ES2296967T3

ES2296967T3 - Conjugados de polimeros de polisacarido de origen natural.

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Publication number: ES2296967T3
Application number: ES02748760T
Authority: ES
Inventors: Ivo Volpato; Bernard Emile Bizzini; Roberto Carlos C/O Bartholdy-Consultadoria Abreu; Marco Lippmann
Original assignee: BARTHOLDY CONSULTADORIA E SERV; BARTHOLDY-CONSULTADORIA E SERVICOS Lda
Current assignee: BARTHOLDY CONSULTADORIA E SERV; BARTHOLDY-CONSULTADORIA E SERVICOS Lda
Priority date: 2001-06-12
Filing date: 2002-06-11
Publication date: 2008-05-01
Anticipated expiration: 2022-06-11
Also published as: US20040219217A1; WO2002100440A1; ITMI20011238A0; EP1399192B1; DE60223371D1; DE60223371T2; EP1399192A1; ITMI20011238A1; ATE377430T1

Abstract

Conjugado que comprende un polímero de polisacárido de origen natural enlazado químicamente a una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa mediante un policonector.

Description

Conjugados de polímeros de polisacárido de origen natural.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a la utilización de fibras de polímeros de polisacárido de origen natural, preferentemente de origen vegetal, tal como por ejemplo, de celulosa o algodón, o la utilización de hilos, telas no tejidas (fieltros), o telas obtenidas a partir de dichas fibras con el fin de obtener productos farmacéuticos, cosméticos o higiénicos, artículos domésticos o productos destinados a su utilización en la industria alimentaria. En particular los polímeros de polisacárido según la presente invención se pueden utilizar con el fin de obtener emplastes, gasas, lana de algodón sanitario, tampones quirúrgicos y vaginales, vendajes, guantes, medias, máscaras, cortinas, alfombras y similares. Además, los polímeros de polisacárido según la presente invención se pueden utilizar con el fin de obtener telas, filtros o envoltorios destinados a la utilización en el campo de la industria alimentaria.

Estado de la técnica

Las fibras de polímeros de polisacárido de origen natural, preferentemente de origen vegetal, tales como por ejemplo celulosa o algodón, o hilos, telas no tejidas (o fieltros), o telas obtenidas a partir de dichas fibras se utilizan en el campo médico, para la automedicación o en el ámbito de la industria de los productos de higiene o cosméticos con funciones únicamente mecánicas o de soporte. Se puede afirmar lo mismo del ámbito de la industria alimentaria, en la que las telas de algodón se utilizan, por ejemplo, con el fin de filtrar el queso o en la producción de salchichas (salchichón). Además, las fibras de polímeros de polisacárido de origen natural, preferentemente de origen vegetal, se utilizan en el fabricación de artículos domésticos tales como alfombras, cortinas o similares.

En general, en el campo médico, se aplican sustancias farmacológica o biológicamente activas en forma de polvos, cremas o ungüentos sobre el cuerpo, en particular sobre el lugar del tejido que se debe tratar, a continuación se aplica el soporte de algodón únicamente como medio de cobertura y protección.

Ocasionalmente, cuando la sustancia medicinal es soluble, como es el caso de los desinfectantes, dicha sustancia se rocía sobre la lana de algodón que se frota sobre la piel para su aplicación.

Por otra parte, en el ámbito de la industria de la alimentación las fibras o hilos y similares que se utilizan se esterilizan previamente mediante desinfectantes o tratamientos con vapor, rayos UV, etc.

De manera similar, los artículos domésticos tales como alfombras y cortinas se someten de vez en cuando al lavado o lavado en seco con el fin de eliminar el polvo y las poblaciones de ácaros que posiblemente anidan en la misma.

Sin embargo, en algunos casos estos procesos no resultan un remedio adecuado.

Este es el caso por ejemplo:

a): de las úlceras, las úlceras de decúbito, heridas:

: Los fármacos que se aplican en estos casos (agentes antibacterianos, agentes antiinflamatorios, antibióticos, etc.) generalmente comprenden cremas, geles, ungüentos, polvos o rociados, es decir, no solamente del principio activo puro, sino también de composiciones farmacéuticas (que comprenden excipientes tales como, por ejemplo, adyuvantes, agentes preservantes y similares) optimizados para la aplicación deseada en el lugar que se debe tratar.

: A pesar de su indudable sencillez de aplicación, es muy conocido que por ejemplos las cremas, geles y ungüentos, debido a que reducen generalmente la biodisponibilidad de los principios activos que comprenden, retrasan la cicatrización, mientras que los polvos pueden inducir la formación de granulomas y los rociados no siempre aseguran la correcta administración del medicamento al lugar de la herida. Por lo tanto, la utilización de excipientes farmacéuticos, aunque su selección se realice apuntando a una compatibilidad máxima con los tejidos del paciente, pueden implicar desventajas.

b): de la desinfección de zonas de la piel:

: Los desinfectantes, generalmente solubles, que se utilizan para embeber las lanas de algodón, no permanecen durante largo tiempo en cantidades elevadas sobre el lugar de aplicación, se eliminan por el limpiado y por lo tanto no aseguran una buena eficacia.

c): en todos los casos en los que se utilizan gasas o vendajes con el fin de proteger zonas heridas o dañadas, inflamaciones de la piel y erosiones, se tiende a acumular polvo y, potencialmente, material infectado con el tiempo, representando así un riesgo sustancial si no se reemplazan con frecuencia o si no se manejan correctamente (en condiciones de esterilidad).

d): también de productos protectores tales como guantes y similares que puede compartir el mismo problema; por ejemplo, pueden acumular material alérgico, infectado u otro.

e): de los tampones vaginales destinados a las menstruaciones que pueden presentar una eficacia parcial debido a la imbibición en su superficie exterior con eritrocitos y plaquetas, que pueden evitar la absorción por las capas internas.

f): en la utilización de toallas sanitarias, en la que surgen los mismos problemas.

g): también de los hilos o telas utilizadas en la industria de la alimentación, por ejemplo, con el fin de filtrar queso, pero también en la preparación de salchichas, en la que surge el mismo problema; por ejemplo, a pesar de una esterilización inicial se puede a continuación acumular material no estéril.

i): finalmente, también los artículos domésticos, que se deben limpiar con gran frecuencia para mantener las contaminaciones de ácaros a un nivel adecuado, lo que resulta bastante incómodo y laborioso en el caso de ciertos artículos domésticos, por ejemplo, colchones.

Un objetivo de la presente invención consiste por lo tanto en proporcionar fármacos (en particular fármacos y componentes médicos), productos higiénicos o cosméticos que no presentan las desventajas mencionadas anteriormente y que aseguran la óptima administración de principios activos en el lugar afectado. Dichos fármacos (en particular fármacos y productos médicos), productos higiénicos o cosméticos podrían por lo tanto provocar una reducción elevada en la utilización del principio activo, sino sobre todo un incremento considerable de la eficacia del
tratamiento.

En particular, otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar emplastos, gasas, lana de algodón, vendajes y similares que se pueden aplicar directamente en el lugar que se debe tratar y no contienen los excipientes farmacéuticos habituales potencialmente desventajosos contenidos en las composiciones descritas anteriormente.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar emplastos, gasas, lana de algodón, vendajes y similares que se pueden aplicar directamente en el lugar que se debe tratar sin ningún fenómeno de eliminación del agente activo.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar emplastos, gasas, lana de algodón, vendajes y similares que se pueden aplicar directamente en el lugar que se debe tratar y que no son susceptibles de acumular materiales infecciosos o alérgenos.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar tampones quirúrgicos de gran eficacia.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar artículos higiénicos como por ejemplo tampones vaginales o toallas sanitarias de gran poder absorbente.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar artículos cosméticos cuya aplicación sobre la piel no resulte difícil y/o cause malestar.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar artículos de vestir de hilos antialérgicos.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar hilos, telas, telas no tejidas, y similares adecuados para su utilización en la industria alimenticia, que no sean susceptibles de acumular materias no estériles, contribuyendo de este modo a la conservación a largo plazo del alimento obtenido mediante su utilización.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar artículos domésticos realizados a partir de textiles o telas no tejidas que no resulten susceptibles a la contaminación por ácaros.

WO 93/11803 se refiere a una tela no tejida que comprende celulosa y ácido hialurónico. La tela no tejida modificada encuentra su aplicación en procedimientos terapéuticos.

Kalpexis et al., [Int. J. Biochem. 17:61-66 (1985)] dan a conocer la inmovilización covalente del hialuronato en las fibras de celulosa utilizando el entrelazador ácido \epsilon-amino-n-caproico. La celulosa modificada se utilizó con el fin de aislar proteoglicanos.

Edwards et al., [Bioconjugate Chem. 11:469-473 (2000)] dan a conocer los conjugados entre celulosa de algodón y péptidos con el fin de preparar textiles que se pueden utilizar, por ejemplo, en la cicatrización de las heridas. En particular, una se acopló una lisozima a la celulosa de algodón derivatizada con glicina.

Sin embargo, persiste el problema que se debe resolver con respecto a cómo mejorar la actividad del agente
activo.

Sumario de la invención

Éstos y otros objetivos que resultarán evidentes en lo que se expone a continuación se alcanzan mediante un conjugado que comprende un polímero de polisacárido de origen natural enlazado químicamente a una sustancia farmacológica y biológicamente activa mediante un policonector. En particular, las fibras que comprenden polímeros de polisacáridos según la presente invención se pueden utilizar con el fin de obtener telas no tejidas (o fieltros) o hilos o telas que se pueden utilizar en la preparación de fármacos, de productos medicinales o higiénicos o cosméticos, o en la fabricación de filtros, telas o envoltorios de utilización en la industria de la alimentación, así como también en la fabricación de artículos domésticos. La conjugación química entre los polímeros de polisacáridos de origen natural, preferentemente de origen vegetal, y las sustancias farmacológicamente o biológicamente activas puede tener lugar durante una de las etapas de la fabricación, es decir, utilizando como sustrato exclusivamente dichas fibras naturales u opcionalmente las telas no tejidas, hilos o telas obtenidas corriente debajo de dichas fibras.

Otro aspecto de la presente invención consiste en proporcionar un procedimiento destinado a obtener un polímero de polisacárido según la presente invención o fibras, hilos, telas o telas no tejidas según la presente invención, que comprende las etapas siguientes:

(a): crear, en las fibras del polímero de polisacárido, en el hilo, tela o tela no tejida obtenida a partir de dichas fibras, de lugares que son adecuados para la conjugación química, obteniéndose así un polímero de polisacárido activado, y

(b): la reacción entre el polímero de polisacárido activado y una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa o derivado de ésta mediante la formación de un enlace químico entre el polímero de polisacárido activado y la sustancia farmacológica o biológicamente activa, y opcionalmente

(c): la modificación, mediante reacción química, de la naturaleza de la conjugación establecida en las etapas (a) y (b) entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

Descripción detallada de la invención

Los polímeros de polisacárido según la presente invención comprenden polímeros de polisacárido de origen natural químicamente conjugado a sustancias farmacológicamente o biológicamente activas. Son particularmente preferidos los polímeros de polisacárido de origen vegetal.

Los polímeros de polisacárido de origen natural utilizados en la presente invención deben ser sustancialmente no biodegradables en el lugar de aplicación terapéutica (o para su utilización en la industria de la alimentación) y ser preferentemente fácilmente asequibles, baratos, de fácil esterilización, no susceptibles a la despolimerización cuando se sufren reacciones de conjugación química y deben sobre todo formar fibras macroscópicas fáciles de trabajar. Un ejemplo preferido de polímero de polisacárido de origen natural es un polímero de polisacárido de origen natural, por ejemplo celulosa, es decir, poli-D-glucosa en la que las unidades de D-glucosa están unidas mediante un enlace \beta-glucosídico entre un carbono anomérico de una molécula y el grupo OH del C-4 de otra molécula. Una forma de celulosa particularmente preferida en la presente invención es el algodón. Otra forma de celulosa preferida según la presente invención es la referida como "celulosa regenerada" o viscosa.

Las sustancias farmacológicamente o biológicamente activas según la presente invención que se deben conjugar con el polímero de polisacárido de origen natural pueden tener diferente naturaleza química y estructura sobre la base de los parámetros bioquímicos funcionales o exógenos que se encuentran implicados en la patología y que tienen que ser neutralizados o reequilibrados con el fin de obtener un efecto profiláctico o terapéutico. Únicamente a título de ejemplo y sin excluir propiedades terapéuticas o profilácticas adicionales, las sustancias farmacológicas o biológicamente activas pueden mostrar propiedades antibacterianas, antiinflamatorias, antibióticas, antimicóticas, micostáticas, antiácaros, desinfectantes, antihemorrágicas, antisépticas, inmunoestimulantes, antitraumáticas, antialérgicas, cicatrizantes, reepitelizantes, antieritemáticas, antidermatopáticas, antiquemaduras, anestésicas, anticoagulantes, coagulantes, antivarices, antiflebíticas, antiagregantes de plaquetas, fibrinolíticas, lipolíticas, de prevención de las arrugas o antienvejecimiento.

En lo que se refiere a la naturaleza de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, la única limitación impuesta por la presente invención es que se pueda conjugar químicamente al polímero de polisacárido de origen natural.

Entre las sustancias farmacológica o biológicamente activas tal como se indica anteriormente, son particularmente preferidas las caracterizadas porque presentan por lo menos un grupo amino, carboxilo, tiol o carbonilo.

También se pueden utilizar sustancias farmacológica o biológicamente activas conocidas, aunque no dispongan de grupos amino, carboxilo, tiol o carbonilo, en la forma de realización preferida de la presente invención tal como se indicó anteriormente, si dichas sustancias se pueden derivatizar mediante la introducción de uno de estos grupos (por ejemplo mediante la oxidación del grupo hidroxilo de un alcohol con el fin de obtener un grupo carbonilo o carboxilo) sin pérdida alguna o reducción sustancial de la actividad farmacológica o biológica, es decir, con el fin de obtener una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa adicional. Los ejemplos preferidos, aunque no exclusivos, de sustancias farmacológica o biológicamente activas que se pueden conjugar directamente o después de la derivatización con los polímeros de polisacárido de origen natural, preferentemente de origen vegetal, son las siguientes: hexaclorociclohexano, bencilbenzoato, mesulfene, 4-hidroxibenzaldehído, sulfadiacina, sulfadimetoxina, bacitracina, gramicidina, ketanserina, procaína, nistatina, factor de crecimiento epidermal (EGF), sulfato de dermatano (sulfato de condroitina B-Sigma C 4259), F VIII (factor antihemofílico plasmático), proteínas y glicoproteínas inmunoestimulantes, fibrinógeno o sus productos de degradación, los referidos como "FDP", heparina (preferentemente de bajo peso molecular), protrombina, naproxeno, diclofenac, lipasa, inmunoglobulinas (IgG), ácido hialurónico, colagenasa, corticoesteroides o elastina. De entre los corticoesteroides el cortisol ("hidrocortisona") es particularmente preferido. Entre las proteínas inmunoestimulantes se prefiere la fracción inmunoestimulante de Corinebacterium granulosum.

Los ejemplos preferidos aunque no limitativos de las sustancias farmacológicamente o biológicamente activas conjugadas con polímeros de polisacáridos de origen vegetal se pueden encontrar en la parte experimental de la presente solicitud.

La conjugación química según la presente invención consiste en la inserción (entre un lugar del polímero de polisacárido previamente activado y la sustancia farmacológica o biológicamente activa) de una cadena de múltiples conectores a su vez unidos entre sí, estando el primer extremo de la cadena de conectores unido a un lugar en el polímero de polisacárido y estando el segundo extremo de la cadena de conectores unido a la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención dicha conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende conectores trivalentes que permiten la conjugación de un lugar en el polímero de polisacárido con dos moléculas de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

El término conector tal como se utiliza en la presente invención se refiere tanto a átomos bivalentes únicos tales como por ejemplo -S- y a grupos completos por lo menos bivalentes, tales como por ejemplo el fragmento de lisilo siguiente:

-NH-CH_{2}(CH_{2})_{3}-CH(COOH)-NH-

que se introduce en el polímero de polisacárido según la presente invención mediante la reacción con el aminoácido lisina. Otros conectores preferidos según la presente invención son el ácido aspártico y el ácido glutámico. Otro conector preferido según la presente invención es la cisteína. Otro conector preferido según la presente invención es la tio-treonina, es decir una treonina en la que el grupo OH ha sido reemplazado por el grupo SH. Según las necesidades específicas, en algunos casos preferidos la lisina y la cisteína (así como también el ácido aspártico, ácido glutámico y también la tio-treonina) pueden ser también conectores trivalentes. En beneficio de la simplicidad terminológica, en el contexto de la presente invención, el término "conector" se refiere tanto a la sustancia la sustancia de la que el átomo insertado o fragmento (por ejemplo "H_{2}S" en el caso de -S-) se deriva como al reactivo que se utiliza con el fin de establecer o modificar una conjugación química (por ejemplo, lisina), y al fragmento bi- o multivalente que forma entonces parte de la conjugación química así obtenida (por ejemplo, el fragmento bivalente de lisilo tal como se indicó anteriormente). De manera similar, el término "conector" se pretende que comprenda (en el caso de conectores simétricos) las mezclas racémicas así como también los enantiómeros puros.

La naturaleza de los enlaces químicos que se encuentran presentes en la conjugación entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa (comprendiendo - más allá de los que se establecen durante la formación de la conjugación química - también los que se encuentran ya presentes en el conector) puede ser diferente dependiendo de que la sustancia conjugada farmacológica o biológicamente activa, con el fin de que exprese su eficacia, deba ser liberada o pueda permanecer unida al polímero propiamente. Si se desea la liberación, se seleccione una conjugación química que sea biodegradable en contacto con el cuerpo del paciente, es decir, una conjugación que comprenda por lo menos un enlace susceptible de resultar roto bajo las condiciones de utilización. Por otra parte, cuando la liberación de dicha sustancia no es deseable, se selecciona una conjugación que no resulte biodegradable en contacto con el cuerpo del paciente, es decir, una conjugación química cuyos enlaces sean estables bajo las condiciones de utilización.

En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológica o biológicamente activa comprende uno o más de los siguientes enlaces seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por enlace imino, enlace amino secundario, el enlace único entre dos átomos de nitrógeno, doble enlace entre dos átomos de nitrógeno, enlace peptídico y enlace disulfuro. La biodegradabilidad relativa de estos enlaces depende del ambiente al que se encuentran expuestos, por ejemplo, de la presencia de enzimas, agentes reductores, etc. Por ejemplo, en el contexto de la presente invención, se ha descubierto que el enlace amino secundario es sustancialmente no biodegradable en contacto con la piel.

En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende un conector cisteinilo o lisilo, es decir, obtenido a partir de cisteína o lisina.

Según la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende un policonector, en particular un conector de polilisina que comprende preferentemente un peso molecular inferior a 16000, p. eje, 4.000 a 15.000, siendo el último el más preferido.

En una forma de realización preferida de la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende un policonector que comprende un conector cisteílo a su vez unido a un conector de polilisina preferentemente de un peso molecular inferior a 16.000, p. eje, entre 4.000 y 15.000 o entre 1.000 y 4.000 siendo el último el más preferido.

En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende un conector obtenido de ácido glutámico o ácido aspártico.

En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende un policonector, en particular un conector de ácido poliglutámico o ácido poliaspártico de peso molecular inferior a 16.000. En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa comprende un policonector que comprende un conector cisteílico a su vez unido a un conector de ácido poliglutámico o poliaspártico de peso molecular preferentemente inferior a 16.000.

En una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, la conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa de la presente invención comprende un conector obtenido de tio-treonina.

En una forma preferida de la presente invención, la conjugación química entre la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa (o un derivado de la misma) y el polímero de polisacárido se encuentra situada en un átomo de carbono del polímero de polisacárido portador (antes de la conjugación) de un OH de alcohol primario o secundario.

Todavía en otra forma de realización preferida de la presente invención la conjugación química entre la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa (o un derivado de la misma) y el polímero de polisacárido se encuentra localizado en un átomo de carbono del polímero de polisacárido portador (antes de la conjugación) un grupo OH de alcohol secundario.

En lo que se refiere a la síntesis de la conjugación entre el polímero de polisacárido de origen natural, preferentemente de origen vegetal, y la sustancia farmacológicamente activa, la misma comprende:

(a): la creación, en el polímero de polisacárido, de un lugar adecuado para la conjugación química, obteniendo así un polímero de polisacárido activado, y

(b): la reacción entre el polímero de polisacárido activado y una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa o un derivado de la misma, con la formación de una conjugación química entre el polímero de polisacárido activado y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa y opcionalmente

(c): la modificación, mediante una reacción química, de la naturaleza de la conjugación química establecida en las etapas (a) y (b) entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

Según una forma preferida de la presente invención, la creación de lugares adecuados para la conjugación química en el polímero de polisacárido tiene lugar mediante la modificación de por lo menos algunos de los grupos alcohólicos OH que se encuentran presentes en el polímero de polisacárido, obteniéndose así un polímero de polisacárido activado. Los ejemplos preferidos de polímeros de polisacárido activados son los polímeros de polisacárido en los que por lo menos algunos de los átomos de carbono del polímero de polisacárido inicialmente portadores de grupos OH alcohólicos primarios o secundarios están modificados (directamente en los carbonos mencionados anteriormente o después de introducir conectores intermedios) con el fin de permitir la formación de un enlace químico con otro conector o con un grupo saliente.

Un grupo saliente es un grupo que puede ser desplazado por otro grupo en la reacción siguiente.

Haciendo referencia a la etapa (c) tal como se indicó anteriormente, se prefieren las modificaciones que pueden modular (es decir, aumentar o disminuir) la biodegradabilidad de la conjugación química, como por ejemplo la reducción de un enlace amino de una base de Schiff con el fin de obtener la correspondiente amina secundaria. Otro procedimiento preferido de síntesis según la presente invención proporciona que la etapa (a) tal como se indicó anteriormente comprende a su vez las etapas siguientes:

(a1): la oxidación o la sustitución de por lo menos algunos de los grupos OH alcohólicos que se encuentran presentes en el polímero de polisacárido, obteniéndose así un primer polímero de polisacárido activado, y

(a2): la reacción entre dicho primer polímero de polisacárido activado y un primer conector o un primer grupo saliente, obteniéndose así un segundo polímero de polisacárido activado y

(a3): la modificación, mediante reacción química, de la naturaleza de la conjugación química establecida en las etapas (a1) y (a2) entre el primer polímero de polisacárido activado y el conector o entre el primer polímero de polisacárido activado y el grupo saliente, obteniéndose así un tercer polímero de polisacárido activado, y

(a4): la reacción entre los segundo o tercer polímeros de polisacárido activado, respectivamente, obtenidos en la etapa (a2) o (a3) respectivamente, y un segundo conector o un segundo grupo saliente, obteniéndose así unos tercer o cuarto polímeros de polisacárido activado, respectivamente, en el que el primer conector ha sido extendido con el segundo conector o en el que el grupo saliente ha sido reemplazado mediante el segundo grupo saliente o mediante el segundo conector, y opcionalmente (a4 + n) repeticiones adicionales de la etapa (a4) con el fin de obtener otros polímeros de polisacárido activados.

Haciendo referencia a la etapa (a1) descrita anteriormente, la oxidación puede comprender la creación de grupos aldehído y/o cetona a partir de los grupos alcohólicos OH primarios y/o secundarios que se encuentran en el polímero de polisacárido. En cualquier caso, es importante que las condiciones seleccionadas sean lo suficientemente suaves para no destruir la cadena del polímero. En una forma de realización preferida, la oxidación se realiza sin metaperiodato e implica la oxidación estereoselectiva de los grupos OH alcohólicos secundarios que constituyen el diol vecinal en el anillo de glucosa.

Haciendo referencia a la etapa (a3) descrita anteriormente, resultan preferidas las modificaciones que modulan (es decir, incrementan o disminuyen) la biodegradabilidad de la conjugación química, tales como por ejemplo, la reducción de un enlace amino de una base de Schiff con el fin de obtener la amina secundaria correspondiente.

Otro procedimiento preferido de síntesis según la presente invención proporciona que la etapa (a) tal como se indicó anteriormente comprenda las siguientes etapas:

(a1): la esterificación de los grupos alcohólicos OH que se encuentran en el polímero de polisacárido con ácido glutámico o aspártico, obteniéndose así un primer polímero de polisacárido activado, y opcionalmente

(a2): la reacción entre dicho primer polímero de polisacárido activado y un conector o grupo saliente, obteniéndose así un segundo polímero de polisacárido activado, y

(a2 + n) repeticiones adicionales de la etapa (a2) con el fin de obtener otros polímeros de polisacárido activados.

Haciendo referencia a la etapa (a1) anterior, según las condiciones/concentraciones seleccionadas dicha esterificación puede ser parcial o implicar tanto los grupos OH de alcohol primario como los grupos OH de alcohol secundario, hasta que se obtiene una esterificación cuantitativa. Los ejemplos específicos de procedimientos de síntesis preferidos según la invención son los siguientes:

Procedimiento A que comprende las siguientes etapas:

(a1): oxidación por lo menos parcial de los grupos OH de alcohol presentes en el polímero de polisacárido, obteniendo así un primer polímero de polisacárido activado que comprende grupos aldehído, y

(a2): la reacción entre dicho primer polímero de polisacárido activado que comprende grupos aldehído y lisina, obteniendo así un segundo polímero de polisacárido activado que representa la base de Schiff formada entre dicho primer polímero de polisacárido activado y uno de los grupos amino de la lisina, y opcionalmente

(a3): la reducción de dicho segundo polímero de polisacárido activado, obteniendo así un tercer polímero de polisacárido activado en el que el grupo imino presente en la base de Schiff ha sido reducido a la correspondiente amina secundaria.

Mientras que en el procedimiento A tal como se describió anteriormente, se une la lisina al polímero de polisacárido activado de acuerdo con dos orientaciones diferentes (es decir, mediante su grupo \alpha-amino o \epsilon-amino) generando un producto "mezcla", en la etapa (a2) también es posible introducir un conector de lisilo en el que, por ejemplo, la posición \alpha-amino está convenientemente protegida como para permitir la reacción del polímero de polisacárido activado solamente con la posición \epsilon-amino del conector de lisilo, generando así, después de la desprotección, un producto homogéneo.

En la presente invención el conector de lisina es particularmente preferido ya que puede reaccionar no solamente con sustancias farmacológicamente o biológicamente activas que comprenden grupos carbonilo (es decir, grupos aldehído o cetona), sino - bajo las condiciones de formación de enlaces peptídicos - también con sustancias farmacológicamente o biológicamente activas que comprenden grupos amino o grupos carboxilo.

\newpage

Después del procedimiento A, el conector de lisilo se extiende (por ejemplo mediante la adición de otros aminoácidos, de manera similar a la síntesis de polipéptidos sobre una fase sólida según Merrifield) antes de establecer el enlace (o enlaces) con la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, construyendo así un policonector, en particular un policonector de lisilo, que puede teóricamente recibir por lo menos un equivalente de sustancia farmacológicamente o biológicamente activa por residuo de lisilo. Por el contrario, el policonector se puede conectar como tal o a través de conectores adicionales al polímero de polisacárido activado. Así, en el caso de que el policonector comprenda conectores tri- (o superior) -valentes (como, por ejemplo, en el caso del ácido poliglutámico o poliaspártico así como también en el caso del conector de polilisina preferido) se puede obtener una ventaja considerable con respecto al lugar activado en el polímero en el sentido de que se pueden enlazar en el mismo lugar múltiples equivalentes de sustancia farmacológicamente o biológicamente activa por grupo lisilo. Con ciertos policonectores como, por ejemplo, polilisina, y dependiendo de las condiciones adaptadas, puede tener lugar en menor grado algo de entrecruzamiento de los lugares activos en el polímero a través de los policonectores ("efecto de curado"). Así, tanto dicha "ventaja" y dicho "efecto de curado" permiten la sustancial conservación de las propiedades mecánicas del polímero en comparación con la conjugación directa. Aparte del efecto de ventaja, incluso si la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se conjuga solamente al residuo más lejano del conector del poli conector, se puede producir un incremento en la eficacia de conjugación y una actividad optimizada. Las últimas mejoras parecen ser debidas a un "efecto de separador" que se produce porque la cadena del poli conector extendida proporciona un incremento de motilidad a la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

Procedimiento B

(a1): sulfonesterificación por lo menos parcial de los grupos OH alcohólicos presentes en el polímero de polisacárido mediante una reacción con cloruro de tosilo o cloruro de mesilo, obteniendo así un primer polímero de polisacárido activado y

(a2): la sustitución de los grupos tosilo o mesilo presentes en el primer polímero de polisacárido activado con grupos SH, obteniendo así un segundo polímero de polisacárido activado que comprende grupos tiol, y

(a3): haciendo reaccionar el segundo polímero de polisacárido activado que comprende grupos tiol con cisteína, obteniendo así un tercer polímero de polisacárido activado que comprende residuos cisteinílo conectados al segundo polímero de polisacárido activado mediante enlaces disulfuro, y

(b): formación de una base de Schiff entre un grupo carbonilo presente en una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa o en uno de sus derivados y el grupo amino del residuo cisteinilo.

El producto obtenido según el procedimiento C(b) es un ejemplo de sustancia según la presente invención en la que la conjugación química entre el polímetro de polisacárido y la sustancia farmacológica o biológicamente activa se establece mediante dos conectores, es decir, el conector -S- y el conector cisteína.

El conector cisteína es particularmente preferido en los procedimientos según la presente invención ya que, además de las posibilidades de formación de enlaces peptídicos en su extremo carboxilo y amino, tal como se describió anteriormente para la lisina, la cisteína puede también reaccionar con sustancias que comprenden un grupo tiol como grupo saliente tal como se da a conocer a continuación:

Según otra forma de realización preferida de la presente invención la tiol-treonina puede reemplazar a la cisteína como conector en algunas situaciones.

Como consecuencia, se ha demostrado la extrema versatilidad de algunos de los procedimientos de síntesis según la presente invención, en particular la de los procedimientos particularmente preferidos que implican la modificación de los grupos OH alcohólicos del polímero de polisacárido junto con la utilización opcional de H_{2}S, cisteína o lisina como conectores o como grupos salientes, con el fin de conjugar sustancias farmacológicamente o biológicamente activas que comprenden grupos amino, tiol, carboxilo o carbonilo. En particular, se ha demostrado que la anterior es una serie de síntesis de conjugación que permite enlazar al polímero de polisacárido, por ejemplo, la fibra de algodón o de viscosa, fármacos o sustancias biológicamente activas con diferentes naturalezas y diferentes propiedades farmacológicas. También se debe observar que la serie de síntesis de conjugación también permite, dependiente de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa utilizada, una conjugación química que, en lo que concierne a la longitud (controlable mediante la introducción de conectores, por ejemplo de tipo aminoácido) de la conexión establecida, la eventual biodegradabilidad de los enlaces comprendidos en la conjugación química y la posición de la conexión en el polímero de polisacárido y en la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, está "hecha a medida". Otros ejemplos de procedimientos de síntesis preferidos según la presente invención se describen en la parte experimental de la presente memoria.

Es importante que la conjugación química se pueda realizar indiferentemente de las múltiples formas macroscópicas del polímetro de polisacárido, es decir, en las fibras o en los múltiples productos elaborados obtenidos a partir de dicho polímero, por ejemplo, en fibras de algodón, en hilos (producto semiterminado) o en el producto terminado (tela, tela no tejida, gasa, vendaje) que se pueden utilizar como tales o con el fin de preparar otros productos tales como tampones, guantes, máscaras, medias, toallas sanitarias, etc. también se debe advertir que la posibilidad de realizar la conjugación química en la fibra o en el producto semiterminado genera la posibilidad de proporcionar productos terminados que soportan dos o más sustancias farmacológicamente o biológicamente activas. Por ejemplo, mediante la utilización de dos hilos derivatizados, se pueden obtener gasas que comprenden, por ejemplo, tanto una sustancia desinfectante (unida por ejemplo mediante una conjugación química no biodegradable) como una sustancia terapéutica que se libera mediante biodegradación de la correspondiente conjugación química. Dichas gasas multiactivas según la presente invención, son muy ventajosas debido a que permiten ahorrar material con respecto a las medicaciones tradicionales que habrían necesitado la aplicación de un desinfectante y un medicamento y la sustitución diaria de la gasa.

En lo que concierne al grado de conjugación con la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, este puede ser modificado por el experto en la materia según las múltiples necesidades, mediante la modificación, por ejemplo, de la temperatura de reacción y el tiempo o mediante la utilización de agentes bloqueadores (por ejemplo glicina), entre una utilización parcial (subestequiométrica) o sustancialmente total (estequiométrica) de los lugares que son adecuados para la conjugación química en el polímero de polisacárido. La utilización de conectores tri- o multifuncionales como policonectores incrementa todavía más el grado total de conectores tri- o multifuncionales como policonectores e incrementa todavía más el grado total de conjugación química que puede alcanzar el experto en la materia según las múltiples necesidades.

En lo que concierne a la utilización de polímeros de polisacárido según la presente invención en la preparación de fármacos y los fármacos o cosméticos y productos higiénicos medicinales así obtenidos, se encuentran los siguientes ejemplos que representan formas de realización preferidas pero no limitativas de la presente invención.

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Ejemplos 1. Tampones sanitarios vaginales y toallas sanitarias 1.a. Antihemorrágicos

Polímero de polisacárido de origen vegetal, en particular algodón conjugado a protrombina o fibrinógeno o fibrina o factor VIII de la coagulación. En este caso el enlace químico puede ser estable, es decir, no biodegradable en contacto con el paciente. Los agentes activos coagulantes conjugados de naturaleza proteica contribuyen a construir un agregado (plaquetas + fibrina), reduciendo así el efecto hemorrágico durante las menstruaciones. Dicho tampón es un ejemplo de producto higiénico según la presente invención.

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1.b. Efecto antiinfeccioso a. Antimicóticos

Los ejemplos que se consideran son de polímero de polisacárido de origen vegetal, en particular algodón conjugado a miconazol, nistatina y ácido benzoico.

El miconazol es particularmente activo en la candidiasis vulvo-vaginal, la nistatina actúa en particular sobre la candidiasis, en infecciones provocadas por Trichophyton glabrata, por Epidermophyton, etc.; el ácido benzoico, generalmente en asociación con ácido salicílico, se utiliza como un micostático general tópico.

b. Antisépticos (desinfectantes)

El ejemplo considerado es la fibra de algodón conjugada a fenol, es decir, a 4-hidroxibenzaldehído como derivado del fenol.

El fenol y sus derivados desarrollan su acción germicida mediante un mecanismo de desnaturalización de las proteínas: presentan una elevada penetrabilidad en los tejidos y son por lo tanto muy tóxicos.

Su conjugación no biodegradable con la fibra de algodón durante su utilización evita su absorción y por lo tanto los efectos tóxicos.

c. Antibacterianos

El ejemplo que se considera es fibra de algodón conjugada a bacitracina, gramicidina y sulfadiazina.

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1.c. Antiinflamatorios

Se conjuga la fibra de algodón a antiinflamatorios FANS (p.ej., naproxeno, diclofenac) y corticosteroides tales como, por ejemplo, cortisol.

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1.d. Imunoestimulantes

La estimulación de las funciones de las células inmunocompetentes en el tejido de la submucosa puede incrementar las defensas contra los patógenos y antagonizar los procesos inflamatorios de diferente origen en el tejido.

En este caso el agente activo que se debe conjugar al algodón comprende glicoproteínas con actividad inmunoestimulante no específica y de origen microorgánico: por ejemplo, de Corinebacterium, parvum y catarralis [B. Bizzini, B. Maro and P. Laloutette, Médecine et Mal. Inf., 8:408 (1978); T. Metianu e B. Bizzini, Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis., 4:285 (1981)].

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2. Medias y leotardos 2.a. Antivarices y antiflebitis

Las varices y la flebitis implican la coagulación y la función parietal de los capilares sanguíneos.

Una de las causas parece ser que el contacto continuo entre zonas de la piel particularmente llenas de capilares y las fibras, en particular las fibras artificiales tales como el nilón, puede reducir el contacto con el aire y su subsiguiente oxigenación.

Un buen medicamento destinado a evitar y tratar la varicoflebitis debe poseer propiedades anticoagulantes, antiagregantes de las plaquetas y antifibrinolíticas.

La heparina y la heparina de bajo peso molecular (MW de aproximadamente 6.000 D - Sigma H2149) presentan estas propiedades.

Su conjugación con la fibra de algodón puede optimizar sus efectos locales mediante su permanencia in situ.

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2.b. Antitrauma

En el tratamiento del trauma de la piel debido a estímulos mecánicos, la radiación u otras causas, pueden resultar de utilidad las gasas o vendajes de fibra de algodón, derivatizadas tanto con heparina de bajo peso molecular como con antiinflamatorio esteroideo (por ejemplo cortisol) o con FANS.

Los mismos materiales conjugados a glicoproteínas inmunomoduladoras no específicas se pueden utilizar con tanto éxito como en el caso anterior.

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2.c. Antidepósito de lípidos

Con el fin de tratar los depósitos subcutáneos y las almohadillas de grasa es posible utilizar medias, leotardos, pantalones, pantalones cortos, vendajes realizados en fibra de algodón derivatizada con el enzima lipasa (tipo V - Sigma L. 1754), que son ejemplos de los productos cosméticos según la presente invención.

El enzima, mantenido en su lugar en una posición adherente, puede penetrar hasta la submucosa desarrollando su efecto lítico movilizador.

Se pueden obtener efectos mejores mediante el tratamiento del tejido con fibras mezcladas derivatizadas con lipasa y con heparina de bajo peso molecular.

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3. Guantes antialérgicos

La idea básica para obtener guantes u otros materiales (por ejemplo, gasas) con un efecto antialérgico es conjugar la fibra de algodón a inmunoglobulinas que son específicas contra el alérgeno.

Como una consecuencia del contacto prolongado, el alérgeno en si se puede acomplejar y por consiguiente desactivar.

Se puede obtener un resultado mejor si se obtiene la tela con fibras mezcladas seleccionadas de entre las que están derivatizadas con inmunoglobulinas y las que están derivatizadas con glicoproteínas inmunoestimulantes.

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4. Gasas 4.a. Desinfectantes

Son válidos los ejemplos mencionados anteriormente, con fibra de algodón derivatizada con germicidas, antimicóticos o antibacterianos.

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4.b. Cicatrizantes

Un ejemplo típico de gasas o vendajes cicatrizantes se proporciona mediante su obtención con fibras de algodón derivatizadas con péptidos obtenidos de la fragmentación del fibrinógeno (por ejemplo Sigma F 3643).

Otro ejemplo es una fibra en la que el agente conjugado es la fibronectina (Sigma 2006) o péptidos que promocionan su adhesión (Sigma F 3667).

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4.c. Antiúlcera y reepitelizantes

Las úlceras, úlceras de decúbito y otros tipos de daño tisular crónico o que se puede cronificar implican múltiples biomecanismos tales como inflamación, procesos inmunes, angiogénesis y otros.

La estrategia terapéutica destinada a reparar puede ser por consiguiente diferente mediante la utilización de sustancias con una efectividad diferente o multifactorial.

De entre las sustancias que han mostrado cierta efectividad sobre biomecanismos específicos implicados se pueden mencionar:

a.: keratoserina (MW 395.40 Fluka 60712) - R.P. Rooman and H. Jansen, Clin. Exp. Appr. To Derm. And Epiderm. Repair, Eds. A. Barbul and coll., Prog In Clin. Biol. Res. Vol. 365, 1991, 115, Wiley Liss, NY.

b.: ácido hialurónico - N. Scott Adzick and M. T. Longaker, Ibid., Page 177

c.: Epidermal Growth Factor (EGF - sigma E 9644) o sus fragmentos peptídicos (fragmento 20 - 31 Sigma E 9384) -M. Eisinger, R. B. Flick, J. Bizick and Y. Arita, Ibid., pag. 375.

d.: inmunomoduladores no específicos, tales como las glicoproteínas de origen microorgánico - M. Laato, Ibid., pag. 459.

Según la naturaleza del daño tisular (herida, úlcera de decúbito, otras) puede resultar de utilidad utilizar uno o más de los principios activos mencionados anteriormente.

Según la presente invención estas sustancias se conjugan individualmente a la fibra de algodón.

Según la presente invención la tela, gasa, etc. se puede obtener con una o más fibras o hilos derivatizados de modo diferente.

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4.d. Antieritema y antidermatopatías con matriz infectiva e inmune

Ejemplos de enfermedad: dermatitis atópica y de contacto, urticaria, psoriasis, pénfigo.

La idea básica consiste en utilizar siempre tela de algodón (gasa) obtenida con fibras simples o asociadas derivatizadas con agentes inmunoestimulantes, cortisona, agentes antibacterianos, etc., según la causa de la patología y su evolución.

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4.e. Antiquemaduras debidas a rayos UV u otras causas

El principio terapéutico es el mismo que se ha mencionado anteriormente con la posibilidad de utilizar fibras derivatizadas con ácido hialurónico o con péptidos obtenidos mediante la degradación del fibrinógeno como agente reepitelizante (regenerando el tejido de piel dañado o necrosado).

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4.f. Prevención de las arrugas y antienvejecimiento

Múltiples factores se encuentran implicados en el proceso de envejecimiento de la piel y eventos relacionados.

De entre éstos, se encuentra desde luego una elasticidad reducida de la piel, una función reducida del sistema inmunocompetente subcutáneo, un patrón morfológico y metabólico modificado de la estructura del colágeno y, según algunos investigadores, una biodisponibilidad reducida del ácido hialurónico (A. K. Balin and A. M. Kligman, Aging and the skin, 1989, Raven Press, NY).

Las zonas más implicadas en estos mecanismos son generalmente las sometidas a trauma e irradiación de diferentes naturalezas tales como la cara, el cuello las piernas.

Las sustancias que se pueden utilizar en la prevención y corrección de tales casos sobre la base de los resultados conocidos son: polisacáridos del tipo sulfato de dermatano (sulfato de condroitina B - Sigma C 4259); agentes inmunoestimulantes no específicos de origen bacteriano, colagenasas (Sigma C0130), elastina (Sigma E 1625).

Estos principios activos, conjugados, por ejemplo, a fibras de algodón, se pueden aplicar sobre las zonas concernientes mediante gasas u otros productos obtenidos del algodón, obteniéndose así productos cosméticos.

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5. Lana de algodón sanitaria 5.a. Desinfectante

Con fibra derivatizada con agentes germicidas o antibacterianos, tal como se describió anteriormente.

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5.b. Anestésico

Con fibra derivatizada con un anestésico local según los ejemplos descritos anteriormente.

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6. Productos utilizados en la industria de la alimentación

Las gasas (vendajes) conjugados a desinfectantes (por ejemplo ácido benzoico), agentes antimicóticos (por ejemplo, nistatina) y/o agentes antibacterianos (por ejemplo, sulfadiazina, bacitracina, etc.) se pueden utilizar con el fin de filtrar queso o vendar salchichas (salamis) y queso.

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7. Telas antiácaros

Las telas (tanto las de tipo urdido como las de tipo no urdido) se pueden conjugar a agentes antiácaro con el fin de evitar la contaminación de dichas telas (que a su vez se pueden utilizar en la fabricación de artículos domésticos realizados a partir de textiles tales como alfombras, cortinas, ropas de cama, colchones y similares) por los ácaros y más importante con sus metabolitos, que son portadores de un considerable riesgo alergénico que desafía a los seres humanos que se exponen continuamente al contacto con las telas, en particular con los artículos domésticos. Se puede estimar razonablemente que las telas resistentes a los ácaros tendrán una vida considerablemente más larga, en lo que se refiere al riesgo alergénico considerablemente menor. Por otra parte, antes de la presente invención, la protección contra los ácaros habría necesitado la impregnación de la tela con acaricidas, con el riesgo inherente de la liberación rápida e incontrolada del agente activo. Así, además del peligro resultante de la posible liberación inicial de sustancias tóxicas, el logro de una actividad antiácaro realmente prolongada en el tiempo (y en particular soportando el limpiado al que la mayoría de las telas se somete durante su vida) fue extremadamente
difícil.

El problema mencionado anteriormente se resuelve mediante la presente invención que proporciona, por primera vez, un polímero de polisacárido conjugado a una sustancia activa con actividad antiácaro. Las sustancias preferidas en la presente invención son el hexaclorociclohexano (en particular gamma-hch, al que se hace asimismo referencia como lindano o gamahexano, pero también los restantes 7 estereoisómeros), bencilbenzoato o mesulfeno que se pueden conjugar a través de conectores adecuados o los policonectores de la presente invención a los polímeros de polisacárido con el fin de proporcionar el deseado efecto antiácaro a largo tiempo sin la liberación de dosis
tóxicas.

Parte química experimental I. Ejemplos de conjugación directa mediante el conector de lisilo o hidracilo (Comparativo) A. Derivatización química de la fibra de algodón

1

Síntesis cuantitativa

Se pretrata una alícuota de fibra de algodón natural pretratada mediante suspensión en acetona con agitación suave durante 15 minutos, con el fin de obtener su desengrase (también se podría haber utilizado cloroformo con tal propósito); se elimina la acetona, las fibras se lavan múltiples veces con agua y se secan.

A continuación se suspenden 20 g de algodón (fibra desengrasada) en 1 l de disolución de metaperiodato sódico reciente (Fluka 71859) 0,05 M (10,7 g/l) en agua destilada.

La fibra se mantiene con agitación suave durante 5 horas a la temperatura del laboratorio y en ausencia de luz.

La disolución oxidante se elimina a continuación y se lava la fibra múltiples veces con agua (se obtiene el reactivo X, algodón-CHO, el primer polímero de polisacárido). Debido a que la oxidación controlada con periodato de la celulosa en las condiciones descritas en la presente memoria conduce a la ruptura del anillo de D-glucosa entre dos grupos de alcohol vecinales (que se transforman en dos grupos de aldehído), dicha oxidación controlada (debido a su especificidad por los dioles vecinales) permite mantener sustancialmente la cadena molecular de celulosa y por consiguiente no conduce a tal fragmentación que destruye la fibra de celulosa que sufre la activación. Dicha fibra activada (reactivo X) se resuspende en 500 ml de una disolución de HCl lisina (Fluca 62960) en agua (1,8 g/500 ml) y la reacción es prolongada durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación. En estas condiciones la base de Schieff entre la fibra de algodón oxidado (reactivo X) y según la orientación, una de las posiciones amino de la lisina, se obtienen como segundo polímero de polisacárido activado. Por consiguiente, dicho segundo polímero de polisacárido activado ("algodón-CH=N-lys") es una mezcla de las dos bases de Schiff que se pueden obtener, tal como se dio a conocer anteriormente en la siguientes etapas 3a y 3b.

A continuación se añade a la reacción 1 g de NaBH_{4} (Fluka 71320) y se mantiene durante 1 hora a temperatura ambiente con agitación.

Se filtra la fibra y se lava múltiples veces con agua (se obtiene el reactivo Y, es decir el tercer polímero de polisacárido activado, que es una mezcla de las dos orientaciones obtenidas tal como en las etapas 3a y 3b).

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B. Conjugación de un bactericida con la fibra de algodón

Se consideran como ejemplos de bactericida un dialdehído y un derivado de fenol.

El esquema de síntesis es el siguiente:

Ejemplo nº 1

(Comparativo)

A 10 g de fibra de algodón derivatizada (reactivo Y), resuspendida en 250 ml de tampón de carbonato-bicarbonato 0,05 M, pH 9,0 se le añaden 0,3 g (es decir 1,2 ml de una disolución al 25%) de glutaraldehído (Fluka 49624) y se mantiene con agitación a temperatura ambiente durante 1 hora.

La fibra se lava múltiples veces con el fin eliminar el exceso de reactivo y a continuación se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-CH_{2}-NH-lis-N=CH-(CH_{2})_{3}-CHO

En el presente Ejemplo Comparativo se une el glutaraldehído al polímero de polisacárido mediante el conector de lisilo, con la creación de un segundo enlace amino entre el polímero de polisacárido activado y el conector y de un enlace imino entre la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa y el conector. A su vez, se puede unir una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa al residuo terminal de aldehído.

El rendimiento de agente activo conjugado = 82%.

Opcionalmente, según las necesidades de biodisponibilidad de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, el enlace imino de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se puede reducir, por ejemplo, mediante NaBH_{4}, obteniendo así el correspondiente enlace amino secundario.

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Ejemplo nº 2

(Comparativo)

A 10 g de fibra de algodón derivatizada (reactivo Y), resuspendidos en 250 ml de tampón de carbonato-bicarbonato 0,05 M, pH 9,0, 0 se le añaden 0,4 g de 4-hidroxibenzaldehído (Fluka 54589).

La reacción se realiza con agitación a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuación la fibra se lava múltiples veces con el fin de eliminar el exceso de reactivos.

A continuación se añade 1 g de NaBH_{4} (Fluka 71320), la reacción se realiza a temperatura ambiente con agitación durante 1 hora, a continuación se filtra la fibra y se lava múltiples veces con agua.

A continuación se seca la fibra.

Se obtiene lo siguiente:

Algodón-CH_{2}-NH-lis-NH-CH_{2}-Ph-OH

en la que Ph es un radical de para-fenileno.

El rendimiento de ingrediente activo conjugado: 74%.

En el presente Ejemplo Comparativo la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, que es un derivado de fenol, se conjuga con el polímero de polisacárido a través del conector de lisilo, con la creación de dos enlaces amino secundarios.

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C. Conjugación de la fibra de algodón a bacteriostáticos con estructuras diferentes C.1 Conjugación de fibra de algodón a un fármaco de sulfamida (Comparativo)

A 10 g de fibra de algodón oxidado (reactivo X), resuspendida en 250 ml de agua, se le añade 1 g de sulfadiacina sal sódica (Sigma S 6387) previamente disuelta en 10 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,05 M, pH 9,0 y la reacción se mantiene a temperatura ambiente con agitación durante 1 hora.

El conjugado obtenido es una base de Schiff entre el primer polímero de polisacárido activado (reactivo X) y el grupo amino de la sulfadiacina. En este conjugado la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se une al polímero de polisacárido a través de un doble enlace, es decir el enlace imino.

A continuación se añade 1 g de NaBH_{4} (Fluka 71320) y se agita el conjunto durante 10 minutos.

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La fibra derivatizada se lava múltiples veces con el fin de eliminar el exceso de agente reductor y a continuación se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-CH_{2}-sulfadiacina

En el presente Ejemplo Comparativo la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se une al polímero de polisacárido a través de un solo enlace, es decir, el enlace amino secundario.

El rendimiento de sulfadiazina conjugada es 87%.

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C.2. Conjugación de bacitracina a fibra de algodón

A 10 g de fibra de algodón oxidada (reactivo X), resuspendida en 250 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,05 M pH 9,0 se le añade 0,2 g de bacitracina (Fluka 11792) en polvo.

La reacción se realizó a temperatura ambiente con agitación durante 2 horas.

Se añadió 1 ml de glicina 2 M (Fluka 50046) (150 mg/ml) y se continuó la agitación durante una hora adicional.

La fibra derivatizada se lava múltiples veces y a continuación se lava.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-CH=N-bacitracina

El rendimiento de bacitracina conjugada es 94%.

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C.3. Conjugación de fibra de algodón con gramicidina

Se aplican las mismas condiciones experimentales que en el elemento C.2) y las mismas proporciones en peso.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-CH=N-gramicidina

Rendimiento de gramicidina conjugada: 88%

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D. Conjugación de un anestésico local a fibra de algodón

En el presente caso se seleccionó procaína como ejemplo.

La reacción de conjugación es la siguiente:

Se resuspenden 10 g de fibra de algodón oxidada (reactivo X) en 250 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,05 M, pH 9,0 y se añade 0,2 g de procaína HCl (Fluka 81666), disuelta en 5 ml de agua destilada, con agitación.

La reacción se realiza durante 2 horas a temperatura ambiente, a continuación los lugares de aldehído que todavía se encuentran libres se bloquean mediante la adición de 1 ml de glicina 2 M; la reacción se realiza durante 1 hora a temperatura ambiente.

La fibra se lava a continuación múltiples veces con el fin de eliminar el exceso de reactivos no unidos a la fibra, y a continuación se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-CH=N-\text{procaína}

En el Ejemplo Comparativo presente la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se une al polímero de polisacárido mediante un doble enlace, en particular el enlace imino de la base de Schiff formado entre la función aldehído del polímero de polisacárido activado y el grupo amino de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

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Rendimiento de procaína conjugada 85%

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E. Esquema de conjugación de la fibra de algodón a factores de coagulación con estructura macromolecular E.1. Conjugación con F VIII (factor antihemofílico plasmático) (a) derivatización de la proteína

Formación del derivado de hidracida.

Se disuelven 10 g de F VIII en 200 ml de agua y se les añade una disolución de hidracida de ácido atípico 0,5 M (Fluka 02191) (87 g/l; 20 ml) a pH 5,0 y se completa el volumen a 250 ml con agua.

Se añade una disolución acuosa de 1-etil-3-(3-metilaminopropil)carbodiimida (Sigma E 1789), ("EDAC") (1 g en 5 ml de tampón de acetato pH 5,6) y se hace reaccionar durante 6 horas a temperatura ambiente con agitación, el valor del pH se mantiene inferior a 5 mediante la adición de ácido clorhídrico.

A continuación se dializa el conjunto contra un tampón carbonato/bicarbonato 10 mM, pH 9.

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(b) Reacción de conjugación

El producto dializado se añade a 10 g de fibra de algodón oxidada (reactivo X) resuspendida en 250 ml de carbonato - bicarbonato 0,05 M, pH 9,0.

La reacción se realiza durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación.

A continuación se añade 1 g de NaBH_{4} y se realiza la reacción durante 1 hora a temperatura ambiente con agitación.

La fibra se filtra y a continuación se lavan múltiples veces con el fin de eliminar los compuestos no reaccionados.

A continuación se seca la fibra.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-CH_{2}-NH-NH-C(O)-F\ VIII

Rendimiento de FVIII conjugado 72%.

En el presente Ejemplo Comparativo la conjugación entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se estableció a través de un conector de hidracina. El conector de hidracilo se introdujo mediante la derivatización de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa. La conjugación así obtenida comprende (además de un enlace amino secundaria y un enlace peptídico) un enlace simple entre dos átomos de nitrógeno.

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E.2. Conjugación del fibrinógeno

Se suspenden 10 g de fibra de algodón activada (reactivo Y) en 250 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,05 M, pH 9,0. Se añaden 0,1 g de fibrinógeno (Sigma F 3879) en 1 ml del mismo tampón e inmediatamente después 0,5 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (Sigma E1769), ("EDAC") en polvo. Se realiza la reacción con agitación a 4ºC durante 12 horas, controlando constantemente el valor del pH a 5,5 con HCl 0,1 N durante la primera hora.

Se bloquea la reacción mediante la adición de 1 ml de glicina 2 N continuando la reacción durante 2 horas adicionales a 4ºC.

La reacción se lava múltiples veces con agua con el fin de eliminar los reactivos no reaccionados.

Se seca el conjunto y se añade la siguiente mezcla:

algodón-CH_{2}-NHCH_{2}-(CH_{2})_{3}-CH(CO-NH-fibr)-NH-CO-fibr

y

algodón-CH_{2}-NH-(CO-NH-fibr)CH-(CH_{2})_{3}-CH_{2}-NH-CO-fibr

el rendimiento de fibrinógeno conjugado es de 95%. Se obtiene un ejemplo en el que el conector de lisilo (introducido estadísticamente según las posibles orientaciones posibles), debido a los dos enlaces peptídicos con dos equivalentes de sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, es un conector trivalente.

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F. Esquema de conjugación de una glicoproteína imunoestimulante (es decir, asociación de un péptido glicano con una glicoproteína obtenida de Gorinebacterium granusolum, parvun o catarralis

Se suspenden 10 g de fibra de algodón oxidada (reactivo X) en 250 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,05 M, pH 9,0.

Se añade a continuación en el mismo tampón 0,2 g de suspensión de la fracción inmunoestimulante (obtenida en el laboratorio según el procedimiento descrito por B. Bizzini tal como se indicó anteriormente).

Se realiza la reacción durante 6 horas con agitación a temperatura ambiente.

A continuación se añade 1 g de NaBH_{4} y se continúa la reacción durante 1 hora, con agitación a temperatura ambiente, a continuación el algodón derivatizado se lava cuidadosamente con agua y se seca.

Se obtiene una fibra de algodón derivatizado, en la que la conjugación entre el polímero de polisacárido y la glicoproteína inmunoestimulante se estableció a través de un enlace amino secundario entre dicho polímero de polisacárido y el grupo aminoterminal del la glicoproteína (evidentemente, si la glicoproteína comprende aminoácidos aminados, tales como por ejemplo lisina, estadísticamente los grupos amino "laterales" también forman enlaces amino secundarios).

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II. Ejemplos de conjugación a través de conjugación con algodón-S-S-cisteína (es decir, con dos conectores: -S- y cisteína, unidos uno al otro mediante un enlace disulfuro) y a través de conjugación con algodón-S- (es decir, mediante un conector de azufre) A. Derivatización química de la fibra de algodón (introducción de grupos SH)

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Esquema de síntesis

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2

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Síntesis cuantitativa

Ejemplo nº 1

Derivatización con cloruro de tosilo

Se tratan 10 g de fibras de algodón, suspendidas en una mezcla de 200 ml de tampón fosfato 0,1 M pH 8,5 y 100 ml de dioxano, con 7 g de cloruro de tosilo (Sigma T3, 595-5) a temperatura ambiente con agitación durante 4 horas.

El algodón derivatizado se lava múltiples veces con agua antes de resuspenderlo en 200 ml de tampón acetato 0,1 M pH 5,5, que contiene tioacetato potásico 0,5 M (11 g).

La transesterificación se realiza durante 24 horas a temperatura ambiente, el algodón se lava múltiples veces con agua.

La desacetilación del derivado de tioacetato de algodón se obtuvo mediante el ajuste del pH de la suspensión de algodón en 200 ml de agua a un valor del 12,0.

El tioderivado se lava múltiples veces en agua y a continuación se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-SH (reactivo W)

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Ejemplo nº 2

Derivatización del algodón-SH con cisteína

A 10 g de algodón-SH suspendido en 200 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,5 M pH 9,0 se le añade 1,5 g de L-cisteína 2HCl (Sigma C 2526) disuelta en 20 ml de agua.

Se realiza la reacción con agitación durante 4 horas a temperatura ambiente.

El algodón se lava múltiples veces con agua y se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-NH(NH_{2})-COOH (reactivo C)

Rendimiento de la reacción: 86%

En el derivado de algodón activado el polímero de polisacárido se ha conjugado con el conector -S- (o conector de azufre), formalmente derivado del H_{2}S, que a su vez se ha conjugado con el conector de cisteinilo a través de un enlace disulfuro. Ya que únicamente existe una posibilidad para la formación de un enlace disulfuro, diferentemente del conector de lisilo tal como se describió anteriormente, el conector cisteinilo reacciona con el polímero de polisacárido activado en una orientación solamente.

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B. Conjugación de fibrinógeno a la fibra de algodón

A 10 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 200 ml de tampón acetato 0,1 M, pH 5,5 se les añaden 0,1 g de fibrinógeno (Sigma F3879) en 10 ml del mismo tampón e inmediatamente después 0,5 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (Sigma E 1769), ("EDAC") en polvo.

Se realiza la reacción con agitación a temperatura ambiente durante 4 horas, con ajuste constante del valor del pH a 5,5 con HCl 0,1 N durante la primera hora.

Después de la reacción se lava el algodón múltiples veces con agua y se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-CH(NH-CO-fibr)-CONH-fibr

Rendimiento de fibrinógeno enlazado: 68%

En el presente ejemplo comparativo la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa se ha conjugado al polímero de polisacárido a través de dos conectores, el primero comprende -S- (formalmente obtenido del H_{2}S) y el segundo es el conector de cisteinilo (formalmente obtenido de la cisteína). En el caso presente, debido a los dos enlaces peptídicos entre el conector cisteinilo y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, el conector cisteinilo constituye un conector trivalente.

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C. Conjugación del Factor VIII de la coagulación a fibra de algodón

El esquema de conjugación es tal como el que se utilizó anteriormente para el fibrinógeno.

El rendimiento de Factor VIII conjugado es de 64%.

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D. Conjugación de heparina de bajo peso molecular (MW) a fibra de algodón 1. Oxidación periódica de la heparina

Se disuelven 0,25 g de heparina sódica (sigma H 1636) en 10 ml de tampón acetato 0,01 M conteniendo 0,01 M NaIO_{4}.

Se agita la disolución en ausencia de luz a temperatura ambiente durante 20 minutos.

La reacción se interrumpe mediante la adición de 100 \mul de glicerol mantenido en contacto durante 15 minutos con agitación constante.

La heparina oxidada se dializa a continuación contra un tampón de carbonato-bicarbonato 0,1 M pH 9,0.

De manera similar al caso del polímero de polisacárido descrito en el elemento I anterior, también en este caso la oxidación controlada con metaperiodato (que es específica para los dioles vecinales) produce dos grupos aldehído en el sustrato farmacológicamente o biológicamente activo, con la ruptura del enlace del anillo del ácido d-glucurónico obtenido en la heparina en las posiciones ocupadas por los grupos de alcoholes vecinales secundarios.

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2. Conjugación de heparina oxidada con algodón-S-S-cisteína

Se hacen reaccionar 5 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 100 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,1 M pH 9,0, con 0,25 g de heparina oxidada con agitación constante a temperatura ambiente durante 3 horas.

Una vez completa la reacción, se lavan múltiples veces las fibras de algodón con agua antes de secarlas.

Se obtiene lo siguiente:

Algodón-S-S-CH_{2}-CH(COOH)-N=CH-heparina

En el presente Ejemplo Comparativo el polímero de polisacárido, que ha sido activado mediante la conjugación a un conector -S- y al conector cisteinilo con el fin de obtener el reactivo C, se conjuga a la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa mediante la formación de una base de Schiff entre un grupo aldehído creado mediante la derivatización del grupo de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa y el grupo amino del conector cisteinilo.

Como alternativa, la conjugación entre el polímero de polisacárido activado (reactivo C) también se puede realizar sin modificar la heparina como sustancia farmacológicamente o biológicamente activa, a través del residuo de ácido glucurónico de la heparina que puede establecer (mediante el procedimiento de carbodiimida, por ejemplo utilizando "EDAC") un enlace peptídico con el grupo amino del reactivo C.

Rendimiento de heparina de bajo MW conjugada a través de la formación de una base de Schiff con el algodón-S-S-cisteína: 74%

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E. Conjugación de fibra de algodón-S-S-cisteína a naproxeno (antiinflamatorio)

Se añaden 10 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 200 ml de tampón acetato 0,1 M, pH 5,5 a 10 ml de una disolución acuosa que comprende 0,25 g de naproxeno (sigma N 5160), e inmediatamente después a 0,5 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (Sigma E 1769), ("EDAC").

La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 4 horas, ajustando el valor del pH a 5,5 con HCl 0,1 N durante la primera hora de reacción.

Se lava la fibra múltiples veces con el fin de eliminar el exceso de reactivos y se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-CH(COOH)-NH-CO-naproxeno

Por lo tanto en el Ejemplo Comparativo presente la conjugación entre el polímero de polisacárido activado y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa portadora del grupo carbonilo tiene lugar a través de la formación de un enlace peptídico ente el reactivo C y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.

Rendimiento de antiinflamatorio conjugado 67%.

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F. Conjugación de lipasa a algodón-S-S-cisteína

Se añaden 10 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) en 200 ml de tampón acetato 0,1 M pH 5,5, a 0,1 g de lipasa (Sigma L 1754) en 10 ml del mismo tampón, e inmediatamente después a 0,05 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (Sigma E 1769), ("EDAC") en forma sólida.

La reacción se realiza a 4ºC con agitación durante 4 horas, ajustando el valor del pH a 5,5 durante la primera hora de reacción, si es necesario.

Después de la reacción, el algodón derivatizado se lava en agua múltiples veces, se seca y se almacena a 4ºC.

Se obtienen lo siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-CH(NH-CO-lipasa)-CO-NH-lipasa

En el presente ejemplo comparativo el conector cisteinilo también es un conector trivalente.

Rendimiento de lipasa conjugada, sobre la base de la actividad lipasa: 65%

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G. Conjugación de IgG (inmunoglobulinas) a fibras de algodón-S-S-cisteína 1. Reducción de la IgG

Se reducen 100 mg de IgG en 1 ml de PBS (tampón fosfato/salina) pH 7,4 con 1 mM EDTA, mediante el tratamiento con DTT (Sigma D 9680) a una concentración final de 5 mM, a temperatura ambiente durante 20 minutos, rompiendo los puentes disulfuro presentes en la IgG y regenerando los correspondientes grupos tiol de las cisteínas comprendidas en la cadena de péptidos de la IgG, obteniendo así IgG-SH.

A continuación se filtra la disolución en una columna de Sephadex G25 y se recoge la fracción de IgG reducida ("IgG-SH").

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2. Reacción de la IgG reducida con algodón-S-S-cisteína

Se tratan 10 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 200 ml de PBS-EDTA, con 100 mg de IgG reducida (IgG-SH) durante 12 horas con agitación y en una atmósfera de nitrógeno.

A continuación se lava la fibra múltiples veces y se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-S-S-IgG

Rendimiento de IgG conjugada: 67%.

Por lo tanto, en el presente Ejemplo comparativo el conector de cisteinilo del reactivo C se hace reaccionar como grupo saliente y se elimina y reemplaza con los grupos tiol que se encuentran presentes en la proteína farmacológicamente o biológicamente activa, formando así el enlace disulfúrico entre el reactivo W (como polímero de polisacárido activado) y la proteína farmacológicamente o biológicamente activa. Se obtiene, por consiguiente, un conjugado en el que el polímero de polisacárido está conjugado a la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa mediante el conector -S-.

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H. Conjugación de ácido hialurónico a algodón -S-S-cisteína

Procedimiento nº 1

Se añaden 5 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 100 ml de tampón acetato 0,1 M, pH 5,5 a 10 ml de una disolución que comprende 0,1 g de ácido hialurónico sódico (Sigma H 1876) en agua e inmediatamente después a 0,5 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (Sigma E 1769), ("EDAC").

La reacción se realiza con agitación a 4ºC durante 4 horas, con ajuste del valor del pH a 5,5 durante la primera hora de la reacción mediante la adición de HCl 0,1 N.

Después de la reacción el algodón se lava múltiples veces y se seca.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-CH(COOH)-NH-CO-hialurónico

Por consiguiente, en el presente Ejemplo Comparativo se establece un enlace peptídico entre el grupo amino del reactivo C y el grupo carboxilo presente en el ácido hialurónico.

Rendimiento de ácido hialurónico conjugado: 57%.

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Procedimiento nº 2

Oxidación del ácido hialurónico

Se disuelven 100 mg de ácido hialurónico (Sigma H 1876) a 4ºC en ausencia de luz en 10 ml de tampón acetato 0,1 M pH 5,5 con 1 mM NaIO_{4}.

A continuación el conjunto se agita durante 15 minutos.

A continuación se bloquea la reacción mediante la adición de 100 \mul de glicerol que se hace reaccionar con agitación durante 15 minutos adicionales.

Conjugación

Se añaden 5 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 100 ml de tampón carbonato-bicarbonato 0,1 M pH 9,0, a la disolución de ácido hialurónico oxidado y se realiza la reacción con agitación a 4ºC durante 4 horas.

A continuación se lava con agua el algodón derivatizado múltiples veces y se seca.

Se obtiene el producto siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-CH(COOH)-N=CH-hialurónico

tal como en el caso de la heparina descrito anteriormente, también se puede oxidar el ácido hialurónico con el metaperiodato sódico con la creación de dos grupos aldehído que se pueden conjugar con el reactivo C mediante la formación de la base de Schiff correspondiente.

Rendimiento de polisacárido conjugado: 45%.

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I. Conjugación de colagenasa a algodón-S-S-cisteína

Se añaden 5 g de algodón-S-S-cisteína suspendidos en 100 ml de tampón acetato 0,1 M pH 5,5, a 1 ml de una disolución en PBS 0,01 M de 0,1 g de colagenasa tipo 1A cruda (Sigma C 9891) e inmediatamente después a 0,5 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (Sigma E 1769), ("EDAC") en polvo.

La reacción se realiza con agitación a 4ºC durante 4 horas, con ajuste del valor del pH a 5,5 con HCl 0,1 N durante los primeros 20 minutos.

Después de la reacción se lava el algodón múltiples veces con agua muy fría.

A continuación se seca el algodón.

Se obtiene lo siguiente:

algodón-S-S-CH_{2}-CH(NH-CO-col)-CO-NH-col

Rendimiento sobre la base de la actividad hidrolítica en sustrato FALGPA (Sigma F 5136): 36%.

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J. Conjugación de elastina a algodón-S-S-cisteína

A 10 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en 200 ml de tampón acetato 0,1 M pH 5,5, se añade 0,1 g de elastina (Sigma E 1625) en 10 ml del mismo tampón y a continuación 0,5 g de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (Sigma E1796), ("EDAC") en polvo.

La reacción se realiza a 4ºC con agitación durante 4 horas, con ajuste del valor del pH a 5,5 con 0,1 N HCl durante los primeros 20 minutos.

Después de la reacción el algodón derivatizado se lava múltiples veces con el fin de eliminar los reactivos no reaccionados.

A continuación se seca el algodón.

Se obtiene lo siguiente:

Algodón-S-S-CH_{2}-CH(NH-CO-elast)-CO-NH-elast

Rendimiento: indeterminado.

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III. Ejemplos de conjugación entre polímero de polisacárido y sustancia farmacológicamente o biológicamente activa mediante el conector obtenido a partir de ácido 4-diazobenzoico A. Conjugación de cortisol ("hidrocortisona", 11\beta, 17\alpha,21-trihidroxipregn-4-eno-3,20-diona, Sigma H 4001) a fibra de algodón (Comparativo) Derivatización de hidrocortisona con el diazo-derivado del ácido p-aminobenzoico a) Preparación del diazo-derivado del ácido p-aminobenzoico (PABA)

Se enfría en hielo una disolución de 548 mg de PABA en 40 ml de HCl 1 N.

Se añaden 248 mg de NaNO_{2} disueltos en 20 ml de agua de hielo, gota a gota con agitación a la disolución de PABA, a continuación se mantiene la agitación durante otra hora en un baño de hielo.

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b) Derivatización de la hidrocortisona

Se disuelven 1.300 mg de hidrocortisona en una mezcla de 20 ml de ácido acético y 90 ml de dimetilformamida. Esta disolución se añade gota a gota a la disolución del diazo-derivado de PABA con agitación, en un baño de hielo en ausencia de luz. La agitación se realiza a 4ºC durante 12 horas, a continuación se precipita el diazo-derivado de hidrocortisona mediante la adición de un gran volumen de agua. Se recoge el precipitado mediante centrifugación, se redisuelve en acetato de etilo y se lava dos veces con agua. La fase orgánica se recoge en Na_{2}SO_{4}, se filtra y evapora hasta la sequedad.

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Conjugación del diazo-derivado de hidrocortisona a la fibra de algodón

Se añaden 20 g de algodón-S-S-cisteína (reactivo C) suspendidos en dioxano a 150 mg de 1-ciclohexil-3,2-morfolino-etilcarbodiimida metil-p-toluensulfonato (Sigma C1011), a continuación a 100 mg del azoderivado y se realiza la reacción con agitación a 4ºC durante 12 horas. El algodón se lava, primero con dioxano, a continuación múltiples veces con agua antes de secarlo.

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Se obtiene lo siguiente:

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El conjugado así obtenido es un ejemplo de utilización del 4-azobenzoico como conector en la presente invención.

Dicho conector se introduce mediante la derivatización de la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa. Se obtiene así una conjugación química entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa que comprende un doble enlace entre dos átomos de nitrógeno.

Rendimiento: 064%

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B. Conjugación de bencilbenzoato (MW 212,3; Sigma B 9550, USP-Merk Index 11,1141, CAS-number 120-51-4): C_{6}H_{5}CO_{2}C_{6}H_{5}

Se puede conjugar el benzoato adecuadamente activado a la fibra de algodón mediante conectores (como, por ejemplo, lisina o cisteína) o mediante poli conectores (como, por ejemplo, poli L-lisina MW 4.000 a 15.000 Sigma P6516, poli D-lisina MW 1.000 a 4.000 Sigma P 0296 o ácido poliglutámico Sigma P 4.636 MW 3.000 a 15.000) o combinaciones de los mismos.

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1. Activación de bencil benzoato 1.1. Preparación del diazo-derivado de ácido p-aminobenzoico (PABA, Sigma A 9878)

Se disuelven 274 mg de PABA en 20 ml de 1 N HCl, y la disolución obtenida se enfría en hielo. Se disuelven 124 mg de NaNO_{2} (Sigma S 2252) en 10 ml de agua de hielo y la disolución se añade gota a gota, con agitación a la disolución de PABA, la agitación se continúa durante 1 hora adicional, siempre con refrigeración en hielo.

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1.2. Derivatización de bencil benzoato

Se disuelven 424 mg de bencilbenzoato en una mezcla de 20 ml de ácido acético y 80 ml de etanol. A esta disolución, se le añade gota a gota la anterior disolución de diazoderivado de PABA, con agitación y con la exclusión de luz. Se mantiene la agitación durante 18 horas a 4ºC. A continuación, el azoderivado del bencilbenzoato se precipita mediante la adición de una gran cantidad de agua. El precipitado se recoge por centrifugación, se disuelve en un pequeño volumen de etanol y se precipita otra vez mediante la adición de agua. El producto obtenido se vuelve a centrifugar, se disuelve en etanol y se seca por evaporación.

Se obtiene:

(isómero I)Ph-COOCH_{2}-Ph-N=N-Ph-COOH

y

(isómero II)HOOC-Ph-N=N-Ph-COOCH_{2}-Ph

en las que -Ph- se refiere al radical para-fenileno. Dicha mezcla isomérica se designa "PABA-bencilbenzoato" en lo que sigue.

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2. Conjugación de los azoderivados a fibra de algodón 2.1 Conjugación mediante el conector lisilo (Comparativo)

Para la conjugación, se puede utilizar algodón lisilado no reducido con NaBH_{4} ("reactivo Y no-reducido", es decir, en el que se ha establecido una base de Schiff mediante la reacción del grupo aldehído en el polímero activado y un grupo amino de la lisina) o reducido con NaBH_{4} (es decir, el reactivo Y anterior), dependiendo de si se supone que se ha de liberar o no la sustancia activa.

A 20 g de algodón derivatizado (reactivo Y reducido o no reducido), suspendido en dioxano, se le añaden 400 mg de 1-ciclohexil-3,2-morfolinoetil-carbodiimida metil-p-toluensulfonato (Sigma C1012), seguido de 280 mg del azoderivado obtenido anteriormente y se deja agitar la reacción a 4ºC durante 18 horas. A continuación se lava el algodón, primero con dioxano, y después repetidamente con agua, y se seca.

Se obtiene:

- (2.1.1) con reactivo Y no reducido

algodón-CH=N-lys-NH-CO-PABA-bencilbenzoato

\quad: que es una mezcla de isómeros ya que los isómeros I y II anteriores se unen al reactivo Y no reducido (que a su vez es portador de dos orientaciones diferentes del conector de lisilo).

Rendimiento: 72%.

- (2.1.2.) Con el reactivo Y reducido:

Algodón-CH_{2}-NH-lis-NH-CO-PABA-bencilbenzoato,

\quad: que es también una mezcla de isómeros ya que tanto el isómero I como el II, anteriores, se unen al reactivo Y reducido (portador a su vez de dos orientaciones diferentes del conector de lisilo).

Rendimiento: 67%.

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2.2. Conjugación mediante policonector (invención)

Preparación de un conjugado entre algodón-poli-D-lisina y los azo-derivados de bencilbenzoato:

Se utilizaron fibra de algodón activado, del tipo reactivo Y y reactivo Y no reducido, con la excepción de que en lugar de lisina se conjugó poli D-lisina (MW 1.000 a 4.000, Sigma P 0296) a las fibras. El protocolo de síntesis siguiente corresponde, mutatis mutandis, al descrito anteriormente en el tema 2.1. En particular, se obtuvo lo
siguiente:

- (2.1.1.) con fibra de algodón activada no reducida:

Algodón-CH=N-polilis-(NH-CO-PABA bencilbenzoato)_{n}

\quad: que es una mezcla de isómeros sobre la base de lo expuesto anteriormente.

Rendimiento: 97%.

- (2.2.2.) con fibra de algodón activado reducido:

Algodón-CH_{2}-NH-polilis-(NH-CO-PABA-bencilbenzoato)_{n}

que también es una mezcla de isómeros, sobre la base de lo descrito anteriormente.

Rendimiento: 100%.

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3. Tabla que muestra los rendimientos obtenidos

Proporción de conjugación de bencilbenzoato a fibra de algodón utilizando múltiples procedimientos:

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Los conjugados tales como los anteriores son ejemplos de polímeros de polisacárido conjugados a moléculas de acaricidas (es decir, agente antiácaro) mediante conectores preferidos de la presente invención, en particular un conector de polilisilo.

En particular, el conjugado III.B.2.2.2. está constituido por un polímero de polisacárido conjugado a becilbenzoato derivatizado con PABA a través de un conector de polilisilo de peso molecular inferior a 16.000, preferentemente comprendido entre 1.000 y 4.000, en el que se establece un enlace amino secundario entre el conector de polilisilo y el polímero de polisacárido, y se establecen enlaces peptídicos entre el conector de polilisilo y el bencilbenzoato derivatizado con PABA.

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Parte experimental farmacológica 1. Ensayo de validación de la efectividad de los tampones en fibra de algodón conjugado a F VIII, fibrinógeno y fibrina en la velocidad y consistencia de la formación de un coágulo de sangre in vitro

La influencia de la presencia de un tampón de algodón derivatizado con proteínas específicas sobre la velocidad y consistencia de un coágulo de sangre se determina según el procedimiento desarrollado por Lee/White [Amer. J. Med., 145:495 (1913)] y modificado. Cantidades pesadas con precisión (aproximadamente 1 g) de fibra de lana de algodón normal o fibra de algodón modificado se introducen en un tuvo de ensayo de 15 ml para serología según los procedimientos descrito en la parte química experimental, junto con las múltiples proteínas implicadas en la reacción de coagulación, y se añaden 5 ml de disolución salina fisiológica.

El conjunto se mantiene en un baño de agua termostático a 37ºC.

Los 5 ml de sangre obtenida mediante punción venosa de una vena marginal de un conejo se vierten en el tubo, los tubos se agitan ligeramente y un grupo de los mismos se mantiene bajo regulación térmica a 37ºC durante 5 minutos, mientras que el otro grupo durante 10 minutos.

Después de dichos tiempos se toman los tacos de algodón de los tubos, se secan mediante un ligero contacto con papel de filtro y se pesan.

La tabla siguiente muestra los porcentajes que se refieren al incremento de peso en los tacos de algodón conjugados a las diferentes proteínas con respecto al porcentaje control (tacos no conjugados).

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Los resultados demuestran que la presencia de fibra de algodón adecuadamente derivatizada puede acelerar el proceso de coagulación. Además, los experimentos realizados con la misma sustancia activa, pero conjugada de modos diferentes a la fibra (tal como en el ejemplo anterior) han demostrado que la naturaleza de la conjugación entre las proteínas de coagulación anteriormente mencionadas y el algodón no afecta el poder de coagulación del algodón así obtenido en lo que se refiere a los conectores cortos bi- y trifuncionales. Sin embargo, se puede obtener una capacidad coaguladora considerablemente incrementada mediante la utilización de poli conectores de la presente invención, en particular a través de la utilización del conector de polilisina de MW inferior a 16.000, preferentemente 1.000 a
4.000.

Esto indica que el algodón derivatizado según la presente invención puede oponerse a las hemorragias funcionales o a las hemorragias producidas por heridas.

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2. Evaluación de la influencia de algodón derivatizado con germicidas a agentes antibaterianos o antifúngicos, en el desarrollo y cantidad de la flora microorgánica

La influencia de la fibra de algodón adecuadamente derivatizada sobre el desarrollo de la flora microorgánica se ha determinado "in vitro" en cultivos desarrollados en placas de múltiples microorganismos: Cándida álbicans, Escherichia coli, Estafilococus aureus aislados y caracterizados mediante material orgánico contaminado.

Con esta finalidad se preparan unos medios selectivos de crecimiento (agar sabouraud para hongos y agar nutriente para bacterias) con los que se preparan placas de Petri.

En la superficie del medio se aplica el cultivo de microorganismo mediante la deposición de 1 ml de suspensión de dicho microorganismo que comprende 10^{9} microorganismos, se agita suavemente con el fin de cubrir toda la superficie de la placa.

A continuación una gasa de algodón obtenida de fibra derivatizada con las múltiples sustancias consideradas se aplica a la superficie; el conjunto se coloca en el termostato a 37ºC.

Después de 24 horas se extrae la gasa y el desarrollo de colonias se compara con las placas en condiciones de cultivo normales.

La reducción en el porcentaje de crecimiento en las placas caracterizadas por gasa conjugada se evalúa con respecto a las condiciones normales de crecimiento.

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Los resultados muestran que la aplicación de algodón derivatizado con una fármaco o germicida adecuado en una superficie puede antagonizar el crecimiento en dicha superficie (por ejemplo la piel o mucosa) de formas microorgánicas no deseadas.

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3. Influencia de las fibra derivatizada con un agente antiinflamatorio o imunoestimulante en el proceso inflamatorio (flogogénico)

Los experimentos se realizaron en ratas mediante el ensayo de inducción de granulomas de "partículas de algodón".

Según este ensayo se introducen en una región subcutánea de la zona subaxila de los animales partículas de algodón de peso (1 g) y forma preestablecidos utilizando una cánula que puede perforar la piel y la subpiel (la cicatriz se cierra de nuevo con una puntada de sutura).

Alrededor de la partícula de algodón se forma un depósito de colágeno "granuloma", cuyo tamaño es proporcional al proceso inflamatorio.

Después de 15 días de la operación se extrae el granuloma del animal, bajo anestesia, y se pesa para determinar su tamaño.

En el caso presente el algodón utilizado como base de la implantación del granuloma está constituido por:

- fibra de algodón normal (control),

- fibra de algodón derivatizada con naproxeno (Ejemplo, II.E anterior),

- fibra de algodón derivatizada con glicoproteína inmunoestimulante de C. granulosum (Ejemplo I.F. anterior).

La tabla siguiente muestra la diferencia en porcentaje de peso de los granulomas que se forman con las partículas de algodón derivatizadas con antiinflamatorios o agentes inmunoestimulantes (de Corinebacterium granulosum) con respecto a los que lo hacen con partículas que comprenden algodón simple (controles).

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Los resultados muestran que la derivatización de la fibra de algodón con una sustancia con actividad antiinflamatoria o inmunoestimulante puede antagonizar la progresión de la inflamación crónica experimental. Mientras que en la tabla anterior, en el caso de la hidrocortisona y de la glicoproteína inmunoestimulante, las mejoras obtenibles pueden ser adscritas al efecto de palanca y posiblemente al efecto espaciador proporcionado por los policonectores respectivos, el primer par de experimentos comparando dos conjugaciones diferentes de naproxeno muestran que, sorprendentemente, una cola de polilisina, en particular un cola de cisteil polilisina puede incrementar la eficacia del naproxeno como tal, una vez se han cortado los puentes de disulfuro. Después de la aplicación a la piel produce un efecto antiinflamatorio y antitrauma.

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4. Influencia de la aplicación de fibra de algodón derivatizado sobre la entidad de la esclerosis experimental en las venas femorales de conejo

Después de una depilación adecuada la vena femoral de un conejo se cierra a lo largo de 5 cm mediante puntadas de sutura corriente arriba y corriente abajo.

En la zona aislada se añaden 0,05 ml de tetracloruro de carbono en una disolución al 10% (Fluka 87031) como agente esclerotizante.

La zona se venda adecuadamente con gasa de algodón normal (control) o gasa derivatizada de modo que se adhieran perfectamente a la zona tratada.

Después de 10 días los fragmentos de vena que sufren éxtasis se extraen y observan al microscopio con el fin de determinar el estado parietal y la consistencia de los depósitos esclerotizantes.

Por consiguiente resulta posible observar cómo la aplicación en la zona que recibe las capas de algodón derivatizado (gasa de algodón con: heparina de bajo peso molecular, Ejemplo comparativo II.D.2.) puede reducir el estado de esclerosis del tejido a una extensión consistente. En particular, no se aprecia diferencia entre la actividad de la heparina oxidada y conjugada a través de la formación de una base de Schiff y la heparina conjugada mediante enlaces peptídicos con la intervención de los grupos del ácido glucurónico que se encuentran presentes en la heparina. Sin embargo, la eficacia puede incrementarse sustancialmente si se conjugan más equivalentes de heparina de bajo peso molecular a través de enlaces peptídicos al algodón previamente derivatizado con polilisina. Se puede seguir la misma estrategia con heparina oxidada que es capaz de formar bases de Schiff con los grupos amino de la cadena de polilisina.

Por consiguiente se puede inferir que la aplicación de dichas gasas tiene un efecto farmacéutico en la regulación de las funciones vasculares y en la formación y consistencia de los trombos venosos.

Esto muestra la importancia de dicha aplicación en la prevención y terapia de las varices y de las patologías flebíticas.

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5. Influencia de la aplicación de fibras de algodón derivatizado sobre el tiempo de sangrado experimental en la orejas de los conejos

La oreja de un conejo se depila adecuadamente y se lava con disolución fisiológica.

A continuación se practican algunos cortes en la superficie en dirección horizontal utilizando una hoja de afeitar normal con la mayor uniformidad posible en los múltiples animales. Inmediatamente después se aplican a las heridas gasas de algodón, tanto normales (controles) como las obtenidas mediante la derivatización de las fibras con factores o péptidos procoagulantes (F VIII o productos de degradación del fibrinógeno, "FDP").

Se controlan las manchas de sangre en la gasa.

Su reducción indica una propiedad cicatrizante.

La tabla siguiente muestra las reducciones en porcentaje de las manchas que se encontraron en las gasas derivatizadas con respecto a los controles. En este caso tampoco se observó diferencia debida a la diferente naturaleza de la conjugación química en las múltiples preparaciones de algodón derivatizado con factor VIII o fibrinógeno. A pesar de lo anterior, se obtiene de nuevo un beneficio adicional mediante la utilización del conector polilisilo

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6. Influencia de la aplicación de fibras de algodón derivatizado sobre el edema inducido por la luz UV en la piel de ratas

Se depilan ratas adultas en la espalda y se exponen a radiación UV hasta que consistentemente se forman edemas en la piel.

La exposición se realiza solamente en zonas circulares preestablecidas utilizando una máscara perforada.

Se aplica con buena adherencia sobre la zona inflamada gasa de algodón normal (control) o gasa obtenida con fibra derivatizada con un medicamento.

Simultáneamente otro grupo de animales se ensaya con el fin de comprobar la efectividad de la aplicación del mismo medicamento en forma de un gel del 5%.

La regresión del eritema, definida como la disminución en la entidad y la superficie de la zona de enrojecimiento, se controla diariamente con respecto a los animales control sin aplicación e inmediatamente después de que se aplique el medicamento de nuevo en múltiples formas.

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En el 5º día la extensión media de la superficie de eritema se mide y se calcula su reducción en porcentaje con respecto a los animales sin aplicación.

Los resultados se muestran en la tabla siguiente:

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Estos resultados apuntan a una aceleración significativa en la regresión del proceso eritemático con la aplicación de gasas sanitarias (es decir, gasas derivatizadas), que es todavía superior al fármaco en forma de gel.

Algunos animales se expusieron a rayos UV durante un tiempo prolongado hasta que se formaron verdaderas úlceras del tejido en su piel.

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8. Comportamiento de las telas antiácaro

Se utilizaron fibras de algodón conjugadas a acaricidas (tal como se describe en la parte química experimental anterior) con el fin de obtener telas (tejidas y no tejidas) utilizadas a su vez con el fin de fabricar artículos domésticos (cortinas, alfombras y similares) que se utilizan en los ambientes habitados. En particular, se seleccionaron ambientes habitados (pisos, apartamentos y casas) en el campo en lugares particularmente expuestos al polvo y la ventilación. Además, el ensayo se condujo durante la primavera, que es el peor período con el riesgo más elevado de contaminación por ácaros.

Después de dos días de exposición total de los ambientes habitables al aire libre, en el momento de tiempo cero, el polvo se recogió con un aspirador y la presencia y el estado de la población de ácaros comprendida en él se sometió a examen microscópico. A continuación, algunos de los ambientes habitables, seleccionados al azar, se equiparon con telas según la presente invención obtenidas a partir de fibras conjugadas a acaricidas, constituyendo así el primer grupo de ensayo. Por otra parte, el resto de los ambientes habitables se equipó con telas de algodón corriente, constituyendo así un segundo grupo de ensayo como control para el desarrollo de la población de ácaros.

Después de dos días adicionales, se recogió el polvo de los dos grupos de ensayo y se estableció el número global de ácaros así como también el número de ácaros vivos.

Los resultados del primer grupo de ensayo, expresados como % de disminución respecto a los resultados obtenidos con el grupo control (telas sin derivatizar), se establecieron tanto para el conjunto como para la población viva.

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Además, se analizó el polvo con el fin de determinar la presencia de agente activo en un intento de verificar si, en condiciones reales de trabajo, se libera el acaricida en el ambiente circundante. Los resultados se presentan en la tabla a continuación.

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Se observa que los acaricidas, en vista de sus propiedades irritantes, no deberían ponerse en contacto con la piel humana o ser inhalados. Es por consiguiente importante que el acaricida no se libere al ambiente.

Con el fin de establecer el riesgo residual que se origina a partir de la exposición, se siguió el siguiente protocolo experimental.

(1) Lavar con tensioactivos (detergentes) de utilización común en la práctica doméstica; la presencia de becilbenzoato en los líquidos de lavado se determinó mediante equipos de cromatografía de gases.

(2) Exposición al aire durante 6 meses en condiciones ambientales normales. La cantidad de acaricida todavía unido a la fibra se estableció a continuación mediante hidrólisis cuantitativa seguido de análisis del hidrolizado, mediante el mismo equipo que en (1).

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Ensayos de optimización de la conjugación entre polímeros de polisacárido y una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa

Experimento 1

La tabla 1 muestra a continuación algunos de los ejemplos de la carga realmente alcanzable con sustancia farmacológicamente o biológicamente activa obtenibles mediante la presente invención. La carga se expresa en términos de miligramos de sustancia activa por gramo de polímero (celulosa). En los Ejemplos (A) a (D), el polímero fue activado previamente mediante la oxidación controlada con metaperiodato sódico y a continuación se conjugó el polímero activado directamente (cuando resulte posible) o mediante conectores adecuados o policonectores según la presente invención, a la sustancia activa. En los Ejemplos (E) a (I), el polímero fue activado previamente con el fin de producir el polímero tiolado (reactivo W tal como se describe en el preámbulo de la sección II de experimentación química anterior) y a continuación el polímero activado se conjugó directamente (cuando resulte posible) o a través de los conectores adecuados o en su lugar policonectores según la presente invención a la sustancia
activa.

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Los ejemplos (A) a (I) como anteriormente demuestran que mediante la utilización de policonectores, se puede obtener un incremento considerable de la carga. Resulta importante que estos incrementos se alcanzan sin afectar negativamente las propiedades mecánicas de sustrato polimérico tal como hubiera sido si la activación del polímero se condujese en condiciones más drásticas. Además es importante apreciar, dependiendo de la combinación de conector y sustancia activa implicados, el incremento de la carga proporcionado mediante la utilización de los policonectores de la presente invención puede ocurrir no solamente en el caso de policonectores polivalentes, es decir, si, dependiendo del tipo de enlace entre el policonector y la sustancia activa, se hace posible un "efecto de palanca" con respecto al número de lugares activos inicialmente creados en el polímero, sino también en el caso de las meras extensiones de los conectores ("efecto espaciador"), sin beneficiarse del "efecto palanca".

Claims

1. Conjugado que comprende un polímero de polisacárido de origen natural enlazado químicamente a una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa mediante un policonector.

2. Conjugado según la reivindicación 1, en el que dicho policonector comprende un residuo de polilisilo o un residuo de ácido poliglutámico.

3. Conjugado según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho polisacárido es de origen vegetal.

4. Conjugado según la reivindicación 3, en el que dicho polisacárido está constituido por unidades de poli-D-glucosa.

5. Conjugado según la reivindicación 4, caracterizado porque dichas unidades de D-glucosa se encuentran unidas entre sí de manera que forman celulosa.

6. Conjugado según la reivindicación 5, caracterizado porque dicha celulosa forma fibras macroscópicas, en particular fibras de algodón o viscosa.

7. Conjugado según las reivindicaciones 1 a 6 conjugado a una sustancia farmacológicamente o biológicamente activa que presenta propiedades antibacterianas, antiinflamatorias, antibióticas, micostáticas antimicóticas, desinfectantes, antihemorrágicas, antisépticas, inmunoestimulantes, antitraumáticas, antialérgicas, cicatrizantes, reepitelizantes, antieritematosas, antidermatopáticas, antiquemadura, anestésicas, anticoagulantes, coagulantes, antivarices, antiflebíticas, antiagregantes para las plaquetas, fibrinolíticas, lipolíticas, de prevención de arrugas, antiácaros o antienvejecimiento.

8. Conjugado según las reivindicaciones 1 a 6, en el que la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa es un acaricida.

9. Conjugado según la reivindicación 8, en el que dicho acaricida es el bencilbenzoato.

10. Conjugado según las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho policonector comprende un residuo de polilisilo que presenta un peso molecular inferior a 16.000.

11. Conjugado según la reivindicación 10, en el que dicho residuo de polilisilo presenta un peso molecular comprendido entre 1.000 y 4.000.

12. Conjugado según la reivindicación 10 u 11, en el que dicho policonector comprende un residuo de cisteinil polilisilo.

13. Conjugado según las reivindicaciones 10 a 12, en el que la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa es un agente antiinflamatorio.

14. Conjugado según la reivindicación 13, en el que dicho agente antiinflamatorio es el naproxeno.

15. Hilos o tela no tejida constituidos por fibras de por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones anteriores.

16. Tela o tela no tejida constituida por lo menos por un hilo según la reivindicación 15.

17. Utilización de por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, o utilización de un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16 para la preparación de un medicamento.

18. Artículos medicinales destinados a la aplicación tópica que comprenden por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, o un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16.

19. Utilización de por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, o utilización de un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16 en la preparación de un fármaco destinado a la terapia tópica de hemorragias, infecciones, micosis, inflamaciones, traumas, quemaduras, alergias, eritemas, dermatopatías, necrosis, urticarias, psoriasis, pénfigo.

20. Utilización de por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, o utilización de un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16 en la preparación de un medicamento destinado a la aplicación tópica para la inducción de la cicatrización, para la inmunoestimulación o para la prevención de las alergias.

21. Utilización de por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, o utilización de un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16 para la prevención de las arrugas de la piel, para la prevención de los procesos de envejecimiento de la piel, con el fin de obtener artículos higiénicos, o para la preparación de un medicamento destinado a la reducción de la grasa corporal.

22. Artículo higiénico o cosmético que comprende un conjugado según las reivindicaciones 1 a 14 o un hilo, tela o tela no tejida según las reivindicaciones 15 ó 16.

23. Utilización de por lo menos un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, o utilización de un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16 en el campo de la industria de la alimentación, para la producción de salchichas (salamis) o queso.

24. Filtro o envoltorio para alimentos constituido por un conjugado según las reivindicaciones 1 a 14 o un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16.

25. Artículo doméstico constituido por un conjugado según las reivindicaciones 1 a 14 o un hilo, tela o tela no tejida según la reivindicación 15 ó 16.

26. Procedimiento para la preparación de un conjugado según una de las reivindicaciones 1 a 14, que comprende las etapas siguientes:

a): la creación, en las fibras del polímero de polisacárido de lugares que resultan adecuados para la conjugación química, mediante la modificación de por lo menos algunos de los grupos OH alcohólicos que se encuentran presentes en el polímero de polisacárido con un policonector, obteniendo así un polímero de polisacárido activado, y

b): la reacción entre el polímero de polisacárido activado y un sustancia farmacológicamente o biológicamente activa o de un derivado de la misma por la formación de una conjugación química entre el polímero de polisacárido activado y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa mediante dicho policonector, y opcionalmente

c): la modificación, mediante una reacción química, de la naturaleza de la conjugación química establecida en las etapas (a) y (b) entre el polímero de polisacárido y la sustancia farmacológicamente o biológicamente activa.