ES2324708T3 - Conjugados de vitamina-mitomicina. - Google Patents
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Abstract
Conjugado de fórmula general B-L-X en la que el grupo B es un folato, o un análogo o un derivado del mismo, que se une a un receptor de folato accesible en la superficie que se expresa de manera única, se sobreexpresa o se expresa preferentemente por una población de células patógenas; en la que el grupo L comprende un grupo de unión escindible y siendo el grupo de unión escindible un grupo disulfuro; y en la que el grupo X comprende un compuesto de mitomicina seleccionado del grupo que consiste en mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C, mitomicina D, mitomicina E, mitomicina F, mitomicina J y porfiromicina.
Description
Conjugados de
vitamina-mitomicina.
Esta invención se refiere a composiciones y
conjugados para su uso en el tratamiento de estados patológicos
caracterizados por la proliferación de poblaciones de células
patógenas. Más particularmente, la invención se refiere a
conjugados de folato-mitomicina, a su uso para
eliminar selectivamente una población de células patógenas en un
animal huésped y a un método de preparación de los conjugados.
El sistema inmunitario de los mamíferos
proporciona un medio para el reconocimiento y la eliminación de
células tumorales, otras células patógenas y patógenos foráneos
invasores. Aunque el sistema inmunitario proporciona normalmente
una fuerte línea de defensa, existen muchos casos en los que células
cancerosas, otras células patógenas o agentes infecciosos eluden
una respuesta inmunitaria del huésped y proliferan o persisten con
patogenicidad concomitante para el huésped. Se han desarrollado
agentes quimioterápicos y radioterapias para eliminar neoplasias en
replicación. Sin embargo, la mayoría, si no todos, de los regímenes
de radioterapia y agentes quimioterápicos disponibles actualmente
tienen efectos secundarios adversos porque funcionan no sólo
destruyendo células cancerosas, sino que también afectan a células
normales del huésped, tales como células del sistema
hematopoyético. Los efectos secundarios adversos de los fármacos
anticancerígenos disponibles actualmente ponen de relieve la
necesidad del desarrollo de nuevas terapias específicas para
poblaciones de células patógenas y con una toxicidad reducida para
el huésped.
Los investigadores han desarrollado protocolos
terapéuticos para destruir células cancerosas dirigiendo compuestos
citotóxicos hasta tales células. Muchos de estos protocolos utilizan
toxinas conjugadas a anticuerpos que se unen a antígenos únicos
para o sobreexpresados por células cancerosas en un intento de
minimizar el suministro de la toxina a las células normales. Usando
este enfoque se han desarrollado ciertas inmunotoxinas que consisten
en anticuerpos dirigidos contra antígenos específicos en las
células patógenas, enlazándose los anticuerpos a toxinas tales como
ricina, exotoxina de Pseudomonas, toxina diftérica y factor
de necrosis tumoral. Estas inmunotoxinas seleccionan como diana las
células tumorales que portan los antígenos específicos reconocidos
por el anticuerpo (Olsnes, S., Immunol. Today, 10, págs.
291-295, 1989; Melby, E.L., Cancer Res.,
53(8), págs. 1755-1760, 1993; Better, M.D.,
publicación PCT número WO 91/07418, publicada el 30 de mayo de
1991). Aunque las inmunotoxinas se dirigen contra antígenos
específicos en las células patógenas, el componente de toxina de
estos compuestos puede mostrar toxicidad para las células normales
del huésped. También se ha descrito el uso de vitaminas para
suministrar agentes quimioterápicos a células (véase la patente
estadounidense número 5.416.016).
Otro enfoque para seleccionar como diana
poblaciones de células cancerosas o patógenos foráneos en un huésped
consiste en potenciar la respuesta inmunitaria del huésped frente a
las células patógenas para evitar la necesidad de la administración
de compuestos que también pueden mostrar toxicidad independiente
para el huésped. Una estrategia notificada para inmunoterapia
consiste en unir anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos multiméricos
modificados mediante ingeniería genética, a la superficie de la
célula tumoral para presentar la región constante de los
anticuerpos en la superficie celular e inducir de ese modo la
destrucción de células tumorales mediante diversos procesos
mediados por el sistema inmunitario (De Vita, V.T., Biologic Therapy
of Cancer, 2ª ed. Filadelfia, Lippincott, 1995; Soulillou, J.P.,
patente estadounidense 5.672.486). Sin embargo, estos enfoques se
han visto complicados por las dificultades al definir antígenos
específicos de tumores. Por tanto, sigue habiendo una necesidad
significativa de terapias eficaces con una toxicidad para el huésped
minimizada dirigidas al tratamiento de estados patológicos
caracterizados por la existencia de poblaciones de células patógenas
en el huésped afectado.
Las mitomicinas son productos naturales que se
sabe que muestran actividad antitumoral. Las mitomicinas pueden
producirse mediante la fermentación de Streptomyces
caespitosus, y las mitomicinas conocidas representativas
incluyen mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C, mitomicina D,
mitomicina E, mitomicina F y porfiromicina. Las estructuras de estos
compuestos se representan mediante la siguiente fórmula genérica con
los sustituyentes mostrados en la tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Las mitomicinas son una clase de fármacos
citotóxicos que se conocen como agentes de alquilación que contienen
quinona. La reducción del resto quinona da como resultado la
formación de especies de alquilación bifuncionales que pueden
formar enlaces covalentes con una variedad de componentes celulares
incluyendo el ADN. La interacción con el ADN da como resultado la
formación de entrecruzamientos de ADN que conducen a la inducción de
apoptosis y muerte celular, y se cree que esta interacción es el
factor contribuyente más importante para la actividad antitumoral
de los compuestos de mitomicina.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se refiere a conjugados
tal como se definen en la reivindicación 1 que comprenden un resto
de vitamina que es folato unido a un compuesto de mitomicina
mediante un grupo de unión escindible, a su uso en el tratamiento
de estados patológicos caracterizados por la proliferación de una
población de células patógenas y a un método de preparación de los
conjugados. Los conjugados de vitamina-mitomicina
según la invención pueden usarse para eliminar selectivamente una
población de células patógenas en un huésped afectado. La
eliminación selectiva de las células patógenas está mediada por la
unión del resto folato del conjugado de
vitamina-mitomicina a un receptor de folato, una
proteína transportadora u otra proteína presentada en la superficie
que se une específicamente a la vitamina de selección como diana, y
que se expresa de manera única, se sobreexpresa o se expresa
preferentemente por las células patógenas. Los conjugados de
vitamina-mitomicina pueden internalizarse en las
células seleccionadas como diana con la unión del resto folato a un
receptor, una proteína transportadora o proteína expresada en la
superficie de este tipo, y, con la presencia de un grupo de unión
escindible usado para conjugar el resto folato al compuesto de
mitomicina, el resto folato y el compuesto de mitomicina pueden
disociarse intracelularmente. El compuesto de mitomicina disociado
interacciona después con el ADN, tal como formando
entrecruzamientos con el ADN, dando como resultado la destrucción o
inhibición de la proliferación de las células
patógenas.
patógenas.
Los receptores de vitamina expresados en la
superficie, tales como el receptor de folato de alta afinidad, se
sobreexpresan, por ejemplo, en las células cancerosas. Se ha
notificado que todos de los cánceres epiteliales de ovario,
glándula mamaria, colon, pulmón, nariz, garganta y cerebro expresan
niveles elevados del receptor de folato. De hecho, se sabe que más
del 90% de todos los tumores de ovario humanos expresan grandes
cantidades de este receptor. En consecuencia, la presente invención
puede usarse para destruir o inhibir la proliferación de una
variedad de tipos de células tumorales y de otros tipos de células
patógenas que sobreexpresan receptores de vitamina.
Aunque se sabe que las mitomicinas muestran una
excelente actividad antitumoral, las mitomicinas también muestran
citotoxicidad hacia los leucocitos en el animal huésped tratado con
estos compuestos. En un esfuerzo por aumentar la actividad
antitumoral de las mitomicinas y/o disminuir la toxicidad no deseada
de estos compuestos, se han preparado derivados de mitomicinas que
contienen una variedad de modificaciones en el grupo amino
C-7 en el esqueleto de aminomitosano. Entre los
derivados de mitomicina conocidos con toxicidad reducida están los
disulfuros de dialquilo asimétricos que contienen sustituyentes en
C-7 de fórmula RSS (CH_{2})_{2}NH- en la
que i) R es un grupo alquilo (véanse la solicitud de patente europea
número 0116208A1 y la solicitud de patente japonesa número
175493/84), ii) R contiene un anillo aromático (véanse las
solicitudes de patente europea números 0116208A1 y 0163550A2, la
solicitud de patente japonesa número 255789/85 y la patente
estadounidense número 4.866.180) y iii) R está relacionado
estructuralmente con fragmentos de péptidos o aminoácidos (véanse
la solicitud de patente europea número 0163550A2, la solicitud de
patente japonesa número 255789/85 y la patente estadounidense
número
4.691.024).
4.691.024).
Todos los métodos conocidos para la preparación
de tales disulfuros de dialquilo asimétricos se basan en una
transtiolación de disulfuros de heteroaril-alquilo
asimétricos con alquil-tiol. En particular, los
grupos salientes de heteroariltio más comunes son
2-tiopiridilo (véanse el documento WO 88/01622 y la
publicación de solicitud europea número 0116208A1) y
3-nitro-2-tiopiridina
(véase la patente estadounidense número 4.691.024). La fuerza
impulsora de esta reacción de escisión son las excelentes
propiedades como grupo saliente del resto heteroariltio. La
reacción es tal como sigue:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los conjugados de
vitamina-mitomicina según la presente invención
pueden prepararse mediante un procedimiento novedoso para la
preparación de disulfuros de dialquilo asimétricos que se basa en la
tiofilicidad de reactivos de tiosulfonato. El esquema sintético
para la preparación de los reactivos de tiosulfonato, mitomicina A y
para la síntesis de un derivado de vitamina (por ejemplo, folato
terminado en cisteína) para su uso en este procedimiento de
preparación se muestra en el esquema 1 a continuación (Fmoc =
9-fluorenilmetiloxicarbonilo; Boc =
terc-butiloxicarbonilo;
Dap = ácido diaminopropiónico; DMF = dimetilformamida; DIPEA = diisopropiletilamina; DMSO = dimetilsulfóxido; TFAA = ácido trifluoroacético; PyBOP = benzotriazol-1-iloxi-tris-(hexafluorofosfato de pirrolidinofosfonio)).
Dap = ácido diaminopropiónico; DMF = dimetilformamida; DIPEA = diisopropiletilamina; DMSO = dimetilsulfóxido; TFAA = ácido trifluoroacético; PyBOP = benzotriazol-1-iloxi-tris-(hexafluorofosfato de pirrolidinofosfonio)).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Esquema
1
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\vskip1.000000\baselineskip
Reactivos y condiciones: i) piperidina al 20%,
DMF; ii) Fmoc-AA-OH, PyBop, DIPEA,
DMF; iii)
Fmoc-D-Glu-OtBu,
PyBop, DIPEA, DMF; iv)
N^{10}-TFA-Pte-OH,
DIPEA, DMSO; v) TFAA, HSCH_{2}CH_{2}SH, iPr_{3}SiH; vi)
H_{4}NOH, pH = 10,3.
\vskip1.000000\baselineskip
Se presentan esquemas sintéticos a modo de
ejemplo para la síntesis de los presentes conjugados de
vitamina-mitomicina como sulfuros de dialquilo
asimétricos usando tiosulfonatos como esquemas 2 y 3 a continuación.
En los conjugados con enlaces disulfuro, uno de los restos alquilo
se une al grupo amino en C-7 en el esqueleto de
mitosano, y el otro se une covalentemente a través de un grupo de
unión divalente o directamente a una molécula de vitamina, o un
análogo de unión al receptor de vitamina o derivado del mismo.
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\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
2
Síntesis de sulfuros de
dialquilo asimétricos usando
tiosulfonatos
\newpage
Esquema
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En ambos esquemas 2 y 3, en primer lugar se hizo
reaccionar una amina disponible comercialmente 1, que contiene un
grupo tiolsulfonato, con el éster metílico vinílogo en
C-7 en el resto quinona del derivado de mitosano 2.
En segundo lugar, se usa el reactivo de tiosulfonato 3 resultante
para la sulfonilación de tioles, tales como los que se encuentran
en la pteroil-glutamil-cisteína 4,
en
Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Cys-OH
6 o
Pte-Glu-Arg-Cys-Ala-Gly-OH
8, que son todos derivados del ácido fólico. La formación
instantánea de disulfuro produce un conjugado de
vitamina-mitomicina, por ejemplo, un conjugado de
pteroil-Glu-Cys-S-mitomicina
C 5, un conjugado de
Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Cys-S-mitomicina
C-OH 7 o un conjugado de
Pte-Glu-Arg-Cys-S-mitomicina
C-Ala-Gly-O 9, con
rendimiento casi cuantitativo.
En realizaciones de la presente invención en las
que la unión disulfuro es un disulfuro de dialquilo asimétrico, tal
como un disulfuro de dialquilo asimétrico preparado mediante el
procedimiento descrito anteriormente, los conjugados de
vitamina-mitomicina eliminan selectivamente las
células patógenas y tienen una toxicidad reducida hacia las células
normales. En realizaciones en las que el resto de vitamina está
conjugado a un compuesto de mitomicina mediante una unión disulfuro
de este tipo, el resto de vitamina y el compuesto de mitomicina
pueden disociarse en las condiciones reductoras que existen
intracelularmente.
Se proporciona un conjugado de fórmula
general
B-L-X
en la que el grupo B es un folato o
un análogo o un derivado del mismo, que se une a un receptor de
folato accesible en la superficie que se expresa de manera única,
se sobreexpresa o se expresa preferentemente por una población de
células patógenas, en la que el grupo L comprende un grupo de unión
escindible siendo el grupo de unión escindible un grupo disulfuro,
y en la que el grupo X comprende un compuesto de mitomicina
seleccionado de mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C, mitomicina
D, mitomicina E, mitomicina F, mitomicina J y
porfiromicina.
También se describe un conjugado para su uso en
un método de eliminación selectiva de una población de células
patógenas en un animal huésped que alberga la población de células
en el que los elementos de la población celular tienen un sitio de
unión accesible en la superficie para una vitamina. El conjugado es
de fórmula
general
general
B-L-X
tal como se definió
anteriormente.
El método puede comprender además la etapa de
administrar al animal huésped un agente quimioterápico tal como
paclitaxel.
Aún en otra realización se proporciona una
composición farmacéutica que comprende un conjugado de fórmula
general
B-L-X
en la que el grupo B es un folato,
o un análogo o un derivado del mismo, que se une a un receptor de
folato accesible en la superficie que se expresa de manera única,
se sobreexpresa o se expresa preferentemente por la población de
células patógenas, en la que el grupo L comprende un grupo de unión
escindible siendo el grupo de unión escindible un grupo disulfuro,
y en la que el grupo X comprende un compuesto de mitomicina
seleccionado de mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C,
mitomicina D, mitomicina E, mitomicina F, mitomicina J y
porfiromicina, y un vehículo farmacéuticamente aceptable para el
mismo.
En otra realización, la composición farmacéutica
puede comprender además un agente quimioterápico tal como
paclitaxel.
Todavía en otra realización se proporciona un
método de preparación de un conjugado biológicamente activo de
fórmula
B-L-X
en la
que
B es un folato o un derivado o análogo de unión
al receptor de folato del mismo;
X comprende un compuesto de mitomicina
seleccionado de mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C, mitomicina
E, mitomicina F, mitomicina J y porfiromicina;
y L es un grupo de unión divalente que comprende
un enlace disulfuro, comprendiendo el método las etapas de formar
un producto intermedio de tiosulfonato de fórmula
B-(L')_{n}SSO_{2}R o un producto intermedio de fórmula
X-(L')_{n}SSO_{2}R
y hacer reaccionar el producto intermedio de
tiosulfonato con un compuesto de fórmula
X-(L')_{n'}-SH o
B-(L'')_{n'}-SH, respectivamente,
en las que L' y L'' son, independientemente,
grupos de unión divalentes a través de los cuales se une
covalentemente el grupo tiol SH a B y X, respectivamente;
n y n' son 1 ó 0; y
R es alquilo, alquilo sustituido, arilo,
heteroarilo o arilo o heteroarilo sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 1 muestra una comparación entre las
citotoxicidades de EC72 (véase el esquema 1; triángulos rellenos) y
mitomicina C (cuadrados rellenos). También se muestran la
citotoxicidad de EC72 en presencia de folato libre en exceso
(círculos rellenos).
La figura 2 muestra la supervivencia en
porcentaje de ratones que portan el tumor M109 a los que se les
inyectó PBS (control; cuadrados rellenos), mitomicina C (círculos en
blanco) o EC72 (círculos rellenos).
La figura 3 muestra la supervivencia en
porcentaje de ratones que portan el tumor M109 a los que se les
inyectó PBS (control; triángulos rellenos), mitomicina C (cuadrados
rellenos), EC72 (círculos rellenos) o EC72 más folato libre en
exceso (rombos rellenos).
\newpage
La figura 4 muestra el tamaño del tumor en
ratones a los que se les implantaron células M109 para formar
tumores subcutáneos y tratados con PBS (cuadrados rellenos) o EC72
(círculos rellenos).
La figura 5 muestra la RMN 1D de un conjugado de
pteroil-Glu-Cys-S-mitomicina
C (compuesto 5; véase el esquema 2), un conjugado de
Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Cys-S-mitomicina
C-OH (compuesto 7; véase el esquema 2) y un
conjugado de
Pte-Glu-Arg-Cys-S-mitomicina
C-Ala-Gly-O
(compuesto 9; véase el esquema 3).
La figura 6 muestra la RMN 2D de un conjugado de
pteroil-Glu-Cys-S-mitomicina
C (compuesto 5; véase el esquema 2), un conjugado de
Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Cys-S-mitomicina
C-OH (compuesto 7; véase el esquema 2) y un
conjugado de
Pte-Glu-Arg-Cys-S-mitomicina
C-Ala-Gly-O
(compuesto 9; véase el esquema 3).
La figura 7 muestra el tamaño del tumor en
ratones a los que se les implantaron células M109 para formar
tumores subcutáneos y tratados con PBS (cuadrados rellenos) o taxol
(20 mg/kg; círculos en blanco) o taxol más EC72 (círculos
rellenos).
La figura 8 muestra el tamaño del tumor en
ratones a los que se les implantaron células M109 para formar
tumores subcutáneos y tratados con PBS (cuadrados rellenos) o taxol
(15 mg/kg; círculos en blanco) o taxol más EC72 (círculos
rellenos).
La figura 9 muestra la unión de ^{3}H-ácido
fólico a células KB en presencia de concentraciones crecientes de
ácido fólico libre (curva inferior) o EC72 (curva superior).
La figura 10 muestra la inhibición de la
síntesis de ADN de células KB mediante concentraciones crecientes
de EC72 (círculos rellenos) o EC72 en presencia de folato libre 0,1
mM (círculos en blanco).
La figura 11 muestra la supervivencia en
porcentaje de ratones que portan el tumor M109 a los que se les
inyectó PBS (control; cuadrados rellenos) o concentraciones
crecientes de EC72 (rombos rellenos = 100 mmol/kg de EC72,
triángulos rellenos = 400 nmol/kg de EC72 y círculos rellenos = 1800
nmol/kg de EC72).
La figura 12 muestra el tamaño del tumor en
ratones a los que se les implantaron células 4T-1
negativas para el receptor de folato para formar tumores
subcutáneos y el tratamiento con PBS (cuadrados rellenos) o EC72
(círculos rellenos).
La presente invención se refiere a conjugados
que comprenden un resto folato unido a un compuesto de mitomicina
mediante un grupo de unión escindible. Los conjugados de
vitamina-mitomicina según la invención pueden usarse
para eliminar selectivamente una población de células patógenas en
un huésped afectado. La eliminación selectiva de las células
patógenas está mediada por la unión del resto de vitamina del
conjugado de vitamina-mitomicina a un receptor de
folato, una proteína transportadora u otra proteína presentada en la
superficie que se une específicamente a folatos o análogos de
folato y que se expresa de manera única, se sobreexpresa o se
expresa preferentemente por las células patógenas. Una proteína
presentada en la superficie expresada de manera única,
sobreexpresada o expresada preferentemente por las células patógenas
es preferiblemente un receptor presente o no presente a menores
concentraciones en células no patógenas que proporciona un medio
para la eliminación selectiva de las células patógenas.
Los conjugados de
vitamina-mitomicina se internalizan con la unión del
resto folato a tal receptor, proteína transportadora o proteína
expresada en la superficie y el resto folato y el compuesto de
mitomicina pueden disociarse intracelularmente con la escisión de
un grupo de unión escindible usado para unir covalentemente el
resto folato al compuesto de mitomicina. El grupo de unión
escindible puede ser, por ejemplo, una unión disulfuro que da como
resultado una toxicidad reducida del conjugado de
vitamina-mitomicina hacia las células normales. En
realizaciones en las que el resto de vitamina se conjuga a un
compuesto de mitomicina mediante una unión disulfuro, el resto de
vitamina y el compuesto de mitomicina pueden disociarse en las
condiciones reductoras que existen intracelularmente. Con su
disociación del resto de vitamina, el compuesto de mitomicina puede
interaccionar con el ADN, tal como formando entrecruzamientos con el
ADN, dando como resultado la destrucción o la inhibición de la
proliferación de las células patógenas.
En una realización alternativa, el resto folato
del conjugado puede unirse a la célula patógena poniendo el
compuesto de mitomicina en estrecha asociación con la superficie
celular. Entonces puede liberarse el fármaco mediante la escisión
de la unión disulfuro, por ejemplo, mediante una proteína disulfuro
isomerasa. El compuesto de mitomicina puede captarlo la célula
patógena a la que se une el conjugado de
vitamina-mitomicina, o el compuesto de mitomicina
puede captarlo otra célula patógena en estrecha proximidad a la
misma para interaccionar con el ADN de la célula y destruir o
inhibir la proliferación de la célula patógena. Alternativamente,
podría liberarse el fármaco mediante una proteína disulfuro
isomerasa dentro de la célula cuando el grupo de unión liberable es
un grupo disulfuro.
En otra realización, o en combinación con las
realizaciones descritas anteriormente, los conjugados de
vitamina-mitomicina pueden actuar a través de un
mecanismo independiente de los receptores celulares de vitamina. Por
ejemplo, los conjugados pueden unirse a receptores solubles de
vitamina presentes en el suero o a proteínas séricas, tales como
albúmina, dando como resultado una circulación prolongada de los
conjugados con relación a la mitomicina no conjugada, y un aumento
de la actividad de los conjugados hacia la población de células
patógenas con relación a la mitomicina no conjugada.
Los conjugados de
vitamina-mitomicina según la invención se utilizan
para eliminar selectivamente una población de células patógenas en
un animal huésped que alberga la población de células patógenas. La
invención es aplicable a poblaciones de células patógenas que
provocan una variedad de patologías incluyendo cáncer, enfermedades
mediadas por macrófagos activados y enfermedades mediadas por
cualquier otro tipo de células patógenas que sobreexpresan
receptores de vitamina o receptores que se unen a análogos o
derivados de vitaminas. Por tanto, la población de células
patógenas puede ser una población de células cancerosas que es
tumorigénica, incluyendo tumores benignos y tumores malignos, o
puede ser no tumorigénica. La población de células cancerosas puede
surgir espontáneamente o mediante procesos tales como mutaciones
presentes la línea germinal del animal huésped o mutaciones
somáticas, o puede inducirse químicamente, viralmente o mediante
radiación. La invención puede utilizarse para tratar cánceres tales
como carcinomas, sarcomas, linfomas, enfermedad de Hodgekin,
melanomas, mesoteliomas, linfoma de Burkitt, carcinomas
nasofaríngeos, leucemias y mielomas. La población de células
cancerosas puede incluir cánceres bucal, de tiroides, endocrino, de
piel, gástrico, esofágico, laríngeo, de páncreas, de colon, de
vejiga, óseo, de ovario, cervicouterino, uterino, de mama, de
testículo, de próstata, rectal, de riñón, de hígado y de
pulmón.
En realizaciones en las que la población de
células patógenas es una población de células cancerosas, el efecto
de la administración del conjugado es una respuesta terapéutica
medida mediante la reducción o eliminación de la masa tumoral, el
mantenimiento de la masa tumoral o de inhibición de la proliferación
de células tumorales. En el caso de un tumor, la eliminación puede
ser una eliminación de células del tumor primario o de células que
han metastatizado o están en el proceso de disociarse del tumor
primario. También se contempla según esta invención un tratamiento
profiláctico con el conjugado de vitamina-mitomicina
para prevenir la reaparición de un tumor tras su extirpación
mediante cualquier enfoque terapéutico incluyendo la extirpación
quirúrgica del tumor, radioterapia, quimioterapia, o terapia
biológica. El tratamiento profiláctico puede ser un tratamiento
inicial con el conjugado de vitamina-mitomicina, tal
como tratamiento en un régimen diario de dosis múltiples y/o puede
ser un tratamiento o serie de tratamientos adicional tras un
intervalo de días o meses tras el/los tratamiento(s)
inicial(es). En consecuencia, la eliminación de la población
de células patógenas incluye eliminación de células, inhibición de
la proliferación de células patógenas, mantenimiento de la masa
tumoral o un tratamiento profiláctico que previene la reaparición de
células patógenas.
El conjugado de la presente invención puede
usarse tanto para aplicaciones veterinarias como de medicina clínica
en seres humanos. Por tanto, el animal huésped que alberga la
población de células patógenas y tratado con conjugados de
vitamina-mitomicina puede ser un ser humano o, en el
caso de aplicaciones veterinarias, puede ser un animal de
laboratorio, agropecuario, doméstico o salvaje. La presente
invención puede aplicarse a animales huésped incluyendo, pero sin
limitarse a, seres humanos, animales de laboratorio tales como
roedores (por ejemplo, ratones, ratas, hámsteres, etc.), conejos,
monos, chimpancés, animales domésticos tales como perros, gatos y
conejos, animales agropecuarios tales como vacas, caballos, cerdos,
ovejas, cabras, y animales salvajes en cautividad tales como osos,
osos pandas, leones, tigres, leopardos, elefantes, cebras, jirafas,
gorilas, delfines y ballenas.
Según la presente invención, los conjugados de
vitamina-mitomicina se forman a partir de folatos o
derivados/análogos de folato de unión a receptores y mitomicinas.
Los conjugados de vitamina-mitomicina pueden
seleccionar como diana selectivamente una población de células
patógenas en el animal huésped debido a la expresión preferente de
un receptor para la vitamina, accesible para la unión de la
vitamina, en las células patógenas. El resto de vitamina descrito
es ácido fólico. Esta vitamina, y sus análogos y derivados de unión
a receptores, constituyen la entidad de selección como diana que
puede acoplarse con mitomicinas mediante un grupo de unión
escindible para formar los conjugados de
folato-mitomicina para su uso según la invención.
Los restos de vitamina incluyen ácido fólico, y análogos y
derivados de unión a receptores de estas moléculas de folato, y
otras moléculas relacionadas de unión al receptor de folato (véase
la patente estadounidense número 5.688.488). Un ejemplo de un
análogo de vitamina es un análogo de folato que contiene un residuo
de ácido glutámico en la configuración D (el ácido fólico
normalmente contiene un ácido glutámico en la configuración I, unido
a ácido pteroico). El compuesto de mitomicina se selecciona de
mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C, mitomicina D, mitomicina
E, mitomicina F, mitomicina J y porfiromicina.
El sitio de unión para la vitamina es el
receptor para folato, o un derivado o análogo del mismo, que puede
unirse específicamente a dicho receptor en el que el receptor u otra
proteína se expresa de manera única, se sobreexpresa o se expresa
preferentemente por una población de células patógenas. Una proteína
presentada en la superficie expresada de manera única,
sobreexpresada o expresada preferentemente por las células patógenas
es normalmente un receptor que o bien no está presente o bien está
presente a menores concentraciones en células no patógenas,
proporcionando un medio para la eliminación selectiva de las células
patógenas. En una realización, los ligandos que pueden usarse en
los conjugados de la presente invención incluyen los que se unen a
receptores expresados específicamente en macrófagos activados,
tales como el receptor de folato, que se une a folato o un análogo
o derivado del mismo.
Según la invención los conjugados de
vitamina-mitomicina pueden unirse con alta afinidad
a receptores en células cancerosas u otras células patógenas. La
unión de alta afinidad puede ser inherente al resto de vitamina o
la afinidad de unión puede potenciarse mediante el uso de una
vitamina modificada químicamente (es decir, un análogo o un
derivado) o mediante la unión química particular entre la vitamina y
el compuesto de mitomicina que está presente en el conjugado.
El grupo de unión puede ser cualquier grupo de
unión escindible biocompatible, tal como un grupo de unión
susceptible de escisión en las condiciones reductoras presentes en
las células, un grupo de unión lábil en medio ácido o un grupo de
unión lábil con una enzima. Normalmente, el grupo de unión comprende
de aproximadamente 1 a aproximadamente 30 átomos de carbono, más
normalmente de aproximadamente 2 a aproximadamente 20 átomos de
carbono. Normalmente, se emplean grupos de unión de menor peso
molecular (es decir, aquellos que tienen un peso molecular
aproximado de aproximadamente 30 a aproximadamente 300).
Generalmente, puede utilizarse cualquier modo de
formación de un complejo entre el grupo de unión y el folato, o
derivado o análogo de unión al receptor de folato, y entre el grupo
de unión y la mitomicina, según la presente invención. El complejo
puede formarse mediante conjugación directa del grupo de unión
escindible con la vitamina y la mitomicina, por ejemplo, a través
de enlaces de hidrógeno, iónicos o covalentes. Los enlaces
covalentes del folato, o derivado o análogo de unión al receptor de
folato, y la mitomicina con el grupo de unión pueden producirse,
por ejemplo, a través de la formación de enlaces amida, éster,
disulfuro o imino entre grupos ácido, aldehído, hidroxilo, amino,
sulfhidrilo o hidrazo. Además, según esta invención, el grupo de
unión puede comprender un medio indirecto para asociar el folato
con la mitomicina, tal como mediante conexión a través de grupos de
unión intermedios, brazos espaciadores o moléculas puente. Ambos
medios directos e indirectos para la asociación deben evitar la
unión de la vitamina, o derivado o análogo de unión al receptor de
vitamina, al receptor de folato en la membrana celular para el
funcionamiento del método de la presente invención.
La invención también proporciona un método de
preparación de un conjugado biológicamente activo de fórmula
B-L-X
en la
que
B es un folato o un derivado o análogo de unión
al receptor de folato del mismo;
X comprende un compuesto de mitomicina
seleccionado de mitomicina A, mitomicina B, mitomicina C, mitomicina
D, mitomicina E, mitomicina F, mitomicina J y porfiromicina
y L es un grupo de unión divalente que comprende
un enlace disulfuro, comprendiendo dicho método las etapas de
formar un producto intermedio de tiosulfonato de fórmula
B-(L')_{n}SSO_{2}R o un producto intermedio de fórmula
X-(L')_{n}SSO_{2}R
y hacer reaccionar dicho producto intermedio de
tiosulfonato con un compuesto de fórmula
X-(L')_{n}-SH o
B-(L'')_{n'}-SH, respectivamente, en las que L' y
L'' son, independientemente, grupos de unión divalentes a través de
los cuales se une covalentemente el grupo tiol SH a B y X,
respectivamente;
n y n' son 1 ó 0; y
R es alquilo, alquilo sustituido, arilo,
heteroarilo o arilo o heteroarilo sustituido.
La naturaleza de los grupos de unión L' y L'' en
los productos intermedios no es crítica excepto porque los grupos
de unión son preferiblemente escindibles; ni tampoco es crítica la
naturaleza del grupo R en el tiosulfonato para la preparación de
los conjugados de vitamina. Normalmente se seleccionan precursores
de tales grupos de unión para que tengan grupos funcionales o bien
nucleófilos o bien electrófilos, o ambos, opcionalmente en una
forma protegida con un grupo protector fácilmente escindible para
facilitar su uso en la síntesis de la especie intermedia. El grupo
de unión -L- en el conjugado, en virtud de su procedimiento de
preparación sintético, también puede representarse como una
amalgama del grupo de unión intermedio L' y L'' mediante la fórmula
-(L')_{n}-S-S-(L'')_{n'}-. En el
caso de -L'-, la entidad X-(L')_{n}-SH debe
conservar actividad citotóxica.
La invención también se refiere a composiciones
farmacéuticas que comprenden una cantidad de un conjugado de
folato-mitomicina eficaz para eliminar una población
de células patógenas en un animal huésped cuando se administra en
una o más dosis. El conjugado de folato-mitomicina
se administra preferiblemente al animal huésped por vía parenteral,
por ejemplo, por vía intradérmica, por vía subcutánea, por vía
intramuscular, por vía intraperitoneal, por vía intravenosa o por
vía intratecal. Alternativamente, el conjugado puede administrarse
al animal huésped mediante otros procesos médicamente útiles, y
puede usarse cualquier dosis eficaz y forma farmacéutica
terapéutica adecuada, incluyendo formas farmacéuticas de liberación
prolongada. El conjugado de la presente invención puede usarse en
combinación con la extirpación quirúrgica de un tumor, radioterapia,
quimioterapia, o terapias biológicas tales como otras
inmunoterapias incluyendo, terapia con anticuerpos monoclonales,
tratamiento con agentes inmunomoduladores, transferencia adoptiva de
células efectoras inmunitarias, tratamiento con factores de
crecimiento hematopoyético, citocinas y vacunación.
Los ejemplos de formas farmacéuticas
parenterales incluyen disoluciones acuosas del agente activo, en una
solución salina isotónica, glucosa al 5% u otros vehículos líquidos
farmacéuticamente aceptables bien conocidos tales como alcoholes,
glicoles, ésteres y amidas líquidos. La forma farmacéutica
parenteral según esta invención puede estar en forma de un
liofilizado que puede reconstituirse que comprende la dosis del
conjugado de vitamina-mitomicina. En un aspecto
preferido de la presente realización, puede administrarse cualquiera
de varias formas farmacéuticas de liberación prolongada conocidas
en la técnica tales como, por ejemplo, las matrices de hidratos de
carbono biodegradables descritas en las patentes estadounidenses
números 4.713.249; 5.266.333; y 5.417.982, o, alternativamente,
puede usarse una bomba lenta (por ejemplo, una bomba osmótica).
Puede administrarse al huésped al menos una
composición adicional que comprende un factor terapéutico en
combinación o como adyuvante de la metodología detallada
anteriormente, para potenciar la eliminación mediada por
vitamina-mitomicina de la población de células
patógenas, o puede administrarse más de un factor terapéutico
adicional. El/los factor(es) terapéutico(s)
puede(n) seleccionarse de un compuesto que puede estimular
una respuesta inmunitaria endógena, un agente quimioterápico u otro
factor terapéutico que puede complementar la eficacia del complejo
de vitamina-mitomicina administrado. El método de la
invención puede llevarse a cabo mediante la administración al
huésped, además de los conjugados descritos anteriormente, de
compuestos o composiciones que pueden estimular una respuesta
inmunitaria endógena incluyendo, pero sin limitarse a, citocinas o
factores de crecimiento de células inmunitarias tales como
interleucinas 1-18, factor de células madre, FGF
básico, EGF, G-CSF, GM-CSF, ligando
de FLK-2, HILDA, MIP-1\alpha,
TGF\alpha, TGF\beta, M-CSF, IFN\alpha,
IFN\beta, IFN\gamma, CD23 soluble, LIF y combinaciones de los
mismos.
Pueden usarse combinaciones terapéuticamente
eficaces de estos factores. En una realización, por ejemplo, pueden
usarse cantidades terapéuticamente eficaces de IL-2,
por ejemplo, en cantidades que oscilan desde aproximadamente 5000
U.I./dosis/día hasta aproximadamente 500.000 U.I./dosis/día en un
régimen diario de dosis múltiples, o, por ejemplo, en cantidades
que oscilan desde aproximadamente 7500 U.I./dosis/día hasta
aproximadamente 150.000 U.I./dosis/día en un régimen diario de
dosis múltiples, junto con los conjugados de
vitamina-mitomicina para eliminar células patógenas
en un animal huésped que alberga una población de células de este
tipo. Alternativamente, puede usarse IL-2 en
combinación con IFN-\alpha en la que puede usarse
IL-2, por ejemplo, en cantidades que oscilan desde
0,1 M.U.I./m^{2}/dosis/día hasta aproximadamente 15
M.U.I./m^{2}/dosis/día en un régimen diario de dosis múltiples, y
puede usarse IFN-\alpha, por ejemplo, en
cantidades que oscilan desde aproximadamente 0,1
M.U.I./m^{2}/dosis/día hasta aproximadamente 7,5
M.U.I./m^{2}/dosis/día en un régimen diario de dosis múltiples,
junto con los conjugados para eliminar o neutralizar células
patógenas en un animal huésped que alberga las células patógenas
(M.U.I. = millón de unidades internacionales; m^{2} = área de
superficie corporal aproximada de un ser humano medio). En otra
realización, se usan IL-12 y
IFN-\alpha en cantidades terapéuticamente
eficaces, y aún en otra realización se usan IL-15 y
IFN-\alpha en cantidades terapéuticamente
eficaces. En una realización alternativa, se usan
IL-2, IFN-\alpha o
IFN-\gamma y GM-CSF en
combinación. La invención también contempla el uso de cualquier
otra combinación eficaz de citocinas incluyendo combinaciones de
otras interleucinas e interferones y factores estimulantes de
colonias.
Los agentes quimioterápicos, que son citotóxicos
en sí mismos, pueden actuar para potenciar la permeabilidad
tumoral, pueden inhibir el crecimiento tumoral o la proliferación de
células tumorales, y similares, también son adecuados para su uso
en el método de la invención en combinación con conjugados de
vitamina-mitomicina. Tales agentes quimioterápicos
incluyen adrenocorticoides, agentes de alquilación, antiandrógenos,
antiestrógenos, andrógenos, estrógenos, antimetabolitos tales como
arabinósido de citosina, análogos de purina, análogos de pirimidina
y metotrexato, actinomicina D, gemcitabina, busulfano, carboplatino,
clorambucilo, cisplatino y otros compuestos de platino,
trimetoprima, dicloxacilina, daunorubicina, doxorubicina,
epirubicina, mitoxantrona, topotecán, etopósido, tamoxifeno, TAXOL®
(es decir, paclitaxel), ciclofosfamida, ciclosporina, alcaloides
vegetales, prednisona, hidroxiurea, tenipósido, bleomicina,
digoxina, mostazas nitrogenadas, nitrosoureas, vincristina,
vinblastina, mitomicina C, agentes inflamatorios y proinflamatorios,
y cualquier otro agente quimioterápico reconocido en la
técnica.
El factor terapéutico adicional puede
administrarse al animal huésped antes de, tras o al mismo tiempo que
el conjugado de vitamina-mitomicina y el factor
terapéutico puede administrarse como parte de la misma composición
que contiene el conjugado o como parte de una composición diferente
a la del conjugado de vitamina-mitomicina. Puede
usarse cualquier composición terapéutica de este tipo que contiene
el factor terapéutico a una dosis terapéuticamente eficaz en la
presente invención incluyendo composiciones que contienen múltiples
factores terapéuticos.
En una realización, el factor terapéutico
adicional es TAXOL® (es decir, paclitaxel; vendido por Bristol Myers
Squibb Company con la marca comercial TAXOL® y por Ivax Corporation
con la marca comercial ONXOL^{TM}). Según esta invención, puede
usarse TAXOL®, ONXOL^{TM}, cualquier otra forma genérica de TAXOL®
o cualquier compuesto relacionado en combinación con los conjugados
de vitamina-mitomicina. Pueden administrarse TAXOL®,
formas genéricas de TAXOL® o compuestos relacionados, por ejemplo,
a pacientes a dosis de aproximadamente de 10 a aproximadamente 500
mg/metro cuadrado, de aproximadamente 50 a aproximadamente 400 mg/
metro cuadrado, de aproximadamente 100 a aproximadamente 300
mg/metro cuadrado o de aproximadamente 100 a aproximadamente 200
mg/metro cuadrado, pero puede usarse cualquier dosis eficaz en
combinación con los conjugados de
vitamina-mitomicina.
Adicionalmente, puede usarse cualquier régimen
eficaz para la administración de TAXOL®, formas genéticas de TAXOL®
o un compuesto relacionado. Por ejemplo, pueden administrarse TAXOL®
o compuestos genéricos o relacionados a lo largo de 3 horas una vez
cada 3 semanas durante un total de 18 semanas, pero se contempla
cualquier otro régimen eficaz según esta invención. Pueden
administrarse TAXOL® o compuestos genéricos o relacionados por
cualquier vía eficaz tal como por vía oral o por vía parenteral, por
ejemplo, por vía intradérmica, por vía subcutánea, por vía
intramuscular, por vía intraperitoneal, por vía intravenosa o por
vía intratecal.
Puede usarse más de un tipo de conjugado de
administración de fármacos. Por ejemplo, el animal huésped puede
tratarse con conjugados con diferentes vitaminas (por ejemplo,
conjugados de folato-mitomicina y conjugados de
vitamina B_{12}-mitomicina) en un protocolo de
dosificación conjunta. En otras realizaciones, el animal huésped
puede tratarse con conjugados que comprenden diversas vitaminas
unidas a diversas mitomicinas. Por ejemplo, el animal huésped
podría tratarse con un conjugado de
folato-mitomicina C y uno de
folato-mitomicina A, o con un conjugado de
folato-mitomicina C y un conjugado de vitamina
B_{12}-mitomicina A. Además, podrían usarse los
conjugados de administración de fármacos con las mismas o diferentes
vitaminas y las mismas o diferentes mitomicinas que comprenden
múltiples vitaminas y múltiples mitomicinas como parte del mismo
conjugado de administración de fármacos.
La dosificación diaria unitaria del conjugado de
vitamina-mitomicina puede variar significativamente
dependiendo del estado del huésped, el estado patológico que se
está tratando, el peso molecular del conjugado, su vía de
administración y la distribución tisular, y la posibilidad del uso
conjunto de otros tratamientos terapéuticos tales como
radioterapia. La cantidad eficaz que ha de administrarse a un
paciente se basa en el área de superficie corporal, el peso del
paciente y la valoración del médico del estado del paciente. Una
dosis eficaz puede oscilar desde aproximadamente 1 ng/kg hasta
aproximadamente 1 mg/kg, más preferiblemente desde aproximadamente
1 \mug/kg hasta aproximadamente 500 \mug/kg y lo más
preferiblemente desde aproximadamente 1 \mug/kg hasta
aproximadamente
\hbox{100 \mu g/kg.}
Puede usarse cualquier régimen eficaz para
administrar el conjugado de vitamina-mitomicina. Por
ejemplo, puede administrarse el conjugado de
vitamina-mitomicina como dosis únicas, o puede
dividirse y administrarse como un régimen diario de dosis
múltiples. Además, puede usarse un régimen escalonado, por ejemplo,
de uno a tres días a la semana como alternativa al tratamiento
diario, y con el fin de definir esta invención, se considera que
tal régimen diario intermitente o escalonado es equivalente al
tratamiento cada día y está dentro del alcance de esta invención.
En una realización de la invención, el huésped se trata con
múltiples inyecciones del conjugado de
vitamina-mitomicina para eliminar la población de
células patógenas. En una realización, se le inyecta al huésped
múltiples veces (preferiblemente de aproximadamente 2 hasta
aproximadamente 50 veces) el conjugado de
vitamina-mitomicina, por ejemplo, a intervalos de
12-72 horas o a intervalos de 48-72
horas. Pueden administrarse inyecciones adicionales del conjugado
de vitamina-mitomicina al paciente con un intervalo
de días o meses tras la(s) inyección/inyecciones
inicial(es) y las inyecciones adicionales previenen la recurrencia del estado patológico provocado por las células patógenas. También puede administrarse cualquier factor terapéutico adicional, tal como un agente quimioterápico (por ejemplo, paclitaxel), tras las inyecciones iniciales para prevenir la recurrencia de la enfermedad.
inicial(es) y las inyecciones adicionales previenen la recurrencia del estado patológico provocado por las células patógenas. También puede administrarse cualquier factor terapéutico adicional, tal como un agente quimioterápico (por ejemplo, paclitaxel), tras las inyecciones iniciales para prevenir la recurrencia de la enfermedad.
Los ligandos usados en los conjugados de la
presente invención incluyen aquellos que se unen a receptores
expresados específicamente en macrófagos activados, tales como el
receptor de folato que se une a folato, o un análogo o derivado del
mismo. Los conjugados de folato-mitomicina pueden
usarse para destruir o suprimir la actividad de macrófagos
activados que provocan estados patológicos en el huésped. Tales
conjugados que seleccionan como diana los macrófagos, cuando se
administran a un paciente que padece un estado patológico mediado
por macrófagos activados, actúan para concentrar y asociarse a la
mitomicina conjugada en la población de macrófagos activados para
destruir los macrófagos activados o suprimir la función de los
macrófagos. La eliminación o desactivación de la población de
macrófagos activados actúa para detener o reducir la patogénesis
mediada por macrófagos activados característica del estado
patológico que se está tratando. Los ejemplos de enfermedades que
se sabe que están mediadas por macrófagos activados incluyen
artritis reumatoide, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn,
psoriasis, osteomielitis, esclerosis múltiple, aterosclerosis,
fibrosis pulmonar, sarcoidosis, esclerosis sistémica, rechazo de
trasplantes de órganos (GVHD) e inflamaciones crónicas. Normalmente
se continúa la administración del conjugado hasta que se reducen o
eliminan los síntomas del estado patológico, y puede administrarse
el conjugado en combinación con cualquier factor terapéutico
adicional, tal como un agente quimioterápico (por ejemplo,
paclitaxel).
Los conjugados se administran preferiblemente
por vía parenteral al animal o paciente que padece el estado
patológico, por ejemplo, por vía intradérmica, por vía subcutánea,
por vía intramuscular, por vía intraperitoneal o por vía
intravenosa en combinación con un vehículo farmacéuticamente
aceptable. Alternativamente, los conjugados pueden administrarse al
animal o paciente mediante otros procedimientos médicamente útiles y
pueden administrarse dosis eficaces en formas farmacéuticas de
liberación prolongada o convencionales. El conjugado terapéutico
puede usarse solo o en combinación con otros métodos terapéuticos
reconocidos para el tratamiento de estados patológicos mediados por
macrófagos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon los compuestos 5, 7 y 9 (véanse
los esquemas 2 y 3) tal como sigue. En primer lugar, se mezclaron
los compuestos 1 y 2 (cuarenta y cinco \mumoles de cada uno) con
agitación bajo argón con 1 ml de metanol anhidro. Tras agitar
durante 20 horas, ambos materiales de partida habían desaparecido
según se determinó mediante CCF (gel de sílice; CHCl_{3}/MeOH =
9/1). Para preparar el compuesto 5, en un matraz aparte se
añadieron 1,0 ml de agua desionizada a cuarenta y dos \mumoles de
compuesto 4 y se purgó la disolución con argón. A esta disolución
se le añadió NaHCO_{3} 0,1 N hasta que se ajustó el pH a 7, y se
mezcló esta disolución con la primera disolución de reacción
descrita anteriormente (preparada mezclando los compuestos 1 y 2).
Se completó la reacción de conjugación en 30 minutos. Se evaporó el
metanol a vacío y se purificó el conjugado con HPLC preparativa
(columna Prep Novapak HR C18 19 X 300 mM; fase móvil (A) - tampón
fosfato 1,0 mM, pH = 6; fase orgánica (B) - acetonitrilo;
condiciones - gradiente desde el 99% de A y el 1% de B hasta el 50%
de A y el 50% de B en 30 minutos, velocidad de flujo = 15
ml/minuto). Se prepararon los compuestos 7 y 9 usando el mismo
protocolo excepto porque se usaron los compuestos 6 y 8,
respectivamente, en la segunda disolución en lugar del compuesto 4.
Se identificaron los compuestos 5, 7 y 9 mediante RMN 1D (figura 5)
y 2D (figura 6) y EM (ES).
Se evaluó un compuesto denominado EC72 (véase el
esquema 1) usando un ensayo de citotoxicidad in vitro que
predice la capacidad del fármaco para inhibir el crecimiento de
células KB positivas para el receptor de folato. Este compuesto
comprende un análogo de folato unido a mitomicina C preparado según
el protocolo representado en el esquema 2. Se expusieron las
células KB durante 15 minutos a 37ºC a las concentraciones
indicadas de EC72, mitomicina C libre (fármaco nº 1) o a EC72 y al
menos un exceso de 100 veces de ácido fólico. Entonces se
enjuagaron las células una vez con nuevo medio de cultivo y se
incubaron en nuevo medio de cultivo durante 72 horas a 37ºC. Se
evaluó la viabilidad celular usando un ensayo ELISA basado en
bromodesoxiuridina.
Cuando se comparó directamente, la citotoxicidad
de EC72 fue igual a la de la mitomicina C libre (véase la figura
1). Se bloqueó la citotoxicidad de EC72 en presencia de ácido fólico
libre en exceso, lo que indica que la destrucción celular observada
estaba mediada por la unión de folato a su receptor. De manera
importante, este resultado también sugiere que los tejidos normales
que expresan de poca cantidad a ninguna del receptor de folato no
deben verse afectados por el conjugado de EC72.
Se evaluó in vivo la eficacia de EC72
para promover la supervivencia de ratones que portan tumores usando
ratones Balb/c que portaban tumores M109. Había dos objetivos en
este estudio: i) determinar si el tratamiento intraperitoneal
diario con EC72 podía prolongar la vida de ratones que portaban
tumores positivos para el receptor de folato más allá de lo que
podría hacer la mitomicina C cuando se somete a prueba con un
régimen de dosificación idéntico y ii) examinar los efectos
patológicos del tratamiento con EC72 en los tejidos normales,
incluyendo tejido renal que es un tejido positivo para el receptor
de folato. Aunque la mayoría de los tejidos normales contienen
niveles muy bajos del receptor de folato, los túbulos proximales del
riñón expresan cifras apreciables de receptores de folato. Por
tanto, la evaluación in vivo de EC72 también permitió la
evaluación de la extensión del daño específico del riñón provocado
por la administración sistémica de conjugados de
folato-mitomicina.
Se administró a ratones Balb/c (5 ratones/grupo)
una inyección intraperitoneal con 1 x 10^{6} células M109.
Entonces se administró a los ratones una inyección intraperitoneal
una vez al día con 1800 nmoles/kg de EC72 o mitomicina C (a los
ratones control se les inyectó PBS) comenzando el día 5 tras la
inoculación de células tumorales (ILS = increased life span,
aumento de la duración de vida (es decir, tiempo medio de
supervivencia)).
Tal como se muestra en la figura 2, todos los
ratones control murieron en el día 22 tras la inoculación del
tumor. Aunque se observó un aumento en la duración de vida (ILS) del
39% para los animales tratados con mitomicina C no modificada, los
animales tratados con EC72 tuvieron un promedio de un aumento en la
duración de vida del 178%.
Se repitió el mismo experimento (excepto porque
se administraron 30 inyecciones diarias con EC72 o mitomicina C)
para confirmar la actividad antitumoral mediada por EC72 observada,
y para confirmar si el efecto de EC72 estaba mediado por la unión
de folato a su receptor. Por tanto, se administraron a un grupo de
animales inyecciones intraperitoneales de EC72 más un exceso de 10
veces de ácido fólico libre. Tal como se muestra en la figura 3, el
grupo de animales tratados con EC72 mostró el mayor aumento en la
duración de vida (es decir, tiempo medio de supervivencia; un 185%
con respecto a los del grupo control con PBS), mientras que los
animales en el grupo con mitomicina C sólo mostraron un aumento
aproximado del 25%. Además, 1 de los 4 animales tratados con EC72
apareció libre de tumor en el día 70 tras la inoculación de células
tumorales. El efecto antitumoral del conjugado de EC72 se redujo
significativamente (un aumento del 112% en el tiempo medio de
supervivencia) mediante la inyección conjunta de un exceso moderado
de ácido fólico, y todos los ratones en este grupo murieron
finalmente debido a la carga tumoral.
También se extrajeron los órganos principales en
los animales tratados tanto con EC72 como con mitomicina C (tras su
sacrificio), y se enviaron a un patólogo independiente para su
examen. Tal como se describe en la tabla 2 a continuación, los
animales tratados con mitomicina C padecieron una extensa
mielosupresión, que es un efecto secundario característico del
tratamiento con mitomicina C. De hecho, todos los animales en este
grupo murieron debido a evidentes efectos secundarios relacionados
con la mitomicina C. Sorprendentemente, los animales tratados con
EC72 no presentaron evidencia de mielosupresión ni daño renal (es
decir, el bazo, la médula ósea del fémur y los riñones le
parecieron todos normales al patólogo experto). De manera
interesante, el examen de la sangre extraída de los ratones
tratados con EC72 indicó niveles de creatina y concentración sérica
de urea normales tras 30 inyecciones diarias consecutivas con EC72.
Por tanto, los conjugados de folato-mitomicina C
parecen ser agentes quimioterápicos eficaces que no provocan una
lesión no deseada de los tejidos normales, incluyendo los riñones,
positivos para el receptor de folato.
Se evaluó la actividad antitumoral de EC72
cuando se administró por vía intravenosa (i.v.) a animales que
portaban tumores, en ratones Balb/c que portaban tumores M109
subcutáneos. Por tanto, se siguió un protocolo similar al descrito
en el ejemplo 3 excepto porque los compuestos se administraron por
vía i.v. (descrito a continuación) y los tumores eran subcutáneos.
Cuatro días tras la inoculación del tumor bajo el cutis de la axila
derecha, se inyectó a los ratones por vía i.v. qd x 5 durante seis
semanas 1800 nmoles/kg de EC72. Se determinó el crecimiento tumoral
a intervalos de 2 días en cada grupo de tratamiento hasta que los
tumores crecieron hasta al menos 1500 mm^{3}. Las venas de la
cola se magullaron excesivamente y se volvieron inaccesibles tras
12 inyecciones i.v. de modo que se continuó la dosificación por vía
i.p. siguiendo el mismo programa qd x 5. Tal como se muestra en la
figura 4, el tratamiento con EC72 fue eficaz en el retardo del
crecimiento del tumor M109. De manera interesante, sí que comenzó a
aumentar la tasa de crecimiento de los tumores justo tras hacerse
el cambio a la dosificación i.p. Por tanto, EC72 puede no haber
alcanzado el tumor subcutáneo distal de manera eficaz tras la
administración i.p. de EC72, una limitación que no se encuentra
cuando se administra EC72 por vía i.v. durante la fase inicial del
tratamiento.
Se siguió el protocolo descrito en el ejemplo 4
excepto porque se inyectó a los ratones por vía i.v. a lo largo de
todo el periodo de tratamiento y se trataron con EC72 durante 4
semanas. Se inyectó a ratones Balb/c (n = 5) por vía subcutánea
debajo del cutis de la axila derecha 1 x 10^{6} células M109 y se
trataron qd x 5 durante 4 semanas con 1800 nmol/kg de EC72. Se
administró EC72 por vía i.v. comenzando el día designado tras la
inoculación de células tumorales (PTI, post tumor inoculation
(tras la inoculación del tumor); véase la tabla 3). Se monitorizó
diariamente la supervivencia de los animales, y los ratones que
mostraron una respuesta completa eran aquellos que estaban libres
de tumor en el día 60 PTI.
En el modelo de tumor subcutáneo, la
supervivencia disminuyó con la duración en el retardo de la
administración de EC72. Por tanto, tal como se resume en la tabla
3, el rendimiento era máximo si se comenzaba el tratamiento con
EC72 en el 1 día PTI, en el que resultaron 2 de 5 respuestas
completas y 3 de 5 animales tuvieron un aumento en la duración de
vida del 133% (ILS; es decir, respuesta parcial). Por el contrario,
el retardo del tratamiento con EC72 hasta 12 días PTI sólo dio como
resultado un ILS del 8% con 0 de 5 respuestas completas. Además,
disminuyeron el tiempo medio de supervivencia (días) y el % de ILS
con el aumento del retardo en el inicio del tratamiento con
EC72.
Se siguió el protocolo descrito en el ejemplo 5
excepto porque se inyectó a los animales por vía i.v. al comienzo
del periodo de tratamiento y se les inyectó por vía i.p. después en
el periodo de tratamiento. Para investigar si EC72 y TAXOL® en
combinación podrían aumentar de manera eficaz la supervivencia de
ratones que portan tumores sólidos, se formaron tumores M109
subcutáneos en ratones Balb/c (n = 5 para cada grupo de tratamiento)
durante 12 días (es decir, un tiempo PTI cuando el inicio del
tratamiento con EC72 solo fue ineficaz (véase la tabla 3)).
Entonces se trataron los ratones con TAXOL® (es decir, paclitaxel)
con o sin EC72, y se midieron tanto los volúmenes del tumor
primario como la supervivencia de los animales.
Doce días PTI, se trataron los ratones con
TAXOL® (20 mg/kg, por vía i.v. en los días 12, 15, 19, 22 y 26 PTI)
con o sin EC72 (1800 nmol/kg qd x 5 durante 4 semanas; por vía i.v.
en los días 12, 15, 19, 22 y 26 PTI y por vía i.p. todos los días
restantes). Se calcularon los volúmenes tumorales usando la ecuación
V = a x b^{2}/2, en la que "a" es la longitud del tumor y
"b" es la anchura expresadas en milímetros. Se midieron los
tumores usando calibres.
Tal como se muestra en la figura 7, los tumores
en los animales control sin tratar crecieron rápidamente, y en el
día 50 PTI, alcanzaron un tamaño con el que se requirió su
sacrificio. Los tumores en los animales tratados con TAXOL® no
crecieron hasta el día 29 PTI, tras el cual se reanudó su
crecimiento. Aunque el tratamiento con 20 mg/kg de TAXOL® solo dio
como resultado 1,3 log de destrucción celular (LCK, log cell
kill), los animales tratados con TAXOL® solo parecieron
enfermos, experimentaron una pérdida de peso y ninguno de los 5
ratones en la cohorte fueron supervivientes a largo plazo. Por el
contrario, los tumores en los ratones tratados con TAXOL® y EC72 en
combinación disminuyeron de tamaño durante el periodo de
dosificación, y este régimen dio como resultado 1,8 de LCK en 3 de
los 5 ratones en esta cohorte, y 2 de los 5 ratones estuvieron
libres de tumor a los 90 días PTI. Además, todos los ratones
tratados con TAXOL® en combinación con EC72 mantuvieron su peso y
parecieron sanos durante todo el periodo de dosificación. Estos
resultados muestran que EC72 y TAXOL® actúan de manera sinérgica
para prevenir el crecimiento tumoral porque EC72 solo no produce una
respuesta antitumoral en este modelo de tumor subcutáneo cuando se
inició el tratamiento con EC72 tratamiento 12 días PTI (véase la
tabla 3), y la respuesta con EC72 y TAXOL® en combinación era mucho
mayor que con TAXOL® solo.
Se siguió el procedimiento descrito en el
ejemplo 6 excepto porque se dosificó TAXOL® a 15 mg/kg y se
sometieron a prueba 6 ratones/cohorte. Tal como se muestra en la
figura 8, los tumores en los animales control sin tratar crecieron
a una tasa exponencial, y en el día 50 PTI, alcanzaron un tamaño con
el que se requirió su sacrificio. Por el contrario, los tumores en
ratones tratados con TAXOL® no crecieron hasta el día 21 PTI, tras
lo cual se reanudó su crecimiento exponencial normal aparente. El
tratamiento con TAXOL® dio como resultado 0,6 de LCK con un aumento
del 135% en el tiempo medio de supervivencia en 4 de los 6 animales
tratados, y 2 de los 6 ratones tuvieron una respuesta completa
(véase la tabla 4 en la que RC = respuesta completa, RP = respuesta
parcial y NR = no hay respuesta). Como en el ejemplo 6, se
obtuvieron resultados sorprendentemente mejores con los animales
tratados con TAXOL® que también se trataron con EC72. Por tanto, la
combinación de TAXOL® y EC72 produjo 1,5 de LCK con un aumento del
185% en el tiempo medio de supervivencia en 2 de los 6 ratones, y,
de manera importante, 4 de los 6 ratones tuvieron una respuesta
completa (véase la figura 8 y la tabla 4). Tomados en conjunto,
estos resultados y los resultados mostrados en la figura 7
demuestran que TAXOL® y EC72 actúan de manera sinérgica para
inhibir el crecimiento tumoral.
También se monitorizó la toxicidad de cada
régimen sometido a prueba, midiendo la pérdida de peso, análisis
bioquímico de sangre y patología tisular. Los animales tratados con
TAXOL® en combinación con EC72 parecieron sanos y no perdieron peso
a lo largo de todo el periodo de dosificación. Además, los
resultados de patología tisular de los ratones tratados con TAXOL®
y EC72 confirmaron que no había una degeneración de los órganos
principales en estos animales (tabla 5).
Se determinó la afinidad de EC72 por los
receptores de folato (RF) con respecto a folato según un método
descrito previamente (Westerhof, G. R., J. H. Schomagel, et
al. (1995) Mol. Pharm. 48: 459-471) con una
ligera modificación. En resumen, se tripsinizaron suavemente
células positivas para RF en tripsina al 0,25% en solución salina
tamponada con fosfato (PBS) a temperatura ambiente durante 3 minutos
y luego se diluyeron con RPMI libre de folato (FFRPMI,
folate-free RPMI) que contenía un 10% de
suero de ternero fetal inactivado por calor (HIFCS,
heat-inactivated fetal calf serum). Tras una
centrifugación de 5 min. a 800 x g y un lavado con PBS, se
suspendió el sedimento celular final en FFRPMI 1640 (sin suero). Se
incubaron las células durante 15 min. en hielo con ^{3}H-ácido
fólico 100 nM en ausencia y presencia de concentraciones crecientes
de EC72 o folato. Se centrifugaron las muestras a 10.000 x g
durante 5 min., y luego se suspendieron los sedimentos celulares en
tampón, se transfirieron a viales individuales que contenían 5 ml de
cóctel de centelleo y luego se contaron para determinar la
radiactividad. Los tubos de control negativo contenían sólo el
^{3}H-ácido fólico en FFRPMI (sin competidor). Los tubos de
control positivo contenían una concentración final de ácido fólico
1 mM, y se restaron las CPM en estas muestras (que representan la
unión no específica del marcador) de todas las muestras. En
particular, se definieron las afinidades relativas como la inversa
de la razón molar de compuesto requerido para desplazar el 50% del
^{3}H-ácido fólico unido al RF en células KB, y la afinidad
relativa del ácido fólico por RF se fijó en 1. Tal como se muestra
en la figura 9, EC72 tiene una afinidad relativa de 0,59, lo que
indica que este conjugado puede competir de manera eficaz con el
ácido fólico (el ligando nativo) por la unión al receptor de
folato.
Se sembraron células KB en placas Falcon de 12
pocillos y se dejó que se formaran monocapas casi confluentes
durante la noche. Tras un enjuagado con 1 ml de FFRPMI/HIFCS nuevo,
cada pocillo recibió 0,5 ml de FFRPMI/HIFCS que contenía
concentraciones crecientes de EC72 en presencia o ausencia de ácido
fólico 0,1 mM (competidor). Se incubaron las células durante 15
min. a 37ºC y luego se enjuagaron cuatro veces con 0,5 ml de
FFRPMI/HIFCS. Entonces se añadieron 0,5 ml de FFRPMI/HIFCS nuevo a
cada pocillo y se capturaron las células durante un total de 72 h a
37ºC. Dos horas antes del final de la incubación, se sustituyeron
los medios en cada pocillo por 0,5 ml de FFRPMI/HIFCS que contenía
5 \muCi de ^{3}H-timidina. Entonces se lavaron
las monocapas 3 veces con 0,5 ml de PBS y luego se precipitaron con
1 ml de ácido tricloroacético frío al 10%. Se recogió la disolución
de ácido tricloroacético y se desechó, y se disolvió secuencialmente
el material precipitado en 0,5 ml de NaOH 0,25 N y dodecilsulfato
de sodio al 1% durante 15 min. a temperatura ambiente. Entonces se
contaron las muestras para determinar la radiactividad usando un
contador gamma Packard. Se expresaron los valores tabulados finales
como un porcentaje de radiactividad incorporada en las muestras de
células sin tratar. Tal como se muestra en la figura 10, EC72
presenta alta actividad sensible a la dosis frente a células KB
positivas para RF (CI_{50} \sim 5 nM), y la actividad es
específica puesto que un exceso de ácido fólico libre bloqueó de
manera eficaz cualquier inhibición de la síntesis de ADN.
Se obtuvieron ratones de seis a siete semanas de
edad (raza Balb/C hembras) de Harlan, Inc., Indianápolis, IN. Se
mantuvieron los ratones con comida libre de folato de Harlan durante
un total de tres semanas antes del inicio de y durante este
experimento. Se inocularon células tumorales M109 P_{0} positivas
para el receptor de folato (0,5 x 10^{6} células por animal) en
la parte superior de la cavidad peritoneal 4 días antes del inicio
de la dosificación. Se dosificaron las formulaciones indicadas en la
figura 11 por vía intraperitoneal qd x 30 empezando en el día 4
tras la inoculación del tumor, y se monitorizó diariamente la
supervivencia de los animales. EC72 presentó una actividad
dependiente de la dosis en ratones que portaban el tumor M109. Al
nivel de dosis de 1800 nmol/kg de EC72 (saturable para receptores de
folato in vivo), se observó un aumento de la duración de
vida del 240%, mostrando 1 de 4 animales una respuesta completa.
Se obtuvieron ratones de seis a siete semanas de
edad (raza Balb/C hembras) de Harlan, Inc., Indianápolis, IN. Se
mantuvieron los ratones con comida libre de folato de Harlan durante
un total de tres semanas antes del inicio de y durante este
experimento. Se inocularon células tumorales 4T-1
negativas para el receptor de folato (1 x 10^{6} células por
animal) debajo del cutis de la axila derecha. Se dosificaron las
formulaciones indicadas en la figura 12 por vía intraperitoneal qd
x 30 empezando en el día 4 tras la inoculación del tumor, y se
monitorizaron diariamente el volumen tumoral así como la
supervivencia de los animales. EC72 no tuvo actividad frente a un
tumor 4T-1 subcutáneo negativo para el receptor de
folato.
Claims (14)
1. Conjugado de fórmula general
B-L-X
en la que el grupo B es un folato,
o un análogo o un derivado del mismo, que se une a un receptor de
folato accesible en la superficie que se expresa de manera única,
se sobreexpresa o se expresa preferentemente por una población de
células
patógenas;
en la que el grupo L comprende un grupo de unión
escindible y siendo el grupo de unión escindible un grupo
disulfuro; y
en la que el grupo X comprende un compuesto de
mitomicina seleccionado del grupo que consiste en mitomicina A,
mitomicina B, mitomicina C, mitomicina D, mitomicina E, mitomicina
F, mitomicina J y porfiromicina.
2. Conjugado según la reivindicación 1, en el
que el grupo de unión se escinde en condiciones reductoras.
3. Conjugado de fórmula general
B-L-X
en la que el grupo B es un folato,
o un análogo o un derivado del mismo, que se une a un receptor de
folato accesible en la superficie que se expresa de manera única,
se sobreexpresa o se expresa preferentemente por la población de
células
patógenas;
en la que el grupo L comprende un grupo de unión
escindible y siendo el grupo de unión escindible un grupo
disulfuro; y
en la que el grupo X comprende un compuesto de
mitomicina seleccionado del grupo que consiste en mitomicina A,
mitomicina B, mitomicina C, mitomicina D, mitomicina E, mitomicina
F, mitomicina J y porfiromicina para su uso en un método de
eliminación selectiva de una población de células patógenas en un
animal huésped que alberga dicha población de células en la que los
miembros de dicha población celular tienen un sitio de unión
accesible en la superficie para folato.
4. Conjugado según la reivindicación 3, en el
que el grupo de unión se escinde en condiciones reductoras.
5. Conjugado según la reivindicación 3, en el
que la población de células patógenas es una población de células
cancerosas.
6. Conjugado según la reivindicación 3, que
comprende además en combinación con o como adyuvante del conjugado
un factor terapéutico seleccionado del grupo que consiste en un
agente de destrucción celular, un potenciador de la penetración
tumoral, un agente quimioterápico, una célula inmunitaria citotóxica
y un compuesto que puede estimular una respuesta inmunitaria
endógena.
7. Conjugado según la reivindicación 6, en el
que el factor terapéutico es un agente quimioterápico.
8. Conjugado según la reivindicación 7, en el
que el agente quimioterápico es paclitaxel.
9. Composición farmacéutica que comprende un
conjugado de fórmula general
B-L-X
en la que el grupo B es un folato,
o un análogo o un derivado del mismo, que se une a un receptor de
folato accesible en la superficie que se expresa de manera única,
se sobreexpresa o se expresa preferentemente por una población de
células
patógenas;
en la que el grupo L comprende un grupo de unión
escindible y siendo el grupo de unión escindible un grupo
disulfuro; y
en la que el grupo X comprende un compuesto de
mitomicina seleccionado del grupo que consiste en mitomicina A,
mitomicina B, mitomicina C, mitomicina D, mitomicina E, mitomicina
F, mitomicina J y porfiromicina; y
un vehículo farmacéuticamente aceptable para el
mismo.
10. Composición según la reivindicación 9, en la
que el grupo de unión se escinde en condiciones reductoras.
11. Composición según la reivindicación 9, que
comprende además un factor terapéutico seleccionado del grupo que
consiste en un agente de destrucción celular, un potenciador de la
penetración tumoral, un agente quimioterápico y un compuesto que
puede estimular una respuesta inmunitaria endógena.
12. Composición según la reivindicación 11, en
la que el factor terapéutico es un agente quimioterápico.
13. Composición según la reivindicación 12, en
la que el agente quimioterápico es paclitaxel.
14. Método de preparación de un conjugado
biológicamente activo de fórmula
B-L-X
en la
que
B es un folato o un derivado o análogo de unión
al receptor de folato del mismo;
X comprende un compuesto de mitomicina
seleccionado del grupo que consiste en mitomicina A, mitomicina B,
mitomicina C, mitomicina D, mitomicina E, mitomicina F, mitomicina J
y porfiromicina;
y L es un grupo de unión divalente que comprende
un enlace disulfuro, comprendiendo dicho método las etapas de
formar un producto intermedio de tiosulfonato de fórmula
B-(L'')_{n}SSO_{2}R o un producto intermedio de fórmula
X-(L')_{n}SSO_{2}R
y hacer reaccionar dicho producto intermedio de
tiosulfonato con un compuesto de fórmula
X-(L')_{n'}-SH o
B-(L'')_{n'}-SH, respectivamente, en las que L' y
L'' son, independientemente, grupos de unión divalentes a través de
los cuales se une covalentemente el grupo tiol SH a B y X,
respectivamente;
n y n' son 1 ó 0; y
R es alquilo, alquilo sustituido, arilo,
heteroarilo o arilo o heteroarilo sustituido.
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Families Citing this family (43)
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|---|---|---|---|---|
| DE60231868D1 (de) * | 2001-04-24 | 2009-05-20 | Purdue Research Foundation | Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate |
| CA2484640C (en) | 2002-05-15 | 2012-01-17 | Endocyte, Inc. | Vitamin-mitomycin conjugates |
| EP2517729A3 (en) * | 2003-01-27 | 2013-01-02 | Endocyte, Inc. | Vitamin receptor binding drug delivery conjugates |
| CN100381177C (zh) * | 2003-01-27 | 2008-04-16 | 恩多塞特公司 | 维生素受体结合递药缀合物 |
| JP5149620B2 (ja) * | 2004-07-23 | 2013-02-20 | エンドサイト，インコーポレイテッド | ２価リンカーおよびその結合体 |
| US20120269886A1 (en) | 2004-12-22 | 2012-10-25 | Nitto Denko Corporation | Therapeutic agent for pulmonary fibrosis |
| JP2009221164A (ja) | 2008-03-17 | 2009-10-01 | Nitto Denko Corp | 肺線維症処置剤 |
| DK2730277T3 (da) | 2004-12-22 | 2020-04-06 | Nitto Denko Corp | Lægemiddelbærer og lægemiddelbærerkit til at inhibere fibrose |
| CN101175757B (zh) * | 2005-03-16 | 2012-11-14 | 恩多塞特公司 | 蝶酸及其缀合物的合成和纯化 |
| CN101203759A (zh) | 2005-03-30 | 2008-06-18 | 普渡研究基金会 | 使用细胞叶酸维生素受体定量法而用于癌症预后的方法 |
| US20080280937A1 (en) * | 2005-08-19 | 2008-11-13 | Christopher Paul Leamon | Ligand Conjugates of Vinca Alkaloids, Analogs, and Derivatives |
| KR20130113543A (ko) * | 2005-08-19 | 2013-10-15 | 엔도사이트, 인코포레이티드 | 복수-약제 리간드 공액체 |
| US9572886B2 (en) | 2005-12-22 | 2017-02-21 | Nitto Denko Corporation | Agent for treating myelofibrosis |
| EP1832575A1 (en) | 2006-03-06 | 2007-09-12 | Sulfidris S.r.l. | Anti-inflammatory agents |
| WO2008101231A2 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-21 | Endocyte, Inc. | Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease |
| CN101678124A (zh) | 2007-03-14 | 2010-03-24 | 恩多塞特公司 | 结合配体连接的微管溶素递药缀合物 |
| TWI407971B (zh) * | 2007-03-30 | 2013-09-11 | Nitto Denko Corp | Cancer cells and tumor-related fibroblasts |
| CN101784565B (zh) | 2007-06-25 | 2014-12-10 | 恩多塞特公司 | 含有亲水性间隔区接头的共轭物 |
| US9877965B2 (en) | 2007-06-25 | 2018-01-30 | Endocyte, Inc. | Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation |
| EP3656403B1 (en) | 2007-08-17 | 2022-05-11 | Purdue Research Foundation | Preparation process of psma binding ligand-linker conjugates |
| KR20100065190A (ko) | 2007-09-14 | 2010-06-15 | 닛토덴코 가부시키가이샤 | 약물 담체 |
| EP2209374B1 (en) | 2007-10-25 | 2014-12-03 | Endocyte, Inc. | Tubulysins and processes for preparing |
| US9951324B2 (en) | 2010-02-25 | 2018-04-24 | Purdue Research Foundation | PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using |
| JP5950428B2 (ja) | 2010-08-05 | 2016-07-13 | 日東電工株式会社 | 線維化組織から正常組織を再生するための組成物 |
| CA2817219A1 (en) * | 2010-11-12 | 2012-05-18 | Endocyte, Inc. | Methods of treating cancer |
| WO2013126797A1 (en) | 2012-02-24 | 2013-08-29 | Purdue Research Foundation | Cholecystokinin b receptor targeting for imaging and therapy |
| US9629918B2 (en) | 2012-02-29 | 2017-04-25 | Purdue Research Foundation | Folate receptor alpha binding ligands |
| US20140080175A1 (en) | 2012-03-29 | 2014-03-20 | Endocyte, Inc. | Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof |
| CN104869998A (zh) | 2012-10-16 | 2015-08-26 | 恩多塞特公司 | 含有非天然氨基酸的药物递送缀合物以及其使用方法 |
| MX2015006109A (es) | 2012-11-15 | 2016-02-05 | Endocyte Inc | Conjugados para el tratamiento de enfermedades causadas por celulas que expresan psma. |
| CN105849086B (zh) | 2012-11-24 | 2018-07-31 | 杭州多禧生物科技有限公司 | 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用 |
| JP6340162B2 (ja) | 2012-12-20 | 2018-06-06 | 日東電工株式会社 | アポトーシス誘導剤 |
| GEP20237497B (en) | 2013-10-18 | 2023-04-10 | Deutsches Krebsforsch | Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer |
| EP3777898B1 (en) | 2013-11-14 | 2025-01-01 | Endocyte, Inc. | Compounds for positron emission tomography |
| DK3122757T3 (da) | 2014-02-28 | 2023-10-09 | Hangzhou Dac Biotech Co Ltd | Ladede linkere og anvendelse deraf til konjugering |
| CN106164089B (zh) | 2014-04-02 | 2020-11-03 | 日东电工株式会社 | 靶向分子及其用途 |
| KR102256453B1 (ko) | 2014-04-07 | 2021-05-25 | 닛토덴코 가부시키가이샤 | 소수성 약물 전달용 신규한 폴리머계 하이드로트로프 |
| US10188759B2 (en) | 2015-01-07 | 2019-01-29 | Endocyte, Inc. | Conjugates for imaging |
| US20180071253A1 (en) * | 2015-03-17 | 2018-03-15 | Lipomedix Pharmaceuticals Ltd. | Methods for the treatment of bladder cancer |
| EP3280454A1 (en) | 2015-04-07 | 2018-02-14 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Nanoparticle immunoconjugates |
| WO2016183131A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-11-17 | Purdue Research Foundation | Ligand ionophore conjugates |
| WO2019204335A1 (en) | 2018-04-17 | 2019-10-24 | Endocyte, Inc. | Methods of treating cancer |
| EP3972627A4 (en) | 2019-05-20 | 2023-06-21 | Endocyte, Inc. | Methods for preparing psma conjugates |
Family Cites Families (92)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2515483A (en) | 1946-08-10 | 1950-07-18 | Merck & Co Inc | Diacylated pteroic acid and process for preparing same |
| US2816110A (en) | 1956-11-23 | 1957-12-10 | Merck & Co Inc | Methods for the production of substituted pteridines |
| US3392173A (en) | 1964-03-09 | 1968-07-09 | Lilly Co Eli | Novel acyl derivatives of desacetyl-vincaleukoblastine and processes for their preparation |
| US3387001A (en) | 1964-10-19 | 1968-06-04 | Lilly Co Eli | Novel aminoacyl esters of desacetyl vincaleukoblastine |
| US4203898A (en) | 1977-08-29 | 1980-05-20 | Eli Lilly And Company | Amide derivatives of VLB, leurosidine, leurocristine and related dimeric alkaloids |
| US4166810A (en) | 1978-04-20 | 1979-09-04 | Eli Lilly And Company | Derivatives of 4-desacetyl VLB C-3 carboxyhydrazide |
| US4337339A (en) | 1979-04-30 | 1982-06-29 | Baker Instruments Corp. | Process for preparation of folic acid derivatives |
| US4713249A (en) | 1981-11-12 | 1987-12-15 | Schroeder Ulf | Crystallized carbohydrate matrix for biologically active substances, a process of preparing said matrix, and the use thereof |
| US5140104A (en) | 1982-03-09 | 1992-08-18 | Cytogen Corporation | Amine derivatives of folic acid analogs |
| JPS59175493A (ja) | 1983-03-25 | 1984-10-04 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | マイトマイシン誘導体 |
| DE3376114D1 (en) | 1982-12-07 | 1988-05-05 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Mitomycin analogues |
| US4866180A (en) | 1984-02-24 | 1989-09-12 | Bristol-Myers Company | Amino disulfide thiol exchange products |
| JPS60255789A (ja) | 1984-06-01 | 1985-12-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | マイトマイシン誘導体，その製造法および抗腫瘍剤 |
| US5266333A (en) | 1985-03-06 | 1993-11-30 | American Cyanamid Company | Water dispersible and water soluble carbohydrate polymer compositions for parenteral administration of growth hormone |
| US4801688A (en) | 1986-05-27 | 1989-01-31 | Eli Lilly And Company | Hydrazone immunoglobulin conjugates |
| IL82579A0 (en) | 1986-05-27 | 1987-11-30 | Lilly Co Eli | Immunoglobulin conjugates |
| DE3750846T2 (de) * | 1986-08-29 | 1995-05-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Mitomycin-derivate. |
| US5006652A (en) | 1988-08-08 | 1991-04-09 | Eli Lilly And Company | Intermediates for antibody-vinca drug conjugates |
| US5094849A (en) | 1988-08-08 | 1992-03-10 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers |
| US5688488A (en) | 1989-04-03 | 1997-11-18 | Purdue Research Foundation | Composition and method for tumor imaging |
| US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
| EP0457875A4 (en) | 1989-11-13 | 1993-03-03 | Xoma Corporation | Chimeric mouse-human a10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen |
| US5998603A (en) | 1994-09-29 | 1999-12-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 4'-desmethyl nucleoside analogs, and oligomers thereof |
| ES2171392T3 (es) | 1990-08-29 | 2002-09-16 | Ct Hospitalier Regional De Nan | Poliligandos de proteina unidos a un nucleo de proteina estable. |
| US6335434B1 (en) | 1998-06-16 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc., | Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates |
| US5159079A (en) | 1991-12-20 | 1992-10-27 | Eli Lilly And Company | 2-piperidones as intermediates for 5-deaza-10-oxo- and 5-deaza-10-thio-5,6,7,8-tetrahydrofolic acids |
| US6004555A (en) | 1992-03-05 | 1999-12-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for the specific coagulation of vasculature |
| AU686629B2 (en) | 1993-04-23 | 1998-02-12 | Wyeth | Rapamycin Conjugates and Antibodies |
| US5417982A (en) | 1994-02-17 | 1995-05-23 | Modi; Pankaj | Controlled release of drugs or hormones in biodegradable polymer microspheres |
| IL112873A (en) | 1994-03-08 | 2005-03-20 | Wyeth Corp | Rapamycin-fkbp12 binding proteins, their isolation and their use |
| US6171859B1 (en) | 1994-03-30 | 2001-01-09 | Mitokor | Method of targeting conjugate molecules to mitochondria |
| US5547668A (en) | 1995-05-05 | 1996-08-20 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Conjugates of folate anti-effector cell antibodies |
| US6207157B1 (en) | 1996-04-23 | 2001-03-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Conjugate vaccine for nontypeable Haemophilus influenzae |
| US6030941A (en) | 1996-05-01 | 2000-02-29 | Avi Biopharma, Inc. | Polymer composition for delivering substances in living organisms |
| WO1997041898A1 (en) | 1996-05-03 | 1997-11-13 | Immunomedics, Inc. | Targeted combination immunotherapy of cancer |
| DE19621133A1 (de) | 1996-05-24 | 1997-11-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Bestimmungsverfahren mit oligomerisierten Rezeptoren |
| CA2265476A1 (en) | 1996-09-12 | 1998-03-19 | Merck & Co., Inc. | Conjugates useful in the treatment of prostate cancer |
| US6056973A (en) | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic liposome composition and method of preparation |
| US6071532A (en) | 1996-10-15 | 2000-06-06 | Emory University | Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof |
| US6177404B1 (en) | 1996-10-15 | 2001-01-23 | Merck & Co., Inc. | Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia |
| AU1095799A (en) | 1997-10-17 | 1999-05-10 | Philip L. Fuchs | Folic acid derivatives |
| GB9723669D0 (en) | 1997-11-07 | 1998-01-07 | Univ Aberdeen | Skin penetration enhancing components |
| US6380395B1 (en) | 1998-04-21 | 2002-04-30 | Bristol-Myers Squibb Company | 12, 13-cyclopropane epothilone derivatives |
| US6093382A (en) | 1998-05-16 | 2000-07-25 | Bracco Research Usa Inc. | Metal complexes derivatized with folate for use in diagnostic and therapeutic applications |
| US6291684B1 (en) | 1999-03-29 | 2001-09-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for the preparation of aziridinyl epothilones from oxiranyl epothilones |
| KR100669053B1 (ko) * | 1999-04-23 | 2007-01-15 | 알자 코포레이션 | 리포좀에 사용하기 위한 절단가능 결합을 갖는 콘쥬게이트 |
| AUPQ014799A0 (en) * | 1999-05-04 | 1999-05-27 | Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited | Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers |
| AUPQ071299A0 (en) | 1999-06-02 | 1999-06-24 | Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited | Vitamin directed dual targeting therapy |
| EP1231942A1 (en) * | 1999-10-15 | 2002-08-21 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Cobalamin conjugates useful as imaging agents and as antitumor agents |
| US7067111B1 (en) | 1999-10-25 | 2006-06-27 | Board Of Regents, University Of Texas System | Ethylenedicysteine (EC)-drug conjugates, compositions and methods for tissue specific disease imaging |
| CZ304942B6 (cs) * | 2000-03-31 | 2015-02-04 | Purdue Research Foundation | Léčivo pro zvyšování specifické eliminace populace tumorových buněk a farmaceutický prostředek obsahující konjugát fosfát-FITC nebo fosfát-dinitrofenyl |
| US6670355B2 (en) | 2000-06-16 | 2003-12-30 | Wyeth | Method of treating cardiovascular disease |
| US6511986B2 (en) | 2000-08-11 | 2003-01-28 | Wyeth | Method of treating estrogen receptor positive carcinoma |
| ATE411321T1 (de) | 2000-09-19 | 2008-10-15 | Wyeth Corp | Wasserlösliche rapamycin-ester |
| US6399625B1 (en) | 2000-09-27 | 2002-06-04 | Wyeth | 1-oxorapamycins |
| US6440991B1 (en) | 2000-10-02 | 2002-08-27 | Wyeth | Ethers of 7-desmethlrapamycin |
| US6399626B1 (en) | 2000-10-02 | 2002-06-04 | Wyeth | Hydroxyesters of 7-desmethylrapamycin |
| WO2002044418A2 (en) | 2000-11-28 | 2002-06-06 | Wyeth | Expression analysis of fkbp nucleic acids and polypeptides useful in the diagnosis and treatment of prostate cancer |
| AR036993A1 (es) | 2001-04-02 | 2004-10-20 | Wyeth Corp | Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas |
| EP2388590A1 (en) | 2001-04-02 | 2011-11-23 | Dana Farber Cancer Institute | PD-1, a receptor for B7-4, and uses thereof |
| DE60231868D1 (de) | 2001-04-24 | 2009-05-20 | Purdue Research Foundation | Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate |
| US7109165B2 (en) | 2001-05-18 | 2006-09-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
| JP2004532888A (ja) | 2001-06-01 | 2004-10-28 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | エポチロン誘導体 |
| US20040018203A1 (en) | 2001-06-08 | 2004-01-29 | Ira Pastan | Pegylation of linkers improves antitumor activity and reduces toxicity of immunoconjugates |
| WO2003011342A2 (en) * | 2001-07-31 | 2003-02-13 | Immunomedics, Inc. | Targeted polymeric delivery systems |
| UA77200C2 (en) | 2001-08-07 | 2006-11-15 | Wyeth Corp | Antineoplastic combination of cci-779 and bkb-569 |
| WO2003018573A1 (en) | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Wyeth | Rapamycin 29-enols |
| CA2455311A1 (en) | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Wyeth | Rapamycin dialdehydes |
| ES2338305T3 (es) | 2001-09-28 | 2010-05-06 | Purdue Research Foundation | Metodo de tratamiento que utiliza conjugados ligando-inmunogeno. |
| WO2003034995A2 (en) * | 2001-10-22 | 2003-05-01 | The Scripps Research Institute | Integrin targeting compounds |
| GR1004163B (el) | 2001-11-01 | 2003-02-21 | Πολυκυκλικα παραγωγα τροποποιησης των οπτικων ιδιοτητων και των ιδιοτητων αντοχης στο πλασμα των πολυμερων λιθογραφιας | |
| US8043602B2 (en) | 2002-02-07 | 2011-10-25 | Endocyte, Inc. | Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology |
| US7000695B2 (en) | 2002-05-02 | 2006-02-21 | Halliburton Energy Services, Inc. | Expanding wellbore junction |
| JP4801348B2 (ja) | 2002-05-06 | 2011-10-26 | エンドサイト，インコーポレイテッド | ビタミンを標的とした造影剤 |
| US6596757B1 (en) * | 2002-05-14 | 2003-07-22 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use |
| CA2484640C (en) | 2002-05-15 | 2012-01-17 | Endocyte, Inc. | Vitamin-mitomycin conjugates |
| AU2003266233A1 (en) | 2002-07-09 | 2004-01-23 | Morphochem Aktiengesellschaft Fur Kombinatorische Chemie | Novel tubulysin analogues |
| AU2003300027A1 (en) | 2002-10-10 | 2004-05-04 | Wyeth | Compositions, organisms and methodologies employing a novel human kinase |
| DE10254439A1 (de) | 2002-11-21 | 2004-06-03 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Tubulysine, Herstellungsverfahren und Tubulysin-Mittel |
| EP1578197A4 (en) | 2002-11-21 | 2006-05-17 | Wyeth Corp | COMPOSITION AND METHOD FOR THE TREATMENT OF LUPUS NEPHRITIS |
| EP2517729A3 (en) | 2003-01-27 | 2013-01-02 | Endocyte, Inc. | Vitamin receptor binding drug delivery conjugates |
| AR042938A1 (es) | 2003-02-06 | 2005-07-06 | Wyeth Corp | Uso del cci-779 en el tratamiento de la fibrosis hepatica |
| EP2664672A1 (en) | 2003-04-17 | 2013-11-20 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Modified iRNA agents |
| WO2004101803A2 (en) | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Wyeth Holdings Corporation | Process for producing anticancer agent ll-d45042 |
| AU2004259669A1 (en) | 2003-07-16 | 2005-02-03 | Wyeth | CCI-779 Isomer C |
| PT1658295E (pt) | 2003-08-07 | 2007-09-25 | Wyeth Corp | Síntese regiosselectiva de cci-779 |
| WO2006020768A2 (en) | 2004-08-10 | 2006-02-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chemically modified oligonucleotides |
| US7290958B2 (en) | 2004-12-03 | 2007-11-06 | Airfield Systems, Llc | Subsurface drainage system and drain structure therefor |
| CN101203759A (zh) | 2005-03-30 | 2008-06-18 | 普渡研究基金会 | 使用细胞叶酸维生素受体定量法而用于癌症预后的方法 |
| WO2007006041A2 (en) | 2005-07-05 | 2007-01-11 | Purdue Research Foundation | Imaging and therapeutic method using monocytes |
| PE20080102A1 (es) | 2006-05-25 | 2008-02-11 | Bristol Myers Squibb Co | Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos |
| WO2008101231A2 (en) | 2007-02-16 | 2008-08-21 | Endocyte, Inc. | Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease |
-
2003
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