ES2326165T3

ES2326165T3 - Metodo para la preparacion de acido salvianolico total.

Info

Publication number: ES2326165T3
Application number: ES03732181T
Authority: ES
Inventors: Feng Wei; Hongshui Yue; Dekun Li; Jiangxiao Sun; Zhengliang Ye; Xu Li
Original assignee: Tianjin Tasly Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tianjin Tasly Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-05-23
Filing date: 2003-05-21
Publication date: 2009-10-02
Anticipated expiration: 2023-05-21
Also published as: WO2003099759A1; WO2003099759A8; CN1459448A; EP1506951A4; CA2486378C; CA2486378A1; JP2005538055A; US7641922B2; AU2003242135A1; EP1506951B1; DE60326450D1; EP1506951B9; DK1506951T3; EP1506951A1; AU2003242135B2; US20050159491A1; RU2317973C2; CN1202103C; RU2004136577A; KR101004660B1

Abstract

Un método para la preparación de ácido salvianólico total que comprende los pasos de: a. extraer el Danshen con agua y acidificar el extracto y filtrarlo; b. aplicar dicho extracto del Danshen a una columna poliamida, lavar la columna con agua a condición neutra, desechar los lavados, eluir la columna de poliamida con solución acuosa débil básica y recolectar las fracciones; c. aplicar las fracciones básicas del paso (b) sobre una columna de resina de absorción microporosa de tipo estireno, después acidificar las fracciones, lavando primeramente la columna con agua a condición neutra, desechando los lavados, y eluyendo entonces la columna con alcohol degradado hidratado o anhidro; recolectando el eluyente, concentrándolo bajo presión reducida hasta que no haya alcohol, y secándolo.

Description

Método para la preparación de ácido salvianólico total.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método para extraer el ácido salvianólico total del Danshen.

Antecedentes de la invención

El Danshen, también conocido por su nombre botánico Radix Salvia Miltiorrhizae, es una de las medicinas tradicionales chinas (TCM) más comúnmente utilizadas en China. Éste está compuesto fundamentalmente de dos categorías de ingredientes químicos, a saber, los solubles en agua y los no solubles en agua. Desde principios del siglo 20, la investigación principal con respecto a estos ingredientes se ha concentrado siempre en los ingredientes no solubles representados por la tashinona, logró gran éxito después de décadas de esfuerzo. No es hasta el comienzo de la década de los 80 que, después de mucho trabajo, nuestros científicos han estudiado los ingredientes solubles en agua del Danshen, así como la primera estructura reportada de aquel que es soluble en agua, el Danshensu. Después, decenas de otros solubles en agua también se han descubierto uno tras otro con la estructura química definitiva. Subsiguientemente se ha comprobado que, de los ingredientes activos del Danshen solubles en agua, los más efectivos son los compuestos del ácido fenólico, tales como ácido salvianólico A(1), B(2), C(3), D(4), E(5), F(8), G(9), H(11), I(12),
J(13), ácido rosmarincico (6), ácido alcánico (7), ácido isosalvianóico C(10), glucósido de ácido rosmarincico (14), etc. (Lian-Niang Li, J. Chinese Pharmaceutical Sciences 1997, 6, 57-64). Desde el punto de vista farmacológico ya se ha reportado una diversidad de actividades de estos compuestos del ácido salvianólico. Por ejemplo, el ácido salvianólico A tiene efectos protectores significativos sobre la célula del músculo cardiaco causado por reperfusión isquémica (I/R), y el ácido fenólico total tiene un fuerte efecto antiarrítmico inducido por I/R; el ácido salvianólico A, B y el ácido fenólico total han demostrado marcados efectos protectores contra daño cerebral causado por I/R en ratas al disminuir el contenido de MDA en tejidos cerebrales; hay muchos efectos más del ácido salvianólico como sigue: efectos anti-trombos, efectos protectores sobre hígado y riñón, antioxidante y de inhibición super oxidante lípida, así como limpieza de anión superoxidante y radicales libres, etc. (Du Guanhua et al, Basic medical science and clinics, 2000, 20 (5): 10-14).

En la actualidad, se ha reportado un gran número de procesos de extracción del ácido salvianólico, pero en su mayoría se han enfocado principalmente en el paso de la columna de resina después de extracción por agua. Takashi Tanaka et al reveló el método de extracción del salvianolato (Chemical Pharmaceutical Bulletin, 1989, 37 (2), 340-344). Además, también hay muchos otros científicos que han adoptado métodos similares para la extracción de compuestos fenólicos a partir del Danshen, tales como Koji Hase et al (Planta Medica, 1997, 63, 22\sim26), Xu Yaming et al (China patent CN1247855A, publicado en marzo, 2000), Liu Ping et al (Patente China CN1270809A, publicado en octubre, 2000), y Li Lianniang (Solicitud de Patente China No. 0 114 228,2, presentada en septiembre, 2001). Pero todos los procesos antes mencionados para la extracción tienen un problema común en la industrialización, esto es la necesidad de concentrar una gran cantidad de agua. Debido a la inestabilidad, la temperatura de concentración de la decocción total en agua de ácido salvianólico debe estar variando entre 50ºC y 60ºC, lo que en correspondencia resultará tanto en dificultades técnicas como de elevación en el costo. Mientras tanto, el proceso demorado de calentamiento, aunque entre 50ºC y 60ºC, también producirá una serie de serios problemas incluyendo inestabilidad y por tanto afectará su calidad y efecto curativo. Finalmente, todos estos problemas hacen casi imposible su industrialización. Otra desventaja de estos procesos ya existentes es que la baja productividad, generalmente entre el 2% y el 3%, limita su aplicación en la industria.

Resumen de la invención

En correspondencia, un objetivo de la presente invención, es, obviando los inconvenientes de la técnica anterior, el de brindar un método para la preparación de ácido fenólico total a partir del Danshen con alta productividad, bajo costo, buena calidad y de conveniente aplicación en la industria. Por tanto, la presente invención brinda un método para la preparación de ácido salvianólico total en correspondencia con la Reivindicación 1 anexa.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

La presente invención de preparación de ácido fenólico total consiste en los siguientes pasos, a saber la decocción del Danshen con agua caliente; la separación de la decocción con columna de poliamida y resina de absorción macroporosa.

El ácido fenólico total puede obtenerse mediante el siguiente esquema:

(a): Después de la eliminación de las impurezas, el Danshen se corta en pequeñas secciones o se pulveriza hasta polvo crudo, y se somete a decocción con agua caliente. La decocción se filtra después de ajustar su valor de pH a acidez.

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(b): Se aplica dicha decocción a una columna poliamida y se lava la columna con agua a condición neutra. Se eluye la columna con solución acuosa básica débil y se recolecta el eluyente.

(c): Se aplica el eluyente a la columna de resina macroporosa de absorción, después de acidificar el eluyente básico del paso b). Al principio, lavando la columna con agua a condición neutra, y eluyendo entonces la columna con alcohol degradado hidratado o anhidro. Después se recolecta el eluyente.

(d): Se concentra el eluyente bajo presión reducida hasta que no hay etanol, y se seca para obtener el ácido salvianólico total.

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En el paso (a), el Danshen se extrae con agua caliente de 2 a 4 veces, 0,5 a 2 h cada una, y la temperatura de extracción es de 60ºC a 100ºC, preferiblemente de 90 a 100ºC; a continuación se trata la solución en extracto después de cada proceso de extracción, sola o combinada, preferiblemente combinada; el valor del pH se ajusta con ácido a menos de 4, preferiblemente por debajo de 2.

En el paso b), la concentración de solución débil básica acuosa es preferiblemente de 0,01% a 2%, de mayor preferencia de 0,08% a 0,5%, y los materiales comunes de poliamida utilizados son por ejemplo, policaprolactamo (nailon-6).

En el paso c), la resina común macroporosa absorbente utilizada, por ejemplo es resina absorbente tipo estireno; el valor de pH de las fracciones débiles básicas se ajusta mediante ácido por debajo de 4, preferiblemente por debajo de 2; el número de átomos de carbono en rangos degradados de alcohol de 1 a 5, por ejemplo, el metanol, el etanol, etc.: la concentración de elusión es del 40% al 95%, preferiblemente del 60% al 95%. Sin embargo, en vista a la seguridad en la producción industrial a gran escala, la disminución del costo y simplificación del proceso, la elusión del etanol al 95% es la mejor opción para alcanzar un objetivo satisfactorio.

En el paso d) de ser necesario, dicho concentrado se seca, tal como mediante liofilización, después de ser filtrado con membrana microporosa de filtro.

El ácido fenólico total producido mediante el método de esta invención puede formularse en cualquier tipo de forma de dosificación aceptable en términos farmacéuticos, y puede combinarse también con otros medicamentos o ingredientes activos.

En comparación con técnicas anteriores, esta invención tiene las siguientes ventajas:

1.: Facilidad de industrialización. En la técnica anterior, es necesario concentrar una gran cantidad de agua durante el proceso, resultando en dificultades en la industrialización. Tal defecto se supera en la presente invención, en la que, sin calentamiento y descompresión, se elimina de manera sorprendente una gran cantidad de agua. Consecuentemente, los procesos y condiciones se optimizan sin consumo de energía y contaminación ambiental. Así, con las ventajas con respecto a técnicas de protección ambiental, es fácil llevar a cabo la industrialización.

2.: Reducción de pérdida en los ingredientes activos. La presente invención puede evitar efectivamente una pérdida de ingredientes activos causada por la precipitación con alcohol en técnicas anteriores, y también prevenir la inestabilidad del ácido fenólico total en la concentración de una gran cantidad de agua. Todo lo anterior de hecho evitaría las pérdidas y descomposición de los ingredientes activos durante el proceso, para asegurar la estabilidad del producto final.

3.: Alta productividad. La productividad de los productos producidos en la técnica anterior (i. e. el polvo seco de ácido fenólico total) es solo del 2%-3% por peso basado en la medicina herbal en bruto; mientras que en el uso del método de la presente invención, la productividad es más del 4%, aparentemente mejor que la de la técnica anterior. Es más, el contenido de ácido fenólico total en el producto final de alta calidad es de más del 80% con menos impureza.

4.: Costo menor. En el método de la presente invención, puede concentrarse y eliminarse una gran cantidad de agua sin calentamiento ni descompresión, reduciendo efectivamente el consumo de energía y el costo. Adicionalmente, la productividad del ácido fenólico total mediante esta invención es mayor, y aún más su contenido en el producto final es cercano o superior al de la técnica anterior, esto es, pueden producirse más productos con una calidad igual o mejor a partir de la misma cantidad de medicina herbal en bruto. El costo menor también beneficiará en gran medida, no solo en la industrialización, sino también en los intereses económicos del paciente, trayendo en correspondencia un gran beneficio social.

5.: Los estudios en animales también muestran los buenos efectos del ácido fenólico total producido mediante el método de la presente invención.

Efecto protector del ácido fenólico total contra isquemia de arteria cerebral en ratas 1. Materiales y métodos

1): Animales: ratas macho Wister, que pesan de 200 a 220 g (Certificado No. SCXK (Beijing) 2002-2003), obtenidas del Centro Animal de la Universidad Médica de Beijing.

2): Reagentes: hidrato de cloral comprado a fábrica de reagentes Shenyang, Liaoning, China, número de lote 920 401. Tetrazolina roja (TTC) de la planta química de Beijing, número de lote 810 911.

3): Aparato: Cuchillo eléctrico de alta frecuencia comprado a la fábrica de aparatos médicos electrónicos de Beijing. El microscopio de operación SXP-1B comprado a la fábrica de instrumentos médicos ópticos de Shangai.

4): Agentes a examinar: el ácido fenólico total producido por el Tianjin Tasly Modern Institute TCM según el método de la presente invención; y el ácido salvianólico total producido por el Institute of Materia Medica de la Academia China de Ciencias Médicas según el método de la solicitud china de patente No. 01 142 288,2 presentada en septiembre del 2001. Inyección Xiangdan, como medicamento de control, comprada a Ya, an Sanjui Pharmaceutical Co. Ltd., siendo el número de lote 010 901.

5): Método de formulación de los agentes examinados y ruta de administración: el ácido fenólico total y la inyección de Xiangdan se diluyen a la concentración deseada con suero fisiológico salino esterilizado, 10 mg/kg y 20 mg/kg para el ácido fenólico total, y 1 ml/kg (igual a 1 g/kg) para la inyección Xiangdang. Por vena sublingual, ambos tipos de medicamentos se administran 30 minutos después de la isquemia.

6): Grupos: todas las ratas se dividen de manera aleatoria en los siguientes grupos: grupo ficticio de control operacional, grupo isquémico de control, ácido fenólico total (Institute of Materia Medica) grupos de 10 mg/kg y 20 mg/km, ácido fenólico total (Tasly) grupos de 10 mg/kg y 20 mg/kg.

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2. Método

1): Bloqueo de la arteria cerebral (coagulación eléctrica) isquemia en ratas: se anestesian las ratas mediante inyección intraperitoneal de aldehído tricloroacético, 350 mg/kg de peso corporal, y se fijan a un tablero en una posición lateral izquierda. Bajo el microscopio de operación, se hace una incisión en la piel abierta vía la línea media entre el meatus y el canthus auditivo externo. Se exponen los ortopédicos zigomáticos y se retiran totalmente con rongeur ortopédico. Se arranca la fascia a lo largo del cráneo y se expone la fossa tempora. Entre los ortopédicos escamosos se proyecta delicadamente la mandíbula con retractor y en el fondo del cráneo se abre la ventana craneana para descubrir la arteria cerebral media. La arteria media se consume con el cuchillo eléctrico de alta frecuencia para bloquear el flujo de sangre, formando un modelo de isquemia cerebral local. Después de 30 minutos, a las ratas se les administra a través de la vena sublingual y se devuelven a su jaula para alimentarlas. La temperatura de la habitación se mantiene rigurosamente entre 24ºC y 25ºC.

2): La medición del volumen del infarto cerebral: 24 horas después del bloqueo de la arteria cerebral media, se decapitan las ratas y se extraen sus cerebros. Se mantiene el cerebro completo a 4ºC en una probeta llena con solución salina normal en un refrigerador durante 10 minutos, y entonces se retira el bulbo olfativo, el cerebelo y el tallo cerebral inferior. A lo largo del plano de la corona, el cerebro se corta en 5 rebanadas y se coloca en 5 ml de soluciones de tintura que contienen 1,5 ml de TTC al 4% y 0,1 ml de 1 mol/L de fosfato di-potasio hidrogenado, ligero incubado en baño de agua a 37ºC durante 30 minutos. Las rebanadas del cerebro se extraen y se colocan dentro de formalina al 10% para solidificación. Como resultado, el tejido cerebral normal es rosado, y el isquémico es blanco. Se utiliza la planimetría por peso para medir el área de infarto, y luego se calcula el porcentaje del área de infarto respecto al hemisferio cerebral total.

3): La medición del contenido de agua en el cerebro: 24 horas después del bloqueo de la arteria cerebral media, se ejecutan las ratas, y se extrae la totalidad del cerebro delicadamente. Después de esto se retira el bulbo olfativo, el cerebelo y el tallo cerebral inferior, se pesa el cerebro (referido como peso mojado cerebral). Después de esto, se seca el cerebro en un horno a 105ºC hasta que el peso sea constante (alrededor de 48 horas) y se pesa de nuevo (referido como peso seco cerebral). El contenido final de agua en el cerebro se calcula con la fórmula siguiente:

El contenido de agua en el cerebro = (el peso cerebral mojado - el peso cerebral seco) / el peso cerebral mojado x 100%

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3. Resultado

Efecto protector del ácido fenólico total contra la isquemia de coagulación de la arteria cerebral media en ratas.

1

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4. Conclusión

Al utilizar el método de coagulación en la arteria media cerebral para provocar isquemia cerebral en ratas, se ha observado el efecto protector del ácido fenólico total producido respectivamente por el Tasly y el Institute of Materia Medica sobre la isquemia de la arteria cerebral. El resultado reveló que, 30 minutos después de administración en vena, 10 mg/kg y 20 mg/kg de ambas clases de ácidos fenólicos podían aliviar de forma marcada el edema cerebral y el infarto cerebral causado por la isquemia. Es más, las dichas dos clases de ácidos fenólicos tuvieron el mismo efecto administradas en la misma dosificación. Todos los estudios anteriores han demostrado que los dos ácidos fenólicos tuvieron el mismo efecto anti isquémico cerebral.

El ácido fenólico total obtenido en correspondencia con esta invención, puede formularse en formas de dosificación aceptables en términos farmacéuticos, incluyendo tabletas, cápsulas, gránulos, líquido oral, formulación a liberación sostenida, formulación a liberación controlada, gel, ungüento, pomada, crema, supositorio, inyección, polvo, parche, pastilla por goteo y suspensión.

El ácido fenólico total puede utilizarse para el tratamiento de enfermedades, incluyendo enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares, nefrosis, hepatopatía, neumonía, enfermedad neumocardiaca, pancreatitis, diabetes mellitus, síndrome cervical, enfermedad vascular del fondo ocular, enfermedad neurológica del fondo ocular, migraña, gastritis crónica, mareos, enfermedades ortopédicas, mal de montaña y demencia senil.

Realizaciones

Los siguientes ejemplos se ofrecen a manera de ilustración solamente y no tienen el propósito de limitar el alcance de la presente invención en forma alguna.

Ejemplo comparativo

Se prepara el ácido fenólico total en correspondencia con la Solicitud China de Patente No. 01 142 288,2, presentada en septiembre del 2001.

Se trituran 5 Kg. de hierba de Danshen hasta reducirla a polvo en bruto y se extraen a 100ºC por tres veces con adición de agua desionizada, específicamente, extraídos durante una hora con adición de 30 L de agua la primera vez, y extraídos durante 0,5 horas con adición de 15 L la segunda y tercera vez respectivamente. Se concentra el extracto a 5 L a 50ºC bajo presión reducida y se enfría. Se añaden al concentrado 14 L de etanol al 95%. La mezcla se deja reposar durante la noche y se filtra. Bajo presión reducida, se recupera el etanol a 50ºC. El concentrado obtenido se aplica con resina macroporosa de absorción RA (que contiene principalmente estireno y crisofenina, y el peso de la resina seca es de 2 kg.) Se lava la resina con agua desionizada hasta que el eluyente no tenga reacción aparente \alpha-naftol y entonces se eluye con etanol al 50% hasta que el eluyente no tenga reacción hidroxilo fenólica obvia añadiendo ferro sesquicloruro de ferricianida de potasio. Las fracciones se concentran a 50ºC bajo presión reducida. La mezcla se deja reposar durante la noche en un refrigerador, y se filtra para producir el extracto de ácido salvianólico total. El pH de dicho extracto se ajusta a 6,5 con hidróxido de sodio al 2% y el extracto se seca por congelación para producir 114 g de ácido fenólico total. La productividad del producto final en medicamento en bruto es del 2,3%. El análisis mostró que el contenido de ácido fenólico total en el producto final ascendía al 83,72% y que el ácido salvianólico B estaba en proporción del 54,41%.

Se analiza el ácido salvianólico total y el ácido salvianólico B en correspondencia con el método de la Solicitud China de Patente No. 01 142 288,3 presentada en septiembre del 2001.

1): ácido salvianólico B: analizado con HPLC a 288 nm. El ácido salvianólico B CRS lo produce el Modern Institute TCM del Grupo Tianjin Tasly con pureza del 98,0%.

2): Ácido salvianólico total: contenido = F(A-B) + B

en el que, A es el contenido de ácido salvianólico total calculado con el ácido salvianólico B CRS mediante espectrometría ultravioleta;

B es el contenido de ácido salvianólico B por HPLC;

F es el factor de corrección 0,626.

Ejemplo 1

Se trituran 5 kg de hierba de Danshen hasta reducirla a polvo en bruto, y se extraen a 100ºC al estado de hervor ligero por tres veces con agua desionizada, específicamente, extraídos durante 1 hora con adición de agua (x 5,5 veces) durante la primera vez, y extraídos con adición de agua (x 3 veces) durante 0,5 horas la segunda y tercera vez respectivamente. El extracto se combina, y el pH de éste se ajusta a 2,0 con 10% de ácido hidroclórico. Se filtra el extracto, y el filtrado se carga en columna de poliamida (la cantidad de la resina seca es dos tercios la de la hierba en bruto). La columna se lava con agua desionizada (x 5 veces) y se descarta el lavado. Entonces se eluye la columna con 5 volúmenes de columna de la solución acuosa al 0,1% de bicarbonato de sodio. La fracción se recolecta, se ajusta el pH a 2,0 con 10% de ácido hidroclórico y se carga en columna de resina macroporosa D_{10}. La columna se lava con agua desionizada a condición neutra y se descarta el lavado. Entonces se eluye la columna con etanol al 95%, y se recolecta el cinturón coloreado cuando se éste se eluye. Las fracciones se concentran bajo presión reducida a secado total. El concentrado anterior se disuelve con agua. La mezcla se deja reposar durante la noche en el refrigerador, y se filtra con membrana microporosa de celulosa mezclada de 03 \mum, para producir la solución de extracción del ácido salvianólico total. Inmediatamente después este ácido fenólico total se ajusta con hidróxido de sodio al 2% a pH 6,0, se seca por congelación para producir 221 g de polvos de ácido salvianólico total secados por congelación. La productividad del producto final es del 4,4% basada en la cantidad de hierba en bruto. El análisis en correspondencia con el método de la Solicitud China de Patente No. 01 142 288,2 presentada en septiembre del 2001 muestra que, el ácido fenólico total asciende al 83,94% y el ácido salvianólico B es del 53,73% en el producto final.

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Ejemplo 2

Se trituran 5 kg de hierba de Danshen hasta reducirla a polvo en bruto, y se extraen a 80ºC por tres veces con agua desionizada, específicamente, extraídos durante 2 horas con adición de agua (x 5,5 veces) durante la primera vez, y extraídos con adición agua (x 3 veces) durante 1 hora la segunda y tercera vez respectivamente. Los extractos se combinan, y el pH de estos se ajusta a 1,0 con 5% de ácido sulfúrico. Se filtra el extracto, y el filtrado se carga en columna de poliamida (la cantidad de resina seca es dos tercios la de la hierba en bruto). La columna se lava con agua desionizada (x 5 veces) y se descarta el lavado. Entonces se eluye la columna con 4 volúmenes de columna de la solución acuosa al 0,2% de bicarbonato de sodio. Las fracciones se recolectan, se ajusta el pH a 1,0 con 5% de ácido sulfúrico y se carga en columna de resina macroporosa de absorción AB-8. La columna se lava con agua desionizada a condición neutra y se descarta el lavado. Entonces se eluye la columna con etanol al 60%, y se recolecta el cinturón coloreado cuando se éste se eluye. Las fracciones se concentran bajo presión reducida hasta que no tengan olor a etanol. La mezcla se deja reposar durante la noche en el refrigerador, y se filtra con membrana microporosa de celulosa mezclada de 03 \mum, para producir la solución de extracción del ácido salvianólico total. Inmediatamente después este ácido fenólico total se ajusta con hidróxido de sodio al 2% a pH 6,0, se seca por congelación para producir 227 g de polvos de ácido salvianólico total secados por congelación. La productividad del producto final es del 4,5% basada en la cantidad de hierba en bruto. El análisis en correspondencia con el método de la Solicitud China de Patente No. 01 142 288,2 presentada en septiembre del 2001 muestra que, el ácido fenólico total asciende al 83,15% y el ácido salvianólico B es del 54,03% en el producto final.

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Ejemplo 3

Se trituran 5 kg de hierba de Danshen hasta reducirla a polvo en bruto, y se extraen a 100ºC al estado de hervor ligero por tres veces con agua desionizada, específicamente, extraídos durante 1 hora con adición de agua (x 5,5 veces) durante la primera vez, y extraídos con adición de agua (x 3 veces) durante 0,5 horas la segunda y tercera vez respectivamente. El extracto se combina, y el pH de éste se ajusta a 2,0 con 10% de ácido hidroclórico. Se filtra el extracto, y el filtrado se carga en columna de poliamida (la cantidad de resina seca es dos tercios la de la hierba en bruto). La columna se lava con agua desionizada (x 5 veces) y se descarta el lavado. Entonces se eluye la columna con 5 volúmenes de columna de la solución acuosa al 0,1% de bicarbonato de sodio. La fracciones se recolectan, se ajusta el pH a 2,0 con 10% de ácido hidroclórico y se carga en columna RA de resina macroporosa. La columna se lava con agua desionizada a condición neutra y se descarta el lavado. Entonces se eluye la columna con metanol al 60%, y se recolecta el cinturón coloreado cuando éste se eluye. Las fracciones se concentran bajo presión reducida hasta que no tengan olor a etanol. La mezcla se deja reposar durante la noche en el refrigerador, y se filtra con membrana microporosa de celulosa mezclada de 03 \mum, para producir la solución de extracción del ácido salvianólico total. Inmediatamente después este ácido fenólico total se ajusta con hidróxido de sodio al 2% a pH 6,0, se seca por congelación para producir 224 g de polvos de ácido salvianólico total secados por congelación. La productividad del producto final es del 4,5% basada en la cantidad de hierba en bruto. El análisis en correspondencia con el método de la Solicitud China de Patente No. 01 142 288,2 presentada en septiembre del 2001 muestra que, el ácido fenólico total asciende al 84,02% y el ácido salvianólico B es del 54,17% en el producto final.

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Ejemplo 4

Fórmula de cápsula de ácido salvianólico total

Ácido salvianólico total: 240 g

Celulosa microcristalina: 40 g

Polvo de talco: 1,4%

Solución al 3% de etanol de polividona: apropiada

Se producen 1 000 cápsulas

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Se mezclan totalmente el ácido salvianólico total y la celulosa microcristalina. Se añade a la mezcla solución al 3% de etanol de polividona para conformar una masa suave. Esta se cierne a través de un tamiz malla calibre 18 para aportar gránulos, y se seca a 60ºC durante 30 a 45 min. Entonces, se añade polvo de talco, y la mezcla se revuelve y se deposita en la concha de la cápsula no. 1 para producir cápsulas cada una de las cuales contiene 240 mg.

Ejemplo 5

Fórmula de tableta de ácido salvianólico total

Ácido salvianólico total: 240 g

Celulosa microcristalina: 40 g

Polvo de talco: 1,4%

Solución al 3% de etanol de polividona: apropiada

Se producen 1 000 tabletas

Se mezclan totalmente el ácido salvianólico total y la celulosa microcristalina. Se añade a la mezcla solución al 3% de etanol de polividona para conformar una masa suave. Esta se cierne a través de un tamiz malla calibre 18 para aportar gránulos, y se seca a 60ºC durante 30 a 45 min. Entonces, se añade polvo de talco, y la mezcla se revuelve y se le da forma de tabletas.

Ejemplo 6

Fórmula de gránulos de ácido salvianólico total

Ácido salvianólico total: 240 g

Celulosa microcristalina: 40 g

Polvo de talco: 1,4%

Solución al 3% de etanol de polividona: apropiada

Se producen 500 almohadillas

Se mezclan totalmente el ácido salvianólico total y la celulosa microcristalina. Se añade a la mezcla solución al 3% de etanol de polividona para conformar una masa suave. Esta se cierne a través de un tamiz malla calibre 18 para aportar gránulos, y se seca a 60ºC durante 30 a 45 min. y se rellena en almohadillas.

Ejemplo 7

Fórmula de polvo de ácido salvianólico total para inyección

Ácido salvianólico total: 100 g

Manita: 30 g

Antalina: 5 g

Agua destilada: 5 ml

Los ingredientes anteriores se mezclan bien, liofilizan y se rellenan en 1000 frascos.

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Referencias citadas en la descripción

Este listado de referencias citadas por el solicitante es únicamente para conveniencia del lector. Este no forma parte del documento de la patente europea. Aunque se ha tomado especial cuidado en la compilación de las referencias, no pueden excluirse errores u omisiones y la OEP no reconoce reclamaciones o responsabilidad en este sentido.

Documentos de patentes citados en la descripción

\bullet CN 1247855 A

\bullet CN 1270809 A

\bullet CN 0114228

\bullet CN 01142288

Literatura no referida a patentes citada en la descripción

\bulletLIAN-NIANG LI, J. Chinese Pharmaceutical Sciences, 1997, vol. 6, 57-64

\bullet DU GUANHUA et al. Basic medical science and clinics, 2000, vol. 20 (5), 10-14

\bulletChemical Pharmaceutical Bulletin, 1989, vol. 37 (2), 340-344

\bulletKOJI HASE et al. Planta Medica, 1997, vol. 63, 22-26

Claims

1. Un método para la preparación de ácido salvianólico total que comprende los pasos de:

a.: extraer el Danshen con agua y acidificar el extracto y filtrarlo;

b.: aplicar dicho extracto del Danshen a una columna poliamida, lavar la columna con agua a condición neutra, desechar los lavados, eluir la columna de poliamida con solución acuosa débil básica y recolectar las fracciones;

c.: aplicar las fracciones básicas del paso (b) sobre una columna de resina de absorción microporosa de tipo estireno, después acidificar las fracciones, lavando primeramente la columna con agua a condición neutra, desechando los lavados, y eluyendo entonces la columna con alcohol degradado hidratado o anhidro; recolectando el eluyente, concentrándolo bajo presión reducida hasta que no haya alcohol, y secándolo.

2. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que la extracción mediante calor en el paso (a) mediante agua se repite de 2-4 veces y durante 0,5\sim2 h cada vez.

3. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que la temperatura de dicho paso de extracción (a) mediante agua es a temperatura de 60\sim100ºC.

4. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que la temperatura de dicho paso de extracción (a) mediante agua es a temperatura de 90\sim100ºC.

5. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que dicho extracto del paso (a) se ajusta con un ácido a un valor de pH inferior a 4, y las fracciones básicas del paso (c) se acidifican con un ácido a un valor de pH inferior a 4.

6. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que dicho extracto del paso (a) se acidifica con un ácido a un valor de pH inferior a 2, y las fracciones básicas del paso (c) se acidifican con ácido hidroclórico o ácido sulfúrico a un valor de pH inferior a 2.

7. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que en el paso (b) se utiliza como eluyente una solución débil básica acuosa del 0,01\sim2%.

8. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que en el paso (b) se utiliza como eluyente una solución acuosa de carbonato de sodio hidrogenado del 0,08\sim0,5%.

9. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que se utiliza como eluyente en el paso (c) el alcohol degradado hidratado o anhidro C_{1}\simC_{3}.

10. El método tal como se describe en la reivindicación 1, en el que en el paso (c) la columna se eluye con etanol acuoso con una concentración del 40\sim95%.

11. El método tal como se reivindica en la reivindicación 9 o la 10, en el que la concentración del alcohol degradado C_{1}\simC_{5} o el etanol acuoso es del 60\sim95%.

12. El método tal como se reivindica en la reivindicación 10, en el que la concentración del etanol acuoso es del 95%.