ES2286460T3 - Proteinas del lupin modificadas para la preparacion de formas de productos que se dispersan en agua de compuestos solubles en la grasa. - Google Patents
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Abstract
Proceso para la fabricación de una proteína del lupin modificada, el cual comprende ajustar una solución o suspensión acuosa de las proteínas del lupin de origen natural teniendo un contenido de masa seca de desde 0, 1 a 20% a pH 3 a 9, adicionar 0, 01 a 10% en peso de una proteasa, con relación al peso seco de la proteína del lupin, incubar la solución o suspensión de proteína a una temperatura de desde 5 a 70ºC hasta que un grado de hidrólisis de desde 1 a 30% es obtenido, e inactivar la proteasa.
Description
Proteínas del lupin modificadas para la
preparación de formas de productos que se dispersan en agua de
compuestos solubles en la grasa.
La presente invención se relaciona con nuevas
proteínas del lupin, un proceso para la fabricación de las mismas y
composiciones que contienen compuestos colorantes y/o ingredientes
activos solubles en la grasa finamente divididos en una matriz
basada en las nuevas proteínas del lupin y con un proceso para
preparar estas composiciones. La presente invención se relaciona
además con el uso de las nuevas composiciones de esta invención para
la coloración y para el enriquecimiento o fortificación de
alimentos, bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos.
Más particularmente, la presente invención se relaciona con nuevas
composiciones que comprenden una proteína del lupin enzimáticamente
y/o físicamente tratada y un compuesto colorante o ingrediente
activo soluble en la grasa, con un proceso para preparar estas
composiciones y el uso de estas composiciones como aditivos para la
coloración y/o enriquecimiento o fortificación para alimentos,
bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos; y para
alimentos, bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos
que contienen tales composiciones. WO 99/51106 se relaciona con una
proteína del lupin modificada que tiene propiedades
emulsionantes.
En un aspecto, la presente invención se
relaciona con un proceso para la fabricación una proteína del lupin
modificada, el cual comprende hidrolizar enzimáticamente una
proteína del lupin de origen natural. Más particularmente, la
invención se relaciona con un proceso el cual comprende ajustar una
solución o suspensión acuosa de proteínas del lupin de origen
natural teniendo un contenido de masa seca de desde 0,1 a 20% a pH 3
a 9, adicionar 0,01 a 10% en peso, con relación al peso de la
proteína del lupin seca, de una proteasa, incubar la solución o
suspensión de la proteína a una temperatura de desde 5 a 70ºC hasta
la obtención de un grado de hidrólisis de desde 1 bis 30%,
inactivar la proteasa, y convertir el hidrolizado en una forma
sólida. Si se requiere dicho hidrolizado de proteína puede ser
físicamente fraccionado por métodos comunes tales como la
centrifugación y/o ultra filtración.
El termino "ingrediente activo soluble en la
grasa" como es usado aquí comprende vitaminas solubles en la
grasa o compuestos funcionalmente relacionados los que pueden ser
usados para el enriquecimiento o fortificación de alimentos,
bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos. Ejemplos de
tales vitaminas solubles en la grasa son las vitaminas de los
grupos A, D, E o K o derivados de las mismas tales como sus acetatos
o sus ésteres de ácidos grasos de cadena larga. Ejemplos de los
compuestos funcionalmente relacionados son por ejemplo los ácidos
grasos poliinsaturados (PUFAs) o derivados de los mismos,
triglicéridos ricos en ácidos grasos poliinsaturados tales como el
ácido eicosapentaenoico (EPA), el ácido docosahexaenoico (DHA) o el
ácido \gamma-linolenico (GLA), o la coenzima Q 10
(CoQ 10). Incluidos además están los filtros solares solubles en la
grasa, tales como los filtros UV-A y
UV-B usados en las preparaciones cosméticas y de
cuidado contra el sol.
El término "colorante" como es usado aquí
comprende un caroteno o compuesto de polieno estructuralmente
relacionado que puede ser usado como un colorante para alimentos,
bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos. Ejemplos de
tales carotenoides son el \alpha- o el
\beta-caroteno,
8'-apo-\beta-carotenal,
ésteres del ácido
8'-apo-\beta-carotenoico
tales como el etil éster, cantaxantina, astaxantina, licopeno,
luteína, zeaxantina o crocetina, \alpha- o
\beta-zeacaroteno o mezclas de los mismos. El
carotenoide preferido es el \beta-caroteno. Se
entiende que las sustancias anteriormente nombradas de las
categorías "ingrediente activo soluble en la grasa" y
"colorante" pueden también ser usadas como mezclas dentro de
las nuevas composiciones de la presente invención.
El término "proteína del lupin de origen
natural" se refiere a las proteínas que pueden ser aisladas de
semillas (incluyendo semillas procesadas o preparadas) de cualquier
variedad de la planta del lupin (por ejemplo, L. albus, L.
angustifolius o variedades de las mismas), o a partir de
productos desengrasados o harina completos tal como hojuelas
blancas o fragmentadas. Los concentrados de proteína del lupin y los
productos del lupin térmica o químicamente
pre-tratados pueden ser usados además para los
propósitos de la invención.
El término "producto desengrasado"
significa que las proteínas del lupin han sido desengrasadas antes
de su tratamiento de acuerdo a los procesos de la invención. El
desengrasado puede ser por ejemplo realizado de acuerdo a los
métodos descritos en WO 99/17619 y WO 00/54608. En estos documentos,
es descrito el tratamiento mecánico de las semillas del lupin para
obtener hojuelas en forma de plaquetas, indirectamente calentar las
hojuelas en ausencia de agua y subsiguientemente extraer los lípidos
de los mismos usando un solvente, preferiblemente seleccionado del
pentano, hexano, heptano y CO_{2} supercrítico. El desengrasado
puede ser realizado por ejemplo usando solventes polares u otros
solventes no polares, por ejemplo mono- y
poli-alcoholes C_{1}-C_{6}
alifáticos, mono- y poli-alcoholes
C_{5}-C_{12} aromáticos, alcanos
C_{1}-C_{12} cíclicos o ramificados, de cadena
lineal alifáticos, etilmetilcetona, acetona, ésteres de alquil
C_{1}-C_{6} de ácido acético, alquil citrato
C_{1}-C_{4}, diclorometano, dialquiléteres
C_{2}-C_{6} y dióxido de carbono supercrítico.
Específicamente preferido entre los mono- y dialcoholes alifáticos y
alcanos son el metanol, el etanol, el
butan-1-ol, el
butan-2-ol, el
propan-1-ol, el
propan-2-ol, el
n-propanol, el 1,2-propilenglicol,
el propano, el butano, el pentano, el hexano, el
n-octano iso-octano, el
ciclohexano.
En una realización preferida de la invención,
las proteínas del lupin modificadas son obtenidas a partir de las
soluciones o suspensión de la proteína del lupin natural que tienen
un contenido de masa seca de desde alrededor de
5-15% en peso. La solución o suspensión es ajustada
a pH 3-9, preferiblemente pH 4-8,
por ejemplo, mediante la adición de un ácido o base
0.1-2 M tal como ácido clorhídrico e hidróxido de
sodio, respectivamente y preferiblemente llevada a una temperatura
de desde 40-60ºC, especialmente 50C. La proteasa
usada puede ser una proteasa que tiene
endo-actividad o exo-actividad.
Mezclas de endo- y exo-proteasas pueden ser usadas.
Las proteasas para el uso en el proceso de la invención están
disponibles de los suministrados, Novozymes, Genencor,
AB-Enzymes, Gist-Brocades etc. Las
proteasas preferidas son aquellas de origen bacteriano o fúngico,
por ejemplo del Bacillus licheniformes o Aspergillus
oryzae. Las preparaciones de enzimas tales como Alcalase o
Flavourzyme obtenidas de la firma Novozymes pueden ser usas. La
proteasa es adicionada para proporcionar una concentración de
alrededor de 0.01 -10% en peso, preferiblemente alrededor de 0.1 -
1% en peso con relación al peso de la proteína del lupin. La
hidrólisis enzimática es llevada a cabo hasta que un grado de
hidrólisis de alrededor de 1-30%, preferiblemente
1-10% sea alcanzado. El grado de hidrólisis puede
ser determinado de una manera conocida por aquellos versados en el
arte, por ejemplo como se describió en Petersen, D., Nielsen, P.M.,
Cambmann C., Determinación del Grado de Hidrólisis (DH) basado en
una Reacción OPA, ED-9512723, Novo Nordisk A/S,
Dic. 1995; Frister, H., Meisel, H., Schlimme, E., Método OPA
modificado por el uso de
N,N-dimetil-2-mercaptoetilamonio
cloruro como componente tiol, Fresenius J. Anal. Chem. 330 (1988)
631. La expresión "grado de hidrólisis" significa el número de
enlaces peptídicos hidrolizados con relación a la suma total de los
enlaces peptídicos en la proteína del lupin presente de manera
natural en la mezcla.
La proteasa es entonces inactivada,
apropiadamente por calentamiento del baño de incubación. En una
realización preferida del proceso de la invención, la enzima es
adicionada en un paso único. La hidrólisis enzimática puede además
ser llevada a cabo de manera escalonada. Por ejemplo, la proteasa o
una mezcla de proteasas es adicionada al baño de incubación en una
cantidad de por ejemplo, 1% donde, por ejemplo, después de
5-10 minutos (a una temperatura de 50ºC) la
proteasa adicional o la mezcla de proteasas que pueden ser la misma
o diferentes de la primera proteasa o mezcla de proteasas
adicionadas es adicionada, por ejemplo en una cantidad de 2% donde
el baño de incubación es hidrolizado a 50ºC durante 10 minutos.
Usando este procedimiento, las proteínas de partida que tienen un
grado de hidrólisis de aproximadamente cero pueden ser usadas.
Básicamente, todos los parámetros antes
mencionados son variables. Así, la temperatura del paso de
hidrólisis puede ser, en general, 5-70ºC con
temperatura de 40-60ºC, especialmente 50ºC siendo la
preferida. La duración de la hidrólisis puede variar entre 1 y 300
minutos y es preferiblemente 5-10 minutos. La
cantidad de enzima adicionada puede variar entre alrededor de
0,01-10% en peso. Cuando la hidrólisis es llevada a
cabo en un procedimiento de dos pasos, la cantidad de enzima usada
en el primer paso es preferiblemente 1% en peso y en el segundo
paso 2% en peso (basado en la masa seca de la proteína).
La inactivación de la proteasa puede ser
efectuada por desnaturalización con calor, por ejemplo, calentando
a 80-85ºC durante 5-10 minutos.
Subsiguientemente, el producto puede ser sometido al
fraccionamiento, por ejemplo, por centrifugación o ultra filtración
para separar y aislar la proteína del lupin modificada.
La solución o suspensión de la proteína del
lupin modificada así obtenida es entonces convertida a una forma
sólida, por ejemplo un polvo seco, por ejemplo, por secado por
rociado o enfriado por rociado.
Antes del secado, las fracciones de la proteína
del lupin modificada pueden ser sometidas al tratamiento con calor
(Pasteurización) por ejemplo calentando a 80-85ºC
durante 5-10 minutos para estabilizar el producto
contra el deterioro microbiano.
Aún en otro aspecto la presente invención se
relaciona con las proteínas del lupin modificadas las que son
obtenibles por el proceso de la presente invención, y con
composiciones que comprenden tales proteínas del lupin modificadas
y un colorante o ingrediente activo soluble en la grasa, y,
opcionalmente, adyuvantes y/o excipientes.
La proteína del lupin modificada es un
polipéptido dispersable o soluble en agua o que ejerce un rol
protector hacia la fase interna de la dispersión es decir el
colorante o el ingrediente activo soluble en la grasa y, por lo
tanto, actúa como un hidrocoloide protector. Como regla el
hidrocoloide caracteriza la actividad de la superficie e imparte
viscosidad, en virtud de la cual la misma estabiliza las emulsiones
o suspensiones en las cuales está presente con el colorante o el
ingrediente activo soluble en la grasa.
Las composiciones de la presente invención son
preferiblemente composiciones en polvo, sólidas donde el contenido
de colorante o del ingrediente activo soluble en la grasa es
finamente dispersado en una matriz o portador. La matriz o
portador contiene o consiste de la proteína del lupin modificada
como un hidrocoloide protector y, opcionalmente, uno o más
excipientes solubles en agua y/o adyuvantes convencionalmente usados
para la formulación de los colorantes o ingredientes activos
solubles en la grasa.
En las composiciones de la presente invención,
la cantidad de proteína del lupin modificada está desde alrededor
de 0.5 a alrededor de 60.0% en peso y la cantidad de colorante y/o
de ingrediente activo soluble en la grasa es desde alrededor de 0.1
a alrededor de 80.0% en peso en base al peso total de la
composición, todos los componentes totalizando 100%.
De manera apropiada, las composiciones de la
presente invención (además) contienen uno o más excipientes y/o
adyuvantes seleccionados de uno o más de un mono- di-, oligo- y
polisacáridos, glicerol, triglicéridos, antioxidantes solubles en
agua y antioxidantes solubles en la grasa. Las composiciones sólidas
pueden en adición contener un agente anti-torta,
tal como el ácido silícico, y hasta alrededor de 10% en peso, como
regla alrededor de 2 a 5% en peso, de agua.
Ejemplos de mono- y disacáridos que pueden estar
presentes en las composiciones de la presente invención son la
sucrosa, el azúcar invertida, la glucosa, la fructosa, la lactosa,
la maltosa, la sacarosa y los alcoholes de azúcar, y ejemplos de
los oligo- y polisacáridos son el almidón y los hidrolizados de
almidón, por ejemplo las dextrinas y maltodextrinas, especialmente
aquellas que tienen el rango de 5 - 65 equivalentes de dextrosa
(DE), y el sirope de glucosa, especialmente aquellos que tienen el
rango de 20 - 95 DE. El término "equivalentes de dextrosa"
(DE) denota el grado de hidrolización y es una medida de la cantidad
del azúcar reductora calculado como D-glucosa en
base al peso seco; la escala está basada en el almidón original que
tiene un DE cercano a 0 y glucosa que tiene un DE de 100.
El triglicérido es apropiadamente un aceite
vegetal o grasa, preferiblemente aceite de maíz, aceite de girasol,
aceite de soya, aceite de cártamo, aceite de semilla de colza,
aceite de cacahuete, aceite de palma, aceite de la almendra de la
palma, aceite de la semilla del algodón o aceite de coco.
El solvente orgánico puede ser por ejemplo
cloruro de metileno, cloroformo, etil acetato, dimetil éter,
acetona, etanol o isopropanol.
El antioxidante soluble en agua puede ser por
ejemplo el ácido ascórbico o una sal del mismo, preferiblemente el
ascorbato de sodio. El antioxidante soluble en grasa puede ser por
ejemplo un tocoferol, por ejemplo el
dl-\alpha-tocoferol (es decir,
tocoferol sintético), el
d-\alpha-tocoferol (es decir,
tocoferol natural), el \beta- o
\gamma-tocoferol, o una mezcla de dos o más de
estos; el hidroxitolueno butilado (BHT); el hidroxianisol butilado
(BHA); el etoxiquin, el propil galato; el tert. butil
hidroxiquinolina; o un éster de ácido ascórbico de un ácido graso,
preferiblemente el ascorbil palmitato o el estearato. Dependiendo
del pH de la solución de la matriz acuosa del éster de ácido
ascórbico de un ácido graso, particularmente el ascorbil palmitato
o el estearato, pueden alternativamente ser adicionados a la fase
agua.
Las composiciones de la presente invención
pueden ser composiciones sólidas, es decir, polvos dispersables o
solubles en agua, estables, o pueden ser composiciones líquidas, es
decir soluciones coloidales acuosas o dispersiones
aceite-en-agua de los polvos antes
mencionados. Las dispersiones
aceite-en-agua estabilizadas, que
pueden ser emulsiones aceite-en-agua
o pueden caracterizar una mezcla de partículas suspendidas, es
decir, sólidas, y goticas emulsificadas, es decir liquidas, pueden
ser preparadas por los métodos ya descritos anteriormente.
Típicamente, una composición en polvo de acuerdo
a la presente invención comprende
- -
- alrededor de 0.5 a alrededor de 60% en peso, preferiblemente alrededor de 5 a alrededor de 50% en peso de una proteína del lupin modificada;
- -
- alrededor de 0.1 a alrededor de 80% en peso preferiblemente alrededor de 0.5 a alrededor de 60% en peso de un colorante y/o un ingrediente activo soluble en grasa;
- -
- 0 a alrededor de 70% en peso preferiblemente alrededor de 0 a alrededor de 40% en peso de un mono- o disacárido;
- -
- 0 a alrededor de 70% en peso preferiblemente alrededor de 0 a alrededor de 40% en peso de un hidrolizado de almidón;
- -
- 0 a alrededor de 20% en peso preferiblemente alrededor de 0 a alrededor de 10% en peso de glicerol;
- -
- 0 a alrededor de 50% en peso preferiblemente alrededor 0 a alrededor de 30% en peso de un triglicérido;
- -
- 0 a alrededor de 5% preferiblemente alrededor de 0 a alrededor de 2% en peso de uno o más antioxidante(s) soluble(s) en agua;
- -
- 0 a alrededor de 5% preferiblemente alrededor de 0 a alrededor de 2% en peso de uno o más antioxidante(s) soluble(s) en la grasa;
- -
- 0 a alrededor de 50% en peso preferiblemente alrededor de 0 a alrededor de 35% en peso de un almidón;
- -
- 0 a alrededor de 5% en peso preferiblemente alrededor de 1% en peso de ácido silícico; y
- -
- 0 a alrededor de 10% en peso preferiblemente alrededor de 1 a alrededor de 5% en peso de agua;
los porcentajes de todos los
ingredientes totalizando
100.
Las nuevas composiciones de esta invención
pueden ser usadas para la coloración y/o para el enriquecimiento o
fortificación de alimentos, bebidas, alimentos animales, cosméticos
o medicamentos.
Mediante la presente invención se proporcionan
preferiblemente composiciones que comprenden
\beta-caroteno como un agente colorante. Estas
composiciones, cuando se disuelven, dispersan o diluyen en/con agua
para una concentración de \beta-caroteno final
de 10 ppm son típicamente caracterizadas por espectroscopia
ultravioleta/visible usando agua des-ionizada como
referencia. Para un espesor muestra de 1 cm las dispersiones
muestran una extinción de al menos 0.6 (preferiblemente alrededor
de 1.0) unidades de absorbancia a la longitud de onda de máxima
densidad óptica en el rango de 400 a 600 nm. Esto es equivalente a
un coeficiente de extinción formal de
\beta-caroteno en dispersión acuosa E (1%, 1 cm)
de 600 (preferiblemente >1000).
La fabricación de las composiciones de la
presente invención puede ser llevada a cabo de una manera conocida
per se para la preparación de composiciones basadas en una
matriz de composiciones colorantes o activas solubles en la grasa
para la coloración y/o para el enriquecimiento o fortificación de
alimentos, bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos,
por ejemplo como es descrito en las Publicaciones de Patentes
Europeas Nos. 0 285 682, 0 347 751, 0 966 889, 1 066 761 y 1 106
174, en la Publicación PCT No. WO 98/15195 y en la Solicitud de
Patente Suiza No. 1238/92, los contenidos de las cuales son
incorporados aquí como referencia.
Así, las composiciones de la presente invención
pueden ser preparadas por un proceso que comprende homogenizar, en
una solución acuosa o coloidal de la proteína del lupin modificada y
opcionalmente uno o más excipientes y/o adyuvantes solubles en
agua, un colorante o ingrediente activo soluble en la grasa o una
solución o dispersión del colorante o compuesto activo soluble en
la grasa y opcionalmente uno o más excipientes y/o adyuvantes
solubles en la grasa, y convertir la dispersión así obtenida en una
composición sólida.
Típicamente, la proteína del lupin modificada y,
los excipientes y adyuvantes opcionales solubles en agua son
disueltos o dispersos en agua. El colorante y/o compuesto activo
soluble en la grasa, los excipientes y adyuvantes opcionales
solubles en la grasa son usados como tal o disueltos o suspendidos
en un triglicérido y/o un solvente orgánico. El colorante y/o
ingrediente activo soluble en la grasa o la solución o dispersión
de los mismos, respectivamente, es entonces adicionado a la solución
de la proteína acuosa con agitación y la mezcla homogenizada
usando tecnología convencional. La dispersión
aceite-en-agua así obtenida puede,
después de la eliminación del solvente orgánico (si está presente),
ser convertida en una composición sólida, por ejemplo un polvo
seco.
Un objetivo adicional de la invención es un
proceso para la preparación de las composiciones basadas en una
proteína del lupin modificada como se describió con más detalles
anteriormente cuyo proceso comprende homogenizar, en una solución
acuosa o solución coloidal de la proteína del lupin modificada y
excipientes y adyuvantes opcionales solubles en agua, una solución
o dispersión del colorante y/o del ingrediente activo soluble en la
grasa y/o adyuvantes opcionales solubles en la grasa, si se
requiere, convertir la dispersión obtenida en un polvo.
Para la homogenización pueden ser aplicadas las
tecnologías convencionales, tales como la homogenización a alta
presión, emulsificación con alto corte (sistemas
rotor-estator), micronización o molido en húmedo.
Otras técnicas usadas para la preparación de composiciones de
colorante o de ingredientes activos solubles en la grasa para la
coloración y/o para el enriquecimiento o fortificación de alimentos,
bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos son
descritas en las Publicaciones de Patentes Europeas Nos. 937412 y
1008380 y en la Especificación de la Patente de los Estados Unidos
No. 6,093,348, los contenidos de las cuales son incorporados aquí
como referencia.
La dispersión así obtenida, la cual es una
dispersión aceite-en-agua, puede ser
convertida en una composición sólida, por ejemplo un polvo seco,
usando cualquier tecnología convencional tal como el secado por
rociado, el secado por rociado en combinación con la granulación en
lecho fluidizado (la última técnica comúnmente conocida como secado
por rociado fluidizado o FSD), o por una técnica de captura de polvo
donde las goticas de la emulsión rociada son atrapadas en un lecho
de un absorbente, tal como almidón, y subsiguientemente secadas.
Las bebidas donde las formas del producto de la
presente invención pueden ser usadas como un colorante o un
ingrediente funcional pueden ser bebidas carbonatadas por ejemplo,
aguas de seltz saborizadas, bebidas con sales o bebidas minerales,
así como bebidas no carbonatadas por ejemplo aguas saborizadas,
jugos de frutas, ponches de frutas y formas concentradas de estas
bebidas. Las mismas pueden estar basadas en jugos de frutas o
vegetales naturales o en sabores artificiales. También son incluidas
las bebidas alcohólicas y los polvos para bebidas instantáneas.
Además, las bebidas que contienen azúcar, bebidas dietéticas con
edulcorantes artificiales no-calóricos son también
incluidas.
Adicionalmente, los productos lácteos, obtenidos
de fuentes naturales o sintéticas, están dentro del alcance de los
productos alimenticios donde las formas del producto de la presente
invención pueden ser usadas como un colorante o como un ingrediente
funcional. Ejemplos típicos de tales productos son las bebidas de
leche, el helado, el queso, el yogurt y similares. Los productos
que reemplazan la leche como las bebidas de leche de soya y los
productos tofu están también comprendidos dentro de este rango de
aplicación.
También incluidos están los dulces que contienen
las formas del producto de la presente invención como un colorante
o como un ingrediente funcional, tal como productos de confitería,
bombones, gomas, postres, por ejemplo helado, jaleas, pudines,
polvos para pudines instantáneos y similares.
También incluidos están los cereales,
bocadillos, pastelitos, pasta, sopas y salsas, mayonesa, aliños para
ensaladas y similares que contienen las formas del producto de la
presente invención como un colorante o un ingrediente funcional.
Por otra parte, las preparaciones de frutas usadas para los lácteos
y cereales están también incluidas.
La concentración final del ingrediente activo o
el colorante que es adicionado por medio de las formas del producto
de la presente invención a los productos alimenticios puede ser
desde alrededor de 0.1 a alrededor de 500 ppm, particularmente
desde alrededor de 1 a alrededor de 50 ppm en base al peso total de
la composición alimenticia y dependiendo del producto alimenticio
particular a ser coloreado o fortificado y el grado de coloración o
fortificación pretendido.
Las composiciones alimenticias de esta invención
son preferiblemente obtenidas adicionando al producto alimenticio
el ingrediente activo o el colorante en la forma de una composición
de esta invención. Para la coloración o fortificación de un
producto alimenticio o farmacéutico una composición de esta
invención puede ser usada de acuerdo a los métodos conocidos per
se para la aplicación de las formas de productos sólidos
dispersables en agua.
En general la composición puede ser adicionada
tanto como una solución de almacenamiento acuosa, una mezcla de
polvo seco o una pre-mezcla con otros ingredientes
alimenticios apropiados de acuerdo a la aplicación específica. El
mezclado puede ser hecho por ejemplo usando un mezclador de polvo
seco, un mezclador de bajo corte, un homogenizador de alta presión
o un mezclador de alto corte dependiendo de la formulación de la
aplicación final. Como será fácilmente aparente tales técnicas
están dentro de la habilidad del experto.
Las composiciones farmacéuticas tales como
tabletas o cápsulas donde las composiciones son usadas como un
colorante están también dentro del alcance de la presente invención.
La coloración de las tabletas puede ser realizada adicionando las
formas del producto en forma de una composición de colorante líquida
o sólida separadamente a la mezcla de recubrimiento de la tableta o
por adición de una composición colorante a uno de los componentes
de la mezcla de recubrimiento de la tableta. Las cápsulas de capa
blanda o dura coloreadas pueden ser preparadas incorporando una
composición colorante en la solución acuosa de la masa de las
cápsulas.
Las composiciones farmacéuticas tales como
tabletas del tipo tabletas masticables, tabletas efervescentes o
tabletas recubiertas con una película o las cápsulas como las
cápsulas de capa dura donde las composiciones son usadas como un
ingrediente activo están también dentro del alcance de la presente
invención. Las formas del producto son típicamente adicionadas como
polvos a la mezcla de la tableta o rellenadas en las cápsulas de
una manera conocida per se para la producción de
cápsulas.
Los productos alimenticios animales tales como
las premezclas, alimentos compuestos, sustitutos de la leche,
preparaciones alimenticias o de dieta líquidas donde las
composiciones son usadas como un colorante para la pigmentación por
ejemplo de la yema del huevo, aves de mesa, animales acuáticos o de
asar a la parrilla o como un ingrediente activo están también
dentro del alcance de la presente invención.
Los productos cosméticos, de tocador y dérmicos
es decir productos para el cuidado de la piel y el cabello tal como
cremas, lociones, baños, lápices labiales, champú,
acondicionadores, atomizadores o geles donde las composiciones son
usadas como un colorante o como un ingrediente activo están también
dentro del alcance de la presente invención.
Para la producción de las formas del producto
líquidas y sólidas tal como las suspensiones
aceite-en-agua, emulsiones
aceite-en-agua o polvos los
hidrocoloides usados aquí actúan como ingredientes
multi-funcionales. Para este propósito los
hidrocoloides deben mostrar un espectro de propiedades funcionales
tales como propiedades de estabilización en dispersión excelentes,
alta capacidad y eficiencia de emulsificación (la última siendo
relevante con respecto a la distribución del tamaño de partículas de
la fase interna de la dispersión), alta solubilidad y buena
viscosidad adaptada en solución acuosa, estabilidad térmica, baja
susceptibilidad al pH, carga y fortaleza del ión, formación de
película superior así como propiedades de barrera al vapor de gas y
agua aceptables en las formas del producto
sólido.
sólido.
Las proteínas del lupin originales son
comercialmente de fácil disponibilidad en forma de harinas o
concentrados de proteínas tal como un producto Vitaprot Tipo LP 60
de J. Rettenmaier & Sons.
Los pasos usados para la modificación de la
proteína del lupin aislada descritos anteriormente conducen a
propiedades funcionales generales mejoradas de la proteína tales
como mejores propiedades emulsionantes, generalmente mayor
solubilidad en solución acuosa por ejemplo menos susceptibilidad al
pH y contra iones así como mejor solubilidad en agua fría, mejor
resistencia a la temperatura, y mejores propiedades de formación de
película. Además la viscosidad en solución acuosa es disminuida
significativamente y está ahora en un rango aceptable para los
propósitos de la corriente invención.
Los siguientes ejemplos ilustran la invención
adicionalmente
Ejemplo
1
Una suspensión acuosa de la proteína del lupin
natural es preparada mediante extracción acuosa de la semilla del
lupin desengrasada a pH 4-5 y la subsiguiente
extracción de la proteína a pH 6-8. La suspensión
acuosa de la proteína del lupin natural tiene un contenido de
materia seca de 4% en peso la materia seca teniendo un contenido de
proteína > 90%. El pH de la suspensión en entonces ajustado a pH
7 y a una temperatura de 50ºC. Luego, son adicionados 0,5% en peso
de Alcalase 2.4 L (Novozymes). Durante la hidrólisis enzimática el
pH es mantenido constante con la adición de una solución de NaOH 1 M
y la temperatura es mantenida a 50ºC. Después de
5-10 minutos la proteasa es inactivada calentando la
suspensión a 80ºC durante 10 minutos. Luego la fracción insoluble
es separada y la solución es secada por rociado a una temperatura
del producto de 70-80ºC.
Ejemplo
2
(Ejemplo de
comparación)
Una suspensión acuosa de la proteína del lupin
natural es preparada mediante extracción acuosa de la semilla del
lupin desengrasada a pH 4-5 (la fracción soluble
representando el pre-extracto) y la extracción
subsiguiente de la proteína a pH 6-8. La suspensión
acuosa de la proteína del lupin natural tiene un contenido de
materia seca de 4% en peso la materia seca teniendo un contenido de
proteína > 90%. La suspensión es ajustada a pH
4-5 y la fracción insoluble es separada por
centrifugación. El sobre-nadante es combinado con el
pre-extracto acídico y la solución combinada es
purificada por ultra filtración. De esta forma, los componentes de
la proteína soluble del pre-extracto acídico y las
proteínas solubles del extracto de proteína acidificado en el
retenido son obtenidos. El retenido de la ultra filtración es
secado por rociado a una temperatura del producto de
70-80ºC.
Ejemplo
3
Una composición que comprende proteína del lupin
modificada y vitamina A es preparada como sigue:
Una premezcla seca de 34.1 g de proteína del
lupin L143T modificada (preparada a partir de L. albus Typ Top de
acuerdo al Ejemplo 1 y referida en lo adelante como L143T) y 51.2 g
de sirope de glucosa secado Glucidex IT 47 (Roquette Fréres,
F-Lestrem) fue preparada y subsiguientemente
mezclada con 120 ml de agua des-ionizada en un
recipiente de reacción de 1 l a temperatura ambiente. La mezcla fue
calentada a 45ºC y agitada durante alrededor de 15 minutos a 45ºC.
El pH era de alrededor de 6.1.
15.3 g de acetato de vitamina A cristalino, 2.7
g de aceite de cacahuete y 1.3 g de
dl-\alpha-tocopherol fueron
introducidos en un frasco Erlenmeyer de 100 ml. Una barra de
agitación magnética fue adicionada a la mezcla. Mientras se
agitaba, la mezcla fue calentada a 65ºC en 10 minutos.
La solución A fue llevada a 50ºC y mientras se
agitaba vigorosamente, la solución B fue adicionada a la solución A
en 3 minutos y la dispersión fue vigorosamente agitada durante otros
20 minutos a 50ºC. La emulsión fue calentada a 60ºC y agitada
durante 5 horas para investigar su estabilidad física a largo
término. Después del tiempo de mantenimiento el tamaño de
partículas principal de la fase interna de la emulsión fue 388 nm
medido por espectroscopia de correlación de fotones (Coulter N4
Plus).
La emulsión fue rociada en un lecho fluidizado
pre-enfriado de almidón de maíz. El exceso de
almidón de maíz fue eliminado por tamizado y el polvo obtenido fue
secado en una corriente de aire a temperatura ambiente durante
alrededor de 2 horas. La fracción de partículas de polvo (126.5 g)
en el rango de 0.16-0.50 mm fue recogida por
tamizado y caracterizada con respecto al contenido de vitamina A,
contaminación con aceite de la superficie, contenido de almidón de
maíz y humedad residual. El polvo obtenido tuvo un contenido de
vitamina A de 263'000 IU/g medido por análisis de HPLC. La
contaminación con aceite de la superficie fue de 0.2% del contenido
de vitamina A. El polvo tuvo un contenido de almidón de maíz de
24.4% y un contenido de agua residual de 6.6%.
Ejemplo
4
Una composición que comprende la proteína del
lupin modificada y vitamina E es preparada como sigue:
26.7 g de
dl-\alpha-tocoferil acetato fueron
introducidos en un frasco Erlenmeyer de 100 ml. Una barra de
agitación magnética fue adicionada y el
dl-\alpha-tocoferil acetato fue
calentado a 75ºC.
Una premezcla seca de 40.0 g de proteína del
lupin L143T modificada fue preparada y subsiguientemente mezclada
con 135 ml de agua des-ionizada en un recipiente de
reacción de 1 l a temperatura ambiente. La mezcla fue calentada a
50ºC y agitada durante alrededor de 15 minutos a 50ºC. El pH era de
alrededor de 6.1.
La solución B fue llevada a 55ºC y mientras se
agitada vigorosamente la solución A fue adicionada a la solución B
y la emulsión fue vigorosamente agitada durante otros 30 minutos a
55ºC. La emulsión fue calentada a 60ºC y agitada durante 5 horas
para investigar su estabilidad física a largo término. Después del
tiempo de mantenimiento el tamaño de partículas principal de la
fase interna de la emulsión fue 521 nm medido por espectroscopia de
correlación de fotones (Coulter N4 Plus).
La emulsión fue diluida con agua
des-ionizada para un contenido de agua final de 65%
y luego secada por rociado con un Mobile Minor (NiroA/S). La
temperatura de entrada del aire de secado fue 220ºC la temperatura
de salida fue 110ºC. El polvo fue recogido y fue adicionado
alrededor de 1% de dióxido de silicio. El contenido de tocoferil
acetato del polvo fue 25.6% medido por HPLC.
Ejemplo
5
Una composición que comprende la proteína del
lupin modificada y \beta-caroteno es preparada
como sigue:
8.8 g de aceite de maíz y 1.6 g de
dl-\alpha-tocoferol fueron
introducidos en un frasco Erlenmeyer de 500 ml. 18.4 g de
\beta-caroteno cristalino fueron dispersados en
206 ml de tricloro metano y la dispersión obtenida fue adicionada
al aceite de maíz y al tocoferol. Una barra de agitación magnética
fue adicionada a la mezcla y un condensador de reflujo fue ajustado
al frasco Erlenmeyer. Agitando suavemente y, al mismo tiempo,
calentando la mezcla a alrededor de 65ºC se obtuvo una solución.
Una premezcla seca de 48.0 g de proteína del
lupin L140T-2 (preparada a partir de L.
angustifolius de acuerdo al Ejemplo 1 y referida en lo
adelante como L140T-2) y 40.8 g de sucrosa y 2.4 g
de ascorbil palmitato fue preparada y subsiguientemente mezclada
con 140 ml de agua des-ionizada en un recipiente de
reacción de 1 l a temperatura ambiente. Mientras se agitaba la
mezcla fue calentada a 35ºC y la adición de 14 ml de una solución
de hidróxido de sodio 1 N el pH de la mezcla fue llevado a 7.9.
Subsiguientemente, la mezcla fue vigorosamente agitada por un corto
período de tiempo para alcanzar una solución homogénea.
Mientras se agitaba vigorosamente, la solución A
fue adicionada a la solución B a 35ºC y la dispersión fue
vigorosamente agitada durante otros 30 minutos. El recipiente de
reacción fue inundado con nitrógeno y la dispersión fue calentada a
55ºC. La dispersión agitada fue mantenida a 55ºC durante 60 minutos.
El tricloro metano residual fue eliminado a 50-55ºC
usando un evaporador rotatorio. Después de eliminar las burbujas de
aire atrapadas por centrifugación la emulsión fue suavemente agitada
a 50-55ºC durante algunos minutos y luego
caracterizada con respecto al tamaño de partículas de la fase
interna. El tamaño de partículas principal de la fase interna de la
emulsión fue 148 nm, medido por espectroscopia de correlación de
fotones (Coulter N4 Plus).
La emulsión fue rociada en un lecho fluidizado
pre-enfriado de almidón de maíz. El exceso de
almidón de maíz fue eliminado mediante tamizado y el polvo obtenido
fue secado en una corriente de aire a temperatura ambiente durante
alrededor de 2 horas. La fracción de partículas de polvo (aprox. 138
g) en el rango de 0.16-0.63 mm fue recogida por
tamizado y caracterizada con respecto al contenido de carotenoides,
intensidad del color y matriz de color en dispersión acuosa,
contenido de almidón de maíz y humedad residual.
El polvo obtenido tuvo un contenido de
\beta-caroteno de 12.8% (11.5%), medido por
espectroscopia UV/VIS (HPLC), un contenido de 25% de almidón de
maíz y un contenido de agua residual de 5.9%. Fue dispersado en
agua des-ionizada y la extinción fue medida en una
celda de precisión de cuarzo de 1 cm contra el agua
des-ionizada. Para una dispersión de 10 ppm de
\beta-caroteno una extinción de 1.130 a una
longitud de onda de 481 nm fue calculada [E(1%,1 cm) =
1130]. Los valores de color L*=81.9, a*=22.6 y b*=31.6 fueron
medidos de acuerdo al sistema CIE para una dispersión de 5 ppm de
\beta-caroteno con un Espectro colorímetro
Ultrascan Hunterlab (1 cm, TTRAN). Basado en los valores de a* y b*
un ángulo de matriz de color h*=54.4º a una saturación (valor
croma) C*=38.8 puede ser calculado.
Ejemplo
6
Una composición que comprende la proteína del
lupin modificada y \beta-caroteno es preparada
como sigue:
El procedimiento de acuerdo al Ejemplo 5 fue
llevado a cabo usando proteína del lupin modificada L143T.
El polvo obtenido tuvo un contenido de
\beta-caroteno de 14,2% (12.4%), medido por
espectroscopia UV/VIS (HPLC), un contenido de 20% de almidón de
maíz y un contenido de agua residual de 5.5%. Fue dispersada en agua
des-ionizada y la extinción fue medida en una celda
de precisión de cuarzo de 1 cm contra agua
des-ionizada. Para una dispersión de 10 ppm de
\beta-caroteno una extinción de 0.892 a una
longitud de onda de 478 nm fue calculada [E(1%,1 cm) = 892].
Los valores de color L*=84.1, a*=16,8 y b*=27.4 fueron medidos de
acuerdo al sistema CIE para una dispersión de 5 ppm de
\beta-caroteno con un Espectro colorímetro
Ultrascan Hunterlab (1 cm, TTRAN). Basado en los valores de a* y b*
un ángulo de matriz de color h*=58.5º a una saturación (valor
croma) C*=32.1 puede ser calculado.
Ejemplo
7
Una composición que comprende la proteína del
lupin modificada y \beta-caroteno es preparada
como sigue:
60 g de proteína del lupin modificada L143T
fueron disueltos en 400 ml de agua des-ionizada a
50ºC. Una premezcla seca consistente de 64.5 g de sucrosa, 121.8 g
de una maltodextrina (DE 20-23) y 3.0 g de ascorbato
de sodio fue preparada y adicionada a la solución de la proteína
acuosa a 50ºC (= solución A).
46.5 g de un triglicérido (Durkex 500: aceite de
fríjol de soya parcialmente hidrogenado) y 0.3 g de
dl-\alpha-tocoferol fueron
mezclados y calentados a 170ºC. Subsiguientemente, 3.75 g de
\beta-caroteno fueron suspendidos en la mezcla de
triglicérido y tocoferol. Agitando durante alrededor de 10 minutos
una solución clara de \beta-caroteno fue obtenida
(= solución B).
Una emulsión cruda fue preparada adicionando la
solución B a la solución A mientras se agitaba suavemente. Una fina
emulsión fue obtenida mediante un tratamiento de homogenización a
alta presión de cuatro pasajes de la pre-emulsión a
una presión de 50/400 bar (LAB 1000 de APV).
La emulsión fue secada por rociado en un secador
por rociado de laboratorio (Mobile Minor de Niro) a una temperatura
de entrada de 190ºC y una temperatura de salida de 83ºC. Un polvo
fino fue obtenido con un contenido de agua residual de 1.8%. El
contenido de \beta-caroteno del polvo fue 1.3%
medido por espectroscopia UV/VIS y HPLC. El polvo fue dispersado en
agua des-ionizada y la extinción fue medida en una
celda de precisión de cuarzo de 1 cm contra el agua. Para una
dispersión de 10 ppm de \beta-caroteno y extinción
de 1.895 a una longitud de onda de 463 nm fue calculada
[E(1%,1 cm)= 1895]. Los valores de color L*=85.0, a*=9.0 y
b*=63.9 fueron medidos de acuerdo al sistema CIE para una
dispersión de 5 ppm de \beta-caroteno con un
Espectro colorímetro Ultrascan Hunterlab (1 cm, TTRAN). Basado en
los valores de a* y b* un ángulo de matriz de color h*=82.0º a una
saturación (valor croma) C*=64.5 puede ser calculado.
Ejemplo
8
Una formulación de Bebida Suave con
\beta-caroteno 6 ppm puede preparada como
sigue:
| *) \hskip0,1cm Sabor Melocotón No. 78511-76 de Givaudan | |
| **) \begin{minipage}[t]{140mm} es decir, una solución acuosa al 1% (dispersión) de formulaciones como las obtenidas por ejemplo en el Ejemplo 3 o 4, en base a un contenido de \beta\text{-caroteno} de 10% en dicha formulación \end{minipage} |
Disolver el benzoato de Na en parte del agua,
adicionar el sirope de azúcar, ácido ascórbico, ácido cítrico y
saborizante y finalmente la solución de almacenamiento de
\beta-caroteno. Diluir el sirope embotellado en
un litro de bebida.
El \beta-caroteno proporciona
un color naranja intenso de una alta claridad y con una alta
fortaleza del color. Pruebas de estabilidad a largo término de tres
meses en condiciones ambientales mostraron una buena estabilidad
física del \beta-caroteno en bebidas y una buena
estabilidad de color en términos de valores de color L*C*h*.
Claims (20)
1. Proceso para la fabricación de una proteína
del lupin modificada, el cual comprende ajustar una solución o
suspensión acuosa de las proteínas del lupin de origen natural
teniendo un contenido de masa seca de desde 0,1 a 20% a pH 3 a 9,
adicionar 0,01 a 10% en peso de una proteasa, con relación al peso
seco de la proteína del lupin, incubar la solución o suspensión de
proteína a una temperatura de desde 5 a 70ºC hasta que un grado de
hidrólisis de desde 1 a 30% es obtenido, e inactivar la
proteasa.
2. Un proceso de acuerdo a la reivindicación 1,
donde el pH de la solución o suspensión es ajustado a pH 4 a 8, la
cantidad de proteasa adicionada es 0,1 a 1%, y la hidrólisis
enzimática es efectuada a 20 a 55ºC.
3. Un proceso de acuerdo a las reivindicaciones
1 o 2, donde la hidrólisis enzimática es efectuada a un grado de
hidrólisis de desde 1 a 10%.
4. Un proceso de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, donde una proteasa que tiene
endo-actividad es usada.
5. Un proceso de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, donde una proteasa que tiene
exo-actividad es usada.
6. Un proceso de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, donde una proteasa de bacteria o de hongo
es usada.
7. Un proceso de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, donde la proteína del lupin
modificada, después que la proteasa ha sido inactivada, es llevada
a una forma sólida mediante centrifugación o ultra filtración,
opcionalmente después de un paso de fraccionamiento.
8. Proteínas del lupin modificadas obtenibles de
acuerdo al proceso de cualquiera de las reivindicaciones
1-7.
9. Composición, que comprende una proteína del
lupin modificada de acuerdo a la reivindicación 8, y un colorante o
ingrediente activo soluble en la grasa, y, opcionalmente, adyuvantes
y/o excipientes.
10. Una composición como la de la reivindicación
9, donde el colorante o ingrediente activo soluble en la grasa es
un carotenoide, una vitamina soluble en la grasa, un triglicérido,
un filtro UV-A o UV-B soluble en
aceite o una mezcla de los mismos.
11. Una composición como la de la reivindicación
10, donde el carotenoide es \alpha- o
\beta-caroteno,
8'-apo-\beta-carotenal,
etil éster de ácido
8'-apo-\beta-carotenoico,
cantaxantina, astaxantina, licopeno, luteína, zeaxantina o
crocetina o mezclas de los mismos.
12. Una composición como la de la reivindicación
10, donde la vitamina soluble en la grasa es Vitamina A, D, E o
K.
13. Una composición como en cualquiera de las
reivindicaciones 8-12 donde al menos uno de mono-,
di-, oligo- o polisacárido, un triglicérido, un
anti-oxidante soluble en agua, un
anti-oxidante soluble en la grasa, ácido silícico y
agua está adicionalmente presente.
14. Una composición como la de la reivindicación
13 donde el mono- o disacárido es sacarosa, azúcar invertida,
glucosa, fructosa, lactosa o maltosa y la composición opcionalmente
contiene glicerol en adición.
15. Una composición como la de la reivindicación
13 donde el polisacárido es un almidón o un hidrolizado de almidón
y/o el triglicérido es un aceite vegetal o grasa.
16. Una composición como la de la reivindicación
15 donde el hidrolizado de almidón es una dextrina o una
maltodextrina (en el rango de 5-65 equivalentes de
dextrosa) o un sirope de glucosa (en el rango de
20-95 equivalentes de dextrosa).
17. Una composición como en cualquiera de las
reivindicaciones 9-16 donde la cantidad de la
proteína del lupin modificada está desde alrededor de 0.5 a
alrededor de 60.0% en peso y la cantidad de colorante o ingrediente
activo soluble en la grasa está desde alrededor de 0.1 a alrededor
de 80.0% en peso.
18. Un proceso para la preparación de una
composición como la reivindicada en cualquiera de las
reivindicaciones 9-17 el cual comprende
homogenizar, en una solución acuosa o solución coloidal de la
proteína del lupin modificada y excipientes y adyuvantes opcionales
solubles en agua, una solución o dispersión del colorante y/o
ingrediente activo soluble en la grasa y los adyuvantes opcionales
solubles en la grasa, si es requerido, convertir la dispersión
obtenida en un polvo.
19. Uso de una composición como la reivindicada
en cualquiera de las reivindicaciones 9-17 para el
enriquecimiento, fortificación y/o coloración para alimentos,
bebidas, alimentos animales, cosméticos o medicamentos.
20. Alimentos, bebidas, alimentos animales,
cosméticos o medicamentos que contienen una composición como la
reivindicada en cualquiera de las reivindicaciones
9-17.
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