ES2283031T3 - Compuestos sinteticos biepitopicos utilizables como patrones o modelosen las dosificaciones biologicas de la troponina i. - Google Patents

Compuestos sinteticos biepitopicos utilizables como patrones o modelosen las dosificaciones biologicas de la troponina i. Download PDF

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Charles Didier Calzolari
Odile Suzanne Helene Flecheux
Claude Granier
Catherine Christiane Marie Larue
Bernard Christian Pau
Francois Yves Rieunier
Sylvie Marie-France Trinquier
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Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A COMPUESTOS SINTETICOS BIEPITOPICOS UTILIZABLES COMO NORMAS EN LOS INMUNOENSAYOS, PARA LA DOSIFICACION DE LA TROPONINA I, SU PROCEDIMIENTO DE PREPARACION, COMPOSICIONES Y KITS QUE CONTIENEN TALES COMPUESTOS ASI COMO LOS PROCEDIMIENTOS DE INMUNODOSIFICACIONES QUE UTILIZAN LOS MISMOS.

Description

Compuestos sintéticos biepitópicos utilizables como patrones o modelos en las dosificaciones biológicas de la troponina I.
La presente invención se refiere a unos compuestos sintéticos biepitópicos utilizables como patrones o modelos en los ensayos inmunologicos para una dosificación de la troponina I, su procedimiento de preparación de las composiciones y de las bolsas, que contienen esta clase de compuestos, así como a unos procedimientos de dosificaciones inmunológicas, que utilizan este tipo de compuestos.
Se sabe que la troponina es un complejo proteico miofibrilar, formado por tres proteínas, lasa troponinas I, T y C. Este complejo proteico permite contribuir a la regulación de la contracción del músculo mediante el ion Ca^{2-} interactuando con la miosina y la actina. De manera más precisa, se sabe que, cuando un influjo nervioso llega al nivel de la placa motora de un músculo, se produce generación de un potencial de acción, que se transmite al retículo sarcoplásmico. En este caso el Ca^{2-} se libera dentro del citosol y se fija sobre la troponina C, lo que ocasiona un reforzamiento de la interacción entre la troponina I y la troponina C, y, por consiguiente, un cambio de conformación del complejo troponina I, T, C. En este caso se produce liberación de los sitios de interacción actina-miosina, lo que permite el movimiento de contracción del músculo.
Cuando se daña o deteriora el músculo, sea el músculo cardíaco en el momento de una necrosis miocárdica consecutiva a un infarto de miocardio o sea el músculo esquelético en el momento de esfuerzos físicos prolongados, las troponinas en tal caso liberadas aparecen más o menos rápidamente en la circulación sanguínea.
Así, se ha preconizado recientemente la dosificación de la troponina para el diagnóstico precoz del infarto de miocardio, sea la de la troponina T en Circulation (1991), 83, págs. 902-912, o de la troponina I en Am Heart J (1987), 110, págs. 133-1334, y Molecular Immunology (1992), 29(2), págs. 271-278. Del mismo modo, se ha propuesto la dosificación de la troponina T cardíaca para medir el éxito de la terapia trombolítica a continuación de un infarto del miocardio en Br. Heart J., (1994), 71, págs. 242-248, así como la dosificación de la troponina I esquelética para la medición del daño o lesión de los músculos esqueléticos (resumen nº 35 de I'American Association for Clinical Chemistry, 46th National Meeting, New Orleans, July 17-21, 1994). Hay que advertir que la dosificación de las diferentes troponinas cardíacas y esqueléticas es, hoy en día, un medio muy útil para el diagnóstico de patologías humanas y animales.
Es bien conocido que los ensayos inmunologicos practicados en los laboratorios de análisis biológicos necesitan el suministro por el fabricante, junto a los reactivos necesarios a la dosificación (es decir, unos anticuerpos marcados o no de los agentes de revelación y de las soluciones de dilución) de un patrón o modelo del compuesto a determinar, que utilizado en unas condiciones análogas a las de la muestra a estudiar servirá de referencia para el cálculo de los resultados y/o de testigo positivo.
Para obtener el patrón y/o el testigo del compuesto a determinar se puede utilizar dicho compuesto purificado bajo la forma liofilizada (acompañado de un disolvente, en el cual será disuelto el compuesto por el usuario antes del empleo) o listo al empleo.
Por el hecho de que los reactivos biológicos son inestables, las soluciones patrones o testigos preparadas a partir de liofilizado se congelan en dosis unitarias y se conservan a -80ºC. Se ha constatado, por otra parte, que estas soluciones no eran estables más de algunas horas a + 4ºC, aunque se añadían unos inhibidores de proteasa o unos agentes antibacterianos. Así pues, esto obliga a los usuarios a preparar extemporáneamente sus soluciones de contraste o calibración.
La solicitud de patente publicada bajo el número FR-A-2 701 954 divulga una composición estabilizada de troponina I o T para ensayo inmunológico, caracterizada por el hecho de que está constituida por una solución acuosa, que contiene la troponina I o la troponina T, en mezcla con la troponina C y especialmente dentro de unas proporciones de 1 a 10 equivalentes molares de troponina C por equivalente de troponia I o T, y de cloruro de calcio. Esta técnica permite la conservación durante varios días a + 4ºC de las soluciones patrones, más o menos diluidas, de
troponina I o T.
La solicitud de patente publicada bajo el número FR 2 734 267 describe unas soluciones patrones de la troponina compuestas de un complejo ternario formado por la troponina I, la troponina T y la troponina C.
Las materias primas utilizadas para obtener estos patrones son de origen humano o animal, y los patrones o testigos así obtenidos son estables durante alrededor de un mes a + 4ºC.
La solicitud WO 94/15217 describe ciertos péptidos sintéticos útiles como inmunógenos para la preparación de los anticuerpos, que reconocen el péptido N-terminal de la troponina I. Algunos de estos péptidos pueden ser utilizados como patrones en dosificaciones inmunológicas de la troponina I, que utilizan los anticuerpos, objetos de la invención protegida por la solicitud WO 94/15217.
Igualmente, la solicitud de patente WO 94/27156 se apoya sobre un procedimiento de dosificación de la troponina I cardíaca, que utiliza unos anticuerpos específicos de la troponina I cardiaca. Estos anticuerpos se pueden preparar a partir de fragmentos peptídicos, que tienen una secuencia ausente de la troponina I del músculo esquelético y, por consiguiente, específico de la troponina I cardíaca. Sin embargo, esta solicitud no divulga ni sugiere la posibilidad de utilizar ciertos fragmentos peptídicos como patrones o modelos en las dosificaciones inmunológicas de la troponina I.
Se sabe asimismo que la solicitud WO 96/27661 describe unas soluciones acuosas para establecer unas proteínas y unos péptidos. Estas soluciones hallan especialmente su aplicación en los tests diagnósticos de proteínas o péptidos.
Según WO 97/27661, estas soluciones acuosas permiten incluso aumentar la estabilidad de los fragmentos de la troponina I, que son conocidos por ser menos estables que la troponina I entera.
La solicitud EP-A-752 426, publicada el 8 de enero de 1997, también describe unos patrones o modelos de la troponina I compuestos de uno o de varios péptidos, fijado sobre una molécula portadora, tales como unas proteínas de alto peso molecular (> 100 KD) o unos polímeros.
La solicitud EP-A-650 053 describe unos patrones o modelos sintéticos, que contienen unos sitios activos para uno o varios receptores, unidos entre sí con una estructura arborescente. Esta solicitud describe más especialmente unos patrones sintéticos de la troponina T, que no son estables en solución más que durante 3 semanas.
Ahora se ha encontrado que es posible obtener unos patrones sintéticos utilizables para la evaluación de la troponina I, que son estables durante varios meses.
En efecto, la estructura particular de los compuestos de la invención les confiere una excelente estabilidad.
Los compuestos de la presente invención permite, pues, obtener unos patrones o modelos altamente estandardizados, estables en solución durante varios meses y evitar las etapas de purificaciones y los procedimientos complejos de extracción necesarios para la preparación de patrones o modelos de la troponina I a partir de los órganos animales.
Se han descrito unos compuestos que comprenden dos epítopos de la troponina I, unidos entre sí, mediante un grupo de unión ("linker") y responden a la fórmula general I
(I)\Xi-E_{1}-Z-E_{2}-\Psi
en la cual
- E_{1}, E_{2}, idénticos o diferentes representan una secuencia peptídica, que comprende sea un epítopo mínimo de la troponina I, sea un epítopo extendido.
- Z representa
\bullet una secuencia peptídica de 1 a 40 aminoácidos (aa), a condición, sin embargo, de que -E_{1} y Z-E_{2}- no forman en conjunto una parte de la secuencia de la troponina I,
\bullet una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada, o
\bullet una construcción mixta constituida por, al menos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos y, al menos, una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada,
- \Xi representa
\bullet
un átomo de hidrógeno, un agrupamiento acetilo, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos N-\alpha-acetilada, un agrupamiento cisteinilo, biotinilo o biocitinilo, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos, que llevan un resto cisteinilo, biotinilo o biocitinilo,
\bullet
una cadena aninoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada,
\bullet
una cadena, aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada N-\alpha-acetilada,
\bullet
una construcción mixta constituida por, al menos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos y, al menos, una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada, o
\bullet
una construcción mixta constituida por, al menos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos y, al menos, una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada, que lleva un resto biotinilo, biocitinilo o cisteinilo.
\newpage
- \Psi representa
\bullet
un radical hidroxilo, un radical amino, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos, que llevan un agrupamiento amino terminal,
\bullet
una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada,
\bullet
una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada, que lleva un radical hidroxilo o un radical amino,
\bullet una construcción mixta constituida por, al menos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos y, al menos, una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada,
\bullet una construcción mixta constituida por, al menos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos y, al menos, una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada,
\bullet una construcción mixta constituida por, al menos, una secuencia peptídica de 1 a 10 aminoácidos y, al menos, una cadena aminoalquil (C_{1}-C_{10}) carbonilo lineal o ramificada, que lleva un radical hidroxilo o un radical amino.
Se considera que -E_{1}-Z-E_{2}- no es una parte de la secuencia de la troponina I, cuando -E_{1}-Z-E_{2}- difiere de un fragmento dado de la secuencia de la troponina I mediante sustitución, deleción o inserción no conservativa de, al menos, un aminoácido, con preferencia de 2 aminoácidos, más particularmente de 5 aminoácidos.
Z puede representar especialmente
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet una cadena de fórmula II:
(II)-NH-(CH_{2})_{m}-CO-
en la cual m representa un número enteró de 1 a 10.
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet una construcción mixta de fórmulas III a V
-[pep_{1}-NH-(CH_{2})_{m}-CO]_{p}-
(III)
-[pep_{1}-NH-(CH_{2})_{m}-CO-pep_{2}]_{p}-
(IV)
-[NH-(CH_{2})_{m}-CO-pep_{2}]_{p}-
(V)
en las cuales
- m representa un número entero de 1 a 10,
- p representa un número entero de 1 a 5, y
- pep_{1} y pep_{2} idénticos o diferentes representan una cadena peptidica, que comporta de 2 a 10 aminoácidos,
\Xi puede representar especialmente
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet una cadena de formula IIa
(IIa)-NH-(CH_{2})_{q}-CO-
en la cual q representa un número entero de 1 a 10,
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet o una construcción mixta de fórmulas IIIa a Va
-[pep_{3}-NH-(CH_{2})_{q}-CO]_{r}-
(IIIa)
-[pep_{3}-NH-(CH_{2})_{q}-CO-pep_{4}]_{r}-
(IVa)
-[NH-(CH_{2})_{q}-CO-pep_{4}]_{r}-
(Va)
en las cuales
- q representa un número entero de 1 a 10,
- r representa un número entero de 1 a 5, y
- pep_{3} y pep_{4} idénticas o diferentes representan una cadena peptídica, que comporta de 2 a 10 aminoácidos,
- una cadena de formulas IIa a Va N-\alpha-acetilada o una cadena de fórmulas IIa a Va, que lleva un resto biotinilo, biocitinilo o cisteinilo;
y \Psi puede representar especialmente
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet una cadena de fórmula IIb:
(IIb)-NH-(CH_{2})_{s}-CO-
en la cual s representa un número entero de 1 a 10,
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet o una construcción mixta de fórmulas IIIb a Vb
-[pep_{5}-NH-(CH_{2})_{s}-CO]_{t}-
(IIIb)
-[pep_{5}-NH-(CH_{2})_{5}-CO-pep_{6}]_{t}-
(IVb)
-[NH-(CH_{2})_{5}-CO-pep_{6}]_{t}-
(Vb)
en las cuales
- s representa un número entero de 1 a 10,
- t representa un numero entero de 1 a 5, y
- pep_{5} y pep_{6} idénticas o diferentes representan una cadena peptídica, que comporta de 2 a 10 aminoácidos,
- una cadena de formulas IIb a Vb, que lleva un radical hidroxilo o un radical amino se describen igualmente unos compuestos en
los cuales \Xi representa o bien una cadena de formula IIa o bien una construcción mixta IIIa a Va, o bien una cadena de fórmulas IIa a Va N-\alpha-acetilada o una cadena de fórmulas IIa a Va, que lleva un resto biotinilo, biocitinilo o cisteinilo. Son descritos igualmente unos compuestos, en los cuales \Psi representa o bien una cadena de fórmula IIb, o bien una construcción mixta de fórmulas IIIb a Vb, o bien una cadena de fórmulas IIb a Vb que lleva un radical hidroxilo o un radical amino.
Z puede representar o bien una cadena de fórmula II o bien una construcción mixta de fórmulas III a V.
Las secuencias peptídicas, que comprenden un epitopo mínimo de la. troponina I, han sido determinadas con la ayuda de los anticuerpos monoclonales anti-troponina I. Tales anticuerpos se describen por Larue et al. (Molec. Immunology, (1992), vol. 20 no 29, pp.271-278), Bodor et al. (Clin. Chem. (1992), vol 38 nº 11 pp.2203-2214), Granier et al (protein Science, (1997), vol 6 suppl 1 p. 61) y en la solicitud WO 94/15217. La mayoría de estos anticuerpos son disponibles en el comercio (Hytest LTD-Turku, Finlandia).
Para determinar la secuencia peptídica, que comprende un epitopo mínimo de la troponina I se ha procedido a la síntesis simultánea de péptidos de lo aminoácidos, cuya secuencia cubre la secuencia del péptido precedente mediante aminoácidos, según el esquema siguiente:
- Péptido 1 = aminoácidos 1-10
- Péptido 2 = aminoácidos 4-13
- Péptido 3 = aminoácidos 7-16
- etc.
\newpage
En su conjunto, los péptidos sintetizados y testados describen la totalidad de la secuencia de la proteína (Vallins J. et al., FEBS Letters (1990), vol. 270 no 1-2, págs. 57-61).
A continuación se ha procedido a la identificación de los péptidos que reaccionan con cada uno de los anticuerpos monoclonales utilizados, mediante un test inmunoenzimático de unión de cada péptido con cada anticuerpo.
Por ejemplo, queda indicada más abajo, para ciertos anticuerpos monoclonales anti-troponina I, la secuencia peptídica, que comprende un epitopo mínimo inmunológicamente reactivo para cada anticuerpo y la posición de esta secuencia peptídica dentro de la secuencia de la troponina I, tal como se describe en FEBS Letters (1990), vol. 270 no 1-2, págs 57-61.
1 
\hskip0.5cm
* Las secuencias peptídicas se indican utilizando un código con una letra.
Las secuencias peptídicas, que derivan de dichas secuencias peptídicas mediante sustitución, deleción o inserción de un aminoácido, en la medida en que presentan una afinidad de unión al anticuerpo equivalente, también son descritas.
Se describen las secuencias lineales E_{1} y/o E_{2} nº 1 a 5 siguientes:
secuencia n^{o} 1: -Thr Glu Pro His-
sea
-TEPH- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 2: -His Ala Lys Lys-
sea
-HAKK- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 3: -Pro Ala Pro Ile Arg Arg Arg-
sea
-PAPIRRR- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 4: -Leu Leu Gly Ala Arg-
sea
-LLGAR- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 5: -Arg Lys Asn Ile-
sea
-RKNI-.
Las secuencias anteriores se dan a título de ejemplo no limitativo.
Cuando el linker Z comporta una secuencia peptídica, ésta puede formar con las secuencias E_{1} y/o E_{2} un epitopo extendido de la troponina I. Este epitopo extendido puede tener en especial para o por secuencia -TEPHAKK- o
-QALLGAR- o -PTLRRVRISA- o -GKFKRPTLRRVR- o -LGFAELQD- O nyrayateph- O -AYATEPH- o -LGFAELQ ., etc.
Estos epitopos extendidos, que amplifican la respuesta inmunológica para los anticuerpos se han determinado añadiendo unos aminoácidos a la secuencia peptídica, que comprende un epitopo mínimo determinado como queda descrito precedentemente.
Como ha sido mencionado más arriba, la secuencia peptídica del linker Z puede comportar de 1 a 40 aminoácidos. Se prefiere que el número de aminoácidos que forman la secuencia peptídica de Z sea inferior a 30 más particularmente inferior a 20.
Una secuencia peptídica de Z puede incluir una secuencia seleccionada entre las siguientes secuencias de aminoácidos:
- Gln Lys Met Gln- sea -QKMQ-.
- Gly Pro Asp Asn- sea -GPDN-,
- Ala Met Met- sea -AMM-,
- Ala Lys Lys- sea -AKK-.
- Lys Ser Lys- sea -KSK- y
- Pro Gly Asn Ser- sea -PGNS-.
Esta secuencia peptídica de Z particularmente preferida puede contener un encadenamiento o concatenación de aminoácidos repetido y tiene un número de aminoácidos inferior a 30.
A título de ejemplo se dan las secuencias peptídicas Z de fórmulas siguientes, en las cuales n representa un número entero de 1 a 5:
secuencia n^{o} 6: -Gln Lys Met Gln-
sea
-QKMQ- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 7: -Gln Gly Pro Asp Asn-
sea
-QGPDN- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 8: -Gly Pro Asp Asn-
sea
-GPDN- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 9: -Ala Met Met Lys Ser Lys (Gln Lys Met Gln)_{n}-
sea
-AMMKSK-(QKMQ)_{n}- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 10: -Ala Lys Lys Ala Met Met Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-
sea
-AKKAMMKSK-(QKMQ)_{n}- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 11: -Ala Met Met Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Gln Ala-
sea
-AMMKSK-(QKMQ)_{n}-QA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 12: -Ala Lys Lys Ala Met Met Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Gln Ala-
sea
-AKKAMM KSK-(QKMQ)_{n}-QA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 13: -Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Ala Met Met-
sea
-KSK-(QKMQ)_{n}-AMM- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 14: -Ala Lys Lys Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Ala Met Met-
sea
-AKKKS K-(QKMQ)_{n}-AMM- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 15: -Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Ala Met Met Gln Ala-
sea
-KSK-(QKMQ)_{n}-AMMQA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 16: -Ala Lys Lys Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Ala Met Met Gln Ala-
sea
-AKKKSK-(QKMQ)_{n}-AMMQA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 17: -Ala Met Met-
sea
-AMM- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 18: -Ala Lys Lys Ala Met Met-
sea
-AKKAMM- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 19: -Ala Met Met Gln Ala-
sea
-AMMQA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 20: -Ala Lys Lys Ala Met Met Gln Ala-
sea
-AKKAMMOA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 21: -Pro Gly Asn Ser-
sea
-PGNS-
Z también puedo representar una construcción mixta de fórmulas III a V, en las cuales m es un número entero de 1 a 10.
A título de ejemplo, Z así puede responder a las secuencian siguientes:
secuencia n^{o} 22: -Ala Lys Lys-NH-(CH_{2})_{m}-CO-
sea
-AKK-NH-(CH_{2})_{n}-CO- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 23: -NH-(CH_{2})_{m}-CO-Ala Met Met-
sea
-NH-(CH_{2})_{m}-CO-AMM- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 24: -Ala Lys Lys-NH-(CH_{2})_{m}-CO-Ala Met Met-
sea
-AKK-NH-(CH_{2})_{m}-CO-AMM- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 25: -NH-(CH_{2})_{m}-CO-Ala Met Met Gln Ala-
sea
-NH-(CH_{2})_{m}-CO-AMMQA- 
\vskip1.000000\baselineskip
secuencia n^{o} 26: -Ala Lys Lys-NH-(CH_{2})_{m}-CO-Ala Met Met Gln Ala-
sea
-AKK-NH-(CH_{2})_{m}-CO-AMMQA-
Cuando \Xi y/o \Psi comportan una secuencia peptídica, esta secuencia puede formar un epitopo extendido con E_{1} y/o E_{2}, a los cuales está unida.
De manera ventajosa, la estructura química de \Xi es tal que permite la fijación de los compuestos biepitópicos de la invención a una proteína portadora natural, a una construcción peptídica o a una fase sólida.
Los peptidos sintéticos biepitopicos de formula Ia y Ib forman parte de los péptidos de la formula I
(Ia)\Xi-Thr Glu Pro His-Z-Leu Leu Gly Ala Arg-\Psi
(Ib)\Xi-Pro Ala Pro Ile Arg Arg Arg-Z-Thr Glu Pro His-\Psi
En las fórmulas Ia y Ib:
- Z incluye o representa una secuencia escogida entre las secuencias siguientes:
secuencia nº 6: -Gln Lys Met Gln-
secuencia nº 7: -Gln Gly Pro Asp Asn-
secuencia nº 8: -Gly Pro Asp Asn-
secuencia nº 20: -Ala Lys Lys Ala Met Met Gln Ala-
secuencia nº 26: -Ala Lys Lys-NH-(CH_{2})_{m}-CO-Ala Met Met Gln Ala
secuencia nº 12: -Ala Lys Lys Ala Met Met Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Gln Ala-
secuencia nº 16: -Ala Lys Lys Lys Ser Lys-(Gln Lys Met Gln)_{n}-Ala Met Met Gln Ala-
y secuencia nº 21: -Pro Gly Asn Ser-,
en las cuales n representa un número entero de 1 a 5 y m, un número entero de 1 a 10
- \Xi representa un radical acetil, un radical cisteinilo, un radical biotinilo o biocitinilo eventualmente unido al resto de una secuencia peptídica, que comprende una secuencia seleccionada entre las secuencias siguientes:
- Gly Asn Tyr Arg Ala Tyr Ala-
- Gly Gly Asn Tyr Arg Ala Tyr Ala-
- Asn Tyr Arg Ala Tyr Ala-, y
- Arg Pro Ala- y
\vskip1.000000\baselineskip
- \Psi representa un radical amino o una secuencia peptídica que comprende una de las secuencias siguientes:
- Ala Lys Glu
- Ala Lys Lys Lys Ser Lys
Se describe todo péptido que incluye una de las secuencias 27 a 33, que son las siguientes:
Secuencia Nº 27
2 
\vskip1.000000\baselineskip
Secuencia Nº 28
3 
\vskip1.000000\baselineskip
Secuencia Nº 29
4 
\vskip1.000000\baselineskip
Secuencia Nº 30
5 
\vskip1.000000\baselineskip
Secuencia Nº 31
6 
\vskip1.000000\baselineskip
Secuencia Nº 32
7 
\vskip1.000000\baselineskip
Secuencia Nº 33
8 
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación se describen asimismo los péptidos sintéticos biepitópicos de fórmula Ia e Ib. En el caso de las dos siguientes tablas, las secuencias peptídicas se dan utilizando el código con una letra.
(Ia)\Xi-TEPH-Z-LLGAR-\Psi
\vskip1.000000\baselineskip
9 
\newpage
(Ib)\Xi-PAPIRRR-Z-TEPH-\Psi
\vskip1.000000\baselineskip
10
En las fórmulas Ia e Ib, las secuencias de aminoácidos, subrayadas, que corresponden a E_{1} y E_{2}, representan un epitopo mínimo de la troponina I. Las secuencias de aminoácidos subrayadas de Z forman con E_{1} o E_{2}, a los cuales se unen, un epitopo extendido de la troponina I.
Entre los compuestos indicados más arriba se describen más particularmente los compuestos 5, 6, 10, 11, 12, 13, 14 y 15. Estos péptidos tienen las secuencias siguientes:
Peptido 5
11
Compuesto 6
12
Compuesto 10
13
Peptido 11
14
Péptido 12
15
Péptido 13
16
Péptido 14
17
Péptido 15
18 
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se refiere a los compuestos biopitópicos:
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 6
19
Compuesto 10
20
Los compuestos sintéticos biopitópicos se obtienen por síntesis en fase sólida según unos métodos clásicos R.B. Merrifield, J. AMER. Chem. Soc. (1963), 85, pp. 2149-2154, R.C. Sheppard. In "Solid phase peptide synthesis, a practical approach", IRL PRESS. (1989), Oxford University Press. Pp.25-34. Comme synthétiseur automatique peut éter utilisé le synthétiseur" 9050 Plus pep. Synthesizer" de Millipore o un sintetizador equivalente.
El soporte utilizado para las síntesis debe ser compatible con la técnica y la química utilizada. Por ejemplo, para una síntesis sobre el sintetizador "9050 Plus pep. Synthesizer" se recomienda utilizar una resina adaptada a la técnica llamada "en flujo continuo"; las resinas PEG PS responden a estos criterios. Estos soportes constan de un brazo ("spacer") a base de polietilenenglicol (PEG) situado entre el agrupamiento funcional del poliestireno de las bolsas y el punto de enganche del primer aminoácido. La naturaleza de este punto de anclaje puede variar según la función C-terminal escogida. Por ejemplo, para un péptido bajo la forma de amida, se podrá tomar una resina de tipo PAL PEG PS.
La resina de partida y los aminoácidos utilizados como materia prima son unos productos disponibles en el comercio (PerSeptive-Biosystem).
Se han utilizado los agrupamientos protectores de cadenas laterales siguientes:
21
La protección temporal de la función amino primaria en a de los aminoácidos se ha efectuado con la ayuda del agrupamiento 9-fluorenilmetilpoxycarbonilo (Fmoc). La desprotección se efectúa mediante mediante una solución de piperidina al 20% dentro de la dimetilformamida.
Para el acoplamiento se utiliza, can preferencia, un exceso de dispropilcarbodiimida (DIPCDI) y de hidroxi-1-benzotriazol (HOBt).
Después de la síntesis, se lava la resina con unos disolventes orgánicos (dimetilformamida seguido de diclorometano) secada al vacío y tratada a continuación mediante una solución a base de ácido trifluaroacético enfriado enfriado a 0ºC y que contiene unos "scavangers" apropiados. Se podrá utilizar, por ejemplo, el reactivo K, que contiene un 82% de ácido trifluoroacético, un 5% de fenol, un 5ª de agua, un 5% de tioanisol y un 3% de etaneditiol.
A continuación los péptidos sintéticos biepitópicos así aislados se precipitan y se aclara con el éter.
A continuación los compuestos sinéticos biepitópicos se purifican, mediante cromotografía líquida en fase inversa, y su pureza se determina, mediante espectrometría de masa. Como fase se puede utilizar, por ejemplo, la fase Bondapak C-18. Se diluyen los péptidos realizando un gradiente lineal y dos soluciones realizando un gradiente lineal y dos soluciones tampones, el primero esencialmente acuoso (por ejemplo, agua al 0,1%) y el segundo más bien orgánico (por ejemplo, una mezcla que contiene el acetonitrilo 60%, agua 40% y TFA 0,08%). Las fracciones puras colectadas se reúnen, concentradas al vacío y liofilizadas.
La determinación del carácter biepitópico de los compuestos de fórmula I se ha efectuado utilizando una bolsa o estuche de dosificación de la troponina. Por ejemplo, se puede utilizar una bolsa o estuche, que permita poner en acción una dosificación inmunológica del tipo sándwich y que contenga unos anticuerpos monoclonales, los cuales reaccionan con las secuencias peptídicas E_{1} y E_{2}.
Para determinar el carácter biepitópico, los compuestos de fórmula I se diluyen dentro del diluyente de la bolsa o estuche, que puede ser, por ejemplo, suero humano o una solución tampón, y se dosifican como una muestra de paciente.
La utilización del compuesto 6 y del compuesto 10, como patrón o modelo para la dosificación inmunológica de la troponina I forma igualmente parte de la invención.
La presente invención se refiere igualmente a unas composiciones, que contienen el compuesto 6 o el compuesto 10. Se trata preferentemente de soluciones acuosas o de composiciones que comprenden el compuesto 6 o el compuesto 10, dentro de una solución tampón. Como solución tampón, se puede utilizar, por ejemplo, una solución tampón fosfato (KH_{2}PO_{4}/K_{2}HPO_{4} pH = 6,5-7,5), que contiene Kathon y BSA o Kathon, Regilait y EDTA, o Kathon, Plasmion y eventualmente EDTA, o Kathon, caseína y EDTA.
También se puedan utilizar unas soluciones tampón succinato (pH = 5-6) o Tris HCl (pH =7,5-8,5) que contiene Kathon, Plasmion y eventualmente EDTA o Kathon, caseína y EDTA.
Igualmente pueden ser utilizadas unas soluciones tampones, que contienen glicina, Kathon, Régilait y EDTA.
Se prefieren las soluciones tampón succinato o fosfato, que contienen Kathon, régilait y EDTA.
El Kathon®, agente antibacteriano comercializado por la Societé Rhom et Hass, está constituido por 5-cloro2-metil 4-isotiazolina-3-ona y por 2-metil-isotiazolina-3-ona (1,5%).
El Régilait® se comercializa por la Societé Régilait.
El Plasmion® se comercializa por los Laboratorios Bellon y esta integrado por gelatina fluida modificada (30 g/l), NaCl (5,382 g/l), MgCl (143 mg/l), KCl (3 mg/l), lactato de sodio (3,360 g/l), en el agua.
Las soluciones tampones siguientes son particularmente preferidas:
-
solución tampón succinato 0,1 M (pH = 6), que contiene Kathon (0,2%) Régilait (0,05 2%) y de EDTA 2 mM,
-
solución tampón succinato 0,1 M (pH = 6), que contiene Kathon (0,2%), la caseína (0,01-0,5%) y EDTA 2 mM,
-
solución tampón fosfato KH2PO4/K2HPO40,1 M (pH = 7,5) que contiene Kathon (0,2%) Régilait (0,05-0,5%) y EDTA 2 mM,
-
solución tampón fosfato KH2PO4/K2PO4 0,1 M (pH=7,5) contiene Kathon (0,2%), la caseína (0,01-0,1%) y EDTA 2 mM,
También forman parte de la presente invención unas composiciones, que contienen plasma o un compuesto 6 o un compuesto 10.
Igualmente forman parte de la invención unos procedimientos de dosificaciones inmunológicas, que utilizan como patrones o testigos, el compuesto 6 o el compuesto 10.
La invención también alude a unas bolsas o estuches para la utilización o puesta en acción de dosificaciones inmunológicas, que incluyen un compuesto 6 o un compuesto 10 o una composición, que contiene uno de estos compuestos.
Ejemplo 1 Preparación de un compuesto según la invención (péptido 10)
100
Este péptido ha sido sintetizado en fase sólida. La técnica puesta a punto en 1963 por Merrifield (J. Am. Chem. Soc. (1963) 85, pags. 2149-2154) consiste en fijar el primer aminoácido sobre un soporte sólido polimérico (resina) mediante su función ácido y en alargar la secuencia peptídica a partir de este primer aminoácido, manteniéndose anclado en la resina el péptido en curso de síntesis.
Para la síntesis del compuesto 10, se han utilizado como sintetizador, el sintetizador "9050 Plus Pep Synthetiser" y como resina, la resina PEG PS descritas anteriormente.
En la tabla I se resumen las diferentes etapas de la síntesis.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA I
22
Después del final de la síntesis, la resina se ha lavado con dimetilformamida, seguido de diclorometano y secada al vacío.
A continuación, la resina ha sido tratada con el reactivo K (ácido trifluoroacético 82%; fenol 5%; agua 5%; tioanisol 5%; etanoditiol 3%). A continuación, el compuesto 10 así aislado mediante precipitación, ha sido aclarado en el dietil óxido. De este modo se ha obtenido el 0,529 g del compuesto 10.
De manera equivalente y utilizando los aminoácidos apropiados, se han sintetizado otros compuestos.
A continuación se dan los pesos moleculares, evaluados mediante espectrometría de masa de algunos compuestos de fórmula Ia y Ib
Compuesto Peso molecular
(dalton)
1 1549,8
2 1545,5
5 3018
6 3132,5
7 4448
8 3934,5
9 3820,5
10 3820,5
11 3934,5
12 4448
13 4391
15 2721
Ejemplo 2 Evaluación de inmunoreactividad de los péptidos
La determinación del carácter biepitópico de los compuestos mencionados más arriba se ha realizado utilizando una bolsa o estuche de dosificación de la troponina I. Se trata de la bolsa o estuche ERIA Troponine Pasteur Code 79691.
Su principio se basa en un método inmunoenzimático de tipo sándwich, que permite una dosificación cuantitativa de la troponina 1 cardíaca en el suero humano.
La fase sólida está constituida por tubos de poliestireno revestidos de un anticuerpo monoclonal antitroponina I cardíaca (8E1).
La revelación se realiza con la ayuda de un segundo anticuerpo monoclonal anti-troponina I cardíaca (11E12) acoplado a la peroxidasa.
La puesta en acción o utilización del test comprende las etapas siguientes:
Las muestras y los patrones o modelos (patrones de troponina 1 de origen animal) así como el anticuerpo monoclonal acoplado a la peroxidasa se incuban en presencia del anticuerpo monoclonal anti-troponina I cardíaca inmovilizada en la fase sólida.
Después de una serie de lavados, se procede a la revelación enzimática mediante adición del cromógeno tetrametilbenzidina.
Después de la parada de la revelación, se hace la lectura de la densidad óptica con \lambda = 450 nm. La absorbancia obtenida, está directamente correlacionada con la concentración de troponina I cardíaca presente dentro de un tubo.
Los compuestos 1, 2, 5, 6, 10, 11 y 12 han sido puestos en solución en el agua (C = 1 mg/ml o 2 mg/ml según el caso). Estas soluciones se han rediluido utilizando un tampón succinato 0,1 M pH = 6, que contiene Régilait 0,05% y Kathon 0,2% y EDTA 2 mM. A continuación las "soluciones finales" han sido dosificadas como "patrones" según el protocolo descrito más arriba.
Además los compuestos 1, 2, 10 y 11 han sido testados después de su dilución en el suero humano. En este caso, las "soluciones finales" se han obtenido diluyendo en el suero humano normal, unas soluciones acuosas "madres", que contienen los compuestos 1, 2, 10 y 11 a una concentración de 2 mg/ml.
Todos los compuestos son reactivos en la dosificación de la troponina I.
Ejemplo 3 Test de estabilidad
Un compuesto según la invención (compuesto 10) ha sido diluido en el agua (C=2 mg/mi). A partir de esta solución "madre" se obtienen cuatro soluciones "hijas" S_{1}, S_{2}, S_{3} y S_{4}.
Para efectuar las diferentes diluciones, se ha utilizado para las soluciones S_{1} (C = 0,5 mg/mi) y S_{2} (C = 1 ng/ml), una solución tampón succinato de sodio 0,1 M (pHl = 6), que contiene Kathon (0,2%), Régilait (0,05%) y EDTA 2 mM.
Las soluciones S_{3} (C = 0,5 ng/ml) y S_{4} (C = 1 ng/ml) se han obtenido diluyendo la solución "madre" con el tampón fosfato (KH_{2}PO_{4}/K_{2}HPO_{4} pl-I = 7,5), que contiene el Kathon (0,2%), el Régilait (0,05%) y el EDTA 2 mM.
Se ha efectuado en JO (día de la preparación de las soluciones) una dosificación de soluciones S_{1}, S_{2}, S_{3} y S_{4} según el protocolo descrito en el caso del ejemplo 2.
Los valores obtenidos han servido de referencia para el seguimiento de las estabilidades.
A continuación, las soluciones S_{1}, S_{2}, S_{3} y S_{4} han sido conservadas a + 4ºC y dosificadas periódicamente. En el momento de cada serie de dosificaciones, se han utilizado tres "soluciones controles". Se trata de sueros de control de la troponina I liofilizados, repartidos dentro de la gama de medida de la dosificación. Para estos sueros, se ha demostrado previamente que la conservación de un suero de control liofilizado es superior a 18 meses. En el momento de cada test o prueba de estabilidad, se ha comprobado que cada uno de los controles testados era obtenido en su concentración blanco. Así pues, esto ha permitido comparar las concentraciones obtenidas para los peptidos en el momento de los diferentes test. En particular, resulta, posible comparar la concentración de la solución del compuesto según la invención en JO (día en el cual se ha efectuado la solución) con la concentración del compuesto según la invención en el momento de los ensayos de la estabilidad en el curso del tiempo. El hecho de encontrar, para los controles, un valor constante en el curso de los ensayos de estabilidad permite validar las pruebas efectuadas.
Los resultados obtenidos en el momento de los ensayos de estabilidad se indican en las Tablas II y III
TABLA II
23 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA III
24
Los resultados indicados en las tablas I y II demuestran la excelente estabilidad de las soluciones del compuesto 10 según la invención.
Unos ensayos efectuados con el compuesto 6 han demostrado que su estabilidad es comparable a la del compuesto 10. Por ejemplo, estos ensayos efectuados con el compuesto 6 han confirmado que este compuesto tenía una excelente estabilidad durante al menos, 9 meses, cuando se conserva a + 4ºC en solución dentro de una solución tampón succinato de sodio 0,1M (pH=6) que contiene el Kathon (0,2%), el Régilait (0,2%) y el EDTA 2mM. El compuesto 6 ha sido disuelto en el tampón indicado más arriba para conseguir unas concentraciones de 0,25, 4,8 y 18 ng/ml. Los resultados de este ensayo se dan en la tabla IV.
Este estudio de estabilidad ha sido validado con la ayuda del compuesto 6 conservado a -20ºC y utilizado como referencia.
Previamente se ha verificado que el compuesto 6 es estable cuando se conserva a -20ºC durante, al menos, 18 meses.
TABLA IV
25
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
DEPOSITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Pasteur Sanofi Diagnostics
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: 3 boulevard Rayrnond Poincaré
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Marnes la Coquette
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: FRANCIA
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: 92430
\vskip0.500000\baselineskip
(G)
TELÉFONO: 0153774000
\vskip0.500000\baselineskip
(H)
TELECOPIA: 0153774133
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: compuestos sintéticos biepitópicos utilizables como patrones o modelos en las dosificaciones biológicas de la troponina I
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NUMERO DE SECUENCIAS: 29
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
FORMA LEGIBLE MEDIANTE ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE SOPORTE: Floppy disk
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: IBK PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA DE EXPLOTACIÓN: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
LOGICIAL: PatentIn Reléase # 1.0,Versión 1,25 (OEB)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Glu Pro His}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{His Ala Lys Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\newpage
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Pro Ala Pro Ile Arg Arg Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu Gly Ala Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Lys Asn Ile}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Lys Met Gln}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Gly Pro Asp Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Pro Asp Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 7 a 10: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Met Met Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(x)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 10 a 13: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Ala Met Met Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 7 a 10: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Met Met Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln Gln Ala}
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 10 a 13: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Ala Met Met Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 4 a 7: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln Ala Met Met}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 7 a 10: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln Ala Met Met}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 4 a 7: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln Ala Met Met Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "aminoácidos 7 a 10: (Gln Lys Met Gln) n con n entero de {}\hskip7.2cm 1 a 5" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Lys Ser Lys Gln Lys Met Gln Ala Met Met Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Ala Met Met}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Met Met Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xii)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Ala Met Met Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Pro Gly Asn Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "entre el aminoácido 3 y el aminoácido 4, agrupamiento {}\hskip7.2cm -NH-(CH_{2})_{m}-CO con m entero de 1 a 10" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Ala Met Met}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "lado N-terminal del aminoácido 1, agrupamiento -NH- {}\hskip7.2cm (CH_{2})_{m}-CO con m entero de 1 a 10" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Met Met Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "entre el aminoácido 3 y el aminoácido 4, agrupamiento {}\hskip7.2cm -NH-(CH_{2})_{m}-CO con m entero de 1 a 10" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Lys Lys Ala Met Met Gln Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 27 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA ADICIONAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRAS INFORMACIONES:/label = repetición
\hskip7cm
/nota = "eventualmente entre el aminoácido 14 y el aminoácido 15, {}\hskip7.2cm agrupamiento -NH-(CH_{2})_{m}-CO con m entero de 1 a 10" 
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
26 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 33 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
27 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
28 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 39 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
29 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 38 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 28:
\vskip1.000000\baselineskip
30 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 24 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 29:
\vskip1.000000\baselineskip
31

Claims (8)

1. Compuesto biepitópico seleccionado entre los compuestos siguientes:
compuesto 6
32
y
compuesto 10
33
2. Utilización de un compuesto biepitópico según la reivindicación 1 como patrón o modelo en el caso de una dosificación inmunológica de la troponina I.
3. Composición, que contiene un compuesto según la reivindicación 1, en solución en el agua, en el plasma o en una solución tampón.
4. Composición según la reivindicación 3, caracterizada por el hecho de que la solución tampón está seleccionada entre las soluciones tampón fosfato, succinato o Tris HCl.
5. Composición según las reivindicaciones 3 y 4, caracterizada por el hecho de que la solución tampón es una de las soluciones siguientes:
- solución tampón succinato (pH =5-6), que contiene el Kathon®, el Régilait® y el EDTA,
- solución tampón succinato (pH =5-6), que contiene el Kathon®, la caseína y el EDTA,
- solución tampón fosfato (KH_{2}PO_{4}/K_{2}HPO_{4} pH = 6,5-7,5), que contiene el Kathon®, el Régilait® y el EDTA,
- solución tampón fosfato (KH_{2}PO_{4}/K_{2}HPO_{4} 0,1 M pH = 6,5-7,5), que contiene el Kathon®, la caseína y el EDTA.
6. Procedimiento de inmunodosificación, que utiliza como patrón o testigo un compuesto biepitópico según la reivindicación 1.
7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado por el hecho de que la inmunodosificación es de tipo sándwich.
8. Estuche o bolsa para la puesta en acción de inmunodosificación, que incluye u péptido biepitópico, según la reivindicación 1, o una composición, que contiene un compuesto biepitópico según una cualquier e las reivindicaciones 3 a 5.
ES97950227T 1996-12-05 1997-12-04 Compuestos sinteticos biepitopicos utilizables como patrones o modelosen las dosificaciones biologicas de la troponina i. Expired - Lifetime ES2283031T3 (es)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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FR2797689B1 (fr) * 1999-08-16 2003-06-27 Pasteur Sanofi Diagnostics Utilisation de composes synthetiques pour des immunodosages
ES2375573T3 (es) * 2005-08-30 2012-03-02 Novo Nordisk A/S Expresión de prote�?nas en e. coli.
US20110306148A1 (en) 2010-06-14 2011-12-15 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Composition for use as an assay reagent
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WO2013099043A1 (ja) * 2011-12-26 2013-07-04 パナソニック株式会社 ヒト心筋由来トロポニンｉに特異的にかつ速やかに結合できる組み換えタンパク質
JP6385245B2 (ja) * 2014-11-04 2018-09-05 Ｎｉｓｓｈａ株式会社 検出装置及び検出方法
KR20170095364A (ko) * 2014-12-18 2017-08-22 비오메리으 합성 이중-에피토프 화합물

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4243648A1 (de) * 1992-12-23 1994-07-07 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Bestimmung von Herzmuskelnekrosen mittels Antikörper gegen das N-terminale Troponin I-Peptid
AU689777B2 (en) * 1993-05-17 1998-04-09 Fortron Bioscience, Inc. Assay for cardiac troponin I
DE4420742A1 (de) * 1993-10-20 1995-04-27 Boehringer Mannheim Gmbh Synthetischer Standard für Immunoassays
US6165981A (en) * 1995-03-07 2000-12-26 Dade Behring Inc. Stabilizing solutions for proteins and peptides
DE19524572A1 (de) * 1995-07-06 1997-01-09 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung eines synthetischen Kalibrators für den Einsatz in Immunoassays, bestehend aus den Analyten oder Teilsequenzen davon, die an inerten Trägermoleküle konjugiert sind
AU2667197A (en) * 1996-04-16 1997-11-07 University Of Miami Stabilized preparations of human troponins and modifications thereof, diagnostic assay methods and assay kits
AU4981897A (en) * 1996-10-15 1998-05-11 Navix, Inc. Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins
US6077676A (en) * 1997-12-18 2000-06-20 Spectral Diagnostics, Inc. Single-chain polypeptides comprising troponin I and troponin C

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