ES2325412T3 - Desoxo-nonadepsipeptidos. - Google Patents
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Abstract
Compuesto de fórmula** ver fórmula** en la que R1 significa C1-C2, estando alquilo C1-C2 sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por trimetilsililo, alcoxicarbonilo, cicloalquilo C1-C6, fenilo sustituido con alcoxi, 2-piridilo y 3-piridilo, o significa alquilo C4-C8, R 2 significa hidrógeno o alquilo C1-C4, R 3 significa alquilo C1-C2, estando alquilo C1-C2 sustituido con un sustituyente trimetilsililo, o significa alquilo C4-C6, R 4 significa hidrógeno o metilo, o una de sus sales, de sus solvatos o de los solvatos de sus sales.
Description
Desoxo-nonadepsipéptidos.
\global\parskip0.900000\baselineskip
La invención se refiere a nonadepsipéptidos y a
procedimientos para su preparación, así como a su uso para la
preparación de fármacos para el tratamiento y/o la profilaxis de
enfermedades, especialmente enfermedades infecciosas
bacterianas.
La pared celular bacteriana se sintetiza
mediante una serie de enzimas (biosíntesis de paredes celulares) y
es esencial para la supervivencia o la reproducción de
microorganismos. La estructura de esta macromolécula, al igual que
las proteínas que participan en su síntesis, se conserva fuertemente
dentro de las bacterias. Debido a su naturaleza esencial y
uniformidad, la biosíntesis de paredes celulares es un punto de
ataque ideal para nuevos antibióticos (D.W.Green, The bacterial
cell wall as a source of antibacterial targets, Expert Opin. Ther.
Targets, 2002, 6, 1-19).
La vancomicina y las penicilinas son inhibidores
de la biosíntesis de paredes celulares bacterianas y representan
ejemplos satisfactorios de la potencia antibiótica de este principio
de acción. Se utilizan desde hace varias décadas clínicamente para
el tratamiento de infecciones bacterianas, sobre todo con patógenos
Gram-positivos. Debido a la creciente aparición de
gérmenes resistentes, por ejemplo, estafilococos resistentes a
meticilina, neumococos resistentes a penicilina y enterococos
resistentes a vancomicina (F. Baquero, Gram-positive
resistance: challenge for the development of new antibiotics, J.
Antimicrob. Chemother., 1997, 39, suplemento A: 1-6;
A.P. Johnson, D.M. Livermore, G.S. Tillotson, Antimicrobial
susceptibility of Gram-positive bacteria: what's
current, what's anticipated?, J. Hosp. Infect., 2001, (49),
suplemento A: 3-11), así como recientemente también
por primera vez estafilococos resistentes a vancomicina (B.
Goldrick, First reported case of VRSA in the United States, Am. J.
Nurs., 2002, 102, 17), estas sustancias pierden cada vez más su
eficacia terapéutica.
La presente invención describe una nueva clase
de inhibidores de la biosíntesis de paredes celulares sin
resistencias cruzadas a clases de antibióticos conocidos.
La sustancia natural lisobactina y algunos
derivados se describen como antibacterianamente eficaces en el
documento US 4.754.018. El aislamiento y la eficacia antibacteriana
de lisobactina también se describen en los documentos
EP-A 196 042 y JP 01132600. El documento WO04/099239
describe derivados de lisobactina con eficacia antibacteriana.
La acción antibacteriana de lisobactina y
katanosina A se describe además en O'Sullivan, J. y col., J.
Antibiot. 1988, 41, 1740-1744, Bonner, D. P. y
col., J. Antibiot. 1988, 41, 1745-1751, Shoji, J. y
col., J. Antibiot. 1988, 41, 713-718 Tymiak, A. A.
y col., J. Org. Chem. 1989, 54, 1149-1157.
Un objetivo de la presente invención es poner a
disposición compuestos alternativos con acción antibacteriana
comparable o mejorada, mejor solubilidad y mejor tolerancia para el
tratamiento de enfermedades bacterianas en el hombre y en
animales.
Objeto de la invención son compuestos de
fórmula
en la
que
\global\parskip1.000000\baselineskip
- R^{1}
- significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por trimetilsililo, alcoxicarbonilo, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, fenilo sustituido con alcoxi, 2-piridilo y 3-piridilo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{8},
- R^{2}
- significa hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4},
- R^{3}
- significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
- R^{4}
- significa hidrógeno o metilo,
y sus sales, sus solvatos y los
solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos según la invención son los
compuestos de fórmula (I) y (Ia) y sus sales, solvatos, solvatos de
las sales y profármacos, los compuestos comprendidos por las
fórmulas (I) y (Ia) de las fórmulas mencionadas a continuación y
sus sales, solvatos, solvatos de las sales y profármacos, así como
los compuestos mencionados a continuación como ejemplos de
realización comprendidos por la fórmula (I) y (Ia) y sus sales,
solvatos, solvatos de las sales y profármacos, en tanto que en el
caso de los compuestos mencionados a continuación comprendidos por
la fórmula (I) y (Ia) no se trate ya de sales, solvatos, solvatos de
las sales y profármacos.
Los compuestos según la invención pueden existir
en función de su estructura en formas estereoisómeras (enantiómeros,
diastereómeros). Por tanto, la invención se refiere a los
enantiómeros o diastereómeros y sus mezclas respectivas. A partir
de tales mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros pueden aislarse
de manera conocida los constituyentes estereoisoméricamente
unitarios.
Si los compuestos según la invención pueden
presentarse en formas tautómeras, la presente invención comprende
todas las formas tautómeras.
Como sales se prefieren en el marco de la
presente invención sales fisiológicamente inocuas de los compuestos
según la invención. Pero también están comprendidas sales que por sí
mismas no son adecuadas para aplicaciones farmacéuticas pero pueden
usarse, por ejemplo, para el aislamiento o la purificación de los
compuestos según la invención.
Sales fisiológicamente inocuas de los compuestos
según la invención comprenden sales de adición de ácido de ácidos
minerales, ácidos carboxílicos y ácidos sulfónicos, por ejemplo
sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico,
ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido
toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido
naftalendisulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido
propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido
cítrico, ácido fumárico, ácido maleico y ácido benzoico.
Sales fisiológicamente inocuas de los compuestos
según la invención también comprenden sales de bases habituales,
como a modo de ejemplo y preferiblemente sales de metales alcalinos
(por ejemplo, sales de sodio y potasio), sales alcalinotérreas (por
ejemplo, sales de calcio y magnesio) y sales de amonio derivadas de
amoniaco o aminas orgánicas con 1 a 16 átomos de C, como a modo de
ejemplo y preferiblemente etilamina, dietilamina, trietilamina,
etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina,
trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procaína,
dibencilamina, N-metilmorfolina, arginina, lisina,
etilendiamina y N-metilpiperidina.
Se denominan solvatos en el marco de la
invención a aquellas formas de los compuestos según la invención que
forman un complejo en estado sólido o líquido mediante coordinación
con moléculas de disolvente. Hidratos son una forma especial de
solvatos en los que la coordinación se realiza con agua.
En el marco de la presente invención, los
sustituyentes tienen, mientras que no se especifique lo contrario,
el siguiente significado:
Alquilo por sí mismo y "alc" y
"alquil" en alcoxi y alcoxicarbonilo representa un resto
alquilo lineal o ramificado con generalmente 1 a 6, preferiblemente
1 a 4, con especial preferencia 1 a 3, átomos de carbono, a modo de
ejemplo y preferiblemente representa metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, terc-butilo,
2,2-dimetilprop-1-ilo,
n-pentilo y n-hexilo.
Alcoxi representa a modo de ejemplo y
preferiblemente metoxi etoxi, n-propoxi, isopropoxi,
terc-butoxi, n-pentoxi y
n-hexoxi.
Alcoxicarbonilo representa a modo de
ejemplo y preferiblemente metoxicarbonilo, etoxicarbonilo,
n-propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo,
terc-butoxicarbonilo, n-pentoxicarbonilo y
n-hexoxicarbonilo.
Cicloalquilo representa un grupo
cicloalquilo con generalmente 3 a 6 átomos de carbono, a modo de
ejemplo y preferiblemente representa ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo y ciclohexilo.
\vskip1.000000\baselineskip
En las fórmulas de los grupos, el punto final de
la línea, además del cual hay en cada caso un *, no representa un
átomo de carbono o un grupo CH_{2}, sino que es constituyente del
enlace al átomo de nitrógeno al que está unido el grupo de
fórmula.
En el marco de la presente invención se
prefieren compuestos de fórmula
en la
que
- R^{1}
- significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por trimetilsililo, alcoxicarbonilo, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, fenilo sustituido con alcoxi, 2-piridilo y 3-piridilo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{8},
- R^{2}
- significa hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4},
- R^{3}
- significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa C_{4}-C_{6},
y sus sales, sus solvatos y los
solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
También se prefieren compuestos de fórmula (I)
en la que
- R^{1}
- significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
- R^{2}
- significa hidrógeno o metilo,
- R^{3}
- significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
y sus sales, sus solvatos y los
solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prefieren especialmente compuestos de fórmula
(I) en la que
- R^{1}
- significa trimetilsililmetilo o 2,2-dimetilprop-1-ilo,
- R^{2}
- significa hidrógeno,
- R^{3}
- significa trimetilsililmetilo o 2,2-dimetilprop-1-ilo,
y sus sales, sus solvatos y los
solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
También se prefieren compuestos de fórmula (I)
en la que R^{1} significa
2,2-dimetilprop-1-ilo.
También se prefieren compuestos de fórmula (I)
en la que R^{2} significa hidrógeno.
También se prefieren compuestos de fórmula (I)
en la que R^{3} significa
2,2-dimetilprop-1-ilo.
Las definiciones de restos especificadas por
separado en las respectivas combinaciones o combinaciones preferidas
de restos también se sustituyen discrecionalmente por definiciones
de restos de otra combinación independientemente de las
combinaciones especificadas respectivas de los restos.
También se prefieren muy especialmente
combinaciones de dos o varios de los intervalos preferidos
anteriormente mencionados.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Además, es objeto de la invención un
procedimiento para preparar los compuestos de fórmulas (Ia) haciendo
reaccionar el compuesto de fórmula
en la
que
- R^{4}
- tiene el significado especificado anteriormente,
con compuestos de fórmula
en la
que
R^{1}, R^{2} y R^{3} tienen
el significado especificado anteriormente,
y
- X^{1}
- significa halógeno, preferiblemente bromo, cloro o flúor, o hidroxi.
En el caso en que X^{1} represente halógeno,
la reacción se realiza en general en disolventes inertes,
opcionalmente en presencia de una base, preferiblemente en un
intervalo de temperatura de -30ºC a 50ºC a presión normal.
Disolventes inertes son, por ejemplo,
tetrahidrofurano, cloruro de metileno, piridina, dioxano o
dimetilformamida, se prefiere piridina o dimetilformamida.
Como disolventes inertes se prefiere
tetrahidrofurano o cloruro de metileno.
Bases son, por ejemplo, trietilamina,
diisopropiletilamina o N-metilmorfolina, se prefiere
diisopropiletilamina.
En el caso en que X^{1} represente hidroxi, la
reacción se realiza en general en disolventes inertes, en presencia
de un reactivo de deshidratación, opcionalmente en presencia de una
base, preferiblemente en un intervalo de temperatura de -30ºC a
50ºC a presión normal.
Disolventes inertes son, por ejemplo,
hidrocarburos halogenados como diclorometano o triclorometano,
hidrocarburo como benceno, nitrometano, dioxano, dimetilformamida o
acetonitrilo. Igualmente es posible utilizar mezclas de
disolventes. Se prefiere especialmente diclorometano o
dimetilformamida.
Como reactivos de deshidratación son adecuados
en este caso, por ejemplo, carbodiimidas, como por ejemplo
N,N'-dietil-, N,N,'-dipropil-,
N,N'-diisopropil-, N,N'-diciclohexilcarbodiimida,
clorhidrato de
N-(3-dimetilaminoisopropil)-N'-etilcarbodiimida
(EDC),
N-ciclohexilcarbodiimida-N'-propiloximetil-poliestireno
(carbodiimida de PS) o compuestos de carbonilo como
carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio
como 3-sulfato de
2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio
o perclorato de
2-terc-butil-5-metil-isoxazolio,
o compuestos de acilamino como
2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina,
o anhídrido de ácido propanofosfónico, o cloroformiato de
isobutilo, o cloruro de
bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)-fosforilo
o hexafluorofosfato de
benzotriazoliloxi-tri(dimetilamino)fosfonio,
o hexafluorofosfato de
O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N,N'-tetrametiluronio
(HBTU), tetrafluoroborato de
2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio
(TPTU) o hexafluorofosfato de
O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(HATU), o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), o
hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)-fosfonio
(BOP), o N-hidroxisucci-
nimida, o mezclas de estos, con bases.
nimida, o mezclas de estos, con bases.
Bases son, por ejemplo, carbonatos alcalinos,
como por ejemplo carbonato de sodio o potasio, o hidrogenocarbonato,
o bases orgánicas como trialquilaminas, por ejemplo trietilamina,
N-metilmorfolina, N-metilpiperidina,
4-dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina.
La condensación se realiza preferiblemente con
HATU o con EDC en presencia de HOBt.
Los compuestos de fórmula (III) llevan
opcionalmente grupos protectores, de manera que en estos casos a la
reacción de los compuestos de fórmula (II) con compuestos de fórmula
(III) le sigue una disociación de los grupos protectores con, por
ejemplo, ácido trifluoroacético o mediante hidrogenolisis según los
procedimientos conocidos para el experto.
El compuesto de fórmula (II) puede sintetizarse
mediante doble degradación de Edman a partir de lisobactina
(ejemplo 1A), como se describe en la parte experimental en el
ejemplo 2A a 5A.
Los compuestos de fórmulas (III) son conocidos o
pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los
productos de partida correspondientes, por ejemplo mediante el
siguiente esquema de síntesis:
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema de síntesis
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación de los compuestos según la
invención puede ilustrarse mediante el siguiente esquema de
síntesis.
\newpage
Esquema de síntesis
2
Esquema de síntesis
3
Los compuestos según la invención muestran un
valioso espectro de acción farmacológico imprevisible. Muestran una
acción antibacteriana.
Por tanto, son adecuados para el uso como
fármacos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en
el hombre y en animales.
Los compuestos según la invención destacan por
una mejor solubilidad en comparación con la lisobactina.
Los nonadepsipéptidos descritos actúan como
inhibidores de la biosíntesis de paredes celulares bacterianas.
Las preparaciones según la invención son
especialmente eficaces contra bacterias y microorganismos similares
a bacterias. Por tanto, son especialmente muy adecuadas para la
profilaxis y la quimioterapia de infecciones locales y sistémicas
en la medicina humana y la veterinaria que se producen por estos
patógenos.
Fundamentalmente, las preparaciones según la
invención pueden usarse contra todas las bacterias y microorganismos
similares a bacterias que están en posesión de una pared celular
bacteriana (sáculo de mureína) o los sistemas enzimáticos
correspondientes, por ejemplo mediante los siguientes patógenos o
mediante mezclas de los siguientes patógenos:
Cocos Gram-negativos
(Neisseria gonorrhoeae), así como bacilos
Gram-negativos como Enterobacteriaceae, por
ejemplo, Escherichia coli, Haemophilus influenzae,
Pseudomonas, Klebsiella, Citrobacter (C. freundii, C.
divernis), Salmonella y Shigella; además de Enterobacter (E.
aerogenes, E. agglomerands), Hafnia, Serratia (S.
marcescens), Providencia, Yersinia, así como el género
Acinetobacter, Branhamella y Chlamydia. Además, el espectro
antibacteriano comprende bacterias estrictamente anaerobias, como
por ejemplo Bacteroides fragilis, representantes del género
Peptococcus, Peptostreptococcus, así como el género Clostridium;
además micobacterias, por ejemplo M. tuberculosus. Los
compuestos según la invención muestran una acción especialmente
marcada contra cocos Gram-positivos, por ejemplo,
estafilococos (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S.
carnosus), enterococos (E. faecalis, E. faecium) y
estreptococos (S. agalactiae, S. pneumoniae, S.
pyogenes).
La lista anterior de patógenos sólo es a modo de
ejemplo y de ninguna manera debe interpretarse de forma limitante.
Como enfermedades que pueden ser provocadas por los patógenos
mencionados o infecciones mixtas y que pueden ser evitadas,
mejoradas o curadas por las preparaciones según la invención son de
mencionar, por ejemplo:
Enfermedades infecciosas en el hombre como, por
ejemplo, infecciones de las vías urinarias complicadas y no
complicadas, infecciones de la piel y superficiales no complicadas,
infecciones de la piel y las partes blandas complicadas,
inflamación pulmonar adquirida en el hospital y ambulante, neumonías
nosocomiales, exacerbaciones agudas e infecciones bacterianas
secundarias de la bronquitis crónica, otitis media aguda, sinusitis
aguda, faringitis estreptocócica, meningitis bacteriana,
uretritis/cervicitis gonocócica y no gonocócica no complicada,
prostatitis aguda, endocarditis, infecciones intraabdominales no
complicadas y complicadas, infecciones ginecológicas, enfermedad
inflamatoria pélvica, vaginosis bacteriana, osteomielitis aguda y
crónica, artritis bacteriana aguda, terapia empírica en pacientes
con neutropenia febril, otras bacteremias, infecciones MRSA, diarrea
infecciosa aguda, infecciones por Helicobacter pylori,
infecciones posoperatorias, infecciones odontogénicas, infecciones
oftalmológicas, infecciones posoperatorias (incluido absceso
periproctal, infecciones de heridas, infecciones biliares, mastitis
y apendicitis aguda), fibrosis quística y bronquiectasia.
Además de en el hombre, también pueden tratarse
infecciones bacterianas en otras especies. A modo de ejemplo son de
mencionar:
- \quad
- Cerdo: diarrea, enterotoxemia, septicemia, disentería, salmonelosis, síndrome de metritis-mastitis-agalaxia, mastitis;
- \quad
- Rumiantes (vacuno, oveja, cabra): diarrea, septicemia, bronconeumonía, salmonelosis, pasteurelosis, infecciones genitales;
- \quad
- Caballo: bronconeumonías, enfermedad articular, infecciones puerperales y pospuerperales, salmonelosis;
- \quad
- Perro y gato: bronconeumonía, diarrea, dermatitis, otitis, infecciones de las vías urinarias, prostatitis;
- \quad
- Aves (pollo, pavo, codorniz, paloma, pájaros ornamentales y otros): infecciones por E. coli, enfermedades respiratorias crónicas, salmonelosis, pasteurelosis, psitacosis.
Igualmente pueden tratarse enfermedades
bacterianas durante la cría y la tenencia de peces de consumo y
ornamentales ampliándose el espectro antibacteriano más allá de los
patógenos previamente mencionados a otros patógenos como, por
ejemplo, Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria,
Erysipelothris, corinebacterias, Borellia, Treponema, Nocardia,
Rikettsia, Yersinia.
Otro objeto de la presente invención es la
utilización de los compuestos según la invención para el tratamiento
y/o la profilaxis de enfermedades, especialmente de enfermedades
infecciosas bacterianas.
Otro objeto de la presente invención es el uso
de los compuestos según la invención para el tratamiento y/o la
profilaxis de enfermedades, especialmente de las enfermedades
previamente mencionadas.
Otro objeto de la presente invención es el uso
de los compuestos según la invención para la preparación de un
fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades,
especialmente de las enfermedades previamente mencionadas.
Los compuestos según la invención se usan
preferiblemente para la preparación de fármacos que son adecuados
para la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades
bacterianas.
Otro objeto de la presente invención es un
procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades,
especialmente de las enfermedades previamente mencionadas, usando
una cantidad antibacterianamente eficaz de los compuestos según la
invención.
Otro objeto de la presente invención son
fármacos que contienen al menos un compuesto según la invención y
al menos uno o varios principios activos distintos, especialmente
para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades
previamente mencionadas. Las combinaciones de principio activo
preferidas son compuestos que actúan de forma antibacteriana que
tienen otro espectro de acción, especialmente un espectro de acción
complementario, y/o son sinérgicos para los compuestos según la
invención.
Los compuestos según la invención pueden actuar
sistémicamente y/o localmente. Para este fin pueden administrarse
de forma adecuada como, por ejemplo, por vía oral, parenteral,
pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica,
transdérmica, conjuntiva, ótica o como injerto o implante.
Para estas vías de administración, los
compuestos según la invención pueden administrarse en formas de
administración adecuadas.
Para la administración por vía oral son
adecuadas formas de administración que funcionan según el estado de
la técnica que liberan los compuestos según la invención de forma
rápida y/o modificada, que contienen los compuestos según la
invención en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta, como por
ejemplo comprimidos (comprimidos sin recubrir o recubiertos, por
ejemplo con recubrimientos resistentes a los jugos gástricos o que
se disuelven de forma retardada o insolubles, que controlan la
liberación del compuesto según la invención), comprimidos o
películas/obleas que se desintegran rápidamente en la cavidad bucal,
películas/liofilizados, cápsulas (por ejemplo cápsulas de gelatina
dura o blanda), comprimidos recubiertos de azúcar, gránulos, pellas,
polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o disoluciones.
La administración parenteral puede producirse
evitando una etapa de resorción (por ejemplo, intravenosa,
intraarterial, intracárdica, intraespinal o intralumbar) o
incluyendo una resorción (por ejemplo, intramuscular, subcutánea,
intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Para la administración
parenteral son adecuadas como formas de administración, entre
otras, preparaciones para inyección e infusión en forma de
disoluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos
estériles.
Para las otras vías de administración son
adecuadas, por ejemplo, formas farmacéuticas para inhalación (entre
otras inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas, disoluciones,
aerosoles nasales; comprimidos, películas/obleas o cápsulas que van
a administrarse por vía lingual, sublingual o bucal, supositorios,
preparaciones para el oído o los ojos, cápsulas vaginales,
suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones
lipófilas, pomadas, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos
(como por ejemplo parches), leche, pastas, espumas, polvos para
extender sobre la piel, implantes o prótesis endovasculares.
Los compuestos según la invención pueden
convertirse en las formas de administración citadas. Esto puede
producirse de una manera conocida en sí mediante mezclado con
coadyuvantes inertes no tóxicos farmacéuticamente adecuados. Entre
estos coadyuvantes figuran, entre otros, vehículos (por ejemplo
celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por
ejemplo polietilenglicoles líquidos), emulgentes y dispersantes o
humectantes (por ejemplo dodecilsulfato de sodio, oleato de
polioxisorbitano), aglutinantes (por ejemplo polivinilpirrolidona),
polímeros sintéticos y naturales (por ejemplo albúmina),
estabilizadores (por ejemplo antioxidantes, como por ejemplo ácido
ascórbico), tintes (por ejemplo pigmentos inorgánicos como, por
ejemplo, óxidos de hierro) y correctores del sabor y/o el olor.
Otro objeto de la presente invención son
fármacos que contienen al menos un compuesto según la invención,
normalmente junto con uno o varios coadyuvantes inertes, no tóxicos,
farmacéuticamente adecuados, así como su uso para los fines
anteriormente mencionados.
En general, en la administración por vía
intravenosa ha demostrado ser ventajoso administrar cantidades de
aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg, preferiblemente aproximadamente
0,1 a 10 mg/kg de peso corporal para lograr resultados eficaces, y
en la administración por vía oral la dosificación asciende a
aproximadamente de 0,01 a 50 mg/kg, preferiblemente 0,5 a 10 mg/kg
de peso corporal.
\newpage
No obstante, opcionalmente puede ser necesario
apartarse de las cantidades mencionadas y concretamente en función
del peso corporal, vía de administración, comportamiento individual
frente al principio activo, modo de preparación y momento o
intervalo en el que o con el que se realiza la administración. Así,
en algunos casos puede ser suficiente arreglárselas con menos de la
cantidad mínima previamente mencionada, mientras que en otros casos
debe superarse el límite superior mencionado. En caso de
administración de cantidades más grandes puede ser recomendable
distribuirse ésta en varias administraciones individuales durante el
día.
Los datos en porcentaje en las siguientes
pruebas son, siempre y cuando no se especifique lo contrario,
porcentajes en peso; los rendimientos en los ejemplos son
porcentajes en moles; las partes son partes en peso. Las relaciones
de disolventes, relaciones de dilución y datos de concentración de
disoluciones líquido/líquido se refieren respectivamente al
volumen.
- Gen.
- general
- área
- superficie (del pico)
- calc.
- calculado
- BHI
- infusión de cerebro y corazón (Brain Heart Infusion)
- Boc
- terc-butiloxicarbonilo
- a
- señal ancha (en espectros de RMN)
- ej.
- ejemplo
- d
- doblete (en espectros de RMN)
- CCF
- cromatografía en capa fina
- DCI
- ionización química directa (en EM)
- DCM
- diclorometano
- DIEA
- N,N-diisopropiletilamina
- DMSO
- dimetilsulfóxido
- DMF
- N,N-dimetilformamida
- d. t.
- del teórico
- EDC
- 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (también EDCI)
- EDCxHCl
- clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
- EE
- acetato de etilo (éster etílico de ácido acético)
- El
- ionización por impacto electrónico (en EM)
- ESI
- ionización por electropulverización (en EM)
- Pf.
- punto de fusión
- hall.
- hallado
- sat.
- saturado
- h
- hora
- HATU
- hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
- HOBt
- 1-hidroxibenzotriazol
- HPLC
- cromatografía líquida de alta presión, de alta resolución
- HR
- High Resolution (alta resolución)
- a. v.
- a vacío
- conc.
- concentrado
- EM-CL
- espectroscopia de masas acoplada a cromatografía de líquidos
- LDA
- diisopropilamida de litio
- m
- middle (medio) (en espectros de UV e IR)
- m
- multiplete (en espectros de RMN)
- MALDI
- desorción/ionización láser asistida por matriz
- CIM
- concentración inhibitoria mínima
- min
- minuto/minutos
- MRSA
- Staphylococcus aureus resistente a meticilina
- EM
- espectroscopia de masas
- NCCLS
- Comité Nacional para Estándares de Laboratorio Clínico
- neg.
- negativa
- NMM
- N-metilmorfolina
- RMN
- resonancia magnética nuclear (nuclear magnetic resonance)
- p.a.
- para análisis
- Pd-C
- paladio sobre carbón
- pos.
- positiva
- porc.
- en porcentaje
- cuant.
- cuantivativo
- RP-HPLC
- HPLC en fase inversa
- TA
- temperatura ambiente
- R_{t}
- tiempo de retención (en HPLC)
- s
- strong (fuerte) (en espectros de UV e IR)
- s
- singlete (en espectros de RMN)
- TBTU
- tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
- TCTU
- tetrafluoroborato de O-(1H-6-clorobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
- TFA
- ácido trifluoroacético
- TFE
- 2,2,2-trifluoroetanol
- THF
- tetrahidrofurano
- TOF
- tiempo de vuelo (time of flight)
- UV
- ultravioleta
- Vis
- visible
- VRSA
- Staphylococcus aureus resistente a vancomicina
- w
- weak (débil) (en espectros de UV e IR)
- Z, Cbz
- benciloxicarbonilo
\vskip1.000000\baselineskip
Para la nomenclatura de los péptidos y
ciclodepsipéptidos véase:
1. A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic
Compounds (Recommendations 1993), 1993, Blackwell Scientific
publications.
2. Nomenclature and symbolism for amino acids
and peptides. Recommendations 1983.
IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical
Nomenclature, UK. Biochemical Journal 1984, 219,
345-373. Así como la bibliografía citada.
Procedimiento 1 (HPLC): instrumento:
HP1100 con DAD (G1315A) e inyector automático (G1329A), termostato
del inyector automático (G1330A, 5ºC), desgasificador (G1322A) y
bomba binaria (G1312A); precolumna: Waters Symmetry
C-18, 10 x 2,1 mm, 3,5 \mum; columna analítica:
Waters Symmetry C-18, 50 x 2,1 mm, 3,5 \mum; horno
de columna: 45ºC; eluyente A: agua/ácido trifluoroacético al 0,05%;
eluyente B: acetonitrilo/ácido trifluoroacético al 0,05%; flujo:
0,4 ml/min; gradiente 0-100% de B en 9 min, después
3 min al 100% de B, después regeneración de la columna.
Procedimiento 2 (EM-CL):
instrumento: Micromass LCT; ionización: ESI positiva/negativa;
HP1100 con DAD e inyector automático; horno 40ºC; columna: Waters
Symmetry C-18, 50 x 2,1 mm, 3,5 \mum; eluyente A:
ácido fórmico al 0,1%/acetonitrilo, eluyente B: ácido fórmico al
0,1%/agua; flujo: 0,5 ml/min; gradiente: 0-1 min 0%
de A, 1-6 min 90% de A, 6-8 min
100% de A, 8-10 min 100% de A, 10-15
0% de A.
Procedimiento 3 (HPLC): instrumento:
Gilson Abimed HPLC; detector de UV 254 nm; sistema de bombeo
binario; columna: Nucleosil RP-18, 7 \mum; 250 x
50 mm; flujo: 30 ml/min; eluyente A: agua/ácido trifluoroacético al
0,1%, eluyente B: acetonitrilo/ácido trifluoroacético al 0,1%;
gradiente: 0-40 min 20-25% de B,
40-60 min 25% de B, 60-110 min
25-50% de B, 110-120 min 50% de B,
120-130 min 50-100% de B,
130-160 min 100% de B, a continuación regeneración
de la columna de cromatografía.
Procedimiento 4 (HPLC): instrumento:
Gilson Abimed HPLC; detector de UV 254 nm; sistema de bombeo
binario; columna: Nucleosil RP-18, 7 \mum; 250 x
50 mm; flujo: 40 ml/min; eluyente A: agua/ácido trifluoroacético al
0,05%, eluyente B: acetonitrilo/ácido trifluoroacético al 0,05%;
gradiente: 0-105 min 20-25% de B,
105-111 min 25% de B, 111-131 min
25-27% de B, 131-157 min
27-35% de B, 157-192 min
35-40% de B, 192-207 min
40-45% de B, a continuación regeneración de la
columna de cromatografía.
Procedimiento 5 (HPLC): instrumento:
Gilson Abimed HPLC; detector de UV 254 nm; sistema de bombeo
binario; columna: Nucleosil RP-18, 7 \mum; 250 x
50 mm; flujo: 40 ml/min; eluyente A: agua/ácido trifluoroacético al
0,05%, eluyente B: acetonitrilo/ácido trifluoroacético al 0,05%;
gradiente: 0-40 min 20-25% de B,
40-105 min 25% de B, 105-130 min
25-27% de B, 130-170 min
27-40% de B, 170-190 min 40% de B,
190-210 min 40-45% de B, a
continuación regeneración de la columna de cromatografía.
Procedimiento 6 (cromatografía en gel en
Sephadex LH-20): la cromatografía en gel se
realiza sin presión en Sephadex LH-20 (empresa
Pharmacia). Se fracciona según la actividad de UV (detector de UV
para 254 nm, empresa Knauer) (colector de fracciones ISCO Foxy
200). Dimensiones de la columna: 32 x 7 cm (escala de medición
1000-100 \mumol); 30 x 4 cm (escala de medición
100-10 \mumol); 25 x 2 cm (escala de medición
10-1 \mumol).
Procedimiento 7 (HPLC preparativa;
Symmetry): instrumento: Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210
nm; sistema de bombeo binario; columna:
SymmetryPrep^{TM}C_{18}, empresa Waters, 7 \mum; 300 x 19 mm;
flujo: 20 ml/min; eluyente A: ácido trifluoroacético al 0,05% en
agua, eluyente B: ácido trifluoroacético al 0,05% en acetonitrilo;
gradiente: 0-3 min 10% de B, 3-30
min rampa de gradiente del 10-90% de B,
30-38 min 90% de B, 38-45 min 10%
de B.
Procedimiento 8 (HPLC preparativa; Symmetry;
TFA): instrumento: Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm;
sistema de bombeo binario; columna: SymmetryPrep^{TM}C_{18},
empresa Waters, 7 \mum; 300 x 19 mm; flujo: 7 ml/min; eluyente A:
agua/ácido trifluoroacético al 0,1-0,25%, eluyente
B: acetonitrilo; gradiente: 0-8 min 5% de B,
8-40 min 5-60% de B,
40-60 min 60% de B, 60-75 min
60-100% de B, 75-80 min 100% de B, a
continuación regeneración de la columna de cromatografía.
Procedimiento 9 (HPLC preparativa; Kromasil,
ácido acético): instrumento: Gilson Abimed HPLC; detector de UV
210 nm; sistema de bombeo binario; columna:
Kromasil-100A C_{18}, 5 \mum; 250 x 20 mm;
flujo: 25 ml/min; eluyente A: agua/ácido acético al
0,25-0,5%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente:
0-3 min 5% de B, 3-30 min
5-100% de B, 30-38 min 100% de B, a
continuación regeneración de la columna de cromatografía.
Procedimiento 10 (HPLC preparativa; Symmetry;
sensible para productos finales): instrumento: Gilson Abimed
HPLC; detector de UV 210 nm; sistema de bombeo binario; columna:
SymmetryPrep^{TM}C_{18}, empresa Waters, 7 \mum; 300 x 19 mm;
eluyente A: ácido trifluoroacético al 0,05% en agua, eluyente B:
ácido trifluoroacético al 0,05% en acetonitrilo; gradiente:
0-5 min 5% B con velocidad de flujo 20 ml/min,
5-30 min rampa de gradiente del 5 al 60% de B con
posteriores aumentos de flujo: 22 ml/min a partir de 6 min, 23
ml/min a partir de 10 min, 24 ml/min a partir de 15 min;
30-35 min rampa de gradiente del 60% al 98% de B con
reducción de la velocidad de flujo hasta el 21 ml/min a partir de
38 min; 40-45 min 10% de B.
Procedimiento 11 (EM-CL):
tipo de instrumento de EM: Micromass ZQ; tipo de instrumento de
HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; columna: Grom-Sil 120
ODS-4 HE 50 x 2 mm, 3,0 \mum; eluyente A:
agua/ácido fórmico al 0,025%/l, eluyente B: acetonitrilo/ácido
fórmico al 0,025%; gradiente: 0-2,9 min
0-70% de B, 2,9-3,1 min
70-90% de B, 3,1-4,5 min
70-90% de B; horno: 50ºC, flujo: 0,8 ml/min,
detección UV: 210 nm.
Procedimiento 12 (EM-CL):
tipo de instrumento de EM: Micromass LCT (ESI pos./neg.); tipo de
instrumento de HPLC: HP 1100 Series; UV DAD 1100 Series; columna
SimmetryPre^{TM}C_{18}, empresa Waters, 50 x 2,1 mm, 3,5
\mum; eluyente A: agua/ácido fórmico al 0,1%, eluyente B:
acetonitrilo/ácido fórmico al 0,1%; gradiente: 0-1
min 0% de B, 1-5,5 min 0-95% de B,
5,5-8 min 95% de B, 8-8,1 min
95-0% de B, 8,1-10 min 0% de B, a
continuación regeneración de la columna de cromatografía. Horno:
40ºC, flujo: 0,5 ml/min (durante 8,1-10 min durante
un corto tiempo hasta 1 ml/min), detección UV: 210 nm.
Procedimiento 13 (HPLC): tipo de
instrumento de HPLC: HP 1050 Series; UV DAD 1100 Series; columna
Symmetry-Prep^{TM}C_{18}, empresa Waters, 50 x
2,1 mm, 3,5 \mum; eluyente A: agua/ácido trifluoroacético al
0,05%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-9 min
0-100% de B, 9-11 min 100% de B,
11-12 min 100-0% de B, a
continuación regeneración de la columna de cromatografía. Horno:
40ºC, flujo: 0,4 ml/min, detección UV: 210 nm.
Procedimiento 14 (EM-CL):
tipo de instrumento de EM: Micromass ZQ; tipo de instrumento de
HPLC: Waters Alliance 2795; columna: Phenomenex Synergi 2 \mum
Hydro-RP Mercury 20 x 4 mm; eluyente A: agua/ácido
fórmico al 0,25%, eluyente B: acetonitrilo/ácido fórmico al 0,25%;
gradiente: 0,0-2,5 min 90-30% de A,
flujo 1-2 ml/min, 2,5-3,0 min
30-5% de A, flujo 2,0 min, 3,0-4,5
min 5% de A; horno: 50ºC; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 15 (HPLC analítica): tipo
de instrumento de HPLC: HP 1050 Series; UV DAD 1100 Series; columna:
Kromasil C_{18}, 60 x 2 mm, 3,5 \mum; eluyente A: agua/ácido
perclórico al 0,5%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente:
0-0,5 min 2% de B, 0,5-4,5 min
2-90% de B, 4,5-9,0 min 90% de B,
9,0-9,2 min 90-2% de B,
9,2-10,0 min 2% de B; flujo: 0,75 ml/min, horno:
30ºC, detección UV 210 nm.
Procedimiento 16 (EM-CL):
instrumento: Micromass Quattro LCZ con HPLC Agilent Serie 1100;
columna: Phenomenex Synergi 2 \mu Hydro-RP
Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido
fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido
fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de A \rightarrow 2,5 min
30% de
A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; horno: 50ºC; detección UV: 208-400 nm.
A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; horno: 50ºC; detección UV: 208-400 nm.
Procedimiento 17 (EM-CL):
tipo de instrumento de EM: Micromass ZQ; tipo de instrumento de
HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; columna: Phenomenex Synergi 2 \mu
Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de
agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de
acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min
90% de A \rightarrow 2,5 min 30% de A \rightarrow 3,0 min 5% de
A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5
min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; horno: 50ºC; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 18 (EM-CL):
instrumento: Micromass Quattro LCZ con HPLC Agilent Serie 1100;
columna: Phenomenex Synergi 2 \mum Hydro-RP
Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido
fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido
fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de A \rightarrow 2,5 min
30% de
A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; horno: 50ºC; detección UV: 208-400 nm.
A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; horno: 50ºC; detección UV: 208-400 nm.
Procedimiento 19 (HPLC analítica):
instrumento: Agilent 1100 con DAD (G1315B), bomba binaria (G1312A),
inyector automático (G1313A), desgasificador de disolvente (G1379A)
y termostato de la columna (G1316A); columna: Agilent Zorbax
Eclipse XDB-C8 4,6 x 150 x 5 mm; temperatura de la
columna: 30ºC; eluyente A: ácido perclórico del 0,05% al 70% en
agua; eluyente B: acetonitrilo; flujo: 2,00 ml/min; gradiente:
0-1 min 10% de B, rampa, 4-5 min
90% de B, rampa, 5,5 min 10% de B.
Procedimiento 20
(EM-MALDI): las investigaciones de
EM-MALDI/EM se realizan en un 4700 Proteomics
Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA, EE.UU.) que está
equipado con óptica de iones TOF/TOF y láser de Nd:YAG de 200 Hz
(355 nm). Los iones cuasimoleculares se aceleran en la fuente de
iones con 8 kV, se seleccionan con un deflector eléctrico (MS1) y
se impactan en una celda de impacto, que está dispuesta entre MS1 y
MS2, con átomos de argón. Los iones de fragmentos formados se
aceleran posteriormente con 15 kV y se caracterizan con el segundo
analizador de masas de tiempo de vuelo (MS2).
Procedimiento 21
(EM-TOF-HR): espectros de
EM-TOF-HR-ESI^{+}
se registran con un instrumento Micromass LCT (tensión del capilar:
3,2 KV, tensión del cono: 42 V, temperatura de la fuente: 120ºC,
temperatura de desolvatación: 280ºC). Para esto se utiliza una
bomba de jeringa (empresa Harvard Apparatus) para la introducción de
las muestras. Como patrón sirve leucina-encefalina
(Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu).
Procedimiento 22 (HPLC preparativa):
instrumento: Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm; sistema de
bombeo binario; columna: Reprosil ODS-A, 5 \mum,
250 x 20 mm; eluyente A: ácido trifluoroacético al 0,2% en agua,
eluyente B: acetonitrilo; velocidad de flujo: 25 ml/min; temperatura
de la columna 40ºC; 0-10 min 20% de B,
10-15 min 80% de B.
Procedimiento 23
(EM-FT-ICR-HR):
las mediciones de precisión de la masa se realizan en un
espectrómetro de masas de resonancia ión-ciclotrón
con transformada de Fourier Apex II de alta resolución (Bruker
Daltonik GmbH, Bremen) que está equipado con un imán de 7 Teslas,
una fuente de iones por electropulverización externa y un sistema
de datos XMASS basado en Unix. La resolución de la masa asciende
aproximadamente a 40.000 (50% de definición de valle).
Procedimiento 24 (EM-CL):
instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent Serie 1100;
columna: Phenomenex Synergi 2 \mu Hydro-RP
Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido
fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido
fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de A \rightarrow 2,5 min
30% de A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de
A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min;
horno: 50ºC; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 25 (HPLC preparativa):
instrumento: Gilson Abimed HPLC; detector de UV 210 nm; sistema de
bombeo binario; columna: Grom-Sil SNr. 4051 120
ODS-4HE, 10 \mum, 250 x 40 mm; eluyente A: ácido
trifluoroacético al 0,1% en agua, eluyente B: ácido
trifluoroacético al 0,1% en acetonitrilo; velocidad de flujo: 50
ml/min; 0-3 min 10% de B, 3-27 min
rampa de gradiente, 27-35 min 95% de B,
35-40 min 10% de B.
A una disolución del péptido libre del extremo
N (0,3 mmol) en piridina seca (30 ml) se añade gota a gota
isotiocianato de fenilo bajo atmósfera de gas protector argón (50
mmol). La mezcla de reacción se agita a 37ºC (aproximadamente 1 h)
hasta que el control analítico por HPLC (procedimiento 13) muestra
suficiente conversión (>95%). La mezcla de reacción se concentra
a vacío con control de temperatura (<40ºC) y luego se
liofiliza.
\vskip1.000000\baselineskip
Bajo atmósfera de gas protector argón, la
tiourea de péptido (0,2 mmol) se mezcla como sólido con agitación
vigorosa con ácido trifluoroacético seco y luego se agita a 40ºC
(aproximadamente 20 min) hasta que el control analítico por HPLC
muestra suficiente conversión (>95%). La mezcla de reacción se
concentra rápidamente a vacío a temperatura ambiente (control de
temperatura). Para liberar el producto bruto de más ácido
trifluoroacético, el producto bruto se recoge en diclorometano y se
libera de nuevo a vacío del disolvente. Este proceso se repite
varias veces con tolueno (dos veces) y con diclorometano (dos
veces). Finalmente se liofiliza el producto bruto.
\vskip1.000000\baselineskip
El aminoaldehído protegido en N
(1,2-1,3 eq.), la amina (aminoéster o ejemplo 3A,
como clorhidrato o sal de TFA) (1 eq.) y acetato de sodio (1 eq.)
se disponen en DMF anhidra y se mezclan a 0ºC con cianoborohidruro
de sodio (2 eq.). La disolución resultante se agita hasta la
reacción completa de la amina de 0ºC a TA (la reacción se determina
mediante HPLC analítica (procedimiento 19) o EM-CL
(procedimiento 17)).
En el caso de lotes pequeños (hasta
aproximadamente 0,7 mmoles), la mezcla de reacción completa se
purifica luego mediante HPLC (procedimiento 7). En el caso de lotes
mayores, primero se purifica previamente en una columna Sephadex
(procedimiento 6) y el producto obtenido se purifica posteriormente
mediante una HPLC preparativa (procedimiento 7). El producto se
aísla mediante liofilización de las fracciones adecuadas.
Los compuestos que contienen piridilo
frecuentemente proporcionan después de este procedimiento un
complejo de piridilo-cianoborano. En este caso,
éste se disuelve en etanol y se calienta 24 h a reflujo. Se forma el
éster de ácido desoxodipeptídico libre. Éste se mezcla con poco
dimetilsulfóxido, se libera del etanol en rotavapor y se purifica
mediante HPLC (procedimiento 7).
\vskip1.000000\baselineskip
El éster metílico de ácido
desoxo(dipeptídico) se disuelve en metanol y se agita con un
exceso de hidróxido de litio (5-10 eq., disolución
1 N en agua) a TA hasta que la HPLC analítica (procedimiento 19)
muestre la saponificación completa. Después se acidifica con ácido
clorhídrico 1 N, se concentra en rotavapor y se purifica mediante
HPLC preparativa. El producto se aísla mediante liofilización de las
fracciones adecuadas.
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El éster bencílico de ácido
desoxo(dipeptídico) se disuelve en etanol
(10-15 ml/mmol) y se hidrogena en presencia de Pd
(10% sobre carbón) como catalizador (40-50 mg/mmol)
bajo hidrógeno a 1 atm (101,3 kPa). Después de completarse la
reacción (detectada mediante HPLC (procedimiento 19)), el
catalizador se separa por filtración y se lava con metanol, luego
el filtrado se evapora en rotavapor. El residuo se seca a alto
vacío.
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El ácido desoxo(dipeptídico) (2 eq.) y el
compuesto del ejemplo 5A (1 eq.) se disponen bajo argón y
enfriamiento con hielo en DMF, se mezclan con NMM (4 eq.), HATU
(2,1 eq.) y de nuevo NMM (5 eq.) y se agita a 0ºC hasta la reacción
completa (la reacción se determina mediante HPLC analítica
(procedimiento 19) o EM-CL (procedimiento 17)). En
el caso de lotes pequeños (hasta aproximadamente 0,2 mmoles), la
mezcla de reacción completa se purifica luego mediante HPLC
(procedimiento 7). En el caso de lotes mayores, primero se purifica
previamente en una columna Sephadex (procedimiento 6) y el producto
obtenido se purifica posteriormente mediante una HPLC preparativa
(procedimiento 7). El producto se aísla mediante liofilización de
las fracciones adecuadas.
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El producto de partida protegido con Boc se
disuelve en diclorometano/TFA 3:1 (20-200 ml/mmol) y
se deja agitar a TA hasta la reacción completa
(5-20 min, control por HPLC (procedimiento 19)). A
continuación, la mezcla se diluye con
1,2-dicloroetano y se concentra en rotavapor. El
residuo se recoge en agua/acetonitrilo, se liofiliza, luego se
disuelve de nuevo en agua y se purifica por HPLC preparativa
(procedimiento 10). El producto final se obtiene mediante
liofilización de las fracciones adecuadas.
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El producto de partida protegido con Z se
disuelve en isopropanol (15-100 ml/mmol) y se
hidrogena en presencia de Pd (10% sobre carbón) como catalizador
(50-200 mg/mmol) bajo hidrógeno a 1 atm (101,3 kPa).
Después de completarse la reacción (detectada mediante HPLC
(procedimiento 19)), el catalizador se separa por filtración y se
lava con metanol, luego el filtrado se evapora en rotavapor. El
residuo se disuelve en agua y se purifica mediante HPLC preparativa
(procedimiento 10). El producto final se obtiene mediante
liofilización de las fracciones adecuadas.
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El depsipéptido que va a abrirse (por ejemplo,
lisobactina, 0,05 \mumol) se mezcla inicialmente en un microvial
con un tampón de borato-ácido clorhídrico (empresa Merck) pH 8 (250
\mul). Se deja reposar durante la noche, se mezcla con ácido
acético (100 \mul) y la muestra se liofiliza. El producto bruto se
investiga sin más etapas de purificación mediante secuenciación por
EM-MALDI.
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YM: agar de
levadura-malta: D-glucosa (4 g/l),
extracto de levadura (4 g/l), extracto de malta (10 g/l), 1 litro
de agua con Lewatit. Antes de la esterilización (20 minutos a 121ºC)
se ajusta el pH a 7,2.
HPM: manitol (5,4 g/l), extracto de
levadura (5 g/l), peptona de carne (3 g/l).
Conserva de trabajo: la cepa liofilizada (ATCC
53042) se cultiva en 50 ml de medio YM.
Fermentación en matraz: se inoculan 150
ml de medio YM o 100 ml de medio HPM en un matraz Erlenmeyer de 1 l
con 2 ml de la conserva de trabajo y se dejan crecer durante
30-48 horas a 28ºC en un agitador a 240 rpm.
Fermentación de 30 l: 300 ml de la
fermentación en matraz (medio HPM) se usan para inocular una
disolución de medio nutriente de 30 l estéril (1 ml de Antifoam SAG
5693/1). Este cultivo se deja crecer durante 21 horas a 28ºC, 300
rpm y una aireación con aire estéril de 0,3 vvm. El pH se mantiene
constante con ácido clorhídrico 1 M a pH = 7,2. En total, durante
el tiempo de cultivo se añaden 880 ml de ácido clorhídrico 1 M.
Cultivo principal (200 l): se inoculan 15
x 150 ml de medio YM en matraces Erlenmeyer de 1 l con 2 ml de la
conserva de trabajo y se dejan crecer a 28ºC durante 48 horas y 240
rpm en el agitador. 2250 ml de este cultivo se usan para inocular
una disolución de medio nutriente de 200 l estéril (YM) (1 ml de
Antifoam SAG 5693/l) y se dejan crecer durante 18,5 horas a 28ºC,
150 rpm y una aireación con aire estéril de 0,3 vvm.
Para controlar el desarrollo de la fermentación,
cada hora se sacan muestras (50 ml). 2 ml de este caldo de cultivo
se mezclan con 1 ml de metanol (ácido trifluoroacético al 0,5%) y se
filtran a través de un filtro de 0,45 \mum. 30 \mul de esta
suspensión se analizan mediante HPLC (procedimiento 1 y
procedimiento 2).
Después de 18,5 horas, el caldo de cultivo del
cultivo principal se separa a 17000 rpm en sobrenadante y
sedimento.
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El sobrenadante (183 l) se ajusta a pH
6,5-7 con ácido trifluoroacético concentrado o
solución cáustica y se aplica a una columna Lewapol (OC 1064,
contenido de 60 l). A continuación se eluye con agua pura,
agua/metanol 1:1 y a continuación con metanol puro (con ácido
trifluoroacético al 0,1%). Esta fase orgánica se concentra a vacío
hasta dar un resto acuoso restante de 11,5 l.
La fase acuosa restante se une a gel de sílice
C_{18} y se separa (MPLC, Biotage Flash 75, 75 x 30 cm,
KP-C18-WP, 15-20
\mum, flujo: 30 ml; eluyente: acetonitrilo/agua con ácido
trifluoroacético al 0,1%; gradiente: 10%, 15% y 40% de
acetonitrilo). La fase de 40% de acetonitrilo, que contiene la
cantidad principal del ejemplo 1A, se concentra a vacío y a
continuación se liofiliza (aproximadamente 13 g). Esta mezcla de
sólidos se separa inicialmente en porciones de 1,2 g en una HPLC
preparativa (procedimiento 3), a continuación mediante filtración
en gel en Sephadex LH-20 (5 x 70 cm,
acetonitrilo/agua 1:1, respectivamente con ácido trifluoroacético al
0,05%) y otra HPLC preparativa (procedimiento 4).
Este proceso proporciona 2250 mg del ejemplo
1A.
El sedimento se recoge en 4 l de
acetona/agua 4:1, se mezcla con 2 kg de Celite, se ajusta a pH = 6
con ácido trifluoroacético, se agita y se centrifuga. El disolvente
se concentra a vacío y el residuo se liofiliza. El liofilizado
obtenido (89,9 g) se recoge en metanol, se filtra, se concentra y se
separa en gel de sílice (procedimiento 5). El ejemplo 1A se
purifica después mediante filtración en gel (Sephadex
LH-20, 5 x 68 cm, agua/acetonitrilo 9:1 (con ácido
trifluoroacético al 0,05%), flujo: 2,7 ml/min. Tamaño de fracciones
13,5 ml) para dar la sustancia pura.
Este proceso proporciona 447 mg del ejemplo
1A.
HPLC (procedimiento 1): R_{t} = 6,19 min
EM (ESIpos): m/z = 1277 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (500,13 MHz, d_{6}-DMSO):
\delta = 0,75 (d, 3H), 0,78 (d, 6H), 0,80 (t, 3H), 0,82 (d, 3H),
0,90 (d, 3H), 0,91 (d, 3H), 0,92 (d, 3H), 0,95 (d, 3H), 0,96 (d,
3H), 1,05 (m, 1H), 1,19 (d, 3H), 1,25 (m, 2H), 1,50 (m, 4H), 1,51
(m, 2H), 1,55 (m, 1H), 1,61 (m, 1H), 1,65 (m, 1H), 1,84 (m, 1H),
1,85 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 2,75 (m,
2H), 3,40 (m, 1H), 3,52 (m, 2H), 3,53 (dd, 1H), 3,64 (m, 2H), 3,66
(m, 1H), 3,68 (dd, 1H), 3,73 (m, 2H), 4,00 (dd, 1H), 4,02 (a, 1H),
4,13 (a, 1H), 4,32 (dd, 1H), 4,39 (t, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,75 (dd,
1H), 5,19 (t, 1H), 5,29 (d, 1H), 5,30 (a, 1H), 5,58 (m, 2H), 6,68
(m, 3H), 6,89 (d, 1H), 6,93 (m, 3H), 6,94 (a, 1H), 6,98 (d, 1H),
7,12 (a, 1H), 7,20 (a, 2H), 7,23 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,54 (d,
1H), 7,58 (d, 1H), 8,32 (a, 1H), 9,18 (a, 1H), 9,20 (m, 2H), 9,50
(a, 1H).
RMN ^{13}C (125,77 MHz, d_{6}-DMSO):
\delta = 10,3, 15,3, 19,0, 19,2, 19,6, 20,0, 20,9, 22,0, 22,4,
23,0, 23,2, 24,3, 24,4, 25,0, 25,4, 26,0, 27,8, 30,9, 35,4, 39,5,
40,8, 40,9, 41,6, 44,1, 51,5, 52,7, 55,9, 56,2, 56,4, 57,9, 58,8,
60,2, 61,1, 62,6, 70,1, 71,6, 71,7, 75,5, 128,1, 128,6, 136,7,
156,8, 168,2, 170,1, 170,4, 171,2, 171,5, 171,9, 172,2, 172,4,
173,7.
La asignación de las señales se realizó según la
asignación descrita en la bibliografía (T. Kato, H. Hinoo, Y.
Terui, J. Antibiot., 1988, 61,
719-725).
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Se hace reaccionar bistrifluoroacetato de
lisobactina (500 mg, 0,33 mmol) (ejemplo 1A) según el procedimiento
general de trabajo 1. Se obtienen 600 mg (cuant.) de producto, que
puede seguir haciéndose reaccionar sin purificar.
Para la posterior purificación, el producto
bruto puede cromatografiarse en gel (procedimiento 6; metanol/ácido
acético al 0,1%). Las fracciones que contienen producto se
concentran a vacío a temperatura ambiente y luego se liofilizan. Se
obtiene el producto en 80% de rendimiento.
HPLC/UV-Vis (procedimiento 13):
R_{t} = 6,84 min,
\lambda_{máx} (cualitativo) = 220 nm (s),
248 (m), 269 (m).
EM-CL (procedimiento 11):
R_{t} = 2,64 min;
EM (ESIpos.): m/z (%) = 706,5 (50) [M +
2H]^{2+}, 1412 (20) [M + H]^{+};
EM-CL (procedimiento 12):
R_{t} = 4,95 min;
EM (ESIpos.): m/z (%) = 1412 (100) [M +
H]^{+}.
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Se hace reaccionar tiourea (ejemplo 2A) (300 mg,
0,2 mmol) según el procedimiento general de trabajo 2. El producto
bruto se cromatografía en gel (procedimiento 6; metanol/ácido
acético al 0,25%) y a continuación se purifica de forma fina
mediante HPLC preparativa (procedimiento 8). Se obtienen 147 mg (65%
d. t.) de producto.
HPLC/UV-Vis (procedimiento 13):
R_{t} = 4,96 min,
\lambda_{máx} (cualitativo) = 220 nm (s),
255-270 (w).
EM-CL (procedimiento 12):
R_{t} = 3,84 min;
EM (ESIpos.): m/z (%) = 582,4 (100) [M +
2H]^{2+}, 1164 (20) [M + H]^{+}.
EM-FT-ICR-HR
(procedimiento 20):
- C_{52}H_{88}N_{14}O_{16} [M + 2H]^{2+}
- calc. 582,32459, hall. 582,32460;
- C_{52}H_{87}N_{14}NaO_{16} [M + H + Na]^{2+}
- calc. 593,31556, hall. 593,31564.
Para la determinación de la secuencia de
aminoácidos, una muestra analítica del producto se hidroliza según
el procedimiento general de trabajo 9.
EM-MALDI (procedimiento 20): m/z
(%) = 1181,7 (100) [M + H]^{+}.
El ejemplo 1A (6,47 g, 4,30 mmol) se disuelve
bajo atmósfera de argón en piridina (90 ml). Luego se añade
isotiocianato de fenilo (1,16 g, 8,60 mmol, 2 equivalentes) y la
mezcla de reacción se agita a 37ºC durante 1 h. A continuación, el
disolvente se elimina por destilación en rotavapor y el residuo se
seca durante la noche en el vacío de una bomba de aceite. Se
obtiene el producto intermedio del ejemplo 2A con un rendimiento
bruto de 6,60 g. El producto intermedio se sigue haciendo reaccionar
sin purificación. Además, el ejemplo 2A (6,60 g) se disuelve bajo
atmósfera de argón en ácido trifluoroacético (107 ml) y se agita 30
min a temperatura ambiente. La disolución se concentra luego en el
rotavapor a vacío, se seca por poco tiempo en el vacío de la bomba
de aceite, se recoge en éter metil-terc-butílico (250 ml) y
se agita vigorosamente hasta que se forme un sólido amorfo
pulverulento. Éste se separa por filtración con vacío y se lava con
éter metil-terc-butílico (200 ml), luego se vuelve a lavar
más con diclorometano (dos veces 100 ml). El sólido se transfiere a
un matraz y se seca a vacío de bomba de aceite. Se obtiene el
ejemplo 3A con un rendimiento bruto de 6,0 g (cuant.). El producto
se hace reaccionar sin más purificación.
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Se hace reaccionar bistrifluoroacetato de
des-D-leucil-lisobactina
(ejemplo 3A, 255 mg, 0,18 mmol) según el procedimiento general de
trabajo 1. Se obtienen 322 mg (cuant.) de producto, que puede seguir
haciéndose reaccionar sin purificar.
Para la posterior purificación, el producto
bruto puede cromatografiarse en gel (procedimiento 6; metanol/ácido
acético al 0,1%). Las fracciones que contienen producto se
concentran a vacío a temperatura ambiente y luego se
liofilizan.
HPLC/UV-Vis (procedimiento 13):
R_{t} = 6,56 min,
\lambda_{máx} (cualitativo) = 220 nm (s),
245 (m), 268 (m).
EM-CL (procedimiento 12):
R_{t} = 4,85 min;
EM (ESIpos.): m/z (%) = 1299 (100) [M +
H]^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Se hace reaccionar tiourea (ejemplo 4A, 66 mg,
34 \mumol) según el procedimiento general de trabajo 2. El
producto bruto puede purificarse previamente mediante una rápida
cromatografía en gel (procedimiento 6; metanol/ácido acético al
0,25%). La HPLC preparativa (procedimiento 8 o procedimiento 9
seguido de posterior transsalinización del producto de
cromatografía mediante adición de TFA (100 \mumol)) proporciona 45
mg (75% d. t.) de producto.
HPLC/UV-Vis (procedimiento 13):
R_{t} = 4,71 min,
\lambda_{máx} (cualitativo) = 220 nm (s),
255-270 (w).
EM-CL (procedimiento 11):
R_{t} = 1,65 min;
EM (ESIpos.): m/z (%) = 526 (100) [M +
2H]^{2+}, 1051 (15) [M + H]^{+}.
El compuesto del ejemplo 3A (6,00 g, 4,30 mmol)
se disuelve bajo atmósfera de argón en piridina (92 ml). Luego se
añade isotiocianato de fenilo (8,75 g, 64,68 mmol, 15 equivalentes)
y la mezcla de reacción se agita a 37ºC durante 1 h. A
continuación, el disolvente se elimina por destilación en rotavapor
y el residuo se seca durante la noche a vacío de bomba de aceite.
Se obtiene el ejemplo 4A con un rendimiento bruto de 6,0 g. El
producto intermedio se sigue haciendo reaccionar sin purificación.
Además, el ejemplo 4A bruto se disuelve bajo atmósfera de argón en
ácido trifluoroacético (82 ml) y se agita 30 min a temperatura
ambiente. La disolución se concentra luego en rotavapor a vacío, se
seca por poco tiempo a vacío de bomba de aceite, se recoge en éter
metil-terc-butílico (250 ml) y se agita vigorosamente hasta
que se forme un sólido amorfo pulverulento. Éste se elimina por
filtración con vacío y se lava con más éter
metil-terc-butílico (200 ml), luego se vuelve a lavar más
con dos partes cada una de 100 ml de diclorometano. El sólido se
transfiere a un matraz y se seca a vacío de bomba de aceite. Se
obtiene el compuesto del título con un rendimiento bruto de 5,4 g
(cuant.). El producto se sigue purificando mediante HPLC preparativa
(procedimiento 22). Se obtienen 1,79 g del compuesto del título
(32% d. t.).
Ejemplo 6A y ejemplo
7A
La síntesis se realiza según M. Merget, K.
Günther, M. Bernd, E. Günther, R. Tacke, J. Organomet. Chem. 2001
628, 183-194. La separación de los enantiómeros se
realiza mediante HPLC preparativa en fase quiral (Gilson Abimed
HPLC, detector de UV 212 nm, columna: Daicel Chiralpak
AD-H 5 \mum; 250 x 20 mm; flujo: 15 ml/min;
eluyente A: iso-hexano, eluyente B: ácido acético al 0,2%/1%
de agua/2-propanol; isocrático).
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Ejemplo
6A
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HPLC preparativa: R_{t} = 9,27 min
[\alpha]_{D}^{20} = -1,6 (c = 0,66,
metanol)
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Ejemplo
7A
HPLC preparativa: R_{t} = 4,16 min
[\alpha]_{D}^{20} = +1,1 (c
= 0,83, metanol)
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del ejemplo 6A (300 mg) se disuelve
en metanol (3 ml) y se enfría hasta 0ºC. Se añade gota a gota
cloruro de trimetilsililo (590 mg, 4,7 eq.) en 30 min y la mezcla se
calienta durante la noche hasta TA. Los componentes volátiles se
eliminan en rotavapor y a continuación a alto vacío. Se obtiene el
compuesto objetivo (224 mg, 92% d. t.).
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta = 8,40 (s
a, 3H), 3,93 (dd, J = 5,3, 10,9 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H),
1,71-0,97 (m, 2H), 0,03 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto del ejemplo 8A (2,0 g) se dispone
en THF (40 ml) bajo argón a 0ºC. Se añade trietilamina (2,3 g, 2,4
eq.) y a continuación una disolución de
N-benciloxicarboniloxisuccinimida (2,83 g, 1,2 eq.)
en 20 ml de THF. La mezcla se agita luego durante la noche a TA, se
concentra hasta la mitad, se diluye con éster etílico de ácido
acético, se lava dos veces con agua y una vez con disolución
saturada de cloruro sódico. La fase orgánica se seca sobre sulfato
de sodio y se evapora en rotavapor. El residuo se purifica mediante
HPLC preparativa (procedimiento 25). Se obtiene el compuesto
objetivo (2,32 g, 79% d. t.)
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,96 min
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 327
[M+NH_{4}]^{+} (100); 310 [M+H]^{+} (3).
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A una disolución del ejemplo 9A (2,32 g, 7,5
mmol) en THF (14 ml) se añaden cloruro de litio (0,64 g, 15 mmol) y
borohidruro de sodio (0,57 g, 15 mmol) y luego 22 ml de etanol. La
mezcla se agita durante la noche a TA. Para el procesamiento se
ajusta a pH 4 con enfriamiento con agua con hielo con una disolución
de ácido cítrico (al 10% en agua), luego se diluye con 200 ml de
agua y se extrae tres veces con diclorometano. Las fases orgánicas
reunidas se secan sobre sulfato de magnesio, se filtran y se
concentran a vacío. El residuo se separa mediante HPLC
(procedimiento 25) y la fracción adecuada se concentra a vacío. Se
obtiene el ejemplo 10A como aceite (1,24 g, 59% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,48 min;
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 299
[M+NH_{4}]^{+} (100); 282 [M+H]^{+} (13);
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,33 (m, 5H), 5,08 (s, 2H), 4,72 (m a, 1H), 3,83 (m a, 1H), 3,65 (m
a, 1H), 3,45 (m a, 1H), 2,13 (s a, 1H), 0,84-0,58
(m, 2H), 0,03 (s, 9H).
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Una disolución del complejo de
piridina-SO_{3} (2,04 g, 12,8 mmol) en DMSO
anhidro (12 ml) se añade a una disolución del ejemplo 10A (0,36 g,
1,28 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (1,65 g, 12,8
mmol) en 7 ml de DMSO bajo argón a 10ºC. Se quita el baño de
refrigeración y la mezcla se agita posteriormente 20 min. Se añaden
400 ml de agua con hielo y la disolución se extrae tres veces con
éter dietílico. Las fases orgánicas reunidas se lavan dos veces con
una disolución de ácido cítrico (al 10% en agua), una vez con agua,
una vez con disolución saturada de bicarbonato y una vez con
disolución saturada de cloruro sódico, se seca sobre sulfato de
magnesio, se filtra y se evapora en rotavapor. El ejemplo 11A se
obtiene como aceite (0,39 g, 93% d. t.) y se utiliza directamente
más adelante como producto bruto.
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 297
[M+NH_{4}]^{+} (100); 280 [M+H]^{+} (25).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
9,53 (s, 1H), 7,35 (m, 5H), 5,13 (s, 2H), 1,12 (dd, J = 5,8, 14,0
Hz, 1H), 0,78 (dd, J = 9,4, 14,0 Hz, 1H), 0,07 (s, 9H).
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A una disolución enfriada con hielo de la sal de
N-benciloxicarbonil-D-(3-terc-butil)-alanin-diciclohexilamina
(1,5 g, 3,26 mmol) en THF anhidro (15 ml) se añade lentamente gota
a gota una disolución del complejo de
borano-tetrahidrofurano en THF (1 M, 8,14 ml, 8,14
mmoles) y luego la disolución se lleva hasta TA en el plazo de 1,5 h
con agitación. Se mezcla con agua con enfriamiento, se concentra
algo a vacío, se diluye con disolución saturada de cloruro de sodio
y se extrae tres veces con éter dietílico. Las fases orgánicas
reunidas se lavan dos veces con ácido clorhídrico 0,1 N, dos veces
con disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio y una vez con
disolución saturada de cloruro sódico, se secan sobre sulfato de
sodio y se evaporan en rotavapor. El residuo se purifica mediante
HPLC preparativa (procedimiento 25) y las fracciones adecuadas se
evaporan en rotavapor y luego se secan a alto vacío. Rendimiento:
485 mg (56% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,4 min
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 283
[M+NH_{4}]^{+} (100); 266 [M+H]^{+} (60).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,35 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,72 (d a, J = aproximadamente 5H),
3,83 (m, 1H), 3,63 (dd, J = 4,0, 10,7 Hz, 1H), 3,51 (dd, J = 6,3,
10,7 Hz, 1H), 1,44 (dd, J = 2,9, 14,7 Hz, 1H), 1,28 (dd, J = 8,7,
14,7 Hz, 1H), 0,95 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación se realiza partiendo del ejemplo
6A (2,45 g, 9,37 mmoles) con el complejo de
borano-tetrahidrofurano (2 eq.) según el mismo
procedimiento que se describe para el ejemplo 12A. Se obtiene el
ejemplo 13A (1,70 g, 73% d. t.) después de la cromatografía sobre
gel de sílice (diclorometano/metanol 100:3).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,4 min
EM (ESI pos): m/z = 270 [M+Na]^{+}
(46); 192 (100).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
4,60-4,38 (m a, 1H), 3,87-3,72 (m a,
1H), 3,69-3,56 (m a, 1H), 3,50-3,38
(m a, 1H), 2,40 (s a, 1H) 1,44 (s, 9H), 0,82-0,66
(m, 2H), 0,04 (s, 9H).
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El compuesto del título se prepara a partir del
ejemplo 13A (620 mg, 2,51 mmoles) análogamente a la síntesis del
ejemplo 11A. Rendimiento 550 mg (80% d. t.). El ejemplo 14A se hace
reaccionar sin más purificación.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
9,50 (s, 1H), 4,93-4,82 (m a, 1H), 4,26 (q a, J =
aproximadamente 7-8 Hz, 1H), 1,44 (s, 9H), 1,09 (dd
a, J = 5,3, 14,8 Hz, 1H), 0,74 (dd, J = 10,0, 14,8 Hz, 1H), 0,08 (s,
9H).
En analogía a los procedimientos de síntesis
anteriormente descritos, los siguientes compuestos de partida se
preparan a partir de derivados de aminoácidos comercialmente
disponibles:
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HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,42 min;
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 283
[M+NH_{4}]^{+} (100); 266 [M+H]^{+} (58);
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,33 (m, 5H), 5,11(s, 2H), 4,71 (m, 1H), 3,83 (m, 1H), 3,62
(dd, J = 4,2, 10,5 Hz, 1H), 3,45 (dd, J = 6,3, 10,9 Hz, 1H), 1,43
(dd, J = 2,9, 14,6 Hz, 1H), 1,29 (dd, J = 8,9, 14,6, 1H), 0,93 (s,
9H).
\vskip1.000000\baselineskip
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 281
[M+NH_{4}]^{+} (100); 264 [M+H]^{+} (20).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
9,58 (s, 1H), 7,36 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 5,06 (m, 1H), 4,33 (dt, J
= 3,8, 8,7 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 3,8, 14,6 Hz, 1H), 1,30 (dd, J =
8,3, 14,7 Hz, 1H), 1,00 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 281
[M+NH_{4}]^{+} (100); 264 [M+H]^{+} (18).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
9,58 (s, 1H), 7,36 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 5,08 (m, 1H), 4,33 (dt, J
= 3,8, 8,7 Hz, 1H), 1,83 (dd, J = 3,8, 14,6 Hz, 1H), 1,30 (dd, J =
8,3, 14,7 Hz, 1H), 1,00 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 267
[M+NH_{4}]^{+} (100); 250 [M+H]^{+} (8).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
9,61 (s, 1H), 7,38 (m, 5H), 5,18 (m, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,35 (m,
1H), 1,62-1,55 (m, 2H), 1,41 (m, 1H), 0,96 (d, J = 7
Hz, 3H), 0,94 (d, J = 7 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 267
[M+NH_{4}]^{+} (100); 250 [M+H]^{+} (10).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
9,61 (s, 1H), 7,38 (m, 5H), 5,18 (m, 1H), 5,12 (m, 2H), 4,35 (m,
1H), 1,85-1,50 (m, 2H), 1,41 (m, 1H), 0,95 (m,
6H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 247
[M+NH_{4}]^{+} (15); 230 [M+H]^{+} (31), 191
(100).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
9,58 (s, 1H), 4,82 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 1,80 (dd, J = 2, 14,6 Hz,
1H), 1,44 (s, 9H), 1,25 (dd, J = 8,7, 14,6 Hz, 1H), 1,00 (s,
9H).
\vskip1.000000\baselineskip
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 247
[M+NH_{4}]^{+} (13); 230 [M+H]^{+} (28), 191
(100).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
9,58 (s, 1H), 4,82 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 1,80 (dd, J = 2, 14,6 Hz,
1H), 1,44 (s, 9H), 1,25 (dd, J = 8,7, 14,6 Hz, 1H), 1,00 (s,
9H).
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Análogamente a la preparación del ejemplo 8A, la
Boc-L-\beta-(3-piridil)-alanina
comercialmente disponible se trata con cloruro de trimetilsililo en
metanol. Después de completarse la reacción, la mezcla de reacción
se mezcla con éter dietílico y el producto cristalino precipitado se
separa por filtración. El producto se lava con éter dietílico frío
y se seca a alto vacío. Rendimiento: 94% d. t.
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,29 min
RMN ^{1}H (DMSO, 400 MHz): \delta = 8,86 (s,
1H), 8,82 (s a, 3H), 8,80 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 8,0 Hz,
1H), 7,92 (dd, J = 5,5, 8,0 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 3,74 (s, 3H),
3,38 (m [ABX], 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
La
L-\beta-(3,4-dimetoxifenil)-alanina
(225 mg, 1 mmol) comercialmente disponible se dispone en metanol (5
ml), se mezcla con cloruro de tionilo (73 \mul, 1 eq.) y la mezcla
se calienta 1 h a reflujo, luego se evapora en rotavapor y se seca
a alto vacío. Se obtienen 277 mg de producto.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta = 8,55 (s
a, 3H), 6,89 (d, J = 8,0 Hz, 1H), (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,73 (dd, J
= 1,9, 8,0 Hz, 1H), 4,25 (t a, J = aproximadamente 6 Hz, 1H), 3,75
(s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,08 (d, J = 6,2 Hz, 2H).
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El éster metílico de
(2S)-N-terc-butoxicarbonil-L-3-terc-butil-alanina
(529 mg, 2,04 mmol) se agita en TFA/diclo-
rometano 1:3 (3 ml) a TA, la disolución se evapora en rotavapor y se seca a alto vacío. Se obtienen 540 mg (97% d. t.) de producto.
rometano 1:3 (3 ml) a TA, la disolución se evapora en rotavapor y se seca a alto vacío. Se obtienen 540 mg (97% d. t.) de producto.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta = 8,33 (s
a, 3H), 3,95 (dd, J = 4,7, 7,5 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 1,80 (dd, J =
7,5, 14,4 Hz, 1H), 1,59 (dd, J = 4,7, 14,4 Hz, 1H), 0,92 (s,
9H).
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Los siguientes ejemplos 25A a 37A se preparan
según el procedimiento general de trabajo 3:
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Preparación a partir del ejemplo 17A y el
ejemplo 24A. Rendimiento: 220 mg (65% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,7 min;
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 407 [M+H]^{+}
(100);
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,34 (s, 5H), 5,52 (d a, J = 6,6 Hz, 1H), 5,14 (q, J= 12 Hz, 1H),
5,06 (q, J= 12 Hz, 1H), 4,09-3,95 (m, 2H), 3,79 (s,
3H), 3,25-3,03 (m, 2H), 2,01-1,78
(m, 2H), 1,50 (dd, J = 7,8, 15, 1H), 1,34 (m, 1H), 0,94 (s, 9H),
0,92 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 16A y el
ejemplo 24A. Rendimiento: 860 mg (36% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,7 min;
EM (ESI pos): m/z = 407 [M+H]^{+}
(100);
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,32 (m, 5H), 5,73 (d a, J = 8,5 Hz, 1H), 5,13 (d, J= 12 Hz, 1H),
5,04 (d, J= 12 Hz, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,80 (s, 3H),
3,33 (dd, J = 10,5, 12 Hz, 1H), 2,89 (dd, J = 3,5, 12 Hz, 1H),
1,95-1,68 (m, 2H), 1,53 (dd, J = 8,7, 14,7, 1H),
1,34 (d a, J = 15, 1H), 0,93 (s, 9H), 0,91 (s, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 19A y el
ejemplo 22A. Rendimiento: 800 mg (60% d. t.).
EM-CL (procedimiento 16):
R_{t} = 1,67 min. ES^{+}: m/z = 414 [M+H]^{+}, ES': 458
[M+HCOOH-H]^{+};
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
8,68 (s, 1H), 8,51 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,1 (d a, J = 7,2 Hz, 1H),
7,54 (dd, J = 5,1, 7,7 Hz, 1H), 7,38-7,28 (m, 5H),
5,12 (m, 1H), 5,03 (d, J= 12,2 Hz, 1H), 4,97 (d, J= 12,2 Hz, 1H),
3,99 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,33-2,99
(m, 3H), 2,85 (m, 1H), 11,61 (m, 1H), 1,42-1,20 (m,
2H), 0,82-0,98 (m, 6H).
Preparación a partir del ejemplo 18A y el
ejemplo 22A. Rendimiento 410 mg (48% d. t.).
EM-CL (procedimiento 14):
R_{t} = 1,51 min. ES^{+}: m/z = 414 [M+H]^{+},
ES^{-}: 458 [M+HCOOH-H]^{-}.
RMN ^{1}H (CDDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
8,90 (s, 1H), 8,66 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 8,3 Hz, 1H),
7,69 (dd, J = 5,5, 7,8 Hz, 1H), 7,39-7,28 (m, 5H),
5,36 (d, J = 7,1, 1H), 5,06 (m [AB], 2H), 4,35 (t, J = 5,1 Hz, 1H),
3,84 (s, 3H), 3,54 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 3,28 (t, J = 10,6 Hz, 1H),
3,08 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 1,62 (m, 1H), 1,45 (ddd, J = 5,4, 9,1,
14,3 Hz , 1H), 1,29 (ddd, J = 4,9, 8,4, 13,9 Hz, 2H), 0,90 (d, J =
6,6 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 20A y el
ejemplo 22A. Rendimiento: 160 mg (59% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,0 min;
EM (ESI pos): m/z = 394 [M+H]^{+} (92),
338 (80), 294 (100).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
8,51 (s, 1H), 8,75 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 7,8 Hz, 1H),
7,83 (dd, J = 5,5, 7,8 Hz, 1H), 4,98 (d a, J = 6,1 Hz, 1H), 4,38 (t,
J= 5,6 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,67 -3,52 (m, 2H), 3,35 (t, J = 10,5
Hz, 1H), 2,98 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 1,44 (dd, J = 9,0, 14,9 Hz, 1H),
1,40 (s, 9H), 1,31 (dd, J = 2,6,14,8 Hz, 1H), 0,93 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 18A y el
ejemplo 23A. Rendimiento 200 mg (32% d. t.).
EM-CL (procedimiento 16):
R_{t} = 1,91 min. ES^{+}: m/z = 473 [M+H]^{+},
ES^{-}: 517 [M+HCOOH-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,50-9,00 (s a, 2H), 7,40-723 (m,
6H), 6,90 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,82 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 6,71 (dd,
J= 1,6, 8,2 Hz, 1H), 5,05 (q [AB], J = 12,5 Hz, 2H), 4,30 (m, 1H),
3,85 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,20 (dd, J
= 5,1, 13,7 Hz, 1H), 3,07-2,93 (m, 3H), 1,58 (m,
1H), 1,38 (ddd, J = 4,6, 9,5, 14,1 Hz, 1H), 1,22 (ddd, J = 4,5, 8,8,
14 Hz, 1H), 0,86 (t, J = 6,4 Hz, 6H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 19A y el
ejemplo 23A. Rendimiento 190 mg (31% d. t.).
EM-CL (procedimiento 16):
R_{t} = 1,66 min. ES^{+}: m/z = 473 [M+H]^{+},
ES^{-}: 517 [M+HCOOH-H]^{-}.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
7,38-7,23 (m, 5H), 6,82-6,77 (m,
2H), 6,67 (dd, J= 1,8, 7,8 Hz, 1H), 5,18 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 4,99
(s, 2H), 4,23 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,81
(s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,34 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,27 (d, J = 5,4
Hz, 2H), 2,94 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 1,59 (m,
1H),1,42-1,25 (m, 2H), 0,90 (t, J = 6,5 Hz, 6H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 14A y el
ejemplo 22A. Rendimiento: 270 mg (73% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,2 min;
EM (ESI pos): m/z (%) = 410
[M+H]^{+}(100), 354 (77), 310 (73), 293 (70), 221
(97).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
8,85 (s, 1H), 8,71 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,47 (d a, J = 7,4 Hz, 1H),
7,80 (dd a, J = 4,8, 7,6 Hz, 1H), 4,94 (d a, J = 6,0 Hz, 1H),
4,40-4,30 (m, 1H), 3,99-3,84 (m,
1H), 3,89 (s, 3H), 3,65-3,52 (m, 2H), 3,32 (t a, J
= aproximadamente 10 Hz, 1H), 2,98 (d a, J = 10,5 Hz, 1H), 1,41 (s,
9H), 0,90 (dd, J = 10,5, 15,0, 1H), 0,75 (dd, J = 4,5, 15,0, 1H),
0,05 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 14A e
hidrotosilato de éster bencílico de L-leucina.
Rendimiento 180 mg (28% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 5,1 min
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
7,41-7,34 (m, 5H), 5,23 (m [AB], 2H), 5,06 (d a, J =
aproximadamente 5,0 Hz, 1H), 4,03-3,92 (m, 2H),
3,30 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,91 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 1,80 (m, 2H),
1,66 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 0,91 (d, J = 2,2 Hz, 3H), 0,89 (d, J =
1,9 Hz, 3H), 0,85 (dd, J = 10,3, 14,7 Hz, 1H), 0,68 (dd, J = 5,0,
14,6 Hz, 1H), 0,04 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 11A y el
ejemplo 24A. Rendimiento 390 mg (66% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,8 min
EM (ESI pos.): m/z = 423 [M+H]^{+}
(100).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,33 (s, 5H), 5,63 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 11,5 Hz, 1H),
5,05 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,07-3,90 (m, 1H), 3,85
(dd, J = 4,5, 7,9 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,35 (dd, J = 9,8, 11,3
Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 2,5, 12,5 Hz, 1H), 1,95-1,80
(m, 2H), 0,95 (dd, J = 10,2, 14,7 Hz, 1H), 0,94 (s, 9H), 0,76 (dd,
J = 5,1, 14,7 Hz, 1H), 0,03 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 16A y el
ejemplo 8A. Rendimiento 106 mg (37% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,8 min
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 423 (100)
[M+H]^{+}.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,32 (s a, 5H), 8,76 (d a, J = 9 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 12 Hz, 1H),
5,05 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,94 (dd, J = 12,6, 3,8 Hz,
1H), 3,78 (s, 3H), 3,34 (dd, J = 10, 12 Hz, 1H), 2,87 (dd, J = 4,
12 Hz, 1H), 1,53 (dd, J = 8,9, 14,7 Hz, 1H),
1,40-1,22 (m, 2H), 1,12 (dd, J = 12,5, 13,5 Hz,
1H), 0,92 (s, 9H), 0,06 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 11A y el
ejemplo 8A. Rendimiento 54 mg (24% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,93 min
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta =
7,36-7,26 (m, 5H), 5,47 (d a, J = 6 Hz, 1H), 5,16
(d, J = 12,4 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,96
(d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,32 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 2,91
(d, J = 11,3 Hz, 1H), 1,31 (d a, J = 14,2 Hz, 1H), 1,12 (t, J = 12,7
Hz, 1H), 0,92 (dd, J = 9,8, 14,9 Hz, 1H), 0,74 (dd, J = 4,8, 14,4
Hz, 1H), 0,06 (s, 9H), 0,02 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 16A y
clorhidrato de
H-Asp(tBu)-OMe. Rendimiento
212 mg (46% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,7 min
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 451 (100)
[M+H]^{+}, 317 (23).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,37-7,27 (m, 5H), 8,76 (d a, J = 9 Hz, 1H), 5,53
(d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,09 (q [AB], J = 12,2 Hz, 2H), 4,13 (m, 1H),
4,07 (t, J = 4,7 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,37 (t a, J = 10,8 Hz,
1H), 3,21-2,99 (m, 3H), 1,53 (dd, J = 8,8, 14,5 Hz,
1H), 1,44 (s, 9H), 1,32 (dd, J = 2,7, 14,5 Hz, 1H), 0,92 (s,
9H).
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Los siguientes ácidos desoxodipeptídicos
(ejemplos 38A a 49A) se preparan según el procedimiento general de
trabajo 4:
Preparación a partir del ejemplo 25A.
Rendimiento: 103 mg (51% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,5 min;
EM (ESI pos.): m/z = 393 [M+H]^{+},
(ESI neg.): 391 ([M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,30-8,60 (a, 1H), 7,40-7,22 (m,
6H), 5,13 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 3,92 (m,
1H), 3,84 (d a, J = 8,9 Hz, 1H), 2,94 (d a, J = 12,1 Hz, 1H), 2,81
(dd, , J = 10,2, 12,2 Hz, 1H), 1,80 (dd, J = 9,5, 13,8 Hz, 1H),
1,67 (d a, J = 9,5 Hz, 1H), 1,44 (dd, J = 8,6, 14,2 Hz, 1H), 1,30
(dd, J = 2,2, 14,2 Hz, 1H), 0,93 (s, 9H), 0,87 (s, 9H).
Preparación a partir del ejemplo 26A.
Rendimiento: 895 mg (83% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,5 min
EM (ESI pos.): m/z = 393 [M+H]^{+}
(100); ES-: 391 (4).
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
7,40-7,27 (m, 5H), 7,07 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,12
(d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,99 (d,
J = 12,7 Hz, 1H), 3,99-3,85 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 1,81 (dd, J = 9,7, 14 Hz, 1H), 1,64 (dd, J = 2, 14 Hz, 1H), 1,45-1,30 (m, 2H), 0,93 (s, 9H), 0,89 (s, 9H).
J = 12,7 Hz, 1H), 3,99-3,85 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 1,81 (dd, J = 9,7, 14 Hz, 1H), 1,64 (dd, J = 2, 14 Hz, 1H), 1,45-1,30 (m, 2H), 0,93 (s, 9H), 0,89 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 27A.
Rendimiento: 744 mg (95% d. t.).
EM-CL (procedimiento 14):
R_{t} = 1,17 min. ES^{+}: m/z = 400 [M+H]^{+},
ES^{-}: 398 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,5-8,9 (a, 2H), 8,62 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,61 (s,
1H), 7,97 (d, J = 7,8 H, 1H), 7,61 (dd, J = 5,1, 7,8 Hz, 1H),
7,41-7,28 (m, 6H), 5,13 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,00
(d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,29 (dd, J = 5,0, 8,8 Hz, 1H), 3,81 (m, 1H),
3,39 (dd, J = 4,8, 14,2 Hz, 1H), 3,16 (dd, J = 9,0, 14,2 Hz, 1H),
3,12 (d a, J = 12,4 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 9,6, 12,4 Hz, 1H), 1,59
(m, 1H), 1,39 (ddd, J = 4,9, 9,5, 13,6 Hz, 1H), 1,23 (ddd, J = 4,7,
8,9, 13,6 Hz, 1H), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,86 (d, J = 6,3 Hz,
3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 28A.
Rendimiento: 420 mg (74% d. t.).
EM-CL (procedimiento 14):
R_{t} = 1,15 min
EM: ES^{+}: m/z = 400 [M+H]^{+},
ES^{-}: 398 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,5-8,6 (a, 1H), 8,62 (s a, 2H), 7,97 (d, J = 7,9 H,
1H), 7,61 (dd, J = 5,2, 7,6 Hz, 1H), 7,43-7,27 (m,
6H), 5,10 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,32 (dd,
J = 5,0, 8,4 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,16 (dd, J = 4,8, 14,2 Hz,
1H), 3,18 (dd, J = 8,9, 14,2 Hz, 1H), 3,14-2,98 (m,
2H), 1,59 (m, 1 H), 1,39 (ddd, J = 4,9, 8,7, 13,8 Hz, 1H), 1,26
(ddd, J = 4,7, 8,8, 13,8 Hz, 1H), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,86
(d, J = 6,3 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 29A.
Rendimiento: 128 mg (77% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 3,9 min
EM: ES^{+}: m/z = 380 [M+H]^{+}
(100), 324 (85), 280 (88).
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,4-8,3 (a, 1H), 8,59 (d, J = aproximadamente 5 Hz,
1H), 8,58 (s, 1H), 7,93 (d, J = 7,8 H, 1H), 7,56 (dd, J = 5,1, 7,8
Hz, 1H), 6,89 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,31 (m, 1H), 3,86 (m, 1H), 3,34
(dd, J = 4,9, 14,1 Hz, 1H), 3,34 (dd, J = 8,9, 14,1 Hz, 1H),
3,10-2,90 (m, 2H), 1,44 (dd, J = 8,9, 14,4 Hz, 1H),
1,39 (s, 9H), 1,32 (dd, J = 2,5, 14,4 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 30A.
Rendimiento 140 mg (72% d. t.).
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 1,91 min. ES^{+}: m/z = 459 [M+H]^{+},
ES^{-}: 457 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 400 MHz): \delta =
9,3-8,4 (a, 2H), 7,41-7,29 (m, 5H),
7,26 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H),
6,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 5,00 (d, J =
11,0 Hz, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,72 (s,
3H), 3,12 (dd, J = 5,2, 14,1 Hz, 1H), 3,02 (dd, J = 7,5, 14,1 Hz,
1H), 3,0-2,83 (m, 2H), 1,55 (m, 1H), 1,34 (ddd, J =
4,9, 9,8, 13,9 Hz, 1H), 1,21 (ddd, J = 4,4, 8,5,13,6 Hz, 1H), 0,87
(d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,84 (d,
J = 6,4 Hz, 3H).
J = 6,4 Hz, 3H).
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Preparación a partir del ejemplo 31A.
Rendimiento 126 mg (99% d. t.).
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 1,92 min. ES^{+}: m/z = 459 [M+H]^{+},
ES^{-}: 457 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 400 MHz): \delta =
9,4-8,4 (a, 2H), 7,41-7,29 (m, 5H),
7,27 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H),
6,75 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,00 (d, J =
12,3 Hz, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,72 (s,
3H), 3,15 (dd, J = 4,9, 13,6 Hz, 1H), 2,99 (dd, J = 7,9, 14,1 Hz,
1H), 2,97 (d a,
J = aproximadamente 12 Hz, 1H), 2,87 (dd, J = 9,7, 11,8 Hz, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,35 (ddd, J = 4,9, 9,8, 13,9 Hz, 1H), 1,21 (ddd, J = 4,9, 8,5, 13,6 Hz, 1H), 0,87 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 0,83 (d, J = 7,9 Hz, 3H).
J = aproximadamente 12 Hz, 1H), 2,87 (dd, J = 9,7, 11,8 Hz, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,35 (ddd, J = 4,9, 9,8, 13,9 Hz, 1H), 1,21 (ddd, J = 4,9, 8,5, 13,6 Hz, 1H), 0,87 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 0,83 (d, J = 7,9 Hz, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 32A.
Rendimiento 56 mg (20% d. t.).
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 1,55 min. ES^{+}: m/z = 396 [M+H]^{+},
ES^{-}: 394 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz) (rotámero
principal): \delta = 9,10 (s, 1H), 8,68-8,58 (m,
2H), 7,81 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 5,19 (d a, J = aproximadamente 6 Hz,
1H), 4,19 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,71-3,57 (m, 2H),
3,30-3,13 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 0,90 (dd, J = 10,8,
14,8 Hz, 1H), 0,75 (dd, J = 4,4, 15 Hz, 1H), 0,03 (s, 9H).
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Preparación a partir del ejemplo 34A.
Rendimiento: 33 mg (47% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,6 min;
EM (ESI pos): m/z (%) = 409 (100)
[M+H]^{+}, ESI neg.: 407 (10)
[M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
7,56-7,43 (m, 5H), 7,29 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,13
(d, J = 12 Hz, 1H), 5,01 (d,
J = 12 Hz, 1H), 4,03-3,80 (m, 2H), 3,10 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 1,84 (dd, J = 9,0, 14,5 Hz, 1H), 1,68 (d a, J = 14,5 Hz, 1H), 0,95 (s, 9H), 0,82 (m, 2H), 0,03 (s, 9H).
J = 12 Hz, 1H), 4,03-3,80 (m, 2H), 3,10 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 1,84 (dd, J = 9,0, 14,5 Hz, 1H), 1,68 (d a, J = 14,5 Hz, 1H), 0,95 (s, 9H), 0,82 (m, 2H), 0,03 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación a partir del ejemplo 35A.
Rendimiento: 86 mg (88% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,6 min
EM: ES^{+}: m/z = 409 (100)
[M+H]^{+}; ES^{-}: 407 (9)
[M-H]^{-}, 113 (100).
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,00-8,65 (a, 2H), 7,42-7,25 (m,
5H), 7,28 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,99 (d,
J = 12,6 Hz, 1H), 3,95-3,80 (m, 2H), 3,10 (m, 1H),
2,89 (m, 1H), 1,44 (dd, J = 10,3, 14,3 Hz, 1H), 1,35 (d a, J = 14,3
Hz, 1H), 1,21 (dd, J = 3,9, 14,0 Hz, 1H), 0,88 (s, 9H), 0,07 (s,
9H).
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Preparación a partir del ejemplo 36A.
Rendimiento 43 mg (82% d. t.).
EM-CL (procedimiento 16):
R_{t} = 2,15 min. ES^{+}: m/z = 425 [M+H]^{+},
ES^{-}: 423 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,00-8,55 (s a, 2H), 7,39-7,22 (m,
5H), 7,25 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,98 (d,
J = 12,3 Hz, 1H), 4,00-3,82 (m, 2H), 3,01 (m, 1H),
2,89 (m, 1H), 1,20 (dd, J = 3,9, 14,1 Hz, 1H), 1,03 (t, J = 13,3
Hz, 1H), 0,89-0,75 (m, 2H), 0,10 (s, 9H), 0,05 (s,
9H).
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Preparación a partir del ejemplo 37A.
Rendimiento 78 mg (42% d. t.).
HPLC (procedimiento 15): R_{t} = 4,5 min
EM: ES^{+}: m/z=437 (100) [M+H]^{+},
ES^{-}: 435 (12) [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,5-8,0 (a, 2H), 7,39-7,27 (m, 6H),
5,10 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,12 (s a,
1H), 3,94-3,83 (m, 1H), 3,00-2,82
(m, 2H), 2,82 (d, = 5,6 Hz, 2H), 1,43 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,30
(dd, J = 2,7, 14,2 Hz, 1H), 0,89 (s, 9H).
El siguiente ejemplo 50A se prepara según el
procedimiento general de trabajo 5:
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Preparación a partir del ejemplo 33A.
Rendimiento 155 mg (95% d. t.).
EM (DCI/NH_{3}): m/z = 361 (100)
[M+H]^{+}, 315 (85).
RMN ^{1}H (DMSO, 300 MHz): \delta =
9,1-8,5 (a, 2H), 6,85 (d, J = 9,0, 1H),
3,98-3,82 (m, 2H), 3,00 (dd, 7,6, 12,3 Hz, 1H),
2,87 (dd, J = 5,3, 12,3 Hz, 1H), 1,85-1,60 (m, 3H),
1,40 (s, 9H), 0,95 (d, J = aproximadamente 2 Hz, 3H), 0,93 (d, J =
aproximadamente 2 Hz, 3H), 0,85-0,78 (m, 2H), 0,03
(s, 9H).
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Los ejemplos 51A a 54A se preparan según el
procedimiento general de trabajo 3 a partir del ejemplo 3A. El
rendimiento no se determina en esta etapa, sino sólo después de la
disociación del grupo protector del extremo N.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Los siguientes ejemplos 55A a 67A se preparan
según el procedimiento general de trabajo 6 a partir del ejemplo
5A. El rendimiento no se determina en esta etapa, sino sólo después
de la disociación del grupo protector del extremo N.
635 \mul (0,89 mmol) de una disolución de
bromuro de metilmagnesio (1,4 N en tolueno:THF 3:1) se mezclan gota
a gota bajo argón a TA con una disolución de 180 mg (0,68 mmol) del
compuesto del ejemplo 16A en 1 ml de éter dietílico anhidro. La
mezcla de reacción se calienta luego 2 h en un baño de aceite
caliente (50ºC), se enfría y se extingue con un cubito de hielo. Se
acidifica con ácido clorhídrico 1 N y se extrae tres veces con
éster de ácido acético. Las fases orgánicas reunidas se secan sobre
sulfato de sodio y se concentran en rotavapor. El residuo se
purifica mediante HPLC preparativa (procedimiento 25). Se obtienen
50 mg (20% d. t.) del compuesto del título.
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 2,34 min. EM (ES^{+}): m/z = 280,3
[M+H]^{+}.
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Una disolución del compuesto del ejemplo 68A (50
mg, 0,18 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (310
\mul, 1,79 mmoles) en 2 ml de DMSO se mezcla a 10ºC con complejo
de piridina-SO_{3} (285 mg, 1,79 mmoles) y se
calienta lentamente hasta TA. Después de 2 h, a la mezcla de
reacción se añaden 50 ml de hielo/agua. Se extrae cuatro veces con
éter dietílico. Las fases orgánicas reunidas se lavan tres veces con
una disolución de ácido cítrico al 10%, luego tres veces con agua y
dos veces con disolución saturada de cloruro sódico, se secan sobre
sulfato de magnesio y se concentran en rotavapor a 20ºC. El producto
bruto (30 mg, 60% d. t.) se hace reaccionar a continuación sin
purificación adicional.
EM-CL (procedimiento 14):
R_{t} = 2,26 min. EM (ES^{+}): m/z = 278,4
[M+H]^{+}.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta =
7,40-7,28 (m, 5H), 5,15-5,06 (m,
3H), 4,40 (dt, J = 2,3, 9,1 Hz, 1H), 2,21 (s, 3H), 1,68 (dd, J =
2,3, 14,7 Hz, 1H), 1,24 (dd, J = 9,1, 14,7 Hz, 1H), 0,99 (s,
9H).
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El compuesto del título se prepara según el
procedimiento general de trabajo 3 a partir del compuesto del
ejemplo 69A (27 mg) y el compuesto del ejemplo 24A (29 mg).
Rendimiento 6 mg (13% d. t.).
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 2,29 min. EM (ES^{+}): m/z = 421,2
[M+H]^{+}.
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El compuesto del título se prepara según el
procedimiento general de trabajo 4 a partir del compuesto del
ejemplo 70A (6 mg). Rendimiento 3 mg (50% d. t.). Los datos
analíticos indican un diastereómero.
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 2,11 min. EM (ES^{+}): m/z = 407,3 [M+H]^{+},
(ES^{-}): m/z = 405,2 [M-H]^{-}.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}, 400
MHz): \delta = 7,38-7,25 (m, 5H), 7,20 (d, J = 9,1
Hz, 1H), 5,04 y 4,98 (respectivamente d, [sistema AB], J = 12,7,
respectivamente 1H), 3,51 (m, 1H), 3,18 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 2,53
(m, 1H), 2,50 (s, 3H), 1,51 (dd, J = 3,6, 13,9 Hz, 1H),
1,34-1,23 (m, 3H), 0,92 (s, 9H), ca,0,9 (3H), 0,84
(s, 9H).
\newpage
Los ejemplos 1 a 6 se preparan según el
procedimiento general de trabajo 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
5,7 mg (4,4 \mumol) del compuesto del ejemplo
5A y 3,0 mg (6,6 \mumol) del compuesto del ejemplo 71A se
disponen en 0,5 ml de DMSO bajo argón. Se añaden 20 \mul (4,5 eq.)
de N-metilmorfolina, 2,7 mg (1,6 eq.) de HATU y
después de 15 min se añaden otra vez 20 \mul (4,5 eq.) de
N-metilmorfolina. La mezcla se agita durante la
noche a TA y luego se purifica directamente mediante HPLC
preparativa (procedimiento 7). El control de las fracciones se
realiza por EM-CL (procedimiento 17). Después de la
liofilización de las fracciones adecuadas (R_{t} = 2,02, ES
(pos): m/z = 1440 [M+H]^{+}),
el producto intermedio protegido con N-benciloxicarbonilo se hidrogena inmediatamente en 200 \mul de isopropanol con 2 mg de paladio (10% sobre carbón) bajo hidrógeno a 1 atm (101,3 kPa). Después de 4 h, la mezcla se filtra, se concentra y se purifica mediante HPLC preparativa (procedimiento 10). Se obtienen 0,5 mg (7% d. t.) del compuesto del título.
el producto intermedio protegido con N-benciloxicarbonilo se hidrogena inmediatamente en 200 \mul de isopropanol con 2 mg de paladio (10% sobre carbón) bajo hidrógeno a 1 atm (101,3 kPa). Después de 4 h, la mezcla se filtra, se concentra y se purifica mediante HPLC preparativa (procedimiento 10). Se obtienen 0,5 mg (7% d. t.) del compuesto del título.
EM-CL (procedimiento 17):
R_{t} = 1,53 min. ES^{+}: m/z = 1290,7 [M+H]^{+}, 646
[M+2H]^{2+}, ES^{-}: m/z = 1288,7
[M-H]^{-},
644 [M-2H]^{-}.
644 [M-2H]^{-}.
La actividad in vitro de los compuestos
según la invención puede mostrarse en los siguientes ensayos:
La CIM se determina en la prueba de dilución de
líquido según las normas del NCCLS. Los cultivos durante la noche
de Staphylococcus aureus 133, Entercococcus faecalis
27159, E. faecium 4147 y Streptococcus pneumoniae G9a
se incuban con las sustancias de prueba descritas en una serie de
dilución 1:2. La determinación de la CIM se realiza con un número
de células de 10^{5} gérmenes por ml en medio IsoSensitest
(empresa Difco, Irvine/EE.UU.), con excepción de S.
pneumoniae que se prueba en caldo BHI (empresa Difco,
Irvine/EE.UU.) con 10% de suero bovino a un número de células de
10^{6} gérmenes por ml. Los cultivos se incuban a 37ºC durante
18-24 horas, S. pneumoniae en
presencia de 10% de CO_{2}.
La menor concentración de sustancia en cada caso
a la que ya no se produce crecimiento bacteriano visible se define
como la CIM. Los valores de CIM se especifican en \mug/ml.
En la tabla A se reproducen datos de actividad
in vitro representativa de los compuestos según la
invención:
La idoneidad de los compuestos según la
invención para el tratamiento de infecciones bacterianas puede
mostrarse en el siguiente modelo animal:
Se cultivan células de S. aureus 133
durante la noche en caldo BHI (empresa Oxoid, Nueva York/EE.UU.).
El cultivo durante la noche se diluye 1:100 en caldo BHI fresco y se
incuba durante 3 horas. Las células que luego se encuentran en la
fase de crecimiento logarítmico se separan por centrifugación y se
lavan dos veces con solución salina fisiológica tamponada. Luego se
ajusta fotométricamente una suspensión celular en solución salina
con una extinción de 50 unidades. Después de una etapa de dilución
(1:15), esta suspensión se mezcla 1:1 con una disolución de mucina
al 10%. De esta disolución de infección se administran
intraperitonealmente 0,25 ml/20 g de ratón (correspondientemente
1x10^{6} gérmenes/ratón). La terapia se realiza
intraperitonealmente o por vía intravenosa 30 minutos después de la
infección. Para el experimento de infección se usan ratones hembra
CFW1. La supervivencia de los animales se registra durante 6
días.
La solubilidad de un compuesto se
determina según procedimientos conocidos para el experto.
Los compuestos según la invención pueden
convertirse de la siguiente manera en preparaciones
farmacéuticas:
100 mg del compuesto del ejemplo 1, 50 mg de
lactosa (monohidratada), 50 mg de almidón de maíz (nativo), 10 mg
de polivinilpirrolidona (PVP 25) (empresa BASF, Ludwigshafen,
Alemania) y 2 mg de estearato de magnesio.
Peso del comprimido 212 mg. Diámetro 8 mm, radio
de curvatura 12 mm.
La mezcla de principio activo, lactosa y almidón
se granula en agua con una disolución al 5% (m/m) de PVP. El
gránulo se mezcla después del secado con el estearato de magnesio
durante 5 min. Esta mezcla se comprime con una prensa de
comprimidos habitual (véase anteriormente la forma de los
comprimidos). Como valor de consigna para la compresión se usa una
fuerza de compresión de 15 kN.
1000 mg del compuesto del ejemplo 1, 1000 mg de
etanol (96%), 400 mg de Rhodigel (goma xantana de la empresa FMC,
Pensilvania, EE.UU.) y 99 g de agua.
Una monodosis de 100 mg del compuesto según la
invención se corresponde con 10 ml de suspensión oral.
El Rhodigel se suspende en etanol, el principio
activo se añade a la suspensión. Con agitación se realiza la
adición del agua. Hasta terminar el hinchamiento del Rhodigel se
agitan aproximadamente 6 h.
100-200 mg del compuesto del
ejemplo 1, 15 g de polietilenglicol 400 y 250 g de agua para fines
de inyección.
El compuesto del ejemplo 1 se disuelve junto con
polietilenglicol 400 en el agua con agitación. La disolución se
esteriliza por filtración (diámetro de poro 0,22 \mum) y se envasa
en condiciones asépticas en botellas de infusión esterilizadas por
calor. Éstas se cierran con tapones de infusión y tapas
rebordeadas.
Claims (10)
1. Compuesto de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- \quad
- R^{1} significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por trimetilsililo, alcoxicarbonilo, cicloalquilo C_{1}-C_{6}, fenilo sustituido con alcoxi, 2-piridilo y 3-piridilo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{8},
- \quad
- R^{2} significa hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4},
- \quad
- R^{3} significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
- \quad
- R^{4} significa hidrógeno o metilo,
o una de sus sales, de sus solvatos
o de los solvatos de sus
sales.
\newpage
2. Compuesto según la reivindicación 1,
caracterizado porque se corresponde con la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- \quad
- R^{1} significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por trimetilsililo, alcoxicarbonilo, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, fenilo sustituido con alcoxi, 2-piridilo y 3-piridilo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{8},
- \quad
- R^{2} significa hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4},
- \quad
- R^{3} significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
o una de sus sales, de sus solvatos
o de los solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Compuesto según la reivindicación 2,
caracterizado porque
- \quad
- R^{1} significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
- \quad
- R^{2} significa hidrógeno o metilo,
- \quad
- R^{3} significa alquilo C_{1}-C_{2},
- \quad
- estando alquilo C_{1}-C_{2} sustituido con un sustituyente trimetilsililo,
- \quad
- o
- \quad
- significa alquilo C_{4}-C_{6},
o una de sus sales, de sus solvatos
o de los solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Compuesto según una de las reivindicaciones 2
ó 3, caracterizado porque
- \quad
- R^{1} significa trimetilsililmetilo o 2,2-dimetilprop-1-ilo,
- \quad
- R^{2} significa hidrógeno,
- \quad
- R^{3} significa trimetilsililmetilo o 2,2-dimetilprop-1-ilo,
o una de sus sales, de sus solvatos
o de los solvatos de sus
sales.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Procedimiento para la preparación de un
compuesto de fórmula (Ia) según la reivindicación 1,
caracterizado porque un compuesto de fórmula
en la
que
R^{4} tiene el significado especificado en la
reivindicación 1,
se hace reaccionar con un compuesto de
fórmula
en la
que
R^{1}, R^{2} y R^{3} tienen el significado
especificado en la reivindicación 1, y
X^{1} significa halógeno, preferiblemente
bromo, cloro o flúor, o hidroxi.
6. Compuesto según una de las reivindicaciones 1
a 4 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
7. Uso de un compuesto según una de las
reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de un fármaco para el
tratamiento y/o la profilaxis de infecciones bacterianas.
8. Fármaco que contiene un compuesto según una
de las reivindicaciones 1 a 4 en combinación con un coadyuvante
inerte no tóxico farmacéuticamente adecuado.
9. Fármaco según la reivindicación 8 para el
tratamiento y/o la profilaxis de infecciones bacterianas.
10. Uso de una cantidad antibacterianamente
eficaz de al menos un compuesto según una de las reivindicaciones 1
a 4, de un fármaco según la reivindicación 8 ó 9 o de un fármaco
obtenido según la reivindicación 7 para combatir infecciones
bacterianas en seres humanos y animales.
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