ES2314127T3 - Compuestos de succinimida heterociclicos fusionados y sustancias analogas, moduladores del receptor hormonal nuclear. - Google Patents

Compuestos de succinimida heterociclicos fusionados y sustancias analogas, moduladores del receptor hormonal nuclear. Download PDF

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James Aaron Balog
Dacia A. Pickering
Soren Giese
Aberra Fura
Wenying Li
Ramesh N. Patel
Ronald L. Hanson
Toomas Mitt
Jacques Roberge
James R. Corte
Steven H. Spergel
Richard A. Rampulla
Raj Misra
Hai-Yun Xiao
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Abstract

Compuesto que tiene la fórmula: (Ver fórmula)

Description

Compuestos de succinimida heterocíclicos fusionados y sustancias análogas, moduladores del receptor hormonal nuclear.
La presente invención se refiere a dos compuestos fusionados cíclicos, a su uso en el tratamiento de afecciones asociadas al receptor hormonal nuclear tales como cáncer, y a composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos.
Los receptores hormonales nucleares (RHN) constituyen una gran superfamilia de factores de trascripción específicos de secuencia y dependientes de ligandos. Miembros de esta familia influyen en la trascripción bien directamente, mediante unión específica a los genes diana promotores (Evans, en Science 240: 889-895 (1988)), o indirectamente, por interacciones de proteína-proteína con otros factores de trascripción (Jonat et al., Cell 62: 1189-1204 (1990), Schuele et al., Cell 62: 1217-1226 (1990), y Yang-Yen et al., Cell 62: 1205-1215 (1990)). La superfamilia de receptores hormonales nucleares (también conocida en la técnica como ``la superfamilia de receptores hormonales esteroideos/tiroideos) incluye receptores de diversos ligandos hidrófobos, incluyendo cortisol, aldosterona, estrógeno, progesterona, testosterona, vitamina D3, hormona tiroidea y ácido retinóico (Evans, 1988, supra). Además de estos receptores hormonales nucleares convencionales, la superfamilia contiene una serie de proteínas que no tienen ligandos conocidos denominados receptores hormonales nucleares huérfanos (Mangelsdorf et al., Cell 83: 835-839 (1995), O'Malley et al., Mol. Endocrinol. 10: 1293 (1996), Enmark et al., Mol. Endocrinol. 10, 1293-1307 (1996) y Giguere, Endocrin. Rev. 20, 689-725 (1999).Los receptores hormonales nucleares convencionales son generalmente transactivadores en presencia de ligando, y pueden ser, bien represores activos o trascripcionalmente inertes en ausencia de ligando. Algunos de los receptores huérfanos se comportan como si fuesen trascripcionalmente inertes en ausencia de ligando. Otros, sin embargo, se comportan bien como activadores constitutivos o represores. Estos receptores hormonales nucleares huérfanos están bien bajo el control de ligando ubicuos que no han sido identificados, o no necesitan unirse a un ligando para ejercer estas actividades.
Los receptores hormonales nucleares tiene en común con otros factores de trascripción, una estructura modular, que comprende tres dominios distintos: un dominio terminal N de dimensión variable que contiene una función de activación trascripcional AF-1, un dominio de unión a ADN conservado y un dominio de unión a ligando conservado. El dominio de unión a ligando no es solamente responsable de unir el ligando específico sino que también contiene una función de activación trascripcional denominada AF-2 y un dominio de dimerización (Wurtz et al., Nature Struc. Biol. 3, 87-94 (1996), Parker et al., Nature Struc. Biol. 3, 113-115 (1996) y Kumar et al., Steroids 64, 310-319 (1999)). Aunque la secuencia de proteína completa de estos receptores puede variar considerablemente, ambos comparten una disposición estructural indicativa de un arquetipo ancestral, y una homología sustancial (especialmente, identidad de secuencia) en el dominio de unión a ligando.
Los receptores hormonales nucleares de unión a esteroides (SB-NHR) comprenden una subfamilia de receptores hormonales nucleares. Estos receptores están relacionados los unos con los otros porque comparten una homología de secuencia más fuerte, particularmente en el dominio de unión a ligando (LBD), que los otros miembros de la superfamilia NHR (Evans, 1988, supra) y todos utilizan ligandos a base de esteroides. Algunos ejemplos de esta subfamilia de NHR son el receptor de andrógeno (AR), el receptor de estrógeno (ER), el receptor de progesterona (PR), el receptor de glucocorticoide (GR), el receptor de mineralcorticoide (MR), el receptor de aldosterona (ALDR) y el receptor de esteroide y xenobiótico (SXR) (Evans et al., WO 99/35246). Basado en la fuerte homología de secuencia en el LBD, diversos receptores huérfanos también pueden ser miembros de la subfamilia SB-NHR.
En consonancia con la alta homología de secuencia encontrada en el LBD para cada uno de los Sb-NHR, los ligandos naturales para cada uno se derivan de un núcleo esteroideo común. Ejemplos de algunos ligandos basados en esteroides utilizados por miembros de los SB-NHR incluyen cortisol, aldosterona, estrógeno, progesterona, testosterona y dihidrotestosterona. Se obtiene la especificidad de un ligando particular basado en esteroides para un SB-NHR respecto de otro por sustitución diferencial alrededor del núcleo esteroideo. Se puede conseguir una unión de alta afinidad a un SB-NHR con una especificidad de nivel alto para ese SB-NHR particular, con solamente cambios estructurales menores alrededor del núcleo esteroideo (por ejemplo, Waller et al., Toxicol. Appl. Pharmacol, 137, 219-227 (1996) y Mekenyan et al., Environ. Sci. Technol. 31, 3702-3711 (1997), binding affinity for progesterone towards the androgen receptor as compared to testosterone).
Se han descrito numerosos agonistas y antagonistas esteroideos y no-esteroideos derivados sintéticamente para los miembros de la familia SB-NHR. Muchos de estos ligandos agonistas y antagonistas se usan clínicamente en el ser humano para tratar diversas afecciones médicas. RU486 es un ejemplo de un agonista sintético del PR, que se utiliza como agente de control de la natalidad (Vegeto et al., Cell 69: 703-713 (1992)), y Flutamida es un ejemplo de un antagonista del AR, que se utiliza para el tratamiento del cáncer de próstata (Neri et al., Endo. 91, 427-437 (1972)). Tamoxifeno es un ejemplo de un modulador específico de tejidos de la función ER que se usa en el tratamiento del cáncer de pecho (Smigel, J. Natl. Cancer Inst. 90, 647-648 (1998)). Tamoxifeno también puede funcionar como un antagonista de ER en tejido de pecho mientras actúa como un agonista de ER en el hueso (Grese et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94,14105-14110 (1997)). Debido al hecho de que los efectos selectivos tisulares vistos para Tamoxifeno, este agente y los agentes similares se denominan "agonista parcial" o "antagonista parcial". Además de los ligandos no endógeno derivados sintéticamente, los ligandos no endógeno par NHR se pueden obtener a partir de fuentes alimentarias (Regal et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 223, 372-378 (2000) y Hempstock et al., J. Med. Food 2, 267-269 (1999)). Los fitoestrógenos flavanoides son un ejemplo de un ligando no natural para SB-NHR que se obtienen fácilmente a partir de una fuente alimentaria tal como la soja (Quella et al., J. Clin. Oncol. 18, 1068-1074 (2000) y Banz et al., J. Med. Food 2, 271-273 (1999)). La capacidad de modular la actividad trascripcional de NHR individual gracias a la adición de un pequeño ligando molecular, hace que sean objetivos ideales para el desarrollo de agentes farmacéuticos para diversos estados patológicos.
Como se ha mencionado anteriormente, los ligandos no naturales se pueden producir sintéticamente para servir de modulares de la función de NHR. En el caso de SB-NHR, la producción de un ligando no natural puede incluir la identificación de una estructural de núcleo que imita el sistema de núcleo esteroideo natural. Esto se pueden conseguir por cribaje aleatorio respecto de diversos SB-NHR o a través de enfoques directos usando las estructuras de cristal disponibles de diversos dominios de unión a ligando NHR (Bourguet et al., Nature 375, 377-382 (1995), Brzozowski, et al., Nature 389, 753-758 (1997), Shiau et al., Cell 95, 927-937 (1998) y Tanenbaum et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 95, 5998-6003 (1998)). La sustitución diferencial alrededor de dicho núcleo mímico esteroideo puede dar como resultado puede proporcionar agentes con selectividad par un receptor respecto de otro. Además, tales modificaciones se pueden emplear para obtener agentes con actividad agonista o antagonista para un SB-NHR particular. La sustitución diferencial alrededor del núcleo mímico esteroideo puede dar como resultado la formación de una serie de agonistas y antagonistas de alta afinidad con especificidad para, por ejemplo, ER respecto de PR respecto de AR respecto de GR respecto de MR. Tal enfoque de sustitución diferencial se ha indicado, por ejemplo, para moduladores basados en quinolina de NHR estroideo en J. Med. Chem., 41, 623 (1999); los documentos WO 9749709; US 5696133; US 5696130; US 5696127; US 5693647; US 5693646; US 5688810; US 5688808 y WO 9619458, todos incorporados a la presente memoria descriptiva por referencia.
Ch. Grogan describe isoindolinas e imidas bicíclicas en el J. Med. Chem., Vol. 6, No. 6, 1963, páginas 802-805. Los compuestos de la presente invención comprenden un núcleo que sirve de mímico esteroideo, y pueden ser útiles como moduladores de la función de receptores hormonales nucleares de unión, describiéndose, además, a continuación otro NHR.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona compuestos cíclicos fusionados que son especialmente útiles como moduladores de función de receptor hormonal nuclear.
La presente invención se refiere a un compuesto que tiene la fórmula:
1
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto que tiene la fórmula:
2
Se revelan también composiciones farmacéuticas que comprenden al menos uno de los compuestos anteriormente mencionados o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéuticamente aceptable puede comprender, además, otro agente anticáncer.
Los compuestos anteriormente mencionados, una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos. Son particularmente útiles para tratar una afección o un trastorno seleccionado en el grupo constituido por enfermedades proliferativas, cánceres, hipertrofia benigna de próstata, adenomas y neoplasias de la próstata, células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógeno, enfermedad cardiaca, afecciones o trastornos angiogénicos, hirsutismo, acné, hiperpilosidad, inflamación, modulación inmune, seborrea, endometriosis, síndrome de ovarios policísticos, alopecia androgénica, hipogonadismo, osteoporosis, espermatogénesis supresora, libido, caquexia, anorexia, inhibición de atrofia muscular en pacientes ambulatorios, suplementación de andrógeno para niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombre, cánceres que expresan el receptor de estrógeno, cáncer de próstata, cáncer de pecho, cáncer de endometrio, sofocos, sequedad vaginal, menopausia, amenorrea, dismenorrea, contracepción, interrupción de embarazo, cánceres que contienen el receptor de progesterona, sincronía de ciclo, meningioma, fibroides, inducción del parto, enfermedades autoinmunitarias, enfermedad de Alzheimer, trastornos sicóticos, dependencia de fármacos, Diabetes Mellitus no insulinodependiente, trastornos mediados por receptor de dopamina, insuficiencia cardiaca congestiva, desregulación de la homeostasis del colesterol, y atenuar el metabolismo de un agente farmacéutico, preferiblemente cáncer de próstata.
Los análogos de los compuestos actualmente reivindicados tienen la fórmula I:
3
Estos compuestos de la fórmula (I), con la excepción de los dos compuestos reivindicados, no son materia objeto de la presente invención.
Tal como se usa en la fórmula I, y a lo largo de toda la memoria, los símbolos tienen los siguientes significados a menos que se indique otra cosa, y se eligen, para cada caso de manera independiente:
G
es un grupo arilo o heterociclo (por ejemplo, heteroarilo), donde dicho grupo es mono- o policíclico, y que está opcionalmente sustituido en una o más posiciones, preferiblemente con h hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, halo, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilolquilo o arilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, CN, R_{1}OC=O,R^{1}C=O, R^{1}C=S, R^{1}HNC=O, R^{1}R^{2}NC=O, HOCR^{3}R^{3'}, nitro, R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2}, NR^{4}R^{5}, SR^{1}, S=OR^{1}, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1}, SO_{2}NR^{1}R^{1'}, (R^{1}O)(R^{1'}O)P=O, oxo, (R^{1})(R^{1'})P=O, o (R^{1'})(NHR^{1})P=O;
Z_{1}
es O, S, NH, o NR^{6};
Z_{2}
es O, S, NH, o NR^{6};
A_{1}
es CR^{7} o N;
A_{2}
es CR^{7} o N;
Y
es J-J'-J'' donde J es (CR^{7}R^{7'})n y n = 0-3, J' es un enlace o O, S, S=O, SO_{2}, NH, NR^{7}, C=O, OC=O, NR^{1}C=O, CR^{7}R^{7'}, C=CR^{8}R^{8'}, R^{2}P=O, R^{2}P=S, R^{2}OP=O, R^{2}NHP=O, OP=OOR^{2}, OP=ONHR^{2}, OP=OR^{2}, OSO^{2}, C=NR^{7}, NHNH, NHNR^{6}, NR^{6}NH, N=N, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido o arilo o arilo sustituido, y J'' es (CR^{7}R^{7'})n y n = 0-3, donde Y no es un enlace (es decir, si J' es un enlace, entonces en al menos uno de J o J'' cada uno definido como (CR^{7}R^{7'})n), n no es cero);
W
es CR^{7}R^{7'}-CR^{7}R^{7'}, CR^{8}=CR^{8'}, CR^{7}R^{7'}-C=O, C=O-C=O, CR^{7}R^{7'}-C=CH_{2}, C=CH_{2}-C=CH_{2}, CR^{7}R^{7'}-C= NR^{1}, CNR^{1}-C=NR^{1}, NR^{9}-CR^{7}R^{7'}, N=CR^{8}, N=N, NR^{9}-NR^{9'}, S-CR^{7}R^{7'}, SO-CR^{7}R^{7'}, SO_{2}-CR^{7}R^{7'}, cicloalquilo ocicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido, en la cual cuando W no es NR^{9}-CR^{7}R^{7'}, N=CR^{8}, N=N, NR^{9}-NR^{9'}, S-CR^{7}R^{7'}, SOCR^{7}R^{7'}, SO_{2}-CR^{7}R^{7'}, o heterociclo o heterociclo sustituido, entonces J' debe ser O, S, S=O, SO_{2}, NH, NR^{7}, OC=O, NR^{1}C=O, OP=OOR^{2}, OP=ONHR^{2}, OSO_{2}, NHNH, NHNR^{6}, NR^{6}NH, o N=N; o
cuando W es CR^{7}R^{7'}-CR^{7}R^{7'}, los sustituyentes R^{7} y R^{7'} cada vez que están presentes se pueden tomar juntos para formar un sistema de anillo carbocíclico sustituido o no sustituido o heterocíclico sustituido o no sustituido que se puede formar por cualquier combinación de R^{7} y R^{7'} fijado al mismo átomo de carbono;
Q_{1}
es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclo (por ejemplo, heteroarilo) heterociclo sustituido (por ejemplo., heteroarilo sustituido), halo, CN, R^{1}OC=O, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, HOCR^{7}R^{7'}, nitro, R^{1}OCH^{2}, R^{1}O, NH_{2}, C=OSR^{1}, SO_{2}R^{1} o NR^{4}R^{5};
Q_{2}
es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, arilo o arilo sustituido, heterociclo (por ejemplo, heteroarilo) o heterociclo sustituido (por ejemplo., heteroarilo sustituido), halo, CN, R^{1}OC=O, R^{4}C=O, R^{5}R^{6}NC=O, HOCR^{7}R^{7'}, nitro,R^{1}OCH_{2}, R^{1}O, NH_{2}, C=OSR^{1}, SO_{2}R^{1} o NR^{4}R^{5};
L
es un enlace, (CR^{7}R^{7'})n, NH, NR^{5}, NH (CR^{7}R^{7'})n, o NR^{5}(CR^{7}R^{7'})n, donde n = 0-3;
R^{1} y R^{1'} son cada uno independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido;
R^{2}
es alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido;
R^{3} y R^{3'} son cada uno independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, halo, CN, hidroxilamina, hidroxamida, alcoxi o alcoxi sustituido, amino, NR^{1}R^{2}, tiol, alquiltio o alquiltio sustituido;
R^{4}
es H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido o, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}OR^{1}, SO_{2}R^{1} o SO_{2}NR^{1}R^{1'};
R^{5}
es alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1}, o SO_{2}NR^{1}R^{1'};
R^{6}
es alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1}, o SO_{2}NR^{1}R^{1'};
R^{7} y R^{7'} son cada uno independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, halo, CN, OR^{4}, nitro, hidroxilamina, hidroxilamida, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NR^{5}R^{5}, NOR^{1}, tiol, alquiltio o alquiltio sustituido, HOC=O, R^{1}C=O, R^{1}(C=O)O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O, NH_{2}C=O, SO_{2}R^{1}, SOR^{1}, PO_{3}R^{1}R^{1'}, R^{1}R^{1'}NC=O, C=OSR^{1}, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1}, o SO_{2}NR^{1}R^{1'}, o, en la cual A_{1} o A_{2} contiene un grupo R^{7} y W contiene un grupo R^{7}, dichos grupos R^{7} de A_{1} o A_{2} y W juntos forman un anillo heterocíclico;
R^{8} y R^{8'} son cada uno independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalcyalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, nitro, halo, CN, OR^{1}, amino, NHR^{4}, NR^{2}R^{5}, NOR^{1}, alquiltio o alquiltio sustituido, C=OSR^{1}, R^{1}OC=O, R^{1}C=O, R^{1}NHC=O, R^{1}R^{1'}NC=O, SO_{2}OR^{1}, S=OR^{1}, SO_{2}R^{1}, PO_{3}R^{1}R^{1'}, o SO_{2}NR^{1}R^{1'}; y
R^{9} y R^{9'} son cada uno independientemente H, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido, cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo , arilo o arilo sustituido, arilalquilo o arilalquilo sustituido, CN, OH, OR^{1}, R^{1}C=O, R^{1}OC=O, R^{1}NHC=O, SO_{2}R^{1}, SO_{2}OR^{1}, o SO_{2}NR^{1}R^{1'}.
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Preferiblemente los compuestos reivindicados son monoméricos y no está comprendidos dentro de otros oligómeros o polímeros.
Los compuestos reivindicados y las sales de los mismos comprenden un núcleo que sirve de mímico esteroideo (y no requieren la presencia de una estructura de tipo esteroideo (por ejemplo análogo de ciclopentanoperhidrofenantreno).
Lo que sigue son definiciones de términos usados en la presente memoria. La definición inicial proporcionada par un grupo o término se aplica en le presente documento a ese grupo o término a lo largo de toda la presente memoria individualmente o como parte de otro grupo, a menos que se indique otra cosa.
El término "alquilo" y "alq" se refiere a un radical de alcano (hidrocarburo) de cadena recta o ramificada que contiene entre 1 y 12 átomos de carbono, preferiblemente 1 y 6 átomos de carbono. Ejemplarmente tales grupos incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, y similares. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto disponible de fijación. Ejemplarmente los sustituyentes incluyen pero no se limitan a uno o más de los siguientes grupos: halo (por ejemplo, un solo sustituyente halo o múltiples sustituyentes halo que forman, en el último caso, grupos tales como un grupo perfluoroalquilo o un grupo alquilo que lleva Cl_{3} o CF_{3}), alcoxi, alquiltio, hidroxi, carboxi (es decir, -COOH), alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, amino (es decir, -NH_{2}), carbamoilo o carbomoilo sustituido, carbamato o carbamato sustituido, urea o urea sustituida, amidinilo o amidinilo sustituido, tiol (es decir, -SH), arilo, heterociclo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, -S-arilo, -S-heterociclo, -S=O-arilo, -S=O-heterociclo, arilalquilo-O-, -S(O)_{2}-arilo, -S(O)_{2}-heterociclo, -NHS(O)_{2}-arilo, -NHS(O)_{2}-heterociclo, -NHS(O)_{2}NH-arilo, -NHS(O)_{2}NH-heterociclo -P(O)_{2}-arilo, -P(O)_{2}-heterociclo, -NHP(O)_{2}-arilo, -NHP(O)_{2}-heterociclo, -NHP(O)_{2}NH-arilo, -NHP(O)_{2}NH-heterociclo, -O-arilo, -O-heterociclo, -NH-arilo, -NH-heterociclo, -NHC=O-arilo, -NHC=O-alquilo, -NHC=O-heterociclo,
-OC=O-arilo, -OC=O-heterociclo, -NHC=ONH-arilo, -NHC=ONH-heterociclo, -OC=OO-arilo, -OC=OO-heterociclo, -OC=ONH-arilo, -OC=ONH-heterociclo, -NHC=OO-arilo, -NHC=OO-heterociclo, -NHC=OO-alquilo,
-C=ONH-arilo, -C=ONH-heterociclo, -C=OO-arilo, -C=OO-heterociclo, -N(alquil)S(O)_{2}-arilo, -N(alquil)S(O)_{2}-heterociclo, -N(alquil)S(O)_{2}NH-arilo, -N(alquil)S (O)_{2}NH-heterociclo, -N(alquil)P(O)_{2}-arilo, -N(alquilo)P(O)_{2}-heterociclo, -N(alquil)P(O)_{2}NH-arilo, -N(alquil)P(O)_{2}NH-heterociclo, -N(alquil)-arilo, -N(alquil)-heterociclo, -N(alquil)C=O-arilo, -N(alquil)C=O-heterociclo, -N(alquil)C=ONH-arilo, -N(alquilo) C=ONH-heterociclo, -OC=ON(alquil)-arilo, -OC=ON(alquil)-heterociclo, -N(alquil)C=OO-arilo, -N(alquil)C=OO-heterociclo, -C=ON(alquil)-arilo, -C=ON(alquil)-heterociclo, -NHS(O)_{2}N(alquil)-arilo, -NHS(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -NHP(O)_{2}N(alquil)-arilo, NHP(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -NHC=ON(alquil)-arilo, -NHC=ON(alquil)-heterociclo, -N(alquil)S(O)_{2}N(alquil)-arilo, -N(alquil)S(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -N(alquil)P(O)_{2}N(alquil)-arilo, -N(alquil)P(O)_{2}N(alquil)-heterociclo, -N(alquil)
C=ON(alquil)-arilo, y -N(alquil)C=ON(alquil)-heterociclo. En los sustituyente ejemplares anteriormente mencionados, en cada caso, los grupos tales como "alquilo", "arilo" y "heterociclo" pueden ellos mismos estar opcionalmente sustituidos; por ejemplo, "alquilo" en el grupo "NCH=OO-alquilo",mencionado anteriormente puede estar opcionalmente sustituido de manera que tanto "NHC=OO-alquilo" como "NHC=OO-alquilo sustituido" son sustituyentes ejemplares. Los sustituyentes ejemplares alquilo también incluyen grupos tales como "T" y "T-R^{12}" (que se definen más adelante), especialmente para alquilo sustituido, grupos en el interior de A_{1} o A_{2}.
El término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene entre 2 y 12 átomos de carbono y al menos un enlace doble carbono-carbono. Ejemplarmente tales grupos incluyen etenilo o aliol. "Alquenilo sustituido" se refiere a un grupo alquenilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto disponible de fijación. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan, a alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos anteriormente mencionados como sustituyentes ejemplares de alquilo.
El término "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o ramificada que contiene de 2 a 12 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono a carbono. Ejemplarmente tales grupos incluyen etinilo. "Alquinilo sustituido" se refiere a un grupo alquinilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes en cualquier punto disponible de fijación. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos anteriormente mencionados como sustituyentes ejemplares de alquilo.
El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo cíclico totalmente saturado de 1 a 4 anillos y 3 a 8 átomos de carbono por anillo. Ejemplarmente tales grupos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc. "Cicloalquilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyente en cualquier punto disponible de fijación. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan, a nitro, ciano, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos mencionados anteriormente como sustituyentes ejemplares de alquilo, y los mencionados anteriormente como sustituyentes preferidos de arilo en la definición para G. Los sustituyentes ejemplares incluyen también sustituyentes cíclicos fusionados o espirofijados, especialmente cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido.
El término "cicloalquenilo" se refiere a un grupo hidrocarburo cíclico parcialmente no saturado de 1 a 4 anillos y 3 a 8 átomos de carbono por anillo. Ejemplarmente tales grupos incluyen ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, etc. "Cicloalquenilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquenilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyente, en cualquier punto disponible de fijación. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan, a nitro, ciano, alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos mencionados anteriormente como sustituyentes ejemplares de alquilo, y los mencionados anteriormente como sustituyentes preferidos de arilo en la definición para G. Los sustituyentes ejemplares incluyen también sustituyentes cíclicos fusionados espirofijados, especialmente cicloalquilo o cicloalquilo sustituido.
El término "alcoxi" o "alquiltio" se refiere a un grupo alquilo como se ha descrito anteriormente enlazado a través de un enlace (-O-) o un enlace azufre (-S-), respectivamente. Los términos "alcoxi sustituido" o "alquiltio sustituido" se refieren a un grupo alquilo sustituido como se describe anteriormente enlazado a través de un enlace de oxígeno o azufre, respectivamente.
El término "alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo alcoxi enlazado a través de un grupo carbonilo.
El término "alquilcarbonilo" se refiere a un grupo alquilo enlazado a través de un grupo carbonilo. El término "alquilcarboniloxi" se refiere a un grupo alquilcarbonilo enlazado a través de un enlace oxígeno.
Los términos "arilalquilo", "arilalquilo sustituido", "cicloalquilalquilo", "cicloalquilalquilo sustituido," "cicloalquenilalquilo", "cicloalquenilalquilo sustituido", "heterocicloalquilo" y "heterocicloalquilo sustituido" se refieren a grupos arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo y heterociclo enlazados a través de un grupo alquilo sustituido sobre el grupo arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo o heterociclo y/o el grupo alquilo cuando se indica como "sustituido".
El término "arilo" se refiere a grupos hidrocarburo aromáticos cíclicos que tiene de 1 a 15 anillos aromáticos, especialmente grupos monocíclicos o bicíclicos tales como fenilo, bifenilo o naftiol. Cuando contienen dos o más anillos aromáticos (bicíclicos, etc.), los anillos aromáticos del grupo arilo se pueden unir en un solo punto (por ejemplo, bifenilo), o fusionar (por ejemplo, naftilo, fenantrenilo y similares). "Arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo sustituido por uno o más sustituyente, preferiblemente 1,2,3,4 o 5 sustituyentes, en cualquier punto de fijación. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, nitro, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, ciano, alquilo-S(O)m- (m=0, 1 o 2), alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos anteriormente mencionados como sustituyentes de alquilo ejemplares y los mencionados anteriormente como sustituyentes de arilo preferidos en la definición para G. Los sustituyentes ejemplares incluyen también sustituyentes cíclicos fusionados, tales como grupos heterociclo o cicloalquenilo, o heterociclo o cicloalquenilo sustituido (por ejemplo, formando de este modo un grupo fluoroenilo, tetrahidronaftalenilo, o dihidroindenilo).
"Carbamoilo" se refiere al grupo -CONH- que se enlaza sobre un extremo al resto de la molécula y sobre el otro al hidrógeno o un residuo orgánico (tal como alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterociclo, alquilcarbonilo, hidroxilo y nitrógeno sustituido). "Carbamato" se refiere al grupo -O-CO-NH- que se enlaza sobre un extremo al resto de la molécula y sobre el otro a un residuo orgánico (tal como los mencionados anteriormente). "Urea" se refiere al grupo -NH-CO-NH- que se enlaza sobre un extremo al resto de la molécula y sobre el otro a un residuo orgánico (tal como se ha mencionado anteriormente). "Amidinilo" se refiere al grupo -C(=NH)(NH_{2}). "Carbamoilo sustituido," "carbamato sustituido", "urea sustituida" y "amidinilo sustituido" se refieren a grupos carbamoilo, carbamato, urea o amidinilo tal como se han descrito anteriormente en los cuales los grupos hidrógeno se sustituyen por un residuo orgánico (tal como se ha mencionado anteriormente).
Los términos "heterociclo", "heterocíclico" y "heterociclo" se refieren a grupos cíclicos (por ejemplo sistemas de anillo de 3 a 7 miembros monocíclicos, 7 a 11 miembros bicíclicos o 10 a 16 miembros tricíclicos) aromáticos total o parcialmente saturados o total o parcialmente no saturados (es decir, "heteroarilo") c que contienen al menos un heteroátomo en al menos un anillo que contiene átomos de carbono. Cada anillo del grupo heterocíclico que contiene un heteroátomo puede tener 1, 2, 3, o 4 heteroátomos seleccionados entre átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno y/o átomos de azufre, cuando los heteroátomos de nitrógeno y azufre se puede opcionalmente oxidar y los heteroátomos de nitrógeno se pueden opcionalmente cuaternizar. (El término "heteroarilo" se refiere a un grupo heteroarilo que lleva un átomo de nitrógeno cuaternario y de este modo una carga positiva). El grupo heterocíclico se puede fijar al resto de la molécula en cualquier heteroátomo o átomo de carbono del anillo o sistema de anillos. Se entiende que, cuando W o W' son cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido, A_{1} y A_{2} se pueden enlazar por separado en diferentes átomos de anillo (tales como los adyacentes) sobre dichos grupos. Los grupos ejemplares monocíclicos, heterocíclicos incluyen óxido de etileno, azetidinilo, pirrolidinilo, pirrolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilotiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo,2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolodinilo, 2-oxoazepinilo, azepinilo, hexahidrodiazepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, triazolilo, tetrazolilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, sulfoxido de tiamorfolinilo, tiamorfolinilo sulfona, 1,3-dioxolano y tetrahidro-1,1-dioxotienilo, y similares. Los grupos ejemplares bicíclicos heterocíclicos incluyen indolilo, isoindolilo, benzotiazolilo, benzodioxolilo, benzoxazolilo, benzoxadiazolilo,benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, benzofurazanilo, cromonilo, coumarinilo, benzopiranilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,2-b]piridinilo] o furo[2,3-b]piridinilo), dihidrobenzodioxiniol, dihidrodioxidobenzotiofenilo, dihidroisoindolilo, dihidroindolilo, dihidroquinolinilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxoquinazolinilo), triazinilazepinilo, tetrahidroquinolinilo y similares. Los grupos ejemplares tricíclicos heterocíclicos incluyen carbazolilo, benzidolilo, fenantrolinilo, dibenzofuranilo, acridinilo, fenantridinilo, xanteniol y similares.
"Heterociclo sustituido,""heterocíclico sustituido," y "heterociclo sustituido" (tal como "heteroarilo sustituido") se refieren a grupos heterociclo, heterocíclico o heterociclo sustituidos con uno o más sustituyente, preferiblemente 1 a 4 substituyentes, en cualquier punto disponible de fijación. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no se limita a, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, nitro, oxo (es decir = O), ciano, alquilo-S(O)m- (m = 0, 1 o 2), alquilo o alquilo sustituido, así como los grupos anteriormente mencionados como sustituyentes ejemplares de alquilo, y los mencionados anteriormente como sustituyentes preferidos de heterociclo en la definición para G.
El término "nitrógeno cuaternario" se refiere a un átomo de nitrógeno tetravalente de carga positiva que incluye, por ejemplo, el nitrógeno de carga positiva en un grupo tetraalquilamonio (por ejemplo, tetrametilamonio, N-metilpiridinio), el nitrógeno de carga positiva en especie de amonio protonado (por ejemplo, trimetil-hidroamonio, N-hidropiridinio), El nitrógeno de carga positiva en amina N-óxidos (por ejemplo, N-metil-morfolina-N-óxido, piridina-N-óxido), y el nitrógeno de carga positiva en un grupo N-amino-amonio (por ejemplo, N-aminopiridinio).
Los términos "halógeno" o "halo" se refieren a cloro, bromo, flúor o yodo.
Los términos "hidroxilamina" e "hidroxilamida" se refieren a los grupos OH-NH-y OH-NH-CO-, respectivamente.
Cuando un grupo funcional se denomina "protegido", esto significa que el grupo es una forma modificada para mitigar, impedir especialmente, reacciones secundarias no deseadas en el lugar protegido. Los grupos protectores apropiados para los procedimientos y los compuestos descritos en el presente documento incluyen sin limitación, los descritos en los libros de texto estándar, tales como Greene, T. W. et al., Protective Groups en Organic Synthesis, Wiley, N.Y. (1991).
Cuando se usa un término tal como "(CRR)n", esto indica que existe una cadena alquilo opcionalmente sustituida entre dos fragmentos a los cuales se enlaza, definiéndose la longitud de dicha cadena por el intervalo descrito para el término n. un ejemplo de esto es n=0-3, que comprende de cero a tres unidades (CRR) que existen entre los dos fragmentos, que están fijados a las unidades primaria y terminal (CRR). En la situación en la cual el término n se establece en cero (n = 0) entonces existe un enlace entre los dos fragmentos fijados a (CRR).
A menos que se indique otra cosa, se asume que cualquier heteroátomo con valencias no satisfechas tiene átomos de hidrógeno suficientes para satisfacer las valencias.
Los grupos divalentes, tales como los de la definición de W (por ejemplo, NR^{9}-CR^{7}R^{7'}), se pueden enlazar bien en dirección al resto de la molécula (por ejemplo,
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para el grupo anteriormente mencionado en la definición de W).
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El anión de carboxilato se refiere a un grupo de carga negativa -COO-.
Los compuestos reivindicados forman sales que también están dentro del alcance de esta invención. La referencia a un compuesto de la fórmula del presente documento se entiende que incluye la referencia a las sales de los mismos, a menos que se indique otra cosa. El término "sal(es" utilizado en la presente memoria descriptiva, indica sales ácidas y/o básicas formadas con ácidos y bases inorgánicos y/o orgánicos. Además, se pueden formar cuando un compuesto de fórmula I contiene tanto un residuo básico, tal como pero no limitándose a una piridina o imidazol, como un residuo ácido tal como pero no limitándose a un ácido carboxílico, iones anfóteros "sales internas" y se incluyen en el término "sal(es)" tal como se usa en el presente documento. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables (es decir, fisiológicamente aceptable, no tóxicas), aunque otras sales también son útiles, por ejemplo en las etapas de aislamiento o purificación en las cuales se pueden emplear durante la preparación. Las sales de los compuestos de la fórmula I se pueden formar, por ejemplo, reaccionando el compuesto de la fórmula I con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el cual los precipitados de sal o en un medio acuoso seguido de liofilización.
Los compuestos de fórmula I que contienen un residuo básico, tal como pero no limitándose a una amina o una piridina o un anillo de imidazol, pueden formar sales con diversas sales orgánicas e inorgánicas. Las sales de adición de ácidos ejemplares incluyen acetatos (tales como los formados con ácido acético o ácido trihaloacético, por ejemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzootes, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos, bromhidratos, yodhiratos, hidroxietanosulfonatos (por ejemplo., 2-hidroxietanosulfonatos), lactatos, maleatos, metanosulfonatos, naftalenosulfonatos (por ejemplo, 2-naftalenosulfonatos), nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, fenilpropionatos (por ejemplo, 3-fenilpropionatos), fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como los formados con ácido sulfúrico), sulfonatos (tales como los mencionados anteriormente en el presente documento), tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos tales como los tosilatos, undecanoatos, y similares.
Los compuestos de fórmula I que contienen un residuo ácido, tal como pero sin limitarse a, un ácido carboxílico, pueden formar sales con diversas bases orgánicas e inorgánicas. Las sales básicas ejemplares incluyen sales de amonio, sales de metales alcalino tales como sales de sodio, litio y potasio, sales alcalinotérreas tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como benzatinas, diciclohexilaminas, hidrabaminas (formadas con N,N-bis(deshidroabietil)etilenodiamina), N-metil-D-glucaminas, N-metil-D-glicamidas, t-butil aminas, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos básicos que contienen nitrógeno se pueden cuaternizar con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), l sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo cloruros, bromuros y yoduros de decilol, laurilo, miristilol y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de becilo u fenetilo), y otros.
Los solvatos de los compuestos de la invención también se contemplan en el presente documento. Los solvatos de los compuestos de fórmula I incluyen, por ejemplo, hidratos.
Los compuestos de la fórmula I, y las sales de los mismos, pueden existir en su forma tautómera (por ejemplo, en forma de un éter de amida o imino). Todas las formas tautómeras de este tipo se contemplan en la presente memoria descriptiva como parte de la presente invención.
Todos los esteroisómeros de los presente compuestos (por ejemplo, los que pueden existir debido gracias a carbonos asimétricos sobre diversos sustituyentes) incluyendo las formas enantioméricas y las formas diastereoméricas, se contemplan dentro del alcance de esta invención. Los estereoisómeros de los compuestos de la invención, pueden, por ejemplo, estar libres de otros isómeros (por ejemplo, como un isómero óptico puro o sustancialmente puro que tiene una actividad especificada), o se pueden mezclar, por ejemplo como racematos o con todos los otros estereoisómeros seleccionados. Los centros quirales pueden tener la configuración S^{-} o R^{-} definida por las Recomendaciones IUPAC de 1974. Las formas racémicas se pueden resolver por procedimientos físicos tales como, por ejemplo, cristalización fraccional, separación o cristalización de derivados diastereoméricos o separación por cromatografía de columna quiral. Los isómeros ópticos individuales se pueden obtener a partir de racematos por cualquier procedimiento apropiado, incluyendo sin limitación los procedimientos convencionales, tales como, por ejemplo la formación de sal con un ácido ópticamente activo seguida de cristalización.
Todos los isómeros de configuración de los compuestos de la presente invención se contemplan, bien en mezcla o en forma pura o sustancialmente pura. La definición de los compuestos de la presente invención comprende tanto los isómeros cis (Z) como los trans (E)alqueno, así como los isómeros cis y trans de anillos cíclico de hidrocarburo o heterociclo. En algunos casos, por ejemplo, se puede preferir la conformación exo o endo para el sistema de anillos fusionados enlazado a G-L en la fórmula I. Por ejemplo, para los antagonistas del receptor de andrógeno (p moduladores selectivos de receptor de andrógeno), cuando Y es O o NR^{7}, se puede preferir la configuración exo, mientras que para la mayoría de las otras definiciones de Y, se puede preferir la configuración endo. Como se puede apreciar, la configuración preferida puede ser una función del compuesto particular y su actividad preferida. La separación de isómeros de configuración se puede conseguir por cualquier procedimiento apropiado, tal como cromatografía de columna.
En toda la memoria descriptiva, se pueden elegir grupos y sustituyentes de los mismos para proporcionar residuos y compuestos estables.
Las realizaciones indicadas en el presente documento son ejemplares o preferidas y pretenden ser a título ilustrativo y no limitativo.
Procedimientos de preparación
Los compuestos de la presente invención y los análogos de los mismos se pueden preparar por procedimientos tales como los ilustrados en los siguientes Esquemas I a XI. Los disolventes, las temperaturas, las presiones y otras condiciones de reacción los puede seleccionar fácilmente el experto en la técnica. Los materiales de partida están comercialmente disponibles o los prepara fácilmente el experto en la técnica. Se pueden emplear técnicas combinatorias en la preparación de los compuestos, por ejemplo cuando los intermedios poseen grupos apropiados para estas técnicas. Véase lo siguiente donde se describen otros procedimientos que se pueden emplear en la preparación de compuestos de la presente invención y los análogos de los mismos, Li, et al., Eur. J. Org. Chem. 9, 1841-1850 (1998); Li, Y-Q, Synlett. 5, 461-464 (1996); Thiemann, et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 67, 1886-1893 (1994); Tsuge et al., Heterocycles 14, 423-428 (1980); Ward et al., Can J. Chem. 75, 681-693 (1997); Ward et al., Can J. Chem. 69, 1487-1497 (1991); Ward et al., Tetrahedron Lett. 31, 845-848 (1990); Fleming et al., J. Org. Chem. 44, 2280-2282 (1979); Jankowski et al., J. Organomet. Chem. 595, 109-113 (2000); Keglevich et al., J. Organomet. Chem. 579, 182-189 (1999); Keglevich et al., J. Organomet. Chem. 570, 49-539 (1998); Jankowski et al., Hetroat. Chem. 7, 369-374 (1996); Jankowski et al., J. Am. Chem. Soc. 113, 7011-7017 (1991); Quin et al., Tetrahedron Lett. 31, 6473-6476 (1990); Quin et al., J. Org. Chem. 59, 120-129 (1994); Quin et al., J. Org. Chem. 58, 6212-6216 (1993); Quin et al., Phosphorous, Sulfur Silicon Relat. Elem. 63, 349-362 (1991); Quin et al., Hetroat. Chem. 2, 359-367 (1991); Hussong et al., Phosphorus Sulfur. 25, 201-212 (1985); Quin et al., J. Org. Chem. 51, 3341-3347 (1986); Myers et al., J. Am. Chem. Soc. 114, 5684-5692 (1992); Myers et al., J. Am. Chem. Soc. 113, 6682-6683 (1991); Shen et al., Patente de los Estados Unidos No. 5817679; Cordone et al., J. Am. Chem. Soc. 111, 5969-5970 (1989); Jung et al., J. Chem. Soc. Commun. 630-632 (1984); Lay et al., J. Am. Chem. Soc. 104, 7658-7659 (1982); Gonzalez et al., J. Am. Chem. Soc. 117, 3405-3421 (1995); Kreher et al., Chem. Ber. 125, 183-189 (1992); Simig et al., Synlett. 7, 425-426 (1990); Sha et al., J. Org. Chem. 55, 2446-2450 (1990); Drew et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 17, 1277-1284 (1985); Kreher et al., Anorg. Chem., Org Chem. 31B, 599-604 (1976); Avalos et al., Tetrahedron Lett. 39, 9301-9304 (1998); Gousse et al., Macromolecules 31, 314-321 (1998); Mikhailyuchenko et al., Khim. Geterotsikl. Soedin. 6, 751-758 (1993); Lubowitz et al., Patente de los Estados unidos No. 4476184; Padwa et al., J. Org. Chem. 61, 3706-3714 (1996); Schlessinger et al., J. Org. Chem. 59, 3246-3247 (1994); Buchmeiser et al., Publicación WO No. 9827423; Tanabe et al., Documento de patente Japonesa JP 07144477; Mochizucki et al., Documento de patente Japonesa JP 63170383; Hosoda et al., Documento de patente Japonesa JP 62053963; Onaka et al., Documento de patente Japonesa JP 62053964; Kato et al., Documento de patente Japonesa JP 53086035; Kato et al., Documento de patente Japonesa JP 51088631; Tottori et al., Documento de patente Japonesa JP 49124225; Augustin et al., Documento de patente alemana DD101271; Title et al., Documento de patente francesa FR 2031538; Gousse et al., Polym. Int. 48, 723-731 (1999); Padwa et al., J. Org. Chem. 62, 4088-4096 (1997); Theurillat-Moritz et al., Tetrahedron: Asymmetry 7, 3163-3168 (1996); Mathews et al., J. Carbohidr. Chem. 14, 287-97 (1995); Srivastava et al., Natl. Acad. Sci. Lett. (India) 15, 41-44 (1992); Mayorga et al., Rev. Cubana Quim. 4, 1-6 (1988); Kondoli et al., J. Chem. Res., Synop. 3, 76 (1987); Primelles et al., Cent. Azucar 7-14 (1985); Solov'eva et al., Khim. Geterotsikl. Soedin. 5, 613-15 (1984); Liu et al., Yaoxue Xuebao 18, 752-759 (1983); Joshi et al., Indian J. Chem, Sect. B. 22B, 131-135 (1983); Amos et al., Publicación WO No. 9829495; Odagiri et al., Patente de los Estados Unidos No. 4670536; Gallucci et al., Documento de patente europea EP 355435; Redmore, D. Patente de los Estados Unidos No. 3821232; Nakano et al., Heterocycles 35, 37-40 (1993); Tomisawa et al., Chem. Pharm. Bull. 36, 1692-1697 (1988); Krow et al., J. Heterocycl. Chem. 22, 131-135 (1985); Krow et al., J. Org. Chem. 47, 1989-1993 (1982); Liu et al., Yaoxue Xuebao 18, 752-759 (1983); Nishikawa et al., Yaoxue Xuebao JP 01061457; y/o Rice et al., J. Med. Chem. 11, 183-185 (1968).
Todos los documentos mencionados en la presente memoria descriptiva, tales como los mencionados en estos "Procedimientos de preparación" así como otras secciones del presente documento, se incorporan a la presente memoria por referencia en su integridad. La referencia a cualquier documento de la presente memoria documento no ha de interpretarse como una admisión de que tal documento forma parte de la técnica anterior.
Esquema I
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Como se ilustra en el Esquema I, se puede reacciona un dieno de fórmula II con un dienofilo de fórmula III, en condiciones fácilmente seleccionadas por el experto en la técnica (tal como por la adición de calor ("\Delta")), para obtener un compuesto de fórmula IV, que es un compuesto de fórmula I. Un dieno intermedio de fórmula II se puede obtener a partir de fuentes comerciales o se lo puede fabricar fácilmente el experto en la técnica, por ejemplo según los siguientes documentos de la bibliografía y las referencias encontradas en la presente memoria: Hofman et al., J. Agric. Food Chem. 45, 898-906 (1997); Baciocchi et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 2 8, 821-824 (1975); Wu et al., J. Heterocycles 38, 1507-1518 (1994); Yin et al., Tetrahedron Lett. 38, 5953-5954 (1997); Mic'ovic' et al., Tetrahedron 20, 2279-2287 (1964); Gorbunova et al., J. Org. Chem.. 35, 1557-1566 (1999); Rassu et al., Chem. Soc. Rev. 29, 109-118 (2000); Kaberdin et al., Russ. Chem. Rev.. 68, 765-779 (1999); Barluenga et al., Aldrichimica Acta 32, 4-15 (1999); Bogdanowicz-Szwed et al., Pol. Wiad. Chem. 52, 821-842 (1998); Casiraghi et al., Adv. Asymmetric Synth. 3, 113-189 (1998); and/or Baeckvall et al., Chem. Rev. 98, 2291-2312 (1998). Se puede obtener un dienofilo intermedio de fórmula III a partir de fuentes comerciales o lo puede fabricar fácilmente el experto en la técnica, según las siguientes referencias bibliográficas y las referencias encontradas en la presente memoria:: Deshpande et al., Heterocycles 51, 2159-2162 (1999); Seijas et al., J. Chem. Res., Synop. 7, 420-421 (1999); Langer et al., Eur. J. Org. Chem. 7, 1467-1470 (1998); Kita et al., Documento de patente japonesa JP 09194458; Lopez-Alvarado et al., J. Org. Chem. 61, 5865-5870 (1996); Condon et al., Patente de los Estados Unidos No. 5523277; Sasakihara et al., Documento de patente japonesa JP 04290868; Igarashi et al., Documento de patente japonesa JP 04149173; Aoyama et al., Documento de patente japonesa JP 04134063; Aoyama et al., Documento de patente japonesa JP 04134062; Pastor et al., J. Org. Chem. 53, 5776-5779 (1988); y/o Takahashi et al., Chem. Lett. 6, 1229-1232 (1987).
Esquema II
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Como se ilustra en el Esquema II, los compuestos de fórmula I se pueden obtener por reacción de una amina primaria de fórmula V con un intermedio de tipo anhídrido sustituido de fórmula VI, por ejemplo en un disolvente tal como ácido acético o sin calentar, para producir un compuesto de fórmula IV, que es un compuesto de fórmula I. Las aminas primarias de fórmula V se pueden obtener a partir de fuentes comerciales o las puede sintetizar fácilmente el experto en la técnica. Los agentes de tipo anhídrido de fórmula VI se pueden obtener a partir de fuentes comerciales o los puede sintetizar fácilmente el experto en la técnica. Los documentos mencionados a continuación describen enfoques ejemplares para la síntesis de intermedios de fórmula VI así como enfoques sintéticos que se pueden aplicar a la síntesis de compuestos de fórmula IV (todos incorporados a la presente memoria por referencia en su integridad): Kohler, E. P.; Tishler, M.; Potter, H.; Thompson, H. T. J. Am. Chem. Soc. 1939, 1057-1061; Yur'ev, Y. K.; Zefirov, N. S. J. Gen. Chem. U.S.S.R. (Trad. Ingl.) 1961, 31, 772-5; Norman G. Gaylord Patente de los Estados Unidos No. 3,995,099; Schueler, P. E.; Rhodes, Y. E. J. Org. Chem. 1974,39,2063-9; Ishitobi, H.; Tanida, H; Tsuji, T. Bull. Client. Soc. Japan 1971, 44, 2993-3000; Stájer, G.; Virág, M.; Szabó, A. E.; Bernáth, G.; Sohár, P.; Sillanpää, R. Acta. Chem. Scand. 1996, 50, 922-30; Hart, H.; Ghosh, T. Tetrahedron Lett. 1988,29,881-884; Kato, M.; Yamamoto, S.; Yoshihara, T.; Furuichi, K; Miwa, T. Chem. Lett. 1987, 1823-1826; Kottwitz, J.; Vorbrüggen, H. Synthesis 1995, 636-637; Creary, X. J. Org. Chem. 1975, 40, 3326-3331; Alder, K.; Ache, H.-J.; Flock, F. H. Chem. Ber. 1960, 93, 1888-1895; Toder, B. H.; Branca, S. J.; Dieter, R. K.; Smith, A. B. III Synth. Commun. 1975, 5, 435-439; Sprague, P. W.; Heikes, J. E.; Gougoutas, J. Z.; Malley, M. F.; Harris, D. N.; y/o Greenberg, R. J. Med. Chem. 1985, 28, 1580-1590.
El(los) enfoque(s) anteriormente mencionado(s) se puede(n) aplicar de manera combinatoria, por ejemplo, utilizando un bloque de reacción multipocillos tal como se describe en Waldemar Ruediger, Wen-Jeng Li, John W., Allen Jr., y Harold N. Weller III, Patente de los Estados unidos No. 5,961,925, Apparatus for Synthesis of Multiple Organic Compounds With Pinch Valve Block (incorporado en la presente memoria por referencia en su integridad). Utilizando el bloque de reacción multipocillos anteriormente mencionado, se puede, por ejemplo, llevar a cabo múltiplos de 96 reacciones a la vez. El disolvente se puede entonces eliminar de los tubos de reacción sin retirarlos del bloque de reacción y los productos en bruto se pueden precipitar usando una base tal como bicarbonato sódico. Los precipitados se pueden recoger por filtración del bloque de reacción y a continuación los productos deseados se pueden transferir directamente a las placas de 96 pocillos para su cribaje. De esta manera, se puede sintetizar una gran serie de compuestos de fórmula I, y realizar ensayos deseados por unos enfoques automatizados.
Esquema III
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El esquema III describe un procedimiento para preparar un compuesto intermedio de fórmula VI que se puede usar para sintetizar un compuesto de fórmula I, como se describe en el Esquema II. Como se describe en el Esquema III, un dieno de fórmula II se puede reaccionar con un dienofilo de fórmula VII para producir el intermedio de fórmula VI. Los procedimientos aplicados para obtener tal transformación son análogos a los descritos en el Esquema I.
Esquema IV
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El esquema IV describe un procedimiento para preparar un compuesto intermedio de fórmula VI que se puede usar para sintetizar un compuesto de fórmula I, como se describe en el Esquema II. Como se muestra en el Esquema IV, se puede reaccionar un dieno de fórmula II con un dienofilo de fórmula VIII para producir el intermedio de fórmula IX. el intermedio de fórmula IX se puede deshidratar hasta un intermedio de tipo anhídrido de fórmula VI. La deshidración del intermedio de bis-ácido de fórmula IX se puede conseguir por diversos procedimientos, tales como los conocidos por el experto en la técnica y descritos en los siguientes documentos y las referencias materializadas en los mismos: Sprague et al., J. Med. Chem. 28, 1580-1590 (1985); y/o Retemi et al., J. Org. Chem. 61, 6296-6301 (1996).
Los Esquemas I a IV describen procedimientos generales para la síntesis de compuestos de fórmula I, y los intermedios de los mismos, en los cuales la sustitución alrededor del sistema de anillos se incorpora directamente, por ejemplo al nivel del dieno intermedio, dieno, dienofilo, intermedio de tipo anhídrido y grupos amina. Además de estos enfoques se puede incorporar una sustitución adicional sobre un compuesto ya preparado de fórmula I por diversos enfoques para prepara otros compuestos de la fórmula I. Los procedimientos ejemplares para otra sustitución se describen en los Esquemas V a XI.
Esquema V
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El esquema V describe un enfoque de este tipo para incorporar una sustitución adicional dentro de una estructura de fórmula I. Como se ilustra en el Esquema V, un compuesto de fórmula X, que es un compuesto de fórmula I donde A_{1} y A_{2} son CR^{7}, W es NH-CHR^{7} e Y es CHR^{7}-CHR^{7}, se puede funcionalizar en la amina libre del grupo W por reacción con uno cualquiera de los agentes electrófilos tales como haluros de ácido o haluros de alquilo en presencia de base, por ejemplo por procedimientos conocidos por el experto en la técnica. En el Esquema V, X es un grupo saliente, y un compuesto de fórmula XI es un compuesto de fórmula I donde A_{1} y A_{2} son CR^{7}, W es NR^{7}-CHR^{7} e Y es CHR^{7}-CHR^{7}.
Esquema VI
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El Esquema VI describe un enfoque adicional para incorporar, además, una sustitución sobre un compuesto de fórmula I. como se ilustra en el Esquema VI, un compuesto de fórmula XII, que es un compuesto de fórmula I donde A_{1} y A_{2} are CR^{7}, W es S-CHR^{7} e Y es CHR^{7}-CHR^{7}, se puede oxidar parcialmente con un agente oxidante tal como mCPBA u otros agentes tales como los conocidos por el experto en la técnica, para proporcionar el análogo de sulfóxido de fórmula XIII, que es un compuesto de fórmula I donde A_{1} y A_{2} son CR^{7}, W es SO-CHR^{7} e Y es CHR^{7}-CHR^{7}. Otro tratamiento de un compuesto de fórmula XIII con un agente oxidante tal como mCPBA u otros agentes tales como los conocidos por el experto en la técnica, puede producir el análogo de sulfona de fórmula XIV, que es un compuesto de fórmula I donde A_{1} y A_{2} son CR^{7}, W es SO_{2}-CHR^{7} e Y es CHR^{7}-CHR^{7}. Alternativamente, se puede convertir un compuesto de fórmula XII directamente en un compuesto de fórmula XIV por tratamiento prolongado con un agente oxidante, tal como mCPBA, o con otros agentes tales como los conocidos por el experto en la técnica.
Esquema VII
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El esquema VII describe otro enfoque para incorporar una sustitución adicional sobre un compuesto de fórmula I. Como se ilustra en el Esquema VII, un dieno de fórmula IIa se puede reaccionar con un dienófilo de fórmula III, como se describe en el Esquema I, para producir un compuesto de fórmula IVa, que es un compuesto de fórmula I donde Y es O, A_{2} es CR^{7} y A_{1} es C-(CH_{2})q-T. El compuesto de fórmula IVa se puede reaccionar con un reactivo de fórmula R^{12}-T' para obtener un compuesto de fórmula IVb o IVc que son compuestos de fórmula I donde Y es O, A_{2} es CR^{7} y A_{1} es C-(CH_{2})_{q}-T'-R^{12} o C-(CH_{2})q-TR^{12}, respectivamente. El reactivo R^{12} -T' se puede obtener a partir de fuentes comerciales o lo puede preparar fácilmente el experto en la técnica.
En el Esquema anterior, R^{12} tiene la misma definición que el R^{7} definido más arriba, q es cero o un número entero de 0 a 8, y T se define bien como (1) un centro nucleófilo tal como, pero no limitándose a, un grupo que contiene nitrógeno, oxígeno o azufre, capaz de experimentar una reacción por sustitución nucleófila con el grupo saliente T' o (2) un grupo saliente capaz de experimentar una reacción por sustitución nucleófila con un grupo nucleófilo T' (tal como, pero no limitándose a, un grupo nucleófilo que contiene nitrógeno, oxígeno o azufre). T' tiene la misma definición que T. En el presente caso, por ejemplo, la reacción por sustitución nucleófila se produce cuando el reactivo atacante (el nucleófilo) lleva el par de electrones al sustrato, usando este par para formar el nuevo enlace, y el grupo saliente (el nucleófugo) se aleja con l par de electrones, saliendo como un intermedio aniónico. Para una mención detallada del mecanismo de sustituciones nucleófilas alifáticas y una revisión de las reacciones por sustitución nucleófila alifática, véase Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms, y Structure, 4th Addition. Jerry March (Ed.), John Wiley & Sons, New York (1992) 293-500 y las referencias en el mismo. Los compuestos de las fórmulas IVa, IVb, o IVc se pueden, emplear, evidentemente, en los procedimientos descritos en la presente memoria (especialmente en el tratamiento de las afecciones asociadas al receptor hormonal nuclear) sin experimentar ninguna reacción adicional de T o T'.
Esquema VIII
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Un enfoque alternativo a los compuestos de fórmula IVa, IVb y IVc se ilustra en el Esquema VIII. Para este enfoque, se pueden aplicar técnicas tales como las descritas en los Esquemas II, III y IV a la preparación de un intermedio de fórmula VIa, donde T y q son tal como se definen en el Esquema VII. El intermedio de fórmula VIa se puede reaccionar con amina sustituida de fórmula V, como se describe en el Esquema II, para producir el compuesto de fórmula IVa, que es un compuesto de fórmula I donde Y es O, A_{2} es CR^{7} y A_{1} es C-(CH_{2})_{q}-T. El compuesto de fórmula IVa se puede tratar de la manera descrita en el Esquema VII para obtener compuestos de fórmula IVb o IVc que son compuestos de fórmula I donde Y es O, A_{2} es CR^{7} y A_{1} es C-(CH_{2})_{q}-T'-R^{12} o C-(CH_{2})_{q}-T-R^{12}, respectivamente.
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Esquema IX
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El Esquema IX describe otro enfoque para incorporar otra sustitución sobre un compuesto de fórmula I. Como se ilustra en el Esquema IX (donde X es un grupo saliente), se puede reaccionar un dieno de fórmula IIb con un dienofílo de fórmula III, como se describe en el Esquema I, para producir un compuesto de fórmula IVe, que es un compuesto de fórmula I donde Y es NH, y A_{1} y A_{2} son CR^{7}. El compuesto de fórmula IVe se puede funcionalizar en la amina libre por reacción con diversos agentes electrófilos tales como haluros de ácido o haluro de alquilo en presencia de base, por ejemplo por procedimientos conocidos por el experto en la técnica y descritos en el Esquema V, para producir un compuesto de fórmula IVf, que es un compuesto de fórmula I donde Y es NR^{7} y A_{1} y A_{2} son CR_{7}.
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Esquema X
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Un enfoque alternativo a los compuestos de fórmula IVe y IVf se ilustra en el Esquema X. Para este enfoque, las técnicas descritas en los Esquemas II, III y IV se pueden aplicar a la preparación de un intermedio de fórmula VIb. Los intermedios de f fórmula Vib se pueden conseguir con una amina sustituida de fórmula V, como se describe en el Esquema II, para producir un compuesto de fórmula IVe, que es un compuesto de fórmula I donde Y es NH, y A_{1} y A_{2} son CR^{7}. Este último intermedio se puede tratar de la manera descrita en el Esquema V para obtener un compuesto de fórmula IVf, que es un compuesto de fórmula I donde Y es NR^{7}, Y A_{1} y A_{2} son CR^{7}.
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Esquema XI
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El esquema XI describe otro enfoque para incorporar una sustitución adicional sobre un compuesto de fórmula I. Como se ilustra en el Esquema XI, se puede reaccionar un dieno de fórmula IIc con un dienófilo de fórmula III, como se describe en el Esquema I, para producir un compuesto de fórmula IVg, que es un compuesto de fórmula I donde Y es SO y A_{1} y A_{2} son CR^{7}. Se puede tratar un compuesto de fórmula IVg con agente oxidante tal como mCPBA, como se describe en el Esquema VI, para producir un compuesto de fórmula IVh, que es un compuesto de fórmula I donde Y es SO_{2} y A_{1} y A_{2} son CR^{7}.
Esquema XII
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El esquema XII describe otro enfoque para incorporar una sustitución adicional sobre un compuesto de fórmula I. como se ilustra en el Esquema XII, un compuesto de fórmula XV, que se puede preparar según los Esquemas anteriores, se puede incubar en presencia de una enzima o microorganismo apropiado que da como resultado la formación de un análogo hidroxilado de fórmula XVI. Tal proceso se puede emplear para producir la incorporación regioespecífica así como enantioespecífica de un grupo hidroxilo en una molécula de fórmula XV por un microorganismo específico o por una serie de diferentes microorganismos. Tales microorganismos pueden, por ejemplo, ser de naturaleza bacteriana, levadura o fúngica y se pueden obtener a partir de distribuidores tales como ATCC o identificar para su uso en este procedimiento tales como procedimientos conocidos por el experto en la técnica. El compuesto XVI es un compuesto de fórmula I donde Y es como se describe anteriormente y A_{1} y A_{2} son preferiblemente CR^{7}.
Esquema XIII
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El esquema XIII describe otro enfoque para incorporar una sustitución adicional sobre un compuesto de fórmula I. como se ilustra en el Esquema XIII, un compuesto de fórmula XVII, que se puede preparar según los Esquemas anteriores, se puede incubar en presencia de una enzima o microorganismo apropiado que da como resultado la formación de un análogo de diol de fórmula XVIII. Tal proceso se puede emplear para producir una transformación regioespecífica así como enantioespecífica de un compuesto de fórmula XVII a un 1-2 diol de fórmula XVIII por un microorganismo específico o por una serie de diferentes microorganismos. Tales microorganismos pueden por ejemplo, ser de naturaleza bacteriana, levadura o fúngica y se puede obtener a partir de distribuidores tales como ATCC o identificar para su uso en este procedimiento tales como procedimientos conocidos por el experto en la técnica. El compuesto XVIII es un compuesto de fórmula I donde Y es como se describe anteriormente y A_{1} y A_{2} son preferiblemente CR^{7}.
Los procedimientos de los Esquemas XII y XIII también se describen.
De este modo, se revela un procedimiento para la preparación de un compuesto de las siguientes fórmulas XVI, o la sal del mismo.
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Donde los símbolos se definen en la presente memoria,
que comprende las etapas de entrar en contacto con un compuesto de la siguiente fórmula XV, o las sales del mismo:
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donde los símbolos son como se han definido anteriormente;
con una enzima o microorganismo capaz de catalizar la hidroxilación de dicho compuesto XV para formar dicho compuesto XVI, y efectuar dicha hidroxilación.
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Se describe también un procedimiento para la preparación de un compuesto de la siguiente fórmula XVIII, o la sal del mismo.
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donde los símbolos son como se han definido en la presente memoria, comprendiendo las etapas de entrar en contacto con un compuesto de la siguiente fórmula XVII, o una sal del mismo:
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donde los símbolos son tal como se han definido anteriormente;
con una enzima o un microorganismo capaz de catalizar la apertura del anillo epóxido del compuesto XVII para formar el diol de dicho compuesto XVIII, y efectuar dicha apertura de anillo y dicha formación de diol.
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Se contemplan todas las estereoconfiguraciones de los centros quirales no especificados de los compuestos de las fórmulas XV, XVI, XVII y XVIII en los procedimientos, bien solos (es decir, sustancialmente libres de otros estereoisómeros) o en mezcla con otras formas estereoisómeras. La conversión de un isómero selectivamente (por ejemplo, la hidroxilación del isómero exo preferiblemente a la hidroxilación del isómero endo) cuando entra en contacto con una mezcla isomérica es una realización preferida de la invención. Se prefiere la conversión a un isómero selectivamente (por ejemplo, la hidroxilación sobre la cara exo "isómero exo" preferiblemente a la cara endo "isómero endo" o la apertura regioselectiva de un epóxido para formar solamente uno de los dos posibles regioisómeros de un diol trans). Se pre-
fiere también la hidroxilación de un intermedio quiral para formar un único isómero óptico del producto hidroxilado.
Se prefiere la resolución de una mezcla racémica de un intermedio por hidroxilación selectiva, o anillo epoxídico y formación de diol, para generar uno de los dos posibles isómeros ópticos. El termino "resolución" como se usa en el presente documento indica una resolución parcial, así como preferiblemente una resolución completa.
Los términos "proceso enzimático" o "procedimiento enzimático", tal como se usan en la presente memoria, indican un proceso o procedimiento que emplea una enzima o un microorganismo. El término "hidroxilación", tal como se usa en la presente memoria, indica la adición de un grupo hidroxilo a un grupo metileno como se ha descrito anteriormente. La hidroxilación se puede conseguir, por ejemplo, por contacto con oxígeno molecular según los procedimientos de la presente invención. La formación de diol se puede conseguir, por ejemplo, por contacto con agua según los procedimientos revelados en la presente memoria. El uso de "una enzima o un microorganismo" en los presentes procedimientos incluye el uso de dos o más enzimas o microorganismos así como una única enzima o un único microorganismo.
La enzima o el microorganismo empleado en el presente documento puede ser una enzima o un microorganismo capaz de catalizar las conversiones enzimáticas descritas en el presente documento. Los materiales enzimáticos o microbianos, sin tener en cuenta su origine o su pureza, se pueden emplear en estado libre o inmovilizados sobre un soporte tal como por atrapamiento o adsorción física. Los microorganismos o enzimas apropiados para su uso en los presentes procedimientos se pueden seleccionar cribando la actividad deseada, por ejemplo poniendo en contacto un microorganismo o una enzima candidata con un compuesto de partida XV o XVII o una sal del mismo, y anotando la conversión al compuesto correspondiente XVI o XVIII o una sal de los mismos. La enzima puede, por ejemplo, estar en forma de enzimas animales o vegetales o mezclas de las mismas, células de microorganismos, células trituradas, extractos de células o de origen sintético.
Los microorganismos ejemplares incluyen los que se encuentran dentro de los géneros: Streptomyces o Amycolatopsis. Se prefieren particularmente los microorganismos que se encuentran dentro de las especies m Streptomyces griseus, especialmente Streptomyces griseus ATCC 10137, y Amycolatopsis orientalis tal como ATCC 14930, ATCC 21425, ATCC 35165, ATCC 39444, ATCC 43333, ATCC 43490, ATCC 53550, ATCC 53630, y especialmente y ATCC 43491. El término "ATCC" tal como se usa en la presente memoria descriptiva se refiere al número de accesión del American Type Culture Collection, 10801 University Blvd., Manassas Virginia 20110-2209, el depositario del organismo en cuestión. Se ha de entender que los mutantes de estos organismos también se contemplan por la presente invención, para su uso en los procedimientos descritos en la presente memoria, tales como los modificados por el uso de medios químicos, físicos (por ejemplo rayos X) o biológicos (por ejemplo, por técnicas de biología molecular).
Las enzimas preferidas incluyen las derivadas de microorganismos, particularmente los microorganismos descritos anteriormente. Las enzimas se pueden aislar, por ejemplo, por procedimientos de extracción y purificación tales como por procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. Una enzima se puede usar, por ejemplo, en su estado libre o en su forma inmovilizada. Una realización de la invención es aquella donde se adsorbe una enzima sobre un vehículo apropiado, por ejemplo tierra diatomácea (Celite Hyflo Supercell poroso), polipropileno microporoso (polvo de polipropileno Enka Accurel®), o adsorbente polimérico no iónico tal como Amberlite®XAD-2 (poliestireno) o XAD-7 (poliacrilato de Rohm y Haas Co. Cuando se emplea para inmovilizar un vehículo puede controlar la dimensión de partícula de la enzima y prevenir la agregación de las partículas enzimáticas cuando se usan en un disolvente orgánico. La inmovilización se puede llevar a cabo, por ejemplo, por precipitación de una solución acuosa de la enzima con acetona fría en presencia de Celite Hyflo Supercell seguido de un secado a vacío, o en el caso de un adsorbente polimérico no iónico, la incubación de soluciones enzimáticas con adsorbente en un agitador, retirando el exceso de solución y secando las resinas de adsorbente enzimático a vacío. Aunque es deseable usar la menor cantidad de enzima posible, la cantidad de enzima requerida variará dependiendo de la actividad específica de la enzima usada.
La hidroxilación tal como se ha descrito anteriormente se puede dar in vivo. Por ejemplo, la enzima una enzima del hígado puede selectivamente, respecto del isómero endo, hidroxilar el isómero exo de un compuesto de la presente invención. En la realización de los procedimientos fuera del cuerpo, se puede emplear hidroxilasa microsoma del hígado como la enzima para la catálisis.
Estos procedimientos se pueden llevar a cabo usando células microbianas que contienen una enzima que tiene la capacidad de catalizar las conversiones. cuando se usa un microorganismo para realizar la conversión, estos procedimientos se llevan a cabo apropiadamente añadiendo las células y el material de partida al medio de reacción deseado.
Cuando se emplean microorganismos, las células se pueden usar en forma de células húmedas o células secadas intactas tales como células liofilizadas, desecadas atomizadas o secadas al calor, o en forma de material celular tratado tal como células rotas o extractos celulares. También se pueden emplear los extractos celulares inmovilizados sobre Celite® o polipropileno Accurel® tal como se ha descrito anteriormente. Igualmente se contempla el uso de organismos manipulados genéticamente. La célula huésped puede ser cualquier célula, por ejemplo Escherichia coli., modificada para contener un gen o varios genes para expresar una o más enzimas capaces de catálisis tal como se ha descrito en la presente memoria.
Cuando se emplean uno o más microorganismos, los procedimientos enzimáticos se pueden llevar a cabo posteriormente a la fermentación del microorganismo (fermentación y conversión en dos etapas) o concurrentemente con la misma, es decir, en este último caso, por fermentación y conversión in situ (fermentación y conversión en una sola etapa).
El cultivo de los microorganismos se puede conseguir por un experto en la técnica usando un medio apropiado. Los medios apropiados para el cultivo de microorganismos incluyen los que proporcionan los nutrientes necesarios para el crecimiento de las células microbianas. Un medio típico para el cultivo incluye las fuentes de carbono, las fuentes de nitrógeno, y los elementos necesarios (por ejemplo en cantidades de trazas). También se pueden añadir inductores. El término "inductor", tal como se usa en la presente memoria descriptiva, incluye cualquier compuesto que favorece la formación de la actividad enzimática deseada en el interior de la célula microbiana.
Las fuentes de carbono pueden incluir azúcares tales como maltosa, lactosa, glucosa, fructosa, glicerol, sorbitol, sacarosa, almidón, manitol, propilenglicol, y similares; y alcoholes tales como etanol, propanol y similares.
Las fuentes de nitrógeno pueden incluir N-Z amina A, licor de maíz fermentado, harina de soja, extractos de carne de buey, extractos de levadura, melazas, levadura de panadería, triptona, Nutrisoy®, peptona, Yeastamin®, aminoácido tales como glutamato sódico y similares.
Los elementos de traza pueden incluir sales de magnesio, manganeso, calcio, cobalto, níquel, hierro, sodio y potasio. Los fosfatos también se pueden añadir en traza o, preferiblemente, de manera superior a las cantidades de traza.
El medio empleado puede incluir más de una fuente de carbono o nitrógeno u otro nutriente.
Los medios preferidos para el crecimiento incluyen medios acuosos.
La agitación y la aireación de la mezcla de reacción afecta a la cantidad de oxígeno disponible durante el procedimiento de conversión cuando se lleva a cabo, por ejemplo, en cultivos en frasco de agitación o tanques de fermentación durante el crecimiento de microorganismos.
La incubación del medio de reacción se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura entre aproximadamente 4 y aproximadamente 60ºC. El tiempo de reacción se puede variar apropiadamente dependiendo de la cantidad de enzimas usada y su actividad específica. Los tiempos de reacción se pueden reducir incrementando la temperatura de reacción y/o incrementando la cantidad de enzima añadida a la solución de reacción.
Se prefiere también emplear un líquido acuoso como medio de reacción, aunque también se puede emplear un líquido orgánico, o una mezcla de líquido orgánico/acuoso miscible o inmisicible (bifásica). La cantidad de enzima o microorganismo empleada respecto del material de partida se selecciona para permitir la catálisis de las conversiones enzimáticas de la presente invención.
Los disolventes para la fase orgánica de un sistema de disolvente bifásico puede ser cualquier disolvente orgánico inmisicible en agua, tal como tolueno, ciclohexano, xileno, triclorotrifluoroetano y similares. La fase acuosa es convenientemente agua, preferiblemente agua desionizada, o una solución tampón acuoso apropiada, especialmente una solución tampón fosfato. El sistema de disolvente bifásico comprende preferiblemente entre aproximadamente el 10 al 90 por ciento en volumen de fase orgánica y entre aproximadamente el 90 y el 10 por ciento en peso en volumen de fase acuosa, y más preferiblemente contiene el o aproximadamente el 20 por ciento en volumen de fase orgánica y el o aproximadamente el 80 por ciento en volumen de la fase acuosa.
Una realización ejemplar de tales procedimientos empieza con la preparación de una solución acuosa de la(s) enzima(s) o microbios a usar. Por ejemplo, la(s) enzima(s) o microbios se pueden añadir a una cantidad apropiada de un disolvente acuoso, tal como tampón fosfato o similar. Esta mezcla se ajusta preferiblemente a y se mantiene a un pH deseado.
Los compuestos XVI y XVIII producidos por los presentes procedimientos se pueden aislar y purificar, por ejemplo, mediante procedimientos tales como la extracción, destilación, cristalización y cromatografía en columna.
Uso y utilidad
Los compuestos de la presente invención modulan la función de los receptores hormonales nucleares (NHR), e incluyen compuestos que son, por ejemplo, agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de andrógeno (AR), el receptor de estrógeno receptor de estrógeno (ER), el receptor de progesterona (PR), el receptor de glucocorticoide (GR), el receptor de mineralcorticoide (MR), el receptor de esteroide y xenobiótico (SXR), otros NHR de unión esteroidea, los receptores huérfanos u otros NHR. Se prefiere la modulación selectiva de un NHR de este tipo respecto de otros en el seno de la familia NHR. La "modulación" incluye, por ejemplo, la activación (por ejemplo, actividad agonista tal como actividad e agonista selectiva de receptor de andrógeno) o la inhibición (por ejemplo actividad antagonista).
Los presentes compuestos son de este modo útiles en el tratamiento de afecciones asociada a NHR. Una "afección asociada a NHR", tal como se usa en la presente memoria, indica una afección o trastorno que se puede tratar modulando la función de un NHR en un sujeto, en el cual el tratamiento comprende la prevención (por ejemplo tratamiento profiláctico), el alivio parcial o cura de la afección o trastorno. La modulación se puede producir localmente, por ejem-
plo, en algunos tejido del sujeto, o más extensamente en todo el sujeto que se está tratando por tal afección o trastorno.
Los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de diversas afecciones y trastornos que incluyen pero no se limita a, los descritos a continuación:
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de estrógeno, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que comprenden la modulación de la vía de los receptores de estrógeno. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limitan a: osteoporosis, sofocos, sequedad vaginal, cáncer de próstata, cáncer de pecho, cáncer del endometrio, cánceres que expresan el receptor de estrógeno tal como los cánceres anteriormente mencionados y otros, contracepción, interrupción del embarazo, menopausia, amenorrea y dismenorrea.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de progesterona, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que comprenden la modulación de la vía del receptor de progesterona. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limitan a: cáncer de pecho, otros cánceres que contienen el receptor de progesterona, endometriosis, caquexia, contracepción, menopausia, sincronía de ciclo, meningioma, dismenorrea, fibroides, interrupción del embarazo, inducción del parto y osteoporosis.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de glucorticoide, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que comprenden la modulación de la vía del receptor de glucocorticoide. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limitan a: enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, cáncer de próstata, cáncer de pecho, enfermedad de Alzheimer, trastornos sicóticos, dependencia de fármacos, diabetes Mellitus no-insulinodependiente, y como un agentes de bloqueo del receptor de dopamina o por el contrario como agentes para el tratamiento de trastornos mediados por el receptor de dopamina.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de mineralocorticoide, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que comprenden la modulación de la vía del receptor de mineraocorticoide. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limitan a: síndrome de abstinencia de fármacos y enfermedades inflamatorias.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de aldosterona, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que comprenden la modulación de la vía del receptor de aldosterona. una aplicación de dichos compuestos incluye pero no se limita a: Insuficiencia cardiaca congestiva.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor de andrógeno, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que comprenden la modulación de la vía del receptor de andrógeno. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limitan a hirsutismo, acné, seborrea, enfermedad de Alzheimer, alopecia androgénica, hipogonadismo, hiperpilosidad, hipertrofia, hipertrofia benigna de próstata, adenomas y neoplasias de la próstata (tales como cáncer de próstata metastático avanzado), tratamiento de células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógeno, tal como es el caso para los cánceres de pecho, cerebro, ovarios, vejiga, linfáticos de hígado y riñón, modulación de cánceres pancreáticos de expresión VCAM y aplicaciones en la misma para el tratamiento enfermedad cardiaca, modulaciones de inflamación e inmunitarias, modulación de la expresión VEGF y aplicaciones en la misa para su uso como agentes antiangiogénicos, osteoporosis, espermatogénesis supresora, libido, caquexia, endometriosis, síndrome de ovarios policísticos, anorexia, suplemento de andrógeno para niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombres, menopausia masculina, sustitución hormonal masculina, disfunción sexual masculina y femenina, e inhibición de atrofia muscular en pacientes ambulatorios. Por ejemplo, se contempla la modulación de pan-AR, prefiriéndose particularmente la modulación AR selectiva de próstata ("SARM"), tal como para el tratamiento de cánceres de próstata en fase temprana.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como antagonistas (preferiblemente, selectivos) del receptor de andrógeno mutado, por ejemplo encontrados en muchas líneas tumorales. Los ejemplos de tales mutantes son los que se encuentran en las líneas celulares tumorales prostáticas representativas tales como LNCap, (Mutaciones T877A, Biophys. Acta, 187, 1052 (1990)), PCa2b, (Mutaciones L701H & T877A, J. Urol., 162, 2192 (1999)) y CWR22, (Mutación H874Y, Mol. Eildo., 11, 450 (1997)). Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limita a: adenomas y neoplasias de la próstata, cáncer de pecho y cáncer del endometrio.
Los compuestos de fórmula I se pueden aplicar como agonistas, agonistas parciales, antagonistas o antagonistas parciales del receptor esteroideo y xenobiótico, preferiblemente selectivamente a ese receptor, en una serie de afecciones médicas que implican la modulación de la vía del receptor esteroideo y xenobiótico. Las aplicaciones de dichos compuestos incluyen pero no se limitan a: tratamiento de la desregulación de la homeostasis del colesterol, la atenuación del metabolismo de agentes farmacéuticos por coadministración de un agente (compuesto de la presente invención), que modula los efectos reguladores P450 de SXR.
Junto con el NHR anteriormente mencionado, existe también una serie de NHR para los cuales los ligandos de activación o desactivación no se pueden caracterizar. Estas proteínas se clasifican como NHR a causa de una fuerte homología de secuencia a otro NHR, y se conocen como los receptores huérfanos. Debido al hecho de que los receptores huérfanos demuestran una fuerte homología de secuencia a otros NHR, los compuestos de fórmula I incluyen los que sirven como moduladores de la función del NHR huérfano. Se ejemplifican los receptores huérfanos que son modulados por los moduladores NHR tales como los compuestos que están dentro del alcance de la fórmula I, pero no se limita a, los listados en la Tabla 1. Las aplicaciones terapéuticas ejemplares de los moduladores de dichos receptores huérfanos también se listan en la Tabla 1, pero no se limitan a los ejemplos de la presente memoria.
TABLA 1 Receptores hormonales nucleares huérfanos ejemplares, forma (M = monomérica, D = heterodimérica, H = homodimérica), expresión tisular y aplicaciones terapéuticas diana. (SNC = sistema nervioso central)
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La presente invención proporciona de este modo el uso de al menos un compuesto de fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones asociadas a NHR. Se pueden emplear otros agentes terapéuticos tales como los descritos más adelante con los compuestos de la invención en los presentes procedimientos (por ejemplo, por separado o formulados juntos como una dosis fija). En los procedimientos otro(s) agente(s) terapéutico(s) de este tipo se puede(n) administrar antes de, simultáneamente con o después de la administración del (los) compuesto(s) de la presente invención.
La presente invención proporciona también composiciones farmacéuticas que comprenden al menos uno de los compuestos reivindicados capaces de tratar una afección asociada a NHR en una cantidad efectiva para la misma, y un soporte farmacéuticamente aceptable (vehículo o diluyente). Las composiciones de la presente invención pueden contener otros agentes terapéuticos como se describe más adelante, y se pueden formular, por ejemplo, empleando vehículos o diluyentes convencionales sólidos o líquidos, así como aditivos farmacéuticos de un tipo apropiado para el modo de administración deseada (por ejemplo, excipientes, aglomerantes, conservantes, estabilizantes, saborizantes, etc.) según técnicas bien conocidas en la técnica de la formulación farmacéutica.
Se observará que los compuestos de la presente invención son, sin limitación en lo que respecta a su mecanismo de acción, útiles en el tratamiento de cualquiera de las afecciones o trastornos listados o descritos en la presente memoria tales como enfermedades inflamatorias o cánceres, u otras enfermedades proliferativas, y en composiciones para tratar tales afecciones o trastornos. tales afecciones y trastornos incluyen sin limitación, cualquiera de las descritas anteriormente, así como las descritas a continuación tales como: mantenimiento de la fuerza y función muscular (por ejemplo en ancianos), inversión o prevención de la fragilidad o declive funcional relacionado con la edad ("AEFD") en ancianos (por ejemplo sarcopenia); tratamiento de efectos secundarios catabólicos de glucocorticoides; prevención y/o tratamiento de masa ósea reducida, densidad o crecimiento (por ejemplo osteoporosis y osteopenia); tratamiento de síndrome de fatiga crónica (SFC); malagia crónica; tratamiento de síndrome de fatiga aguda y perdida muscular seguida de cirugía electiva (por ejemplo rehabilitación posquirúrgica); aceleración de cicatrización de herida; aceleración de reparación de fractura ósea (tal como aceleración de la recuperación de pacientes de fractura de cadera); aceleración de cicatrización de fracturas complicadas, por ejemplo osteogénesis por distracción, en sustitución articular; prevención de formación de adhesión posquirúrgica; aceleración de reparación o crecimiento dental; mantenimiento de función sensorial (por ejemplo, oído, vista, olfato y gusto); tratamiento de enfermedad periodontal; tratamiento de emaciación secundaria fracturas y emaciación en conexión con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfermedad crónica del hígado, SIDA, ingravidez, cáncer, caquexia, recuperación de quemaduras y traumas, estado catabólico crónico (por ejemplo, coma), trastornos alimentarios (por ejemplo, anorexia) y quimioterapia; tratamiento de cardiomiopatía, tratamiento de trombocitopenia; tratamiento de retraso del crecimiento en conexión con enfermedad de Crohn, tratamiento de síndrome de intestino corto; tratamiento del síndrome del colon irritable; tratamiento de la enfermedad del colon inflamatorio; tratamiento de la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa; tratamiento de complicaciones asociadas a trasplante; tratamiento de baja estatura fisiológica; incluyendo niños con deficiencia de la hormona de crecimiento y baja estatura asociado a enfermedad crónica; tratamiento de la obesidad y retraso del crecimiento asociado con obesidad, tratamiento de la anorexia (por ejemplo, asociado con caquexia o envejecimiento); tratamiento de hipercortisonismo y síndrome de Cushing; enfermedad de Paget; tratamiento de osteoartritis; inducción de liberación pulsátil de la hormona del crecimiento, tratamiento de osteocondrodisplasia; tratamiento de depresión, nerviosismo, irritabilidad y estrés; tratamiento de energía mental reducida y baja autoestima (por ejemplo, motivación/asertividad); mejora de la función cognitiva (por ejemplo, el tratamiento de la demencia, incluyendo enfermedad de Alzheimer y pérdida de memoria a corto plazo); tratamiento de catabolismo en conexión con disfunción pulmonar y dependencia ventilatoria, tratamiento de disfunción cardiaca (por ejemplo, asociada con enfermedad valvular, infarto de miocardio, hipertrofia cardiaca o insuficiencia cardiaca congestiva); reducción de presión sanguínea; protección contra disfunción ventricular o prevención de eventos de reperfusión; tratamiento de adultos en diálisis crónica; inversión o reducción del estado catabólico del envejecimiento, atenuación o inversión de respuestas catabólicas a las proteínasa continuación de trauma (por ejemplo, inversión del estado catabólico asociado a cirugía, insuficiencia cardiaca congestiva, miopatía cardiaca, quemaduras, cáncer, EPOC, etc); reducción de caquexia y pérdida de proteína debido a enfermedad crónica tal como cáncer o SIDA; tratamiento de hiperinsulinemia incluyendo nesidioblastosis; tratamiento de pacientes inmunosuprimidos; tratamiento de emaciación en conexión con escreosis múltiple u otros trastornos neurodegenerativos; promoción de reparación de mielina; mantenimiento de enfermedad cutánea;M tratamiento de homeostasis metabólica y homeostasis renal (por ejemplo, en ancianos delicados), estimulación de ostoblastos, remodelación ósea y crecimiento de cartílago; regulación de ingesta alimentaria; tratamiento de resistencia a insulina, incluyendo NIDDM, en mamíferos (por ejemplo, humanos); tratamiento de resistencia a insulina en el corazón; mejora de la calidad del sueño y corrección del hiposomatotropismo relativo de senescencia debida a aumento elevado en la fase REM del sueño y en una reducción en latencia REM; tratamiento de hipotermia; tratamiento de insuficiencia cardiaca congestiva; tratamiento de lidodistrofia (por ejemplo en pacientes que reciben terapias contra VIH o SIDA tales como inhibidores de la proteasa); tratamiento de atrofia muscular (por ejemplo; debida a inactividad física, afecciones que conllevan descanso en cama o peso reducido); tratamiento de trastorno musculoesquelético (por ejemplo en ancianos); mejora de la función pulmonar global; tratamiento de trastornos del sueño; y el tratamiento del estado catabólico de enfermedad crítica prolongada; tratamiento de hirsutismo, acné, seborrea, alopecia androgénica, anemia, hiperpilosidad, hipertrofia de próstata benigna, adenomas y neoplasias de la próstata (por ejemplo cáncer de próstata metastático avanzado) y células tumorales malignas que contienen el receptor de andrógeno, tal como es el caso de cánceres de pecho, cerebro, piel, ovarios, vejiga, lifático, hígado y riñón; cánceres de la piel, páncreas, endometrio, pulmón y colon, osteosarcoma, hipercalcemia de malignidad; enfermedad ósea metastática; tratamiento de espermatogénesis; endometriosis y síndrome de ovarios policísticos; contrarrestar la preeclampsia, eclampsia de embarazo y parto prematuro; tratamiento de síndrome premenstrual; tratamiento de sequedad vaginal; niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombres, menopausia masculina, hipogonadismo, sustitución hormonal masculina, disfunción sexual masculina y femenina (por ejemplo, disfunción eréctil, apetito sexual reducido, bienestar sexual, libido reducida), contracepción masculina y femenina, perdida de cabello, Síndrome de Reaven y el favorecimiento de rendimiento/fuerza muscular y ósea; y las afecciones, enfermedades y trastornos colectivamente referenciadas como "Sindrome X" o Síndrome metabólico como se detalla en Johannsson J. Clin. Endocrinol. Metab., 82, 727-34
(1997).
Los presentes compuestos tienen utilidad terapéutica en la modulación de activación/proliferación celular inmunitaria, por ejemplo como inhibidores competitivos de reacciones de unión a ligando/receptor intercelular que implica CAM (moléculas de adhesión celular) y leucointegrinas. Por ejemplo, los presentes compuestos modulan LFA-ICAM 1 y son particularmente útiles como antagonistas de LFA-ICAM 1, y en el tratamiento de tales afecciones asociadas con LFA-ICAM 1 tales como trastornos inmunológicos. Las utilidades preferidas para el presente compuesto incluyen, pero no se limitan a afecciones inflamatorias tales como las que dan como resultado una respuesta del sistema inmunitario no específico en un mamífero (por ejemplo síndrome de insuficiencia respiratoria en el adulto, choque, toxicidad del oxígeno, síndrome de lesión multiorgánica secundario a septicemia, síndrome de lesión multiorgánica secundario a trauma, lesión por reperfusión de tejido debido a derivación cardiopulmonar, infarto de miocardio o uso con agentes trombolíticos, glomerulonefritis aguda, vasculitis, colitis ulcerosa, entrecolitis necrotizante y síndrome asociado a transfusión granulocítica), y afecciones que dan como resultado una respuesta del sistema inmunitario específico en un mamífero (por ejemplo soriasis, rechazo de transplante de órgano/tejido, reacción de injerto contra huésped, artritis reumatoide, diabetes mellitus insulinodependiente, uveitis, enfermedad inflamatoria del colon incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, y lupus eritomatoso sistémico). El presente compuesto se puede usar en el tratamiento de todas las enfermedades actualmente tratables mediante terapia de esteroides. Los presentes compuestos se pueden emplear para el tratamiento de estos y otros trastornos solos o con otros agentes inmunosupresores o antiinflamatorios. Según la invención, un compuesto de la fórmula I se puede administrar antes del inicio de la inflamación (para suprimir una inflamación anticipada) o después del inicio de la inflamación. Cuando se proporciona profilácticamente, el (los) compuesto(s) inmunosupresores se proporciona(n) preferiblemente previamente a cualquier respuesta o síntoma inflamatorio (por ejemplo, antes de, en el momento, poco después del momento del trasplante de órgano o tejido pero previamente a cualesquiera síntomas o rechazo de órgano). La administración profiláctica de un compuesto de fórmula I previene o atenúa cualquier respuesta inflamatoria posterior (tal como, por ejemplo, el rechazo de un órgano o tejido trasplantado, etc). La administración de un compuesto de fórmula I atenúa cualquier inflamación efectiva (tal como, por ejemplo, el rechazo de un órgano o tejido trasplantado).
Los compuestos de la fórmula I se pueden administrar para cualquiera de los usos descritos en el presente documento por cualquier medio apropiado, por ejemplo por vía oral, tal como en forma de comprimidos, cápsulas, gránulos o polvos; por vía sublingual, bucal, parenteral, así como por inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraesternal o técnicas de infusión (por ejemplo, como soluciones o suspensiones estériles acuosas o no acuosas inyectables), por vía nasal, incluyendo la administración a las membranas nasales, tales como por pulverización de inhalación; por vía tópica, tal como en forma de una crema o una pomada; o por vía rectal tal como en forma de supositorios; en formulaciones de dosificación unitaria que contienen vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables no tóxicos. Los presentes compuestos se pueden administrar, por ejemplo, en forma apropiada para liberación inmediata o liberación prolongada. La liberación inmediata o la liberación prolongada se puede conseguir usando composiciones farmacéuticas apropiadas que comprenden los presentes compuestos, o particularmente en el caso de la liberación prolongada, usando dispositivos tales como implantes subcutáneos o bombas osmóticas. Los presentes compuestos se pueden administrar también por vía liposomal.
Las composiciones ejemplares para administración oral incluyen suspensiones que pueden contener, por ejemplo, celulosa microcristalina para distribuir en bruto ácido algínico o alginato sódico como agente de suspensión, metilcelulosa como potenciador de la viscosidad, y edulcorantes o agentes saborizantes tales como los conocidos en la técnica; comprimidos de liberación inmediata que pueden contener, por ejemplo, celulosa microcristalina, fosfato dicalcio, almidón, estearato de magnesio y/o lactosa y/u otros excipientes, aglomerantes, extensores, disgregantes, diluyentes y lubricantes tales como los conocidos en la técnica. Los compuestos de fórmula I se pueden administrar también a través de la cavidad bucal por administración sublingual y/o bucal. Los comprimidos moldeados, comprimidos sometidos a compresión o los comprimidos liofilizados son formas ejemplares que se pueden usar. Las composiciones ejemplares incluyen los que formulan el (los) presente(s) compuesto(s) con diluyentes de disolución rápida tales como manitol, lactosa, sacarosa y/o ciclodextrinas. También se pueden incluir en tales formulaciones excipientes de peso molecular elevado tales como celulosas (Avicel) o polietilenglicoles PEG. tales formulaciones también pueden incluir un excipiente para favorecer la adhesión a mucosa tal como hidroxipropil celulosa (HPC), hidroxipopilmetil celulosa (HPMC), carboximetil celulosa de sodio (SCMC), copolímero de anhídrido maléico (por ejemplo, Gantrez), y agentes para controlar la liberación tal como copolímero poliacrílico (por ejemplo, Carbopol 934). También se pueden añadir lubricantes, deslizantes, saborizantes, agentes colorantes y estabilizantes para facilitar la fabricación y el uso.
Las composiciones ejemplares para administración aerosol o inhalación nasal incluyen soluciones en solución salina que pueden contener, por ejemplo alcohol bencílico u otros conservante apropiados, promotores de absorción para favorecer la biodisponibilidad, y/o otros agentes de solubilización o dispersión tales como los conocidos en la técnica.
Las composiciones ejemplares para administración parenteral incluyen soluciones o suspensiones inyectables que pueden contener, por ejemplo, diluyentes o disolventes parenteralmente aceptables, tales como manitol, 1,3-butanodiol, agua, solución de Ringer, una solución de cloruro sódico isotónica, u otros agentes dispersantes o humectantes y de suspensión, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos, y ácidos grasos, incluyendo ácido oleico o Cremaphor.
Las composiciones ejemplares para administración rectal incluyen supositorios que pueden contener, por ejemplo, un excipiente no irritante apropiado, tal como manteca de cacao, ésteres de glicérido sintéticos o polietilenglicoles, que son sólidos a temperaturas normales, pero que licuan y/o disuelven en la cavidad rectal para liberar el fármaco.
Las composiciones ejemplares para administración tópica incluyen un vehículo tópico tal como Plastibase (aceite mineral gelificado con polietileno).
La cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención se puede determinar por un experto en la técnica, e incluye cantidades de dosificación ejemplares para un ser humano adulto de aproximadamente 1 a 100 (por ejemplo, 15 o menos, especialmente 1 a 3 o menos) mg/kg de peso corporal de compuesto activo por día, que se puede administrar en una dosis única o en forma de dosis individuales divididas, tal como de 1 a 4 veces por día. Se entenderá que el nivel específico de dosis y la frecuencia de dosificación para cualquier sujeto particular puede variar y dependerá de diversos factores incluyendo actividad del compuesto específico empleado, estabilidad metabólica y duración de acción de ese compuesto, especie, edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del sujeto, el modo y el tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos, y gravedad de la afección particular. Los sujetos preferidos para el tratamiento incluyen los animales, más preferiblemente los mamíferos tales como los humanos, y animales domésticos tales como perros, gatos y similares, que padecen afecciones asociadas a NHR.
Como se ha mencionado anteriormente, los compuestos de la presente invención se pueden emplear solos o en combinación los unos con los otros y/o con otros agentes terapéuticos apropiados útiles en el tratamiento de afecciones asociadas a NHR, por ejemplo un antibiótico y otro material farmacéuticamente activo.
Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden combinar con agentes promotores del crecimiento, tales como, pero no limitándose a, TRH, dietilestilbesterol, teofilina, encefalina, prostaglandinas E, compuestos revelados en la patente de los Estados Unidos Nº 3.239.345, por ejemplo zeranol, y compuestos revelados en la patente de los Estados Unidos nº 4.036.979, por ejemplo, sulbenox o péptidos revelados en la patente de los Estados Unidos nº 4.411.890.
Los compuestos de la invención también se pueden usar en combinación con secretagogos de la hormona del crecimiento tales como GHRP-6, GHRP-1 (como se describe en la Patente los Estados unidos No. 4,411,890 y las publicaciones WO 89/07110 y WO 89/07111), GHRP-2 (como se describe en la publicación WO 93/04081), NN703 (Novo Nordisk), LY444711 (Lilly), MK-677 (Merck), CP424391 (Pfizer) y B-HT920, o con factor de liberación de la hormona del crecimiento y sus análogos o la hormona del crecimiento y sus análogos o somatomedinas incluyendo IGF-1 y IGF-2, o con agonistas alfa-adrenérgicos, tales como agonistas 5-HTD de clonidina o serotinina, tales como sumatriptano, o agente que inhiben la somatostatina o su liberación, tales como fisostigmina y piridostigmina. Otro uso de los compuestos revelados de la invención es en combinación con la hormona paratiroidea, PTH(1-34) o bisfosfonatos, tales como MK-217 (alendronato).
Otro uso de los compuestos de la invención es en combinación con estrógeno, testosterona, un modulador selectivo del receptor de estrógeno, , tal como tamoxifeno o raloxifeno, u otros moduladores del receptor de andrógeno, tales como los revelados en Edwards, J. P. et al., Bio. Med. Chem. Let., 9, 1003-1008 (1999) y Hamann, L. G. et al., J. Med. Chem., 42, 210-212 (1999).
Otro uso de los compuestos de esta invención es en combinación con agonistas del receptor de progesterona ("PARA"), tal como levonorgestrel, acetato de medroxiprogesterona (MPA).
Los compuestos de la presente invención se pueden emplear solos o en combinación los unos con los otros o con otros agentes terapéuticos apropiados útiles en el tratamiento de los trastornos anteriormente mencionados incluyendo: agentes antidiabéticos; agentes antiosteoporosis; agentes antiobesidad; agentes antiinflamatorios; agentes antiansiedad; antidepresivos; agentes antihipertensivos; agentes antiplaquetas; agentes antitrombóticos y trombolíticos; glicosidos cardiacos, agentes reductores de colesterol/lípidos, antagonistas del receptor de mineralcorticoide; inhibidores de la fosfodiesterasa; inhibidores de proteína tirosina-quinasa; miméticos de tiroides (incluyendo agonistas del receptor de tiroides); agentes anabólicos; terapias de VIH o SIDA; terapias útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y otros trastornos cognitivos; terapias útiles en el tratamiento de trastornos del sueño; agentes antiproliferativos, y agentes antitumorales.
Los ejemplos de agentes antidiabéticos para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen biguadinas (por ejemplo, metformina), inhibidores de la glucosidasa (por ejemplo acarbosa), insulinas (incluyendo secretagogos de insulina o sensibilizadores de insulina), meglitinidas (por ejemplo, repaglidina), sulfoniltureas (por ejemplo, glimepirida, gluburida y glipizida), combinaciones de biguanida/gliburida (por ejemplo, Glucovance®), tiazolidenodionas (por ejemplo, troglitazona, rosiglitazona y pioglitazona), agonistas de PPAR-alfa, agonistas de PPAR-gamma, agonistas duales PPARalfa/gamma, inhibidores de SGLT2, inhibidores de glicogen fosforilasa, inhibidores de proteína de unión a ácido graso (aP2) tales como los revelados en el documento número de serie de los Estados Unidos 09/159.079 presentado el 6 de marzo de 2000, inhibidores de péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1) y dipeptil peptidasa IV (DP4).
Los ejemplos de agentes antiosteoporosis apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen alendronato, risedronato. PTH, fragmento de PTH, raloxifeno, calcitonina, agonistas de receptor de progesterona no esteroidea, antagonista de ligando RANK, antagonistas de receptores de detección de calcio, inhibidores de TRAP, moduladores selectivos de receptores de estrógeno (SERM), inhibidores de estrógeno y
AP-1.
Los ejemplos de agentes antiobesidad apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de aP2, tales como los revelados en el documento número de serie de los Estados Unidos 09/519.079 presentado el 6 de marzo de 2000, antagonistas de PPAR gamma, agonistas de PPAR delta, agonistas adrenérgicos de beta 3, tales como AJ9677 (Takeda/Dainippon), L750355 (Merck), o CP331648 (Pfizer) u otros agonistas conocidos de beta 3 agonistas como se revelan en las patentes de los Estados unidos números. 5,541,204, 5,770,615, 5,491,134, 5,776,983 y 5,488,064, un inhibidor de lipasa, tal como orlistat o ATL-962 (Alizyme), un inhibidor de recaptación de la serotonina (y dopamina), tal como sibutramina, topiramato (Johnson & Johnson) u axoquiina (Regeneron), un fármaco receptor beta de tiroides, tal como un ligando de receptor de tiroides como se revela en los documentos WO 97/21993 (U. Cal SF), WO 99/00353 (KaroBio) y GB98/284425 (KaroBio), y/o un agente anoréctico, tal como dexanfetamina, fentermina, fenilpropanolamina o mazindol.
Los ejemplos de agentes antiinflamatorios para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen prednisona, dexametasona, Enbrel®, inhibidores de la ciclooxigenasa (es decir, inhibidores de COX-1 y/o COX-2 tales como AINE, aspirina, indometacina, ibuprofeno, piroxicam, Naproxen®, Celebrex®, Vioxx®), agonistas/antagonistas de CTLA4-Ig, antagonistas de ligandos CD40, inhibidores de IMPDH, tales como (antagonistas de integrinas de micofenolato (CellCept®), antagonistas de integrinas alpha-4 beta-7, inhibidores de adhesión celular, antagonistas de interferón gamma, ICAM-1, antagonistas de factor de necrosis tumoral (TNF) (por ejemplo, infliximab, OR1384), inhibidores de síntesis de prostaglandina, budesonida, clofazimina, CNI-1493, antagonnistasd de CD4 (por ejemplo, priliximab),inhibidores de proteínas quinasas mitógeno-activadas, inhibidores de proteínas tirosina quinasas (PTK), inhibidores de IKK, y terapias para el tratamiento de síndrome de colon irritable (por ejemplo, Zelmac® y Maxi-K® abridores tales como los revelados en la patente de los Estados Unidos No. 6,184,231 B1).
Los ejemplos de agentes antiansiedad apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen diazepam, lorazepam, buspirona, oxazepam, y hidroxicina pamoato.
Los ejemplos de antidepresivos apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen citalopram, fluoxetina, nefazodona, sertralina, y paroxetina.
Los ejemplos de agentes antihipertensivos apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen bloqueantes beta-adrenérgicos, bloqueantes de canales de calcio (tipo L y tipo T; por ejemplo diltiazem, verapamil, nifedipina, amlodipina y mibefradil), diuréticos (por ejemplo, corotiazida, hidroclorotiazida, flumetiazida, hidroflumetiazida, bendroflumetiazida, metilclorotiazida, triclorometiazida, politiazida, benztiazida, tricrinafen de ácido etacrínico, cortalidona, furosemida, musolimina, bumetanida, triamtreneno, amilorida, espironolactona), inhibidores de rinina, inhibidores de ACe (por ejemplo., captopril, zofenopril, fosinopril, enalapril, ceranopril, cilazopril, delapril, pentopril, quinapril, ramipril, lisinopril), antagonistas de receptores de AT-1 (por ejemplo, losartan, irbesartan, valsartan),antagonistas de receptores de ET (por ejemplo., sitaxsentan, atrsentan y los compuestos revelados en las patentes de los Estados Unidos No. 5.612.359 y 6.043.265), antagonista dual de ET/AII (por ejemplo, los compuestos revelados en la publicación WO 00/01389), inhibidores de endopeptidasa neutra (NEP), inhibidores de vasopepsidasa (inhibidores duales de NEP-ACEl) (por ejemplo, omapatrilat y gemopatrilat), y
nitratos.
Los ejemplos de agentes antiplaquetas para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen bloqueantes de GPIIb/IIIa (por ejemplo, abciximab, eptifibatida, tirofiban), antagonistas de P2Y12 (por ejemplo, clopidogrel, ticlopidina, CS-747), antagonistas de receptores de tromboxano (por ejemplo, ifetroban), aspirina, e inhibidores de PDE-II (por ejemplo, dipiridamol) con o sin aspirina.
Los ejemplos de glicosidas cardiacos apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen digitalis y ouabaina.
Los ejemplos de agentes de reducción de colesterol/lípidos apropiados agentes para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de HMG-CoA reductasa (por ejemplo, pravastatina, lovastatina, atorvastatina, simvastatina, NK-104 (a.k.a. itavastatina, o nisvastatina o nisbastatina) y ZD-4522 (a.k.a. rosuvastatina, o atavastatina o visastatina)), inhibidores de escualeno sintetasa, fibratos, secuestrantes de ácido biliar, inhibidores de ACAT, inhibidores de MTP, inhibidores de lipooxigenasa, inhibidores de absorción de colesterol, e inhibidores de la proteína de transferencia de éster del colesterol (por ejemplo, CP-529414).
Los ejemplos de antagonistas de receptores de mineralocorticoide apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen espironolactona y eplerinona.
Los ejemplos de inhibidores apropiados de fospodiesterasa para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de PDEIII tales como cilostazol, e inhibidores de PDE V tales como sildenafil.
Los ejemplos de miméticos de tiroides apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen tirotropina, polihiroide, KB-130015, y dronedarona.
Los ejemplos de agentes anabióticos apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen testosterona, TRH dietilstilbesterol, estrógenos, b-agonistas, teofilina, esteroides anabólicos, deshidroepiandrosterona, encefalinas, prostaglandinas de serie E, ácido retinoico y compuestos como los revelados en la patente de los Estados Unidos. No. 3,239,345, por ejemplo, Zeranol®; patente de los Estados Unidos No. 4,036,979, por ejemplo, Sulbenox® o péptidos como se revelan en la patente de los Estados Unidos. No. 4,411,890.
Los ejemplos de terapias apropiadas del VIH o el SIDA para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen indinavir sulfato, saquinavir, saquinavir mesilato, ritonavir, lamivudina, zidovudina, combinaciones de lamivudina/zidovudina, zalcitabina, didanosina, stavudina, y megestrol acetato.
Los ejemplos de terapias apropiadas para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y trastornos cognitivos para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen donepezil, tacrina, revastigmina, 5HT6, inhibidores de gamma secretasa, inhibidores de beta secretasa, bloqueantes de canales SK, bloqueantes Maxi-K, y bloqueantes KCNQ.
Los ejemplos de terapias apropiadas para el tratamiento de trastornos del sueños para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen análogos de melatonina, antagonistas de receptores de melatonina, agonistas de ML1B, y antagonistas de receptores de GABA/NMDA.
Los ejemplos de agentes antiproliferativos apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen ciclosporina A, paclitaxel, FK 506, y adriamicina.
Los ejemplos de agentes antitumorales apropiados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen paclitaxel, adriamicina, epotilonas, cisplatina y carboplatina.
Los compuestos de la presente invención se pueden usar, además, en combinación con suplementos nutricionales tales como los descritos en el documento U.S. 5,179,080, especialmente en combinación con proteína de trigo o casina, aminoácidos (tales como leucina, aminoácidos ramificados e hidroximetilbutirato), triglicéridos, vitaminas (por ejemplo, A, B6, B12, folata, C, D y E), minerales (por ejemplo, selenio, magnesio, zinc, cromo, calcio y potasio), carnitina, ácido lipoico, creatina, y la coenzima Q-10.
Además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con agentes terapéuticos usados en el tratamiento de la disfunción sexual, incluyendo pero no limitándose a inhibidores de PDE5, tales como sildenafil o IC-351; con un agente antirresortivo, terapias de sustitución hormonal, análogos de vitamina D, calcitoninas, suplementos de calcio y calcio elemental, inhibidores de catepsina K, inhibidores de MMP, antagonistas de receptores de revitronectina, antagonistas de Src SH2, inhibidores de vacular-H+- ATPasa, agonistas de receptores de progesterona, ipriflavona, antagonistas de fluoruro, antagonistas de RANK, PTH y sus análogos y fragmentos, Tibolona, inhibidores de HMG-CoA reductasa inhibitors, SERM, inhibidores de p38 prostanoides, inhibidores de 17-beta hidroxiesteroide deshidrogenasa e inhibidores de Src quinasa.
Los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con contraceptivos masculinos, tales como nonoxinol 9 o agentes terapéuticos para el tratamiento de la pérdida de cabello, tales como minoxidil y finasterida o agente quimioterapéuticos, tales como con agonistas de LHRH.
Para su uso preferido anticáncer o antiangiogénico, los compuestos de la presente los compuestos de la presente invención se pueden administrar bien solos o en combinación con otros agentes anticáncer y agentes citotóxicos y tratamientos útiles en el tratamiento de cáncer u otras enfermedades proliferativas, por ejemplo, donde el segundo fármaco tiene el mismo o distinto mecanismo de acción que los presentes compuestos de fórmula I. Los ejemplos de clases de agentes anticáncer y citotóxicos útiles en combinación con los presentes compuestos incluyen pero no se limitan a: agentes alquilantes tales como mostazas de nitrógeno, alquil sulfonatos, nitrosoureas, etileniminas, y triazenos; inhibidores de EGFR tales como inhibidores de EGFR de la molécula pequeña, anticuerpos de EGFR tales como C225 (Erbitux); antimetabolitos tales como antagonistas de folato, análogos de purina, y análogos de pirimidina; antibióticos tales como antraciclinas, bleomicinas, mitomicina, dactinomicina, y plicamicina; enzimas tales como L-asparaginasa; inhibidores de farnesil-proteina transferase; inhibidores de 5\alpha \betareductasa; inhibidores de 17\beta-hidroxi esteroide deshidrogenasa de tipo 3 o tipo 1; agentes hormonales tales como glucocorticoides, estrógenos/antiestrógenos, andrógenos/antiandrógenos, progestinas, y antagonistas de liberación de hormonas luteinizantes, octreotido acetato; agentes disruptores de los microtúbulos, tales como ecteinascidina o sus análogos y derivados; agentes estabilizantes de microtúbulos tales como taxanos, por ejemplo, paclitaxel (Taxol®), docetaxel (Taxotere®), y sys análogos, y epotilonas, tales como epotilones A-F y sus análogos; productos derivados de vegetales, tales como alcaloides de vinca, epipodofilotoxinas, taxanos; e inhibidores de la y topiosomerasa; inhibidores de la prenil-proteína transferase; y diversos agentes tales como hidroxiurea, procarbazina, mitotano, hexametilmelamina, complejos de coordinación de platino tales como cisplatina y carboplatina; y otros agentes usados como agentes anticáncer y citotóxicos tales como modificadores de respuesta biológica, factores del crecimiento; moduladores inmunitarios y anticuerpos monoclonales. Los compuestos de la invención se pueden usar también en combinación con terapia de radiación.
Los ejemplos representativos de estas clases de agentes anticáncer y citotóxicos incluyen pero no se limitan a clorhidrato de mecloretamina, ciclofosfamida, clorambucil, melfalan, ifosfamida, busulfan, carmustin, lomustina, semustina, streptozocina tiotepa, dacarbazina, metotrexato, tioguanina, mercaptopurina, fludarabina, pentastatina, cladribin, citarabina, fluorouracil, clorhidrato de doxorubicina, daunorubicina, idarubicina, sulfato de bleomicina, mitomicina C, actinomicina D, safracinas, saframicinas, quinocarcinas, a discodermolidas, vincristina, vinblastina, vinorelbina tartrato, etoposida, fosfato de etoposida, teniposida; paclitaxel, tamoxifeno, estramustina, estramustina fosfato sodio, flutamida, buserelina, leuprolida, pteridinas, diinos, levamisol, aflacón, interferón, interleuquinas, aldesleuqiuina, filgrastim, sargramostim, rituximab, BCG, tretinoina, clorhidrato de irinotecan, betametosona, clorhidrato de gemcitabina, altretamina, y topoteca y cualesquieras análogos y derviados de los mismos.
Los miembros preferidos de estas clases incluyen pero no se limita apaclitaxel, cisplatina, carboplatina, doxorubicina, carminomicina, daunorubicina, aminopterina, metotrexato, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, o porfiromicina, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurina, gemcitabina, citosina arabinosida, podofilotoxina o derivados de podofilotoxina tales como etoposida, etoposida fosfato o teniposida, melfalan, vinblastina, vincristina, leurosidina, vindesina y leurosina.
Los ejemplos de agentes anticáncer y otros agentes citotóxicos incluyen lo siguiente: derivados de epotilona como se encuentran en la patente alemana No. 4138042.8; las publicaciones WO 97/19086, WO 98/22461, WO 98/25929, WO 98/38192, WO 99/01124, WO 99/02224, WO 99/02514, WO 99/03848, WO 99/07692, WO 99/27890, WO 99/28324, WO 99/43653, WO 99/54330, WO 99/54318, WO 99/54319, WO 99/65913, WO 99/67252, WO 99/67253 y WO 00/00485; inhibidores de quinasa dependiente de ciclinasa como se encuentran en la publicación WO 99/24416 (véase también la patente de los Estados Unidos No. 6,040,321); e inhibidores de prenil-proteína transferasa como se encuentran en las publicaciones WO 97/30992 y WO 98/54966; y agentes tales como los descritos genérica y específicamente en la patente de los Estados Unidos No. 6,011,029 (los compuestos de dicha patente de los Estados Unidos se pueden emplear junto con cualquiera moduladores de NHR (incluyendo, pero no limitándose a, los de la presente invención) tales como moduladores de AR, moduladores de ER, con moduladores de LHRH, o con castración quirúrgica, especialmente en el tratamiento del cáncer).
Las combinaciones de la presente invención se pueden formular también o coadministrar con otros agentes terapéuticos que se seleccionan por su utilidad particular en la administración de terapias asociadas a las afecciones anteriormente mencionadas. Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden formular con agentes para prevenir la náusea, la hipersensibilidad y la irritación gástrica, tales como antieméticos, y antiistamínicos H_{1} y H_{2}.
Como pertenecen al tratamiento del cáncer, los compuestos de esta invención se usan más preferiblemente solos o en combinación con tratamientos anticáncer tales como terapia de radiación y/o con agentes citostáticos y/o citotóxicos, tales como, pero no limitándose a: agentes interactivos de ADN, tales como isplatina o doxorubicina; inhibidores de farnesil proteína transferasa, tales como los descritos en la patente de los Estados Unidos No. 6.011.029; inhibidores de topoisomerasa II, tales como etoposida; inhibidores de topoisomerasa I, tales como CPT-11 o topotecanagentes de estabilización de tubulina, tales como paclitaxel, docetaxel, otros taxanos, o epotilonas; agentes hormonales, tales como tamoxifeno; inhibidores de timidilato sintasa, tales como 5-fluorouracil; antimetabolitos, tales como metoxtrexata; agentes antiangiogénicos, tales como angiostatina, ZD6474, ZD6126 y comberstatina A2; inhibidores de quinasa, tales como anticuerpos específicos de her2, Iressa e inhibidores de CDK; inhibidores de histona desacetilasa, tales como CI-994 y MS-27-275. Tales compuestos se pueden combinar también con agentes que suprimen la producción de la testosterona en circulación tal como agonistas o antagonistas de LHRH o con castración quirúrgica. Las terapia de combinación ejemplares (por ejemplo, para el tratamiento de cáncer de próstata) para su uso con un compuesto de la presente invención incluyen un modulador de LHRH o prednisona.
La presente invención también contempla kits, por ejemplo, para el tratamiento de cáncer de próstata, que comprenden un primer recipiente (tal como un vial) que contiene una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, dicho compuesto opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable, y un segundo recipiente (tal como un vial) que contiene una formulación farmacéutica que comprende uno o más agentes (tales como un modulador de LHRH) a usar en combinación condicho compuesto de la presente invención, dicho(s) agente(s) opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Por ejemplo, las terapias conocidas para cáncer de próstata metastático avanzado incluyen "terapia de ablación de andrógeno completa" en la cual se inhibe el crecimiento tumoral controlando el suministro de andrógeno a los tejidos de la próstata mediante castración química (la castración sirve para inhibir la producción de testosterona en circulación (T) y la dihidrotestosterona (DHT)) seguido de la administración de antagonistas de receptores de andrógeno (AR) (que inhiben la función T/DHT derivada de la conversión de precursores de andrógeno circulantes en T/DHT por el tejido prostático). Los compuestos de la presente invención se pueden emplear como antagonistas de AR en terapia de ablación completa, solos o en combinación con otros antagonistas de AR, tales como Flutamida, Casodex, Nilutamida, o Ciproterona acetato.
La presente invención proporciona compuestos que se pueden usar para tratar pacientes que padecen de cáncer de próstata resistente a antagonistas de receptores de andrógeno que no se encuentran dentro de la fórmula I de la invención (o sales de los mismos), tales como bicalutimida. La invención contempla, además, de este modo, un procedimiento para tratar el cáncer de próstata resistente a un antagonista de receptores de andrógeno distinto de los de la fórmula I o las sales de los mismos. que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo necesita un compuesto capaz de reducir la velocidad de crecimiento de la masa tumoral de dicho cáncer en una cantidad efectiva para el mismo. El término "reducir la velocidad de crecimiento de dicha masa tumoral" indica la reducción en la velocidad de crecimiento (incluyendo, por supuesto, la estabilización o la reducción en tamaño) de dicha masa tumoral con un tratamiento respecto de la velocidad de crecimiento con un tratamiento con dicho antagonista de receptores de andrógeno distinto de los de la fórmula HI o las sales de los mismos. Los compuestos preferidos son los compuestos de la fórmula I y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de la presente invención.
La presente invención contempla también el uso de un inhibidor de antiestrógeno y/o aromatasa en combinación con un compuesto de la presente invención, por ejemplo, para ayudar a mitigar los efectos laterales asociados a la terapia de antiandrógeno tales como ginecomastia. Los inhibidores ejemplares de antiestrógeno y/o aromatasa incluyen anastrozol (Arimidex), tamoxifeno citrato (Nolvadex), exemestano (Aromasin), toremifeno citrato (Fareston), letrozol (Femara), clorhidrato de raloxifeno (Evista), Faslodex, o 923 (Wyeth Ayerst).
Los compuestos de la presente invención se pueden emplear como adyuvantes a la cirugía.
Otra aplicación de los presentes compuestos es en combinación con terapia de anticuerpos tales como pero no limitándose a terapia de anticuerpos contra PSCA. Una aplicación adicional en concierto con agentes de modulación inmunitaria vacuna para el tratamiento del cáncer.
Los compuestos de la presente invención se pueden emplear según los procedimientos descritos en la Solicitud provisional de patente con número de serie 60/284,438, que lleva por título "Selective Androgen Receptor Modulators and Methods for Their Identification, Design and Use" presentada el 18 de abril de 2001 por Mark E. Salvati et al. (Número de expediente. LD0250(PSP)), dicha solicitud de provisional de patente se incorpora a la presente memoria por referencia en su integridad (incluyendo, pero no limitándose a, la referencia a todos los compuestos específicos de la fórmula I de la presente invención), y la solicitud de patente de los Estados Unidos con número de serie 09/885,827, que lleva por título "Selective Androgen Receptor Modulators and Methods for Their Identification, Design and Use" presentada el 20 de junio de 2001 por Mark E. Salvati et al. (número de expediente LD0250(NP)), dicha solicitud de patente se incorpora a la presente memoria en su integridad (incluyendo pero no limitándose a la referencia a todos los compuestos de la fórmula I de la presente invención).
Para los racematos de los compuestos de la presente invención, un enantiómero puede, por ejemplo ser un antagonista de AR completo mientras que el otro puede ser un antagonista de AR en tejidos tumorales mientras no tiene actividad o tiene actividad agonista en tejido no tumoral que contiene el receptor andrógeno.
Los otros agentes terapéuticos anteriores, cuando se emplean en combinación con los compuestos de la presente invención, se pueden usar, por ejemplo, en las cantidades indicadas en la Physicians'Desk Reference (PDR) o como lo determina por otro lado un experto en la técnica.
Los siguientes ensayos se pueden emplear para determinar la actividad de un compuesto como un modulador de NHR. Los compuestos preferidos son los que tienen una actividad superior a 20 \mum para la unión o la transactivación en cualquiera de estos ensayos. Se determina que diversos compuestos de la presente invención tienen actividad de moduladores AR utilizando el ensayo de transactivación, y ensayos de unión a AR estándar como se describen a continuación.
Ensayos de transactivación Ensayo Específico del AR
Los compuestos de la presente invención se ensayaron en ensayos de transactivación de una construcción reportera transfectada y usando el receptor de andrógeno endógeno de las células huésped. El ensayo de transactivación proporciona un procedimiento para identificar agonistas funcionales (DHT). Este ensayo se puede usar para predecir actividad in vivo cuando hay una buena correlación en ambas series de datos. Véase, por ejemplo T. Berger et al., J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 773 (1992), cuya revelación se incorpora a la presente memoria por referencia.
Para el ensayo de transactivación se introduce un plásmido reportero por transfección (un procedimiento para inducir que una células tomen genes extranjeros) dentro de las respectivas células. Este plásmido reportero, que comprende el ADNc para una proteína reportera, tal como alcalino fosfatasa secretada (SEAP) controlada por secuencias aguas arriba de antígeno específico de próstata (PSA) que contienen elementos de respuesta a andrógeno (ARE). Este plásmido reportero funciona como un reportero para la actividad de modulación de transcripción del AR. De este modo, el reportero actúa como un sustituto de los productos (ARNm a continuación proteína) normalmente expresados por un gen bajo control del AR y su hormona nativa. con el fin de detectar antagonistas, se lleva a cabo el ensayo de transactivación en presencia de concentración constante de la hormona de AR natural (DTH) conocida por inducir una señal reportera definida. Las crecientes concentraciones de un antagonista sospechoso reducirá la señal reportera (por ejemplo, producción de SEAP). Por otra parte, la exposición de las células transfectadas a concentraciones crecientes de un agonista sospechoso incrementará la producción de la señal reportera.
Para este ensayo, las células LNCaP y MDA 453 se obtuvieron en el American Type Culture Collection (Rockville, MD), y mantuvieron en RPMI 1640 o el medio de DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS; Gibco) respectivamente. Las células respectivas se transfectaron transitoriamente por electroporación según el procedimiento optimizado descrito por Heiser, 130 Methods Mol. Biol., 117 (2000), con el plásmido reportero pSEAP2/PSA540/Enhancer. El plásmido reportero, se construyó como sigue: se uso ADN genómico de placenta humano comercial para generar por Reacción de ciclo de polimerasa (PCR) un fragmento que contiene el sitio BgIII (posición 5284) y el sitio Hind III en la posición 5831 del promotor de antígeno específico de próstata humano (Acceso # U U37672), Schuur, et al., J. Biol. Chem., 271 (12): 7043-51 (1996). Este fragmento se subclonó en el pSEAP2/básico (Clontech) previamente digerido con BgIII y HindIII para generar al construcción pSEAP2/PSA540. A continuación se amplificó un fragmento que lleva el fragmento de secuencia corriente arriba de PSA humano entre las posiciones 5322 y 3873 por PCR a partir de ADN genómico de placenta humano. Se introdujeron un sitio Axhol y un sitio BgIII con los cebadores. El fragmento resultante se subclonó en el pSEAP2/PSA540 digerido con XhoI y BglII respectivamente, para generar la construcción pSEAP2/PSA540/Enhancer. Las células LNCaP y MDA 453 se recogieron en medios que contienen FBS dializado al 10%. Cada suspensión celular se distribuyó en dos cubetas de pulsador génico (Bio-Rad) que a continuación recibieron 8 Pg de la construcción reportera y se electroporó usando un pulsador génico Bio-Rad a 210 voltios y 960 \muFaraday. Después de las transfecciones, las células se lavaron y se incubaron con medio que contienen suero bovino fetal bovino dializado en ausencia (blanco) o presencia (control) de 1 nM dihidrotestosterona (DHT; Sigma Chemical) y en presencia o ausencia de la bicalutamida antiandrógeno estando compuestos de la presente invención en concentraciones que varían entre 10-10 y 10-5 M (muestra). Se usaron duplicados para cada muestra. Las diluciones de compuestos se llevaron a cabo sobre un puesto de trabajo Biomek 2000. Después de 48 horas, se ensayó una fracción del sobrenadante para actividad SEAP usando el sistema de ensayo quimioluminiscente Pompa-Light (Trompis, Cinc). Se determinó la viabilidad del resto de células usando el ensayo de proliferación celular no radiactivo acuoso CellTiter 96 (MTS Assay, Promega). En resumen, se añadió una mezcla de un compuesto de tetrazolio (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna; MTS) y un reactivo de acoplamiento de electrones (fenazina metosulfato; PMS) a las células. Se bioredujo MTS (reactivo de Owen) por células en un formazan que es soluble en un medio de cultivo human, y por lo tanto su absorción a 490 nm se puede medir directamente a partir de placas de ensayo de 96 pocillos sin procesamiento adicional. La cantidad de producto de formazan medido por la cantidad de absorción de 490 nm es directamente proporcional al número de células vivas en cultivo. Para cada replicado se normalizo la lectura de SEAP por el valor Abs490 derivado del ensayo MTS Para el modo antagonista, se calculo el porcentaje de inhibición de la siguiente forma:
Porcentaje de inhibición = 100 x (1- [control medio - blanco medio / muestra media - blanco medio])
Se registraron los datos y la concentración del compuesto que inhibió el 50% del SEAP normalizado se cuantificó (IC_{50}).
Para el modo agonista se denomina el porcentaje de control como el efecto del compuesto ensayado comparado con el efecto máximo observado con la hormona natural, en este caso DHT, y se calculó de la siguiente forma:
Porcentaje de control = 100 x muestra media - blanco medio/ control medio - blanco medio
Se registraron los datos y la concentración del compuesto que se activó a niveles del 50% del SEAP normalizado para el control se cuantificó (IC_{50}).
Ensayo de especificidad de GR
El plásmido reportero utilizado comprendió ADNc para la proteína SEAP reportera, como se describe para el ensayo de transactivación específico de AR. La expresión de la proteína SEAP reportera se controló por secuencias repetidas terminales largas del virus de tumor de mama de ratón (MMTV LTR) que contiene tres elementos de respuesta hormonal (HRE) que se pueden regular tanto por GR como por PR, véase por ejemplo, G. Chalepakis et al., Cell, 53(3), 371 (1988). Este plásmido se transfectó en las células A549, que expresa GR endógeno, para obtener un ensayo de transactivación específica de GR. Se obtuvieron células A549 del American Type Culture Collection (Rockville, MD), y se mantuvieron en RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino al 10% (FBS; Gibco). La determinación de la actividad antagonista específica de GR de los compuestos de la presente invención fue idéntica a la descrita para el ensayo de transactivación específica de AR, salvo que se sustituyó el DHT con 5 nM de dexametasona (Sigma Chemicals), un agonista específico para GR. La determinación de la actividad agonista específica de GR de los compuestos de la presente invención se llevó a cabo según se describe para el ensayo de transactivación AR, en el cual se mide la activación del sistema reportero específico GR por la adición de un compuesto de ensayo, en ausencia de un ligando de agonistas específico GR conocido.
Ensayo específico PR
El plásmido reportero utilizado comprendió ADNc para la proteína SEAP reportera, como se describe para el ensayo de transactivación específico de AR. La expresión de la proteína SEAP reportera se controló por secuencias repetidas terminales largas del virus de tumor de mama de ratón (MMTV LTR) que contiene tres elementos de respuesta hormonal (HRE) que se pueden regular tanto por GR y como por PR, Este plásmido se transfectó en T47D, que expresa PR endógeno, para obtener un ensayo de transactivación específica de PR. Se obtuvieron células T47D del American Type Culture Collection (Rockville, MD), y se mantuvieron en el medio DMEM suplementado con suero fetal bovino al 10% (FBS; Gibco). La determinación de la actividad antagonista específica de PR de los compuestos de la presente invención fue idéntica a la descrita para el ensayo de transactivación específica de AR, salvo que se sustituyó el DHT con 1 nM de Promegastona (NEN), un agonista específico para PR. La determinación de la actividad agonista específica de PR de los compuestos de la presente invención se llevó a cabo según se describe para el ensayo de transactivación AR, en el cual se mide la activación del sistema reportero específico PR por la adición de un compuesto de ensayo, en ausencia de un ligando de agonistas específico PR conocido.
Ensayo de unión a AR
Para todo el ensayo de unión celular, se incubaron células LNCaP humanas (AR mutante T877A) o MDA 453 (Ar de tipo salvaje) en placas de microvaloración de 96 pocillos que contienen RPMI 1640 o DMEM suplementado con CA-FBS dializado al 10% (Cocaleco Biologicals) respectivamente a 37ºC para eliminar cualquier ligando endógeno que se pudiese complejar con el receptor en las células. Después de 48 horas, se llevaron a cabo bien un análisis de saturación para determinar el K_{d} para dihidrotestosterona valorada [^{3}H]-DHT, o un ensayo de unión competitivo para evaluar la capacidad de los compuestos de ensayo para completar con [^{3}H]-DHT. Para el análisis de saturación, se añadieron medios (RPMI 1640 o DMEM - CA-FBS al 2%9 que contienen [^{3}H]-DHT (en concentraciones que varían entre 0,1 nM a 16 nM) en ausencia (unión total) o presencia (unión no específica) de un exceso molar de 500 veces de FHY no marcado a las células. Después de 4 horas a 37ºC, se eliminó una alícuota de los medios de unión total a cada concentración de [^{3}H]-DHT para estimar la cantidad de [^{3}H]-DHT libre. Los medios restantes se eliminaron, las células se lavaron tres veces con PBS y se recogieron sobre placas UniFilter GF/B (Packard), se añadió Microscint (Packard) y se contaron las placas en un contador Top-Counter (Packard) para evaluar la cantidad de [^{3}H]-DHT unido.
Para el análisis de saturación, se definió la diferencia entre la unión total y la unión no específica como unión específica. La unión específica se evaluó por análisis de Scatchard para determinar el K_{d} para [^{3}H]-DHT. Véase por ejemplo D. Rodbard, Mathematics and statistics of ligand assays: una guía ilustrada: En: J. Langon and J. J. Clapp, eds., Ligand Assay, Masson Publishing U.S.A., Inc., New York, pp. 45-99, (1981), cuya revelación se incorpora a la presente memoria por referencia.
Para los estudios de competición, los medios que contienen 1nM [3H]-DHT y compuestos de la invención ("compuestos de ensayo") en concentraciones que varían entre 10^{-10} y 10^{-5} se añadieron a las células. Se usaron dos replicados para cada muestra. Después de 4 horas a 37ºC, se lavaron, se recogieron y se contaron como se ha descrito anteriormente. Los datos se registraron como la cantidad de [^{3}H]-DHTp(porcentaje de control en ausencia de compuesto de ensayo) que queda sobre el intervalo de la curva de respuesta a dosis para un compuesto dado. La concentración de compuesto de ensayo que inhibió el 50% de la cantidad de [^{3}H]-DHT unido en ausencia de ligando de competición se cuantificó (IC_{50}) después de la transformación log-logit. Los valores KI se determinaron por aplicación de la ecuación de Cheng-Prussof a los valores IC_{50}, donde:
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Después de corregir la unión no específica, se determinaron los calores IC50. El IC_{50} se definió como la concentración de ligando competitivo necesario para reducir la unión específica en un 50%. El K_{d} paras [^{3}H]-DHT para MDA 453 y LNCaP fue 0,7 y 0,2 nM, respectivamente.
Ensayo de proliferación de células de próstata humana
Los compuestos de la presente invención se ensayaron ("compuestos de ensayo") en la proliferación de líneas celulares de cáncer de próstata humana. Para esto, se incubaron células MDA Pca2B, una línea celular derivada de la metástasis de un paciente que falló la castración, Navone et al., Clin. Cancer Res., 3, 2493-500 (1997), con o sin los compuestos de ensayo durante 72 horas y la cantidad de [3H]-timidina incorporada al ADN se cuantificó para evaluar el número de células y por lo tanto la proliferación. La línea celular MDA PCa2b se mantuvo en los medios BRFF-HPC1 (Biological Research Faculty & Facility Inc., MD) suplementado con FBS al 10%. Para el ensayo, las células se depositaron en microplacas de 96 pocillos Biocated y se incubaron a 37ºC en FBS al 10%(dializado)/BRFF-BMZERO (sin andrógenos). Después de 24 horas, las células se trataron en ausencia (blanco) o presencia de 1 nM DHT (control) o sin compuestos de ensayo (muestra) de la presente invención en concentraciones que varían entre 10^{-10} y 10^{-5}. Se usaron replicados para cada muestra. Las diluciones de compuestos se llevaron a cabo en una estación de trabajo de laboratorio Biomek 2000. 72 horas después se añadió 0,44 uCi de [^{3}H]-timidina (Amersham) por pocillo y se incubó durante otras 24 horas seguido de tripsinización, recogida de las células sobre filtros GF/B. Se añadió PS microscint a los filtros antes de contarlos sobre un contador Beckman TopCount.
El porcentaje de inhibición se calculo de la siguiente manera:
% de inhibición = 100 x (1- [media_{control} - media_{blanco}/ media_{muestra} - media_{blanco}])
Los datos se registraron y se cuantificó la concentración de compuesto que se inhibió al 50% de la incorporación de la incorporación de [^{3}H]-timidina.
Ensayo de transactivación de mioblasto de ratón C2C12
Se desarrollaron dos ensayos de transactivación funcional para evaluar la eficacia de agonistas de andrógeno en un fondo de células musculares usando un reportero de luciferasa. El primer ensayo (ARTA1 Stable 1) usa una línea celular, Stable 1 (clon #72), que expresa establemente el receptor de andrógeno de rata de longitud total pero requiere la transfección transitoria de un potenciador/reportero. Esta línea celular se derivó de células de mioblasto de ratón CeC12. El segundo ensayo (ARTA2 Stable 2) usa una línea celular Stable 2 (clon #133), derivada de Stable 1 que expresa establemente tanto rAR como el potenciador/reportero de luciferasa.
La construcción de potenciador/reportero usada en este sistema es pGL3/2XDR-1/luciferasa. Se indicó que 2XDR-1 fue un elemento de respuesta específica a AR en las células CV-1, Brown et. al. The Journal of Biological Chemistry 272, 8227-8235, (1997). Se desarrollo por mutagénesis aleatoria de una secuencia potenciadora de consenso AR/GR.
ARTA Stable 1
1. Las células Stable 1 se depositaron en placas de formato de 96 pocillos a una concentración de 6.000 células/pocillo en DMEM de glucosa elevada sin rojo fenol (Gibco BRL, Cat. No.: 21063-029) que contiene FBS tratado con carbón al 10% y dextrano (HyClone Cat. No.: SH30068.02), 50 mM de tampón HEPES (Gibco BRL, Cat. No.: 15630-080), 1 X MEM Na Piruvato (Gibco BRL, Cat. No.: 11360-070), 0,5 X de antibiótico-antimicótico, y 800 \mug/ml de geneticina (Gibco BRL, Cat. No.: 10131-035).
2. 48 horas más tarde, las células se transfectan con pGL3/2XDR-1/luciferasa usando el reactivo LipofectAMINE Plus^{TM} (Gibco BRL, Cat. No.: 10964-013). Específicamente, se diluyeron 5 ng/pocillo del pGL3/2XDR-1/ADN de luciferasa y 50 ng/pocillo de ADN de esperma de salmón (como vehículo) con 5 \mul/pocillo de medio Opti-MEMem (Gibco BRL, Cat. No.: 31985-070). A esto se añadió 0.5 \mul/pocillo de reactivo Plus. Esta mezcla se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente. En un recipiente separado, se diluyó 0,385 Ml/pocillo de reactivo LipofectAMINE con 5 \mul/pocillo de Opti-MEM. La mezcla de ADN se combina entonces con la mezcla de LipofectAMINE y se incuba durante 15 minutos más a temperatura ambiente. Durante este tiempo, el medio de las células se elimina y se sustituye con 60 \mul/pocillo de Opti-MEM. A esto se añaden 10 \mul/pocillo de la mezcla de transfección ADN/LipofectAMINE. Las células se incuban durante 4 horas.
3. La mezcla de transfección se elimina de las células y se sustituye con 90 \mul de medio como en el apartado 1 anterior.
4. Se depositan 10 \mul/pocillo de la dilución farmacológica apropiada en cada pocillo.
5. 24 hora más tarde, se usa el sistema de ensayo de luciferasa Steady-Glo^{TM} para detectar actividad según las instrucciones del fabricante (Promega, Cat. No.: E2520).
ARTA Stable 21
1. Las células Stable 2 se depositaron en placas de formato de 96 pocillos a una concentración de 6.000 células/pocillo en DMEM de glucosa elevada sin rojo fenol (Gibco BRL, Cat. No.: 21063-029) que contiene FBS tratado con carbón al 10% y dextrano (HyClone Cat. No.: SH30068.02), 50 mM de tampón HEPES (Gibco BRL, Cat. No.: 15630-080), 1 X MEM Na Piruvato (Gibco BRL, Cat. No.: 11360-070), 0,5 X de antibiótico-antimicótico, y 800 \mug/ml de geneticina (Gibco BRL, Cat. No.: 10131-035). y 800 \mu/ml de Higromogina \beta (Gibco BRL, Cat. No.: 10687-010).
2. 48 horas más tarde, se retiró el medio sobre las células y se sustituyó como 90 \mul fresco. Se depositan 10 \mul/pocillo de la dilución farmacológica apropiada en cada pocillo.
3. 24 hora más tarde, se usa el sistema de ensayo de luciferasa Steady-Glo^{TM} para detectar actividad según las instrucciones del fabricante (Promega, Cat. No.: E2520).
Véase la solicitud de patente de los Estados Unidos número de serie 09/885.831 que lleva por título "Cell Lines and Cell-BasedAssays for Identification of Androgen Receptor Modulators" presentada el 20 de junio de 2001 por Jacek Ostrowski et al. (expediente de agente D0177), dicha solicitud de patente se incorpora a la presente memoria descriptiva por referencia en su integridad.
Ensayos de proliferación Ensayo de proliferación de células de mama murina
La capacidad de los compuestos de la presente invención ("compuestos de ensayo") para modular la función de AR se determinó ensayando dichos compuestos en un ensayo de proliferación usando la línea de células de mama murina responsiva a andrógeno derivadas del Tumor Shionogi, Hiraoka et al., Cancer Res., 47, 6560-6564 (1987). Los clones dependientes de AR estables de la línea Shionogi parenteral se establecieron pasando fragmentos tumorales bajo los procedimientos generales originalmente descritos en Tetuo, et. al., Cancer Research 25, 1168-1175 (1965). Del procedimiento anterior, en la línea estable, se aisló, caracterizó y utilizó SC114 para el ensayo de los compuestos ejemplares. Se incubaron las células SC114 con o sin los compuestos de ensayo durante 72 horas y se cuantificó la cantidad de [3H]-timidina incorporada al AND como punto final sustituto para evaluar el número de células y por lo tanto la velocidad de proliferación como se describen en Suzuki et. al., J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 37, 559-567 (1990). Se mantuvo la línea celular SC114 en MEM que contiene 10^{-8} M de testosterona y FCS tratado con DCC al 2%. Para el ensayo se depositaron las células en microplacas de 96 pocillos en el medio de mantenimiento y se incubaron a 37ºC. Al día siguiente, el medio se cambio por medio libre de suero [Ham's F-12:MEM (1;1, v/v) que contenía BSA al 0,1%] con (modo antagonista) o sin (modo agonista) 10^{-8} M de testosterona y los compuestos de ensayo de la presente invención en concentraciones que varían de 10^{-10} a 10^{-5} M. Se usaron duplicados para cada muestra. Las diluciones de compuestos se llevaron a cabo en una estación de trabajo de laboratorio Biomek 2000. 72 horas más tarde se añadió 0,44 uCi de [3H]-Timidina (Amersham) por pocillo y se incubó durante otras 2 horas seguido de tripsinización, y recogida de las células sobre filtros GFB. Se añadieron PS Micro-scint a los filtros antes de su recuento sobre un contador Beckman TopCount.
Para el modo antagonista se calcula el porcentaje de inhibición de la siguiente manera:
% de inhibición = 100 x (1 - [media_{muestra} - media_{blanco} / media_{control} - media_{blanco}])
Los datos se registraron y se cuantificó la concentración de compuesto que inhibió el 50% de la incorporación de [3H]-Timidina (IC_{50}).
Para el modo agonista el porcentaje control se denomina como el efecto del compuesto ensayado comparado con el efecto máximo observado con la hormona natural, en este caso DHT, y se calculo de la siguiente forma:
% de control = 100 x (media_{muestra} - media_{blanco})/ media_{control} - media_{blanco}]
Los datos se registraron y se cuantificó la concentración de compuesto que inhibió el 50% de la incorporación de [3H]-Timidina (EC_{50}).
Ensayo in vitro para medir la transrepresión AP-1 inducida por GR
El ensayo AP-1 es un ensayo de reportero de luciferasa basado en células. Las células A549, que contienen receptor de glucocorticoide endógeno, se transfectaron establemente con un sitio de unión de ADB AP-1 fijado al gen de la luciferasa. Las células se cultivan entonces en RPMI + suero bovino fetal al 10% (tratado con carbón) + penicilina/estreptomicina con 0,5 mg/ml de geneticina. Las células se depositan el día anterior del ensayo en una concentración aproximada de 40 células por pocillo. El día del ensayo, se retira el medio por aspiración y se añade 20 \mu de tampón de ensayo (RPMI sin rojo fenol - FCS al 10% (tratado con carbón) + penicilina/estreptomicina) a cada pocillo. En este punto, se añaden bien 20 \mul de tampón de ensayo (experimentos control), los compuestos de la presente invención ("compuestos de ensayo") (disueltos en DMSO y añadidos a concentraciones variables) o dexametasona (100 mM en DMSO, control positivo) a cada pocillo. Las placas se preincuban entonces durante 15 minutos a 37ºC, seguido de la estimulación de las células con 10 ng/ml de PMA. Las placas se incuban entonces durante 7 horas a 37ºC después de lo cual se añadieron 40 \mul de reactivo de sustrato de luciferasa a cada pocillo. Se mide la actividad por análisis de un luminómetro comparado con los experimentos de control tratados con tampón o dexametasona. La actividad se designa como porcentaje de inhibición del sistema reportero comparado con el control de tampón con solo 10 ng/ml de PMA. La dexametasona de control, a una concentración de \leq10 \muM suprime típicamente la actividad en un 65%. Los compuestos de ensayo que demuestran una inhibición de inducción de PMA del 50% o más a una concentración de compuesto de ensayo \leq 10 \muM se consideran activos.
Ensayo de antagonista de AR del ensayo de peso mojado de próstata
La actividad de compuestos de la presente invención como antagonistas de AR se investigó en un modelo de rata macho inmadura, un ensayo reconocido estándar de actividad de antiandrógeno de un compuesto dado, como se describen L. G. Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med., 83, 175 (1953); P. C. Walsh y R. F. Gittes, "Inhibition of extratesticular stimuli to prostate growth in the castrated rat by antiandrogens", Endocrinology, 86, 624 (1970); y B. J. Furr et al., "ICI 176,334: A novel non-steroid, peripherally selective antiandrogen", J. Endocrinol., 113, R^{7}-9 (1987), cuyas revelaciones se incorporan a la presente memoria por referencia.
\newpage
La base de este ensayo es el hecho de que los órganos accesorios sexuales macho, tales como la próstata y las vesículas seminales desempeñan un papel importante en la función reproductiva. Estas glándulas son estimuladas para crecer y se mantienen en tamaño la función secretora por la presencia continuada de testosterona en suero (T), que es el principal andrógeno en suero (>95%) producido por las células Leydig en los testículos bajo el control de la hormona luteinizante de la pituitaria (LH) y la hormona estimuladora de los folículos (FSH). La testosterona se convierte en la forma más activa, la dihidrotestosterona, DHT), dentro de la próstata por 5\alpha-reductasa. Los andrógenos adrenales también contribuyen aproximadamente el 20% del DHT total en la próstata de rata, comparado con el 40% de los hombres de 65 años de edad. F. Labrie et al. Clin. Invest. Med., 16, 475-492 (1993). Sin embargo, no es una vía principal, ya que tanto en los animales como en los humanos, la castración conduce a una involución casi completa de la próstata y de las vesículas seminales sin adrenalectomía concomitante. Por lo tanto, en condiciones normales, las adrenales no soportan crecimiento considerable de los tejidos prostáticos. M. C. Luke and D. S. Coffey, "The Physiology of Reproduction" ed. por E. Knobil y J. D. Neill,1, 1435-1487 (1994). Puesto que los órganos sexuales son los tejidos más sensibles a la modulación de la actividad de andrógeno, este modelo se usa para determinar el crecimiento dependiente de los órganos sexuales accesorios en ratas castradas inmaduras.
Las ratas inmaduras macho (19-290 días de edad Sprague-Dawley, Harlan Sprague Dawely) se castraron con anestesia de metofano. Cinco días después de la cirugía se les administraron dosis a estas ratas castradas (60-70 g, 23-25 días de edad) durante 3 días. A los animales se les administraron dosis subcutáneas (s.c) de 1 mg/kg de Testosterona Propionato (TP) en un vehículo de aceite de cacahuete y los compuestos de ensayo anti-andrógeno (compuestos de la presente invención) fueron administrado en dosis por alimentación forzada (p.o.) en suspensiones disueltas de PEG 400 al 80% y Tween 80 al 20% (PEGTW). A los animales se les administro dosis (v/p) de 0,5 ml de vehículo/100 g de peso corporal. Los grupos experimentales fueron los siguientes:
1.-
Vehículo de control
2 .-
Testosterona Propionato (TP) (3 mg/rata/día, subcutánea)
3.-
TP más Casodex (administrado p.o. en PEGTW, QD), un antiandrógeno reconocido, como compuesto de referencia.
4.-
Para demostrar actividad antagonista; un compuesto de la presente invención (c"compuesto de ensayo") se administró (p.o. en PEGTW, QD) con TP (s.c. como se administra en el grupo 2) en una serie de dosis.
5.-
Para demostrar actividad agonista; un compuesto de la presente invención (c"compuesto de ensayo") se administró solo (p.o. en PEGTW, QD) en una serie de dosis.
\vskip1.000000\baselineskip
Al final del tratamiento de 3 días, los animales se sacrificaron, y se peso la próstata ventral. Para comparar los datos de diferentes experimentos, se estandarizaron en primer lugar los pesos de los órganos sexuales como mg por 100 g de peso corporal, y el incremento en el peso de los órganos inducido por TP se consideró como el máximo incremento (100%). Se uso ANOVA seguido del ensayo exacto de Fischer o Student a una cola para análisis estadísticos.
La ganancia y pérdida del peso de los órganos sexuales reflejan los cambios del número de células (contenido de ADN) y la más celular (contenido de proteínas), dependiendo de la concentración de andrógeno en suero. Véase Y. Okuda et al., J. Urol., 145, 188-191 (1991), cuya revelación se incorpora a la presente memoria por referencia. Por lo tanto, la medición del peso mojado de los órganos es suficiente para indicar la bioactividad de andrógenos y antagonistas de andrógeno. En ratas castradas inmaduras, la sustitución de andrógeno exogénos incrementa las vesículas seminales (SV) y la próstata ventral (VP) de una manera dependiente de dosis.
El incremento máximo en el peso de los órganos fue de 4 a 5 veces cuando se administro una dosificación de 3 mg/rata/día de testosterona (T) o 1 mg/rata/día de testosterona propionato (TP) durante 3 días. El EC_{50} de T y TP fue aproximadamente 1 mg y 0,03 md, respectivamente. El incremento en el peso de la VP y los SV también se correlacionó con el incremento en la concentración de T y DHT en suero. Aunque la administración de T mostró concentraciones en suero cinco veces superiores de T y DHT 2 horas después de inyección subcutánea que de TP, después, estos niveles elevados bajaron muy rápidamente. Por el contrario, las concentraciones en suero de T y DHT en animales tratados con TP fueron bastante consistentes durante las 24 horas siguientes y por lo tanto TP mostró una potencia aproximadamente 10-30 veces superior a T libre.
En este ejemplo de rata castrada inmadura se administró de forma simultánea un conocido AR antagonista (Casodex) con 0,1mg de TP (ED_{80}), inhibiendo el incremento tratado con testosterona en los pesos del VP y SV de una manera dependiente de dosis. Los efectos contrarios fueron similares con la dosis oral o subcutánea. Los componentes de a invención también exhibieron la actividad AR antagonista con la supresión del incremento tratado con testosterona en los pesos del VP y SV.
Ensayo de Agonista AD de ensayo de Peso mojado de próstata y Levator Ani
La actividad de compuestos de la presente invención como agonistas Ar se investigó en un modelo de rata macho inmadura, un ensayo reconocido de efectos anabólicos en el músculo, efectos sostenidos en órganos sexuales para un compuesto dado, como se describe en L. G. Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med., 83, 175 (1953); B. L. Beyler et al, "Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals", J. Amer. Med. Women's Ass., 23, 708 (1968); H. Fukuda et al., "Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay", Nago Dai. Yak. Ken. Nem. 14, 84 (1966), cuyas revelaciones se incorporan a la presente memoria por referencia.
La base de este ensayo reside en la acción bien definida de agentes androgénicos sobre el mantenimiento y el crecimiento de tejidos musculares y órganos sexuales accesorios en animales y hombres. Los esteroides androgénicos, tales como la testosterona (T), se han caracterizado por su capacidad para mantener masa muscular. Los tratamientos de animales o humanos después de castraciones con una fuente exógena de T da como resultado una inversión de la atrofia muscular. Los efectos de T sobre la atrofia muscular en el músculo levator ani estimulado se han caracterizado bien. M. Masuoka et al., "Constant cell population in normal, testosterone deprived and testosterone stimulated levator ani muscles" Am. J. Anat. 119, 263 (1966); Z. Gori et al., "Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats. I. Quantitative data" Boll. Soc. Ital. Biol. Sper. 42, 1596 (1966); Z Gori et al., "Testosterone hypertrophy of levator ani muscle "Am. J. Anat. 119, 263 (1966); Z. Gori et al., "Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats. I. Quantitative data" Boll. -Soc. Ital. Biol. Sper. 42, 1596 (1966); Z. Gori et al., "Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats. II. Electron-microscopic observations" Boll. - Soc. Ital. Biol. Sper. 42, 1600 (1966); A. Boris et al., Steroids 15, 61 (1970). Como se describe anteriormente, los efectos de los andrógenos o el mantenimiento de órganos sexuales accesorios masculinos, tales como la próstata y las vesículas seminales, se describen bien. La castración da como resultado la rápida involución y atrofia de la próstata y las vesículas seminales. este efecto se puede revertir por la adición exógena de andrógenos. Puesto que tanto el músculo levator ani como los órganos sexuales masculinos son los tejidos más sensibles a los efectos de los agentes androgénicos, este modelo se usa para determinar la inversión dependiente de andrógeno de atrofia en el músculo levator ani y los órganos sexuales accesorios en ratas castradas inmaduras. Las ratas sexualmente maduras (200-250 g, 6-8 semanas de edad, Sprague-Dawley, Harlan) se adquirieron castradas al vendedor (Taconic). Las ratas se dividieron en grupos y se trataron diariamente durante 7 a 14 días con lo siguiente:
1.-
Vehículo de control
2.-
Testosterona propionato (TP) (3 mg/rata/día, subcutánea)
3
TP más Casodex (administrado p.o. en PEGTW, QD), un antiandrógeno reconocido, como compuesto de referencia.
4.-
Para demostrar actividad antagonista; un compuesto de la presente invención (c"compuesto de ensayo") se administró (p.o. en PEGTW, QD) con TP (s.c. como se administra en el grupo 2) en una serie de dosis.
5.-
Para demostrar actividad agonista; un compuesto de la presente invención (c"compuesto de ensayo") se administró solo (p.o. en PEGTW, QD) en una serie de dosis.
\vskip1.000000\baselineskip
Al final del tratamiento de 7-14 días, los animales se sacrificaron con dióxido de carbono, y se pesaron el levador ani, la vesícula seminal y la próstata ventral. Para comparar los datos de diferentes experimentos, se estandarizaron en primer lugar los pesos del músculo levador ani y de los órganos sexuales como mg por 100 g de peso corporal, y el incremento en el peso de los órganos inducido por TP se consideró como el máximo incremento (100%). Se uso super-anova (un factor) para análisis estadísticos.
La ganancia y pérdida del peso de los órganos sexuales reflejan los cambios del número de células (contenido de ADN) y la más celular (contenido de proteínas), dependiendo de la concentración de andrógeno en suero. Véase Y. Okuda et al., J. Urol., 145, 188-191 (1991), cuya revelación se incorpora a la presente memoria por referencia. Por lo tanto, la medición del peso mojado de los órganos es suficiente para indicar la bioactividad de andrógenos y antagonistas de andrógeno. En ratas castradas inmaduras, la sustitución de andrógeno exogénos incrementa el levator ani, las vesículas seminales (SV) y la próstata de una manera dependiente de dosis.
El incremento máximo en el peso de los órganos fue de 4 a 5 veces cuando se administro una dosificación de 3 mg/rata/día de testosterona (T) o 1 mg/rata/día de testosterona propionato (TP) durante 3 días. El EC_{50} de T y TP fue aproximadamente 1 mg y 0,03 md, respectivamente. El incremento en el peso de la VP y los SV también se correlacionó con el incremento en la concentración de T y DHT en suero. Aunque la administración de T mostró concentraciones en suero cinco veces superiores de T y DHT 2 horas después de inyección subcutánea que de TP, después, estos niveles elevados bajaron muy rápidamente. Por el contrario, las concentraciones en suero de T y DHT en animales tratados con TP fueron bastante consistentes durante las 24 horas siguientes y por lo tanto TP mostró una potencia aproximadamente 10-30 veces superior a T libre.
Ensayo de Zenoinjerto de próstata humana MDA Pca2b
Ensayo antitumoral in vivo: Se mantuvieron tumores de próstata humana MDA-Pca-2b en ratones desnudo Balb/c nu/nu. Los tumores se propagaron como trasplantes subcutáneos en ratones desnudos macho adultos (4-6 semanas) usando fragmentos tumorales obtenidos de ratones donantes. El paso a tumor se produjo cada 5-6 semanas.
Para un ensayo eficaz antitumoral, se pusieron juntos el número requerido de animales necesarios para detectar una respuesta significativa al principio del experimento y a cada uno se le dio un implante subcutáneo de un fragmento tumoral (\sim50 mg) con un trocar de 13 calibres. Los tumores se dejaron crecer a aproximadamente 100-200 mg (los tumores fuera de este intervalo se excluyeron) y los animales se distribuyeron regularmente a diversos grupos de tratamiento y control. El tratamiento de cada animal se basó en el peso corporal individual. Los animales tratados se verificaron diariamente respecto de la toxicidad/mortalidad relacionada con el tratamiento. Cada grupo de animales se peso antes del inicio del tratamiento (Wt1) y a continuación de nuevo después de la última dosis del tratamiento (Wt2). La diferencia de peso corporal (Wt2-Wt1) proporciona una medida de toxicidad relacionada con el tratamiento.
La respuesta tumoral se determinó midiendo los tumores con un calibre dos veces a la semana, hasta que los tumores alcanzan una dimensión "objetivo" predeterminada de 0,5 g. Se estimaron los pesos de los tumores (mg) a partir de la fórmula: peso de tumor = (longitud x ancho2) / 2.
El punto final de la respuesta tumoral se expresa en término de inhibición de crecimiento tumoral (%T/C), definida como la relación de pesos de tumores medianos de los tumores tratados (T) respecto de los del grupo de control (C).
Para estimar la muerte celular tumoral, se calculó en primer lugar el tiempo de duplicación del volumen tumoral con la fórmula
TVDT = tiempo medio (días) para que los tumores de control alcancen el tamaño objetivo - tiempo medio (días) para que los tumores de control alcancen la mitad del tamaño objetivo
y muerte celular logarítmica = (T-C) / (3,32 x TVDT)
La evaluación estadística de datos se llevó a cabo usando el ensayo Wilcoxon generalizado de Gehan
Tumor de próstata de Dunning
El tumor de próstata R3327H de Dunning es un adenocarcinoma de próstata sensible a andrógeno bien diferenciado derivado espontáneamente (Smolev JK, Heston WD, Scott WW, y Coffey DS, Cancer Treat Rep. 61, 273-287 (1977)). el crecimiento de la sublínea R3327H se ha seleccionado por su crecimiento altamente andriogenodependiente y reproducible en ratas macho intactas. Por lo tanto, este modelo y otras sublíneas de este tumos se han usado ampliamente para evaluar actividades antimutomorales in vivo de andrógenos tales como flutamida y bacilutamida/Casodex (Maucher A., y von Angerer, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 119, 669-674 (1993), Furr B.J.A. Euro. URL. 18 (suppl. 3), 2-9 (1990), Shain S.A. y Huot RI. J. Steriod Biochem. 31, 711-718 (1988))
Al principio del estudio, las piezas tumorales de Dunning (aproximadamente 4 x 4 mm) se trasplantan subcutáneamente en el costado de las ratas Copenhagen l macho maduras 86-7 semanas de vida, Harlan-Sprague Dawley, Indianapolis, MD). Aproximadamente 6 semanas después del transplante, los animales con tumores de dimensión medible (aproximadamente 80-120 mm^{2}) se aleatorizaron en grupos de tratamiento (8-10 ratas/grupo) y se iniciaron los tratamientos. Un grupo de ratas son castradas para servir como control negativo del crecimiento tumoral. Los animales se tratan diariamente con compuestos de la presente invención, antiandrógenos estándar tales como bacilutamida o vehículo (control) para una media de 10 a 14 semanas. Los compuestos de ensayo se disuelven en un vehículo de (2,5 ml/kg de peso corporal) polietilenglicol al 10% y tween-80 al 0,05% en carboximetilcelulso al 1%, PEG/CMC (sigma, St-Louis, MO). Los experimentos terapéuticos típicos incluirían tres grupos de tres dosis de intensificación para cada compuesto estándar o de ensayo (en un intervalo de 300-3 mg/kg).
Los tumores en el grupo de vehículo (control) alcanzan una dimensión de 1.500 a 2.500 mm^{3}, mientras que el grupo de animales castrados muestra típicamente estasis tumoral durante las 14 semanas de observación. se esperaría que los animales tratados oralmente con 20 mg/kg de bicalutamida o flutamida mostrasen una reducción del 40% en los volúmenes tumorales comparado con el control después de 14 semanas de tratamiento. La dimensión de los tumores se mide semanalmente con un calibre Vernier (Froboz, Suiza), tomando mediciones perpendiculares de longitud y ancho. Los volúmenes tumorales se miden en mm^{3} usando la fórmula: longitud x ancho x altura = volumen. Las diferencias estadísticas entre los grupos de tratamiento y el control se evalúan usando múltiples análisis ANOVA seguidos de un ensayo Student no paramétrico a cola.
Ensayo de peso de próstata de ratas maduras
La actividad de compuestos de la presente invención se investigó en un modelo de rata macho madura, que es una variación del ensayo de peso mojado de próstata y Levator ani anteriormente descrito. Los ensayos in vivo anteriores son ensayos reconocidos para determinar los efectos anabólicos en el músculo y sostener efectos en órganos sexuales para un compuesto dado, como se describe en L. G. Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med., 83, 175 (1953); B. L. Beyler et al, "Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals", J. Amer. Med. Women's Ass., 23, 708 (1968); H. Fukuda et al., "Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay", Nago Dai. Yak. Ken. Nem. 14, 84 (1966), cuyas revelaciones se incorporan a la presente memoria por referencia. La base de este ensayo la acción bien definida de los agentes adrogénicos sobre el mantenimiento y el crecimiento de tejidos musculares y órganos sexuales accesorios en mamíferos y el hombre.
Los órganos sexuales accesorios masculinos, tales como la próstata y las vesículas seminales, desempeñan un papel importante en la función reproductiva. Estas glándulas son estimuladas para crecer y se mantienen en tamaño y la función secretora por la presencia continuada de testosterona en suero (T), que es el principal andrógeno en suero (>95%) producido por las células Leydig en los testículos bajo el control de la hormona luteinizante de la pituitaria (LH) y la hormona estimuladora de los folículos (FSH). La testosterona se convierte en la forma más activa, la dihidrotestosterona, (DHT), dentro de la próstata por 5\alpha-reductasa. Los andrógenos adrenales también contribuyen aproximadamente el 20% del DHT total en la próstata de rata, comparado con el 40% de los hombres de 65 años de edad. F. Labrie et al. Clin. Invest. Med., 16, 475-492 (1993). Sin embargo, no es una vía principal, ya que tanto en los animales como en los humanos, la castración conduce a una involución casi completa de la próstata y de las vesículas seminales sin adrenalectomía concomitante. Por lo tanto, en condiciones normales, las adrenales no soportan crecimiento considerable de los tejidos prostáticos. M. C. Luke and D. S. Coffey, "The Physiology of Reproduction" ed. por E. Knobil y J. D. Neill, 1, 1435-1487 (1994). Puesto que los órganos sexuales y el levato ani son los tejidos más sensibles a la modulación de la actividad de andrógeno, este modelo se usa para determinar la actividad de compuestos tales como la vía de receptores de andrógeno en ratas maduras.
Junto con su actividad mitogénica sobre tejido tales como próstata, vesícula seminal y músculo, la testosterona sirve también como regulador negativo para su propia biosíntesis. La producción de testosterona en las células Leydig se control por el nivel de LH en circulación liberado a partir de la glándula pituitaria. Los niveles de LH se controlan ellos mismos por el nivel de LHRH producido en la región hipotálamica. Los niveles de testosterona en la sangre sirven para inhibir la secreción de LHRH y por consiguiente reducir los niveles de LH y finalmente los niveles de testosterona en circulación. midiendo los niveles en sangre de LH puesto que se ven afectados por los compuestos de la presente invención ("compuestos de ensayo"), es posible determinar el nivel de actividad agonista o antagonista de dichos compuestos en el eje hipotálamico de este ciclo endocrino.
Los conjuntos emparejados de ratas Sprague-Dawley (40-42 días de edad, 120-220 g), se les administro dosificación por alimentación forzada (p.o.) con los compuestos de ensayo en suspensión disuelta de PEG 400 al 80% y Tween-20 al 20% (PEGTW) durante 14 días. Se administraron dosificaciones a dos grupos de control, uno de ratas intactas y otro de ratas castradas, oralmente de vehículo de PEGTW. A los animales se les administro dosificación (v/p) de 0,5 ml de vehículo / 100 g de peso corporal. Los grupos experimentales fueron los siguientes:
1.-
Vehículo intacto (p.o. PEGTW, QD)
2.-
Vehículo de control (p.o. PEGTW, QD)
3.-
Bicalutamida (Casodex, un antiandrógeno reconocido, como un compuesto de referencia), o un compuesto de la presente invención, p.o. en PEGTW QD (en un intervalo de dosis).
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Al final del tratamiento de 14 días, los animales se sacrificaron, y se pesaron el levator ani, la vesícula seminal y la próstata ventral. Para comparar los datos de diferentes experimentos, se estandarizaron en primer lugar los pesos de los órganos sexuales como mg por 100 g de peso corporal y se expreso como el porcentaje del valor del órgano respectivo en el grupo intacto.
La hormona luteinizante de rata (rLH) se determina cuantitativamente con el kit Biotrak [^{125}I] (Amersham Pharmacia Biotek), seguido de las instrucciones del fabricante. el ensayo se basa en la competición por la LH presente en el suero de la unión de [^{125}I] rLH a una suspensión de perla/anticuerpo de Amerlex-M. La radiactividad que permanece después de la incubación con el suero y los posteriores lavados se extrapola a una curva estándar para obtener una lectura en ng/ml
La ganancia y pérdida del peso de los órganos sexuales y el levator ani reflejan los cambios del número de células (contenido de ADN) y la más celular (contenido de proteínas), dependiendo de la concentración de andrógeno en suero. Véase Y. Okuda et al., J. Urol., 145, 188-191 (1991), cuya revelación se incorpora a la presente memoria por referencia. Por lo tanto, la medición del peso mojado de los órganos es suficiente para indicar la bioactividad de andrógenos y antagonistas de andrógeno. En ensayos de ratas maduras, agentes agonistas activos no tendrán ningún efecto o reducirán el peso de uno o más órganos sensibles al andrógeno (levator ani, próstata, vesícula seminal) y no tendrán efecto o un efecto supresor sobre la secreción de LH. Los compuestos con actividad antagonista reducen el peso de uno o más de los órganos sensibles a andrógeno (Levator ani, próstata, vesícula seminal) y no tendrán efecto o un efecto supresor reducido sobre la secreción de LH.
Ensayo de zenoinjerto de próstata humana CWR2
Ensayo antitumoral in vivo: Se mantuvieron tumores de próstata humana CWR22 en ratones desnudo Balb/c nu/nu. Los tumores se propagaron como trasplantes subcutáneos en ratones desnudos macho adultos (4-6 semanas) usando fragmentos tumorales obtenidos de ratones donantes. El paso a tumor se produjo cada 5-6 semanas.
Para un ensayo eficaz antitumoral, se pusieron juntos el número requerido de animales necesarios para detectar una respuesta significativa al principio del experimento y a cada uno se le dio un implante subcutáneo de un fragmento tumoral (\sim50 mg) con un trocar de 13 calibres. Los tumores se dejaron crecer a aproximadamente 100-200 mg (los tumores fuera de este intervalo se excluyeron) y los animales se distribuyeron regularmente a diversos grupos de tratamiento y control. El tratamiento de cada animal se basó en el peso corporal individual. Los animales tratados se verificaron diariamente respecto de la toxicidad/mortalidad relacionada con el tratamiento. Cada grupo de animales se peso antes del inicio del tratamiento (Wt1) y a continuación de nuevo después de la última dosis del tratamiento (Wt2). La diferencia de peso corporal (Wt2-Wt1) proporciona una medida de toxicidad relacionada con el tratamiento.
La respuesta tumoral se determinó midiendo los tumores con un calibre dos veces a la semana, hasta que los tumores alcanzan una dimensión "objetivo" predeterminada de 0,5 g. Se estimaron los pesos de los tumores (mg) a partir de la fórmula: peso de tumor = (longitud x ancho 2) / 2.
El punto final de la respuesta tumoral se expresa en término de inhibición de crecimiento tumoral (%T/C), definida como la relación de pesos de tumores medianos de los tumores tratados (T) respecto de los del grupo de control (C).
Para estimar la muerte celular tumoral, se calculó en primer lugar el tiempo de duplicación del volumen tumoral con la fórmula
TVDT = tiempo medio (días) para que los tumores de control alcancen el tamaño objetivo - tiempo medio (días) para que los tumores de control alcancen la mitad del tamaño objetivo
y muerte celular logarítmica = (T-C) / (3,32 x TVDT)
La evaluación estadística de datos se llevo a cabo usando el ensayo Wilcoxon generalizado de Gehan.
Los siguientes ejemplos ilustran realizaciones de la presente invención, y no se destinan a limitar el alcance de las reivindicaciones. En algunos ejemplos, un compuesto de la fórmula I se prepara y a continuación se emplea para preparar, además, uno o más compuestos adicionales de la fórmula I o las sales de los mismos. Los procedimientos empleados para preparar un compuesto de la fórmula I o una sal del mismo tal como se ha descrito en la presente memoria descriptiva se puede emplear como apropiado para preparar otros compuestos de la invención.
Abreviaturas
En la presente memoria descriptiva se usan las siguientes abreviaturas:
DBU = 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno
4-DMAP = 4.dimetilaminopiridina
ee = exceso enantiomérico
DMF = dimetilformamida
EtOAc = etil acetato
LDA = litio diisopropilamina
Base de Hünig = N,N-diisopropiletilamina
Me = metilo
TR = tiempo de retención
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
TLC = cromatografía de capa fina
TMS = trimetilsililo
pTSA = ácido para-toluenosulfónico
\Delta = calor
t-Bu = terc-butilo
PhCH_{3} = tolueno
Pd/C = paladio sobre carón activado
PsCl = cloruro de tosilo
TBSOTf = terc-butildimetilsilil trifluorometano sulfonato
TBS = terc-butildimetilsilano
Mel = youdor de metilo
(BOC)_{2}O = di-terc-butil dicarbonato
TEA = trietilamina
n-Buli = n-butilitio
tr = temperatura ambiente
LC = cromatografía líquida
Ts = tosilo
Ph = fenilo
EtOH = etanol
DCE = dicloroetano
DMSO = dimetilsulfoxido
Ra-Ni = Níquel Raney
MS = tamices moleculares
MS(ES) =espectrometría de masa por Electrospray
mCPBA = ácido m-cloroperoxibenzóico
sat = saturado
AcOH = ácido acético
MeOH = metanol
Et_{2}O dietil éter
Ac = acetilo
DEAD = dietil azodicarboxilato
h = horas
Et = etilo
WSDCC = clorhidrato de dicarboniol diimida, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida hidrosoluble
TBAF = fluoruro de tetrabutilamonio
DBAD = di-terbutilazodicarboxilato
DCC = diciclohexilcarbodiimida
Catalizador de Wilkinson = RhCl(PPh)3
ADDP = 1,1-[azoficarbonil]dipiperidina
DMA = dimetilacetamida
DME = 1,2-dimetoxietano
BOP = hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)-fosfonio
HRMS = especrometería de masas de alta resolución
TBME = MTBE = metil terc-butil éter (es decir, 2-metoxi-2-metil-propano
TiCl_{2}Cp_{2} = dicloruro de bis(ciclopentadienil)titanio
DPPA = difenilfosforil azido
HMPA = hexametilfosforil amida
% V = porcentaje en volumen
BH_{3}DMS = dimetilsulfato de borano
vvm = volumen de gas por volumen de líquido por minuto.
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Ejemplo de referencia 1
(3a\alpha,4\beta-5\alpha-7\beta,7a\alpha)-4-(octahidro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil)ben- zonitrilo (1D)
25
A. 3-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2,5.dimetilfuerano (1A)
26
Se disolvió 2,5-dimetil-3(3H)-furanona (2,00 g, 17,8 mmol) en cloruro de metileno (180 ml). Se añadió TEA (7,43 ml, 53,5 mmol) seguido de TBSOTf (4,92 ml, 21,4 mmol) a 25ºC. Después de 1 hora, la reacción se concentró a vacío y se pasó la suspensión resultante a través de una columna de gel de sílice condicionada con TEA al 3% en hexanos. el producto se eluyó con Tea al 3%/hexanos para proporcionar 3,6 g (89%) de compuesto 1a en forma de un aceite naranja que se usó directamente en posteriores reacciones
B. (3a\alpha,4\beta,7\beta,7a\alpha)-4-[5[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-1,3,3a,4,7,7a-hexahidro-4,7-dimetil-1,3-di-oxo-4,7- epoxi-2H-isoindol-2-il]-2-(trifluorometil)benzonitrilo (1B)
27
Se disolvió 4-(2,5-dihidro-2,5-dioxo-1H-pirrol-1-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo (1,00 g, 3,85 mmol) en benceno (5,0 ml) y se añadió el compuesto 1A (1,30 g, 5,77 mmol). La mezcla de reacción se redujo a 60ºC durante 2 horas y a continuación se enfrió a 25ºC. a continuación la solución se concentró a vacío para proporcionar el compuesto 1B en forma de un aceite amarillo que se lleva a la siguiente reacción sin purificación. HPLC: 60% a 4,013 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contiene ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm).
C. (3a\alpha,4\beta-5\alpha-7\beta,7a\alpha)-4-[-5[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi-oxahidro-4,7-dimetil-1,3-diozo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il]-2-trifluorometil)benzonitrilo (1C) 
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28 
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Se disolvió el compuesto bruto 1B (3,85 mmol) en acetato de etilo (75 ml) y se añadió PD/C/ al 10%. A continuación se introdujo hidrógeno por un globo. Después de 24 horas se filtro a través de Celite aclarando con acetato de etilo y se concentró a vacío para proporcionar un aceite amarillo. el producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/acetona (0%-1%-2% de acetona) para proporciona 0,710 g (35%) del compuesto 1C en forma de sólido amarillo. HPLC: 100% a 4,160 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contiene ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm) MS(ES): m/z 517,6 [M+Na]^{+}.
D. (3a\alpha,4\beta-5\alpha-7\beta,7a\alpha)-4-(octahidro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorome- til)benzonitrilo (1D)
Se disolvió el compuesto 1C (0,040 g, 0,081 mmol) en THF (1,0 ml) y se añadió HF\cdotpiridina (0,5) ml. Después de 2 horas, la reacción se vertió cuidadosamente en NaHCO3 acuoso saturado frío. a continuación la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (3 x 10 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con 1N HCl (1 x 10 ml) y se secaron sobre sulfató de sodio anhidro. La concentración a vacío proporcionó 0,031 g (10%) de compuesto 1D en forma de un sólido amarillo. Los experimentos NOE confirmaron el isómero asignado. HPLC: 98% a 2,777 min (tiempo de retención) (Columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm) eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 4 minutos que contiene ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm) MS(ES): m/z 403,06 [M+Na]^{+}.
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Ejemplo de referencia 2
[3aR-(3a\alpha,4\beta-5\beta,7\beta,7a\alpha)-4-(octahifro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il-2-(trifluorometil) benzonitrilo (2Di) [3aS-(3a\alpha,4\beta-5\beta,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (2Dii) 
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29 
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A. 4-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-1-il)-2-trifluorometil-benzonitrilo (471A)
30
Se calentó una mezcla de 3-trifluoromeil-4-ciano-anilina (24,0 g, 129 mmol) y anhídrido maléico (14,0 g, 143 mmol) en 50 ml de ácido acético a 115ºC durante una noche. Se obtuvo un precipitado durante el periodo de calentamiento. Se dejó que la reacción se mantuviese a temperatura ambiente durante una noche adicional. El sólido se retiro por filtración, la torta de filtración se lavó con dietil éter y se seco para proporcionar 21 g (79 mmol), 61%) del compuesto 2A en forma de un sólido colo crema. HPLC: 100% a 2.11 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS, 4,6 x 50 mm, eluyendo con metano acuoso al 10-90% durante 4 min que contiene ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm).
B. (3a\alpha,4\beta\beta,7a\alpha)-4-(1,3,3a,4,7,7a-hexahidro-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (2B)
31
Se calentó una suspensión de compuesto 2A (13,0 g, 48,8 mmol) y 2,5-dimetilfurano (10,5 ml, 98,6 mmol) en 50 ml de tolueno a 60ºC, en argón. Se obtuvo una solución con el calentamiento inicial y se observó un precipitado después de aproximadamente 1 hora. El calentamiento continuó durante una noche. Después enfriar a temperatura ambiente, la suspensión se dejo descansar a 4ºC durante una noche. El sólido resultante se filtró y la torta de filtración se lavó con tolueno frío seguido de secado por aire para proporcionar 13,2 g del compuesto bruto 2B en forma de sólido blanco. El volumen de filtrado se redujo a vacío en una mitad y la solución resultante se trató como anteriormente para producir 2,.8 g adicionales del compuesto bruto 2B (total 16,0 g, 90%). HPLC: 100% a 2.11 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS, 4,6 x 50 mm, eluyendo con metano acuoso al 10-90% durante 4 min que contiene ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm).
C. (3a\alpha4\beta,5\beta7\beta7a\alpha)-4-(octahidro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil) benzonitrilo (2c)
32
Una solución de compuesto 2B (25 g, 69 mmol) en 125 ml de THF, en un matraz seco en nitrógeno, se enfrió a 10ºC con un baño de hielo. A esta solución se añadió complejo de borano-dimetillsulfido puro (13,0 ml, 138 mmol) gota a gota durante 10 min, mientras se mantiene una temperatura de reacción de <15ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura de reacción y a continuación en un baño de hielo se enfrió a 10ºC. A la solución fría se añadió lentamente 480 ml de tampón fosfato de pH 7, que dio como resultado una fuerte reacción exoterma y una evolución gaseosa vigorosa. La solución se mantuvo a <21ºC a lo largo de toda la adición mediante un baño de hielo. A la solución resultante se añadieron 240 ml de etanol y la mezcla de reacción se enfrió a 5ºC con un baño de hielo. A la solución enfriada se añadieron 50 ml de peróxido de hidrógeno al 30% y la mezcla resultante se agitó a 10-20ºC durante 1 hora y media. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 1 l) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con sulfito sódico al 10% (1 x 500 ml) y salmuera (2 x 300 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La concentración a vacío proporcionó 29 g de producto bruto en forma de sólido blanco. Este material se sometió a cromatografía ultrarrápida sobre una columna de 1,2 L de gel de sílice equilibrado con CH_{2}Cl_{2}- al 100%. El material se aplicó a la columna en forma de una solución constituida por 100 ml de L EtOAc (templado) y 400 ml de CH_{2}Cl_{2}. La elución inicial con CH_{2}Cl_{2} (3 l), seguida de EtOAcal 25%/CH_{2}Cl_{2} al 75% (3 l) y finalmente EtOAc al 50%/CH_{2}Cl_{2} al 50% (6 l) proporcionó 11,8 g (45%) de compuesto 2C que es una mezcla racémica.
Alternativamente el compuesto 2C se puede hacer por el siguiente enfoque: un matraz seco que contiene el compuesto 2B (8,90 g, 24,6 mmol) y catalizador de Wilkinson (0,57 mg, 0,62 mmol) se desgasificó 4 veces con vacío/argón. Se añadió THF (40 ml) al matraz y la mezcla se agitó hasta obtener una solución marrón clara. A continuación se añadió gota a gota catecolborana (49 ml, 49 mmol, 1 M en THF) durante 20 min y se observó un ligero exotermo. El agitado continuó durante 45 min seguido del enfriamiento de la mezcla de reacción con un baño de hielo. Se añadió lentamente tampón fosfato, (175 mL) de pH 7, seguido de la adición consecutiva de etanol (87 mL) y peróxido de hidrógeno al 30% (18 ml). Se siguió agitando con enfriamiento y se vigiló el progreso de la reacción por HPLC durante 4 horas. La reacción se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 250 ml). Los extractos combinados se lavaron con 1:1 1N NaOH: sulfito de sodio al 15% (300 ml) y salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, y el disolvente se eliminó a vacío para obtener 8,5 g de un sólido color canela. El producto se sometió a cromatografía ultrarrápida sobre una columna de gel de sílice de 500 cm^{3} eluyendo con un gradiente de 25-50% EtOAc/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 6,00 g del compuesto 2C (15,8 mmol, 64%) en forma de un sólido blanco. HPLC: 90% a 2,45 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS, 4,6 x 50 mm, eluyendo con metano acuoso al 10-90% durante 4 min que contiene ácido fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm)
MS (ES): m/z 381.11 [M+H]+.
D. [3aR-(3a\alpha,4\beta,5\beta,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(tri- fluorometil)benzonitrile (2Di) y [3aS-(3a\alpha,4\beta,5\beta,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5-hidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-iisoindol-2-il)-i2-(trifluorometil)benzonitrile (2Dii)
Las antípodas individuales del compuesto 2C se separaron por HPLC quiralpreparativa de fase normal (CHIRALPAK AD, columna 5 x 50 cm. Se disolvió una porción de 2,5 g de 2C en 25 ml de acetona templada y se diluyó a 50-75 ml con hexano para inyección. La elución isocrática con MeOHal 20%/EtOH (1:1) en heptano a 50 ml/min dio el compuesto 2Di de elución más rápida (Chiral HPLC: 10.02 min; CHIRALPAK AD columna 4,6 x 250 mm; elución isocrática con MeOHal 205/EtOH (1:1) en heptano a 1 ml/min) y el compuesto 2Dii de elución más lenta (Chiral HPLC: 14,74 min; CHIRALPAK AD columna 4.6 x 250 mm; elución isocrática con MeOHal 20%/EtOH (1:1) en heptano a 1 ml/min). Los compuestos 2Di y 2Dii: HPLC: 90% a 2,45 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS, 4,6 x 50 mm, elución con metanol acuoso al 10-90% durante 4 min que contiene ácido fosfórico al 0.2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm). MS (ES): m/z 381.11 [M+H]+. La estereoquímica de los compuestos 2Di y 2Dii se determinó por estudios de difracción de rayos X de un solo cristal y es tal como se describe con la nomenclatura designada.
Las fracciones purificadas de HPLC resultantes de los compuestos 2Di y 2Dii se purificaron, además, por cristalización usando uno cualquiera de los procedimientos descritos más adelante.
1) A partir de acetato de etilo
Una porción de 700 mg de compuesto 2Di, obtenido después de cromatografía quiral como se describe anteriormente, se disolvió en acetato de etilo (10 ml) a temperatura ambiente. La solución se diluyó con pequeñas porciones de hexano (20 ml) hasta que se observe turbiedad. La solución se dejo descansando una noche a temperatura ambiente. El sólido blanco resultante se filtró y se seco al aire para obtener 430 mg de compuesto 2Di en forma de un polvo blanco. Esta muestra se seco a continuación a 60ºC (3 h. 0,5 Torr), a continuación a 70ºC, (12 h, 0,5 Torr).
2) A partir de acetona
Una porción de 500 mg de compuesto 2Di, obtenido después de cromatografía quiral como se describe anteriormente, se disolvió en una cantidad mínima de acetona (3 ml) y se diluyó lentamente con hexano (1 ml). La solución incolora transparente se dejó reposar una noche a temperatura ambiente. El sólido blanco resultante se filtró y se seco al aire para obtener 440 mg de compuesto 2Di en forma de un polvo blanco. Esta muestra se seco a continuación a 70ºC, (12 h, 0,5 Torr).
3) A partir de Metanol
Una porción de 500 mg de compuesto 2Di, obtenido después de cromatografía quiral como se describe anteriormente, se disolvió en 5 ml de metanol caliente (baño de vapor). La solución incolora transparente se dejó reposar 2 horas a temperatura ambiente y a continuación a 4ºc durante una noche. El sólido resultante se filtró, se lavó con un mínimo de metano frío y se seco al aire para obtener 360 mg de compuesto 2Di en forma de un polvo blanco. Esta muestra se seco a continuación a 70ºC, (12 h, 0,5 Torr).
4) A partir de CH_{2}Cl_{2}
Una porción de 7,00 g de compuesto 2Di, obtenido después de cromatografía quiral como se describe anteriormente, se disolvió en 75 ml de CH_{2}Cl_{2} a temperatura ambiente. La solución incolora transparente se diluyó lentamente conhexano (48 ml) hasta que se observó su cristalización. La solución se dejó reposar a temperatura ambiente durante 1 hora, a continuación a 4ºC durante una noche. El material cristalino resultante se filtró y a continuación se lavó con una mínima cantidad de 2:1 de CH_{2}Cl_{2}:hexano frío. Los cristales grandes se trituraron hasta obtener un polvo fino y se secaron a 50ºC (12 h, 0,5 Torr) para producir 5,96 g del compuesto 2Di en forma de polvo blanco.
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Ejemplo de referencia 3
(3a\alpha,4\beta,5\beta,6\alpha,7\beta,7a\alpha)-4-(octahidro-5,6-dihidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorome- til)benzonitrilo (3B)
33
A. (3a\alpha,4\beta,5\alpha,6\beta,7\beta,7a\alpha)-4-(octahidro-5-[[(1,1- dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-6-hidroxi-4,7-dimetil-i1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-iisoindol-2-il)-2- (trifluorometil)benzonitriloe (2A)
34
A una solución de compuesto 1B (1,49 g, 3 mmol) en un THF anhidro (31 ml) se añadió complejo de bonao-metil sulfido (0,61 ml, 6,1 mmol) gota a gota a temperatura ambiente en argón. después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora y media, se añadió EtOH (20 ml) lentamente a 0ºC, seguido de tampón fosfato (pH = 7,2, 39 ml), y H_{2}O_{2} (30% acuoso, 12 ml). La mezcla se agito vigorosamente a 0ºC durante 30 minutos, a temperatura ambiente durante 21 horas y a continuación se concentró a presión reducida a temperatura ambiente para eliminar THF. El residuo se dividió entre EtOAc (160 ml) y salmuera (160 ml). La solución orgánica se separó, se lavó con solución de Na_{2}SO_{3} a 5% (120 ml), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró a presión reducida. Purificación por cromatografía ultrarrápida de gel de sílice y sobre SiO_{2} eluyendo con EtOAc/heptano (gradiente de relación 1:8 a 1:0) compuesto 3A (1,15 g, 75%) en forma de una sólido alveolar.
B. [3aS-(3a\alpha,4\beta,5\beta,6\alpha,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5,6-dihidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (3B)
TA una solución de solución agitada de compuesto 3A (0,67 g, 1,3 mmol) en EtOH (100%, 19 ml) se añadió HCl concentrado (3,7 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 21 horas, a 40ºC durante 3 horas, y a continuación se concentró a presión reducida. Purificación por cromatografía ultrarrápida de gel de sílice eluyendo con EtOAc/heptano (gradiente de relación 1:1 a 1:0) dio un compuesto 3B (0,47 mg, 92%) en forma de un sólido vidrioso. HPLC: 98% a 3,07 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS, 4,6 x 50 mm, eluyendo con metano acuoso al 10-90% durante 4 min que contiene ácido 3 fosfórico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm). MS (ES): m/z 397 [M+H]+. el compuesto 3B representa una mezcla racémica de antípodas. La nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica del compuesto.
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Ejemplo de referencia 4
[3aS-(3a\alpha,4\beta,5\beta,6\alpha,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5,6-dihidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(tri- fluorometil)benzonitrilo y [3aR-(3a\alpha,i4\beta,5\beta,6\beta,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5,6-dihidroxi-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-trifluorometil)benzonitrilo 4i y 4ii) 
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35 
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El compuesto racémico 3B (1g) se separó en sus enantiómeros por HPLC quiralpreparativa de fase normal (columna CHIRALPAK OJ 5 x 50 cm; eluyendo xon MeOH al 205/EtOH (1:1) en heptanoe (isocrático) + dietilamina al 0,1% a 50 ml/min) para proporcionar 296 mg de compuesto de elusión más rapida 4i (Chiral HPLC: 8,92 min; columna CHIRALPAK OJ 4,6 x 250 mm; eluyendo con MeOH al 20%/EtOH (1:1) en heptano + dietilamina al 0,1% a mlmin); HPLC: 95% a 1,25 min (tiempo de retención) (columna Phenomenex S5 ODS 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 2 min conteniendo TFA al 0,1%, 4 ml/min, vigilando a 254 nm); MS (ES): m/z 397,37 [M+H]+ y 274 mg de 4ii de elusión más lenta (columna Chiral HPLC: 11,25 min; CHIRALPAK OJ 4,6 x 250 mm; eluyendo con MeOH al 20%/EtOH (1:1) en heptano + diethylamine al 0,2% a 1 ml/min); HPLC: 95% a 1.25 min (tiempo de retención) (Columna Phenomenex S5 ODS 4,6 x 50 mm eluyendo con metanol acuoso al 10-90% durante 2 min conteniendo TFA al 0,1%, 4 ml/min, vigilando a 254 nm); MS (ES): m/z 397,43 [M+H]+. La estereoquímica de los compuestos 4i y 4ii no se ha establecido todavía. Aunque este compuesto representa una sola antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica del compuesto.
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Ejemplo 1 [3aR-(3a\alpha,4\beta,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-4,7-dimetil-1,3,5-trioxo-4,7-epoxi 2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (A) 
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36 
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El compuesto 2Di (0,10 g, 0,263 mmol) se disolvió en una mezcla de CH_{2}Cl_{2} (1,0 mlL) y THF (2,0 mL) a 22ºC. Se añadió periodinano Dess-Martin (0,279 g, 0,658 mmol) xon agitación. Después de 3 horas, se inactivo la reacción con una mezcla 1:1 de NaHCO_{3} saturado acuoso y NaHSO_{3} saturado acuoso (5 ml). Después de agitar durante 15 minutos, la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. El material bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida de gel de sílice eluyendo con acetona al 5-10-20% en cloroformo para proporcionar el compuesto A (0,090 g) en forma de un sólido blanco. HPLC: 100% a 3,170 min (tiempo de retención) (columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm eluyendo con metano acuoso al 10-90% durante 4 minutos conteniendo ácido fósforico al 0,2%, 4 ml/min, vigilando a 220 nm), MS (ES): m/z 379,11 [M+H]+. HPLC analítica quiral usando una columna Chiracel OD, 4,6X250 mm, eluyendo con (1:1) EtOHal 20%/MeOH en hexanos a 2.0 ml/min y vigilando a 220 nm proporcionó un tiempo de retención de 9,097 minutos. La estereoquímica absoluta del compuesto A se estableció por la estereoquímica conocida del compuesto intermedio 2Di y la retención de de configuración en el mismo. La estereoquímica absoluta es como se dibuja en la figura anterior y como se refleja por la nomenclatura.
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Ejemplo de referencia 5
37 
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A. Ester 2-metozietoximetil de ácido 2,5-dimetilfuran-3-carboailico (5A) 
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38 
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Un matraz de fondo redondo de 2 litros equipado con un agitador mecánico se cargó con ácido 2,5-dimetil-3-furoico (81,0 g, 0,58 mol) y carbonato potásico (95,9 g, 0,69 mol) en DMF (500 ml). Se uso un baño de hielo para enfriar la reacción como cloruro de 2-metoxietoximetilo (7,2 g, 0,58 mol) se añadió gota a gota. La reacción se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. a continuación la mezcla se diluyó con agua (1,5 l) y se extrajo con EtOAc (2 x 600 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 900 ml) y solución de cloruro sódico saturada (1 l), se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto 5A (103 g, 82%) en forma de un aceite amarillo. ^{1}H NMR(CDCl_{3}): \delta\beta = 6,23 (s, 1H), 5,47 (s, 1H), 3,84 (m, 2H), 3,56 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,51 (s, 3H) y 2,20 ppm (s, 3H).
B. (5B)
39 
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Un matraz de fondo redondo de 250 ml se cargó con 4-(2,5-dioxo-2,5-dihiydropirrol-1-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo (15,0 g, 0,056 mol) and ester 2-metoxietoximeti de ácido 2,5-dimetilfuran-3-carboxílico (22.8 g, 0.10 mol). La mezcla se calentó a 125ºC durante una hora y media, a continuación se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El producto bruto se disolvió en EtOAc y se adsorbió sobre gel de sílice. La purificación por cromatografía de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 30% en hexanos, proporcionó el compuesto 5B (8,21 g, 30%) en forma de un aceite viscoso. ^{1}H NMR(CDCl_{3}): \delta\beta = 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,44 (m, 2H), 3,83 (m, 2H), 3,57 (m, 2H); 3,39 (s, 3H), 3,19 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 3,09 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 2,04 (s, 3H) y, 1,91 ppm (s, 3H).
C (5C)
40
Una botella de hidrogenación Parr de 250 ml se cargó con el compuesto 5B (7,75 g, 0,015 mol), EtOAc (80 ml) y paladio sobre carbono (0,40 g, Pd al 10%, mojado al 50%). La botella se colocó sobre un aparato de hidrogenación Parr, se presurizó con hidrógeno a 0,34 bares (5 psi) , y se agitó hasta que la recaptación del hidrógeno se detuvo. La filtración del contenido sobre Celite y la concentración proporcionaron un aceite amarillo. La purificación por cromatografía de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 305 en hexanos, proporcionó el compuesto 5C (3,92 g, 50%) en forma de una sólido blanco. HPLC: 100% a 14,5 min (tiempo de retención) (Columna Hypersil C18 BDS, 250 x 4,6 mm 5 Mm, una longitud de onda de detección de 254 mn, y un caudal de 1 ml/min. Se usó un gradiente lineal del 90% de ácido trifluoroacético al 0,1% en agua, acetonitrilo al 10% (inicio) a acetonitrilo al 100% durante 15 min, a continuación acetonitrilo al 100% durante 5 minutos. Rf = 0.61 (SiO_{2}, EtOAc en hexanos). Mpt >300ºC. ^{1}H NMR(CDCl_{3}): \delta\beta = 7,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,74 (m, 1H), 5,46 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 3,85 (m, 2H), 3,57 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,33 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,19 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,04 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,05 (t, J = 12,2 Hz, 1H), 1,78 (s, 3H) y 1,64 ppm (s, 3H), m/z = 496 [M+H]+.
D. (5Di y 5Dii)
El compuesto racémico 5C se separó en sus dos enantiómeros por HLPC quiralpreparativa usando una columna Chiracel OD (50 x 500 mm), eluyendo con EtOH al 50% en heptano a 100 ml/min y 290 nm de detección. el compuesto 5Di tuvo un tiempo de retención de 6,68 min y [\alpha]_{25}^{D} = +28;7º (c = 1,0, MeOH). el compuesto 5Dii tuvo un tiempo de retención de 13,9 min y [\alpha]_{25}^{D} = -29,2º (c = 1,0, MeOH). La estereoquímica absoluta de los compuestos 5Di y 5Dii no se ha establecido. Aunque, cada compuesto representa un único antípoca, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.
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Ejemplo de referencia 6
Ácido[3aR-(3a\alpha,4\beta,5\alpha,7\beta,7a\alpha)]-2-(4-ciano-3-trifluorometil)fenil)hexahidro-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-1H- isoindol-5-carboxílico (6)
41
Se cargó un matraz de fondo redondo de 250 ml con el compuesto 5Di (9,85 g, 19,8 mmol) y THF (60 ml).Se añadió una solución de 3N ácido clorhídrico (50 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, a continuación se añadió el agua (60 ml) y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 x 120 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto 6 (8,00 g, 98%) que se ha mostrado ser idéntico al compuesto 4. HPLC: 100% a 13,3 min (tiempo de retención (Columna Hypersil C18 BDS, 250 x 4,6 mm, 5 Mm, a una longitud de onda de detección de 254 nm, y un caudal de 1 ml/min. Se usó un gradiente lineal del 90% de ácido trifluoroacético al 0,1% en agua, acetonitrio al 10% (inicio) a acetonitrilo al 100% durante 15 min, a continuación acetonitrilo al 100% durante 5 minutos, MS (ES): m/z 409 [M+H]+. Rf = 0.41 (SiO_{2}, MeOH al 10% en CH_{2}Cl_{2}). Mpt >300ºC. [\alpha]_{25}^{D} = - 28.5º (c = 1,0, MeOH), ^{1}H NMR (CD_{3}OD): \delta = 8,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 8,3 y 2,0 Hz, 1H), 3,39 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 3,30 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 3,00 (dd, J = 12,0 y 5,2 Hz, 1H), 2,23 (dd, J = 12,0 y 5,2 Hz, 1H), 2,01 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 1,70 (s, 3H) y 1,57 ppm (s, 3H). La estereoquímica absoluta del compuesto 6 no se ha establecido. Aunque el compuesto representa un único antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.
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Ejemplo de referencia 7
Ácido [3S-(3a\alpha,4\beta,5\alpha-7\beta,7a\alpha)-2-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)hexahidro-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-1H-isoindol-5-carboxílico (7)
42
El compuesto 7 se preparó de manera idéntica como se describe en referencia al ejemplo 6 con la excepción de que el compuesto 5Dii fue el material de partid en lugar del compuesto 5Di. El compuesto 7 se obtuvo con un rendimiento del 98%. [\alpha]^{25}_{D} = +28,0º (c = 1,0, MeOH). La esteroquímica absoluta del compuesto 7 no se ha establecido, Aunque el compuesto representa un único antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.
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Ejemplo de referencia 8
43
Se cargó un matraz de fondo redondo de 50 ml con dioxano (6 ml), el compuesto 6 (400 mg, 0,984 mmol), difenifosfori azida (334, mg, 1,21 mmol), trietilamina (123 mg, 1,22 mmol) y tamices moleculares 4\ring{A} en polvo (400 mg). La suspensión resultante se calentó a 50ºC durante una hora y media, la temperatura se elevó entonces a 75ºC y se añadió 2-(trimetilsilil)etanol (590 mg, 5,02 mmol). Se calentamiento continuó durante una hora y media más. La mezcla de reacción se enfrió entonces, se filtró a través de un lecho de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. La purificación del residuo por cromatografía de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 20% y después al 40% en hexanos, proporcionó el compuesto 8 (400 mg, 78%) en forma de un sólido blanco. HPLC: 100% a 15,3 min (tiempo de retención) (columna Hypersil C18 BDS, 250 x 4,6 mm, 5 Mm, una longitud de onda de detección de 254 nm, y un caudal de 1 ml/min. Se usó un gradiente lineal de 90% de ácido trifluoroacético al 0.1% en agua, acetonitrilo al 10% (inicio a acetonitrilo al 100% durante 15 minutos y a continuación acetonitrilo al 100% durante 5 minutos, MS (ES): m/z 524 [M+H]+. Rf = 0,79 (SiO_{2}, EtOAc al 50% en hexanos). Mpt >300ºC. [\alpha]_{25}^{D} = -1,8º (c = 1,0, MeOH). ^{1}H NMR(CDCl_{3}): \delta = 7,96 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,73 (dd, J = 8,3 and 2,0 Hz, 1H), 4,72 (s ancho, 1H), 4,19 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 4,05 (m, 1H), 3,45 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,36 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 1,61 (s, 6H), 1,04 (t, J = 12,0 Hz, 2H) y 0,05 ppm (s, 6H). La estereoquímica absoluta del compuesto 8 no se ha establecido. Aunque el compuesto representa un único antípoca, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan el estereoquímica del compuesto.
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Ejemplo de referencia 9
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44 
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El compuesto 9 se preparó de manera idéntica como se describe en referencia al ejemplo 8 con la excepción de que el compuesto 7 fue el material de partid en lugar del compuesto 6. El compuesto 9 se obtuvo con un rendimiento del 80%. [\alpha]^{25}_{D} = +1,1º (c = 1,0, MeOH). La esteroquímica absoluta del compuesto 9 no se ha establecido, Aunque el compuesto representa un único antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.
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Ejemplo de referencia 10
[3aR-(3a\alpha,4\beta,5\alpha,7\beta,7a\alpha)]-4-(octahidro-5-amino-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxiy-2H-isoindol-2-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo (10) 
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45 
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Una solución de compuesto 8 (400 mg, 0,76 mmol) en cloruro de metileno (10 ml) se trató con ácido trifluoroacético (2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de este tiempo la reacción se volvió básica (pH = 9) por la adición de una solución de carbonato sódico acuosa saturada (20 ml) y carbonato potásico sólido. a continuación la fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con cloruro de metileno (3 x 40 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron para proporcionar el compuesto 10 (283 ml, 99%) en forma de un sólido blanco HPLC: 100% a 10,5 min (tiempo de retención) (Columna Hypersil C18 BDS, 250 x 4,6 mm, 5 Mm, una longitud de onda de detección de 254 nm, y un caudal de 1 mLlmin. Se usó un gradiente lineal de 90% de ácido trifluoroacético al 0.1% en agua, acetonitrilo (inicio) al 10%) a acetonitrilo al 100% durante 15 minutos, a continuación acetonitrilo al 100% durante 5 minutos), MS (ES): m/z 380 [M+H]+. Rf = 0,59 (SiO_{2}, MeOH al 5% en CH_{2}Cl_{2}). [\alpha]_{25}^{D} = -26,7º (c = 1,0, MeOH), Mpt = 150-152ºC. ^{1}H NMR (CD_{3}OD): \delta = 8,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,83 (dd, J = 8,3 y 2,0 Hz, 1H), 3,66 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,21 (m, 4H), 2,16 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 1,51 (s, 3H), 1,49 (s, 3H) y 1,42 ppm (dd, J = 12,0 y 5,0 Hz, 1H). La esteroquímica absoluta del compuesto 10 no se ha establecido. Aunque el compuesto representa un único antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.
\newpage
Ejemplo de referencia 11
[3aS-(3a\alpha,4\beta,5\alpha,7\beta,7a\alpha)]-4-(Octahidro-5-amino-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo (11)
46
El compuesto 11 se preparó de manera idéntica como se describe en referencia al ejemplo 10 con la excepción de que el compuesto 9 fue el material de partid en lugar del compuesto 8. El compuesto 11 se aisló con un rendimiento global del 94%. [\alpha]^{25}_{D} = +27,3º (c = 1,0, MeOH). La esteroquímica absoluta del compuesto 11 no se ha establecido, Aunque el compuesto representa un único antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.
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Ejemplo 2 (3a\alpha4\beta5\alpha7\beta7a\alpha)-4-(octahidro-5-etilsulfonamido-4,7-dimetil-1,3-dioxo-4,7-epoxi-2H-isoindol-2-il-2-trifluorometil) benzonitrilo (B)
47
Un matraz de fondo redondo de 25 ml se cargó con una mezcla racémica de los componentes 10 y 11 (102 mg, 0,27 mmol) y cloruro de metileno (10 ml). Se añadió cloruro de etanosulfonilo (54,3 mg, 0,42 mmol) y trietilamina (43,6 mg, 0,43 mmol y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El análisis de la mezcla de reacción por TLC (SiO_{2}, EtOAc) indicó la presencia de material de partida de manera que un equivalente adicional de cloruro de etanosulfonilo (54,3 mg, 0,42 mmol) se añadió y la agitación continuó durante 4 horas. A continuación la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se lavó con agua (10 ml). El secado sobre sulfato de magnesio, la filtración y la concentración proporcionaron un aceite amarillo. La purificación de este aceite por cromatografía de gel de sílice con EtOAc al 25% en hexanos, a continuación EtOAc al 50% en hexanos y finalmente EtOAc, proporcionó el compuesto B (55,9 mg, 44%) en forma de sólido blanco. HPLC: 100% a 13,8 min (tiempo de retención) (columna Hypersil C18 BDS, 250 x 4,6 mm, 5 Mm, una longitud de onda de detección de 254 nm, y un caudal de 1 ml/min. Se uso un gradiente lineal del 90% de ácido trifluoroacético al 0,1% en agua, acetonitrilo al 10% (inicio) a acetonitrilo al 100% durante 15 minutos, a continuación acetonitrilo al 100% durante 5 minutos), MS (ES): m/z 472 [M+H]+. Rf = 0,72 (EtOAc). Mpt = 189-192ºC. ^{1}H NMR(CDCl_{3}): \delta = 7,94 (d, J = 8,3Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,74 (dd, J = 8,3 y 2,0 Hz, 1H), 5,72 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,11 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,37 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 1,67 (m, 1H), 1,62 (s, 3H), 1,61 (s, 3H) y 1,40 ppm (t, J = 7,2 Hz, 3H), La esteroquímica absoluta del compuesto B no se ha establecido. Aunque el compuesto representa un único antípoda, la nomenclatura y la estructura mostradas no reflejan la estereoquímica absoluta del compuesto.

Claims (8)

1. Compuesto que tiene la fórmula:
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48 
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2. Compuesto que tiene la fórmula:
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49 
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3. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto según la reivindicación 1 o 2 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
4. Una composición farmacéutica según la reivindicación 3 que comprende, además, otro agente anticáncer.
5. Uso de al menos un compuesto según se ha definido en la reivindicación 1 ó 2 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamente para tratar una afección o un trastorno seleccionado en el grupo constituido por enfermedades proliferativas, cánceres, hipertrofia benigna de próstata, adenomas y neoplasias de la próstata, células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógeno, enfermedad cardiaca, afecciones o trastornos angiogénicos, hirsutismo, acné, hiperpilosidad, inflamación, modulación inmunitaria, seborrea, endometriosis, síndrome de ovarios policísticos, alopecia androgénica, hipogonadismo, osteoporosis, espermatogénesis supresora, libido, caquexia, anorexia, inhibición de atrofia muscular en pacientes ambulatorios, suplementación de andrógeno para niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombre, cánceres que expresan el receptor de estrógeno, cáncer de próstata, cáncer de pecho, cáncer de endometrio, sofocos, sequedad vaginal, menopausia, amenorrea, dismenorrea, contracepción, interrupción de embarazo, cánceres que contienen el receptor de progesterona, sincronía de ciclo, meningioma, fibroides, inducción del parto, enfermedades autoinmunitarias, enfermedad de Alzheimer, trastornos sicóticos, dependencia de fármacos, Diabetes Mellitus no insulinodependiente, trastornos mediados por receptor de dopamina, insuficiencia cardiaca congestiva, desregulación de la homeostasis del colesterol, y atenuación del metabolismo de un agente farmacéutico.
6. Uso según la reivindicación 5, en el cual la afección o trastorno es cáncer de próstata.
7. Compuesto según se ha definido en la reivindicación 1 ó 2 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una afección o un trastorno seleccionado en el grupo constituido por enfermedades proliferativas, cánceres, hipertrofia benigna de próstata, adenomas y neoplasias de la próstata, células tumorales benignas o malignas que contienen el receptor de andrógeno, enfermedad cardiaca, afecciones o trastornos angiogénicos, hirsutismo, acné, hiperpilosidad, inflamación, modulación inmunitaria, seborrea, endometriosis, síndrome de ovarios policísticos, alopecia androgénica, hipogonadismo, osteoporosis, espermatogénesis supresora, libido, caquexia, anorexia, inhibición de atrofia muscular en pacientes ambulatorios, suplementación de andrógeno para niveles de testosterona reducidos relacionados con la edad en hombre, cánceres que expresan el receptor de estrógeno, cáncer de próstata, cáncer de pecho, cáncer de endometrio, sofocos, sequedad vaginal, menopausia, amenorrea, dismenorrea, contracepción, interrupción de embarazo, cánceres que contienen el receptor de progesterona, sincronía de ciclo, meningioma, fibroides, inducción del parto, enfermedades autoinmunitarias, enfermedad de Alzheimer, trastornos sicóticos, dependencia de fármacos, Diabetes Mellitus no insulinodependiente, trastornos mediados por receptor de dopamina, insuficiencia cardiaca congestiva, desregulación de la homeostasis del colesterol, y atenuación del metabolismo de un agente farmacéutico.
8. Compuesto según se define en la reivindicación 1 ó 2 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar el cáncer de próstata.
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