ES2290974T3 - Plantas, que son transgenicas para un gen de desacetilasa. - Google Patents
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Abstract
LA INVENCION SE REFIERE A LOS GENES DE LA DESACETILASA, AL PROCEDIMIENTO PARA SU AISLAMIENTO Y SU USO, ESPECIALMENTE PARA LA CREACION DE PLANTAS TRANSGENICAS UTILIZANDO PROMOTORES ESPECIFICOS DE TEJIDOS. EN ESTAS PLANTAS SE PUEDE EVITAR SELECTIVAMENTE EL DESARROLLO DE DETERMINADAS PARTES DE PLANTAS. ASIMISMO, MEDIANTE LOS GENES DE LA DESACETILASA SE PUEDEN IDENTIFICAR Y AISLAR PROMOTORES ESPECIFICOS DE TEJIDOS EN PLANTAS TRANSGENICAS.
Description
Plantas, que son transgénicas para un gen de
desacetilasa.
El invento se refiere a genes de desacetilasas,
destinados a la producción de plantas transgénicas mediando el
empleo de promotores específicos para ciertos tejidos. En estas
plantas se puede impedir de una manera deliberada el desarrollo de
determinadas partes de las plantas.
La fosfinotricina (PTC, ácido
2-amino-4-metilfosfino-butírico)
es un inhibidor de la sintetasa de glutamina (GS). La PTC es un
"eslabón" del antibiótico
fosfinotricil-alanil-alanina. Este
tripéptido (PTT) es activo contra bacterias
gram-positivas y gram-negativas y
también contra el hongo Botrytis cinerea. El PTT es
producido por la cepa Streptomyces viridochromogenes Tü494,
que ha sido depositada y es obtenible en la Colección Alemana de
Microorganismos [Deutsche Sammlung für Mikroorganismen] bajo los
números DSM 40736 y DSM 4112.
A partir del documento de patente alemana
2.717.440 es conocido que la PTC actúa como herbicida total. En la
solicitud publicada de patente europea
(EP-A-0257542) se describe cómo, con
ayuda de un gen de N-acetil transferasa de
fosfinotricina (pat) se producen plantas resistentes a los
herbicidas. La N-acetil transferasa de
fosfinotricina codificada por el gen pat modifica a la PTC que
aparece intracelularmente y desintoxica al herbicida.
Raibaud y colaboradores (Journal of
Bacteriology, 173, 4454-4463, 1991) describen que el
racimo (en inglés cluster) de genes de la producción del
antibiótico bialafos (bap) a partir de Streptomyces
hygroscopicus codifica un producto génico, que presenta
similaridades con respecto a las lipasas. Existen indicios de que
en el caso de este producto génico se trata de una acetil hidrolasa
(bah), que elimina el grupo N-acetilo, que se
encuentra en la forma desmetilada de la PTC, mediante una acetil
transferasa de PTC o una acetil transferasa que es específica para
la PTC desmetilada, que es codificada por el gen de resistencia a
bialafos (bar).
En el documento de solicitud de patente
internacional WO 91/03561 se describe la utilización de enzimas de
citocromo P450 de origen bacteriano (Streptomyces griseolus)
para la producción de plantas transgénicas, realizándose que las
plantas así obtenidas (a), mediante una desactivación enzimática de
moléculas con acción herbicida tomadas entre la clase de las
sulfonilureas, pueden acentuar las resistencias frente a estos
herbicidas, o por el contrario (b), mediante la conversión de
sustancias no tóxicas en otras que son tóxicas, pueden acentuar la
esterilidad
masculina.
masculina.
El presente invento describe ahora unos genes de
desacetilasas (dea) cuyos productos de expresión pueden desacetilar
intracelularmente a los productos de expresión de
N-acetil-fosfinotricina
(N-Ac-PTC) o respectivamente de
N-Ac-PTT, y de este modo los hacen
de nuevo activos como antibióticos.
Un gen de desacetilasa del tripéptido con
N-acetil-fosfinotricina conforme al
invento se puede aislar a partir de S. viridochromogenes
Tü494. El documento EP 0257542 describe un gen de resistencia contra
la PTC, que se ha obtenido a partir de Streptomyces
viridochromogenes y que es idóneo para la producción de plantas
resistentes a la PTC. En el fragmento de BamHI. de 4,0 kb
(kilobases) ya conocido (por el documento EP-A
0.257.542) está situado, secuencia abajo del gen pat, el gen dea.
Este gen está situado en un fragmento de
BgIII-BamHI, y es determinado con exactitud por
medio de la secuencia (Figura 1 y Tabla 1). La secuencia proteínica
es definida por la secuencia de ADN. Como codón de iniciación de la
traducción sirve un codón ATG, que es reconocido en bacterias y en
plantas; la secuencia de Shine-Dalgarno es resaltada
mediante subrayado. Este gen codifica en la biosíntesis del PTT la
última etapa, es decir la desacetilación del tripéptido con
N-acetil-fosfinotricina inactivo
para dar el PTT activo.
\vskip1.000000\baselineskip
De muchas enzimas es conocido que su
especificidad no está limitada a un solo substrato. Así, la
N-acetil transferasa de fosfinotricina, codificada
por el gen pat, sirve en la biosíntesis de PTT propiamente para la
acetilación de la desmetil-PTC y, a causa de su
inespecificidad, se puede utilizar para la desintoxicación de la
PTC. Por medio de una sobreexpresión del gen dea (con ayuda de
apropiados promotores o mediante clonación en vectores con alto
número de copias (en inglés "high-copy"), se
puede emplear una desacetilasa de
N-acetil-PTT que no es
suficientemente específica para la activación de
N-acetil-fosfinotricina.
Otro gen dea adicional se puede obtener a partir
de E. coli. En efecto, se encontró que en el seno de E.
coli -al contrario que en otras bacterias (p.ej. en rizobios y
estreptomicetos)- después de una clonación del gen pat no se puede
detectar ninguna actividad en vectores de expresión (Strauch y
colaboradores, Gene, 63, 65-74, 1988; Wohlleben y
colaboradores, Gene, 70, 25-37, 1988) en el
denominado ensayo de PAT (trabajo doctoral de Inge Broer, Facultad
de Biología de la Universidad de Bielefeld; expresión del gen de
N-acetil transferasa de fosfinotricina a partir de
Streptomyces viridochromogenes en Nicotiana tabacum,
páginas 42-43, 1989). Además, el gen pat en un bajo
número de copias en E. coli no está en situación de conferir
resistencia al PTT, puesto que la desacetilasa endógena suprime el
efecto de la N-acetil transferasa de fosfinotricina.
Finalmente, esta actividad de desacetilasa se puede detectar
directamente mediante la inhibición efectiva de la actividad de GS
después de una adición de
N-acetil-fosfinotricina. La
N-Ac-PTC es convertida mediante la
desacetilasa en PTC, que entonces, de una manera conocida, inhibe a
la GS, lo cual se puede medir en el ensayo de la
\gamma-glutamil transferasa (Bender y
colaboradores, J. Bacteriol. 129, 1001-1009, 1977).
Esto se sitúa en una actividad endógena de desacetilasas de E.
coli.
Esta actividad no debería poder encontrarse en
la mutante de argE, que es conocida a partir de la bibliografía
(Baumberg. Molec. Gen. Genetics 106, 162-173, 1970).
Otras mutantes de desacetilasas de E. coli son fácilmente
seleccionables: Después de una mutagénesis clásica (Delic y
colaboradores, Mut. Res. 9, 167-182, 1970; Drake y
Baltz, Ann. Rev. Biochem. 45, 11-38,1976) o
respectivamente de una mutagénesis con Tn5 (Kleckner, Ann. Rev.
Genet. 15, 341-404, 1981) se pueden reconocer, en un
medio mínimo suplementado con PTT, tales mutantes por el hecho de
que ellas pueden crecer solamente después de una transformación con
un gen pat clonado en un vector de bajo número de copias.
Por consiguiente, el gen de desacetilasa
procedente de E. coli se puede aislar mediante disposición de
un banco de genes en p.ej. la mutante para argE de E. coli o
respectivamente en una mutante aislada de nuevas, con
procedimientos habituales (Maniatis y colaboradores, Molecular
Cloning: a Laboratory Manual [Clonación molecular: un manual de
laboratorio], Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,
Nueva York, 1982).
Se establecen procedimientos para el aislamiento
de otros genes de desacetilasas a partir de lo descrito más arriba:
P.ej. el aislamiento de nuevos organismos que, a pesar de la
presencia de un gen pat en un vector de bajo número de copias, son
sensibles al PTT, y el subsiguiente aislamiento de un gen de
desacetilasa.
Los genes pat y dea se pueden emplear, en un
aspecto adicional del invento, en común con promotores específicos
para ciertos tejidos, con el fin de impedir deliberadamente el
desarrollo de determinados tejidos de plantas. Una aplicación
especial es p.ej. la producción de plantas estériles masculinas.
La producción de una simiente híbrida en la
procreación y cultivación de plantas es dependiente de que se evite
con gran seguridad una autofecundación de la planta madre. En la
naturaleza, para muchas especies de plantas se presentan mutantes
estériles masculinas, que se emplean en la procreación y
cultivación. El mecanismo molecular de la esterilidad masculina
citoplasmática (cms de cytoplasmatischen männlichen sterilität) no
ha sido explicado totalmente hasta hoy en día. Tampoco existe
ninguna variante con cms para muchas especies cultivadas, tales
como p.ej. Beta vulgaris. Por lo tanto, es de gran interés
para la agricultura producir por una vía genética molecular
mutantes con cms de todas las especies cultivadas importantes
definidas. La entidad PGS, de Bélgica ha presentado un método de
este tipo en el documento de solicitud de patente PCT/EP 89/00495.
Éste se basa en la destrucción del tejido (tapetum) que rodea a las
células madres del polen. Con esta finalidad, un gen de RNAsa se
fusiona con un promotor específico para el tapetum (Mariani y
colaboradores, Nature 347, 737-741, 1990). La
exclusiva expresión del gen en las células del tapetum procura la
destrucción selectiva del tejido e impide por consiguiente la
formación de polen maduro. Una planta, que lleva este gen, debería
poder formar semillas solamente después de una fecundación ajena.
Una desventaja esencial de este sistema es el hecho de que las
descendientes de estas plantas son asimismo estériles masculinas y
por lo tanto en el campo, donde necesitan una autofecundación, no
pueden formar ninguna semilla. Esto se consigue solamente cuando el
partícipe masculino en el cruce lleva un gen, que puede suprimir en
las descendientes el efecto de la RNAsa. Esto se debe efectuar, de
acuerdo con la solicitud de patente divulgada arriba mencionada, por
medio del gen barstar. Es un hecho cierto, en este caso, que se
pueden usar en el cruce solamente partícipes modificados
genéticamente, es decir transgénicos.
Seguidamente, se exponen procedimientos para la
producción de plantas con cms, que permiten cruzar plantas madres
transgénicas con cualesquiera partícipes de la misma especie. Esto
se consigue por combinación de un gen dea bajo el control p.ej. de
un promotor de tapetum en unión con un gen pat expresado
constitutivamente. Mediante aplicación de la PTC o respectivamente
del PTT se inhibe deliberadamente a la sintetasa de glutamina en
las células de tapetum y se lleva ésta a la muerte. Un sistema
todavía más sencillo consiste en la producción de plantas
transgénicas, que contienen solamente un único gen ajeno, a saber un
gen dea bajo el control de un promotor específico para ciertos
tejidos, aquí el promotor de tapetum, así como por aplicación de
N-Ac-PTC o respectivamente
N-Ac-PTT sobre la planta.
De manera generalizada, el invento comprende por
consiguiente para la inhibición específica para ciertos tejidos,
con ayuda de un gen de desacetilasa, de manera preferida del gen dea
antes mencionado procedente de E. coli o de S.
viridochromogenes T0 494, los siguientes procedimientos:
- 1)
- Plantas resistentes al PTT o respectivamente a la PTC mediante una actividad de pat (p.ej. producidas tal como se ha descrito en el documento EP 0257542), son transformadas con el gen de desacetilasa procedente de estreptomicetos bajo el control de un promotor específico para ciertos tejidos en plantas. Después de una aplicación de PTT o de PTC, la expresión del gen de desacetilasa conduce a la supresión de la actividad de N-acetil transferasa de fosfinotricina en los correspondientes tejidos. Éstos, entonces, son matados selectivamente, mientras que la planta restante es resistente.
- 2)
- Plantas resistentes al PTT y respectivamente a la PTC son transformadas con el gen de desacetilasa de E. coli bajo el control de un promotor específico para ciertos tejidos. Después de una aplicación de PTT o de PTC, la expresión del gen de desacetilasa conduce a la supresión de la actividad de N-acetil transferasa de fosfinotricina en los correspondientes tejidos. Éstos, entonces, son matados selectivamente, mientras que la planta restante es resistente.
- Por utilización de N-acetil-fosfinotricina o respectivamente del tripéptido con N-acetil-fosfinotricina, se puede simplificar este sistema. Ambas sustancias no son activas como herbicidas, pero son recibidas por las plantas, transportadas y no descompuestas inmediatamente. Una actividad de desacetilasa para la N-acetil-fosfinotricina y el tripéptido con N-acetil-fosfinotricina no se ha detectado hasta ahora en plantas. Así, el sistema de 2 genes, arriba descrito, se puede reducir a un sistema de 1 gen y por consiguiente se puede simplificar decisivamente, tal como se expone más adelante:
- 3)
- Plantas arbitrarias son transformadas con un gen de desacetilasa procedente de estreptomicetos bajo el control de un promotor específico para ciertos tejidos. Después de una aplicación de N-acetil-fosfinotricina o del tripéptido con N-acetil-fosfinotricina, la expresión específica para ciertos tejidos conduce a la muerte inmediata del correspondiente tejido.
- 4)
- Plantas arbitrarias son transformadas con un gen de desacetilasa procedente de E. coli bajo el control de un promotor específico para ciertos tejidos. Después de una aplicación de N-acetil-fosfinotricina o del tripéptido con N-acetil-fosfinotricina, la expresión específica para ciertos tejidos conduce a la muerte inmediata del correspondiente tejido.
A causa de la más alta especificidad de la
desacetilasa de estreptomicetos para el tripéptido con
N-acetil-fosfinotricina en el caso
3) se empleará preferiblemente el tripéptido con
N-acetil-fosfinotricina y en el caso
4) se empleará preferiblemente la
N-acetil-fosfinotricina, cuando se
necesiten altas actividades. Como promotores específicos para
ciertos tejidos pueden encontrar utilización todos los promotores
descritos, cuya expresión selectiva se ha detectado en determinados
tejidos (p.ej. Koltunow y colaboradores, The Plant Cell. (La célula
vegetal), volumen 2, 1201-1224, 1990).
Naturalmente, son apropiados también todos los promotores aislados
de nuevas con propiedades similares. Aparte de promotores
específicos para ciertos tejidos, se pueden emplear también
aquellos promotores que están sometidos a otro tipo distinto de la
regulación (p.ej. en el tiempo, condicionada por estrés,
dependiente del medio ambiente), y que aparece de una manera
específica para ciertos tejidos.
Estos procedimientos hacen posible, además, el
análisis de la diferenciación de la regulación celular así como la
producción de plantas, en las que se había impedido deliberadamente
el desarrollo de determinadas partes de plantas, preferiblemente la
producción de plantas estériles masculinas.
Otros aspectos del invento se exponen en los
Ejemplos.
Ejemplo
1
A partir de una cepa de E. coli se aisló
el plásmido pPRI (véase el documento EP-0.257.542) y
se disoció con BamH1 y BgIII. El ADN digerido fue separado en un
gel de agarosa y a partir del gel se aisló un fragmento de 0,9 kb.
El vector pROKI (Baulcombe y colaboradores, Nature 321,
446-449, 1986) fue restringido asimismo con BamHI.
Las dos tandas se reunieron y ligaron. La mezcla de ligación fue
transformada según E. coli S17.1 (Simon y colaboradores
Bio/Technology 1, 784-791, 1983). Unas colonias que
crecían en unos medios que contenían kanamicina fueron transferidas
a filtros de nitrocelulosa y fueron lisadas después de una
incubación durante 12 h a 37ºC. El ADN de las bacterias fue fijado
sobre el filtro, el fragmento de 0,9 kb aislado a partir del gel de
agarosa fue hecho monocatenario por incubación a 100ºC. A
continuación, la cadena que faltaba se sintetizó con una polimerasa
de Klenow y con nucleótidos marcados por digoxigenina. La cadena
marcada se usó como una sonda para la hibridación con el ADN
bacteriano fijado sobre el filtro. Los clones que se hibridaban se
pudieron detectar con ayuda de una reacción con anticuerpos. El ADN
de los clones positivos se aisló mediante una lisis con Qiagen y se
digirió con BarnHI/EcoRI así como con BamHI/HindIII. Esta
restricción hace posible la determinación de la orientación del
fragmento de 0,9 kb insertado. El plásmido con la orientación I se
designó como pIB17.1, y el que tenía la orientación II se designó
como p1B17.2 (véase la Figura 2).
Ejemplo
2
Se pudo mostrar que las señales de transcripción
eucarióticas, clonadas en el vector pROKI, hacen posible también
una expresión en R. meliloti, A. tumefaciens y E.
coli.
Los plásmidos pIB17.1 y pIB17.2 fueron
transferidos por lo tanto, mediante un cruce de 2 factores, en la
cepa 2011 de Rhizobium meliloti. Por medio de una incubación
de cepas de tipo salvaje de R. meliloti con un
N-acetil-PTC marcado
radiactivamente, se pudo mostrar que esta cepa no desacetila a la
N-acetil-PTC (después de una
incubación de cepas portadoras de pIB17.1 con
N-acetil-PTC y con
N-acetil-PTT se puede detectar la
desacetilación mediante una cromatografía de capa fina). Asimismo,
se pudo mostrar que el R. meliloti reacciona de una manera
muy sensible a la PTC y al PTT. Por lo tanto, la desacetilación se
puede detectar también a través de la inhibición de las sintetasas
de glutaminas procedentes de R. meliloti mediante la PTC
puesta en libertad.
Ejemplo
3
El gen de desacetilasa modificado en el Ejemplo
1 se transfirió mediante un cruce de 2 factores según A.
tumefaciens LBA4404. Con las cepas LBA4404117.1 y LBA4404/17.2
resultantes de esta manera se incubaron discos de hojas de
Nicotiana tabacum y después de 3 días se hicieron reaccionar
sobre un medio para la inducción de vástagos, que contenía
kanamicina. Los vástagos resistentes a la kanamicina que se habían
regenerado, se pueden ensayar mediante una hibridación de Southern
en cuanto a la presencia del gen de desacetilasa. Después de un
tratamiento con N-acetil-PTC o con
N-acetil-PTT se matan entonces las
plantas mediante la PTC o respectivamente el PTT que se ha puesto
en libertad.
Ejemplo
4
El gen de desacetilasa modificado procedente de
pIB17.1 y pIB17.2 se recortó mediante una digestión con
EcoRI/HindIII a partir de los plásmidos. El ADN restringido fue
separado en el gel de agarosa, y se aisló en cada caso un fragmento
de 0,9 kb. El vector pSVB28 (Arnold y Pühler, Gene 70,
171-179, 1988) fue asimismo digerido con
EcoRI/HindIII. Las dos tandas fueron reunidas y ligadas. Después de
una transformación en el seno de la cepa JM83 de E. coli,
negativa para \beta-galactosidasa, todos los
clones portadores de vectores mostraron una coloración de azul,
mientras que los clones, que son portadores de un vector con
introducción del gen de desacetilasa, permanecieron de color
blanco. A partir de los clones identificados de esta manera, el ADN
se aisló y se digirió con EcoRI/HindIII. Con ayuda del modelo de
restricción, los clones se pudieron reconocer con el gen de
desacetilasa modificado. Los vectores construidos llevan la
denominación pIB27.1 y pIB27.2 (véase la Figura 2). Ellos se
presentan en E. coli con un gran número de copias.
Ejemplo
5
A partir de las cepas de E. coli
construidas en el Ejemplo 4 se aisló el ADN de plásmido. Hojas
jóvenes de tabaco fueron incubadas durante 20 h con enzimas de
digestión. Los protoplastos que habían caído desde la nervadura de
las hojas fueron limpiados e incubados en un tampón de transferencia
con poli(etilenglicol) (PEG) y con el ADN aislado. A
continuación, los protoplastos se lavaron y se recogieron en un
líquido de cultivo (medio K3). Después de una incubación durante 3
días bajo una débil iluminación, los protoplastos que se habían
regenerado fueron digeridos y los extractos brutos fueron incubados
con N-acetil-PTC o
N-acetil PTT que se había marcado radiactivamente.
La PTC o respectivamente el PTT que se había desacetilado se puede
detectar a través de una cromatografía de capa fina.
Ejemplo
6
El gen de desacetilasa procedente de
Streptomyces viridochromogenes se fusiona con un promotor
específico para tapetum, procedente de Nicotiana tabacum, y se
introduce en células de tabaco a través de una transformación de
discos de hojas, mediada por agrobacterias. Las plantas que se han
regenerado a partir de estas células son rociadas con
N-acetil-PTC o
N-acetil-PTT en un momento
arbitrario antes de la floración. Se puede mostrar que la
N-acetil-PTC es estable en la célula
de una planta y es transportada en todas las células. Ninguna de
las dos sustancias tiene secuelas negativas reconocibles para la
planta de tipo salvaje. Tan pronto como se forman las primeras
células de tapetum, ellas comienzan con la expresión del gen de
desacetilasa. La N-acetil-PTC o el
N-acetil-PTT que se ha almacenado en
la célula, se desacetila mediante la enzima y, de esta manera, se
transforma en su forma eficaz. Ella o él inhibe a la sintetasa de
glutamina de las células y conduce de esta manera a una rápida
muerte. Ya no pueden formarse pólenes maduros. Adicionalmente
también se ha interrumpido la formación de la desacetilasa. Las
células circundantes no deberían ser perjudicadas. Si la planta no
ha sido tratada con N-acetil-PTC ni
con N-acetil-PTT, ella es plenamente
fértil. De esta manera se hace innecesaria una supresión de la cms
mediante un gen del partícipe masculino en el cruce. Al mismo
tiempo, se presenta una mutación exactamente definida, que
permanece sin repercusiones sobre la capacidad de crecimiento y la
utilidad de la planta.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Hoechst Schering AgrEvo GmbH
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Gebaeude K 801
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- LOCALIDAD: Frankfurt
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TERRITORIO FEDERAL: -
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Alemania
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- NÚMERO DE CÓDIGO POSTAL: 65926
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TELEFONO: 069-305-82808
\vskip0.500000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: 69-305-2200
\vskip0.500000\baselineskip
- (I)
- TELEX: -
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA SOLICITUD: Gen de desacetilasa para la producción de fosfinotricina o de fosfinotricil-alanil-alanina, procedimiento para su aislamiento y su utilización
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE LAS SECUENCIAS: 2
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- SOPORTE DE DATOS: disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: Patent In Release #1.0, Version #1.25 (EPA)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 1a:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 932 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE CADENA: monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- SITUACIÓN: 1...932
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1a:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 1b:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 299 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE CADENA: monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGIA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: proteína
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- SITUACIÓN: 1...299
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1b:
Claims (8)
1. Planta, caracterizada porque ella
contiene un gen de desacetilasa, que codifica una desacetilasa de
N-acetil-PTC o de
N-acetil-PTT, bajo el control de un
promotor específico para tejidos, y realizándose que la expresión
del gen de desacetilasa, bajo el control del promotor específico
para ciertos tejidos, conduce en determinados tejidos de esta
planta, después de un tratamiento con
N-acetil-PTC o con
N-acetil-PTT y de la conversión de
la N-acetil-PTC o del
N-acetil-PTT en PTC o PTT, conduce a
la muerte de las correspondientes partes de tejidos.
2. Planta de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizada porque ella contiene un gen de
N-acetil transferasa de fosfinotricina, que
codifica una N-acetil transferasa de fosfinotricina,
y realizándose que el tratamiento de la planta con PTC o PTT y su
conversión en N-acetil-PTC o
N-acetil-PTT mediante la
N-acetil transferasa de fosfinotricina en toda la
planta, así como la desacetilación específica para ciertos tejidos
de N-acetil-PTC o de
N-acetil-PTT en PTC o PTT mediante
la desacetilasa de N-acetil-PTC o de
N-acetil-PTT en las correspondientes
partes de tejidos, conducen a la muerte de las correspondientes
partes de tejidos.
3. Planta de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 ó 2, caracterizada porque esta planta es
una planta estéril masculina.
4. Planta de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 3, estando el gen de desacetilasa puesto bajo
el control de un promotor de tapetum.
5. Planta de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 4, procediendo el gen de desacetilasa de
Escherichia coli.
6. Planta de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 4, procediendo el gen desacetilasa de
Streptomyces viridochromogenes Tü494.
7. Planta de acuerdo con la reivindicación 6,
siendo codificada la secuencia proteínica de la desacetilasa por el
cuadro de lectura abierto de la secuencia de ADN de acuerdo con la
Tabla 1.
8. Planta de acuerdo con la reivindicación 6,
conteniendo el gen de desacetilasa el cuadro de lectura abierto de
la secuencia de nucleótidos de acuerdo con la Tabla 1.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4126414 | 1991-08-09 | ||
| DE4126414A DE4126414A1 (de) | 1991-08-09 | 1991-08-09 | Deacetylasegene zur erzeugung von phosphinothricin oder phosphinothricyl-alanyl-alanin, verfahren zu ihrer isolierung und ihre verwendung |
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Family Applications (2)
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| ES92113465T Expired - Lifetime ES2128331T3 (es) | 1991-08-09 | 1992-08-07 | Genes de desacetilasa para la produccion de fosfinotricina o fosfinotricil-alanin-alanina, metodo para su aislamiento y su utilizacion. |
Family Applications After (1)
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|---|---|---|---|
| ES92113465T Expired - Lifetime ES2128331T3 (es) | 1991-08-09 | 1992-08-07 | Genes de desacetilasa para la produccion de fosfinotricina o fosfinotricil-alanin-alanina, metodo para su aislamiento y su utilizacion. |
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