ES2301197T3

ES2301197T3 - Utilizaciones de cuerpos oleosos.

Info

Publication number: ES2301197T3
Application number: ES98922563T
Authority: ES
Inventors: Harm M. Deckers; Gijs Van Rooijen; Joseph Boothe; Janis Goll; Maurice Moloney; Soheil Sayed Mahmoud
Original assignee: SemBioSys Genetics Inc
Current assignee: SemBioSys Genetics Inc
Priority date: 1997-05-27
Filing date: 1998-05-27
Publication date: 2008-06-16
Anticipated expiration: 2018-05-27
Also published as: CN1084595C; TW505508B; KR20010013047A; NO995802D0; JP2002503268A; PT986309E; US6210742B1; HK1027487A1; DK0986309T3; WO1998053698A1; AR012877A1; EP0986309B1; CN1258198A; AU7517898A; NZ501404A; IL132908A0; EP0986309A1; NO316731B1; KR20040101211A; AU737896B2

Abstract

Procedimiento para la preparación de una formulación de una emulsión que comprende: (1) obtener los cuerpos oleosos a partir de una célula; (2) lavar los cuerpos oleosos para obtener una preparación de cuerpo oleoso lavado que comprende unos cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, conteniendo la preparación del cuerpo oleoso lavado menos del 10% de otras proteínas de semillas; (3) formular la preparación del cuerpo oleoso lavado en una formulación de una emulsión; y (4) tratar dicha formulación de una emulsión de tal manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseadas.

Description

Utilizaciones de cuerpos oleosos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a unas nuevas emulsiones que comprenden cuerpos oleosos. La invención también proporciona un procedimiento para la elaboración de emulsiones y para la utilización de las emulsiones en varias composiciones domésticas e industriales.

Antecedentes de la invención

Las emulsiones son mezclas que se preparan a partir de dos componentes mutuamente insolubles. Es posible generar mezclas de aspecto macroscópico homogéneo a partir de estos componentes mediante una selección y una manipulación adecuadas de las condiciones de mezcla. El tipo más común de emulsiones en el que se utiliza un componente acuoso y un componente lipófilo y las que en la técnica se denominan frecuentemente como emulsiones de aceite en agua y emulsiones de agua en aceite. En las emulsiones de aceite en agua la fase lipófila se dispersa en la fase acuosa, mientras que en las emulsiones de agua-en-aceite la fase acuosa se dispersa en la fase lipófila. Los ejemplos domésticos comúnmente conocidos de formulaciones basadas en emulsiones incluyen mayonesa, margarina, helados, cosméticos y pinturas. Los sistemas de emulsión también se aplican extensamente en industrias como la farmacéutica y las agroquímicas, en las que es deseable a menudo formular ingredientes activos en las emulsiones.

Las emulsiones se preparan generalmente con la presencia de una multiplicidad de otras sustancias para conseguir un equilibrio deseable de emulsificación, viscosidad, estabilidad y apariencia. Por ejemplo, la formulación de emulsiones requiere habitualmente por lo menos un, y frecuentemente una combinación de varios, agentes emulsionantes. Estos agentes facilitan la dispersión de una fase inmiscible a la otra y ayudan en la estabilización de la emulsión. Los emulsionantes comprenden una amplia variedad de componentes sintéticos y naturales. Por ejemplo, los monoglicéridos y sus derivados químicos, se utilizan ampliamente como emulsionantes en aplicaciones para alimentos como la margarina y productos horneados. Un ejemplo de un emulsionante natural es la lecitina, un fosfolípido presente en la yema del huevo, que se utiliza comúnmente en la preparación de la mayonesa. También es posible atrapar ingredientes activos en las emulsiones. Esto resulta especialmente deseable en composiciones que comprenden agentes activos que son difíciles de disolver en soluciones acuosas, tales como determinadas vitaminas y nucleótidos. Los ingredientes activos también se formulan frecuentemente como emulsiones para aumentar su estabilidad. Un ejemplo de un sistema emulsionante que comprende un agente farmacéutico está documentado en la patente US nº 5.602.183 que da a conocer una composición para la cura de heridas que contiene un agente antiinflamatorio. Lo anterior ejemplifica sólo unos pocos de la multitud de componentes que se incluyen en las formulaciones de emulsiones conocidas en la materia. Una visión general extensa de los agentes emulsionantes y de sus aplicaciones se puede encontrar en Becher, P. Encyclopedia of Emulsion Technology, Dekker Ed., 1983.

En las semillas de cultivos de semillas oleaginosas, que incluyen cultivos económicamente importantes, tales como el de soja, colza, girasol y palma, la fracción de aceite insoluble en agua se almacena en diversas estructuras subcelulares discretas conocidas en la materia como cuerpos oleosos, oleosomas, cuerpos de lípidos o esferosomas (Huang 1992, Ann. Rev. Plant Mol. Biol. 43: 177-200). Además de una mezcla de aceites (triacilglicéridos), que se definen químicamente como ésteres de glicerol de ácidos grasos, los cuerpos oleosos comprenden fosfolípidos y varias de proteínas asociadas, colectivamente denominadas proteínas de cuerpos oleosos. Desde un punto de vista estructural, los cuerpos oleosos son considerados como una matriz de triacilglicéridos encapsulada por una monocapa de fosfolípidos en la que las proteínas de cuerpos oleosos se embeben (Huang 1992, Ann. Rev. Plant Mol. Biol. 43: 177-200). El aceite de semilla presente en la fracción de cuerpo oleoso de las especies vegetales es una mezcla de varios triacilglicéridos, cuya composición exacta depende de la especie de la planta de la que se deriva el aceite. A través de una combinación de reproducción clásica y de técnicas de ingeniería genética, ha sido posible manipular el perfil del aceite de las semillas y ampliar el repertorio natural disponible de composiciones de aceites de plantas. Para una visión general de los esfuerzos continuados en este área, ver Designer Oil Crops/Breeding, Processing and Biotechnology, D. J. Murphy Ed., 1994, VCH Verlagsgesellschaft, Weinheim, Alemania.

Los aceites de semillas de plantas se utilizan en variedad de aplicaciones industriales, principalmente en la industria alimentaria, de cosméticos y detergentes. Para obtener los aceites de plantas utilizados en dichas aplicaciones, las semillas se machacan o se prensan y posteriormente se refinan utilizando procedimientos tales como la extracción orgánica, el desengomado, la neutralización, el blanqueado y el filtrado. También se ha descrito la extracción acuosa de las semillas aceitosas de plantas (por ejemplo, Embong and Jelen, 1977, Can. Inst. Food Sci. Technol: J. 10: 239-243). Como el objetivo de los procedimientos enseñados por la técnica anterior es obtener aceite puro, los cuerpos oleosos a lo largo de estos procedimientos de producción pierden su integridad estructural. Por consiguiente, las emulsiones de la técnica anterior formuladas a partir de aceites de plantas generalmente no comprenden cuerpos oleosos intactos.

Aunque existen muchas aplicaciones en las que los productos basados en aceites minerales dominan el mercado, en otras aplicaciones, los aceites derivados de fuentes vegetales y de fuentes fósiles están en directa competencia. Los aceites láuricos, por ejemplo, que se utilizan ampliamente en la fabricación de detergentes, se obtienen de aceites minerales así como del aceite de coco y más recientemente de colza genéticamente modificada (Knauf, V. C., 1994, Fat. Sci. Techn. 96: 408). Sin embargo, actualmente existe una creciente demanda de fuentes biodegradables de materiales crudos. Las emulsiones basadas en cuerpos de aceites vegetales de la presente invención ofrecen una ventaja sobre las formulaciones similares basadas en aceites minerales, y es que la fracción de aceite se obtiene a partir de una fuente renovable y ambientalmente no dañina.

Las patentes US nº 5.683.710 y nº 5.613.583 dan a conocer unas emulsiones que comprenden vesículas lipídicas de plantas oleaginosas. Las emulsiones que se dan a conocer en dichas Patentes se preparan a partir de extractos de semillas relativamente crudas y comprenden numerosos componentes de semillas incluyendo proteínas glicosiladas y no glicosiladas. Una desventaja de las emulsiones a las que dichas patentes se refieren es que comprenden unos componentes contaminantes de semillas que transmiten una variedad de propiedades no deseables, que puede incluir alerginicidad, olor, sabor, color y características organolépticas no deseables a las emulsiones. Debido a la presencia de contaminantes de las semillas, las preparaciones de vesículas lipídicas que se dan a conocer en estas patentes presentan unas aplicaciones limitadas.

El documento WO 98/27115 da a conocer un procedimiento para la separación de una molécula diana de la mezcla utilizando cuerpos oleosos y sus proteínas asociadas como matrices afines.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a nuevas formulaciones de emulsiones que comprenden una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende unos cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniformes, en la que además dicha emulsión comprende un conservante. Las formulaciones de emulsiones a la invención se obtienen de formas no tóxicas y comestibles aptas para el consumo alimenticio. Además, las formulaciones de emulsiones se preparan ventajosamente a partir de una preparación de un cuerpo oleoso cuya textura es cremosa y de este modo se puede aplicar fácilmente en una variedad de aplicaciones domésticas e industriales. Los presentes inventores han descubierto que la fracción de cuerpo oleoso de células vivas es útil en la formulación de varios productos alimenticios, cosméticos, farmacéuticos e industriales nuevos basados en las emulsiones. Expuesto en términos generales, la presente invención proporciona una formulación de emulsión que comprende cuerpos oleosos lavados derivados de una célula.

La invención también proporciona unos procedimientos para la preparación de las formulaciones de emulsiones y la utilización de las formulaciones de emulsión en varias composiciones domésticas e industriales.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de unas formulaciones de emulsiones que comprende: 1) obtención de cuerpos oleosos a partir de una célula; 2) lavado de los cuerpos oleosos para obtener una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, en la que la preparación del cuerpo oleoso lavado contiene menos del 10% de otras proteínas de la semilla; 3) la formulación de los cuerpos oleosos lavados en una formulación de una emulsión; y 4) tratamiento de dicha formulación de una emulsión de manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseables.

En una forma de realización preferida, la preparación del cuerpo oleoso lavado se obtiene de semillas vegetales, incluyendo semillas que se obtienen a partir de la colza, la soja, el maíz y el girasol. Por consiguiente, la invención proporciona un procedimiento para la preparación de formulaciones de emulsión a partir de semillas vegetales que comprende:

(a): moltura de semillas vegetales;

(b): extracción de sólidos de las semillas molidas;

(c): separación de la fase de cuerpo oleoso de la fase acuosa;

(d): lavado de la fase de cuerpo oleoso para producir una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, en la que la preparación del cuerpo oleoso lavado contiene menos del 10% de otras proteínas de la semilla;

(e): formulación de la preparación del cuerpo oleoso lavado en una emulsión;

(f): tratamiento de dicha formulación de una emulsión de manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseables.

En una forma de realización preferida, la fase líquida se añade a las semillas antes de o tras la moltura de las semillas.

En otra forma de realización preferida, la formulación de la emulsión (e) comprende la adición de una fase líquida a la preparación del cuerpo oleoso lavado.

Las emulsiones de la presente invención se pueden utilizar en un amplio rango de aplicaciones incluyendo la preparación de productos alimenticios y pienso, productos farmacéuticos, productos de cuidado y cuidado personal y productos industriales. La formulación de la emulsión de la presente invención es especialmente adecuada para la preparación de productos alimenticios aptos para el consumo ya que no es tóxica, presenta una textura cremosa y es biodegradable.

Los objetivos, ventajas y características adicionales de la presente invención se pondrán de manifiesto tras la consideración de las figuras que acompañan y de la siguiente descripción detallada de la invención.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es un gel teñido con azul de Coomassie de una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de mostaza blanca, colza (Brassica napus), soja, cacahuete, calabacín, lino, girasol, cártamo y maíz.

La Figura 2A-C son geles teñidos con azul de Coomassie que muestran los perfiles proteicos de varias fracciones de semillas obtenidas a partir de Brassica napus (Canola) (A), girasol (B), y maíz (C). Los geles muestran las siguientes fracciones (1) proteína total de la semilla (TSP), (2) fase líquida decantada (DL), (3) cuerpos oleosos no lavados (LP1), (4) tres lavados con agua (LP4), (5) cuatro lavados con agua y uno lavado con Na_{2}CO_{3} 100 mM (Lavado).

Descripción detallada de la invención

Tal como se ha mencionado anteriormente en la presente memoria, la presente invención da a conocer una emulsión que comprende una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende unos cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, en la que dicha emulsión comprende además un conservante.

En otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de una formulación de una emulsión que comprende:

(1): obtener cuerpos oleosos a partir de una célula;

(2): lavar los cuerpos oleosos para obtener una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende unos cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniformes, en la que la preparación del cuerpo oleoso lavado contiene menos del 10% de otras proteínas de la semilla;

(3): formular la preparación de un cuerpo oleoso lavado en una formulación de una emulsión; y

(4): tratar dicha formulación de una emulsión de tal manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseables.

La célula puede ser cualquier célula que contenga cuerpos oleosos (o estructuras similares a los cuerpos oleosos) incluyendo células vegetales, células animales, células de hongos y células bacterianas. En una forma de realización preferida de la invención, los cuerpos oleosos se obtienen de una célula vegetal. Los cuerpos oleosos se pueden obtener a partir de una célula vegetal mediante la ruptura de la membrana celular vegetal y de la pared celular utilizando cualquier procedimiento que libere los constituyentes celulares sin comprometer sustancialmente la integridad de los cuerpos oleosos. Más preferentemente, los cuerpos oleosos se obtienen a partir de semillas vegetales. Por consiguiente, la presente invención también proporciona un procedimiento para la preparación de una formulación de una emulsión que comprende:

(1): obtener los cuerpos oleosos a partir de semillas vegetales mediante un procedimiento que comprende:

(a): moltura de las semillas vegetales;

(b): extracción de los sólidos de las semillas molidas; y

(c): separación de la fase de cuerpo oleoso de la fase acuosa;

(2): lavar la fase de cuerpo oleoso para producir una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, en la que la preparación del cuerpo oleoso lavado contiene menos del 10% de otras proteínas de la semilla;

(3): formular la preparación del cuerpo oleoso lavado en una formulación de una emulsión; y

(4): tratar dicha formulación de una emulsión de manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseables.

En una forma de realización preferida de la invención, la fase líquida se añade a las semillas antes de o tras la moltura de las semillas.

En otra forma de realización preferida de la invención, la formulación de la emulsión (e) comprende la adición de una fase líquida a la preparación del cuerpo oleoso lavado.

El término "moltura" tal como se utiliza en la presente memoria significa moler, triturar, despedazar o granular las semillas y estos términos se pueden utilizar intercambiablemente a lo largo de esta aplicación. En el procedimiento, las células de las semillas se fragmentan.

El término "sólidos" tal como se utiliza en la presente memoria significa cualquier material que no es soluble en la fase acuosa o en la fase de cuerpo oleoso, como la cáscara de la semilla.

La expresión "lavado de los cuerpos oleosos" tal como se utiliza en la presente memoria significa cualquier procedimiento que extraiga los contaminantes celulares de la fase de cuerpo oleoso, en particular cualquier contaminante que transmita propiedades no deseadas a la formulación de la inmersión, tales como propiedades alergénicas, color, olor, sabor, o características organolépticas no deseadas o cualquier otra propiedad no deseada. Los ejemplos de los procedimientos de lavado incluyen los procedimientos de separación basados en la gravedad tales como las técnicas de separación basadas en la centrifugación y la exclusión de tamaño como la ultrafiltración de la membrana y la microfiltración a flujo cruzado. Los procedimientos de lavado y las condiciones se seleccionan según la pureza deseada de la preparación del cuerpo oleoso.

La expresión "preparación de un cuerpo oleoso lavado" tal como se utiliza en la presente memoria significa una preparación de cuerpos oleosos de los que se ha extraído una cantidad significativa de material celular incluyendo los contaminantes que transmiten propiedades no deseadas a las formulaciones de la emulsión, tales como propiedades alergénicas, color, olor, sabor, o características organolépticas no deseadas o cualquier otra propiedad no deseada. La preparación del cuerpo oleoso lavado contiene menos del 10% de otras proteínas de la semilla.

Por "formulación de los cuerpos oleosos en una emulsión" se entiende que la preparación de cuerpos oleosos lavados se mezcla u homogeneiza, si es necesario, hasta que se forme una emulsión. En una forma de realización preferida, se añade un ingrediente adicional, como una fase líquida, y la preparación del cuerpo oleoso lavado y la fase líquida se mezclan hasta que se obtiene una mezcla homogénea.

Las preparaciones de cuerpos oleosos lavados son particularmente adecuadas para las formulaciones de emulsiones debido a las propiedades ventajosas resumidas a continuación:

Propiedades de los cuerpos oleosos

Las formulaciones de emulsiones de la presente invención comprenden cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniformes. Al observarlos al microscopio electrónico, se encuentra que los cuerpos oleosos son estructuras de forma más o menos esférica (ver: Ejemplo Murphy, D. J. y Cummins I., 1989, Phytochemistry, 28: 2063-2069; Jacks, T. J. et al., 1990, JAOCS, 67: 353-361). Los tamaños típicos de los cuerpos oleosos varían entre 0,4 \mum y 1,5 \mum (Murphy, D. J. y Cummins I., 1989, Phytochemistry, 28: 2063-2069). Cuando se analizaron utilizando un analizador de tamaño de partícula Malvern, se encontró que los cuerpos oleosos en una preparación de cuerpos oleosos lavados aislados de colza estaban distribuidos simétricamente y unimodalmente alrededor de 1 \mum. Utilizando un analizador de tamaño de partícula Malvern, se podía distinguir claramente una preparación de un cuerpo oleoso lavado de emulsiones de aceite en agua comercialmente disponibles incluyendo leche de soja, mayonesa (Kraft Real Mayonnaise) y dos preparaciones de leche de coco (Tosca, Aroy-D).

El tamaño y la densidad exactos de los cuerpos oleosos dependen por lo menos en parte de la composición exacta de proteína/fosfolípido/triacilglicérido que esté presente. La preparación de cuerpos oleosos lavados según la presente invención no provoca una alteración sustantiva de la forma de los cuerpos oleosos en comparación con los presentes en la semilla completa al observarlos con un microscopio electrónico.

Al fragmentar por completo una célula que contiene unos cuerpos oleosos, la fracción de cuerpo oleoso se puede separar rápida y sencillamente a partir de unas soluciones acuosas ya que en las soluciones acuosas la fracción de cuerpo oleoso flotará al aplicarse una fuerza centrífuga. En las soluciones en las que la densidad de la fracción de cuerpo oleoso es superior a la del solvente, como un 95% de etanol, los cuerpos oleosos sedimentarán en las mismas condiciones. La fracción de cuerpo oleoso también se puede separar de la fracción acuosa a través de técnicas de separación basadas en la exclusión por tamaño, tales como una filtración por membrana, la cual puede resultar ventajosa ya que se pueden conseguir cuerpos oleosos de tamaño más uniforme.

Los cuerpos oleosos presentes en las preparaciones de cuerpos oleosos lavados de la presente invención son resistentes a la exposición a ácidos y bases fuertes, incluyendo la exposición prolongada a unas condiciones ácidas por lo menos por debajo de pH 2 y a condiciones alcalinas por lo menos por encima de pH 10. Cuando se expusieron a un pH 12, se observó una pequeña pérdida de aceite, indicando una pérdida de integridad de la estructura del cuerpo oleoso. Además, la extracción con varias soluciones orgánicas, incluyendo metanol, etanol, hexano, alcohol isopropílico y acetato de etilo, no compromete o sólo compromete ligeramente la integridad de los cuerpos oleosos presentes en la preparación del cuerpo oleoso lavado. También se encontró que los cuerpos oleosos presentes en la preparación del cuerpo oleoso lavado soportaban la mezcla con el detergente aniónico, dodecil sulfato de sodio o (SDS), el detergente catiónico, bromuro de hexahecil trimetil y Tween-80, un detergente no iónico. Se encontró que al hervir la preparación del cuerpo oleoso lavado en presencia de SDS se producía por lo menos parcialmente la desintegración de la estructura del cuerpo oleoso. Los cuerpos oleosos presentes en la preparación del cuerpo oleoso lavado son estables cuando se mantienen durante 2 horas a una temperatura de hasta por lo menos 100ºC. Una congelación y descongelación lenta de las preparaciones de cuerpos oleosos dan como resultado un cambio en su apariencia física caracterizada por la formación de grumos en oposición a una emulsión homogénea. Los grumos del cuerpo oleoso que siguen a una congelación-descongelación también se podrían evitar en gran medida mediante, o bien a) la congelación rápida en nitrógeno líquido en lugar de una congelación lenta a -20ºC o b) añadiendo glicerol en un exceso del 5% (v/v) a la preparación del cuerpo oleoso antes de la congelación. La resistencia a unas condiciones químicas y físicas relativamente severas, constituye una característica única de los cuerpos oleosos presentes en la preparación del cuerpo oleoso lavado objeto de la presente invención.

La presente invención proporciona unas formulaciones de emulsiones que comprenden cuerpos oleosos de los que se ha extraído una cantidad significativa de contaminantes de las semillas. Estos contaminantes incluyen proteínas, compuestos volátiles y otros componentes que pueden transmitir color, olor, sabor, características organolépticas no deseadas u otras características no deseadas. Se ha descrito que varias proteínas de semillas causan reacciones alérgicas. Por ejemplo, Ogawa et al. (1993, Biosci. Biotechnol. Biochem., 57:1030-1033) describe la alergenicidad de la glicoproteína P34 de la soja (referida alternativamente como Gly m Bd 30K). También se han descrito reacciones alérgicas a las proteínas de las semillas de la colza, el trigo y la cebada (Armentia et al., 1993., Clin. Exp. Allergy 23: 410-415; Monsalve et. al., 1993, Clin. Exp. Allergy 27: 833-841). Por eso resulta ventajosa la extracción de proteínas contaminantes de las semillas. Las condiciones de lavado se pueden seleccionar de manera que se obtenga una preparación de un cuerpo oleoso sustancialmente pura. En este caso, solo las proteínas del cuerpo oleoso están sustancialmente presentes en la preparación.

Para muchas aplicaciones, también se considera deseable que se obtenga una preparación de un cuerpo oleoso más pura y mejor definida, ya que esto permite un mayor control sobre el procedimiento de formulación de la emulsión final. Para que la preparación de un cuerpo oleoso lavado se incluya en una serie de diversas emulsiones es deseable que los compuestos volátiles se mantengan a un mínimo y que el color sea preferentemente claro o blanco. El lavado de la preparación del cuerpo oleoso da como resultado una preparación de color más claro. Además, se extrae una cantidad sustancial de compuestos volátiles. Mediante el lavado también se extraen compuestos que promueven el crecimiento de microorganismos al observarse que una preparación de un cuerpo oleoso lavado presentaba una caducidad mayor que una preparación no lavada. Otros compuestos que se extraen mediante el lavado incluyen glucosinolatos antinutricionales y/o sus productos derivados y material fibroso. Cuando se trató con calor a 60ºC u 80ºC, se observó que unas cantidades mayores de agua permanecían absorbidas por la preparación del cuerpo oleoso lavado en comparación con una preparación no lavada. Al dejarlas enfriar a temperatura ambiente y centrifugarlas, se observó que la preparación del cuerpo oleoso lavado permanecía estable, mientras que en la preparación no lavada tuvo lugar una separación de fases. Dada la estabilidad mejorada de los cuerpos oleosos lavados, son preferidos cuando el procedimiento de formulación implica la aplicación de calor. Cuando se calienta a 40ºC, la preparación del cuerpo oleoso lavado fue capaz de absorber una cantidad mayor de agua añadida exógenamente sin que se de la separación de fases. De este modo en las formulaciones de los cuerpos acuosos, se prefieren los cuerpos oleosos lavados. También se comparó la capacidad de absorber los aceites añadidos exógenamente entre una preparación de cuerpos oleosos lavados y una preparación no lavada. Se pudieron añadir cantidades mayores de aceite exógeno a la preparación del cuerpo oleoso lavado antes de que se formara una emulsión inestable. Esto resulta ventajoso en formulaciones en la que se añaden aceites o ceras exógenos al procedimiento de formulación como cuando se preparan cosméticos o lubricantes. Cuando se comparó la viscosidad entre una preparación de un cuerpo oleoso lavado con una preparación no lavada se encontró que la preparación lavada era más viscosa. Es deseable una preparación de cuerpos oleosos más viscosa ya que esto elimina la necesidad de añadir agentes espesantes en el procedimiento de formulación.

De este modo la preparación de un cuerpo oleoso proporcionada en la presente memoria es superior a una preparación no lavada en muchos aspectos. La preparación de un cuerpo oleoso lavado de la presente invención es una preparación mejor definida con una caducidad mayor y unas características de color, olor y viscosidad más preferidas. La preparación del cuerpo oleoso lavado también presenta unas características de absorción de agua y aceite superiores. Finalmente debido a la extracción de una cantidad significativa de proteínas de la semilla, es menos posible que den reacciones alérgicas. Estas características permiten la utilización de la preparación del cuerpo oleoso lavado en la formulación de varias emulsiones domésticas e industriales.

Las observaciones mencionadas anteriormente se realizaron utilizando preparaciones de cuerpos oleosos lavados y no lavados obtenidas a partir de colza y preparadas tal como se detalla en el Ejemplo 2 de la presente solicitud. Se cree que la resistencia a condiciones químicas y físicas relativamente severas sería una característica de los cuerpos oleosos presentes en la preparación de aceite lavado objeto de la presente invención independientemente de la fuente de los cuerpos oleosos. Sin embargo es probable que una o más de las propiedades de los cuerpos oleosos de colza descritas anteriormente en la presente memoria varíen algo dependiendo de las células de las que se obtenga la preparación de cuerpos oleosos lavados. No obstante, se ha de entender claramente que el objetivo de la invención es preparar un cuerpo oleoso que se puede obtener a partir de cualquier célula que comprenda cuerpos oleosos.

En una forma de realización de la presente invención, los cuerpos oleosos se obtienen a partir de semillas vegetales. La presencia de cuerpos oleosos intactos en la emulsión y las características descritas de estos cuerpos oleosos distinguen claramente la formulación de la emulsión propuesta de otros materiales que se pueden preparar a partir de semillas vegetales.

Fuentes y preparación de los cuerpos oleosos

La preparación del cuerpo oleoso lavado de la invención se puede obtener a partir de cualquier célula que contenga cuerpos oleosos u orgánulos similares a cuerpos oleosos. Estos incluyen células animales, células vegetales, células fúngicas, células de levadura (Leber, R. et al., 1994, Yeast 10: 1421-1428), células bacterianas (Pieper-Fürst et al., 1994, J. Bacterol. 176: 4328-4337) y células de algas (Rossler, P. G., 1988, J. Physiol. (Londres) 24: 394-400). En unas formas de realización de la invención preferidas, los cuerpos oleosos se obtienen a partir de células vegetales que incluyen células de polen, de esporas, de semillas y de órganos vegetativos de las plantas en las que están presentes cuerpos oleosos u orgánulos similares a los cuerpos oleosos (Huang, 1992, Ann. Rev. Plant Physiol. 43: 177-200). Más preferentemente, la preparación del cuerpo oleoso lavado objeto de la presente invención se obtiene a partir de una semilla vegetal y más preferentemente de entre el grupo de especies de plantas que comprenden: colza, (Brassica spp.), soja (Glycine max), girasol (Helianthus annuus), aceite de palma (Elaeis guineensis), semillas de algodón (Gossypium spp.), cacahuete (Arachis hypogaea), coco (Cocos nucifera), ricino (Ricinus communis), cártamo (Carthamus tinctorius), mostaza (Brassica spp. y Sinapis alba), cilantro (Coriandrum sativum), calabacín (Cucurbita maxima) linaza/lino (Linum usitatissimum), nuez de Brasil (Bertholletia excelsa), yoyoba (Simmondsia chinenis) y maíz (Zea mays). Las plantas se hacen crecer y se deja que granen utilizando unas prácticas de cultivo agrícola bien conocidas por los expertos en la materia. Después de recoger la semilla, y si se desea, de extraer materiales como piedras o cáscaras de semillas (descascarado), mediante por ejemplo tamizado o aclarado, y opcionalmente secar la semilla, las semillas posteriormente se procesan mediante prensado, moltura o aplastamiento mecánico. En una forma de realización preferida, se añade una fase líquida antes de la moltura de las semillas. Esto es conocido como moltura húmeda. Preferentemente, el líquido es agua aunque también se pueden utilizar algunos solventes orgánicos como el etanol. Se han descrito molturas húmedas en procedimientos de extracción de aceite para semillas de varias especies de plantas incluyendo: mostaza (Aguilar et al., 1990, Journal of Textura Studies 22: 59-84), soja (patente US nº 3.971856; Carter et al., 1974, J. Am. Oil Chem. Soc. 51: 137-141), cacahuete (patente US nº 4.025.658; patente US nº 4.362.759) semilla de algodón (Lawhon et al., 1977, J. Am. Oil Chem. Soc. 63: 533-534) y coco (Kumar et al., 1995, INFORM 6 (11): 1217-1240). También puede resultar ventajoso embeber las semillas por un periodo de tiempo de aproximadamente quince minutos a aproximadamente dos días en una fase líquida antes de la moltura. El embebido puede ablandar las paredes celulares y facilitar el procedimiento de moltura. El embebido durante periodos de tiempo más largos puede imitar el procedimiento de germinación y produce ciertas alteraciones ventajosas en la composición de los constituyentes de las semillas. En otra forma de realización, la fase líquida se añade después de que se hayan molido las semillas. Esto es conocido como moltura seca. Preferentemente, el líquido que se añade es agua.

Las semillas se muelen preferentemente utilizando un molino coloidal, como el MZ130 (Fryma Inc.). A parte de molinos coloidales, también se puede utilizar en la invención descrita en la presente memoria otro aparato de moltura o picado capaz de procesar unas cantidades de semillas a escala industrial incluyendo: laminador de flocos, molinos de disco, molinos coloidales, molinos de púas, molinos orbitales, molinos IKA y homogeneizadores a escala industrial. La selección del molino puede depender de los requerimientos de rendimiento de la semilla así como de la fuente de la semilla que se utiliza. Es de suma importancia que los cuerpos oleosos de las semillas permanezcan intactos durante el proceso de moltura. Por tanto, cualquiera de las condiciones operativas comúnmente utilizadas en el procesamiento de las semillas oleosas que tiendan a desorganizar los cuerpos oleosos no son adecuadas para la utilización en el procedimiento de la invención. Las temperaturas de moltura son preferentemente entre 10ºC y 90ºC y más preferentemente entre 26ºC y 30ºC, mientras que el pH se mantiene preferentemente entre 2,0 y 10.

Los contaminantes sólidos, como cáscaras de semillas, material fibroso, hidratos de carbono no disueltos y proteínas y otros contaminantes insolubles, se extraen de la fracción de semilla molida. La separación de los contaminantes sólidos se puede conseguir utilizando una centrífuga de decantación, como una centrífuga de decantación de 2 fases HASCO 200 o una NX310B (Alpha Laval). Dependiendo de los requerimientos de rendimiento de las semillas, la capacidad de la centrífuga de decantación se puede variar utilizando otros modelos de centrífugas de decantación, como decantadores de 3 fases. Las condiciones operativas variarán dependiendo de la centrífuga en particular que se utilice y que se tenga que ajustar de manera que los sedimentos de los materiales contaminantes insolubles y los restos sedimentados en la decantación. Bajo estas condiciones se puede observar una separación parcial de la fase de cuerpo oleoso y de la fase líquida.

Después de la extracción de los contaminantes insolubles, la fase del cuerpo oleoso se separa de la fase líquida. En una forma de realización preferida de la invención se utiliza una centrífuga tubular. En otras formas de realización, se pueden utilizar hidrociclonas, centrífugas de disco, o disponer las fases bajo gravedad natural o se puede utilizar cualquier otro procedimiento de separación basado en la gravedad. También es posible separar la fracción de cuerpo oleoso de la fase acuosa utilizando procedimientos de exclusión por tamaño, como la ultrafiltración de membrana y la microfiltración de flujo cruzado. En unas formas de realización preferidas la centrífuga tubular es un modelo Sharples AS-16 (Alpha Laval) o una Sharples AS-46 (Alpha Laval). Un parámetro fundamental es el tamaño del anillo de la presa utilizado para hacer funcionar la centrífuga. Los anillos de la presa son anillos extraíbles de apertura circular central variable, en el caso de la AS-16, de 28 a 36 mm y regula la separación de la fase acuosa de la fase de cuerpo oleoso regulando de este modo la pureza de la fracción de cuerpo oleoso que se obtiene. En unas formas de realización preferidas, se utiliza un anillo de presa de tamaño 29 ó 30 mm cuando se utiliza la AS-16. El tamaño exacto del anillo de la presa utilizado depende del tipo de semilla oleosa que se utiliza así como de la consistencia final deseada de la preparación de cuerpo oleoso. La eficacia de la separación se ve afectada también por la velocidad de flujo. Cuando se utiliza la AS-16 las velocidades de flujo son habitualmente entre 750-1.000 ml/min (tamaño del anillo de la presa 29) o entre 400-600 ml/min (tamaño del anillo de la presa 30) y las temperaturas se mantienen preferentemente entre 26ºC y 30ºC. Dependiendo del modelo de centrífuga utilizado, las velocidades de flujo y los tamaños del anillo de la presa se deben ajustar de modo que se consiga una separación óptima de la fracción de cuerpo oleoso de la fase acuosa. Estos ajustes se harán evidentes fácilmente para el experto en la materia.

La separación de los sólidos y la separación de la fase acuosa del cuerpo oleoso también se pueden realizar concomitantemente utilizando un procedimiento de separación basado en la gravedad como una centrífuga tubular de 3 fases o un decantador o una hidrociclona o un procedimiento de separación basado en la exclusión por tamaño.

Las composiciones obtenidas en esta etapa del procedimiento, generalmente son relativamente crudas y comprenden numerosas proteínas de semillas, que incluyen proteínas glicosiladas y no glicosiladas y otros contaminantes como el almidón o glucosinolatos o sus productos derivados. La presente invención comprende la extracción de una cantidad significativa de contaminantes de semillas. Para conseguir la extracción de material contaminante de las semillas, la preparación del cuerpo oleoso obtenida en la separación de la fase acuosa se lava por lo menos una vez resuspendiendo la fracción de cuerpo oleoso y centrifugando la fracción resuspendida. Este procedimiento produce lo que para el propósito de esta aplicación se refiere como una preparación de un cuerpo oleoso. El número de lavados dependerá generalmente de la pureza deseada de la fracción de cuerpo oleoso. Dependiendo de las condiciones de lavado que se utilicen, se obtendrá una preparación esencialmente pura de cuerpo oleoso. En dicha preparación las únicas proteínas presentes serán las proteínas del cuerpo oleoso. Para lavar la fracción del cuerpo oleoso, se pueden utilizar unas centrífugas tubulares u otras centrífugas como hidrociclonas o centrífugas de disco. El lavado de los cuerpos oleosos se puede realizar utilizando agua, sistemas de tampones, por ejemplo, cloruro sódico en concentraciones entre 0,01 M y por lo menos 2 M, carbonato sódico 0,1 M a un pH elevado (11-12), tampón bajo en sal, como Tris-HCl 50 mM pH 7,5, solventes orgánicos, detergentes o cualquier otra fase líquida. En unas formas de realización preferidas los lavados se realizan a un pH elevado (11-12). La fase líquida utilizada para el lavado así como las condiciones de lavado, como el pH y la temperatura, pueden variar dependiendo del tipo de semilla que se utilice. Lavar varios pH diferentes entre pH 2 y pH 11-12 puede resultar beneficioso ya que esto permitirá la extracción gradual de los contaminantes, en particular las proteínas. Las condiciones de lavado se seleccionan de forma que la etapa de lavado dé como resultado en la extracción de una cantidad significativa de contaminantes sin comprometer la integridad estructural de los cuerpos oleosos. En las formas de realización en las que se realiza más de una etapa de lavado, las condiciones de lavado pueden variar para diferentes etapas de lavado. Se pueden utilizar convencionalmente electroforesis en gel SDS u otras técnicas analíticas para monitorizar la extracción de proteínas de las semillas y otros contaminantes al lavar los cuerpos oleosos. No es necesario extraer toda la fase acuosa entre las etapas de lavado y la preparación final del cuerpo oleoso lavado se puede suspender en agua, en un sistema de tampón, por ejemplo, Tris-HCl 50 mM pH 7,5, o cualquier otra fase líquida y, si se desea, el pH se puede ajustar a cualquier pH entre pH 2 y pH 10.

El procedimiento para la fabricación de la preparación del cuerpo oleoso lavado se puede realizar en operaciones por lotes o en un procedimiento de flujo continuo. Particularmente cuando se utilizan centrífugas tubulares, un sistema de bombas que operan entre las etapas (a) y (b), (b) y (c), y (c) y (d) se genera un flujo continuo a través del sistema de procesamiento. En una forma de realización preferida, las bombas son bombas de 1 pulgada M2 Wilden de aire de doble diafragma. En otras formas de realización se pueden utilizar bombas hidráulicas o bombas peristálticas. Para mantener un suministro de consistencia homogénea en la centrífuga de decantación y en la centrífuga tubular, se pueden añadir homogeneizadores, como un homogeneizador IKA, entre las etapas de separación. También se pueden añadir unos homogeneizadores en fila entre varias centrífugas o aparatos de separación de exclusión por tamaño utilizados para lavar las preparaciones de cuerpos oleosos. El tamaño de los anillos de la presa, las composiciones del tampón, la temperatura y el pH pueden diferir en cada etapa de lavado por el tamaño del anillo de la presa utilizado en la primera etapa de separación.

En unas formas de realización de la invención en las que los cuerpos oleosos se aíslan de los tejidos más blandos, por ejemplo el mesocarpio de las aceitunas, las técnicas aplicadas para fragmentar la célula pueden variar algo de las utilizadas para romper semillas más duras. Por ejemplo, pueden resultar preferibles las técnicas basadas en la presión en contra de las técnicas por aplastamiento. La metodología para aislar los cuerpos oleosos a pequeña escala se ha dado a conocer para el aislamiento de cuerpos oleosos de los mesocarpios en las aceitunas (Olea europaea) y los aguacates (Persea americana) (Ross et al., Plant Science, 1993, 93: 203-210) y para embriones microporosos de la colza (Brassica napus) (Holbrook et al., Plant Physiol., 1991, 97: 1051-1058).

En unas formas de realización de la invención, en las que los cuerpos oleosos se obtienen de células no vegetales, la preparación del cuerpo oleoso lavado se aísla siguiendo procedimientos similares a los comentados anteriormente. Se ha descrito la metodología para aislar cuerpos oleosos a partir de levadura (Ting et al., 1997, Journal Biol. Chem. 272: 3699-3706).

Las propiedades químicas y físicas de la fracción oleosa pueden variar de dos formas por lo menos. Primero, diferentes especies vegetales contienen cuerpos oleosos con diferentes composiciones oleosas. Por ejemplo, el coco es rico en aceites láuricos (C_{12}), mientras que los aceites ácidos erúcicos (C_{22}) están presentes abundantemente en algunas Brassica spp. En segundo lugar, las cantidades relativas de aceites se pueden modificar en unas especies particulares de vegetales mediante la aplicación de técnicas de cultivo y ingeniería genética conocidas por los expertos en la materia. Estas dos técnicas tienen como objetivo alterar las actividades relativas de los enzimas que controlan las vías metabólicas implicadas en la síntesis del aceite. A través de la aplicación de estas técnicas, son obtenibles semillas con un grupo sofisticado de diferentes aceites. Por ejemplo, los esfuerzos realizados en los cultivos han dado como resultado el desarrollo de una semilla de colza con un bajo contenido de ácido erúcico (Canola) (Bestor, T. H., 1994, Dev. Genet. 15: 458) y se han generado por ingeniería genética líneas de plantas con aceites con alteraciones en la posición y en el número de dobles enlaces, variación en la longitud de la cadena de ácidos grasos y la introducción de grupos funcionales deseados (Töpfer et al., 1995, Science, 268: 681-685). Utilizando enfoques similares un experto en la materia será capaz de ampliar aún más las fuentes actualmente disponibles de cuerpos oleosos. Las composiciones variantes de aceites darán como resultado unas propiedades físicas y químicas variantes de los cuerpos oleosos. De este modo, mediante la selección de semillas oleosas o de sus mezclas a partir de diferentes especies o líneas de plantas como fuente de los cuerpos oleosos, se puede obtener un amplio repertorio de emulsiones con diferentes texturas y viscosidades.

La formulación de la emulsión

La preparación del cuerpo oleoso lavado se puede formular en una emulsión utilizando técnicas conocidas en la técnica. Preferentemente, se añade por lo menos un ingrediente adicional a la preparación del cuerpo oleoso lavado. El ingrediente adicional se puede añadir como una solución, una suspensión, un gel o un sólido y las cantidades del ingrediente adicional dependerán de la formulación. En la formulación, el ingrediente adicional se puede asociar con los cuerpos oleosos, permanecer suspendido en la solución, o formar una suspensión en la que los cuerpos oleosos están dispersos. El ingrediente también puede penetrar en la monocapa de fosfolípidos que rodea el cuerpo oleoso o la matriz de triacilglicérido. Los ingredientes que pueden penetrar el cuerpo oleoso pueden incluir aceites, ceras y el colorante Rojo de Nilo. En una forma de realización preferida, el ingrediente adicional es una fase líquida. En otra forma de realización preferida la fase líquida es agua. El agua se puede añadir tanto directamente o a través de la humedad asociada con otro ingrediente. La cantidad final de agua no es crítica, siempre y cuando al mezclar los ingredientes, se forme una emulsión estable. Generalmente, las composiciones contendrán por lo menos un 1% de agua y hasta un 99% de agua. Normalmente se requerirá una mezcla para proporcionar una emulsión adecuada y puede ser necesario aplicar calor o presión.

En otra forma de realización preferida el ingrediente adicional es un aceite o una cera. Los aceites y las ceras pueden partir la matriz de triacilglicérido de los cuerpos oleosos y de esta manera los ingredientes lipídicos solubles, como las vitaminas lipídicas solubles, se pueden transportar a la matriz del cuerpo oleoso. Cuando los aceites y las ceras comprenden el ingrediente añadido, los cuerpos oleosos pueden permanecer suspendidos en la fase lipófila o se pueden formar emulsiones dobles.

Las composiciones finales pueden presentarse en forma sólida o líquida o de cualquier otra viscosidad deseada. La emulsión se puede espesar utilizando agentes gelificantes como la celulosa y sus derivados, Carbopol y sus derivados, algarroba, carragenanos y sus derivados, goma xantana, goma escleranto, alcanolamidas de cadena larga, y bentona y sus derivados, normalmente presentes en concentraciones inferiores al 2% en peso.

La emulsión puede comprender además surfactantes para humedecer, hacer espuma, penetrar, emulsionar, solubilizar y/o dispersar un material seleccionado. Por ejemplo, se pueden añadir si es necesario los surfactantes aniónicos, como el sulfonato de monoglicérido sódico de coco, y los surfactantes catiónicos, como el cloruro de lauril trimetil amonio, cloruro de cetil piridinio y bromuro de trimetilamonio, los surfactantes no iónicos incluyendo los plurónicos, y los condensados de óxido de polietileno de fenoles de alquilo, y los surfactantes zwiteriónicos como los derivados de compuestos de amonio, fosmonio y sulfomonio cuaternario alifáticos.

También se pueden incluir en la formulación de la emulsión si se desea, agentes quelantes, capaces de unir iones metálicos, como ácido tartárico, EDTA, ácido cítrico, citratos de metales álcalis, sales pirofosfatos o policarboxilatos poliméricos aniónicos.

Generalmente, las formulaciones de emulsiones serán tratadas de forma que se eviten contaminaciones por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseadas, como reacciones oxidantes. En unas formas de realización preferidas esto se consigue mediante la adición de conservantes, por ejemplo metabisulfito sódico u otros aditivos químicos o mediante irradiación, por ejemplo mediante radiación ionizante como irradiación con cobalto-60 o cesio-137 o mediante radiación ultravioleta.

Además, los agentes activos se pueden añadir a la preparación del cuerpo oleoso lavado. Por ejemplo, se pueden formular unas composiciones cosméticas como unas suspensiones estables utilizando la presente formulación de la emulsión y vitaminas y agentes humectantes se pueden incluir en cremas para la piel. Una manera particularmente ventajosa en la que un ingrediente activo se puede incluir en las emulsiones objeto de la invención, es a través de la construcción de fusiones de genes oleosinas como se detalla en el documento WO 96/21029. Indicado brevemente, el documento WO 96/21029 da a conocer un procedimiento para producir unas proteínas y péptidos como proteínas de fusión de oleosinas. Estas proteínas de fusión se crean uniendo genéticamente el gen que codifica para la oleosina a un gen que codifica para un péptido o una proteína de interés. La expresión del gen de fusión, en por ejemplo una semilla oleosa vegetal, da como resultado la síntesis de una proteína de fusión que después se dirige al cuerpo oleoso. El aislamiento de la fracción de cuerpo oleoso da como resultado la recuperación de la proteína de fusión. En principio se puede producir cualquier proteína o péptido deseado utilizando esta técnica. Por ejemplo, se prevé que los péptidos anticongelación de peces polares (Davies, P. L. et al., 1990, FASEB J. 4: 2460-2468) se producen como proteínas de fusión oleosinas. Después, la preparación del cuerpo oleoso lavado se puede utilizar para preparar helados, batidos u otros materiales alimentarios congelados con propiedades de congelación mejoradas mediante la inhibición o la prevención de la formación de cristales. En otro ejemplo, se puede producir una proteína terapéutica como una proteína de fusión de oleosinas. Los cuerpos oleosos se pueden utilizar entonces para formular una suspensión deseable que será para la administración oral, o para la administración tópica. Esta forma de realización de la presente invención se ejemplifica aún más en el Ejemplo 11 de la presente invención en la que se prepara un pescado para consumo alimenticio
que comprende cuerpos oleosos que comprenden una fusión de oleosina-hormona de crecimiento de la carpa.

También se puede formular una emulsión con propiedades formadoras de películas. Dicha emulsión, cuando se aplica a una superficie y se seca forma una capa. Un ejemplo de una emulsión en la que se aplica una película de una capa de un cuerpo oleoso es en pescados, en la que los cuerpos oleosos se pueden aplicar al pescado para aumentar su valor alimenticio. Una emulsión formadora de película es particularmente útil en formas de realización de la presente invención en las que es deseable una liberación controlada de un ingrediente activo como en la liberación de productos farmacéuticos o compuestos volátiles como las fragancias. El tiempo de liberación del agente activo de una película de una emulsión, que se produce durante el secado, depende, entre otros factores, del grosor de la película. Cuando se aplica un recubrimiento más grueso, un tiempo de secado más largo dará lugar en una liberación más lenta del agente activo. En variantes consideradas de la forma de realización, la liberación del agente se produce sólo cuando la película está seca. Otros factores, como la composición de la emulsión y el tipo y la concentración del ingrediente activo también determinan las características de la liberación. Por ejemplo, cosolventes, como el etanol, se pueden incluir en la formulación e influenciar en el tiempo de liberación. La liberación de un ingrediente activo también es deseable en aplicaciones alimenticias, en las que un potenciador de sabor atrapado en una emulsión se libera durante el consumo. La liberación del potenciador de sabor, dependiendo de la formulación exacta de la emulsión, puede proporcionar una sensación súbita e intensa o una combinación más sutil de sabores y esencias.

La formulación de la emulsión también se puede utilizar en pulverizadores y aerosoles. Para este propósito se utilizan preferentemente cuerpos oleosos de pequeño tamaño, por ejemplo 1 \mum o inferior en diámetro como los encontrados en B. napus. Los compuestos volátiles, como el alcohol y las fragancias se pueden incluir en estos aerosoles. Las emulsiones de este tipo también se pueden pulverizar en la superficie de preparaciones alimenticias secas como patatas fritas y sopa seca. La emulsión puede incluir un potenciador del sabor y añadir valor conservante o ayudar a mantener los niveles de humedad apropiados de la comida.

Utilizaciones de la formulación de la emulsión

El objetivo de la invención es producir unas emulsiones que son útiles en composiciones industriales y cosméticas. Se ha apuntado que las emulsiones se pueden aplicar en composiciones que varían ampliamente en propiedades físicas y utilización. Por consiguiente, las formas de realización específicas incluyen aplicaciones como productos comestibles y pienso, productos farmacéuticos, productos de cuidado personal y productos industriales.

Las utilizaciones en comestibles y nutrición incluyen sustitutos de productos no lácteos, tales como quesos o yogures no lácteos, mayonesas, vinagretas, glaseados, helados, aliños de ensaladas, mostazas sintéticas, caramelos, goma de mascar, puding, productos horneados, condimentos, agentes espesantes de zumos, fórmula para bebés, vehículos de sabor, agentes texturizante (margarina), comida para animales domésticos, comida para peces y alimento para el ganado. Las aplicaciones para productos para el cuidado personal incluyen jabones, cosméticos, cremas para la piel, cremas faciales, dentífricos, lápiz de labios, perfumes, maquillajes, cremas base, colorete, máscaras, sombra de ojos, cremas solares, acondicionadores para el pelo y colorantes de pelo. Los productos farmacéuticos que se pueden formular utilizando la preparación del cuerpo oleoso lavado objeto de la invención incluyen agentes terapéuticos, agentes de diagnóstico y agentes de liberación. Como agente terapéutico o de diagnóstico, la emulsión contendrá adicionalmente un ingrediente activo. El ingrediente activo puede ser cualquiera que se desee liberar en un huésped. En una forma de realización, el ingrediente activo puede ser una proteína o un péptido que presenta un valor terapéutico o de diagnóstico. Dichos péptidos incluyen antígenos (de formulaciones de vacunas), anticuerpos, citoquinas, factores de coagulación y hormonas de crecimiento. Las utilizaciones industriales para las emulsiones de la presente invención incluyen pinturas, recubrimientos, lubricantes, películas, geles, líquidos para taladros, encolado de papel, látex, material de construcción de edificios y carreteras, tintas, colorantes, ceras, abrillantadores y formulaciones de agroquímicos. En unas formas de realización preferidas, el objetivo de la invención es proporcionar unas composiciones que pueden ser ingeridas por animales y humanos. Como estas composiciones pueden ingerirse deben tener una calidad alimenticia. El producto particular y la forma particular en la que se aplica la emulsión, no son sin embargo de gran importancia y puede ser como se desee. Se ha de entender claramente que la emulsión formulada con la preparación del cuerpo oleoso lavado se puede aplicar en cualquier producto doméstico o industrial.

La estabilidad de la presente formulación de la emulsión a un pH bajo se puede aprovechar en formulaciones de emulsiones ácidas. Por ejemplo, la formulación de la emulsión se puede utilizar en la preparación de un producto alimenticio similar a la mayonesa, que además de la preparación del cuerpo oleoso lavado también comprende un aceite vegetal, mostaza, vinagre y yema de huevo, si se desea. Las emulsiones fluidas, como aliños de ensaladas, se pueden preparar aumentando la cantidad relativa de vinagre y/o mediante la adición de agua.

Un ejemplo de una aplicación en la que se puede aplicar calor sin efectos dañinos aparentes, es en la preparación de una salsa salada como la salsa bechamel o en salsas dulces como salsas con chocolate. En estas aplicaciones, la preparación del cuerpo oleoso lavado se utiliza como un sustituto de la fritura. Para preparar la salsa bechamel, se añade 1 parte de la preparación del cuerpo oleoso calentada, 1 parte (p/p) de harina y se agita hasta que se forma una suspensión espesa. Se añade leche moderadamente caliente gradualmente hasta que se obtiene una salsa con la viscosidad deseada.

La formulación de la emulsión también se puede utilizar como un sustituto de la mantequilla. En esta aplicación, se añaden pequeñas cantidades de agua a la preparación del cuerpo oleoso lavado, por ejemplo, inferior al 10% hasta que se obtiene una viscosidad deseada. Se pueden añadir si se desea sabores naturales de mantequilla y espesantes. El sustituto de la mantequilla se puede utilizar en maíz dulce, pan, en mezclas para pasteles o para hacer pan. La sal, que contribuye al sabor y actúa como un conservante, se puede añadir normalmente a un nivel de aproximadamente 2,5% (pt/vol.). Se pueden añadir agentes colorantes, por ejemplo, extractos de semilla de annatto o caroteno para intensificar el color como se desee. Una ventaja de esta aplicación es que la mantequilla basada en el cuerpo oleoso no comprende ácidos grasos hidrogenados, los cuales se utilizan en las formulaciones de margarina y similares para conseguir una consistencia deseada, pero también están asociadas a enfermedades cardiovasculares.

Se pueden preparar mantequillas con varios niveles de rigidez, de una espuma a una mantequilla líquida. En esta aplicación, se introduce aire en la formulación de la emulsión y la formulación de la emulsión se puede considerar dispersada en la fase continua, aire. Las mantequillas se pueden aplicar en mezclas que se desea batir o agitar. Estas mezclas incluyen glaseados, cremas sintéticas, helados y pasta de pasteles.

Se puede preparar una imitación de zumo de frutas a partir de sabores y nutrientes naturales o artificiales. Dichos zumos de imitación no presentan la apariencia correcta y debido a la transparencia parecen poco cargados o diluidos. Mediante la adición de una cantidad pequeña, por ejemplo del 0,1 al 1% (v/v) de la preparación del cuerpo oleoso lavado o en una de sus emulsiones se producirá un enturbamiento para darle al zumo una apariencia enriquecida. Por consiguiente, la presente preparación del cuerpo oleoso lavado se puede utilizar como agente opacizante.

En otra aplicación que implica zumos, se puede añadir la preparación del cuerpo oleoso lavado o una de sus emulsiones a los zumos con sólidos con tendencia a formar sedimentos, como el zumo de tomate. Añadiendo una pequeña cantidad de la preparación del cuerpo oleoso lavado, por ejemplo del 0,1 al 1% (v/v), puede disminuir la tasa de sedimentación de los sólidos en el zumo y ayuda a mantener una apariencia rica.

También se han previsto aplicaciones tópicas de la preparación del cuerpo oleoso lavado de la presente invención. En esta forma de realización la emulsión se formula como una emulsión dermatológicamente aceptable, que por ejemplo se puede utilizar para humedecer el cutis y/o todo el cuerpo, incluyendo las uñas y los labios o puede presentar propiedades para combatir el envejecimiento de la piel, el acné, la pigmentación, la pérdida de cabello, o para promover la eliminación de cabello o para facilitar la curación de heridas y/o la reestructuración del tejido cutáneo. La preparación del cuerpo oleoso lavado representa preferentemente el 1-99% en peso de la composición final.

Las composiciones cosméticas de la presente invención pueden comprender compuestos hidrocarburos adicionales tales como aceites o ceras de plantas, animales, minerales o sintéticos o sus mezclas. Comprenden parafina, vaselina, perhidroescualeno, aceite de arara, aceite de almendra, aceite de calofilo, aceite de aguacate, aceite de sésamo, aceite de ricino, aceite de yoyoba, aceite de oliva, o aceite de germen de cereales. También se pueden incluir ésteres como ésteres de ácido lanolico, ácido oleico, ácido láurico, ácido esteárico, ácido mirístico. También es posible incluir alcoholes por ejemplo, alcohol oleílico, alcohol linolénico o alcohol linolínico, alcohol isoesteárico o dodecanol octilo, alcohol o polialcohol. Otros hidrocarburos que se pueden incluir son los octanoatos, decanoatos, ricinoleatos, triglicéridos caprílicos/cápricos o triglicéridos de ácidos grasos C_{10} a C_{22}. La adición de estos agentes producirá una formulación de emulsiones dobles.

También se pueden incluir en las formulaciones cosméticas de la presente invención los aceites hidrogenados, que son sólidos a 25ºC, como el aceite de ricino hidrogenado, el aceite de palma o el aceite de coco, o sebo hidrogenado; mono-di-tri- o sucroglicéridos; lanolinas; y ácidos grasos que son sólidos a 25ºC. Entre las ceras que se pueden incluir están las ceras animales como la cera de abejas; ceras vegetales como la cera de carnauba, cera de candelilla, cera de ouricurry, cera Japonesa o ceras de fibras de corcho o de caña de azúcar; ceras minerales, por ejemplo cera parafina, cera de lignito, ceras microcristalinas u ozoqueritas y ceras sintéticas.

Se pueden incluir pigmentos y pueden ser blancos o coloreados, inorgánicos u orgánicos y/o perlados. Estos pigmentos comprenden dióxido de titanio, óxido de zinc, dióxido de zirconio, óxidos de hierro negros, amarillos, rojos y marrones, dióxido de cerio, óxido de cromo, azul férrico, carbón negro, bario, estroncio, lacas de calcio y aluminio y mica recubierta con óxido de titanio o con óxido de bismuto.

Se pueden incluir los ingredientes activos comúnmente utilizados en cremas para la piel, como vitaminas, por ejemplo como las vitaminas A o C y alfa-hidroxi ácidos, como cítrico, glicólico, láctico o tartárico, en cosméticos y/o composiciones dermatológicas. Por ejemplo, la patente US nº: 5.602.183 da a conocer que la vitamina C o ácido ascórbico promueve el crecimiento de tejido conectivo, particularmente en el refuerzo de la piel contra agresiones externas como del humo y la radiación UV. Los agentes hidratantes que se pueden incluir en cremas para la piel y cosméticos son por ejemplo aceite mineral y urea. También se pueden añadir antioxidantes como los que se producen naturalmente tocoferoles y polifenoles, o hidroxitolueno butilado y hidroxianisol. Los filtros solares tales como metoxicinamato de octilo (Parsol MCX), 3-benzofenona (Uvinul M40) y butilmetoxidibenzoilmetano (Parsol 1789) se pueden utilizar para preparar una loción bronceadora. Los ingredientes farmacéuticamente activos que se pueden utilizar para formular unas composiciones cosméticas incluyen por ejemplo antibióticos, fungicidas y agentes antiinfla-
matorios.

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El producto cosmético final se puede presentar en forma de un polvo suelto, fluido o compacto (base de maquillaje, colorete o sombra de ojos), un producto relativamente grasiento como un lápiz de labios, una máscara o un aceite o loción para el cuerpo o la cara.

La preparación del cuerpo oleoso lavado también se puede utilizar para servir como un vehículo oralmente aceptable en dentífricos que además comprenden sílices, surfactantes, agentes quelantes, un flúor, espesantes, edulcorantes, aromas, por ejemplo como aceite de menta, enzimas y biocidas.

Un ejemplo de un producto industrial que se puede formular es la pintura en la que la resina principal, como en las basadas en compuestos tipo silicona, compuestos acrílicos, poliéster, "akyd", flúor, epoxi, o poliuretano puede reemplazarse parcialmente o completamente por la preparación del cuerpo oleoso lavado de la presente invención. Otros aditivos como pigmentos, tintes, virutas de vidrio y virutas de aluminio, dispersantes de pigmentos, espesantes, agentes de nivelación, catalizadores endurecedores, agentes endurecedores como los diisocianatos, catalizadores endurecedores, inhibidores de la gelificación, agentes de absorción de radiación ultravioleta, agentes de extinción de radicales libres, etc., se pueden formular en composiciones de pinturas si se requieren.

La preparación del cuerpo oleoso lavado también puede servir para la formulación de lubricantes. Por ejemplo, la preparación del cuerpo oleoso se puede utilizar para reemplazar parcial o completamente los aceites lubricantes como los aceites animales, aceites vegetales, aceites lubricantes de petróleo, aceites lubricantes sintéticos, o la grasa lubricante como la grasa de litio, grasa de urea y grasa de calcio. Otras composiciones utilizadas en una formulación de lubricante comprenden antioxidantes, dispersantes de detergente, agentes aceitosos, modificadores de la fricción, optimizadores del índice de viscosidad, depresores de puntos porosos, material lubricante sólido, inhibidores de oxidación y antiespumantes.

También se pueden preparar ceras utilizando la preparación del cuerpo oleoso lavado de la presente invención. Éstas comprenden los tipos de ceras de aclarado, como las que proporcionan una película de acabado hidrófoba estable en automóviles y otras capas de recubrimiento. Otras composiciones utilizadas en la preparación de una cera comprenden surfactantes, aceites minerales, tales como mezclas de aceites parafínicos y aromáticos/nafténicos, perfumes, biocidas, agentes colorantes que se pueden añadir en cantidades compatibles si se desea.

Al formular productos industriales, tales como pinturas o lubricantes, la pureza de la fase del cuerpo oleoso puede ser menos importante y puede no ser necesario someter los cuerpos oleosos a un lavado. Una emulsión industrial se puede preparar mediante (i) la obtención de los cuerpos oleosos a partir de una célula y (ii) la formulación de los cuerpos oleosos en una emulsión industrial. Los cuerpos oleosos se pueden obtener mediante (a) la moltura de semillas vegetales; (b) la extracción de los sólidos de las semillas molidas; y (c) la separación de la fase del cuerpo oleoso de la fase acuosa. La invención también incluye una emulsión industrial que comprende cuerpos oleosos preparados según la presente invención.

Los ejemplos siguientes no limitativos se proporcionan a título ilustrativo de la presente invención:

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Ejemplos

Ejemplo 1

Obtención de una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de semillas oleosas de colza, soja, girasol, mostaza blanca, cacahuete, calabacín, lino, cártamo y maíz a escala de laboratorio

Las semillas maduras secas de Brassica napus cv Westar, soja, girasol, mostaza blanca, cacahuete, calabacín, lino, cártamo y maíz se homogeneizaron en cinco volúmenes de tampón de de moltura frío (Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, sacarosa 0,4 M y NaCl 0,5 M) utilizando un politrón a alta velocidad. El homogeneizado se centrifugó a 10 x g durante 30 minutos para extraer partículas de materia y para separar los cuerpos oleosos de la fase acuosa que contiene la masa de la proteína soluble de la semilla. La fracción del cuerpo oleoso se recogió de la superficie del sobrenadante con una espátula metálica y se añadió a un volumen del tampón de moltura. Para conseguir un lavado eficaz en etapas posteriores se encontró que era necesario redispersar minuciosamente los cuerpos oleosos en el tampón de moltura. Esto se consiguió mediante la homogeneización suave de los cuerpos oleosos en el tampón de moltura utilizando un politrón a baja velocidad. Utilizando una jeringa, los cuerpos oleosos redispersados se laminaron cuidadosamente por debajo de cinco volúmenes de tampón Tris-HCl 50 mM, pH 7,5 frío y se centrifugó como antes. Después de la centrifugación, se extrajeron los cuerpos oleosos y el proceso de lavado se repitió dos veces. La preparación final del cuerpo oleoso se resuspendió en un volumen de Tris-HCl pH 7,5 frío, redispersado con el
politrón.

La muestra del cuerpo oleoso se disolvió en un tampón de muestra SDS y después se analizó mediante electroforesis en gel de poliacrilamida SDS. Los resultados se muestran en la Figura 1.

El material obtenido de este modo estaba entonces listo para utilizarse en varias formulaciones.

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Ejemplo 2

Obtención de una preparación de un cuerpo oleoso a partir de semillas oleosas de colza, girasol y maíz a gran escala

Este ejemplo describe la recuperación de la fracción de cuerpo oleoso a partir de semillas de canola, girasol y maíz a gran escala. La preparación resultante contiene cuerpos oleosos intactos y es comparable en pureza a una preparación obtenida utilizando procedimientos a escala de laboratorio.

Moltura de las semillas. Se vertieron un total 10-15 Kg de semillas secas de canola (Brassica napus cv Westar), girasol (Helianthus annuus) o maíz (Zea mays) a través de una tolva de un molino coloidal (Molino Coloidal, MZ-130 (Fryma); capacidad: 500 Kg/hr), que se equipó con un aparato de moltura con un rotor/generador MZ-120 con dientes transversales y una tolva de carga superior. Antes de la moltura se añadieron aproximadamente 50-75 litros de agua a través de una manguera conectada exteriormente. El molino se puso en funcionamiento a un intervalo de 1R, seleccionado para conseguir unas partículas de tamaño inferior a 100 micras a una temperatura de 18ºC y 30ºC. Después de la moltura de las semillas se añadió agua del grifo a la suspensión de semillas hasta un volumen final de 90 litros.

Extracción de los sólidos. La suspensión resultante, se bombeó en una centrífuga de decantación (centrífuga de decantación de 2 fases y una velocidad operativa máxima de 6.000 rpm. Hasco 200) después de llevar la centrífuga a una velocidad operativa de 3.500 rpm. La transferencia desde el molino a la centrífuga a una velocidad de flujo de 360 l/h se consiguió utilizando una bomba de aire de doble diafragma de 1 pulgada M2 Wilden. En 15-20 minutos se decantaron aproximadamente 15 kg de semillas.

Separación del cuerpo oleoso. La separación de la fracción del cuerpo oleoso se consiguió utilizando una centrífuga tubular Sharples modelo AS-16 (Alpha Laval) equipada con una campana de separación de tres fases y series desmontables del anillo de la presa; capacidad: 150 l/hr; anillo de la presa: 30 mm. La velocidad operativa fue de 15.000 rpm. (13.200 x g.). Se utilizó una bomba peristáltica Watson-Marlow (Modelo 704) para bombear la fase líquida decantada (DL) a la centrífuga tubular después de llevar la centrífuga a la velocidad operativa. Esto da como resultado la separación de la fase líquida decantada en una fase pesada (HP) que comprende agua y proteínas solubles de las semillas y una fase ligera (LP) que comprende cuerpos oleosos. La fracción de cuerpo oleoso que se obtuvo después de una pasada a través de la centrífuga se denomina una preparación de un cuerpo oleoso no lavado. Después, la fracción se pasó a través de la centrífuga tres veces más. Entre cada paso a través de la centrífuga, los cuerpos oleosos concentrados se mezclaron con aproximadamente cinco volúmenes de agua fresca. Todo el procedimiento se realizó a temperatura ambiente. Las preparaciones obtenidas después de la segunda separación se denominan todas como la preparación del cuerpo oleoso lavado. Después de tres lavados se extrajo gran cantidad de la proteína soluble contaminante y los perfiles de la proteína del cuerpo oleoso en electroforesis de gel de poliacrilamida SDS fueron similares en apariencia a los obtenidos utilizando procedimientos a escala de laboratorio.

Ejemplo 3

Extracción de las proteínas de las semillas mediante el lavado de la fase de cuerpo oleoso

Este ejemplo describe la recuperación de una fracción de cuerpo oleoso a partir de semillas de canola, maíz o girasol. Utilizando distintas condiciones de lavado, se ha demostrado que el lavado resulta en la extracción de cantidades significativas de proteínas de las semillas de la preparación del cuerpo oleoso. Estas proteínas incluyen proteínas que pueden ser alergénicas.

Se vertieron un total de 10-15 Kgs. de semilla seca de canola (Brassica napus cv Westar), maíz (Zea mays) o girasol (Helianthus annuus) a través de la tolva de un molino coloidal (Molino Coloidal, MZ-130 (Fryma)), que se equipó con un equipo de moltura con un rotor/generador MZ-120 con dientes transversales y una tolva de carga superior. Antes de la moltura se añadieron aproximadamente 50-75 l de agua a través de una manguera conectada exteriormente. El molino se puso en funcionamiento a un intervalo de 1R, seleccionado para conseguir partículas de tamaño inferior a 100 micrones a 18ºC y 30ºC. Después de la moltura de las semillas se añadió agua del grifo a la suspensión de semillas a un volumen final de 60-90 litros y se obtuvo una muestra de suspensión de semillas por electroforesis en gel de poliacrilamida de SDS. Después la suspensión se bombeó en una centrífuga de decantación (centrífuga de decantación de 2 fases y una velocidad máxima operativa de 6.000 rpm. Hasco 200) después de llevar la centrífuga a una velocidad operativa de 3.500 rpm. La transferencia desde el molino a la centrífuga se consiguió utilizando una bomba de aire de doble diafragma de 1 pulgada M2 Wilden. En 15-20 minutos se decantaron aproximadamente 15 kg de semillas. Se obtuvo una muestra de la fase líquida decantada por electroforesis en gel de poliacrilamida SDS. La separación de la fracción del cuerpo oleoso se consiguió utilizando una centrífuga tubular Sharples modelo AS-16 (Alpha Laval) equipada con una campana de separación de tres fases y series desmontables del anillo de la presa; capacidad: 150 l/h; anillo de la presa: 29 mm. La velocidad operativa fue de 15.000 rpm. (13.200 x g.). Se utilizó una bomba peristáltica Watson-Marlowe (Modelo 704) para bombear la fase líquida decantada en la centrífuga tubular después de llevar la centrífuga a la velocidad operativa. Se obtuvo la fase de cuerpo oleoso no lavada y se mezcló con aproximadamente 5 volúmenes de agua. Este proceso se repitió un total de tres veces más. La fase de cuerpo oleoso que se obtuvo después del primer centrifugado se denomina preparación de cuerpo oleoso no lavada. Todas las otras preparaciones son preparaciones de cuerpo oleoso lavado. Después de la primera y cuarta separación se obtuvieron muestras para el análisis mediante electroforesis en gel de poliacrilamida SDS.

Al terminar el cuarto lavado, se homogeneizó una muestra de 0,9 ml de la preparación del cuerpo oleoso en 0,1 ml de Na_{2}CO_{3} 1 M y se mantuvo bajo agitación durante 30' a temperatura ambiente. Se recuperó la fracción de cuerpo oleoso lavado después de la centrifugación, se lavó una vez con agua y se preparó para electroforesis en gel de poliacrilamida SDS.

Todas las muestras se disolvieron en un tampón de muestras SDS y las muestras se analizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida SDS. Los resultados se muestran en la Figura 2.

Ejemplo 4

El efecto del lavado de la fase del cuerpo oleoso sobre las características de retención de agua

Se prepararon una preparación de cuerpo oleoso lavado y una fase de cuerpo oleoso no lavado a partir de colza como en el ejemplo 2. Para determinar la diferencia de la capacidad de retención de agua entre la fase de cuerpo oleoso no lavado y la preparación de cuerpo oleoso lavado se mezclaron minuciosamente 30 ml de preparaciones de cuerpo oleoso utilizando un vortex. Después las preparaciones se incubaron durante 2 horas en un baño maría a 40, 60 u 80ºC y las muestras se centrifugaron a 1.500 x g durante 20 minutos (muestras no diluidas). Se preparó otro grupo de muestras mediante la mezcla de 15 g de preparación de cuerpo oleoso lavado o no lavado y 15 ml de agua. Las muestras se mezclaron en un vortex y después se incubaron a 40, 60 u 80ºC durante 2 horas y se determinó la cantidad de agua presente en las muestras después de la centrifugación a 1.500 x g durante 20 minutos (muestras diluidas). Se midió la pérdida de masa atribuible a la evaporación a unas temperaturas de 80ºC y 60ºC.

A una temperatura de 80ºC, las preparaciones no diluidas que comprendían cuerpos oleosos perdieron cantidades significativas de agua a través de la evaporación. La preparación de cuerpos oleosos no lavados perdió el 26% de su masa, mientras que la preparación lavada perdió el 16%. Al centrifugarse, la preparación no lavada liberó aproximadamente 2,5 ml de fase acuosa, mientras que los cuerpos oleosos lavados permanecieron en la misma fase. Ambas preparaciones diluidas absorbieron agua. El volumen de cuerpos oleosos aumentó en ambos casos 18,5 \pm 1 ml.

A una temperatura de 60ºC, las preparaciones no diluidas perdieron aproximadamente el 10% de agua a través de la evaporación. Después de la centrifugación, la preparación lavada liberó aproximadamente 0,5 ml de fase acuosa, mientras que la preparación del cuerpo oleoso lavado permaneció en la misma fase. Ambas preparaciones diluidas absorbieron agua. A 60ºC, el volumen de los cuerpos oleosos aumentó en ambos casos 18 \pm 1 ml.

A 40ºC, ambas muestras no diluidas liberaron aproximadamente 2 ml de fase acuosa. Cuando las muestras diluidas se compararon, la preparación no lavada absorbió aproximadamente 3 ml de agua, igual que a 60 u 80ºC. Sin embargo, a 40ºC la preparación lavada absorbió 8 ml de agua.

Estos experimentos demuestran que en una preparación del cuerpo oleoso lavado calentada a 60ºC u 80ºC, el agua permanece más estrechamente asociada con la preparación del cuerpo oleoso que en una preparación no lavada. Al enfriarse, la preparación del cuerpo oleoso lavado pareció ser más estable que la emulsión no lavada. Al calentarse a 40ºC, la preparación del cuerpo oleoso lavado fue capaz de absorber un mayor volumen de agua añadida exógenamente sin que resultase en una separación de la fase.

Ejemplo 5

El efecto del lavado de los cuerpos oleosos sobre las características de absorción de aceite

Se prepararon una preparación de cuerpo oleoso lavado y una fase de cuerpo oleoso no lavada a partir de colza como en el ejemplo 2. Para determinar la diferencia de la capacidad de absorción de aceite entre la fase de cuerpo oleoso no lavada y la preparación de cuerpo oleoso lavado, se dispersaron 2 gr de preparaciones de cuerpo oleoso en 12 ml de aceite de colza refinado, blanqueado y desodorizado en un tubo de 50 ml. Los contenidos se agitaron durante 30 segundos cada 5 minutos durante 30 min. Después, los tubos se centrifugaron a 4.400 rpm durante 25 min. El aceite libre se decantó y se determinó el porcentaje de aceite absorbido mediante la diferencia de peso. Se ensayaron tres preparaciones de cuerpos oleosos lavados y tres preparaciones de cuerpos oleosos no lavados.

Se encontró que la capacidad de absorción de aceite de los cuerpos oleosos no lavados variaba significativamente entre los tres lotes y variaba entre un 18,7% y un 28%. Los cuerpos oleosos lavados presentaron una absorción de aceite reproducible de 32 \pm 1%. Por consiguiente, se encontró que la preparación del cuerpo oleoso lavado era superior ya que (1) se encontró que se absorbió una cantidad mayor de aceite y (2) que la absorción se dio de una forma más reproducible.

Ejemplo 6

Preparación de una emulsión similar a la mayonesa que comprende una preparación de un cuerpo oleoso lavado

Se preparó una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de colza como en ejemplo 2 y se produjo una emulsión similar a la mayonesa mediante la mezcla de los siguientes componentes utilizando una batidora eléctrica doméstica.

100

Se obtuvo un producto con una textura similar a la mayonesa. El producto similar a la mayonesa permaneció estable durante por lo menos 1 día a 4ºC.

Ejemplo 7

Preparación de una emulsión similar a la mayonesa sin colesterol

Se preparó una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de colza como en ejemplo 2 y se produjo una emulsión similar a la mayonesa mediante la mezcla de los siguientes componentes.

Aceite de girasol: 200 gr

Cuerpos oleosos lavados: 100 gr

Vinagre: 30 ml

Se obtuvo un producto de textura similar a la mayonesa. Como la mayonesa se prepara sin yema de huevo, un ingrediente habitualmente utilizado en mayonesa comercialmente disponible, el producto preparado utilizando cuerpos oleosos lavados no contiene colesterol. Se encontró que la mayonesa era tan estable como una mayonesa comercial cuando se valoró la estabilidad utilizando la centrifugación.

Ejemplo 8

Preparación de una emulsión similar a la vinagreta que comprende una preparación de cuerpo oleoso lavado

Se preparó una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de colza como en el ejemplo 2 y se produjo una emulsión similar a la vinagreta mediante mezcla manual de los componentes siguientes.

101

Se obtuvo un producto de textura similar a la vinagreta. El producto similar a la vinagreta permaneció estable durante por lo menos varios días a 4ºC.

Ejemplo 9

Preparación de un producto para untar similar a la mostaza

Se obtuvo una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de colza como se ha descrito en el ejemplo 2. Los siguientes ingredientes se mezclaron para obtener un producto similar a la mostaza.

102

La formulación de la emulsión resultante es un producto similar a la mostaza que se puede untar fácilmente y que presenta unas características de sabor más cremoso, menos arenoso que la mostaza.

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Ejemplo 10

Preparación de una salsa similar a la bechamel

Se obtuvo una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de colza como se ha descrito en el ejemplo 2. La preparación del cuerpo oleoso lavado se calentó a una temperatura moderada y se añadió una parte igual de harina y se mezcló con la preparación del cuerpo oleoso lavado. Mientras se agitaba manualmente, se añadió leche gradualmente a esta mezcla.

103

Se obtuvo una salsa similar a la bechamel. La consistencia de la salsa puede ser como se desee dependiendo de la cantidad de leche que se añada. También se pueden añadir aromas adicionales si se requiere. La ausencia de ácidos grasos hidrogenados en este producto le proporciona una ventaja sobre una salsa preparada a partir de margarina doméstica.

Ejemplo 11

Preparación de una emulsión farmacéutica para cubrir pescado

Se obtuvo una preparación de un cuerpo oleoso lavado a partir de una planta transgénica B. napus que expresa la hormona de crecimiento de la carpa (cGH) fusionada con oleosina, en la que la proteína de fusión se dirigió a los cuerpos oleosos, de la siguiente manera. Un fragmento de ADN que contenía la región que codifica para la cGH a la que le faltaba secuencia señal de sus 22 aminoácidos se amplificó a partir de un plásmido que contenía en un inserto del ADNc de la hormona de crecimiento de la carpa común (Cyprinus carpio) (Koren et. al., 1989, Gene 67: 309-315) utilizando la reacción en cadena de la polimerasa en combinación con dos cebadores específicos de cGH. El fragmento de cGH amplificado se fusionó en el marco de lectura correcto y en 3' de la oleosina de Arabidopsis thaliana utilizando pOTrhomb (van Rooijen, 1993, PhD Tesis, University of Calgary) como un plásmido padre y utilizando las estrategias de clonación conocidas por un experto en la materia. En la pOhrTomb se manipuló un sitio de segmentación de la trombina en 3' de la secuencia de codificación de la oleosina. Se introdujo el gen de fusión oleosina-CGH en el vector binario pCGN1559 (McBride y Summerfelt, 1990, Plant. Mol. Biol. 14: 269-276) y la construcción resultante se utilizó para transformar la A. tumefaciens. La cepa de la agrobacterium se utilizó para transformar las semillas de la B. napus cv Westar. Se obtuvieron semillas de plantas transgénicas y se aislaron los cuerpos oleosos de la semilla transgénica tal como se ha descrito en el ejemplo 1.

Posteriormente, los cuerpos oleosos se colocaron en una jeringa y se rociaron sobre el pescado utilizando aproximadamente 2,5 \mum de proteína de un cuerpo oleoso por 1 mg de pescado. Después el pescado recubierto con cuerpos oleosos se dejó secar durante la noche. Después un total de 50 mg de pescado se mezclaron con 10 ml de agua y se incubaron durante 0, 30, 45 o 60 minutos. Después se recogió el pescado y se resuspendió en 0,2 ml de Tris-Cl 50 mM (pH 7,5) y se prepararon para analizarlos mediante electroforesis en gel de poliacrilamida SDS en ebullición en 2,5% de SDS. La presencia de cuerpos oleosos en el pescado se evaluó utilizando Western blot y anticuerpos monoclonales contra la cGH.

A juzgar por la intensidad de la señal de la única banda observada en cada carril del Western blot, los cuerpos oleosos comprendían cGH remanente estrechamente asociado con el pescado durante la incubación de los cuerpos oleosos en agua. El pescado que se incubó durante 30, 45 ó 60 minutos en agua demostró contener aproximadamente las mismas cantidades de cGH que el pescado control que no se incubó en agua.

Este ejemplo demuestra que se puede preparar una variedad de planta transgénica que proporciona unas propiedades específicas deseables a una emulsión. El ejemplo también demuestra que se puede preparar una emulsión a partir de una preparación de un cuerpo oleoso lavado que se puede utilizar como un recubrimiento o una película. Finalmente, este ejemplo demuestra que la preparación del cuerpo oleoso lavado se puede utilizar para la formulación de una composición farmacéutica.

Aunque se han descrito varias formas de realización preferidas para ilustrar la presente invención, otras aplicaciones que también se encuentran comprendidas en el alcance de la invención resultarán evidentes para los expertos en la materia.

Claims

1. Procedimiento para la preparación de una formulación de una emulsión que comprende:

(1): obtener los cuerpos oleosos a partir de una célula;

(2): lavar los cuerpos oleosos para obtener una preparación de cuerpo oleoso lavado que comprende unos cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, conteniendo la preparación del cuerpo oleoso lavado menos del 10% de otras proteínas de semillas;

(4): tratar dicha formulación de una emulsión de tal manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseadas.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicha célula es una célula vegetal.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicha célula vegetal se obtiene a partir de esporas, polen, semillas o un órgano vegetativo vegetal.

4. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que los cuerpos oleosos se obtienen a partir de semillas vegetales.

5. Procedimiento para la preparación de una formulación de emulsiones que comprende:

(1): obtener cuerpos oleosos a partir de semillas vegetales mediante un procedimiento que comprende;

(a): moltura de las semillas vegetales;

(b): extracción de sólidos de las semillas molidas; y

(c): separación de la fase de cuerpo oleoso de la fase acuosa;

(2): lavar la fase de cuerpo oleoso para conseguir una preparación de un cuerpo oleoso lavado que comprende unos cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniformes, conteniendo la preparación del cuerpo oleoso lavado menos del 10% de otras proteínas de semillas;

(3): formular la preparación de un cuerpo oleoso lavado a una formulación de una emulsión; y

(4): tratar dicha formulación de la emulsión de tal manera que se evite la contaminación por bacterias, hongos, micoplasmas, virus y similares o reacciones químicas no deseadas.

6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que se añade la fase líquida antes o después de la etapa de moltura.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha formulación comprende la mezcla de los cuerpos oleosos lavados hasta que se forma una emulsión.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, en el que se añade la fase líquida a los cuerpos oleosos lavados y la fase líquida y los cuerpos oleosos lavados se mezclan hasta que se forma una emulsión.

9. Procedimiento según la reivindicación 6 u 8, en el que dicha fase líquida es agua.

10. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que dicha fase líquida está presente en la emulsión en una cantidad que varía entre el 1% al 99% v/v.

11. Procedimiento según la reivindicación 4 ó 5, en el que dicha planta es una planta con semilla oleosa.

12. Procedimiento según la reivindicación 4 ó 5, en el que dicha planta se selecciona de entre un grupo de plantas constituido por colza, (Brassica spp.), soja (Glycine max), girasol (Helianthus annuus), aceite de palma (Elaeis guineensis), semillas de algodón (Gossypium spp.), cacahuete (Arachis hypogaea), coco (Cocos nucifera), ricino (Ricinos communis), cártamo (Carthamus tinctorius), mostaza (Brassica spp. y Sinapis alba), cilantro (Coriandrum sativum), calabacín (Cucurbita maxima), linaza/lino (Linum usitatissimum), nuez de Brasil (Bertholletia excelsa), yoyoba (Simmondsia chinenis) y maíz (Zea mays).

13. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que dichos sólidos se extraen mediante centrifugación o filtración de dichas semillas molidas.

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14. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicha fase de cuerpo oleoso se separa de dicha fase acuosa mediante un procedimiento basado en la gravedad o un procedimiento basado en la exclusión por tamaño.

15. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que la preparación del cuerpo oleoso lavado se presenta esencialmente sin proteínas de semillas no oleosas, compuestos antinutricionales, almidón, glucosilnolatos o productos derivados del mismo, y fibras.

16. Procedimiento según la reivindicación 15, en el que dichas proteínas de semillas están glucosiladas.

17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en el que dicha formulación comprende la adición de un agente conservante.

18. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en el que dicha emulsión es un producto alimenticio o pienso, un producto de cuidado personal, un producto farmacéutico o un producto industrial.

19. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que la semilla está inmersa en una fase líquida antes de la moltura durante o desde 15 minutos a 2 días.

20. Emulsión que comprende una preparación de un cuerpo oleoso que comprende cuerpos oleosos intactos de tamaño, forma y densidad aproximadamente uniforme, en la que la preparación del cuerpo oleoso lavado contiene menos del 10% de proteínas de otras semillas y en la que dicha emulsión comprende asimismo un conservante.

21. Emulsión según la reivindicación 20, que comprende asimismo una fase líquida.

22. Emulsión según la reivindicación 21, en la que dicha fase líquida es agua.

23. Emulsión según la reivindicación 20, en la que los cuerpos oleosos se obtienen a partir de una planta.

24. Emulsión según la reivindicación 23, en la que los cuerpos oleosos se obtienen a partir de una planta seleccionada de entre el grupo constituido por colza, (Brassica spp.), soja (Glycine max), girasol (Helianthus annuus), aceite de palma (Elaeis guineensis), semillas de algodón (Gossypium spp.), cacahuete (Arachis hypogaea), coco (Cocos nucifera), ricino (Ricinos communis), cártamo (Carthamus tinctorius), mostaza (Brassica spp. y Sinapis alba), cilantro (Coriandrum sativum), calabacín (Cucurbita maxima), linaza/lino (Linum usitatissimum), nuez de Brasil (Bertholletia excelsa), yoyoba (Simmondsia chinenis) y maíz (Zea mays).

25. Emulsión según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 24, en la que dicha emulsión es un producto alimenticio o pienso, un producto de cuidado personal, un producto farmacéutico o un producto industrial.

26. Emulsión según la reivindicación 25, en la que dicho producto alimenticio o pienso se selecciona de entre un grupo constituido por un sustitutivo lácteo, un queso no lácteo, un yogurt no lácteo, una margarina, una mayonesa, una vinagreta, un glaseado, helados, un aderezo para ensaladas, una mostaza sintética, una golosina, una goma de mascar, un pudin, un producto horneado, un condimento, un zumo, una fórmula para bebés, un vehículo de sabor, un agente texturizante, comida para animales domésticos y alimentos para el ganado.

27. Emulsión según la reivindicación 25, en la que dicho producto alimenticio o pienso es una mayonesa, una mayonesa sin colesterol, una salsa bechamel, una vinagreta, mostaza o comida para peces.

28. Emulsión según la reivindicación 25, en la que dicho producto de cuidado personal se selecciona de entre el grupo constituido por un jabón, un producto cosmético, una crema para la piel, una crema facial, una pasta dentífrica, un pintalabios, un perfume, maquillaje, una base de maquillaje, colorete, una máscara, una sombra de ojos, una loción solar y un producto para el cuidado del cabello.

29. Emulsión según la reivindicación 25, en la que dicho producto farmacéutico se selecciona de entre el grupo constituido por un agente terapéutico, un agente de diagnóstico y un agente de liberación.

30. Emulsión según la reivindicación 29, en la que dicho agente terapéutico incluye una hormona de crecimiento.

31. Emulsión según la reivindicación 25, en la que dicho producto industrial se selecciona de entre el grupo constituido por una pintura, un recubrimiento, un lubricante, una película, un gel, un líquido para taladros, encolado de papel, látex, un material de construcción de edificios o carreteras, una tinta, un colorante, una cera, un abrillantador y una formulación de productos agroquímicos.

32. Utilización de una emulsión según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 31, para preparar un producto de cuidado personal, un producto alimenticio o pienso, un producto industrial o un producto farmacéutico.

33. Utilización de una emulsión según la reivindicación 32, en la que dicho producto alimenticio o pienso comprende un sustitutivo no lácteo, un queso no lácteo, un yogurt no lácteo, una margarina, una mayonesa, una vinagreta, un glaseado, helados, un aderezo para ensaladas, una mostaza sintética, una golosina, una goma de mascar, un pudín, un producto horneado, un condimento, un zumo, una fórmula para bebés, un vehículo de sabor, un agente texturizante, comida para animales domésticos y alimentos para el ganado.

34. Utilización de una emulsión según la reivindicación 32, en la que dicho producto alimenticio o pienso es una mayonesa, una mayonesa sin colesterol, una salsa bechamel, una vinagreta, mostaza o comida para peces.

35. Utilización de una emulsión según la reivindicación 32, en la que dicho producto de cuidado personal comprende un jabón, un producto cosmético, una crema para la piel, una crema facial, una pasta dentífrica, un pintalabios, un perfume, maquillaje, una base de maquillaje, colorete, una máscara, una sombra de ojos, una loción para el sol, o un producto para el cuidado del cabello.

36. Utilización de una emulsión según la reivindicación 32, en la que dicho producto industrial comprende, una pintura, un recubrimiento, un lubricante, una película, un gel, líquido para taladros, encolado de papel, un látex, un material de construcción de edificios o carreteras, una tinta, un colorante, una cera, un abrillantador o una formulación de productos agroquímicos.

37. Utilización de una emulsión según la reivindicación 32, en la que dicho producto farmacéutico es un agente terapéutico, un agente de diagnóstico o un agente de liberación.