ES2317668T3 - Metodo y composiciones para dificultar la multiplicacion del vih-1. - Google Patents

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Abstract

Una composición inmunogénica que está compuesta de un péptido o polipéptido de la fórmula R3-Lys-X-Leu- Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-R4 ID DE SECUENCIA Nº: 37, en la que X se selecciona del grupo que consta de Gly ó Ala; en la que R3 se selecciona del grupo que consta de hidrógeno y una secuencia de entre 1 a 5 aminoácidos adicionales; en la que R4 se selecciona del grupo que consta de un hidroxilo libre y una amida.

Description

Métodos y composiciones para dificultar la multiplicación del VIH-1.
Campo de la invención
La presente invención hace referencia en general a las composiciones y métodos útiles para inhibir la multiplicación del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) en pacientes infectados, sintomáticos o asintomáticos, y para atenuar la multiplicación del VIH-1 durante la infección primaria en sujetos no infectados hasta entonces, minimizando de este modo su progresión hacia el SIDA.
Antecedentes de la invención
Se encuentran niveles elevados en plasma de ARN del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) durante la infección primaria con VIH-1, la enfermedad de seroconversión, [C. Baumberger et al, AIDS, 7:(suppl 2):S59 (1993); M. S. Saag et al, Nature Med., 2:625 (1996)], tras lo cual disminuyen a medida que la respuesta inmunitaria controla la infección hasta una medida variable. Tras la seroconversión, hay presentes niveles en plasma menores pero detectables de ARN del VIH-1, y estos niveles aumentan con la progresión de la enfermedad hasta alcanzar de nuevo niveles elevados en la fase del SIDA [M. S. Saag et al, Nature Med., 2:265 (1996)].
Aproximadamente el 50% de los sujetos tiene una enfermedad sintomática en la seroconversión [B. Tindall y D. A. Cooper, AIDS, 5:1 (1991)] y la seroconversión sintomática está asociada con un riesgo incrementado de desarrollar el SIDA, probablemente porque una enfermedad primaria grave tiene probabilidades de estar relacionada con una propagación temprana e importante del VIH.
La inhibición de la multiplicación viral durante la infección en fase inicial lo más probable es que reduzca el desarrollo posterior de la viremia crónica que lleva al SIDA. La práctica médica actual apoya este concepto, con la administración de fármacos antivirales para situaciones definidas como "de riesgo", tales como por ejemplo pinchazos con agujas con sangre contaminada o embarazos en madres infectadas con el VIH.
Los niveles en plasma de ARN del VIH-1 después de la seroconversión han demostrado ser el pronosticador más potente de la probabilidad de progresión hacia el SIDA [J. W. Mellors et al, Science, 272:1167 (1996); M. S. Saag et al, Nature Med., 2:265 (1996); R. W. Coombs et al, J. Inf. Dis., 174:704 (1996); S. L. Welles et al, J. Inf. Dis., 174:696 (1990)]. Otras mediciones de la carga viral, tales como por ejemplo el ARN celular [K. Saksela et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 91:1104 (1994)] y el ADN proviral del VIH celular [T-H. Lee et al, J. Acq. Imm. Def. Syndromes, 7:381 (1994)] establecen de forma similar la importancia de la infección en fase inicial a la hora de establecer las cargas virales que determinan la progresión futura de la enfermedad.
Por consiguiente, cualquier intervención que inhiba la contagiosidad del VIH-1 durante la infección en fase inicial y/o disminuya la carga viral después de la seroconversión es probable que tenga una influencia favorable sobre el resultado eventual, retrasando o impidiendo la progresión hacia el SIDA.
Actualmente se emplean diversos métodos para tratar pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1), incluyendo el tratamiento con ciertas combinaciones de fármacos inhibidores de la proteasa. Desgraciadamente, sin embargo, este tipo de tratamiento está asociado con graves efectos secundarios en algunos pacientes. De forma alternativa, se están desarrollando vacunas para controlar la propagación del VIH-1 a humanos que no estén infectados por él. No obstante, este esfuerzo se ha dirigido en buena parte hacia las proteínas del virus, expresadas sobre la superficie de las células infectadas, que son reconocidas por células T citotóxicas con la eliminación de las células infectadas, mientras que el virus libre es bloqueado y eliminado por los anticuerpos contra los antígenos superficiales del virión. Las limitaciones de este método de vacunación son claramente patentes para el VIH-1, que ha mostrado una gran diversidad en epítopos virales inmunogénicos y rápidas variaciones mutacionales que ocurren en y entre individuos [B. D. Preston et al., Science, 242:1168 (1988); J. D. Roberts et al., Science, 242:1171 (1988); A. R. Meyerhans et al., Cell, 58:901 (1989); K. Kusumi et al., J. Virol., 66:875 (1992); B. A. Larder et al., Science, 243:1731 (1989); M. S. Sang et al., N. Engl. J. Med., 329:1065 (1993); M. A. Sande, et al., JAMA, 270:2583 (1993); M. Seligmann et al., Lancet, 343:871 (1994); G. Meyers et al., Human retroviruses and AIDS 1993, I-V. A compilation and analysis of nucleic acid and amino acid sequences. Laboratorio Nacional de Los Álamos, Los Álamos, NM.].
La variación en las cepas del VIH-1 y las frecuentes mutaciones de las proteínas del virión han impedido la aplicación con éxito de los enfoques convencionales de las vacunas [VV. E. Paul, Cell, 82:177 (1995); J. E. Osborn, J. Acq. Imm. Def. Syndr. Hum. Retrovirol., 9:26 (1995)]. La mutación y la selección de variantes resistentes es el problema central a la hora de desarrollar una vacuna satisfactoria contra el VIH-1 [M. D. Daniel et al., Science, 258:1938 (1992); N. L. Letvin, N. Engl. J. Med., 329:1400 (1993); M. Clerici et al., AIDS, 8:1391 (1994); S. M. Wolinsky et al, Science, 272:537 (1996)].
Otros enfoques para el tratamiento del VIH-1 se han centrado en el gen transactivador (tat) del VIH-1, que produce una proteína (Tat) esencial para la transcripción del virus. El gen tat y su proteína se han secuenciado y examinado en busca de su participación en los tratamientos propuestos del VIH [véase, por ejemplo, la patente estadounidense nº 5.158.877; la patente estadounidense nº 5.238.882; la patente estadounidense nº 5.110.802; la solicitud de patente internacional nº WO92/07871, publicada el 14 de mayo de 1992; la solicitud de patente internacional nº WO91/10453, publicada el 25 de julio de 1991; la solicitud de patente internacional nº W091/09958, publicada el 11 de julio de 1991; la solicitud de patente internacional nº WO87/02989, publicada el 21 de mayo de 1987]. La proteína Tat es liberada de forma extracelular, haciéndola disponible para ser captada por otras células infectadas para aumentar la transcripción del VIH-1 en las células y para ser captada por células no infectadas, alterando las activaciones de los genes de las células huésped y haciendo que las células sean susceptibles de ser infectadas por el virus. La captación de Tat por parte de las células es muy fuerte, y se ha informado que actúa de mediadora una secuencia básica corta de la proteína [S. Fawell et al., Proc. Natl. Acad. Sci., EE.UU., 91:664-668 (1994)].
La solicitud de patente internacional nº WO92/14755, publicada el 3 de septiembre de 1992, hace referencia a la proteína Tat y a la integrina, un receptor de la superficie celular que tiene la capacidad de unirse a la proteína Tat. Se identifican dos secuencias de Tat que unen la integrina, que son el dominio o región básicos que es el sitio de unión dominante para la integrina, y que tiene una secuencia peptídica de -Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg- [ID DE SECUENCIA Nº: 4], así como -Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 5]. Esta especificación muestra que cierto número de péptidos correspondientes a estas secuencias de Tat y las integrinas pertinentes bloquean la unión celular in vitro a placas recubiertas de Tat, como lo hacen los anticuerpos contra las integrinas adecuadas. Sin embargo, la especificación también muestra que estos reactivos no bloquean la captación de Tat funcional por parte de las células (véase el Ejemplo 9 en WO92/14755), anulando de este modo el mecanismo de acción propuesto para el beneficio terapéutico en la infección del VIH. Las secuencias de Tat descritas en esta solicitud internacional son distintas a los inmunogenes peptídicos de la presente invención.
Tanto los anticuerpos monoclonales como los policlonales contra la proteína Tat han sido producidos fácilmente en animales y se ha visto que bloquean la captación de proteína Tat in vitro [véase, por ejemplo, D. Brake et al, J. Virol., 64:962 (1990); D. Mann et al, EMBO J., 10:1733 (1991); J. Abraham et al, citado anteriormente; P. Auron et al, citado anteriormente; M. Jaye et al, citado anteriormente; G. Zauli et al, citado anteriormente]. Unos informes más recientes han mostrado que los anticuerpos monoclonales o policlonales contra la proteína Tat añadidos al medio de cultivo de tejido atenuaban la infección del VIH-1 in vitro [L. Steinaa et al, Arch. Virol., 139:263 (1994); M. Re et al, J. Acq. Imm. Def. Syndr. Hum. Retrovirol., 10:408 (1995); y G. Zauli et al, J. Acq. Imm. Def. Syndr. Hum. Retrovirol., 10:306 (1995)].
La propia publicación del inventor [G. Goldstein, Nature Med., 2:960 (1996); véase también, la solicitud de patente internacional nº WO95/31999, publicada el 30 de noviembre de 1995] revisaba la evidencia que indicaba que la secreción de la proteína Tat del VIH-1 a partir de células infectadas y la captación por parte tanto de células infectadas como no infectadas era importante para la contagiosidad del VIH-1. Estudios anteriores también mostraron que los anticuerpos contra la proteína Tat in vitro bloqueaban la captación de Tat e inhibían la contagiosidad in vitro. Goldstein propuso la inmunización activa de mamíferos para inducir anticuerpos contra la proteína Tat del VIH-1 como una vacuna potencial contra el SIDA.
A pesar de los conocimientos cada vez mayores acerca de la progresión de la enfermedad del VIH-1, aún persiste una necesidad en la técnica para el desarrollo de composiciones y métodos para el tratamiento del VIH-1, de forma tanto terapéutica como profiláctica, que sean útiles para disminuir los niveles virales del VIH-1 para el tratamiento y posible prevención de la subsiguiente, generalmente mortal, enfermedad del SIDA.
Resumen de la invención
En un aspecto, la invención proporciona una composición novedosa que está compuesta de dos, tres o cuatro péptidos o polipéptidos, que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de la fórmula a la que se ha denominado Epítopo I: R1-Val-Asp-Pro-Y-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 36], en la que Y varía entre Arg, Lys, Ser ó Asn. El R1 N-terminal puede representar hidrógeno (esto es, el hidrógeno en el aminoácido N-terminal no modificado), o un alquilo inferior, ó un alcanoilo inferior. R1 también puede incluir una secuencia de entre 1 a alrededor de 5 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. En una realización, R1 es -X-Pro-, en el que X es Glu ó Asp. Preferentemente, R1 representa 2 aminoácidos. El R2 C-terminal también puede representar el grupo hidroxilo en el aminoácido C terminal o una amida. Para mejorar el título, R2 es preferentemente una secuencia de entre 1 a alrededor de 14 aminoácidos adicionales amidados en el extremo carboxilo terminal. En una realización preferente, R2 es -Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser- amida [ID DE SECUENCIA Nº: 10]. Los péptidos o polipéptidos de estas composiciones se producen de forma sintética o recombinante. Esta composición puede tomar la forma de uno o más de los péptidos anteriormente descritos expresados como un péptido sintético acoplado a un portador, o expresados como un péptido multiantigénico, o los péptidos seleccionados se pueden expresar dentro de una proteína producida de forma recombinante. Esta composición está diseñada para inducir anticuerpos reactivos con más del 95% de las variantes conocidas de la proteína Tat del VIH-1.
En otro aspecto, la composición anteriormente descrita además contiene uno o más péptidos o polipéptidos adicionales que representan otras secuencias de aminoácidos que equivalen a residuos de aminoácidos 2 ó 4 hasta 10 de una proteína Tat del VIH-1. Estas secuencias de aminoácidos opcionales se describen en detalle a continuación. Estas secuencias son preferentemente de una cepa del VIH-1 con una variante de la proteína Tat en esa ubicación.
En otro aspecto, la invención proporciona una composición novedosa que está compuesta de un péptido o polipéptido de la fórmula a la que se ha denominado Epítopo II: R3-Lys-X-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys- R4 [ID DE SECUENCIA Nº: 37]. De conformidad con esta fórmula, X es Gly ó Ala. El R3 N Terminal puede representar hidrógeno (esto es, el hidrógeno en el aminoácido N terminal no modificado), o puede ser un alquilo inferior, ó un alcanoilo inferior. R3 también puede incluir una secuencia de entre 1 a alrededor de 5 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. El R4 C terminal puede ser el hidroxilo libre del aminoácido C terminal, o una amida, o una secuencia de uno o de hasta alrededor de 5 aminoácidos adicionales, opcionalmente sustituidos por una amida. Los péptidos o polipéptidos de estas composiciones se producen de forma sintética o recombinante, siempre y cuando el péptido recombinante del Epítopo II esté situado en el extremo C terminal de la proteína recombinante. Esta composición puede tomar la forma de uno o más de los péptidos anteriormente descritos expresados como un péptido sintético acoplado a un portador, o expresados como un péptido multiantigénico. Esta composición está diseñada para inducir anticuerpos reactivos con más de aproximadamente el 95% de las variantes conocidas de la proteína Tat del VIH-1.
Las composiciones anteriormente descritas pueden además estar compuestas de un péptido o polipéptido de la fórmula a la que se ha denominado Epítopo III: R5-Arg-Arg-X-Z-A-Y-Ser-R6 [ID DE SECUENCIA Nº: 38], en la que X se selecciona del grupo que consta de Ala, Pro, Ser y Gln; en la que Y se selecciona del grupo que consta de Asp, Asn, Gly y Ser; en la que Z se selecciona del grupo que consta de Pro y His; y en la que A se selecciona del grupo que consta de Gln y Pro. El R5 N terminal es hidrógeno, un alquilo inferior, un alcanoilo inferior, o una secuencia de entre 1 a alrededor de 3 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. En una realización preferente, el R5 es -Gln-Arg-, opcionalmente modificado como se ha descrito anteriormente. El R6 C terminal es o bien un hidroxilo libre o una amida. Una realización preferente de dicha composición contiene al menos tres péptidos del Epítopo III, esto es, -Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- (aminoácidos 54-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1), -Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-His-Gln-Asp-Ser- (aminoácidos 2-10 de la ID DE SECUENCIA Nº: 65), y -Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro- Pro-Asp-Ser- (aminoácidos 264-272 de la ID DE SECUENCIA Nº: 3), opcionalmente modificados como se ha descrito anteriormente. Otros péptidos o polipéptidos representativos de aa 56-62 de Tat, pero que tienen secuencias diferentes de las de la anterior fórmula también se pueden incluir en la composición. Los péptidos o polipéptidos de estas composiciones se producen de forma sintética o recombinante. Esta composición puede tomar la forma de uno o más de los péptidos anteriormente descritos expresados como un péptido sintético acoplado a un portador, o expresados como un péptido multiantigénico, o los péptidos seleccionados pueden ser expresados dentro de una proteína producida de forma recombinante. Esta composición está diseñada para inducir anticuerpos reactivos con más de aproximadamente el 75% de todas las variantes conocidas de la proteína Tat del VIH-1.
Las composiciones anteriormente descritas pueden además estar compuestas de un péptido o polipéptido de la fórmula a la que se ha denominado Epítopo IV: R7-Ser-Gln-X-His-Gln-Y-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro-R8 [ID DE SECUENCIA Nº: 39], en la que X se selecciona del grupo que consta de Asn y Thr; y en la que Y se selecciona del grupo que consta de Ala y Val. El R7 N terminal puede ser hidrógeno, un alquilo inferior, un alcanoilo inferior, o una secuencia de entre 1 a alrededor de 3 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. El R8 C terminal puede ser un hidroxilo libre, una amida, o una secuencia de uno o de hasta alrededor de 3 aminoácidos adicionales, opcionalmente sustituidos por una amida. Un péptido del Epítopo IV preferente es -Ser-Gln-Thr-His-Gln-Ala-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 40]. Los péptidos o polipéptidos de estas composiciones se producen de forma sintética o recombinante. Esta composición puede tomar la forma de uno o más de los péptidos anteriormente descritos expresados como un péptido sintético acoplado a un portador, o expresados como un péptido multiantigénico, o los péptidos seleccionados pueden ser expresados dentro de una proteína producida de forma recombinante. Esta composición está diseñada para inducir anticuerpos reactivos con más del 64% de todas las variantes conocidas de la proteína Tat del VIH-1.
En todavía otro aspecto, esta invención proporciona una composición descrita anteriormente que contiene péptidos o polipéptidos que están compuestos de uno o más péptidos del Epítopo I en combinación con uno o más péptidos del Epítopo II, y/o uno o más péptidos del Epítopo III, y/o uno o más péptidos del Epítopo IV. Dichas composiciones pueden combinar péptidos del Epítopo adecuado, como para prever una composición que induzca anticuerpos reactivos con más de aproximadamente el 99% de todas las proteínas Tat del VIH-1 conocidas.
En todavía otro aspecto más, la invención proporciona un gen sintético que codifica secuencialmente un péptido o polipéptido que contiene al menos una secuencia de aminoácidos del Epítopo I definida anteriormente, opcionalmente con un péptido del Epítopo II carboxilo terminal, o contiene al menos dos secuencias de aminoácidos del Epítopo I. El gen sintético puede contener cada secuencia de aminoácidos separada por una secuencia espaciadora, o puede expresar cada péptido/polipéptido en un marco de lectura abierto con una proteína portadora. El gen sintético puede estar separado de la proteína portadora mediante un espaciador si el espaciador está fusionado con una secuencia del Epítopo I, dejando una secuencia del Epítopo II en el extremo carboxilo terminal de la proteína recombinante. Otras realizaciones incluyen múltiples péptidos del Epítopo I fusionados juntos y con la proteína portadora.
En todavía un aspecto más, la invención proporciona una molécula sintética, por ejemplo, un vector, que está compuesta del gen sintético anteriormente descrito, enlazada de forma operativa a secuencias de ácido nucleico reguladoras, que dirigen y controlan la expresión del producto del gen sintético en una célula huésped.
En otro aspecto, la invención proporciona un virus recombinante que contiene el gen sintético o la molécula sintética anteriormente descritos, virus que es capaz de expresar múltiples copias del producto del gen o la molécula en una célula huésped. El virus no es patógeno para los seres humanos.
En todavía un aspecto más, la invención proporciona una composición de anticuerpos aislados que se dirige contra un péptido o polipéptido de las composiciones descritas anteriormente. También se pueden obtener anticuerpos contra múltiples componentes de las composiciones descritas anteriormente. Estos anticuerpos se producen inmunizando a un mamífero con una composición peptídica/polipeptídica de la invención, un gen sintético o una molécula sintética de la invención; un virus recombinante o bacteria comensal de la invención; y aislando y purificando los anticuerpos de dicho mamífero inmunizado. De forma alternativa, los anticuerpos pueden ser anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, o mezclas de los mismos.
Por consiguiente, otro aspecto de la invención es una composición farmacéutica útil para inducir anticuerpos que reaccionen con más del 95%, y preferentemente más del 99%, de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas. Estos anticuerpos inducidos pueden reducir la multiplicación del VIH-1. La composición farmacéutica está compuesta por al menos una de las composiciones recombinantes o peptídicas/polipeptídicas sintéticas descritas anteriormente; el gen/la molécula sintético/a descrito/a anteriormente; el virus recombinante descrito en el presente documento; o la bacteria comensal descrita en el presente documento, en un portador aceptable farmacéuticamente.
Aún un aspecto más de la invención es una composición farmacéutica útil para dificultar la multiplicación del VIH-1, conteniendo esta composición una composición de anticuerpos descrita anteriormente.
En todavía un aspecto más de la invención, las composiciones se pueden utilizar para reducir los niveles virales del VIH-1 exponiendo a un ser humano a las composiciones farmacéuticas inductoras de anticuerpos descritas anteriormente, induciendo activamente anticuerpos que reaccionen con la mayoría de las proteínas Tat del VIH-1, y dificultando la multiplicación del virus in vivo. Este uso es adecuado para un sujeto infectado con el VIH-1 con un sistema inmunitario competente, o un sujeto no infectado o infectado recientemente. El uso induce anticuerpos que reaccionan con las proteínas Tat del VIH-1, anticuerpos que reducen la multiplicación viral durante cualquier infección aguda en fase inicial con el VIH-1 y minimizan la viremia crónica que lleva al SIDA.
En todavía otro aspecto, la invención proporciona el uso de las composiciones para reducir los niveles virales del VIH-1 administrando a un ser humano, que es incapaz de desarrollar una respuesta inmunitaria rápida o efectiva a la infección con el VIH-1, una composición farmacéutica que contiene las composiciones de anticuerpos descritas anteriormente. El método puede implicar administrar de forma crónica la composición.
Aún otros aspectos de la invención incluyen métodos para producir las composiciones descritas anteriormente, así como las células huésped transfectadas con dichas composiciones.
En todavía un aspecto más, la invención proporciona un método para detectar los títulos y patrones de reactividad de los anticuerpos en sujetos vacunados con las composiciones de esta invención. El método incluye los pasos de incubar diluciones del fluido biológico del sujeto, por ejemplo suero, con placas o perlas en las que hay enlazados uno o más péptidos de los Epítopos I al IV, quitar materiales biológicos no enlazados, y medir cualquier anticuerpo que se enlace a los péptidos con un reactivo marcado, por ejemplo, una inmunoglobulina anti-humana a la que se asocia una enzima. Dependiendo del tipo de etiqueta que se emplee, la señal producida por la etiqueta puede ser provocada añadiendo adicionalmente un sustrato que reaccione con la enzima, por ejemplo, produciendo un cambio de color. También se pueden incorporar otras etiquetas convencionales a este diseño de ensayo.
Otros aspectos y ventajas de la presente invención se describen más a fondo en la descripción detallada de las realizaciones preferentes de la misma que viene a continuación.
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Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 ilustra una secuencia de consenso de la proteína Tat del VIH-1 [ID DE SECUENCIA Nº: 1], basándose en las secuencias de las proteínas Tat de 31 cepas del VIH-1 conocidas que se han encontrado en el subtipo B común [base de datos del NIH (Institutos nacionales de la salud) de Los Álamos]. Las posiciones de los aminoácidos en las que aparecen variaciones están en letras minúsculas.
Las Figuras 2A a 2C ilustran un gen sintético que codifica una proteína de fusión [ID DE SECUENCIA Nº: 3] de esta invención, descrito en detalle en el Ejemplo 5 que sigue a continuación.
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Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona una solución al problema anteriormente expuesto proporcionando composiciones que inducen anticuerpos en sujetos no infectados o infectados en la fase inicial todavía capaces de desarrollar una respuesta inmunitaria a un inmunogen, reaccionando los anticuerpos con más del 95%, y preferentemente, con más del 99% de las variantes conocidas de la proteína Tat del VIH-1. Los anticuerpos inducidos pueden inhibir la multiplicación del VIH-1. Esto impide que la enfermedad evolucione más en su progresión hacia el SIDA. Las composiciones de los anticuerpos también se proporcionan para su uso en seres humanos infectados o no infectados, que son incapaces de desarrollar una respuesta inmunitaria efectiva o rápida a la infección con el VIH-1. Estas composiciones son capaces de reaccionar con más del 95%, y preferentemente con más del 99%, de las proteínas Tat reduciendo de este modo los niveles virales del VIH-1. Estos anticuerpos son útiles en contextos tanto terapéuticos como profilácticos para controlar el desarrollo del SIDA en una población grande expuesta a, o infectada por, cepas del VIH-1 que producen en la infección proteínas Tat inconfundibles desde el punto de vista inmunológico.
Las composiciones de la presente invención, que están basadas en péptidos proporcionados por ciertos epítopos de la proteína Tat del VIH-1, pueden ser proteináceas por naturaleza, o pueden ser composiciones de ácido nucleico que codifican los péptidos y polipéptidos que inducen los anticuerpos contra la Tat, que a su vez dificultan la multiplicación del VIH-1.
La proteína Tat del VIH-1 se produce a partir de dos exones: el Exón 1 codifica una proteína de 72 aminoácidos (aa) (véase la Figura 1, ID DE SECUENCIA Nº: 1) que se puede expresar sin unir o unirse con el péptido de aproximadamente 29 aminoácidos codificado por el Exón 2 para producir un péptido de aproximadamente 101 aminoácidos. Dado que el producto de 72 aminoácidos del Exón 1 es capaz por sí solo de la captación y activación celular, es esencial que los anticuerpos reaccionen con e inhabiliten el transporte intercelular del péptido de 72 aminoácidos. La Tat del VIH-1 contiene Cys en las posiciones 22 y 37 de los aa del Exón 1 [ID DE SECUENCIA Nº: 1 y 2], y 5 Cys adicionales entre estos. Esta región del péptido es calificada como la región rica en Cys y posee enlaces covalentes Cys-Cys que producen una estructura terciaria compleja. La literatura científica ha indicado que esta región no parece ser inmunogénica.
El inventor ha identificado epítopos, esto es, regiones de unión, reconocidas por los anticuerpos (secuencias antigénicas) en la secuencia lineal N-terminal 1-21 (22 aa) y la secuencia lineal C-terminal 38-72 (35 aa) del Exón 1 [ID DE SECUENCIA Nº: 2] u otras variantes de la secuencia de Tat. Las regiones inmunogénicas de estas secuencias más largas fueron identificadas por el inventor y están subrayadas en las secuencias de consenso N terminal y C terminal del Exón 1 que sigue a continuación: el Epítopo I fue identificado como la secuencia de nueve aminoácidos de las posiciones 2-10 de los aa del Exón 1. El Epítopo II fue identificado como la secuencia de once aminoácidos de las posiciones 41-51 de los aa del Exón 1. El Epítopo III fue identificado como la secuencia de 7 aminoácidos de las posiciones 56-62 de los aa del Exón 1. El Epítopo IV fue identificado como la secuencia de doce aminoácidos de las posiciones 62-73 de los aa de Tat, incluyendo el primer Pro (aa 73) del Exón 2 y se solapa con respecto al Ser 62 del Epítopo III (subrayado discontinuo).
1
El término "variante de la secuencia de Tat" se refiere a un polipéptido o péptido que contiene residuos de aminoácidos de la proteína Tat, o una secuencia de la proteína Tat de otra cepa del VIH-1 que sea sustancialmente similar a la secuencia del ID DE SECUENCIA Nº: 1. Cada variante puede diferir de la secuencia de consenso de la Figura 1 [ID DE SECUENCIA Nº: 1] y/o de otra variante debido al menos a una variación en los aminoácidos dentro de los residuos de interés para los Epítopos I al IV. Esta variación puede proporcionar la misma especificidad antigénica o una diferente a ese Epítopo de Tat en particular cuando se añade a la composición de la invención.
A. Composiciones inmunogénicas del Epítopo I
Por lo tanto, en una realización, la presente invención proporciona una composición que contiene un polipéptido o péptido que se produce de forma no natural, que está compuesto de dos, tres o cuatro secuencias de aminoácidos del Epítopo I. Estas secuencias del Epítopo I provocan una respuesta inmunitaria humoral específica (a efectos de esta invención) en un mamífero expuesto a las secuencias del Epítopo I in vivo. Las secuencias de aminoácidos del Epítopo I corresponden a los residuos de aminoácidos 2-10 ó 4-10 de la secuencia de consenso de Tat [ID DE SECUENCIA Nº: 1] de la Figura 1 que proviene de un número de "variantes de la secuencia de Tat".
El Epítopo I define péptidos de la fórmula general: R1-Val-Asp-Pro-Y-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 36]. El R1 N terminal puede representar el hidrógeno en el Val de aminoácidos N terminal no modificado, o el R1 puede ser un alquilo inferior, o un alcanoilo inferior acoplado al Val. El R1 puede también incluir una secuencia de entre 1 a alrededor de 5 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. En una realización, el R1 es -X-Pro-, en el que X es Glu ó Asp. El R2 C-terminal puede representar el grupo hidroxilo en el Pro de aminoácidos C terminal, o el R2 puede ser una amida en el Pro; de forma alternativa, el R2 es una secuencia de entre 1 a alrededor de 14 aminoácidos adicionales, opcionalmente amidados en el extremo carboxilo. Las posiciones X e Y representan variantes comunes de este péptido del Epítopo, en las que X es Glu (90%) o Asp (10%), e Y varía entre Arg (74%), Lys (11%), Ser (9%) o Asn (4%). Los péptidos que contienen Glu o Asp en la posición X inducen anticuerpos que reaccionan de forma cruzada con eficacia con la otra variante. De forma alternativa, los péptidos que omiten el X-P con eficacia inducen anticuerpos contra Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro (aminoácidos 4-10 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1). Un inmunogen deseable de la fórmula Glu-Pro-Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Glu-Pro [ID DE SECUENCIA Nº: 56] reacciona/reacciona de forma cruzada con más del 95% de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas, mientras que un inmunogen de la fórmula Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Gly-Pro [ID DE SECUENCIA Nº: 57] reacciona/reacciona de forma cruzada con más del 97% de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas.
Los anticuerpos contra las cuatro variantes de la posición Y son generados utilizando las cuatro como inmunogenes. De forma alternativa, la reactividad cruzada permite una reducción a dos o incluso a una secuencia inmunizadora para inducir la reactividad contra las cuatro variantes de la posición Y. Tal y como se trata en detalle en los Ejemplos que vienen a continuación, las reactividades de los anticuerpos inducidos por el péptido que contiene el Epítopo I se presentan en la Tabla 1 de más abajo: Val-Asp-Pro-Y-Leu-Glu-Pro-Typ-Lys-His-Pro-Gly-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 58], en el que Y es Arg, Lys, Ser o Asn. El sombreado oscuro muestra la auto-reactividad, el sombreado claro muestra la reactividad cruzada significativa (.40%).
TABLA 1
2
{}\hskip0,3cm * Únicamente está disponible un antisuero del título elevado.
Preferentemente una composición de esta invención contiene dos, tres o cuatro de los siguientes péptidos o polipéptidos del Epítopo I:
R1-Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 6];
R1-Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 7];
R1-Val-Asp-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 8];
R1-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 9].
Tal y como se ha demostrado anteriormente, el inmunogen en el que Y es Lys [ID DE SECUENCIA Nº: 7] induce anticuerpos con buena reactividad con las otras tres variantes. Ningún inmunogen indujo anticuerpos de título elevado con una buena reactividad cruzada con la variante en el que Y fuera Ser. Por tanto, un inmunogen del Epítopo I en el que Y era Lys [ID DE SECUENCIA Nº: 7] puede ser suficiente para una completa reactividad cruzada para las cuatro variantes de la posición Y, y se puede utilizar por sí solo en una composición inmunogénica. Aunque este patrón de respuesta del péptido en el que Y es Lys se produce en la mayoría de los ensayos hasta la fecha, una persona experta en la técnica deberá esperar que se puedan producir algunas diferencias en la reactividad cruzada con respecto a los resultados anteriores en algunas de las muestras de ensayo.
De forma alternativa, una combinación de inmunogenes del Epítopo I en la que Y era Lys y en la que Y era Asn [ID DE SECUENCIA Nº: 7 y 9] deberá proporcionar títulos algo mejores que las variantes del Epítopo I en las que Y era Ser o Y era Asn.
Aún otro inmunogen peptídico del Epítopo I alternativo contiene en la posición Y una omitina, puesto que la cadena lateral de la omitina es similar a la lisina con un -CH_{2}- menos. Esta secuencia del Epítopo I puede proporcionar incluso más reactividad cruzada, y se puede utilizar por sí sola o en combinación con otros inmunogenes del Epítopo I.
De conformidad con la fórmula del Epítopo I anterior, los siete residuos de aminoácidos que forman las secuencias del Epítopo I reactivas mínimas, pueden estar flanqueados por otros aminoácidos, de manera que la secuencia del Epítopo I al completo puede ser de entre 7 y alrededor de 25 aminoácidos en longitud. Tal y como se indica en el Ejemplo 1 que sigue a continuación, la identidad de los aminoácidos que los flanquean no es esencial para la función biológica del inmunogen del Epítopo I. En particular, los aminoácidos adicionales en el extremo N de las secuencias del Epítopo I no afectan a la inmunogenicidad. Por tanto, el R1 N-terminal del Epítopo I se puede seleccionar del grupo que consta de un hidrógeno de aminoácidos N terminal libre, un alquilo inferior (esto es, alquilo C1-C10), un alcanoilo C1-C10 inferior, tal como por ejemplo un grupo acetilo, o una secuencia de entre 1 a alrededor de 5 aminoácidos. Preferentemente, el R1 representa 2 aminoácidos.
Los aminoácidos adicionales en el extremo C de la secuencia mínima del Epítopo I aumentan el título de los anticuerpos. Los inmunogenes del Epítopo I requieren al menos dos extensiones de aminoácidos en el extremo C para una inmunogenicidad óptima y son inmunogénicos cuando están presentes dentro de la secuencia de aminoácidos extendida. Por consiguiente, aunque el R2 C-terminal puede ser un grupo hidroxilo libre simple, también puede ser una amida C terminal. Sin embargo, para aumentar el título, el R2 es preferentemente una secuencia de entre 1 a alrededor de 14 aminoácidos adicionales amidados en el extremo carboxilo. En una realización preferente, el R2 es -Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-amida [ID DE SECUENCIA Nº: 10].
La composición del Epítopo I de la invención descrita anteriormente puede contener un número de péptidos o polipéptidos adicionales, que contienen otras secuencias que corresponden a residuos de aminoácidos entre aa 2 - aa 10 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1, pero que provienen de otras variantes de Tat que no reaccionan bien de forma cruzada con anticuerpos contra las composiciones del Epítopo I descritas anteriormente. Estos péptidos y polipéptidos adicionales se denominan "inmunogenes del Epítopo la opcionales". Por ejemplo, los inmunogenes del Epítopo la opcionales que pueden estar presentes en composiciones de esta invención, pueden contener al menos una copia de al menos una de las siguientes secuencias de aminoácidos [ID DE SECUENCIA Nº: 11 a la 18, respectivamente]:
R1-Gly-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2;
R1-Ala-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2;
R1-His-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2;
R1-Asp-Pro-Gly-Leu-Glu-Pro-R2;
R1-Asp-Pro-Arg-Ile-Glu-Pro-R2;
R1-Asp-Pro-Arg-Leu-Gly-Pro-R2;
R1-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Ala-R2; y
R1-Asn-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro-R2;
Las composiciones del Epítopo I de esta invención pueden contener múltiples copias de un péptido solo, o múltiples copias de diferentes péptidos del Epítopo I, incluyendo opcionalmente péptidos del Epítopo la, en cualquier orden, o múltiples copias de al menos dos de estos péptidos. En una realización, están presentes al menos una copia de las cuatro secuencias de aminoácidos [ID DE SECUENCIA Nº: 6-9].
Tal y como se describe en más detalle a continuación, los péptidos o polipéptidos del Epítopo I y la de estas composiciones se producen de forma sintética o recombinante. Los inmunogenes del Epítopo I se pueden expresar como péptidos sintéticos unidos a la proteína portadora. Los inmunogenes del Epítopo I pueden también expresarse como péptidos multiantigénicos, opcionalmente unidos a la proteína portadora. De manera alternativa, los inmunogenes del Epítopo I se pueden expresar dentro de una proteína producida de forma recombinante, opcionalmente co-expresada o fusionada en estructura con una proteína portadora.
Las composiciones del Epítopo I demuestran una actividad biológica de inducir en un mamífero inmunizado y competente desde el punto de vista inmunitario, esto es, un ser humano no infectado, o un ser humano infectado asintomático, una respuesta inmunitaria humoral activa (es decir, anticuerpos) que está dirigida contra más del 95%, y preferentemente más del 99%, de las variantes conocidas de las proteínas Tat del VIH-1. El resultado final de dicho tratamiento es una dificultad de la multiplicación del VIH-1 en una infección grave, impidiendo de ese modo unos niveles elevados en plasma del VIH-1 después de la seroconversión que están asociados con la progresión hacia el SIDA. La inducción activa de anticuerpos en la fase asintomática temprana de la infección con VIH puede reducir la multiplicación viral, disminuir la carga viral en plasma y reducir la probabilidad de la progresión hacia el SIDA. La composición que contiene al menos un inmunogen del Epítopo I hasta las cuatro secuencias de aminoácidos de la ID DE SECUENCIA Nº: 6-9, puede provocar una respuesta inmunitaria a alrededor del 97% de las 400 secuencias de Tat conocidas de los subtipos B comunes del VIH-1 y con proteínas Tat de los 18 subtipos que no son B del VIH-1 que han sido secuenciados [cortesía de la Dra. Esther Guzmán, base de datos del VIH del NIAID (Instituto nacional de alergias y enfermedades infecciosas) de Los Álamos; base de datos de GenBank].
B. Composiciones inmunogénicas del Epítopo II
En otra realización, la presente invención proporciona una composición que está compuesta de al menos una secuencia de aminoácidos del Epítopo II. Esta secuencia del Epítopo II provoca una respuesta inmunitaria humoral específica (a efectos de esta invención) en un mamífero expuesto a la secuencia del Epítopo II in vivo. El Epítopo II define los péptidos de la Fórmula R3-Lys-X-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-R4, en la que X es Gly (70%) o Ala (30%). Esta secuencia está muy protegida. El inmunogen en el que X es Gly induce anticuerpos reactivos de forma cruzada con la secuencia en la que X es Ala.
El R3 N terminal puede representar el hidrógeno en el aminoácido Lys N terminal no modificado, o el R3 puede ser un alquilo inferior, o un alcanoilo inferior, tal como por ejemplo un grupo acetilo, substituyente en el Lys. El R3 también puede incluir una secuencia de entre 1 hasta alrededor de 5 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. El R4 C terminal puede representar el hidroxilo libre del aminoácido Lys C terminal, o el R3 puede ser una amida en ese aminoácido C terminal. El R3 puede opcionalmente ser una secuencia de uno o de hasta alrededor de 5 aminoácidos adicionales, opcionalmente sustituidos por una amida. El inmunogen preferente en este momento para el Epítopo II es -Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys- (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1). Esto reaccionaría/reaccionaría de forma cruzada con más del 96% de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas.
El Epítopo II es muy poco inmunogénico cuando se presenta dentro de otras secuencias. Por lo tanto, para una inmunogenicidad óptima, esta secuencia se prepara como un péptido sintético fusionado a, o unido a, una proteína portadora o como un péptido multiantigénico, opcionalmente unido a una proteína portadora. De forma alternativa, el Epítopo II se puede expresar como la secuencia C terminal de una proteína recombinante, que se fusiona opcionalmente en estructura a una proteína portadora en su secuencia aminoterminal. En una composición de esta invención, un péptido del Epítopo II se presenta preferentemente solo o en combinación con uno o más péptidos del Epítopo I. Otras composiciones pueden emplear uno o más péptidos del Epítopo III o IV.
C. Composiciones inmunogénicas del Epítopo III
En otra realización, la presente invención estipula que las Composiciones Inmunogénicas del Epítopo I y las Composiciones Inmunogénicas del Epítopo II pueden además estar compuestas de al menos una, y preferentemente dos o más secuencias de aminoácidos del Epítopo III. Estas secuencias del Epítopo III provocan una respuesta inmunitaria humoral específica (a efectos de esta invención) en un mamífero expuesto a las secuencias del Epítopo III in vivo. Este epítopo muestra una variación considerablemente mayor que la de los Epítopos I y II. Estos péptidos y polipéptidos inmunogénicos del Epítopo III provienen de secuencias de la proteínas variantes Tat que corresponden a los aminoácidos 56-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1. El Epítopo III define los péptidos de la fórmula: R5-Arg-Arg-X-Z-A-Y-Ser-R6 [ID DE SECUENCIA Nº: 38], en la que X puede ser Ala, Pro, Ser ó Gln; Y puede ser Asp, Asn, Gly ó Ser; Z puede ser Pro ó His; y A puede ser Gln ó Pro. Los inmunogenes del Epítopo I II en los que X es Ala inducen anticuerpos que reaccionan de forma cruzada con las otras variantes de la posición X. Los inmunogenes del Epítopo III que contienen Asp en la posición Y inducen anticuerpos que reaccionan de forma cruzada con las otras variantes de la posición Y. Las tres variantes más comunes para las posiciones Z y A son -Pro-Gln- (61%), -Pro-Pro- (8%) y -His-Gln- (8%). Los anticuerpos inducidos por estos tres inmunogenes no reaccionan de forma cruzada con los otros de modo que se necesitaría utilizar tres inmunogenes para cubrir estas variantes (77%).
De conformidad con la fórmula del Epítopo III anterior, los siete residuos de aminoácidos que forman las secuencias del Epítopo III reactivas mínimas, pueden estar flanqueados por otros aminoácidos, de manera que la secuencia del Epítopo III al completo puede ser de entre 7 y alrededor de 15 aminoácidos en longitud. Tal y como se indica en el Ejemplo 3 que sigue a continuación, la identidad de los aminoácidos que los flanquean no es esencial para la función biológica del inmunogen del Epítopo III. En particular, los aminoácidos adicionales en el extremo N de las secuencias del Epítopo III no afectan a la inmunogenicidad. El R5 N terminal puede representar opcionalmente el hidrógeno en el Arg N-terminal, o el R5 es un alquilo o alcanoilo inferior, tal como por ejemplo un grupo acetilo, substituyente en el Arg N-terminal. De forma alternativa, el R5 es una secuencia de entre 1 a alrededor de 3 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. En una realización preferente, el R5 es -Gln-Arg-, opcionalmente modificado como se ha descrito anteriormente, que mejora la inmunogenicidad del Epítopo. El R6 C terminal representa o bien el hidroxilo libre en el aminoácido C terminal o una amida substituyente en el aminoácido C terminal, porque cualquier extensión C-terminal dificulta la inmunogenicidad.
Los inmunogenes del Epítopo III que pueden estar presentes en las composiciones de esta invención pueden incluir al menos una copia de por lo menos una de las siguientes secuencias de aminoácidos del Epítopo III preferentes: R5-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser-R6, R5-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-His-Gln-Asp-Ser-R6, y R5-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Pro-Asp-Ser-R6, opcionalmente modificadas tal y como se ha indicado anteriormente [ID DE SECUENCIA Nº: 20 a la 22, respectivamente].
Todavía entre otras secuencias inmunogénicas opcionales que pueden estar incluidas en las composiciones del Epítopo III se incluyen R5-Arg-Arg-Pro-Pro-Gln-Asp-Asn-R6, R5-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Arg-R6; R5-Arg-Gly-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser-R6; R5-Arg-Arg-Ala-Pro-Glu-Asp-Ser-R6; ó R5-Arg-Arg-Ala-Ser-Gln-Asp-Ser-R6 [ID DE SECUENCIA Nº: 23 a la 27, respectivamente]. Tal y como puede ser determinado a partir de la revisión de los ejemplos que siguen a continuación, la inclusión de estos péptidos del Epítopo III en las composiciones de la invención puede inducir anticuerpos que reaccionen con proteínas Tat poco comunes del VIH-1 que no son reactivas de forma cruzada con, o que no tienen una reactividad cruzada lo suficientemente fuerte ante, anticuerpos inducidos por los inmunogenes del Epítopos III preferentes.
Tal y como se describe con más detalle a continuación, los péptidos o polipéptidos del Epítopo III son muy poco inmunogénicos cuando se presentan dentro de otras secuencias. Aunque las secuencias del Epítopo III se pueden preparar de forma recombinante, para una inmunogenicidad óptima, estas secuencias se prepararían de forma sintética y se unirían a una proteína portadora, o como péptidos multiantigénicos, opcionalmente unidos a una proteína portadora. De forma alternativa, el Epítopo III se puede expresar como la secuencia C terminal de una proteína recombinante, que se fusiona opcionalmente en estructura a una proteína portadora en su secuencia aminoterminal. Las composiciones de esta invención preferentemente contendrían tres o más inmunogenes del Epítopo III diferentes, con inmunogenes del Epítopo I o el Epítopo II, y opcionalmente con uno o más inmunogenes del Epítopo IV.
D. Composiciones inmunogénicas del Epítopo IV
En otra realización, la presente invención estipula que las Composiciones Inmunogénicas del Epítopo I y las Composiciones Inmunogénicas del Epítopo II pueden además estar compuestas de al menos una, y preferentemente dos o más secuencias de aminoácidos del Epítopo IV. Estas secuencias del Epítopo IV provocan una respuesta inmunitaria humoral específica (a efectos de esta invención) en un mamífero expuesto a las secuencias del Epítopo IV in vivo. Los péptidos y polipéptidos inmunogénicos del Epítopo IV provienen de secuencias de las proteínas variantes Tat que corresponden a los aminoácidos 62-72 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1, incluyendo un Pro C-terminal del Exón 2 de Tat del VIH-1. El Epítopo IV define los péptidos de la fórmula: R7-Ser-Gln-X-His-Gln-Y-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro-R8 [ID DE SECUENCIA Nº: 39], en la que X puede ser Asn ó Thr; e Y puede ser Ala ó Val.
El inmunogen en el que X es Thr induce anticuerpos que reaccionan de forma cruzada con el inmunogen en el que X es Asn. El inmunogen en el que Y es Val induce anticuerpos que no reaccionan de forma cruzada con los péptidos en los que Y es Ala. Sin embargo, los péptidos que contienen Ala en posición Y inducen anticuerpos que reaccionan de forma cruzada con los péptidos para el Epítopo IV en los que Y es Val. Por lo tanto, el inmunogen del Epítopo IV óptimo es Ser-Gln-Thr-His-Gln-Ala-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro [ID DE SECUENCIA Nº: 40] y esto induce anticuerpos reactivos/reactivos de forma cruzada con el 64% de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas.
De conformidad con la fórmula del Epítopo IV anterior, los doce residuos de aminoácidos que forman las secuencias del Epítopo IV reactivas mínimas, pueden estar flanqueados por algunos otros aminoácidos, de modo que la secuencia del Epítopo IV al completo puede ser de entre 12 y alrededor de 18 aminoácidos en longitud. El R7 N terminal puede representar el hidrógeno del aminoácido N terminal, o un alquilo o alcanoilo inferior, tal como por ejemplo un grupo acetilo substituyente en el aminoácido N terminal. Aunque la extensión N-terminal inhibe sensiblemente la inmunogenicidad, el R7 también puede ser una secuencia de entre 1 a alrededor de 3 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior. El R8 C terminal puede representar el hidroxilo libre en el aminoácido C terminal, o una amida susbtituyente en el aminoácido C terminal, o el R8 puede ser una secuencia de uno o de hasta alrededor de 3 aminoácidos adicionales, opcionalmente sustituidos por una amida. Además, el Pro C-terminal, que es un componente importante del epítopo, está codificado por el exón 2 de Tat. Por consiguiente, los anticuerpos contra el Epítopo IV serían muy poco reactivos con una proteína Tat del Exón I no unida.
Esta secuencia del Epítopo IV es muy poco inmunogénica cuando se presenta dentro de otras secuencias. Por lo tanto, para una inmunogenicidad óptima, esta secuencia estaría preparada como un péptido sintético unido a una proteína portadora o como un péptido multiantigénico, opcionalmente unido a una proteína portadora. Las composiciones de esta invención preferentemente contendrían dos o más inmunogenes diferentes del Epítopo IV, con inmunogenes del Epítopo I o del Epítopo II, y opcionalmente con uno o más inmunogenes del Epítopo III.
E. Composiciones que contienen múltiples Epítopos
Aunque las secuencias de aminoácidos del Epítopo I, II, III y IV y los inmunogenes opcionales identificados en el presente documento fueron obtenidos mediante el análisis riguroso de más de 400 secuencias de Tat del VIH-1 conocidas, una persona experta en la técnica debería entender que se pueden obtener composiciones similares, siguiendo las enseñanzas de esta invención, a partir del estudio de más proteínas Tat, las secuencias de ácido nucleico que las codifican, y los fragmentos de las mismas de proteínas Tat recién aisladas del VIH-1 subtipo B, o de proteínas Tat de los otros subtipos, o de otras cepas del VIH.
Por consiguiente, las composiciones de esta invención, esto es, los péptidos/polipéptidos que contienen las secuencias de aminoácidos anteriormente identificadas, cuando se proporcionan a un sujeto humano, son útiles en la inhabilitación inmunológica de las proteínas Tat extracelulares de la mayoría de las cepas del VIH-1. Estas composiciones funcionan para reducir drásticamente la multiplicación explosiva del virus y permitir un control inmunitario efectivo del virus.
Los inmunogenes para cada Epítopo están preferentemente diseñados para inducir anticuerpos reactivos con la más elevada proporción de variantes que se producen de forma natural de cada epítopo. Para un epítopo tal como por ejemplo el Epítopo I, se podrían incorporar múltiples copias de un inmunogen en un inmunogen sintético o recombinante para aumentar la inmunogenicidad y producir anticuerpos de título más elevado. Además, los inmunogenes para dos o más epítopos se podrían combinar para extender la cobertura, dado que las variaciones en la secuencia de cada epítopo se producen de forma independiente. Por ejemplo, combinando un(os) inmunogen(es) del Epítopo I (95%) con un inmunogen del Epítopo II (96%) daría por resultado anticuerpos en sujetos receptivos inmunológicamente reactivos con el 99,8% de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas. Por lo tanto, como un ejemplo, una composición de esta invención contiene un inmunogen del péptido fusionado del Epítopo I (subrayado)-Epítopo II (doble subrayado) tal como por ejemplo Cys-Glu-Pro-Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-Glu-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-amida [ID DE SECUENCIA Nº: 67], unido a una proteína portadora acoplada al Epítopo I, o el mismo péptido (menos el Cys N-terminal para la unión), sintetizado como un péptido multiantigénico, opcionalmente unido a una proteína portadora. De forma alternativa, las mezclas de dos o más inmunogenes se podrían usar de la manera que sigue a continuación.
Los inmunogenes del Epítopo I, con o sin cualquier Epítopo II, III o IV u otros inmunogenes opcionales, pueden prepararse y utilizarse en composiciones inmunogénicas de diversas formas, por ejemplo, sintetizados químicamente o como péptidos fusionados, proteínas de fusión, proteínas, polipéptidos o péptidos recombinantes.
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1. Péptido/proteína sintéticos unidos a un portador
Como una realización, una composición de la presente invención puede ser un péptido sintético, que contenga copias múltiples o únicas de las mismas o de diferentes secuencias de aminoácidos inmunogénicas del Epítopo I y/o secuencias de aminoácidos inmunogénicas del Epítopo II/III/IV, y opcionalmente secuencias de aminoácidos de los inmunogenes opcionales, unidas a una proteína portadora seleccionada. En esta realización de una composición de esta invención, múltiples secuencias de aminoácidos del Epítopo I anteriormente descritas con o sin secuencias que las flanqueen, pueden combinarse secuencialmente en un polipéptido y unirse al mismo portador. De forma alternativa, los inmunogenes del Epítopo I, II, III, ó IV, se pueden unir individualmente como péptidos a las mismas o a diferentes proteínas portadoras, y las construcciones de inmunogen - portador resultantes mezclarse las unas con las otras para formar una composición única.
Para esta realización, la proteína portadora es deseable que sea una proteína u otra molécula que pueda aumentar la inmunogenicidad del inmunogen seleccionado. Dicho portador puede ser una molécula más larga que tenga un efecto adyuvante. Entre los portadores de proteína convencional ejemplares se incluyen, sin limitación, la proteína DnaK E. coli, la galactoquinasa (galK, que cataliza el primer paso del metabolismo de la galactosa en las bacterias), la ubiquitina, el factor de contacto \alpha, la \beta-galactosidasa, y la proteína NS-1 de la gripe. Los toxoides (esto es, la secuencia que codifica la toxina que se produce de forma natural, con suficientes modificaciones como para eliminar su actividad tóxica) tales como por ejemplo el toxoide de la difteria y el toxoide del tétanos también pueden emplearse como portadores. De forma similar, se pueden utilizar diversas proteínas bacterianas de choque térmico, por ejemplo, las hsp-70 micobacterianas. El glutatión reductasa (GST) es otro portador útil. Una persona experta en la técnica puede seleccionar fácilmente un portador adecuado.
En una construcción de una proteína inmunogénica-portadora especialmente deseable, uno o más inmunogenes del epítopo y los péptidos/polipéptidos de los inmunogenes opcionales pueden enlazarse de forma covalente a una proteína 70 micobacteriana E. coli de choque térmico (hsp70) [K. Suzue et al, J. Immunol., 156:873 (1996)]. En otra realización deseable, la composición se forma enlazando de manera covalente las secuencias de péptidos o polipéptidos que contienen inmunogenes al toxoide de la difteria.
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2. Péptido multiantigénico
En todavía otra realización, los inmunogenes del epítopo de los polipéptidos o péptidos y cualesquiera inmunogenes opcionales seleccionados pueden estar en forma de una construcción de péptido multiantigénico ("MAP", al que también se ha denominado un péptido octamérico de núcleo de lisina). Dicha clase de construcción puede diseñarse empleando el sistema MAP descrito por Tam, Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 85:5409-5413 (1988). Este sistema hace uso de una matriz nuclear de residuos de lisina en la que se sintetizan múltiples copias de los mismos inmunogenes opcionales o del Epítopo I de la invención tal y como se ha descrito [D. Posnett et al., J. Biol. Chem., 263(4):1719-1725 (1988); J. Tam, "Chemically Defined Synthetic Immunogens and Vaccines by the Multiple Antigen Peptide Approach", Vaccine Research and Developments, Vol. 1, ed. W. Koff. y H. Six, pp. 51-87 (Marcel Deblau, Inc., Nueva York 1992)]. Cada MAP contiene múltiples copias de únicamente un péptido. Por lo tanto, por ejemplo, una composición del epítopo de esta invención puede incluir un MAP en el que el inmunogen del epítopo peptídico o polipeptídico acoplado al núcleo de lisina contenga una repetición o repeticiones secuenciales de las cuatro secuencias de aminoácidos [ID DE SECUENCIA Nº: 6-9] identificadas anteriormente. Se pueden emplear múltiples MAPs diferentes para obtener cualquier combinación deseada de las secuencias del Epítopo I, II, III ó IV. Preferentemente, estas construcciones de MAP están asociadas con otras secuencias estimulatorias de célula T, o como composiciones farmacéuticas, se administran en conjunción con agentes estimulatorios de célula T, tales como por ejemplo adyuvantes
conocidos.
3. Espaciadores
En cualquiera de las composiciones anteriores, por ejemplo, como construcciones de péptido/polipéptido-portador o MAPs, cada inmunogen peptídico/polipeptídico, o cada secuencia de aminoácidos en el inmunogen, puede separarse opcionalmente mediante secuencias de aminoácidos opcionales llamadas "espaciadores". Los espaciadores son secuencias de entre 1 a alrededor de 4 aminoácidos que se interponen entre dos secuencias para permitir el enlace ahí en medio sin efectuar desfavorablemente la estructura tridimensional del inmunogen. Los espaciadores también pueden contener sitios de división endonucleasa de restricción para permitir la separación de las secuencias, donde se desee. Una persona experta en la técnica conoce los enlazadores o espaciadores adecuados y los puede diseñar y seleccionar fácilmente. Los espaciadores preferentes son secuencias que contienen aminoácidos Gly y/o
Ser.
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F. Composiciones de ácido nucleico de la invención, incluyendo un gen sintético
Otras realizaciones de esta invención incluyen secuencias de ácido nucleico, que codifican las composiciones peptídicas/polipeptídicas descritas anteriormente, incluyendo los inmunogenes peptídicos y polipeptídicos de las composiciones descritas anteriormente, incluyendo aquellos péptidos y polipéptidos fusionados a proteínas portadoras. Las secuencias de ácido nucleico pueden también incluir secuencias que codifican las proteínas portadoras.
Por consiguiente, una realización preferente de la invención es un "gen sintético" que codifica secuencialmente para uno o más péptidos/polipéptidos inmunogénicos del Epítopo I. El gen sintético preferentemente codifica dos, tres o las cuatro secuencias de aminoácidos del Epítopo I [ID DE SECUENCIA Nº: 6 a la 9, respectivamente]:
R1-Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2;
R1-Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Glu-Pro-R2;
R1-Val-Asp-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro-R2; y
R1-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-R2.
El gen sintético también puede codificar cualquier selección de los inmunogenes opcionales identificados anteriormente, y puede incluir un inmunogen del Epítopo II 6 III siempre y cuando el péptido del Epítopo II 6 III esté fusionado al extremo C de la secuencia del Epítopo I y no esté modificado adicionalmente en su propio extremo C. El gen sintético puede codificar múltiples copias de la misma secuencia de aminoácidos, copias de múltiples secuencias de aminoácidos o inmunogenes diferentes, o múltiples copias de múltiples secuencias de aminoácidos o inmunogenes diferentes. El gen sintético puede codificar las secuencias de aminoácidos seleccionadas en un marco de lectura abierto con, o fusionado a, una secuencia de ácido nucleico que codifique una proteína portadora. Una característica adicional del gen sintético puede ser que codifica un espaciador entre cada secuencia que codifica un inmunogen y/o entre la secuencia que codifica un inmunogen y la secuencia que codifica la proteína portadora.
El gen sintético de la presente invención puede también formar parte de una molécula recombinante o sintética. La molécula sintética puede ser una construcción de ácido nucleico, tal como por ejemplo un vector o plásmido que contenga el gen sintético que codifica la proteína, péptido, polipéptido, proteína de fusión o péptido de fusión bajo el control operativo de secuencias de ácido nucleico que codifican elementos reguladores tales como por ejemplo promotores, señales de terminación, y cosas por el estilo. Dichas moléculas sintéticas se pueden utilizar para producir las composiciones del inmunogen peptídico/polipeptídico de forma recombinante.
El gen sintético o las moléculas sintéticas se pueden preparar mediante el uso de métodos de síntesis química o preferentemente, mediante técnicas recombinantes. Por ejemplo, las moléculas o el gen sintéticos pueden contener ciertos codones de preferencia para las especies de la célula huésped indicada.
Las moléculas o el gen sintéticos, preferentemente en la forma de ADN, se pueden utilizar en una variedad de maneras. Por ejemplo, estas secuencias de ácido nucleico sintéticas se pueden emplear para expresar los péptidos/polipéptidos de la invención in vitro en un cultivo de la célula huésped. Los inmunogenes expresados, tras una purificación adecuada, pueden entonces ser incorporados a una vacuna o reactivo farmacéutico.
De forma alternativa, el gen sintético o la molécula sintética de esta invención se pueden administrar directamente a un mamífero, preferentemente a un sujeto humano, como el denominado "ADN desnudo" para expresar el inmunogen de la proteína/péptido in vivo en un paciente. Véase, por ejemplo, J. Cohen, Science, 259:1691-1692 (19 de marzo de 1993); E. Fynan et al., Proc. Natl, Acad. Sci. EE.UU., 90:11478-11482 (diciembre de 1993); y J. A. Wolff et al., Biotechniques, 11:474-485 (1991), todas ellas incorporadas por referencia en el presente documento. La molécula sintética, por ejemplo, un vector o plásmido, se puede utilizar para inyectar directamente en el huésped mamífero. Esto da como resultado la expresión de la proteína por las células huésped y la presentación posterior al sistema inmunitario para inducir la formación de anticuerpos in vivo.
G. Microorganismos que expresan el gen sintético
En todavía otro aspecto de la presente invención, las moléculas o genes sintéticos de esta invención se pueden incorporar a un microorganismo no patógeno. El microorganismo resultante, cuando se administra a un huésped mamífero expresa y multiplica las composiciones expresadas de esta invención in vivo para la formación de anticuerpos específicos inducidos. Por ejemplo, los virus recombinantes no patógenos que transportan las composiciones o los genes sintéticos de esta invención y que son útiles para su administración a un paciente mamífero se pueden preparar mediante el uso de una metodología convencional y seleccionar de entre microorganismos no patógenos
conocidos.
Entre los virus no patógenos adecuados que pueden ser creados para transportar el gen sintético a las células del huésped se incluyen los virus de la viruela, tales como por ejemplo, la vaccinia, el adenovirus, la viruela del canario, los retrovirus y cosas por el estilo. Cierto número de dichos virus no patógenos se utilizan de manera ordinaria para la terapia génica humana, y como portadores para otros agentes vacinales, y son conocidos y seleccionables por una persona experta en la técnica.
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H. Preparación o elaboración de composiciones de la invención
Las composiciones de la invención, y los péptidos/polipéptidos individuales que contienen el Epítopo I ó, II, y opcionalmente el Epítopo III o el Epítopo IV o los inmunogenes opcionales de esta invención, los genes sintéticos, y las moléculas sintéticas de la invención, se pueden preparar de forma convencional recurriendo a técnicas de síntesis química conocidas, tales como por ejemplo las descritas por Merrifield, J. Amer. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963). De forma alternativa, las composiciones de esta invención se pueden preparar mediante técnicas de ADN recombinante conocidas clonando y expresando dentro de un microorganismo o célula huésped un fragmento de ADN que transporte una secuencia que codifique un péptido/polipéptido que contenga un Epítopo I y/o un inmunogen opcional y una proteína portadora opcional. Las secuencias de codificación para el Epítopo I y los inmunogenes opcionales se pueden preparar de forma sintética [W. P. C. Stemmer et al, Gene, 164:49 (1995) o pueden derivarse de ARN viral mediante técnicas conocidas, o a partir de plásmidos que contienen c-ADN disponibles.
Se pueden utilizar combinaciones de estas técnicas, como por ejemplo para la producción del gen sintético, que puede requerir el ensamblaje de inmunogenes secuenciales mediante técnicas convencionales de biología molecular, y mutagénesis sitio-dirigida para proporcionar secuencias deseadas de inmunogenes. El producto del gen sintético se produce entonces de forma recombinante. Todas estas manipulaciones se pueden llevar a cabo mediante metodología convencional.
Entre los sistemas para clonar y expresar las composiciones peptídicas/polipeptídicas de esta invención utilizando las moléculas o genes sintéticos, se incluyen diversos microorganismos y células que son bien conocidos en la tecnología recombinante. Estos incluyen, por ejemplo, diversas cepas de E. coli, Bacillus, Streptomyces, y Saccharomyces, así como células de mamíferos, levadura e insectos. Hay vectores adecuados por tanto conocidos y disponibles en laboratorios y almacenes privados y públicos y disponibles de vendedores comerciales. Actualmente, el huésped más preferente es una célula de mamífero tal como por ejemplo las células de los ovarios de un hámster chino (CHO) o células COS-1. Estos huéspedes se pueden utilizar en conexión con vectores del virus de la viruela, tales como por ejemplo la vaccinia o la viruela porcina. La selección de otras células huésped y métodos para la transformación, cultivo, amplificación, criba y la producción y purificación del producto adecuados se puede llevar a cabo por parte de una persona experta en la técnica haciendo referencia a técnicas conocidas. Véase, por ejemplo, Gething y Sambrook, Nature, 293:620-625 (1981).
Otro sistema preferente incluye los vectores y el sistema de expresión del baculovirus.
Cuando se producen mediante medios recombinantes convencionales, las composiciones de esta invención, esto es, los péptidos/polipéptidos que contienen las copias indicadas de los inmunogenes del Epítopo I y de los inmunogenes opcionales se pueden aislar o bien a partir de los contenidos celulares mediante técnicas de tisis convencionales o a partir del medio celular mediante métodos convencionales, tales como por ejemplo la cromatografía. Véase, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual., 2ª Edición, Laboratorio de Cold Spring Harbor, Nueva York (1989).
Los vectores virales y plasmídicos adecuados utilizados ambos para la producción de los componentes peptídicos/polipeptídicos como las vacunas de ADN son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica y no son una limitación de la presente invención. Véase, Sambrook et al., citado anteriormente y las referencias anteriores sobre la producción de la proteína. Véase también la solicitud de patente internacional PCT WO94/01139, publicada el 20 de enero de 1994.
En síntesis, el ADN que codifica el péptido/polipéptido seleccionado se inserta en un vector o plásmido que contiene otras secuencias de flanqueo opcionales, un promotor, una secuencia líder mARN, un sitio de iniciación y otras secuencias reguladoras capaces de dirigir la multiplicación y expresión de esa secuencia in vivo o in vitro. Estos vectores permiten la infección de las células del paciente y la expresión de la secuencia del gen sintético in vivo o su expresión como una proteína/un péptido o una proteína/péptido de fusión in vitro.
La composición resultante se puede formular en una composición del Epítopo I con cualquier número de inmunogenes opcionales y cribar en busca de eficacia mediante ensayos in vivo. Dichos ensayos emplean la inmunización de un animal, por ejemplo, un conejo o un simio, con la composición, y la evaluación de los títulos del anticuerpo contra las proteínas Tat del VIH-1 o contra los péptidos detectores sintéticos correspondientes a las secuencias de Tat variantes (tal y como se muestra en los ejemplos que siguen a continuación).
I. Composiciones de los anticuerpos de la invención
La composición de anticuerpos de un mamífero aislado que está dirigida contra un péptido o polipéptido de la invención, tal y como se ha descrito anteriormente, es también un aspecto de esta invención. Dichas composiciones de anticuerpos policlonales se producen inmunizando a un mamífero con una composición peptídica/polipeptídica que contiene una gran variedad de inmunogenes del Epítopo I, II, III y/o IV e inmunogenes opcionales, tal y como se ha descrito anteriormente.
Entre los mamíferos adecuados se incluyen los primates, como por ejemplo los monos; animales de laboratorio más pequeños, tales como por ejemplo los conejos y ratones, así como animales más grandes, tales como por ejemplo el caballo, la oveja y las vacas. Dichos anticuerpos también se pueden producir en animales transgénicos. Sin embargo, un huésped deseable para generar anticuerpos policlonales contra una composición de esta invención incluye a los seres humanos.
Los anticuerpos policlonales generados en el mamífero expuesto a la composición se aíslan y purifican a partir del plasma o suero del mamífero inmunizado mediante técnicas convencionales. Entre las técnicas de recogida convencionales se pueden incluir la plasmaféresis, entre otras.
Tales composiciones de anticuerpos policlonales pueden por sí mismas ser empleadas como composiciones farmacéuticas de esta invención. De forma alternativa, se pueden desarrollar otras formas de anticuerpos utilizando técnicas convencionales, incluyendo anticuerpos monoclonales, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y anticuerpos completamente humanos. Véase, por ejemplo, Harlow et al., Antibodies A Laborarory Manual, Laboratorio de Cold Spring Harbor, (1988); Queen et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. EE.UU., 86:10029-10032 (1989); Hodgson et al., Bio/Technologyo 9:421 (1991); Solicitud de PCT internacional PCT/GB91/01554, Publicación Nº W092/04381 y la Solicitud de PCT internacional PCT/GB93/00725, Publicación Nº W093/20210. Se pueden desarrollar otros anticuerpos anti-Tat cribando hibridomas o bibliotecas combinatorias, o expresiones en fago de los anticuerpos [W. D. Huse et al., Science, 246:1275-1281 (1988)] utilizando los anticuerpos monoclonales o policlonales producidos de conformidad con esta invención y las secuencias de aminoácidos de los inmunogenes opcionales o del Epítopo I, II, III o IV.
Estas composiciones de anticuerpos se unen a más del 95%, y preferentemente a más del 99% de las variantes de la proteína Tat conocidas del VIH-1, e impiden que las proteínas Tat secunden la multiplicación adicional del VIH-1. Por lo tanto, estos anticuerpos son útiles en las formulaciones y métodos farmacéuticos descritos a continuación.
J. Composiciones farmacéuticas de la invención
Como otro aspecto de esta invención, una composición farmacéutica útil para inducir anticuerpos que reaccionen con más del 95%, preferentemente más del 99%, de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas y dificulten la multiplicación del VIH-1 puede comprender como sus agentes activos, de uno o más de los péptidos o polipéptidos de los Epítopos I o II, y, opcionalmente los Epítopos III o IV. Entre las diversas composiciones deseables se incluyen los siguientes componentes descritos anteriormente:
(a)
un inmunogen peptídico/polipeptídico que contiene dos, tres o cuatro y preferentemente las cuatro secuencias de aminoácidos del Epítopo I, ID DE SECUENCIA Nº: 6-9;
(b)
un inmunogen peptídico/polipeptídico que contiene al menos una de las secuencias de aminoácidos del Epítopo II;
(c)
un gen sintético que codifica una o más de las secuencias del Epítopo I, o del Epítopo II, y, opcionalmente del Epítopo III o del Epítopo IV tal y como se ha descrito anteriormente;
(d)
una molécula sintética descrita anteriormente; y
(e)
un virus recombinante que transporta la molécula o el gen sintéticos;
El/Los componente(s) activo(s) seleccionado(s) está(n) presente(n) en un portador aceptable farmacéuticamente, y la composición puede contener ingredientes adicionales. Las formulaciones farmacéuticas que contienen las composiciones de esta invención pueden contener otros agentes activos, tales como por ejemplo agentes estimulatorios de célula T para los MAPs, adyuvantes y las citoquinas inmunoestimulatorias, tales como por ejemplo IL-12 y otras citoquinas bien conocidas, para las composiciones proteicas/peptídicas. Todas estas composiciones farmacéuticas pueden intervenir para disminuir los niveles virales de un mamífero.
Como composiciones farmacéuticas, estas composiciones que están compuestas de
Secuencias de aminoácidos del Epítopo I y/o II, y/o III, y/o IV con secuencias de aminoácidos inmunogénicos opcionales están mezcladas con un vehículo farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración como una composición proteica para la profilaxis o tratamiento de las infecciones de los virus. Estas proteínas se pueden combinar en un preparado farmacéutico único para su administración. Los portadores adecuados farmacéuticamente aceptables para su uso en una composición proteica inmunogénica de la invención son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica. Entre dichos portadores se incluyen, por ejemplo, la solución salina, la solución salina tamponada, un adyuvante seleccionado, tal como por ejemplo las suspensiones acuosas de los hidróxidos de aluminio y de magnesio, los liposomas, las emulsiones de aceite en agua y otros. También se pueden emplear adyuvantes adecuados en las composiciones que contienen proteínas de esta invención. La presente invención no está limitada por la selección del portador o adyuvante.
Entre los vehículos adecuados para el ADN directo, el ácido nucleico plasmídico, o la administración de vectores recombinantes se incluyen, sin limitación, la solución salina, o la sacarosa, la protamina, el polibreno, la polilisina, los policationes, las proteínas, CaPO_{4} o la espermidina. Véase, por ejemplo, la solicitud de PCT WO94/01139 y las referencias citadas anteriormente.
Las composiciones peptídicas/polipeptídicas y las moléculas o genes sintéticos in vivo son capaces de provocar en un mamífero huésped inmunizado, por ejemplo, un ser humano, una respuesta inmunitaria capaz de inhabilitar más de alrededor del 95% a alrededor del 99% de las variantes de la proteína Tat extracelular conocidas del VIH-1 y por consiguiente disminuir los niveles virales.
Aún otra composición farmacéutica útil para dificultar la multiplicación del VIH-1 está compuesta de una composición de anticuerpos tal y como se ha descrito en detalle anteriormente. En una composición farmacéutica, los anticuerpos pueden transportarse en una solución salina u otro portador adecuado. Las composiciones de anticuerpos son capaces de proporcionar una inhabilitación de Tat inmediata, provista de forma exógena.
La preparación de estas composiciones aceptables farmacéuticamente, a partir de los componentes anteriormente descritos, que tienen un pH, isotonicidad, estabilidad y otras características convencionales adecuadas está dentro de la habilidad de la técnica.
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K. Método de la invención - Cómo dificultarla multiplicación del VIH-1
De conformidad con la presente invención, las composiciones de la invención se pueden utilizar para reducir los niveles virales del VIH-1 exponiendo a un ser humano a las composiciones farmacéuticas que inducen anticuerpos de Tat descritas anteriormente, induciendo activamente anticuerpos que reaccionan con más del 95%, preferentemente más del 99%, de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas, y dificultando la multiplicación del virus in vivo. Este uso es adecuado para un sujeto infectado con el VIH-1 con un sistema inmunitario competente, o un sujeto no infectado o infectado de forma reciente. El uso induce anticuerpos que reaccionan con las proteínas Tat del VIH-1, anticuerpos que reducen la multiplicación viral durante cualquier infección aguda en fase inicial con el VIH-1 y minimizan la viremia crónica que lleva al SIDA. Este uso también reduce la multiplicación viral crónica en sujetos infectados, de nuevo minimizando la progresión hacia el SIDA.
En una realización, las composiciones farmacéuticas se pueden administrar de forma terapéutica a un ser humano infectado con el VIH-1 con un sistema inmunitario competente para el tratamiento o control de la infección viral. Dicho ser humano infectado puede ser asintomático. En una realización similar, las composiciones farmacéuticas se pueden administrar a un ser humano no infectado como profilaxis.
En estos dos casos, las composiciones farmacéuticas preferentemente contienen las composiciones peptídicas/poli-
peptídicas, las moléculas o genes sintéticos, el virus recombinante o la bacteria recombinante comensal. Cada uno de estos componentes activos de la composición farmacéutica induce activamente en el ser humano expuesto la formación de anticuerpos anti-Tat que bloquean la transferencia de Tat de células infectadas a otras células infectadas o no infectadas. Esta acción reduce la multiplicidad de la infección y bloquea que se desencadene una expansión viral del VIH-1, y por lo tanto disminuye los niveles virales. En pacientes que ya han sido infectados, este método de reducción de los niveles virales puede reducir la viremia crónica y la progresión hacia el SIDA. En seres humanos no infectados, esta administración de las composiciones de la invención puede reducir la infección aguda y por tanto minimizar la viremia crónica que lleva a la progresión hacia el SIDA.
En aún otro aspecto de la invención, las composiciones se pueden utilizar para reducir los niveles virales del VIH-1 administrando a un ser humano, que es incapaz de desarrollar una respuesta inmunitaria rápida o efectiva a la infección con el VIH-1, una composición farmacéutica que contiene las composiciones de anticuerpos descritas anteriormente. El uso puede implicar administrar de forma crónica la composición. Entre tales pacientes apropiados para el tratamiento con este método están los pacientes infectados con el VIH-1 que están inmunodeprimidos por la enfermedad y son incapaces de desarrollar una respuesta inmunitaria fuerte. En fases avanzadas de la infección con el VIH-1, la probabilidad de generar títulos efectivos de anticuerpos es menor, debido a la debilitación del sistema inmunitario asociada con la enfermedad. Así mismo, entre tales pacientes se encuentran mujeres embarazadas infectadas con el VIH-1, neonatos de madres infectadas, y pacientes no inmunizados con una supuesta exposición (por ejemplo, un ser humano que se ha clavado sin darse cuenta una aguja usada por un ser humano infectado con el VIH-1).
Para tales pacientes, el uso de la invención preferentemente emplea como la composición farmacéutica la composición de anticuerpos de la invención, que es una composición de anticuerpos policlonales preparada en otros mamíferos, preferentemente seres humanos normales. De forma alternativa, se pueden utilizar las otras formas de anticuerpo descritas anteriormente. Estas composiciones de anticuerpos se administran como inmunoterapia pasiva para inhibir la multiplicación viral y disminuir la carga viral. Los anticuerpos exógenos que reaccionan con más del 95%, preferentemente más del 99%, de las proteínas Tat conocidas del VIH-1 proporcionan en el paciente una inhabilitación inmediata de la transferencia del Tat de las células infectadas viralmente a otras células infectadas o no infectadas. De conformidad con este uso, el paciente se puede tratar de forma crónica con la composición de anticuerpos para un régimen de tratamiento prolongado.
En cada uno de los usos anteriormente descritos, estas composiciones de la presente invención se administran a través de una vía adecuada, por ejemplo, a través de la vía subcutánea, oral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, nasal, o inhalación. La vía de administración preferente en este momento es la intramuscular para las composiciones inmunizadoras (de inducción activa) e intravenosa o intramuscular para las composiciones de anticuerpos (de terapia pasiva). Los vectores virales recombinantes o ADN desnudo se administra(n) preferentemente de forma intramuscular, sin embargo, ciertos otros vectores virales recombinantes se pueden administrar oralmente.
La cantidad de las secuencias de ácido nucleico, péptidos o proteínas de la invención presente en cada dosis de la vacuna se selecciona con relación a la consideración de la edad, peso, sexo, condición física general del paciente y cosas por el estilo. La cantidad del componente activo requerida para inducir una respuesta inmunitaria, preferentemente una respuesta protectora, o producir un efecto exógeno en el paciente sin efectos secundarios adversos significativos varía dependiendo de la composición farmacéutica empleada y la presencia opcional de un adyuvante (para las composiciones que contienen proteínas).
Generalmente, para las composiciones que contienen proteína/péptido, proteína de fusión, MAP o proteína unida, o composición de anticuerpos, cada dosis estará compuesta de entre alrededor de 50 \mug a alrededor de 2 mg de los inmunogenes peptídicos/polipeptídicos por mL de una solución estéril. Una dosificación más preferente puede ser de alrededor de 500 \mug de inmunogen. Una persona experta en la técnica también puede considerar otras gamas de dosificación. Las dosis iniciales pueden ser seguidas opcionalmente por dosis de refuerzo sucesivas, cuando así se desee.
Las composiciones de anticuerpos de la presente invención se pueden emplear en tratamientos crónicos para sujetos en riesgo de infección aguda debido a pinchazos con agujas o infección maternal. Una frecuencia de dosificación para tales infecciones "agudas" puede ir de dosificaciones diarias a una vez o dos veces a la semana de forma intravenosa o intramuscular, con una duración de alrededor de 6 semanas. Las composiciones de anticuerpos de la presente invención también se pueden emplear en tratamientos crónicos para pacientes infectados, o pacientes con VIH en fase avanzada. En pacientes infectados, la frecuencia de la administración crónica puede ir de dosificaciones diarias a una vez o dos veces a la semana de forma intravenosa o intramuscular, y puede depender de la vida media del inmunogen (por ejemplo, de alrededor de 7-21 días). Sin embargo, la duración del tratamiento crónico para dichos pacientes infectados se prevé que sea un periodo indeterminado pero prolongado.
De forma alternativa, las composiciones de esta invención se pueden diseñar para una administración directa de moléculas o genes sintéticos de esta invención como "ADN desnudo". Como con las composiciones inmunogénicas de proteínas, las cantidades de los componentes en las composiciones de vectores y ADN y el modo de administración, por ejemplo, inyección o intranasal, se pueden seleccionar y ajustar por parte de una persona experta en la técnica. Generalmente, cada dosis estará compuesta de entre alrededor de 50 \mug a alrededor de 1 mg de ADN que codifica los inmunogenes por mL de una solución estéril.
Para los virus recombinantes que contienen las moléculas o genes sintéticos, las dosis pueden ir de alrededor de 20 a alrededor de 50 ml de solución salina que contiene concentraciones de desde alrededor de 1 x 10^{7} a 1 x 10^{10} ufp/ml de virus recombinante de la presente invención. Una dosis humana preferente es de alrededor de 20 ml de solución salina con las concentraciones anteriores. Sin embargo, se entiende que una persona experta en la técnica puede alterar dichas dosificaciones dependiendo de la identidad del virus recombinante y la composición del inmunogen que se está administrando al huésped.
Por consiguiente, las composiciones de esta invención están diseñadas para retrasar o minimizar la infección mediante el virus seleccionado de un mamífero no infectado, por ejemplo, un ser humano. Dichas composiciones por tanto tienen utilidad como vacunas. Los anticuerpos anti-proteína Tat no son reactivos con las proteínas del VIH-1 utilizadas en ensayos de diagnóstico para detectar la seroconversión tras la infección. De este modo, los sujetos tratados con las composiciones de esta invención no estarían marcados con pruebas de falso positivo en busca de la infección con el VIH-1, y seguiría siendo posible detectar la seroconversión si los sujetos tratados sí han sido infectados con el VIH-1.
El proporcionar a un mamífero las composiciones de esta invención, tanto como una composición que contenga proteínas/péptidos o mediante la administración de una secuencia de ácido nucleico novedosa que codifique el inmunogen, ofrece una estrategia radicalmente diferente para la vacunación contra el SIDA porque permite la disminución de los niveles virales mediante una inhabilitación biológica de más de alrededor del 95%, y preferentemente más de alrededor del 99%, de las variantes de la proteína Tat del VIH-1 conocidas, disminuyendo la multiplicación del VIH-1.
El uso de las composiciones que contienen inmunogenes de Tat tiene una ventaja especialmente deseable en contraste con otros tratamientos y métodos profilácticos empleados contra tales virus. Debido a que la inhabilitación de la proteína Tat inhibe de forma extracelular la multiplicación de todas las cepas o cuasiespecies del VIH sin discriminación, no crea una presión selectiva sobre el virus precursor mismo para la selección de variantes mutantes del virus. Por consiguiente, el bloquear la captación de proteína Tat por parte de las células del paciente no solamente reduce el nivel de la viremia, sino que además lo hace de una manera que impide la selección de "variantes de escape".
De manera adicional, la invención está compuesta de un método para tratar activamente a sujetos infectados con VIH-1 asintomáticos con viremia, dado que durante el curso de la enfermedad, la proteína Tat extracelular probablemente contribuye a la infección persistente y las anomalías inmunitarias que están presentes en esta fase de la infección con el VIH-1. La inhabilitación de la proteína Tat extracelular por anticuerpos inducidos mediante la inmunización de conformidad con esta invención puede reducir la viremia con un control inmunitario más efectivo, y dar por resultado el retraso o prevención de la progresión hacia el SIDA.
El mecanismo de la presente invención tal y como se ha descrito anteriormente es útil a la hora de dificultar el curso de la infección viral y de producir unos resultados clínicos deseables. Más específicamente, las composiciones de esta invención son capaces de reducir la viremia en pacientes ya infectados con el virus bloqueando la posterior captación de la proteína Tat por parte de células no infectadas. Las composiciones de la presente invención, utilizadas o bien solas o en conjunción con otros regímenes terapéuticos para pacientes infectados con el VIH, se prevé que ayuden en la reducción de la viremia y la prevención del deterioro clínico.
Para tales usos terapéuticos, las formulaciones y modos de administración son básicamente idénticos a los descritos específicamente anteriormente y se pueden administrar simultáneamente con otros usos terapéuticos convencionales para la infección viral específica. Para el uso terapéutico o el uso profiláctico, pueden ser convenientes dosificaciones sucesivas de las composiciones inmunizadoras, tales como por ejemplo una dosis de refuerzo anual o una dosis de refuerzo en otros intervalos de tiempo.
L. Kits de diagnóstico de esta invención
Los péptidos y polipéptidos descritos anteriormente también pueden emplearse como reactivos de un kit útil para la medición y detección de títulos y especificidades de anticuerpos inducidos mediante vacunación con las composiciones descritas anteriormente. El kit de la invención puede incluir uno o más péptidos de los Epítopos I al IV. En una realización, cada péptido tiene en su extremo N la biotina de las proteínas y un espaciador, por ejemplo, -Ser-Gly-Ser-Gly- [ID DE SECUENCIA Nº: 30]. De forma alternativa, el péptido puede tener en su extremo C un espaciador, por ejemplo, -Gly-Ser-Gly-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 90], y la biocitina de las proteínas. Estas realizaciones permiten a los péptidos estar unidos a un soporte sólido recubierto de avidina, por ejemplo, una placa o perlas. Desde luego, también pueden emplearse para los mismos efectos otros agentes de unión conocidos por aquellas personas expertas en la técnica del ensayo diagnóstico. También se proporcionan en el kit reactivos marcados que detectan la unión de un anticuerpo a los péptidos del Epítopo inmovilizados, tales como por ejemplo una inmunoglobulina anti-humana de cabra o algo similar. La etiqueta en el reactivo se puede seleccionar de entre las muchas etiquetas de diagnóstico conocidas, tales como por ejemplo los compuestos radiactivos, las proteínas y los compuestos fluorescentes, las enzimas colorimétricas, etc. El kit por lo tanto también contiene reactivos variados y aparatos para la lectura de las etiquetas, por ejemplo, ciertos substratos que interactúan con una etiqueta enzimática para producir una señal de color, etc., aparatos para tomar muestras de sangre, así como viales adecuados y otros componentes de ensayo diagnóstico. Una persona experta en la técnica también puede seleccionar fácilmente otros componentes de diagnóstico convencionales para este kit.
Tales kits y reactivos pueden emplearse en un método para detectar los títulos y patrones de reactividad de los anticuerpos en sujetos vacunados con las composiciones de esta invención. Un método para determinar la presencia y/o título de los anticuerpos inducidos mediante la inmunización a un inmunogen de Tat incluye los pasos de localizar una muestra biológica de un sujeto inmunizado, por ejemplo, un fluido corporal, preferentemente sangre, suero o plasma, pero también puede ser orina, saliva y otros fluidos o tejidos, con una o más de las secuencias de unión del Epítopo I, II, III o IV, preferentemente inmovilizadas en un soporte sólido, tal como por ejemplo una placa o perlas. Las secuencias de unión del Epítopo I, II, III o IV empleadas en este método pueden ser las regiones de unión mínimas, no modificadas. Por consiguiente, dichas secuencias incluyen -Val-Asp-Pro-Y-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 86] o -Glu-Pro-Val-Asp-Pro-Y-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 124], en las que Y se selecciona del grupo que consta de Arg, Lys, Ser y Asn; y/o -Lys-X-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys- [ID DE SECUENCIA Nº: 87], en la que X se selecciona del grupo que consta de Gly 6 Ala; y/o -Arg-Arg-X-Z-A-Y-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 88], en la que X se selecciona del grupo que consta de Ala, Pro, Ser y Gln; en la que Y se selecciona del grupo que consta de Asp, Asn, Gly y Ser; en la que Z se selecciona del grupo que consta de Pro e His; en la que A se selecciona del grupo que consta de Gln y Pro; y/o -Ser-Gln-X-His-Gln-Y-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 89], en la que X se selecciona del grupo que consta de Asn y Thr; en la que Y se selecciona del grupo que consta de Ala y Val.
Una vez que la muestra biológica se expone a los péptidos inmovilizados durante un periodo de tiempo suficiente, el soporte se lava para eliminar cualquier material de la muestra biológica que no esté unido a los péptidos. Tales pasos de lavado son convencionales en los ensayos de diagnóstico, y se llevan a cabo con solución salina. Si los anticuerpos contra los Epítopos I, o II, o III, o IV, o una combinación de los mismos, fueran inducidos en el sujeto mediante el tratamiento anteriormente descrito, los péptidos inmovilizados se habrían unido con anticuerpos procedentes de la muestra biológica. A partir de entonces, se añade un reactivo marcado al material en el soporte para detectar la unión entre los péptidos en el soporte sólido y el anticuerpo en dicha muestra biológica. Preferentemente, tal reactivo es una inmunoglobulina anti-humana, tal como por ejemplo una inmunoglobulina anti-humana de cabra. La etiqueta se selecciona de entre una amplia serie de etiquetas de diagnóstico empleadas de forma convencional, tal y como se ha analizado anteriormente. En una realización, la etiqueta puede ser una enzima colorimétrica, que al contacto con un substrato produce una señal de color perceptible. La presencia y/o intensidad del color proporciona evidencia de la inducción de anticuerpos en el sujeto tratado. Este ensayo se puede emplear para determinar la eficacia de la inmunización, así como para supervisar el estado inmunitario de un paciente.
De nuevo, la selección de pasos de ensayo específicos, así como una diversidad de sistemas de etiquetas perceptibles, está bien dentro de la habilidad de la técnica. Dicha selección es rutinaria y no limita la presente invención.
M. Ventajas de la invención
Una de las ventajas de las composiciones de esta invención es el pequeño número de inmunogenes requeridos para su inclusión en una composición de esta invención para reaccionar de forma cruzada con más del 95% a más del 99% de las variantes de la proteína Tat conocidas del VIH-1 del subtipo B común. Tal y como se ha mencionado anteriormente, un inmunogen del Epítopo I en el que Y era Lys [ID DE SECUENCIA Nº: 7] podría ser suficiente para una reactividad cruzada completa a las cuatro variantes de la posición Y, y se podría utilizar por sí solo en una composición inmunogénica. De forma alternativa, tal y como se ilustra en los ejemplos que siguen a continuación, la composición inmunogénica del Epítopo I que contiene las cuatro secuencias de aminoácidos del Epítopo I reacciona de forma cruzada con 387 de las 399 proteínas Tat del VIH-1 del subtipo B común, así como con las 18 secuencias de la proteína Tat de los subtipos que no son B del VIH-1 que son menos frecuentes. Por consiguiente, una única composición puede emplearse útilmente a la hora de proteger contra o tratar la infección, causada por la inmensa mayoría de cepas del VIH-1 que se pueden encontrar.
Además, habiendo identificado los epítopos precisos en el Tat contra los que se desea la unión (esto es, AA2-10, AA41-51, ó AA56-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) se pueden identificar fácilmente nuevos inmunogenes peptídicos de Tat deseables a partir de cepas del VIH-1 recién producidas o cepas recién descubiertas utilizando los métodos descritos en el presente documento, e incluirlos en las composiciones. Esta flexibilidad permite que las composiciones de esta invención sean útiles profilácticamente hablando contra cualquier nueva cepa o cepas del VIH-1 que se identifiquen en el futuro. En vista de las enseñanzas del presente documento, una persona experta en la técnica se espera que sea capaz fácilmente de incorporar nuevas combinaciones de los inmunogenes de Tat (y las construcciones de ácido nucleico que las codifican) a las composiciones.
Por ejemplo, el uso de técnicas convencionales tales como por ejemplo la RCP y las series de oligonucleótidos de gran densidad [M. J. Kozal et al, Nature Med., 2:753 (1996)] permite a una persona experta en la técnica obtener las secuencias de aminoácidos de una larga serie de proteínas Tat del VIH-1 que representan variantes de aislados clínicos de subtipos y cepas del VIH-1. La utilización de dichas técnicas permite la determinación de otras variantes del subtipo B del VIH-1 así como de otros subtipos en países subdesarrollados, que no han sido estudiados tan detenidamente hasta la fecha. La determinación de nuevas secuencias de Tat permitirá la fácil inclusión de los péptidos correspondientes como inmunogenes en las composiciones de esta invención, permitiendo la inducción de una respuesta de los anticuerpos contra otras proteínas Tat poco comunes del VIH-1.
Los estudios sobre la reactividad cruzada con anticuerpos generados contra los péptidos sintéticos correspondientes a cada variante de Tat se pueden utilizar para eliminar la necesidad de inmunizar con variantes de Tat en las que los cambios en la secuencia son inmunologicamente silenciosos, en que estos péptidos están fuertemente unidos mediante anticuerpos contra la secuencia de consenso u otras variantes.
Los siguientes ejemplos ilustran métodos preferentes para preparar las composiciones de la invención y utilizar estas composiciones para inducir anticuerpos contra las proteínas Tat del virus en un huésped inmunizado.
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Ejemplo 1
Estudios inmunológicos sobre secuencias de aminoácidos de proteínas Tat mínimas necesarias para unirse a anticuerpos para el epítopo I en la proteína Tat del VIH-1
Un péptido que corresponde a los aminoácidos 4-16 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1 que se ilustra en la Figura 1 fue sintetizado tal y como se describe a continuación. Esta secuencia está entre las representaciones de secuencias más frecuentes en estas posiciones en 31 secuencias de proteína Tat del subtipo B común según viene en informes de la base de datos del VIH del NIAID (Instituto nacional de alergias y enfermedades infecciosas). Esta secuencia fue elegida como un supuesto inmunogen, denominado Epítopo I.
A. Síntesis peptídica - Péptidos inmunizadores
La secuencia de aminoácidos de este inmunogen -Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 28] fue sintetizada mediante metodología de fase sólida en soportes de polipropileno de conformidad con los métodos de H. M. Geysen et al., Immunol. Meth., 102:259 (1987), con un cisteinilo N-terminal siendo incorporado para facilitar la unión a una proteína portadora. El extremo N se dejó como una amina libre y el extremo C fue amidado en los péptidos inmunizadores para la mayoría de los experimentos para los que se recogen datos en la Tabla 2 que sigue a continuación. Los péptidos inmunizadores fueron generalmente purificados hasta alcanzar una pureza de más del 95% mediante CLAP de fase inversa, y la pureza se confirmó adicionalmente mediante espectrometría de masas (EM).
Los péptidos inmunizadores fueron unidos de forma covalente a una proteína portadora del toxoide de la difteria (TD) a través de la cadena lateral del cisteinilo mediante el método de A. C. J. Lee et al., Molec. Immunol., 17:749 (1980), utilizando una proporción de 6-8 moles de péptido por mol de toxoide de la difteria.
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B. Síntesis peptídica - Péptidos detectores
Un péptido correspondiente a la secuencia de aminoácidos del péptido del inmunogen fue sintetizado mediante el método de Geysen, citado anteriormente, para su uso en ensayos ELISA para la detección de la reactividad y la reactividad cruzada. También fueron sintetizados péptidos adicionales con truncaciones de N-terminal y C-terminal.
Para la mayoría de los experimentos de los que se informa a continuación en las Tablas 2 y 3, se había añadido a los péptidos detectores un -Ser-Gly-Ser-Gly- [ID DE SECUENCIA Nº: 30] N-terminal, con biotinilación del nuevo extremo N, y el C-terminal continuó siendo un ácido libre. Los péptidos detectores C-terminal para algunos de estos experimentos habían sido sintetizados sin querer con un extremo C amidado, lo que podría haber llevado a una unión falsamente alta para la ID DE SECUENCIA Nº: 32 -Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser- de la que se informa en las Tablas 2 y 3 que siguen a continuación. Por consiguiente, varios péptidos fueron sintetizados de nuevo con grupos C-terminal adecuados y las partes pertinentes del experimento se repitieron con anticuerpos contra -Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 28], y se informó de los resultados en la Tabla 3 que sigue a continuación. Estos péptidos detectores tenían una pureza que superaba el 70% mediante espectrometría de masas y no fueron purificados adicionalmente.
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C. Inmunización de conejos
Los conjugados peptídicos fueron captados en agua purificada y emulsionados 1:1 con adyuvante completo de Freund (ACF) o adyuvante incompleto de Freund (AIF) [ANTIBODIES - A LABORATORY MANUAL, Eds. E. Harlow y P. Lane, Laboratorio de Cold Spring Harbor (1998)]. El volumen total por conejo era de 1 ml, y éste contenía 100 \mug de péptido unido a DT.
Se utilizaron dos conejos para el péptido inmunizador, con la inyección intramuscular (IM) inicial con conjugado en ACF y una dosis de refuerzo IM posterior a las 2 semanas con conjugado en AIF. Se extrajo sangre antes de la primera inyección y se tomaron más muestras de sangre 3 y 5 semanas después de la inyección de refuerzo.
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D. Determinación ELISA de la unión de antisueros a péptidos biotinilados
Estos ensayos se llevaron a cabo tal y como aparece descrito en H. M. Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 81:3998 (1983). En resumen, utilizando placas de 96 pocillos Nunc Immuno Maxisorb^{TM}, los péptidos biotinilados fueron unidos a placas recubiertas de estreptavidina y, con lavado con solución salina tamponada con fosfato (SSTF) entre los pasos, se llevaron a cabo incubaciones sucesivas con diluciones de antisuero e inmunoglobulina anti-conejo conjugada de peroxidasa de rábano picante para detectar anticuerpos unidos. Las placas se desarrollaron con ABTS, con una lectura D.O. a 405 nm. Una absorbencia mayor de D.O. 1,0 se tomó como positiva y los títulos se determinaron a partir del doblaje de las diluciones de cada antisuero. Se calculó el título medio geométrico (TMG) para cada par de antisueros para un inmunogen determinado.
TABLA 2
8 
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TABLA 3
9 
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Los resultados ELISA que se exponen en las Tablas 2 y 3 demostraron que los anticuerpos contra el primer inmunogen estaban reaccionando con la secuencia -Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro [AA 5-10 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1]. La truncación de N-terminal o C-terminal de estas secuencias redujo el título ELISA. A partir de los resultados de las Tablas 2 y 3 juntos, el Val N-terminal del péptido del Epítopo I hace una pequeña aportación a la unión de anticuerpos (la supresión da el 65% de la unión). Por lo tanto la definición de la región primaria de unión de anticuerpos del Tat del VIH-1, denominada en el presente documento como el Epítopo I, es: -Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 34].
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E. Análisis de la secuencia mínima del Epítopo I de Tat del VIH-1
El siguiente experimento se llevó a cabo utilizando como la secuencia peptídica inmunizadora: Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-NH_{2} [ID DE SECUENCIA Nº: 28]. Tal y como se demostró mediante los resultados de la Tabla 3, la secuencia mínima del Epítopo I con unión máxima del anticuerpo se confirma como Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro [ID DE SECUENCIA Nº: 34]. Las variaciones en la unión con extensiones C-terminal no son significativas. La truncación de Val N-terminal ó Pro C-terminal lleva a la reducción moderada de los títulos de unión, pero la truncación más allá de esto lleva a la pérdida casi completa de la unión específica, indicando que Asp-Pro-Arg-Leu-Glu (aminoácidos 5-9 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) son los aminoácidos más importantes para crear interacciones con el anticuerpo específico (Véase, por ejemplo, la Figura 3). El TMG se expone que es el % de TMG en el péptido detector que contiene la secuencia inmunogénica.
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F. Efectos de la extensión del inmunogen del Epítopo I en los títulos de los anticuerpos
La extensión N terminal de la secuencia del epítopo en el inmunogen no afecta a la inmunogenicidad. Por contraste, la extensión C terminal hasta Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-NH_{2} [ID DE SECUENCIA Nº: 28] da por resultado que el título aumente 5 veces. La presente secuencia inmunizadora óptima parece ser la ID DE SECUENCIA Nº: 28. El TMG en la ID DE SECUENCIA Nº: 28 se expone como el % del TMG de los antisueros contra la ID DE SECUENCIA Nº: 28 en este péptido, tal y como se muestra en la Tabla 4.
TABLA 4
10
G. Patrón de unión de anticuerpos inducidos por inmunogenes extendidos de modo N-terminal
La unión de antisueros contra los inmunogenes del Epítopo I con extensiones de la secuencia N-terminal a través del Met N-terminal fue examinada en los péptidos detectores con longitud completa y truncación de N-terminal ó C-terminal. En estos casos, algunos de los péptidos inmunizadores fueron sintetizados con Cys-amida C-terminal para la unión a la proteína portadora y los péptidos detectores correspondientes fueron sintetizados con una -Gly-Ser-Gly-Ser-biocitina-amida C-terminal [ID DE SECUENCIA Nº: 91] para la unión a las placas recubiertas de avidina.
TABLA 5
11
TABLA 6
12
A partir de los datos anteriores es evidente que la extensión N- unión de anticuerpos a través de Glu_{2} de la secuencia de la proteína Tat del VIH-1.
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TABLA 7
13 
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Estos datos muestran que se obtienen unos títulos de anticuerpos anti-Tat totales muy similares con los diversos inmunogenes N-terminal pero con una distribución ligeramente diferente de las regiones de unión.
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Ejemplo 2
Variaciones de secuencia en el epítopo I de la proteína Tat del VIH-1 y las reactividades cruzadas inmunológicas de los antisueros contra estas secuencias
Se analizaron las variaciones en la secuencia de la proteína Tat AA 5-10 de la ID DE SECUENCIA Nº:1 en las secuencias disponibles en HUMAN RETROVIRUSES and AIDS 1996, publicado por el Grupo de Biofísica y Biología Teórica del Laboratorio Nacional de Los Álamos, Los Álamos, NM, y las secuencias adicionales obtenidas con la amabilidad de GenBank por parte de Esther Guzmán del Laboratorio de Los Álamos.
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A. Variaciones en las secuencias
Se obtuvieron 399 secuencias de hexapéptidos de Tat de aa 5-10 del subtipo B común del VIH-1, así como 18 de los subtipos que no son B (6 del subtipo A, 2 del subtipo C, 7 del subtipo D, 2 del subtipo F y 1 del subtipo U).
Para el subtipo B, 386 del total de 399 (97%) hexapéptidos tenían o bien Arg (289, 74%), 6 Lys (45, 11%), ó Ser (36, 9%) ó Asn (16, 4%) en la posición 3 como la única variación en los hexapéptidos. Las variaciones restantes (3%) estaban compuestas de:
-Gly-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro- (4) [ID DE SECUENCIA N°: 11],
-Asp-Pro-Gly-Leu-Glu-Pro- (2) [ID DE SECUENCIA N°: 14],
y ejemplos individuales de:
-Asp-His-Arg-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 41],
-Ala-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 12],
-His-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 13],
-Asp-Pro-Arg-Ile-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 15],
-Asp-Pro-Arg-Leu-Gly-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 16],
-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Ala- [ID DE SECUENCIA N°: 17] y
-Asn-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 18]. 
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Para las 18 secuencias del subtipo que no es B, 2 tenían Arg, 1 tenía Lys, 2 tenían Ser y 9 tenían Asn en la posición 3 de los hexapéptidos de aa 5-10, y otras variantes eran:
-Asp-Pro-Asn-Leu-Asp-Pro- (2) [ID DE SECUENCIA N°: 42] 
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y ejemplos individuales de
-Asp-Pro-Asn-Ile-Glu-Pro- [ID DE SECUENCIA N°: 43] y
-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Ser- [ID DE SECUENCIA N°: 44]. 
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B. Evaluación de la reactividad y reactividad cruzada inmunológicas de los cuatro inmunogenes primarios
Las secuencias detectoras e inmunizadoras fueron sintetizadas, tal y como se describe en el Ejemplo 1, para las siguientes secuencias [ID DE SECUENCIA Nº: 28 y 45 hasta el 47, respectivamente]:
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-Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-,
-Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-,
-Val-Asp-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-,
-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-. 
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Se inmunizó a los conejos y los antisueros se sometieron a ensayo mediante ELISA, tal y como se describe en el Ejemplo 1, en relación a la reactividad y la reactividad cruzada. Las autoreactividades se resumen en la Tabla 8.
TABLA 8
17 
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Las reactividades cruzadas entre estos inmunogenes primarios con residuos de aminoácidos variables en la posición 3 del Epítopo I se muestran en la Tabla 9. Téngase en cuenta que los resultados que se exponen a continuación son promedios con un antisuero muy poco reactivo.
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TABLA 9
18 
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Las Tablas 8 y 9 demuestran que cada variante es un inmunogen efectivo, pero en general hay solo una moderada reactividad cruzada entre las variantes. La mejor reactividad cruzada se obtiene con el inmunogen que contiene Lys 3. Esto implica que la cobertura óptima requeriría la inclusión de las cuatro variantes como inmunogenes en una composición primaria tal y como se ha descrito anteriormente.
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C. Evaluación de las reactividades cruzadas de otras variantes
Se hicieron péptidos detectores para todas las variantes del epítopo restantes y se sometieron a ensayo con referencia a la reactividad cruzada con los antisueros contra el inmunogen de hexapéptidos primario de la posición 3 adecuado. Se muestran las reactividades cruzadas frente a la autoreactividad con el inmunogen primario de la posición 3 adecuado en la Tabla 10.
TABLA 10
19 
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Los resultados de las Tablas 8-10 indican que la inmunización con los cuatro inmunogenes primarios generarían anticuerpos reactivos con más del 97% de las proteínas Tat del VIH-1 del subtipo B común. Curiosamente, los 18 subtipos que no son B de las bases de datos tenían secuencias del Epítopo I reactivas con anticuerpos contra los inmunogenes primarios.
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D. Inmunogenicidad de ciertas variantes del Epítopo I
Se sintetizaron los péptidos inmunizadores y detectores para los siguientes 2 péptidos variantes del Epítopo I, con inmunizaciones y ensayos ELISA de la forma que aparece en el Ejemplo 1. Se muestran los autotítulos (TMG) en la Tabla 11.
TABLA 11
20
Estos datos muestran que la inclusión de variantes poco comunes junto con los inmunogenes primarios amplía la cobertura de los anticuerpos contra tales variantes poco comunes del epítopo.
La inmunización con las cuatro secuencias primarias del Epítopo I puede inducir anticuerpos de título elevado reactivos con proteínas Tat de > 97% de todas las cepas del VIH-1. Esta cobertura puede ampliarse opcionalmente con la inclusión de secuencias variantes poco comunes adicionales del Epítopo I en la composición inmunizadora.
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E. Consecuencias de la extensión del inmunogen N terminal en la conservación inmunológica y la reactividad cruzada
Revisando las secuencias del Epítopo I estudiadas anteriormente la variación de mayor importancia en la extensión Glu-Pro- es la incidencia de una sustitución de Glu por Asp en el 9% de las secuencias. Sin embargo, tal y como se muestra en la Tabla 12, los anticuerpos contra los péptidos que contienen Glu son básicamente reactivos de forma cruzada con el péptido que contiene Asp correspondiente, y viceversa.
TABLA 12
21
Aparte de la variación entre Glu y Asp había solamente 7 otras variantes en estas dos posiciones (5 sustituciones Lys/Glu y 2 sustituciones Leu-Pro), llevando la conservación inmunológica del Epítopo I ampliado en las proteínas Tat del subtipo B del VIH-1 al 95%. Para las 18 secuencias del subtipo que no es B únicamente 16 contenían la secuencia correspondiente a la extensión Glu-Pro y, aparte de la variación Glu/Asp, todas eran Glu-Pro ó Asp-Pro excepto por dos secuencias del subtipo F (Glu-Leu), produciendo una conservación inmunológica del 88%. Por lo tanto, la inmunización con péptidos con secuencia N-terminal extendida aún proporciona una elevada incidencia de inmunoreactividad con una amplia muestra de secuencias de la proteína Tat del VIH-1 conocidas.
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Ejemplo 3
Definición de una secuencia de aminoácidos de unión de anticuerpos (Epítopo II) dentro de la secuencia lineal de 18 aminoácidos siguiendo a Cys_{37} de la proteína Tat del VIH-1
Un péptido correspondiente a aminoácidos 38-55 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1 que se ilustra en la Figura 1 fue sintetizado tal y como se ha descrito en el Ejemplo 1. Utilizando los métodos descritos en el Ejemplo 1, se detectó una respuesta de los anticuerpos de bajo título en conejos y la Tabla 28 resume los estudios que definen la secuencia implicada en esta unión de anticuerpos. El título medio geométrico (TMG) se presenta como el porcentaje del autotítulo.
TABLA 13
22
Estos resultados ELISA establecieron que los anticuerpos de bajo título inducidos se unían a la secuencia Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 43-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1). Por consiguiente, esta secuencia y la secuencia Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) fueron sintetizadas y se utilizaron para inmunizar conejos.
La inmunización con el epítopo mínimo, Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 43-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1), produjo anticuerpos de bajo título (TMG 1.000) mientras que, sorprendentemente, la inmunización con Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) indujo anticuerpos de título elevado (TMG 20.000) contra el péptido detector Phe-Ile-Thr-Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg [ID DE SECUENCIA Nº: 105].
La variación de secuencia que se produce dentro del Epítopo II fue analizada para permitir el diseño de inmunogenes que induzcan anticuerpos que reaccionen con la mayoría de las secuencias del Epítopo II. Se establecieron 441 variaciones de secuencia en los aminoácidos 41-51 de la proteína Tat del VIH-1 del subtipo B común, como lo fueron 21 de los subtipos que no eran B (7 del subtipo A, 4 del subtipo C, 7 del subtipo D, 2 del subtipo F y 1 del subtipo U). Para el subtipo B, 422 de 441 (96%) tenían la secuencia nominal con la excepción de una sustitución de Gly por Ala en 134 (32%). Para las secuencias del subtipo que no era B 20 de 21 (95%) tenían la secuencia nominal.
La reactividad de los anticuerpos inducidos por Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) fue estudiada titulando los antisueros contra Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) tal y como sigue en los péptidos detectores que se enumeran:
TABLA 14
23
Estos datos muestran que hay una reactividad cruzada inmunológica completa con la variante Ala y que la respuesta de los anticuerpos a Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) continúa dirigida al epitopo antes identificado Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 43-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1). Por lo tanto, la inmunización con Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) induce anticuerpos de título elevado que reaccionan con más del 96% de las proteínas Tat del VIH-1 conocidas.
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Ejemplo 4
Estudios inmunológicos sobre secuencias de aminoácidos de la proteína Tat mínimas necesarias para unirse al anticuerpo para el epítopo III en la proteína Tat del VIH-1
Se sintetizó un péptido que correspondía a aminoácidos 53-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1 que se ilustra en la Figura 1 tal y como se describe a continuación. La secuencia es las representaciones de secuencias más frecuentes en estas posiciones en 31 secuencias de la proteína Tat del subtipo B común de las que se informa en la base de datos del VIH del NIAID (Instituto nacional de alergias y enfermedades infecciosas). La secuencia fue elegida como un segundo supuesto inmunogen.
A. Síntesis peptídica - Péptidos inmunizadores
Las secuencias de aminoácidos del inmunogen, -Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 29] fueron sintetizadas tal y como se ha descrito en el Ejemplo 1 del Epítopo I. Los experimentos de los que se presentan datos vienen representados en las Tablas 15-16 que siguen a continuación. Los péptidos inmunizadores se purificaron generalmente hasta una pureza de más del 95% mediante CLAP de fase inversa, y la pureza fue adicionalmente confirmada mediante espectrometría de masas (EM). Los péptidos inmunizadores se unieron de forma covalente a la proteína portadora del toxoide de la difteria (TD) a través de la cadena lateral del cisteinilo tal y como se ha descrito en el Ejemplo 1A para el Epítopo I.
B. Síntesis peptídica - Péptidos detectores
Los péptidos correspondientes a la secuencia de aminoácidos del péptido del inmunogen fueron sintetizados mediante el método de Geysen, citado anteriormente, para su uso en ensayos ELISA para la detección de la reactividad y la reactividad cruzada. También se sintetizaron péptidos adicionales con truncaciones de N-terminal y C-terminal. Para la mayoría de los experimentos de los que se informa a continuación en la Tabla 15, a los péptidos detectores se les había añadido un -Ser-Gly-Ser-Gly-[ID DE SECUENCIA Nº: 30] N-terminal, con biotinilación del nuevo extremo N, y el C-terminal seguía siendo un ácido libre. Estos péptidos detectores tenían una pureza que superaba el 70% mediante espectrometría de masas y no fueron purificados adicionalmente.
C. Inmunización de conejos
Los conjugados peptídicos fueron captados en agua purificada y emulsionados 1:1 con ACF o AIF tal y como se ha descrito en el Ejemplo 1C. El volumen total por conejo era de 1 ml, y éste contenía 100 \mug de péptido unido a DT. Se utilizaron dos conejos para el péptido inmunizador, con la inyección intramuscular (IM) inicial con conjugado en ACF y una dosis de refuerzo IM posterior a las 2 semanas con conjugado en AIF. Se extrajo sangre antes de la primera inyección y se tomaron más muestras de sangre 3 y 5 semanas después de la inyección de refuerzo.
D. Determinación ELISA de la unión de antisueros a péptidos biotinilados
Estos ensayos se llevaron a cabo tal y como aparece descrito en H. M. Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 81:3998 (1983) y como se ha descrito en el Ejemplo I D para el Epítopo I. A partir de los resultados de la Tabla 15, la definición de otra región de unión de anticuerpos del Tat del VIH-1, a la que se denomina en el presente documento Epítopo III, es -Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 19].
E. Análisis de la secuencia mínima del Epítopo III de Tat del VIH-1
El siguiente experimento se llevó a cabo utilizando como la secuencia peptídica inmunizadora: Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser-NH_{2} [ID DE SECUENCIA Nº: 29]. Los resultados en la Tabla 15 siguiente ilustran que la secuencia mínima del Epítopo III con una unión máxima de anticuerpos es Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser [ID DE SECUENCIA Nº: 19]. Las extensiones de N-terminal o C-terminal de los péptidos detectores no producen una unión significativamente diferente. La truncación de Arg N-terminal lleva a una moderada reducción del título de unión, mientras que la truncación del siguiente Arg N-terminal o del Ser C-terminal lleva a casi la pérdida completa de la unión específica, indicando que Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser (aminoácidos 57-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) son los aminoácidos más importantes para crear interacciones con anticuerpos específicos (Véase la Figura 4). El TMG se presenta como el % del TMG en el péptido detector que contiene la secuencia inmunogénica.
TABLA 15
24
F. Epítopo III de Tat del VIH-1 - Efectos del inmunogen en los títulos de anticuerpos
Cada caso de extensión de C-terminal da por resultado la pérdida de inmunogenicidad y la reducción de títulos. Por contraste, la extensión de N terminal hasta un punto aumenta la inmunogenicidad, obteniéndose títulos máximos con Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser (aminoácidos 54-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) y produciéndose un descenso de la inmunogenicidad con Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- (aminoácidos 52-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) como el inmunogen. El TMG en Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- (aminoácidos 53-62 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) se presenta en la Tabla 16 como el % de TMG de los antisueros contra este péptido en este péptido detector.
TABLA 16
25
Ejemplo 5
Variaciones de secuencia en el epítopo III de la proteína Tat del VIH-1 y las reactividades cruzadas inmunológicas de los antisueros contra estas secuencias
Las variaciones en la secuencia de la proteína Tat de AA 56-72 fueron analizadas en las secuencias disponibles en HUMAN RETROVIRUSES and AIDS 1996, (citado anteriormente) y las secuencias adicionales [GenBank], tal y como se ha descrito en el Ejemplo 4.
A. Variaciones en las secuencias del Epítopo III
Había 482 secuencias del Epítopo III del subtipo B común del VIH-1 disponibles para analizar. La secuencia más frecuente que se encontró se ajustaba a la fórmula -Arg-Arg-X-Pro-Gln-Y-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 110], en la que X es Ala, Pro, Ser, ó Gln, e Yes Asp, Asn, Gly ó Ser. Este tipo de secuencia, que parece reactiva de forma cruzada desde el punto de vista inmunológico (véase a continuación), se encontró en 292 de las 482 (61%) de las secuencias de Tat disponibles.
Se produjeron otras variantes de la secuencia en menor incidencia y éstas incluían las enumeradas en la Tabla 17 que sigue a continuación.
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TABLA 17
26 
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Juntas estas secuencias representan el 85% de las variantes del Epítopo III, estando el resto compuesto de un gran número de variaciones de pequeña incidencia.
Las secuencias del Epítopo III estaban solamente disponibles de 18 ejemplos de subtipos que no eran B del VIH-1. A diferencia del Epítopo I, mostraban divergencia con respecto a las secuencias del subtipo B y opcionalmente un mayor número de secuencias se pueden seleccionar para la inclusión en la composición de esta invención, si se determinan secuencias del Epítopo III del subtipo que no es B adicionales y son deseables en una composición inmunogénica de esta invención.
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B. Evaluación de la reactividad y reactividad cruzada inmunológicas de las secuencias seleccionadas del Epítopo III
Las secuencias detectoras e inmunizadoras fueron sintetizadas, tal y como se ha descrito en el Ejemplo 1, para las secuencias en la Tabla 18. Los conejos fueron inmunizados y los antisueros fueron sometidos a ensayo mediante ELISA, tal y como se ha descrito en el Ejemplo 4, con referencia a la reactividad y reactividad cruzada. Los diversos antisueros y péptidos detectores fueron utilizados para determinar la inmunogenicidad de las diversas secuencias y el alcance de la reactividad cruzada inmunológica. La incidencia y la reactividad inmunológica de las secuencias del Epítopo III de la fórmula -Arg-Arg-X-Pro-Gln-Y-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 10] (véase lo anterior) se muestran en la Tabla 18. En la Tabla 18 que sigue a continuación, el porcentaje de reactividad cruzada se midió con el antisuero contra Cys-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 74], autotítulo = 46.115. Los resultados de la Tabla 18 demuestran que la inmunización con -Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 29] deberán proporcionar una reactividad cruzada efectiva con la mayoría de estas variantes, representada en el 61% de las cepas del VIH-1.
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TABLA 18
27 
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La inmunización con -Arg-Arg-Ala-Pro-Pro-Asp-Asn- [ID DE SECUENCIA Nº: 50] y -Arg-Arg-Ala-Pro-Pro-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 20] produjo anticuerpos que reaccionaron de forma cruzada con los dos péptidos detectores, tal y como se muestra en la Tabla 19. Por lo tanto, la inclusión de cualquiera de las secuencias en una composición inmunizadora de esta invención proporciona anticuerpos contra las variantes de la proteína tat del Epítopo III en un 41/482 (8,5%) adicional de las cepas del VIH-1.
La inmunización con -Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-His-Gln-Asn-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 52] [20/482 (4%)] indujo anticuerpos que dieron un autotítulo de 209.286 y una reactividad cruzada de 5.356 (2,5%) con -Arg-Arg-Ala-His-Gln-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 21] [17/482 (3,5%)]. Por consiguiente, la inclusión de esta secuencia en un inmunogen cubre un 27/482 (7,5%) adicional de las cepas del VIH-1.
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Por lo tanto, la inmunización con tres variantes del Epítopo III,
-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln-Asp-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 19],
-Arg-Arg-Ala-Pro-Pro-Asp-Asn- [ID DE SECUENCIA Nº: 50], y
-Arg-Arg-Ala-His-Gln-Asn-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 22],
proporciona anticuerpos reactivos con las proteínas Tat del 77% de las cepas del VIH-1.
TABLA 19
28 
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Ejemplo 6
Estudios inmunológicos sobre secuencias de aminoácidos de la proteína Tat mínimas necesarias para su unión a un anticuerpo para el epítopo IV en la proteína Tat del VIH-1
Una publicación por McPhee et al, FEBS Letters 233:393 (1988) sugirió que algunos sueros de sujetos infectados con el VIH-1 reaccionaban con un péptido sintético Ser-Gln-Thr-His-Gln-Val-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro-Cys [ID DE SECUENCIA Nº: 111], erróneamente presentado como aminoácidos 71-83 de la proteína Tat del VIH-1 (las posiciones correctas son aminoácidos 61-73). El inventor por lo tanto inmunizó a ratones con el péptido sintético -Ser-Gln-Thr-His-Gln-Val-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro [ID DE SECUENCIA Nº: 112] y determinó que se generaban anticuerpos reactivos con este péptido, con un título medio geométrico de 26.517.
Para determinar el tamaño mínimo del epítopo, se sintetizaron una serie de péptidos truncados y se utilizaron como péptidos detectores para determinar los requisitos mínimos de longitud de la secuencia para la unión. La Tabla 20 expone los péptidos detectores y el porcentaje de unión, determinado como se ha descrito en el Ejemplo 1 para el Epítopo I.
TABLA 20
29
A partir de estos datos, queda claro que los 12 aminoácidos son necesarios para una unión completa al Epítopo IV, aunque la contribución de los aminoácidos en las posiciones 1 y 2 no es importante.
Se llegaron a las siguientes determinaciones acerca de las variaciones de secuencia en el Epítopo IV y las reactividades cruzadas inmunológicas de los antisueros, siguiendo los procedimiento descritos anteriormente para los Epítopos I, II y III. Había 444 ejemplos de esta región de la secuencia disponibles en las bases de datos. Las variaciones más comunes eran Thr por Asn en la posición 3 y Val por Ala en la posición 6. Se estudiaron las reactividades de los antisueros contra el péptido nominal ante los péptidos detectores correspondientes a estas secuencias tal y como se ha descrito anteriormente, y los resultados del porcentaje de unión se expusieron en la Tabla 21 que sigue a continuación.
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TABLA 21
30 
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Por lo tanto, la sustitución del aminoácido de la posición 3 de Thr a Asn no afecta de forma considerable la unión de anticuerpos, mientras que una sustitución de Val por Ala en el aminoácido de la posición 6 es fundamentalmente no reactivo de forma cruzada. En los 444 ejemplos de las proteínas Tat del VIH-1 secuenciadas en esta región 282/444 (64%) tenían secuencias que eran similares a la secuencia nominal. Ignorando las variaciones del aminoácido 3 entre Thr y Asn, 199/444 (45%) tenían Val como el aminoácido 6 y 83/444 (19%) tenían Ala como el aminoácido 6. En contraste con la poca reactividad cruzada de los péptidos Ala6 con antisueros contra el inmunogen Val6, los antisueros contra el péptido Ala6 produjeron títulos de 26.000 en el péptido Ala6, y 32.000 en el péptido VaI6, demostrando una reactividad cruzada completa.
Por lo tanto, la inmunización con proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos -Ser-Gln-Thr-His-Gln-Ala-Ser-Leu-Ser- Lys-Gln-Pro- [ID DE SECUENCIA Nº: 114] provoca anticuerpos reactivos con el 64% de las proteínas Tat variantes del VIH-1.
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Ejemplo 7
Construcción de un gen sintético de la invención
Se construyó un gen sintético que incorporaba en estructura ocho variantes del Epítopo I (incluyendo los cuatro inmunogenes primarios de la invención) y trece variantes del Epítopo III, constituyendo éstas todas las secuencias variantes del Epítopo I y del Epítopo I II que se encuentran en las secuencias de la proteína Tat de 31 cepas del subtipo B del VIH-1 de las que se habla en la compilación de SIDA y RETROVIRUS HUMANOS (HUMAN RETROVIRUSES and AIDS) de 1996, citada anteriormente. Entre éstas se incluían los aminoácidos 4-16 para el Epítopo I y 53-62 para el Epítopo III, utilizando la numeración de la ID DE SECUENCIA Nº:1 que se ilustra en la Figura 1. Las secuencias del epítopo fueron separadas mediante espaciadores dipeptídicos que contenían residuos de Gly y/o Ser.
La secuencia de este gen ejemplar de esta invención se muestra en las Figuras 2A-2C [ID DE SECUENCIA Nº: 2 y 3]. El gen fue ensamblado tal y como se describe en W. P. C. Stemmer et al., Gene, 164:49 (1995). En resumen, se sintetizaron once oligonucleótidos (oligos) de 60 monómeros de hebra superior y once oligos de hebra inferior con 20 nucleótidos (nt) de recubrimiento junto con dos oligos de 50 monómeros de extremo. Los veintidós oligos de 60 monómeros fueron incubados juntos bajo condiciones de hibridación y se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para rellenar la secuencia y amplificarla. Los oligos de 50 monómeros de extremo se añadieron entonces y se completó el conjunto mediante RCP, con aislamiento del gen de longitud completa en gel de agarosa.
El gen fue secuenciado y se descubrió que tenía la secuencia correcta dentro de los epítopos mismos, con la excepción de una sustitución de Ala por Thr en la posición 136 (véanse las Figuras 2A-2C). Esto se aceptó dado que este cambio no afecta a la unión de anticuerpos del Epítopo III (véase el Ejemplo 4).
Este gen fue después cortado con las enzimas de restricción e insertado en el vector de expresión pBAD [L-M. Guzman et al., J. Bacteriol, 177:4121 (1950)] que contenía, en estructura, la secuencia para la proteína fluorescente verde (PFV) [A. Crameri et al., Nature Biotech, 14:315 (1996)]. Se transfectaron las TG1 de E. coli y se aislaron colonias fluorescentes verdes.
Se cultivaron las colonias aisladas y se indujo la expresión. La proteína de cada una de las tres colonias tenía bandas fluorescentes en la inmunoelectrotransferencia de tipo Western (Western blotting) con el tamaño molecular esperado (esto es, doble del de la PFV sola). La proteína resultante era soluble y fue purificada mediante purificación por afinidad en columna de níquel utilizando un hexa-histidilo que se había incorporado a la secuencia.
La producción fue de aproximadamente 1 mg de proteína por litro de sobrenadante después de la purificación por afinidad doble para producir > 90% de pureza.
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Ejemplo 8
Caracterización inmunológica de la proteína de fusión recombinante que expresa variantes de la proteína Tat del VIH-1 del epítopo A. Reactividad de la proteína de fusión con antisueros de conejo contra las variantes del Epítopo I y 2
Los antisueros de conejo generados contra los péptidos sintéticos correspondientes a las cuatro secuencias primarias del Epítopo I y las cuatro secuencias del Epítopo III (véase a continuación) fueron sometidos a ensayo mediante ELISA, utilizando la metodología descrita en los Ejemplos 1 y 4, con la excepción de que las placas estaban inicialmente recubiertas directamente con una solución de 100 \mug/ml de antisueros con la proteína de fusión.
TABLA 22
31
Estos datos muestran que las secuencias variantes del epítopo, expresadas como una proteína de fusión recombinante lineal, se expresan en una conformación reconocible por parte de los anticuerpos contra los correspondientes péptidos sintéticos.
B. Inmunización de ratones con la proteína de fusión
Tres ratones fueron inmunizados con 10 \mug cada uno de una solución acuosa de la proteína de fusión del Ejemplo 7 emulsionada con un volumen igual de adyuvante completo de Freund, administrado de forma intraperitoneal. Dos semanas después, se les administraron dosis de refuerzo de forma similar, salvo que se utilizó adyuvante incompleto de Freund. Se obtuvieron sueros tres semanas después.
C. Ensayo ELISA de antisueros contra la proteína de fusión con péptidos sintéticos correspondientes a las variantes del epítopo incorporadas en la proteína de fusión
Se llevó a cabo un ensayo ELISA tal y como se ha descrito en el Ejemplo 1 salvo que se utilizó inmunoglobulina anti-ratón conjugada de peroxidasa de rábano picante para detectar la unión de los anticuerpos. Los resultados se encuentran resumidos en la Tabla 23 que sigue a continuación. Estos datos demuestran que las secuencias tanto del Epítopo I como del Epítopo III se expresan en la proteína de fusión lineal, y reaccionan con los anticuerpos contra las secuencias sintéticas (véase anteriormente). Los anticuerpos contra el Epítopo I fueron inducidos de forma perceptible mediante la proteína de fusión recombinante bajo las condiciones de este experimento en ratones. El fallo de las secuencias del Epítopo III expresadas dentro de este péptido lineal es acorde con los resultados de los péptidos sintéticos, en
los que la extensión C-terminal del inmunogen reduce el título resultante de los anticuerpos (véase el Ejemplo 4).
TABLA 23
32
Ejemplo 9
Estudio animal en primates
Se llevó a cabo un estudio en diez macacos rhesus machos jóvenes para determinar si la presencia de anticuerpos contra la proteína Tat, inducidos mediante un péptido sintético de esta invención antes de la infección con el virus de la inmunodeficiencia, atenuaría la infección y reduciría los niveles en plasma del virus. El VIH-1 no infecta a los monos, pero un virus de inmunodeficiencia de los simios (VIS) correspondiente sí que lo hace. P. A. Luciw et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 92:7490 (1995) construyó un virus recombinante infeccioso (quimera) del VIS_{mac239} y el VIH-1_{SF33} que sí infecta a los monos, normalmente causando una viremia aguda que alcanza su nivel más alto en alrededor de 2 semanas y posteriormente disminuye en la semana 8. En esta construcción quimérica, denominada VIHS_{SF33}, los nucleótidos del VIS que codifican tat, rev y env (pg 160) del VIS_{mac239} han sido sustituidos por la región correspondiente del VIH-1_{SF33}.
A. Inmunización de monos
A los monos se les separó de forma aleatoria en dos grupos.
Cada mono del grupo 1 (grupo de control) fue inmunizado con 0,4 mg del toxoide de la difteria (Laboratorios Commonwealth Scrum, Victoria, Australia) con 0,25 mg de dipéptido de treonil-muramil (DPT-M) en 0,5 ml de agua, siendo esto emulsionado con 0,5 ml de adyuvante MF75 (Chiron Corp, Emeryville CA).
Cada mono del grupo 2 (grupo de ensayo) fue inmunizado con 0,1 mg del péptido sintético Cys-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-Trp-His-Pro-Gly-Ser-amida [ID DE SECUENCIA Nº: 84] unido a 0,4 mg del toxoide de la difteria [A. C. Lee et al., Mol. Immunol., 17:749 (1980)]. El conjugado se disolvió en 0,5 ml de agua que contenía 0,25 mg de DPT-M y se emulsionó con 0,5 ml de adyuvante MF75.
Cada mono fue inmunizado el día 0 y el día 28 (la semana 4) con dos inyecciones intramusculares de 0,5 ml en dos sitios bien diferenciados. El inmunogen peptídico sintético contenía el Epítopo I de célula B, Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser- [ID DE SECUENCIA Nº: 115] de la proteína Tat del VIH-1 SF33 que está incorporada en el clon molecular del VIHS_{SF33} que fue utilizado para poner a los monos ante un desafío (véase lo anterior).
B. Ensayo en busca de anticuerpos contra la proteína Tat
En el día 42 (la semana 6), 2 semanas después de la inyección de refuerzo, se extrajeron los sueros y fueron sometidos a ensayo mediante ELISA en busca de su unión a Ser-Gly-Ser-Gly-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-OH [ID DE SECUENCIA Nº: 85], tal y como se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 1.
Los monos de control tenían títulos de fondo que iban de 25 a 44, mientras que el grupo de ensayo tenía títulos de 1788 a 9588, tal y como se muestra en la Tabla 24 que sigue a continuación.
TABLA 24
33
C. Desafío viral
En el día 49 (la semana 7) después de la inmunización inicial, a todos los monos se les administró 1 ml de una dilución 1/1000 de las existencias de VIHS_{SF33} titulado animal de forma intravenosa (día de desafío 0). Esto correspondía a 50 dosis_{50%} infecciosas animales (50 DIA_{50}) ó 200 dosis50% infecciosas de cultivo de tejidos (200 DICT_{50}).
D. Evaluación de la infección
Se extrajo plasma en AEDT en las semanas 2, 4 y 8, y se midieron copias de ARN viral por ml de plasma mediante RCP-TR-RC, utilizando sondas del VIS para el componente VIS del VIHS_{SF33} [A. J. Conrad et al., J. Acq. Imm. Def. Syndrome and Hum. Retrovirol., 10:425 (1995)]. Los resultados vienen resumidos como sigue en las Tablas 25 y 26.
TABLA 25
34
TABLA 26
35
Tal y como se esperaba, el VIHS_{SF33} causó una infección aguda, con niveles máximos del ARN viral a las 2 semanas y niveles apenas o nada perceptibles para la semana 8. Los monos inmunizados con un conjugado peptídico sintético que indujo anticuerpos contra la proteína Tat del virus VIHS_{SF33} del desafío tenían, en comparación con los monos inmunizados de control, una reducción del 71% en los niveles máximos del virus en plasma 2 semanas después del desafío viral, con una inhibición del 43% siendo aún perceptible en los niveles virales en plasma disminuyentes a las 4 semanas. Esto muestra que la multiplicación del VIHS in vivo fue inhibida en la presencia de anticuerpos contra la proteína Tat utilizada por el virus, y sugiere que un efecto similar prevalecería en seres humanos infectados con el VIH.
E. Evaluación de la seroconversión
Los sujetos infectados con VIH desarrollan anticuerpos contra las proteínas superficiales del virión y esto es detectado mediante ELISA y utilizado para diagnosticar la infección. Los sueros de los monos fueron sometidos a ensayo antes del desafío vírico y 8 semanas después del desafío, utilizando el HIVAB®HIV-1/HIV-2(rDNA)EIA (Laboratorios Abbott, IL). Todos los sueros anteriores al desafío fueron negativos y todos los sueros de 8 semanas de después del desafío fueron positivos. Estos resultados proveen un respaldo adicional al hecho de que los anticuerpos contra la proteína Tat no quedan registrados en los ensayos de diagnóstico en busca de la seroconversión del VIH.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10
Estudio animal en primates
Se llevó a cabo un estudio adicional en monos utilizando la inmunización con péptidos sintéticos unidos al toxoide de la difteria (9 monos) o controles inmunizados del toxoide de la difteria (5 monos). La inmunización inicial fue con adyuvante completo de Freund, con inyecciones de refuerzo a las 3, 6 y 9 semanas con adyuvante incompleto de Freund. Los péptidos inmunizadores fueron Cys-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser-amida [ID DE SECUENCIA Nº:116] (Epítopo I) y Cys-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Ala-Pro-Asp-Ser-Ser-Gln-Asn-His-Gln-OH [ID DE SECUENCIA Nº: 117] (Epítopo III).
Se puso a los monos ante un desafío con 50 DIA_{50} del VIHS33, como en los párrafos anteriores, 2 semanas después de la última inyección de refuerzo con inmunogen. Los títulos medios geométricos a las 11 semanas (tiempo del desafío) en los animales inmunizados fueron de 46.000 para el Epítopo I y de 5.000 para el Epítopo III.
Las cargas virales medias geométricas en plasma en el nivel máximo (2 semanas) fueron de 456.000 para el grupo de ensayo y de 234.000 para los controles. Sin embargo, desde las 4 semanas después del desafío en adelante las cargas virales en el grupo de ensayo disminuyeron de forma significativa por debajo de las del grupo de control (Tabla 27).
TABLA 27
36
La seroconversión a VIS positivo tuvo lugar en las semanas 4-8. Por consiguiente, las cargas virales de después de la seroconversión (el marcador pronóstico más importante en la infección con el VIH-1) se vieron disminuidas de forma significativa en presencia de los anticuerpos contra la proteína Tat del VIH-1.
En un esfuerzo por comprender el alto nivel de carga viral a las 2 semanas en el grupo de ensayo, los sueros fueron sometidos a ensayo en el momento del desafío viral (2 semanas después de la última inmunización) en busca de TNF_{\alpha} (factor de necrosis tumoral alfa) mediante ELISA. El TNF_{\alpha}, que se libera durante una respuesta inmunitaria, activa las células y se sabe que evita el requisito de activación mediada por Tat para respaldar la proliferación del VIH-1. El inventor determinó que mientras que el TNF_{\alpha}, del suero era imperceptible antes de la inmunización, se detectaba en todos los monos inmunizados con Tat 2 semanas después de la inmunización con un nivel medio de 7 pg/ml.
Se concluyó que los efectos de la inhabilitación de Tat en la infección aguda estaban encubiertos por la activación de TNF_{\alpha} en torno a la inmunización; una vez que esto disminuyó, el grupo inmunizado con Tat desarrolló cargas virales significativamente menores, teniendo la mayoría niveles imperceptibles en plasma (< 100 copias/ml).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 11
Método y kits para detectar títulos y especificidades de anticuerpos inducidos mediante vacunación
Para seguir el título y las especificidades de anticuerpos inducidos después de la inmunización con las vacunas de esta invención, se puede emplear un método de ensayo. En una realización de dicho ensayo, se usan los péptidos que contienen las secuencias que se presentan en la Tabla 28 (dependiendo de la composición de la vacuna inmunizadora) para desarrollar kits que miden los títulos y los patrones de reactividad de los anticuerpos en sujetos vacunados.
TABLA 28
37
Estos péptidos se sintetizan con Biotina-Ser-Gly-Ser-Gly- [ID DE SECUENCIA Nº: 123] en el extremo N. Cada péptido está recubierto en placas recubiertas de avidina individuales, con una secuencia -Ser-Gly-Ser-Gly- [ID DE SECUENCIA Nº: 30] que sirve como un espaciador para garantizar que la secuencia peptídica relevante sea ajena al bolsillo de unión de biotina de la avidina. Las placas se incuban a continuación con diluciones del suero de ensayo, se lavan, y se determina la unión de anticuerpos con reactivo a la inmunoglobulina humana, por ejemplo, la inmunoglobulina anti-humana de conejo, unida a, por ejemplo, la biotina, o directamente etiquetada con enzima. Un complejo de avidina-enzima se utiliza para detectar la etiqueta de biotina, o se emplea un reactivo para reaccionar con la enzima y producir una señal colorimétrica (añadidos del kit de I+D).
Se incluyen numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención en la especificación que se ha identificado anteriormente y se espera que sean obvias para una persona experta en la técnica. Dichas modificaciones a y alteraciones de las composiciones y procesos de la presente invención se cree que se abarcan en el alcance de las reivindicaciones que se adjuntan al presente documento.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE: Thymon, L.L.C.
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Métodos y composiciones para dificultar la multiplicación del VIH-1
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 124
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
DIRECCIÓN PARA LA CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
DESTINATARIO: Howson y Howson
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: Spring House Corporate Cntr., Apartado de correos 457
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Spring House
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
ESTADO: Pensilvania
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: EE.UU.
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: 19477
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
FORMATO LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE MEDIO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: Compatible con IBM PC
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOFTWARE: PatentIn Release 1.0, Versión 1.30
\vskip0.800000\baselineskip
(vi)
DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NÚMERO DE SOLICITUD: WO
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
FECHA DE PRESENTACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CLASIFICACIÓN:
\vskip0.800000\baselineskip
(vii)
DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NÚMERO DE SOLICITUD: US 08/893.853
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
FECHA DE PRESENTACIÓN: 11-JULIO-1997
\vskip0.800000\baselineskip
(viii)
INFORMACIÓN DEL AGENTE/APODERADO:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Bak, Mary E.
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
NÚMERO DE REGISTRO: 31.215
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
NÚMERO DEL EXPEDIENTE/DE REFERENCIA: GGP2APCT
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
INFORMACIÓN SOBRE TELECOMUNICACIONES:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TELÉFONO: 215-540-9200
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TELEFAX: 215-540-5818
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 72 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 1:
38 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 912 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: ADN complementario
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: unión (1..876, 883..912)
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 2:
39
40 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 302 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 3:
41 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 4:
42 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 5:
43 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 6:
44 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA No. 7.
45 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 8:
46 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 9:
47 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio de unión
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "una amida está acoplada al Ser en la posición 6"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 10:
48 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 11:
49 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 12:
50 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 13
51 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 14:
52 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 15:
53 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 16:
54 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 17:
55 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 18:
56 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 19:
57 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 20:
58 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 21:
59 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 22:
60 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 23:
61 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 24:
62 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 25:
63 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 26:
64 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 27:
65 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Ser en la posición 13 se modifica opcionalmente con NH2"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 28:
66 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 29:
67 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 30:
68 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 31:
69 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 32
70 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 33:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 33:
71 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 34:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 34:
72 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 35:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 35:
73 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 36:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Xaa en la primera posición puede estar ausente, o puede ser 1- {}\hskip4.7cm 5 aa, que se puede modificar opcionalmente con un alquilo {}\hskip4.7cm inferior o un alcanoilo inferior, o Xaa puede ser X-Pro, en el {}\hskip4.7cm que X es Glu ó Asp".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Val en la posición 2 se modifica opcionalmente con un alquilo {}\hskip4.8cm inferior o un alcanoilo inferior cuando Xaa en la primera po- {}\hskip4.8cm sición está ausente".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 5a posición puede ser Arg, Lys, Ser ó Asn"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Pro en la posición 8 está amidado opcionalmente, cuando es el {}\hskip4.7cm aminoácido C terminal".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 9
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 9a posición puede estar ausente o ser una {}\hskip4.7cm secuencia de 1-14 aminoácidos amidados en el extremo carbo- {}\hskip4.7cm xilo".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 36:
74 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 37:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Xaa en la primera posición puede estar ausente o puede ser op- {}\hskip4.7cm cionalmente 1-5 aminoácidos, modificados opcionalmente con {}\hskip4.7cm un alquilo inferior o un alcanoilo inferior en el extremo N".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Lys en la posición 2 se modifica opcionalmente con un alquilo {}\hskip4.7cm inferior o un alcanoilo inferior, cuando el Xaa de la primera {}\hskip4.7cm posición está ausente".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 3a posición puede ser o bien Gly o bien {}\hskip4.7cm Ala".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 12
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Lys en la posición 12 está amidado opcionalmente, cuando es {}\hskip4.7cm el aminoácido C terminal".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 13' posición puede estar ausente o puede {}\hskip4.7cm ser una secuencia de 1-5 aminoácidos adicionales, sustituidos {}\hskip4.7cm opcionalmente por una amida".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 37:
75 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 38:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El Xaa de la primera posición puede estar ausente o ser una {}\hskip4.8cm secuencia de 1-3 aa, modificados opcionalmente con un alqui- {}\hskip4.8cm lo inferior o un alcanoilo inferior; o puede ser Gln-Arg, modi- {}\hskip4.8cm ficado opcionalmente con un alquilo inferior o un alcanoilo {}\hskip4.8cm inferior".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Arg en la posición 2 se modifica opcionalmente con un alquilo {}\hskip4.7cm inferior o un alcanoilo inferior, cuando es el aminoácido N {}\hskip4.7cm terminal".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 4' posición puede ser Ala, Pro, Ser ó Gln".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 5' posición puede ser Pro ó His".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 6' posición puede ser Gln ó Pro".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 7' posición puede ser Asp, Asn, Gly ó {}\hskip4.8cm Ser".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Ser en la posición 8 está amidado opcionalmente".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 38:
76 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 39:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Xaa en la primera posición puede estar ausente o es opcio- {}\hskip4.8cm nalmente 1-3 aminoácidos, opcionalmente modificados con {}\hskip4.8cm un alquilo inferior o un alcanoilo inferior".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Ser en la posición 2 se modifica opcionalmente con unalquilo {}\hskip4.7cm inferior o un alcanoilo inferior, cuando es el aminoácido N {}\hskip4.7cm terminal".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 4' posición puede ser Asn ó Thr".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido de la 7' posición puede ser Ala ó Val".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Pro en la posición 13 está amidado opcionalmente cuando es {}\hskip4.7cm el aminoácido C terminal".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 14
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Xaa en la posición 14 puede estar ausente o es opcionalmente {}\hskip4.7cm 1-3 aminoácidos, opcionalmente sustituidos por una amida".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 39:
77 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 40:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 40:
78 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 41:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 41:
79 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 42:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 42:
80 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 43:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 43:
81 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 44:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 44:
82 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 45:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 45:
83 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 46:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 46:
84 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 47:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 47:
85 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 48:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 48:
86 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 49:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 49:
87 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 50:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 50:
88 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 51:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 51:
89 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 52:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 52:
90 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 53:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 53:
91 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 54:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 54:
92 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 55
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 55:
93 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 56:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 56:
94 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 57:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 57:
95 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 58:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 4 puede ser Arg, Lys, Ser ó Asn".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 58:
96 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 59:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 59:
97 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 60:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 60:
98 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 61:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 61:
99 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 62:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 62:
100 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 63:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 63:
101 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 64:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 64:
102 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 65:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 65:
103 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 66:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 66:
104 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 67:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 22 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 22
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Una amida está acoplada al Lys en la posición 22".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 67:
105 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 68:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 68:
106 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 69:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 69:
107 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 70:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 70:
108 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 71:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 71:
109 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 72:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 72:
110 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 73:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 73:
111 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 74:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 74:
112 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 75:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 75:
113 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 76:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 76:
114 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 77:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 77:
115 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 78:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 78:
116 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 79:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 79:
117 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 80:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 80:
118 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 81:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 81:
119 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 82:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 82:
120 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 83:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 83:
121 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 84:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio de unión
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "una amida está acoplada al Ser en la posición 13"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 84:
122 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 85:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 17 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 85:
123 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 86:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 4 puede ser Arg, Lys, Ser ó Asn".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº:86:
124 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 87:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 2 puede ser Gly ó Ala"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 87:
125 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 88:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 3 puede ser Ala, Pro, Ser ó Gln".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 4 puede ser Pro ó His".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 5 puede ser Gln 6 Pro".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 6 puede ser Asp, Asn, Gly ó Ser".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 88:
126 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 89:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 3 puede ser Asn 6 Thr".
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 6 puede ser Ala ó Val".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 89:
127 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 90:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 90:
128 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 91:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "La biocitina-amida está acoplada a Ser en la posición 4".
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 91:
129 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 92:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado al Trp en la posición 8"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 92:
130 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 93:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado a Pro en la posición 7"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 93:
131 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 94:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado al Glu en la posición 6"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 94:
132 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 95:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 95:
133 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 96:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 96:
134 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 97:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 97:
135 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 98:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 98:
136 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 99:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 99:
137 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 100:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 100:
138 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 101:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 101:
139 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 102:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado a Pro en la posición 7"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 102:
140 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 103:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 103:
141 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 104:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 104:
142 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 105:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 105:
143 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 106:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 106:
144 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 107:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado a Ser en la posición 10"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 107:
145 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 108:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado a Ser en la posición 8"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 108:
146 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 109:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 11
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NH2 está acoplado a Gln en la posición II"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 109:
147 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 110:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 3 puede ser Ala, Pro, Ser 6 Gln"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 6 puede ser Asp, Asn, Gly ó Ser"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 110:
148 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 111:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 111:
149 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 112
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 112:
150 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 113:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 113:
151 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 114:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 114:
152 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 115:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 115:
153 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 116:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 14
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "Una amida está acoplada a Ser en la posición 14"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 116:
154 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 117:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 15 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 117:
155 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 118:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 118:
156 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 119:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LASECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 119:
157 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 120:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 120:
158 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 121:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 121:
159 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 122:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 122:
160 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 123:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "La biotina está acoplada a Ser en la posición 1"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 123:
161 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID DE SECUENCIA Nº: 124:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
DISPOSICIÓN EN HEBRAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN: /nota= "El aminoácido en la posición 7 puede ser Arg, Lys, Ser ó Asn"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID DE SECUENCIA Nº: 124:
162

Claims (46)

1. Una composición inmunogénica que está compuesta de un péptido o polipéptido de la fórmula R3-Lys-X-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-R4 ID DE SECUENCIA Nº: 37,
en la que X se selecciona del grupo que consta de Gly ó Ala;
en la que R3 se selecciona del grupo que consta de hidrógeno y una secuencia de entre 1 a 5 aminoácidos adicionales;
en la que R4 se selecciona del grupo que consta de un hidroxilo libre y una amida.
2. La composición de conformidad con la reivindicación 1 en la que R3 es H.
3. La composición de conformidad con la reivindicación 1 en la que dicho péptido es -Lys-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys- (aminoácidos 41-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1).
4. La composición de conformidad con la reivindicación 1 en la que dicho péptido es -Lys-Ala-Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys- (ID DE SECUENCIA Nº: 106).
5. El uso de una composición que está compuesta de un péptido de la fórmula -Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys- (aminoácidos 43-51 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1) en la preparación de un medicamento para inducir anticuerpos contra la proteína Tat del VIH-1.
6. Una composición que está compuesta de un péptido de la fórmula -Leu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys- (aminoácidos 43-50 de la ID DE SECUENCIA Nº: 1).
7. Una composición inmunogénica que está compuesta de dos, tres o cuatro péptidos o polipéptidos de la fórmula R1-Val-Asp-Pro-Y- Leu-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 36,
en la que Y se selecciona del grupo que consta de Arg, Lys, Ser y Asn;
en la que R1 se selecciona del grupo que consta de hidrógeno y una secuencia de 1 a 5 aminoácidos adicionales;
en la que R2 se selecciona del grupo que consta de un hidroxilo libre, una amida, una secuencia de uno a alrededor de 14 aminoácidos adicionales, opcionalmente sustituidos por una amida.
8. La composición de conformidad con la reivindicación 7 en la que R1 es -X-Pro-, en la que X se selecciona del grupo que consta de Glu y Asp, opcionalmente sustituidos por un alquilo inferior o un alcanoilo inferior.
9. La composición de conformidad con la reivindicación 7 en la que R2 es -Trp-Lys-His-Pro-Gly-Ser- ID DE SECUENCIA Nº: 10 opcionalmente sustituido por una amida.
10. La composición de conformidad con la reivindicación 7 que está compuesta de dos, tres o cuatro secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consta de:
R1-Val-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 6]; R1-Val-Asp-Pro-Lys-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 7]; R1-Val-Asp-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 8]; y R1-Val-Asp-Pro-Asn-Leu-Glu-Pro-R2 [ID DE SECUENCIA Nº: 9].
11. La composición de conformidad con la reivindicación 7, que está compuesta además de polipéptidos y péptidos adicionales, que están compuestos de al menos una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consta de:
R1-Gly-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 11; R1-Ala-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 12; R1-His-Pro-Arg-Leu-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 13;
R1-Asp-Pro-Gly-Leu-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 14; R1-Asp-Pro-Arg-Ile-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 15; R1-Asp-Pro-Arg-Leu-Gly-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 16; R1-Asp-Pro-Arg-Leu-Glu-Ala-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 17; y R1-Asp-Pro-Ser-Leu-Glu-Pro-R2 ID DE SECUENCIA Nº: 18;
12. La composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-4 6 6-11, en la que dichos péptidos o polipéptidos se producen de forma sintética.
13. La composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-4 ó 6-11, en la que dichos péptidos o polipéptidos se producen de forma recombinante.
14. La composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-4 6 6-11, en la que uno o más de dichos péptidos se expresa como un péptido sintético unido a una proteína portadora.
15. La composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-4 ó 6-11, en la que uno o más de dichos péptidos se expresa como un péptido multiantigénico, opcionalmente unido a una proteína portadora.
16. La composición de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 7-11 anteriores en la que dos o más de dichos péptidos se expresan dentro de una proteína producida de forma recombinante, opcionalmente fusionada en estructura con una proteína portadora.
17. La composición de conformidad con la reivindicación 16, en la que dicha proteína producida de forma recombinante además está compuesta de un péptido de la reivindicación 1.
18. La composición de conformidad con la reivindicación 17, en la que dicha proteína portadora se selecciona del grupo que consta de una proteína DnaK E. coli, una proteína GST, una proteína 70 micobacteriana de choque térmico, un toxoide de la difteria, un toxoide del tétanos, una galactoquinasa, una ubiquitina, un factor de contacto \alpha, una \beta-galactosidasa, y una proteína NS-1 de la gripe.
19. Un gen sintético que consta de una secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido o polipéptido tal y como se ha comentado en las reivindicaciones 1 a la 6.
20. Un gen sintético que consta de una secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido o polipéptido tal y como se ha comentado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 6 fusionado al extremo C de un péptido o polipéptido tal y como se ha comentado en cualquiera de las reivindicaciones 7 a la 11.
21. Un gen sintético que consta de una secuencia de ácido nucleico que codifica dos, tres o cuatro péptidos o polipéptidos tal y como se ha comentado en cualquiera de las reivindicaciones 7 a la 10.
22. El gen sintético de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 19 a la 21 en el que cada secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos está separada por una secuencia espaciadora que consta de 1 a 4 residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consta de Gly, Ser, y combinaciones de los mismos.
23. Una molécula sintética que consta del gen sintético de cualesquiera de las reivindicaciones 19 a la 21 enlazado de forma operativa a secuencias de ácido nucleico reguladoras, que dirigen y controlan la expresión del producto de dicho gen sintético en una célula huésped.
24. La molécula de conformidad con la reivindicación 23 que es un plásmido.
25. Un virus recombinante que está compuesto del gen sintético de cualesquiera de las reivindicaciones 19 a la 22 o una molécula sintética de la reivindicación 23 y capaz de expresar múltiples copias del producto de dicho gen en una célula huésped, en el que dicho virus no es patógeno para los seres humanos.
26. Una composición de anticuerpos que está compuesta de un anticuerpo aislado que está dirigido contra un péptido o polipéptido de una composición de cualesquiera de las reivindicaciones 1-4 ó 6.
27. Una composición de anticuerpos que está compuesta de anticuerpos aislados que están dirigidos contra cada componente peptídico o polipeptídico de la composición tal y como se ha comentado en la reivindicación 7 o en la reivindicación 8 o en la reivindicación 9.
28. Una composición de anticuerpos que está compuesta de anticuerpos aislados dirigidos contra cada uno de los mencionados dos, tres o cuatro componentes de la secuencia de aminoácidos de la composición tal y como se ha comentado en la reivindicación 10.
29. Una composición de anticuerpos de conformidad con la reivindicación 27 que además está compuesta de un anticuerpo aislado dirigido contra un péptido o polipéptido tal y como se ha comentado en la reivindicación 11.
30. La composición de anticuerpos de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 26 a la 29 en la que dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consta de un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, un anticuerpo desarrollado cribando hibridomas o bibliotecas combinatorias o expresiones en fago de los anticuerpos, y mezclas de los mismos.
31. Una composición farmacéutica útil para inducir anticuerpos que reaccionen con las proteínas Tat del VIH-1 de múltiples subtipos B comunes y subtipos que no son B del VIH-1, estando compuesta dicha composición de un miembro seleccionado del grupo que consta de:
(a)
una composición de las reivindicaciones 1 a la 4 ó 6-18, producida de forma recombinante o sintética;
(b)
un gen sintético de las reivindicaciones 19 a la 22;
(c)
una molécula sintética de las reivindicaciones 23 a la 24; o
(d)
un virus recombinante de la reivindicación 25; tales composiciones seleccionadas en un portador aceptable farmacéuticamente.
32. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 31, que está compuesta de dicha composición (a) y un adyuvante.
33. Una composición farmacéutica útil para dificultar la multiplicación del VIH-1, estando compuesta dicha composición de una composición de anticuerpos de las reivindicaciones 26 a la 30.
34. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 31 a la 33 para su uso en terapia.
35. Una composición de conformidad con la reivindicación 31 para su uso a la hora de reducir los niveles virales del VIH-1 induciendo activamente anticuerpos que reaccionen con las proteínas Tat del VIH-1 de múltiples subtipos B comunes y subtipos que no son B del VIH-1.
36. Una composición de conformidad con la reivindicación 35 para su uso en la administración a un sujeto infectado con el VIH-1 que tenga un sistema inmunitario competente.
37. Una composición de conformidad con la reivindicación 35 para su uso en la administración a un sujeto no infectado para inducir anticuerpos que reaccionen con las proteínas Tat del VIH-1, anticuerpos que reduzcan la multiplicación viral durante cualquier infección aguda en fase inicial con el VIH-1 y minimicen la viremia crónica que lleva al SIDA.
38. El uso de una composición de la reivindicación 31 en la elaboración de un medicamento para reducir los niveles virales del VIH-1 induciendo activamente anticuerpos que reaccionen con las proteínas Tat del VIH-1 de múltiples subtipos B comunes y subtipos que no son B del VIH-1.
39. El uso de conformidad con la reivindicación 38, en el que el medicamento es para su administración a un sujeto infectado con el VIH-1 que tiene un sistema inmunitario competente.
40. El uso de conformidad con la reivindicación 38 en el que el medicamento es para su administración a un sujeto no infectado e induce anticuerpos que reaccionan con las proteínas Tat del VIH-1, anticuerpos que reducen la multiplicación viral durante cualquier infección aguda en fase inicial con el VIH-1 y minimizan la viremia crónica que lleva al SIDA.
41. Una composición de conformidad con la reivindicación 33 para su uso en la inhibición de la multiplicación viral y la reducción de los niveles virales del VIH-1 mediante inmunoterapia pasiva en un ser humano que es incapaz de desarrollar una respuesta inmunitaria rápida o efectiva a la infección con el VIH-1.
42. Una composición de conformidad con la reivindicación 41 para su uso en la administración crónica a dicho ser humano.
43. El uso de una composición de conformidad con la reivindicación 33 en la elaboración de un medicamento para inhibir la multiplicación viral y reducir los niveles virales del VIH-1 mediante inmunoterapia pasiva en un ser humano que es incapaz de desarrollar una respuesta inmunitaria rápida o efectiva a la infección con el VIH-1.
44. El uso de conformidad con la reivindicación 43, en el que dicho medicamento es para su administración crónica a dicho ser humano.
45. Un método para producir una composición que induce anticuerpos que reaccionan con las proteínas Tat del VIH-1 de múltiples subtipos B comunes y subtipos que no son B del VIH-1, dicho método comprende:
(a) el cultivo de una célula huésped infectada o transfectada in vitro con un miembro del grupo que consta de un gen sintético de las reivindicaciones 19 a la 22, una molécula sintética de las reivindicaciones 23 a la 24; y un virus recombinante de la reivindicación 25; y
(b) el aislamiento de dicho cultivo a dicho péptido o polipéptido tal y como se ha comentado en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a la 18.
46. La célula huésped de un mamífero infectada o transfectada con un miembro del grupo que consta de un gen sintético de las reivindicaciones 19 a la 22, una molécula sintética de las reivindicaciones 23 a la 24; y un virus recombinante de la reivindicación 25.
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