ES2282162T3 - 4-pirimidinil-n-acil-l-fenilalanninas. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de la fórmula I en la que R1 es un grupo de la fórmula Y-1 en la que R22 y R23, con independencia entre sí, son hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, cicloalquilo, arilo, arilalquilo C1-6, nitro, ciano, alquiltio C1-6, alquisulfinilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, halógeno o perfluoralquilo C1-6 y por lo menos uno de R22 y R23 es diferente del hidrógeno, y R24 es hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, arilo, nitro, ciano, alquilsulfonilo C1-6 o halógeno; o bien R1 es un grupo de la fórmula Y-2, que es un anillo heteroaromático de cinco o seis eslabones, unido a través del átomo de carbono al carbonilo de la amida, dicho anillo contiene uno, dos o tres heteroátomos elegidos entre N, O y S y uno o dos átomos de dicho anillo están sustituidos con independencia entre sí por alquilo C1-6, cicloalquilo, halógeno, ciano, perfluoralquilo o arilo y por lo menos uno de dichos átomos sustituidos está adyacente al átomo de carbono unido al carbonilo de la amida; o bienR2 es hidrógeno o alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido, arilalquilo o arilo; R3 es hidrógeno o alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido, arilalquilo C1-6 o arilo; R4 es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 sus-tituido o arilo; R5 es hidrógeno, alquilo C1-6, cloro o alcoxi C1-6; R6 es hidrógeno, alquilo C1-6, alquilcarboniloxilo C1-6 alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido, o bien R6 es un grupo de la fórmula P-3 en la que R32 es hidrógeno o alquilo C1-6, R33 es hidrógeno, alquilo C1-6, arilo, R34 es hidrógeno o alquilo C1-6, "h" es un número entero de 0 a 2, "g" es un número entero de 0 a 2, la suma de h y g se sitúa entre 1 y 3; o bien R6 es un grupo de la fórmula P-4 en la que R32, g y h tienen los significados recién definidos, Q'' es O, S, -(CH2)j- o un grupo de la fórmula N-R35, R35 es hidrógeno, alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alcanoílo C1-6, alcoxicarbonilo C1-6; "j" es el número 0, 1 ó 2; o sus sales farmacéuticamente aceptables; el término "alquilo C1-6, sustituido" significa un grupo de alquilo C1-6, que está sustituido por uno o mas grupos elegidos independientemente entre cicloalquilo, nitro, ariloxilo, arilo, hidroxilo, halógeno, ciano, alcoxi C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquiltio C1-6, alquilsulfinilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, amino y mono o di-alquilamino C1-6; el término "arilo" significa un grupo mono- o bicíclico aromático; el término "cicloalquilo" significa un anillo carblocíclico de 3 a 7 miembros.
Description
4-pirimidinil-N-acil-L-fenilalaninas
La molécula-1 de adhesión a
células vasculares (VCAM-1), miembro de la familia
de supergenes de la inmunoglobulina (Ig), se expresa en endotelio
activado pero no en reposo. La integrina VLA-4
(\alpha_{4}\beta_{1}), es un antígeno de aparición muy
tardía que se expresa en muchos tipos de células, incluyendo los
linfocitos circulantes, eosinófilos, basófilos y monocitos, pero no
en neutrófilos, y es el principal receptor de la
VCAM-1. Los anticuerpos de VCAM-1 o
de VLA-4 pueden bloquear la adhesión de estos
leucocitos mononucleares y de las células de melanoma al endotelio
activado in vitro. Los anticuerpos de ambas proteínas han
sido eficaces en inhibir la infiltración de leucocitos y en evitar
el daño de los tejidos de varios modelos de inflamación animal. Se
ha demostrado que los anticuerpos monoclonales
anti-VLA-4 bloquean la emigración de
células T en caso de artritis inducida por adyuvantes, impiden la
acumulación de eosinófilos y la broncoconstricción en modelos de
asma, reducen la parálisis e inhiben la infiltración de monocitos y
linfocitos en encefalitis autoinmune experimental (EAE). Se ha
demostrado que los anticuerpos monoclonales
anti-VCAM-1 prolongan el tiempo de
supervivencia de los trasplantes cardíacos homoplásticos. Los
estudios recientes han demostrado que los anticuerpos monoclonales
anti-VLA-4 pueden prevenir la
insulitis y la diabetes de ratones diabéticos no obesos y pueden
atenuar de modo significativo la inflamación en caso de modelo de
colitis de monos tamarinos del algodonero. Se ha demostrado además
que la VCAM se expresa en células del endotelio de tejido inflamado
del colon en un modelo de enfermedad intestinal inflamatoria de
ratas sometidas a TNB/etanol (Gastroenterology 1999,
116, 874-883).
Por consiguiente, los compuestos que inhiben la
interacción entre integrinas que contienen \alpha_{4} y la
VCAM-1 pueden ser muy útiles como agentes
terapéuticos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias
crónicas, tales como la artritis reumatoide (RA), la esclerosis
múltiples (MS), el asma y las enfermedades intestinales
inflamatorias (IBD). Los compuestos de la presente invención tienen
este efecto.
La WO 99/10312 y WO 99/10313 describen derivados
de N-alcanoilfenilalanina y derivados de
N-aroilfenilalanina, respectivamente, que son
inhibidores de unión de
VCAM-1/VLA-4.
Tal como se utiliza en esta descripción, el
término "halógeno" significa uno cualquiera de los cuatro
halógenos, bromo, cloro, flúor y yodo, a menos que se indique lo
contrario. Los halógenos preferidos son el bromo, flúor y
cloro.
cloro.
El término "alquilo de bajo peso
molecular", solo o en combinación con otro, significa un grupo
alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene un máximo de seis
átomos de carbono, por ejemplo el metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, n-butilo,
sec-butilo, isobutilo, tert-butilo,
n-pentilo, n-hexilo, etcétera.
El término "alquilo de bajo peso molecular
sustituido" significa un grupo alquilo de bajo peso molecular
recién definido que está sustituido por uno o varios grupos elegidos
con independencia entre sí entre cicloalquilo, nitro, ariloxi,
arilo, hidroxi, halógeno, ciano, alcoxi de bajo peso molecular,
alcanoílo de bajo peso molecular, alquiltio de bajo peso molecular,
(alquilo de bajo peso molecular)-sulfinilo, (alquilo
de bajo peso molecular)-sulfonilo, amino y mono- o
di-(alquilo de bajo peso molecular)-amino. Son
ejemplos de grupos alquilo de bajo peso molecular sustituidos el
2-hidroxietilo, 3-oxobutilo,
cianometilo y 2-nitropropilo.
El término "alquilo de bajo peso molecular
perfluorado" para los casos de R_{4}, R_{22} o R_{23},
significa un grupo alquilo de bajo peso molecular sustituido del
modo recién definido que es un grupo metilo o etilo del que todos
los átomos de hidrógeno se han sustituido por flúor, es decir
trifluormetilo y pentafluoretilo.
El término "alquenilo de bajo peso
molecular" significa un grupo alquileno que tiene de 2 a 10
átomos de carbono y un doble enlace situado entre dos átomos de
carbono adyacentes cualesquiera.
El término "cicloalquilo" significa un
anillo carbacíclico de 3 a 7 eslabones, sin sustituir o sustituido.
Los sustituyentes útiles con arreglo a la presente invención son el
hidroxi, halógeno, ciano, alcoxi de bajo peso molecular, alcanoílo
de bajo peso molecular, alquilo de bajo peso molecular, aroílo,
(alquilo de bajo peso molecular)-tio, (alquilo de
bajo peso molecular)-sulfinilo, (alquilo de bajo
peso molecular)-sulfonilo, arilo, heteroarilo y
amino
sustituido.
sustituido.
El término "alcoxi de bajo peso molecular"
significa un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada que contiene
un máximo de seis átomos de carbono, por ejemplo el metoxi, etoxi,
n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi,
tert-butoxi,
etcétera.
etcétera.
El término "(alquilo de bajo peso
molecular)-tio" significa un grupo alquilo de
bajo peso molecular unido al resto de la molécula mediante un átomo
de azufre divalente, un grupo metilmercapto o isopropilmercapto. El
término "(alquilo de bajo peso
molecular)-sulfinilo" significa un grupo alquilo
de bajo peso molecular recién definido, unido al resto de la
molécula mediante un átomo de azufre del grupo sulfinilo. El término
"(alquilo de bajo peso molecular)-sulfonilo"
significa un grupo alquilo de bajo peso molecular recién definido,
unido al resto de la molécula mediante un átomo de azufre del grupo
sulfonilo.
El término "arilo" significa un grupo
aromático mono- o bicíclico, por ejemplo fenilo o naftilo, que está
sin sustituir o sustituido por grupos sustituyentes convencionales.
Los sustituyentes preferidos son el alquilo de bajo peso molecular,
alcoxi de bajo peso molecular, hidroxi-(alquilo de bajo peso
molecular), hidroxi, hidroxialcoxi, halógeno, (alquilo de bajo peso
molecular)-tio, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfinilo, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfonilo, ciano, nitro, perfluoralquilo,
alcanoílo, aroílo, arilalquinilo, alquinilo de bajo peso molecular y
(alcanoílo de bajo peso molecular)-amino. Los
ejemplos de grupos arilo que pueden utilizarse con arreglo a la
presente invención son el fenilo, p-tolilo,
p-metoxifenilo, p-clorofenilo,
m-hidroxifenilo, m-metiltiofenilo,
2-metil-5-nitrofenilo,
2,6-diclorofenilo, 1-naftilo,
etcétera.
El término "arilalquilo" significa un grupo
alquilo de bajo peso molecular tal como se ha definido antes, en el
que uno o varios átomos de hidrógeno se han sustituido por un grupo
arilo o heteroarilo, definidos en esta descripción. Puede utilizarse
con arreglo a esta invención cualquier aralquilo convencional, por
ejemplo el bencilo,
etcétera.
etcétera.
El término "heteroarilo" significa un
anillo heteroaromático monocíclico de 5 ó 6 eslabones, sin sustituir
o sustituido, o un anillo heteroaromático bicíclico de 9 ó 10
eslabones, que contenga 1, 2, 3 ó 4 heteroátomos que, con
independencia entre sí, serán N, S u O. Son ejemplos de anillos
heteroarilo la piridina, bencimidazoles, indoles, imidazoles,
tiofenos, isoquinolinas, quinolinas, etcétera. En la definición de
heteroarilo se incluyen los sustituyentes definidos en el apartado
"arilo".
El término "(alcoxi de bajo peso
molecular)-carbonilo" significa un grupo alcoxi
de bajo peso molecular unido al resto de la molécular mediante un
grupo carbonilo. Son ejemplos de grupos alcoxicarbonilo el
etoxicarbonilo,
etcétera.
etcétera.
El término "(alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi" significa un grupo
(alquilo de bajo peso molecular)-carboniloxi unido
al resto de la molécula a través de un átomo de oxígeno, por ejemplo
a través de un grupo acetoxi. El término "aciloxi" tiene el
mismo significado.
El término "alcanoílo de bajo peso
molecular" significa un grupo alquilo de bajo peso molecular
unido al resto de la molécula mediante un grupo carbonilo y
comprende en el sentido de la definición anterior los grupos del
tipo acetilo, propionilo, etcétera. El término
"perfluor-(alcanoílo de bajo peso molecular)" significa un
grupo alquilo de bajo peso molecular perfluorado (un grupo alquilo
de bajo peso molecular en el que todos los átomos de hidrógeno se
han sustituido por flúor, con preferencia el trifluormetilo o el
pentafluoretilo) unido al resto de la molécula mediante un grupo
carbonilo.
El término "perfluor-(alcanoílo de bajo peso
molecular)-amino" significa un alcanoílo de bajo
peso molecular perfluorado unido al resto de la molécular a través
de un grupo amino.
El término "(alquilo de bajo peso
molecular)-carbonilamino" significa grupos
(alquilo de bajo peso molecular)-carbonilo unidos al
resto de la molécula mediante un átomo de nitrógeno, por ejemplo el
acetilamino. El término "(alquilo de bajo peso
molecular)-aminocarbonilo" significa grupos
(alquilo de bajo peso molecular)-amino unidos al
resto de la molécular a través de un grupo carbonilo.
El término "arilaminocarbonilo" significa
grupos arilo unidos a un grupo amino que a su vez está unido al
resto de la molécula mediante un grupo carbonilo.
El término "aroílo" significa un grupo
arilo o heteroarilo, mono- o bicíclico, unido al resto de la
molécula mediante un grupo carbonilo. Son ejemplos de grupos aroílo
el benzoílo, 3-cianobenzoílo,
2-naftoílo, nicotinoílo, etcé-
tera.
tera.
Las sales farmacéuticamente aceptables son bien
conocidas por los expertos en la técnica y pueden obtenerse por
métodos convencionales, teniendo en cuenta la naturaleza química del
compuesto. Son ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de
compuestos ácidos las sales de metales alcalinos o de metales
alcalinotérreos, por ejemplo del sodio, potasio, calcio, magnesio,
las sales de aminas básicas o de aminoácidos básicos, las sales de
amonio o de alquilamonio. Son sales especialmente deseables de los
compuestos de esta invención las de sodio, p.ej. de un compuesto
ácido en el que R_{6} sea H. La sal de sodio de cualquier ácido de
esta invención puede obtenerse fácilmente a partir del ácido por
tratamiento con el hidróxido sódico. En caso de compuestos básicos,
los ejemplos son sales de ácidos inorgánicos u orgánicos, tales como
el ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico,
cítrico, fórmico, fumárico, maleico, acético, succínico, tartárico,
metanosulfónico y p-toluenosulfónico.
\newpage
En una ejecución, la presente invención se
refiere a un compuesto de la fórmula I
y a sales farmacéuticamente
aceptables del mismo. De acuerdo con la invención, R_{1} es un
grupo Y-1, Y-2 o
Y-3, que se describen a
continuación.
R_{1} es Y-1, un grupo de la
fórmula
en la
que
R_{22} y R_{23}, con independencia entre sí,
son hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular, alcoxi de bajo peso
molecular, cicloalquilo, arilo, arilalquilo, nitro, ciano, (alquilo
de bajo peso molecular)-tio, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfinilo, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfonilo, alcanoílo de bajo peso
molecular, halógeno o perfluor-(alquilo de bajo peso molecular), y
por lo menos uno de R_{22} y R_{23} es diferente del hidrógeno,
y R_{24} es hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular, alcoxi de
bajo peso molecular, arilo, nitro, ciano, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfonilo o halógeno,
R_{1} es Y-2, un anillo
heteroaromático de cinco o seis eslabones, unido a través del átomo
de carbono al carbonilo de la amida, dicho anillo contiene uno, dos
o tres heteroátomos elegidos entre N, O y S y uno o dos átomos de
dicho anillo están sustituidos con independencia entre sí por
alquilo de bajo peso molecular, cicloalquilo, halógeno, ciano,
perfluoralquilo o arilo y por lo menos uno de dichos átomos
sustituidos está adyacente al átomo de carbono unido al carbonilo de
la amida,
R_{2} es hidrógeno o alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido, arilalquilo o
arilo;
R_{3} es hidrógeno o alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido, arilalquilo o
arilo;
R_{4} es hidrógeno, halógeno, alquilo de bajo
peso molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido (p.ej.
perfluor-(alquilo de bajo peso molecular)), o arilo;
R_{5} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, cloro o alcoxi de bajo peso molecular;
R_{6} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, (alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular), alquilo de bajo peso molecular sustituido, o bien
R_{6} es un grupo de la fórmula P-3
en la que R_{32} es hidrógeno o
alquilo de bajo peso molecular, R_{33} es hidrógeno, alquilo de
bajo peso molecular, arilo, R_{34} es hidrógeno o alquilo de bajo
peso molecular, "h" es un número entero de 0 a 2, "g" es
un número entero de 0 a 2, la suma de h y g se sitúa entre 1 y 3; o
bien R_{6} es un grupo de la fórmula
P-4
en la que R_{32}, g y h tienen
los significados recién definidos, Q' es O, S,
-(CH_{2})_{j}- o un grupo de la fórmula
N-R_{35}, R_{35} es hidrógeno, alquilo de bajo
peso molecular, alcanoílo de bajo peso molecular, (alcoxi de bajo
peso molecular)-carbonilo, "j" es el número 0,
1 ó
2.
Los compuestos de la invención pueden existir en
forma de estereoisómeros, todos ellos están comprendidos dentro del
alcance de la presente invención. Todos los compuestos mencionados
en varias ejecuciones de la invención, mencionadas antes o después,
se contemplan también en su forma de sal farmacéuticamente
aceptable.
En una primera ejecución especial de los
compuestos de la fórmula I
R_{2} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido, arilalquilo o
arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido, arilalquilo o
arilo; y R_{4} es hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular,
perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) o arilo.
En una segunda ejecución especial de los
compuestos de la fórmula I
R_{2} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo; y
R_{4} es hidrógeno, halógeno, alquilo de bajo
peso molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o
arilo.
En una tercera ejecución especial de los
compuestos de la fórmula I y en su primera y segunda ejecución
especial recién mencionadas, con preferencia la primera ejecución
especial,
R_{2} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo; y
R_{4} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) o arilo.
En una ejecución preferida de los compuestos de
la fórmula I y en sus tres ejecuciones especiales recién
mencionadas, con preferencia la tercera, R_{4} es hidrógeno,
alquilo de bajo peso molecular o perfluor-(alquilo de bajo peso
molecular).
En una ejecución más preferida de los compuestos
de la fórmula I y sus tres ejecuciones especiales, sobre todo la
ejecución especial primera, R_{1} es un grupo de la fórmula
Y-1, definido en la fórmula I y R_{22} y R_{23}
con independencia entre sí son alquilo de bajo peso molecular o
halógeno; y R_{24} es hidrógeno. En otra ejecución más preferida,
R_{1} es un grupo de la fórmula Y-1, definido en
la fórmula I, y R_{22} y R_{23}, con independencia entre sí, son
hidrógeno o halógeno; y R_{24} es alcoxi de bajo peso molecular,
con preferencia metoxi.
Otra forma de ejecución más preferida de la
fórmula I y sus formas de ejecución especiales es un compuesto de la
fórmula Ib:
en la que R_{1} tiene la
definición dada con ocasión de la fórmula I, R_{2} es alquilo de
bajo peso molecular, R_{3} es alquilo de bajo peso molecular,
R_{4} es hidrógeno, perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) o
alquilo de bajo peso molecular, R_{5} es hidrógeno o alquilo de
bajo peso molecular, R_{6} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, con preferencia metilo, (alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular), con preferencia 1-(acetoxi)etilo, un grupo de la
fórmula P-3 definido con ocasión de la fórmula I o
un grupo de la fórmula P-4, definido con ocasión de
la fórmula I. Dentro de esta forma de ejecución más preferida, es
preferido en especial que R_{1} sea un grupo de la formula
Y-1, definido con ocasión de la fórmula I, en la que
R_{22} y R_{23} con independencia entre sí sean
perfluor-(alquilo de bajo peso molecular), con preferencia
trifluormetilo; alquilo de bajo peso molecular, con preferencia
metilo, etilo, propilo o isopropilo; o halógeno, con preferencia
flúor, cloro o bromo; y R_{24} sea
hidrógeno.
Cuando R_{1} es un grupo especialmente
preferido de la fórmula Y-1, definido en el párrafo
anterior, es preferido que i) R_{2} y R_{3} sean alquilo de bajo
peso molecular; R_{4} sea hidrógeno o alquilo de bajo peso
molecular; y R_{5} y R_{6} sean hidrógeno, o ii) R_{2} y
R_{3} sean alquilo de bajo peso molecular, R_{4} sea hidrógeno o
alquilo de bajo peso molecular, R_{5} sea hidrógeno y R6 sea
hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular o (alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular); o que R_{6} sea un grupo de la fórmula
P-3 definido con ocasión de la fórmula I, o que
R_{6} sea un grupo de la fórmula P-4 definido con
ocasión de la fórmula I (R_{35} es con preferencia hidrógeno), en
especial que R_{6} sea alquilo de bajo peso molecular; o que
R_{6} sea (alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular); o que R_{6} sea un grupo de la fórmula
P-3 en la que R_{32} es hidrógeno, R_{33} y
R_{34} son alquilo de bajo peso molecular; h es 1; y g es 0; o que
R_{6} sea un grupo de la fórmula P-4, en la que
R_{32} es hidrógeno; h es 1; g es 0; y Q' sea O; o iii) R_{2} y
R_{3} sean alquilo de bajo peso molecular; R_{4} sea
perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) y R_{5} y R_{6} sean
hidrógeno; o iv) R_{2} y R_{3} sean alquilo de bajo peso
molecular; R_{4} sea hidrógeno; R_{5} sea alquilo de bajo peso
molecular y R_{6} sea hidrógeno.
Los compuestos particulares de la forma de
ejecución preferida i) del párrafo anterior se eligen entre:
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-bromo-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-etil-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2-(2-metiletil)-6-metilfenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2,6-di-(2-metiletil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-etilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-propilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2-cloro-6-(2-metiletil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
\vskip1.000000\baselineskip
Otros compuestos se eligen entre:
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-bromo-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
N-[(2-bromo-5-metoxifenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil]-L-fenilalanina.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos especiales de ii) de antes, cuyo
R_{6} es alquilo de bajo peso molecular, se eligen entre:
éster etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
éster etílico de
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
donde R_{6} es (alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular), se eligen entre:
éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
\vskip1.000000\baselineskip
en donde R_{6} es un grupo de fórmula
P-3, los compuestos se eligen entre:
éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
\vskip1.000000\baselineskip
donde R_{6} es un grupo de fórmula
P-4, los compuestos se eligen entre:
éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
\vskip1.000000\baselineskip
Respecto a iii) se eligen compuestos
especiales:
N-[1-(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina;
o
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
\vskip1.000000\baselineskip
Respecto a iv) se eligen compuestos especiales
entre:
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina;
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina;
o
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina.
\vskip1.000000\baselineskip
En los compuestos de esta invención de la
fórmula Ib definida antes,
en la que R_{1} tiene el
significado definido en la fórmula I, R_{2} es alquilo de bajo
peso molecular, R_{3} es alquilo de bajo peso molecular, R_{4}
es hidrógeno, perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) o alquilo de
bajo peso molecular, R_{5} es hidrógeno o alquilo de bajo peso
molecular, R_{6} es hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular,
(alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular), un grupo de la fórmula P-3 definido con
ocasión de la fórmula I o un grupo de la fórmula P-4
definido con ocasión de la fórmula I, es preferido además que
R_{2} y R_{3} sean alquilo de bajo peso molecular; y R_{4},
R_{5} y R_{6} sean hidrógeno, en especial que R_{1} sea un
grupo de la fórmula Y-1, tal como se define en la
fórmula I, en la que R_{22} y R_{23} con independencia entre sí
son alquilo de bajo peso molecular o halógeno; y R_{24} sea
hidrógeno; o bien que R_{22} y R_{23}, con independencia entre
sí, sean hidrógeno o halógeno; y R_{24} sea alcoxi de bajo peso
molecular.
En el compuesto del párrafo anterior, en el que
R_{2} y R_{3} son alquilo de bajo peso molecular y R_{4},
R_{5} y R_{6} son hidrógeno es preferido además que R_{1} sea
un anillo heterocíclico de cinco o seis eslabones unido mediante un
átomo de carbono al carbonilo de la amida, dicho anillo contiene
uno, dos o tres heteroátomos elegidos entre N, O y S y uno o dos
átomos de dicho anillo con independencia entre sí están sustituidos
por alquilo de bajo peso molecular, cicloalquilo, halógeno, ciano,
perfluoralquilo o arilo y por lo menos uno de dichos átomos
sustituidos está adyacente al átomo de carbono unido al carbonilo de
la amida.
En otra forma de ejecución de los compuestos de
la fórmula I, en la que
R_{2} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo; y
R_{4} es hidrógeno, halógeno, alquilo de bajo
peso molecular, alquilo de bajo peso molecular sustituido o arilo,
es decir, en la segunda forma de ejecución especial,
R_{1} es Y-1, en el que
R_{22} y R_{23} tienen los significados definidos para la
fórmula I. R_{22} y R_{23} son con preferencia y con
independencia entre sí alquilo inferior o halógeno y R_{24} es
hidrógeno, o bien R_{22} y R_{23} con independencia entre sí son
hidrógeno o halógeno y R_{24} es alcoxi de bajo peso
molecular.
En otra variante de la segunda forma de
ejecución especial, R_{1} es Y-2.
En otra variante más específica de la segunda
forma de ejecución especial,
R_{2} es alquilo de bajo peso molecular,
R_{3} es alquilo de bajo peso molecular,
R_{4} es hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular o halógeno,
R_{5} es hidrógeno y R_{6} es hidrógeno.
Una forma de ejecución preferida dentro de esta
más específica es cuando R_{4} es hidrógeno. Dentro de esta forma
de ejecución preferida, R_{1} es Y-1 tal como se
define en la fórmula I, en especial en la que R_{22} y R_{23}
con independencia entre sí son alquilo de bajo peso molecular o
halógeno; y R_{24} es hidrógeno; o bien que R_{22} y R_{23},
con independencia entre sí, son hidrógeno o halógeno; y R_{24} es
alcoxi de bajo peso molecular. Dentro de esta forma de ejecución
preferida, R_{1} es eventualmente Y-2, tal como se
define en la fórmula I.
Además, una forma de ejecución preferida de la
presente invención es un compuesto de la fórmula I:
en la que R_{1} es un grupo de la
fórmula
Y-1
en la que R_{22} y R_{23}, con
independencia entre sí, son hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, alcoxi de bajo peso molecular, cicloalquilo, arilo,
arilalquilo, nitro, ciano, (alquilo de bajo peso
molecular)-tio, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfinilo, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfonilo, alcanoílo de bajo peso
molecular, halógeno o perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) y
por lo menos uno de R_{22} y R_{23} es diferente de hidrógeno; y
R_{24} se hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular, alcoxi de
bajo peso molecular, arilo, nitro, ciano, (alquilo de bajo peso
molecular)-sulfonilo o halógeno; R_{2} es alquilo
de bajo peso molecular; R_{3} es alquilo de bajo peso molecular;
R_{4} es hidrógeno o alquilo de bajo peso molecular; R_{5} es
hidrógeno; y R_{6} es
hidrógeno.
Una forma de ejecución más preferida dentro de
la anterior de la presente invención es un compuesto de la fórmula I
anterior, en la que R_{1} es un grupo de la fórmula
Y-1
en la que R_{22} y R_{23}, con
independencia entre sí, son hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular o halógeno, R_{24} es hidrógeno o alcoxi de bajo peso
molecular; R_{2} es alquilo de bajo peso molecular, R_{3} es
alquilo de bajo peso molecular, R_{4} es hidrógeno o alquilo de
bajo peso molecular, R_{5} es hidrógeno y R_{6} es alquilo de
bajo peso molecular, (alquilo de bajo peso
molecular)-carboniloxi-(alquilo de bajo peso
molecular) o, con preferencia,
hidrógeno.
Otra forma de ejecución preferida de la presente
invención es un compuesto de la fórmula I anterior, en la que
R_{1} es un anillo heteroaromático de cinco o seis eslabones unido
a través de un átomo de carbono al carbonilo de la amida, en la que
dicho anillo contiene uno, dos o tres heteroátomos elegidos entre N,
O y S y uno o dos átomos de dicho anillo, con independencia entre
sí, están sustituidos por alquilo de bajo peso molecular,
cicloalquilo, halógeno, ciano, perfluoralquilo o arilo y por lo
menos uno de dichos átomos sustituidos está adyacente al átomo de
carbono unido al carbonilo de la amida; R_{2} es alquilo de bajo
peso molecular, R_{3} es alquilo de bajo peso molecular, R_{4}
es hidrógeno, perfluor-(alquilo de bajo peso molecular) o alquilo de
bajo peso molecular, R_{5} es hidrógeno y R_{6} es
hidrógeno.
En otro aspecto, la presente invención se
refiere a compuestos de la fórmula II
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en la que
R_{2}-R_{5} tienen los significados definidos
para la fórmula I y P_{1} y P_{2} son en ambos casos un grupo
protector. Más en particular, P_{1} es un grupo protector estándar
de nitrógeno, por ejemplo un
tert-butiloxi-carbonilo (Boc) o un
grupo carbobenciloxi y P_{2} es un grupo protector estándar del
carboxi, por ejemplo un alquilo de bajo peso molecular o alquilo de
bajo peso molecular sustituido. Estos compuestos son útiles como
intermedios de la preparación de los compuestos de la fórmula
I.
Los compuestos de la invención inhiben la unión
de la VCAM-1 y de la fibronectina al antígeno
VLA-4 de linfocitos circulantes, eosinófilos,
basófilos y monocitos ("células de expresión del
VLA-4"). Se sabe que la unión de la
VCAM-1 y fibronectina al VLA-4 en
tales células conduce a determinados estados patológicos, por
ejemplo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedades
intestinales inflamatorias y en particular a la unión de eosinófilos
al endotelio de las vías aéreas que contribuye a provocar la
inflamación pulmonar que se observa en caso de asma. De este modo,
los compuestos de la presente invención son útiles para el
tratamiento del asma.
Por su capacidad de inhibir la unión de la
VCAM-1 y de la fibronectina al VLA-4
de linfocitos circulantes, eosinófilos, basófilos y monocitos, los
compuestos de la invención pueden utilizarse como medicamentos o
como composición farmacéutica en especial para tratar trastornos que
se sabe están asociados o causados por tal unión. Son ejemplos de
tales trastornos la artritis reumatoide, la esclerosis múltiple, el
asma y la enfermedad intestinal inflamatoria. Los compuestos de la
invención se utilizan con preferencia para tratar las enfermedades
que implican una inflamación pulmonar, por ejemplo el asma. La
inflamación pulmonar del asma se debe a la activación e infiltración
de eosinófilos, monocitos y linfocitos en los pulmones, la
activación se debe a algún acontecimiento o sustancia que
desencadena el asma.
Por otro lado, los compuestos de la invención
también inhiben la unión de la VCAM-1 y la MadCAM al
receptor celular alfa4-beta7, también conocido como
LPAM, que se expresa en linfocitos, eosinófilos y células T. Todavía
no se conoce a fondo el papel exacto que desempeña la interacción de
la alfa4-beta7 con varios ligandos dentro de una
situación inflamatoria, por ejemplo el asma, por tanto los
compuestos de la invención que inhiben la unión tanto del receptor
alfa4-beta1 como del alfa4-beta7 son
especialmente eficaces en modelos animales de asma. El trabajo
adicional realizado con anticuerpos monoclonales del
alfa4-beta7 indica que los compuestos que inhiben la
unión del alfa4-beta7 a la MadCAM o la VCAM son
útiles para el tratamiento de enfermedades intestinales
inflamatorias. Pueden ser útiles además para el tratamiento de otras
enfermedades en las que intervenga dicha unión como causa de los
daños o los síntomas patológicos.
Los compuestos de la invención pueden
administrarse por vía oral, rectal o parenteral, p.ej. intravenosa,
intramuscular, subcutánea, intratecal o transdermal; o sublingal o
en forma de preparados oftalmológicos o en forma de aerosol para el
caso de inflamación pulmonar. Como ejemplos de formas de
administración cabe citar las cápsulas, tabletas, suspensiones o
soluciones para administración oral, los supositorios, soluciones
inyectables, gotas para los ojos, pomadas o soluciones
pulverizables.
La forma preferida de uso es la administración
intravenosa, intramuscular, oral o la inhalación. Las dosis de
administración de los compuestos de la invención en cantidades
efectivas dependerán de la naturaleza del principio activo
específico, la edad y las peculiaridades del paciente y del modo de
administración. Las dosis pueden determinarse por métodos
convencionales, p.ej. por ensayos clínicos de limitación de dosis.
Por tanto, la invención comprende además un método de tratamiento de
un huésped que sufre una enfermedad en la que la
VCAM-1 o la fibronectina se unen a células de
expresión del VLA-4 y esta unión es el factor
causante de los síntomas o daños de la enfermedad, dicho tratamiento
consiste en administrar una cantidad suficiente de un compuesto de
la invención para inhibir la unión de la VCAM-1 o de
la fibronectina a las células de expresión del
VLA-4, de modo que se reduzcan los síntomas o el
daño mencionados. En general son preferidas las dosis diarias de 0,1
a 100 mg/kg de peso corporal, siendo preferidas en particular las
dosis diarias de 1 a 25 mg/kg y especialmente preferidas las dosis
diarias de 1 a 10 mg/kg de peso corporal.
En otro aspecto, la invención se refiere además
a medicamentos o composiciones farmacéuticas que constan de una
cantidad farmacéuticamente eficaz del compuesto de la invención y de
un excipiente farmacéuticamente aceptable. Se refiere también a un
proceso de fabricación de una composición farmacéutica que consiste
en introducir un compuesto de la presente invención o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente
farmacéuticamente aceptable en una forma de administración galénica.
Tales composiciones pueden formularse por cualquier método
convencional. Las tabletas y granulados pueden contener una serie de
aglomerantes, excipientes o diluyentes. Las composiciones líquidas
pueden adoptar por ejemplo la forma de una solución estéril miscible
con agua. Además del principio activo, las cápsulas pueden contener
cargas de relleno o espesantes. Por otro lado pueden estar también
presentes los aditivos que mejoran el sabor, así como sustancias que
normalmente se utilizan como conservantes, estabilizantes,
humectantes o emulsionantes así como sales para variar la presión
osmótica, tampones y otros
aditivos.
aditivos.
Los excipientes antes mencionados y los
diluyentes pueden comprender cualquier sustancia orgánica o
inorgánica que sea farmacéuticamente aceptable, p.ej. agua,
gelatina, lactosa, almidón, estearato magnésico, talco, goma
arábiga, polialquilenglicoles, etcétera.
\newpage
Las formas de dosificación de unidades de
administración oral, por ejemplo tabletas y cápsulas, contienen con
preferencia de 25 mg a 1000 mg de un compuesto de la invención.
En general, los compuestos de la presente
invención pueden obtenerse a partir de los derivados idóneos de la
fenilalanina por reacción con una
5-halo-2,4-dioxopirimidona,
la reacción se cataliza con paladio.
Tal como se presenta en el esquema de reacción
1, se convierte un derivado de 4-yodo- o
4-bromo-fenilalanina tal como 1 en
el derivado protegido de fenilalanina 2, en el que R_{5}' es
hidrógeno, cloro, alquilo de bajo peso molecular o alcoxi de bajo
peso molecular, P_{1} es un grupo protector estándar del
nitrógeno, p.ej. el Boc, o un grupo carbobenciloxi y P_{2} es un
alquilo de bajo peso molecular o un alquilo de bajo peso molecular
sustituido, elegido oportunamente para que actúe como grupo
protector o es un elemento de un profármaco (fármaco que libera el
principio activo dentro del cuerpo del paciente). El grupo P_{2}
puede introducirse por métodos convencionales que el experto en la
química de los péptidos conoce perfectamente. El orden de adición
de P_{1} y P_{2} no es fundamental y dependerá de la elección
concreta de los reactivos. Theodora W. Greene y Peter G.M. Wuts,
Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience,
Nueva York 1991, presentan un estudio del uso e introducción de
grupos protectores. Como alternativa se puede convertir un compuesto
de la fórmula 1 en un compuesto de la fórmula 4, en el que R_{1}'
significa un componente de un grupo acilo de la invención. Un método
conveniente consiste en introducir el grupo éster P_{2} en primer
lugar y después realizar la reacción de copulación de las aminas
libres empleando reactivos convencionales de copulación de péptidos,
por ejemplo el HBTU, en presencia de una base del tipo amina
terciaria, por ejemplo la dietilisopropilamina. También en este
caso, la elección de los reactivos puede dictar una variación del
orden de introducción de R_{1}' y P_{2}. La conversión de
compuestos de la fórmula 2 ó 4 en los derivados 3 ó 5, en los que M
significa un átomo de boro o estaño sustituido, puede llevarse a
cabo por tratamiento con un compuesto adecuado, por ejemplo
hexametildiestaño, hexabutildiestaño o un tetraalcoxidiboro en
presencia de una fuente de paladio cero. La metodología se describe
aportando referencias en F. Diederich y P.J. Stang, coordinadores,
Metal Catalyzed Cross Coupling Reactions,
Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 1998.
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Esquema de reacción
1
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Las
pirmidina-2,4-dionas (derivados
uracilo) de la fórmula 6, en la que R_{4}' es hidrógeno, alquilo
de bajo peso molecular o perfluor(alquilo de bajo peso
molecular) son ya conocidas por bibliografía técnica o pueden
obtenerse por métodos conocidos. Las
pirimidina-2,4-dionas disustituidas
en posiciones 1 y 3 de la fórmula 7, en la que R_{2}' y R_{3}'
son alquilo de bajo peso molecular, aril-(alquilo de bajo peso
molecular) o arilo son también compuestos conocidos o que pueden
obtenerse por métodos convencionales. Entre los artículos dedicados
a la síntesis de estos compuestos cabe mencionar los siguientes:
Shigeo Senda y col., Chem. Pharm. Bull. 1974, 22,
189-195; Chem. Pharm. Bull. 1972, 20,
1389-1396 y Yasuo Morita y col., Chem. Comm. 1977,
359-360. Para el caso en que R_{2}' y R_{3}'
sean alquilo de bajo peso molecular o aril-(alquilo de bajo peso
molecular), los compuestos de la fórmula 7 pueden obtenerse por
alquilación de los compuestos de la fórmula 6 tratando con un agente
alquilante, por ejemplo yodometano, bromuro de bencilo, bromuro de
alilo, en presencia de una base, por ejemplo carbonato potásico, y
eventualmente un catalizador de transferencia de fase. Para los
agentes alquilantes menos reactivos puede ser necesario recurrir a
una base más fuerte, por ejemplo un hidróxido de metal alcalino y
calentar la mezcla reaccionate. Los compuestos de la fórmula 6 ó 7
definidos antes pueden halogenarse en posición 5 por tratamiento con
agentes halogenantes convencionales, por ejemplo el bromo, la
N-yodosuccinimida o la
N-bromosuccinimida, en un disolvente adecuado, por
ejemplo ácido acético glacial o ácido acético acuoso, para obtener
las halopirimidinas de la fórmula 8, X = Br o I, R_{2}' y R_{3}'
con independencia entre sí son hidrógeno, alquilo de bajo peso
molecular, aril-(alquilo de bajo peso molecular) o arilo, R_{4}' =
hidrógeno, alquilo de bajo peso molecular o perfluor-(alquilo de
bajo peso molecular).
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Esquema de reacción
2
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Tal como se indica en el esquema de reacción 3,
el compuesto de la fórmula 8 puede utilizarse para la reacción de
copulación, catalizada con paladio, con un derivado de fenilalanina
de la fórmula 3 ó 5. Por ejemplo, cuando M es un estaño sustituido,
el tratamiento de una mezcla de 8 y la fenilalanina de la fórmula 3
ó 5 con una fuente de paladio cero, por ejemplo el dicloruro de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio o de
bis(trifenilfosfina)paladio, en presencia de un
disolvente inerte, por ejemplo la DMF, a una temperatura comprendida
entre temperatura ambiente y 100°C, proporciona un compuesto de la
fórmula 9 ó 10. Los compuestos de la estructura 9 pueden
convertirse en compuestos de la estructura 10 por eliminación del
grupo protector P_{1}, que puede llevarse a cabo por métodos
convencionales en función del P_{1} que se haya elegido. Por
ejemplo, si P_{1} es un grupo Boc, entonces podrá eliminarse por
tratamiento con un ácido fuerte, por ejemplo el ácido
trifluoracético, eventualmente en presencia de un disolvente, por
ejemplo diclorometano, y de un agente neutralizador. A continuación
puede acilarse la amina libre resultante con un ácido de la fórmula
R_{1}'CO_{2}H, empleando técnicas de copulación convencionales
en la química de los péptidos. Por ejemplo tratando con HBTU en
presencia de una base amina terciaria, por ejemplo la
dietilisopropilamina, en presencia de un disolvente aprótico, p.ej.
DMF, para obtener el compuesto de la estructura 10.
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(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Esquema de reacción
3
Si el producto final deseado es el ácido libre
11, entonces puede eliminarse el grupo éster P_{2} por métodos
convencionales. Por ejemplo, si P_{2} es un alquilo de bajo peso
molecular, tal como metilo, puede eliminarse por tratamiento con un
hidróxido de metal alcalino, por ejemplo hidróxido de litio, en un
disolvente apropiado, por ejemplo THF acuoso que contenga
eventualmente metanol para mejorar la solubilidad. Si P_{2} es
bencilo o bencilo sustituido, podrá eliminarse por hidrogenación
catalítica empleando catalizadores de metales nobles, por ejemplo
paladio sobre carbón.
Como alternativa, tal como se muestra en el
esquema de reacción 4, puede convertirse un compuesto de la
estructura 8, en la que X es bromo o yodo, en un compuesto de la
fórmula 12, en la que M' significa un átomo de estaño, boro o cinc
sustituido. En el caso de derivados de estaño o boro, en los que M'
significa un átomo de estaño o boro sustituido, la conversión puede
realizarse por tratamiento con un compuesto adecuado, p.ej.
hexametildiestaño, hexabutildiestaño o tetraalcoxidiboro en
presencia de una fuente de paladio cero. Para la formación del
derivado de cinc, 12, M' = Zn(halógeno), la conversión puede
tener lugar por tratamiento del compuesto de la fórmula 8, X = I,
con una fuente de metal cinc activado, en un disolvente idóneo,
p.ej. dimetilacetamida, a una temperatura comprendida entre
temperatura ambiente y 100°C, hasta completar la conversión y
obtener el compuesto de la fórmula 12, M' = Zn (halógeno). Estos
Esquema de reacción
4
compuestos de la fórmula 12 pueden
reaccionar con un derivado de fenilalanina sustituido en posición 4
de la fórmula 4', en la que X' es yodo, bromo o
trifluormetilsulfoniloxi, en presencia de una fuente de paladio
cero, para obtener un compuesto de la fórmula 10'. Si el grupo
P_{2} no fuera parte del compuesto deseado, entonces podrá
eliminarse por procedimientos de hidrólisis apropiados para el
P_{2} concreto. Por ejemplo, si P_{2} es alquilo de bajo peso
molecular, tal como metilo, podrá eliminarse por hidrólisis básica
estándar, empleando un hidróxido de metal alcalino, por ejemplo
hidróxido de litio. En una variante de este procedimiento, puede ser
deseable mantener el grupo protector durante la reacción de
copulación y eliminarlo a posteriori. En tal caso, un
compuesto de la fórmula 2', en el que P_{1}' sea un (alcoxi de
bajo peso molecular)-carbonilo o benciloxicarbonilo
y X' tenga el significado definido antes, puede copularse con una
pirimidinadiona de la estructura 12 para dar un compuesto de la
estructura 9', que a su vez puede convertirse en el compuesto de la
invención empleando los procedimientos generales descritos a raíz
del esquema de reacción
3.
Una vía alternativa de acceso a los compuestos
de la invención, tal como se indica en el esquema de reacción 5, que
es además especialmente aplicable a los compuestos en los que
R_{5}' es diferente de hidrógeno, consiste en obtener un aldehído
de la fórmula 14. Puede realizarse por reacción de un compuesto de
la fórmula 12 con un compuesto de la fórmula 13, en la que R_{5}'
es un grupo alquilo de bajo peso molecular o alcoxi de bajo peso
molecular y X'' significa un yoduro, bromuro o un resto
trifluormetilsulfoniloxi y R_{8} significa un alcohol o aldehído
protegidos. En caso de alcoholes, los grupos protectores idóneos son
sililéteres, benciléteres. Los aldehídos pueden protegerse con sus
derivados acetales. El compuesto de la fórmula 12 puede convertirse
en el aldehído de la fórmula 15 mediante etapas de reacción que, en
caso de ser R_{8} un alcohol, consisten en eliminar el grupo
protector, si fuera necesario, y después oxidar. Puede utilizarse
cualquier reactivo idóneo para la oxidación selectiva de alcoholes
bencílicos primarios hasta aldehídos, por ejemplo, tratando con
dióxido de manganeso activado en un disolvente inerte. Si R_{8} es
un aldehído protegido, entonces para obtener el aldehído de la
fórmula 15 se tendrá que eliminar el grupo protector, por ejemplo
mediante hidrólisis de un acetal con ácido diluido. La reacción de
15 para obtener un ácido deshidroamino de la fórmula 16 puede
efectuarse por tratamiento con un reactivo de Wittig de la fórmula
17, en la que P_{1}' es un (alcoxi de bajo peso
molecular)-carbonilo o benciloxicarbonilo y P_{2}
tiene el significado definido antes. Por ejemplo, tratando 15 con
éster trimetílico de la
(\pm)-N-(benciloxicarbonil)-\alpha-fosfonoglicina
en presencia de una base idónea, por ejemplo la tetrametilguanidina,
se obtiene directamente un ácido deshidroamino de la fórmula 16,
P_{2} = metilo y P_{1}' = benciloxicarbonilo. La reducción
enantioselectiva de 16 para obtener el ácido L-amino
de la fórmula 18 puede llevarse a cabo utilizando un gran número de
reductores idóneos para el fin, por ejemplo el reactivo
etil-DuPHOS-rodio descrito
recientemente (Burk, M.J.; Feaster, J.E.; Nugent, W.A.; Harlow, R.L.
en J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 10125),
utilizando fundamentalmente el procedimiento de la bibliografía
técnica. La posterior conversión de 18 en los compuestos de la
invención puede tener lugar utilizando los procedimientos general
descritos anteriormente.
Esquema de reacción
5
En una forma de ejecución, el grupo
N-acilo R' de la estructura 11 se deriva de un ácido
benzoico sustituido en posición 2. Los ácidos benzoicos sustituidos
en posición 2 son productos comerciales o bien pueden obtenerse por
métodos convencionales. Por ejemplo carbonilando yoduros de arilo
orto-sustituidos o triflatos en presencia de
monóxido de carbono y de un catalizador idóneo de paladio. La
obtención de tales productos intermedios yoduro o triflato es
independiente del modelo particular de sustitución que se desee y
pueden obtenerse yodación directa o diazotación de una anilina
seguida del tratamiento con una fuente de yoduro, por ejemplo el
yoduro potásico. Los triflatos pueden derivarse de los fenoles
correspondientes por métodos convencionales, por ejemplo por
tratamiento con anhídrido trifluormetanosulfónico en presencia de
una base, por ejemplo trietilamina o diisopropiletilamina, en un
disolvente inerte. Tal como muestra el esquema de reacción 6, otro
método de obtención de ácidos benzoicos
orto-sustituidos consiste en tratar un derivado de
2-metoxifeniloxazolina como es el compuesto 19,
Z_{1} y Z_{2} = hidrógeno, alquilo, cloro, perfluoralquilo,
alcoxi de bajo peso molecular, con un reactivo de Grignard
alquilado, continuando con la hidrólisis del anillo de la oxazolina
con arreglo al procedimiento general descrito por Meyers, A.I.,
Gabel, G., Mihelick, E.D., en J. Org. Chem. 1978, 43,
1372-1379, para obtener el ácido de la fórmula 20.
También los benzonitrilos sustituidos en posición 2 ó 2,6 pueden
actuar como precursores idóneos de los ácidos benzoicos
correspondientes. En el caso de nitrilos muy impedidos
estéricamente, por ejemplo el
2-cloro-6-metilbenzonitrilo,
resulta difícil la hidrólisis convencional en medio ácido o básico,
obteniéndose mejores resultados por reducción DIBAL que conduce al
benzaldehído correspondiente, después se realiza una oxidación con
un reactivo oxidante basado en cromo. Otros métodos se describen en
Chen y col., WO 99/10312.
Esquema de reacción
6
En lo referente al esquema de reacción 7, los
ácidos cíclicos de la fórmula 23 son compuestos conocidos o que
pueden obtenerse por métodos ya conocidos. Para obtener ácido
alquil- o cicloalquilcarboxílicos sustituidos pueden realizarse
reacciones de alquilación empleando un dianión del ácido con metal
alcalino o un monoanión del éster correspondiente. Por ejemplo, un
éster de ácido cicloalquilcarboxílico de la fórmula 21 puede
tratarse con una fase fuerte, por ejemplo diisopropilamida de litio,
en un disolvente inerte, por ejemplo THF, y después añadirse el
grupo R_{41}-Lv, en el que R_{41} significa una
cadena lateral deseada, por ejemplo un bencilo sustituido, un
alquilo de bajo peso molecular, un (alcoxi de bajo peso
molecular)-alquilo, un azido-(alquilo de bajo peso
molecular), etcétera, y Lv significa un grupo saliente, por ejemplo
un bromuro, yoduro, mesilato o similar que ya se conoce que pueden
intervenir en reacciones de alquilación de ésteres enolatos. El
éster resultante 22 puede hidrolizarse dando el ácido 23 por
tratamiento con hidróxido de metal alcalino en un disolvente idóneo,
por ejemplo en alcohol acuoso. En función de la naturaleza de
R_{41} y del objetivo perseguido, el compuesto 23 puede copularse
con una amida, por ejemplo el compuesto 1, y convertirse en el
objetivo directamente o bien R_{41} puede someterse a diversas
modificaciones en el momento oportuno de la síntesis. Por ejemplo,
si R_{41} es un resto azido-(alquilo de bajo peso molecular), la
azida puede reducirse por ejemplo con un reactivo trialquilfosfina y
después se funcionaliza la amina resultante por alquilación,
acilación, sulfonilación y otros procedimientos similares, bien
conocidos de los expertos en esta técnica. Si R_{41} incluye un
grupo saliente, por ejemplo un átomo de bromo terminal, este grupo
podrá desplazarse con un nucleófilo adecuado, por ejemplo
metilmercaptida sódica, para dar en este caso un tioéter que puede
ser el producto buscado o bien puede someterse a otras
modificaciones, por ejemplo una oxidación para obtener un sulfóxido
o una sulfona, utilizando condiciones estándar de reacción. Otros
nucleófilos que pueden emplearse para obtener productos intermedios
que llevan a compuestos de esta invención son: cianuro sódico,
metóxido sódico, azida sódica, morfolina y otros. Si R_{41} lleva
un grupo cetal, este grupo puede hidrolizarse en un momento oportuno
de la síntesis para obtener un grupo ceto. Este grupo puede
modificarse a su vez, por ejemplo por reducción que conduce a un
alcohol o por conversión en un derivado, por ejemplo en una
oxima.
En Chen. y col., WO 99/10313, se encontrarán
ejemplos de aplicación de estos métodos de síntesis de compuestos de
la fórmula 23.
Esquema de reacción
7
En general, los ácidos aromáticos
orto-sustituidos requeridos para la obtención de
compuestos en los que R_{1} = Y-1 pueden
prepararse del modo descrito en Chen y col., WO 99/10312.
Para la síntesis de ácidos
2-cloro-6-alquilbenzoicos
de la fórmula 28, en la que R_{43} es un alquilo de bajo peso
molecular, es particularmente indicado el procedimiento descrito en
el esquema de reacción 8. Un aldehído comercial de la fórmula 24 se
convierte en la imida 25, en la que R_{42} es un alquilo de bajo
peso molecular, con preferencia butilo, por tratamiento con
butilamina en un disolvente orgánico hidrófobo inerte, por ejemplo
heptano. Se trata el compuesto resultante de la fórmula 25 con un
exceso de un derivado de Grignard 26 en un disolvente inerte, por
ejemplo THF, después se trata con ácido durante la purificación para
obtener el aldehído de la fórmula 27. La oxidación de 27 en el ácido
de la fórmula 28 puede realizarse por métodos convencionales, por
ejemplo tratando una solución de 27 en un disolvente idóneo, por
ejemplo acetonitrilo acuoso, con clorito sódico y peróxido de
hidrógeno del 30% a una temperatura igual o inferior a la
temperatura ambiente.
Esquema de reacción
8
Puede ser deseable la obtención de ésteres
profármacos (= fármacos que liberan el principio activo en el cuerpo
del paciente) de los compuestos de esta invención, en los que sea
más conveniente la introducción del grupo éster al final de la
síntesis. Para este fin puede emplearse un gran número de técnicas
comunes de formación de ésteres de ácidos carboxílicos. Los métodos
típicos que pueden ser útiles incluyen la reacción de un alcohol con
el ácido carboxílico en presencia de un ácido, por ejemplo ácido
clorhídrico, en un procedimiento que se conoce como esterificación
de Fisher. Como alternativa puede recurrirse a la unión de un ácido
carboxílico y un alcohol con intervención de una diimida, con el uso
opcional de un promotor, por ejemplo la
4,4-dimetilaminopiridina. Una diimida típica es la
diciclohexilcarbodiimida. Otra alternativa consiste en tratar el
ácido carboxílico con un haluro de alquilo reactivo, por ejemplo un
yoduro de alquilo o un cloruro de aciloximetilo, en presencia de una
base, por ejemplo bicarbonato sódico, en un disolvente inerte, por
ejemplo DMF. La elección del método concreto dependerá de la
naturaleza de la combinación de ácido carboxílico concreto y resto
éster deseado y será obvia para cualquier entendido en estas
técnicas. Los grupos éster, que puedan constituir profármacos,
podrán crearse en cualquier momento oportuno de la síntesis. Por
ejemplo, el grupo P_{2} de la fórmula 1 puede constituir un
profármaco deseable y puede mantenerse en el producto final.
Métodos generales: los puntos de fusión
se determinan en un aparato Thomas-Hoover y no se
han corregido. Las rotaciones ópticas se determinan en un
polarímetro Perkin-Elmer modelo 241. Los espectros
RMN-H^{1} se registran en espectrómetros Varian
XL-200, Mercury-300 o Unityplus 400
Mhz, utilizando tetrametilsilano (TMS) como patrón interno. Los
espectros de masas de impacto electrónico (IE, 70 ev) y de bombardeo
atómico rápido (FAB) se registran en espectrómetros de masas VG
Autospec o VG 70E-HF. El gel de sílice empleado para
la cromatografía de columna es Mallinkrodt SiliCar
230-400 mesh para cromatografía flash; las
cromatografías de columna se asisten con una presión de
0-5 psi de nitrógeno en cabeza para activar el
flujo. Las cromatografías de capa fina se efectúan en placas de
vidrio revestidas de gel de sílice, suministradas por E. Merck (E.
Merck, artículo nº 1.05719) y se visualizan revelando con luz UV de
254 nm en una caja de revelado, por exposición a vapor de I_{2} o
por pulverización de ácido fosfomolíbdico (PMA) en etanol acuoso, o
después de exposición a Cl_{2} por pulverización de reactivo
4,4'-tetrametildiaminodifenilmetano, preparado con
arreglo a E. von Arx, M. Faupel y M. Brugger, J.
Chromatography, 1976, 120,
224-228. La cromatografía de líquidos de alta
eficacia en fase inversa (RP-HPLC) se lleva a cabo
en un cromatógrafo HPLC Rainin con una columna Dynamax^{TM}
C-18 de 41,4 x 300 mm, 8 \mum, y con un caudal de
49 ml/min, utilizando un gradiente de acetonitrilo:agua (conteniendo
ambos un 0,75% de TFA) del 5 al 95% de acetonitrilo durante
35-40 min. Las condiciones de la HPLC corresponden
al formato
(5-95-33-214); con
él se indica que el gradiente lineal va del 5% al 95% de
acetonitrilo en agua durante 35 min, al tiempo que se efectúa un
seguimiento del flujo saliente con un detector UV en una longitud de
onda de 214 nm.
El cloruro de metileno (diclorometano),
2-propanol, DMF, THF, tolueno, hexano, éter y
metanol son reactivos para análisis de Fisher o Baker y se
utilizaron tal cual sin purificación adicional; el acetonitrilo es
de pureza para hplc de Fisher o Baker y se utiliza tal cual.
Las abreviaturas utilizadas son las
siguientes:
- THF es tetrahidrofurano,
- DMF es N,N-dimetilformamida,
- DMA es N,N-dimetilacetamida,
- HOBT es 1-hidroxibenzotriazol,
- BOP es hexafluorfosfato de [(benzotriazol-1-il)oxi]tris-(dietilamonio)fosfonio,
- HATU es hexalfuorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio,
- HBTU es hexafluorfosfato de O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio,
- DIPEA es diisopropiletilamina,
- DMAP es 4-(N,N-dimetilamino)piridina,
- DPPA es difenilfosforilazida,
- DPPP es 1,3-bis(difenilfosfino)propano,
- DBU es 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno,
- NaH es hidruro sódico,
- salmuera es una solución acuosa saturada de cloruro sódico,
- CCF es cromatografía de capa fina,
- LDA es diisopropilamida de litio,
- BOP-Cl es cloruro bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico,
- NMP es N-metilpirrolidona,
- reactivo de Lawesson es el 1,3-ditia-2,4-difosfetano-2,4-disulfuro de 2,4-bis(4-metoxifenilo),
- NIS es el anhídrido N-yodosuccínico.
La cromatografía a través de gel de sílice en
columnas Biotage se refiere al uso de sistemas de cromatografía
flash suministrado por la división Biotage de la empresa Dyax
Corporation, empleando columna preparadas de 40 g (columnas 40s), 90
g (columnas 40m) o 800 g (columnas 75m). La elución se realiza
empleando una mezcla de hexano-acetato de etilo con
una presión de nitrógeno de 10-15 psi.
Se desoxigena una solución éster metílico de
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-yodo-L-fenilalanina
(5,3 g, 13 mmoles) y hexabutildiestaño (27,5 ml, 54 mmoles) en
tolueno (50 ml) alternando la congelación de la mezcla en un baño de
nitrógeno líquido con vacío y la descongelación en atmósfera de
argón (3 veces). Se añade el
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (280 mg, 0,22 mmoles)
y se calienta la mezcla reaccionante a reflujo durante 45 min hasta
que el color vira de amarillo a negro. La CCF (acetato de
etilo/hexano 1:6) indica la presencia de algo de yoduro de partida y
se añade una porción adicional de catalizador (140 mg, 0,11 mmoles).
Se prosigue el reflujo durante 1 hora. Se enfría la mezcla y se
concentra. Se recoge el residuo en hexano (200 ml) y trietilamina
(30 ml), se agita durante 30 min y se filtra. Se concentra el
líquido filtrado y se cromatografía a través de una columna con 150
g de gel de sílice, empleando como eluyente hexano y después una
mezcla de acetato de etilo/hexano 1:6, para obtener el éster etílico
de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-[(tributil)estannil]-L-fenilalanina
(5,7 g, 77%), en forma de aceite transparente. LR(+)LSIMS
(C_{27}H_{47}NO_{4}Sn): m/z 1081
(2M-C_{4}H_{9}) 570 (M+H).
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\vskip1.000000\baselineskip
Se mantiene a reflujo durante 40 h una mezcla de
uracilo (28,6 mmoles, 3,2 g) y monocloruro de yodo (49,2 mmoles,
7,988 g) en metanol (120 ml). Se elimina el disolvente con vacío y
se recristaliza el residuo en etanol:agua (1:1, 150 ml) y se
mantiene en frigorífico durante 3 h. Se recogen las agujas formadas
por filtración y se lavan con etanol:agua (mezcla 1:1, 50 ml), agua
(30 ml), hexano (30 ml) y después se secan en el aire para obtener
5,47 g (80%) del 5-yodo-uracilo en
forma de agujas blancas (p.f. 278-282°C,
bibliografía 274-276°C, Synthetic
communication 1988, 18, 855-867).
El espectro de masas de alta resolución
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{4}H_{3}IN_{2}O_{2} (M^{+}) es de 237,9239, hallado
237,9244.
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Se agita a temperatura ambiente durante 24 h una
mezcla de 5-yodo-uracilo (22,2
mmoles, 5,28 g) y carbonato potásico en polvo (60 mmoles, 10,3 g) en
DMF (188 ml) y después se añade yoduro de metilo (53,5 mmoles, 3,33
ml). A continuación se agita la mezcla reaccionante a temperatura
ambiente durante otras 72 h y se vierte sobre una mezcla de agua
(150 ml) y acetato de etilo (150 ml). Se separan las capas y se
extrae la fase acuosa con acetato de etilo (2 veces con 100 ml cada
vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera
y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se retira el agente
secante por filtración y se evapora el disolvente, obteniéndose un
sólido en bruto que se cristaliza en etanol:agua (3:1, 150:50 ml) y
se guarda en el frigorífico durante una noche. Se recogen los
sólidos por filtración y se lavan con una mezcla (3:1, 120 ml) de
etanol:agua, con agua (30 ml), hexano (30 ml) y se secan con vacío,
obteniéndose 4,61 g (78%) del
1,3-dimetil-5-yodo-uracilo
en forma de agujas blancas (p.f. 226-228°C, bibl.
225-227°C, Synthetic communication
1988, 18, 855-867). El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{6}H_{7}IN_{2}O_{2} (M^{+}) es de 266,0021, el hallado
es de 266,0023.
A una suspensión de cinc en polvo (30 mmoles,
2,0 g) en THF (3,0 ml) se le añade a temperatura ambiente
1,2-dibromoetano (2,0 mmoles, 0,174 ml). Se calienta
la suspensión a 60-65°C con un calentador tipo
pistola hasta que cesa el desprendimiento de gas etileno
(observación visual). Se repite el proceso tres veces. Después se
enfría la suspensión a t.a. y se añade trimetilclorosilano (1,0
mmoles, 0,15 ml) y se agita la mezcla durante 10 min. A la
suspensión de cinc se le añade una solución caliente (el compuesto
de yodo no es muy soluble en ninguno de los dos disolventes y
precipita cuando se enfría a temperatura ambiente) de
5-yodo-1,3-dimetiluracilo
(11,0 mmoles, 2,92 g) en THF (3,0 ml) y DMA (10 ml). Una vez
finalizada la adición se calienta la mezcla a 73°C. La temperatura
interior de la mezcla reaccionante sube hasta
77-78°C debido a que la reacción es exotérmica. Se
agita la mezcla reaccionante durante 1,5 h sobre un baño cuya
temperatura es de 73°C, después se enfría a temperatura ambiente y
se agita durante otras 1,5 h. El RMN-H^{1} del
hidrolizado de una parte alícuota de 0,25 ml de la mezcla indica la
presencia de trazas del material de partida y la yodólisis de una
parte alícuota de 0,25 ml de la mezcla rinde el yodo otra vez. Se
calienta la mezcla reaccionante a 70°C y se agita durante 30 min. Se
enfría a temperatura ambiente la mezcla reaccionante y se diluye con
THF (5 ml), dejando que sedimente el exceso de cinc durante
30-60 min.
Se añade a temperatura ambiente el compuesto de
cinc recién obtenido (5,5 mmoles) a una suspensión de
Pd(dba)_{2}
(0,07 mmoles, 40 mg), trifurilfosfina (TFP) (0,26 mmoles, 66,6 mg) y éster metílico de Boc-4-yodo-L-fenilalanina (4,5 mmoles, 1,823 g) en THF (10 ml) y se agita la mezcla de color amarillo durante 15 h. Se vierte la mezcla sobre una solución saturada de cloruro amónico y se extrae con acetato de etilo (3 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se concentra la solución, obteniéndose el producto en bruto que se purifica por cromatografía de columna, resultando 0,80 g (43%) de éster metílico de la N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)]-L-fenilalanina en forma de sólido blanco: p.f. 65-69°C. EM-AR-EI m/e calculado para C_{21}H_{27}N_{3}O_{6} (M^{+}) 418,1978, hallado: 418,1965.
(0,07 mmoles, 40 mg), trifurilfosfina (TFP) (0,26 mmoles, 66,6 mg) y éster metílico de Boc-4-yodo-L-fenilalanina (4,5 mmoles, 1,823 g) en THF (10 ml) y se agita la mezcla de color amarillo durante 15 h. Se vierte la mezcla sobre una solución saturada de cloruro amónico y se extrae con acetato de etilo (3 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se concentra la solución, obteniéndose el producto en bruto que se purifica por cromatografía de columna, resultando 0,80 g (43%) de éster metílico de la N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)]-L-fenilalanina en forma de sólido blanco: p.f. 65-69°C. EM-AR-EI m/e calculado para C_{21}H_{27}N_{3}O_{6} (M^{+}) 418,1978, hallado: 418,1965.
Se trata a temperatura ambiente una solución de
éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(1,94 mmoles, 0,811 g) en dioxano (5 ml) con ácido clorhídrico 4,0N
en dioxano (5 ml, 20 mmoles) y se agita la solución durante 0,5 h.
En este momento se forma lentamente un precipitado de color
amarillo. Se recogen los sólidos por filtración y se lavan con
hexano, resultando 412 mg (rendimiento del 60%), p.f.
187-193°C. Se concentran las aguas madres con vacío
y se tritura el residuo con diclorometano. Se reúnen los sólidos que
contienen algo del material de partida y se disuelven en metanol. Se
evapora la mayor parte del metanol y se añade diclorometano para
obtener un precipitado. Se recogen los sólidos y se secan,
resultando 330 mg (48%) de la sal clorhidrato del éster metílico de
la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(p.f. 187-193°C). El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{16}H_{19}N_{3}O_{4} (M+H) es de 318,1454, mientras que el
hallado es de 318,1447.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,5 mmoles, 0,180 g), ácido
2-cloro-6-metilbenzoico
(0,55 mmoles, 0,084 g) y HBTU (0,6 mmoles, 0,227 g) en DMF (4 ml) se
le añade a temperatura ambiente diisopropiletilamina (3,0 mmoles,
0,52 ml). Pasado 1 min, todo se ha disuelto y se agita la solución
transparente de color amarillo durante 15 h a temperatura ambiente.
En este momento se convierte en una solución de color pardo que se
diluye con acetato de etilo (25 ml). Se lava la capa de acetato de
etilo sucesivamente con agua (2 veces con 20 ml cada vez), solución
saturada de bicarbonato sódico (25 ml) y una solución de salmuera
(25 ml) y se seca con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente
secante y se concentra el disolvente, resultando un producto en
bruto que se purifica por cromatografía de columna a través de gel
de sílice, obteniéndose 151,5 mg (rendimiento del 72%) del éster
metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco, p.f. 155-157°C. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{24}H_{24}N_{3}O_{5}Cl (M^{+}) es de 470,1483, mientras
que el hallado es de 470,1484.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,278 mmoles, 131 mg) en etanol (4 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0N en agua (3 ml). Se calienta la mezcla
a 40-45°C y se agita la solución transparente
resultante durante 2-3 h. Se elimina el etanol a
presión reducida y se diluye el residuo con agua (20 ml) y NaOH (3
ml, 1,0N) para disolver la sal sódica. Se lava la solución acuosa
con éter (50 ml) para eliminar cualquier impureza neutra. Se
acidifica la fase acuosa con HCl 1,0 N y se extrae el producto con
acetato de etilo (2 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los
extractos orgánicos, se lavan con solución de salmuera y se secan
con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se
concentra el líquido filtrado, resultando 107 mg (85%) de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco, p.f. 234-236°C. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{23}H_{22}N_{3}O_{5}Cl (M+H) es de 456,1326 y el hallado
456,1326.
Se obtiene la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-N-[[1-(2-metoxietil)ciclopentil]carbonil]-L-fenilalanina
a
partir del éster metílico de la 4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina y del ácido 1-(2-metoxietil)ciclopentanocarboxílico (ver WO 99/10312), empleando métodos generales descritos en el ejemplo 2. El EM-AR-EI m/e calculado del C_{24}H_{31}N_{3}O_{5} (M+H) es de 458,2292 y el hallado es de 458,2279.
partir del éster metílico de la 4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina y del ácido 1-(2-metoxietil)ciclopentanocarboxílico (ver WO 99/10312), empleando métodos generales descritos en el ejemplo 2. El EM-AR-EI m/e calculado del C_{24}H_{31}N_{3}O_{5} (M+H) es de 458,2292 y el hallado es de 458,2279.
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtiene la
N-[(2-bromo-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y ácido
2-bromo-6-metilbenzoico
con arreglo a los métodos generales descritos en el ejemplo 2. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{23}H_{22}N_{3}O_{5}Br (M+H) es de 500,0822, el hallado es
de 500,0825.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtiene la
N-[(2-bromo-5-metoxifenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
y ácido
2-bromo-5-metoxibenzoico
con arreglo a los métodos generales descritos en el ejemplo 2. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{23}H_{22}N_{3}O_{6}Br (M+H) es de 516,0770 y el hallado
es de 516,0780.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se agita a temperatura ambiente durante 24 h una
mezcla de
5-yodo-6-metil-uracilo
(22,18 mmoles, 5,58 g) y carbonato potásico en polvo (60 mmoles,
8,29 g) en DMF (188 ml) y después se añade yoduro de metilo, MeI,
(90,6 mmoles, 3,33 ml). Se agita la mezcla reaccionante a
temperatura ambiente durante otras 76 h y se vierte sobre una mezcla
de agua (150 ml) y acetato de etilo (150 ml). Se separan las capas y
se extrae la fase acuosa con acetato de etilo (2 veces con 100 ml
cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de
salmuera (150 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se
filtra el agente secante y se evapora el disolvente para obtener un
sólido en bruto que se cristaliza en etanol: agua (3:1, 150:50 ml) y
se guarda en el frigorífico durante una noche. Se recogen los
sólidos por filtración, se lavan con etanol:agua (3:1, 120 ml), agua
(30 ml), hexano (30 ml) y se secan con alto vacío, resultando 5,8 g
(rendimiento del 93%) del
5-yodo-1,3,6-trimetil-uracilo
en forma de sólido blanco: p.f. 155-157°C,
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{7}H_{9}IN_{2}O_{2} (M^{+}) 279,9709, hallado
279,9709.
A una suspensión de cinc en polvo (800 mmoles,
52,29 g) en THF (26,0 ml) se le añade a temperatura ambiente
1,2-dibromoetano (53,2 mmoles, 4,58 ml). Se calienta
esta suspensión a 60-65°C con un calentador tipo
pistola hasta que cesa el desprendimiento de gas etileno
(observación visual). Se enfría la suspensión a temperatura
ambiente, se añade trimetilclorosilano (26,6 mmoles, 3,38 ml) y se
agita la mezcla durante 15 min. Se calienta una suspensión de
5-yodo-1,3,6-trimetil-uracilo
(266 mmoles, 74,6 g) en DMA (225 ml) para obtener una solución
transparente y se añade de una sola vez a la mezcla reaccionante.
Una vez finalizada la adición se calienta la mezcla a 70°C. La
temperatura interna de la mezcla reaccionante sube hasta
80-85°C debido a que la reacción es exotérmica. Se
agita la mezcla reaccionante a 70°C durante 3-4 h,
entonces la CCF de una parte alícuota que se ha extinguido con una
solución saturada de cloruro amónico indica que ya no existe
material de partida. Se diluye la mezcla reaccionante con THF (140
ml), se enfría a temperatura ambiente y se deja sedimentar el exceso
de cinc en polvo durante 2-3 h.
Se añade a temperatura ambiente esta solución
que contiene el compuesto de cinc (266 mmoles) a una solución de
Pd(dba)_{2} (8 mmoles, 4,6 g),
tri-o-tolilfosfina
[P(Tol)_{3}] (29,6 mmoles, 9,0 g) y éster metílico
de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-yodo-L-fenilalanina
(186 mmoles, 75,56 g) en THF (280 ml) y se agita la mezcla de color
amarillo claro resultante a 50-55°C durante 48 h. Se
vierte la mezcla reaccionante sobre una solución saturada de cloruro
amónico y se extrae con acetato de etilo (3 veces con 750 ml cada
vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera
(1,5 litros) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el
material secante y se concentra el líquido filtrado, resultando un
producto en bruto que se purifica por cromatografía de columna a
través de gel de sílice empleando para ello una columna Biotage
(75m), de este modo se obtienen 57,88 g (rendimiento del 72%) de
éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{22}H_{29}N_{3}O_{6} (M^{+}) es 431,2056, el hallado es
431,2054.
Se trata a temperatura ambiente una porción del
sólido éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(17,15 mmoles, 7,4 g) recién obtenido con ácido clorhídrico 4N en
dioxano (68 mmoles, 17 ml) y se agita la solución durante 1 h hasta
que se forma un precipitado blanco. Se diluye la mezcla con éter de
dietilo, se decanta el líquido sobrenadante y se concentra el
residuo primeramente en el evaporador rotatorio y después con alto
vacío, obteniéndose 6,28 g (rendimiento del 99%) de la sal
clorhidrato del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido amarillo amorfo. El
EM-AR-FAB m/e calculado del
C_{17}H_{21}N_{3}O_{4} (M+H) es de 332,1610 y el hallado es
de 332,1617.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(3,12 mmoles, 1,15 g) y cloruro de
2,6-diclorobenzoílo (3,51 mmoles, 0,735 g) en
diclorometano (40 ml) se añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (9,36 mmoles, 1,63 ml). Pasado 1 min, todo se
ha disuelto y se agita la solución de color amarillo claro a
temperatura ambiente durante 20 horas. Se diluye la solución
resultante de color pardo con diclorometano (50 ml). Se lava la capa
de diclorometano sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con
50 ml cada vez), solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y
una solución de salmuera (50 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra por
evaporación del disolvente, obteniéndose un producto en bruto que se
purifica por cromatografía a través de gel de sílice empleando para
ello una columna Biotage (40m), de este modo se obtienen 1,46 g
(rendimiento del 93%) del éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido amorfo de color blanco. El
EM-AR-FAB m/e calculado para
C_{24}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+H) 504,1093, hallado
504,1083.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(2,2 mmoles, 1,11 g) en etanol (12 ml) se añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0N en agua (8,8 ml). Se calienta la
mezcla a 45-50°C y se agita la solución transparente
resultante durante unas 2 h. Se elimina el etanol a presión reducida
y se diluye el residuo con agua (50 ml) y NaOH (5 ml, 1,0N) para
disolver la sal sódica. Se lava la solución acuosa con éter de
dietilo (50 ml) para eliminar cualquier impureza neutra. Se
acidifica la capa acuosa con HCl 1,0N y se extrae el producto con
acetato de etilo (2 veces con 75 ml cada vez). Se lavan los
extractos orgánicos con una solución de salmuera (100 ml) y se secan
con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se
concentra el líquido filtrado, obteniéndose 970 mg (rendimiento del
90%) de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco, p.f. 225-227°C.
EM-AR-FAB m/e calculado de
C_{23}H_{21}Cl_{2}O_{3}O_{5} (M+H) es 490,0937, el
hallado es 490,0940.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,4 mmoles, 173 mg), HBTU (0,5 mmoles, 189 mg) y ácido
1-(2-metoxietil)ciclopentanocarboxílico (0,5
mmoles, 86 mg) en DMF (2 ml) se añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (1,2 mmoles, 0,29 ml). Después de 5 min todo se
ha disuelto y se agita la solución transparente de color amarillo a
temperatura ambiente durante 24 h. Se diluye la solución pardo
oscura resultante con acetato de etilo (30 ml). Se lava la capa de
acetato de etilo sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con
30 ml cada vez), solución saturada de bicarbonato sódico (30 ml) y
solución de salmuera (30 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado por evaporación del disolvente, resultando un producto en
bruto que se purifica por cromatografía a través de gel de sílice
empleando una columna Biotage (40m), de este modo se obtienen 139 mg
(rendimiento del 72%) del éster metílico de la
N-[[1-(2-metoxietil)ciclopentil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo. El espectro de masas de alta
resolución EM-AR-FAB m/e calculado
para C_{26}H_{35}N_{3}O_{6} (M+H) es de 486,2604, el hallado
es de 486,2602.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[[1-(2-metoxietil)ciclopentil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,273 mmoles, 133 mg) en etanol (3 ml) se añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0 N en agua (1,5 ml). Se calienta al
mezcla a 40-45°C y se agita la solución transparente
resultante durante 15 h. Se elimina el etanol a presión reducida y
se diluye el residuo con agua (25 ml) y NaOH (3 ml, 1,0N) para
disolver la sal sódica. Se lava la solución acuosa con éter de
dietilo (50 ml) para eliminar cualquier impureza neutra. Se
acidifica la capa acuosa con HCl 1,0 N y se extrae el producto con
acetato de etilo (2 veces con 25 ml cada vez). Se reúnen los
extractos orgánicos, se lavan con solución de salmuera (50 ml) y se
secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y
se concentra el líquido filtrado, obteniéndose 121 mg (rendimiento
del 94%) de la
N-[[1-(2-metoxietil)ciclopentil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-FAB m/e calculado de
C_{25}H_{33}N_{3}O_{6} (M+H) es 472,2448, hallado
472,2467.
Se prepara la
N-[(2-bromo-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de ácido
2-bromo-6-metilbenzoico,
utilizando los métodos generales descritos en el ejemplo 7. Se
obtiene en forma de sólido blanco, p.f. 240-242°C.
EM-AR-FAB m/e calculado de
C_{24}H_{24}BrN_{3}O_{5} (M+H) 514,0978, hallado
514,0965.
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Se prepara la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de ácido
2-cloro-6-metilbenzoico,
utilizando los métodos generales descritos en el ejemplo 7. Se
obtiene en forma de sólido blanco, p.f. 238-240°C.
EM-AR-FAB m/e calculado de
C_{24}H_{24}ClN_{3}O_{5} (M+H) 470,1483, hallado
470,1489.
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Se prepara la
N-[(2-etil-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de ácido
2-etil-6-metilbenzoico,
utilizando los métodos generales descritos en el ejemplo 7. Se
obtiene en forma de sólido blanco, p.f. 127-133°C.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{26}H_{29}N_{3}O_{5} (M+Na) 494,1498, hallado
494,1501.
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Se prepara la
N-[[2-(2-metiletil)-6-metilfenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de ácido
2-(2-metiletil)-6-metilbenzoico,
utilizando los métodos generales descritos en el ejemplo 7. Se
obtiene en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{27}H_{31}N_{3}O_{5} (M+Na) 500,2156, hallado
500,2160.
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtiene la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del ácido 2,6-difluorbenzoico siguiendo los
métodos generales descritos en el ejemplo 7, en forma de sólido
blanco amorfo. Espectro de masas de alta resolución
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{23}H_{21}F_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) 480,1483, hallado
480,1489.
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Se obtiene la
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del ácido
2-fluor-6-(trifluor-
metil)benzoico siguiendo los métodos generales descritos en el ejemplo 7, en forma de sólido blanco, p.f. 218-220°C. EM-AR-EI m/e calculado del C_{25}H_{23}F_{4}N_{3}O_{5} (M+Na) 530,1310, hallado 530,1317.
metil)benzoico siguiendo los métodos generales descritos en el ejemplo 7, en forma de sólido blanco, p.f. 218-220°C. EM-AR-EI m/e calculado del C_{25}H_{23}F_{4}N_{3}O_{5} (M+Na) 530,1310, hallado 530,1317.
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Se obtiene la
N-[[2,6-di-(2-metiletil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del ácido
2,6-di-(2-metiletil)benzoico
siguiendo los métodos generales descritos en el ejemplo 7, en forma
de sólido blanco amorfo. EM-AR-EI
m/e calculado del C_{29}H_{35}N_{3}O_{5} (M+Na) 530,1310,
hallado 530,1317.
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A una suspensión de
2-cloro-6-fluorbenzaldehído
(416 mmoles, 66 g) en heptano (200 ml) se le añade a temperatura
ambiente n-butilamina (460 mmoles, 45,5 ml). Después
de la adición tiene lugar una reacción exotérmica y los sólidos se
disuelven por completo. Se agita la solución a temperatura ambiente
durante 3 h, se trasladan a un embudo de decantación, se lavan con
una solución de salmuera (200 ml) y se secan con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado, resultando un aceite amarillo que se purifica por
destilación con alto vacío, (p.eb. 95-98°C/4,5 mm
Hg), obtiéndose 86,31 g (rendimiento del 97%) de la
N-(2-cloro-6-fluorbencilidina)butilamina
en forma de aceite amarillo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{11}H_{13}ClFN (M^{+}) 213,0720, hallado 213,0714.
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A una solución de
N-(2-cloro-6-fluorbencilidina)butilamina
(15 mmoles, 3,21 g) en THF (20 ml) se añade por goteo una solución
de bromuro de etil-magnesio (30 mmoles, 30 ml, 1M)
en THF, manteniendo la temperatura entre 5 y 15°C. Después de la
adición se deja calentar la mezcla reaccionante a 20°C y se agita
durante 5 h. A continuación se enfría a 0°C (baño de hielo) y se
añade por goteo HCl al 20% en agua (50 ml) manteniendo la
temperatura por debajo de 15°C mediante un baño de hielo. Después de
la adición se deja calentar la mezcla reaccionante hasta temperatura
ambiente y se agita durante 15 h. Seguidamente se diluye con agua
(75 ml) y se extrae con acetato de etilo (2 veces con 50 ml cada
vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera
(100 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el
material secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose
2,27 g (rendimiento del 90%) del
2-cloro-6-etilbenzaldehído
en forma de aceite amarillo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{9}H_{9}ClO (M^{+}) 167,0264, hallado 167,0263.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión a temperatura ambiente de
2-cloro-6-etilbenzaldehído
(13,5 mmoles, 2,27 g) en acetonitrilo (25 ml) se le añade una
solución de fosfato sódico monobásico (3,4 mmoles, 0,465 g) en agua
(7,5 ml) seguida de peróxido de hidrógeno (1,8 ml, 30%). Se añade
por goteo a 0°C una solución de clorito sódico (23,7 mmoles, 2,15 g)
en agua (20 ml), manteniendo la temperatura por debajo de 3°C. Una
vez finalizada la adición se agita la suspensión de color amarillo
durante 15 h, pasando de 0°C a temperatura ambiente. En este
momento, el análisis por CCF de la mezcla indica que no existe ya
material de partida. Seguidamente se añade por goteo a 0°C una
solución de bisulfito sódico (20,5 mmoles, 2,8 g) en agua (10 ml),
hasta que desaparece el color amarillo (papel KI: positivo). Es
importante enfriar para controlar la reacción exotérmica. Pasada 1 h
se elimina el disolvente con vacío. Se extraen las impurezas neutras
con éter de dietilo (200 ml). Se neutraliza la solución acuosa
básica con HCl del 10% hasta pH \sim 1. Se recoge el sólido blanco
precipitado por filtración y se seca con aire, obteniéndose 2,415 g
(rendimiento del 97%) de ácido
2-cloro-6-etilbenzoico
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{9}H_{9}ClO_{2} (M^{+}) 184,0291, hallado 184,0295.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,5 mmoles, 184 mg), HBTU (0,7 mmoles, 265 mg) y ácido
2-cloro-6-etilbenzoico
(0,7 mmoles, 129 mg) en DMF (2 ml) se le añade a temperatura
ambiente diisopropiletilamina (1,25 mmoles, 0,22 ml). Pasados 5 min,
todo se ha disuelto y se agita la solución transparente de color
amarillo a temperatura ambiente durante 15 h. Se diluye la solución
de color pardo oscuro resultante con acetato de etilo (30 ml). Se
lava la capa de acetato de etilo sucesivamente con ácido clorhídrico
1N (2 veces con 30 ml cada vez), solución saturada de bicarbonato
sódico (30 ml) y solución de salmuera (30 ml) y se seca con sulfato
magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el
líquido filtrado por evaporación del disolvente, resultando un
producto en bruto que se purifica a través de gel de sílice en una
columna Biotage (40m), de este modo se obtienen 175 mg (rendimiento
del 70%) del éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-etilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{26}H_{28}ClN_{3}O_{5} (M+Na) es de 520,1611, el hallado
es de 520,1613.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-etilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,33 mmoles, 164 mg) en etanol (2 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0 N en agua (0,7 ml). Se agita la mezcla
a temperatura ambiente durante 3 h. Se elimina el etanol a presión
reducida y se diluye el residuo con agua (30 ml). Se lava la
solución acuosa con éter de dietilo (30 ml) para eliminar cualquier
impureza neutra. Se acidifica la capa acuosa con HCl 1,0 N y se
extrae el producto con acetato de etilo (2 veces con 35 ml cada
vez). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con solución de
salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra
el material secante y se concentra el líquido filtrado, resultando
138 mg (rendimiento del 87%) de la
N-[(2-cloro-6-etilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco, p.f. 187-190°C.
EM-AR-EI m/e calculado para el
C_{25}H_{26}ClN_{3}O_{5} (M+Na) 506,1459, hallado
506,1455.
El ácido
2-cloro-6-propilbenzoico
se obtiene a partir de la
2-fluor-6-clorobencilidina-butilamina
y bromuro de propil-magnesio, siguiendo los métodos
generales descritos en el ejemplo 15.
La
N-[(2-cloro-6-propilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
se obtiene a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del ácido
2-cloro-6-propilbenzoico
siguiendo los métodos generales descritos en el ejemplo 15, en forma
de sólido blanco, p.f. 225-227°C.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{26}H_{28}ClN_{3}O_{5} (M+Na) 520,1611, hallado
520,1615.
\vskip1.000000\baselineskip
El ácido
2-cloro-6-(2-metiletil)benzoico
se obtiene a partir de la
2-fluor-6-clorobencilidinabutilamina
y bromuro de isopropil-magnesio siguiendo el
procedimiento general descrito en el ejemplo 15.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La
N-[[2-cloro-6-(2-metiletil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
se obtiene a partir del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del ácido
2-cloro-6-(2-metiletil)benzoico
siguiendo los procedimientos generales descritos en el ejemplo 15,
en forma de sólido blanco, p.f. 205-209°C.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{26}H_{28}ClN_{3}O_{5} (M+Na) 520,1611, hallado
520,1617.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión de
5-yodo-6-metil-uracilo
(20,97 mmoles, 5,45 g) y carbonato potásico en polvo (60 mmoles,
8,29 g) en DMF (188 ml) se le añade yoduro de etilo (83,88 mmoles,
6,7 ml). Se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente
durante 15 h y se vierte sobre una mezcla de agua (150 ml) y acetato
de etilo (150 ml). Se separan las capas y se extrae la capa acuosa
con acetato de etilo (2 veces con 100 ml cada vez). Se reúnen los
extractos, se lavan con una solución de salmuera (150 ml) y se secan
con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se
concentra el líquido filtrado, resultando un sólido en bruto que se
tritura con diclorometano/éter de dietilo/hexano (1:1:1) para
obtener 3,89 g (rendimiento del 60%) del
5-yodo-1,3-dietil-6-metil-uracilo
en forma de sólido blanco cristalino, p.f.
159-161,5°C.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{9}H_{13}IN_{2}O_{2} (M^{+}) 308,0022, hallado
308,0018.
A una suspensión de cinc en polvo (33 mmoles,
1,96 g) en THF (3 ml) se le añade a temperatura ambiente
dibromoetano (3 mmoles, 0,261 ml). Se calienta esta suspensión a
60-65°C empleando un calentador tipo pistola hasta
que cesa el desprendimiento de gas etileno. Se enfría la suspensión
a temperatura ambiente, se añade trimetilclorosilano (1,5 mmoles,
0,19 ml) y se agita la mezcla durante 15 min. Se calienta una
suspensión de
5-yodo-1,3-dietil-6-metil-uracilo
(11 mmoles, 3,39 g) en DMA (6 ml) para obtener una solución
transparente y se añade de una vez a la mezcla reaccionante
anterior. Después de la adición se calienta la mezcla a 70°C. La
temperatura interior de la mezcla reaccionante sube hasta 75°C, dado
que la reacción es exotérmica. Se mantiene la mezcla reaccionante a
70°C durante 15 h, en este momento un análisis por CCF de una parte
alícuota de la mezcla reaccionante extinguida con una solución
saturada de cloruro amónico indica que ya no existe material de
partida. Se diluye la mezcla reaccionante con THF (6 ml) y se enfría
a temperatura ambiente. Se deja sedimentar el exceso de cinc en
polvo.
Se añade a temperatura ambiente esta solución
que contiene el compuesto de cinc recién preparado (11 mmoles) a una
solución de Pd(dba)_{2} (0,14 mmoles, 80 mg),
trifurilfosfina (TFP) (0,52 mmoles, 134 mg) y éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-yodo-L-fenilalanina
(9 mmoles, 3,65 mg) en THF (6 ml) y se agita la mezcla de color
amarillo claro resultante a 50-55°C durante 72 h. Se
vierte la mezcla reaccionante sobre una solución saturada de cloruro
amónico (100 ml) y se extrae con acetato de etilo (3 veces con 75 ml
cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una solución de
salmuera (150 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se
filtra el material secante y se concentra el líquido filtrado,
resultando un producto en bruto que se purifica por cromatografía de
columna a través de gel de sílice empleando para ello una columna
Biotage (40m), de este modo se obtienen 1,78 g (rendimiento del 43%)
de éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3-dimetil-6-etil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{24}H_{33}N_{3}O_{6} (M+Na) es 482,2262, el hallado es
482,2262.
A una solución del éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3-dimetil-6-etil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(3,87 mmoles, 1,78 g) en dioxano (10 ml) se le añade a temperatura
ambiente ácido clorhídrico 4N en dioxano (20 mmoles, 5 ml) y se
agita la solución durante 1 h. Se concentra la solución y se diluye
con éter de dietilo para obtener un sólido blanco. Se decantan las
aguas madres y se concentra el residuo en evaporador rotatorio y
después con alto vacío, obteniéndose 0,72 g (rendimiento del 47%) de
la sal clorhidrato del éster metílico de la
4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido amorfo. EM-AR-EI
m/e calculado del C_{19}H_{25}N_{3}O_{4} (M+Na) 382,1737,
hallado 382,1736.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,76 mmoles, 0,3 g) y cloruro de
2,6-diclorobenzoílo (0,84 mmoles, 0,175 mg) en
diclorometano (2 ml) se le añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (3,03 mmoles, 0,53 ml). Pasados 5 min, todo se
ha disuelto y se agita la solución de color amarillo claro a
temperatura ambiente durante 15 horas. Se diluye la solución
resultante de color pardo con diclorometano (25 ml). Se lava la capa
de diclorometano sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con
25 ml cada vez), solución saturada de bicarbonato sódico (25 ml) y
una solución de salmuera (25 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado por evaporación del disolvente, obteniéndose un producto en
bruto que se purifica por cromatografía a través de gel de sílice
empleando para ello una columna Biotage (40s), de este modo se
obtienen 0,40 g (rendimiento del 99%) del éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido amorfo de color blanco. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{26}H_{27}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) 554,1221, hallado
554,1229.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,77 mmoles, 0,41 g) en etanol (2 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0N en agua (1,5 ml). Se calienta la
mezcla a 50°C y se agita la solución transparente resultante durante
unas 2 h. Se elimina el etanol a presión reducida y se diluye el
residuo con agua (25 ml) y NaOH (2 ml, 1,0N) para disolver la sal
sódica. Se lava la solución acuosa con éter de dietilo (30 ml) para
eliminar cualquier impureza neutra. Se acidifica la capa acuosa con
HCl 1,0N y se extrae el producto con acetato de etilo (2 veces con
25 ml cada vez). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con una
solución de salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado, obteniéndose 320 mg (rendimiento del 80%) de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{25}H_{25}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+H) es 541,3921, el
hallado es 541,3925.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,758 mmoles, 300 mg), HBTU (0,84 mmoles, 318 mg) y ácido
2-cloro-6-metilbenzoico
(0,84 mmoles, 142 mg) en DMF (2 ml) se le añade a temperatura
ambiente diisopropiletilamina (1,9 mmoles, 0,33 ml). Pasados 5 min,
todo se ha disuelto y se agita la solución transparente de color
amarillo durante 48 h a temperatura ambiente. En este momento se
convierte en una solución de color pardo que se diluye con acetato
de etilo (30 ml). Se lava la capa de acetato de etilo sucesivamente
con agua (2 veces con 30 ml cada vez), solución saturada de
bicarbonato sódico (30 ml) y una solución de salmuera (30 ml) y se
seca con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se
concentra el disolvente, resultando un producto en bruto que se
purifica por cromatografía a través de gel de sílice empleando una
columna Biotage (40m), obteniéndose 380 mg (rendimiento del 98%) del
éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{27}H_{30}ClN_{3}O_{5} (M+Na) es de 535,1026, mientras que
el hallado es de 535,1024.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,82 mmoles, 420 mg) en etanol (2 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0N en agua (1,6 ml). Se calienta la
mezcla a 50°C y se agita la solución transparente resultante durante
2 h. Se elimina el etanol a presión reducida y se diluye el residuo
con agua (25 ml) y NaOH (3 ml, 1,0N) para disolver la sal sódica. Se
lava la solución acuosa con éter (30 ml) para eliminar cualquier
impureza neutra. Se acidifica la fase acuosa con HCl 1,0 N y se
extrae el producto con acetato de etilo (2 veces con 25 ml cada
vez). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con solución de
salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra
el agente secante y se concentra el líquido filtrado, resultando 277
mg (rendimiento del 68%) de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{26}H_{28}ClN_{3}O_{5} (M+Na) es de 520,1611 y el hallado
520,1616.
\vskip1.000000\baselineskip
La
4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-N-[[1-(2-metoxietil)ciclopentil]carbonil]-L-fenilalanina
se obtiene a partir del éster metílico de la
4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del ácido
1-(2-metoximetil)ciclopentanocarboxílico
siguiendo las técnicas generales descritas en el ejemplo 19, en
forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{27}H_{37}N_{3}O_{6} (M+Na) 522,2575, hallado
522,2581.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución premezclada de metóxido sódico
(55 mmoles, 2,97 g) y
3-amino-4,4,4-trifluorcrotonato
de etilo (55 mmoles, 10,0 g) en DMSO (19 ml, secado con tamices
moleculares) se le añade a 20°C isocianato de metilo (55 mmoles, 3,2
g) en DMSO (2,5 ml) durante 15 min. Se agita la solución durante 15
min y después se añade otra porción de metóxido sódico (27,5 mmoles,
1,34 g). Se agita a 20°C durante 15 min y se añade a esta
temperatura isocianato de metilo (14 mmoles, 0,8 g). Pasados otros
15 min se deja calentar la mezcla reaccionante a temperatura
ambiente y se agita durante una noche. Se vierte la solución de
color amarillo resultante sobre agua (50 ml) para obtener una
solución de color amarillo claro. Se extraen las impurezas neutras
con éter de dietilo (3 veces con 50 ml cada vez). Se acidifica la
capa acuosa con ácido clorhídrico concentrado, resultando un sólido
blanco. Se recogen los sólidos por filtración y se lavan con agua.
Se seca con aire, obteniéndose 6,79 g (rendimiento del 63%) del
3-metil-6-(trifluormetil)-uracilo
en forma de sólido blanco, p.f. 235-237°C. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{6}H_{5}F_{3}N_{2}O_{2} (M+) es de 194,0303 y el hallado
de 194,0303.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión de
3-metil-6-(trifluormetil)uracilo
(20,6 mmoles, 4,0 g) y carbonato potásico en polvo (41,2 mmoles, 5,7
g) en DME (30 ml) se le añade yoduro de metilo (82,4 mmoles, 5,13
ml). Se mantiene la mezcla reaccionante en reflujo 4 h, entonces el
análisis CCF de la misma indica la ausencia de material de partida.
Se enfría la mezcla reaccionante a temperatura ambiente y se diluye
con agua (50 ml). Se elimina la DME a presión reducida, resultando
una suspensión blanca. Se recogen los sólidos por filtración y se
lavan con agua. Se seca con aire, obteniéndose 3,55 g (rendimiento
del 83%) de
1,3-dimetil-6-(trifluormetil)uracilo
en forma de sólido blanco, p.f. 85-87°C. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{7}H_{7}F_{3}N_{2}O_{2} (M^{+}) es de 208,0459,
hallado 208,0460.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de
1,3-dimetil-6-(trifluormetil)uracilo
(16,91 mmoles, 3,52 g), ácido trifluoracético (20 ml) y anhídrido
trifluoracético (5 ml) se calientan a ebullición a reflujo durante 5
min. Se añade NIS (16,91 mmoles, 3,8 g) y se agita la mezcla
reaccionante durante 15 h, entonces el análisis por CCF de la misma
indica la presencia de algo del material de partida. Se añade otra
porción de NIS (8,45 mmoles, 1,9 g) y se continúa el reflujo durante
otras 5 h. Se enfría la mezcla reaccionante a temperatura ambiente y
se vierte lentamente sobre una solución saturada de carbonato
potásico (100 ml). Se añade una solución de tiosulfito sódico para
quitar el color del exceso de yodo. Se recogen los sólidos por
filtración y se lavan con agua. Se seca con aire, obteniéndose 3,73
g (rendimiento del 66%) del
1,3-dimetil-5-yodo-6-(trifluormetil)uracilo
en forma de sólido blanco, p.f. 149-151°C. El
EM-HR-EI m/e calculado del
C_{7}H_{6}F_{3}IN_{2}O_{2} (M^{+}) es de 333,9426, el
hallado de 333,9436.
A una suspensión de cinc en polvo (33 mmoles,
1,96 g) en THF (3 ml) se le añade a temperatura ambiente
1,2-dibromoetano (3 mmoles, 0,261 ml). Se calienta
la suspensión a 60-65°C con un calentador tipo
pistola hasta que cesa el desprendimiento de gas etileno. Después se
enfría la suspensión a temperatura ambiente y se añade
trimetilclorosilano (1,5 mmoles, 0,19 ml) y se agita la mezcla
durante 15 min. Se calienta una suspensión de
1,3-dimetil-5-yodo-6-(trifluormetil)uracilo
(10 mmoles, 3,34 g) en DMA (8 ml) para lograr una solución
transparente que se añade de una sola vez a la mezcla reaccionante.
Una vez finalizada la adición se calienta la mezcla a 70°C. La
temperatura interior de la mezcla reaccionante sube hasta 75°C
debido a que la reacción es exotérmica. Se agita la mezcla
reaccionante durante 3 h a 70°C, en este momento, la CCF de una
parte alícuota de la mezcla, extinguida con una solución saturada de
cloruro amónico, indica la ausencia del material de partida. Se
diluye la mezcla reaccionante con THF (5 ml) y se enfría a
temperatura ambiente, dejando que sedimente el exceso de cinc en
polvo.
Se añade a temperatura ambiente el compuesto de
cinc recién obtenido (10 mmoles) a una solución de
Pd(dba)_{2} (1,0 mmoles, 520 mg), trifurilfosfina
(TFP) (4,0 mmoles, 0,93 g) y éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-yodo-L-fenilalanina
(7 mmoles, 2,84 g) en THF (10 ml) y se agita la mezcla de color
amarillo claro a 45°C durante 12 h. Se vierte la mezcla sobre una
solución saturada de cloruro amónico (100 ml) y se extrae con
acetato de etilo (3 veces con 75 ml cada vez). Se reúnen los
extractos, se lavan con una solución de salmuera (150 ml) y se secan
con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se
concentra la solución, obteniéndose el producto en bruto que se
purifica por cromatografía a través de gel de sílice, empleando una
columna Biotage (40m), resultando 1,45 g (rendimiento del 42%) de
éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{22}H_{26}F_{3}N_{3}O_{6} (M+Na) 508,1666, hallado
508,1670.
\newpage
Se trata a temperatura ambiente el éster
metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
sólido (2,92 mmoles, 1,42 g) con ácido clorhídrico 4N en dioxano (28
mmoles, 7 ml) y se agita la solución durante 2 h. Se diluye la
mezcla reaccionante con diclorometano (5 ml) y se concentra a
presión reducida en un evaporador rotatorio. Se diluye el residuo
con éter de dietilo, resultando un sólido de color pardo claro. Se
recogen los sólidos por filtración y se lavan con éter de dietilo.
Se secan, obteniéndose 1,21 g (rendimiento del 91%) de la sal
clorhidrato del éster metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido de color pardo claro, p.f.
244-247°C. EM-AR-EI
m/e calculado de C_{17}H_{18}F_{3}N_{3}O_{4} (M+H)
386,1322, hallado 386,1319.
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A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(1,0 mmoles, 421 mg) y cloruro de
2,6-diclorobenzoílo (1,1 mmoles, 0,235 g) en
diclorometano (3 ml) se le añade a tempertura ambiente
diisopropiletilamina (4,4 mmoles, 0,622 ml). Pasado 1 min, todo se
ha disuelto y se agita a temperatura ambiente la solución de color
pardo claro durante 72 h. Se diluye con diclorometano (25 ml) la
solución de color pardo oscuro resultante. Se lava la capa de
diclorometano sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con 25
ml cada vez), solución saturada de bicarbonato sódico (25 ml) y una
solución de salmuera (25 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el agente secante y se concentra el líquido
filtrado, resultando un producto en bruto que se purifica por
cromatografía a través de gel de sílice en columna Biotage (40s),
obteniéndose 0,541 g (rendimiento del 97%) del éster metílico de la
N-[1-(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{24}H_{20}Cl_{2}F_{3}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 580,0624,
hallado de 580,0629.
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A una suspensión del éster metílico de la
N-[1-(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluorme-
til)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina (0,422 mmoles, 0,236 g) en piridina (15 ml) se le añade a temperatura ambiente yoduro de litio (4,22 mmoles, 0,571 g). Se calienta la mezcla a reflujo durante 15 h. Se enfría a temperatura ambiente, se diluye con ácido clorhídrico 1N y se extrae con acetato de etilo (2 veces con 25 ml). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con solución de salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se concentra el líquido filtrado, resultando 201 mg (rendimiento del 87%) de la N-[1-(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina, en forma de sólido de color amarillo claro, p.f. 125-128°C. EM-AR-EI m/e calculado del C_{23}H_{18}Cl_{2}F_{3}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 566,0469, hallado 566,0468.
til)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina (0,422 mmoles, 0,236 g) en piridina (15 ml) se le añade a temperatura ambiente yoduro de litio (4,22 mmoles, 0,571 g). Se calienta la mezcla a reflujo durante 15 h. Se enfría a temperatura ambiente, se diluye con ácido clorhídrico 1N y se extrae con acetato de etilo (2 veces con 25 ml). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con solución de salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se concentra el líquido filtrado, resultando 201 mg (rendimiento del 87%) de la N-[1-(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina, en forma de sólido de color amarillo claro, p.f. 125-128°C. EM-AR-EI m/e calculado del C_{23}H_{18}Cl_{2}F_{3}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 566,0469, hallado 566,0468.
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Se trata una solución de ácido
2-cloro-6-metilbenzoico
(190 mg, 1,14 mmoles) en diclorometano (7 ml) que contiene DMF (4
gotas) con cloruro de oxalilo (0,42 ml, 4,8 mmoles) y se agita la
mezcla durante 2 h. Se concentra la mezcla, se realiza una
destilación azeotrópica con tolueno para eliminar las trazas de
cloruro de oxalilo y se utiliza el residuo directamente en la etapa
siguiente.
Se trata una mezcla del cloruro de ácido
anterior, la sal clorhidrato del éster metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil-L-fenilalanina
(423 mg, 1,003 mmoles) en diclorometano (5 ml) con DIPEA (0,625 ml,
4,46 mmoles) y se agita la solución de color pardo claro resultante
durante 3 días. Se concentra la mezcla, se diluye con acetato de
etilo, se lava con HCl 1N y una solución de salmuera y se seca con
sulfato magnésico anhidro. Se filtra y se concentra, resultando un
residuo que se purifica a través de gel de sílice en columna Biotage
(40s), obteniéndose el éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
en forma de espuma blanca (179 mg, 33%). El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{25}H_{23}ClN_{3}O_{5} (M+Na) es de 560,1171, el hallado
es de 560,1172.
Se calienta a ebullición a reflujo durante una
noche una solución de éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
(260 mg, 0,48 mmoles), obtenido en el experimento anterior, y yoduro
de litio (653,4 mg, 4,8 mmoles) en piridina (14 ml). Se diluye la
mezcla con ácido clorhídrico 1N y se extrae con acetato de etilo. Se
reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera y se
secan con sulfato magnésico anhidro, se filtran y se concentran. Se
tritura el residuo con éter, hexano y diclorometano, resultando la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
(205 mg, 81%) en forma de sólido blanco, p.f.
243-247°C. EM-AR-EI
m/e calculado del C_{24}H_{21}ClF_{3}N_{3}O_{5} (M+Na) es
de 546,1014, hallado 546,1013.
Se trata una solución de ácido
2-fluor-6-trifluormetilbenzoico
(125 mg, 0,60 mmoles) (Aldrich, artículo nº 33080-9)
en diclorometano (3 ml) que contiene DMF (2 gotas) con cloruro de
oxalilo (0,21 ml, 2,4 mmoles) y se agita la mezcla durante 2 h. Se
concentra la mezcla, se realiza una destilación azeotrópica con
tolueno para eliminar las trazas de cloruro de oxalilo y se utiliza
el residuo directamente en la etapa siguiente.
Se trata una mezcla del cloruro de ácido
anterior, la sal clorhidrato del éster metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil-L-fenilalanina
(210 mg, 0,50 mmoles) en diclorometano (3 ml) con DIPEA (0,336 ml,
2,4 mmoles) y se agita la solución de color pardo claro resultante
durante 3 días. Se concentra la mezcla, se diluye con acetato de
etilo, se lava con HCl 1N y una solución de salmuera y se seca con
sulfato magnésico anhidro. Se filtra y se concentra, resultando un
residuo que se purifica a través de gel de sílice en columna Biotage
(40s), obteniéndose el éster metílico de la
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
en forma de espuma blanca (179 mg, 62%). El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{25}H_{20}F_{7}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 598,1183, el
hallado es de 598,1186.
Se calienta a ebullición a reflujo durante una
noche una solución de éster metílico de la
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
(266 mg, 0,46 mmoles), obtenido en el experimento anterior, y yoduro
de litio (624 mg, 4,6 mmoles) en piridina (14 ml). Se diluye la
mezcla con ácido clorhídrico 1N y se extrae con acetato de etilo. Se
reúnen los extractos, se lavan con una solución de salmuera y se
secan con sulfato magnésico anhidro, se filtran y se concentran. Se
tritura el residuo con éter, hexano y diclorometano, resultando la
N-[[2-fluor-6-(trifluor-metil)fenil]carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina
(167 mg, 64%) en forma de sólido blanco, p.f.
122-125°C. EM-AR-EI
m/e (calculado del C_{24}H_{18}F_{7}N_{3}O_{5} (M+Na) es
de 584,1027, hallado 584,1028.
Se hidrogena a temperatura ambiente durante 2 h
una mezcla de alcohol
4-nitro-3-metilbencílico
(56,53 mmoles, 9,45 g), dicarbonato de
di-tert-butilo (63 mmoles, 13,74 g)
y paladio sobre carbón (450 mg) en acetato de etilo (240 ml).
Después se filtra la mezcla reaccionante a través de un lecho de
Celite, lavando con acetato de etilo (50 ml). Se concentra el
líquido filtrado con vacío, obteniéndose 10,18 g (rendimiento del
76%) del alcohol
4-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino-3-metilbencílico
en forma de sólido de color amarillo claro. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{13}H_{19}NO_{3} (M^{+}) es de 237,0126, el hallado es de
237,0129.
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A una solución de alcohol
4-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino-3-metilbencílico
(42,9 mmoles, 10,18 g) en diclorometano (85 ml) se le añade a
temperatura ambiente dióxido de manganeso (138 mmoles, 12 g) y
tamices moleculares de 4A (6 g). Se agita la mezcla reaccionante a
temperatura ambiente durante 76 h y se filtra a través de un lecho
de Celite, lavando con diclorometano. Se concentra el líquido
filtrado a presión reducida y se purifica el residuo por
cromatografía a través de gel de sílice con una columna Biotage
(40m), obteniéndose 7,82 g (rendimiento del 77%) del
4-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]-3-metilbenzaldehído,
en forma de sólido blanco, p.f. 109-111°C. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{13}H_{17}NO_{3} (M^{+}) es 235,1208, el hallado es
235,1207.
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A una solución del éster trimetílico de la
N-(benciloxicarbonil)-\alpha-fosfonoglicina
(18 mmoles, 5,96 g) (Aldrich Chemical Company) en diclorometano (30
ml) se le añade a temperatura ambiente tetrametilguanidina (18
mmoles, 2,07 g). Se agita la mezcla reaccionante a temperatura
ambiente durante 1 h y se enfría a -30°C. A continuación se le añade
de una vez una solución de
4-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]-3-metilbenzaldehído
(15 mmoles, 3,52 g) en diclorometano (12,5 ml). Pasados 30 min a
esta temperatura se deja calentar la mezcla reaccionante hasta
temperatura ambiente y se agita durante 15 h. Se diluye la mezcla
reaccionante con éter de dietilo (100 ml) y se lava sucesivamente
con ácido clorhídrico 0,5N (2 veces con 50 ml cada vez), una
solución saturada de bicarbonato sódico (100 ml), una solución de
salmuera (100 ml) y se seca con sulfato magnésico anhidro. Se filtra
el agente secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose
un producto un bruto que se purifica por cromatografía a través de
gel de sílice en una columna Biotage (40m), resultando 3,87 g
(rendimiento del 58%) del éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]-3-metil-deshidrofenilalanina,
en forma de sólido blanco. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{24}H_{28}N_{2}O_{6} (M^{+}) es 440,1527, el hallado es
de 440,1524.
Se hace borbotear durante una noche una
corriente de argón a través de éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]-3-metil-deshidrofenilalanina
(8,08 mmoles, 3,56 g) en metanol (25 ml) en un reactor de presión
Parr. En una caja de acceso con guantes se añade con corriente de
argón el catalizador, el trifluormetanosulfonato de
(+)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dimetilfosfolano)benceno(ciclooctadieno)-rodio
(I) [[Rh(DOC)(S,S)-(me)DuPHOS]+TfO-] (\sim40 mg). Se
agita la solución a temperatura ambiente con presión de hidrógeno
(60 psi) durante 22 h. Se concentra la solución resultante y se
purifica el producto en bruto por cromatografía a través de gel de
sílice en una columna Biotage (40m), obteniéndose 2 g (rendimiento
del 55%) del ester metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]-3-metil-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{24}H_{30}N_{2}O_{6} (M^{+}) es de 442,1627, el hallado
es de 442,1629.
A una solución del ester metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino-3-metil-L-fenilalanina
(4,52 mmoles, 2 g) en dioxano (12 ml) se le añade a temperatura
ambiente ácido clorhídrico 4N en dioxano (48 mmoles, 2 ml) y se
agita la solución durante unas 2 h hasta que se forma un precipitado
blanco. Se disuelven los sólidos con éter de dietilo, se decantan
las aguas madres y se seca el residuo en primer lugar en el
evaporador rotatorio y después con alto vacío, obteniéndose 1,487 g
(rendimiento del 87%) de la sal clorhidrato del éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-amino-3-metil-L-fenilalanina,
en forma de sólido amarillo amorfo. El
EM-AR-FAB m/e calculado del
C_{19}H_{22}N_{2}O_{4} (M+H) es de 343,0142, el hallado es
de 343,0144.
Se calienta una suspensión de ácido sulfúrico
(0,3 ml), agua (36 ml) y sal clorhidrato del éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-amino-3-metil-L-fenilalanina
(2,9 mmoles, 1,1 g) hasta obtener una solución transparente. Se
enfría a -1°C (baño de hielo) y se añade por goteo una solución de
nitrito sódico (5,8 mmoles, 400 mg) en agua (8 ml). Se agita la
mezcla reaccionante durante 30 min y se añade una solución de yoduro
potásico (8,7 mmoles, 1,5 g) en agua (6 ml), resultando una
suspensión de color pardo. Se agita 30 min, se deja calentar a
temperatura ambiente y se agita durante 1 h. Se diluye la mezcla
reaccionante con agua (100 ml) y se extrae con acetato de etilo (3
veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una
solución saturada de bisulfito sódico (100 ml) y una solución de
salmuera (100 ml) y se seca con sulfato magnésico anhidro. Se filtra
el material secante y se concentra el líquido filtrado, resultando
un producto en bruto que se purifica por cromatografía a través de
gel de sílice en columna Biotage (40m), obteniéndose 0,84 g
(rendimiento del 64%) del éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-yodo-3-metil-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{19}H_{20}INO_{4} (M+Na) es de 476,0329, el hallado es de
476,0336.
A una suspensión de cinc en polvo (15 mmoles,
0,98 g) en THF (1,5 ml) se le añade a temperatura ambiente
1,2-dibromoetano (1 mmol, 0,13 ml). Se calienta la
suspensión a 60-65°C con un calentador tipo pistola
hasta que cesa el desprendimiento de gas etileno. Después se enfría
la suspensión a temperatura ambiente y se añade trimetilclorosilano
(0,5 mmoles, 70 \mul) y se agita la mezcla durante 15 min. Se
calienta una suspensión de
5-yodo-1,3-dimetiluracilo
(2,5 mmoles, 665 mg) en DMA (2 ml) para obtener una disolución
transparente que se añade de una vez a la mezcla reaccionante
anterior. Una vez finalizada la adición se calienta la mezcla a
70°C. Se agita la mezcla reaccionante a 70°C durante unas 3 h, en
este momento la CCF de una parte alícuota de la mezcla, que se ha
extinguido con una solución saturada de cloruro amónico, indica la
ausencia de material de partida. Se diluye la mezcla con THF (2 ml),
dejando que sedimente el exceso de cinc en polvo.
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Se añade a temperatura ambiente el compuesto de
cinc recién obtenido (2,5 mmoles) a una solución de
Pd(dba)_{2} (0,05 mmoles, 27 mg), trifurilfosfina
(TFP) (0,2 mmoles, 50 mg) y éster metílico de
N-(benciloxicarbonil)-4-yodo-3-metil-L-fenilalanina
(0,5 mmoles, 227 mg) en THF (2 ml) y se agita la mezcla de color
amarillo claro a 45°C durante 15 h. Se vierte la mezcla sobre una
solución saturada de cloruro amónico y se extrae con acetato de
etilo (3 veces con 30 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se
lavan con una solución de salmuera (50 ml) y se secan con sulfato
magnésico anhidro. Se filtra el agente secante y se concentra la
solución, obteniéndose el producto en bruto que se purifica por
cromatografía a través de gel de sílice en columna Biotage (40m),
resultando 161 mg (rendimiento del 69%) de éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{25}H_{27}N_{3}O_{6} (M+Na) 488,1792, hallado:
488,1801.
Se calienta a reflujo durante 20 min una mezcla
de éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,34 mmoles, 159 mg), ciclohexeno (1 ml) y paladio al 10% sobre
carbón (100 mg) en etanol (3 ml). Se filtra a través de un lecho de
Celite y se lava el lecho con etanol (10 ml). Se reúnen los
filtrados, se concentran y se seca el residuo con alto vacío,
resultando 96 mg (rendimiento del 85%) del éster metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
en forma de sólido amarillo pegajoso. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{17}H_{21}N_{3}O_{4} (M+Na) 354,1424, hallado:
354,1424.
A una suspensión de éster metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,125 mmoles, 46 mg), HBTU (0,125 mmoles, 47,5 mg) y ácido
2-cloro-6-metilbenzoico
(0,137 mmoles, 25 mg) en DMF (2 ml) se añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (0,312 mmoles, 44 \mul). Después de 5 min,
todo se ha disuelto y se agita la solución transparente de color
amarillo a temperatura ambiente durante 72 h. Se diluye la solución
pardo oscura resultante con acetato de etilo (30 ml). Se lava la
capa de acetato de etilo sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2
veces con 30 ml cada vez), solución saturada de bicarbonato sódico
(30 ml) y solución de salmuera (30 ml) y se seca con sulfato
magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el
líquido filtrado por evaporación del disolvente, resultando un
producto en bruto que se purifica por cromatografía a través de gel
de sílice empleando una columna Biotage (40s), de este modo se
obtienen 42 mg (rendimiento del 70%) del éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina,
en forma de residuo aceitoso. El espectro de masas de alta
resolución EM-AR-EI m/e calculado
para C_{25}H_{26}ClN_{3}O_{5} (M+Na) es de 506,1454, el
hallado es de 506,1459.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,083 mmoles, 40 mg) en etanol (1 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0 N en agua (0,2 ml). Se calienta al
mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se elimina el etanol a
presión reducida y se diluye el residuo con agua (5 ml). Se lava la
solución acuosa con éter de dietilo (20 ml) para eliminar cualquier
impureza neutra. Se acidifica la capa acuosa con HCl 1,0 N y se
extrae el producto con acetato de etilo (2 veces con 25 ml cada
vez). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con solución de
salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra
el material secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose
34 mg (rendimiento del 87%) de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{24}H_{24}ClN_{3}O_{5} (M+Na) es 492,1295, hallado
492,1301.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,128 mmoles, 47 mg) y cloruro de
2,6-diclorobenzoílo (0,153 mmoles, 32 mg) en
diclorometano (1 ml) se le añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (0,45 mmoles, 77 \mul). Pasados 5 min, todo
se ha disuelto y se agita la solución de color amarillo claro a
temperatura ambiente durante 15 h. Se diluye la solución resultante
de color pardo con diclorometano (25 ml). Se lava la capa de
diclorometano sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con 25
ml cada vez), solución saturada de bicarbonato sódico (25 ml) y una
solución de salmuera (25 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra por
evaporación del disolvente, obteniéndose un producto en bruto que se
purifica por cromatografía a través de gel de sílice empleando para
ello una columna Biotage (40m), de este modo se obtienen 52 mg
(rendimiento del 81%) del éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
en forma de sólido amorfo de color blanco. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{24}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) 526,0907, hallado
526,0912.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,1 mmoles, 59 mg) en etanol (1 ml) se añade a temperatura ambiente
hidróxido sódico 1,0N en agua (0,2 ml). Se agita la mezcla a
temperatura ambiente durante unas 2 h. Se elimina el etanol a
presión reducida y se diluye el residuo con agua (10 ml). Se lava la
solución acuosa con éter de dietilo (20 ml) para eliminar cualquier
impureza neutra. Se acidifica la capa acuosa con HCl 1,0N y se
extrae el producto con acetato de etilo (2 veces con 15 ml cada
vez). Se lavan los extractos orgánicos con una solución de salmuera
(50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el
material secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose 20
mg (rendimiento del 41%) de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{23}H_{21}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) es 512,0752, el
hallado es 512,0754.
A una suspensión de cinc en polvo (15 mmoles,
0,98 g) en THF (1,5 ml) se le añade a temperatura ambiente
1,2-dibromoetano (1 mmol, 0,13 ml). Se calienta esta
suspensión a 60-65°C con un calentador tipo pistola
hasta que cesa el desprendimiento de gas etileno. Se enfría la
suspensión a temperatura ambiente, se añade trimetilclorosilano (0,5
mmoles, 70 \mul) y se agita la mezcla durante 15 min. Se calienta
una suspensión de
5-yodo-1,3,6-trimetil-uracilo
(2,5 mmoles, 700 mg) en DMA (2 ml) para obtener una solución
transparente y se añade de una sola vez a la mezcla reaccionante. Se
agita la mezcla reaccionante a 70°C durante 3-4 h,
entonces la CCF de una parte alícuota que se ha extinguido con una
solución saturada de cloruro amónico indica que ya no existe
material de partida. Se diluye la mezcla reaccionante con THF (3 ml)
y se deja sedimentar el exceso de cinc en polvo.
Se añade a temperatura ambiente esta solución
que contiene el compuesto de cinc (2,5 mmoles) a una solución de
Pd(dba)_{2} (0,05 mmoles, 27 mg), trifurilfosfina
(TFP) (0,2 mmoles, 50 mg) y éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-yodo-3-metil-L-fenilalanina
(0,5 mmoles, 227 mg) en THF (2 ml) y se agita la mezcla de color
amarillo claro resultante a 45°C durante 15 h. Se vierte la mezcla
reaccionante sobre una solución saturada de cloruro amónico y se
extrae con acetato de etilo (3 veces con 30 ml cada vez). Se reúnen
los extractos, se lavan con una solución de salmuera (50 ml) y se
secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y
se concentra el líquido filtrado, resultando un producto en bruto
que se purifica por cromatografía a través de gel de sílice
empleando para ello una columna Biotage (40m), de este modo se
obtienen 71 mg (rendimiento del 30%) de éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
en forma de aceite amarillo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{26}H_{29}N_{3}O_{6} (M+Na) es 502,2173, el hallado es
502,2174.
Se calienta a reflujo durante 15 h una mezcla de
éster metílico de la
N-(benciloxicarbonil)-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,145 mmoles, 70 mg), ciclohexeno (1 ml) y paladio al 10% sobre
carbón (100 mg) en etanol (2 ml). Se filtra a través de un lecho de
Celite y se lava el lecho con etanol (10 ml). Se reúnen los
filtrados, se concentran y se seca el residuo con alto vacío,
resultando 36 mg (rendimiento del 72%) del éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
en forma de sólido amarillo claro. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{18}H_{23}N_{3}O_{4} (M+Na) es de 368,1327, hallado:
368,1321.
A una suspensión de éster metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,089 mmoles, 34 mg) y cloruro de 2,6-clorobenzoílo
(0,1 mmoles, 21 mg) en diclorometano (2 ml) se le añade a
temperatura ambiente diisopropiletilamina (0,4 mmoles, 70 \mul).
Después de 5 min, todo se ha disuelto y se agita la solución
transparente de color amarillo a temperatura ambiente durante 15 h.
Se diluye la solución pardo oscura resultante con diclorometano (25
ml). Se lava la capa de diclorometano sucesivamente con ácido
clorhídrico 1N (2 veces con 25 ml cada vez), solución saturada de
bicarbonato sódico (25 ml) y solución de salmuera (25 ml) y se seca
con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se
concentra el líquido filtrado por evaporación del disolvente,
resultando un producto en bruto que se purifica por cromatografía a
través de gel de sílice empleando una columna Biotage (40m), de este
modo se obtienen 22 mg (rendimiento del 48%) del éster metílico de
la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina,
en forma de aceite viscoso. El espectro de masas de alta resolución
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{25}H_{25}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 541,1065, el
hallado es de 541,1063.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina
(0,04 mmoles, 22 mg) en etanol (2 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0 N en agua (0,5 ml). Se calienta al
mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se elimina el etanol a
presión reducida y se diluye el residuo con agua (10 ml). Se lava la
solución acuosa con éter de dietilo (20 ml) para eliminar cualquier
impureza neutra. Se acidifica la capa acuosa con HCl 1,0 N y se
extrae el producto con acetato de etilo (2 veces con 15 ml cada
vez). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con solución de
salmuera (50 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra
el material secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose
20 mg (rendimiento del 93%) de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado de
C_{23}H_{21}Cl_{2}N_{3}O_{5} [(M-H)+2Na]
es 548,0725, hallado 548,0733.
A una suspensión de
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,6 mmoles, 300 mg) y bicarbonato sódico (3,6 mmoles, 302 mg) en
DMF (4 ml) se le añade yodoetano (3,6 mmoles, 0,29 ml) a temperatura
ambiente. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 72 h. Se
vierte sobre agua (50 ml) y se extrae con acetato de etilo (3 veces
con 20 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con una
solución de salmuera (60 ml) y se secan con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado, resultando un producto en bruto que se purifica por
cromatografía a través de gel de sílice en una columna Biotage
(40m), de este modo se obtienen 155 mg (rendimiento del 50%) del
éster etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco cristalino, p.f.
262-265°C. El
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{25}H_{25}Cl_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 540,1062, el
hallado es de 540,1049.
Se agita a temperatura ambiente durante una
noche una mezcla de
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(320 mg, 0,65 mmoles), clorhidrato del cloruro de
2-[(N,N-dietil)amino]etilo (579 mg,
3,26 mmoles) y carbonato potásico (451 mg, 3,27 mmoles) en acetato
de etilo (5 ml) y agua (5 ml). Se separan las capas y se extrae la
capa acuosa con acetato de etilo. Se reúnen los extractos y se lavan
con salmuera, se secan con sulfato magnésico anhidro y se
concentran, obteniéndose el éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(190 mg, 49%) de un sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{29}H_{34}Cl_{2}N_{4}O_{5} (M+H) es 589,1978, hallado
589,1980. Si se acidifica la capa acuo-
sa se recupera la N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina (167 mg).
sa se recupera la N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina (167 mg).
El éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
se obtiene a partir de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y del clorhidrato del cloruro de
2-[(N,N-dietil)aminoetilo siguiendo los
métodos generales descritos en el ejemplo 28, en forma de sólido
blanco amorfo. EM-AR-EI m/e
calculado de C_{30}H_{37}ClN_{4}O_{5} (M+H) 569,2525;
hallado: 569,2530.
El éster etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
se obtiene a partir de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de yodoetano siguiendo los procedimientos generales descritos en
el ejemplo 27, en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{26}H_{28}ClN_{3}O_{5} (M+Na) 520,1610, hallado:
520,1591.
A una suspensión de éster metílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(8,8 mmoles, 3,79 g) en etanol (20 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0N en agua (17,57 ml). Se agita la
mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se diluye con agua (50
ml) y se elimina el etanol a presión reducida. Se lava la solución
acuosa con éter de dietilo (100 ml) para eliminar cualquier impureza
neutra. Se acidifica la capa acuosa con HCl 1,0N y se extrae el
producto con acetato de etilo (2 veces con 100 ml cada vez). Se
lavan los extractos orgánicos con una solución de salmuera (200 ml)
y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material
secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose 3,44 g
(rendimiento del 94%) de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido espumoso de color pardo claro.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{21}H_{27}N_{3}O_{6} (M+Na) 440,1792, hallado
440,1792.
A una solución de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(1,21 mmoles, 505 mg) y 2-(4-morfolino)etanol
(2,42 mmoles, 318 mg) en THF (8 ml) se le añade a temperatura
ambiente di-isopropilcarbodiimida (DIC) (1,82
mmoles, 0,287 ml) y 4-dimetilaminopiridina (0,6
mmoles, 74 mg). Se agita la solución resultante durante 72 h. Se
vierte la mezcla reaccionante sobre agua (50 ml) y se extrae con
acetato de etilo (3 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los
extractos, se lavan con agua (2 veces con 50 ml cada vez) y una
solución de salmuera (100 ml) y se secan con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado, obteniéndose un producto en bruto que se purifica por
cromatografía a través de gel de sílice en una columna Biotage
(40m), de este modo se obtienen 428 mg (rendimiento del 67%) del
éster 2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{27}H_{38}N_{4}O_{7} (M+Na) 553,2633, hallado
553,2636.
Se trata a temperatura ambiente el éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
sólido (1,6 mmoles, 0,85 g) con ácido clorhídrico 4N en dioxano
(16,02 mmoles, 4 ml) y se agita la solución durante 3 h hasta que se
forma un precipitado blanco. Se diluyen los sólidos con éter de
dietilo, se decantan las aguas madres y se seca el residuo en primer
lugar en el evaporador rotatorio y después con alto vacío,
obteniéndose 0,75 g (rendimiento del 99%) de la sal clorhidrato del
éster 2-(4-morfolino)etílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido amorfo de color amarillo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{22}H_{30}N_{4}O_{5} (M+H) 431,2289, hallado 431,2292.
A una suspensión de la sal clorhidrato del éster
2-(4-morfolino)etílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,85 mmoles, 399 mg) y cloruro de
2,6-diclorobenzoílo (0,95 mmoles, 0,201 g) en
diclorometano (4 ml) se le añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (4,75 mmoles, 0,66 ml). Pasados 5 min, todo se
ha disuelto y se agita la solución transparente de color amarillo a
temperatura ambiente durante 48 h. Se diluye la solución de color
pardo claro resultante con diclorometano (50 ml). Se lava la capa de
diclorometano sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con 50
ml cada vez), una solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y
una solución de salmuera (50 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado, obteniéndose un producto en bruto que se purifica por
cromatografía a través de gel de sílice en una columna Biotage
(40m), resultando 0,427 g (rendimiento del 75%) del éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco, p.f. 90-94°C.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{29}H_{32}Cl_{2}N_{4}O_{6} (M+H) 603,1772, hallado
603,1782.
El éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
se obtiene a partir del éster
2-(4-morfolino)etílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de cloruro de
2-cloro-6-metilbenzoílo
siguiendo los métodos generales descritos en el ejemplo 31, en forma
de sólido blanco amorfo. El EM-AR-EI
m/e calculado para C_{30}H_{35}ClN_{4}O_{6} (M+H) es de
583,2318, hallado: 583,2326.
A una suspensión de
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(1,006 mmoles, 420 mg) y bicarbonato sódico (5,03 mmoles, 422 mg) en DMF (8 ml) se le añade a temperatura ambiente acetato de 1-cloroetilo (5,03 mmoles, 616 mg). Se agita la mezcla reaccionante durante 48 h. Se vierte sobre agua (50 ml) y se extra con acetato de etilo (3 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con agua (2 veces con 50 ml cada vez) y una solución de salmuera (100 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido filtrado, resultando un producto en bruto que se purifica por cromatografía a través de gel de sílice en una columna Biotage (40s), obteniéndose 390 mg (rendimiento del 77%) del éster 1-(acetoxi)etílico de la N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina en forma de sólido blanco amorfo. El EM-AR-EI m/e calculado para C_{25}H_{33}N_{3}O_{8} (M+Na) es de 526,2160, hallado: 526,2143.
(1,006 mmoles, 420 mg) y bicarbonato sódico (5,03 mmoles, 422 mg) en DMF (8 ml) se le añade a temperatura ambiente acetato de 1-cloroetilo (5,03 mmoles, 616 mg). Se agita la mezcla reaccionante durante 48 h. Se vierte sobre agua (50 ml) y se extra con acetato de etilo (3 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con agua (2 veces con 50 ml cada vez) y una solución de salmuera (100 ml) y se secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido filtrado, resultando un producto en bruto que se purifica por cromatografía a través de gel de sílice en una columna Biotage (40s), obteniéndose 390 mg (rendimiento del 77%) del éster 1-(acetoxi)etílico de la N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina en forma de sólido blanco amorfo. El EM-AR-EI m/e calculado para C_{25}H_{33}N_{3}O_{8} (M+Na) es de 526,2160, hallado: 526,2143.
Se trata a temperatura ambiente el éster
1-(acetoxi)etílico de la
N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
sólido (1,4 mmoles, 0,705 g) con ácido clorhídrico 4N en dioxano (20
mmoles, 5 ml) y se agita la solución durante 2 h hasta que se forma
un precipitado blanco. Se diluye la mezcla con éter de dietilo y
diclorometano y se recogen los sólidos por filtración, lavando con
éter de dietilo. Se seca, obteniéndose 0,63 g (rendimiento del 99%)
de la sal clorhidrato del éster 1-(acetoxi)etílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido gris amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{20}H_{26}N_{3}O_{6} (M+H) es de 404,1816, el hallado es
de 404,1818.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
1-(acetoxi)etílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,723 mmoles, 399 mg) y cloruro de
2,6-diclorobenzoílo (0,8 mmoles, 0,17 g) en
diclorometano (5 ml) se le añade a temperatura ambiente
diisopropiletilamina (3,2 mmoles, 0,45 ml). Pasados 5 min, todo se
ha disuelto y se agita la solución de color amarillo claro a
temperatura ambiente durante 48 h. Se diluye la solución de color
pardo claro resultante con diclorometano (50 ml). Se lava la capa de
diclorometano sucesivamente con ácido clorhídrico 1N (2 veces con 50
ml cada vez), una solución saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y
una solución de salmuera (50 ml) y se seca con sulfato magnésico
anhidro. Se filtra el material secante y se concentra el líquido
filtrado, resultando un producto en bruto que se purifica por
cromatografía a través de gel de sílice en una columna Biotage
(40s), obteniéndose 0,312 g (rendimiento del 67%) del éster
1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco, p.f. 168-170°C. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{27}H_{27}Cl_{2}N_{3}O_{7} (M+Na) es de 598,1118, el
hallado es de 598,1122.
El éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
se obtiene a partir del éster 1-(acetoxi)etílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
y de cloruro de
2-cloro-6-metilbenzoílo
siguiendo los métodos generales descritos en el ejemplo 33, en forma
de sólido blanco, p.f. 84-88°C. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{28}H_{30}ClN_{3}O_{7} (M+Na) es de 578,1664, el hallado
es de 578,1665.
A una suspensión de sal clorhidrato del éster
metílico de la
4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(7 mmoles, 2,57 g), HBTU (8,75 mmoles, 3,32 g) y
L-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-prolina
(8,75 mmoles, 1,88 g) en DMF (28 ml) se le añade a temperatura
ambiente diisopropiletilamina (21 mmoles, 3,65 ml). Pasados 2 min,
todo se ha disuelto y se agita la solución transparente de color
amarillo claro a temperatura ambiente durante 48 h. Se diluye la
solución de color pardo oscuro resultante con acetato de etilo (10
ml). Se lava la capa de acetato de etilo sucesivamente con ácido
clorhídrico 1N (2 veces con 50 ml cada vez), solución saturada de
bicarbonato sódico (100 ml) y solución de salmuera (100 ml) y se
seca con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y
se concentra el líquido filtrado por evaporación del disolvente,
resultando un producto en bruto que se purifica por cromatografía a
través de gel de sílice en una columna Biotage (40m), de este modo
se obtienen 2,5 g (rendimiento del 67%) del éster metílico de la
L-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-prolil-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado del
C_{27}H_{36}N_{4}O_{7} (M+Na) es de 551,2476, el hallado es
de 551,2476.
A una suspensión de éster metílico de la
L-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-prolil-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(1,51 mmoles, 800 mg) en etanol (8 ml) se le añade a temperatura
ambiente hidróxido sódico 1,0 N en agua (5 ml). Se calienta la
mezcla a 45-50°C y se agita la solución transparente
resultante durante 3 h. Se elimina el etanol a presión reducida y se
diluye el residuo con agua (25 ml). Se lava la solución acuosa con
éter de dietilo (50 ml) para eliminar cualquier impureza neutra. Se
acidifica la capa acuosa con HCl 1,0 N y se extrae el producto con
acetato de etilo (2 veces con 50 ml cada vez). Se reúnen los
extractos orgánicos, se lavan con solución de salmuera (50 ml) y se
secan con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y
se concentra el líquido filtrado, resultando 640 mg (rendimiento del
83%) de la
L-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-prolil-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina,
en forma de sólido blanco amorfo.
EM-AR-EI m/e calculado para el
C_{26}H_{34}N_{4}O_{7} (M+Na) 537,2320, hallado
537,2321.
Se trata a temperatura ambiente la
L-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-prolil-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
sólida (0,89 mmoles, 462 mg) con ácido clorhídrico 4N en dioxano (16
mmoles, 4 ml) y se agita la solución durante 3 h. Se elimina el
disolvente con vacío y se seca el residuo con alto vacío, resultando
un residuo en bruto que se tritura con diclorometano, éter de
dietilo y acetonitrilo, obteniéndose 395 mg (rendimiento del 99%)
del clorhidrato de la
L-prolil-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido amorfo de color amarillo claro. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{21}H_{26}N_{4}O_{5} (M+H) es de 415,1976, el hallado es
de 415,1976.
A una suspensión de
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,743 mmoles, 340 mg) y bicarbonato sódico (5,94 mmoles, 499 mg) en
DMF (3,8 ml) se añade a temperatura ambiente yodoetano (5,94 mmoles,
0,475 ml). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 48 h.
Se vierte la mezcla reaccionante sobre agua (100 ml) y se extrae con
acetato de etilo (3 veces con 25 ml cada vez). Se reúnen los
extractos, se lavan con una solución de salmuera (80 ml) y se secan
con sulfato magnésico anhidro. Se filtra el material secante y se
concentra el líquido filtrado, resultando un producto en bruto que
se purifica por cromatografía a través de gel de sílice en columna
Biotage (40s), obteniéndose 335 mg (rendimiento del 93%) del éster
etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco cristalino, p.f.
218-219°C. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{25}H_{25}F_{2}N_{3}O_{5} (M+Na) es de 508,1654, el
hallado es de 508,1660.
Se agita a temperatura ambiente durante una
noche una mezcla de
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(1,0 mmoles, 460 mg), clorhidrato de cloruro de
2-[(N,N-dietil)amino]etilo (8,05
mmoles, 1,43 g) y carbonato potásico (8,05 mmoles, 1,11 g) en
acetato de etilo (5 ml) y agua (5 ml). Se separan las capas y se
extrae la capa acuosa con acetato de etilo (2 veces con 40 ml cada
vez). Se reúnen los extractos, se lavan con salmuera (50 ml) y se
secan con sulfato sódico anhidro. Se filtra el material secante y se
concentra el líquido filtrado, obteniéndose un producto en bruto que
se purifica por cromatografía a través de gel de sílice en columna
Biotage (40m), resultando 426 mg (rendimiento del 76%) del éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{29}H_{34}F_{2}N_{4}O_{5} (M+H) es de 557,2570, el
hallado es de 557,2575.
A una suspensión de
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
(0,743 mmoles, 340 mg) y bicarbonato sódico (5,94 mmoles, 499 mg) en
DMF (3,0 ml) se le añade a temperatura ambiente acetato de
1-cloroetilo (5,94 mmoles, 0,73 g). Se agita la
mezcla a temperatura ambiente durante 48 h. Se vierte la mezcla
reaccionante sobre agua (50 ml) y se extrae con acetato de etilo (3
veces con 25 ml cada vez). Se reúnen los extractos, se lavan con
salmuera (80 ml) y se secan con sulfato sódico anhidro. Se filtra el
material secante y se concentra el líquido filtrado, obteniéndose un
producto en bruto que se purifica por cromatografía a través de gel
de sílice en columna Biotage (40m), resultando 265 mg (rendimiento
del 66%) del éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco amorfo. El
EM-AR-EI m/e calculado para
C_{27}H_{27}F_{2}N_{3}O_{7} (M+Na) es de 566,1709, el
hallado es de 566,1710.
Ejemplo
A
Se cuantifica la actividad antagonista de
VLA-4, definida como la capacidad de competir por la
unión con la VCAM-1 inmovilizada, empleando una
ELISA anticuerpo dual de fase sólida. El VLA-4
(integrina \alpha4\beta1) unido a la VCAM-1 se
detecta con un complejo de anticuerpo anti-integrina
\beta1: IgG anti-ratón conjugado HRP: sustrato
cromogénico (K-Blue). Inicialmente, esto supone
recubrir placas de 96 hoyos (Nunc Maxisorp) con
VCAM-1 recombinante humana (0,4 \mug en 100 \mul
de PBS), sellar cada placa y dejar las placas en reposo a 4°C
durante unas 18 h. Las placas recubiertas con VCAM se bloquean a
continuación con 250 \mul de BSA del 1%/NaN_{3} del 0,02% para
reducir las uniones no específicas. El mismo día del ensayo se lavan
todas las placas dos veces con tampón de ensayo VCAM (200
\mul/hoyo de Tris-HCl 50 mM, NaCl 100 mM,
MnCl_{2} 1mM, Tween 20 del 0,05%; pH 7,4). Se disuelven los
compuestos a ensayar en DMSO del 100% y después se diluyen con
tampón de ensayo VCAM completado con 1 mg/ml de BSA (es decir, DMSO
final = 5%). Se efectúa una serie de diluciones 1:4 para conseguir
un intervalo de concentraciones de 0,005 nM a 1,563 \muM para cada
compuesto de ensayo. Se añaden a las placas revestidas de VCAM 100
\mul de cada dilución a cada hoyo, seguidos de 10 \mul de
VLA-4 derivado de células de Ramos. Estas placas se
mezclan sucesivamente en un agitador de plataformas durante 1 min,
se incuban a 37°C durante 2 h y se lavan cuatro veces con 200
\mul/hoyo de tampón de ensayo VCAM. Se añade a cada hoyo 100
\mul de anticuerpo anti-humano de integrina
\beta1 (0,6 \mug/ml de tampón de ensayo VCAM + 1 mg/ml de BSA) y
se mantiene en incubación a 37°C durante 1 h. Una vez finalizado el
período de incubación se lavan todas las placas cuatro veces con
tampón de ensayo VCAM (200 \mul por hoyo). Entonces se añade a
cada hoyo un segundo anticuerpo, IgG conjugado HRP de cabra
anti-ratón (100 \mul por hoyo a razón de una
dilución 1:800 en tampón de ensayo VCAM + 1 mg/ml de BSA), a
continuación se incuba a temperatura ambiente durante 1 h y se
termina con tres lavados (200 \mul/hoyo) con tampón de ensayo
VCAM. Se inicia el revelado de color por adición de 100 \mul de
K-Blue por hoyo (15 min de incubación, temperatura
ambiente) y se termina con la adición de 100 \mul de tampón de
paro en rojo a cada hoyo. Todas las placas se leen en un
espectrómetro UV/Vis en una longitud de onda de 650 nm. Se calculan
los resultados como % de inhibición de la unión total (es decir,
VLA-4 + VCAM-1 en ausencia del
compuesto de ensayo). En la tabla I se recogen los resultados (A =
CI_{50} <1 nM; B = CI_{50} < 10 nM)
\vskip1.000000\baselineskip
Se purifica VCAM-1 recombinante
humana soluble (mezcla de segmentos 5- y 7-Ig) de
los medios de cultivo celular CHO por cromatografía de
inmunoafinidad y se mantiene en una solución que contiene
Tris-glicina 0,1 M (pH 7,5), NaCl 0,1 M, EDTA 5 mM,
PMSF 1 mM, NaN_{3} del 0,02% y 10 \mug/\mul de leupeptina. La
calceína-AM se adquiere de la empresa Molecular
Probes Inc.
Se cuantifica la actividad antagonista de
VLA-4 (integrina \alpha4\beta1), definida como
capacidad de competir con superficie celular VLA-4
por la unión con la VCAM-1 inmovilizada, mediante un
ensayo de adhesión celular de VCAM-1. Se marcan con
colorante fluorescente (Calceína-AM) las células de
Ramos que llevan superficie celular VLA-4 y se dejan
unir a la VCAM-1 en presencia o ausencia de los
compuestos de ensayo. Una reducción de la intensidad de
fluorescencia asociada a las células adherentes (% de inhibición)
refleja la inhibición competitiva de la adhesión celular de
VLA-4 debida al compuesto de ensayo.
Inicialmente esto supone revestir placas de 96
hoyos (Nunc Maxisorp) con VCAM-1 recombinante humana
(100 ng en 100 \mul de PBS), sellar cada placa y dejar las placas
en reposo a 4°C durante 18 h. Se lavan las placas revestidas con
VCAM sucesivamente dos veces con Tween 20 del 0,05% en PBS y después
se bloquean durante 1 h (a temperatura ambiente) con 200 \mul de
tampón de bloqueo (BSA del 1%/timerosal del 0,02%) para reducir las
uniones no específicas. Después de la incubación con el tampón de
bloqueo se invierten las placas, se secan y se aspira el tampón
remanente. Se lava cada placa con 300 \mul de PBS, se invierte y
se aspira el PBS residual.
Se disuelven los compuestos de ensayo en DMSO
del 100% y después se diluye 1:25 con tampón de ensayo de adhesión
de células VCAM (CaCl_{2} 4 mM, MgCl_{2} 4 mM en
Tris-HCl 50 mM, pH 7,5) (DMSO final = 4%). Se
realiza una serie de ocho diluciones 1:4 para cada uno de los
compuestos (intervalo general de concentración de 1 nM a 12.500 nM).
Se añade a las placas revestidas de VCAM 100 \mul de cada
dilución/hoyo y después 100 \mul de células de Ramos (200.000
células/hoyo en BSA/PBS del 1%). Se incuban a temperatura ambiente
durante 45 min las placas que contienen compuestos de ensayo y
células de Ramos, después se añaden 165 \mul de PBS/hoyo. Se
invierten las placas para eliminar las células no adheridas, se
secan y se añaden 300 ml de PBS/hoyo. Se invierten las placas otra
vez, se secan y se aspira suavemente el tampón residual. Se añaden a
cada hoyo 100 \mul de tampón de lisis (SDS del 0,1% en
Tris-HCl 50 mM, pH 8,5) y se agita durante 2 min en
una plataforma agitadora giratoria. A continuación se lee la
intensidad de la fluorescencia de las placas en un sistema de
medición de fluorescencia Cytofluor 2300 (Millipore),
(excitación
= 485 nm, emisión = 530 nm). Los resultados se recogen en la tabla II (A = CI_{50} <100 nM; B = CI_{50} < 10000 nM)
= 485 nm, emisión = 530 nm). Los resultados se recogen en la tabla II (A = CI_{50} <100 nM; B = CI_{50} < 10000 nM)
Dos semanas antes del día previo al ensayo se
revisten placas inmuno F96 Maxisorp de alta adherencia de la empresa
Nunc, artículos nº 442404 y 439454, con 25 ng/hoyo (0,25 \mug/ml)
de MadCAM en un volumen de 100 \mul/hoyo. Se cubren las placas con
sellante y se envuelven con sarán, después se incuban en frigorífico
durante 24 horas como mínimo. El tampón empleado para el
revestimiento se compone de: tampón carbonato/bicarbonato 10 mM
hecho con 0,8 g de carbonato sódico/litro y 1,55 g de bicarbonato
sódico/litro, que se ajusta a pH 9,6 por adición de HCl 1N. Los
tampones de ensayo tienen la composición siguiente:
tampón de lavado: Tween 20 al 0,05% en PBS
tampón de bloqueo: leche desnatada seca al 1% en
PBS
tampón de marcado: PBS
tampón celular: RPMI 1640 medio (sin
aditivos)
tampón de unión: CaCl_{2} 1,5 mM, MnCl_{2}
0,5 mM, Tris-HCl 50 mM; se añade NaOH por goteo
hasta pH 7,5; se enrasa con H_{2}O, se ajusta el pH a 7,5
tampón de dilución: DMSO al 4% en tampón de
unión.
Se lavan las placas 2 veces con tampón de lavado
y después se bloquean a temperatura ambiente durante 1 hora por lo
menos con tampón de bloqueo. Las placas selladas a veces se bloquean
durante una noche en el frigorífico. Después se lavan las placas con
PBS y se secan manualmente. Se aspira el líquido residual de los
hoyos.
Se toman células RPMI 8866 suficientes de la
cepa para el ensayo (2 x 10^{6} células/ml x 10 ml/hoyo x número
de placas) y se colocan en un tubo de centrífuga. Se llenan los
tubos con PBS y se centrifugan durante 8 minutos a una velocidad de
200 rpm. Se tira el tampón y se vuelven a suspender las células en
una concentración de 10 x 10^{6}/ml en PBS y se añade una solución
patrón de calceína en DMSO (5 mg/ml) en una cantidad de 5 \mul/ml
de suspensión celular. Se incuba la suspensión a 37°C y en la
oscuridad durante 30 minutos. Después se lavan las células con PBS.
Se tira el PBS y se vuelven a suspender las células en el tampón
celular en una concentración de 2 x 10^{6} células/ml para
depositarlas en las placas de ensayo.
Se prepara una solución patrón de los compuestos
de ensayo de 25 x primera dilución deseada en DMSO 100%. Las
primeras diluciones para el patrón y también para los compuestos de
ensayo es de 1:25 en el tampón de unión tal cual, mientras que las
demás series de diluciones se realizan en el tampón de dilución
(tampón de unión/DMSO del 4%). Las concentraciones del patrón y las
diluciones de los compuestos de exploración se determinan por
actividad anticipada.
Para el ensayo se colocan 129 \mul del tampón
de unión en la primera hilera de hoyos y 100 \mul de tampón de
dilución en los hoyos restantes de la placa. Se pipetean 5,4 \mul
de parte alícuota de cada compuesto a los hoyos etiquetados idóneos,
por triplicado. Después se diluyen los compuestos en la placa (34
\mul + 100 \mul \Rightarrow dilución cuádruple). Para los
controles se introduce en las placas 100 \mul de tampón de
dilución + 100 \mul de tampón celular en hoyos de fondo no
específico (sin células, sin compuestos) y 100 \mul de tampón de
dilución + 100 \mul de células se introducen en los hoyos de unión
sola (sin compuesto = unión 100%). A cada hoyo que contiene
compuesto se le añaden células marcadas en una cantidad de 2 x
10^{6} células/ml, 100 \mul/hoyo (= 2 x 10^{5} células/hoyo).
Se sellan las placas y se incuban a temperatura ambiente y en la
oscuridad durante 45 minutos. Después de la incubación se eliminan
las células no unidas por adición de 150 \mul de PBS/hoyo. Se
invierten las placas, se secan sobre toalla de papel y se lavan
añadiendo suavemente 200 \mul de PBS a los hoyos y secando otra
vez. Se aspira con cuidado el tampón residual de los hoyos.
Finalmente se añaden 100 \mul de PBS a cada hoyo.
Se lee la intensidad de fluorescencia de las
placas en un sistema de medida de fluorescencia Cytofluor 2300
(Millipore) (excitación = 485 nm, emisión = 530 nm). Se determinan
las IC_{50} de cada compuesto por análisis de regresión lineal.
Los resultados se recogen en la tabla III.
Claims (37)
1. Un compuesto de la fórmula I
en la que R_{1} es un grupo de la
fórmula
Y-1
en la
que
R_{22} y R_{23}, con independencia entre sí,
son hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alcoxi
C_{1-6}, cicloalquilo, arilo, arilalquilo
C_{1-6}, nitro, ciano, alquiltio
C_{1-6}, alquisulfinilo C_{1-6},
alquilsulfonilo C_{1-6}, alquilcarbonilo
C_{1-6},halógeno o perfluoralquilo
C_{1-6} y por lo menos uno de R_{22} y R_{23}
es diferente del hidrógeno, y R_{24} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, arilo,
nitro, ciano, alquilsulfonilo C_{1-6} o halógeno;
o bien
R_{1} es un grupo de la fórmula
Y-2, que es un anillo heteroaromático de cinco o
seis eslabones, unido a través del átomo de carbono al carbonilo de
la amida, dicho anillo contiene uno, dos o tres heteroátomos
elegidos entre N, O y S y uno o dos átomos de dicho anillo están
sustituidos con independencia entre sí por alquilo
C_{1-6}, cicloalquilo, halógeno, ciano,
perfluoralquilo o arilo y por lo menos uno de dichos átomos
sustituidos está adyacente al átomo de carbono unido al carbonilo de
la amida; o bien
R_{2} es hidrógeno o alquilo
C1-6, alquilo C1-6 sustituido,
arilalquilo o arilo;
R_{3} es hidrógeno o alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido, arilalquilo C_{1-6} o arilo;
R_{4} es hidrógeno, halógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido o arilo;
R_{5} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, cloro o alcoxi
C_{1-6};
R_{6} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilcarboniloxilo
C_{1-6} alquilo C_{1-6}, alquilo
C_{1-6} sustituido,
o bien R_{6} es un grupo de la fórmula
P-3
en la que R_{32} es hidrógeno o
alquilo C_{1-6}, R_{33} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, arilo, R_{34} es hidrógeno o alquilo
C1-6, "h" es un número entero de 0 a 2,
"g" es un número entero de 0 a 2, la suma de h y g se sitúa
entre 1 y 3; o bien R_{6} es un grupo de la fórmula
P-4
en la que R_{32}, g y h tienen
los significados recién definidos, Q' es O, S,
-(CH_{2})_{j}- o un grupo de la fórmula
N-R_{35}, R_{35} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilcarbonilo
C_{1-6}, alcanoílo C_{1-6},
alcoxicarbonilo C_{1-6}; "j" es el número 0,
1 ó 2; o sus sales farmacéuticamente
aceptables;
el término "alquilo C_{1-6},
sustituido" significa un grupo de alquilo
C_{1-6}, que está sustituido por uno o mas grupos
elegidos independientemente entre cicloalquilo, nitro, ariloxilo,
arilo, hidroxilo, halógeno, ciano, alcoxi C_{1-6},
alquilcarbonilo C_{1-6}, alquiltio
C_{1-6}, alquilsulfinilo
C_{1-6}, alquilsulfonilo
C_{1-6}, amino y mono o
di-alquilamino C_{1-6}; el término
"arilo" significa un grupo mono- o bicíclico aromático; el
término "cicloalquilo" significa un anillo carblocíclico de 3 a
7 miembros.
2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el
que
R_{2} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido, arilalquilo o arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido, arilalquilo C_{1-6} o arilo; y
R_{4} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, perfluoralquilo C_{1-6}
o arilo.
3. Un compuesto de la reivindicación 1, en el
que
R_{2} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido o arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido o arilo; y
R_{4} es hidrógeno, halógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sus-tituido o arilo.
4. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-3, en el que
R_{2} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido o arilo;
R_{3} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}
sustituido o arilo; y
R_{4} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, perfluoralquilo C_{1-6}
o arilo.
5. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, en el que R_{4} es
hidrógeno, alquilo C_{1-6} o perfluoralquilo
C_{1-6}.
6. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, en el que R_{1} es un grupo
de la fórmula Y-1, definido en la fórmula I y
R_{22} y R_{23} con independencia entre sí son alquilo
C_{1-6} o halógeno; y R_{24} es hidrógeno.
7. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, en el que R_{1} es un grupo
de la fórmula Y-1, definido en la fórmula I, y
R_{22} y R_{23}, con independencia entre sí, son hidrógeno o
halógeno; y R_{24} es alcoxi C_{1-6}.
8. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-4 de la fórmula I
en la
que
R_{1} tiene la definición dada en la
reivindicación 1,
R_{2} es alquilo
C_{1-6},
R_{3} es alquilo
C_{1-6},
R_{4} es hidrógeno, perfluoralquilo
C_{1-6} o alquilo C_{1-6},
R_{5} es hidrógeno o alquilo
C_{1-6},
R_{6} es hidrógeno, alquilo
C_{1-6}, con preferencia metilo,
carboniloxialquilo C_{1-6},-alquilo
C_{1-6},
o bien R_{6} es un grupo de la fórmula
P-3 definido en la reivindicación 1,
o o bien R_{6} es un grupo de la fórmula
P-4 definido en la reivindicación 1.
9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el
que R_{1} es un grupo de la formula Y-1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{22} y R_{23} con
independencia entre sí son perfluor-alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6} o
halógeno, y R_{24} es
hidrógeno.
10. Un compuesto según la reivindicación 9, en
el que R_{2} y R_{3} son alquilo C_{1-6};
R_{4} es hidrógeno o alquilo C_{1-6}; y R_{5}
y R_{6} son hidrógeno.
11. Un compuesto según la reivindicación 10,
elegido entre
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-bromo-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-etil-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2-(2-metiletil)-6-metilfenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2,6-di-(2-metiletil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-etilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-propilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[[2-cloro-6-(2-metiletil)fenil]carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dietil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-6-metil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
\newpage
12. Un compuesto según la reivindicación 10,
elegido entre
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-bromo-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
N-[(2-bromo-5-metoxifenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil]-L-fenilalanina.
13. Un compuesto según la reivindicación 9, en
el que R_{2} y R_{3} son alquilo C_{1-6},
R_{4} es hidrógeno o alquilo C_{1-6}; y R_{5}
es hidrógeno y R_{6} es hidrógeno, alquilcarboniloxi
C_{1-6}-alquilo
C_{1-6}, alquilo C_{1-6}, o bien
R_{6} es un grupo de la fórmula P-3
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{32} es hidrógeno o
alquilo C1-6, R_{33} es hidrógeno, alquilo
C1-6, arilo, R_{34} es hidrógeno o alquilo
C1-6, "h" es un número entero de 0 a 2,
"g" es un número entero de 0 a 2, la suma de h y g se sitúa
entre 1 y 3; o bien R_{6} es un grupo de la fórmula
P-4
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{32}, g y h tienen
los significados recién definidos, Q' es O, S,
-(CH_{2})_{j}- o un grupo de la fórmula
N-R_{35}, R_{35} es
hidrógeno.
14. Un compuesto de la reivindicación 13, en el
que R_{6} es alquilo C_{1-6}.
15. Un compuesto según la reivindicación 14 que
es
éster etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
éster etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
16. Un compuesto de la reivindicación 13, en el
que R_{6} es alquilcarboniloxi
C_{1-6}-alquilo
C_{1-6}.
17. Un compuesto de la reivindicación 16 que
es
éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster 1-(acetoxi)etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
18. Un compuesto de la reivindicación 13 en el
que R_{6} es un grupo de la fórmula P-3, en la que
R_{32} es hidrógeno, R_{33} y R_{34} son alquilo
C_{1-6}, "h" es el número 1 y "g" es el
número 0.
19. Un compuesto de la reivindicación 18 que
es
éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster
2-[(N,N-dietil)amino]etílico de la
N-[(2,6-difluorfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
20. Un compuesto de la reivindicación 13, en el
que R_{6} es un grupo de la fórmula P-4, en la que
R_{32} es hidrógeno, "h" es el número 1, "g" es el
número 0 y Q' es O.
21. Un compuesto de la reivindicación 20 que
es
éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
o
éster
2-(4-morfolino)etílico de la
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
22. Un compuesto de la reivindicación 9, en el
que R_{2} y R_{3} son alquilo C_{1-6}, R_{4}
es perfluoralquilo C_{1-6} y R_{5} y R_{6} son
hidrógeno.
23. Un compuesto de la reivindicación 22, que
es
N-[1-(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina;
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-[1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil]-L-fenilalanina;
o
N-[[2-fluor-6-(trifluormetil)fenil]carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-6-(trifluormetil)-5-pirimidinil)-L-fenilalanina.
24. Un compuesto de la reivindicación 9, en el
que R_{2} y R_{3} son alquilo C_{1-6}, R_{4}
es hidrógeno, R_{5} es alquilo C_{1-6} y R_{6}
es hidrógeno.
25. Un compuesto de la reivindicación 24 que
es
N-[(2-cloro-6-metilfenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina;
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3-dimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina;
o
N-[(2,6-diclorofenil)carbonil]-4-(1,3,6-trimetil-2,4-dioxo-5-pirimidinil)-3-metil-L-fenilalanina.
26. Un compuesto de la reivindicación 8, en el
que
R_{2} y R_{3} son alquilo
C1-6, R_{4} es hidrógeno, R_{5} y R_{6} son
hidrógeno.
27. Un compuesto de la reivindicación 26 en que
R_{1} es un grupo de la fórmula Y-1.
28. Un compuesto de la reivindicación 26 en el
que R_{1} es un grupo de la fórmula Y-1, en la que
R_{22} y R_{23} con independencia entre sí son alquilo
C_{1-6} o halógeno, y R_{24} es hidrógeno.
29. Un compuesto de la reivindicación 27 en el
que R_{1} es un grupo de la fórmula Y-1, en la que
R_{22} y R_{23} con independencia entre sí son hidrógeno o
halógeno, y R_{24} es alcoxi C_{1-6}.
30. Un compuesto de la reivindicación 26 en el
que R_{1} es un anillo heteroaromático de cinco o seis eslabones,
unido a través del átomo de carbono al carbonilo de la amida, dicho
anillo contiene uno, dos o tres heteroátomos elegidos entre N, O y S
y uno o dos átomos de dicho anillo están sustituidos con
independencia entre sí por alquilo C_{1-6},
cicloalquilo, halógeno, ciano, perfluoralquilo o arilo y por lo
menos uno de dichos átomos sustituidos está adyacente al átomo de
carbono unido al carbonilo de la amida.
\newpage
31. Un compuesto de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
en la que
R_{2}-R_{5} tienen los significados definidos en
la reivindicación 1 y P_{1} es un grupo ter.butiloxicarbonilo
(Boc) o carbobenciloxilo y P_{2} es alquilo
C_{1-6} o alquilo C_{1-6}
sustituido.
32. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-30 destinado a utilizarse como
medicamento.
33. Una composición farmacéutica que consta de
un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones
1-30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo
y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
34. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-30 destinado a utilizarse en el
tratamiento de estados patológicos debidos a la unión de la molécula
VCAM-1 o del antígeno VLA-4 o de
células de expresión del VLA-4, en el tratamiento de
artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedades inflamatorias
intestinales y asma.
35. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1-30 o de una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, en el tratamiento de estados
patológicos debidos a la unión de la molécula VCAM-1
o del antígeno VLA-4 o de células de expresión del
VLA-4, en el tratamiento de artritis reumatoide,
esclerosis múltiple, enfermedades inflamatorias intestinales y
asma.
36. Un procedimiento de fabricación de una
composición farmacéutica que consiste en incorporar un compuesto
según una cualquiera de las reivindicaciones 1-30 o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente
farmacéuticamente aceptable a una forma de administración
galénica.
37. El uso de un compuesto según una cualquiera
de las reivindicaciones 1-30 o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide, de la
esclerosis múltiple, de las enfermedades inflamatorias intestinales
y del asma.
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