ES2312788T3 - Procedimiento de diagnostico fotodinamico para enfermedades vasculares. - Google Patents
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Abstract
El uso de un derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I) (Ver fórmula) en la que Asp representa un residuo de ácido aspártico; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de queratosis inflamatoria mediante terapia fotodinámica (TFD).
Description
Procedimiento de diagnóstico fotodinámico para
enfermedades vasculares.
La presente invención se refiere a agentes
terapéuticos concebidos para su uso en terapia fotodinámica (TFD)
de queratosis inflamatoria, y que contienen como ingrediente activo
un derivado de ácido aspártico iminoclorado o una sal de mismo
farmacéuticamente aceptable.
Las terapias fotodinámicas (TFD) han emergido
como una nueva forma de tratamiento de cáncer. En TDF, un derivado
de porfirina determinado se inyecta intravenosamente y se deja que
se acumule, de forma preferente, en los tejidos cancerosos (tumor).
Posteriormente, se irradia con luz de láser para destruir
selectivamente los tejidos cancerosos. La técnica aprovecha dos
propiedades únicas de los derivados de porfirina: su capacidad para
acumularse selectivamente en tejidos cancerosos y su capacidad
fotosensibilizante.
Los presentes inventores han llevado a cabo
estudios exhaustivos para desarrollar derivados de porfirina
potentes para su uso en TFD y, hasta el momento, han propuesto
varios derivados de porfirina de un único componente, que se
eliminan rápidamente de los tejidos normales y que presentan una
fototoxicidad reducida, a la vez que mantienen la capacidad de
acumularse de forma selectiva y estable en los tejidos
cancerosos.
Un ejemplo es un derivado de ácido aspártico
iminoclorado, un derivado de porfirina que es adecuado para su uso
con un láser de titanio zafiro (longitudes de onda de 600 nm o
inferior y de 670 o superior) o un láser de diodo (670 nm) y tiene
la estructura representada por la fórmula (I) siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que Asp representa un residuo
de ácido
aspártico
Entre los derivados del ácido aspártico
iminoclorados representados por la fórmula (I) y las sales de los
mismos farmacéuticamente aceptables, una sal de sodio denominada
ATX-S10.Na, muestra una selectividad particularmente
alta por los tejidos cancerosos y las neovascularizaciones. Se ha
comprobado que el compuesto es altamente efectivo como un agente de
TFD para el tratamiento de tumores y degeneración macular
relacionada con la edad, y se ha presentado ya una solicitud de
patente que reivindica este aspecto del compuesto (WO 98/14453).
Distintas enfermedades van acompañadas por
angiogénesis, incluyendo la artritis reumatoide y queratosis
inflamatoria.
La artritis reumatoide es una enfermedad de
colágeno caracterizada por inflamación vascular y se especula que
está provocada por una respuesta inmune anormal. Las causas exactas
de la enfermedad, sin embargo, no se conocen todavía y no se han
establecido aún tratamientos efectivos. Los tratamientos actuales
para la artritis reumatoide incluyen tratamientos con fármacos,
tales como agentes anti-inflamatorios, esteroides y
agentes anti-reumáticos, así como tratamientos
quirúrgicos, tales como el reemplazo de una articulación por otra
artificial. Sin embargo, ninguno de estos tratamientos es
suficientemente efectivo para curar la enfermedad. Trauner et
al., examinaron la posibilidad de usar TFD en el tratamiento de
la artritis reumatoide y se ha concedido ya una patente a estos
inventores (Patente de EE.UU. nº 5.368.841). No obstante, los
fotosensibilizadores revelados en esta patente podrían presentar
fototoxicidad debido a que los compuestos no son suficientemente
selectivos para acumularse en un tejido particular, si no que
permanecen en el cuerpo durante un periodo de tiempo prolongado.
La queratosis inflamatoria, por otra parte, es
una enfermedad de la piel en la que tiene lugar "inflamación",
una afección provocada cuando se expanden los vasos sanguíneos
epidérmicos permitiendo que los linfocitos y otros leucocitos se
infiltren en la piel, junto con "queratosis", un engrosamiento
de la epidermis y la córnea. Los tratamientos para la enfermedad
incluyen agentes anti-inflamatorios tales como
esteroides, inhibidores del crecimiento epidérmico tales como los
retinoides, y tratamientos con luz UV (por ejemplo, PUVA), pero
ninguno ofrece una cura
decisiva.
decisiva.
En "Trends Biotechnol"., vol. 13 (1), 1995,
p. 14-18, se revela que la psoriasis se puede tratar
por TFD.
Recientemente, la aplicación de TFD usando
clorhidrato del ácido 5-aminolevulínico
(5-ALA) ha emergido como un tratamiento efectivo.
Se conoce que el precursor de la biosíntesis de protoporfirina IX,
5-ALA, presenta algunas propiedades químicas de la
protoporfirina IX: no se acumula fácilmente en las
neovascularizaciones y sólo puede absorber luz a las longitudes de
onda de 630 nm, como máximo. Estas propiedades limitan los efectos
terapéuticos del tratamiento con 5-ALA.
Al mismo tiempo, los presentes inventores
dirigieron su atención a la capacidad del derivado de ácido
aspártico iminoclorado de fórmula (I) y de las sales del mismo
farmacéuticamente aceptables, para acumularse selectivamente en las
neurovasculizaciones, y llevaron a cabo investigaciones exhaustivas
para examinar la posibilidad de utilizar estos compuestos como
agentes terapéuticos potenciales para TFD. Estos esfuerzos
condujeron, finalmente, al descubrimiento de que
ATX-S10.Na, una sal del sodio del compuesto,
presenta una capacidad superior para acumularse en las células
inflamatorias responsables de la angiogénesis, no sólo cuando se usa
en estados de enfermedad tales como cánceres o trastornos
oftálmicos, sino también en otros estados de enfermedad,. Los
presentes inventores han descubierto también que cuando se usa en
TFD, ATX-S10.Na puede funcionar como una cura
altamente efectiva para distintas enfermedades de la piel, tales
como la queratosis inflamatoria (dermatitis tal como
psoriasis).
psoriasis).
Entre los derivados del ácido aspártico
iminoclorados, representados por la fórmula (I), y a las sales de
los mismos farmacéuticamente aceptables, ATX-S10.Na,
una sal de sodio, es conocida por emitir luz fluorescente roja a
670 nm, cuando se irradia con luz con una longitud de onda de
excitación apropiada (por ejemplo, 400 nm) y se puede usar, de esta
forma, para proporcionar un diagnóstico definitivo de la
localización de un tumor. Estos son hechos ya
revelados.
revelados.
En las operaciones quirúrgicas para eliminar
tumores, una determinación precisa de la localización del tumor
ayuda a evitar una eliminación innecesaria de tejidos normales y
mejora la calidad de vida de los pacientes al reducir su carga.
La cirugía del cáncer está acompañada,
frecuentemente, de quimioterapia para reducir el riesgo de
metástasis. Sin embargo, la quimioterapia va acompañada,
normalmente, de efectos secundarios y es preferible evitarla si es
posible.
Para determinar la presencia de metástasis,
recientemente se está realizando la biopsia de los nódulos
linfáticos centinelas. Los nódulos linfáticos centinelas (que se
pueden referir como "SN" de aquí en adelante) son los primeros
nódulos linfáticos que reciben drenaje desde un cáncer. Si los
resultados de la biopsia SN no indican la presencia de metástasis,
se podría evitar la eliminación de los nódulos linfáticos de
alrededor y, de esta forma, se podría reducir el riesgo de
complicaciones, tales como una actividad inmune disminuida, así como
la probabilidad de quimioterapia
post-operativa.
Las técnicas de tinción con colorantes y las
técnicas de radioisótopos se utilizan actualmente para determinar
la localización del SN. Sin embargo, los tejidos grasos del cuerpo y
los vasos linfáticos delgados hacen difícil llevar a cabo estas
técnicas sin una destreza significativa y, de este modo, dificultan
la localización exacta del SN.
Los presentes inventores, interesados por la
capacidad del derivado de ácido aspártico iminoclorado y de las
sales del mismo farmacéuticamente aceptables, para emitir
fluorescencia, han realizado un esfuerzo para desarrollar un agente
de diagnóstico que permita la determinación de la localización del
SN y el diagnóstico de la presencia de metástasis cancerosas. Los
presentes inventores descubrieron posteriormente que estos
compuestos pueden funcionar como agentes de diagnóstico altamente
efectivos para la localización del SN y para el diagnóstico de la
presencia de metástasis cancerosas.
De acuerdo con esto, un objetivo de la presente
invención es proporcionar un agente terapéutico para su uso en una
terapia fotodinámica (TFD) de queratosis inflamatoria
\vskip1.000000\baselineskip
Un aspecto esencial de la presente invención se
refiere a un agente terapéutico para su uso en una terapia
fotodinámica (TFD) de queratosis inflamatoria. Este agente contiene,
como un ingrediente activo, un ácido aspártico iminoclorado,
representado por la fórmula (I) siguiente, o una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable:
en la que Asp representa un residuo
de ácido
aspártico.
Específicamente, el aspecto esencial de la
presente invención es particular debido a que la capacidad del
derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I) y a las
sales del mismo farmacéuticamente aceptables, para acumularse en
neovacularizaciones o células tumorales, se aprovecha para la
realización de TFD.
Un ejemplo de enfermedad provocada por
angiogénesis es la queratosis inflamatoria. La queratosis
inflamatoria es una enfermedad de la piel caracterizada por
enrojecimiento y queratinización, un síntoma notable de inflamación.
La enfermedad incluye psoriasis y parapsoriasis, el tratamiento de
las cuales requiere agentes fuertes tales como esteroides. Sin
embargo, el derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I),
o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, se acumula de
forma efectiva en las células inflamatorias
sub-epidérmicas cuando se administra de forma
percutánea, y mediante la exposición de la células a irradiación por
láser para realizar TFD, la enfermedad se puede tratar de forma
efectiva.
De esta forma, la presente invención se refiere
a un medicamento para el tratamiento efectivo de la queratosis
inflamatoria. El medicamento comprende el derivado de ácido
aspártico iminoclorado de fórmula (I), o una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable, para su uso en TFD para inducir
necrosis de las células inflamatorias
sub-epidérmicas. Esta forma de realización se
refiere también a un agente terapéutico para su uso en TFD de
queratosis inflamatoria (incluye enfermedades de la piel tales como
psoriasis) que contiene como un ingrediente activo al derivado de
ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I), o a una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable.
La presente invención ha revelado que, entre los
derivados del ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I) y de las
sales del mismo farmacéuticamente aceptables, es particularmente
efectiva una sal de sodio conocida como ATX-S10.Na.
Así, la presente invención se refiere a un medicamento para su uso
en TFD de queratosis inflamatoria y a un agente terapéutico para su
uso en TFD de queratosis inflamatoria; en el que el derivado de
ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I), o una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable, comprende ATX-S10.Na,
una sal de sodio.
La Figura 1 es una gráfica que muestra la
viabilidad de HUVEC en TFD usando la sal ATX-S10.Na
de la presente invención.
La Figura 2 comprende fotografías que muestran
la apariencia visual de un modelo de ratón en el que se inyectó
colágeno de tipo II para inducir artritis y no se proporcionó
irradiación con láser en TFD (grupo control).
La Figura 3 comprende fotografías que muestran
la apariencia visual de un modelo de ratón en el que se inyectó
colágeno de tipo II para inducir artritis y se irradió con láser en
TFD (grupo bajo análisis). Las fotografías muestran al ratón 7 días
después de la irradiación por láser.
La Figura 4 comprende microfotografías que
muestran un corte de tejido de la articulación de un modelo de de
ratón que padece artritis inducida por colágeno de tipo II, sin
proporcionar irradiación por láser en TFD (grupo control).
La Figura 5 comprende microfotografías que
muestran un corte de tejido de la articulación de un modelo de de
ratón que padece artritis inducida por colágeno de tipo II, después
de irradiación por láser en TFD (grupo bajo análisis).
La Figura 6 es una gráfica que muestra los
efectos citotóxicos de TFD utilizando la sal
ATX-S10.Na de la presente invención en
queratinocitos cultivados. Se añadieron 50 \mug/ml de la sal
ATX-S10.Na de la presente invención al cultivo
celular. Después de un periodo de cultivo predeterminado, las
células se lavaron con PBS y se irradiaron con láser a 10
J/cm^{2}. La viabilidad de los queratinocitos se determinó 1, 2,
3, 6, 12 y 24 horas después de la irradiación y se representó en
una gráfica.
La Figura 7 comprende imágenes de fluorescencia
de un modelo de ratón que tiene dermatitis, tomadas 3 horas después
de la aplicación de una pomada hidrófila, con o sin
ATX-S10.Na. Las fotografías corresponden (a) con
una pomada hidrófila que contenía ATX-S10.Na, y (b)
con una pomada hidrófila que no contenía
ATX-S10.Na.
La Figura 8 comprende microfotografías de
secciones de tejido de piel obtenidas a partir de un modelo de
dermatitis de ratón. Las fotografías se tomaron 3 horas después de
la aplicación de una pomada hidrófila, que contenía 1% de
ATX-S10.Na, a piel tratada con TFD. Las fotografías
corresponden (a) con irradiación por láser, y (b) sin irradiación
por láser.
La Figura 9 comprende imágenes de fluorescencia
tomadas después de la administración de fotofrina. Las dos
fotografías superiores muestran 5 minutos (izquierda) y 10 minutos
después de la administración. Las fotografías en el medio muestran
15 minutos (izquierda) y 20 minutos después de la administración.
Las fotografías inferiores muestran 25 minutos (izquierda) y 30
minutos después de la administración.
La Figura 10 comprende imágenes de fluorescencia
tomadas después de la administración de la sal
ATX-S10.Na de la presente invención. Las dos
fotografías superiores muestran 5 minutos (izquierda) y 10 minutos
después de la administración. Las fotografías en el medio muestran
15 minutos (izquierda) y 20 minutos después de la administración.
Las fotografías inferiores muestran 25 minutos (izquierda) y 30
minutos después de la administración.
Se describirán ahora en detalle formas de
realización individuales de la presente invención, en referencia a
los Ejemplos bajo análisis.
Se puede producir un derivado de ácido aspártico
iminoclorado de fórmula (I) y sales del mismo farmacéuticamente
aceptables, mediante, por ejemplo, un procedimiento descrito en el
documento WO 98/14453. Los ejemplos de sales farmacéuticamente
aceptables incluyen sales de sodio, sales de potasio y sales de
calcio. Entre éstas, son particularmente preferidas las sales de
sodio y una sal de sodio de un derivado de ácido aspártico
iminoclorado de fórmula (I) determinado, se denominó
ATX-S10.Na.
Como una primera etapa, los autores de la
memoria determinaron si se podía inducir muerte celular de HUVEC
inflamadas por TFD.
Las HUVEC se sembraron en medio de cultivo a 1,0
x 10^{-4} células/pocillo. Después de un periodo de cultivo
determinado previamente, se añadieron IL-1\beta (1
ng/ml) y TNF\alpha (10 ng/ml) para estimular a las células y,
así, provocar inflamación de las células. Después de un periodo de
estimulación de 1 hora, las células se dividieron en dos grupos, y
se añadieron 25 \mug/ml de la sal ATX-S10.Na de la
presente invención a un grupo y 50 \mug/ml de
ATX-S10.Na al otro. Posteriormente, las células se
incubaron a 37ºC durante 24 horas.
Después del periodo de incubación, las células
cultivadas se irradiaron por láser (cada grupo de dosificación se
dividió en cinco sub-grupos, que se irradiaron a 0,
15, 30, 50 y 100 J/cm^{2}). Veinticuatro horas después de la
irradiación, se determinó la viabilidad de HUVEC mediante un ensayo
MTT.
Los resultados indican que no se observó muerte
celular en los grupos no irradiados mientras que la viabilidad de
HUVEC estuvo en el intervalo entre aproximadamente el 10 y el 20% en
cada uno de los grupos irradiados (los grupos irradiados a 15, 30,
50 y 100 J/cm^{2}). Cada uno de los grupos a los que se suministró
25 \mug/ml de ATX-S10.Na mostró una viabilidad
comparable a la del grupo correspondiente a los que se había
suministrado 50 \mug/ml (Figura 1).
Estos resultados sugieren que
ATX-S10.Na, cuando se usan en TFD, induce muerte
celular de HUVEC inflamadas.
A continuación, usando un modelo de ratón real
con artritis inducida por colágeno de tipo II, los autores de la
memoria realizaron el análisis siguiente para examinar los efectos
que la TFD tiene en artritis, usando
ATX-S10.Na.
Se usaron ratones macho DBA/1, de 6 a 8 semanas
edad y que pesaban de 15 a 18 g. La artritis se indujo por colágeno
de tipo II según el protocolo siguiente.
En el Día 0, se inyectaron intraperitonealmente
2 mg de una mezcla de anticuerpos anti-colágeno tipo
II. En el Día 1, se inyectaron de nuevo intraperitonealmente 2 mg
de la mezcla de anticuerpos anti-colágeno tipo II.
En el Día 2 y Día 3, se inyectaron intraperitonealmente 50 \mug de
lipopolisacárido (LPS) para inducir la artritis por colágeno de
tipo II.
En el Día 5, se confirmó la inducción de la
artritis por colágeno de tipo II. Se inyectaron intravenosamente 5
mg/kg de ATX-S10.Na a un grupo bajo análisis de 5
animales y un grupo control de 3 animales. El grupo bajo análisis
se expuso a irradiación por láser (dosis: 30 J/cm^{2}) 3 horas
después de la administración de ATX-S10.Na. En el
Día 14, se observó la presencia de efectos clínicos en cada uno de
los animales, medida por un sistema de calificación de artritis
clínica (Terato et al., 1995). Cada uno de los animales se
sometió a fijación por perfusión, se recogió tejido de las
articulaciones y se tiñó con Safranina 0. La muestra de tejido
descalcificada resultante se sometió a un análisis histológico.
Los resultados del análisis revelaron que el
grupo control no irradiado presentaba síntomas de artritis de forma
continua, y tenía una calificación de artritis de 4 (Figura 2),
mientras que no se observaron síntomas artríticos, o se observaron
pocos, en el grupo bajo análisis irradiado, lo que indicaba una
calificación de artritis de 0 ó 1
(Figura 3).
(Figura 3).
En el análisis histológico, se observó una
infiltración significativa de células sinoviales en el grupo control
(Figura 4), mientras que la infiltración se suprimió en el grupo
bajo análisis (Figura 5).
Estas observaciones demuestran que
ATX-S10.Na, un derivado de ácido aspártico
iminoclorado de la presente invención, es altamente eficiente
cuando se usa en TFD para tratar artritis reumatoide.
Los derivados de porfirina convencionales están
acompañados de fotosensibilidad y otros efectos secundarios debido
a que tienen una capacidad relativamente baja para acumularse de
forma selectiva en un tejido particular y se metabolizan lentamente
en tejidos normales. Así, los tratamientos con estos derivados de
porfirina se deben llevar a cabo en un ambiente oscuro. En
contraste con esto, ATX-S10.Na, el derivado de ácido
aspártico iminoclorado de la presente invención, tiene una alta
capacidad para acumularse de forma selectiva en células inflamadas
y tumores, a la vez que se metaboliza rápidamente en tejidos
normales. Así, el ATX-S10.Na provoca, si es que
provoca alguno, efectos secundarios reducidos tales como
fotosensibilidad. Además, el compuesto absorbe luz con una longitud
de onda que penetra más profundamente en el tejido (670 nm) y, de
esta forma, se puede usar en terapias en las que se usan fuentes
externas de luz de láser.
Los reumatismos articulares, en particular, los
sinoviocitos intratables resistentes al tratamiento con fármacos,
se tratan generalmente por inyección intraauricular de esteroides,
por sinovectomía artroscópica y por sinovectomía abierta. La
administración de esteroides se asocia con el riesgo a infección y
es invasiva. También, algunos esteroides son inapropiados para la
administración repetitiva en las articulaciones. La sinovectomia
abierta o artroscópica requiere hospitalización, es invasiva y
requiere, algunas veces, una rehabilitación considerable.
En comparación con esto, la aplicación de TFD
para tratar artritis reumatoide implica la inyección intravenosa
del fotosensibilizador que se acumula de forma selectiva en las
articulaciones inflamadas, y la posterior irradiación externa con
láser de las articulaciones para inducir necrosis de las células
sinoviales y, de ese modo, suprimir la destrucción de las
articulaciones. Por tanto, el procedimiento ofrece una terapia no
invasiva, altamente efectiva.
Una segunda forma de realización de la presente
invención se refiere a un procedimiento TFD para el tratamiento de
queratosis inflamatoria (psoriasis y otras enfermedades de la piel)
y a un agente terapéutico para su uso en TFD de queratosis
inflamatoria. El procedimiento TFD o el agente terapéutico,
comprende como un ingrediente activo un derivado de ácido aspártico
iminoclorado de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente
aceptable, en particular ATX-S10.Na, una sal de
sodio del compuesto.
La queratosis inflamatoria es una enfermedad de
la piel caracterizada por enrojecimiento y queratinización, un
síntoma notable de inflamación. La enfermedad incluye psoriasis y
parapsoriasis con sus características clínicas particulares, que
incluyen eritrodermia psoriatica, psoriasis artropática y psoriasis
pustular.
Los presentes inventores aprovecharon la
capacidad del derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula
(I), o de una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en
particular ATX-S10.Na, para acumularse de forma
efectiva en células inflamadas, y prepararon una pomada hidrófila
que contenía ATX-S10.Na y una base de pomada
hidrófila, descrita en Japanese Pharmacopoeia.
Posteriormente, los inventores aplicaron la pomada a la piel, la
eliminaron de la piel mediante lavado y obtuvieron una imagen de
fluorescencia, que confirmó que ATX-S10.Na se
acumulaba en la piel.
Mediante irradiación por láser en esta etapa
para realizar TFD, se puede inducir necrosis de las células
inflamadas y, de esta forma, la queratosis inflamatoria se debería
tratar de forma efectiva. Los inventores realizaron el análisis
siguiente para verificar esta teoría.
Los queratinocitos de obtuvieron a partir de un
paciente con queratosis inflamatoria y se cultivaron a 37ºC durante
24 horas. Se añadieron 50 \mug/ml de la sal
ATX-S10.Na de la presente invención y las células se
cultivaron adicionalmente bajo las mismas condiciones.
Posteriormente, las células se aclararon con PBS, se irradiaron con
láser a 10 J/cm^{2} y se observó su viabilidad a lo largo del
tiempo.
Asumiendo que el número inicial de células
viables en el medio de cultivo antes de la irradiación por láser
era el 100%, la viabilidad de las células se determinó a 1, 2, 3, 6,
12 y 24 horas después de la irradiación. Los resultados se muestran
en la Figura 6. Como se muestra, el 75% de los queratinocitos
incubados con ATX-S10.Na murieron 6 horas después
de la irradiación por láser.
Los inventores realizaron el siguiente análisis,
usando un modelo de dermatitis en ratón, para examinar los efectos
de TFD usando ATX-S10.Na en la enfermedad.
Usando una base de pomada hidrófila, descrita en
Japanese Pharmacopoeia, se prepararon dos pomadas hidrófilas,
una que contenía un 1% de ATX-S10.Na y la otra un
10% del compuesto, mediante una técnica farmacéutica común.
Se afeitaron ratones macho DBA/1, de 6 a 8
semanas edad y que pesaban de 15 a 18 g, con unas tijeras y una
cuchilla de afeitar. Posteriormente, se aplicó TFD en la piel para
inducir dermatitis.
3) Se aplicó una pomada hidrófila que contenía
un 1% de ATX-S10.Na al grupo bajo análisis. La
pomada se aplicó en la región de la piel en la que se había
inducido dermatitis y se aclaró después de 3 horas. Se aplicó una
pomada hidrófila sin ATX-S10.Na al grupo control y
también se aclaró después de la aplicación. Las imágenes de
fluorescencia obtenidas 3 horas después de la aplicación mostraron
una fluorescencia rojiza en el grupo bajo análisis, pero no en el
grupo control, lo que indicaba la presencia de
ATX-S10.Na acumulada en la piel (Figura 7).
El grupo bajo análisis se dividió posteriormente
en dos subgrupos: un grupo se irradió con un láser a 100 J/cm^{2}
y el otro grupo no se irradió. Se observó la histología de la piel
de cada animal.
Los resultados indican que la dermatitis
provocada por TFD (región inflamada) se mantuvo en el grupo no
irradiado mientras que se observó una disminución significativa en
la región inflamada en el grupo irradiado. Esto demuestra que
cuando se usa TFD, la sal ATX-S10.Na de la presente
invención, funciona para aliviar la dermatitis de forma
significativa.
Las microfotografías de secciones transversales
de los tejidos de piel con y sin irradiación con láser se muestran
en la Figura 8.
De esta forma, se ha demostrado que el derivado
de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I), o una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable, en particular
ATX-S10.Na, se acumula de forma efectiva en las
células inflamadas. Las células se exponen posteriormente a
irradiación por láser en TFD para inducir necrosis de las células
inflamadas y, de ese modo, tratar la queratosis inflamatoria de
forma efectiva.
Se usaron ratones macho DBA/1, de 6 a 8 semanas
edad y que pesaban de 15 a 18 g. Se inocularon células cancerosas
Meth-A en la almohadilla de la pata de cada animal,
y se inyectaron 0,02 mg/20 \mul de ATX-S10.Na,
como compuesto bajo análisis, en la región del tumor. Mediante el
uso de un sistema de imagen de fluorescencia, se identificó la
localización del SN y se determinó la presencia de metástasis
cancerosas durante el periodo de los 30 minutos siguientes.
Como compuesto control, también se inyectó
intravenosamente un compuesto porfirina, la fotofrina.
\vskip1.000000\baselineskip
Las condiciones respecto al uso del sistema de
imagen de fluorescencia son como sigue:
Cámara: Cámara de color ICCD
Lentes: Micro-Nikkor f55 mm (F
2,8)
Filtros para cortar la luz de excitación:
Y52*2
Campo de visión: 39 mm
Luz de excitación: unidad de la fuente de luz
(L7212), lentes (E5147-06);
fibras ópticas (A2873)
Filtros: XYZ*2 + B39 + B37
Distancia de proyección: 145 mm
\vskip1.000000\baselineskip
Las condiciones respecto a la captura de imagen
son como sigue:
Ajustes estándar S-VHS
\rightarrow DV \rightarrow DV Raptor (video DV)
Tamaño de imagen: Marco 640x480 Formato DV
(Brillo = 128, contraste = 199, espesor del
color = 192, tinta = 128, agudeza = 1)
\vskip1.000000\baselineskip
La Figura 9 muestra las imágenes obtenidas para
fotofrina (denominada simplemente PF de aquí en adelante) como
compuesto control, y la Figura 10 muestra imágenes obtenidas para la
sal ATX-S10.Na de la presente invención (denominada
simplemente S10 de aquí en adelante).
Como se muestra, la localización de SN se indicó
claramente mediante la inyección de ATX-S10.Na.
Posteriormente, se recogió el SN y se puso en un
tubo de análisis. Se añadieron 500 \mul de 0,3% de ácido
tricloroacético/60% de una disolución acuosa de MeOH y el tejido se
sonicó a temperatura ambiente durante 10 minutos. El producto
sonicado se transfirió a un tubo eppendorf y se centrifugó (8000 x
g, 10 minutos, 4ºC). Se añadieron 200 \mul del sobrenadante a una
placa de 96 pocillos de fondo plano (Nalge Nunc 167008) y se
determinó la fluorescencia mediante un lector de fluorescencia de
placas (CytoFluor 2350, Millipore). La fluorescencia se midió a una
longitud de onda de excitación de 420 nm y una longitud de onda de
emisión de 645 nm. Se determinó que el nivel de
ATX-S10.Na en el SN era una cantidad traza de 10 a
20 ng/mg, lo que prueba la alta sensibilidad del procedimiento.
De esta forma, se puede determinar la
localización del SN mediante el uso de un derivado de ácido
aspártico iminoclorado de fórmula (I) de la presente invención. Una
vez que se ha localizado el SN, se lleva a cabo una biopsia para
determinar si el cáncer ha metastatizado.
La determinación de metástasis cancerosas en el
SN hace posible determinar si el cáncer ha metastatizado hacia el
sistema linfático completo y, de esta forma, ofrece una dirección
para el diagnóstico y tratamientos futuros.
Como se ha establecido, aprovechando la alta
capacidad del derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula
(I), en particular de ATX-S10.Na, una sal de sodio
del compuesto, para acumularse en células inflamadas, la presente
invención proporciona un agente terapéutico para su uso en TFD de
queratosis inflamatoria.
Respecto a los agentes terapéuticos para la
queratosis inflamatoria, ninguno de los agentes
anti-inflamatorios, inhibidores del crecimiento
epidérmico o terapias UV (por ejemplo, PUVA) convencionales,
proporciona un tratamiento decisivo. La aplicación de TFD usando
clorhidrato del ácido 5-aminolevulínico
(5-ALA) no proporciona tampoco efectos terapéuticos
suficientes, debido a la baja capacidad del compuesto para
acumularse en las neovascularizaciones y a la longitud de absorción
máxima del compuesto (630 nm). Contrastando con esto, los agentes
terapéuticos de la presente invención, que se pueden acumular de
forma efectiva en las células inflamatorias subepidérmicas, cuando
se administran de forma percutánea, se pueden usar en TFD, técnica
por la que los compuestos acumulados se exponen a irradiación por
láser para tratar de forma efectiva la enfermedad.
Claims (6)
1. El uso de un derivado de ácido aspártico
iminoclorado de fórmula (I)
en la que Asp representa un residuo
de ácido
aspártico;
o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable,
para la preparación de un medicamento para el tratamiento de
queratosis inflamatoria mediante terapia fotodinámica (TFD).
2. El uso según la reivindicación 1, en el que
el derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I), o una
sal del mismo farmacéuticamente aceptable, es una sal de sodio.
3. Un agente terapéutico para su uso en TFD de
queratosis inflamatoria, que comprende como un ingrediente activo
el derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I) de la
reivindicación 1, o una sal del mismo farmacéuticamente
aceptable.
4. El agente terapéutico según la reivindicación
3, en el que el derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula
(I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, es una sal de
sodio.
5. El uso del derivado de ácido aspártico
iminoclorado de fórmula (I) de la reivindicación 1, o de una sal
del mismo farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un
medicamento para su uso en TFD de queratosis inflamatoria.
6. El uso según la reivindicación 5, en el que
el derivado de ácido aspártico iminoclorado de fórmula (I), o una
sal del mismo farmacéuticamente aceptable, es una sal de sodio.
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