ES2296594T3 - Androstanos y pregnanos para la modulacion alosterica del receptor de gaba. - Google Patents

Androstanos y pregnanos para la modulacion alosterica del receptor de gaba. Download PDF

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Abstract

Compuesto de fórmula: (Ver fórmula) en la que R es hidrógeno, halógeno, -O-alquilo C1 - 10, -NR12R13, alquilo, 1-alquinilo opcionalmente sustituido o alquilo sustituido; R1 es un aralquinilo sustituido, arilalquilo, arilalquenilo, arilo, aralquilalquinilo opcionalmente sustituido, alcanoiloxialquinilo, heteroariloxialquinilo opcionalmente sustituido, oxoalquinilo o un cetal del mismo, cianoalquinilo, heteroarilalquinilo opcionalmente sustituido, hidroxialquinilo, alcoxialquinilo, aminoalquinilo, acilaminoalquinilo, mercaptoalquinilo, hemiéster del ácido hidroxialquinildioico o una sal del mismo, o alquiniloxialquinilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, OR11, O-C(O)R14, -C(O)OR14, un grupo ceto o un grupo -NR15R16; R3 es un grupo acetilo, un cetal de un grupo acetilo; un grupo alcoxiacetilo, un grupo alquiltioacetilo, un grupo alquilsulfinilacetilo, un grupo alquilsulfonilacetilo, un grupo aminoacetilo, un grupo trifluoroacetilo; un grupo hidroxiacetilo; un grupo alcoxialquilacetilo; un grupo hidroxialquilo; una sal de hemiéster de ácido hidroxiacetildioico; un grupo alcanoiloxiacetilo; un grupo sulfoxiacetilo; un grupo alquilacetilo; un grupo haloacetilo; un grupo etinilo; un grupo heteroaralquilacetilo opcionalmente sustituido que también puede estar opcionalmente sustituido en el alquileno con un grupo hidroxilo, alcoxilo, alcanoiloxilo o carbalcoxilo; un grupo heterociclilacetilo opcionalmente sustituido; una sal de acetil-tiosulfato; un grupo ciano; un grupo metileno junto con R7; un grupo alquilmetileno junto con R7; o un grupo alcoximetileno junto con R7; R4 es hidrógeno o metilo, R5 es hidrógeno; R6 es hidrógeno, alcanoílo, aminocarbonilo o alcoxicarbonilo; R7 es hidrógeno, halógeno, hidroxilo, -OR11, -O-C(O)-R14 o -C(O)OR14, un grupo metileno junto con R3 o un grupo alcoximetileno junto con R3; R8 es hidrógeno o halógeno; R9 es hidrógeno, halógeno, alquilo, -OR11, arilalcoxilo o -NR15R16; y R10 es...

Description

Androstanos y pregnanos para la modulación alostérica del receptor de GABA.
Referencias cruzadas a solicitudes relacionadas
Esta solicitud es una continuación en parte de documento U.S. con número de serie 08/346.927, presentado el 23 de noviembre de 1994, que es una continuación en parte del documento U.S. con número de serie 08/196.919, presentado el 14 de febrero de 1994, incorporándose el contenido de cada uno de los cuales en su totalidad como referencia al presente documento.
Antecedentes de la invención
La presente invención se refiere a métodos, composiciones y compuestos para modular la excitabilidad cerebral animal (y de seres humanos) mediante el complejo de receptor del ácido gamma-aminobutírico A (GABA_{A})-ionóforo de cloruro (GRC). Específicamente, la presente invención se refiere a métodos, composiciones y compuestos para modular la excitabilidad cerebral a través de la unión al sitio del receptor de neuroesteroides en el GRC.
La excitabilidad cerebral se define como el nivel de alerta de un animal, un continuo que oscila desde el coma hasta las convulsiones, y está regulado por diversos neurotransmisores. En general, los neurotransmisores son responsables de la regulación de la conductancia de iones a través de las membranas neuronales. En reposo, la membrana neuronal tiene un potencial (o voltaje de membrana) de aproximadamente -80 mV, siendo el interior celular negativo con respecto al exterior celular. El potencial (voltaje) es el resultado del equilibrio iónico (K^{+}, Na^{+}, Cl^{-}, aniones orgánicos) a través de la membrana neuronal semipermeable. Los neurotransmisores se almacenan en vesículas presinápticas y se liberan bajo la influencia de potenciales de acción neuronales. Cuando se libera en la hendidura sináptica, un transmisor químico excitador tal como la acetilcolina producirá la despolarización de la membrana (cambio de potencial desde -80 mV hasta -50 mV). Este efecto está mediado por receptores nicotínicos postsinápticos que se estimulan por la acetilcolina para aumentar la permeabilidad de la membrana a iones Na^{+}. El potencial de membrana reducido estimula la excitabilidad neuronal en forma de un potencial de acción postsináptico.
En el caso del GRC, el efecto sobre la excitabilidad cerebral está mediado por GABA, un neurotransmisor. El GABA tiene una profunda influencia sobre la excitabilidad cerebral global porque hasta el 40% de las neuronas en el cerebro utilizan GABA como neurotransmisor. El GABA regula la excitabilidad de neuronas individuales regulando la conductancia de iones cloruro a través de la membrana neuronal. El GABA interacciona con su sitio de reconocimiento sobre el GRC para facilitar el flujo de iones cloruro a favor de un gradiente electroquímico del GRC dentro de la célula. Un aumento intracelular de este anión produce la hiperpolarización del potencial de membrana, haciendo la neurona menos susceptible a entradas excitadoras (es decir, excitabilidad neuronal reducida). En otras palabras, cuanto mayor es la concentración de ion cloruro en la neurona, menor es la excitabilidad cerebral (el nivel de
alerta).
Está bien documentado que el GRC es responsable de la mediación de la ansiedad, actividad convulsiva y sedación. Por tanto, el GABA y los fármacos que actúan como el GABA o facilitan los efectos del GABA (por ejemplo, los barbitúricos y benzodiazepinas (BZ) terapéuticamente útiles tales como Valium) producen sus efectos terapéuticamente útiles interaccionando con sitios reguladores específicos en el GRC.
También se ha observado que una serie de metabolitos esteroideos interaccionan con el GRC para alterar la excitabilidad cerebral (Majewska, M.D. et al., "Steroid hormone metabolites are barbiturate-like modulators of the GABA receptor", Science 232:1004-1007 (1986); Harrison, N.L. et al., "Structure-activity relationships for steroid interaction with the gamma-aminobutyric acid-A receptor complex", J. Pharmacol. Exp. Ther. 241:346-353 (1987)). Antes de la presente invención, la utilidad terapéutica de estos metabolitos esteroideos no estaba reconocida por los investigadores en el campo debido a un entendimiento incompleto de la potencia y el sitio de acción. La invención de los solicitantes se refiere en parte a una aplicación farmacéutica del conocimiento logrado a partir de un entendimiento más desarrollado de la potencia y el sitio de acción de ciertos compuestos esteroideos.
La hormona ovárica progesterona y sus metabolitos han mostrado tener profundos efectos sobre la excitabilidad cerebral (Backstrom, T. et al., "Ovarian steroid hormones: effects on mood, behavior and brain excitability", Acta Obstet. Gynecol. Scand. Suppl. 133-19-24 (1985); Pfaff, D.W. y McEwen, B.S., "Actions of estrogens and progestins on nerve cells", Science 219:808-814 (1983); Gyermek et al., "Structure activity relationship of some steroidal hypnotic agents", J. Med. Chem. 11:117 (1968); Lambert, J. et al., "Actions of synthetic and endogenous steroids on the GABAA receptor", Trends Pharmacol. 8:224-227 (1987)). Los niveles de progesterona y sus metabolitos varían con las fases del ciclo menstrual. Se ha documentado bien que la progesterona y sus metabolitos disminuyen antes del comienzo de la menstruación. También se ha documentado bien la repetición mensual de ciertos síntomas físicos antes del comienzo de la menstruación. Estos síntomas, que se han asociado con el síndrome premenstrual (SPM), incluyen estrés, ansiedad y cefaleas migrañosas (Dalton, K., Premenstrual Syndrome and Progesterone Therapy, 2ª edición, Chicago: Chicago yearbook, 1984). Las pacientes con SPM tienen una repetición mensual de síntomas que están presentes en la premenstruación y ausentes en la posmenstruación.
\newpage
De una manera similar, también se ha correlacionado temporalmente una reducción en la progesterona con un aumento en la frecuencia de convulsiones en pacientes epilépticas (es decir, epilepsia catamenial; Laidlaw, J., "Catamenial epilepsy", Lancet, 1235-1237 (1956)). Se ha observado una correlación más directa con una reducción en los metabolitos de la progesterona (Rosciszewska et al., "Ovarian hormones, anticonvulsant drugs and seizures during the menstrual cycle in women with epilepsy", J. Neurol. Neurosurg. Psych. 49:47-51 (1986)). Además, para pacientes con epilepsia menor generalizada primaria, la incidencia temporal de las convulsiones se ha correlacionado con la incidencia de los síntomas del síndrome premenstrual (Backstrom, T. et al., "Endocrinological aspects of cyclical mood changes during the menstrual cycle or the premenstrual syndrome", J. Psychosom. Obstet. Gynaecol. 2:8-20 (1983)). Se ha hallado que el esteroide desoxicorticosterona es eficaz en el tratamiento de pacientes con ausencias epilépticas correlacionadas con sus ciclos menstruales (Aird, R.B. y Gordan, G., "Anticonvulsive properties of deoxycorticosterone", J. Amer. Med. Soc. 145:715-719 (1951)).
Un síndrome también relacionado con niveles bajos de progesterona es la depresión posnatal (DPN). Inmediatamente tras el parto, los niveles de progesterona disminuyen de manera espectacular conduciendo a la aparición de la DPN. Los síntomas de la DPN oscilan desde depresión leve hasta psicosis que requiere hospitalización; la DPN está asociada con ansiedad grave e irritabilidad. La depresión asociada a la DPN no puede tratarse mediante antidepresivos clásicos y las mujeres que experimentan DPN muestran un aumento de la incidencia de SPM (Dalton, K., 1984).
Colectivamente, estas observaciones implican un papel crucial de la progesterona y la desoxicorticosterona, y más específicamente de sus metabolitos, en la regulación homeostásica de la excitabilidad cerebral, que se manifiesta como un aumento en la actividad convulsiva o los síntomas asociados con la epilepsia catamenial, SPM y DPN. La correlación entre los niveles reducidos de progesterona y los síntomas asociados con el SPM, DPN y la epilepsia catamenial (Backstrom et al., 1983; Dalton, K., 1984) ha provocado el uso de progesterona en su tratamiento (Mattson et al., "Medroxyprogesterone therapy of catamenial epilepsy", en Advances in epileptology: XVth Epilepsy international Symposium, Raven Press, Nueva York, 279-282, 1984, y Dalton, K., 1984). Sin embargo, la progesterona no es eficaz sistemáticamente en el tratamiento de los síndromes mencionados anteriormente. Por ejemplo, no existe relación dosis-respuesta para la progesterona en el tratamiento del SPM (Maddocks, et al., "A double-blind placebo-controlled trial of progesterone vaginal suppositories in the treatment of premenstrual syndrome", Obstet. Gynecol. 154:573-581 (1986); Dennerstein, et al., British Medical Journal, 290:16-17 (1986)).
El documento US 3.274.179 da a conocer derivados de 3-haloetinil-3-hidroxilo de la serie de androstan-17-ona y pregnan-20-ona, en particular 20-etilendioxi-3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-pregnan-11,20-diona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-pregnan-11,20-diona.
Phillips (Mol. Mech. Gen. Anaesth. Glaxo Symposium 1974 págs. 32-47 y Journal of Steroidal Biochemistry, 1975 Vol. 6 págs. 607-613) describe modificaciones de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-11,20-diona, y los efectos de estas modificaciones sobre la actividad anestésica de los compuestos.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a composiciones y a compuestos para modular la excitabilidad cerebral. Más particularmente, la invención se refiere al uso de derivados de esteroides 3\alpha-hidroxilados, que actúan en un sitio recién identificado en el complejo de GR, para modular la excitabilidad cerebral de manera que aliviarán el estrés, ansiedad, insomnio, trastornos del estado de ánimo (tales como depresión) que pueden tratarse con agentes activos para GR, y actividad convulsiva. Las composiciones y compuestos eficaces para tal tratamiento están dentro del alcance de la invención.
Los compuestos usados en y que forman parte de la invención son moduladores de la excitabilidad del sistema nervioso central tal como está mediada por su capacidad para regular los canales de ion cloruro asociados con el complejo de receptor de GABA_{A}. Los experimentos de los solicitantes han establecido que los compuestos usados en y de la invención tienen actividad anticonvulsiva y ansiolítica similar a las acciones de agentes ansiolíticos conocidos tales como las BZ, pero actúan en un sitio distinto en el complejo de GR.
La relación de los metabolitos endógenos de la progesterona con los procesos asociados con la reproducción (ciclo estral y embarazo) está bien establecida (Marker. R.E., Kamm, O., y McGrew, R.V., "Isolation of epipregnanol-3-one-20 from human pregnancy urine, "J. Am. Chem. Soc. 59:616-618 (1937)). Sin embargo, antes de la presente invención, no estaba reconocido cómo tratar trastornos modulando la excitabilidad cerebral a través del uso de metabolitos de la progesterona y sus derivados. Por tanto, esta invención se refiere a métodos, composiciones y compuestos para tratar trastornos modulando la excitabilidad cerebral usando los compuestos de esta invención. Los trastornos representativos tratados en la presente invención son epilepsia, ansiedad, síndrome premenstrual (SPM), depresión posnatal (DPN), trastornos del estado de ánimo (tales como depresión), que pueden tratarse con agentes activos para GR, e insomnio. Los compuestos de la invención también pueden usarse para inducir anestesia.
Breve descripción de los dibujos
La presente invención puede entenderse mejor y apreciarse sus ventajas por los expertos en la técnica haciendo referencia a los dibujos adjuntos, en los que:
Las figuras 1A y 1B son representaciones gráficas de la unión en tanto por ciento de [^{35}S]t-butilbiciclosforotionato ([^{35}S]TBPS) a las membranas celulares de cerebro de rata frente al logaritmo de la concentración de la alfaxalona y el GABA en diversas concentraciones de (+)bicuculina.
La figura 2 muestra los transcursos temporales para la disociación de [^{35}S]TBPS 2 nM a partir de homogeneizados P_{2} corticales de rata iniciada mediante la adición de TBPS 2 \muM (\blacksquare), 3\alpha5\alphaP 1 \muM (\square), pentobarbital de Na 100 \muM (\bullet) y 3\alpha5\alphaP 1 \muM + pentobarbital de Na 100 \muM (\circ).
La figura 3 es una representación gráfica que muestra el efecto de una dosificación única de pentobarbital sobre la modulación por 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona (3\alpha-5\alpha-P) de la unión a [^{3}H]-flunitrazepam en homogeneizados de hipocampo de rata.
La figura 4 es una representación gráfica del efecto de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (5\alpha-THDOC) y R5020 (promegesterona) sobre la inhibición de la unión a [^{35}S]TBPS en homogeneizados de corteza cerebral de rata.
La figura 5 es una representación gráfica de la correlación entre la unión de TBPS y la actividad electrofisiológica de 15 esteroides 3\alpha-hidroxilados diferentes.
La figura 6 es una representación gráfica del efecto de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona, 5\alpha-pregnan-3\alpha,20\alpha-diol y 5\beta-pregnan-3\alpha,20\beta-diol sobre la inhibición de la unión a [^{35}S]TBPS en homogeneizados de corteza de rata.
La figura 7 es una representación gráfica que muestra el efecto de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona, 5\alpha-pregnan-3\alpha,20\alpha-diol y 5\beta-pregnan-3\alpha,20\beta-diol sobre la corriente provocada por GABA en ovocitos de Xenopus a los que se les inyectó la subunidad \alpha1\beta1\gamma2L del receptor de GABA recombinante humano.
La figura 8 es un gráfico de líneas del número de transiciones de luz a oscuridad que se producen en el plazo de diez minutos desde la inyección de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona.
Las figuras 9A y 9B son dos gráficos de líneas de (A) las entradas y(B) el tiempo de brazos abiertos durante un periodo de prueba de cinco minutos de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona en la prueba de laberinto en cruz elevado.
La figura 10 es un gráfico de líneas del cambio en ratas castigadas que responden desde el nivel inicial para 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona en la prueba de Geller-Seifter.
La figura 11 es un gráfico del transcurso temporal de la actividad anti-metrazol de varios profármacos de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas
Los compuestos de y usados en la invención son derivados de diversos pregnanos 3\alpha-hidroxilados y androstanos 3\alpha-hidroxilados, y derivados de éster, éter, sulfonato, sulfato, fosfonato, fosfato, oxima, tiosulfato, heterociclilo y heteroarilo de los mismos, y derivados denominados como profármacos. La expresión "profármaco" indica un derivado de un fármaco de acción directa conocido, derivado que tiene características de administración y un valor terapéutico mejorados comparado con el fármaco, y se transforma en el fármaco activo mediante un proceso enzimático o químico; véase Notari, R.E., "Theory and Practice of Prodrug Kinetics", Methods in Enzymology, 112:309-323 (1985); Bodor, N., "Novel Approaches in Prodrug Design", Drugs of the Future, 6(3):165-182 (1981); y Bundgaard, H., "Design of Prodrugs: Bioreversible-Derivatives for Various Functional Groups and Chemical Entities", en Design of Prodrugs (H. Bundgaard, ed.), Elsevier, Nueva York (1985). Debe indicarse que algunos de los derivados sintéticos que forman parte de la presente invención pueden no ser verdaderos profármacos porque, además de las características anteriores, también tienen actividad intrínseca. Sin embargo, para los fines de esta solicitud, se denominarán como profármacos.
Los estudios de los inventores (Gee, K.W. et al., "GABA-dependent modulation of the Cl ionophore by steroids in rat brain", European Journal of Pharmacology, 136:419-423, 1987) han demostrado que los esteroides 3\alpha-hidroxilados usados en la invención son varios órdenes de magnitud más potentes que los otros que se han notificado (Majewska, M.D. et al. (1986) y Harrison, N.L. et al. (1987)) como moduladores del complejo de GR. Majewska et al. y Hanison et al. enseñan que los esteroides 3\alpha-hidroxilados-5-reducidos sólo son capaces de niveles de eficacia mucho menores. Los datos experimentales in vitro e in vivo demuestran que la alta potencia de estos esteroides les permite ser terapéuticamente útiles en la modulación de la excitabilidad cerebral a través del complejo de GR. Los esteroides más potentes útiles en la presente invención incluyen derivados de metabolitos principales de la progesterona y desoxicorticosterona. Estos esteroides pueden usarse específicamente para modular la excitabilidad cerebral en el estrés, ansiedad, insomnio, trastornos del estado de ánimo (tales como depresión) que pueden tratarse con agentes activos de GR, y trastornos convulsivos de manera terapéuticamente beneficiosa. Además, los inventores han demostrado que estos esteroides interaccionan en un único sitio en el complejo de GR que es distinto de otros sitios de interacción conocidos (es decir, barbitúricos, BZ y GABA) en los que se habían logrado previamente efectos terapéuticamente beneficiosos sobre el estrés, ansiedad, trastornos del sueño, del estado de ánimo y trastornos convulsivos (Gee, K.W. y Yamamura, H.L, "Benzodiazepines and Barbiturates: Drugs for the Treatment of Anxiety, Insomnia and Seizure Disorders", en In Central Nervous System Disorders, páginas 123-147, D.C. Horvell, ed., 1985; Lloyd, K.G. y Morselli, P.L., "Psychopharmacology of GABAergic Drugs", en Psychopharmacology: The Third Generation of Progress, páginas 183-195, H.Y. Meltzer, ed., Raven Press, N.Y., 1987). Estos compuestos son deseables por su duración, potencia y actividad oral (junto con otras formas de administración).
Los derivados esteroideos de esta invención son aquéllos que tienen una de las siguientes fórmulas estructurales (I):
\vskip1.000000\baselineskip
1
en la que R, R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7}, R_{8}, R_{9} y R_{10} se definen adicionalmente en el presente documento y las líneas de puntos son enlaces sencillos o dobles.
La presente invención también incluye ésteres y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I, incluyendo sales de adición de ácido. Se cree que el 3\alpha-hidroxilo también puede enmascararse como un éster farmacéuticamente aceptable debido al hecho de que el éster se escindirá a medida que el profármaco se convierta en la forma de fármaco. Éstos se denominan en el presente documento como ésteres escindibles.
Definiciones
Según la presente invención y tal como se usa en el presente documento, los siguientes términos se definen con el siguiente significado, a menos que se indique explícitamente lo contrario.
El término "alquilo" se refiere a grupos alifáticos saturados que incluyen grupos de cadena lineal, de cadena ramificada y cíclicos, todos los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos. Los grupos alquilo adecuados incluyen metilo, etilo y similares y pueden estar opcionalmente sustituidos.
El término "alquenilo" se refiere a grupos insaturados que contienen al menos un doble enlace carbono-carbono e incluye grupos de cadena lineal, de cadena ramificada y cíclicos, todos los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos.
El término "alquinilo" se refiere a grupos hidrocarbonados insaturados que contienen al menos un triple enlace carbono-carbono e incluye grupos de cadena lineal y de cadena ramificada que pueden estar opcionalmente sustituidos. Los grupos alquinilo adecuados incluyen propinilo, pentinilo y similares que pueden estar opcionalmente sustituidos con ciano, acetoxilo, halógeno, hidroxilo o ceto. Los grupos alquinilo preferidos tienen de cinco a dieciocho átomos de carbono. Grupos alquinilo más preferidos tienen de cinco a doce átomos de carbono. Los grupos alquinilo más preferidos tienen de cinco a siete átomos de carbono.
El término "alcoxilo" se refiere al éter -OR en el que R es alquilo.
El término "ariloxilo" se refiere al éter -OR en el que R es arilo.
El término "arilo" se refiere a grupos aromáticos que tienen al menos un anillo que tiene un sistema electrónico pi conjugado e incluye arilo y biarilo carbocíclicos, ambos de los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos.
El término "arilo carbocíclico" se refiere a grupos en los que los átomos de anillo del anillo aromático son átomos de carbono. Los grupos arilo carbocíclicos incluyen grupos fenilo y naftilo opcionalmente sustituidos. El fenilo sustituido tiene preferiblemente de uno a tres, cuatro o cinco sustituyentes, siendo tales ventajosamente alquilo inferior, amino, amido, ciano, éster de carboxilato, hidroxilo, alcoxilo inferior, halógeno, acilo inferior y nitro.
El término "aralquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo. Los grupos aralquilo adecuados incluyen bencilo y similares, y pueden estar opcionalmente sustituidos.
El término "alcanoiloxilo" se refiere a -O-C(O)R, en el que R es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo.
El término "carbalcoxilo" se refiere a -C(O)O, en el que R es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo.
El término "carboxamido" se refiere a -C(O)NRR_{1}, en el que R y R_{1} se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo.
El término "dialquilamino" se refiere a -NRR'' en el que R y R'' son independientemente grupos alquilo inferior o juntos forman el resto de un grupo morfolino. Los grupos dialquilamino adecuados incluyen dimetilamino, dietilamino y morfolino.
El término "acilo" se refiere al grupo alcanoílo -C(O)R en el que R es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo.
El término "amino" se refiere a NRR', en el que R y R' son independientemente hidrógeno, alquilo inferior y se unen entre sí para dar un anillo de 5 o 6 miembros, por ejemplo anillos de pirrolidina o piperidina.
El término "opcionalmente sustituido" o "sustituido" se refiere a grupos sustituidos con de uno a tres, cuatro o cinco sustituyentes, seleccionados independientemente de alquilo inferior (acíclico y cíclico), arilo (carboarilo y heteroarilo), alquenilo, alquinilo, alcoxilo, halógeno, haloalquilo (incluyendo trihaloalquilo, por ejemplo trifluorometilo), amino, mercapto, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, nitro, alcanoílo, alcanoiloxilo, alcanoiloxialcanoílo, alcoxicarboxilo, carbalcoxilo (-COOR, en el que R es alquilo inferior), carboxamido (-CONRR', en el que R y R' son independientemente alquilo inferior), formilo, carboxilo, hidroxilo, ciano, azido, ceto y cetales cíclicos del mismo, alcanoilamido, heteroariloxilo, heterocarbocicliloxilo y sales de éster de hemisuccinato de los mismos.
El término "inferior" al que se hace referencia en el presente documento junto con radicales o compuestos orgánicos define tales como de uno hasta e incluyendo diez, preferiblemente hasta e incluyendo seis, y ventajosamente de uno a cuatro átomos de carbono. Tales grupos pueden ser de cadena lineal, de cadena ramificada o cíclicos.
El término "heterocíclico" se refiere a radicales que contienen carbono que tienen anillos de cuatro, cinco, seis o siete miembros y uno, dos o tres heteroátomos de O, N o S, por ejemplo tiazolidina, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, pirrolidina, piperidina, quinuclidina, ditiano, tetrahidropirano, \varepsilon-caprolactona, \varepsilon-caprolactama, \varpi-tiocaprolactama y morfolina.
El término "heteroarilo" se refiere a radicales insaturados cíclicos de 5 a 14 miembros que contienen carbono que contienen uno, dos, tres o cuatro átomos de O, N o S y que tienen 6, 10 o 14 electrones \pi deslocalizados en uno o más anillos, por ejemplo piridina, oxazol, indol, purina, pirimidina, imidazol, bencimidazol, indazol, 2H-1,2,4-triazol, 1,2,3-triazol, 2H-1,2,3,4-tetrazol. 1H-1,2,3,4-tetrazol, benzotriazol, 1,2,3-triazolo[4,5-b]piridina, tiazol, isoxazol, pirazol, quinolina, citosina, timina, uracilo, adenina, guanina, pirazina, ácido picolínico, picolina, ácido furoico, furfural, alcohol butílico, carbazol, 9H-pirido[3,4-b]indol, isoquinolina, pirrol, tiofeno, furano, 9(10H)-acridona, fenoxacina y fenotiazina, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido tal como se trató anteriormente.
La expresión "ácidos dioicos" se refiere a grupos alquileno C_{1-5} sustituidos con dos grupos carboxilo, por ejemplo ácido malónico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido pimélico y ácido subérico. Las sales de hemiéster de los ácidos dioicos incluyen las sales de sodio, litio, potasio, magnesio y calcio de los mismos.
La expresión "sal de \beta-acetil-tiosulfato" se refiere y pretende incluir las sales de sodio, litio, potasio, magnesio y calcio de los mismos.
La expresión "ésteres o sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a ésteres o sales de fórmula I derivados de la combinación de un compuesto de esta invención y un ácido o una base orgánicos o inorgánicos.
Según la presente invención, los cetales incluyen diéteres de alcanoles inferiores, por ejemplo dimetil y dietilcetales, así como cetales cíclicos que incluyen diéteres de alcanodioles C_{2-3}, por ejemplo etilencetales y propilencetales.
Los sustituyentes en los compuestos de fórmula I tienen los siguientes valores:
\quad
R es hidrógeno, halógeno, 1-alquinilo opcionalmente sustituido, alcoxilo inferior, alquilo, dialquilamino o alquilo sustituido;
\quad
R_{1} es un aralquinilo sustituido, arilalquilo, arilalquenilo, arilo, aralquilalquinilo opcionalmente sustituido, alcanoiloxialquinilo, heteroariloxialquinilo opcionalmente sustituido, oxoalquinilo o un cetal del mismo, cianoalquinilo, heteroarilalquinilo opcionalmente sustituido, hidroxialquinilo, alcoxialquinilo, aminoalquinilo, acilaminoalquinilo, mercaptoalquinilo, hemiéster del ácido hidroxialquinildioico o una sal del mismo, o alquiniloxialquinilo;
\quad
R_{2} es hidrógeno, hidroxilo, alcoxilo, alcanoiloxilo, carbalcoxilo, un grupo ceto o un grupo amino;
\quad
R_{3} es un grupo acetilo, un cetal de un grupo acetilo; un grupo alcoxiacetilo, un grupo alquiltioacetilo, un grupo alquilsulfinilacetilo, un grupo alquilsulfonilacetilo, un grupo aminoacetilo, un grupo trifluoroacetilo; un grupo hidroxiacetilo; un grupo alcoxialquilacetilo, por ejemplo un grupo metoximetilacetilo o un grupo etoximetil-2'-metilenacetilo; un grupo hidroxialquilo, por ejemplo un grupo hidroximetilo, un grupo 1'-hidroxietilo, un grupo 1'-hidroxipropilo o un grupo 2'-hidroxi-2'-propilo; una sal de hemiéster de ácido hidroxiacetildioico, por ejemplo un grupo succiniloxiacetilo; un grupo alcanoiloxiacetilo, por ejemplo un grupo acetoxiacetilo; o un grupo sulfoxiacetilo; un grupo, por ejemplo un grupo metilacetilo; un grupo haloacetilo; un grupo etinilo; un grupo heteroaralquilacetilo opcionalmente sustituido que también puede estar opcionalmente sustituido en el alquileno con un grupo hidroxilo, alcoxilo, alcanoiloxilo o carbalcoxilo; un grupo heterociclil-acetilo opcionalmente sustituido; una sal de acetil-tiosulfato; un grupo ciano; un grupo alquilmetileno (junto con R_{7}); o un grupo alcoximetileno (junto con R_{7});
\quad
R_{4} es hidrógeno o metilo,
\quad
R_{5} es hidrógeno;
\quad
R_{6} es hidrógeno, alcanoílo, aminocarbonilo o alcoxicarbonilo;
\quad
R_{7} es hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxilo, alcanoiloxilo, carbalcoxilo, un grupo metileno (junto con R_{3}), o un grupo alcoximetileno (junto con R_{3});
\quad
R_{8} es hidrógeno o halógeno;
\quad
R_{9} es hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxilo, arilalcoxilo o amino; y
\quad
R_{10} es hidrógeno, halógeno, alquilo, haloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, alcanoiloxilo, carbalcoxilo, ciano, tiociano o mercapto.
Un grupo preferido de compuesto de fórmula I son compuestos en los que R es hidrógeno o alcoxilo inferior. Se prefieren más compuestos en los que R, R_{5}, R_{6}, R_{7}, R_{8}, R_{9} y R_{10} son hidrógeno.
Otro grupo de compuestos preferidos son compuestos de fórmula I en los que R_{1} es aralquinilo sustituido, por ejemplo R_{1} es fenilalquinilo 4-sustituido tal como 4-acetilfeniletinilo, 4-metoxifeniletinilo, 4-N,N-dimetilaminofeniletinilo, 4-cianofeniletinilo, éster etílico de 4-carboxifeniletinilo, 4-N,N-dialquilamidofeniletinilo, o en los que R_{1} es oxoalquinilo, hidroxialquinilo, acetoxialquinilo, cianoalquinilo o alcoxialquinilo.
Un grupo adicional de compuestos preferidos son aquéllos en los que R_{3} es acetilo, hidroxialquilo, hidroxiacetilo, y sus ésteres con ácidos fisiológicamente aceptables. Más preferiblemente, R_{3} es acetilo, \beta-succiniloxiacetilo, alcoxiacetilo o sales de acetil-tiosulfato.
Un grupo adicional de compuestos preferidos son aquéllos en los que:
\quad
R es hidrógeno, flúor, cloro o alcoxilo inferior;
\quad
R_{1} es ariletinilo sustituido;
\quad
R_{2} es hidrógeno, un grupo ceto o un grupo dimetilamino;
\quad
R_{3} es un grupo \beta-acetilo, un dimetilcetal de un grupo \beta-acetilo, un grupo trifluoroacetilo, un grupo \beta-(hidroxi- acetilo), un grupo \beta-metoximetilacetilo, un grupo \beta-(etoxi)metil-2'-metilenacetilo, un grupo \beta-(1'-hidroxietilo), un grupo \beta(1'-hidroxipropilo), un grupo \beta-(2'-hidroxi-2'-propilo), un grupo \beta-succiniloxiacetilo, un grupo de \beta-hidroxiacetilsuccinato de sodio, un grupo \beta-acetoxiacetilo, un grupo \beta-sulfoxiacetilo, un grupo \beta-metilacetilo, un grupo \beta-cloroacetilo o un grupo \beta-etinilo;
\quad
R_{4} es hidrógeno o metilo;
\quad
R_{5}, R_{6}, R_{7}, R_{8}, R_{9} y R_{10} son hidrógeno;
\quad
las líneas de puntos representan todas enlaces sencillos; y
\quad
R_{7} es hidrógeno o, cuando R_{3} es \beta-hidroxiacetilo, R_{7} es hidrógeno o hidroxilo.
Compuestos preferidos adicionales son compuestos de fórmula I que son ésteres de grupos hidroxilo en las posiciones 3, 20 y/o 21. Los ésteres preferidos son los obtenidos a partir de sus correspondientes ácidos y ácidos dioicos: acético, propiónico, maleico, fumárico, ascórbico, pimélico, succínico, glutárico, bismetilensalicílico, metanosulfónico, etano-di-sulfónico, oxálico, tartárico, salicílico, cítrico, glucónico, itacónico, glicólico, p-aminobenzoico, aspártico, glutámico, gamma-amino-butírico, \alpha-(2-hidroxietilamino)propiónico, glicina y otros \alpha-aminoácidos, fosfórico, sulfúrico, glucurónico y 1-metil-1,4-dihidronicotínico.
Se prefieren los siguientes compuestos: 3\alpha-hidroxi-3\beta-feniletinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-feniletinil-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3',4'-dimetoxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-metilfenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-metoxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-carboxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-acetoxiacetilfenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-dimetilaminofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-bifenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-nitrofenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-metoxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-trifluorometilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-clorofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-cianofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'(R/S)-hidroxipentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-bencil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-feniletil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[2-(3',4'-dimetoxifenil)etil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[6'-oxo-1'-heptinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(7'-oxo-1'-octinil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-oxo-1'-pentinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-[5'-(R/S)-hidroxihexinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxibutinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxibutinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-[4'-(N,N-dietilcarboxamido)fenil]etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[5-oxo-1-hexinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 5'-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 3\alpha-hidroxi-3\beta-[5'-oxo-1'-hexinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(5-ciano-1-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(6-hidroxi-1-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de 6'-hemisuccinato de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de 5'-hemisuccinato de 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de 4'-hemisuccinato de 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-ciano-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(5'-acetoxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetoxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetoxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-(6'-acetoxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'-propiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona,
3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-metoxi-1-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-metoxi-1-propinil)-5\alpha-pregnan-20-ona,
3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(4'-piridiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(1'H-1,2,3-triazol-1'-il)-1-pro-
pil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'H-1,2,3-triazol-2'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-tienil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3'-fenil-1'-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3'-fenilpropil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(1'H-pirazol-1'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(3'-acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(3'-acetoxi-3'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, S-[3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-hidroxibutinil)-5\beta-pregnan-20-on-21-il]tiosulfato de sodio y 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletiletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona y sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona.
Los esteroides neuroactivos más preferidos incluyen 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-19-norpregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-19-norpregnan-20-ona, 3\beta-(4'-dimetilaminofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-bifenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-metoxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-trifluorometilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-24-ona, 3\beta-(4'-clorofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-[4'(R/S)-hidroxipentinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxibutinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-hidroxibutinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'H-1,2,3-triazol-2'-il)-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona y sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona.
Los esteroides neuroactivos especialmente preferidos incluyen 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-dimetilaminofenil)etil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4-bifenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxibutinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxibutinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'H-1,2,3-triazol-2'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\beta-[4'(R/S)-hidroxipentinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
Métodos sintéticos
Los compuestos según la invención pueden prepararse mediante cualquier método convencional, por ejemplo usando técnicas convencionales tales como las descritas en "Steroid Reactions", Djerassi, publicado en 1963 por Holden-Day, Inc., San Francisco o en "Organic Reactions in Steroid Chemistry", Fried y Edwards, publicado en 1972 por Van Nostrand-Reinhold Co., Nueva York.
Métodos generales
Se prepararon 20-hidroxi-pregnanos mediante la reducción de 20-ceto-prepanos con agentes reductores convencionales.
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Se prepararon 21-hemisuccinatos a partir de derivados de pregnan-20-ona que se bromaron en primer lugar con bromo molecular para obtener los correspondientes 21-bromopregnanos. Los compuestos de bromo se hicieron reaccionar entonces son diversos ácidos dioicos, tales como ácido succínico, en presencia de una amina para producir 21-hidroxiésteres. Los ésteres resultantes a partir de los ácidos dioicos se convirtieron entonces en sus sales de sodio por medios convencionales.
Pueden prepararse compuestos 21-oxigenados de este tipo mediante una secuencia de reacciones en la que se oxida una pregnan-20-ona con tetraacetato de plomo para dar un derivado de 21-acetoxilo, hidrólisis del acetato para dar un 21-alcohol y acilación con un derivado de ácido carboxílico apropiado, por ejemplo un anhídrido o cloruro de ácido u otro reactivo que puede sustituir el hidrógeno del grupo hidroxilo, tal como cloruro de metanosulfonilo.
Pueden formarse pregn-17-enos mediante la reacción de un 17-cetoesteroide con un reactivo de Wittig tal como el iluro derivado del tratamiento de un bromuro de n-propiltrifenilfosfonio con una base fuerte tal como t-butóxido de potasio.
Ejemplo 1 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(2'-feniletil)-5\beta-pregnan-20-ona
Se disolvió una solución de 3\alpha-hidroxi-3\beta-feniletinil-5\beta-pregnan-20-ona (44 mg) en EtOAc (12 ml), se añadió Pd/C (5%, 12 mg) y se hidrogenó la mezcla a 400 Kpa de presión durante la noche a t.a. La filtración del catalizador seguida de la evaporación del disolvente produjo el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice para aislar el compuesto de título puro (33 mg); p.f. 153-154ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,4.
Ejemplo 2 3\alpha-(3',4'-Dimetoxifeniletinil)-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona y 3\beta-(3',4'-dimetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 2,2-dibromo-1-(3',4'-dimetoxifenil)eteno (preparada mediante la reacción de Wittig de 3,4-dimetoxibenzaldehído con tetrabromuro de carbono en presencia de trifenilfosfina) (966 mg, 3 mmol) en THF seco (15 ml) bajo N_{2} con n-BuLi (2,5 M en THF, 6 mmol, 2,4 ml) a -78ºC. Se agitó la mezcla a esta temperatura durante 2 horas y se añadió gota a gota una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (720 mg, 2 mmol) en THF seco (10 ml) durante un periodo de 30 min. Tras agitar la mezcla resultante a -78ºC durante 2 horas, se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación a t.a. durante otra hora. Entonces se extinguió con solución de HCl 2 N (1 ml) a -10ºC. Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (10 ml) se agitó la solución a t.a. durante 2 horas. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (1,2 g). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con la mezcla tolueno:acetona (96:4) dio un compuesto de fenilacetileno, que no se caracterizó. La elución adicional con el mismo disolvente produjo 3\alpha-(3',4'-dimetoxifeniletinil)-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (120 mg) como una primera fracción, y 3\beta-(3',4'-dimetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona como una segunda fracción (430 mg); p.f. 82-88ºC.
Se usó un método análogo para preparar: 3\beta-(4'-metoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-clorofeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(2'-metoxifeniletinil)-30-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-bifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-dimetilaminofeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; y 3\beta-(4'-cianofeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
Ejemplo 3 3\beta-(3',4'-Dimetoxifeniletil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se saturó previamente una mezcla de Pd/C (5%, 28 mg) y EtOAc (12 ml) con hidrógeno agitándola bajo hidrógeno durante 10 min. Entonces se añadió una solución de 3\beta-(3',4'-dimetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (185 mg) en EtOAc (5 ml) y se hidrogenó la mezcla a 300 Kpa de presión durante la noche a t.a. La filtración del catalizador seguida de la evaporación del disolvente produjo el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexano: acetona 4:1) para aislar el compuesto del título puro (135 mg); CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,14.
Ejemplo 4 3\beta-(4'-Nitrofeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 2,2-dibromo-1-(4-nitrofenil)eteno (preparada mediante la reacción de Wittig de 4-nitrobenzaldehído con tetrabromuro de carbono en presencia de trifenilfosfina) (296 mg, 1 mmol) en THF seco (20 ml) se trató bajo N_{2} con n-BuLi (2,5 M en THF, 2 mmol, 0,8 ml) a -95ºC. Se agitó la mezcla a de -80 a -100ºC durante 0,5 horas y entonces se añadió gota a gota una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (120 mg, 0,5 mmol) en THF seco (10 ml) durante un periodo de 10 min. Tras agitar la mezcla resultante a -80ºC durante 1 hora, y luego a 0ºC durante 1 hora más, se extinguió con solución de NH_{4}Cl (3 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (10 ml) se agitó la solución a t.a. durante 1 hora. Se añadió solución saturada de NHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con CH_{2}Cl_{2}. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (400 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (96:4) dio el compuesto del título como un sólido marrón (70 mg); CCF R_{f} (tolueno:acetona 95:5) = 0,18.
Ejemplo 5 3\beta-Hidroxi-fenil-5\beta-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (720 mg, 2 mmol) en 15 ml de THF seco se trató con bromuro de fenilmagnesio (3 M en THF, 6 mmol, 2 ml) a 70ºC. Tras agitar la mezcla a esta temperatura durante 3 horas y luego a t.a. durante 2 horas, se extinguió con HCl 2 N (1 ml). Se eliminó el disolvente y se disolvió el residuo en acetona (20 ml). Tras añadir HCl 1 N (5 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 horas. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con CH_{2}Cl_{2}. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (1,3 g). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio una 3\alpha-fenil-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (420 mg) como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\beta-fenil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (185 mg), p.f. 182-184ºC.
Ejemplo 6 3\beta-Hidroxi-3\alpha-bencil-5\beta-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-bencil-5\beta-pregnan-20-ona
Se diluyó una solución de bromuro de bencilmagnesio (2 M en THF, 2 mmol. 1 ml) con THF (15 ml) y se trató gota a gota con una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (360 mg, 1 mmol) en THF seco (15 ml) a -60ºC. Tras agitar la mezcla a esta temperatura durante 1 hora y luego a t.a. durante 15 horas, se extinguió con HCl 2 N (1 ml). Se eliminó el disolvente y se disolvió el residuo en acetona (20 ml): Tras añadir HCl 1 N (5 ml) se agitó la solución a t.a. durante 30 min. Se neutralizó con NaOH 2 N. Se recogió mediante filtración el sólido precipitado, se lavó con agua y se secó para producir 3\beta-hidroxi-3\alpha-bencil-5\beta-pregnan-20-ona (238 mg). Se extrajo el filtrado con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para dar el producto bruto (160 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio 3\beta-hidroxi-3\alpha-bencil-5\beta-pregnan-20-ona (40 mg) como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-bencil-5\beta-pregnan-20-ona (30 mg), que se cristalizó en hexano:CH_{2}Cl_{2} (4:1) como varillas incoloras (15 mg); p.f. 133-141ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 9:1) = 0,5.
Ejemplo 7 3\beta-[3'(R/S)-Hidroxibutinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 3 (R/S)-hidroxibutino (0,470 ml, 6 mmol) en THF seco (15 ml) se trató con n-BuLi (2,5 M en THF, 12 mmol, 4,8 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a esta temperatura durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (1,08 g, 3 mmol) en THF seco (30 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la mezcla a t.a. durante otras 1,5 horas. Entonces se extinguió con solución de NH_{4}Cl (3 ml). Se eliminó el disolvente y se disolvió el residuo en acetona (10 ml). Tras añadir HCl 2 N (5 ml), se agitó la solución a t.a. durante 1 hora. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (1,4 g). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (85:15) dio 3\beta-[3'(RS)-hidroxibutinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (145 mg) como un sólido incoloro; CCF R_{f} (tolueno:acetona 4:1)= 0,24.
Se usó un método análogo para preparar: 3\beta-[4'(R/S)-hidroxipentinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
Ejemplo 8 3\beta-(4'-Acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona
Una solución de 4-yodoacetofenona (95 mg, 0,39 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-5\alpha-pregnan-20-ona (106 mg, 0,3 mmol) en pirrolidina desgasificada seca (3 ml) se agitó bajo argón a t.a. Se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a n durante 15 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (15 ml) y se extrajo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (150 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:acetona (4:1) proporcionó 3\beta\beta(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (35 mg) como un sólido incoloro; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,4.
Se usó un método análogo para preparar: 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-trifluorometilfeniletinil)-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-metilfeniletinil)-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-acetoxiacetilfeniletinil)-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(3'-hidroxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-
(2',4'-difluorofeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(pentafluorofeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; y éster etílico de 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-5\beta-pregnan-20-ona.
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Ejemplo 9 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-21-(1'-imidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona
3\alpha-Hidroxi-21-bromo-5\beta-pregnan-20-ona: A un matraz que contenía una solución de 3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (5,15 g, 16,5 mmol) en metanol (100 ml) se le añadió una solución de bromo (1,1 ml) en metanol (30 ml) gota a gota en una velocidad tal para mantener el color marrón del bromo hasta que fue persistente. Entonces se añadió agua (200 ml) y se extrajo la mezcla con CH_{2}Cl_{2} (33x100 ml). Se secaron los extractos combinados sobre Na_{2}SO_{4}. La eliminación del disolvente dio como resultado el producto como un sólido blanco espumoso (6,63 g). Se sintetizaron otras 21-bromo-pregnan-20-onas (3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-21-bromo-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-metil-3\alpha-hidroxi-21-bromo-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-trifluorometil-12-bromo-5\beta-19-nor-pregnan-20-ona) usando el mismo método.
3\alpha-Hidroxi-21-(1'-imidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona: Se calentó una mezcla de 3\alpha-hidroxi-21-bromo-5\beta-pregnan-20-ona (0,86 g) e imidazol (0,37 g) en CH_{3}CN (12 ml) bajo Ar a reflujo durante 1 h y se enfrió hasta 25ºC. Entonces se vertió en un embudo de decantación que contenía solución de NH_{4}Cl (100 ml, ac. sat.) y se extrajo el producto con EtOAc (3x50 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na_{2}SO_{4} y se eliminó el disolvente a vacío. Se aisló el producto puro (0,59 g, 42%) mediante cromatografía en columna ultrarrápida.
Se sintetizaron los compuestos 3\alpha-hidroxi-21-(1'-bencimidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\alpha-hidroxi-21-[1H-(4-metil-5-carbetoxil)-imidazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1'-imidazolil)-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-21-(1'-imidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1H-3,5-dimetilpirazolil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1'-imidazolil)-3\beta-metil-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1'-pirazolil)-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-21-(1'-pirazolil)-5\beta-pregnan-20-ona, 21-(1'-bencimidazolil)-3\alpha-hidroxi-3\beta-metil-5\alpha-pregnan-20-
ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1'-pirazolil)-3\beta-metil-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(pirazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-[1H-(2-metil)imidazol-1-il]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-[1H-(2'-formil)imidazol-1-il]-5-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1H-imidazol-1-il)-3\beta-trifluorometil-5\beta-19-nor-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-21-(pirazol-1-il)-3\beta-trifluorometil-5\beta-19-nor-pregnan-20-ona según el ejemplo 9.
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Ejemplo 10 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-3\beta-metil-21-(1',2',4'-triazolil)-5\alpha-pregnan-20-ona
A una solución de 1,2,4-triazol (146 mg) en THF (15 ml) bajo Ar se le añadió NaH (56 mg) y se agitó la mezcla obtenida a 25ºC durante 20 min. Entonces se añadió una solución de 3\beta-metil-3\alpha-hidroxi-21-bromo-5\alpha-pregnan-20-ona (300 mg) en THF y se agitó la mezcla así obtenida durante 5 horas. Entonces se vertió en un embudo de decantación que contenía agua (40 ml) y se extrajo el producto con CH_{2}Cl_{2} (3x50 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na_{2}SO_{4} y se eliminó el disolvente a vacío. Se aisló el producto puro (187 mg, 64%) mediante cromatografía en columna ultrarrápida.
Se sintetizaron 3\alpha-hidroxi-21-(2'H-1,2,3,4-tetrazol-2'-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(2H-1,2,3-triazol-2-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(9'H-purin-9'-il-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-metil-21(2'H-1',2',3'-triazol-2'-il)-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-21-(1',2',4'-triazoil)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-metil-21-(1',2',3'-triazol-1'-il)-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1',2',4'-triazol-1-il)-5\beta-3-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1'H-1,2,3,4-tetrazol-1'-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-[1H-(4-nitro)imidazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(7'H-purin-7'-il)-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-[1H-(4',5'-diciano)imidazol-1-il)]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-21-(1'-1,2,4-triazol-1-il)-3\beta-trifluorometil-5\beta-19-nor-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-21-[1H-(4',5'-dicloro)imidazol-1-il)]-5\beta-pregnan-20-ona, según los procedimientos expuestos en el ejemplo 10.
Ejemplo 11 3\beta-(4'-Acetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona a. 3\beta-(4'-Hidroxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 2,2-dibromo-1-(4-hidroxifenil)eteno (preparada mediante la reacción de Wittig de 4-hidroxibenzaldehído con tetrabromuro de carbono en presencia de trifenilfosfina) (1,25 mg, 4,5 mmol) en THF seco (25 ml) se trató bajo N_{2} con n-BuLi (2,5 M en THF, 13,5 mmol, 5,4 ml) a 70ºC. Entonces se agitó la mezcla a -70ºC de temperatura durante 0,5 horas, y se añadió gota a gota una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (810 mg, 2,25 mmol) en THF seco (25 ml) durante un periodo de 10 min. Tras agitar la mezcla resultante a -78ºC durante 30 min., se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación a t.a. durante otra hora. Entonces se extinguió con solución saturada de NH_{4}Cl (4 ml) a -10ºC. Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (6 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminó el disolvente bajo presión reducida y el producto bruto (1,3 g) se usó como tal para la etapa siguiente.
b. 3\beta-(4'-Acetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se disolvió el producto bruto de la etapa anterior en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y piridina (3 ml). Se añadió la solución resultante a una mezcla helada de cloruro de acetilo (3 ml) y piridina (3 ml). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 30 min. y se vertió en hielo (50 g). Se añadió HCl 2 N (10 ml) y se diluyó la mezcla con más CH_{2}Cl_{2}. Se separó la fase orgánica, se lavó con agua, salmuera, y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La eliminación del disolvente dio un sólido bruto (2 g) que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95: 5) dio 3\alpha-(4'-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (150 mg). La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\beta-(4'-acetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (530 mg); p.f. 171-176ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,41.
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Ejemplo 12 3\beta-(4'-Acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una solución de 4-yodoacetofenona (60 mg, 0,24 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona (80 mg, 0,24 mmol) en trietilamina desgasificada seca (0,5 ml) se agitó bajo argón a 23ºC. Se añadieron bicloruro de bis(trifenilfosfina)-paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 45 min. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (4 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 3 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (4:1) dio 3\beta-(4'-acetilfenil-etinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona (30 mg) como un sólido incoloro; p.f. 65-67ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,12.
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Ejemplo 13 Éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 4-yodobenzoato de etilo (70 mg, 0,24 mmol) y 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona (80 mg, 0,24 mmol) en trietilamina desgasificada seca (1 ml) se agitó bajo argón a 23ºC. Se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)-paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 1 hora. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (4 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 3 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (4:1) dio éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona (22 mg) como un sólido incoloro; p.f. 164-166ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,27.
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Ejemplo 14 Éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona
Una solución de 4-yodobenzoato de etilo (83 mg, 0,3 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (103 mg, 0,3 mmol) en trietilamina desgasificada seca (1 ml) se agitó bajo argón a 23ºC. Se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)-paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 1 hora. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (4 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 1,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (4:1) dio éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (10 mg) como un sólido incoloro; p.f. 190-192ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,27.
Ejemplo 15 3\beta-[4'-(N,N-dietilcarboxamido)fenil]etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 4-(N,N-dietilcarboxamido)yodobenceno (91 mg, 0,3 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (103 mg, 0,3 mmol) en trietilamina desgasificada seca (1 ml) se agitó bajo argón a 23ºC. Se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)-paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 1 hora. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (4 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 0,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (3:1) dio éster etílico de 3\beta-[4'-(N,N-dietilcarboxamido)fenil]etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (18 mg) como un sólido incoloro; CCF R_{f} (hexano:acetona 3:1) = 0,22.
Ejemplo 16 (1,2-Etanodiil-acetal) cíclico de 3\alpha-hidroxi-3\beta-[5-oxo-1-hexinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de (1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 1-hexin-5-ona (493 mg, 3,52 mmol) en THF seco (15 ml) se trató con n-BuLi (2,5 M en THF, 3 mmol, 1,2 ml) a -60ºC. Tras agitar la mezcla a -78ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (360 mg, 1 mmol) en THF (15 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (3 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (40 ml). Tras añadir HCl 1 N (4 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (700 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (93:7) dio (1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 3\alpha-hidroxi-3\beta-[5-oxo-1-hexinil]-5\beta-pregnan-20-ona (210 mg) como un sólido incoloro; p.f. 130-133ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 9:1) = 0,33.
Ejemplo 17 3\alpha-Hidroxi-3\beta-[5-oxo-1-hexinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Se disolvió en acetona (5 ml) (1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 3\alpha-hidroxi-3\beta-[5-oxo-1-hexinil]-5\beta-pregnan-20-ona (95 mg). Tras añadir HCl 2 N (1 ml) se agitó la solución a t.a. durante 3 horas. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto del título bruto (100 mg), que se cristalizó entonces en hexano-acetona como varillas incoloras, rendimiento 63 mg; p.f. 104-106ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,27.
Se usó un método análogo para preparar 3\alpha-hidroxi-3\beta-[6-oxo-heptinil]-5\beta-pregnan-20-ona, usando 6-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 1-heptin-6-ona.
Ejemplo 18 3\beta-(5-Ciano-1-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 5-cianopentino (0,84 ml, 8 mmol) en THF seco (20 ml) se trató con n-BuLi (2,5 M en THF, 7,8 mmol, 3,2 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de SR-pn.goan 3,20-dioae (720 mg, 2 mmol) en THF (20 ml) y se agitó la mezcla a 78ºC durante 0,5 horas. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (3 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (40 ml). Tras añadir HCl 1 N (4 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (1,55 g). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio 3\alpha-(5-ciano-1-pentinil)-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (170 mg) como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\beta-(5-ciano-1-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (480 mg) como un sólido incoloro; p.f. 134-136ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,3.
Se usó un método análogo para preparar 3\beta-(4-ciano-1-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
Ejemplo 19 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(2-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 2-etinilpiridina (270 mg, 2,6 mmol) en THF seco (15 ml) se trató con n-BuLi (2,5 M en THF, 2,5 mmol, 1 ml) a -60ºC. Tras agitar la mezcla a -78ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (170 mg, 0,47 mmol) en THF (15 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (3 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (2 ml), se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (360 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio la etinilpiridina sin reaccionar como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\beta-(2-piridil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (107 mg) como un sólido incoloro; p.f. 192-195ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 87:13) = 0,21.
Ejemplo 20 3\beta-(6-Hidroxi-1-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una solución de 5-hexin-1-ol (1,35 ml, 12 mmol) en THF seco (15 ml) se trató con n-BuLi (9,6 ml, 2,5 M en THF, 24 mmol) a -65ºC. Tras agitar la mezcla a -78ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona, (1,08 g, 3 mmol) en THF (20 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación a t.a. durante 45 min. Entonces se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (5 ml). Se eliminó el disolvente, se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, solución diluida de NaHCO_{3}, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (1,90 g). Entonces se cristalizó este producto bruto en EtOAc para producir el producto puro como varillas incoloras (890 mg). Entonces se disolvió esto en acetona (120 ml). Tras añadir HCl 2 N (3 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio el hexinol sin reaccionar como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-(6-hidroxi-1-hexinil-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (60 mg), y luego 3\beta-(6-hidroxi-1-hexinil)-3\alpha-
hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (620 mg) como un sólido incoloro; p.f. 132-134ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,23.
Ejemplo 21 Sal sódica de 6'-hemisuccinato de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona a. 6'-Hemisuccinato de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (600 mg, 1,45 mmol) en piridina (5 ml) con anhídrido succínico (600 mg, 6 mmol) y 4-(N,N-dimetil)aminopiridina (20 mg). Se calentó la mezcla hasta 70-75ºC durante 1,25 horas. La CCF mostró una conversión del 100%. Se enfrió hasta t.a. y se vertió en hielo-HCl 2 N. Se extrajeron las fases orgánicas con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,2N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:acetona (7:3) dio 6'-hemisuccinato de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (700 mg): CCF R_{f} (hexano:acetona: AcOH 70:30:0,5) = 0,21.
b. Sal sódica de 6'-hemisuccinato de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una mezcla del hemisuccinato anterior (400 mg), NaHCO_{3} (68 mg), agua (8 ml) y CH_{2}Cl_{2} (1 ml) a t.a. durante 15 min. Se eliminó el disolvente y se liofilizó el residuo para producir la sal sódica como un sólido incoloro (400 mg).
Ejemplo 22 3\beta-(5'-Hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 4-pentin-1-ol (1,1 ml, 12 mmol) en THF seco (15 ml) con n-BuLi (9,9 ml, 2,5 M en THF, 24,5 mmol) a -65ºC. Tras la mezcla a -78ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (1,08 g, 3 mmol) en THF (20 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación a t.a. durante 45 min. Entonces se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (5 ml). Se eliminó el disolvente, entonces se disolvió el residuo en acetona (30 ml). Tras añadir HCl 2 N (7 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona:EtOAc (70:15:15) dio el pentinol sin reaccionar como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (100 mg), y luego 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (650 mg) como un sólido incoloro; p.f. 160-163ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona:EtOAc 70:15:15) = 0,28.
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Se usó un método análogo para preparar: 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-19-nor-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\beta-
[4'(R/S)-hidroxi-1'-pentinil]-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\beta-[3'(R/S)-hidroxi-1'-butinil]-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; y 3\beta-(3'-hidroxi-1'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
Ejemplo 23 Sal sódica de 5'-hemisuccinato de 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona a. 5'-Hemisuccinato de 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (350 mg, 0,87 mmol) en piridina (3 ml) con anhídrido succínico (380 mg, 3,8 mmol) y 4-(N,N-dimetil)aminopiridina (20 mg). Se calentó la mezcla hasta 65-70ºC durante 1 hora. La CCF mostró una conversión del 100%. Se enfrió hasta t.a. y se vertió en hielo-HCl 2 N. Se extrajeron las fases orgánicas con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,2 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (900 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:acetona (7:3) dio 5'-hemisuccinato de 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (350 mg); CCF R_{f} (hexano:acetona:AcOH 70:30:0,5) = 0,25.
b. Sal sódica de 5'-hemisuccinato de 3\beta-(5'-hidroxi-1'pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Una mezcla del hemisuccinato anterior (345 mg), NaHCO_{3} (60 mg), agua (5 ml), THF (2 ml) y CH_{2}Cl_{2} (1 ml) se agitó a t.a. durante 1 hora. Se eliminó el disolvente y se liofilizó el residuo para producir la sal sódica como un sólido incoloro (340 mg).
Se usó un método análogo para preparar sales sódicas de hemisuccinato a partir de: 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-19-nor-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'(R/S)-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3/3-[3'(R/S)-hidroxi-1'-butinil]-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; y 3\beta-(3'-hidroxi-1'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
Ejemplo 24 3\beta-(5'-Acetoxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de piridina (280 mg) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) con cloruro de acetilo (280 mg) a 0-5ºC. Se añadió una solución de 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (130 mg) en CH_{2}Cl_{6} (3 ml). Se continuó la agitación a 0ºC durante 20 min. La CCF mostró una conversión del 100%, por eso, la mezcla se vertió en hielo-HCl 2 N (20 g, 2 ml). Se extrajeron las fases orgánicas con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,2 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (9:1) dio 30-(5'-acetoxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (100 mg); p.f. 84-87ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 70:30) = 0,38.
Ejemplo 25 3\beta-(4'-Acetoxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de piridina (280 mg) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) con cloruro de acetilo (280 mg) a 10ºC. Se añadió una solución de 3\beta-(4'-hidroxi-1'butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (110 mg) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml). Se continuó la agitación a 10ºC durante 30 min. La CCF mostró una conversión del 100%, por eso la mezcla se vertió en hielo-HCl 2 N (20 g, 3 ml). Se extrajeron las fases orgánicas con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,2 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:acetona (4:1) dio 3\beta-(4'-acetoxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (92 mg); p.f. 170-173ºC; CCF R_{f} (hexano: acetona 70:30) = 0,3.
Ejemplo 26 3\beta-(6'Acetoxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de piridina (2 ml) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) con cloruro de acetilo (2 ml) a 0ºC. Se añadió una solución de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (400 mg, 0,96 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml). Se continuó la agitación a 0ºC durante 20 min. La CCF mostró una conversión del 100%, por eso la mezcla se vertió en hielo-HCl 2 N (50 g, 11 ml). Se extrajeron las fases orgánicas con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,2 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (500 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio 3\beta-(6'-acetoxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (130 mg); p.f. 85-87ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 93:7) = 0,2.
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Ejemplo 27 3\alpha-Hidroxi-3\beta-[3(2'-propiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de propargil éter (0,3 ml, 3 mmol) en THF seco (10 ml), se trató con n-BuLi (2,4 M en THF, 3 mmol, 1,25 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona, (360 mg, 1 mmol) en THF (10 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (5 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (40 ml). Tras añadir HCl 1 N (4 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (95:5) dio 3\beta-hidroxi-3\alpha-[3-(2'-propiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona (31 mg) como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'-propiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona (255 mg) como un sólido incoloro; p.f. 103-106ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 95:5) = 0,39.
Ejemplo 28 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(3-metoxi-1-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de metil propargil éter (0,25 ml, 3 mmol) en THF seco (10 ml) con n-BuLi (2,4 M en THF, 2,9 mmol, 1,20 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (185 mg, 0,5 mmol) en THF (10 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 20 min. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (2 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HQ 2 N (2 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (250 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (93:7) dio 3\beta-hidroxi-3\alpha-(3-metoxi-1-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona (19 mg) como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-metoxi-1-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona (115 mg) como un sólido incoloro; p.f. 155-159ºC; CCF R_{f} (hexano: acetona 7:3) = 0,25.
Ejemplo 29 3\alpha-Hidroxi-3\beta-[3-(4'-piridiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de propargil 4-piridil éter (preparada según (Thummel et al, J. Org. Chem. 1978, 43, 4882) (173 mg, 1,3 mmol) en THF seco (15 ml) con n-BuLi (2,5 M en THF, 1,3 mmol, 0,52 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (180 mg, 0,5 mmol) en THF (15 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 20 min. Se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación a t.a. durante 1 hora. Se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (2 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (2 ml) se agitó la solución a t.a. durante 20 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (250 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de CH_{2}Cl_{2}:acetona (90:10) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(4'-piridiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona (145 mg) como un sólido incoloro; p.f. 84-90ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:acetona 85: 15) = 0,17.
Ejemplo 30 3\alpha-Hidroxi-3\beta-[3-(1'H-1,2,3-triazol-1'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 1-(2-propinil)-1H-1,2,3-triazol (preparada mediante la reacción de triazol con bromuro de propargilo) (77 mg, 0,72 mmol) en THF seco (10 ml) con n-BuLi (2,5 M en THF, 0,72 mmol, 0,28 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (130 mg, 0,36 mmol) en THF (10 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (1 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (2 ml) se agitó la solución a t.a. durante 30 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (85:15) dio 3\alpha-hidroxi-30\beta-[3(1'H-1,2,3-triazol-1'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona (56 mg) como un sólido incoloro; p.f. 142-144ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) =
0,33.
Ejemplo 31 3\alpha-Hidroxi-3\beta-[3-(2'H-1,2,3-triazol-2'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 2-(2-propinil)-2H-1,2,3-triazol (preparada mediante la reacción de triazol con bromuro de propargilo) (35 mg, 0,33 mmol) en THF seco (10 ml) con n-BuLi (2,5 M en THF, 0,33 mmol, 0,15 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (60 mg, 0,16 mmol) en THF (10 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (1 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (2 ml) se agitó la solución a t.a. durante 30 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (85:15) dio pregnan-3,20-diona (20 mg) como una primera fracción. La elución adicional con el mismo disolvente produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'H-1,2,3-triazol-2'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona (20 mg) como un sólido incoloro; p.f. 139-140ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,17.
Ejemplo 32 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(2'-tienil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una solución de 4-yodotiofeno (63 mg, 0,3 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (103 mg, 0,3 mmol) en trietilamina desgasificada seca (1 ml) bajo argón a 23ºC. Se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 45 min. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 1 hora. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente, y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (4:1) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-tienil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona (50 mg) como un sólido incoloro; p.f. 205-206ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,35
Se usó un método análogo para preparar 3\alpha-hidroxi-3\beta-(5'-acetil-2'-tienil)tienil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona; p.f. 226-228ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,14.
Ejemplo 33 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(3'-fenil-1'-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3-fenil-1-propino (0,25 ml, 2 mmol) en THF seco (17 ml) con n-BuLi (2,5 M en THF, 2 mmol, 0,8 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 10 min., se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (206 mg, 0,6 mmol) en THF (10 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 20 min. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (5 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (15 ml). Tras añadir HCl 2 N (4 ml) se agitó la solución a t.a. durante 20 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido: Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtSOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre Mg90, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (460 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezclas de tolueno:acetona (85:15) dio el fenilpropino sin reaccionar como una primera fracción. La elución adicional con el mismo disolvente produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3'-fenil-1'-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona (175 mg) como un sólido incoloro; p.f. 124-132ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,46.
Ejemplo 34 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(3'-fenilpropil)-5\beta-pregnan-20-ona
Se hidrogenó una solución del derivado de fenilpropinilo anterior (50 mg) en EtOAc (10 ml) sobre Pd/C (10 mg, 5%) bajo 2 atm. de H_{2} durante 45 min. Entonces se filtró la mezcla a través de una almohadilla pequeña de Celite, y se concentró para producir el compuesto del título como un sólido incoloro (40 mg); p.f. 41-46ºC; R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,48.
Ejemplo 35 3\alpha-Hidroxi-3\beta-[3-(1'H-pirazol-1'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 1-(2-propinil)-1H-pirazol (preparada mediante la reacción de pirazol con bromuro de propargilo) (160 mg, 1,5 mmol) en THF seco (15 ml) con n-BuLi (2,5 M en THF, 1,5 mmol, 0,6 ml) a -70ºC. Tras agitar la mezcla a -75ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,20-diona (180 mg, 0,5 mmol) en THF (15 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (1 ml). Se eliminó el disolvente y entonces se disolvió el residuo en acetona (25 ml). Tras añadir HCl 2 N (2 ml) se agitó la solución a t.a. durante 30 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (9:1) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(1'H-pirazol-1'-il)-1-propinil]-
5\beta-pregnan-20-ona (80 mg) como un sólido incoloro; p.f. 113-115ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 9:1) = 0,19.
Ejemplo 36 3\beta-(3'-Acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una solución de 3-yodoacetofenona (74 mg, 0,3 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (103 mg, 0,3 mmol) en trietilamina desgasificada seca (1 ml) bajo argón a 23ºC. Se añadieron dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II) (5 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 45 min. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 1,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (85:15) dio 3\beta-(3'-acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (30 mg) como un sólido incoloro; p.f. ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0.
Ejemplo 37 3\beta-(3-Acetoxi-3'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de piridina (280 mg) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) con cloruro de acetilo (280 mg) a 0-5ºC. una Se añadió solución de 3\beta-(3'-hidroxi-1'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (130 mg) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml). Se continuó la agitación a 0ºC durante 30 min. La CCF mostró una conversión del 100%, por eso, se vertió la mezcla en hielo-HCl 2 N (20 g, 3 ml). Se extrajeron las fases orgánicas con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,2 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (150 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (4:1) dio 3\beta-(3'-acetoxi-1'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (110 mg); p.f. 132-150ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 70:30) = 0,37
Ejemplo 38 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1-imidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona a. 21-Bromo-3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona (386 mg, 1 mmol) en MeOH (20 ml) se trató con dos gotas de cloruro de acetilo, seguido de bromo (1,2 mmol). Se agitó la mezcla a t.a. durante 2,5 horas y se vertió en hielo-agua. Se recogió el sólido separado mediante filtración, se lavó con agua, se secó (410 mg). Entonces se disolvió este sólido semi-secado en EtOAc y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y eliminación del disolvente dio el derivado de bromo bruto, y se usó como tal para la etapa siguiente.
b. 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1-imidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una suspensión de NaH (138 mg, 95%, 5,46 mmol) en THF (10 ml) con una solución de imidazol (345 mg, 5,1 mmol) en THF (10 ml) a t.a. Tras agitar la mezcla durante 30 min. se añadióuna solución del derivado de bromo bruto (95 mg, 0,2 mmol) en THF (10 ml). Se continuó la agitación a t.a. durante 1 hora. Se añadió solución saturada de NH_{4}Cl y se eliminó el disolvente. Se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (100 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} (95:4,5:0,5) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1-imidazolil)-5\beta-pregnan-20-ona (40 mg) como un sólido incoloro; p.f. 117-119ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} 95:4,5:0,5) 0,21.
Se prepararon de manera similar 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1,2,4-triazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona; p.f. 208-210ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} 95:4,5:0,5) 0,24; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(tetrazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona; p.f. 110-112ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} 96:3,5:0,5) 0,11; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1,2,3-triazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona; p.f. 101-104ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} 95:4,5:0,5) 0,2.
Ejemplo 39 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1-imidazolil)-5\beta-19-norpregnan-20-ona a. 21-Bromo-3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-5\beta-19-norpregnan-20-ona
Se calentó hasta 33ºC una solución de 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-5\beta-19-norpregnan-20-ona (710 mg, 1,9 mmol) en MeOH (60 ml) y se trató con dos gotas de cloruro de acetilo, seguido de bromo (2,28 mmol, 0,116 ml). Se agitó la mezcla a t.a. durante 1,5 horas y se vertió en hielo-agua. Se recogió el sólido separado mediante filtración, se lavó con agua, se secó. Entonces se disolvió este sólido semi-secado en EtOAc y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y eliminación del disolvente dio el derivado de bromo bruto (870 mg), y se usó como tal para la etapa siguiente.
b. 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1-imidaxolil)-5\beta-19-norpregnan-20-ona
Se trató una suspensión de NaH (138 mg, 95%, 5,46 mmol) en THF (10 ml) con una solución de imidazol (345 mg, 5,1 mmol) en THF (10 ml) a t.a. Tras agitar la mezcla durante 30 min. se añadió una solución del derivado de bromo bruto (90 mg, 0,2 mmol) en THF (10 ml). Se continuó la agitación a t.a. durante 1 hora. Se añadió solución saturada de NH_{4}Cl y se eliminó el disolvente. Se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (100 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} (95:4,5:0,5) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutil-1-il)-21-(1-imidazolil)-5\beta-19-norpregnan-20-ona (25 mg) como un sólido incoloro; p.f. 118-127ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NEt_{3} 95:4,5:0,5) 0,28.
Ejemplo 40 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1,2,3-triazol-2-il)-5\beta-19-norpregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1,2,3-triazol-1-il)-5\beta-19-norpregnan-20-ona
Se trató una suspensión de NaH (11 mg, 95%, 0,44 mmol) en THF (10 ml) con una solución de 1,2,3-triazol (30 mg, 0,44 mmol) en THF (10 ml) a t.a. Tras agitar la mezcla durante 30 min. se añadió una solución de la 21-bromo-3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona bruta (100 mg, 0,22 mmol) en THF (10 ml). Se continuó la agitación a t.a. durante 1 hora. Se añadió solución saturada de NH_{4}Cl y se eliminó el disolvente. Se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (100 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de CH_{2}Cl_{2}:acetona (4:1) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(2H-1,2,3-triazol-2-il)-5\beta-19-norpregnan-20-ona (15 mg) como una primera fracción; p.f. 158-160ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:acetona 4:1) 0,36. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-hidroxibutin-1-il)-21-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-5\beta-19-norpregnan-20-ona (15 mg); p.f. 188-190ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:acetona 4:1) 0,2.
Ejemplo 41 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-2\beta-morfolinil-21-[1'2'4'-triazolil)]-5\alpha-pregnan-20-ona
A una solución de 1,2,4-triazol (108 mg, 1,57 mmol) en THF seco (2,5 ml) se le añadió hidruro de sodio (36 mg, 1,50 mmol). Se agitó la mezcla a 25ºC bajo argón durante 0,5 horas. Entonces se añadió 3\alpha-hidroxi-2\beta-morfolinil-21-bromo-5\alpha-pregnan-20-ona (130 mg, 0,27 mmol) y se agitó la mezcla adicionalmente a 25ºC bajo argón durante 2,5 horas. Se añadió agua (20 ml) lentamente a la mezcla de reacción. Se extrajo el producto con acetato de etilo (3 x 25 ml). Se lavaron los extractos combinados con salmuera (20 ml) y agua (3 x 20 ml). Se secó la solución orgánica obtenida sobre sulfato de sodio y se eliminó el disolvente a vacío para dar el producto bruto (130 mg). Se obtuvo el producto puro (90 mg, 71%) mediante cromatografía ultrarrápida (30 g de gel de sílice y 300 ml de disolvente mixto de CH_{2}Cl_{2}:MeOH:Et_{3}N = 95:4,5:0,5, R_{f} = 0,14).
Ejemplo 42 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-21-(1'-uracilo)-5\alpha-pregnan-20-ona
A una suspensión de uracilo (112 mg, 1 mmol) y K_{2}CO_{3}(138 mg, 1 mmol) en DMF (1,5 ml) se le añadió 3\alpha-hidroxi-21-bromo-5\alpha-pregnan-20-ona (400 mg, 1 mmol) y se agitó la mezcla obtenida a 25ºC durante 65 h. Entonces se vertió en un embudo de decantación que contenía agua (60 ml) y acetato de etilo (100 ml). Se eliminó la fase acuosa tras agitar y se obtuvo el sólido blanco en la fase orgánica mediante filtración como el producto (87 mg, 20%). p.f.: 262-265ºC (descomp.).
Ejemplo 43 Ilustrativo
S-(3\alpha-Hidroxi-5\alpha-pregnan-20-on-21-il)tiosulfato de sodio
A una solución de 21-bromo-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (500 mg, 1,26 mmol) disuelta en 50 ml de etanol se le añadió gota a gota una solución de tiosulfato de sodio (199 mg, 1,26 mmol) en 10 ml de agua. Se dejó agitar la reacción a t.a. hasta que la CCF (acetona/diclorometano 1:1) indicó un consumo completo del bromuro de partida. La concentración de la reacción a vacío dio el tiosulfato deseado contaminado con bromuro de sodio. La cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice eluido con un gradiente desde 1:1 hasta 3:1 de acetona/diclorometano) proporcionó 430 mg (75%) del compuesto del título como un sólido blanco.
Se prepararon de manera similar S-(3\alpha-hidroxi-3\beta-metil-5\alpha-pregnan-20-on-21-il)-tiosulfato de sodio, purificado mediante cromatografía ultrarrápida tal como anteriormente, S-(3\alpha-hidroxi-3\beta-metoximetil-5\alpha-pregnan-20-on-21-il)-tiosulfato de sodio, purificado mediante recristalización en metanol/agua 50:1, S-(3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-on-21-il)-tiosulfato de sodio, purificado mediante cromatografía ultrarrápida con gel de sílice y acetona/etanol 3:1, S-[3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-hidroxibutinil)-5\beta-pregnan-20-on-21-il]-tiosulfato de sodio, purificado mediante trituración con acetona caliente, y S-(3\alpha-hidroxi-3\beta-trifluorometil-5\beta-19-norpregnan-20-ona-21-il)-tiosulfato de sodio, purificado mediante trituración con acetona caliente/cloroformo.
Ejemplo 44 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(E)-(2-feniletenil)-5\alpha-pregnan-20-ona Bencil-fenil-sulfóxido
A una solución de sulfuro de bencil-fenilo (Aldrich; 1,068 g, 5,33 mmol) en 25 ml de CH_{2}Cl_{2} a -78ºC se le añadió lentamente una solución de ácido m-cloroperbenzoico (Aldrich, 50-60%; 760 mg, 2,64 mmol si es al 60%) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2}. Tras calentar hasta temperatura ambiente y agitar durante la noche, se añadió la solución a 20 ml de una solución saturada de NaHCO_{3}. Se separó la fase acuosa y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 X 10 ml). Entonces se secaron las fases orgánicas reunidas (MgSO_{4}) y se concentraron. Se sometió el residuo a cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, acetona al 10% /hexano y acetona al 15% /hexano) produciendo el sulfóxido (632 mg, 55%) como un sólido blanco, p.f. 123-126ºC.
20,20-Etilendioxi-3\alpha-hidroxi-3\beta-[[2-(fenilsulfinil)-2-fenil]etil]-5\alpha-pregnano
Se enfrió hasta -10ºC una solución de diisopropilamina (Aldrich, recién destilada en CaH_{2}; 0,5 ml, 361 mg, 3,57 mmol) en 2 ml de THF seco y se trató con una solución 1,6 M de n-BuLi en hexanos (Aldrich; 1,0 ml, 1,6 mmol) añadida gota a gota mediante jeringuilla. Tras 10 min., se enfrió la reacción hasta -75ºC y se añadió gota a gota una solución de bencil-fenil-sulfóxido (347 mg, 1,60 mmol) en 5 ml de THF seco mediante jeringuilla durante 30 min. A la solución amarillo fuerte resultante se le añadieron 297 mg (0,79 mmol) de 20,20-etilendioxi-3(R)-5\alpha-pregnan-3-espiro-2'-oxirano sólido. Se dejó calentar la reacción hasta t.a. y entonces se calentó hasta 50ºC. Tras 5 h, se dejó enfriar la reacción hasta t.a. y se añadió a 30 ml de agua helada. Se extrajo la mezcla resultante con EtOAc (3 x 20 ml). Se extrajeron de nuevo las fases de EtOAc combinadas con una solución saturada de NaCl, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, gradiente desde el 100% de CH_{2}Cl_{2} hasta el 20% de acetona/CH_{2}Cl_{2}.) produciendo el sulfóxido (405 mg, 86%) como una mezcla de dos diastereómeros (basándose en dos protones bencílicos en la ^{1}H RMN).
3\alpha-Hidroxi-3\beta[[2-(fenilsulfinil)-2-fenil]etil]-5\alpha-pregnan-20-ona
Una solución de 20,20-etilendioxi-3\alpha-hidroxi-3\beta-[[2-(fenilsulfinil)-2-fenil]etil]-5\alpha-pregnano (1,30 g, 2,21 mmol) en 15 ml de THF se enfrió en un baño de hielo/agua y se añadió una solución acuosa de HCl 1 N (3 ml) seguida de 2 ml de acetona. Tras agitar a t.a. durante 70 min., se volvió a enfriar la reacción hasta 0ºC y se añadió a una mezcla de EtOAc/agua que contenía 6 ml de una solución saturada de NaHCO_{3}. Se extrajo la fase acuosa dos veces con EtOAc y se extrajeron las fases orgánicas combinadas con una solución saturada de NaCl, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron. Se llevó el residuo a la siguiente etapa sin purificación.
3\alpha-Hidroxi-3\beta-(E)-(2-feniletenil)-5\alpha-pregnan-20-ona
Una suspensión de 3\alpha-hidroxi-3\beta-[[2-fenilsulfinil)-2-fenil]etil-5\alpha-prepan-20-ona (963 mg, 1,76 mmol) en 6 ml de p-cimeno que contenía 0,95 ml de 2,4,6-colidina se calentó a 135ºC durante 1 hora. Tras reposar durante la noche a 0ºC, había precipitado el producto y se aisló mediante filtración. Se lavó el producto bruto con p-cimeno frío (3 x 5 ml) y hexano (un total de 120 ml) y proporcionó 445 mg del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. 209-213ºC.
Ejemplo 45 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-2\beta-trimetilsililetinil-5\alpha-pregnan-20-ona
Se enfrió una solución de trimetilsililacetileno (0,5 ml, 0,347 g, 3,54 mmol) en 4 ml de THF seco hasta -78ºC y se trató con una solución 2,5 M de n-BuLi en hexanos. Se añadió BF_{3}-Et_{2}O puro (0,3 ml, 0,346 g, 2,44 mmol) mediante jeringuilla. Tras agitar a -78ºC durante 5 min., se añadió una solución de 20,20-etilendioxi-5\alpha-pregnan-2\alpha,3\alpha-epóxido (557 mg, 1,54 mmol) en 3 ml de THF seco durante 12 min. Tras 2,5 h adicionales, se añadió la reacción a una solución saturada de NH_{4}Cl. Se extrajo la mezcla resultante con EtOAc (3 x 25 ml). Se lavaron las fases orgánicas combinadas con una solución de salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron bajo presión reducida. Se disolvió la mezcla de reacción bruta en 10 ml de acetona, se enfrió en un baño de hielo/agua y se trató con una solución de HCl 1 N (1 ml). Tras 1 h a t.a. se añadió la reacción a una mezcla de éter/agua que contenía 1 ml de una solución saturada de NaHCO_{3}. Se lavó la fase acuosa dos veces con éter y se lavaron las fases de éter reunidas con una solución saturada de NaCl, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron. La cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, acetona al 12,5% /hexano) proporcionó 249 mg del compuesto del título como un sólido blanco, p.f. 164-167ºC.
Se usó el procedimiento anterior para la preparación de 3\alpha-hidroxi-2\beta-(3'-metoxi-1'-propinil)-5\alpha-pregnan-20-ona.
La hidrólisis del compuesto de trimetilsililo con K_{2}CO_{3}/MeOH dio 3\alpha-hidroxi-2\beta-etinil-5\alpha-pregnan-20-ona como un sólido blanco, p.f. 179-189ºC (descomp.).
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Ejemplo 46 Ilustrativo
3\alpha,21-Dihidroxi-3\beta-etinil-5\beta-pregnan-20-ona a. 21-Bromo-3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (3 g, 8,77 mmol) en MeOH (110 ml) con dos gotas de HBr (48%), seguido de bromo (0,5 ml, 10,8 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora y se vertió en hielo-agua. Se recogió el sólido separado mediante filtración, se lavó con agua y se secó (3,2 g). Entonces se disolvió este sólido semi-secado en EtOAc y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y eliminación del disolvente dio el derivado de bromo bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:EtOAc (4:1) dio 21-bromo-3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (3,2 g).
b. 3\alpha,21-Dihidroxi-3\beta-etinil-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución del derivado de bromo anterior (3,2 g) en acetona (100 ml) con ácido trifluoroacético (5,8 ml, 76 mmol) y trietilamina (8,5 ml). Se sometió a reflujo la mezcla durante 30 min. y entonces se añadió sal sódica de ácido trifluoracético (10 g) en porciones durante un periodo de 10 horas. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se añadió una solución de NaHCO_{3} saturado. Se eliminó el disolvente y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:EtOAc (3:2) dio 3\alpha,21-dihidroxi-3\beta-etinil-5\beta-pregnan-20-ona (1,6 g). p.f. 156-157ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 3:1) = 0,2.
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Ejemplo 47 3\beta-(4'-Acetilfeniletinil)-3\alpha-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una solución de 4-yodoacetofenona (1,22 g, 4,44 mmol), 3\alpha,21-dihidroxi-3\beta-etinil-5\beta-pregnan-20-ona (1,59 g, 4,44 mmol) en trietilamina desgasificada seca (7 ml) bajo argón a 23ºC. Se añadieron cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (15 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 45 min. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (30 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 1,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (4:1) dio 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (1,3 g) como un sólido incoloro; p.f. 181-183ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 3:2) = 0,14.
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Ejemplo 48 Sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona a. 21-Hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (1,3 g, 6,76 mmol) en piridina (8 ml) con anhídrido succínico (680 mg, 2,5 mmol) y 4-(N,N-dimetil)aminopiridina (25 mg). Se calentó la mezcla hasta 70-75ºC durante 2,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100%. Se eliminó la piridina y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,1 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:acetona (7:3) dio 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfenil-etinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona (1,4 g)
b. Sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una mezcla del hemisuccinato anterior (1,5 g, 2,6 mmol), NaHCO_{3} (220 mg, 2,6 mmol), agua (10 ml), y CH_{2}Cl_{2} (16 ml) a temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminó el disolvente y se liofilizó el residuo para producir la sal sódica como un sólido incoloro (1,4 g).
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Ejemplo 49 Ilustrativo
3\alpha,21-Dihidroxi-3\beta-etinil-5\alpha-pregnan-20-ona a. 21-Bromo-3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona
Se trató una solución de etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (2,3 g, 6,72 mmol) en MeOH (80 ml) con dos gotas de HBr (48%), seguido de bromo (0,4 ml, 7,73 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora y se vertió en hielo-agua. Se recogió el sólido separado mediante filtración, se lavó con agua y se secó (2,5 g). Entonces se disolvió este sólido semi-secado en EtOAc y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y eliminación del disolvente dio el derivado de bromo bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:EtOAc (85:15) dio 21-bromo-3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (2,1 g).
b. 3\alpha,21-Dihidroxi-3\beta-etinil-5\alpha-pregnan-20-ona
Se trató una solución del derivado de bromo anterior (2,1 g, 5 mmol) en acetona (40 ml) con ácido trifluoroacético (3,8 ml, 50 mmol) y trietilamina (5,5 ml). Se sometió a reflujo la mezcla durante 30 min. y entonces se añadió sal sódica de ácido trifluoracético (10 g) en partes durante un periodo de 10 horas. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se añadió una solución de NaHCO_{3} saturado. Se eliminó el disolvente y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (1,6 g). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:EtOAc (7:3) dio 3\alpha,21-dihidroxi-3\beta-etinil-5\alpha-pregnan-20-ona (1,5 g), p.f. 214-218ºC; CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,33.
Ejemplo 50 3\beta-(4'-Acetilfeniletinil)-3\alpha-21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona
Una solución de 4-yodoacetofenona (962 mg, 4 mmol), 3\alpha,21-dihidroxi-3\beta-etinil-5\alpha-pregnan-20-ona (1,2 g, 4 mmol) en trietilamina desgasificada seca (7 ml) se agitó bajo argón a 23ºC. Se añadieron cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (15 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 45 min. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 1,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (7:3) dio 3\beta-(4'-)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (750 mg) como un sólido incoloro; p.f. 222-225ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 4:1) = 0,13.
Ejemplo 51 Sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona a. 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetiletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona
Se trató una solución de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (276 mg, 1,4 mmol) en piridina (4 ml) con anhídrido succínico (680 mg, 2,7 mmol) y 4-(N,N-dimetil)aminopiridina (20 mg). Se calentó la mezcla hasta 70-75ºC durante 2,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100%. Se eliminó la piridina a vacío y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con HCl 0,1 N, agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de hexano:acetona (7:3) dio 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (400 mg).
b. Sal sódica de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona
Se agitó una mezcla del hemisuccinato anterior (400 mg, 0,7 mmol), NaHCO_{3} (60 mg, 0,7 mmol), agua (3 ml), y CH_{2}Cl_{2} (5 ml) a temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminó el disolvente y se liofilizó el residuo para producir la sal sódica como un sólido incoloro (390 mg).
Ejemplo 52 3\alpha-Hidroxi-3\beta-(3-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona
Se agitó una solución de 3-bromopiridina (70 mg, 0,44 mmol), 3\beta-etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (150 mg, 0,44 mmol) en dietilamina desgasificada seca (1 ml) bajo argón a 23ºC. Se añadieron cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (10 mg) y CuI (5 mg) y se agitó la mezcla a esta temperatura durante 45 min. Se añadió CH_{2}Cl_{2} (4 ml) y se agitó la mezcla a 23ºC durante 1,5 horas. La CCF mostró una conversión del 100% del material de partida, por eso, se eliminó el disolvente y se purificó el residuo mediante cromatografía sobre gel de sílice. La elución con hexano:acetona (3:1) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona (30 mg) como un sólido incoloro; p.f. 230-35ºC, CCF R_{f} (hexano:acetona 7:3) = 0,24.
Ejemplo 53 21-Bromo-3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)5\beta-pregnan-20-ona
Se calentó una solución de 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona (483 mg, 1,3 mmol) en MeOH (20 ml) hasta 33ºC y se trató con dos gotas de HBr (48%), seguido de bromo (1,43 mmol, 0,73 ml). Se agitó la mezcla a 37ºC durante 1 hora y se vertió en hielo-agua. Se recogió el sólido separado mediante filtración, se lavó con agua y se secó. Entonces se disolvió este sólido semi-secado en EtOAc y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y eliminación del disolvente dio la 21-bromo-3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona bruta (322 mg).
Ejemplo 54 Ilustrativo
3\alpha-Hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)-21-(1,2,3-triazol-2-il)-5\beta-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)-21-(1,2,3-triazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona
Se trató una suspensión de NaH (30 mg, 95%, 1,2 mmol) en THF (10 ml) con una solución de 1,2,3-triazol (69 mg, 1 mmol) en THF (10 ml) a temperatura ambiente. Tras agitar la mezcla durante 30 min. se añadió una solución del derivado de bromo bruto del ejemplo 53 (162 mg, 0,37 mmol) en THF (10 ml). Se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadió solución saturada de NH_{4}Cl y se eliminó el disolvente. Se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO anhidro, se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto (250 mg). Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de CH_{2}Cl_{2}:acetona (6:4) dio 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)-21-(2H-1,2,3-triazol-2-il)-5\beta-pregnan-20-ona (40 mg) como una primera fracción; p.f. 88-191ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:acetona 6:4) 0,56. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-hidroxipropin-1-il)-21-(1H-1,2,3-triazol-1-il)-5\beta-pregnan-20-ona (40 mg); p.f. 135-140ºC; CCF R_{f} (CH_{2}Cl_{2}:acetona 6:4) 0,34.
Ejemplo 55 3\beta-(4'-Hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-11,20-diona
Se trató una solución de 3-butin-1-ol (0,4 ml, 5,2 mmol) en THF seco (15 ml) con n-BuLi (4 ml, 2,5 M en THF, 10 mmol) a -65ºC. Tras agitar la mezcla a -78ºC durante 0,5 horas, se añadió una solución de 20-(1,2-etanodiil-acetal) cíclico de 5\beta-pregnan-3,11,20-triona (800 mg, 2,14 mmol) en THF (20 ml) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 1 hora. Se retiró el baño de enfriamiento y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 45 min. Entonces se extinguió la mezcla con solución de NH_{4}Cl (5 ml). Se eliminó el disolvente, entonces se disolvió el residuo en acetona (30 ml). Tras añadir HCl 2 N (7 ml) se agitó la solución a t.a. durante 15 min. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} para neutralizar el ácido. Se eliminaron los disolventes y se extrajo el residuo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua y salmuera. Tras secar sobre MgSO_{4} anhidro se filtró la solución y se evaporó para producir el producto bruto. Entonces se disolvió este producto bruto en una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y se vertió en una columna de gel de sílice. La elución con mezcla de tolueno:acetona (3:1) dio el butinol sin reaccionar como una primera fracción. La elución adicional con la misma mezcla de disolventes produjo 3\alpha-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\beta-hidroxi-5\beta-pregnan-11,20-diona (100 mg), y luego 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-11,20-diona (400 mg) como un sólido incoloro; p.f. 158-162ºC; CCF R_{f} (tolueno:acetona 3:1) = 0,16.
Para un experto en la técnica será obvio que los compuestos anteriormente descritos pueden estar presentes como mezclas de diastereómeros que pueden separarse en los diastereómeros individuales. La resolución de los diastereómeros puede llevarse a cabo convenientemente mediante cromatografía líquida o de gases o aislamiento de fuentes naturales. A menos que se especifique lo contrario en el presente documento, la referencia en la memoria descriptiva y las reivindicaciones a los compuestos de la invención, tal como se discutió anteriormente, pretende incluir todos los isómeros, o bien separados o bien mezclas de los mismos.
Si los isómeros están separados, la actividad farmacológica deseada predominará con frecuencia en uno de los diastereómeros. Tal como se da a conocer en el presente documento, estos compuestos presentan un alto grado de estereoespecificidad. En particular, aquellos compuestos que tienen la mayor afinidad por el complejo de receptor de GABA son aquellos con esqueletos esteroideos de 3\alpha-hidroxipregnano 3\beta-sustituido.
Los compuestos de y usados en la invención, que siendo las formas de "profármaco" y de acción directa, naturales y sintéticas, farmacéuticamente aceptables, no tóxicas de metabolitos de androstano, progesterona y desoxicorticosterona, tienen hasta la fecha una actividad desconocida en el cerebro en el complejo de receptor de GABA_{A}. La presente invención toma ventaja del descubrimiento de esta actividad y este mecanismo anteriormente desconocido.
Las composiciones farmacéuticas de la invención se preparan en formas farmacéuticas unitarias convencionales incorporando un compuesto activo de la invención o una mezcla de tales compuestos, con un vehículo farmacéutico no tóxico según procedimientos aceptados en una cantidad no tóxica suficiente para producir la actividad farmacodinámica deseada en un sujeto, animal o ser humano. Preferiblemente, la composición contiene el principio activo en una cantidad activa, pero no tóxica, seleccionada desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 500 mg de principio activo por unidad de dosificación. Esta cantidad depende de la actividad biológica específica deseada y el estado del paciente. Objetos deseables de las composiciones y métodos de esta invención son en el tratamiento de estrés, ansiedad, SPM, DPN y convulsiones tales como las producidas por la epilepsia, mejorar o prevenir los ataques de ansiedad, tensión muscular y depresión común en pacientes que padecen estas anomalías del sistema nervioso central. Un objeto deseable adicional de la composición y métodos es tratar el insomnio producir actividad hipnótica. Otro objeto deseable de los compuestos y métodos es inducir anestesia, particularmente mediante administración intravenosa.
El vehículo farmacéutico empleado puede ser, por ejemplo, o bien sólido, líquido o de liberación en el tiempo (véase, por ejemplo Remington's Pharmaceutical Sciences, 14ª Edición, 1970). Los vehículos sólidos representativos son lactosa, alabastro, sacarosa, talco, gelatina, agar agar, pectina, goma arábiga, estearato de magnesio, ácido esteárico, celulosa microcristalina, hidrogeles poliméricos y similares. Los vehículos líquidos típicos son propilenglicol, glicofurol, soluciones acuosas y de ciclodextrinas, jarabe, aceite de cacahuete, y aceite de oliva y emulsiones similares. De manera similar, el vehículo o diluyente puede incluir cualquier material de retardo en el tiempo bien conocido en la técnica, tal como monoestearato de glicerol o diestearato de glicerol solo o con cera, microcápsulas, microesferas, liposomas y/o hidrogeles.
Puede emplearse una amplia variedad de formas farmacéuticas. Así, si se usa un vehículo sólido, la preparación puede micronizarse con fresadora de planear, en aceite, conformarse en comprimidos, colocarse en una cápsula recubierta entérica o de gelatina dura en forma granulada o de polvo micronizado, o en forma de un trocisco o pastilla para chupar. Los compuestos de y usados en la invención pueden administrarse también en forma de supositorios para administración rectal. Los compuestos pueden estar mezclados en un material tal como manteca de cacao y polietilenglicoles u otro material no irritante adecuado que es sólido a t.a. pero líquido a la temperatura rectal. Si se usa un vehículo líquido, la preparación puede estar en forma de un líquido, tal como una ampolla, o como una suspensión líquida acuosa o no acuosa. Las formas farmacéuticas líquidas necesitan también conservantes farmacéuticamente aceptables y similares. Además, debido a las bajas dosis que se requerirán basándose en los datos descritos en el presente documento, la administración parenteral, pulverización nasal, administración sublingual y bucal, y parches dérmicos de liberación en el tiempo son también formas farmacéuticas adecuadas para administración tópica.
El método para producir actividad ansiolítica, anticonvulsiva, de alteración del estado de ánimo (tal como antidepresiva) o hipnótica, según esta invención, comprende administrar a un sujeto que necesita tal actividad un compuesto de la invención, preparado normalmente en una composición tal como se describió anteriormente con un vehículo farmacéutico, en una cantidad no tóxica suficiente para producir dicha actividad.
Durante la menstruación, los niveles de metabolitos excretados varían aproximadamente cuatro veces (Rosciszewska, et al.). Por tanto, el tratamiento para controlar los síntomas implica mantener al paciente a un nivel más alto de metabolitos de progesterona que el normal en el estado premenstrual de pacientes con SPM. Los niveles plasmáticos de metabolitos activos y principales se monitorizan durante los periodos premenstruales y postmenstruales del paciente. La cantidad administrada de los compuestos de la invención, o bien individualmente o bien como mezclas de los mismos, se calculan así para alcanzar un nivel que ejercerá una actividad de receptor de GABA_{A} igual o superior al nivel de metabolitos de progesterona en el sujeto normal durante el estado premenstrual.
La vía de administración puede ser cualquier vía que transporte de manera eficaz el compuesto vivo a los receptores de GMA_{A} que han de estimularse. La administración puede llevarse a cabo por vía parenteral, vía enteral, vía rectal, vía intravaginal, vía intradérmica, vía intramuscular, vía sublingual o vía nasal; se prefieren las vías oral, intramuscular y dérmica. Por ejemplo, una dosis en un parche dérmico puede suministrar el principio activo al paciente durante un periodo de hasta una semana. Sin embargo, se prefiere la vía parenteral para el estado epiléptico.
Potencia y eficacia en el sitio de GR
Los datos experimentales in vitro e in vivo muestran que los metabolitos que se producen de manera natural de la progesterona/desoxicorticosterona y sus derivados interaccionan con alta afinidad en un sitio de reconocimiento específico y novedoso en el complejo de GR para facilitar la conductancia de los iones cloruro a través de membranas neuronales sensibles a GABA (Gee et al., 1987 Hanison et al., 1987).
Los expertos en la técnica saben que la modulación de la unión a [^{35}S]t-butilbiciclofosforotionato ([^{35}S]TBPS) es una medida de la potencia y eficacia de fármacos que actúan en el complejo de GR, fármacos que pueden ser de posible valor terapéutico en el tratamiento del estrés, la ansiedad y trastornos convulsivos (Squires, R.F., et al., "[^{35}S]t-Butilcyclo-phophorothionate binds with high affinity to brain-specific sites coupled to a gamma aminobutyric acid-A and ion recognition site", Mol, Pharmacol., 23:326, 1983; Lawrence, L.J., et al., "Benzodiazepine anticonvulsant action: gamma-aminobutyric acid-dependent modulation of the chloride ionophore", Biochem. Biophys. Res. Comm., 123:1130-1137, 1984; Wood, et al., "In vivo characterization of benzodiazepine receptor agonists, antagonists, inverse agonists and agonist/antagonism", Pharmacol, Exp. Ther., 231:572 576, 1984). Se realizaron varios experimentos para determinar la naturaleza de la modulación de [^{35}S]TBPS afectada por los compuestos de la invención. Se encontró que estos compuestos interaccionan con un sitio novedoso en el complejo de GR que no se solapa con los sitios de barbitúricos, benzodiazepinas o cualquier otro sitio conocido previamente. Además, estos compuestos tienen potencia y eficacia elevadas en el complejo de GR, con requisitos estructurales rigurosos para tal actividad. Los compuestos preferidos que son útiles en la presente invención tienen una CI_{50} de 2 \muM o inferior en el ensayo de unión a [^{35}S]TBPS descrito a continuación en el presente documento.
Los procedimientos para realizar este ensayo se describen en detalle en: (1) Gee, et al., 1987; y (2) Gee, K. W., L.J. Lawrence, y H.I. Yamamura, "Modulation of the chloride ionophore by benzodiazepine receptor ligands: influence of gamma-aminobutyric acid and ligand efficacy", Molecular Pharmacology 30:218, 1986. Se realizaron estos procedimientos tal como sigue:
Se extirparon los cerebros de ratas Sprague-Dawley macho inmediatamente tras su sacrificio y se disecaron las cortezas cerebrales sobre hielo. Se preparó un homogeneizado P_{2} tal como se describió previamente (Gee, et al., 1986). Brevemente, se homogeneizaron suavemente las cortezas cerebrales en sacarosa 0,32 M seguido por centrifugación a 1000 x g durante 10 minutos. Se recogió el sobrenadante y se centrifugó a 9000 x g durante 20 minutos. Se suspendió el sedimento P_{2} resultante como una suspensión al 10% (peso húmedo original/volumen) en tampón fosfato de Na/K 50 mM (pH 7,4) NaCl 200 mM para formar el homogeneizado.
Se incubaron alícuotas de cien microlitros (ml) del homogeneizado P_{2} (0,5 miligramos (mg) de proteína) con [^{35}S]TBPS 2 nanomolar (nM) (70-110 curios/milimol; New England Nuclear, Boston, MA) en presencia o ausencia de los esteroides que se producen de manera natural o sus derivados sintéticos que van a someterse a prueba. Se disolvieron los compuestos sometidos a prueba en dimetilsulfóxido (Baker Chem. Co., Phillipsbury, NJ) y se añadieron a la mezcla de incubación en alícuotas de 5 \mul. Se llevó la mezcla de incubación a un volumen final de 1 ml con tampón. Se definió la unión no específica como la unión en presencia de TBPS 2 mM. Se evaluaron el efecto y la especificidad de GABA (Sigma Chem. Co., St. Louis, MO) realizando todos los ensayos en presencia de GABA más (+)bicuculina (Sigma Chem. Co.), mantenidos a 25ºC durante 90 minutos (condiciones de estado estacionario) se terminaron mediante filtración rápida a través de filtros de fibra de vidrio (nº 32, Schleicher y Schuell, Keene, NH). Se cuantificó la radiactividad unida al filtro mediante espectrofotometría de centelleo líquido. Se analizaron los datos cinéticos y las curvas de dosis/respuesta de compuesto/[^{35}S]TBPS mediante regresión no lineal usando un procedimiento iterativo computerizado para obtener valores de constantes de velocidad e CI_{50} (concentración de compuesto a la que se produce la mitad de la inhibición máxima de la unión a [^{35}S]TBPS basal).
Los datos experimentales obtenidos para este ensayo también se publicaron en Gee, et al., 1987. Los datos tratados en esta referencia se muestran como representaciones gráficas en las figuras 1A y 1B. Estas representaciones gráficas muestran el efecto de (+)bicuculina sobre la modulación con el esteroide de pregnano, alfaxalona (1A) y GABA (1B) de la unión de [^{35}S]TBPS 2 nM a corteza cerebral de rata. En estas figuras, (\circ) representa control sin bicuculina; (\bullet) representa bicuculina 0,5 \muM; (\square) representa bicuculina 1,0 \muM; (\blacksquare) representa bicuculina 2,0 \muM; y (\Delta) representa bicuculina 3,0 \muM. En este experimento, se determinó el efecto de (+)bicuculina sobre la capacidad de alfaxalona o GABA para inhibir la unión de [^{35}S]TBPS. Se sabe que la bicuculina es un antagonista competitivo de GABA y se observa un desplazamiento paralelo clásico en las curvas dosis-respuesta en la figura 1B. Por el contrario, el sitio de unión de esteroides identificado por este trabajo es diferente del sitio de GABA/bicuculina en la figura 1A. El desplazamiento en las curvas dosis-respuesta inducido por la bicuculina cuando se produce la inhibición de [^{35}S]TBPS por alfaxalona no es paralelo. Esto indica que los sitios de GABA y esteroides no se
solapan.
Se realizó un segundo conjunto de experimentos para demostrar que los esteroides, barbitúricos y benzodiazepinas no comparten un sitio de unión común en el receptor de GABA. La figura 2 muestra el transcurso temporal para la disociación de [^{35}S]TBPS a partir de homogeneizados P_{2} corticales de rata iniciada mediante la adición de TBPS 2 \muM (\blacksquare), 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona 1 \muM (\square), pentobarbital de Na 100 \muM (\bullet) y 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona 1 \muM + pentobarbital de Na 100 \muM (\circ). Se realizó el ensayo según los procedimientos expuestos anteriormente. Estos datos cinéticos muestran que la disociación de la unión a [^{35}S]TBPS iniciada por la concentración saturante de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona se potencia mediante pentobarbital de Na 100 \muM. Este efecto es una indicación de que 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona (esteroide) y pentobarbital (barbitúrico) se unen a sitios independientes.
El tercer conjunto de experimentos examinó las interacciones entre 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y pentobarbital de Na en la potenciación de la unión a (^{3}H)-flunitrazepam (FLU). Estos experimentos respaldan adicionalmente la reivindicación de que los esteroides no comparten un sitio de acción común con las benzodiazepinas y los barbitúricos. En esta serie de experimentos, el efecto de concentraciones variables de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona sobre la unión a (^{3}H)-FLU en presencia o ausencia de una concentración estimulante de manera máxima de pentobarbital de Na. Puesto que el pentobarbital de Na tiene una eficacia máxima superior a la de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona en la potenciación de la unión a (^{3}H)-FLU, la 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona debe antagonizar en última instancia el efecto de pentobarbital de Na si los dos interaccionan de manera competitiva en el mismo sitio. Esto no es lo que se observó (figura 3). Por tanto, los datos respaldan adicionalmente la conclusión de que ciertos esteroides incluyendo los compuestos de y usados en la invención interaccionan con un sitio novedoso distinto del sitio regulador de barbitúricos o BZ en el complejo de GR. Debido a este sitio de acción independiente, se prevé que estos compuestos esteroideos tendrán perfiles terapéuticos diferentes a los de los barbitúricos y las BZ.
Se seleccionaron diversos compuestos para determinar su potencial como moduladores de la unión a [^{35}S]TBPS in vitro. Se realizaron estos ensayos según los procedimientos tratados anteriormente. Basándose en estos ensayos, se ha establecido los requisitos de estructura-actividad para su interacción específica en el complejo de GR y su potencia y eficacia en orden de importancia. La figura 4 proporciona la inhibición por [^{35}S]TBPS de curvas de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (3\alpha,5\alpha-P), 3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (5\alpha-THDOC) y R5020 (promogesterona) como ejemplos experimentales, mientras que la tabla 1 proporciona la CI_{50} y la inhibición máxima de numerosos compuestos, incluyendo ejemplos de los reivindicados en la solicitud. CI_{50} se define como la concentración de los compuestos para inhibir el 50% de la unión a [^{35}S]TBPS control. Es una indicación de la potencia in vitro de un compuesto. La inhibición máxima es una indicación de la eficacia in vitro de un compuesto.
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TABLA 1
2
3
4
5
Tal como puede observarse a partir de la figura 4 y la tabla 1, la 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, la dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y los compuestos de y usados en la invención tienen baja CI_{50}, que es la concentración necesaria para conseguir un 50% de la inhibición máxima de la unión a [^{35}S]TBPS, mientras que compuestos tales como esteroides sexuales (R5020, estradiol y progesterona), glucocorticoides (corticosterona) y colesterol que tienen una elevada CI_{50} son esencialmente inactivos. Por tanto, se prevé que los esteroides hormonales y el colesterol per se no tendrán ningún valor terapéutico para las indicaciones descritas en el presente documento. Con el fin de distinguir esta clase única de esteroides de los esteroides hormonales, ahora se denominan esteroides neuroactivos. Sin embargo, los esteroides sexuales tales como la progesterona pueden metabolizarse en el organismo para dar esteroides similares a 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona. Por tanto, la progesterona puede considerarse como un profármaco. Los datos de TBPS se correlacionan con los datos sobre la captación de iones de ^{36}Cl potenciada por diversos esteroides 3\alpha-hidroxilados descritos en Purdy RH., et al., "Synthesis, Metabolism, and Pharmacological Activity of 3\alpha-Hydroxy Steroids Which Potentiate GABA-Receptor-Mediated Chloride Ion Uptake in Rat Cerebral Cortical Synaptoneurosomes". J. Med. Chem 33:1572-1581 (1990), incorporado como referencia al presente documento y estos datos también se correlacionan con los datos electrofisiológicos obtenidos midiendo la actividad de un esteroide para potenciar la corriente inducida por GABA en ovocitos a los que se les inyectó receptores de GABA humanos, tal como se muestra en la figura 5. Esto indica que el ensayo de TBPS es una medida aproximada de la capacidad de los esteroides para modular alostéricamente la actividad del canal de Cl^{-}.
Compuestos con eficacia limitada
En cuanto a que la actividad terapéutica deseada debe estar disponible para el paciente con efectos secundarios no deseados mínimos, un aspecto notable de esta invención implica el descubrimiento de agonistas con actividad parcial en aquellos compuestos con un grupo 5\alpha-pregnan-3\alpha,20\alpha-diol, 5\beta-pregnan-3\alpha,20\beta-diol o los derivados y profármacos de estos compuestos. Además, un subconjunto de esteroides neuroactivos distinto a estos dos grupos también muestra eficacia parcial en el ensayo de TBPS (tabla 1). Para los pacientes que desean una mejoría de la ansiedad o las convulsiones, no se desea la hipnosis. Para los pacientes que desean una mejoría del insomnio, no se desea la anestesia. Se esperaba que los compuestos y las actividades descritos como agonistas con actividad parcial tuvieran el efecto deseado con efectos no deseados mínimos.
Para mostrar los agonistas con eficacia limitada, se ilustra en la figura 6 la capacidad de 5\alpha-pregnan-3\alpha,20\alpha-diol y 5\beta-pregnan-3\alpha,20\alpha-diol para modular parcialmente la unión a [^{35}S]TBPS incluso a concentraciones muy altas).
Además, también se muestra la capacidad parcial de estos compuestos para potenciar el aumento mediado por GABA de la corriente de Cl^{-} que se comparó con la de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-22-ona (figura 7) en ovocitos de Xenopus a los que se les inyectó genes del receptor de GABA_{A} humanos.
Cuando se usó el sistema de expresión en ovocitos de Xenopus para someter a prueba la propiedad de eficacia límite de algunos esteroides neuroactivos, se realizó el siguiente procedimiento. Se les inyectó a ovocitos de Xenopus laevis (estadio VI) que se habían "desfoliculado" usando el método de digestión con colagenasa (3 h a 18-23ºC, colagenasa "A" 2 mg ml^{-1} en solución salina de Barth con las sales de Ca^{2+} omitidas) transcritos de ARNc del complejo de subunidades del receptor de GADA_{A} humano \alpha1, \beta1 y \gamma1. El principal complejo de receptor de GABA_{A} se compone de subunidades \alpha\beta\gamma. Se mantuvieron los ovocitos que se inyectaron individualmente en placas de 96 pocillos (200 \mul por pocillo de solución de Barth normal complementada con penicilina 50 U.I. ml^{-1}, estreptomicina 50 mg ml^{-1} y gentomicina 100 mg ml^{-1}) durante hasta 9 días a 19-20ºC. Se registraron las corrientes inducidas por agonista a partir de ovocitos de Xenopus sometidos a fijación de voltaje a un potencial de mantenimiento de -60 mV, usando un amplificador de fijación de voltaje Axoclamp 2 A (Axon Instruments) en el modo de fijación de voltaje de dos electrodos. Se rellenaron los microelectrodos que detectan voltaje y por los que pasa corriente con KCl 3 M, y resistencias de 1-3 MOhms cuando se midieron en la solución salina extracelular habitual. Se superfundieron los ovocitos continuamente con Ringer para ranas (NaCl 120 mM; KCl 2 mM; CaCl_{2} 1,0 mM; HEPES 5 mM pH 7,4) a la velocidad de 5-7 ml min.^{-1} a t.a. (17-21ºC).
Se aplicaron todos los fármacos a través del sistema de perfusión. Se prepararon los esteroides (10^{-2} M) como soluciones madre concentradas o bien en DMSO o bien en etanol y luego se diluyeron con la solución de Ringer a la concentración apropiada. La concentración en DMSO y etanol final fue del 0,2% v/v, una concentración que no tuvo efecto sobre las respuestas provocadas por GABA. Se prepararon las soluciones madre de todos los demás fármacos en solución de Ringer. Las respuestas de corriente de membrana se filtraron con filtro de paso bajo a 100 Hz y se grabaron en cinta magnética usando un grabador de cinta FM (Racal Store 4DS) para el posterior
análisis.
Los compuestos de y usados en la presente invención muestran una eficacia parcial análoga a la de los descritos anteriormente también mostrados en las tablas anteriores.
Beneficios con respecto a la progesterona
Las correlaciones entre los niveles reducidos de progesterona y los síntomas con SPM, DPN y epilepsia catamenial (Backstrom, et al., 1983; Dalton, K., 1984) condujeron al uso de progesterona en su tratamiento (Mattson, et al., 1984; y Dalton, 1984). Sin embargo, la progesterona no es eficaz sistemáticamente en el tratamiento de los síndromes mencionados anteriormente. Por ejemplo, no existe respuesta a la dosis para la progesterona en el tratamiento de SPM (Maddocks, et al., 1987). Estos resultados son predecibles cuando se consideran a la luz de los resultados de los estudios in vitro que demuestran que la progesterona tiene una potencia muy baja en el complejo de GR, tal como se observa en la tabla 1, en comparación con ciertos metabolitos de la progesterona.
El efecto beneficioso de la progesterona está relacionado probablemente con la conversión variable de la progesterona en los metabolitos de la progesterona activos. El uso de metabolitos de la progesterona específicos en el tratamiento de los síndromes mencionados anteriormente es claramente superior al uso de la progesterona basado en la potencia y eficacia elevadas de los metabolitos y sus derivados (véase Gee, et al., 1987, y tabla 1).
Sin efectos secundarios hormonales
También se ha demostrado que los esteroides neuroactivos carecen de efectos secundarios hormonales por la falta de afinidad por los receptores de la progesterona y otros esteroides hormonales (tablas 2-5). Los datos presentados se obtuvieron realizando ensayos según los procedimientos descritos en et al. 1988 previamente para determinar el efecto de los metabolitos de la progesterona y sus derivados y la progestina R5020 sobre la unión de [^{3}H]R5020 al receptor de la progesterona en útero de rata (Gee et al. 1988).
Se incubó ^{3}H-progesterona (0,15 nM) con el citosol de útero de rata en presencia de los compuestos de prueba. Se determinó la unión específica tras incubación y se comparó con la incubación control sin los compuestos. Los datos se expresan como inhibición en porcentaje de la unión. Si los compuestos se unen al receptor de la progesterona con una afinidad elevada, se esperaría una inhibición del 100% de la unión a la concentración sometida a
prueba.
Se estudiaron adicionalmente diversas actividades hormonales de esteroides neuroactivos representativos a través de someter a prueba sus posibles actividades estrogénica, mineralocorticoidea y glucocorticoidea. Se analizaron estas actividades monitorizando la capacidad de los compuestos para inhibir la unión de las hormonas esteroideas a sus respectivos receptores hormonales. Los resultados se muestran en las tablas 3-5. Se expresan como la inhibición en porcentaje de la unión de ^{3}H-ligando a los diversos receptores de hormonas esteroideas para los compuestos a 10^{-6} M. Los valores control están representados por la unión en ausencia de compuestos de prueba.
En la tabla 3, se sometieron ratas a suprarrenalectomía 3 días antes de su sacrificio. Para aislar el receptor de mineralocorticoides, se prepararon fracciones de citosol cerebral tal como se describe en Gee, et al. 1988. Se incubaron los fármacos con 3 nM de ^{3}H-aldosterona (el ligando específico para el receptor de mineralocorticoides) en presencia del agonista de tipo II selectivo RU28362 (0,5 \muM) que bloquea la unión de ^{3}H-aldosterona a los receptores de tipo II (de glucocorticoides).
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TABLA 2 Inhibición de la unión de ^{3}H-progesterona a receptores de la progesterona de útero bovino
6 
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TABLA 3 Inhibición de la unión de ^{3}H-aldosterona a receptores de mineralocorticoides de hipocampo
8 
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Para la tabla 4, se prepararon fracciones de citosol cerebral como para la tabla 3, y se incubaron los compuestos con 3 nM de ^{3}H-dexametasona (el ligando específico para el receptor de glucocorticoides).
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TABLA 4 Inhibición de la unión de ^{3}H-dexametasona a receptores de glucocorticoides 
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9 
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La tabla 5 muestra la inhibición de la unión de ^{3}H-estradiol (el ligando específico para el receptor de estrógenos) a citosol de úteros bovinos, preparados según se describió previamente (Gee, et al. 1988). Se incubó el ^{3}H-estradiol (0,15 nM) con el citosol en presencia de los compuestos.
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TABLA 5 Inhibición de la unión de ^{3}H-estradiol a receptores de estrógenos de útero bovino 
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Los resultados de estos experimentos muestran claramente que los esteroides neuroactivos no tienen una fuerte afinidad por ninguno de los receptores de esteroides anteriores. Por tanto, no tendrán los efectos secundarios hormonales previstos que podrían resultar de tal unión a receptores de esteroides.
\newpage
Actividad anticonvulsiva
También se realizaron experimentos para determinar la relevancia fisiológica de las interacciones de los receptores de GABA y esteroides neuroactivos evaluando la capacidad de los compuestos de y usados en la invención para prevenir las convulsiones inducidas con metrazol en ratones. Se les inyectó a los ratones diversas dosis de los compuestos de prueba de la invención, 10 minutos antes de la inyección de metrazol. Se determinó el tiempo hasta la aparición de mioclonía (presencia de actividad clónica de las extremidades superiores) inducida por metrazol observando cada ratón durante un periodo de 30 minutos. En ratones control, el metrazol (85 mg/kg) inducirá convulsiones en el 95% de los animales. En la tabla 6 se muestra la capacidad de varios compuestos de y usados en la invención para proteger a lo ratones frente a las convulsiones.
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TABLA 6 Actividad anti-metrazol de esteroides neuroactivos en ratones 
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También se demostró la capacidad de los esteroides neuroactivos para proteger a los animales frente a otros convulsivos químicos para 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-hidroxi-3\beta-metil-5\alpha-pregnan-20-ona. Las pruebas anticonvulsivas son similares a las descritas anteriormente. Los siguientes convulsivos químicos son: metrazol (85 mg/kg); (+)bicuculina (2,7 mg/kg); picrotoxina (3,15 mg/kg); estricnina (1,25 mg/kg); o vehículo (solución salina al 0,9%). Inmediatamente tras la inyección de convulsivo o vehículo, se observaron los ratones durante un periodo de 30 a 45 minutos. Se registró el número de animales con convulsiones tónicas y/o clónicas. En la prueba de electrochoque máximo, se suministraron 50 mA de corriente a 60 Hz a través de electrodos corneales durante 200 mseg para inducir convulsiones tónicas. Se definió la capacidad de los compuestos para suprimir la componente tónica como el criterio de valoración. Se determinó el potencial de depresión del SNC general mediante una prueba con varilla rotatoria (rotorod) 10 minutos tras la inyección de los compuestos, en la que se determinó el número de ratones que permanecieron sobre una varilla rotativa (6 rpm) durante 1 minuto en uno de los tres ensayos. Se determinó la DE_{50} (la dosis a la que se produce la mitad del efecto máximo) para cada selección y se presentan en la tabla 7, a continuación. Los resultados demuestran que los esteroides neuroactivos, en comparación con otros anticonvulsivos clínicamente útiles, son sumamente eficaces con perfiles similares a los de la BZ clonazepam. Estas observaciones la utilidad terapéutica de estos compuestos como moduladores de la excitabilidad cerebral, que se corresponde con su interacción de alta afinidad con el complejo de GR in vitro.
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TABLA 7 Actividad anticonvulsiva de los esteroides neuroactivos a modo de ejemplo y los anticonvulsivos seleccionados clínicamente útiles en ratones
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Efectos ansiolíticos
Los siguientes experimentos demuestran que los metabolitos de progesterona, 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona son ansiolíticos eficaces en cuatro modelos animales de ansiedad en seres humanos que miden los efectos sobre el comportamiento de los compuestos ansiolíticos. Debe entenderse que estos dos compuestos describen la invención a modo de ilustración. Los datos sobre sus derivados sintéticos en estas mediciones también se presentan en las tablas 8-10. Los cuatro modelos animales utilizados para medir los efectos sobre el comportamiento de los compuestos ansiolíticos son: 1) prueba de transición luz/oscuridad; 2) laberinto en cruz elevado; 3) Prueba de conflicto de Geller-Seifter y 4) prueba de Vogel.
a) Prueba de transición luz/oscuridad
La prueba de transición luz/oscuridad (Crawley y Goodwin, "Preliminary report of a simple animal behavior model for the anxiolytic effect of benzodiazepines", Pharmacol. Biochem. Behav. 13:67-70 (1980)) se basa en la observación de que los roedores tienden de manera natural a explorar los nuevos entornos, pero los roedores tienen aversión por los espacios abiertos con luz brillante que inhiben su comportamiento exploratorio (Christmas y Maxwell, "A comparison of effects of some benzodiazepines and other drugs on aggressive and exploratory behaviour in mice and rats", Neuropharmacol. 9:17-29 (1970); Archivo, "The use of social interaction as a method of detecting anxiolytic activity of chlordiazepoxide-like drugs", J. Neurosci. Meth. 2:219-238 (1980)). Se ha demostrado que una variedad de ansiolíticos clínicamente establecidos incluyendo diazepam, clonazepam y pentobarbital aumentan el número de transiciones entre la caja clara y la caja oscura, mientras que los fármacos no ansiolíticos no demuestran este efecto sobre el comportamiento (Crawley et al., "Absence of intrinsic antagonist actions of benzodiazepine antagonists on an exploratory model of anxiety in the mice", Neuropharmacol. 23:531-537 (1984)).
Ratones macho N.I.H. y Swiss-Webster (Harlan, Harlan, Indianápolis, EN) que pesaban 15-20 g se alojaron en un número de cuatro por jaula, en jaulas de polietileno con lecho de serrín. Se controló el entorno de la sala en la que se encontraba la colonia (22ºC) con un ciclo de 12 horas de luz/oscuridad (0600-1800 h). Se facilitaron alimentos y agua a voluntad, excepto durante la prueba. Los experimentos se llevaron a cabo desde las 0700-1500 h y los grupos se equilibraron para los efectos de la hora del día. A los ratones se les administró únicamente fármaco o vehículo una vez.
El método utilizado fue una modificación de los métodos descritos anteriormente (Wieland et al., "Anxiolytic activity of progesterone metabolite 5\alpha-pregnan-3\alpha-ol-20-one", Br. Res. 565:263-268 (1991)). El aparato incluía dos cámaras de prueba automatizadas bicompartimentales (Modelo RXYZCM16, Omnitech Electronics, Columbus, OH). El compartimento abierto estaba conectado al compartimento encerrado mediante un conducto de 7,5 X 7,5 cm. El compartimento abierto se iluminó fuertemente usando una bombilla de luz incandescente de 200 W. La sala de experimentación se mantuvo a oscuras. Las interrupciones de los haces de luz infrarroja en cada cámara se registraron automáticamente al estar asociadas con un ordenador mediante un analizador Digiscan (Omnitech) y se analizaron los datos utilizando el Integrated Lab Animal Monitoring System (Sistema de monitorización integrado de animales de laboratorio) (Omnitech Electronics). Se administró vehículo o fármaco de prueba por vía intraperitoneal (i.p.) a los ratones N.I.H. y Swiss-Webster, 10 min. después se colocaron en el centro del compartimento iluminado. Se midió el número de transiciones entre las cámaras iluminada y oscura, la actividad total en la cámara iluminada y el tiempo transcurrido en la cámara iluminada durante un periodo de prueba de 10 min.
La figura 8 muestra los efectos de la 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y la 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona en la prueba de transición luz/oscuridad. Ambos compuestos produjeron una curva dosis-respuesta significativa en relación con el número de transiciones entre la caja oscura y la caja clara. Las comparaciones múltiples a posteriori demostraron que el número de cruces por dosis tanto de 3\alpha- OH-5\alpha-pregnan-20-ona como de 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona aumentó significativamente a las dosis probadas del control (prueba de la t de Dunnett).
Además, tanto 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona como 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona produjeron aumentos significativos (p < 0,01) en la actividad a 10 y 20 mg/kg, en comparación con los grupos control (Prueba de la t de Dunnett). No hubo diferencias significativas entre los dos compuestos a ninguna de las dosis probadas.
b) Laberinto en cruz elevado
La base teórica para la prueba del laberinto en cruz elevado es similar a la de la prueba de transición luz/oscuridad. Tal como se describió anteriormente (Pellow et al. "Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat", J. Neurosci. Meth. 14:149-167. (1985)). El aparato del laberinto en cruz elevado está diseñado para utilizar la aversión natural de los ratones a los espacios abiertos. El aparato consiste en dos brazos abiertos y dos brazos cerrados. La prueba del laberinto en cruz elevado permite que se realicen dos medidas de la ansiedad, el número de entradas en los brazos abiertos y el tiempo transcurrido en los brazos abiertos, ambos expresados como un porcentaje del número total de entradas y el tiempo transcurrido en/sobre tanto los brazos abiertos como los brazos cerrados.
Ratones macho N.I.H. y Swiss-Webster (Harlan, Harlan, Indianápolis, EN) que pesaban 15-20 g se alojaron en un número de cuatro por jaula, en jaulas de polietileno con lecho de serrín. Se controló el entorno de la sala en la que se encontraba la colonia (22ºC) con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h (0600-1800 h). Se facilitaron alimentos y agua a voluntad, excepto durante la prueba. Los experimentos se llevaron a cabo durante 0700-1500 h y los grupos se equilibraron para los efectos de la hora del día. A los ratones se les administró únicamente fármaco o vehículo una vez.
El método utilizado se describió anteriormente (Lister, "The use of Plus-Maze to measure anxiety in the mouse", Psychopharmocol. 92:180-185 (1987)). El aparato incluía dos brazos abiertos perpendiculares a dos brazos cerrados elevados 50 cm desde el suelo. Cada brazo tenía 50 cm de largo y las paredes de los brazos cerrados tenían 40 cm de alto. El laberinto estaba hecho completamente de plexiglass negro. Había bombillas de luz incandescente de 200 W por encima de cada uno de los brazos abiertos para producir un fuerte contraste entre los brazos abiertos y los brazos cerrados.
Diez minutos tras una inyección, los ratones N.I.H. y Swiss-Webster se colocaron en el centro del laberinto en cruz de frente a un brazo abierto. Durante el periodo de prueba de 5 min., se midió el número de entradas en los brazos abiertos y los brazos cerrados y el tiempo transcurrido en los brazos abiertos y los brazos cerrados. Las cuatro patas tenían que estar dentro de un brazo para que se midiera la variable dependiente. Por tanto, no se cuenta el tiempo transcurrido en el centro del laberinto, por lo que el tiempo transcurrido total en los brazos abiertos y los brazos cerrados puede que no sea igual a 5 min. Los efectos de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona en la prueba del laberinto en cruz elevada se muestran en la figura 9A. Ambos compuestos demuestran un aumento en la proporción de entradas en los brazos abiertos a través de las dosis. 3\alpha-OH-5\alpha-Pregnan-20-ona produjo un aumento significativo en las entradas a 20 mg/kg (P \leq \beta0,05), mientras que 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona produjo aumentos significativos en las entradas a 5 mg/kg (p \leq 0,5), 7,5 mg/kg (p \leq 0,1), y 10 mg/kg (p \leq 0,01).
Además, 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona produjeron aumentos dependientes de la dosis en el tiempo transcurrido en los brazos abiertos (figura 9B). 3\alpha-OH-5a-pregnan-20-ona produjo aumentos significativos en el tiempo transcurrido en los brazos abiertos a 10 mg/kg (p \leq \beta0,01), mientras que 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona produjo aumentos significativos en el tiempo transcurrido en los brazos abiertos a 7,5 mg/kg (p \leq \beta0,01) y 10 mg/kg (p \leq \beta0,01).
La tabla 8 muestra el resumen de las actividades ansiolíticas de los compuestos de y usados en la invención utilizando el laberinto en cruz elevado en las mismas condiciones que las descritas anteriormente.
TABLA 8 Actividad ansiolítica en laberinto en cruz en ratones 
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c) Prueba de conflicto de Geller-Seifter
Este modelo animal de ansiedad en seres humanos utiliza un estado condicionado de conflicto en ratas para determinar las propiedades ansiolíticas de los fármacos. Las ratas se condicionan a presionar una barra para obtener un refuerzo positivo en dos programas de comportamiento (Geller y Seifter. "The effects of meprobamate, barbiturates, d-amphetamine and promazine on experimentally induced conflict in the rat", Psychopharmacologia 1:482-492 (1960)). El primero incluye presionar la barra en un programa de razón variable sin castigo. El segundo componente es un programa de razón fija dando como resultado cada presión de la barra un refuerzo positivo y un castigo. El componente de castigo produce un estado de conflicto dentro del animal. El componente sin castigo permite la observación de cualquier efecto depresivo de respuesta que puede tener un fármaco. Una respuesta ansiolítica aumentaría la respuesta de castigo sin afectar a la respuesta sin castigo.
Se utilizaron ratas Sprague-Dawley albinas macho (Charles River Labs, Wilmington, MA) que pesaban 250-300 g para experimentos de conflicto y se mantuvieron con una dieta restringida de gránulos alimenticios Lab Chow de Purina con agua disponible en todo momento para mantener el peso corporal en el 85% de sus niveles de adulto joven con libre alimentación. Las ratas se alojaron individualmente con un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas desde
0700-1900.
Se midieron en las ratas los efectos anti-ansiedad (disminución del castigo) y depresivos de la respuesta de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona mediante la prueba de conflicto de Geller y Seifter (1960). En esta prueba de 63 min., en las ratas hambrientas se produjo una respuesta de presión de la palanca para obtener una recompensa de leche edulcorada. El programa de refuerzo consiste en componentes de castigo y sin castigo, alternándolos aproximadamente cada 15 min. Se entrenó a las ratas en cámaras de prueba (instrumentos Coulbourn) con una palanca montada en una pared, una pequeña cuchara que suministraba la recompensa de 0,1 ml de leche (1 parte de leche condensada Eagle: 2 partes de agua), y un suelo de rejilla metálica a través del cual se administró el castigo de sacudida eléctrica en la pata. Se utilizó un miniordenador DEC PDP 11/73 running SKED (State Systems) para la programación y el registro de los datos.
Las ratas aprendieron inicialmente a responder en un programa de refuerzo continuo y progresaron rápidamente a programas de intervalos variables (IV) de 30 s, 1 min. y 2 min. En el programa de refuerzo continuo, las ratas recibieron una recompensa de leche tras cada presión de la palanca; en los programas de IV, las recompensas de leche estuvieron disponibles a intervalos poco frecuentes y variables, finalmente a un promedio de una vez cada 2 min. Entonces se introdujeron cuatro periodos de "conflicto" de 3 min en el nivel inicial de IV sin castigo; el primero comenzó tras 3 min. de realización de IV y los otros se alternaron entre periodos de 12 min. de respuesta a IV. Durante los periodos de conflicto, que se señalizaron mediante la presentación de una luz y un sonido, el programa de refuerzo continuo estaba de nuevo en vigor y cada presión de la palanca suministraba tanto una recompensa de leche como una breve sacudida eléctrica en la pata (0,25 ms) cuya intensidad era de 0,2 mA inicialmente, y que se aumentaba diariamente en incrementos de 0,02 mA con el fin de suprimir gradualmente la presión de la palanca hasta 5 respuestas o menos por periodo de conflicto. Este entrenamiento duró 4-6 semanas, tras el cual se observaron tasas de respuesta bajas y estables durante los periodos de conflicto y tasas altas y estables en los periodos sin castigo. Los aumentos inducidos por el fármaco en la tasa de respuestas con castigo se tomaron como un índice de una actividad anti-ansiedad, mientras que las disminuciones en la tasa de respuestas sin castigo se tomaron como un índice de depresión o sedación a la respuesta.
Los efectos de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona en la prueba de conflicto se resumen en la figura 10. Ambos compuestos produjeron grandes aumentos en la tasa de respuestas con castigo, lo que sugiere que ambos serían activos como agentes anti-ansiedad. El efecto máximo de 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona se observó a 2 mg/kg y el de 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona a 4,4 mg/kg tras la administración subcutánea. (Para los análisis estadísticos y debido al pequeño número de pruebas en cada dosis, se combinaron todas las pruebas con cada compuesto para realizar una comparación frente a las pruebas de control con vehículo, usando una prueba de la t para las mediciones relacionadas: para 3\alpha-OH-5\alpha-pregnan-20-ona, p < 0,02; para 3\alpha-OH-5\beta-pregnan-20-ona, p < 0,008).
La tabla 9 muestra el resumen de las actividades ansiolíticas de los compuestos de y usados en la invención utilizando la prueba de Geller-Seiftr en las condiciones experimentales descritas anteriormente.
TABLA 9 Actividad ansiolítica en Geller/Seifter en ratas
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d) Prueba de Vogel
La prueba de Vogel se basa en el desarrollo de un conflicto entre un comportamiento altamente motivado y una aversión. Para esta prueba, la fuerte motivación es la sed. Se priva al animal de agua durante 12 - 16 horas para producir la motivación a beber. Durante el periodo de entrenamiento, los animales se exponen al entorno de prueba, de manera que llegan a acostumbrarse a al tubo de descarga de bebida y se minimiza el miedo a un entorno novedoso. Tras el entrenamiento, se permite que los animales tengan acceso a agua durante 2 horas. Durante este tiempo, los animales beberán y comerán su cantidad normal de agua y alimento, compensando el tiempo de privación. Sin embargo, este programa todavía produce una fuerte motivación a beber durante el periodo de prueba.
Tras habérsele privado de agua durante de doce a dieciséis horas, se coloca un animal en una jaula de prueba en la que se le permite beber libremente durante cinco minutos. Este periodo se utiliza para habituar al animal al entorno y al tubo de descarga de bebida. Tras el periodo de entrenamiento, los animales tienen acceso al agua a y a los alimentos en su jaula durante 2 horas. El alimento está disponible en todo momento. Veinticuatro horas más tarde se administra el fármaco al animal por vía intracerebroventricular.
Tras un retraso indicado que se inicia en el momento de la inyección, el animal se coloca de nuevo en la jaula de prueba durante diez minutos. Un ordenador cuenta cada vez que el animal lame, y tras cada veinte lamidas, administra un leve estímulo eléctrico a través de la lengua y/o las patas. El estímulo eléctrico consiste en una corriente de 0,6 mA con una duración de 100 ms. Este procedimiento produce un estado de conflicto para el animal que se reduce mediante la administración de los agentes ansiolíticos usados clínicamente (es decir, Valium). Para las curvas dosis-respuesta, se inyectó a grupos separados de animales dosis crecientes del fármaco de prueba y se sometieron a prueba a un tiempo predeterminado.
En la tabla 10, se resumen los datos de compuestos representativos usando estas mediciones.
TABLA 10 Actividad ansiolítica en la prueba de Vogel en ratas
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Profármacos
Se evaluaron las actividades anticonvulsivas y ansiolíticas de los profármacos de los compuestos básicos 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y sus derivados utilizando los mismos procedimientos descritos anteriormente. Se representó la protección en tanto por ciento lograda por varios profármacos de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona frente a las convulsiones inducidas por metrazol, frente al tiempo tras la administración de los compuestos. (Figura 11 y tabla 11).
La modificación de los compuestos básicos 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona y 3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona en los hidroxilos 3\alpha y 21 con diversos ésteres mantiene su actividad biológica y en algunos casos tal modificación aumentó el tiempo de protección proporcionado por el compuesto. Por tanto, los compuestos de esta invención pueden modificarse para proporcionar actividades anticonvulsivas y ansiolíticas durante un periodo de tiempo, con grados variables de protección.
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TABLA 11 Actividad anti-metrazol de ésteres del profármaco de 3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona (3\alpha-(RCOO)-5\alpha- pregnan-20-ona)
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A diferencia con las benzodiazepinas, los esteroides neuroactivos también pueden inducir anestesia. Se cree que su capacidad para inducir anestesia se debe a su capacidad para abrir el canal de ion cloruro en ausencia de GABA, lo que es una propiedad que no tienen las benzodiazepinas. Por tanto, los neuroesteroides pueden actuar directamente en ausencia de GABA, en el receptor, y también "indirectamente", en presencia de GABA. Esta acción "indirecta" se denomina "modular" el receptor. (Lambert, et al., "Actions of synthetic and endogenous steroids on the GADAA receptor", Trends Pharmacology Science 8: 224-227 (1987)).
Los compuestos de y usados en la invención también pueden utilizarse para indicaciones anestésicas a altas dosis. Sin embargo, la vía de administración preferida para inducir anestesia es la administración intravenosa (i.v.). En animales, las propiedades anestésicas de un fármaco se miden mediante la capacidad del fármaco para proporcionar una pérdida de reflejo de enderezamiento. El reflejo de pérdida de enderezamiento se define como la incapacidad de un animal para enderezarse cuando se le coloca sobre su lomo. Se administró a los ratones el fármaco i.v. en la vena lateral de la cola. Tras la administración, los ratones se colocaron sobre sus lomos y se observó la pérdida de reflejo de enderezamiento. en la tabla 12, se presentan resultados ilustrativos.
TABLA 12 Actividad anestésica de esteroides neuroactivos en ratones
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Se prevé que los profármacos con modificaciones similares a las descritas anteriormente, de compuestos de y usados en la invención, tendrán actividad como profármacos de 3\alpha-hidroxi-5-pregnanos reducidos.

Claims (38)

1. Compuesto de fórmula:
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en la que
\quad
R es hidrógeno, halógeno, -O-alquilo C_{1-10}, -NR_{12}R_{13}, alquilo, 1-alquinilo opcionalmente sustituido o alquilo sustituido;
\quad
R_{1} es un aralquinilo sustituido, arilalquilo, arilalquenilo, arilo, aralquilalquinilo opcionalmente sustituido, alcanoiloxialquinilo, heteroariloxialquinilo opcionalmente sustituido, oxoalquinilo o un cetal del mismo, cianoalquinilo, heteroarilalquinilo opcionalmente sustituido, hidroxialquinilo, alcoxialquinilo, aminoalquinilo, acilaminoalquinilo, mercaptoalquinilo, hemiéster del ácido hidroxialquinildioico o una sal del mismo, o alquiniloxialquinilo;
\quad
R_{2} es hidrógeno, hidroxilo, OR_{11}, O-C(O)R_{14}, -C(O)OR_{14}, un grupo ceto o un grupo -NR_{15}R_{16};
\quad
R_{3} es un grupo acetilo, un cetal de un grupo acetilo; un grupo alcoxiacetilo, un grupo alquiltioacetilo, un grupo alquilsulfinilacetilo, un grupo alquilsulfonilacetilo, un grupo aminoacetilo, un grupo trifluoroacetilo; un grupo hidroxiacetilo; un grupo alcoxialquilacetilo; un grupo hidroxialquilo; una sal de hemiéster de ácido hidroxiacetildioico; un grupo alcanoiloxiacetilo; un grupo sulfoxiacetilo; un grupo alquilacetilo; un grupo haloacetilo; un grupo etinilo; un grupo heteroaralquilacetilo opcionalmente sustituido que también puede estar opcionalmente sustituido en el alquileno con un grupo hidroxilo, alcoxilo, alcanoiloxilo o carbalcoxilo; un grupo heterociclil-acetilo opcionalmente sustituido; una sal de acetil-tiosulfato; un grupo ciano; un grupo metileno junto con R_{7}; un grupo alquilmetileno junto con R_{7}; o un grupo alcoximetileno junto con R_{7};
\quad
R_{4} es hidrógeno o metilo,
\quad
R_{5} es hidrógeno;
\quad
R_{6} es hidrógeno, alcanoílo, aminocarbonilo o alcoxicarbonilo;
\quad
R_{7} es hidrógeno, halógeno, hidroxilo, -OR_{11}, -O-C(O)-R_{14} o -C(O)OR_{14}, un grupo metileno junto con R_{3} o un grupo alcoximetileno junto con R_{3};
\quad
R_{8} es hidrógeno o halógeno;
\quad
R_{9} es hidrógeno, halógeno, alquilo, -OR_{11}, arilalcoxilo o -NR_{15}R_{16}; y
\quad
R_{10} es hidrógeno, halógeno, alquilo, haloalquilo, hidroxilo, -OR_{11}, -O-C(O)-R_{14}, -C(O)OR_{14}, ciano, tiociano o mercapto;
o un 3-éster, 20-éster, 21-éster, 3,20-diéster o 3,21-diéster fisiológicamente aceptable del mismo;
en el que
"alquilo" se refiere a un grupo alifático saturado cíclico o de cadena lineal o ramificada que puede estar opcionalmente sustituido;
"alquenilo" se refiere a un grupo cíclico insaturado o de cadena lineal o ramificada que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono y puede estar opcionalmente sustituido;
"alquinilo" se refiere a grupos hidrocarbonados insaturados de cadena lineal o ramificada opcionalmente sustituidos que contienen al menos un triple enlace carbono-carbono;
"arilo" se refiere a grupos aromáticos que tienen al menos un anillo que tiene un sistema electrónico pi conjugado y puede estar opcionalmente sustituido;
"aralquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo;
"opcionalmente sustituido" se refiere a grupos sustituidos con de uno a tres, cuatro o cinco sustituyentes, seleccionados independientemente de alquilo C_{1-10}, arilo, carboarilo o heteroarilo cíclico o acíclico, alquenilo, alquinilo, -OR_{11}, halógeno, haloalquilo, NR_{15}R_{16}, mercapto, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, nitro, alcanoílo, -O-C(O)R_{14}, alcanoiloxialcanoílo, alcoxicarboxilo, -COO-alquilo C_{1-10}, CONR_{17}R_{18}, formilo, carboxilo, hidroxilo, ciano, azido, ceto y cetales cíclicos del mismo, alcanoilamido, heteroariloxilo, heterocarbocicliloxilo y sales de éster de hemisuccinato de los mismos;
"heteroarilo" se refiere a radicales insaturados cíclicos de 5-14 miembros que contienen carbono que contienen uno, dos, tres o cuatro átomos de O, N o S y que tienen 6, 10 o 14 electrones \pi deslocalizados en uno o más anillos;
R_{11} es alquilo;
R_{12} y R_{13} son cada uno independientemente alquilo C_{1-10} o juntos forman el resto de un grupo morfolino;
R_{14} es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo;
R_{15} y R_{16} son cada uno independientemente H, alquilo C_{1-10} o se unen entre sí para dar un anillo de 5 o 6 miembros;
R_{17} y R_{18} son cada uno independientemente alquilo C_{1-10} con la condición de que el compuesto no sea 20-etilendioxi-3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-pregnano-11,20-diona o 3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-pregnano-11,20-diona.
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que:
\quad
R es hidrógeno, flúor, cloro o -O-alquilo C_{1-10};
\quad
R_{1} es ariletinilo sustituido;
\quad
R_{2} es hidrógeno, un grupo ceto o un grupo dimetilamino;
\quad
R_{3} es un grupo \beta-acetilo, un dimetilcetal de un grupo \beta-acetilo, un grupo trifluoroacetilo, un grupo \beta-(hidroxi- acetilo), un grupo \beta-metoximetilacetilo, un grupo \beta-(etoxi)metil-2'-metilenacetilo, un grupo \beta-(1'-hidroxietilo), un grupo \beta(1'-hidroxipropilo), un grupo \beta-(2'-hidroxi-2'-propilo), un grupo \beta-succiniloxiacetilo, un grupo de \beta-hidroxiacetilsuccinato de sodio, un grupo \beta-acetoxiacetilo, un grupo \beta-sulfoxiacetilo, un grupo \beta-metilacetilo, un grupo \beta-haloacetilo o un grupo \beta-etinilo;
\quad
R_{4} es hidrógeno o metilo;
\quad
R_{5}, R_{6}, R_{8}, R_{9} y R_{10} son hidrógeno;
\quad
las líneas de puntos representan todas enlaces sencillos; y
\quad
R_{7} es hidrógeno o, cuando R_{3} es \beta-hidroxiacetilo, R_{7} es hidrógeno o hidroxilo.
3. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es ariletinilo sustituido.
4. Compuesto según la reivindicación 3, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-nitrofenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-metoxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[2-(3',4'-dimetoxifenil)etinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-metilfenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-trifluorometilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-
ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-metoxifenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-dimetilaminofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-clorofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-
ona, 3\beta-(4'-acetilfenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-acetoxiacetilfenil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona o 3\beta-(4'-cianofenil)etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
5. Compuesto según la reivindicación 3, que es 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona; éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-19-nor-5\beta-pregnan-20-ona; éster etílico de 3\beta-(4'-carboxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\beta-[4'-(N,N-dietilcarboxamido)fenil]etinil-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona;
3\beta-(4'-acetoxifeniletinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-
ona; 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; sal de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; o sal de 21-hemisuccinato de 3\beta-(4'-acetilfeniletinil)-3\alpha,21-dihidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
6. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es aralquilo.
7. Compuesto según la reivindicación 6, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-bencil-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-feniletil)-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3'-fenilpropil)-5\beta-pregnan-20-ona o 3\alpha-hidroxi-30-[2-(3',4'-dimetoxifenil)etil]-50-pregnan-20-ona.
8. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es arilo.
9. Compuesto según la reivindicación 8, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-fenil-5\beta-pregnan-20-ona.
10. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es cianoalquinilo.
11. Compuesto según la reivindicación 10, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-(5'-ciano-1'-pentinil)-5\beta-pregnan-20-ona o 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-ciano-1'-butinil)-5\beta-pregnan-20-ona.
12. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es oxoalquinilo.
13. Compuesto según la reivindicación 12, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-[6'-oxo-1'-heptinil]-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(7'-oxo-1'-octinil)-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-(5'-oxo-1'-hexinil)-5\beta-pregnan-20-ona o 3\alpha-hidroxi-3\beta-(5'-oxo-1'-pentinil)-5\beta-pregnan-20-ona.
14. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es hidroxialquinilo o un éster fisiológicamente aceptable del mismo.
15. Compuesto según la reivindicación 14, que es 3\beta-(4'(R/S)-hidroxipentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-[5'-(R/S)-hidroxihexinil]-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de hemisuccinato de 3\beta-(5'-hidroxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de 6'-hemisuccinato de 3\beta-(6'-hidroxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, sal sódica de 4'-hemisuccinato de 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, sal sódica de 4'-hemisuccinato de de 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona, 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-19-norpregnan-20-ona, sal sódica de 4'-hemisuccinato de 3\beta-(4'-hidroxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-19-norpregnan-20-ona, 3\beta-[3'(R/S)-hidroxi-1'-butinil]-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona o 3\beta-(3'-hidroxi-1'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
16. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es alcanoiloxialquinilo.
17. Compuesto según la reivindicación 16, que es 3\beta-(3'-acetoxi-1'-propinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-acetoxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona; 3\beta-(4'-acetoxi-1'-butinil)-3\alpha-hidroxi-5\alpha-pregnan-20-ona; 3\beta-(5'-acetoxi-1'-pentinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona o 3\beta-(6'-acetoxi-1'-hexinil)-3\alpha-hidroxi-5\beta-pregnan-20-ona.
18. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es alquiniloxialquinilo.
19. Compuesto según la reivindicación 18, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'-propiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona.
20. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es alcoxialquinilo.
21. Compuesto según la reivindicación 20, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-metoxi-1-propinil)-5\beta-pregnan-20-ona o 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-metoxi-1-propinil)-5\alpha-pregnan-20-ona.
22. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es heteroariloxialquinilo.
23. Compuesto según la reivindicación 22, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(4'-piridiniloxi)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona.
24. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es heteroarilalquinilo.
25. Compuesto según la reivindicación 24, que es 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2'-tienil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(2-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(1'H-1,2,3-triazol-1'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona; 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(2'H-1,2,3-triazol-2'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-[3-(1'H-pirazol-1'-il)-1-propinil]-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(5'-acetil-2'-tienil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona, 3\alpha-hidroxi-3\beta-(3-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona o 3\alpha-hidroxi-3\beta-(4-piridil)etinil-5\beta-pregnan-20-ona.
26. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{3} es una sal de acetil-tiosulfato.
27. Compuesto según la reivindicación 26, que es S-[3\alpha-hidroxi-3\beta-(4'-hidroxibutinil)-5\beta-pregnan-20-on-21-il]tiosulfato de sodio.
\newpage
28. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
29. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para modular el complejo de receptor de GABA_{A}-ionóforo de cloruro en un sujeto animal mediante la unión al sitio de neuroesteroides en dicho complejo.
30. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para tratar o prevenir el estrés o la ansiedad en un sujeto animal.
31. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para aliviar o prevenir la actividad convulsiva en un sujeto animal.
32. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para aliviar o prevenir el insomnio en un sujeto animal.
33. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para aliviar o prevenir el síndrome premenstrual (SPM) o la depresión posnatal (DPN) en un sujeto animal.
34. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para tratar o prevenir trastornos del estado de ánimo en un sujeto animal.
35. Uso según la reivindicación 34, en el que dicho trastorno del estado de ánimo es depresión.
36. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en la preparación de un agente para inducir anestesia en un sujeto animal.
37. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 29 a 36, en el que el compuesto es un éster o diéster farmacéuticamente aceptable de un ácido seleccionado del grupo que consiste en ácido acético, propiónico, maleico, fumárico, ascórbico, pimélico, succínico, glutárico, bismetilensalicílico, metanosulfónico, etano-di-sulfónico, oxálico, tartárico, salicílico, cítrico, glucónico, itacónico, glicólico, p-aminobenzoico, aspártico, glutámico, \gamma-aminobutírico, \alpha-(2-hidroxietilamino)-propiónico, glicina y otros \alpha-aminoácidos, fosfórico, sulfúrico, glucurónico y 1-metil-1,4-dihidronicotínico.
38. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 29 a 37, en el que el compuesto está presente en una cantidad de desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 100 mg por unidad de dosificación cuando el agente va a administrarse por vía intravenosa y de desde aproximadamente 100 mg hasta aproximadamente 500 mg por unidad de dosificación cuando el agente no va a administrarse por vía intravenosa.
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