30:70 a 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo claro (251 mg, 69%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 9,58 (d, 1H, J= 1,4 Hz, ArH); 8,33-8,34 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 8,16-8,17 (m, 1H, ArH); 7,86 (bs, 1H, NH); 7,69-7,71 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,49-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,70-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,86 (2, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).

La indometacin-N-2-(4-metiltiazolil)amida (compuesto 57) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 30:70 y después 70:30), para proporcionar el producto puro en forma de sólido de color amarillo pálido, el cual fue recristalizado a partir de éter etílico (241 mg, 63%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,68 (bs, 1H, NH); 7,70-7,74 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH); 7,48-7,52 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,79-6,85 (m, 2H, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 6,52 (s, 1H, Tiazol-H); 3,88 (2, 2H, CH_{2}); 3,79 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}); 2,27 (s, 3H,
CH_{3}).

La indometacin-N-(4-bifenil)amida (compuesto 58) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos; 30:70), para proporcionar el producto puro en forma de sólido de color amarillo pálido, el cual fue recristalizado a partir de éter etílico (421 mg, 59%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,68-7,71 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,32-7,55 (m, 11H, ArH); 6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,0 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,73-6,74 (dd, 1H, J= 1,7 Hz, ArH); 3,83 (2, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).

Las estructuras y valores de IC_{50} para la indometacina y los compuestos 28 a 58 se indican en la siguiente Tabla 2

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 2 Inhibición COX-2 selectiva mediante derivados amida de Indometacina

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TABLA 2 (continuación)

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10

TABLA 2 (continuación)

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^{a} \begin{minipage}[t]{150mm} Los valores IC_{50} fueron determinados incubando varios de los inhibidores en DMSO con COX-2 humana (66 nM) o COX-1 ovina (44 nM), durante un período de 20 minutos, seguido de tratamiento con 1-^{14}C\text{-}AA (50 \mu M) a 37^{o}C, durante un período de 30 segundos. Los ensayos se efectuaron por duplicado. ^{b} Relación de IC_{50} (COX-1):IC_{50}(COX-5). ^{c} >80% de la actividad COX-1 se conservaba a esta concentración. \end{minipage}

Discusión acerca de derivados amida secundaria de indometacina Derivados amida secundaria alifática de ácido carboxílico de indometacina

El derivado N-metilamida (compuesto 28) mostró inhibición selectiva COX-2 (IC_{50} (COX-2) \sim 0,70 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM). Con el homólogo octilo más elevado (compuesto 3) se observaron incrementos en la selectividad y potencia inhibidora de COX-2; no obstante, incrementos adicionales en la longitud de la cadena hasta el derivado nonilo (compuesto 4) condujo a alguna pérdida de selectividad COX-2 (compuesto 3: IC_{50} (COX-2) \sim 37,5 nM; IC_{50} (COX-1) 66 \muM, compuesto 4: IC_{50} (COX-2) \sim 40 nM; IC_{50} (COX-1) \sim 16,5 \muM).

Derivados amida secundaria aromática de ácido carboxílico de indometacina

La incorporación de unidades espaciadoras de metileno (compuesto 38) entre el nitrógeno de la amida y el anillo de fenilo generaba también potentes y selectivos inhibidores COX-2. Tal y como se ha observado con los ésteres aromáticos discutidos anteriormente, la selectividad dependía del tipo y de la posición de los sustituyentes sobre el anillo de fenilo.

Por ejemplo, el derivado 4-metilbencilamida (compuesto 33) era 133 veces selectivo para COX-2, mientras que el correspondiente isómero 2-metilbencilo (compuesto 5) era > 440 veces más selectivo como inhibidor COX-2. Además, el enantiómero R-metil-(4-metilbencilo) (compuesto 34) era mejor inhibidor de COX-2 que el correspondiente S-metil enantiómero (compuesto 8).

Adicionalmente, las amidas aromáticas que contienen el sustituyente 4-fluoro (compuesto 39), el sustituyente 4-metilmercapto (compuesto 15) o el sustituyente 3-piridilo (compuesto 47) mostraban una potente y selectiva inhibición COX-2, tal y como se indica más adelante.

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Amidas terciarias (Compuestos comparativos 36 y 37)

Otro interesante aspecto en los estudios SAR con amidas de indometacina era que los derivados amida N,N-metil-2-fenetilo (Compuesto 36) y piperidinilo (compuesto 37), ambas amidas terciarias, resultaban inactivos frente a COX-2. En otras palabras, tan solo las amidas secundarias resultaban selectivas como inhibidores COX-2, mientras que las amidas terciarias estaban desprovistas de cualquier tipo de efecto inhibidor hacia cualquier isozima, a saber, la medición de la inhibición COX-2 para las amidas terciarias se detenía en un valor IC extremadamente elevado (ver el valor de 33 para ambos compuestos 9 y 10) y todavía subsistía > 80% de actividad COX-1.

Ejemplo III Comparación con sulfonamidas de otro estudio

Un estudio SAR similar fue hecho publico anteriormente en la anteriormente mencionada publicación, por parte de Li et al., en relación con sulfonamidas ácidas. (Ver, las estructuras dibujadas anteriormente para los compuestos L-745.337 y NS-398). Específicamente, Li et al., averiguaron que la sustitución del protón N-H en el resto NHSO_{2}CH_{3} de L-745.337 o NS-398 por un grupo metilo conducía a la completa pérdida de la potencia inhibidora hacia cualquiera de los isoenzimas COX-1 o COX-2.

Este comportamiento puede ser explicado a partir de la recientemente resuelta estructura cristalina de COX-2 de múrido complejado con NS-398. Ver, Kurumbail et al., Abstract 197, Eicosanoids and Other Bioactive Lipids in Cancer, Inflammation and Related Diseases, Fifth Internacional Conference, La Jolla, California (17-20 septiembre 1997). A diferencia de los diarilheterociclos, el NS-398 no utiliza la bolsa lateral, incluso en el caso de que la misma contiene un grupo sulfonamida. Por el contrario, la sulfonamida se une a Arg 106 de manera similar a los NSAIDs que contienen ácido carboxílico.

Si bien los derivados amida secundaria de ácido carboxílico de indometacina de la presente invención no contienen ningún sustituyente sustractor de electrones, las observaciones SAR discutidas anteriormente acerca de la falta de inhibición por parte de los derivados amida terciaria de ácido carboxílico sugiere que el grupo -CONH-R_{1} se une también probablemente a Arg 106. Esto puede ser observado a partir del contraste de datos indicado seguidamente para el derivado amida secundaria inventivo (compuesto 11) con los derivados amida terciaria e comparación (compuestos 9 y 10) y el derivado de comparación del compuesto del estado de la técnica NS-398, en el cual el protón N-H en el resto NHSO_{2}CH_{3} fue sustituido por un metilo.

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Ejemplo IV Comprobación de actividad inhibidora adicional con COX de ratón

Compuesto 38. La base estructural para la selectividad de COX-2 para el compuesto 38 fue también demostrada mediante mutagénesis directa en un punto. Mas particularmente, la potencia inhibidora de la indometacina, comparada con la de la indometacin-N-fenetilamida (compuesto 38) fue evaluada frente a mutantes de COX-2 de múrido, dirigidos a un punto específico (Arg 106Gin y Tyr341Ala), los cuales representan restos clave involucrados en la unión de los NSAIDs que contienen ácido carboxílico. Arg 106 es el único resto cargado positivamente en el punto de unión de ácido graso y resulta importante para la unión del resto ácido carboxílico de un NSAID con Tyr341Ala, el cual es yuxtapuesto a Arg 106 en el punto de constricción y es responsable de la unión selectiva de los enantiómeros S pero no de los enantiómeros R en la clase 2-fenilpropionato de NSAIDs, que incluye el flurbiprofeno. Además, de estos mutantes, se analizó también el perfil de inhibición del mutante Val509IIeArg499HisVal420IIe (conocido también como mutante VRV), el cual incorpora los cambios más relevantes entre COX-2 y COX-1 en la región del bolsillo lateral y es responsable de unión a diarilheterociclos. Los resultados indicaron que la indometacina desplegaba una potencia ligeramente mejor frente a la COX-2 de ratón de origen natural que la mostrada por el compuesto 38 (indometacina: IC_{50} (COX-2 de ratón) \sim 25 nM; compuesto 38:IC_{50} (COX-2 de ratón) \sim 35 nM). Además, la Tyr341Ala y el mutante triple VRV resultaban ser resistentes a la inhibición por parte de la indometacina y el compuesto 38, mientras que el mutante Arg106 resultó ser resistente a la inhibición por parte de la indometacina pero era inhibido de forma eficaz por parte del compuesto 38 (IC_{50} \sim 25 nM).

Compuesto 44. La inhibición de la actividad COX-2 en células de ratón intactas por parte del Compuesto 44 fue objeto de ensayo en macrófagos RAW264,7 múridos, en los cuales la actividad COX-2 era inducida mediante estímulos patológicos. Los macrófagos fueron tratados con LPS (500 ng/mL) de interferon-g (10 U/mL), durante un período de 7,5 horas para inducir COX-2 y después tratados con diversas concentraciones del derivado 4-metoxifenilamida de indometacina (Compuesto 44), durante un período de 30 minutos a 37ºC. El valor IC_{50} para PGD_{2} por parte del compuesto 44 era de 62,5 nM. Bajo estas condiciones, la indometacina resultó ser un mejor inhibidor de la actividad COX-2 en células de ratón intactas (IC_{50} \sim 10 nM) que el compuesto 44.

Ciertamente, la comparación de la potencia de la indometacina como inhibidor de COX-2 de ratón purificada frente a la COX-2 humana purificada, reveló que la indometacina mostraba una mayor grado de inhibición del enzima de ratón que de la isoforma humana (IC_{50}(COX-2 de ratón) \sim 350 nM; IC_{50} (COX-2 humana) \sim 1 \muM). Por otra parte un derivado amida-indometacina (compuesto 38) resultaba ser mejor inhibidor de la COX-2 humana que de la COX-2 de múrido (Compuesto 38: IC_{50} (COX-2 de ratón) \sim 120 nM; IC_{50} (COX-2 humana) \sim 75 nM).

Estos resultados refuerzan otras observaciones efectuadas anteriormente por parte de otros investigadores, las cuales sugieren que los enzimas COX procedentes partir de rata resultan farmacológicamente diferentes de los procedentes de los humanos, según se ha reportado por parte de Ramesha, "Human and Rat Cyclooxigenases are Pharmacologically Distint", Adv. Exp. Mol. Biol. (1997) Vol 407, pp. 67-71.

Ejemplo V Comprobación de reducción de inflamación

El compuesto 41 fue objeto de comprobación en un ensayo de inflamación estándar, el modelo in vivo de edema plantar en pie de rata. Este ensayo es ampliamente utilizado en la industria farmacéutica para evaluar compuestos anti-inflamatorios. Las ratas fueron inyectadas con carragenano, el cual desencadena un rápido enema (hinchazón) al cabo de 3 horas, el cual puede ser medido de forma cuantitativa mediante el desplazamiento de volumen. Una única dosis de compuesto 41 (2 mg/kg) proporcionada por vía oral 1 hora después de la inyección de carragenano, provocó un descenso muy importante en la hinchazón.

En estos experimentos, el carragenano que fue inyectado se encontraba en 0,1 mL de salina acuosa, por lo que el incremento de 0,1 m en el volumen fue debido únicamente a la inyección. Tomando esto en consideración, se averiguó que tenía lugar entre un 80 y un 85% de reducción en la inflamación después del tratamiento con el compuesto 41. A efectos comparativos, la indometacina fue también objeto de comprobación en este ensayo, a una dosis de 2 mg/kg por vía oral y también se averiguó la existencia de una reducción comparable en la inflamación.

Más específicamente, ratas macho Sprague-Dawley (150 g) recibieron una inyección subplantar de carragenano (0,1 mL de una suspensión al 1% de carragenano en solución salina acuosa estéril) en la planta trasera derecha, con moderada anestesia a base de metoxiflurano. Una vez transcurrida 1 hora desde la administración de la inyección, las ratas fueron alimentadas con sonda con 0,5 mL de aceite de maíz que contenía o bien 90 \muL de DMSO o 90 \muL del compuesto 41, a las dosis específicadas más adelante. Se midió el volumen plantar ipsilateral (mL) con un pletismómetro de desplazamiento de agua, al cabo de 3 horas de haberse aplicado la inyección y se comparó con el volumen de la pata a tiempo cero, es decir anterior a la aplicación de la inyección, a los efectos de cálculo de edema.

Para cada una de las dosis, 6 ratas fueron objeto de inyección, resumiéndose los resultados seguidamente:

Compuesto 41
Concentración (mg/mL)	Edema a las 3 horas (mL)	Desviación estándar
0	0,87	0,1
0,2	0,55	0,04
0,5	0,47	0,07
1,0	0,39	0,03
2,0	0,38	0,07

Se da por entendido que pueden modificarse diversos detalles de la invención sin apartarse del campo de protección de la misma. Además, la siguiente descripción se proporciona tan solo a efectos ilustrativos y no con el propósito de limitar la invención definida a través de las reivindicaciones.

Claims

1. Procedimiento para alterar la especificidad de un compuesto inhibidor de ciclooxigenasa, que comprende los pasos de:

(a) proporcionar un compuesto que tiene actividad inhibidora de ciclooxigenasa, teniendo el compuesto un resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, asociado con la actividad inhibidora de la ciclooxigenasa, estando el compuesto desprovisto de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2; y

(b) alterar la especificidad del compuesto en el paso (a), pasando de estar desprovisto de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2 a tener especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2, mediante la conversión del compuesto que tiene el resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en un derivado que tiene un resto éster o un resto amida secundaria.

2. Procedimiento de la reivindicación 1, en el que el compuesto es un fármaco anti-inflamatorio no esteroide.

3. Procedimiento de la reivindicación 2, en el que el fármaco anti-inflamatorio no esteroide es seleccionado de entre el grupo que comprende ácidos fenámicos, indoles, ácidos fenilalcanoicos, ácidos fenilacéticos, sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y combinaciones de los mismos.

4. Procedimiento de la reivindicación 2, en el que el fármaco anti-inflamatorio no esteroide es seleccionado de entre el grupo que comprende indometacina, ácido 6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético, ácido meclofenámico, diclofenaco, ácido flufenámico, ácido niflúmico, ácido mefenámico, sulindaco, tolmetina, suprofeno, ketorolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, aceloferaco, alcofenaco, amfenaco, benoxaprofeno, bromfenaco, carprofeno, clidanaco, diflunisal, ácido efenámico, ácido etodólico, fenbufeno, fenclofenaco, fencloraco, fenoprofeno, ácido flecózico, indoprofeno, isofezolaco, ketoprofeno, loxoprofeno, meclofenamato, naproxeno, orpanoxina, pirprofeno, pranoprofeno, ácido tolfenámico, zaltoprofeno, zomopiraco, y ácidos farmacéuticamente aceptables de los mismos y combinaciones de los
mismos.

5. Procedimiento de la reivindicación 1 en el que el derivado amida secundaria es seleccionado de entre el grupo que comprende indometacin-N-metilamida, indometacin-N-etan-2-ol-amida, indometacin-N-octilamida, indometacin-N-nonilamida, indometacin-N-(2-metilbencil)amida, indometacin-N-(4-metilbencil)amida, indometacin-N-((R)-,
4-dimetilbencilamida, indometacin-N((S)-,4-dimetilbencilamida, indometacin-N-((2-fenetil)amida, indometacin-N-(4-fluorofenil)amida, indometacin-N-(4-clorofenil)amida, indametacin-N-(4-acetamidofenil)amida, indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida, indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida, indometacin-N-(4-metoxifenil)amida, indometacin-N-(3-etoxifenil)amida, indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida, indometacin-N-(3-piridil)amida, indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida, indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida, indometacin-N-(3-cloropropil)amida, indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida, indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida, indometacin-N-(2-pirazinil)amida, indometacin-N-2-(4-metoxitiazolil)amida, indometacin-N-(4-bifenil)
amida y combinaciones de las mismas.

6. Uso de un derivado éster de ácido carboxílico o de un derivado amida secundaria de ácido carboxílico, en el que:

(1): el derivado es selectivo para la inhibición de ciclooxigenasa-2, y

(2): el compuesto (a) es un inhibidor de ciclooxigenasa pero carece de selectividad para la inhibición de ciclooxigenasa-2 y (b) contiene un resto ácido carboxílico o una de sus sales farmacéuticamente aceptables

para la preparación de un medicamento que contiene una cantidad eficaz del citado derivado, suficiente para crear un tratamiento analgésico, anti-inflamatorio o antipirético en un animal vertebrado de sangre caliente, incluyendo humanos.

7. Uso de la reivindicación 6, en el que la cantidad para tratamiento eficaz, suficiente para crear un efecto analgésico, anti-inflamatorio o antipirético oscila entre aproximadamente 0,5 miligramos y aproximadamente 7,0 miligramos por kilogramo de peso corporal de animal por día.

8. Uso de la reivindicación 6, en el que la cantidad para tratamiento eficaz, suficiente para crear un efecto analgésico, anti-inflamatorio o antipirético, oscila entre aproximadamente 1,5 miligramos y aproximadamente 6,0 miligramos por kilogramo de peso corporal de animal y día.

9. Uso de la reivindicación 6, en el que la cantidad para tratamiento eficaz, suficiente para crear un efecto analgésico, anti-inflamatorio o antipirético, oscila entre aproximadamente 2,0 miligramos y aproximadamente 5,0 miligramos por kilogramo de peso corporal de animal y día.

10. Uso de la reivindicación 6, en el que el compuesto es un fármaco anti-inflamatorio no esteroide.

11. Uso de la reivindicación 10, en el que el fármaco anti-inflamatorio no esteroide es seleccionado de entre el grupo que comprende ácidos fenámicos, indoles, ácidos fenilalcanoicos, ácidos fenilacéticos, sus sales farmacéuticamente aceptables y combinaciones de los mismos.

12. Uso de la reivindicación 10, en el que el fármaco anti-inflamatorio no esteroide es seleccionado de entre el grupo que comprende indometacina, ácido 6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético, ácido meclofenámico, diclofenaco, ácido flufenámico, ácido niflúmico, ácido mefenámico, sulindaco, tolmetina, suprofeno, ketorolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, aceloferaco, alcofenaco, amfenaco, benoxaprofeno, bromfenaco, carprofeno, clidanaco, diflunisal, ácido efenámico, ácido etodólico, fenbufeno, fenclofenaco, fencloraco, fenoprofeno, ácido flecózico, indoprofeno, isofezolaco, ketoprofeno, loxoprofeno, meclofenamato, naproxeno, orpanoxina, pirprofeno, pranoprofeno, ácido tolfenámico, zaltoprofeno, zomopiraco, y ácidos farmacéuticamente aceptables de los mismos y combinaciones de los mismos.

13. Uso de la reivindicación 6, en el que el derivado es un derivado de un fármaco anti-inflamatorio no esteroide.

14. Uso de la reivindicación 13, en el que el derivado es un derivado de un fármaco anti-inflamatorio no esteroide seleccionado de entre el grupo que comprende ácidos fenámicos, indoles, ácidos fenilalcanoicos, ácidos fenilacéticos y combinaciones de los mismos.

15. Uso de la reivindicación 13, en el que el derivado es un derivado de un fármaco anti-inflamatorio no esteroide seleccionado de entre el grupo que comprende indometacina, ácido 6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético, ácido meclofenámico, diclofenaco, ácido flufenámico, ácido niflúmico, ácido mefenámico, sulindaco, tolmetina, suprofeno, ketorolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, aceloferaco, alcofenaco, amfenaco, benoxaprofeno, bromfenaco, carprofeno, clidanaco, diflunisal, ácido efenámico, ácido etodólico, fenbufeno, fenclofenaco, fencloraco, fenoprofeno, ácido flecózico, indoprofeno, isofezolaco, ketoprofeno, loxoprofeno, meclofenamato, naproxeno, orpanoxina, pirprofeno, pranoprofeno, ácido tolfenámico, zaltoprofeno, zomopiraco y combinaciones de los mismos.

16. Uso de la reivindicación 13, en el que el derivado es un derivado de un fármaco anti-inflamatorio no esteroide seleccionado de entre el grupo que comprende indometacin-N-metilamida, indometacin-N-etan-2-ol-amida, indometacin-N-octilamida, indometacin-N-nonilamida, indometacin-N-(2-metilbencil)amida, indometacin-N-(4-metilbencil)amida, indometacin-N-((R)-,4-dimetilbencilamida, indometacin-N((S)-,4-dimetilbencilamida, indometacin-N-((2-fenetil)amida, indometacin-N-(4-fluorofenil)amida, indometacin-N-(4-clorofenil)amida, indametacin-N-(4-acetamidofenil)amida, indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida, indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida, indometacin-N-(4-metoxifenil)amida, indometacin-N-(3-etoxifenil)amida, indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida, indometacin-N-(3-piridil)amida, indometacin-N-5-(2-cloro)piridil)amida, indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida,
indometacin-N-(3-cloropropil)amida, indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida, indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida, indometacin-N-(2-pirazinil)amida, indometacin-N-2-(4-metoxitiazolil)amida, indometacin-N-(4-bifenil)amida y combinaciones de las mismas.