ES2270825T3

ES2270825T3 - Derivados de vitamina d para el tratamiento de lupus eritematoso sistemico.

Info

Publication number: ES2270825T3
Application number: ES00923617T
Authority: ES
Inventors: Hector F. Deluca; Margherita T. Cantorna; Jean Humpal-Winter
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 1999-04-29
Filing date: 2000-04-25
Publication date: 2007-04-16
Anticipated expiration: 2020-04-25
Also published as: CA2370230C; EP1181020B1; DE60030107D1; WO2000066098A3; US20040142912A1; US6673782B2; CA2370230A1; WO2000066098A2; ATE336253T1; AU4370900A; DE60030107T2; JP2002543115A; EP1181020A2; US20020028830A1

Abstract

El uso de un compuesto de vitamina D elegido entre 1, 25-dihidroxivitamina D3, 19- nor-1, 25-dihidroxivitamina D2, 19-nor-21-epi-1, 25-dihidroxivitamina D3, 1, 25- dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D3, y 19-nor-1, 25-dihidroxi-24-homo-22- dehidro-22E-vitamina D3, en la fabricación de un medicamento de administración oral que reduce o elimina la proteinuria y/o reduce o elimina los nodos linfáticos hinchados en un paciente con LES, o para evitar los síntomas de LES en un individuo susceptible al LES, en el que el nivel de ingesta de calcio del paciente o individuo es de al menos 800 mg/día/72, 6 kg (160 lb) de paciente.

Description

Derivados de vitamina D para el tratamiento de lupus eritematoso sistémico.

Antecedentes de la invención

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune sistémica con el potencial de estar directamente involucrada en múltiples sistemas de órganos. (Véase la revisión de Kotzin, B.L., Cell 85: 303-306, 1996). Las manifestaciones clínicas del LES incluyen erupciones cutáneas y dolor de articulaciones, y participación renal progresiva y grave. Normalmente, los pacientes de LES presentan niveles en suero elevados de anticuerpos de los constituyentes nucleares (es decir, anticuerpos antinucleares). Con el fin de estudiar la enfermedad, los investigadores han empleado varios modelos animales, incluyendo los ratones híbridos F1 de Negro de Nueva Zelanda (NZB, del inglés "New Zealand Black") y de Blanco de Nueva Zelanda (NZW, del inglés "New Zealand White"), ratones MRL homocigotos para el gen de linfoproliferación (lpr) y ratones BXSB, que portan la enfermedad acelerando el gen Yaa en el cromosoma Y.

Los principales objetivos de los anticuerpos producidos en pacientes con LES incluyen complejos proteína-ácido nucleico, tales como cromatina, las partículas de ribonucleoproteína nuclear pequeña Sm y U1 (snRNP) y los complejos Ro/SSA y La/SSB RNP (Tan, 1989; Cotson y Odell, 1995). También se detectan autoanticuerpos de fosfolípidos y de moléculas de la superficie celular.

Una mayoría de los pacientes con LES presentan síntomas de fallo renal. Las presentaciones clínicas normalmente incluyen hematuria o proteinuria asintomáticas, síndromes nefríticos o nefróticos agudos, glomerulonefritis progresiva rápida e insuficiencia renal crónica. (Véase Austin y Balow, Seminars in Nephrology 19 (1): 2-11, 1999).

Los tratamientos actuales han abordado el lupus nefrítico, aunque los regímenes terapéuticos usados habitualmente son potencialmente tóxicos y pueden ser ineficaces en algunos pacientes de alto riesgo. Normalmente se prescriben regímenes inmunosupresivos intensivos. Para el LES severo, se usan inmunosupresivos tales como quimioterapias y ciclosporina. Otros tratamientos incluyen el tratamiento con corticosteroides y con fármacos citotóxicos. Las terapias alternativas incluyen el tratamiento con ciclofosfamida y con prednisona. Los efectos secundarios del uso a largo plazo de prednisona incluyen el desarrollo de presión sanguínea elevada, de diabetes y de osteoporosis.

Actualmente, muchas compañías farmacéuticas buscan terapias alternativas. La compañía "La Jolla Pharmaceutical Company" (La Jolla, California) está llevando a cabo ensayos en fase II/III de LJP394 Toleragen, diseñando para atacar células B que muestran anticuerpos anti ADN de cadena doble, que se ven afectadas en el daño renal. Genelabs Technologies, Inc., está llevando a cabo un ensayo en fase III de DHEA, un anticuerpo monoclonal humanizado que ataca CD40 en células T colaboradoras (Idec Pharmaceuticals Corp., San Diego, California) y un inhibidor complementario 5G1.1 C5 (Alexion Pharmaceuticals, New Haven, Connecticut).

Lemire y col., Autoimmunity 12 (2): 143-148, 1992, describen la atenuación mediante 1,25-dihidroxivitamina D_{3} de algunos síntomas de lupus de murina experimentales en ratones MRL/I.

1,25(OH)_{2}D_{3} y Análogos

Los metabolitos 1\alpha-hidroxilados de la vitamina D, principalmente la 1\alpha,25-dihidroxivitamina D_{3} y la 1\alpha,25-dihidroxivitamina D_{2}, son reguladores altamente potentes de la homeostasis de calcio en animales y en humanos. Más recientemente, también se ha determinado su actividad en la diferenciación celular. En consecuencia, se han preparado y evaluado multitud de análogos estructurales de dichos metabolitos, tales como compuestos con diferentes estructuras de las cadenas secundarias, con diferentes modelos de hidroxilación o con diferentes estereoquímicas. Ejemplos importantes de dichos análogos son la 1\alpha-hidroxivitamina D_{3}, la 1\alpha-hidroxivitamina D_{2}, diversos derivados fluorados en las cadenas laterales de la 1\alpha,25-dihidroxivitamina D_{3} y análogos homologados de cadena lateral. Varios de estos compuestos conocidos exhiben actividades altamente potentes in vivo o in vitro, y poseen perfiles de actividad ventajosos, y por tanto se usan, o han su uso ha sido propuesto, en el tratamiento de una serie de enfermedades tales como osteodistrofia renal, raquitismos resistentes a la vitamina D, osteoporosis, soriasis, esclerosis múltiple, artritis y determinadas malignidades.

1,25-Dihidroxivitamina D_{3} Como Un Inmunomodulador

El primer indicio de que la vitamina D podría modular la inmunidad fue el descubrimiento de que los monocitos sanguíneos periféricos y los linfocitos T activados presentan receptores de 1,25-dihidroxivitamina D_{3} (revisado en Manolagas, S.C. y col., Mol. and Cell. Endocrin. 43: 113-122, 1985). A pesar de las numerosas investigaciones, la actividad inmunomoduladora de la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} permanece sin definir en su mayor parte y a menudo es causa de controversia (revisión en Manolagas, S.C., y col., ver anterior, 1985; Rigby, W.F.C., Today 9: 54-57, 1988; y Lemire, J.M., y col., J. Nutr. 125: 1704S-1708S, 1995).

La acción de la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} sobre las células mononucleares sanguíneas periféricas humanas (PBMC, del inglés "peripheral blood mononuclear cells") se ha estudiado intensivamente in vitro. Estos experimentos in vitro mostraron que la hormona inhibió la proliferación estimulada por mitógeno de las PBMC (Lemire, J.M., y col., J. Clin. Invest. 74: 657-661, 1984; Rigby, W.F.C., y col., J. Clin. Invest. 74: 1451-1455, 1984) reduciendo la producción de IL-2 (Lemire, J.M, y col., J. Immunol. 134: 3032, 1985; Iho, S., y col., Immunol. Let. 11: 331-336, 1985; Manolagas, S.C., y col., J. Clin. Endocrinol. Met. 63: 394, 1986) al nivel de transcripción génica (Alroy, I., y col., Mol. Cell. Biol. 15: 5789-5799, 1995). Por el contrario, Bhalla, y col. (Bhalla, A.K., y col., J. Immunol. 133: 1748-54, 1984) publicaron que la hormona no inhibió la proliferación celular de timo y de bazo de ratón estimulada por mitógeno, aunque sí inhibió la proliferación de dichas células estimulada por antígeno. Lacey y col. (Lacey, D.L., y col., J. Immunol. 138: 1680-1686, 1987) publicaron que la hormona estimulaba realmente la proliferación inducida por mitógeno de células T clonadas de ratón. Ningún estudio ha establecido directamente la acción de la hormona sobre la diferenciación de linfocitos T y sobre la función in vivo.

Se han presentado resultados dispares acerca de la síntesis de IFN-\gamma de linfocitos T in vitro. Rigby y col. (Rigby, W.F.C., y col., J. Clin. Invest. 79: 1659-1664, 1987) y Reichel y col. (Reichel, H., y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3387-3389, 1987) demostraron que la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} disminuía la síntesis de IFN-\gamma en las PBMC estimuladas por mitógeno. Sin embargo, Muller y col. (Muller, K, y col., Immunol. Let. 35: 177-182, 1993) publicaron que la hormona no tenía efecto sobre la síntesis de IFN-\gamma en líneas de células T humanas. La hormona inhibió el desarrollo de linfocitos T citotóxicos pero no la función citotóxica (Merino, F., y col., Cell. Immunol. 118: 328-336, 1989).

No existe controversia acerca de la acción de la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} in vitro sobre células monocitos/macró-
fagas. La 1,25-dihidroxivitamina D_{3} potenció una diferenciación de células de leucemia mieloide del fenotipo de macrófago (Manolagas, S.C., y col., ver anterior, 1985). También aumentó la producción de monocitos/macrófagos de M-CSF, TNF-\alpha y prostaglandina E2, pero disminuyó la síntesis de IL-12 (Lemire, J.M., y col., FASEB J. 8: A745 (abs), 1994). La hormona disminuyó la función coestimuladora de macrófagos para la proliferación de células T (Rigby, W.F.C. y M.G. Waugh, Arthritis Rheum. 35: 110-119, 1992). Se han presentado resultados dispares para los efectos de la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} sobre la síntesis in vitro de IL-1. Según algunos informes, la hormona disminuyó la síntesis de IL-1 (Iho, S., y col., ver anterior, 1985; Tsoukas, C.S., y col., J. Clin. Endocrinol. Metab. 69: 127-133, 1989) y aumentó la síntesis de IL-1 según otros informes (Amento, E.P., J. Clin. Invest. 73: 731-739, 1987; Bhalla, A.K., y col., Immunol. 72: 61-64, 1991; Fagan, D.L., y col., Mol. Endocrinol. 5: 179-186, 1991). Del mismo modo, algunos investigadores publicaron que la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} potenció la expresión de proteína de clase II in vitro (Morel, P.A., y col., J. Immunol. 136: 2181-2186, 1986), pero otros publicaron que disminuyó la expresión de proteína de clase II (Amento, E.P., ver anterior, 1987; Carrington, M.N., y col., J. Immunol. 140: 4013-4018, 1988; Rigby, W.F.C., y col., Blood 76; 189-197, 1990). Considerados en conjunto, estos descubrimientos no proporcionan una visión clara y consistente de cómo podría modificar la función de macrófago la 1,25-dihidroxivitamina D_{3}. Ningún estudio ha abordado directamente la acción de la hormona sobre la diferenciación monocito/macrófago y sobre la función in vivo.

También existe controversia acerca de la acción de la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} sobre los linfocitos B (revisado en Rigby, W.F.C., ver anterior, 1988). Lemire y col. (Lemire, J.M., y col., ver anterior, 1984) publicaron que la hormona inhibió la síntesis de I_{g}G y de I_{g}M estimulada por mitógeno mediante células mononucleares sanguíneas periféricas. Se han demostrado los efectos supresitos y potenciadotes de la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} sobre la proliferación de células B estimulada por mitógeno y sobre la síntesis de anticuerpos in vitro. In vivo, se ha publicado que la 1,25-dihidroxivitamina D_{3} potencia la síntesis de anticuerpos en determinados estudios (Abe, J., y col., Endocrinology 124: 2645-2647, 1989; Ross, T.K., y col., Vitamins Hormones 49: 281-326, 1994; Daynes, R.A., y col., Infec. Immun. 64: 1100-1109, 1996) y la inhibe en otros estudios (Lemire, J.M., y col., ver anterior, 1995).

Breve resumen de la invención

La presente invención se refiere al uso de un compuesto de vitamina D elegido entre 1,25-dihidroxivitamina D_{3}, 19-nor-1,25-dihidroxivitamina D_{2}, 19-nor-21-epi-1,25-dihidroxivitamina D_{3}, 1,25-dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D_{3}, y 19-nor-1,25-dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D_{3}, en la fabricación de un medicamento de administración oral que reduce o elimina la proteinuria y/o reduce o elimina los nodos linfáticos hinchados en un paciente con LES, o para evitar los síntomas de LES en un individuo susceptible al LES, en el que el nivel de ingesta de calcio del paciente o individuo es de al menos 800 mg/día/72,6 kg (160 lb) de paciente.

(Con "síntomas de LES" los solicitantes se refieren al hinchamiento de nodo linfático y a la proteinuria que son característicos del LES).

El medicamento puede usarse en un método que comprende la selección de un paciente de LES y la administración de una cantidad suficiente del análogo de vitamina D al paciente, de tal modo que los síntomas de LES desaparezcan. Preferiblemente, el paciente mostrará una reducción en los niveles de proteinuria hasta menos de 100 mg/dL. Preferiblemente, el paciente también seguirá una dieta de contenido en calcio en la que la ingesta de calcio del paciente es al menos de 800 mg/día/72,6 kg (160 lb) de peso corporal de calcio. Un intervalo preferido va desde 800 mg/día hasta 1,5 g/día por 72,6 kg (160 lb) de peso corporal. En una forma preferida de la invención, el compuesto es 1,25(OH)_{2}D_{3}.

Una dosis preferida de compuesto de vitamina D para la presente invención es la máxima que un paciente pueda tolerar sin desarrollar hipercalcemia.

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Si el compuesto de vitamina D no es un compuesto 1\alpha-hidroxi, una dosis diaria particularmente ventajosa de compuesto de vitamina D se encuentra entre 5,0 y 50 \mug por día y por 72,6 kg (160 lb) de paciente. Si el compuesto de vitamina D es un compuesto 1\alpha-hidroxi, la dosis preferida del compuesto se encuentra entre 0,5 y 25 \mug por día y por 72,6 kg (160 lb) de paciente. En esta realización de la invención, la cantidad de 1,25(OH)_{2}D_{3} administrada podría ser de hasta 1,5 \mug por día y por 72,6 kg (160 libras) de paciente. Una dosis preferida estaría entre 0,5 y 5,0 \mug por día y por 72,6 kg (160 libras) de paciente.

Una ventaja de la presente invención es que el método disminuye los síntomas de LES de proteinuria y de hinchamiento de nodos linfáticos.

Otra ventaja de la presente invención es que el método disminuye el inicio de síntomas de LES.

Otra ventaja de la presente invención es que en el método el compuesto de vitamina D se administra oralmente.

Otra ventaja de la presente invención es que los individuos susceptibles pueden ser tratados profilácticamente para evitar el desarrollo de LES.

Otra ventaja de la presente invención es que no se produce pérdida ósea como efecto secundario del tratamiento.

Otras ventajas y características de la presente invención serán evidentes tras examinar la especificación, las reivindicaciones y las figuras.

Breve descripción de las diferentes vistas de las figuras

La Figura 1 es un gráfico de la gravedad de la proteinuria en ratones MRL/MPJ de control y tratados con 1,25(OH)_{2}
D_{3} frente a la edad del ratón. El gráfico muestra el % de ratones con valores de proteinuria de 100 mg/dL y superiores.

La Figura 2 es un gráfico de la gravedad de LES en ratones MRL/MPJ de control y tratados con 1,25(OH)_{2}D_{3} frente a la edad del ratón, y muestra la gravedad de los síntomas de MRL/MPJ.

Las Figuras 3A y 3B son gráficos de proteinuria en ratones con una dieta del 0,02% en calcio (Figura 3A) y de los valores de síntomas medios (Figura 3B) en ratones con lupus con una dieta del 0,02% en calcio.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona el uso de un compuesto de vitamina D elegido entre 1,25-dihidroxivitamina D_{3}, 19-nor-1,25-dihidroxivitamina D_{2}, 19-nor-21-epi-1,25-dihidroxivitamina D_{3}, 1,25-dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D_{3}, y 19-nor-1,25-dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D_{3}, en la fabricación de un medicamento de administración oral que reduce o elimina la proteinuria y/o reduce o elimina los nodos linfáticos hinchados en un paciente con LES, o para evitar los síntomas de LES en un individuo susceptible al LES, en el que el nivel de ingesta de calcio del paciente o individuo es de al menos 800 mg/día/72,6 kg (160 lb) de paciente.

El medicamento puede usarse en un método que comprende la selección de un paciente de LES y la administración de una cantidad suficiente del análogo de vitamina D al paciente, de tal modo que los síntomas de LES desaparezcan. En la realización preferida de la invención, el paciente tiene una ingesta de calcio ajustada de al menos 800 mg/día/72,6 kg (160 lb) de paciente.

Uno puede evaluar un compuesto de vitamina D candidato por su adecuabilidad para la presente invención. El compuesto candidato debería ser sometido en primer lugar a un procedimiento de monitorización n modelo de ratón, tal como el descrito más adelante en los Ejemplos para la 1,25-(OH)_{2}D_{3}. Un compuesto válido reducirá los síntomas de LES de hinchamiento de nodos linfáticos y de proteinuria en ratones MRL/MPJ, preferiblemente en la extensión mostrada en los Ejemplos de la 1,25-(OH)_{2}D_{3}. Sin embargo, un compuesto válido generalmente se describe como uno que reduce los síntomas de LES.

Preferiblemente, el compuesto debería mostrar una reducción significativa en la proteinuria. Preferiblemente, el ratón tratado mostrará una reducción en los niveles de proteinuria hasta menos de 100 mg/dL. Preferiblemente, el porcentaje de proteinuria en los ratones tratados será inferior al 50% de la de control. Más preferiblemente, el nivel de proteinuria será inferior al 10% de la de control. Entonces se predeciría que el compuesto es válido para pacientes humanos.

Una dosis preferida del compuesto de vitamina D es la máxima que un paciente pueda tolerar sin desarrollar hipercalcemia.

Si el compuesto de vitamina D no es un compuesto 1\alpha-hidroxi, una dosis diaria particularmente ventajosa del compuesto de vitamina D se encuentra entre 5,0 y 50 \mug por día y por 72,6 kg (160 libras) de paciente.

Si el compuesto de vitamina D es un compuesto 1\alpha-hidroxi, la dosis preferida se encuentra entre 0,5 y 25 \mug por día y por 72,6 kg (160 libras) de paciente. En esta realización de la invención, la cantidad de 1,25(OH)_{2}D_{3} administrada podría ser de hasta 1,5 \mug por día y por 72,6 kg (160 libras) de paciente. Una dosis preferida estaría entre 0,5 y 1,5 \mug por día y por 72,6 kg (160 libras) de paciente.

La 1,25-dihidroxivitamina D_{3} (1,25-(OH)_{2}D_{3}) se administra actualmente en un nivel de 0,5 \mug/día por cada 72,6 kg (160 libras) de paciente, normalmente en dos cápsulas de cuarto de microgramo por la mañana y por la noche para el tratamiento de la osteoporosis o de la osteodistrofia renal. La dieta de calcio debería estar en el orden de 800 mg a 1,5 g/día. Nuestros resultados mostrados más adelante en los Ejemplos indican que el tratamiento con 1,25(OH)_{2}D_{3} no es eficaz cuando se usa con dietas bajas en calcio (por debajo de 500 mg/día por cada 72,6 kg (160 libras) de paciente).

Por tanto, la dosis máxima preferida de 1,25(OH)_{2}D_{3} parece estar entre 0,5 y 0,75 \mug/día. Otros compuestos de vitamina D 1\alpha-hidroxi menos activos pueden administrarse a mayores dosis de forma segura. Por ejemplo, en Japón el tratamiento de la osteoporosis con 1,25-(OH)_{2}D_{3} se da entre 0,5 y 1,0 \mug/día. Esto mismo es válido para otros países, tales como Italia, donde el Dr. Caniggia ha usado con éxito hasta 1 \mug/día de 1,25 (OH)_{2}D_{3} (Caniggia, A., y col., Metabolism 39: 93-99, 1990).

También prevemos una menor dosis preventiva de compuesto de vitamina D en gente susceptible.

Creemos que para el tratamiento de enfermedad LES ya existente, la dosis más alta de 1,25-(OH)_{2}D_{3} sería lo más útil.

Un régimen de tratamiento preferido sería el siguiente: Aumentar la ingesta de calcio del paciente hasta al menos 800 mg/día, posiblemente mediante suplementos de calcio, y aumentando el consumo de productos lácteos. En estas circunstancias, la dosis de 1,25-(OH)_{2}D_{3} puede aumentarse de forma segura hasta 1,5 \mug si se administra por la noche.

Un modo de tratamiento preferido es diariamente, por administración oral, preferiblemente con una formulación de liberación lenta o con un compuesto de liberación lenta. Los solicitantes prevén específicamente que una dosificación prácticamente continua del compuesto de vitamina D es útil en la reducción de los síntomas de la enfermedad de LES.

El modo preferido de tratamiento para los compuesto 1\alpha-hidroxi es la administración de entre 0,5 y 0,75 \mug/día del compuesto. Un método preferido sería administrar entre 0,75 y 1 \mug/día a las 10 p.m. o antes de irse a dormir. Un método aún más preferido sería aumentar la dieta de calcio hasta al menos 800 mg/día y simultáneamente administrar entre 0,75 y 1,5 \mug/día del compuesto a las 10 p.m.

Un modo preferido del tratamiento para los compuestos no 1\alpha-hidroxi sería la administración, dentro de una dieta, en la que los pacientes reciben al menos 800 mg/día de calcio. En este caso, la dosis de tratamiento podría aumentarse hasta 50 \mug/día por cada 72,6 kg (160 libras) de paciente.

La dosis de tratamiento óptima se determinará mediante la observación de una reducción en los síntomas del paciente en función de la cantidad de compuesto de vitamina D administrado.

Con "síntomas de LES" queremos decir síntomas que se caracterizan por niveles elevados de proteinuria y por hinchamiento de nodos linfáticos.

Con "reducción de los síntomas de LES" queremos decir que el nivel de proteinuria del paciente será inferior al 50% del que presentan los pacientes de LES no tratados. Preferiblemente, el nivel de proteinuria será inferior al 10% del de los pacientes de LES no tratados.

La invención también es útil para retrasar o para evitar el inicio del LES en individuos susceptibles.

El LES es una enfermedad multigenética y se sabe poco acerca de qué genes controlan la susceptibilidad frente a esta enfermedad. Lo que se sabe es que los parientes en primer grado (hijos, padres, hermanos) presentan un riesgo del 5% de desarrollar LES en comparación con el 0,001% del público general. Si un gemelo tiene LES, el otro tiene entre el 11% y el 69% de posibilidades de contraer la enfermedad. Prevemos que los pacientes en primer grado de pacientes con LES son un grupo probable de individuos susceptibles que podrían beneficiarse del tratamiento profiláctico. Estudios futuros con marcadores genéticos, según se vayan realizando, permitirán la determinación de otros individuos susceptibles. Adicionalmente, se sabe que más del 85% de los pacientes de LES son mujeres. Véase Cooper, Arthritis and Rheumatism 41 (10): 1714-1724, 1998.

Los experimentos mostrados a continuación demuestran una reducción o eliminación de los síntomas de LES en modelos de ratones. Predecimos un tipo similar de reducción de los síntomas en pacientes humanos.

Una ventaja de la presente invención es que no se produce pérdida ósea como efecto secundario como ocurre en otros tratamientos. Por ejemplo, véase Trapani, S., y col., Rheumatol. Int. 18: 45-49, 1988, y Kipen, Y., y col., J. Rheumatol. 26: 310-317, 1999.

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Ejemplos

La evidencia experimental presentada a continuación demuestra que la 1,25(OH)_{2}D_{3} evitó o redujo los síntomas de LES en ratones con una dieta con un 0,87% de calcio, pero no inhibió dichos síntomas en ratones con una dieta con un 0,02% de calcio.

A. Dieta con un 0,87% de Calcio

El modelo para la enfermedad de lupus humano son los ratones MRL. Véase Briñas, y col., J. Exp. Med. 148: 1198-1215, 1978 y P.L. Cohen y R.A. Eisenburg, Annu. Rev. Immunol. 9: 243-69, 1991.

Una vez que los ratones MRL de este estudio tuvieron una edad de 4 semanas, comenzaron una de las tres dietas experimentales. Todos los ratones fueron alimentados con la dieta experimental que contiene un 0,87% de Ca. Los ratones de control fueron alimentados con la dieta experimental sin 1,25(OH)_{2}D_{3}; un grupo de 7 ratones fueron alimentados con la dieta experimental de 50 ng/ratón/día de 1,25(OH)_{2}D_{3}; y otro grupo de 8 ratones fue alimentado con la dieta experimental de 200 ng/ratón/día de 1,25(OH)_{2}D_{3}. Los ratones fueron sometidos a chequeo semanalmente en busca de síntomas físicos. En los ratones MRL con alimentación de control, los síntomas de enfermedad de LES se desarrollaron espontáneamente después de 5 semanas. Se asignaron números para los síntomas entre 0,5 y 3, siendo 0,5 úlceras pequeñas; 1, nodos linfáticos hinchados debajo de las patas delanteras; 2, nodos linfáticos hinchados debajo de las patas delanteras y en el cuello; 3, nodos linfáticos hinchados debajo de las patas delanteras, en el cuello y en las patas traseras (puntuación de gravedad para la tabla).

Los niveles de proteinuria se comprobaron semanalmente comenzando a las 16 semanas de edad.

A las 10 semanas de edad, los animales con dosis de 200 ng de 1,25-(OH)_{2}D_{3} comenzaron a mostrar síntomas de hipercalcemia. Entonces se cambió la dieta por otra igual que proporciona un nivel de 100 ng/ratón/día.

Los primeros síntomas físicos del lupus comenzaron a desarrollarse en dos ratones hembra con dieta de control a las 14 semanas de edad. Ninguno de los ratones tratados con 1,25-(OH)_{2}D_{3} mostró síntomas a esa edad. A las 17 semanas de edad los ratones de control comenzaron a morir. Sus niveles de proteinuria se elevaron por encima de 300 mg/dL. (Los niveles normales de proteinuria son de 30 mg/dL o inferiores). A la misma edad, los animales tratados con 1,25 comenzaron a morir de lo que creemos era hipercalcemia. Las Figuras 1 y 2 muestran los resultados de estos experimentos. La Figura 1 compara el porcentaje de ratones con proteinuria elevada con la edad del ratón. La Figura 2 compara la gravedad de los síntomas de LES con la edad del ratón.

Se midieron los valores de calcio en suero y se determinaron en 8mg% Ca para los controles y en 12mg% Ca para los grupos tratados tanto con 50 ng como con 100 ng. La dieta del tratamiento con 1,25(OH)_{2}D_{3} se retiró a las 17 semanas de edad, y todos los ratones fueron alimentados con la dieta de control con un 0,87% de calcio hasta el final del experimento. Los resultados del experimento descrito se muestran en las Tablas 1 y 2 presentadas a continuación. La Tabla 1 indica que ninguno de los ratones tratados con 1,25(OH)_{2}D_{3} desarrolló proteinuria a 100 mg/dL o más. La Tabla 2 indica que los valores de gravedad de la enfermedad fueron muy inferiores en los ratones tratados en comparación con los de los controles.

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TABLA 1

1

TABLA 2

2

B. Grupo con Dieta con un 0,02% de Calcio

Se criaron ratones MRL/MPJ-Fas<lpr> con una dieta de pienso. A las 5-6 semanas de edad, se cambió a 13 ratones a un dieta purificada que contenía un 0,02% de calcio, y 14 ratones se pusieron en una dieta que contenía un 0,02% de calcio con 100 ng de 1,25-(OH)_{2}D_{3} por ratón y día. Los ratones fueron sometidos a chequeo semanalmente en busca de síntomas de lupus. Se asignó una puntuación numérica a los síntomas comenzando en 0,5 = pequeña erupción cutánea; 1 = nodos linfáticos hinchados bajo las patas delanteras; 2 = nodos linfáticos hinchados bajo las patas delanteras y en el cuello; 3 = nodos linfáticos hinchados bajo las patas delanteras, en el cuello y en las patas traseras (valores de gravedad usados en la correspondiente figura).

La Figura 3A y B y las Tablas 3 y 4 describen los datos obtenidos en este estudio. A las 12 semanas de edad, el grupo de 0,02% en calcio + 100 ng de 1,25(OH)_{2}D_{3} comenzó a mostrar síntomas de LES. No fue hasta las 14 semanas de edad que los ratones de control (0,02% en Ca) presentaron el mismo porcentaje de gravedad que los ratones tratados con 1,25-(OH)_{2}D_{3}. Entre las 18 y las 20 semanas de edad, aproximadamente el 21,4% de los ratones de 0,02% en Ca + 100 ng de 1,25-(OH)_{2}D_{3} murieron. Sin embargo, ninguno de los controles había alcanzado la muerte. El experimento finalizó a las 20 semanas de edad.

Concluimos que el uso de una dieta baja en calcio simultánea al tratamiento con 1,25-(OH)_{2}D_{3} da como resultado que la progresión de la enfermedad sea más rápida.

TABLA 3

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TABLA 4

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Claims

1. El uso de un compuesto de vitamina D elegido entre 1,25-dihidroxivitamina D_{3}, 19-nor-1,25-dihidroxivitamina D_{2}, 19-nor-21-epi-1,25-dihidroxivitamina D_{3}, 1,25-dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D_{3}, y 19-nor-1,25-dihidroxi-24-homo-22-dehidro-22E-vitamina D_{3}, en la fabricación de un medicamento de administración oral que reduce o elimina la proteinuria y/o reduce o elimina los nodos linfáticos hinchados en un paciente con LES, o para evitar los síntomas de LES en un individuo susceptible al LES, en el que el nivel de ingesta de calcio del paciente o individuo es de al menos 800 mg/día/72,6 kg (160 lb) de paciente.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que primero se ajusta la ingesta de calcio del paciente a al menos 800 mg/día/72,6 kg (160 libras) de paciente, antes de la administración del medicamento.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que el compuesto se administra por la noche.

4. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la ingesta de calcio del paciente se complementa con suplementos de calcio.

5. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la cantidad de compuesto que se va a administrar se encuentra entre 0,5 y 25 \mug/día/72,6 kg (160 lb) de paciente.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la cantidad de compuesto que se va a administrar se encuentra entre 0,5 y 0,75 \mug/día/72,6 kg (160 lb) de paciente.

7. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la dosis debe administrarse diariamente.