ES2292981T3 - Virus oncoliticos como agentes para determinar el fenotipo de neoplasias. - Google Patents
Virus oncoliticos como agentes para determinar el fenotipo de neoplasias. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2292981T3 ES2292981T3 ES03737795T ES03737795T ES2292981T3 ES 2292981 T3 ES2292981 T3 ES 2292981T3 ES 03737795 T ES03737795 T ES 03737795T ES 03737795 T ES03737795 T ES 03737795T ES 2292981 T3 ES2292981 T3 ES 2292981T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- virus
- reovirus
- cancer
- cells
- viruses
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncogenic proteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/14—Reoviridae, e.g. rotavirus, bluetongue virus, Colorado tick fever virus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Un método para diagnosticar una neoplasia en un animal mediante el fenotipo, que comprende: (a) proporcionar una muestra biológica del animal, en donde la muestra comprende células neoplásicas; (b) proporcionar al menos dos virus oncolíticos, en donde cada virus oncolítico se replica selectivamente en células neoplásicas que tienen un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en activación de la vía de ras, resistencia a interferón, deficiencia en p53 y deficiencia en Rb; y en donde cada uno de los al menos dos virus oncolíticos se replica en células neoplásicas que tienen un fenotipo diferente; (c) poner en contacto las células neoplásicas en la muestra con cada uno de los al menos dos virus oncolíticos en condiciones que permitan a cada virus oncolítico replicarse en las células neoplásicas que tienen el fenotipo para el que cada virus oncolítico es específico; (d) determinar si cada uno de los virus oncolíticos se puede replicar selectivamente en las células neoplásicas; y (e) diagnosticar una neoplasia en el animal de un fenotipo específico según la capacidad de cada uno de los virus oncolíticos de replicarse selectivamente en las células neoplásicas.
Description
Virus oncolíticos como agentes para determinar
el fenotipo de neoplasias.
Esta invención se refiere a métodos para
detectar la causa esencial de tumores, particularmente al uso de
reovirus en el diagnóstico de tumores con ras activado. Además,
también se pueden utilizar otros virus oncolíticos con diferentes
selectividades para el diagnóstico tipos particulares de
tumores.
- Patente de EE.UU. No. 6136307.
- WO 94/18992, publicado el 1 de septiembre de
1994.
- Bischoff JR et al., "An
Adenovirus Mutant that Replicates Selectively in
p53-Deficient Human Tumor", Science
274(5286): 373-376 (1996).
- Bos, J. "ras oncogenes in human
cancer: a review", Cancer Res. 49:
4682-4689 (1989).
- Campbell, S.L. et al.,
"Increasing complexity of Ras signaling", Oncogene 17:
1395-1413 (1998).
- Chandron y Nibert, "Protease
cleavage of reovirus capsid protein mu1 and mu1C is blocked by alkyl
sulfate detergents, yielding a new type of infectious subvirion
particle", J. of Virology 72(1):
467-75 (1998).
- Chang et al., J. Virol.
69: 6605-6608 (1995).
- Chang et al., Proc. Natl.
Sci. USA 89: 4825-4829 (1992).
- Chang et al., Virol. 194:
537-547 (1993).
- Fueyo, J. et al., "A Mutant
Oncolytic Adenovirus Targeting the Rb Pathway Produces
Anti-Glioma Effect in vivo",
Oncogene 19(1): 2-12
(2000).
- Gutkind, J.S., "The pathways
connecting G protein-coupled receptors to the
nucleus through divergent mitogen-activated protein
kinases", J. Biol. Chem. 273: 1839-1842
(1998).
- Kawagishi-Kobayashi, M.
et al., Mol. Cell. Biol. 17: 4146-4158
(1997).
- Nemunaitis, J. "Oncolytic
viruses", J. Invest. New Drugs 17: 375-386
(1999).
- Nibert, M.L., Schiff, L.A. y
Fields, B.N. "Reoviruses and their replication", páginas
1557-96 en Virology (Fields et al., 3ª
edición), Lippencott-Raven Press, 1996.
- Romano et al., Mol. Cell.
Bio. 18(12): 7304-7316 (1998).
- Sharp et al., Virology
250: 302-315 (1998).
- Smith, R.E. et al.,
"Polypeptide components of virions, top component and cores of
reovirus type 3", Virology 39: 791-800
(1969).
- Smith, C.A. et al.,
"Correlations among p53, Her-2/neu, and ras
overexpression and aneuploidy by multiparameter flow cytometry in
human breast cancer: evidence for a common phenotypic evolutionary
pattern in infiltrating ductal carcinomas", Clin Cancer
Res. 6(1): 112-26 (2000).
Con los recientes progresos en el campo de la
oncología y la biología celular, los investigadores han sido
capaces de empezar programas de desarrollo de drogas cuyo objetivo
es específicamente la causa esencial del cáncer, particularmente si
la causa es la deficiencia o mutación de productos de genes
específicos. Por lo tanto, si los médicos clínicos tienen las
herramientas para determinar la causa del cáncer para cada paciente
de cáncer, se puede elegir una pauta de tratamiento que se adapta a
la causa específica con eficacia optimizada.
El oncogén ras es responsable de un gran número
de tumores. Las mutaciones activadoras del gen ras mismo se dan en
alrededor del 30% de todos los tumores humanos (Bos, J.L., 1989),
principalmente en carcinomas de páncreas (90%), colorrectal
esporádico (50%) y de pulmón (40%), así como leucemia mieloide
(30%). Además de las mutaciones del gen ras en si mismo, la
activación de los factores anteriores o posteriores a ras en la vía
de ras también se asocia con tumores. Por ejemplo, la
sobreexpresión de HER2/Neu/ErbB2 o el receptor de factor de
crecimiento epidérmico (EGF) es común en cáncer de mama
(25-30%), y la sobreexpresión del receptor del
factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) o el receptor de
EGF es frecuente en gliomas y glioblastomas
(40-50%). Se sabe que tanto el receptor de EGF como
el receptor de PDGF activan ras tras la unión de sus respectivos
ligandos, y v-erbB codifica un receptor
constitutivamente activado que carece del dominio extracelular. En
conjunto, se cree que la mutación directa del oncogén ras o de un
elemento anterior en la vía de ras ocurre aproximadamente en dos
tercios de todos los tumores.
Dado el papel significativo de la vía de ras en
la oncogénesis, es deseable ser capaz de determinar si un tumor
está asociado con la activación de la vía de ras de modo que se
pueda desarrollar una pauta de tratamiento específicamente
adaptada. Antes de la presente invención, sin embargo, no ha habido
un método simple y sensible para diagnosticar la asociación de un
cáncer con la vía de ras. Mientras que las mutaciones en el gen
estructural de ras se pueden detectar con gran sensibilidad
mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), existen
otros muchos factores en la vía de ras que pueden ser la causa de
una alta actividad de ras, tales como mutaciones en las secuencias
flanqueantes del gen ras de llevan a unos niveles de expresión
anormalmente altos del producto del gen ras, mutaciones en los
genes estructurales de un factor anterior o posterior a ras en la
vía de ras, o mutaciones reguladoras que afectan a los niveles de
expresión de estos factores anteriores o posteriores. Por lo tanto,
la PCR del gen ras no identifica exactamente todos los cánceres
asociados con la activación de la vía de ras. Persiste la necesidad
para un método simple y preciso para diagnosticar tumores con ras
activado.
La presente invención proporciona un método para
diagnosticar neoplasias que tienen fenotipos particulares,
particularmente neoplasias mediadas por una actividad anormalmente
alta de la vía de ras, utilizando dos o más reovirus u otros virus
oncolíticos similares. Los reovirus no se replican en células
normales. Sin embargo, los reovirus se replican selectivamente en
células con una vía de ras activada, lo que lleva a la muerte de
estas células. La vía de ras en estas células puede estar activada
debido a mutaciones del gen estructural de ras o anormalidades de
cualquier otro factor en la vía de ras que produce la activación de
la vía. Por lo tanto, se puede diagnosticar una célula que se
vuelve neoplásica debido a, al menos en parte, aumentos en las
actividades de la vía de ras mediante su susceptibilidad a la
replicación de reovirus.
De acuerdo con esto, una parte de la invención
reivindicada proporciona un método para detectar células neoplásicas
con ras activado en una muestra biológica, que comprende poner en
contacto la muestra con un reovirus y determinar la capacidad del
reovirus para replicarse en la muestra, en donde la capacidad del
reovirus para replicarse indica la presencia de células neoplásicas
con ras activado en la muestra.
La muestra biológica es preferiblemente de un
mamífero, particularmente de un ser humano. En la presente invención
se puede utilizar cualquier reovirus capaz de replicarse en células
con ras activado, por ejemplo un reovirus de mamífero o un reovirus
de aves. El reovirus de mamíferos es preferiblemente un reovirus de
serotipo 3 y más preferiblemente un reovirus de la cepa
Dearing.
En una forma de realización preferida, la
muestra biológica es de un animal que tiene una neoplasia
seleccionada del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de
próstata, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de riñón,
cáncer suprarrenal, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de
mama, cáncer hematopoyético y cáncer del sistema nervioso central y
periférico.
Otro aspecto de la presente invención
proporciona un método según la reivindicación 1.
El animal es preferiblemente un mamífero,
particularmente un ser humano. Cualquier reovirus capaz de
replicarse en células con ras activado se puede utilizar en la
presente invención, por ejemplo un reovirus de mamífero o un
reovirus de aves. El reovirus de mamíferos es preferiblemente un
reovirus de serotipo 3 y más preferiblemente un reovirus de la cepa
Dearing.
En una forma de realización preferida, la
muestra biológica es de un animal que tiene una neoplasia
seleccionada del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de
próstata, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de riñón,
cáncer suprarrenal, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de
mama, cáncer hematopoyético y cáncer del sistema nervioso central y
periférico.
El virus oncolítico es preferiblemente un
reovirus, un adenovirus mutado en la región VA1, un virus de la
vacuna mutado en la región K3L y/o E3L, un parapoxvirus virus del
ectima contagioso mutado en el gen OV20.0L, un virus de la gripe
mutado en el gen NS-1, un virus herpes mutado en el
gen \gamma_{1}34.5, un virus de la estomatitis vesiculosa
(VSV), o un virus Newcastle. Otros agentes terapéuticos que son
selectivos para neoplasias con ras activado incluyen, sin ser
limitantes, inhibidores de la farnesil transferasa (FTIs) e
inhibidores de la quinasa RAF.
En cualquier forma de realización de la presente
invención, el reovirus puede ser un reovirus recombinante. El
reovirus recombinante se puede generar mediante coinfección de
células de mamífero con diferentes subtipos de reovirus. El
reovirus recombinante puede existir de forma natural o no existir de
forma natural. El reovirus recombinante puede ser de dos o más
cepas de reovirus, particularmente de dos o más cepas de reovirus
seleccionadas del grupo que consiste en cepa Dearing, cepa Abney,
cepa Jones, y cepa Lang. El reovirus recombinante también puede ser
el resultado del reagrupamiento de reovirus de diferentes serotipos,
tales como los seleccionados del grupo que consiste en reovirus de
serotipo 1, reovirus de serotipo 2 y reovirus de serotipo 3. El
reovirus recombinante puede comprender secuencias que codifican
variantes naturales de la proteína de la cubierta o secuencias que
codifican la proteína de la cubierta mutada.
Además de los reovirus, algunos otros virus
oncolíticos también son selectivos para neoplasias con ras activado,
y por lo tanto se pueden utilizar para practicar la presente
invención de la misma manera que los reovirus. Estos virus
incluyen, sin estar limitados a, adenovirus mutados en la región
VA1, virus de la vacuna mutados en la región K3L y/o E3L,
parapoxvirus virus del ectima contagioso mutados en el gen OV20.0L,
virus de la gripe mutados en el gen NS-1, o virus
herpes mutados en el gen \gamma_{1}34.5. De este modo, por
ejemplo, un aspecto de la presente invención proporciona un método
para detectar células neoplásicas con ras activado en una muestra
biológica, que comprende poner en contacto la muestra con un virus
oncolítico que se replica selectivamente en células deficientes en
PKR, y determinar la capacidad del virus para replicarse en la
muestra, en donde la capacidad del virus de replicarse indica la
presencia de células neoplásicas con ras activado en la muestra.
Preferiblemente, el virus oncolítico se selecciona del grupo que
consiste en adenovirus mutados en la región VA1, virus de la vacuna
mutados en la región K3L y/o E3L, parapoxvirus virus del ectima
contagioso mutados en el gen OV20.0L, virus de la gripe mutados en
el gen NS-1, o virus herpes mutados en el gen
\gamma_{1}34.5.
Además, muchos otros virus oncolíticos que son
capaces de infectar selectivamente células particulares de tumores
también son útiles en la presente invención de la misma manera que
los reovirus. Por ejemplo, el virus de la estomatitis vesiculosa
(VSV) se puede utilizar para diagnosticar tumores resistentes a
interferón, el virus ONYX-015 se puede utilizar
para diagnosticar virus deficientes en p53, y el virus Delta24 se
puede utilizar para diagnosticar tumores deficientes en Rb. Sin
embargo, el virus oncolítico útil en la presente invención
preferiblemente no es un adenovirus, particularmente no el virus
ONYX-015.
Aún otro aspecto podría ser un kit que comprende
un reovirus y medios para detectar la replicación del reovirus. Los
medios de detección pueden ser un par de cebadores específicos para
el ácido nucleico del reovirus, o puede opcionalmente incluir
reactivos para PCR. Los medios de detección también pueden ser un
anticuerpo específico para una proteína del reovirus, así como
reactivos accesorios tal como anticuerpos secundarios. Los medios
de detección pueden ser además portaobjetos y colorantes adecuados
para observar la morfología de las células infectadas en el
microscopio, o medios de cultivo para virus y células que se pueden
utilizar para determinar el título del reovirus. Similarmente, la
presente invención también proporciona kits que comprenden otros
virus capaces de replicarse en células de tumores específicos, así
como medios para detectar la replicación del virus. Ejemplos de
estos virus incluyen, sin estar limitados a, VSV, virus
ONYX-015, y virus Delta24.
Otro aspecto podría ser un kit que comprende al
menos dos virus que se pueden utilizar para determinar el fenotipo
de tumores según la presente invención. Los virus son
preferiblemente selectivos para neoplasias con diferentes
fenotipos. Preferiblemente, los virus se seleccionan del grupo que
consiste en reovirus, VSV, virus ONYX-015, y virus
Delta24.
Aún otro aspecto podría ser un kit que comprende
un virus útil para el diagnóstico de una neoplasia de un fenotipo
particular.
Además, puesto que los virus oncolíticos se
replican selectivamente en células neoplásicas pero no en células
normales, otro aspecto podría ser un método para diagnosticar la
presencia de una neoplasia en un mamífero, que comprende poner en
contacto una muestra de células de dicho mamífero con un virus
oncolítico, en donde la capacidad de dicho virus para replicarse en
dicha muestra indica la presencia de una neoplasia en dicho
mamífero.
La presente invención proporciona un método para
diagnosticar neoplasias que tienen fenotipos particulares
utilizando dos o más virus oncolíticos. En particular, los tumores
mediados por actividad anormalmente alta en la vía de ras se pueden
diagnosticar utilizando reovirus. Los reovirus no se replican en
células normales. Sin embargo, los reovirus se replican
selectivamente en células con una vía de ras activada, lo que lleva
a la muerte de estas células. Por lo tanto, un tumor con ras
activado se puede diagnosticar mediante su susceptibilidad a la
replicación del reovirus. El diagnóstico facilitará entonces el
tratamiento o mejora del tumor con mayor eficacia.
Esta invención se puede aplicar además para
diagnosticar otros tumores, tales como tumores resistentes a
interferón, tumores deficientes en p53 y tumores deficientes en
Rb.
Antes de describir la invención con más detalle,
se definen los términos utilizados en esta solicitud como sigue a
menos que se indique de otra manera.
Como se usa aquí, "células neoplásicas",
también conocidas como "células con un trastorno
proliferativo", se refiere a las células que proliferan sin las
propiedades normales de inhibición del crecimiento. Una masa que
comprende células neoplásicas es una "neoplasia" o
"tumor". Una neoplasia es un crecimiento anormal de un tejido,
generalmente formando una masa inconfundible, que crece mediante
proliferación celular más rápidamente de lo que crece el tejido
normal. Las neoplasias pueden mostrar falta total o parcial de
organización estructural y coordinación funcional con el tejido
normal. Como se utiliza aquí, se pretende que neoplasia abarque
neoplasias hematopoyéticas así como neoplasias sólidas.
Una neoplasia puede ser benigna (tumor benigno)
o maligna (tumor maligno o cáncer). Los tumores malignos en pueden
clasificar en general en tres tipos principales. Las neoplasias
malignas que provienen de estructuras epiteliales se denominan
carcinomas, las neoplasias malignas que se originan de tejidos
conjuntivos tales como músculo, cartílago, grasa o hueso se
denominan sarcomas y los tumores malignos que afectan a estructuras
hematopoyéticas (estructuras relacionadas con la formación de las
células sanguíneas) incluyendo componentes del sistema inmune, se
denominan leucemias y linfomas. Otras neoplasias incluyen, pero no
están limitadas a neurofibromatosis.
Una "célula deficiente en PKR" es una
célula en la que PKR no se activa como en las células normales. Tal
deficiencia en PKR puede ser debida a, por ejemplo, una mutación en
el gen de PKR o un nivel reducido en la proteína o actividad de
PKR. Por ejemplo, las células neoplásicas con ras activado son
deficientes en PKR porque la vía de ras activada bloquea la
fosforilación de PKR. Ensayos para los niveles de proteína o
actividad de PKR son conocidos en la técnica.
Como se usa aquí, "células neoplásicas con ras
activado" o "células neoplásicas mediadas por ras" se
refiere a células que proliferan a una tasa anormalmente alta
debido a, al menos en parte, activación de la vía de ras. La vía de
ras se puede activar mediante mutación en el gen estructural de ras,
aumentado en los niveles de la expresión génica de ras, aumento en
la estabilidad del mensajero del gen ras, o cualquier mutación u
otro mecanismo que lleve a la activación de ras o un factor o
factores posteriores o anteriores a ras en la vía de ras,
incrementando de ese modo la actividad de la vía de ras. Por
ejemplo, la activación del receptor de EGF, el receptor de PDGF, o
Sos produce activación de la vía de ras. Las células neoplásicas
mediadas por ras incluyen, pero no están limitadas a, células
cancerosas mediadas por ras, que son células que proliferan de una
manera maligna debido a la activación de la vía de ras.
Un "tumor con ras activado" es un tumor en
el que la vía de ras está activada.
Un "tumor resistente a interferón" o
"tumor que tiene un fenotipo de resistencia a interferón" es un
tumor que no puede ser tratado o mejorado con
interferón-alpha, beta o gamma.
Un "tumor deficiente en p53" o "un tumor
que tiene el fenotipo de deficiencia en p53" es un tumor en el
que el nivel celular del supresor de tumores p53 es menor que el de
una célula normal.
Un "tumor deficiente en Rb" o "un tumor
que tiene el fenotipo de deficiencia en Rb" es un tumor en el que
el nivel celular del supresor de tumores Rb es menor que el de una
célula normal.
Un "virus oncolítico" es un virus que mata
selectivamente células neoplásicas. Matar las células neoplásicas
se puede detectar mediante cualquier método establecido en la
técnica, tal como determinar la cantidad de células viables, efecto
citopático, apoptosis de las células neoplásicas, síntesis de
proteínas virales en las células neoplásicas (por ejemplo, mediante
marcaje metabólico, análisis por inmunotransferencia de proteínas
virales, reacción de la transcriptasa inversa y en cadena de la
polimerasa de genes virales necesarios para la replicación), o
reducción en tamaño de un tumor.
Como se usa aquí, "reovirus" se refiere a
cualquier virus en el género reovirus. El nombre reovirus
(Respiratory and enteric orphan virus, virus
respiratorio e intestinal huérfano) es un acrónimo descriptivo que
sugiere que estos virus, aunque no están asociados a ningún estado
de enfermedad en humanos, se pueden aislar tanto de las vías
respiratorias como de las intestinales. El término "reovirus"
se refiere a todos los virus clasificados en el género
reovirus.
Los reovirus humanos consisten en tres
serotipos: tipo 1 (cepa Lang o T1L), tipo 2 (cepa Jones, T2J) y tipo
3 (cepa Dearing o cepa Abney, T3D). Los tres serotipos se
identifican fácilmente en base a los ensayos de neutralización e
inhibición de la hemaglutinina (Ver, por ejemplo, Nibert et
al., 1996).
El reovirus se puede dar de forma natural o
estar modificado. El reovirus se "da de forma natural" cuando
se puede aislar de una fuente en la naturaleza y no se ha modificado
intencionadamente por seres humanos en un laboratorio. Por ejemplo,
el reovirus puede ser de una "fuente de campo", esto es, de un
ser humano que se ha sido infectado por un reovirus.
El reovirus puede estar modificado pero aún ser
capaz de infectar líticamente una célula de mamífero que tiene una
vía de ras activada. El reovirus estar pretratado químicamente o
bioquímicamente (por ejemplo, mediante tratamiento con una
proteasa, tal como quimotripsina o tripsina) antes de su
administración a las células que proliferan. El pretratamiento con
una proteasa elimina la cubierta externa o cápsida del virus y puede
aumentar la infectividad del virus. El reovirus puede estar
recubierto en un liposoma o micela (Chandron y Nibert, 1998) para
reducir o prevenir una respuesta inmune de un mamífero que ha
desarrollado inmunidad al reovirus. Por ejemplo, el virión se puede
tratar con quimotripsina en presencia de concentraciones formadoras
de micelas de detergentes de sulfato de alquilo para generar a un
nueva partícula de subvirión infecciosa.
El reovirus puede ser un reovirus recombinante
proveniente de la recombinación/reagrupamiento de segmentos
genómicos de dos o más reovirus genéticamente diferentes. El
reovirus recombinante puede ser de dos o más tipos de reovirus con
fenotipos patogénicos diferentes tal que contenga determinantes
antigénicos diferentes, reduciendo o previniendo de esta manera una
respuesta inmune de un mamífero que ha estado previamente expuesto
a un subtipo de reovirus. Los reovirus recombinantes también pueden
mostrar actividades biológicas diferentes (por ejemplo, actividades
de replicación en células neoplásicas y biodistribución) comparadas
con los reovirus originales. La recombinación/reagrupamiento de
segmentos genómicos de reovirus puede ocurrir en la naturaleza tras
la infección de un huésped con al menos dos reovirus genéticamente
distintos. Los viriones recombinantes también se pueden generar en
cultivos de células, por ejemplo, mediante coinfección de células
huésped permisivas con reovirus genéticamente distintos (Nibert
et al., 1996).
De acuerdo con esto, la invención contempla el
uso de reovirus recombinantes resultantes del reagrupamiento de
segmentos genómicos de dos o más reovirus genéticamente distintos,
incluyendo pero no limitados a, reovirus humanos, tal como tipo 1
(por ejemplo, cepa Lang), tipo 2 (por ejemplo, cepa Jones), y tipo 3
(por ejemplo, cepa Dearing o cepa Abney), reovirus de mamíferos no
humanos, o reovirus de aves. La invención contempla además el uso
de reovirus recombinantes resultantes del reagrupamiento de
segmentos genómicos de dos o más reovirus genéticamente distintos
en donde al menos un virus parental está modificado genéticamente,
comprende uno o más segmentos genómicos sintetizados químicamente,
se ha tratado con mutágenos químicos o físicos, o es él mismo el
resultado de un suceso de recombinación. La invención contempla
además el uso de reovirus recombinantes que han sufrido
recombinación en presencia de mutágenos químicos, incluyendo pero no
limitados a sulfato de dimetilo y bromuro de etidio, o mutágenos
físicos, incluyendo pero no limitados a luz ultravioleta y otras
formas de radiación.
La invención contempla además reovirus
recombinantes que comprenden deleciones o duplicaciones en uno o más
segmentos genómicos, que comprenden información genética adicional
como resultado de la recombinación con el genoma de la célula
huésped, o que comprende genes sintéticos.
"Determinar el fenotipo" de un tumor
significa clasificar un tumor según su fenotipo. Por ejemplo,
fenotipos de tumores incluyen activación de la vía de ras,
resistencia a interferón, deficiencia en p53, y deficiencia en Rb.
Los fenotipos no son mutuamente excluyentes, es decir, un tumor
puede tener fenotipo de más de una clase.
Una "muestra biológica" es una muestra
recogida de un sujeto biológico, tal como un animal.
La presente invención es útil en la
determinación precisa de fenotipos de tumores, facilitando de este
modo el desarrollo de una pauta de tratamiento que se adapta a un
tumor específico. En una primera parte de las invenciones
reivindicadas se utiliza el reovirus para infectar una muestra
biológica recogida de un animal que tiene un tumor. Dado que los
reovirus infectan selectivamente las células neoplásicas con ras
activado pero no las células normales o células tumorales en las
que la vía de ras no está activada, el método presente permite al
médico determinar con precisión si el tumor está asociado con la
activación de la vía de ras. Si se diagnostica que tiene ras
activado, el tumor se puede tratar con pautas de tratamiento
específicas para ras, tal como la terapia de reovirus (Patente de
EE.UU. No. 6136307).
La vía de ras es una vía de transducción de
señales compleja que lleva a la proliferación celular. Ras es un
transmisor central es esta vía, que recibe señales de elementos
anteriores (por ejemplo, receptores de factores de crecimiento) y
las transmite a elementos posteriores.
Muchos receptores de factores de crecimiento tal
como el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), el
receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), así
como moléculas relacionadas con el receptor de EGF (por ejemplo,
Her-2/Neu/ErbB2), poseen una actividad tirosina
quinasa intrínseca que se activa mediante la dimerización del
receptor inducida por el ligando. Esto produce autofosforilación del
receptor en residuos de tirosina y la unión de proteínas que
contienen dominios de homología con Src 2 (SH2). Dos de esas
proteínas con SH2 son Grb2 y SHC que activan indirectamente la
proteína pequeña que une GTP, asociada a la membrana Ras. La
activación de Ras también se produce en respuesta a ligandos que se
unen a los receptores con siete dominios transmembrana unidos a las
proteínas G (por ejemplo, Gutkind, 1998). La activación de Ras y
otras vías de señalización reguladas por receptores de factores de
crecimiento finalmente lleva a cambios en el citoesqueleto y la
expresión génica que son necesarios para la proliferación,
diferenciación y transformación celular (revisado en Campbell et
al., 1998).
Los tres genes humanos de ras
(Ha-Ras, N-Ras y
Ki-Ras) codifican 4 proteínas (debido al ayuste
alternativo del ARNm de Ki-Ras). En circunstancias
normales, las proteínas Ras hacen un ciclo entre un estado activo
(unido a GTP) y un estado inactivo (unido a GDP). La activación de
Ras se produce mediante intercambio del GDP unido por GTP, que se
facilita por una familia de factores de intercambio de nucleótidos.
La inactivación de Ras ocurre mediante la hidrólisis del GTP unido
a GDP. Esta reacción la facilitan las proteínas activadoras de la
GTPasa (GAPs). En muchos cánceres humanos, las proteínas Ras están
oncogénicamente activadas mediante mutaciones que destruyen su
actividad GTPasa, y por lo tanto desregulan la señalización por Ras
(revisado en Campbell et al., 1998).
Existen múltiples candidatos a efectores de Ras
que pueden servir después de Ras en la transducción de señales y
transformación oncogénica, incluyendo miembros de la familia Rho de
GTPasas pequeñas, fosfatidilinositol-3 quinasa
(PI3K) y proteína serina/treonina quinasa
c-Raf-1 (revisado en Campbell et
al., 1998). La señalización mediada por Raf es la vía efectora
de Ras mejor caracterizada. Ras activado recluta a Raf a la membrana
donde se produce la activación de Raf. Raf activada es el
componente inicial de una cascada de quinasas, la cascada de
proteínas quinasa activadas por mitógenos
(Mitogen-Activated Protein Kinase, MAPK). Raf
fosforila y activa las proteínas quinasas MEK1 y MEK2 (quinasa de
MAPK/ERK) que, a su vez, fosforilan y activan las quinasas
reguladas por señales extracelulares ERK1 y ERK2 (Extracellular
signal Regulated Kinases, también conocidas como MAPK1 y MAPK2). A
diferencia de sus dianas posteriores, ERK1,2, las proteínas MEK1,2
son enzimas altamente específicas cuyo único sustrato conocido son
las proteínas ERK1,2. Tras la activación, ERK1 y ERK2 fosforilan (y
regulan así) diversas proteínas diana, que incluyen factores de
transcripción nuclear, que llevan a la respuesta celular final.
De acuerdo con esto, numerosos sucesos pueden
producir la activación de la vía de ras. Por ejemplo, se puede
producir una mutación en cualquiera de los tres genes estructurales
de ras. Las mutaciones estructurales también pueden tener lugar en
los receptores que son anteriores a ras, los transductores de
señales posteriores a ras (tal como raf o mek1,2), o los efectores
finales MAPK1 y 2. De modo similar, las mutaciones reguladoras que
llevan a niveles de expresión anormalmente altos de cualquier
proteína en la vía de ras también pueden causar respuestas
celulares mitogénicas. Tales mutaciones reguladoras pueden suceder
en cualquier parte en las secuencias reguladoras de un miembro de
la vía de ras, o incluso en la región estructural o reguladora de
un factor que controla la expresión de un miembro de la vía de ras.
Por consiguiente, la detección de aberraciones en cualquier miembro
específico de la vía de ras no es un modo eficaz de determinar si la
vía de ras está activada.
Es posible medir la actividad de la MAPK, el
efector final de la vía de ras, ya que la activación constitutiva
de MAPK es indicativa de una activación de la vía de ras. Sin
embargo, tal aproximación bioquímica requiere una cantidad
sustancial de material de muestra, así como procedimientos tediosos
como extracción y/o purificación parcial de MAPK.
Detectando el fenotipo de ras activado en lugar
de aberraciones en cualquier gen o producto del gen específico, la
presente invención es útil si la activación de la vía de ras se debe
a una mutación en el gen estructural de ras, secuencias reguladoras
del gen de ras, o cualquier otro factor de la vía de ras. Además, el
método presente es relativamente sencillo, sin la necesidad de
extraer o purificar una enzima de la muestra.
La capacidad de un reovirus para infectar
células en una muestra se puede determinar mediante cualquier método
en la técnica. Por ejemplo, se puede medir la replicación del ácido
nucleico de los reovirus mediante reacción en cadena de la
polimerasa con cebadores específicos para el reovirus utilizado; la
síntesis de proteínas del reovirus se puede detectar mediante
anticuerpos específicos; las células infectadas se pueden observar
al microscopio y detectar evidencias de efectos citopáticos
inducidos por el reovirus; y los reovirus replicados se pueden
recoger de la muestra, y determinar el título del virus, para
evaluar si ha tenido lugar la replicación viral. Otros métodos para
determinar la presencia de la replicación del reovirus son conocidos
o se pueden desarrollar por los expertos en la materia.
Se debe advertir que un tumor puede contener
anormalidades oncogénicas múltiples. En particular, se ha descrito
que la activación de ras está normalmente precedida por la
sobreexpresión de p53 en cáncer de mama (Smith et al.,
2000). La presencia de otras anormalidades oncogénicas además de la
activación de la vía de ras, sin embargo, no dificulta la capacidad
de una pauta de terapia específicamente adaptada para tumores con
ras activados. Por ejemplo, los reovirus aún pueden matar
selectivamente células neoplásicas con ras activado incluso si las
células también contienen niveles anormalmente elevados de p53.
Además, puesto que los reovirus se replican
selectivamente en células neoplásicas con ras activado pero no en
células normales, otro aspecto de la presente invención proporciona
un método para diagnosticar la presencia de una neoplasia en un
mamífero, que comprende poner en contacto una muestra de células de
dicho mamífero con un reovirus en condiciones que permitan que el
reovirus se replique en las células con ras activado, en donde la
capacidad de dicho reovirus de replicarse en dicha muestra indica la
presencia de una neoplasia en dicho mamífero.
Similar al reovirus, algunos otros virus
oncolíticos también se replican selectivamente en células con ras
activado. Se contempla que se pueden emplear estos virus oncolíticos
para practicar la presente invención de la misma manera que los
reovirus. Estos virus son típicamente mutantes que son sensibles a
la quinasa de ARN de cadena doble (PKR), mientras que sus
equivalentes salvajes no son sensibles a la PKR.
Normalmente, cuando un virus entra en una
célula, se activa la PKR y bloquea la síntesis de proteínas, y el
virus no se puede replicar en esta célula. Algunos virus han
desarrollado un sistema para inhibir la PKR y facilitar la síntesis
de proteínas virales así como la replicación viral. Por ejemplo, los
adenovirus fabrican una gran cantidad de un ARN pequeño, ARN VA1.
El ARN VA1 tiene estructuras secundarias frecuentes y se une a la
PKR en competición con el ARN de cadena doble (ARNcd) que
normalmente activa la PKR. Puesto que se requiere una longitud
mínima de ARNcd para activar la PKR, el ARN VA1 no activa la PKR. En
lugar de eso, secuestra la PKR en virtud de su gran cantidad. Por
consiguiente, la síntesis de proteínas no se bloquea y los
adenovirus se pueden replicar en la célula.
Las células neoplásicas con ras activado no
están sometidas a inhibición de la síntesis de proteínas por la
PKR, porque ras inactiva la PKR. Estas células son por lo tanto
susceptibles a la infección viral incluso si el virus no tiene un
sistema inhibidor de la PKR. De acuerdo con esto, si se muta el
inhibidor de la PKR en adenovirus de modo que no bloquee más la
función de la PKR, el virus resultante no infecta células normales
debido a la inhibición de la síntesis de proteínas por PKR, pero se
replica en células neoplásicas con ras activado que carecen de
actividad PKR.
De acuerdo con esto, un virus que está
modificado o mutado de modo que no inhibe la función de PKR se
replica selectivamente en células neoplásicas con ras activado
mientras que las células normales son resistentes. Preferiblemente,
el virus es un adenovirus mutado en la región VA1, un virus de la
vacuna mutado en la región K3L y/o E3L, parapoxvirus virus del
ectima contagioso mutado en el gen OV20.0L, un virus de la gripe
mutado en el gen NS-1, o un virus herpes mutado en
el gen \gamma_{1}34.5.
Los virus se pueden modificar o mutar según la
relación estructura-función conocida de los
inhibidores virales de PKR. Por ejemplo, dado que la región amino
terminal de la proteína E3 interacciona con el dominio de la región
carboxi-terminal de PKR, la deleción o mutación
puntual de este dominio previene la función anti-PKR
(Chang et al., 1992, 1993, 1995; Sharp et al., 1998;
Romano et al., 1998). El gen K3L del virus de la vacuna
codifica pK3, un pseudosustrato de PKR. Hay una mutación de pérdida
de la función dentro de K3L. Los truncamientos o mutaciones
puntuales en la parte C-terminal de la proteína K3L
que es homóloga a los residuos 79 a 83 en eIF-2
anulan la actividad inhibidora de PKR
(Kawagishi-Kobayashi et al., 1997).
En una segunda parte de la invención
reivindicada se puede utilizar el virus de la estomatitis vesiculosa
(VSV) para diagnosticar tumores resistentes a interferón. Los
interferones son factores circulantes que se unen a receptores en
la superficie celular y finalmente producen tanto una respuesta
antiviral como una inducción de señales para la inhibición del
crecimiento y/o apoptóticas en las células diana. Aunque los
interferones se pueden utilizar teóricamente para inhibir la
proliferación de células tumorales, este intento no ha tenido mucho
éxito debido a las mutaciones específicas de tumor de miembros de
vía del interferón.
Sin embargo, interrumpiendo la vía del
interferón para evitar la inhibición del crecimiento ejercida por el
interferón, las células tumorales pueden comprometer
simultáneamente su respuesta antiviral. En efecto, se ha mostrado
que el VSV, un virus envuelto, ARN de sentido negativo, se replicó
rápidamente y mató varias líneas celulares tumorales en presencia
de interferón, mientras que los cultivos de células primarias
humanas normales estaban aparentemente protegidos por el
interferón. El VSV se puede utilizar así para diagnosticar tumores
resistentes a interferón aunque sensibles a VSV. Como la forma de
realización de reovirus, el diagnóstico basado en VSV es una
evaluación del fenotipo y no depende de los mecanismos de
resistencia a interferón.
En una alternativa segunda o tercera parte de la
invención reivindicada, el virus ONYX-015 se puede
utilizar para diagnosticar tumores deficientes en p53. p53 es un
potente supresor de tumores, que está presente en cualquier célula
y controla el crecimiento celular. Puesto que los virus dependen de
la maquinaria de proliferación celular para replicarse, están
sujetos a la regulación por p53 y no se pueden sobrereplicar.
Ciertos adenovirus, SV40 y virus del papiloma humano, sin embargo,
incluyen proteínas que inactivan p53, permitiendo de esta manera su
propia replicación (Nemunaitis 1999).
Para los adenovirus de serotipo 5 esta proteína
es una proteína de 55 Kd codificada por la región E1B. Si se
deleciona la región E1B que codifica esta proteína de 55 Kd, como en
el virus ONYX-015 (Bischoff et al., 1996; WO
94/18992), el inhibidor de p53 de 55 Kd no está ya presente. Como
resultado, cuando el ONYX-015 entra en una célula
normal, p53 funciona para suprimir la proliferación celular así como
la replicación viral. Por lo tanto, ONYX-015 no se
replica en células normales. Por otra parte, en células neoplásicas
que tienen la función de p53 interrumpida, ONYX-015
se puede replicar y finalmente causar que la célula muera. De
acuerdo con esto, este virus se puede utilizar para detectar
células neoplásicas deficientes en p53 en una muestra. El experto
en la materia también puede mutar e interrumpir el gen inhibidor de
p53 en adenovirus 5 u otros virus utilizando técnicas establecidas,
y los virus resultantes son útiles en el método presente para
diagnosticar tumores deficientes en p53.
De forma similar, el virus Delta24 se puede
utilizar para diagnosticar tumores deficientes en Rb, en cualquier
parte alternativa de las invenciones reivindicadas. El virus Delta24
es un adenovirus mutante que tiene una deleción de 24 pares de
bases en la región E1A (Fueyo et al., 2000). Esta región es
responsable de la unión al supresor de tumores celular Rb e inhibir
la función de Rb, dejando de esta forma que prosiga de forma
incontrolada la maquinaria de proliferación celular, y por lo tanto
la replicación del virus. Delta24 tiene una deleción en la región
de unión a Rb y no se une a Rb. Por lo tanto, la replicación del
virus mutante se inhibe por Rb en una célula normal. Sin embargo,
si se inactiva Rb y la célula se transforma en neoplásica, Delta24
no está ya inhibido. Por el contrario, el virus mutante se replica
eficazmente y lisa la célula deficiente en Rb. De acuerdo con esto,
el virus Delta24 se puede utilizar para determinar si una muestra
contiene células tumorales deficientes en Rb.
Como en el caso de las células tumorales con ras
activado, las células deficientes en p53 o deficientes en Rb pueden
ser el resultado de diversas razones. Por ejemplo, una mutación en
el gen estructural de p53 o Rb puede producir un producto génico
que funciona mal o una baja traducción, una mutación en las
secuencias reguladoras del gen p53 o Rb puede producir una cantidad
reducida de transcripción, una mutación en un factor de
transcripción para el gen p53 o Rb puede resultar en la producción
deficiente de p53 o Rb, o una mutación en un cofactor necesario
para la función de p53 o Rb también puede ser la razón de la
deficiencia en p53 o Rb. Puesto que la presente invención detecta
el fenotipo, más que aberraciones estructurales en el gen/proteína
p53 o Rb solo, tiene más poder que los métodos basados en la
estructura, tal como la PCR.
Una vez que se ha determinado el fenotipo de un
tumor, el tumor se puede tratar según su fenotipo. Por ejemplo, un
tumor con ras activado se puede tratar mediante reovirus, o
inhibidores de la vía de ras. La terapia con reovirus se ha
divulgado, por ejemplo, en la Patente de EE.UU. No. 6136307.
Se debe advertir que Delta24 y
ONYX-015 son meramente ejemplos para aclarar la
solicitud, mientras que el experto en la materia será capaz de
identificar o desarrollar otros virus útiles en el diagnóstico y
tratamiento de tumores según la presente divulgación.
Como con los reovirus, la presente invención
también comprende el uso de virus inmunoprotegidos o reagrupados de
otros virus oncolíticos. Además, aparte de los virus específicamente
discutidos en la presente solicitud, el experto en la materia puede
practicar la presente invención utilizando virus oncolíticos
adicionales según lo divulgado aquí y los conocimientos disponibles
en la técnica. El virus oncolítico puede ser un miembro en la
familia de myoviridae, siphoviridae, podoviridae, teciviridae,
corticoviridae, plasmaviridae, lipothrixviridae, fuselloviridae,
poxviridae, iridoviridae, phycodnaviridae, baculoviridae,
herpesviridae, adenoviridae, papovaviridae, polydnaviridae,
inoviridae, microviridae, geminiviridae, circoviridae, parvoviridae,
hepadnaviridae, retroviridae, cyctoviridae, reoviridae,
birnaviridae, paramyxoviridae, rhabdoviridae, filoviridae,
orthomyxoviridae, bunyaviridae, arenaviridae, leviviridae,
picornaviridae, sequiviridae, comoviridae, potyviridae,
caliciviridae, astroviridae, nodaviridae, tetraviridae,
tombusviridae, coronaviridae, glaviviridae, togaviridae, o
barnaviridae.
La presente invención se puede aplicar a
cualquier animal, particularmente mamíferos. Los mamíferos
preferidos incluyen perros, gatos, ovejas, cabras, vacas, caballos,
cerdos, seres humanos y primates no humanos. Lo más
preferiblemente, el mamífero es un ser humano.
Un aspecto adicional podrían ser kits útiles
para el diagnóstico de tumores. Un aspecto podría ser un kit que
comprende un reovirus y medios para detectar la replicación del
reovirus. Los medios de detección pueden ser un par de cebadores
específicos para el ácido nucleico del reovirus, y puede
opcionalmente incluir reactivos para PCR. Los medios de detección
también pueden ser un anticuerpo específico para una proteína del
reovirus, y puede contener opcionalmente los reactivos accesorios
tales como anticuerpos secundarios. Los medios de detección pueden
ser además portaobjetos y colorantes adecuados para observar la
morfología de las células infectadas en el microscopio, o medios de
cultivo de virus y células que se pueden utilizar para determinar
el título del reovirus. De forma similar, se podrían utilizar kits
que comprenden otro virus capaz de replicarse en células de tumores
específicos, así como medios para detectar la replicación del virus.
Ejemplos de estos virus incluyen, sin estar limitados a, VSV, el
virus ONYX-015 y el Delta24.
Se podría utilizar preferiblemente un kit que
comprende al menos dos virus que se pueden utilizar para determinar
el fenotipo de tumores según la presente invención. Preferiblemente,
los virus se seleccionan del grupo que consiste en reovirus, VSV,
el virus ONYX-015, y el virus Delta24.
Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar
la invención y no se deben interpretar de ninguna manera como
limitantes del ámbito de la presente invención.
En los ejemplos posteriores, las siguientes
abreviaturas tienen los siguientes significados. Las abreviaturas
no definidas tienen sus significados generalmente aceptados.
- ºC
- = grados Celsius
- hr
- = hora
- min
- = minuto
- \muM
- = micromolar
- mM
- = milimolar
- M
- = molar
- ml
- = mililitro
- \mul
- = microlitro
- mg
- = miligramo
- \mug
- = microgramo
- PAGE
- = electroforesis en gel de poliacrilamida
- rpm
- = revoluciones por minuto
- SBF
- = suero bovino fetal
- DTT
- = ditiotreitol
- SDS
- = dodecil sulfato sódico
- PBS
- = solución salina tamponada con fosfato
- DMEM
- = medio de Eagle modificado por Dulbecco
- \alpha-MEM
- = medio de Eagle \alpha modificado
- \beta-ME
- = \beta-mercaptoetanol
- MOI
- = multiplicidad de infección
- PFU
- = unidades formadoras de placas
- EGF
- = factor de crecimiento epidérmico
- PDGF
- = factor de crecimiento derivado de plaquetas
- CPE
- = efecto citopático
- VSV
- = virus de la estomatitis vesiculosa
- PCR
- = reacción en cadena de la polimerasa
- SH2
- = homología con src 2.
Ejemplo
1
Se encontró un tumor en una mujer de 65 años de
edad cuando se hacía su mamografía regular. Se recogió una muestra
del tumor durante la biopsia y parece que es un tumor maligno. Para
determinar si el tumor contiene células con ras activado, la
muestra se pone en cultivo celular y se incuba con reovirus.
La cepa Dearing del serotipo 3 de reovirus se
propaga en cultivos en suspensión de células L-929
purificadas según Smith (Smith et al., 1969) con la
excepción de que se omite el \beta-mercaptoetanol
(\beta-ME) del tampón de extracción. La
proporción partícula/PFU para el reovirus purificado es normalmente
de 100/1. La muestra de la biopsia se trocea en DMEM, se incuba con
el reovirus durante 2 horas a 37ºC, se cambia a DMEM fresco más SBF
al 20%, y se cultiva durante 48 horas. Después de esto, se recoge el
sobrenadante del cultivo y se determina el título del reovirus. El
resultado indica que el reovirus se ha replicado en la muestra. Por
lo tanto, el tumor de mama contiene células tumorales con ras
activado.
Claims (8)
1. Un método para diagnosticar una neoplasia en
un animal mediante el fenotipo, que comprende:
- (a)
- proporcionar una muestra biológica del animal, en donde la muestra comprende células neoplásicas;
- (b)
- proporcionar al menos dos virus oncolíticos, en donde cada virus oncolítico se replica selectivamente en células neoplásicas que tienen un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en activación de la vía de ras, resistencia a interferón, deficiencia en p53 y deficiencia en Rb; y en donde cada uno de los al menos dos virus oncolíticos se replica en células neoplásicas que tienen un fenotipo diferente;
- (c)
- poner en contacto las células neoplásicas en la muestra con cada uno de los al menos dos virus oncolíticos en condiciones que permitan a cada virus oncolítico replicarse en las células neoplásicas que tienen el fenotipo para el que cada virus oncolítico es específico;
- (d)
- determinar si cada uno de los virus oncolíticos se puede replicar selectivamente en las células neoplásicas; y
- (e)
- diagnosticar una neoplasia en el animal de un fenotipo específico según la capacidad de cada uno de los virus oncolíticos de replicarse selectivamente en las células neoplásicas.
2. El método de la reivindicación 1, en donde el
animal es un mamífero.
3. El método de la reivindicación 2, en donde el
mamífero es un ser humano.
4. El método de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en donde el virus oncolítico es un reovirus
de mamíferos o es un reovirus de aves.
5. El método de la reivindicación 4, en donde el
reovirus de mamífero es un reovirus de serotipo 3.
6. El método de la reivindicación 5, en donde el
reovirus de serotipo 3 es un reovirus de la cepa Dearing.
7. El método de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en donde la muestra biológica es de un
animal que tiene una neoplasia seleccionada del grupo que consiste
en cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer
de tiroides, cáncer de riñón, cáncer suprarrenal, cáncer de hígado,
cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer hematopoyético y cáncer
del sistema nervioso central y periférico.
8. El método de la reivindicación 7, en donde
los al menos dos virus oncolíticos se seleccionan del grupo que
consiste en reovirus, adenovirus mutados en la región VA1, virus de
la vacuna mutados en la región K3L y/o E3L, parapoxvirus virus del
ectima contagioso mutados en el gen OV20.0L, virus de la gripe
mutados el gen _{K1}34.5, virus de la estomatitis vesiculosa,
virus ONYX-015, y virus Delta 24.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US39203102P | 2002-06-28 | 2002-06-28 | |
| US392031P | 2002-06-28 | ||
| US44318803P | 2003-01-29 | 2003-01-29 | |
| US443188P | 2003-01-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2292981T3 true ES2292981T3 (es) | 2008-03-16 |
Family
ID=30003222
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03737795T Expired - Lifetime ES2292981T3 (es) | 2002-06-28 | 2003-06-25 | Virus oncoliticos como agentes para determinar el fenotipo de neoplasias. |
| ES07021569T Expired - Lifetime ES2385845T3 (es) | 2002-06-28 | 2003-06-25 | Virus oncolíticos como agentes para la caracterización fenotípica de neoplasmas |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES07021569T Expired - Lifetime ES2385845T3 (es) | 2002-06-28 | 2003-06-25 | Virus oncolíticos como agentes para la caracterización fenotípica de neoplasmas |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7306902B2 (es) |
| EP (2) | EP1890151B1 (es) |
| JP (1) | JP2005531306A (es) |
| CN (1) | CN1666105B (es) |
| AR (1) | AR039768A1 (es) |
| AT (2) | ATE555388T1 (es) |
| AU (2) | AU2003245760B2 (es) |
| BR (1) | BR0311983A (es) |
| CA (1) | CA2487824C (es) |
| DE (1) | DE60317331T2 (es) |
| DK (2) | DK1890151T3 (es) |
| ES (2) | ES2292981T3 (es) |
| IL (2) | IL165498A0 (es) |
| MX (1) | MXPA04012414A (es) |
| NZ (1) | NZ537116A (es) |
| PT (1) | PT1890151E (es) |
| SI (1) | SI1890151T1 (es) |
| TW (3) | TWI402345B (es) |
| WO (1) | WO2004003562A2 (es) |
Families Citing this family (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPQ425699A0 (en) | 1999-11-25 | 1999-12-23 | University Of Newcastle Research Associates Limited, The | A method of treating a malignancy in a subject and a pharmaceutical composition for use in same |
| US8491884B2 (en) | 2000-05-03 | 2013-07-23 | Oncolytics Biotech Inc. | Virus clearance of neoplastic cells from mixed cellular compositions |
| US7306902B2 (en) * | 2002-06-28 | 2007-12-11 | Oncolyties Biotech Inc. | Oncolytic viruses as phenotyping agents for neoplasms |
| US20040115170A1 (en) * | 2001-11-30 | 2004-06-17 | Brown Earl Garnet | Oncolytic virus |
| AU2003249059A1 (en) | 2002-07-24 | 2004-02-09 | Arizona Board Of Regents | Use of vaccinia virus deleted for the e3l gene as a vaccine vector |
| AU2002953436A0 (en) | 2002-12-18 | 2003-01-09 | The University Of Newcastle Research Associates Limited | A method of treating a malignancy in a subject via direct picornaviral-mediated oncolysis |
| WO2005007824A2 (en) * | 2003-07-08 | 2005-01-27 | Arizona Board Of Regents | Mutants of vaccinia virus as oncolytic agents |
| WO2005111200A1 (en) * | 2004-05-17 | 2005-11-24 | Universite De Montreal | Novel strains of reoviruses and methods of uses thereof |
| WO2007099401A2 (en) | 2005-08-01 | 2007-09-07 | University Technologies International, Inc. | Oncolytic attenuated reoviruses for treatment of proliferative disorders |
| US10668119B2 (en) | 2005-08-01 | 2020-06-02 | Virocure, Inc. | Attenuated reovirus |
| ATE516370T1 (de) * | 2005-12-22 | 2011-07-15 | Sloan Kettering Inst Cancer | Verfahren zur erfassung von krebszellen unter verwendung eines virus |
| DK1984007T3 (en) * | 2006-02-13 | 2015-12-07 | Oncolytics Biotech Inc | Application of Low-dose local immunosuppression for amplification of viral oncolytic therapy |
| US10369171B2 (en) | 2007-03-13 | 2019-08-06 | Virocure, Inc. | Attenuated reoviruses for selection of cell populations |
| US9241998B2 (en) * | 2007-05-21 | 2016-01-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for treatment of cancer using oncolytic RSV activity |
| CN102124335B (zh) * | 2008-05-22 | 2014-07-30 | 第一药品株式会社 | 基于肿瘤抑制因子的过度增生细胞对溶瘤病毒疗法的敏感性 |
| TW200950777A (en) * | 2008-05-27 | 2009-12-16 | Oncolytics Biotech Inc | Abrogating proinflammatory cytokine production during oncolytic reovirus therapy |
| US20110086005A1 (en) * | 2008-05-27 | 2011-04-14 | Oncolytics Biotech Inc. | Modulating interstitial pressure and oncolytic viral delivery and distribution |
| US8481297B2 (en) * | 2009-01-08 | 2013-07-09 | Yale University | Compositions and methods of use of an oncolytic vesicular stomatitis virus |
| ES2385251B1 (es) | 2009-05-06 | 2013-05-06 | Fundació Privada Institut D'investigació Biomèdica De Bellvitge | Adenovirus oncolíticos para el tratamiento del cáncer. |
| US9428565B2 (en) | 2011-01-31 | 2016-08-30 | The General Hospital Corporation | Treatment and bioluminescent visualization using multimodal TRAIL molecules |
| EP2764119A2 (en) | 2011-10-05 | 2014-08-13 | Genelux Corporation | Method for detecting replication or colonization of a biological therapeutic |
| WO2013138522A2 (en) | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Genelux Corporation | Methods for assessing effectiveness and monitoring oncolytic virus treatment |
| WO2013158265A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Genelux Corporation | Imaging methods for oncolytic virus therapy |
| US9862932B2 (en) | 2012-07-24 | 2018-01-09 | The General Hospital Corporation | Oncolytic virus therapy for resistant tumors |
| EP2890720B1 (en) | 2012-08-30 | 2019-07-17 | The General Hospital Corporation | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2014055960A1 (en) | 2012-10-05 | 2014-04-10 | Genelux Corporation | Energy absorbing-based diagnostic and therapeutic methods employing nucleic acid molecules encoding chromophore-producing enzymes |
| WO2015089280A1 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-18 | The General Hospital Corporation | Stem cell delivered oncolytic herpes simplex virus and methods for treating brain tumors |
| WO2015103438A2 (en) | 2014-01-02 | 2015-07-09 | Genelux Corporation | Oncolytic virus adjunct therapy with agents that increase virus infectivity |
| AU2015332533B2 (en) | 2014-10-14 | 2018-08-30 | Halozyme, Inc. | Compositions of adenosine deaminase-2 (ADA2), variants thereof and methods of using same |
| EP4122492A1 (en) | 2015-02-25 | 2023-01-25 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Use of inactivated nonreplicating modified vaccinia virus ankara (mva)as monoimmunotherapy or in combination with immune checkpoint blocking agents for solid tumors |
| KR20180006916A (ko) | 2015-04-17 | 2018-01-19 | 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 | 고형 종양에 대한 면역치료제로서 mva 또는 mva델타e3l의 용도 |
| WO2017147554A2 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Recombinant mva or mvadele3l expressing human flt3l and use thereof as immuno-therapeutic agents against solid tumors |
| CN109152815B (zh) | 2016-02-25 | 2022-10-18 | 纪念斯隆凯特琳癌症中心 | 用于癌症免疫治疗的具有胸苷激酶缺失和具有或不具有人flt3l或gm-csf表达的复制型减毒痘苗病毒 |
| SG11201808457PA (en) | 2016-04-15 | 2018-10-30 | Alpine Immune Sciences Inc | Icos ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| AU2017248830B2 (en) | 2016-04-15 | 2023-03-09 | Alpine Immune Sciences, Inc. | CD80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| US10842835B2 (en) | 2016-05-25 | 2020-11-24 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Oncolytic vaccinia virus mutants and using same for cancer treatment |
| WO2018022945A1 (en) | 2016-07-28 | 2018-02-01 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Cd112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| US11471488B2 (en) | 2016-07-28 | 2022-10-18 | Alpine Immune Sciences, Inc. | CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| EP3491013A1 (en) | 2016-07-28 | 2019-06-05 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| MX428707B (es) * | 2016-09-27 | 2025-11-13 | Sator Therapeutics LLC | Virus oncoliticos optimizados y usos de los mismos. |
| EP3872180A1 (en) | 2016-10-20 | 2021-09-01 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Secretable variant immunomodulatory proteins and engineered cell therapy |
| AU2018219895C1 (en) | 2017-02-09 | 2024-10-03 | Indapta Therapeutics, Inc. | Engineered Natural Killer (NK) cells and compositions and methods thereof |
| MX2019010887A (es) | 2017-03-16 | 2019-10-15 | Alpine Immune Sciences Inc | Proteinas inmunomoduladoras de cb80 variante y usos de estas. |
| FI3596116T3 (fi) | 2017-03-16 | 2023-11-09 | Alpine Immune Sciences Inc | Immunomodulatorisia pd-l1-varianttiproteiineja ja niiden käyttöjä |
| JP2020511144A (ja) | 2017-03-16 | 2020-04-16 | アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド | Ｐｄ−ｌ２バリアント免疫調節タンパク質及びその使用 |
| CN111107872A (zh) | 2017-05-12 | 2020-05-05 | 纪念斯隆-凯特林癌症中心 | 有用于癌症免疫疗法的牛痘病毒突变体 |
| JP7282760B2 (ja) | 2017-10-18 | 2023-05-29 | アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド | バリアントｉｃｏｓリガンド免疫調節タンパク質ならびに関連する組成物および方法 |
| SG11202006148UA (en) | 2018-01-03 | 2020-07-29 | Alpine Immune Sciences Inc | Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof |
| KR102662837B1 (ko) | 2018-06-04 | 2024-05-03 | 카리디 바이오테라퓨틱스, 인크. | 바이러스 치료법의 강화를 위한 세포-기반 비히클 |
| WO2019241758A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-19 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Pd-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| WO2020047161A2 (en) | 2018-08-28 | 2020-03-05 | Actym Therapeutics, Inc. | Engineered immunostimulatory bacterial strains and uses thereof |
| CA3112654A1 (en) | 2018-09-15 | 2020-03-19 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Recombinant poxviruses for cancer immunotherapy |
| CA3116192C (en) | 2018-11-06 | 2025-09-23 | Calidi Biotherapeutics (Nevada), Inc. | IMPROVED SYSTEMS FOR CELL-MEDIATED ONCOLYTIC VIRAL THERAPY |
| EP3884041A2 (en) | 2018-11-21 | 2021-09-29 | Indapta Therapeutics, Inc. | Methods for expansion of natural killer (nk) cell subset and related compositions and methods |
| CN113727998A (zh) | 2018-11-30 | 2021-11-30 | 高山免疫科学股份有限公司 | Cd86变体免疫调节蛋白及其用途 |
| KR20220004959A (ko) | 2019-02-27 | 2022-01-12 | 액팀 테라퓨틱스, 인코퍼레이티드 | 종양, 종양-상주 면역 세포, 및 종양 미세환경을 콜로니화하기 위해 조작된 면역자극성 박테리아 |
| KR20230088306A (ko) | 2020-04-22 | 2023-06-19 | 인답타 세라뷰틱스 인코포레이티드 | 자연 살해(ｎｋ) 세포 조성물 및 이를 생성하는 방법 |
| WO2022147481A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Ansun Biopharma Inc. | Combination therapy of an oncolytic virus delivering a foreign antigen and an engineered immune cell expressing a chimeric receptor targeting the foreign antigen |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5747469A (en) * | 1991-03-06 | 1998-05-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53 |
| US5670330A (en) * | 1992-09-29 | 1997-09-23 | Mcgill University | Anti-tumor agent assay using PKR |
| DK0689447T3 (da) | 1993-02-16 | 1999-10-18 | Onyx Pharma Inc | Cytopatiske vira til behandling af og profylakse for neoplasia |
| US5846945A (en) | 1993-02-16 | 1998-12-08 | Onyx Pharmaceuticals, Inc. | Cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia |
| ES2310580T3 (es) | 1993-04-30 | 2009-01-16 | Wellstat Biologics Corporation | Composiciones purificadas del virus de la enfermedad de newcastle. |
| JPH09506866A (ja) | 1993-12-14 | 1997-07-08 | ジョーンズ ホプキンス ユニバーシティー スクール オブ メディシン | 医薬として活性のある物質の免疫療法のための放出制御 |
| WO1995032300A1 (en) | 1994-05-23 | 1995-11-30 | University Of Medicine & Dentistry Of New Jersey | Selective biological destruction of tumor cells |
| US5585096A (en) | 1994-06-23 | 1996-12-17 | Georgetown University | Replication-competent herpes simplex virus mediates destruction of neoplastic cells |
| US5840502A (en) | 1994-08-31 | 1998-11-24 | Activated Cell Therapy, Inc. | Methods for enriching specific cell-types by density gradient centrifugation |
| US6777177B1 (en) * | 1997-10-10 | 2004-08-17 | Vanderbilt University | Mammalian genes involved in viral infection and tumor suppression |
| US6110461A (en) | 1997-08-13 | 2000-08-29 | Oncolytics Biotech Inc. | Reovirus for the treatment of neoplasia |
| CA2508238C (en) | 1997-08-13 | 2008-01-15 | Oncolytics Biotech Inc. | Reovirus for the treatment of neoplasia |
| US6136307A (en) * | 1997-08-13 | 2000-10-24 | Oncolytics Biotech Inc. | Reovirus for the treatment of cellular proliferative disorders |
| US7780962B2 (en) * | 1997-10-09 | 2010-08-24 | Wellstat Biologics Corporation | Treatment of neoplasms with RNA viruses |
| EP1905304A3 (en) | 1997-10-09 | 2008-08-13 | Wellstat Biologics Corporation | Treatment of neoplasms with viruses |
| US6475481B2 (en) | 1997-11-18 | 2002-11-05 | Canji Inc | Purging of stem cell products |
| EP1061806A4 (en) | 1998-03-12 | 2001-09-12 | Univ Pennsylvania | PRODUCTIVE CELLS FOR REPLICATION-SELECTIVE VIRUSES FOR TREATING Vicious DISEASES |
| ATE318176T1 (de) | 1998-08-31 | 2006-03-15 | Julian L Ambrus | Verfahren zur entfernung von hiv und anderen viren aus blut |
| CN1477964A (zh) | 1999-04-15 | 2004-02-25 | 应用病毒治疗肿瘤 | |
| DE19934788B4 (de) * | 1999-07-27 | 2004-05-27 | T-Mobile Deutschland Gmbh | Verfahren zur automatischen Anpassung von Daten an die Fähigkeiten einer Nutzer-Software |
| AU782402B2 (en) | 1999-09-17 | 2005-07-28 | Wellstat Biologics Corporation | Oncolytic virus |
| BR0015491A (pt) | 1999-11-12 | 2002-10-15 | Oncolytics Biotech Inc | Métodos para tratar um distúrbio proliferativo celular mediado por ras em um mamìfero, para tratar um neoplasma tendo uma via-ras ativada em um humano, para inibir metástase de um neoplasma tendo uma via-ras ativada em um mamìfero, e para tratar um neoplasma suspeito de ter uma via-ras ativada em um mamìfero, composição farmacêutica, kit, e, método para tratar uma população de células compreendendo um neoplasma suspeito de ter uma via-ras ativada in vitro |
| AUPQ425699A0 (en) | 1999-11-25 | 1999-12-23 | University Of Newcastle Research Associates Limited, The | A method of treating a malignancy in a subject and a pharmaceutical composition for use in same |
| AR028039A1 (es) | 2000-05-03 | 2003-04-23 | Oncolytics Biotech Inc | Remocion de reovirus de celulas neoplasticas intermediadas por ras a partir de composiciones celulares mixtas |
| AR028040A1 (es) | 2000-05-03 | 2003-04-23 | Oncolytics Biotech Inc | Remocion de virus de celulas neoplasticas a partir de composiciones celulares mixtas |
| US7306902B2 (en) * | 2002-06-28 | 2007-12-11 | Oncolyties Biotech Inc. | Oncolytic viruses as phenotyping agents for neoplasms |
| WO2002000233A2 (en) | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Wellstat Biologics Corporation | Purging of cells using viruses |
| WO2002004596A2 (en) | 2000-07-07 | 2002-01-17 | President And Fellows Of Harvard College | Diagnosing and treating cancer cells using mutant viruses |
| ES2445704T3 (es) | 2000-11-09 | 2014-03-04 | Oncolytics Biotech Inc. | Métodos para el tratamiento de trastornos celulares proliferativos |
| US20030138405A1 (en) * | 2001-04-17 | 2003-07-24 | Juan Fueyo | Conditionally replicative adenovirus to target the Rb and Rb-related pathways |
-
2003
- 2003-06-24 US US10/602,024 patent/US7306902B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 SI SI200332164T patent/SI1890151T1/sl unknown
- 2003-06-25 AU AU2003245760A patent/AU2003245760B2/en not_active Expired
- 2003-06-25 ES ES03737795T patent/ES2292981T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 BR BR0311983-1A patent/BR0311983A/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-06-25 EP EP07021569A patent/EP1890151B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 PT PT07021569T patent/PT1890151E/pt unknown
- 2003-06-25 EP EP03737795A patent/EP1520175B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 DK DK07021569.4T patent/DK1890151T3/da active
- 2003-06-25 CA CA2487824A patent/CA2487824C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 WO PCT/CA2003/000951 patent/WO2004003562A2/en not_active Ceased
- 2003-06-25 NZ NZ537116A patent/NZ537116A/en unknown
- 2003-06-25 DK DK03737795T patent/DK1520175T3/da active
- 2003-06-25 AT AT07021569T patent/ATE555388T1/de active
- 2003-06-25 CN CN03815353.XA patent/CN1666105B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 ES ES07021569T patent/ES2385845T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 MX MXPA04012414A patent/MXPA04012414A/es active IP Right Grant
- 2003-06-25 JP JP2004516379A patent/JP2005531306A/ja active Pending
- 2003-06-25 DE DE60317331T patent/DE60317331T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-25 AT AT03737795T patent/ATE377754T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-06-26 TW TW098118162A patent/TWI402345B/zh not_active IP Right Cessation
- 2003-06-26 AR ARP030102317A patent/AR039768A1/es unknown
- 2003-06-26 TW TW098135545A patent/TWI334444B/zh not_active IP Right Cessation
- 2003-06-26 TW TW092117377A patent/TWI327167B/zh not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-12-01 IL IL16549804A patent/IL165498A0/xx active IP Right Grant
-
2007
- 2007-05-30 US US11/807,771 patent/US20080014577A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-08-28 AU AU2008207579A patent/AU2008207579B2/en not_active Expired
-
2010
- 2010-01-05 US US12/652,289 patent/US8222036B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-06-04 IL IL220139A patent/IL220139A/en active IP Right Grant
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2385845T3 (es) | Virus oncolíticos como agentes para la caracterización fenotípica de neoplasmas | |
| US7608257B2 (en) | Sensitization of chemotherapeutic agent resistant neoplastic cells with a virus | |
| JP2005531306A5 (es) | ||
| US7198783B2 (en) | Sensitization of neoplastic cells to radiation therapy with reovirus | |
| HK1112509B (en) | Oncolytic viruses as phenotyping agents for neoplasms | |
| HK1069877B (en) | Oncolytic viruses as phenotyping agents for neoplasms |