ES2301908T3 - Gen de resistencia al paraquat. - Google Patents
Gen de resistencia al paraquat. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2301908T3 ES2301908T3 ES04021478T ES04021478T ES2301908T3 ES 2301908 T3 ES2301908 T3 ES 2301908T3 ES 04021478 T ES04021478 T ES 04021478T ES 04021478 T ES04021478 T ES 04021478T ES 2301908 T3 ES2301908 T3 ES 2301908T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- plant
- gene
- paraquat
- atmvr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 79
- FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L paraquat dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 65
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 41
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 46
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 101
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 43
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 31
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 19
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 17
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 9
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 9
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 4
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 4
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 4
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 3
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 241000219193 Brassicaceae Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 2
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 208000006278 hypochromic anemia Diseases 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 2
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 1
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100027265 Aldo-keto reductase family 1 member B1 Human genes 0.000 description 1
- 101000697844 Arabidopsis thaliana Thiosulfate sulfurtransferase 16, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 108060006004 Ascorbate peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 1
- 108010063907 Glutathione Reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100036442 Glutathione reductase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000756137 Hemerocallis Species 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012218 Kunkel's method Methods 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N flutolanil Chemical compound CC(C)OC1=CC=CC(NC(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(F)(F)F)=C1 PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- INFDPOAKFNIJBF-UHFFFAOYSA-N paraquat Chemical compound C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 INFDPOAKFNIJBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000026267 regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 244000045561 useful plants Species 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
- C12N15/8223—Vegetative tissue-specific promoters
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Un método para el cribado o detección de una planta transgénica, que comprende introducir un ácido nucleico que codifica una proteína del siguiente (a) ó (b) y un gen exógeno o un fragmento de ADN exógeno en una planta y cribado de una planta transgénica en base a la resistencia al paraquat como un indicador: (a) una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2 y (b) una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos que tiene una sustitución, cancelación o adición de 1 a 10 aminoácidos respecto a la secuencia de aminoácidos tal como se describe en (a) e imparte resistencia al paraquat.
Description
Gen de resistencia al paraquat.
La presente invención se refiere a un método
para el cribado o detección de una planta transgénica y también a
un método para impartir a una planta resistencia al paraquat.
Las plantas se encuentran expuestas
habitualmente a diversas tensiones ambientales que incluyen
temperaturas altas y bajas, sequía, elevada intensidad luminosa,
salinidad, gases contaminantes, microbios patógenos y similares.
Por lo tanto, si se pueden desarrollar plantas útiles que puedan
crecer suficientemente incluso en dichas condiciones ambientales,
por ejemplo, cultivos, la producción de alimentos será posible
incluso en regiones en las que los cultivos y cosechas no puedan
crecer habitualmente debido a las tensiones ambientales, y
aumentará la posibilidad de prepararse para una crisis alimenticia
grave que es previsible en el futuro. Como consecuencia de ello, la
producción de plantas que han adquirido resistencia a dichos tipos
de tensiones ambientales está en camino a nivel global. Por
ejemplo, se han fabricado plantas que poseían una resistencia al
frío (Nature 356, 710-703, 1992; Plant Physiol.,
105, 601-605, 1994), resistencia a la sequía (Plant
Physiol., 107, 125-130, 1995; Nature, 379,
683-684, 1996; Nature Biotech., 17,
287-291, 1999), resistencia a la sal (Science, 259,
508-510, 1993; Biotechnology, 14,
177-180, 1996; Plant J., 12,
133-142, 1997), resistencia a los contaminantes del
aire (Plant Cell Physiol., 34, 129-135, 1993;
Biotechnology, 12, 165-168, 1994), resistencia a las
enfermedades (Kagaku a Seibutsu (Chemistry and Organisms), 37,
295-305, 385-392, 1999) y similares
mediante técnicas de recombinación genética. Además, ya se emplean
algunas plantas a las que se las ha dotado de resistencia a los
productos químicos para la agricultura mediante técnicas de
recombinación genética (Nature, 317, 741-744, 1985;
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 391-395, 1988, EMBO
J.,6, 2513-2518, 1987; EMBO J.,7,
1241-1248, 1988).
Estas tensiones ambientales están íntimamente
relacionadas con la generación in vivo de especies de
oxígeno activo (radical superóxido (O_{2}), peróxido de hidrógeno
(H_{2}O_{2}), radical oxidrilo (OH^{-})). Las especies de
oxígeno activo son generadas por la respiración, la fotosíntesis,
las tensiones ambientales y similares, y crean daños fatales a las
células por una oxidación excesiva de las proteínas, ácidos
nucleicos, estructura de la membrana o similares. También se ha
informado que una planta resistente al oxígeno activo fabricada por
técnicas de recombinación genética mostraba una gran resistencia a
las tensiones ambientales anteriormente mencionadas (Plant
Physiol., 111, 1177-1181, 1996; FEBS Letters, 428,
47-51, 1998).
Para fabricar una planta resistente al oxígeno
activo, se emplea principalmente un método en el cual un gen de la
especie del oxígeno activo que barre enzimas (la superóxido
dismutasa, ascorbato peroxidasa, catalasa y glutationreductasa y
otras) se introduce en la planta.
El Paraquat es un potente herbicida no selectivo
que puede matar todas las plantas ya que genera oxígenos activos
de forma continuada en los fotosistemas. Por consiguiente, la
resistencia al Paraquat se puede utilizar como un indicador de la
resistencia a los oxígenos activos, y se ha llevado a cabo un
análisis respecto al mecanismo de la resistencia del paraquat en
plantas (Pestic. Biochem. Physiol., 26, 22-28,
1986: Theor. Appl. Genet. 75, 850-856, 1988; and
Plant Physiol.,91, 1174-1178, 1989).
Mientras tanto, un gen supresor de la apoptosis
(Publicaciones de Patentes JP (Kokai) No.10-309142;
No.2000-23583; y No.2002-300822),
un gen que codifica una proteína homóloga a la aldosa reductasa
(Publicación de Patentes JP (Kohyo) No.2001-523466)
y un gen que codifica una proteína unida al hierro (ferritina)
(Publicación de Patentes JP (Kohyo) No.2001-519671)
se han revelado como genes que pueden impartir resistencia al
paraquat. Además, en las publicaciones de patentes JP (Kokai)
no.2002-281979 y no.2001-95585, la
peroxidasa derivada del callo resistente al paraquat se revela como
un gen capaz de impartir resistencia al paraquat.
"Clon de Arabipdosis thaliana 122632
mRNA, secuencia completa". XP002309600 extraído o recuperado del
número de acceso de EBI EM_PRO:AY084949; Nr. de acceso de la base
datos AY084949 y "cromosoma 4 de ADN de Arabidopsis
thaliana, fragmento contiguo nr. 73" XP002309601 recuperado
del EBI nr. de acceso EM_PRO:
AL161577. El nr. de acceso de la base de datos AL161577 revela un gen que codifica la proteína que tiene la secuencia de aminoácido conforme a SEQ ID NO.2. Ambas secuencias de aminoácidos se derivan de la Arabipdosis thaliana.
AL161577. El nr. de acceso de la base de datos AL161577 revela un gen que codifica la proteína que tiene la secuencia de aminoácido conforme a SEQ ID NO.2. Ambas secuencias de aminoácidos se derivan de la Arabipdosis thaliana.
La publicación de la patente coreana nr.
10-2001-0009592 muestra un gen
resistente al paraquat así como su uso en un método de cribado de
una planta transformada.
Se había creído que si se podía aislar un gen de
resistencia al paraquat que pudiera impartir fuerte resistencia al
paraquat, sería útil en el desarrollo de plantas con elevada
resistencia a los oxígenos activos generados en varias clases de
condiciones ambientales de estrés (temperaturas altas y bajas,
sequía, elevada intensidad luminosa, salinidad, gases
contaminantes, microbios patógenos y similares). Sin embargo,
recientemente se ha revelado que los oxígenos activos cumplen un
papel importante como una molécula reguladora del crecimiento y de
la respuesta al estrés de una planta. Por lo tanto, para evitar
características que influyen mucho como el rendimiento del cultivo,
es importante aumentar la resistencia de una planta a las tensiones
como el paraquat sin afectar a su crecimiento y a los mecanismos
del control fisiológico de una planta que depende de los oxígenos
activos.
\vskip1.000000\baselineskip
Un objetivo de la presente invención consiste en
explicar los métodos definidos en las reivindicaciones 1 y 2.
\vskip1.000000\baselineskip
La Fig. 1 es una fotografía de la electroforesis
del cADN derivado de un gen transformante AtMVR.
La Fig. 2 es un diagrama esquemático que muestra
la posición de un gen transformante AtMVR y un no transformante en
las Figs. 2B y 2C. La Fig 2B es una fotografía que muestra el
crecimiento de un gen transformante AtMVR y un no transformante en
un medio de cultivo 1/2MS sin paraquat. La Fig. 2C es una
fotografía que muestra el crecimiento de un gen transformante AtMVR
y un no transformante en un medio de cultivo 1/2MS con
paraquat.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se describirá con detalle
a continuación.
El gen usado en los métodos conforme a la
presente invención es un gen que codifica la proteína de la (a) ó
(b) siguientes:
- (a)
- una proteína que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2 y
- (b)
- una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos que tiene una sustitución, anulación o adición de 1 a 10 aminoácidos con respecto a la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2 y que imparte resistencia al paraquat.
El gen que codifica la proteína descrita en el
anterior (a) es un gen (después, conocido como "gen de
AtMVR")que codifica una proteína que imparte resistencia al
paraquat que consiste en una secuencia de aminoácidos representada
por SEQ ID NO:2.
Los actuales inventores realizaban una búsqueda
de bases de datos que tuvieran la secuencia completa de nucleótidos
de la Arabipdosis thaliana (por ejemplo, GenBank, EMBL,
DDBJ, tair: La fuente de información de la Arabipdosis) basada en
la secuencia de nucleótidos del gen AtMVR y descubrieron que
existen 13 genes homólogos al gen AtMVR (AtMVR 3-1
a AtMVR 3-13) presente en el genoma de
Arabidopsis thaliana. La secuencia de nucleótidos de cada
uno de estos genes homólogos del AtMVR y la supuesta secuencia de
aminoácidos codificada por el gen homólogo relevante AtMVR son
representadas por los números de la SEQ ID indicados en la tabla 1
siguiente. La tabla 1 enumera además los resultados del análisis de
homología entre el gen de AtMVR y cada gen homólogo de AtMVR. El
análisis de homología se realizaba usando BLAST P a nivel de
aminoácidos. Los aminoácidos pueden clasificarse en base a las
propiedades químicas de sus cadenas laterales. En la matriz de
sustitución de aminoácidos BLOSUM62 (Proc. Natl. Acad. Sci., 89,
10915-10919, 1992), los aminoácidos se clasifican
en: un aminoácido con un grupo mercapto (C); los aminoácidos
hidrofílicos que tienen peso molecular bajo (S, T, P, A, G); los
aminoácidos acídicos (N, D, E, Q); los aminoácidos básicos (H, R,
K); los aminoácidos hidrofóbicos que tienen pesos moleculares bajos
(M, I, L, V); y los aminoácidos aromáticos (F, Y, W). En la tabla
1, el término "Identidades" se refiere a la correspondencia
del 100% en términos de aminoácidos y el término "Positivos"
se refiere al valor numérico cuando los aminoácidos que tienen una
puntuación positiva en la matriz de sustitución de aminoácidos
BLOSUM 62 se añaden a los que tienen una correspondencia del 100%
(ver Bioinformatics (en japonés), Eds. Okazaki Y.&Bono
H.(publicado por Medical Science Internacional).
Tal como se muestra en la tabla 1, la homología
de AtMVR con los 13 genes homólogos de AtMVR oscilaba entre el 22 y
el 57% para las identidades y entre el 41 y el 70% para los
positivos. Se considera que estos genes homólogos AtMVR imparten
resistencia al paraquat del mismo modo que el gen de AtMVR.
Adicionalmente, el gen de AtMVR tiene homología
a una proteína asociada a la senescencia, DSA 5 (número de acceso
al GenBank AF082030) (Plant Molecular Biology 40,
237-248, 1999). El resultado del análisis de
homología usando BLAST X indicaba que la proteína codificada por el
gen AtMVR tiene una identidad del 89% a nivel de aminoácido
respecto a la proteína codificada por DSA 5. Se informa que el DSA
5 es un gen que se expresa con el envejecimiento del pétalo de la
liliácea (cultivo híbrido de Hemerocallis)(Plant Molecular
Biology 40, 237-248, 1999). Sin embargo, puesto que
la proteína codificada por el DSA 5 no tiene homología con ninguna
proteína conocida, se desconoce que funciones tiene la proteína. De
acuerdo con ello, el gen de AtMVR es un gen nuevo que imparte
resistencia al paraquat.
Tal como se utiliza aquí, el término
"resistencia al paraquat" se refiere a tener resistencia al
paraquat. Más específicamente, el término "planta resistente al
paraquat" hace referencia a una planta que requiere una mayor
cantidad de paraquat que una planta no resistente, con el fin de
obtener un efecto determinado del paraquat. El paraquat es un
herbicida potente y no selectivo que mata todas las plantas
generando de forma continuada oxígenos activos en el sistema
fotoquímico. Es posible confirmar si el gen de AtMRV es un gen
resistente al paraquat que imparte resistencia al paraquat
examinando si un gen transformante al que se ha introducido un gen
puede crecer en presencia de paraquat.
El gen que codifica la proteína descrita en el
apartado (b) anterior es un gen que codifica una proteína formada
por una secuencia de aminoácidos que tiene una sustitución,
anulación o adición de 1 a 10 (ó 1 a 5) respecto a la secuencia de
aminoácidos representada por SEQ ID NO:2 y que imparte resistencia
al paraquat.
Una vez se ha determinado la secuencia de
nucleótidos del gen conforme a la presente invención, es posible
entonces obtener el gen conforme a la presente invención por
síntesis química, o por la reacción en cadena de la polimerasa (a
continuación, conocida como "RCP"), que emplea como plantilla
un clon que ha sido clonado, o bien realizando la hibridación que
emplea un fragmento de ADN que tiene la secuencia de nucleótidos
como una prueba. Además, es posible sintetizar un mutante del gen
de acuerdo con la presente invención que tenga funciones
equivalentes a las anteriores a la mutación por una técnica como la
mutagénesis dirigida al lugar.
Los ejemplos del método para introducir una
mutación en el gen conforme a la presente invención incluyen un
método conocido como el método Kunkel o el método duplex a
intervalos o un método de acuerdo con dichos métodos. Por ejemplo,
se puede realizar la introducción de una mutación usando un equipo
para introducir una mutación (por ejemplo, Mutant-K
(fabricado por TAKARA, Inc.) o Mutant-G (fabricado
por TAKARA, Inc.) utilizando la mutagénesis dirigida o usando el
equipo de la Mutagénesis in vitro con la PCR, fabricado por
TAKARA, Inc.
Una proteína que imparte resistencia al paraquat
conforme a la presente invención es la proteína codificada por el
gen conforme a la presente invención. Por ejemplo, el gen conforme
a la presente invenciones integrará en un vector derivado del
Escherichia coli o similares, y el E. coli es
transformado luego con el vector recombinante obtenido. A
continuación, la proteína conforme a la presente invención se podrá
obtener extrayendo la proteína sintetizada en la E.
coli.
Además, un vector recombinante conforme a la
presente invención es un vector recombinante que comprende el gen
conforme a la presente invención. El vector recombinante conforme a
la presente invención se puede obtener insertando el gen conforme a
la presente invención en un vector apropiado. Un vector usado para
insertar el gen conforme a la presente invención no se encuentra
especialmente limitado siempre que sea capaz de replicarse en un
huésped, y ejemplos de ello incluyen un plásmido, un vector
lanzadera, y un plásmido auxiliar. Además, cuando el vector
propiamente no es capaz de replicarse, se puede usar un fragmento
de ADN capaz de replicarse mediante un método como la inserción en
el cromosoma de un huésped.
Ejemplos de ADN plasmídico incluyen un plásmido
derivado de la E. coli (pB1221 y similares, por ejemplo, un
sistema pET como el pET30b, el sistema pBR como el pBR322 y el
pBR325, el sistema pUC como el pUC118, pUC119, pUC18 y pUC 19,
pBluescript, y pB1221), un derivado plasmídico del Bacillus
subtilis (por ejemplo, pUB 110 y pTP5), un plásmido derivado del
Agrobacterium tumefaciens (por ejemplo, el sistema pBI
derivado del pBIN19, pBI101 ó pBI121), un plásmido derivado de
levadura (por ejemplo, el sistema YEp como el YEp13 o el sistema
YCp como el YCp5O) o similares. Ejemplos de ADN fágicos incluyen el
bacteriófago \lambda (Charon 4A, Charon 21A, EMBL3, EMBL4,
\lambdagt10, \lambdagt11, \lambdaZAP y similares). Además,
también se puede utilizar un vector de un virus animal como el
retrovirus o el virus de la variolovacuna, un vector del virus de
una planta como el virus del mosaico de la coliflor, o un vector de
un virus de un insecto como un báculovirus.
Para insertar el gen conforme a la presente
invención en un vector, se puede usar un método en el cual el cADN
del gen conforme a la presente invención se parte inicialmente
usando un enzima de restricción apropiado y luego se inserta en un
lugar o punto del enzima de restricción o un lugar de multiclonaje
de un vector de ADN apropiado y se liga al vector. Además, se puede
usar un método en el cual una región homóloga se disponga
respectivamente en una parte de un vector y el cADN del gen
conforme a la presente invención, y el vector y el cADN se conecten
por un método in vitro usando la RCP o algo similar o bien
un método in vivo que use levadura o algo similar.
Un vector recombinante conforme a la presente
invención puede incluir también un gen exógeno o un fragmento de
ADN exógeno además del gen conforme a la presente invención. Un
método para insertar un gen exógeno o un fragmento de ADN exógeno
en un vector es el mismo que el método para insertar un fragmento de
ADN conforme a la presente invención en un vector. Cualquier gen o
fragmento de ADN puede ser utilizado como un gen exógeno o un
fragmento de ADN exógeno. Por consiguiente, el gen conforme a la
presente invención se puede utilizar como un gen marcador selectivo
para indicar la resistencia al paraquat, por ejemplo, como con un
gen de resistencia antibiótica para la canamicina o higromicina o
similares.
Un transformante según la presente invención es
un transformante que tiene el vector recombinante conforme a la
presente invención. El transformante conforme a la presente
invención se pueden obtener introduciendo el vector recombinante
conforme a la presente invención en un huésped. Un huésped no está
limitado mientras sea capaz de expresar el gen conforme a la
presente invención, sin embargo se prefiere una planta. Cuando el
huésped es una planta, es posible obtener una planta transgénica
del modo anteriormente descrito.
Una "planta" que se transforma en la
presente invención puede ser tanto: una planta entera, un órgano de
una planta (por ejemplo, hoja, pétalo, tallo, raíz o semilla),
tejido de planta (por ejemplo, epidermis, floema, parénquima o
xilema) o bien una célula de cultivo de planta. Los ejemplos de
plantas que se pueden usar en la transformación incluyen pero no se
limitan a una planta perteneciente a la familia Poaceae,
Brassicaceae, Solanaceae o leguminosas (ver a
continuación).
\vskip1.000000\baselineskip
El vector recombinante conforme a la presente
invención se puede introducir en una planta mediante un método de
transformación convencional como, por ejemplo, el método de
electroporación, método Agrobacterium, método de lanzamiento
de partículas o método PEG.
Por ejemplo, cuando se utiliza el método de
electroporación, el vector recombinante conforme a la presente
invención se introducen en un huésped realizando el tratamiento
que usa un aparato de electroporación equipado con un controlador
del pulso en unas condiciones de voltaje de 500 a 1600 V, a 25
hasta 1000 pF, durante 20 a 30 mseg.
Cuando se utiliza el método del lanzamiento de
partículas, toda la planta, un órgano de la planta o un tejido de
la misma se pueden usar sin ningún tratamiento. Se puede preparar
una sección y luego usarla o bien un protoplasto. La muestra
preparada se puede tratar usando un dispositivo para la
transferencia de genes (por ejemplo, PDS-1000/He
fabricado por Bio-Rad Inc.). Aunque las condiciones
de tratamiento pueden variar dependiendo de la planta o muestra
utilizada, el tratamiento se realiza normalmente a una presión de
aproximadamente 450 a 2000 psi y a una distancia de aproximadamente
3 a 12 cm.
Un método que usa el plásmido Ti o el plásmido
Ri de Agrobacterium tiene la ventaja de una característica
por la cual cuando una bacteria perteneciente al género
Agrobacterium infecta una planta, una parte del ADN
plasmídico que posee la bacteria es transferida al genoma de la
planta. Por consiguiente, este método se puede utilizar para
introducir el gen conforme a la presente invención en un huésped
de planta. Entre las bacterias que pertenecen al género
Agrobacterium, cuando el Agrobacterium tumefaciens
infecta una planta, provoca la formación de un tumor que se conoce
como "agalla de la corona". Además, cuando el Agrobacterium
rhizogenes infecta una planta, incita la generación de una raíz
capilar. Estas son causadas por una región que se conoce como
"región del T-ADN (ADN transferida)" de un
plásmido Ti ó plásmido Ri que es transferido a una planta en el
momento de la infección para ser integrado en el genoma de la
planta. De acuerdo con ello, el ADN que va a ser integrado en un
genoma de planta se inserta por primera vez en la región del
T-ADN de un plásmido Ti o plásmido Ri, y luego el
ADN puede ser integrado en el genoma de la planta infectando el
huésped de la planta con una bacteria del género
Agrobacterium.
Ejemplos del método para transformar una
bacteria del género Agrobacterium en un huésped de planta
incluyen el método de electroporación anteriormente descrito, el
método de lanzamiento y el método PEG, así como un método in
planta. Ejemplos del método in planta incluyen un método
de inoculación directa del Agrobacterium y un método de
infiltración.
El tejido tumoral o brote, la raíz capilar o
algo similar que se obtiene como resultado de la transformación se
puede utilizar sin tratamiento alguno para el cultivo celular, el
cultivo tisular o el cultivo de los órganos. Alternativamente, se
puede regenerar en un cuerpo de planta por la administración de una
hormona de planta (auxina, citoquinina, giberelina, ácido
abscísico, etileno, brasinolida o similares) de una concentración
apropiada usando un método de cultivo del tejido de la planta
convencional.
El gen conforme a la presente invención se puede
introducir también en una planta utilizando un virus de planta
como un vector. Ejemplos de virus de plantas que se pueden usar
incluyen el virus del mosaico de la coliflor. En primer lugar, se
inserta el genoma vírico en un vector derivado de la E. coli
o similar para producir un recombinante, y luego se introduce el
gen conforme a la presente invención en el genoma vírico. El genoma
vírico modificado de esta forma se separa posteriormente del
recombinante usando un enzima de restricción, y el gen conforme a
la presente invención se puede introducir luego en una planta
huésped por inoculación del genoma vírico en la planta huésped.
Además de la introducción en una planta huésped
tal como se ha descrito antes, el vector recombinante según la
presente invención también se puede introducir en bacterias que
pertenecen al género Escherichia como la E. coli, el
género Bacillus como el Bacillus subtilis, o el
género Pseudomonas como la Pseudomonas putida, así
como levaduras como las Saccharomyces cerevisiae y
Schizosaccharomyces pombe, células animales como la célula
COS o la célula CHO, y células de insectos como la Sf9. Cuando se
utiliza una bacteria como la E. coli o una levadura o algo
similar como un huésped, es preferible que el vector recombinante
conforme a la presente invención sea capaz de una replicación
autónoma en la bacteria y ello comprende un promotor, una secuencia
unida al ribosoma, una secuencia de terminación de la
transcripción y el gen conforme a la presente invención. Puede
implicar también un gen que regule el promotor.
El método para introducir el vector recombinante
conforme a la presente invención en una bacteria no se encuentra
limitado mientras que sea un método que pueda introducir ADN en una
bacteria, y por ejemplo, puede mencionarse un método que utilice
calcio o el método de electroporación.
El método para introducir el vector recombinante
conforme a la presente invención en la levadura no se encuentra
limitada mientras sea un método que pueda introducir ADN en la
levadura, y por ejemplo se pueden mencionar el método de
electroporación, el método de esferoplastos y el método del acetato
de litio.
Cuando se utiliza una célula animal como
huésped, se puede usar una célula de mono COS-7,
Vero, célula de ovario de hámster chino, células L de ratón o
similares. El método para introducir el vector recombinante
conforme a la presente invención en una célula de animal no está
especialmente limitado mientras se trate de un método que pueda
introducir ADN en una célula animal, y por ejemplo, se pueda
mencionar el método de electroporación, el método de fosfato de
calcio y el método de lipofección.
Cuando se utiliza una célula de insecto como un
huésped, se puede usar una célula de Sf9 o algo similar. El método
para introducir el vector recombinante conforme a la presente
invención en una célula de insecto no se encuentra limitado
mientras pueda introducir ADN en una célula de insecto, y por
ejemplo, se puedan mencionar el método del fosfato de calcio, el
método de lipofección y el método de electroporación.
Es posible conformar si el gen conforme a la
presente invención se ha integrado en un huésped mediante el uso
del método de RCP, el método de hibridación meridional, el método
de hibridación septentrional o similar. Por ejemplo, la RCP se
puede realizar después de preparar el ADN del transformante y
designando un cebador de ADN específico. A continuación, el
producto de amplificación se somete a la electroforesis en gel de
agarosa, a la electroforesis en gel de poliacrilamida o a la
electroforesis capilar o algo similar, y el producto de la misma se
colorea con bromuro de etidio, solución de verde SYBR o algo
similar. Luego, si se ha producido o no transformación se puede
confirmar mediante la detección del producto de amplificación como
una banda única. También es posible detectar el producto de
amplificación después de realizar la RCP usando un cebador que
previamente se habrá marcado con un colorante fluorescente o algo
similar. Además, se puede emplear un método en el cual el producto
de amplificación se una a una fase sólida de una microplaca o algo
similar para permitir la confirmación del producto de amplificación
por la reacción enzimática o de fluorescencia.
Un cuerpo de una planta conforme a la presente
invención es aquel que tiene un vector recombinante que comprende
el gen conforme a la presente invención y que tiene resistencia al
paraquat. Tal como se utiliza aquí, el término "cuerpo de la
planta" se refiere a una planta entera transformada con un
vector recombinante que comprende el gen conforme a la presente
invención. El cuerpo de la planta conforme a la presente invención
se puede obtener introduciendo el anterior vector recombinante en
una célula de planta o algo similar y regenerando un cuerpo de
planta transgénico de la célula de la planta transgénica obtenida.
Como método de regeneración se puede emplear un método en el cual
las células transformadas en forma de callo son transferidas a un
medio de cultivo en el cual el tipo y la concentración de hormonas
se han modificado y se han podido cultivar, y un embrión adventicio
se ha podido crear para obtener un cuerpo de planta completo.
Ejemplos del medio de cultivo que se utilizará incluyen un medio LS
y un medio MS. La introducción de un vector recombinante en una
célula de planta o similar se puede efectuar mediante un método
similar al método anteriormente descrito.
En el cuerpo de la planta conforme a la presente
invención, una proteína que imparte resistencia al paraquat que es
codificada por el gen conforme a la presente invención se
sobreexpresa por todo el cuerpo de la planta. Así el cuerpo de la
planta conforme a la presente invención puede tener resistencia al
paraquat.
Un método de cribado para las plantas
transgénicas conforme a la presente invención es un método en el
cual el vector recombinante conforme a la presente invención se
introduce en las plantas y la resistencia al paraquat se utiliza
como indicador para el cribado en plantas transgénicas. La
transformación se puede verificar empleando el gen conforme a la
presente invención como un marcador selectivo para indicar la
resistencia al paraquat. Ejemplos del método de cribado incluyen un
método en el cual las plantas transformadas por el vector
recombinante conforme a la presente invención crecen en un medio
que contiene paraquat y el cribado se realiza en base a las
variaciones en la vida y en la muerte así como en el crecimiento de
las plantas. La concentración de paraquat usada para el cribado
puede variar dependiendo de las especies y del tamaño de las
plantas. Sin embargo, si se utiliza, por ejemplo, Arabipdosis
thaliana como huésped, el paraquat puede estar presente en un
medio en una concentración de preferiblemente 0,1 a 3,0 \muM, más
preferiblemente 1,0 a 3,0 \muM, y más preferiblemente de 3,0
\muM. Una planta no transgénica, es decir, una planta tipo
salvaje, desarrolla clorosis y muere en un medio que contiene
paraquat. En contraste con ello, una planta transformada con el
vector recombinante conforme a la presente invención se mantiene
verde incluso en un medio que contiene paraquat. Por consiguiente,
es posible verificar una diferencia clara en el crecimiento en un
medio que contiene paraquat entre una planta no transgénica y una
planta transformada con el vector recombinante conforme a la
presente invención.
Cuando se emplea resistencia a antibióticos,
resistencia a herbicidas como un indicador, se pueden observar
falsos positivos a nivel de cribado por la existencia de una
diferencia en la sensibilidad en la planta. En contraste con ello,
el paraquat es un herbicida no selectivo y potente que puede matar
todas las plantas. Consecuentemente, en el método de cribado de
plantas transgénicas conforme a la presente invención, no se
observa una positividad falsa en la etapa de cribado. Además según
el método de cribado de plantas transgénicas conforme a la presente
invención, la resistencia se puede confirmar efectivamente en una
etapa prematura del crecimiento.
La presente invención se explicará con detalle a
continuación en lo que se refiere a los siguientes ejemplos. Sin
embargo, estos ejemplos no pretenden limitar el objetivo técnico de
la invención.
En este ejemplo, se utilizaban las líneas de
T-ADN de Weigel aquiridas en Nottingham Arabipdosis
Stock Center (http://nasc.nott.ac.uk) como líneas de
referencia de activación de la Arabipdosis thaliana.
\vskip1.000000\baselineskip
Semillas de líneas de T-ADN de
Weigel se inoculaban de forma estéril en un medio de cultivo de 1/2
MS agar (1%)(2,3 g/l de mezcla salina de Murashige and Shook Plant
(fabricada por Wako Pure Chemical Industries Ltd), 1,5 mg de
clorhidrato de tiamina, 2,5 mg de ácido nicotínico, 0,25 mg de
clorhidrato de piridoxina, 1,5% de sacarosa, 1% de agar) que
contienen 3 pM de paraquat (viológeno de metilo, fabricado por
Sigma Chemical Co.,) y se cultivaban a 22ºC bajo la irradiación
luminosa de 60 \muE/m^{2}/s (ciclo de un fotoperiodo de 16
h/periodo de oscuridad de 8 h). Aproximadamente 10 días después del
cultivo, se detectaban e identificaban los individuos que crecían
en el medio que contenía paraquat.
\vskip1.000000\baselineskip
Semillas de las líneas de T-ADN
de Weigel de las cuales los individuos originados se plantaban en
un crisol que contenía vermiculita (fabricada por Asahi Kagaku
Kogyo Co., Ltd) y se dejaban crecer durante aproximadamente un mes
a 23ºC bajo una intensidad luminosa de 100 \muE/m^{2}/s en unas
condiciones de 16 h de fotoperiodo/8 h de oscuridad.
El genoma de ADN se preparaba a partir de las
hojas de individuos cultivados usando el equipo DNeasy Plant Mini
(fabricado por Qiagen), y se diseñaban tres tipos de cebadores
específicos (TLI:SEQ ID NO:31; TL2:SEQ ID NO:32; TL3:SEQ IDE NO:33)
para una secuencia izquierda de T-ADN (borde
izquierdo de T-ADN:SEQ ID NO:30) de un vector
marcado de activación (pSK1015:GenBank acceso nr. AF187951) usado
con las líneas de T-ADN de Weigel. El
TAIL-PCR (Shokubutsu nr. PCRJikken Purotokoru
(Protocolos de Experimentos con la RCP para plantas), (Eds.
Shimamoto K.&Sasaki T.), New Edition, 2000, pp
83-89, Shujunsha CO., Ltd., Tokyo; Genomics, 25,
674-681, 1995; Plant J.,8, 457-463,
1995)se preparaba luego usando los cebadores específicos y
un cebador aleatorio 1 (SEQ ID NO:34) y la mezcla de reacción de
la RCP y las condiciones de reacción descritas a continuación para
amplificar el ADN del genoma próximo al T-ADN. En
la SEQ ID NO: 34, n representa a, g, c o t (lugar: 1 y 11), s
representa g ó c(lugar:7) y w representa a ó t (lugar: 8 y
13).
La composición de la mezcla de reacción y las
condiciones de la RCP para la primera vuelta RCP se enumeran en
las tablas 2 y 3.
\vskip1.000000\baselineskip
La composición de la mezcla de reacción y las
condiciones de la RCP para la segunda vuelta se enumeran en las
tablas 4 y 5.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La composición de la mezcla de reacción y las
condiciones de la RCP para la tercera vuelta se enumeran en las
tablas 6 y 7.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Seguidamente, tras someter los productos de
reacción de la segunda vuelta de RCP y de la tercera vuelta de RCP
a electroforesis en gel de agarosa, se verificaba la presencia o
ausencia de amplificación y la especificidad de los productos de
reacción.
Además, usando el cebador específico TL3 (SEQ ID
NO:33), el producto de amplificación de la tercera vuelta de la
RCP se secuenciaba directamente usando el equipo de ABI PRISM Dye
Terminador Cycle Sequencing (Applied Biosystems) y la secuencia de
nucleótidos se determinaba luego usando el analizador genético ABI
PRISM 310 (Applied Biosystems). Como resultado, se obtenía
información de la secuencia 278-bp (SEQ ID NO: 35).
En la SEQ ID NO: 35, n representa a, g, c ó t (lugar: 13, 35, 73,
108, 156, 190, 198 y 201). Se realizaba una búsqueda de la
secuencia obtenida con las bases de datos que tienen la secuencia
de nucleótidos completa de Arabipdosis thaliana, y se
averiguaba que el punto de inserción se localiza en 77240 bp del
clon BAC F17123.
\vskip1.000000\baselineskip
Se plantaban semillas de Arabipdosis thaliana
(Arabipdosis thaliana ecotipo Columbia (Col-0))
en un crisol que contiene vermiculita (Asahi Kagaku Kogyo Co.,Ltd)
y se dejaba que crecieran durante aproximadamente un mes a 23ºC
bajo una intensidad de luz de 100 \muE/m^{2}/s en unas
condiciones de un fotoperiodo de 16 horas y un periodo de oscuridad
de 8 horas.
Tras el crecimiento, las hojas de los individuos
se congelaban usando nitrógeno líquido. Posteriormente, todo el
ARN se extraía usando el equipo RNeasy Plant Mini (fabricado por
QIAGEN). Luego, el cADN se sintetizaba a partir de ARN total
extraído usando el equipo Prestar First Srand
RT-PCR (fabricado por STRATAGEN).
En base a la secuencia de un supuesto gen de
marco de lectura abierto presente en un 10 kb adyacente de un gen
estructural que tiene la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:35)
obtenida en el (2) anterior, se diseñaban un cebador 141
dF(SEQ ID NOR:36) y un cebador 141 dR(SEQ ID NO:37)
para el supuesto gen estructural, y la RCP se realizaba luego
usando estos cebadores y la siguiente mezcla de reacción (tabla 8)
que contiene Takara EX-Taq (fabricado por TAKARA
BIO Inc.) empleando el cADN anteriormente sintetizado como un
patrón.
Treinta ciclos de 94ºC(30
seg)/55ºC(30 seg)/72ºC(60 seg) se empleaban como
condiciones de la reacción.
El producto de amplificación se clonaba en el
vector pGEM-T Easy (fabricado por Promega) y la
secuencia de nucleótidos se determinaba luego usando el analizador
genético ABI PRISM 310 (Applied Biosystems). Como resultado de
ello, se obtenía un fragmento de cADN de 857 bp (SEQ ID NO:1). Este
fragmento de cADN se designaba gen AtMVR, y el vector
pGEM-T Easy que contiene AtMVR se conocía como
pAtMVR. La secuencia de aminoácidos codificada por el gen AtMVR se
muestra en SEQ ID NO: 2.
La búsqueda se realizaba con las bases de datos
que tienen la secuencia de nucleótidos íntegra de Arabipdosis
thaliana en base a la secuencia de nucleótidos del gen AtMVR y
se observaba que además de la secuencia de nucleótidos del gen
AtMVR existen 13 genes homólogos de AtMVR en el genoma de
Arabipdosis thaliana.
Los respectivos genes homólogos de AtMVR se
conocían como AtMVR3-1 a AtMVR-13.
La secuencia de nucleótidos de cada uno de los genes homólogos
AtMVR y la supuesta secuencia aminoácido codificada por el gen
homólogo relevante AtMVR se muestran en las SEQ ID enumeradas en la
tabla 9 siguiente. La tabla 9 también menciona los resultados del
análisis de homología entre el gen AtMVR y cada uno de los genes
homólogos AtMVR. El análisis de homología se realizaba utilizando
BLAST P a nivel aminoácido. El término "Identidades" se
refiere a una correspondencia del 100% en los términos de los
aminoácidos. Los aminoácidos se pueden clasificar en base a las
propiedades químicas de sus cadenas laterales. En la matriz de
sustitución del aminoácido BLOSUM62, los aminoácidos se clasifican
en: un aminoácido con un grupo mercapto ©; aminoácidos hidrofílicos
que tienen pesos moleculares bajos (S,T,P,A,G); aminoácidos
acídicos (N,D,E,Q); aminoácidos básicos (H,R,K);aminoácidos
hidrofóbicos que tienen pesos moleculares bajos (M,I,L,V); y
aminoácidos aromáticos (F,Y,W). En la tabla 9, el término
"identidades" se refiere a la correspondencia del 100% en
términos de aminoácidos y el término "Positivos" se refiere al
valor numérico cuando los aminoácidos que tienen una puntuación
positiva en la matriz de sustitución del aminoácido BLOSUM 62 se
añaden a los que tienen una correspondencia del 100%.
Tal como se muestra en la tabla 9, la homología
entre AtMVR y los 13 genes homólogos de AtMVR oscilaba entre el 22
y el 57% para las identidades y entre el 41 y el 70% para los
positivos.
Las técnicas de transformación aquí aplicadas
coincidían con un sistema de vectores descrito por Pellegrineschu
y cols.(Biochemical Society Transitions 23, 247-250,
1995) basado en el sistema de transporte de genes de
Agrobacterium mencionado por Hinchee y cols.(Plant Cell y
Tissue Culture, pp.231-270, Eds. I.K. Vasil, T.A
Thorpe, Kluwer Academic Publisher, 1994).
La secuencia del gen AtMVR se dividía a partir
del pAtMVR usando SacI/SacII y se subclonaba en pBlue/Script
(STRATAGENE). Posteriormente, un fragmento que contiene la
secuencia del gen AtMVR se escindía con XbaI/SacI y se introducía
en el lugar XbaI/SacI que está presente corriente abajo del
promotor CaMV 35S de pBI121 (fabricado por Clontech). El vector
resultante se usaba a continuación como un vector de expresión de
AtMVR para plantas.
El vector de expresión AtMVR para plantas
fabricadas en el apartado (1) se introducía en la cepa LBA4404 de
Agrobacterium tumefaciens por el método de electroporación
(Plant Molecular Biology Manual, Segunda Edición, B.G. Stanton,
A.S. Robbert, Kluwer Academia Publishers, 1994). Posteriormente, el
Agrobacterium tumefaciens que tiene el vector de expresión
AtMVR para la planta introducida en el mismo se introducía en una
Arabipdosis thaliana ecotipo Col-0 tipo
natural o de referencia, mediante un método de infiltración
descrito por Clough y cols. (The Plant Journal
16:735-743, 1998).
Los transformantes se detectaban en un medio que
con- tiene canamicina, y se fabricaba una planta de generación T3
(línea homocigótica que tiene 1 gen AtMVR introducido) por
autopolinización.
Seguidamente, se analizaba la cantidad de gen
AtMVR expresada introducida. Las semillas de transformante
producidas tal como se han descrito y una no transformante se
plantaban, respectivamente, en crisoles que contenían vermiculita
(Asahi Kagaku Kogyo Co., Ltd) y se dejaba que crecieran durante
aproximadamente un mes bajo una intensidad luminosa de 100
\muE/m^{2}/s a 23ºC con un fotoperiodo de 16 horas/un periodo
de oscuridad de 8 horas.
Tras el crecimiento, se extraía el ARN total del
transformante y de la Arabipdosis thaliana ecotipo
Col-0 no transformante tipo natural o de referencia
usando el equipo RNeasy Plant Mini (QIAGEN). Luego, 1 \mug de ARN
se sometía a una transcripción invertida usando el equipo ProSTAR
First Strand RT-PCR (STRATAGEN). La RCP se llevaba
a cabo luego usando la mezcla de reacción siguiente (tabla 10) que
contiene Takara EXTaq (TAKARA BIO) empleando 1/50 volúmenes del
cADN sintetizado como un patrón y usando cebadores para el gen
AtMVR (cebador 14ldl (SEQ ID NO: 38) y cebador 141d2 (SEQ ID NO:
39)).
Treinta ciclos de 94º0(30 seg)/55ºC (30
seg)/72ºC(60 seg) se empleaban como condiciones de la
reacción.
Los productos de amplificación se sometían a
electroforesis en gel de agarosa. La figura 1 muestra los
resultados de la electroforesis. Como se puede ver en la figura 1,
en comparación con el no transformante, el transformante producido
sobreexpresaba el gen AtMVR.
\vskip1.000000\baselineskip
Las semillas derivadas del gen transformante
AtMVR fabricado y del no transformante (Arabipdosis thaliana
ecotipo Col-0 tipo de referencia o natural) se
inoculaban de forma estéril en un medio de 1/2 MS agar (1%) (2,3
g/l de Murashige y Skoog Plant Salt Mixture (Wako Pure Chemical
Industries Ltd.), 1,5 mg/l de clorhidrato de tiamina, 2,5 mg/l de
ácido nicotínico, 0,25 mg/l de clorhidrato de piridoxina, 1,5% de
sacarosa) que contienen 3 \muM de paraquat (viológeno de metilo
(Sigma Chemical CO.)), y se cultivaban durante ocho días a 22ºC
bajo una irradiación luminosa de 60 \mumol/m^{2}/s (ciclo de
fotoperiodo de 16 horas/periodo de oscuridad de 8 horas). Tras el
cultivo, se evaluaba el crecimiento de los individuos germinados.
Los resultados se muestran en la figura 2, donde la figura 2B es
una fotografía que muestra el crecimiento de un gen transformante
de AtMVR y un no transformante en un medio de cultivo 1/2 MS sin
paraquat, y la figura 2C es una fotografía que muestra el
crecimiento de un gen transformante AtMVR y un no transformante en
un medio de cultivo 1/2MS con paraquat. La figura 2A es un diagrama
esquemático que muestra la posición del gen transformante AtMVR y
la del no transformante en las figuras 2B y 2C.
Como se puede ver en la figura 2B, los
resultados indicaban que en el medio de cultivo sin paraquat, el
gen transformante AtMVR exhibía el mismo crecimiento que el no
transformante. Entretanto, como se puede ver en la figura 2C, en un
medio que contiene paraquat el no transformante desarrollaba
clorosis y moría, es decir, el crecimiento se veía inhibido de
forma notable, mientras que en contraste con ello, la plántula del
gen transformante AtMVR era capaz de crecer. Por consiguiente, se
confirmaba que en un medio sin paraquat, el gen transformante AtMVR
exhibía el mismo crecimiento que un no transformante,
independientemente de la expresión del gen AtMVR, y también que en
un medio con paraquat, el gen transformante AtMVR tenía claramente
mayor resistencia al paraquat que el no transformante.
SEQ ID NOS: 31 a 39 son cebadores
En la SEQ ID NO: 34, n representa a, g, c ó t
(lugar: 1 y 11), s representa g ó c (lugar: 7), y w representa a ó
t (lugar: 8 y 13).
En la SEQ ID NO:35, n representa a, g, c, ó t
(lugar: 13, 35, 73, 108, 156, 190, 198 y 201).
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con la presente invención se aportan
los métodos definidos en las reivindicaciones 1 y 2,
respectivamente. Un gen de resistencia al paraquat en los métodos
conforme a la presente invención es capaz de impartir resistencia
que es específica al paraquat sin influir en la regulación del
crecimiento que es sometida al control por la generación de
oxígenos activos en diversos entornos.
<110> TOYOTA MOTOR CORPORATION
\hskip1cmOKAYAMA PREFECTURE
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> A PARAQUAT RESISTANCE GENE AND A
VASCULAR TISSUE-AND
TRICHOME-SPECIFIC PROMOTER
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> PH-2160
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140>
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> JP 2003-322051
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2003-09-12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 41
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2. 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 855
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 272
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 822
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 272
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 792
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 263
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 984
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 327
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 858
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 285
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 849
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 282
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210>14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 810
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 269
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 813
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 270
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 816
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 271
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 705
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 234
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 795
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 264
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 654
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 217
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 837
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 278
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 816
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 271
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcggcagcgg cggcaggata tatt
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptgctttcgcc tataaatacg acgg
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcgctgcggac atctacattt ttg
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> base modificada
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptcccggacat gaagccattt ac
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 34
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> base modificada
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1 y 11
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n representa g ó c
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> base modificada
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<223> s representa g ó c
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> base modificada
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 8 y 13
\vskip0.400000\baselineskip
<223> w representa a ó t
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 34
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipngtcgaswga nawgaa
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 278
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> base modificada
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 13, 35, 73, 108, 156, 190, 198 y
201
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n representa a, g, c ó t
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 36
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcttcttcaat catcaccatg
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 37
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 37
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptagcttgaac cggcgcaaat
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 38
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgtacgtttta gtaacagtct
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 39
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial : cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 39
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgattagcagt gactaactcc
\hfill20
Claims (2)
1. Un método para el cribado o detección de una
planta transgénica, que comprende introducir un ácido nucleico que
codifica una proteína del siguiente (a) ó (b) y un gen exógeno o un
fragmento de ADN exógeno en una planta y cribado de una planta
transgénica en base a la resistencia al paraquat como un
indicador:
- (a)
- una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2 y
- (b)
- una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos que tiene una sustitución, cancelación o adición de 1 a 10 aminoácidos respecto a la secuencia de aminoácidos tal como se describe en (a) e imparte resistencia al paraquat.
2. Un método para impartir resistencia al
paraquat a una planta, que comprende introducir un vector
recombinante que consta de un ácido nucleico que codifica una
proteína de (a) o (b) siguientes en una planta e imparte
resistencia al paraquat a la planta:
- (a)
- una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2 y
- (b)
- una proteína que consiste en una secuencia de aminoácidos que tiene una sustitución, cancelación o adición de 1 a 10 aminoácidos respecto a la secuencia de aminoácidos tal como se describe en (a) e imparte resistencia al paraquat.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003322051A JP4312012B2 (ja) | 2003-09-12 | 2003-09-12 | パラコート（登録商標）耐性遺伝子並びに維管束及びトライコーム特異的プロモーター |
| JP2003-322051 | 2003-09-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2301908T3 true ES2301908T3 (es) | 2008-07-01 |
Family
ID=34132069
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06001775T Expired - Lifetime ES2332464T3 (es) | 2003-09-12 | 2004-09-09 | Gen resistente al paraquat y promotor especifico de tejido vascular y trichomo. |
| ES04021478T Expired - Lifetime ES2301908T3 (es) | 2003-09-12 | 2004-09-09 | Gen de resistencia al paraquat. |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06001775T Expired - Lifetime ES2332464T3 (es) | 2003-09-12 | 2004-09-09 | Gen resistente al paraquat y promotor especifico de tejido vascular y trichomo. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7402732B2 (es) |
| EP (2) | EP1514941B1 (es) |
| JP (1) | JP4312012B2 (es) |
| CN (2) | CN100535117C (es) |
| DE (2) | DE602004022089D1 (es) |
| ES (2) | ES2332464T3 (es) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130117881A1 (en) | 2003-10-14 | 2013-05-09 | Ceres, Inc. | Promoter, promoter control elements, and combinations, and uses thereof |
| US7169915B2 (en) | 2003-10-14 | 2007-01-30 | Ceres, Inc. | Promoter, promoter control elements, and combinations, and uses thereof |
| US11634723B2 (en) | 2003-09-11 | 2023-04-25 | Ceres, Inc. | Promoter, promoter control elements, and combinations, and uses thereof |
| US11739340B2 (en) | 2003-09-23 | 2023-08-29 | Ceres, Inc. | Promoter, promoter control elements, and combinations, and uses thereof |
| EP1687438A4 (en) * | 2003-10-14 | 2008-05-28 | Ceres Inc | METHOD AND COMPOSITIONS FOR CHANGING SEED PHENOTYPES |
| US7429692B2 (en) | 2004-10-14 | 2008-09-30 | Ceres, Inc. | Sucrose synthase 3 promoter from rice and uses thereof |
| WO2009082208A2 (en) * | 2007-12-21 | 2009-07-02 | Keygene N.V. | Trichome specific promoters |
| US20110294794A1 (en) | 2008-11-13 | 2011-12-01 | Link Medicine Corporation | Treatment of proteinopathies using a farnesyl transferase inhibitor |
| US8153226B2 (en) | 2009-03-31 | 2012-04-10 | The Procter & Gamble Company | Capped tufted laminate web |
| WO2011050715A1 (zh) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | 北京未名凯拓作物设计中心有限公司 | 百草枯抗性基因及其应用 |
| WO2012047076A2 (ko) | 2010-10-08 | 2012-04-12 | 한국생명공학연구원 | 파라고무나무 유래의 라텍스 분비 조직 특이적 ｓｒｐｐ 프로모터 및 이의 용도 |
| CN102061308B (zh) * | 2010-10-29 | 2013-05-08 | 北京未名凯拓作物设计中心有限公司 | 一种用百草枯筛选转基因植物的方法 |
| US9867739B2 (en) | 2013-12-20 | 2018-01-16 | The Procter & Gamble Company | Absorbent article having a clefted topsheet |
| CN112830959B (zh) * | 2019-11-22 | 2022-07-15 | 中国科学技术大学 | 一种降解百草枯的蛋白及其编码基因与应用 |
| CN114561384B (zh) * | 2020-11-27 | 2023-05-05 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 植物维管特异性启动子pDAOFU及其应用 |
| CN116768991B (zh) * | 2022-03-10 | 2024-07-05 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 与油脂代谢调控相关的大豆四跨膜区蛋白GmTET270及其编码基因与应用 |
| CN114672489B (zh) * | 2022-05-10 | 2024-02-09 | 贵州省烟草科学研究院 | 烟草腺毛启动子pNtGGPPS2a及其应用 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5538878A (en) | 1988-08-08 | 1996-07-23 | Calgene, Inc. | Superoxide dismutase expression in plants |
| JPH0332358A (ja) | 1989-06-29 | 1991-02-12 | Ricoh Co Ltd | 高電圧供給装置 |
| GB9211416D0 (en) * | 1992-05-29 | 1992-07-15 | Ici Plc | Expression of genes in transgenic plants |
| JPH0814964B2 (ja) | 1993-02-15 | 1996-02-14 | 九州日立マクセル株式会社 | ディスククリーナ |
| JP3281124B2 (ja) | 1993-06-24 | 2002-05-13 | パロマ工業株式会社 | 濃淡燃焼バーナ |
| JP2000023583A (ja) | 1997-03-11 | 2000-01-25 | Natl Inst Of Agrobiological Resources | 細胞死抑制遺伝子が導入されたストレス抵抗性植物およびその作出方法 |
| JP2002300822A (ja) | 1997-03-11 | 2002-10-15 | National Institute Of Agrobiological Sciences | 細胞死抑制遺伝子が導入されたストレス抵抗性植物およびその作出方法 |
| JP3331367B2 (ja) | 1997-03-11 | 2002-10-07 | 独立行政法人農業生物資源研究所 | 細胞死抑制遺伝子が導入されたストレス抵抗性植物およびその作出方法 |
| HUP9700762A3 (en) * | 1997-04-16 | 2000-08-28 | Btg Int Ltd | Transgenic stressresistant plants overexpressing iron-binding ferritin protein |
| HUP9702118A3 (en) | 1997-11-18 | 2000-08-28 | Btg Int Ltd | Plants over producing aldose reductase homologous protein can tolerate water deficiency and resist oxidative stresses, and process for producing them |
| EP1033405A3 (en) * | 1999-02-25 | 2001-08-01 | Ceres Incorporated | Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby |
| KR100350825B1 (ko) * | 1999-07-12 | 2002-09-09 | 조진기 | 파라쿠아트 내성 유전자, 이 유전자를 함유한 플라스미드벡터및 이를 이용한 형질전환 식물체 선발방법 |
| GB9917642D0 (en) * | 1999-07-27 | 1999-09-29 | Zeneca Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| WO2001020008A2 (en) | 1999-09-16 | 2001-03-22 | Universiteit Leiden | Vascular-specific promoters |
| JP2001095585A (ja) | 1999-09-30 | 2001-04-10 | Toyota Motor Corp | パラコート耐性カルス由来のペルオキシダーゼ |
| JP2002281979A (ja) | 2001-03-28 | 2002-10-02 | Toyota Motor Corp | ストレス耐性植物 |
-
2003
- 2003-09-12 JP JP2003322051A patent/JP4312012B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-09-09 ES ES06001775T patent/ES2332464T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-09 DE DE602004022089T patent/DE602004022089D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-09 DE DE602004011712T patent/DE602004011712T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-09 ES ES04021478T patent/ES2301908T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-09 EP EP04021478A patent/EP1514941B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-09 EP EP06001775A patent/EP1715050B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-09-10 US US10/937,710 patent/US7402732B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-13 CN CNB2004100747001A patent/CN100535117C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-13 CN CNB2006101393183A patent/CN100535118C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-12-13 US US11/956,239 patent/US7993914B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1514941A2 (en) | 2005-03-16 |
| US20050091711A1 (en) | 2005-04-28 |
| US7402732B2 (en) | 2008-07-22 |
| EP1514941B1 (en) | 2008-02-13 |
| ES2332464T3 (es) | 2010-02-05 |
| CN1594571A (zh) | 2005-03-16 |
| EP1715050A1 (en) | 2006-10-25 |
| JP4312012B2 (ja) | 2009-08-12 |
| CN1970766A (zh) | 2007-05-30 |
| DE602004022089D1 (de) | 2009-08-27 |
| EP1715050B1 (en) | 2009-07-15 |
| EP1514941A3 (en) | 2005-05-04 |
| US7993914B2 (en) | 2011-08-09 |
| DE602004011712T2 (de) | 2009-01-29 |
| CN100535118C (zh) | 2009-09-02 |
| JP2005087033A (ja) | 2005-04-07 |
| DE602004011712D1 (de) | 2008-03-27 |
| CN100535117C (zh) | 2009-09-02 |
| US20090064375A1 (en) | 2009-03-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2301908T3 (es) | Gen de resistencia al paraquat. | |
| ES2729635T3 (es) | Modificación genómica usando sistemas de polinucleótido guía/endonucleasa Cas y métodos de uso | |
| ES2974086T3 (es) | Método para cambiar la movilidad intercelular de un ARNm | |
| ES2262514T3 (es) | Plantas resistentes a herbicidas. | |
| ES2562187T3 (es) | Plantas resistentes a enfermedades | |
| EP3425046B1 (en) | Herbicide tolerant protein, encoding gene and use thereof | |
| ES2886551T3 (es) | Plantas resistentes a Phytophthora pertenecientes a la familia Solanaceae | |
| ES2429360T3 (es) | Método de codificar información en ácidos nucleicos de un organismo tratado por ingeniería genética | |
| KR20180028532A (ko) | 식물에서 제초제 내성을 위한 방법 및 조성물 | |
| CN112639086A (zh) | 抗除草剂基因、多肽及其在植物育种中的应用 | |
| ES2693895A1 (es) | Vectores binarios y usos de los mismos | |
| CN104177481B (zh) | 植物倒伏和花器官发育调控蛋白ZmLA1及其编码基因与应用 | |
| JP7836895B2 (ja) | 変異ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼポリペプチド、ならびにそのコード遺伝子およびその使用 | |
| CN1451749A (zh) | 一种负调控植物程序性细胞死亡和促进转基因愈伤组织生长分化的水稻锌指蛋白基因 | |
| CN104152420A (zh) | 小麦TaFAD2蛋白及其编码基因和其在提高植物抗病性中的应用 | |
| JP2013085484A (ja) | 形質転換トウモロコシの製造方法、当該製造方法に使用できる発現ベクター、及び形質転換トウモロコシ | |
| Steele | The Transcriptional Regulation of Host Recognition and Prehaustorium Development in Triphysaria versicolor | |
| US20080047030A1 (en) | Plant Dwarfing Gene | |
| JP2006042768A (ja) | 発光バラ科植物 | |
| Khatun | Functional Characterization of Mitochondrial Small Heat Shock Protein Genes in Eggplant for Abiotic Stress Tolerance | |
| US20220186244A1 (en) | Rose rosette virus infectious clones and uses thereof | |
| US7060872B1 (en) | Method for producing plants having modified canopy size or seedless fruit | |
| TW202216994A (zh) | 編碼細胞色素p450之基因及其利用 | |
| WO2017066895A1 (es) | Regulación de captación de nitrato y uso de nitrogeno por genes btb | |
| JP2004180678A (ja) | 活性酸素ストレス応答性プロモーター |