ES2314210T3 - Composicion para tratamiento de trastornos inflamatorios. - Google Patents

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Abstract

Una composición farmacéutica para administración parenteral, comprendiendo la composición liposomas que consisten en: - colesterol, y - lípidos no cargados que forman vesículas seleccionados de DSPC, HSPC y DPPC, liposomas que tienen un diámetro medio de partícula seleccionado en el intervalo de tamaño entre alrededor de 40-200 nm y contienen un corticosteroide para el tratamiento específico del sitio de trastornos inflamatorios, caracterizada porque el corticosteroide está presente en una forma soluble en agua.

Description

Composición para tratamiento de trastornos inflamatorios.
La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para administración parenteral y en particular intravenosa, que comprende liposomas compuestos de lípidos no cargados que forman vesículas, que incluyen opcionalmente no más de 5 por ciento en moles de lípidos cargados que forman vesículas, teniendo los liposomas un diámetro medio de partícula seleccionado en el intervalo de tamaños entre alrededor de 40-200 nm y conteniendo un corticosteroide para el tratamiento específico del sitio de trastornos inflamatorios.
Antecedentes de la invención
Los liposomas que pertenecen al grupo de partículas vehículo coloidal, son pequeñas vesículas que consisten en una o más bicapas de lípido concéntricas que encierran un espacio acuoso. Debido a su versatilidad estructural con respecto al tamaño, carga superficial, composición de lípido, fluidez de la bicapa y debido a su capacidad de encapsular casi todos los fármacos, su importancia como sistemas de suministro de fármaco fue fácilmente apreciada. Sin embargo, al inyectar intravenosamente los liposomas, estos son reconocidos como partículas extrañas por el Sistema Fagocitario Mononuclear (MPS) y son rápidamente aclarados de la circulación a órganos ricos en células fagocíticas, como hígado, bazo y médula ósea. Se han identificado varias posibilidades para reducir este efecto, tales como disminuir el tamaño de partícula de los liposomas y cambiar la carga superficial de los liposomas. Otro desarrollo se refiere a la modificación superficial de los liposomas por la introducción de componentes poliméricos hidrófilos específicos sobre la superficie liposomal, grupos que reducen la adsorción de proteínas sobre la superficie de la partícula. Consecuentemente tales liposomas están protegidos contra el reconocimiento por células del MPS y tienen un tiempo de residencia prolongado en la circulación general. Un ejemplo bien conocido de modificación de la superficie liposomal es la incorporación durante la preparación de composiciones liposomales de un derivado de lípido del polímero hidrófilo polietilenglicol (PEG). Usualmente este polímero está modificado en el extremo con un resto hidrófobo, que es el resto de un derivado de fosfatidiletanolamina o un ácido graso de cadena larga. El polietilenglicol per se es un polímero bastante estable, que es un repelente de la adhesión de proteínas y que no está sometido a degradación hidrolítica o enzimática en condiciones fisiológicas. Se han obtenido buenos resultados con respecto a la extensión de la semivida en plasma y la acumulación disminuida en los órganos ricos en células fagocíticas después de la administración intravenosa de liposomas que tienen una superficie injertada con PEG, a varias especies de animales y también a seres humanos (Storm G., Belliot S.O., Daemon T., and Lasic D.D.; Surface modification of nanoparticles to oppose uptake by mononuclear phagocyte system en Adv. Drug Delivery Rev. 17, 31-48 (1995); Moghimi S.M., Hunter A.C. and Murray J.C.; Long-circulating and target-specific nanoparticles; theory to practice en Pharmacol. Rev. 53, 283-318 (2001); Boerman O.C., Dams E.T., Oyen W.J.C., Corstens F.H.M. and Storm G.; Radiopharmaceuticals for scintigraphic imaging of infection and inflammation en Inflamm. Res. 50, 55-64 (2001)). Se han obtenido aprobaciones de comercialización para tales preparaciones liposomales que contienen doxorubicina.
Mientras tanto se han encontrado varias desventajas del uso del polímero polietilenglicol en liposomas de larga circulación. La acumulación de liposomas injertados con PEG en macrófagos y la piel es de alguna preocupación debido a la no biodegradabilidad. Se ha observado la pérdida de la larga circulación (rápido aclaramiento) al inyectar PEG-liposomas por segunda vez (Dams E.T., Laverman P., Oijen W.J., Storm G., Scherphof G.L., Van der Meer J.W., Corstens F.H. and Boerman O.C.; Accelerated blood clearance and altered biodistribution of repeated injections of sterically stabilized liposomes en J. Pharmacol. Exp. Ther. 292, 1071-1079 (2000)). Estudios recientes con PEG-liposomas en pacientes han mostrado que los PEG-liposomas pueden inducir agudos efectos secundarios (rubor facial, opresión en el pecho, falta de aliento, cambios de presión sanguínea), que se resuelven inmediatamente cuando se termina la administración (infusión) de la formulación de PEG-liposoma. Los datos recientes apuntan a un papel de la activación del complemento en la inducción de efectos secundarios (Szebeni J., Baranyi L., Savay S., Lutz H., Jelezarova E., Bunger R and Alving C.R.; The role of complement activation en hyper-sensitivity to Pegylated liposomal doxorubicin (Doxil) en J. Liposome Res. 10, 467-481 (2000)). Hasta ahora las preparaciones comercialmente disponibles basadas en PEG-liposomas son preparaciones en suspensión acuosa. Es bien conocido que la vida útil de las preparaciones de suspensión acuosa liposomal en general y también de PEG-liposomas es bastante limitada. Son conocidas varias técnicas de cómo retirar el vehículo o fase continua de tales preparaciones, tales como, secado por pulverización, diafiltración, evaporación rotacional, etc., y preferentemente liofilización. Recientemente se propuso un método de liofilización, que mejoraba la vida útil de largo plazo de PEG-liposomas, que contiene el quelante de tecnecio hidrazinonicotinamida (Laverman P., van Bloois L., Boerman O.C., Oyen W.J.G., Corstens F.H.M. and Storm G., Lyophilisation of Tc-99m-HYNIC labelled PEG-liposomes en J. Liposome Res. 10 (2&3), páginas 117-129 (2000)), pero se requieren investigaciones adicionales de los resultados y aplicabilidad de esta técnica a preparaciones liposomales.
Los liposomas de pequeño tamaño de larga circulación, que contienen lípidos no cargados o ligeramente cargados negativamente que forman vesículas, tales como PEG-liposomas, después de la administración intravenosa pueden circular durante muchas horas en un volumen no mayor que la circulación general y por lo tanto, en teoría, son capaces de suministrar relativamente altas porciones de agentes antiinflamatorios vía extravasación en sitios de permeabilidad vascular mejorada comunes a las regiones inflamadas. Tales liposomas son de particular interés en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, por ejemplo, artritis reumatoide, que es un trastorno autoinmune crónico, que provoca la inflamación de las articulaciones y la destrucción progresiva del cartílago. Aunque están disponibles para su uso varios tipos de fármacos antireumáticos, el tratamiento de la sinovitis persistente severa y las exacerbaciones agudas puede requerir el uso de varias inyecciones intravenosas que contienen altas dosis de glucocorticoides. Aunque los glucocorticoides sistémicos pueden suprimir los síntomas de la enfermedad, los efectos adversos limitan su uso. Además de esto, los glucocorticoides tienen un comportamiento farmacocinético desfavorable: cortos valores de semivida en plasma y un gran volumen de distribución requieren alta y repetida administración para alcanzar una concentración terapéuticamente efectiva del fármaco en el sitio de acción deseado. La inyección intraarticular de esteroides en las articulaciones afectadas se usa a menudo para incrementar la eficacia (local) de los glucocorticoides y para disminuir los efectos adversos sistémicos, pero este modo de administración es menos confortable para los pacientes y no es factible cuando están afectadas múltiples pequeñas articulaciones. Además, una incidencia significativa de la destrucción indolora de la articulación puede estar asociada a las inyecciones intraarticulares repetidas de glucocorticoides. Según el documento EP-0662820-B los compuestos preferidos para la inclusión en liposomas que contienen PEG son los compuestos antiinflamatorios esteroides, tales como prednisona, metilprednisolona, parametazona, 11-fludrocortisol, triamcinolona, betametasona y dexametasona. Los esteroides listados pertenecen al grupo de esteroides que se administran sistémicamente. Sin embargo, no se proporcionan ejemplos de liposomas de larga circulación que contienen estos glucocorticoides. El único ejemplo de PEG-liposoma que contiene glucocorticoide, a saber el no. 12, se refiere a la preparación de PEG-liposomas que contienen dipropionato de beclometasona. Al preparar PEG-liposomas que contienen dexametasona según la descripción en el documento EP-0662820 y en la administración intravenosa de los mismos en un modelo de artritis experimental in vivo, los presentes inventores advirtieron que los efectos beneficiosos, como se enseña en el documento EP-0662820, no se podían observar en absoluto.
Dado que los glucocorticoides son a menudo los fármacos más efectivos en el tratamiento de trastornos inflamatorios, se necesita proporcionar composiciones liposomales que después de la administración parenteral puedan suministrar más eficientemente cantidades efectivas de glucocorticoide en la región o tejido inflamado para una actividad local mejorada y prolongada, también después de la administración repetida.
Sumario de la invención
Es un objetivo de la presente invención proporcionar una composición farmacéutica para administración parenteral, que comprende liposomas compuestos de lípidos no cargados que forman vesículas, que incluyen opcionalmente no más de 5 por ciento en moles de lípidos cargados que forman vesículas, teniendo los liposomas un diámetro medio de partícula seleccionado en el intervalo de tamaños entre alrededor de 40-200 nm y conteniendo un corticosteroide soluble en agua para el tratamiento específico del sitio de trastornos inflamatorios.
Leyendas de las figuras
La Figura 1 es una representación gráfica de los valores medios para el porcentaje calculado de dosis inyectada en muestras de plasma frente al tiempo para PEG-liposomas para liposomas de DSPC-colesterol no revestidos con polímero de diferentes tamaños de partícula.
La Figura 2 es una representación gráfica de los niveles en plasma de dexametasona libre después de la inyección de 10 mg/kg de tres preparaciones diferentes de fosfato de dexametasona liposomal.
La Figura 3 es una representación gráfica de la puntuación de la inflamación de la pata frente al tiempo antes y después de una sola inyección intravenosa de disolución salina y de liposomas que contienen fosfato de dexametasona.
Descripción detallada de la invención
Se ha encontrado ahora que incorporando una forma soluble en agua de un corticosteroide en liposomas de larga circulación, compuestos de lípidos no cargados que forman vesículas, que incluyen opcionalmente no más de 5 por ciento en moles de lípidos cargados que forman vesículas, teniendo los liposomas una tamaño medio de partícula seleccionado en el intervalo de tamaños entre alrededor de 40-200 nm, se puede alcanzar una localización incrementada y retención mejorada del corticosteroide en el tejido inflamado después de una sola inyección intravenosa de una composición farmacéutica, que comprende dichos liposomas, y como consecuencia de ello, una significativa reversión de la inflamación de la pata en el modelo de artritis adyuvante en ratas.
Los liposomas de larga circulación según la presente invención tienen una semivida de circulación de por lo menos 6 horas, siendo definida la semivida de circulación como el tiempo en el que la segunda fase lineal del perfil logarítmico de aclaramiento liposomal llega al 50% de su concentración inicial, que es la concentración en plasma extrapolada a t=0.
El tamaño de partícula de los liposomas está preferentemente entre 50 y 110 nm de diámetro.
Un corticosteroide soluble en agua según la presente invención es un compuesto que es soluble 1 en \leq 10 (peso/volumen), como se evalúa en agua o agua tamponada a valores fisiológicos, por ejemplo, a pH>6,0, a una temperatura entre 15 y 25ºC.
Los corticosteroides solubles en agua que se pueden usar ventajosamente según la presente invención son sales de metales alcalinos y de amonio preparadas de corticosteroides, que tienen un grupo hidroxilo libre, y ácidos orgánicos, tales como ácidos dicarbónicos alifáticos de C_{2}-C_{22} saturados o insaturados, y ácidos inorgánicos, tales como ácido fosfórico y ácido sulfúrico. También se pueden encapsular ventajosamente en los liposomas de larga circulación sales de adición de ácido de corticosteroides. Si está disponible más de un grupo en la molécula de corticosteroide para la formación de sal, pueden ser útiles mono- así como di-sales. Como sales de metal alcalino son preferidas las sales de sodio y potasio. También se pueden usar otros derivados de corticosteroides positiva o negativamente cargados. Los ejemplos específicos de coticosteroides solubles en agua son fosfato de betametasona y sodio, fosfato de desonida y sodio, fosfato de dexametasona y sodio, fosfato de hidrocortisona y sodio, succinato de hidrocortisona y sodio, fosfato de cortisona y sodio, succinato de cortisona y sodio, fosfato de metilprednisolona y disodio, fosfato de prednisolona y sodio, succinato de prednisolona y sodio, fosfato de prednisona y sodio, succinato de prednisona y sodio, hidrocloruro de
prednisolamato, fosfato de acetonido de triamcinolona y disodio y fosfato de acetonido de triamcinolona y dipotasio.
Los corticosteroides anteriormente mencionados normalmente se usan en el tratamiento sistémico de enfermedades y trastornos antiinflamatorios. Dado que ha sido probado que usando una forma soluble en agua de un corticosteroide en liposomas de larga circulación, que tienen un pequeño diámetro medio de partícula específico, se produce la focalización efectiva del fármaco a los sitios artríticos, por administración sistémica, la presente invención se puede aplicar ventajosamente a corticosteroides, que, por varias razones, normalmente se usan para uso tópico. Tales corticosteroides incluyen, por ejemplo, dipropionato de alclometasona, amcinonida, monopropionato de beclometasona, 17-valerato de betametasona, ciclometasona, propionato de clobetasol, butirato de clobetasona, propionato de deprodona, desonida, desoximetasona, acetato de dexametasona, valerato de diflucortolona, diacetato de diflurasona, diflucortolona, difluprednato, pivalato de flumetasona, flunisolida, acetato de acetonido de fluocinolona, fluocinonida, pivalato de fluocortolona, acetato de fluormetolona, acetato de fluprednideno, halcinonida, halometasona, acetato de hidrocortisona, medrisona, acetato de metilprednisolona, furoato de mometasona, acetato de parametasona, prednicarbato, acetato de prednisolona, prednilideno, rimexolona, pivalato de tixocortol, y hexacetonido de triamcinolona. Los corticosteroides tópicos de especial interés son, por ejemplo, budesonida, flunisolida y propionato de fluticasona, que sufren un aclaramiento eficiente y rápido tan pronto como estos fármacos están disponibles en la circulación general. Preparando una forma soluble en agua de estos esteroides y encapsulando estos en liposomas de larga circulación según la presente invención es posible ahora administrar sistémicamente tales cortocosteroides para llegar al suministro del fármaco en el sitio específico, evitando por ello los efectos adversos asociados al tratamiento sistémico y superando los problemas que son inherentes al corticosteroide, tales como el rápido aclaramiento. En este aspecto el fosfato de budesonida y disodio ha parecido ser una sal de gran interés.
Los componentes lípidos usados para formar los liposomas se pueden seleccionar de varios lípidos que forman vesículas, tales como fosfolípidos, esfingolípidos y esteroles. "Fosfolípido" se refiere a uno cualquiera de los fosfolípidos o combinación de fosfolípidos capaz de formar liposomas. Las fosfatidilcolinas (PC), que incluyen las obtenidas de fuentes naturales o las que son parcial o totalmente sintéticas, o de longitud de cadena de lípido e insaturación variables son apropiadas para su uso en la presente invención. Los fosfolípidos preferidos contienen cadenas alquílicas saturadas, tales como DSPC, HSPC y DPPC, dando una bicapa con una relativamente alta temperatura de transición. El colesterol es preferido como componente bicapa y puede formar hasta el 50% en moles de los constituyentes de la bicapa.
La substitución (completa o parcial) de estos componentes básicos, por ejemplo, por esfingomielinas y ergosterol parecía ser posible. Para la encapsulación efectiva de los corticosteroides solubles en agua en los liposomas, evitando por ello la fuga del fármaco de los liposomas.
Los liposomas según la presente invención se pueden preparar según métodos usados en la preparación de liposomas convencionales. La carga pasiva de los ingredientes activos dentro de los liposomas disolviendo el corticosteroide en la fase acuosa puede dar como resultado cantidades insuficientes de fármaco encapsulado. Sin embargo, se prefiere la carga activa o remota, ya que con este método se pueden conseguir más altas eficiencias de encapsulación. Con la carga remota los ésteres de corticosteroide sensible a la presión pueden evitar la etapa de extrusión que consume tiempo y es posiblemente perjudicial. La carga remota de corticosteroides se puede efectuar usando un gradiente de pH e implica la encapsulación de acetato de calcio como agente complejante en el interior liposomal.
Las ventajas de los liposomas según la invención sobre los PEG-liposomas son: una más alta eficiencia de encapsulación y una mejor relación de fármaco a lípido cuando se encapsulan los corticosteroides. Más importantemente, se pueden esperar menos efectos secundarios agudos relacionados con el complemento con los liposomas según la invención cuando se inyecta intravenosamente la formulación liposomal.
Los efectos beneficiosos observados después de una sola inyección del corticosteroide soluble en agua que contiene liposomas de larga circulación según la invención son muy favorables cuando se comparan con los resultados obtenidos después de inyecciones repetidas del corticosteroide soluble en agua no encapsulado en diferentes concentraciones. Los liposomas según la invención han mostrado un perfil farmacocinético mejorado comparado con los PEG-liposomas. Además de un incremento del AUC bajo la curva de (concentración en plasma de fosfato de dexametasona)-tiempo, también se observa menos dexametasona libre en la circulación durante las primeras horas después de la inyección de fosfato de dexametasona liposomal.
Las composiciones según la presente invención se pueden usar ventajosamente para la preparación de un medicamento en el tratamiento de enfermedades inflamatorias tales como artritis reumatoide, osteoartritis, esclerosis múltiple, psoriasis, síndrome inflamatorio intestinal, colitis, enfermedad de Crohn en seres humanos que padecen dichas enfermedades. También es útil la aplicación en oncología.
Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente la invención.
Ejemplos
Ejemplo de referencia
Preparación de PEG-liposomas que contienen fosfato de dexametasona
694 mg de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) (Lipoid Ludwigshafen), 193 mg de colesterol (Sigma Aldrich) y 206 mg de PEG-diestearoilfosfatidiletanolamina (PEG-DSPE) (Avanti Polar Lipids) se pesaron y mezclaron en un matraz de fondo redondo de 100 ml. Los lípidos se disolvieron en alrededor de 30 ml de etanol. A partir de entonces tuvo lugar la evaporación hasta sequedad en un Rotavapor durante 1 hora a vacío a 40ºC, seguido de lavado con nitrógeno gaseoso durante 1 hora.
1.000 mg de fosfato de dexametasona y disodio (OPG Nieuwegein) se pesaron y disolvieron en 10 ml de agua esterilizada. La disolución se añadió a la película de lípido seco y se agitó durante cinco minutos en presencia de bolas de vidrio para permitir la hidratación completa de la película de lípido.
La suspensión liposomal se transfirió a un extrusor (Avestin, máximo volumen 15 ml) y se extruyó a temperatura ambiente a presión, usando nitrógeno gaseoso, 6 veces a través de 2 filtros porosos uno colocado encima del otro, que tienen un tamaño de poro de 200 y 100 nm respectivamente, 100 y 50 nm respectivamente y 50 y 50 nm respectivamente. Subsecuentemente la suspensión liposomal se dializó en un compartimento de diálisis (Slide-A-Lyzer, 10.000 MWCO) 2 veces durante 24 horas contra 1 litro de PBS esterilizado.
El tamaño medio de partícula de los liposomas se determinó por medio de dispersión de la luz (Malvern Zeta-sizer) y se encontró que era 93,1 \pm 1,2 nm, siendo el índice de polidispersidad 0,095 \pm 0,024. La eficiencia de encapsulación del fosfato de dexametasona se determinó por medio de un método de HPLC y se encontró que era 4,8%. El contenido de fosfolípido se determinó por destrucción del lípido usando ácido perclórico seguido de la determinación del fosfato y era 40,0 \mumol/ml. Se encontró que la relación de fármaco a lípido era 0,12. La suspensión de liposomas se almacenó en una atmósfera de nitrógeno a 4ºC y se encontró que era estable durante alrededor de 2 meses.
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Ejemplo 1
Preparación de liposomas que contienen fosfato de dexametasona
750 mg de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) (Lipoid Ludwigshafen) y 193 mg de colesterol (Sigma Aldrich) se pesaron y mezclaron en un matraz de fondo redondo de 100 ml. Los lípidos se disolvieron en alrededor de 30 ml de etanol. A partir de entonces tuvo lugar la evaporación hasta sequedad en un Rotavapor durante 1 hora a vacío a 40ºC, seguido de lavado con nitrógeno gaseoso durante 1 hora.
1.000 mg de fosfato de dexametasona y disodio (OPG Nieuwegein) se pesaron y disolvieron en 10 ml de agua esterilizada. La disolución se añadió a la película de lípido seco y se agitó durante cinco minutos en presencia de bolas de vidrio para permitir la hidratación completa de la película de lípido.
La suspensión liposomal se transfirió a un extrusor (Avestin, máximo volumen 15 ml) y se extruyó a temperatura ambiente como se describe en el ejemplo de referencia.
El tamaño medio de partícula de los liposomas se determinó como se describe en el ejemplo de referencia y se encontró que era 102,0 \pm 4,3 nm, siendo el índice de polidispersidad 0,12 \pm 0,05. La eficiencia de encapsulación del fosfato de dexametasona era 8,4%. La concentración de fosfolípido era 26,6 \mumol/ml. Se encontró que la relación de fármaco a lípido era 0,32. La suspensión de liposomas se almacenó en una atmósfera de nitrógeno a 4ºC.
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Ejemplo 2
Preparación de liposomas que contienen fosfato de dexametasona
Se repitió el ejemplo 1 pero en lugar de DPPC se usó diestearoilfosfatidilcolina (DSPC) como componente lípido principal. La hidratación se realizó como se describe en los ejemplos previos, sin embargo la suspensión se calentó repetidamente durante el procedimiento de hidratación y tardó 15 minutos en lugar de 5 minutos como se describe anteriormente. Después de la hidratación la dispersión de liposomas se extruyó como se describe en el ejemplo 1, sin embargo el procedimiento de extrusión se realizó a 65ºC. El tamaño medio de partícula de los liposomas se determinó como se describe en el ejemplo de referencia y se encontró que era 102,9 \pm 0,5 nm, siendo el índice de polidispersidad 0,26 \pm0,015. La eficiencia de encapsulación del fosfato de dexametasona era 17,5%. La concentración de fosfolípido era 57,5 \mumol/ml. Se encontró que la relación de fármaco a lípido era 0,30. La suspensión de liposomas se almacenó en una atmósfera de nitrógeno a 4ºC.
Ejemplo 3
Preparación de liposomas que contienen fosfato de dexametasona
Se repitió el ejemplo 2 pero en lugar de 100 mg/ml de fosfato de dexametasona se usaron 10 ml de una disolución de 50 mg/ml de fosfato de dexametasona para la hidratación de la película de lípido. Después de la hidratación la dispersión de liposomas se extruyó como se describe en el ejemplo 2 a 65ºC. Después de la extrusión a través de dos filtros con un tamaño de poro de 50 nm, la dispersión de liposomas se extruyó 6 veces a través de dos filtros que tienen un tamaño de poro de 50 nm y 30 nm respectivamente y dos filtros, que tienen ambos un tamaño de poro de 30 nm. El tamaño medio de partícula de los liposomas se determinó como se describe en el ejemplo de referencia y se encontró que era 63,1 \pm 0,7 nm, siendo el índice de polidispersidad 0,20 \pm 0,021. La eficiencia de encapsulación del fosfato de dexametasona era 14,4%. La concentración de fosfolípido era 63,2 \mumol/ml. Se encontró que la relación de fármaco a lípido era 0,11. La suspensión de liposomas se almacenó en una atmósfera de nitrógeno a 4ºC.
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Ejemplo 4
Preparación de liposomas que contienen fosfato de dexametasona
Se repitió el ejemplo 2. En lugar de 750 mg, se usaron 694 mg de DSPC. Además, se añadieron 112 mg de dipalmitoilfosfatidilglicerol negativamente cargado en forma de componente de bicapa de lípido. Se realizó la hidratación y extrusión como se describe en el ejemplo 2. El tamaño medio de partícula de los liposomas era 95,1 \pm 0,9 nm, siendo el índice de polidispersidad 0,12 \pm 0,018. La eficiencia de encapsulación del fosfato de dexametasona era 3,0%. La concentración de fosfolípido era 39,0 \mumol/ml. Se encontró que la relación de fármaco a lípido era 0,08. La suspensión de liposomas se almacenó en una atmósfera de nitrógeno a 4ºC.
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Ejemplo 5
Preparación de liposomas que contienen fosfato de dexametasona
Se repitió el ejemplo 3. En lugar de 750 mg se usaron 694 mg de DSPC. Además, se añadieron 112 mg de dipalmitoilfosfatidilglicerol negativamente cargado en forma de componente de bicapa de lípido. Se realizó la hidratación y extrusión como se describe en el ejemplo 3. El tamaño medio de partícula de los liposomas era 65,3 \pm 0,5 nm, siendo el índice de polidispersidad 0,17 \pm 0,021. La eficiencia de encapsulación del fosfato de dexametasona era 3,0%. La concentración de fosfolípido era 53,8 \mumol/ml. Se encontró que la relación de fármaco a lípido era 0,06. La suspensión de liposomas se almacenó en una atmósfera de nitrógeno a 4ºC.
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Ejemplo 6
Cinética comparativa de fosfato de dexametasona liposomal y dexametasona libre en la circulación después de una sola inyección intravenosa a la rata
Ratas macho (Lewis (exogámicas, calidad SPF) (Maastricht University, Los Países Bajos) tenían acceso libre a dieta de animales de laboratorio en pelets estándar (Altromin, código VRF 1, Lage, Alemania) y agua del grifo. Se les inyectó en la vena de la cola una sola dosis de inyección intravenosa de preparaciones liposomales, que contiene cada una 10 mg/kg de fosfato de dexametasona. Se recogieron muestras de sangre de la vena de la cola de cada rata en los siguientes puntos de tiempo post-dosis: 1, 4, 24 y 48 horas, 4 días y 1 semana. La cantidad de muestra recogida era aproximadamente 500 \mul por caso de muestreo.
La sangre recogida se transfirió a tubos que contienen EDTA, se centrifugó y la fracción de plasma se almacenó a -80ºC. La extracción tanto de fosfato de dexametasona como de dexametasona de muestras de 200 \mul de plasma se realizó con 2 ml de acetato de etilo después de añadir ácido fosfórico para rebajar el pH de la fracción de plasma. La fracción de acetato de etilo se evaporó en nitrógeno y el extracto se reconstituyó en 150 \mul de una mezcla de etanol/agua 50/50. Estas disoluciones se transfirieron a un sistema HPLC en fase inversa equipado con columna de C18 usando una mezcla de acetonitrilo/agua 25/75 con pH=2 como fase móvil. La detección se realizó con un detector de UV a 254 nm. Los resultados se muestran en la Figura 1 y 2.
TABLA 1 Liposomas: propiedades
1 
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Ejemplo 7
Evaluación de la eficacia terapéutica
Las ratas lewis fueron inmunizadas subcutáneamente en la base de la cola con Mycobacterium tuberculosis térmicamente inactivadas en adyuvante de Freund incompleto. La inflamación de la pata comenzó entre 9 y 12 días después de la inmunización, alcanzó máxima severidad aproximadamente después de 20 días, y a continuación se resolvió gradualmente.
La evaluación de la enfermedad se realizó puntuando visualmente la severidad de la inflamación de la pata, máxima puntuación 4 por pata, y midiendo la pérdida de peso corporal inducida por la enfermedad. La eficacia terapéutica de 10 mg/kg de fosfato de dexametasona liposomal, preparado según el ejemplo de referencia, ejemplo 2 y 3 se evaluó contra PBS como tratamiento de control. Las ratas fueron tratadas cuando la puntuación media > 6 (el día 14 o 15 después de la inducción de la enfermedad).
Se observó una remisión completa del proceso de inflamación en 3 días después del tratamiento con una sola dosis de 10 mg/kg de fosfato de dexametasona liposomal. Las tres preparaciones indujeron el mismo efecto terapéutico en el modelo de enfermedad (resultados mostrados en la Figura 3).

Claims (5)

1. Una composición farmacéutica para administración parenteral, comprendiendo la composición liposomas que consisten en:
-
colesterol, y
-
lípidos no cargados que forman vesículas seleccionados de DSPC, HSPC y DPPC, liposomas que tienen un diámetro medio de partícula seleccionado en el intervalo de tamaño entre alrededor de 40-200 nm y contienen un corticosteroide para el tratamiento específico del sitio de trastornos inflamatorios, caracterizada porque el corticosteroide está presente en una forma soluble en agua.
2. Una composición según la reivindicación 1, caracterizada porque el corticosteroide se selecciona del grupo que consiste en corticosteroides sistémicamente administrados.
3. Una composición según la reivindicación 2, caracterizada porque los corticosteroides sistémicamente administrados se seleccionan del grupo que consiste en prednisolona, dexametasona y metilprednisolona.
4. Una composición según la reivindicación 1, caracterizada porque el corticosteroide se selecciona del grupo de corticosteroides aplicados tópicamente.
5. Una composición según la reivindicación 4, caracterizada porque los corticosteroides aplicados tópicamente se seleccionan del grupo que consiste en budenosida, flunisolida y propionato de fluticasona.
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