ES2316373T3 - Procedimiento clinico para la seleccion genetica de recien nacidos utilizando espectometria de masas en tandem. - Google Patents
Procedimiento clinico para la seleccion genetica de recien nacidos utilizando espectometria de masas en tandem. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2316373T3 ES2316373T3 ES00947150T ES00947150T ES2316373T3 ES 2316373 T3 ES2316373 T3 ES 2316373T3 ES 00947150 T ES00947150 T ES 00947150T ES 00947150 T ES00947150 T ES 00947150T ES 2316373 T3 ES2316373 T3 ES 2316373T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- samples
- blood
- results
- data
- scan
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6806—Determination of free amino acids
- G01N33/6812—Assays for specific amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/60—Complex ways of combining multiple protein biomarkers for diagnosis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Un procedimiento para seleccionar recién nacidos que utiliza un sistema que emplea un espectrómetro de masas en tándem con electronebulización, que comprende las etapas de: recibir una pluralidad de gotas de sangre; combinar un patrón de aminoácidos y un patrón exento de carnitina/acilcarnitina para formar un patrón interno que contiene una pluralidad de compuestos marcados; preparar una pluralidad de muestras, comprendiendo cada una de dichas muestras dicho patrón interno, metanol, y un extracto de sangre procedente de una de dichas gotas de sangre; realizar un barrido de dicha pluralidad de muestras utilizando dicho espectrómetro de masas en tándem con electronebulización para producir unos resultados del barrido; preparar una pluralidad de muestras de sangre control, comprendiendo cada una de dichas muestras de sangre control sangre hemolizada, EDTA, y 2 H3-serina; preparar una pluralidad de patrones, comprendiendo cada uno de dichos patrones sangre hemolizada, EDTA, 2 H 3serina, y uno de dichos compuestos marcados; realizar un barrido de dicha pluralidad de muestras de sangre control para producir unos resultados de muestras control; realizar un barrido de dicha pluralidad de patrones para producir una pluralidad de resultados de patrones; y, comparar dichos resultados de muestras control obtenidos para cada una de dichas muestras de control de calidad con dicha pluralidad de resultados de patrones obtenidos para cada uno de dichos patrones; y, analizar dichos resultados del barrido utilizando dichos resultados de patrones y dichos resultados de muestras control.
Description
Procedimiento clínico para la selección genética
de recién nacidos utilizando espectrometría de masas en tándem.
Es la selección genética de bebés recién nacidos
utilizando la espectrometría de masas en tándem. En particular,
gotas de sangre tomadas de recién nacidos se reúnen con patrones
internos y se barren para cuantificar la pluralidad de metabolitos
sanguíneos para ayudar en el diagnóstico de trastornos metabólicos.
Los controles de calidad y los indicadores de garantía de calidad
utilizados en los patrones internos y las funciones de barrido
aseguran unas técnicas de toma de muestras y unos análisis precisos
para ayudar en el diagnóstico médico.
La espectrometría de masas ha contribuido
significativamente al diagnóstico de enfermedades metabólicas
durante 20 años. El análisis mediante espectrometría de masas en
tándem con bombardeo de átomos rápidos ("Fast Atom Bombardment
Tandem Mass Spectrometry", FAB-MS/MS) de
acilcarnitinas en volúmenes muy pequeños de plasma o sangre completa
se ha ido convirtiendo en una rutina. Véase Millington, et
al., Mass Spectrometry: Clinical and Biomedical Applications, 1,
capítulo 8, 299-318. Ha sido un procedimiento
bioquímico muy satisfactorio para el diagnóstico diferencial de
trastornos del catabolismo de ácidos grasos, y el procedimiento
instrumental reconoce numerosos defectos en el catabolismo de
aminoácidos de cadena ramificada. La frecuencia de aparición de
estas enfermedades y su asociación con muertes súbitas e inesperadas
ha generado un gran interés médico por el desarrollo de ensayos de
selección neonatales.
También ha sido demostrado previamente el
análisis rutinario de aminoácidos y acilcarnitinas mediante
espectrometría de masas en tándem con iones secundarios líquida
("Liquid Secondary Ion Tandem Mass Spectrometry", LSIMS/MS) de
gotas de sangre sobre papel de filtro. Véase Chace et al.,
"Neonatal Screening for Inborn Errors of Metabolism by Automated
Dynamic Liquid Secondary Ion Tandem Mass Spectrometry", New
Horizons in Neonatal Screening, 1994. Para aumentar el número y la
velocidad a la cual pueden analizarse las muestras se requiere el
desarrollo de la preparación automática de muestras, el análisis
instrumental y la interpretación de los datos. El aumento en el
rendimiento de las muestras y la facilidad en la preparación de las
muestras permite un diagnóstico más eficaz y exacto de un gran
número de trastornos metabólicos, un proceso necesario para
determinar la salud de un bebé recién nacido o, en cualquier caso,
de cualquier persona que requiera cuidados clínicos. La gama de
síntomas clínicos y anomalías en los ensayos sanguíneos sencillos es
tan grande que justifica una investigación bioquímica extensiva
cuando se sospecha que existe una enfermedad metabólica, como se
indica en Millington, et al., "Diagnosis of Metabolic
Disease", en Biological Mass Spectrometry: Present and Future,
3.15, 1994.
La formación de perfiles metabólicos de
aminoácidos y acilcarnitinas a partir de gotas de sangre mediante el
uso de espectrometría de masas en tándem con electronebulización
automática ("Electrospray Tandem Mass Spectrometry",
ESI-MS/MS) es una herramienta de diagnóstico más
poderosa para los errores congénitos del metabolismo. Véase Rashed,
et al., Clinical Chem., 43:7, 1129-1141.
Nuevas estrategias para la preparación de muestras y la
interpretación de datos han ayudado a establecer la metodología como
un procedimiento de selección neonatal robusto y de alto
rendimiento. Comparada con procedimientos más antiguos, la
ESI-MS/MS es mucho más versátil y menos trabajosa,
porque la mayoría de las etapas puede realizarse de modo
automático.
Los errores congénitos del metabolismo
normalmente son el resultado de enzimas o cofactores defectuosos. La
deficiencia en acil-CoA deshidrogenasa de longitud
de cadena media (MCAD) es un trastorno muy común de la oxidación de
ácidos grasos. Como se ve en Chace et al., Clin. Chem.,
43:11, 2106-2113, la deficiencia en MCAD se
diagnostica basándose en el aumento de acilcarnitinas con longitud
de cadena media, identificable mediante procedimientos de
espectrometría de masas con dilución de isótopos. Los ésteres
butílicos de las acilcarnitinas comparten un patrón de fragmentación
similar con un ion de fragmentación común a 85 Da después de una
disociación inducida por colisión utilizando un espectrómetro de
masas. Las diferencias en el patrón de fragmentación se comparan con
espectros conocidos de individuos sanos y, por tanto, puede
realizarse un diagnóstico. En un entorno clínico, es posible el
análisis de acilcarnitinas mediante una espectrometría de masas en
tándem, puesto que sus ésteres metílicos asociados permiten el
reconocimiento diagnóstico de todos los pacientes con deficiencia en
MCAD, independientemente de la mutación subyaciente, el estado
sintomático o el tratamiento. Además, el análisis de aminoácidos, en
forma de sus ésteres butílicos asociados, ha sido validado para la
búsqueda en recién nacidos de fenilcetonuria (PKU), tirosinemia,
enfermedad de la orina de jarabe de arce, y homocistinuria, todas
las cuales, entre otras, pueden detectarse mediante una
espectrometría de masas.
La espectrometría más selectiva y sensible, en
relación con los trastornos genéticos, se realiza mediante un
espectrómetro de masas en tándem con electronebulización automático.
Se ha presentado el uso de ESI-MS/MS como la forma
más rápida y exitosa para proporcionar un procedimiento de selección
específico y preciso (Rashed, et al.). Sin embargo, el
procedimiento en sí mismo debe complementarse con un procedimiento
de toma de muestras eficaz y con un modo de función de barrido y de
inyección óptimos para albergar, con la mayor precisión, muchas
muestras al mismo tiempo, maximizando, con ello, el rendimiento
mientras se mantiene la sensibilidad y la precisión.
\newpage
La eficacia de la ionización de los compuestos
es muy alta con la utilización de la ionización con
electronebulización. Como puede verse en la patente de EEUU nº
5.352.891, Monning, et al., la alta eficacia de la ionización
permite obtener los espectros útiles requeridos incluso para
cantidades muy pequeñas de material. En otras palabras, la
espectrometría de masas en tándem con electronebulización es muy
sensible y específica con respecto a sus sistemas de inyección de
compuestos, permitiendo, con ello, cubrir un espectro más amplio de
enfermedades, lograr una menor proporción de falsos positivos,
obtener una alta especificidad, y permitir un tiempo analítico más
corto. El uso de la MS/MS en tándem con electronebulización ha
demostrado aumentar el rendimiento. Además, la técnica se ha
aplicado con éxito al diagnóstico prenatal (Rashed, et al.,
1130) y otros procesos de selección. Sin embargo, la optimización
del procedimiento de selección de recién nacidos debe lograrse
maximizando el rendimiento de las muestras de la forma más eficaz y
precisa, comenzando con la preparación de muestras, y terminando con
la garantía de calidad. El proceso, de forma global, se presta a dar
tranquilidad a los padres y a conseguir unos resultados oportunos y
baratos.
La preparación de muestras para la selección
genética de un individuo para detectar carnitinas y
\alpha-aminoácidos (marcadores genéticos de
errores congénitos en el metabolismo) para su uso en la
espectrometría de masas se contempla en la técnica. El procedimiento
convencional de recogida de muestras para la selección neonatal es
una punción en el tobillo, seguida del depósito de la sangre
completa sobre un papel de filtro especial (o tarjetas Guthrie) en
forma de gotas. Véase Millington, et al., International
Journal of Mass Spectrometry and Ion Processes, 111, 212, 1991. El
último procedimiento desarrollado para preparar derivados de éster
butílico de acilcarnitinas y aminoácidos a partir de gotas de sangre
consiste en procesar las muestras en microplacas. Un troquel de
gotas de sangre automático corta una única gota de sangre desde cada
tarjeta Guthrie directamente hacia los pocillos individuales de la
microplaca. A cada trozo cortado de gota de sangre en cada pocillo
se le añade una disolución metanólica que contiene concentraciones
conocidas de patrones marcados con isótopos estables. Los patrones
marcados pueden incluir glicina y alanina; valina, metionina y
fenilalanina; leucina y tirosina; ornitina; carnitina;
acetilcarnitina; propionilcarnitina; octanoilcarnitina; y
palmitoilcarnitina, todas en combinación en alguna concentración
para potenciar la sensibilidad por compuestos concretos, según
requiera el respectivo protocolo de ensayo. Las muestras se extraen
y los extractos entonces se trasladan a otra microplaca, en la que
se elimina el metanol mediante evaporación. Al residuo en cada
pocillo se le añade HCl butanólico u otros modificadores químicos, y
se completa la derivatización mediante calentamiento. Los residuos
finales se reconstituyen y se colocan en una bandeja de toma de
muestras automática para su introducción en el MS.
La incorporación de técnicas de dilución de
isótopos como patrones proporciona información cuantitativa acerca
de los componentes específicos de cada muestra. Resulta necesaria
una concentración óptima de una combinación de 12 patrones de
aminoácidos y 8 patrones de acilcarnitina/carnitina para mejorar la
precisión y proporcionar un control de calidad, así como para
proporcionar una serie de funciones de barrido que maximicen la
información sobre los metabolitos con un alto rendimiento. El
control de calidad y la garantía de calidad en un entorno clínico
resultan importantísimos, debido al procedimiento e instrumentación
que han se han desarrollado para la optimización del rendimiento de
las muestras. Esto resulta especialmente importante, puesto que los
resultados de la espectrometría de masas se correlacionan con la
población general de recién nacidos, de forma que muestren unos
resultados precisos en la tendencias demográficas.
Las ventajas de la ESI-MS/MS
frente a otros procedimientos de análisis son su alta especificidad
y precisión de cuantificación mediante el uso de la técnica de
dilución de isótopos, además de su velocidad y adaptabilidad a
realizarse de modo automático. Véase Chace, et al., Clin.
Chem., vol, 39, nº 1, 1993. Habiendo unido la sensibilidad en la
detección con la necesidad de que la selección de recién nacidos
requiere un rendimiento rápido, una alta fiabilidad, una alta
precisión, una alta selectividad y un alto valor de bajo coste,
ahora existe una necesidad en un entorno clínico, satisfecha por la
presente invención, de un medio preciso para asegurar la calidad de
los datos para el diagnóstico de trastornos genéticos obtenidos de
una manera organizada y precisa. Esta calidad puede unirse al
procedimiento más eficaz de preparar y seleccionar muestras, de
forma que se reduce el número de falsos positivos y falsos
negativos, y el rendimiento de las muestras se maximiza
necesariamente en el entorno clínico de diagnóstico.
La patente de EEUU nº 5.538.897, 23 de julio,
1996 (Yates, III, et al.) muestra un procedimiento para
correlacionar un espectro de masas de fragmentos de péptidos con las
secuencias de aminoácidos derivadas de una base de datos. Un péptido
se analiza mediante un espectrómetro de masas en tándem para
producir un espectro de masas de fragmentos del péptido. Se emplea
una base de datos de secuencias de proteínas o una base de datos de
secuencias de nucleótidos para predecir uno o más espectros de
fragmentos para su comparación con el espectro de los fragmentos
obtenido de forma experimental. Los diversos espectros de masas
predichos se comparan con el espectro de los fragmentos obtenido de
forma experimental utilizando una medida de ajuste más cercano,
calculado preferiblemente con un proceso en dos etapas, incluyendo
el cálculo de una puntuación preliminar y, para los espectros
predichos con mayor puntuación, el cálculo de una función de
correlación.
La patente de EEUU nº 5.206.508, 27 de abril,
1993 (Alderdice, et al.) indica un sistema de espectrometría
de masas en tándem capaz de obtener espectros de masas en tándem
para cada ion progenitor sin la separación de los iones progenitores
que se diferencian en su masa. Además, este sistema proporcionaría
la capacidad de seleccionar un ion particular antes de la
excitación.
La patente de EEUU nº 5.352.891, 4 de octubre,
1994 (Monning, et al.) demuestra que la producción de
espectros de masas de compuestos químicos de elevado peso molecular
que tienen una multiplicidad de picos mejora mediante la generación
de un espectro de masas mejorado a partir del espectro de masas
frente a carga observado. La proporción de señal frente al ruido
puede mejorarse, en algunas aplicaciones, incluyendo en el producto
todas las porciones dentro de los picos discretos en el espectro de
masas frente a carga, que están contenidas dentro de una ventana
alrededor de cada uno de los picos discretos.
\vskip1.000000\baselineskip
El objetivo de la presente invención es mejorar
el procedimiento de selección de recién nacidos poniendo en práctica
protocolos de toma de muestras y controles de calidad de datos
eficaces. Como etapas inicial y final en el uso de la espectrometría
de masas en tándem con electronebulización para la selección de
errores congénitos de metabolitos, la eficacia de las muestras y la
garantía de calidad complementan un procedimiento de rendimiento de
las muestras más rápido con un alto valor de bajo coste. Todos los
valores se comparan con umbrales conocidos, como un medio para
evaluar los contenidos de la muestra. La alta fiabilidad y la alta
precisión obtenidas en un gran número de muestras proporcionará, con
gran rapidez, un diagnóstico coherente al nivel clínico.
La espectrometría de masas en tándem con
electronebulización es muy sensible y específica, y puede detectar
un amplio espectro de trastornos al nivel genético. El tiempo
analítico, que ya es más corto, y la alta especificidad aumenta la
velocidad a que se pueden analizarse las muestras. La inclusión de
patrones internos en la preparación de las muestras, que disminuyen
el error de extracción y permiten funciones de barrido de modo
mixto, aumenta aún más el rendimiento de las muestras. Los patrones
internos se utilizan para proporcionar la información cuantitativa
necesaria para detectar componentes específicos. El uso de las
proporciones adecuadas de cada ion particular permite la detección
de muchos metabolitos al mismo tiempo, eliminado, con ello, el
análisis por duplicado, permitiendo emplear los ensayos secundarios
para la garantía de calidad y el ensayo de suficiencia, en lugar de
emplearlos para la detección de compuestos preliminares.
Un segundo objetivo del presente procedimiento
es incluir patrones de EDTA que puedan determinar si la sangre fue
recogida de forma adecuada o no. La sangre contaminada o la sangre
recogida en tubos, en lugar de mediante una punción en el tobillo,
no resulta adecuada y este patrón puede identificarla.
Un tercer objetivo del presente procedimiento es
incluir patrones de garantía de calidad, tal como
^{2}H_{3}-serina (serina marcada con deuterio 3)
para demostrar que el ordenador está reconociendo compuestos que
normalmente no aparecen. La ^{2}H_{3}-serina es
un aminoácido que no se incluye ni se reconoce en un barrido normal,
de manera que la ^{2}H_{3}-serina se añade a una
muestra para demostrar que, cuando este compuesto se detecta y se
muestra como un pico, el ordenador es capaz de detectar compuestos
extraños. En efecto, pueden detectarse muestra contaminadas o sin
fármacos.
Un cuarto objetivo del presente procedimiento es
incluir factores de corrección, valores de masas, marcadores de
garantía de calidad y marcadores de preparación de muestra
apropiados como valores de entrada, que complementan una base de
datos que se utiliza para comprobar los cálculos producidos
utilizando una hoja de cálculo, asegurando, con ello, una reducción
en los datos precisos. Esto proporciona una mayor garantía de
calidad. Cuando se advierte una muestra anómala debe realizarse una
acción recomendada. La conservación de valores en la base de datos
facilita el informe de los datos de la proporción de enfermedad, la
generación y el análisis de tendencias, los valores totales de
muestras por día, y los análisis de QA/QC.
Un quinto objetivo del presente procedimiento es
incluir una etapa de control de calidad que utiliza patrones no
marcados y patrones de sangre control para asegurar la coherencia y
la precisión en la detección de los veinte metabolitos.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 1 es un diagrama de bloques
simplificado que muestra la metodología global. Se correlacionan
cinco procesos principales, desde la preparación de las muestras
hasta el diagnóstico del sistema.
La figura 2 es un diagrama de bloques que
muestra con más detalle las etapas implicadas en la preparación de
la muestra.
La figura 3 es un diagrama de bloques que
muestra con más detalle las etapas implicadas en el uso automático
de un espectrómetro de masas en tándem con electronebulización que
incluye el uso de las funciones de barrido apropiadas para maximizar
un rendimiento preciso.
La figura 3a es una hoja de cálculo que muestra
los posibles umbrales superiores o inferiores utilizados para
determinar qué muestran deben marcarse para una posterior toma de
decisiones o un reensayo.
La figura 3b es un ejemplo de un barrido MRM de
carnitina libre que muestra los picos pertinentes y los valores para
la garantía de calidad.
La figura 3c es un ejemplo de un barrido MRM de
acetilcarnitina que muestra los picos pertinentes y los valores para
la garantía de calidad.
La figura 3d es un ejemplo de un perfil de
barrido completo de acetilcarnitina que muestra los picos
pertinentes y los valores para la garantía de calidad.
La figura 3e es un ejemplo de un perfil de
barrido completo aminoácidos que muestra los picos pertinentes y los
valores para la garantía de calidad.
La figura 3f es un ejemplo de un barrido MRM de
aminoácidos básicos que muestra los picos pertinentes y los valores
para la garantía de calidad.
La figura 4 es un diagrama de bloques que
muestra con más detalle las etapas implicadas en el procesamiento de
los datos después de la adquisición de los valores, que se han
producido en el espectrómetro.
La figura 5 es un diagrama de bloques que
muestra con más detalle las etapas implicadas en la interpretación
de los datos, con relación a la demografía y la toma de
decisiones.
La figura 6 es un diagrama de bloques que
muestra con más detalle las etapas implicadas en el control del
diagnóstico del sistema y la introducción de controles de
calidad.
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación la invención se describirá en
detalle con relación a una realización preferida y su ejecución,
cuya naturaleza es servir de ejemplo y ser descriptivamente
específica según se describe. Como siempre, se entenderá que con
ello no se pretende limitar el alcance de la invención. La invención
incluye las alteraciones y otras modificaciones en el dispositivo
ilustrado, y otras aplicaciones de los principios de la invención
ilustrada en la presente, que normalmente surgen en los expertos en
la técnica con que se relaciona la invención.
La figura 1 representa un esquema global del
procedimiento de seleccionar recién nacidos en un entorno de
diagnóstico clínico que implica cinco etapas principales, cada una
de las cuales es importante para lograr un análisis de las muestras
rápido, automático y preciso. Una preparación de la muestra (10)
eficaz resulta necesaria para asegurar una derivatización precisa de
los metabolitos, y se introducen ciertos aditivos o patrones
internos que resultan importantes para proporcionar información
cuantitativa para los componentes específicos de cada muestra.
Después de la preparación de la muestra (10), las muestras se cargan
sobre el espectrómetro de masas en tándem con electronebulización
(12), que incluye muchas características automáticas para asegurar
la velocidad y coherencia del barrido de las muestras. Entonces se
adquieren los datos y se procesan hasta una forma reducida y
organizada, como se observa en el recuadro (14). Los valores
producidos a partir del barrido del espectrómetro de masas se
procesan y se imprimen en forma de una hoja de cálculo para permitir
la posterior comprobación de los cálculos, un medio para asegurar un
número preciso de producción y calidad. Los datos adquiridos
entonces se interpretan mediante un sistema de interpretación de
diagnóstico asistido (16) que integra los resultados con los datos
demográficos relacionados con el bebé y permite la correlación con
un trastorno específico basado en cualquier de los picos marcados.
El proceso, que trabaja junto con un programa informático, permite
elaborar un informe con los datos, que es una manera de controlar
los resultados diarios y ayudar en la toma de decisiones necesaria
para futuras acciones, tales como un seguimiento o un reensayo.
Todos los datos espectrales se mantienen precisos utilizando
comprobaciones de diagnóstico del sistema y muestras de control de
calidad como se observa en la etapa (18). Para asegurar la precisión
del diagnóstico y la calidad de la muestra se emplean comprobaciones
periódicas de la integridad del sistema y muestras control que
incluyen aditivos específicos. En combinación, las etapas
mencionadas anteriormente maximizan la velocidad y la calidad en que
se seleccionan muestras de sangre de recién nacidos para detectar
trastornos metabólicos, que resultan necesarias en un entorno
clínico.
La figura 2 muestra un esquema global del
procedimiento de preparación de muestras (etapa 1 de la figura 1).
Se realiza una entrada inicial de la muestra (20) codificando cada
muestra, asociando, con ello, la muestra a un emplazamiento
específico en un pocillo de microvaloración. Las muestras consisten
en gotas de sangre colocadas sobre áreas designadas de papel de
filtro. Las gotas se cortan con un diámetro en el intervalo de 0,47
cm a 0,32 cm y se colocan en el pocillo de microvaloración
designado. Se preparan preparaciones de patrón interno (22) en
metanol para producir un disolvente de extracción, que se añade a la
gota de sangre seca en cada pocillo. Las adiciones del disolvente de
extracción (24) se realizan utilizando un equipo de manipulación de
muestras automático.
El metanol actúa como medio del disolvente de
extracción, mientras que los patrones internos actúan para
cuantificar los metabolitos en la matriz de sangre seca. Las
preparaciones de patrón interno (22) comprenden una mezcla ideal de
veinte isótopos estables (doce patrones de aminoácidos y ocho
patrones de acilcarnitina/carnitina). En la figura 2a aparece una
lista de los patrones de aminoácidos. La columna de la izquierda
muestra las concentraciones patrón de la disolución madre de trabajo
concentrada (20a). La disolución madre se diluye 1:100 v/v con
metanol para producir concentraciones de patrones de trabajo diarios
(22a). Las concentraciones de los patrones de trabajo diarios (22a)
pueden ajustarse para que analicen dos gotas de sangre seca de 0,47
cm, dos de 0,32 cm o una de 0,32 cm, ajustando el volumen de las
adiciones del disolvente de extracción 24 (figura 2) o la
concentración de la disolución madre de trabajo (20a). Los patrones
de trabajo diarios (22a) actúan como disolvente de extracción y como
medio para la estandarización interna del análisis.
Los patrones internos de carnitina libre y
acilcarnitina se listan en la figura 2b. De nuevo, la columna de la
izquierda lista las concentraciones de la disolución madre de
trabajo (20b) utilizada en la dilución con metanol 1:100 v/v para
producir los patrones de trabajo diarios (22b). Además, los patrones
de trabajo diarios (22b) pueden ajustarse como se describió
anteriormente para el análisis de gotas de sangre.
Ambos grupos de patrones se proporcionan en el
medio de extracción para las funciones de barrido en modo mixto
óptimas, que maximizan la detección de metabolitos. Los grupos de
metabolitos detectados incluyen los
\alpha-aminoácidos (alanina, fenilalanina,
tirosina, ácido glutámico, ornitina, citrulina, arginina) y las
carnitinas (carnitina libre, acilcarnitinas, acetilcarnitina,
octanoilcarnitina, palmitoilcarnitina).
Siguiendo con la figura 2, después de la adición
del disolvente de extracción (24), el disolvente se traslada en la
etapa (26) a una placa o placa de microvaloración que tiene pocillos
de fondo redondo, en los que se elimina el disolvente utilizando un
sistema de secado de nitrógeno en la etapa (27). El extracto de
sangre entonces sufre una esterificación y es modificado
químicamente y calentado en la etapa (28) para convertirse en un
derivado. El exceso de derivado se elimina en la etapa (29) y se
añade un disolvente de fase móvil utilizando un sistema de
manipulación de muestras automático. Un sellado de las placas
retrasa cualquier evaporación del disolvente.
La figura 3 muestra las etapas implicadas
después de que se prepare la muestra y se incluyan los patrones y ya
se pueda introducir en el espectrómetro de masas en tándem con
electronebulización automático. Se logra la optimización de los
sistemas de MS/MS (30) utilizando una disolución de ajuste, y el
sistema de MS/MS de electronebulización (32) es un sistema de bajo
caudal que utiliza una línea de sílice fusionado desplazada hacia la
punta del electrodo. Los sistemas de inyección automática (34)
utilizan la línea de sílice fusionado para conectar directamente el
inyector con la punta del electrodo para minimizar el espacio
muerto. Los barridos incluidos para detectar los fragmentos
necesarios de los iones consisten en cinco funciones de barrido de
modo mixto (36) para maximizar la información de los metabolitos y
la garantía de calidad. Las funciones de barrido de modo mixto 36
incluyen MRM de carnitina libre, MRM de acetilcarnitina, barrido
completo de acilcarnitina, barrido completo de aminoácidos, y MRM de
aminoácidos básicos, mientras que el barrido completo cubre una gama
más amplia de proporciones de masa frente a carga y, por tanto,
puede compararse una gama más amplia de picos. Cada pico se
corresponde con un número de umbral o concentración, y se compara
con un umbral superior o inferior conocido.
En la figura 3a pueden observarse ejemplos de
los valores de los umbrales. Debe entenderse que todos los valores
de las muestras necesarios en la determinación de errores
metabólicos o la garantía de calidad que se encuentran por encima o
por debajo de un cierto umbral se marcan, o se identifican, para
objetivos de diagnóstico, reensayo u otras tomas de decisiones
clínicas.
La figura 3b demuestra que un MRM de carnitina
libre proporciona una garantía de calidad. Un MRM es un barrido para
un compuesto concreto que muestra masas duales (401) (la masa
progenitora y la masa hija, respectivamente). Un primer pico (403)
se detecta como los fragmentos de carnitina libre. Entonces se
obtiene la concentración resultante de carnitina libre (405). En
este barrido se garantiza la calidad observando el pico de CN exenta
de d_{3} (carnitina exenta de deuterio 3) (404) que surge de la
hidrólisis de acilcarnitinas marcadas con d_{3}. El valor de
concentración "hidrolibre" resultante (409) es un marcador de
garantía de calidad para la hidrólisis de acilcarnitina, y también
es una corrección para las concentraciones verdaderas de carnitina
libre (405).
La figura 3c muestra un MRM de acetilcarnitina.
El pico (501) es el pico de acetilcarnitina (acetilCN) y el pico
(503) es un pico de garantía de calidad (QA) que manifiesta la
hidrólisis del glutamato. La concentración de glutamato resultante
(505) muestra la cantidad de interferencia desde un glutamato, que
está corregida en la determinación de la concentración de acetilCN
(504). En este barrido se incluyen otras comprobaciones de QA para
la propionil CN como los picos duplicados (507) y (509).
En la figura 3d se muestra un perfil del barrido
completo de acilcarnitina. Los patrones internos añadidos están
fragmentados y se revelan como los picos (601, 602, 603, 604, 605).
Entonces se obtiene una lista de las concentraciones de los
metabolitos detectables (610), así como las proporciones molares
(612). En este barrido se incluye un ensayo de QA como un valor de
derivado malo (614) que surge de cualquier pico que se encuentre
alrededor de un valor de amu, m/z de (403). El valor de derivado
malo (614) revela una mala preparación de la muestra si es elevado.
También se incluye un marcador de QA de EDTA (616) para revelar el
procedimiento de recogida de muestras. Unos valores elevados del
marcador de QA de EDTA (616) manifiestan que las muestras se
extrajeron de tubos en lugar de punciones en el tobillo, o revelan
un extenso mantenimiento de la conservación.
Se utiliza otro procedimiento de QA en este
barrido, que revela un valor de intensidad (618). Un valor de
intensidad elevado demuestra que la muestra se ha barrido con una
sensibilidad adecuada. Si el valor de intensidad (618) es demasiado
bajo, la muestra se marcará (anotará) y puede reensayarse
dependiendo del protocolo.
La figura 3e es un ejemplo de un análisis de
barrido completo de aminoácidos. Los aminoácidos en los fragmentos
de patrones internos se muestran como los picos (710, 711, 712, 713,
714, 715, 716, 717). Se listan los valores de la concentración de
aminoácidos (701), junto con un valor de marcador de QA (703)
alrededor de un valor de amu, m/z de (165). El valor del marcador de
QA (703) se producirá, de forma más probable, tras la adición de
^{2}H_{3}-serina, que se añade a la muestra para
manifestar la detección adecuada de compuestos que normalmente no
aparecen en una muestra de rutina, puesto que la serina es un
aminoácido que no está incluido en la lista de aminoácidos
pertinentes a cualquier trastorno. También se incluye un marcador de
intensidad (705) para mostrar una sensibilidad adecuada en la
detección.
La figura 3f es un ejemplo de un MRM de
aminoácidos básicos. El marcador de QA aparece en el pico (802), y
el barrido incluye un análisis de citrulina por duplicado (804), que
normalmente forma un pico alrededor de un valor m/z de 215 y
232.
La figura 4 describe el procesamiento de los
datos adquiridos de las funciones de barrido utilizadas para el
espectrómetro de masas. La etapa (40) es la entrada de todos los
valores de masas, las constantes para los cálculos de la
concentración, los factores de corrección para la eficacia de la
extracción, las proporciones de datos de concentración, y los
valores de corte. También se introducen los marcadores de garantía
de calidad, los marcadores de la preparación de la muestra, y los
marcadores de sensibilidad. Los marcadores incluyen los picos
descritos anteriormente, los valores de intensidad, los valores de
derivados malos, y los valores de EDTA, y son importantes porque
revelan si las muestras están o no contaminadas o sin fármacos, y
son muy indicativos de cómo se han conservado las muestras o de
dónde se han extraído las muestras. Además ayudan a mantener la
precisión y la coherencia del instrumento. Los resultados se
procesan y se imprimen en la etapa (42). Las funciones de barrido
descritas en las figuras 3a-3e puede detectar
múltiples enfermedades basándose en los fragmentos de metabolitos
detectados. Los picos reveladores conducen finalmente a los perfiles
indicados en los recuadros (43a) y (43b). Los perfiles también
pueden incluir la anotación de picos elegidos utilizando los
patrones de garantía de calidad o de control de calidad.
La figura 5 muestra las etapas implicadas en la
interpretación de los datos organizados. Los datos de la hoja de
cálculo se introducen en un módulo de base de datos para el
reconocimiento del tipo de archivo y de muestra. Como puede
observarse en la etapa (50), los datos se interpretan de forma que
pueden asignarse parámetros a la muestra concreta, y se ofrecen los
resultados. Los resultados entonces se integran en la etapa (52) con
los datos demográficos del recién nacido. Los datos demográficos
pueden incluir edad, tipo de espécimen, u otra indicación, tal como
si el bebé es o no prematuro, etc. Las muestras que muestran
anomalías, o parece que muestran un pico revelador, se marcan para
ser interpretadas utilizando una guía de referencia, y se toman las
decisiones sobre las acciones siguientes en la etapa (54). La
siguiente etapa es la referencia al árbol de decisiones y la
recomendación de la acción, en la etapa (56). Las muestras marcadas
se correlacionan con el módulo de base de datos utilizado para
distinguir los picos anómalos, y se toma la decisión de reensayar o
de diagnóstico. En la etapa (58), como una medida de la garantía de
calidad y el control de calidad, se registra la muestra media de los
días y la generación de tendencias para realizar un seguimiento de
la aparición estadística de enfermedades, y para mantener un alto
rendimiento de la toma de muestras. Esto incluye el informe de datos
automático y el informe de comunicaciones por Internet.
La figura 6 muestra las etapas implicadas en
mantener aún más la garantía de calidad utilizando muestras de
control de calidad y el mantenimiento de la integridad del sistema.
Las muestras de control de calidad se preparan en la etapa (60). Las
muestras consisten en líquidos y gotas de sangre de QA preparados
como patrones sin marcar a las mismas concentraciones que los
patrones internos, y se realiza un barrido. Los patrones de sangre
control incluidos en esta etapa (60) consisten en sangre hemolizada,
EDTA y ^{2}H_{3}-serina, u otro marcador
reconocido. Se ensayan y se comparan con patrones que consisten en
sangre hemolizada, EDTA, ^{2}H_{3}-serina y uno
de los veinte compuestos que son los mismos que los utilizados en
los patrones internos pero que están sin marcar. El ordenador se
ajusta de forma adecuada para que reconozca e interprete los
resultados. Otra etapa para mantener la garantía de calidad se
proporciona en la etapa (61). Los sistemas se controlan en un
programa de base de datos para detectar cambios en la integridad o
la sensibilidad del sistema. Una etapa final para mantener el
diagnóstico del sistema se incluye en la etapa (63). Los
procedimientos y programas de mantenimiento se siguen y se controlan
constantemente mediante un sistema de archivos y mediante Internet a
través de un control en marcha de los datos de la espectrometría de
masas.
La invención se utiliza para ayudar en el
diagnóstico de muchos trastornos metabólicos que deben detectarse y
tratarse en los primeros días tras el nacimiento para asegurarse de
que el bebé se desarrolle con normalidad y/o sobreviva. Al nivel
clínico, los ensayos deben realizarse con una alta proporción de
rendimiento, manteniéndose precisos y fiables. Cualquier resultado
positivo o negativo también debe unirse a unos controles de calidad
rigurosos para asegurar esta precisión y fiabilidad. Se cree que la
invención se convertirá en el proceso de selección fundamental para
ayudar en el diagnóstico de todos los trastornos neonatales que se
producen al nivel genético.
Claims (23)
1. Un procedimiento para seleccionar recién
nacidos que utiliza un sistema que emplea un espectrómetro de masas
en tándem con electronebulización, que comprende las etapas de:
recibir una pluralidad de gotas de sangre;
combinar un patrón de aminoácidos y un patrón
exento de carnitina/acilcarnitina para formar un patrón interno que
contiene una pluralidad de compuestos marcados;
preparar una pluralidad de muestras,
comprendiendo cada una de dichas muestras dicho patrón interno,
metanol, y un extracto de sangre procedente de una de dichas gotas
de sangre;
realizar un barrido de dicha pluralidad de
muestras utilizando dicho espectrómetro de masas en tándem con
electronebulización para producir unos resultados del barrido;
preparar una pluralidad de muestras de sangre
control, comprendiendo cada una de dichas muestras de sangre control
sangre hemolizada, EDTA, y ^{2}H_{3}-serina;
preparar una pluralidad de patrones,
comprendiendo cada uno de dichos patrones sangre hemolizada, EDTA,
^{2}H_{3}-serina, y uno de dichos compuestos
marcados;
realizar un barrido de dicha pluralidad de
muestras de sangre control para producir unos resultados de muestras
control;
realizar un barrido de dicha pluralidad de
patrones para producir una pluralidad de resultados de patrones;
y,
comparar dichos resultados de muestras control
obtenidos para cada una de dichas muestras de control de calidad con
dicha pluralidad de resultados de patrones obtenidos para cada uno
de dichos patrones; y,
analizar dichos resultados del barrido
utilizando dichos resultados de patrones y dichos resultados de
muestras control.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que cada una de dichas muestras se prepara en un pocillo de fondo
redondo de una placa de microvaloración.
3. El procedimiento de la reivindicación 2, que
comprende además la etapa de codificar cada una de dichas muestras
para asociar cada una de dichas muestras con dicho pocillo de fondo
redondo.
4. El procedimiento de la reivindicación 1, que
comprende además las etapas de:
organizar dichos resultados del barrido mediante
una hoja de cálculo;
introducir dichos resultados del barrido en una
base de datos adaptada para ayudar a organizar, reconocer e
interpretar dichos datos del barrido;
asignar dichos resultados del barrido a los
datos demográficos de cada uno de dichos recién nacidos que se
corresponden con cada una de dichas muestras;
marcar cada una de dichas muestras que revelan
una anomalía, formando, con ello, una pluralidad de muestras
marcadas, en el que cada una de dichas muestras marcadas puede
interpretarse utilizando una guía de referencia, y en el que pueden
tomarse unas acciones siguientes para cada una de dichas muestras
marcadas.
5. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que dicho patrón de aminoácidos contiene doce aminoácidos
marcados.
6. El procedimiento de la reivindicación 5, en
el que dichos doce aminoácidos marcados se seleccionan del grupo que
consiste en ^{15}N^{13}C-glicina,
^{2}H_{4}-alanina,
^{2}H_{8}-valina,
^{2}H_{3}-leucina,
^{2}H_{3}-metionina,
^{2}H_{5}-fenilalanina,
^{2}H_{4}-tirosina,
^{2}H_{3}-aspartato,
^{2}H_{3}-glutamato,
^{2}H_{2}-ornitina-2HCl,
^{2}H_{2}-citrulina, y
^{2}H_{4}^{13}C-arginina-HCl.
7. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que dichos patrones de carnitina libre/acilcarnitina contienen
ocho carnitinas marcadas.
8. El procedimiento de la reivindicación 7, en
el que dichas ocho carnitinas marcadas se seleccionan del grupo que
consiste en ^{2}H_{9}-carnitina,
^{2}H_{3}-acetilcarnitina,
^{2}H_{3}-propionilcarnitina,
^{2}H_{3}-butirilcarnitina,
^{2}H_{9}-isovalerilcarnitina,
^{2}H_{3}-octanoilcarnitina,
^{2}H_{9}-miristoilcarnitina, y
^{2}H_{3}-palmitoilcarnitina.
9. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que para la etapa de barrido de dichas muestras se proporciona
una función de barrido MRM de carnitina libre.
10. El procedimiento de la reivindicación 9, en
el que dicha función de barrido MRM de carnitina libre proporciona
unos datos de garantía de calidad para la hidrólisis de la
acilcarnitina.
11. El procedimiento de la reivindicación 10, en
el que dichos datos de garantía de calidad para la hidrólisis de la
acilcarnitina son un pico de masa dual observado alrededor de
221,3/103,1 unidades de masa atómica.
12. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que para la etapa de barrido de dichas muestras se proporciona
una función de barrido MRM de acetilcarnitina.
13. El procedimiento de la reivindicación 12, en
el que dicha función de barrido MRM de acetilcarnitina proporciona
unos datos de garantía de calidad para la hidrólisis del glutamato y
dos marcadores de garantía de calidad para la
propionilcarnitina.
14. El procedimiento de la reivindicación 13, en
el que dichos datos de garantía de calidad para la hidrólisis del
glutamato son un pico de masa dual observado alrededor de 261,3/85,1
unidades de masa atómica.
15. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que para la etapa de barrido de dichas muestras se proporciona un
barrido completo de acilcarnitina.
16. El procedimiento de la reivindicación 15, en
el que dicho barrido completo de acilcarnitina proporciona datos de
garantía de calidad para un valor de derivado malo, mediante los
cuales se revela una mala preparación de dichas muestras, y en el
que dicho barrido completo de acilcarnitina proporciona unos datos
de garantía de calidad para EDTA, mediante los cuales dicha muestra
puede identificarse como que ha sido barrida con una sensibilidad
adecuada.
17. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que para la etapa de barrido de dichas muestras se proporciona un
barrido completo de aminoácidos.
18. El procedimiento de la reivindicación 17, en
el que dicho barrido completo de aminoácidos proporciona unos datos
de garantía de calidad para la precisión en la detección de
aminoácidos.
19. El procedimiento de la reivindicación 18, en
el que dichos datos de garantía de calidad para la precisión en la
detección de aminoácidos son un valor de concentración que
corresponde a una cantidad de
^{2}H_{3}-serina.
20. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que para la etapa de barrido de dichas muestras se proporciona un
MRM de aminoácidos básicos.
21. El procedimiento de la reivindicación 20, en
el que dicho MRM de aminoácidos básicos incluye datos de garantía de
calidad para la citrulina.
22. El procedimiento de la reivindicación 21, en
el que dichos datos de garantía de calidad para la citrulina son un
pico que se observa alrededor de un valor de masa dual de
232,3/113,1 unidades de masa atómica.
23. El procedimiento de la reivindicación 1, que
comprende además la etapa de determinar unas acciones siguientes
para diagnosticar o reensayar a dicho recién nacido.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/US2000/018716 WO2002004945A1 (en) | 1999-03-26 | 2000-07-07 | Clinical method for the genetic screening of newborns using tandem mass spectrometry |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2316373T3 true ES2316373T3 (es) | 2009-04-16 |
Family
ID=21741569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES00947150T Expired - Lifetime ES2316373T3 (es) | 2000-07-07 | 2000-07-07 | Procedimiento clinico para la seleccion genetica de recien nacidos utilizando espectometria de masas en tandem. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6258605B1 (es) |
| EP (2) | EP1299720B1 (es) |
| AT (2) | ATE408826T1 (es) |
| AU (1) | AU2000260808A1 (es) |
| DE (2) | DE60045783D1 (es) |
| DK (1) | DK1299720T3 (es) |
| ES (1) | ES2316373T3 (es) |
| WO (1) | WO2002004945A1 (es) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7011977B2 (en) * | 1999-01-30 | 2006-03-14 | Sigma-Tau Pharmaceuticals, Inc. | Quantification of carnitine levels in dialysis patients |
| US7238531B2 (en) * | 1999-01-30 | 2007-07-03 | Pediatrix Screening, Inc. | Method for interpreting tandem mass spectrometry data for clinical diagnosis |
| US7297545B2 (en) * | 1999-01-30 | 2007-11-20 | Pediatrix Screening, Inc. | Clinical method for the genetic screening of newborns using tandem mass spectrometry and internal standards therefor |
| JP2003524394A (ja) * | 1999-02-11 | 2003-08-19 | マキシジェン， インコーポレイテッド | ハイスループット質量分析法 |
| US7013707B2 (en) * | 1999-11-19 | 2006-03-21 | Perkinelmer Las, Inc | Method and apparatus for enhanced detection of a specie using a gas chromatograph |
| ATE343130T1 (de) * | 1999-12-29 | 2006-11-15 | Perkinelmer Life Sciences Inc | Testtablett, kit und verfahren zum screening von körperflüssigkeiten von neugeborenen durch tandem-massenspektrometrie |
| US7329489B2 (en) * | 2000-04-14 | 2008-02-12 | Matabolon, Inc. | Methods for drug discovery, disease treatment, and diagnosis using metabolomics |
| US20020009740A1 (en) * | 2000-04-14 | 2002-01-24 | Rima Kaddurah-Daouk | Methods for drug discovery, disease treatment, and diagnosis using metabolomics |
| EP1355728A4 (en) * | 2001-01-29 | 2005-01-12 | Metara Inc | AUTOMATED PROCESS-INTEGRATED ISOTOPE AND MASS SPECTROMETRY |
| GB0128498D0 (en) * | 2001-11-28 | 2002-01-23 | Inst Of Child Health | International standards for sphingolipids |
| US6800489B2 (en) | 2002-06-05 | 2004-10-05 | Izaak Walton Killam Health Center | Electrospray tandem mass spectrometry of transition metal diimine complexes of amino acids, α-hydroxyketones and hexose phosphates for newborn screening |
| CA2496910A1 (en) * | 2002-09-03 | 2004-03-18 | Anticancer, Inc. | Homocysteine assay adaptable to screening |
| US7298876B1 (en) * | 2002-11-04 | 2007-11-20 | R2 Technology, Inc. | Method and apparatus for quality assurance and quality control in radiological equipment using automatic analysis tools |
| DE112004000338B4 (de) * | 2003-02-24 | 2012-09-27 | Waters Technologies Corp. (N.D.Ges.D. Staates Delaware) | System und Verfahren zum Verarbeiten identifizierter Metaboliten |
| US20050014279A1 (en) * | 2003-07-14 | 2005-01-20 | Nguyen Hoa Duc | Method of analysis of amine by mass spectrometry |
| US7485435B2 (en) * | 2004-08-30 | 2009-02-03 | Perkinelmer Las, Inc. | Simultaneous detection of metabolic enzyme activity and metabolite levels |
| US20050048499A1 (en) * | 2003-08-29 | 2005-03-03 | Perkin Elmer Life Sciences, Inc. | Tandem mass spectrometry method for the genetic screening of inborn errors of metabolism in newborns |
| WO2006025863A2 (en) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Perkinelmer Las, Inc. | Simultaneous detection of metabolic enzyme activity and metabolite levels |
| GB0415046D0 (en) | 2004-07-05 | 2004-08-04 | Micromass Ltd | Mass spectrometer |
| WO2006098192A1 (ja) * | 2005-03-16 | 2006-09-21 | Ajinomoto Co., Inc. | 生体状態評価装置、生体状態評価方法、生体状態評価システム、生体状態評価プログラム、評価関数作成装置、評価関数作成方法、評価関数作成プログラムおよび記録媒体 |
| ES2452025T3 (es) * | 2005-06-30 | 2014-03-31 | Biocrates Life Sciences Ag | Aparato de análisis de un perfil de metabolitos |
| WO2008033575A2 (en) * | 2006-09-15 | 2008-03-20 | Metabolon, Inc. | Methods of identifying biochemical pathways |
| EP2330402B1 (en) * | 2009-12-01 | 2017-02-15 | Spark Holland B.V. | Method and apparatus for desorption of a blood sample from a medical test sheet |
| EP3805756A1 (en) | 2014-04-08 | 2021-04-14 | Metabolon, Inc. | Small molecule biochemical profiling of individual subjects for disease diagnosis and health assessment |
| CN108645924B (zh) * | 2017-06-22 | 2021-07-20 | 南方医科大学 | 基于超高效液相色谱串联质谱技术的新生儿代谢物的检测方法 |
| JP7518765B2 (ja) | 2017-11-22 | 2024-07-18 | コンサート ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Ｄ－セリンの重水素化類似体およびその使用 |
| CN108982569A (zh) * | 2018-07-20 | 2018-12-11 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种同时定量血浆内、外源性葡萄糖的二维核磁共振方法 |
| CN116186557A (zh) * | 2023-01-17 | 2023-05-30 | 长城汽车股份有限公司 | 充电站数据准确性校验方法、装置及电子设备 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2250632B (en) | 1990-10-18 | 1994-11-23 | Unisearch Ltd | Tandem mass spectrometry systems based on time-of-flight analyser |
| US5352891A (en) | 1993-07-16 | 1994-10-04 | The Regents Of The University Of California | Method and apparatus for estimating molecular mass from electrospray spectra |
| US5538897A (en) | 1994-03-14 | 1996-07-23 | University Of Washington | Use of mass spectrometry fragmentation patterns of peptides to identify amino acid sequences in databases |
| US5629210A (en) * | 1995-06-02 | 1997-05-13 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Rapid screening test for smith-lemli-opitz syndrome |
-
1999
- 1999-03-26 US US09/277,119 patent/US6258605B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-07-07 DE DE60045783T patent/DE60045783D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-07 ES ES00947150T patent/ES2316373T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-07 AT AT00947150T patent/ATE408826T1/de active
- 2000-07-07 AT AT08161251T patent/ATE503182T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-07-07 DK DK00947150T patent/DK1299720T3/da active
- 2000-07-07 EP EP00947150A patent/EP1299720B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-07 AU AU2000260808A patent/AU2000260808A1/en not_active Abandoned
- 2000-07-07 EP EP08161251A patent/EP2000800B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-07 WO PCT/US2000/018716 patent/WO2002004945A1/en not_active Ceased
- 2000-07-07 DE DE60040303T patent/DE60040303D1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE60040303D1 (de) | 2008-10-30 |
| WO2002004945A1 (en) | 2002-01-17 |
| US6258605B1 (en) | 2001-07-10 |
| DE60045783D1 (de) | 2011-05-05 |
| EP2000800B1 (en) | 2011-03-23 |
| EP2000800A3 (en) | 2008-12-17 |
| EP1299720A4 (en) | 2006-07-26 |
| EP1299720B1 (en) | 2008-09-17 |
| ATE408826T1 (de) | 2008-10-15 |
| ATE503182T1 (de) | 2011-04-15 |
| EP2000800A2 (en) | 2008-12-10 |
| EP1299720A1 (en) | 2003-04-09 |
| AU2000260808A1 (en) | 2002-01-21 |
| DK1299720T3 (da) | 2009-01-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2316373T3 (es) | Procedimiento clinico para la seleccion genetica de recien nacidos utilizando espectometria de masas en tandem. | |
| EP3019624B1 (en) | Biomarkers of autism spectrum disorder | |
| Maniscalco et al. | Clinical metabolomics of exhaled breath condensate in chronic respiratory diseases | |
| Van Veldhoven et al. | Effects of exposure to water disinfection by-products in a swimming pool: a metabolome-wide association study | |
| ES2871823T3 (es) | Biomarcadores relacionados con la función renal y métodos para utilizarlos | |
| Chace et al. | Laboratory integration and utilization of tandem mass spectrometry in neonatal screening: a model for clinical mass spectrometry in the next millennium | |
| Wiley et al. | Newborn screening with tandem mass spectrometry: 12 months' experience in NSW Australia | |
| Hsu et al. | Integrated analyses utilizing metabolomics and transcriptomics reveal perturbation of the polyamine pathway in oral cavity squamous cell carcinoma | |
| Bringans et al. | Comprehensive mass spectrometry based biomarker discovery and validation platform as applied to diabetic kidney disease | |
| KR102094802B1 (ko) | 소변 대사체 분석을 이용한 베체트병의 진단방법 | |
| US7297545B2 (en) | Clinical method for the genetic screening of newborns using tandem mass spectrometry and internal standards therefor | |
| CN104297442A (zh) | 内源性小分子物质在快速检测早期心脏毒性方面的应用 | |
| Pereira et al. | Paper spray mass spectrometry combined with machine learning as a rapid diagnostic for chronic kidney disease | |
| US20160240362A1 (en) | Quantitation of structural isomers using maldi ms/ms | |
| EP1587406B1 (en) | Quantification of carnitine levels in dialysis patients | |
| KR100572619B1 (ko) | 임상적 진단을 위한 탄뎀질량분석기 자료를 해석하는 방법 | |
| CN104364658B (zh) | 用于诊断慢性瓣膜疾病的方法 | |
| CN120221049B (zh) | 一种肿瘤代谢标志物的筛选方法 | |
| Pontoni et al. | Diagnosis and follow-up of cystinuria: use of proton magnetic resonance spectroscopy | |
| Aydin et al. | A green and non-invasive approach for quantitative analysis of psychoactive substances in exhaled breath | |
| WO2023238005A1 (en) | A method for screening hemoglobinopathies by globin chain analysis using electrospray tandem quadrupole mass spectrometry. | |
| CN119827773A (zh) | 一种低龄儿童龋早期风险评估的标志物组合、组合试剂、试剂盒及其在构建低龄儿童龋早期风险评估模型中的应用 | |
| AU2006200472A1 (en) | Clinical method for the genetic screening of newborns using tandem mass spectrometry |