ES2308523T3 - Inhibidores de quinasa. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula I: (Ver fórmula) en la que: R 1 es hidrógeno, alquilo C1-C4 o tolilo; W es 1-(4-metilsulfonilbenzoil)-piperidin-4-il-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-iloxi]naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)- piperidin-4-il]-(alcoxi C1-C2)-naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-fenil-, (1-Y-piperidin-4-iloxi)- fenil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperazin-4-il]-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4- il)-fenil- o 4-[1-(piridin-4-ilmetil)-piperazin-4-ilcarbonil]-fenil- en los que fenilo está opcionalmente sustituido con uno a dos sustituyentes del grupo constituido por halógeno, metilo y trifluorometilo; Y es -C(O)-R 2 , alquilsulfonilo C1-C3 o ciclopropilsulfonilo; y R 2 es alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6-(alquilo C1-C6), amino, benciloxi, indolilo, tetrahidrofurilo, piperidinilo, triclorometilo, ciclopentilmetilo, ciclocalquilo C3-C5 opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes independiente-mente seleccionados del grupo constituido por fenilo, alquilo C1-C4 y halógeno, piridinilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por alcoxilo C1-C4 y halógeno, tienilo opcionalmente sustituido con 1-2 halógenos o sustituyentes alquilo C1-C4, pirrolilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes alquilo C1-C4, imidazolilo, pirazolilo opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes alquilo C1-C4 o fenilo sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alcoxilo C1-C4, 2-(dimetilamino)etoxilo y morfolin-4-ilmetilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Description
Inhibidores de quinasa.
La quinasa p38 es una proteína quinasa activada
por mitógeno (MAP) que pertenece a la superfamilia de las
serina/treonina quinasas. Esta quinasa se activa mediante estreses
extracelulares tales como calor, luz UV y estrés osmótico, así como
mediante estímulos inflamatorios tales como lipopolisacárido. Cuando
está activada, la quinasa p38 fosforila sustratos de proteína
intracelulares que regulan la biosíntesis de las citocinas
proinflamatorias factor de necrosis tumoral \alpha
(TNF-\alpha) e
interleucina-1\beta (IL-1\beta).
Estas citocinas están implicadas en la patología de varios
trastornos inflamatorios crónicos (Lee, et al., Ann. N.Y.
Acad. Sci., 696, 149-170 (1993);
Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8,
210-220 (1996)), trastornos del sistema nervioso
central y cardiovasculares (Salituro, et al., Current
Medicinal Chemistry, 6, 807-823 (1999)), y
trastornos autoinmunitarios (Pargellis, et al., Nature
Structural Biology, 9(4), 268-272
(2002)).
Se han identificado varios compuestos de urea
(por ejemplo, los documentos WO 9923091, WO 01012188, WO 04004720,
WO 04037789, WO 99/32111, US 2004/0058961, WO 2004/100946, WO
03/072569, WO 00/55139, WO 2004/101529 y WO 0043384) como
inhibidores de quinasa p38 o inhibidores de citocinas. Sin embargo,
sigue existiendo una necesidad de tratamiento en este campo para
compuestos que son fármacos supresores de citocinas, es decir,
compuestos que pueden inhibir la quinasa p38.
La presente invención proporciona nuevos
inhibidores de la quinasa p38 útiles para el tratamiento de
afecciones que resultan de la producción excesiva de citocinas.
La presente invención proporciona compuestos de
fórmula I:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \quad
- R^{1} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} o tolilo;
- \quad
- W es 1-(4-metilsulfonilbenzoil)-piperidin-4-il-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-iloxi]naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-(alcoxi C_{1}-C_{2})-naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-fenil-, (1-Y-piperidin-4-iloxi)-fenil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperazin-4-il]-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-fenil- o 4-[1-(piridin-4-ilmetil)-piperazin-4-ilcarbonil]-fenil- en los que fenilo está opcionalmente sustituido con uno a dos sustituyentes del grupo constituido por halógeno, metilo y trifluorometilo;
- \quad
- Y es -C(O)-R^{2}, alquilsulfonilo C_{1}-C_{3} o ciclopropilsulfonilo; y
- \quad
- R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}-(alquilo C_{1}-C_{6}), amino, benciloxi, indolilo, tetrahidrofurilo, piperidinilo, triclorometilo, ciclopentilmetilo, ciclocalquilo C_{3}-C_{5} opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por fenilo, alquilo C_{1}-C_{4} y halógeno, piridinilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por alcoxilo C_{1}-C_{4} y halógeno, tienilo opcionalmente sustituido con 1-2 halógenos o sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, pirrolilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, imidazolilo, pirazolilo opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, o fenilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alcoxilo C_{1}-C_{4}, 4-metilpiperazin-1-ilmetilo, 2-(dimetilamino)etoxilo y morfolin-4-ilmetilo;
o una sal farmacéuticamente
aceptable de los
mismos.
La presente invención proporciona un compuesto
de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para
su uso como producto farmacéutico.
La presente invención proporciona además un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo para su uso en el tratamiento de afecciones que resultan de la
producción excesiva de citocinas. En una realización preferida de
la invención la citocina producida excesivamente es factor de
necrosis tumoral \alpha (TNF-\alpha). Como tal,
la presente invención también se refiere a un compuesto de fórmula I
o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la
supresión de la producción de factor de necrosis tumoral \alpha
(TNF-\alpha).
La presente invención también proporciona un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo para su uso en la inhibición del crecimiento de una neoplasia
susceptible.
La presente invención también proporciona un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo para su uso en la inhibición o la prevención de
metástasis.
La presente invención también proporciona una
formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un
excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Esta invención también proporciona el uso de un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de
afecciones que resultan de la producción excesiva de citocinas.
Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de fórmula I
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el
tratamiento de afecciones que resultan de la producción excesiva de
citocinas en mamíferos. Además, esta invención proporciona una
composición farmacéutica adaptada para el tratamiento de afecciones
que resultan de la producción excesiva de citocinas que comprende un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo en combinación con uno o más excipientes, vehículos o
diluyentes farmacéuticamente aceptables.
En una realización preferida de la invención, la
citocina producida excesivamente es el factor de necrosis tumoral
\alpha (TNF\alpha). Como tal, esta invención se refiere también
al uso de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para la
supresión de la producción de factor de necrosis tumoral \alpha
(TNF-\alpha). Adicionalmente, esta invención se
refiere a un compuesto de fórmula I o a una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo para su uso en la supresión de la producción de
factor de necrosis tumoral \alpha (TNF-\alpha)
en mamíferos. Además, esta invención se refiere a una composición
farmacéutica adaptada para la supresión de la producción de factor
de necrosis tumoral \alpha (TNF-\alpha) que
comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo en combinación con uno o más excipientes,
vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
Esta invención también proporciona el uso de un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo para la fabricación de un medicamento para la inhibición del
crecimiento de una neoplasia susceptible. Adicionalmente, esta
invención proporciona un compuesto de fórmula I o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la inhibición
del crecimiento de una neoplasia susceptible en mamíferos. Además,
esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada
para la inhibición del crecimiento de una neoplasia susceptible que
comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo en combinación con uno o más excipientes,
vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
Esta invención también proporciona el uso de un
compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo para la fabricación de un medicamento para la inhibición o la
prevención de metástasis. Adicionalmente, esta invención
proporciona un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo para su uso en la inhibición o la prevención de
metástasis en mamíferos. Además, esta invención proporciona una
composición farmacéutica adaptada para la inhibición o la prevención
de metástasis que comprende un compuesto de fórmula I o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con uno o más
excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente
aceptables.
Los términos químicos generales usados en las
fórmulas anteriores tienen sus significados habituales. Por
ejemplo, la expresión "alquilo C_{1}-C_{6}"
incluye alquilos de cadena lineal o ramificados, por ejemplo,
restos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
sec-butilo, terc-butilo, pentilo y
hexilo. La expresión "alquilo C_{1}-C_{4}"
está incluida en el significado de la expresión "alquilo
C_{1}-C_{6}" e incluye metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y
terc-butilo. La expresión "alcoxilo
C_{1}-C_{6}" incluye metoxilo, etoxilo,
propoxilo, butoxilo, pentoxilo y hexoxilo. La expresión "alcoxilo
C_{1}-C_{4}" incluye metoxilo, etoxilo,
propoxilo y butoxilo. La expresión "alcoxi
C_{1}-C_{6}-(alquilo
C_{1}-C_{6})" se refiere a un grupo alcoxilo
unido a través de un ligador de alquileno. La expresión
"alquilsulfonilo C_{1}-C_{3}" se refiere a
un grupo sulfonilo que está sustituido con un grupo metilo, etilo o
propilo grupo. La expresión "cicloalquilo
C_{3}-C_{5}" incluye restos ciclopropilo,
ciclobutilo y ciclopentilo. El término "halógeno" incluye
flúor, cloro, bromo y yodo.
La expresión "quinasa p-38"
se considera que significa las isoformas de quinasa
p-38\alpha y/o p-38\beta.
La expresión "supresión de la producción de
TNF-\alpha (IL-1\beta,
citocina)" se considera que significa la disminución de niveles
excesivos in vivo de TNF-\alpha,
IL-1\beta u otra citocina en un mamífero hasta
niveles normales o inferiores a los normales. Esto puede lograrse
mediante la inhibición de la liberación in vivo de
TNF-\alpha, IL-1\beta u otra
citocina por todas las células, incluyendo macrófagos, mediante
regulación por disminución, a nivel genómico, de los niveles
excesivos in vivo de TNF-\alpha,
IL-1\beta u otra citocina en un mamífero hasta
niveles normales o inferiores a los normales; mediante la inhibición
de la síntesis de TNF-\alpha,
IL-1\beta u otra citocina como un acontecimiento
postrasduccional; o mediante una regulación por disminución de
TNF-\alpha, IL-1\beta u otra
citocina a nivel traduccional.
El experto en la técnica apreciará que ciertos
compuestos de fórmula I contienen al menos un centro quiral. La
presente invención contempla todos los diastereómeros o enantiómeros
individuales, así como mezclas de los enantiómeros y diastereómeros
de dichos compuestos incluyendo racematos. Se prefiere que los
compuestos de fórmula I que contienen al menos un centro quiral
existan como enantiómeros o diastereómeros únicos. Los enantiómeros
o diastereómeros únicos pueden prepararse comenzando con reactivos
quirales o mediante técnicas sintéticas estereoespecíficas o
estereoselectivas. Como alternativa, los enantiómeros o
diastereómeros únicos pueden aislarse a partir de mezclas mediante
técnicas de cristalización o cromatográficas quirales
convencionales.
El lector experto entenderá que la mayoría o
todos los compuestos de la presente invención pueden de formar
sales. En todos los casos, las sales farmacéuticamente aceptables de
todos de los compuestos están incluidas en los nombres de los
mismos. Los compuestos de la presente invención son aminas y, por
consiguiente, reaccionan con cualquiera de varios ácidos
inorgánicos y orgánicos para formar sales de adición de ácido
farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente
aceptables preferidas son las formadas con ácido clorhídrico y ácido
metansul-
fónico.
fónico.
Aunque todos los compuestos de fórmula I son
inhibidores de la quinasa p-38 útiles, se prefieren
ciertas clases de compuestos. Los siguientes párrafos describen
tales clases preferidas:
- a)
- W es [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-fenil- o (1-Y-piperidin-4-iloxi)-fenil-
- b)
- Y es C(Q)-R^{2};
- c)
- R^{1} es metilo;
- d)
- R^{1} es tolilo;
- e)
- R^{2} es fenilo sustituido 1-2 veces con halógeno;
- f)
- R^{2} es terc-butilo;
- g)
- R^{2} es ciclopropilo;
Las realizaciones preferidas de la presente
invención incluyen todas las combinaciones de los párrafos a) -
g).
Los compuestos de fórmula I son inhibidores de
la quinasa p38. Por tanto, la presente invención también proporciona
un procedimiento de inhibición de la quinasa p38 en un mamífero que
comprende administrar a un mamífero que necesita dicho tratamiento
una cantidad inhibidora de la quinasa p38 de un compuesto de fórmula
I. Se prefiere que el mamífero va a tratarse mediante la
administración de los compuestos de fórmula I sea un ser humano.
Como inhibidores de la quinasa p38, los
compuestos de la presente invención son útiles para suprimir la
producción de las citocinas proinflamatorias factor de necrosis
tumoral \alpha (TNF-\alpha) e
interleucina-1\beta
(IL-1\beta), y por tanto para el tratamiento de
trastornos que resultan de la producción excesiva de citocinas. Se
cree por tanto que los presentes compuestos son útiles en el
tratamiento de trastornos inflamatorios, incluyendo eczema,
dermatitis atópica, artritis reumatoide, artrosis, enfermedad
inflamatoria del intestino y síndrome del choque tóxico. También se
cree que los compuestos de la presente invención son útiles en el
tratamiento de trastornos cardiovasculares, tales como infarto
agudo de miocardio, insuficiencia cardiaca crónica, aterosclerosis,
miocarditis viral, rechazo de aloinjerto cardiaco y disfunción
cardiaca asociada con septicemia. Además, también se cree que los
compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento
de trastornos de sistema nervioso central, tales como meningitis
meningocócica, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y
esclerosis múltiple.
La mayoría de los tumores sólidos aumentan en
masa a través de la proliferación de células malignas y células de
estroma, incluyendo células endoteliales. Para que un tumor crezca
más de 2-3 milímetros de diámetro, debe formar una
vasculatura, un proceso conocido como angiogénesis. Se ha notificado
la supresión de la angiogénesis inducida por tumor mediante
angiostatina y endostatina dando como resultado una actividad
antitumoral (O'Reilly, et al., Cell, 88,
277-285 (1997)). Se ha mostrado que el inhibidor
selectivo de la quinasa p38 SB22025 inhibe la angiogénesis (J.R.
Jackson, et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 284, 687
(1998)). Debido a que la angiogénesis es un componente crítico de
la expansión en masa de la mayoría de los tumores sólidos, el
desarrollo de nuevos inhibidores de la quinasa p38 para la
inhibición de este proceso representa un enfoque prometedor para la
terapia antitumoral. Este enfoque para la terapia antitumoral puede
carecer de los efectos secundarios tóxicos o las propiedades de
inducción de resistencia a fármacos de la quimioterapia convencional
(Judah Folkman, Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey
Lectures, Serie 92, páginas 65-82,
Wiley-Liss Inc., (1998)).
Como inhibidores de la quinasa p38, los
compuestos de la presente invención, por tanto, son también útiles
en la inhibición del crecimiento de neoplasias susceptibles.
Schultz, R. M. Potential of p38 MAP kinase inhibitors in the
treatment of cancer. In: E. Jucker (ed.), Progress in Drug Research,
60, 59-92, (2003). Se define una neoplasia
susceptible como que es una neoplasia que depende de la quinasa p38
para su supervivencia, crecimiento o metástasis. Las neoplasias
susceptibles incluyen tumores del cerebro, tracto genitourinario,
sistema linfático, estómago, laringe y pulmón (patente
estadounidense nº 5.717.100). Preferiblemente, la expresión
"neoplasias susceptibles" tal como se usa en la presente
solicitud incluye cánceres humanos incluyendo carcinoma de pulmón
de células no pequeñas (A. Greenberg, et al., Am. J. Respir.
Cell Mol. Biol., 26, 558 (2002)), carcinoma de mama (J. Chen, et
al., J. Biol. Chem., 276, 47901 (2001); B. Salh, et al.,
Int. J. Cancer, 98, 148 (2002); y S. Xiong, et al., Cancer
Res., 61, 1727 (2001)), carcinoma gástrico (Y.D. Jung, et
al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 43, 9 (2002)), carcinomas
colorrectales (S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727
(2001)), y melanoma maligno (C. Denkert, et al., Clin. Exp.
Metastasis, 19, 79 (2002)).
También se ha enseñado que la inhibición de la
angiogénesis mediante la supresión de TNF-\alpha
es útil en la inhibición o la prevención de metástasis (patente
estadounidense nº 6.414.150; patente estadounidense nº 6.335.336).
Además, se indica la supresión de TNF-\alpha para
el tratamiento y la prevención de caquexia, un síndrome consuntivo
experimentado por aproximadamente la mitad de todos los pacientes
con cáncer (T. Yoneda, et al., J. Clin. Invest., 87, 977
(1991)).
Además, la inhibición de la quinasa p38 puede
ser eficaz en el tratamiento de ciertas afecciones viral tales como
influenza (K. Kujime, et al., J. Immunology., 164,
3222-3228 (2000)), rinovirus (S. Griego, et
al., J. Immunology, 165, 5211-5220 (2000)), y
VIH (L. Shapiro, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95,
7422-7426, (1998)).
Los compuestos de la presente invención pueden
prepararse mediante una variedad de procedimientos, algunos de los
cuales se ilustran en los esquemas a continuación. Se reconocerá por
un experto en la técnica que pueden variarse las etapas
individuales en los siguientes esquemas para proporcionar los
compuestos de fórmula 1. El orden particular de las etapas
requeridas para producir los compuestos de fórmula I depende del
compuesto particular que se está sintetizando, el compuesto de
partida y la labilidad relativa de los restos sustituidos. Se han
eliminado algunos sustituyentes en los siguientes esquemas con el
fin de claridad y no tienen la intención de limitar la enseñanza de
los esquemas de ningún modo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Esquema
1
Pueden prepararse los compuestos de fórmula I
(i) tal como se ilustra en el siguiente esquema en el que R^{1}
es tal como se definió anteriormente.
Se hace reaccionar
p-fluoronitrobenceno (a) con una hidroxipiperidina
N-protegida (PG), un hidróxido alcalino y una sal
de tetraalquilamonio como catalizador de transferencia de fase en un
disolvente prótico polar, preferiblemente agua, para proporcionar
la piperidina sustituida con nitrofenilo correspondiente (b) (en la
técnica se conocen bien procedimientos para introducir y eliminar
grupos protectores de nitrógeno; véase, por ejemplo, Greene y Wuts,
Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª Ed., John Wiley and Sons,
Nueva York, Capítulo 7 (1999)). Se reduce el resto nitro con
hidrógeno o agentes reductores, por ejemplo, catálisis de paladio,
hidrógeno, en un disolvente adecuado tal como alcanoles inferiores
para proporcionar la amina correspondiente (c). Entonces se hace
reaccionar esta amina con un carbamato de
pirazolil-2,2,2-tricloroetilo
apropiado para proporcionar una urea sustituida con
piperidina-N-protegida (d). Tras la
desprotección, el procedimiento proporciona la piperidina
sustituida (e). Finalmente, la pieperidina sustituida (e) se hace
reaccionar con un ácido carboxílico sustituido en las condiciones
de acoplamiento convencionales para ácidos orgánicos y aminas
orgánicas en presencia de un agente de acoplamiento o de
deshidratación, tal como, un carbonildiimidazol; o con un cloruro de
sulfonilo o cloruro de ácido sustituido y un eliminador de base
para proporcionar la fórmula I (i). Además, puede alquilarse
piperidina (e) con por ejemplo, yoduro de metilo en presencia de un
eliminador de base [March, Advanced Organic Chemistry, 5ª Ed., John
Wiley and Sons, Nueva York (2001)] para proporcionar la fórmula I
(i). El experto en la técnica apreciará que los ejemplos de fórmula
I pueden prepararse 1) comenzando con otros isómeros de
fluoronitrobenceno; 2) comenzando con otros isómeros de piperidina
protegida, incluyendo grupos N-protectores
diferentes que pueden requerir otros procedimientos de desprotección
para formar el producto intermedio (e); y 3) haciendo reaccionar la
amina (c) con otros isocianatos o carbamatos reactivos.
Esquema
2
Pueden prepararse los compuestos de fórmula I
(ii) tal como se ilustra en el siguiente esquema en el que R^{1}
es tal como se definió anteriormente.
Se hace reaccionar
1,3-difluoronitrobenceno (k) con una
hidroxipiperidina N-protegida (PG), un hidróxido
alcalino y una sal de tetraalquilamonio como catalizador de
transferencia de fase en un disolvente prótico polar,
preferiblemente agua, para proporcionar la piperidina sustituida
con nitrofenilo correspondiente (1). El resto nitro se reduce con
hidrógeno o agentes reductores, por ejemplo, catálisis de paladio,
hidrógeno, en un disolvente adecuado tal como alcanoles inferiores
para proporcionar la amina correspondiente (m). Entonces se hace
reaccionar esta amina con un carbamato de
pirazolil-2,2,2-tricloroetilo
apropiado para proporcionar una urea sustituida con
piperidina-N-protegida (n). Tras la
desprotección, el procedimiento proporciona la pieperidina
sustituida (o). Finalmente, la pieperidina sustituida (o) se hace
reaccionar con un ácido carboxílico sustituido en las condiciones
de acoplamiento convencionales para ácidos orgánicos y aminas
orgánicas en presencia de un agente de acoplamiento o de
deshidratación, tal como, un carbonildiimidazol; o con un cloruro de
sulfonilo o cloruro de ácido sustituido y un eliminador de base
para proporcionar la fórmula I (ii). El experto en la técnica
apreciará que los ejemplos de fórmula I pueden prepararse 1)
comenzando con otros isómeros de fluoronitrobenceno de producto
intermedio (k); 2) comenzando con otros isómeros de piperidina
protegida; y 3) haciendo reaccionar la amina (m) con otros
isocianatos o carbamatos activos.
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Esquema
3
También pueden prepararse los compuestos de
fórmula I (i, ii y iii) tal como se ilustra en el siguiente esquema
en el que Z es tal como se definió anteriormente.
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Se hace reaccionar una hidroxipiperidina (q) con
un cloruro de sulfonilo, cloruro de ácido carboxílico sustituido
apropiadamente o grupo protector, por ejemplo,
benciloxiclorocarbonilo en un disolvente adecuado tal como cloruro
de metileno y base orgánica tal como trietilamina para proporcionar
la hidroxipiperidina N-sustituida correspondiente
(r). Se trata la pieperidina sustituida (r) con un
amino-fenol N-protegido o un
amino-naftol N-protegido en
condiciones de Mitsunobu [March, Advanced Organic Chemistry, 5ª Ed.,
John Wiley and Sons, Nueva York (2001)] para proporcionar el
feniléter correspondiente (s). Tras la desprotección selectiva del
fragmento de anilina, el procedimiento proporciona la amina (t).
Finalmente, la amina se hace reaccionar con un isocianato de
pirazolilo o ácido carbámico apropiado, éster
2,2,2-tricloroetílico para proporcionar la fórmula I
(i, ii, iii). El experto apreciará que los ejemplos de fórmula I
(i, ii y iii) pueden prepararse 1) comenzando con otros isómeros de
piperidina de producto intermedio (q); y 2) usando otros isómeros de
aminofenol(es) o aminonaftol(es) para formar fenil o
naftil éteres.
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Esquema
4
Pueden prepararse los compuestos de fórmula I
(iv) tal como se ilustra en el siguiente esquema en el que Y se
define tal como anteriormente.
Se hace reaccionar una
amino-piperidina N-protegida (u) con
un ácido carboxílico sustituido en las condiciones de acoplamiento
convencionales para ácidos orgánicos y aminas orgánicas en presencia
de un agente de acoplamiento o de deshidratación, tal como, un
carbonildiimidazol para dar la piperidina sustituida con nitrógeno
de anillo (v). Tras la desprotección, el procedimiento proporciona
la amina (w). Finalmente, se hace reaccionar la amina con un
isocianato de pirazolilo o ácido carbámico apropiado, éster
2,2,2-tricloroetílico para proporcionar I (iv). El
experto apreciará que los ejemplos de fórmula I pueden prepararse
comenzando con otros isómeros de piperidina de producto intermedio
(u).
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Esquema
5
Pueden prepararse los compuestos de fórmula I
(v, Z es CH_{2}, C=O) y fórmula I (vi) tal como se ilustra en el
siguiente esquema en el que R^{1} se define tal como
anteriormente.
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El producto intermedio (y), preparado a partir
de (g) y un éster etílico de ácido
isocianato-benzoico, se reduce en un disolvente
adecuado tal como THF con DIBAL dando el alcohol bencílico (z). Se
oxida el alcohol bencílico dando el aldehído (aa) con, por ejemplo,
MnO_{2} en cloruro de metileno. Se trata el carboxaldehído con
piperazina en condiciones reductoras, por ejemplo, con borohidruro
de sodio en cloruro de metileno dando la amina (bb), que se hace
reaccionar con un ácido carboxílico sustituido en las condiciones de
acoplamiento convencionales para ácidos orgánicos y aminas
orgánicas en presencia de un agente de acoplamiento o de
deshidratación, tal como, un carbonildiimidazol dando la fórmula I
(v, vi). El experto apreciará que los ejemplos de fórmula I pueden
prepararse 1) comenzando con otras ureas o isómeros de urea de
producto intermedio (y); 2) usando otras condiciones reductoras,
por ejemplo, hidrogenación catalítica, para formar (z); y 3) usando
otras condiciones oxidantes, por ejemplo, condiciones de Swern
cuando sean apropiadas para formar (aa).
Como alternativa, el fragmento de éster de
producto intermedio (y) puede saponificarse con hidróxido alcalino
en un alcanol inferior dando el ácido (cc), y el ácido se hace
reaccionar con una piperazina monosustituida en presencia de un
agente de acoplamiento o de deshidratación, tal como, un
carbonildiimidazol dando la fórmula I (v).
\newpage
Esquema
6
Pueden prepararse los compuestos de fórmula I
(v, Z es CH_{2,} Y'' es H) tal como se ilustra en el siguiente
esquema en el que R^{1} se define tal como anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se hace reaccionar bromuro de
p-nitrobencilo (a) con la piperazina
N-BOC protegida en carbonato de potasio en un
disolvente polar, preferiblemente acetonitrilo para proporcionar la
piperazina sustituida con nitrobencilo correspondiente (b). Se
reduce el resto nitro con cloruro de estaño en acetato de etilo para
proporcionar la amina correspondiente (c). Entonces se hace
reaccionar esta amina con un carbamato de
pirazolil-2,2,2-tricloroetilo
apropiado para proporcionar una urea sustituida con
N-BOC-piperazina (d). Tras la
desprotección, el procedimiento proporciona la piperazina
sustituida (e). Finalmente, la piperazina sustituida (e) se hace
reaccionar con un ácido carboxílico sustituido en las condiciones
de acoplamiento convencionales para ácidos orgánicos y aminas
orgánicas en presencia de un agente de acoplamiento o de
deshidratación, tal como carbonildiimidazol; o con un cloruro de
ácido sustituido en presencia de un eliminador de base dando la
fórmula I (v). Además, puede acilarse la piperazina (e) con, por
ejemplo, anhídrido acético en presencia de una base para
proporcionar la fórmula I (v).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
7
Pueden prepararse los compuestos de fórmula I
(v, Z es un enlace) tal como se ilustra en el siguiente esquema en
el que R^{1} se define tal como anteriormente.
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\vskip1.000000\baselineskip
Se protege
4-nitrofenilpiperazina como un derivado de
N-BOC seguido por reducción del grupo nitro en
condiciones de hidrogenación, normalmente catalizada por Pd sobre
carbono. Entonces se hace reaccionar esta amina con un carbamato de
pirazolil-2,2,2-tricloroetilo
apropiado para proporcionar una urea sustituida con piperazina
N-protegida. Tras la desprotección, el procedimiento
proporciona la piperazina sustituida. Finalmente, la pieperidina
sustituida se hace reaccionar con un ácido carboxílico sustituido en
las condiciones de acoplamiento convencionales para ácidos
orgánicos y aminas orgánicas en presencia de un agente de
acoplamiento o de deshidratación, tal como, un carbonildiimidazol;
o con un cloruro de sulfonilo o cloruro de ácido sustituido y un
eliminador de base para proporcionar los compuestos finales
\newpage
El experto en la técnica también apreciará que
no todos los sustituyentes en los compuestos de fórmula I tolerarán
ciertas condiciones de reacción empleadas para sintetizar los
compuestos. Pueden introducirse estos restos en un punto
conveniente en la síntesis, o puede protegerse y luego desprotegerse
si se necesita o se desea. El experto apreciará que los grupos
protectores pueden eliminarse en cualquier punto conveniente en la
síntesis de los compuestos de la presente invención. Los
procedimientos para introducir y eliminar grupos protectores de
oxígeno y nitrógeno se conocen bien en la técnica; véase, por
ejemplo, Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª
Ed., John Wiley and Sons, Nueva York, capítulo 7 (1999). Además, el
experto apreciará que en muchas circunstancias, el orden en el que
se introducen los restos no es crítico. El orden particular de las
etapas requeridas para producir los compuestos de fórmula I depende
del compuesto particular que es está sintetizando, el compuesto de
partida y la labilidad relativa de los restos sustituidos.
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Las abreviaturas, los símbolos y los términos
usados en los ejemplos y ensayos tienen los siguientes
significados.
AcOH = ácido acético
DCC = diciclohexilcarbodiimida
DEAD = azodicarboxilato de dietilo
DIBAL = hidruro de diisobutilaluminio
DIEA =
N,N-di-isopropiletilamina
DMSO = dimetilsulfóxido
DMF = N,N-dimetilformamida
h = hora(s)
HCl = ácido clorhídrico
HOB(t) =
1-hidroxibenzotriazol
MnO_{2} = dióxido de manganeso
min. = minuto(s)
NaCl = cloruro de sodio
NaBH(OAc)_{3} =
triacetoxiborohidruro de sodio
NaOH = hidróxido de sodio
PS-DCC = carbodiimida unida a
una fase sólida
THF = tetrahidrofurano
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Preparación
1
Se disuelve el éster
terc-butílico del ácido
4-hidroxi-1-piperidin-1-carboxílico
(6,04 g, 30 mmoles) en
1-fluoro-4-nitrobenceno
(7,83 g, 55,5 mmoles). Luego se añade una disolución acuosa de
hidróxido de potasio (25% en peso, 44 ml), seguido por la adición
de bromuro de tetrabutilamonio (1,26 g). Se agita la mezcla de
reacción a 35ºC durante 17 horas. Se recoge el sólido amarillo
mediante filtración, se lava con agua (4 x 50 ml). Se obtiene un
polvo amarillo (9,43 g, 97,5% de rendimiento).
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Preparación
2
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Se agita enérgicamente una mezcla de éster
terc-butílico del ácido
4-(4-nitro-fenoxi)-piperidin-1-carboxílico
(3,15 g, 9,77 mmoles) y el 10% en peso de paladio sobre carbono
(1,01 g) en etanol-metanol anhidro (1:1, 100 ml)
bajo gas hidrógeno a 22ºC durante 2 horas. Entonces se elimina el
paladio sobre carbono mediante filtración. Se concentra el filtrado
dando un sólido blanco (2,35 g, 82,3% de rendimiento).
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Preparación
3
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A una disolución enfriada con hielo de
5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-ilamina
(0,50 g, 3,26 mmoles) y piridina (0,27 ml, 3,29 mmoles) en THF
(THF, 10 ml) se le añade cloroformiato de
2,2,2-tricloroetilo (0,44 ml, 3,29 mmoles). Se
agita la mezcla de reacción a 0ºC durante 30 min. y entonces se
calienta hasta temperatura ambiente durante 2 horas. Entonces se
distribuye la mezcla de reacción entre acetato de etilo (100 ml) y
agua (100 ml). Se extrae la fase acuosa con acetato de etilo (50
ml). Se lavan las fases orgánicas combinadas con NaCl saturado (2 x
50 ml) y se seca sobre sulfato de magnesio anhidro. Tras eliminar el
disolvente, se purifica el residuo con una cromatografía en gel de
sílice lavando con acetato de etilo proporcionando un sólido blanco
(0,83 g, 78%, ES+(m/z) 329,9 [M+H]).
Preparación
4
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Se suspende
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-{4-[1-(terc-butoxi)carbonil-piperidin-4-iloxi]fenil}urea
(ejemplo 1, a continuación, 2,25 g, 4,77 mmoles) en una disolución de ácido trifluoroacético en diclorometano (25% v/v, 100 ml). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 15 min. Tras eliminar el disolvente, se neutraliza el residuo aceitoso con disolución de hidróxido de sodio hasta pH 12 y se extrae con diclorometano (6 x 50 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio anhidro y se concentran dando un sólido amarillo (2,28 g, ES+(m/z) 372,1 [M+H]).
(ejemplo 1, a continuación, 2,25 g, 4,77 mmoles) en una disolución de ácido trifluoroacético en diclorometano (25% v/v, 100 ml). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 15 min. Tras eliminar el disolvente, se neutraliza el residuo aceitoso con disolución de hidróxido de sodio hasta pH 12 y se extrae con diclorometano (6 x 50 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio anhidro y se concentran dando un sólido amarillo (2,28 g, ES+(m/z) 372,1 [M+H]).
\newpage
Preparación
5
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A una disolución enfriada con hielo de
4-hidroxipiperidina (2,04 g, 20,2 mmoles) y
trietilamina (3,2 ml, 23,0 mmoles) en diclorometano (25 ml) se le
añade cloruro de 2,6-diclorobenzoílo (2,9 ml, 20,2
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 0ºC durante 2 horas y
entonces se lava con disolución acuosa de ácido clorhídrico 1 N (50
ml), agua (50 ml) y una disolución acuosa saturada de bicarbonato de
sodio (50 ml). Se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio
anhidro y se concentra dando un sólido blanco (5,01 g, 90,5% de
rendimiento, ES+(m/z) 276,1 [M+H]).
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Preparación
6
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A una disolución de 4-aminofenol
(10,97 g, 100,5 mmoles) y trietilamina (30 ml) en metanol (200 ml)
se le añade dicarbonato de
di-terc-butilo (24,07 g, 110,3
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 14 horas.
Tras eliminar el disolvente, se distribuye el residuo entre acetato
de etilo (250 ml) y disolución acuosa de ácido clorhídrico 0,25
N(100 ml). Se aísla la fase orgánica, se lava con una
disolución saturada acuosa de cloruro de amonio (3 x 50 ml), y se
seca sobre sulfato de sodio anhidro. La eliminación de disolvente
proporciona un sólido blanco (20,91 g,100% de rendimiento,
ES-(m/z) 208,1 [M-H]).
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Preparación
7
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A una disolución enfriada con hielo de éster
terc-butílico del ácido
(4-hidroxi-fenil)-carbámico
(422,8 mg, 2,02 mmoles),
(2,6-diclorobenzoil)-(4-hidroxi-piperidin-1-il)-metanona
(552,8 mg, 2,01 mmoles) y trifenilfosfina (1,09 g, 4,16 mmoles) en
THF (20 ml) se le añade azodicarboxilato de dietilo (1,0 ml, 2,20
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 17 horas.
Tras eliminar el disolvente, se purifica el residuo con una
cromatografía en gel de sílice con acetato de
etilo-hexanos proporcionando un sólido blanco (606,2
mg, 64,8% de rendimiento, ES+(m/z) 465,1 [M+H]).
\newpage
Preparación
8
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Se suspende el sólido blanco anterior, éster
terc-butílico del ácido
{4-[1-(2,6-dicloro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-fenil}-carbámico
en una disolución de ácido trifluoroacético en diclorometano (25%
v/v, 20 ml). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 15 min.
Tras eliminar el disolvente, se neutraliza el residuo aceitoso con
disolución acuosa de hidróxido de sodio 0,5 N (50 ml) y se extrae
con diclorometano (5 x 50 ml). Se secan las fases orgánicas
combinadas sobre sulfato de sodio anhidro y se concentran dando un
sólido amarillo (440,2 mg, 92,0% de rendimiento,
ES+(m/z) 365,1 [M+H]).
Se preparan las siguientes preparaciones con
procedimientos análogos a los procedimientos de las preparaciones
5-8:
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\newpage
Preparación
16
Se prepara el producto intermedio usando la
preparación 5-8 partiendo de cloruro de
2-clorobenzoílo en la prep. 5 y
5-amino-cresol en la prep. 6.
(ES+(m/z) 345,2 [M+H]).
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Preparación
17
A una disolución enfriada con agua con hielo de
2-dimetilamino-etanol (305,0 mg, 3,0
mmoles), éster metílico del ácido
4-hidroxi-benzoico (456,3 mg, 3,0
mmoles) y trifenilfosfina (1,59 g, 6,0 mmoles) en THF (4 ml) se le
añade gota a gota DEAD (disolución al 40% en tolueno, 2,75 ml, 6,0
mmoles). Tras agitar a 22ºC durante la noche, se pasa la mezcla de
reacción a través de una columna SGX, se lava con metanol, y se
eluye con amoniaco 2 M en metanol. La eliminación del disolvente da
un producto bruto, que se usa en la etapa siguiente sin
purificación.
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Preparación
18
A una disolución de éster metílico del ácido
4-[2-(dimetilamino)-etoxi]-benzoico
(3 mmoles) en metanol (10 ml) se le añade una disolución de
hidróxido de litio(2 M, 20 ml). Se agita la mezcla de
reacción a 22ºC durante 15 min. Tras eliminar el disolvente, el
residuo se disuelve de nuevo en metanol, se pasa a través de una
columna SCX, se lava con metanol, y se eluye con amoniaco 2 M en
metanol. Tras evaporarse el disolvente, se obtiene un sólido blanco
(500 mg, 80% de rendimiento, ES-(m/z) 208,2
[M-H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
19
A una disolución enfriada con hielo de
1,1-(azodicarbonil)dipiperidina (18,08 g, 71,7 mmoles) en THF
anhidro (200 ml) se le añade mediante jeringuilla tributilfosfina
(17,69 ml, 79,7 mmoles) y se deja agitar durante 2,5 horas. A esta
mezcla enfriada con hielo se le añade una disolución de éster
terc-butílico del ácido
(3-hidroxi-fenil)-carbámico
(10,0 g, 47,8 mmoles) y éster bencílico del ácido
4-hidroxi-piperidin-1-carboxílico
(7,23 ml, 47,8 mmoles) en THF anhidro (30 ml) provocando la
formación de un precipitado amarillo claro. Se calienta la mezcla
hasta temperatura ambiente y se agita durante la noche. Se filtra
la mezcla a través de un embudo filtrante con placa porosa y se
lava el sólido con THF (3 x 15 ml). Tras eliminar el disolvente, se
purifica el residuo con una cromatografía en gel de sílice con
acetato de etilo-hexanos proporcionando un aceite
claro (11,8 g, 57,9% de rendimiento, ES+(m/z) 427,2
[M+H]).
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Preparación
20
Se disuelve éster bencílico del ácido
4-(3-terc-butoxicarbonilamino-fenoxi)-piperidin-1-carboxílico
(11,8 g, 27,6 mmoles) en una disolución de ácido trifluoroacético
en diclorometano (25% v/v, 20 ml). Se agita la mezcla de reacción a
22ºC durante 60 min. Tras eliminar el disolvente, se disuelve el
residuo aceitoso en diclorometano (250 ml) y se neutraliza con
disolución acuosa de hidróxido de sodio 0,2 N (250 ml) y se extrae
con diclorometano (10 x 100 ml) seguido por acetato de etilo (5 x
100 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de
sodio anhidro. Tras eliminar el disolvente, se purifica el producto
bruto con cromatografía en gel de sílice con
diclorometano-metanol dando un aceite marrón claro
(4,84 g, 54%, ES+(m/z) 327,3 [M+H]).
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Preparación
21
Se agita una mezcla de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-{3-[1-(benciloxi)-carbonil-piperidin-4-iloxi]fenil}urea.
(Ejemplo 54, más adelante, 6,62 g, 13,1 mmoles) y paladio al 10%
sobre carbono (1 g) en etanol (200 ml) a 22ºC bajo gas hidrógeno
durante 2,5 horas. Se elimina el catalizador mediante filtración. Se
concentra el filtrado dando aceite marrón, que se solidifica en
reposo a 22ºC a lo largo del fin de semana. Se purifica el residuo
con una cromatografía en gel de sílice eluyendo con metanol y
diclorometano. Se obtiene un sólido color de melocotón (3,51 g, 72%
de rendimiento, ES+(m/z) 372,3 [M+H]).
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Preparación
22
A una disolución de
3-metil-5-trifluorometil-nitrobenceno
(3,80 g, 17,2 mmoles) en diclorometano (10 ml) a -78ºC se le añade
una disolución de tribromuro de boro (1 M en DCM, 100 ml, 100
mmoles). Se deja calentar la mezcla de reacción hasta 22ºC y se
agita durante la noche. A continuación, se extingue la reacción con
una disolución saturada de bicarbonato de sodio y se extrae con
acetato de etilo (4 x 100 ml). Se secan las fases orgánicas
combinadas sobre sulfato de sodio y se concentran. Se purifica el
residuo sobre gel de sílice con hexanos-acetato de
etilo dando un sólido amarillo (2,6 g, 73% de rendimiento).
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Preparación
23
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\vskip1.000000\baselineskip
Se sintetiza el producto intermedio usando el
procedimiento de preparación 7 y 2, ejemplo 1, y preparación 4 a
partir del producto intermedio 22. (ES+(m/z) 440,2
[M+H]).
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Preparación
24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión enfriada con hielo de
4-N-BOC-amino-piperidina
(400,8 mg, 2,0 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol
(HOBt, 342,3 mg, 2,53 mmoles), y ácido
p-(metilsulfonil)-benzoico (445,9 mg, 2,23
mmoles) en diclorometano (6 ml) se le añade
1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC, 496,7 mg, 2,40
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 23 horas. Se
purifica el producto bruto con una cromatografía en gel de sílice
con acetato de etilo-hexanos proporcionando un
sólido blanco (692,9 mg, 90,6% de rendimiento,
ES+(m/z) 383,1 [M+H]).
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Preparación
25
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\vskip1.000000\baselineskip
Se suspende el sólido blanco anterior en una
disolución de ácido trifluoroacético en diclorometano (25% v/v, 20
ml). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC durante 15 min. Tras
eliminar el disolvente, se neutraliza el residuo aceitoso con
disolución acuosa de hidróxido de sodio 0,5 Ny se extrae con
diclorometano (5 x 50 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas
sobre sulfato de sodio anhidro y se concentran dando un sólido
blanco (308,1 g, 60,2% de rendimiento, ES+(m/z) 283,2
[M+H]).
\newpage
Preparación
26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada con hielo de
clorhidrato de
4-(3-aminofenil)-piperidina (250,2
mg, 1,0 mmoles) y trietilamina (1 ml) en diclorometano (6 ml) se le
añade cloruro 2,6-diclorobenzoico (0,15 ml, 1,0
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 0ºC durante 6 horas. Tras
eliminar el disolvente, se purifica el residuo con una
cromatografía en gel de sílice con acetato de
etilo-hexanos proporcionando un sólido blanco (163,9
mg, 46,9% de rendimiento, ES+(m/z) 349,1 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
27
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\vskip1.000000\baselineskip
A 1,0 g (6,53 mmoles) de
5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-ilamina
en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} se le añaden 1,37 g (7,17 mmoles) de
éster etílico del ácido
4-isocianato-benzoico, y se agita la
mezcla a 23ºC durante 3 horas. Se filtra el sólido blanco y se
tritura con cloruro de metileno y luego con dietil éter. Se secan
al aire los sólidos durante 1 hora obteniendo el compuesto de título
(2,07 g, 6,01 mmoles, 92% de rendimiento, ES+(m/z)
345 [M+H]).
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Preparación
28
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A un matraz seco se le añaden 872 mg (2,5
mmoles) de éster etílico del ácido
4-[3-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-ureido]-benzoico
en 30 ml de cloruro de metileno seco y se enfría hasta 0ºC. A
continuación, se añaden 10,12 ml de DIBAL 1 M en hexanos (4 eq.,
10,12 mmoles) y se deja que la reacción alcance la temperatura
ambiente. Entonces se agita la mezcla durante 1 hora, y se añaden
60 ml de acetato de etilo y 100 ml de disolución acuosa saturada de
tartrato de sodio, y se agita la mezcla durante otros 30 min.
Entonces se separa la fase orgánica y se lava con agua y se seca
sobre sulfato de magnesio, se filtra, y se evapora dando un sólido
blanco que pesa 720 mg (2,4 mmoles, 95%, ES+(m/z) 303
[M+H]).
\newpage
Preparación
29
A una suspensión de 518 mg (1,72 mmoles) de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-hidroximetil-fenil)-urea
en cloruro de metileno (25 ml) se le añaden 2,7 g de MnO_{2}. Se
agita la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Entonces se
filtra la mezcla sobre Celite® y se evapora obteniendo 353 mg (1,2
mmoles, 68%) del compuesto del título como un sólido blanco.
(ES+(m/z) 301 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
30
A una suspensión de 353 mg (1,18 mmoles) de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-formil-fenil)-urea
en 1,2-dicloroetano (20 ml) se le añade éster
terc-butílico del ácido
piperazin-1-carboxílico (219 mg,
1,18 mmoles). Luego, se añade NaBH (OAc)_{3} (350 mg, 1,65
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente
durante la noche. Entonces se diluye la mezcla con cloruro de
metileno y se añaden 10 ml de NaOH 1 N. Se separa la fase orgánica
y se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora a presión
reducida dando 485 mg del compuesto N-BOC protegido
como un aceite incoloro. ES+(m/z)= 471 [M+H]. Entonces
se añaden 10 ml de una disolución 4 M de HCl en dioxano y se agita
la mezcla durante 2 horas a temperatura ambiente. Se evaporan los
disolventes a presión reducida dando el 457 mg del compuesto del
título (1,03 mmoles, 87%) como un sólido blanco.
(ES+(m/z) 371 [M+H].
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
31
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 27 y partiendo de éster etílico del ácido
3-isocianato-benzoico se sintetiza
el compuesto del título. (ES+(m/z) 345
[M+H].
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
32
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 28, partiendo de éster etílico del ácido
3-[3-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-ureido]-benzoico
se sintetiza el compuesto del título. (ES+(m/z) 303
[M+H].
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
33
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 29, partiendo de
1-(5-terc-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-(3-hidroximetil-fenil)-urea
se sintetiza el compuesto del título. (ES+(m/z) 301
[M+H].
Preparación
34
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 30, partiendo de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-(3-formil-fenil)-urea
se sintetiza el compuesto del título. (ES+(m/z) 371
[M+H].
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
35
A una suspensión de éster etílico del ácido
4-[3-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-ureidolbenzoico
(0,24 g, 0,71 mmoles) en etanol (4 ml) se le añade disolución ac.
de NaOH 1 N (2 ml) y se calienta la mezcla a 80ºC durante 2 horas.
Entonces, se añade HCl 1 N hasta pH 6 y se diluye la mezcla con
acetato de etilo. Se lava la fase orgánica una vez con disolución
acuosa de cloruro de sodio y se seca sobre sulfato de magnesio, se
filtra y se evapora a presión reducida dando 0,19 g (0,59 mmoles),
el 83% como sólido blanco. ES+(m/z) 317 [M+H].
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
36
A una disolución de
4,4-dimetil-3-oxo-pentanonitrilo
(1 g, 7,99 mmoles) y clorhidrato de isopropilhidrazina (873 mg,
7,99 mmoles) en tolueno (40 ml) se le añade DIEA (1,39 ml, 7,99
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 110ºC en un tubo sellado
durante la noche. Tras eliminar el disolvente, se purifica el
residuo con una cromatografía en gel de sílice con acetato de
etilo-hexanos dando un sólido blanco (1,14 g, 79% de
rendimiento, ES+(m/z) 182 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Las siguientes preparaciones se preparan con un
procedimiento análogo a la preparación 36.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Las siguientes preparaciones se preparan con un
procedimiento análogo a la preparación 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\global\parskip0.930000\baselineskip
Preparación
44
Se agita una mezcla de
1-bromometil-4-nitro-benceno
(2 g, 9,26 mmoles), piperazina N-BOC (1,72 g, 9,26
mmoles) y carbonato de potasio (2,8 g, 20,37 mmoles) en
acetonitrilo (25 ml) a 80ºC durante la noche. Entonces, se elimina
el carbonato de potasio mediante filtración. Se concentra el
filtrado dando un sólido blanco (2,63 g, 89% de rendimiento, ES+
(m/z) 322 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
45
Se suspenden éster terc-butílico
del ácido
4-(4-nitro-bencil)-piperazin-1-il-carboxílico
(769 mg, 2,4 mmoles) y cloruro de estaño dihidratado (2,70 g, 12
mmoles) en acetato de etilo (20 ml) y se agita a temperatura
ambiente durante la noche. Entonces, se añade disolución acuosa
saturada de bicarbonato de sodio (20 ml) y se agita enérgicamente
durante 1 hora. Se eliminan los sólidos mediante filtración y se
separa la fase orgánica del filtrado y se lava con agua (20 ml). Se
seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro y se
concentra dando un sólido blanco (620 mg, 89% de rendimiento,
ES+(m/z) 293 [M+H]).
Las siguientes preparaciones se preparan usando
el procedimiento del ejemplo 1 (véase más adelante):
Preparación
48
Se disuelve éster terc-butílico
del ácido
4-{4-[3-(5-terc-butil-2-etil-2H-pirazol-3-il)-ureido]-bencil}-piperazina-1-carboxílico
(105 mg, 0,216 mmoles) en diclorometano (3 ml) y se añade una
disolución de HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,86 ml, 3,5
mmoles) y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas.
Tras eliminar el disolvente, se tritura el residuo con dietil éter
y se seca al aire obteniendo el compuesto del título (99 mg, 99% de
rendimiento, ES+(m/z) 385 [M+H]).
La siguiente preparación se prepara con un
procedimiento análogo a la preparación 48.
Preparación
50
Se disuelve
1-(4-nitro-fenil)-piperazina
(2 g, 9,65 mmoles) en diclorometano (50 ml) y se añade
(BOC)_{2}O (2,10 g, 9,65 mmoles). Se agita la mezcla a
temperatura ambiente durante la noche. La eliminación del disolvente
da un sólido amarillo (2,96 g, 100% de rendimiento,
ES+(m/z) 308 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
51
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 45 se sintetiza el compuesto del título.
ES+(m/z) 278 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip1.000000\baselineskip
Preparación
52
Usando el procedimiento del ejemplo 1 se
sintetiza el compuesto del título (véase más adelante)
ES+(m/z) 457 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
53
Se disuelve éster terc-butílico
del ácido
4-(4-amino-fenil)-piperazin-1-il-carboxílico
(0,51 g, 1,8 mmoles) en 20 ml de CH_{3}CN y se añade
K_{2}CO_{3} (0,28 g, 2,02 mmoles), seguido por adición de éster
2,2,2-tricloro-etílico del ácido
(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-carbámico
(0,74 g, 2,02 mmoles). Se agita la disolución durante la noche a
temperatura ambiente bajo atmósfera de N_{2}. Se diluye la mezcla
de reacción mediante adición de CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y se lava
con disolución acuosa saturada de cloruro de sodio y agua. Se seca
la fase orgánica sobre MgSO_{4} y se evapora el disolvente a
presión reducida. Se purifica el producto bruto resultante mediante
ISCO usando una mezcla CH_{2}Cl_{2}/MeOH como eluyente. (0,72 g,
75% de rendimiento, ES+(m/z) 533 [M+H]).
Las siguientes preparaciones se preparan con un
procedimiento análogo a la preparación 48:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97 (véase más adelante) pero con Et_{3}N y CH_{2}Cl_{2} se
preparan los siguientes ejemplos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
128 (véase más adelante) (reacción de
1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-piperazin-1-il-fenil)-urea
con el ácido carboxílico correspondiente) se prepara el siguiente
compuesto.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
61
A una disolución de
2-fluoro-1-metil-4-nitro-benceno
(1 g, 6,45 mmoles) y bromato de sodio (2,92 g, 19,33 mmoles) en una
mezcla de EtOAc:agua (12 ml:9 ml), se le añade gota a gota mediante
embudo de adición a disolución de bisulfito de sodio 3,85 M (5,20
ml, 19,33 mmoles). Se agita enérgicamente la mezcla durante seis
días y entonces se añade bisulfito de sodio (10 ml) y se separa la
fase orgánica y se lava con disolución saturada acuosa de
bicarbonato de sodio. Se seca la fase orgánica con sulfato de
magnesio, se filtra y se evapora a presión reducida dando una
mezcla del compuesto del título y
2-fluoro-1-metil-4-nitro-benceno
de partida en una proporción 5:1 (RMN de 1H) que se usa en la etapa
siguiente sin purificación adicional. ES+ (m/z) 235
[M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
62
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 56, pero partiendo de
2-fluoro-4-metil-1-nitro-benceno,
se sintetiza el compuesto del título. ES+(m/z) 235 [M+H]).
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 44, seguido por la preparación 48, se preparan los
siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97 (véase más adelante) se preparan los siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Usando el mismo procedimiento que en la
preparación 45, se sintetizan los siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se burbujea gas nitrógeno a través de una
disolución de éster
2,2,2-tricloro-etílico del ácido
(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-carbámico
(1,65 g, 5,01 mmoles) y éster terc-butílico del
ácido
4-(4-amino-fenoxi)-piperidin-1-carboxílico
(1,47 g, 5,02 mmoles) en DMSO (20 ml) durante 2 min. Luego, se
añade N,N-diisopropiletilamina (2 ml, 11,48 mmoles).
Se agita la mezcla de reacción a 60ºC durante 6 horas. Entonces, se
distribuye la mezcla de reacción entre agua (150 ml) y
diclorometano (100 ml). Se aísla la fase acuosa y se extrae con
diclorometano (2 x 100 ml). Se lavan las fases orgánicas combinadas
con agua (100 ml) y cloruro de sodio acuoso (100 ml), y se seca
sobre sulfato de sodio anhidro. Tras eliminar el disolvente, el
producto bruto se purifica con una cromatografía en gel de sílice
con acetato de etilo-hexanos (25%) dando un sólido
blanco (2,28 g, 97%, ES-(m/z) 470,1
[M-H]).
\newpage
Ejemplo
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada con hielo de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-[4-(piperidin-4-iloxi)-fenil]-urea
(82,2 mg, 0,22 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol
(HOBt, 50,1 mg, 0,37 mmoles) y ácido benzoico (38,8 mg, 0,32
mmoles) en diclorometano-THF (1:1,2 ml) se le añade
DCC (52,0 mg, 0,25 mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 22ºC
durante 19 horas. Se purifica el producto bruto con una
cromatografía en gel de sílice con acetato de
etilo-hexanos proporcionando un sólido blanco (97,7
mg, 93,4% de rendimiento, ES+(m/z) 476,1 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se burbujea gas nitrógeno a través de una
disolución de
[4-(4-amino-fenoxi)-piperidin-1-il]-(2,6-diclorofenil)-metanona
(47 mg, 0,12 mmoles) y éster
2,2,2-tricloro-etílico del ácido
(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-carbámico
(42 mg, 0,12 mmoles) en DMSO (1,5 ml) durante 5 min. Luego, se
añade N,N-diisopropiletilamina (40 \mul, 0,24
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a 60ºC durante 6 horas.
Entonces, se elimina DMSO haciendo pasar la mezcla de reacción a
través de una columna de SCX. Se obtiene el producto bruto eluyendo
la columna de SCX con amoniaco 2 M en metanol y purificando el
residuo en gel de sílice con acetato de
etilo-hexanos (25%) dando un sólido blanco
(ES+(m/z) 544,2 [M+H]).
Usando el procedimiento del ejemplo 2 o 3 da los
siguientes compuestos, aislados como la base libre, en la que el
nitrógeno de la urea está siempre conectado a un átomo de carbono en
W':
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
93
Se agita una mezcla de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-{3-fluoro-5-[3-formilbenoil)-piperidin-4-iloxi]-fenil}-urea
(usando el ejemplo 28, 103,9 mg, 0,2 mmoles), morfolina (100
\mul, 0,2 mmoles) y triacetoxiborohidruro de sodio (96,1 mg, 0,45
mmoles) en 1,2-dicloroetano (2 ml) a 22ºC durante la
noche. Se evapora el disolvente y se purifica el residuo sobre gel
de sílice con 0-5% (amoniaco 2 M en metanol) en
diclorometano dando un sólido blanco (65,3 mg, 55% de rendimiento,
ES+(m/z) 593,3 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
94
Se burbujea gas nitrógeno a través de una
disolución de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-{3-fluoro-5-(piperidin-4-iloxi)-fenil}-urea
(390,6 mg, 1,0 mmoles) y éster fenílico del ácido carbámico (140,6
mg, 1,0 mmoles) en DMSO (2 ml) durante 5 minutos. A continuación,
se añade N,N-diisopropiletilamina (350 ml, 2,0 mmoles). Tras
agitar a 85ºC durante la noche, se distribuye la mezcla de reacción
entre acetato de etilo (15 ml) y bicarbonato de sodio saturado (50
ml). Se aísla la fase acuosa y se extrae con acetato de etilo (2 x
15 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de
sodio y se concentra. Se purifica el residuo sobre una cromatografía
sobre gel de sílice con hexanos y acetato de etilo dando un sólido
blanco (250 mg, 58% de rendimiento, ES+(m/z) 433,3
[M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
95
A una disolución enfriada con agua helada de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-{3-fluoro-5-(piperidin-4-iloxi)-fenil}-urea
(390,6 mg, 1,0 mmoles) y trietilamina (280 \mul, mmoles) en
diclorometano (5 ml) se le añade cloruro de tricloroacetilo (115
\mul, 1,0 mmol). Se deja calentar la mezcla de reacción hasta 22ºC
y se agita durante 1 hora. Tras eliminar el disolvente, se purifica
el residuo sobre una cromatografía sobre gel de sílice con hexanos
y acetato de etilo proporcionando un sólido blanco (520,0 mg, 97% de
rendimiento, ES+(m/z) 535,9 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
96
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se burbujea gas nitrógeno a través de una
disolución de
(4-amino-piperidin-1-il)-(4-metilsulfonil-fenil)-metanona
(141,6 mg, 0,50 mmoles) y éster
2,2,2-tricloro-etílico del ácido
(5-terc-butil-2-tolil-2H-pirazol-3-il)-carbámico
(204,8 mg, 0,51 mmoles) en DMSO (2 ml) durante 2 minutos. A
continuación, se añadeN,N-diisopropiletilamina
(0,20 ml). Se agita la mezcla de reacción a 60ºC durante 6 horas. Se
purifica el producto bruto sobre una cromatografía sobre gel de
sílice con acetato de etilo dando un sólido blanco (261,2 mg, 97,2%,
ES+(m/z) 538,3 [M+H]).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
97
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión de 75 mg (0,17 mmoles) de
dicloruro de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-piperazin-1-ilmetilfenil)-urea
en cloruro de metileno (4 ml) se le añade DIEA (0,103 ml, 0,6
mmoles) seguido por cloruro de 2,6-diclorobenzoílo
(0,020 ml, 0,17 mmoles): Se agita la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante la noche. Se añade agua (4 ml) y se
separa la fase orgánica, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y
se evapora a presión reducida dando un aceite amarillo pálido. Se
cromatografía el residuo usando cloruro de metileno hasta cloruro
de metileno:MeOH 92:8 en un gradiente. Se recoge el compuesto del
título como un sólido blanco (30 mg; 0,06 mmoles, 33%).
ES+(m/z) 544 [M+H]:
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97, se preparan los siguientes ejemplos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97, se preparan los siguientes ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97, se preparan los siguientes ejemplos:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Ejemplo
121
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97 pero usando isocianato de trimetilsililo en lugar de ácido
clorhídrico, se prepara el compuesto del título. ES+(m/z) 476
[M+H]).
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
97 pero usando el cloruro de sulfonilo correspondiente en lugar del
cloruro de ácido, se preparan los siguientes compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Ejemplo
124
Se prepara el compuesto del título mediante la
reacción de
1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-piperazin-1-il-fenil)-urea
(0,20 g, 0,46 mmoles) con 0,51 mmoles de ácido
3,3-dimetil-butírico, (0,06 g, 0,46
mmoles) de 1-hidroxibenzotriazol hidratado y (0,8
g, 0,46 mmoles) de carbodiimida soportada en polímero, disuelto en
16 ml de CH_{2}Cl_{2}. Se agita la mezcla a t.a. durante la
noche. Se filtra y se lava la resina con CH_{2}Cl_{2}. Se
evapora el disolvente y se purifica el residuo con un cartucho SCX
eluyendo con NH_{4}OH/CH_{3}OH 2 N. ES+(m/z) =
531 [M+H].
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
124 (reacción de
1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-piperazin-1-il-fenil)-urea
con el correspondiente ácido carboxílico), se preparan los
siguientes compuestos. En el caso del ácido
piperidina-3-carboxílico, se lleva
a cabo la reacción usando el derivado de N-BOC que
se desprotege usando HCl/dioxano 4M.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
133
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añaden 0,11 ml de una disolución 1 N de ácido
metilsulfónico en CH_{2}Cl_{2} a una disolución agitada de
1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{4-[4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-1-il)-fenil}-urea
en 1 ml de CH_{2}Cl_{2}, se agita la disolución durante 30
minutos. Se concentra la disolución de sal a vacío. Se
cristaliza la sal mediante trituración con Et_{2}O. Se filtra el
sólido y se seca a vacío dando el compuesto del título.
MS(ES+H): m/z =573
\newpage
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
133, se preparan los siguientes ejemplos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
138
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
A una suspensión de 75 mg (0,17 mmoles) de
diclorhidrato de
1-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-3-(4-piperazin-1-ilmetilfenil)-urea
en cloruro de metileno (5 ml) se le añade DIEA (0,103 ml, 0,6
mmoles), PS-carbodiimida (266 mg, 0,34 mmoles),
HOBT (23 mg, 0,17 mmoles) y luego ácido isonicotínico (21 mg, 0,17
mmoles). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente
durante la noche. A continuación, se añade
PS-trisamina (150 mg) y se agita la mezcla de
reacción a temperatura ambiente durante 2 h. Se filtra la mezcla y
se evapora dando un aceite amarillo, que se cromatografía usando
cloruro de metileno hasta cloruro de metileno:metanol 92:8 en un
gradiente. Se recoge el compuesto del título como un sólido blanco
que pesa 12 mg (0,03 mmoles, 18%). ES+(m/z) = 476
[M+H].
Usando esencialmente la metodología del ejemplo
138, se prepara el siguiente ejemplo:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Usando el procedimiento del ejemplo 1, se
preparan los siguientes ejemplos, en los que W' contiene uno de los
nitrógenos de la urea:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Ejemplo
150
A una disolución de ácido
4-[3-(5-terc-butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)-ureido]benzoico
(0,08 g, 0,26 mmoles) en una mezcla de diclorometano (4 ml) y DMF
(0,20 ml) se le añade
1-(4-piridinilmetil)piperazina (0,046 g,
0,26 mmoles), PS-DCC (0,41 g, 0,52 mmoles) y HOBT
(0,035 g, 0,26 mmoles). Se agita la mezcla durante la noche a 45ºC
en un tubo cerrado (agitación orbital). Entonces se añade
PS-trisamina (0,52 mmoles) y se agita la mezcla
durante 4 h a temperatura ambiente, se filtra y se lava tres veces
con diclorometano. Se evaporan los disolventes a presión reducida y
se purifica el residuo mediante cromatografía en columna biotage
(eluyente: acetato de etilo/metanol 10:1) dando 0,020 g (0,04
mmoles), 16% como un sólido blanco. ES+(m/z)= 476
[M+H].
Se prepara la disolución tampón de la quinasa
combinando 2,5 ml de Tris-HCl 1 M (pH 7,5), 0,1 ml
de ditiotreitol 1 M, 1,0 ml de cloruro de magnesio 1 M y 300 \mul
de Triton X-100 al 1% y diluyendo hasta 100 ml con
agua. Se combinan 84 ml de esta disolución tampón de la quinasa con
16 ml de DMSO para preparar la disolución de DMSO al 16%.
Se prepara la disolución de ATP 200 \muM
añadiendo 102,6 \mul de ATP acuoso 10 mM, 25 \mul de
^{33}P-ATP y 163,5 \mul de péptido del factor
de crecimiento epidérmico 661-681 4 mM (Biomol,
número de catálogo P-121) en 5 ml de disolución
tampón de la quinasa.
Se prepara la disolución de enzima quinasa P38
disolviendo 9,5 \mul de disolución de enzima concentrada (250 ng
de enzima p38/\mul de disolución tampón de la quinasa) en 1536
\mul de disolución tampón de la quinasa.
Se prepara una disolución 80 \muM de cada
compuesto de prueba y compuesto control disolviendo 2 \mul de una
disolución madre 10 mM de los respectivos compuestos en
dimetilsulfóxido en 248 \mul de la disolución de DMSO al 16% en
una placa de microtitulación de 96 pocillos Costar. Se coloca la
placa sobre un manipulador de líquidos automatizado Tecan Genesis
para preparar diluciones en serie 1:3.
Se colocan 10 \mul del compuesto diluido en
serie con un manipulador de líquidos automatizado de 96 pocillos
Beckman Multimek en la placa de ensayo. Se añaden 20 \mul de la
disolución de ATP 200 \muM con un manipulador de líquidos de 8
canales Titertek Multidrop. Se transfieren 10 \mul de la
disolución de enzima quinasa p38 a la placa de ensayo usando el
manipulador Multimek. Se deja reaccionar la mezcla durante 40 min. a
30ºC y luego se detiene la reacción añadiendo 60 \mul de AcOH
glacial al 5% recién preparado con el manipulador Multidrop. Se
transfieren 80 \mul de esta disolución a una placa "MAPH"
usando el manipulador Multimek. Se dejan reposar las placas durante
30 min. a temperatura ambiente y luego se lavan/aspiran sobre el
extractor Titertek MAP con AcOH glacial al 0,5% recién preparado (1
x 300 \mul, 2 x 200 \mul). Se transfieren los pocillos y se
añaden 100 \mul de líquido de centelleo
MicroScint-20 (Packard Bioscience) con el
manipulador Multidrop. Se dejan asentar las placas durante 30 min.
y se cuentan en un contador de centelleo Microbeta Trilux de
PE/Wallac para determinar el isótopo ^{33}P.
Todos los compuestos ejemplificados se someten a
prueba inicialmente a 10 concentraciones (20 \muM - 1 nM usando
diluciones en serie 1:3). Los compuestos con valores de CI_{50}
inferiores a 25 nM vuelven a someterse a prueba a una concentración
de partida de 2 \muM a 0,1 nM (diluciones en serie 1:3). Se
calculan los valores de CI_{50} (programa ActivityBase de IDBS)
para cada compuesto usando regresión no lineal. Se sometieron a
prueba todos los compuestos ejemplificados esencialmente según se
describió anteriormente y se encontró que inhibían la enzima
quinasa p38 con una CI_{50} inferior a 5 \muM. La actividad para
los ejemplos 70, 100 y 136 en este ensayo fue de 0,019 \muM,
0,010 \muM y 0,091 \muM, respectivamente.
Se inyectan 1 ml de caldo de tioglicolato (5,0 g
de extracto de levaduras, 15,0 g de casitona o tripticasa, 5,0 g de
dextrosa, 2,5 g de cloruro de sodio, 0,75 g de
L-cistina, 0,5 g de tioglicolato de sodio, 1,0 mg
de resazurina, y 0,75 g de agar en 1,0 l de agua destilada) en la
cavidad peritoneal de ratones hembra Balb/C. En el día 4 ó 5 tras
la inyección, se sacrifican los ratones y luego se les inyecta i.p.
4 ml de medio RPMI-1640 (BioWhittaker) y se extraen
los macrófagos peritoneales mediante una jeringuilla.
Se cuentan los macrófagos peritoneales de ratón
con un hemocitómetro y se ajustan hasta 5 x 10^{5} células/pocillo
en placas de 96 pocillos en medio RPMI-1640 con
suero bovino fetal al 10%. Se siembran en placas 200 \mul/pocillo
en placas de 96 pocillos y se dejan sedimentar y adherir las células
al fondo del pocillo durante al menos 3 h. Se trata previamente el
compuesto de prueba o el inhibidor de la quinasa p38 patrón usando
una serie de 8 concentraciones durante 1 h a 37ºC (20
\mul/pocillo). Se tratan las células con una mezcla de
lipopolisacárido 50 ng/ml (LPS) e
interferon-\gamma 10 U/ml durante 18 h a 37ºC (20
\mul/pocillo). Se recoge el medio condicionado y se somete a
ensayo para determinar la producción de TNF-\alpha
usando el procedimiento Luminex.
Se reconstituye el patrón de
TNF-\alpha premezclado liofilizado (1 tubo de
patrón/dos placas de 96 pocillos) con 50 \mul de agua estéril
(500.000 pg/ml). Se agitan con vórtex las muestras durante 5
segundos, se incuban en hielo durante 30 min. y se agitan con
vórtex durante 5 segundos antes de su uso. Se marcan un conjunto de
doce tubos de 1,5 ml con los números 1 hasta 12 y luego se añaden
las cantidades de medios celulares mostradas a continuación a los
tubos apropiados (las concentraciones del patrón son las siguientes:
50.000 pg/ml; 25.000 pg/ml; 12.500 pg/ml; 6.250 pg/ml; 3.125 pg/ml;
1.562,5 pg/ml; 781,3 pg/ml; 390,6 pg/ml; 195,3 pg/ml; 97,7 pg/ml;
48,8 pg/ml; y 24,4 pg/ml). Se agitan con vórtex vigorosamente (25X)
durante 30 segundos las perlas conjugadas con
anti-citocina premezcladas. Se diluyen las perlas
conjugadas con anti-citocina hasta una concentración
de 1X usando el tampón de ensayo 1X Bio-Plex. Para
cada placa, se añaden 240 \mul de las perlas premezcladas a 5760
\mul de tampón de ensayo Bio-Plex. Se bloquea una
placa filtrante de 96 pocillos de Millipore con 100 \mul/pocillo
de tampón de bloqueo. Se filtra el tampón de bloqueo usando un
sistema de filtración de Millipore y luego se seca con una toalla.
Se realizan 2 lavados sobre la placa filtrante con 100
\mul/pocillo de tampón de ensayo Bio-Plex y se
seca con una toalla. Se agitan con vórtex las perlas conjugadas con
anti-citocina 1X durante 15 segundos y se añaden 50
\mul a cada pocillo. Se filtra esto y se seca con una toalla. Se
realizan 2 lavados sobre las placas con 100 \mul/pocillo de
tampón de lavado Bio-Plex. De nuevo, se filtra y se
seca con una toalla. Se añaden 50 \mul de la muestra o el patrón
a cada pocillo de muestra. Se incuba esto durante 60 segundos a
temperatura ambiente sobre un agitador protegido de la luz en el
parámetro 6 y luego durante 30 min. en el parámetro 3 y luego se
coloca en el frigorífico durante la noche. Se realizan 3 lavados con
el tampón de lavado Bio-Plex. Se filtra y se seca
con una toalla. Se prepara el anticuerpo de detección de citocinas
(10 min. antes de su uso) para cada placa y se añaden de 60 \mul
de la reserva de anticuerpo de detección de citocinas premezclado a
5940 \mul del diluyente del anticuerpo de detección
Bio-Plex.
Se añaden 50 \mul del anticuerpo de detección
de citocinas y se incuba durante 60 segundos a temperatura ambiente
sobre un agitador protegido de la luz en el parámetro 6 y luego
durante 30 min. en el parámetro 3. Se realizan 3 lavados con el
tampón de lavado Bio-Plex. Se filtra esto y se seca
con una toalla. Se prepara el Strept-PE (10 minutos
antes de su uso) para cada placa y se añaden de 60 \mul a 5940
\mul del tampón de ensayo Bio-Plex. Se añaden 50
\mul de Estreptavidina-PE a cada pocillo y se
incuba durante 60 segundos a temperatura ambiente sobre un agitador
protegido de la luz en el parámetro 6 y luego durante 10 min. en el
parámetro 3. Se realizan 3 lavados con el tampón de lavado
Bio-Plex. Se filtra esto. Se resuspenden las perlas
en 100 \mul/pocillo de tampón de ensayo Bio-Plex.
Se leen los patrones y las muestras en una máquina Luminex.
Entonces se convierten estas lecturas de intensidad en unidades de
picogramo/mililitro basándose en una curva patrón de 12 puntos
creada por duplicado usando un procedimiento de regresión logística
de cuatro (Bio-Plex Manager 2,0,
Bio-Rad), y se calcula la
CI_{50}.
CI_{50}.
Se sometieron a prueba miembros representativos
de los compuestos ejemplificados esencialmente según se describió
anteriormente y se suprimió el TNF-\alpha in
vitro con una CI_{50} inferior a 100 nM. El ejemplo 100
mostró una CI_{50} = 11 nM en este ensayo.
Se administran los compuestos v.o. (30 mg/kg, 10
mg/kg, 3 mg/kg y 1 mg/kg) a ratones Balb/c hembra (6 ratones/dosis).
1 h tras la administración del compuesto a 4 dosis (v.o. a un
volumen de 0,1 ml/ratón; vehículo: NaCMC al
1%/Tween-80 al 0,25% en agua); se les administra a
los ratones una inyección i.p. de LPS a 400 ug/kg. 1,5 h tras la
exposición a LPS, se anestesian los ratones con isoflurano y se
extrae sangre mediante punción cardiaca. Se determinan los niveles
de TNF-\alpha en el plasma usando el kit de ELISA
de R&D Systems y se determina la DE50 de respuesta a la
dosis.
Se sometieron a prueba miembros representativos
de los compuestos ejemplificados esencialmente según se describió
anteriormente y se suprimió el TNF-\alpha in
vivo con una DE50 inferior a 30 mg/kg. El ejemplo 100 mostró
una TMED50 = 2,4 mg/kg en este ensayo.
La inyección intra-articular de
LPS en los tobillos de las ratas induce la síntesis de
TNF-\alpha, que puede medirse en el líquido de
lavado sinovial. Pueden detectarse niveles altos de
TNF-\alpha en el plazo de 2 horas. Dado que la
articulación es el sitio en el que se desarrolla la artritis, este
modelo puede determinar rápidamente si un compuesto administrado
oralmente tiene un efecto sobre una respuesta inflamatoria en el
sinovio.
Se colocan seis ratas Lewis hembra (150 g -200
g) en cada grupo de tratamiento. A los animales se les administra
el vehículo (carboximetilcelulosa de sodio al 1% - Tween 80 al
0,25%) o el compuesto de prueba (1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg y 30
mg/kg) por vía. Una hora más tarde, se administran 10 \mul de LPS
(10 \mug) por vía intra-articular en el tobillo
derecho de cada rata, mientras que el tobillo izquierdo recibe 10
\mul de solución salina. Tras dos horas, se lava cada tobillo con
100 \mul de solución salina. Se recoge el lavado y se almacena a
-80ºC.
- Grupo nº 1:
- vehículo (NaCMC al 1% - Tween 80 al 0,25%, 1 ml, v.o.)
- Grupo nº 2:
- compuesto de prueba (1 mg/kg, 1 ml, v.o.)
- Grupo nº 3:
- compuesto de prueba (3 mg/kg, 1 ml, v.o.)
- Grupo nº 4:
- compuesto de prueba (10 mg/kg, 1 ml, v.o.)
- Grupo nº 5:
- compuesto de prueba (30 mg/kg, 1 ml, v.o.)
Se mide el TNF-\alpha con un
kit de ELISA disponible comercialmente (R&D, RTA00). El
tratamiento con el ejemplo 100 produjo una inhibición en respuesta
a la dosis de la síntesis de TNF-\alpha, según se
mide en el líquido de lavado sinovial con una DE50 = 30 mg/kg.
Se obtiene la línea celular de melanoma B16F10
de la Colección Americana de Cultivos Tipo, Rockville, MD. Se
cultivan las células en medio RPMI-1640
complementado con suero de ternera fetal al 10%. Se recogen las
células que se han hecho crecer in vitro durante su fase de
crecimiento exponencial mediante tripsinización suave, se lavan dos
veces en el medio y se resuspenden en medio
RPMI-1640 libre de suero. Se determina el número de
células viables monodispersas usando un hemocitómetro y se ajusta
hasta 1 x 10^{6} células/ml. Se inyectan células tumorales por
vía intravenosa en la vena de la cola de ratones C57B16 normales con
un volumen de inóculo de 0,2 ml que contienen 200.000 células. Se
tratan los ratones con el compuesto de prueba o el control de
vehículo comenzando 1 día tras la inoculación del tumor i.v. Se
prepara el compuesto de prueba como una formulación en suspensión
en NaCMC al 1%/polisorbato 80 al 0,25% y se sonica la sonda en un
volumen de inyección de un 1% del peso corporal (por ejemplo, se
prepara el nivel de dosis de 30 mg/kg a 3 mg/ml y se administran
0,2 cc por 20 g de ratón). Se tratan los ratones por vía oral tres
veces al día con el compuesto de prueba a 30 mg/kg, 10 mg/kg y 3
mg/kg (90 mg/kg/día, 30 mg/kg/día y 9 mg/kg/día) desde el día -1
hasta el 16 tras la inoculación de las células tumorales. Los
ratones control reciben el vehículo solo de una manera idéntica. En
el día 16, se sacrifican los ratones y se recogen los pulmones y se
fijan en paraformaldehído al 3%. Se cuantifican las lesiones
pulmonares mediante recuento manual bajo un microscopio de
disección.
Se obtiene la línea celular de melanoma B16F10
de la Colección Americana de Cultivos Tipo, Rockville, MD. Se
cultivan las células en medio RPMI-1640
complementado con suero de ternera fetal al 10%. Se recogen las
células que se han hecho crecer in vitro durante su fase de
crecimiento exponencial mediante tripsinización suave, se lavan dos
veces en el medio y se resuspenden en medio
RPMI-1640 libre de suero. Se determina el número de
células viables usando un hemocitómetro y se ajusta hasta 1 x
10^{7} células/ml. Se inyectan células tumorales por vía
subcutánea en ratones C57B16 normales. El volumen de inóculo por
ratón es de 0,2 ml (200.000 células). Cuando los tumores alcanzan
300-500 mg, se usan los ratones para estudios de
inhibición de la diana a un tiempo fijo (2,5 horas) tras el
tratamiento con el compuesto v.o. o para estudios farmacodinámicos
en los que se recogen los tumores a múltiples puntos de tiempo (por
ejemplo, 3 h, 6 h, 9 h, 12 h, 15 h y 18 h) tras el tratamiento con
el compuesto v.o.
Los tumores recogidos según se describió
anteriormente se congelan rápidamente de manera inmediata en
nitrógeno líquido y se almacenan a -80ºC. Se homogeneizan los
tejidos tumorales en hielo usando un homogeneizador Daunce en un
tampón de extracción (Tris 25 mM pH 7,5 que contiene los siguientes
inhibidores de proteasas: leupeptina 10 \mug/ml, inhibidor de la
quimotripsina de soja 10 \mug/ml,
N-tosil-L-fenilalanina
clorometil cetona 10 \mug/ml, aprotinina 10 \mug/ml, éster
metílico de
N\alpha-p-tosil-L-arginina,
benzamidina 7 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,3 mM y dos
comprimidos de cóctel inhibidor de proteasas completo de Roche; los
siguientes inhibidores de fosfatasas:
beta-glicerofosfato 60 mM, vanadato de sodio 1 mM,
fluoruro de sodio 10 mM, fosfato de p-nitrofenilo
20 mM, ácido okadaico 1 \muM, microcistina 1 \muM, pirofosfato
de sodio 2,5 mM; y ditiotreitol 1 mM, EDTA 15 mM, EGTA 5 mM, Triton
X100 al 1% y NaCl 150 mM). Se clarifican los lisados tisulares
mediante centrifugación en una microcentrífuga refrigerada a 14.000
rpm y a 1ºC durante 20 min. Se transfieren los sobrenadantes a
tubos de microcentrífuga nuevos enfriados previamente en hielo y se
congelan rápidamente de nuevo en nitrógeno líquido o nieve
carbónica. Tras descongelar rápidamente hasta aproximadamente el
80% de la finalización en agua tibia, se colocan las muestran en
hielo hasta la descongelación completa. Se centrifugan las muestras
de nuevo a 14.000 rpm y a 1ºC durante 15 min. Se transfieren los
sobrenadantes a tubos de microcentrífuga enfriados previamente
nuevos y se miden las concentraciones de proteína usando reactivos
de ensayo de proteínas de Bio-Rad usando albúmina
sérica bovina como patrón proteico.
Se igualan los extractos proteicos con el tampón
de extracción. Se añade un volumen igual de tampón de muestra 2X
SDS a los extractos proteicos y se someten a ebullición en un baño
de agua durante 5 min. Se usan 100 \mug de extracto proteico por
muestra para la electroforesis sobre un gel de
SDS-PAGE en gradiente del 4-20% y
se transfieren sobre membranas de nitrocelulosa (NC). Se bloquean
las membranas de NC en BSA al 5% en TBST (Tris 20 mM pH = 7,5, NaCl
500 mM, Tween 20 al 0,05% y azida de sodio al 0,02%) durante al
menos 1 h. Entonces se incuban las membranas en anticuerpo primario
a 1:1.000 con BSA al 5% en TBST durante la noche sobre un agitador
con 80 rpm a 4ºC. Se lavan las membranas 4 X, 10 min. cada una, con
TBST. Entonces se incuban las membranas durante 40 min. con
conjugado de anticuerpo secundario - HRP (peroxidasa del rábano) a
una dilución 1:10.000 en leche desnatada al 3% en TBST y se lavaron
de nuevo 4 veces con TBST, 10 min. cada una. Entonces se visualizan
las inmunotransferencias mediante quimioluminiscencia potenciada
(ECL, Amersham) según las instrucciones del fabricante. Todos los
anticuerpos primarios se adquieren de Cell Signaling y los
conjugados de anticuerpo secundario - HRP se obtienen de Amersham.
Los geles, membranas y aparatos usados para la electroforesis e
inmunotransferencia de tipo Western se adquieren de Invitrogen. Se
cuantifican las bandas de proteínas de interés a partir de
películas usando la estación de imagen 1000 de Kodak.
A ratones DBA/2 (6-8 semanas de
edad) hembra (Taconic) se les implanta por vía subcutánea en la
región del flanco trasero en el día 0 con células P815 (0,5 x
10^{6} células en 200 ul de RPMI 1640). Las células tumorales
P815 se adquieren de la ATCC y se cultivan en medio RPMI,
complementado con glutamina y suero bovino al 10% a 37ºC en un
incubador de cultivo celular con CO_{2} al 5%. Se tratan los
animales que portan el tumor con la administración oral del
compuesto de prueba a diferentes dosis o vehículo con una frecuencia
de tres veces al día comenzando el día de la implantación. Se
controla el crecimiento tumoral cada 2 días midiendo los diámetros
perpendiculares. Se determina el volumen tumoral expresado en
miligramos (mg) como el producto del diámetro más largo (a) y su
perpendicular (b) según la fórmula [volumen tumoral = a x b^{2} x
0,536].
Se determina la inhibición de la diana in
vivo midiendo el efecto del tratamiento inhibidor sobre la
fosforilación de MAPKAP-K2 expresada en tejidos
tumorales P815. Se dejan crecer los tumores en ratones DBA/2 que
recibieron la implantación subcutánea de células P815 hasta un
tamaño de 300 mg-500 sin tratamiento. Entonces se
les administra por vía oral a los ratones que portan el tumor el
compuesto de prueba o el vehículo. Para investigar el transcurso de
tiempo relacionado con la inhibición de la diana por el compuesto de
prueba, se recogen los tumores de animales sacrificados con
CO_{2} a los tiempos indicados (3 h, 6 h, 12 h y 18 h) tras
dosificar el compuesto a 30 mg/kg. Se investiga la inhibición de la
diana dependiente de la dosis por el compuesto de prueba recogiendo
los tumores a las 3 h tras administrar por vía oral diferentes dosis
del compuesto de prueba o el vehículo. Se congelan rápidamente de
manera inmediata los tumores recogidos sobre nieve carbónica, se
pulverizan, se homogeneizan y se lisan en tampón de lisis enfriado
que contiene inhibidores de proteinasas y fosfatasas. Tras la
centrifugación para eliminar desechos celulares, se resuspenden los
sobrenadantes que contienen 100 microgramos de proteínas totales en
tampón de carga 2 x Tris-Glicina y se someten a
electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio - poliacrilamida
(Tris-Glicina al 10%) en condiciones reductoras. Se
transfieren posteriormente las proteínas sobre una membrana de PDVF
y entonces se bloquearon en PBS-leche al 5% que
contenía Tween-20 al 0,1% durante 1 h a temperatura
ambiente. Entonces se incuba la membrana con anticuerpo primario
(anti-fosfo-MAPKAPK2, Cell
Signaling) a 4ºC durante la noche seguido por incubación con
anticuerpo secundario (IgG conjugada con HRP
anti-conejo) a temperatura ambiente durante 1 h. Se
visualiza el nivel de expresión de
fosfo-MAPKAP-K2 mediante el sistema
de detección Phospho-Image tras usar la detección
por quimioluminiscencia potenciada (ECL) para reflejar la presencia
de proteínas sobre las transferencias de PVDF. También se controla
el nivel de expresión de la fosfo-MAP quinasa p38 y
la MAP quinasa p38 total mediante un procedimiento de
inmunotransferencia de tipo Western similar.
Se inmunizan ratas Lewis hembra (\cong190 g,
Charles River Labs) con colágeno bovino tipo II (2 mg/ml)
emulsionado con un volumen igual de adyuvante (hidróxido de
aluminio). Se inmunizan las ratas con aproximadamente 0,3 mg de la
emulsión por vía intradérmica sobre la espalda cerca de la base de
la cola. Se vuelven a inmunizar todos los animales 7 días después
según el mismo protocolo. Las ratas comienzan a desarrollar artritis
(caracterizada por hinchazón y enrojecimiento de uno o ambos
tobillos) a partir de 12 a 14 días tras la primera inmunización. Se
distribuyen las ratas equitativamente en cinco grupos de tratamiento
a los primeros signos de artritis y se inicia el tratamiento
administrándose a cada rata cada dos veces al día durante 14
días.
\vskip1.000000\baselineskip
- Grupo 1
- vehículo (carboximetilcelulosa de sodio al 1% + Tween 80 al 0,25%) 1 ml, v.o., dos veces al día x 14 días
- Grupo 2
- compuesto de prueba, 5 mg/kg, 1 ml, v.o., dos veces al día x 14
- Grupo 3
- compuesto de prueba, 15 mg/kg, 1 ml, v.o., dos veces al día x 14
- Grupo 4
- compuesto de prueba, 30 mg/kg, 1 ml, v.o., dos veces al día x 14
- Grupo 5
- prednisolona 10 mg/kg, 1 ml, v.o., cada día x 14.
\vskip1.000000\baselineskip
Se mide el diámetro del tobillo con calibradores
5 días a la semana y se registra. Se expresan los datos como el
área bajo la curva (AUC) generada a partir de las puntuaciones de
inflamación compuestas y se realiza un análisis estadístico.
Se prefiere la administración oral de los
compuestos de la presente invención. Sin embargo, la administración
oral no es la única vía o incluso la única vía preferida. Por
ejemplo, la administración transdérmica puede ser muy deseable para
pacientes que son olvidadizos o irascibles con respecto a la ingesta
de un medicamento oral, y puede preferirse la vía intravenosa como
cuestión de comodidad o para evitar posibles complicaciones
relacionadas con la administración oral. También pueden
administrarse los compuestos de fórmula I mediante la vía
percutánea, intramuscular, intranasal o intrarrectal en
circunstancias particulares. La vía de administración puede
variarse de cualquier forma, limitada por las propiedades físicas de
los fármacos, la comodidad del paciente y el profesional sanitario,
y otras circunstancias relevantes (Remington's Pharmaceutical
Sciences, 18ª Edición, Mack Publishing Co. (1990)).
Las composiciones farmacéuticas se preparan de
una manera bien conocida en la técnica farmacéutica. El vehículo o
excipiente puede ser un material sólido, semisólido o líquido que
puede servir como vehículo o medio para el principio activo. Se
conocen bien en la técnica vehículos o excipientes adecuados. La
composición farmacéutica puede adaptarse para uso oral, inhalación,
parenteral o tópico y puede administrarse al paciente en forma de
comprimidos, cápsulas, aerosoles, inhalantes, supositorios,
disoluciones, suspensiones o similares.
Los compuestos de la presente invención pueden
administrarse por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o
cápsulas o comprimirse para dar comprimidos. Para el fin de la
administración terapéutica oral, pueden incorporarse excipientes a
los compuestos y usarse en forma de comprimidos, trociscos,
cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, chicles y
similares. Estas preparaciones deben contener al menos un 4% del
compuesto de la presente invención, el principio activo, pero puede
variarse dependiendo de la forma particular y puede ser
convenientemente entre el 4% y aproximadamente el 70% del peso de la
unidad. La cantidad del compuesto presente en las composiciones es
tal que se obtendrá una dosificación adecuada. Pueden determinarse
las composiciones y preparaciones preferidas de la presente
invención mediante procedimientos bien conocidos por el experto.
Los comprimidos, pastillas, cápsulas, trociscos
y similares también pueden contener uno o más de los siguientes
adyuvantes: aglutinantes tales como povidona, hidroxipropilcelulosa,
celulosa microcristalina o gelatina; excipientes o diluyentes tales
como: almidón, lactosa, celulosa microcristalina o fosfato de
dicalcio, agentes disgregantes tales como: croscarmelosa,
crospovidona, glicolato sódico de almidón, almidón de maíz y
similares; lubricantes tales como: estearato de magnesio, ácido
esteárico, talco o aceite vegetal hidrogenado; deslizantes tales
como dióxido de silicio coloidal; agentes humectantes tales como:
laurilsulfato de sodio y polisorbato 80; y pueden añadirse agentes
edulcorantes tales como: sacarosa, aspartamo o sacarina o un agente
aromatizante tal como: menta, salicilato de metilo o aroma de
naranja. Cuando la forma unitaria de dosificación es una cápsula,
puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un
vehículo líquido tal como polietilenglicol o un ácido graso. Otras
formas unitarias de dosificación pueden contener otros diversos
materiales que modifican la forma física de la unidad de
dosificación, por ejemplo, como revestimientos. Por tanto, los
comprimidos o pastillas pueden revestirse con azúcar,
hidroxipropilmetilcelulosa, polimetacrilatos u otros agentes de
recubrimiento. Los jarabes pueden contener, además de los presentes
compuestos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos
conservantes, tintes y colorantes y aromas. Los materiales usados en
la preparación de estas diversas composiciones deben ser
farmacéuticamente puros y no tóxicos en las cantidades
usadas.
usadas.
Los compuestos de fórmula I son generalmente
eficaces a lo largo de un amplio intervalo de dosificación. Por
ejemplo, las dosificaciones por día se encuentran normalmente dentro
del intervalo de aproximadamente 0,0001 mg/kg a aproximadamente 30
mg/kg de peso corporal. En algunos casos, niveles de dosificación
por debajo del límite inferior del intervalo mencionado
anteriormente pueden ser más que adecuados, mientras que en otros
casos pueden emplearse dosis todavía mayores sin provocar ningún
efecto secundario perjudicial, y por tanto no se pretende que el
intervalo de dosificación anterior limite el ámbito de la invención
de ningún modo. Se entenderá que la cantidad del compuesto
administrado realmente la determinará un médico, en vista de las
circunstancias relevantes, incluyendo la afección que va a tratarse,
la vía de administración elegida, el compuesto o compuestos reales
administrados, la edad, el peso y la respuesta del paciente
individual, y la gravedad de los síntomas del paciente.
Claims (15)
1. Un compuesto de fórmula I:
en la
que:
- \quad
- R^{1} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} o tolilo;
- \quad
- W es 1-(4-metilsulfonilbenzoil)-piperidin-4-il-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-iloxi]naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-(alcoxi C_{1}-C_{2})-naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-fenil-, (1-Y-piperidin-4-iloxi)-fenil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperazin-4-il]-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-fenil- o 4-[1-(piridin-4-ilmetil)-piperazin-4-ilcarbonil]-fenil- en los que fenilo está opcionalmente sustituido con uno a dos sustituyentes del grupo constituido por halógeno, metilo y trifluorometilo;
- \quad
- Y es -C(O)-R^{2}, alquilsulfonilo C_{1}-C_{3} o ciclopropilsulfonilo; y
- \quad
- R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}-(alquilo C_{1}-C_{6}), amino, benciloxi, indolilo, tetrahidrofurilo, piperidinilo, triclorometilo, ciclopentilmetilo, ciclocalquilo C_{3}-C_{5} opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por fenilo, alquilo C_{1}-C_{4} y halógeno, piridinilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por alcoxilo C_{1}-C_{4} y halógeno, tienilo opcionalmente sustituido con 1-2 halógenos o sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, pirrolilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, imidazolilo, pirazolilo opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4} o fenilo sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alcoxilo C_{1}-C_{4}, 2-(dimetilamino)etoxilo y morfolin-4-ilmetilo;
o una sal farmacéuticamente
aceptable del
mismo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que W es
1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il-fenil-
(1-Y-piperazin-4-il)-fenil-
o
(1-Y-piperidin-4-iloxi)-fenil-.
3. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, en el que R^{1} es metilo.
4. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, en el que R^{1} es tolilo.
5. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, en el que Y es
C(O)-R^{2}.
6. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 5, en el que R^{2} es fenilo sustituido
1-2 veces con halógeno.
7. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 5, en el que R^{2} es ciclopropilo.
8. Una formulación farmacéutica que comprende un
compuesto de fórmula I:
en la
que:
- \quad
- R^{1} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4} o tolilo;
- \quad
- W es 1-(4-metilsulfonilbenzoil)-piperidin-4-il-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-iloxi]naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-(alcoxi C_{1}-C_{2})-naftil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperidin-4-il]-fenil-, (1-Y-piperidin-4-iloxi)-fenil-, [1-(2,6-diclorobenzoil)-piperazin-4-il]-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-metil-fenil-, (1-Y-piperazin-4-il)-fenil- o 4-[1-(piridin-4-ilmetilpiperazin-4-ilcarbonil]-fenil- en los que fenilo está opcionalmente sustituido con uno a dos sustituyentes del grupo constituido por halógeno, metilo y trifluorometilo;
- \quad
- Y es -C(O)-R^{2}, alquilsulfonilo C_{1}-C_{3} o ciclopropilsulfonilo; y
- \quad
- R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}-(alquilo C_{1}-C_{6}), amino, benciloxi, indolilo, tetrahidrofurilo, piperidinilo, triclorometilo, ciclopentilmetilo, ciclocalquilo C_{3}-C_{5} opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por fenilo, alquilo C_{1}-C_{4} y halógeno, piridinilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por alcoxilo C_{1}-C_{4} y halógeno, tienilo opcionalmente sustituido con 1-2 halógenos o sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, pirrolilo opcionalmente sustituido con 1-2 sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, imidazolilo, pirazolilo opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes alquilo C_{1}-C_{4}, o fenilo sustituido con 1-2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxilo, alcoxilo C_{1}-C_{4}, 2-(dimetilamino)etoxilo y morfolin-4-ilmetilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un diluyente, excipiente, o vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para su uso como producto farmacéutico.
10. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para su uso en el tratamiento de afecciones
que resultan de la producción excesiva de citocinas.
11. Un compuesto según la reivindicación 10, en
el que la citocina es el factor de necrosis tumoral \alpha.
12. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para su uso en la inhibición del crecimiento
de neoplasias susceptibles y/o la inhibición o la prevención de
metástasis.
13. Uso de un compuesto tal como se define en
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de afecciones que resultan de la
producción excesiva de citocinas.
14. Uso según la reivindicación 13, en la que la
citocina es el factor de necrosis tumoral \alpha.
15. Uso de un compuesto tal como se define en
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la fabricación de un
medicamento para la inhibición del crecimiento de neoplasias
susceptibles y/o la inhibición o la prevención de metástasis.
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