ES2330079T3 - Direccionamiento de farmaco mediado par la integrina. - Google Patents
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Abstract
Conjugado caracterizado por la fórmula general (I) CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp-IA (I) en la que CT denota un radical citotóxico o un radical de un citostático o de un derivado citostático, que adicionalmente puede llevar un grupo hidroxilo, carboxilo o amino, AA1 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', AA2 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', AA3 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', A4 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', en la que Sp'' es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono, Sp está ausente, es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono o es un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo, con la condición de que al menos uno de los radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente, IA es un radical no peptídico que se dirige a un receptor de la integrina v3, que es un radical de la fórmula (III) **(Ver fórmula)** en la que R10 es -SO2R100 , -COOR1000 , -COR100 , -CONR100 o -CS-NR100 , o representa un enlace directo a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado; R100 independientemente de cualquier otro es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado; R1000 es un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado; R11 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir o un radical arilo sustituido o sin sustituir, R16 es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno; R17 es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno; R12 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido X'' es N, O o S; R13 está ausente, es -H, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, -NO2, -CN, -COR130 , -COOR130 . R130 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales; R14 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido R15 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido; y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente aceptables.
Description
Direccionamiento de fármaco mediado por la
integrina.
El modelo de lectina marcada sobre la superficie
de células tumorales (Gabius; Onkologie 12, (1989), 175) abre la
posibilidad fundamental de dirigir específicamente éstas sobre
células tumorales mediante la unión de unidades de carbohidratos
apropiadas a citostáticos. Esta expectativa está restringida al
hecho de que, incluso en otros tejidos, en particular en el hígado,
se producen lectinas que tienen especificidades por carbohidratos
similares (galactosa, lactosa, manosa,
N-acetilglucosamina, fucosa, etc.) (Ashwell y col.,
Annu. Rev. Biochem. 46 (1982), 531; Stahl y col. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 74 (1977), 1521; Hill y col., J. Biol. Chem. 262 (1986),
7433; Jansen y col., J. Biol. Chem. 266 (1991), 3343). Por
consiguiente, se debe esperar una concentración elevada de
glicoconjugados que contienen el compuesto activo en el hígado y en
otros órganos ricos en lectina si, en esta aproximación, se usan
carbohidratos sin una modificación particular que establezca una
selectividad para el tejido tumoral.
La amina heterocíclica batracilina (1) muestra
una buena acción antitumoral en diversos modelos de cáncer de
estómago (documento US-4 757 072).
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Los conjugados peptídicos de (1) que tienen una
buena actividad in vitro y propiedades de solubilidad más
favorables (documento US-4 180 343) se toleran peor
que la batracilina libre en experimentos con animales. Los
conjugados de fucosa de la batracilina (1) descritos en el documento
EP-A-0 501 250 se concentran muy
intensamente de manera desventajosa en el hígado.
La quinolona-a (2), ácido
7-[(3a-R,S, 4-R,S,
7a-S,R)-4-amino-1,3,3a,4,7,7a-hexahidro-iso-indol-2-il]-8-cloro-1-ciclopropil-6-fluoro-1,4-dihidro-4-oxo-3-quinolincarboxílico,
también presenta, además de su extraordinaria actividad
antibacteriana, una muy buena actividad contra diversas líneas
celulares tumorales (documentos
EP-A-0 520 240, JP-4
253 973). No obstante, se enfrenta a problemas toxicológicos
considerables (por ejemplo, genotoxicidad, toxicidad de médula ósea,
toxicidad muy acusada in vivo, etc.).
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La 20(S)-camptotecina es
un alcaloide pentacíclico que fue aislado en 1966 por Wall y col.
(J. Am. Chem. Soc. 88, 3888 (1966)). Tiene un potencial antitumoral
muy activo en numerosas pruebas in vitro e in vivo.
Sin embargo, desafortunadamente, la materialización del potencial
prometedor en la fase de investigación clínica falló debido a
problemas de toxicidad y solubilidad.
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Abriendo el anillo E de la lactona y con la
formación de la sal sódica, se obtuvo un compuesto soluble en agua
que se encuentra en un equilibrio con la forma anular cerrada que
depende del pH. Aquí también, los estudios clínicos no han dado
ningún fruto todavía.
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Unos 20 años más tarde, se encontró que la
actividad biológica se debe atribuir a la inhibición enzimática de
la topoisomerasa I. Desde entonces, las investigaciones han
aumentado de nuevo en la búsqueda de un derivado de camptotecina
que sea más tolerable y que sea activo in vivo.
Para mejorar la solubilidad en agua, se han
descrito sales de los derivados de camptotecina modificados en el
anillo A y en el anillo B y de los derivados de
20-O-acilo con grupos ionizables
(Vishnuvajjala y col., documento US 4 943 579). Este último
concepto de profármaco también se transfirió a derivados de
camptotecina modificados (Wani y col., documento WO 9602546). No
obstante, los profármacos de
20-O-acilo descritos, tienen una
semi-vida in vivo muy corta y se escinden muy
rápidamente para dar la estructura parental.
El documento WO 96/31532 describe citostáticos
modificados con carbohidratos en los que se consigue tanto la
estabilidad sérica y la liberación del citostático dentro de las
células tumorales como una concentración específica del citostático
en el tejido tumoral mediante una nueva unión de carbohidratos
modificados selectivamente a citostáticos (por ejemplo,
batracilina, quinolona-a, camptotecina) a través de
grupos espaciadores y enlazadores preferidos.
Las integrinas son proteínas transmembrana
heterodiméricas encontradas en la superficie de las células, que
desempeñan un papel importante en la adhesión de las células a una
matriz extracelular. Reconocen glicoproteínas extracelulares tales
como la fibronectina o la vitronectina sobre la matriz extracelular
a través de la secuencia RGD que se encuentra en estas proteínas
(RGD es el código de una sola letra para la secuencia de aminoácidos
arginina-glicina-aspartato).
En general, las integrinas tales como, por
ejemplo, el receptor de vitronectina, que también se denomina
receptor \alpha_{v}\beta_{3}, o alternativamente receptor
\alpha_{v}\beta_{5} o receptor GpIIb/IIIa desempeñan un
papel importante en procesos biológicos tales como la migración
celular, la angiogénesis y la adhesión a la matriz celular y, por
tanto, en enfermedades en las que estos procesos son etapas
cruciales. A modo de ejemplo se pueden mencionar el cáncer, la
osteoporosis, arterioesclerosis, restenosis y oftalmia.
El receptor \alpha_{v}\beta_{3} se
encuentra, por ejemplo, en grandes cantidades en células
endoteliales en crecimiento y hace posible su adhesión a una matriz
extracelular. El receptor \alpha_{v}\beta_{3} desempeña así
un papel importante en la angiogénesis, es decir, la formación de
nuevos vasos sanguíneos, que es requisito previo crucial para el
crecimiento tumoral y la formación de metástasis en trastornos
carcinomatosos.
Ha sido posible demostrar que el bloqueo de los
receptores anteriormente mencionados es un punto de partida
importante para el tratamiento de trastornos de este tipo. Si se
suprime la adhesión de las células endoteliales en crecimiento a la
matriz extracelular bloqueando sus receptores integrina
correspondientes, por ejemplo, mediante un péptido cíclico o un
anticuerpo monoclonal, las células endoteliales mueren. Por tanto no
se produce la angiogénesis, que da lugar a la detención o la
regresión del crecimiento tumoral (cf., por ejemplo, Brooks y col.,
Cell, Volumen 79, 1157-1164, 1994).
Además, las propiedades invasivas de las células
tumorales y, así, su capacidad para formar metástasis se reduce
drásticamente cuando su receptor \alpha_{v}\beta_{3} se
bloquea con un anticuerpo (Brooks y col., J. Clin. Invest., Volumen
96, 1815, 1995).
El documento WO 98/10795 describe conjugados en
los que una molécula que se añade a tumores se une a una unidad
funcional tal como, por ejemplo, un citostático o un marcador
detectable tal como, por ejemplo, un núclido radiactivo. Entre
otros, se describen antagonistas de integrinas tales como, por
ejemplo, péptidos que tienen la secuencia RGD descritos
anteriormente como moléculas que se añaden a tumores. La
doxorubicina se describe como un ejemplo de citostático que está
unido a una molécula de este tipo que se dirige a tumores.
En el caso de los compuestos del documento WO
98/10795, la unión se lleva a cabo de manera que la molécula que se
dirige a un tumor y la unidad funcional están directamente unidas
entre sí con la retención de sus respectivas propiedades (cf., por
ejemplo, p. 56, 1. 17, a p. 58, 1. 10, y Ej. 6). Esto tiene el
resultado de que estos compuestos están en efecto selectivamente
concentrados en las inmediaciones próximas de las células tumorales
por la unión de la entidad que se dirige al tumor (en el caso de un
radical que tiene una actividad antagonista de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} mediante la unión al receptor de la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} que, en particular, se
expresa en células endoteliales recién formadas mediante
angiogénesis), pero a causa de la combinación directa, la unidad
funcional tal como por ejemplo un citostático, no se puede liberar
al espacio intracelular del tejido tumoral.
Fundamentalmente, el conjugado que por una parte
está selectivamente concentrado en el tejido tumoral por el efecto
de una parte que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}
encontrados en el conjugado, pero por otra parte comprende un
citostático que se puede liberar del conjugado, debe tener un
efecto toxofórico incrementado sobre el tejido tumoral debido a la
posibilidad de una acción más directa del citostático sobre las
células tumorales comparado con los conjugados descritos en el
documento WO 98/10795.
Por tanto, era el objeto de la presente
invención desarrollar conjugados que comprendan un resto que se
dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}
o \alpha_{v}\beta_{5} y un citostático que se pueda liberar
del conjugado, en el que el resto en el conjugado que se dirige a
los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5} retiene su capacidad para unirse al
receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5}.
El objeto anterior se consigue mediante
conjugados que comprenden un resto no peptídico que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5}, un citostático y una unidad de unión
que es enzimática o hidrolíticamente escindible con la liberación
del citostático. Los conjugados que tienen un resto no peptídico
que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} son
particularmente preferidos en el presente documento.
En principio, los conjugados que contienen el
medicamento son compuestos complejos y difíciles de preparar, como
se explica, por ejemplo, en Anti-Cancer Drug Design
10 (1995), 1-9, en particular p. 1. En este
artículo, se describen conjugados del metotrexato citostático, un
espaciador oligopeptídico y una proteína (seroalbúmina humana). No
obstante, también se apunta (cf. p. 7, primer párrafo) que la
naturaleza de esta unidad de unión y el tipo de unión al toxóforo y
el vehículo (por ejemplo, un anticuerpo) puede afectar a la escisión
de la unidad de unión. Por tanto, este artículo enseña que la unión
presentada no se puede transferir sin dificultad a otros sistemas
conjugados. En particular, no se dice nada sobre si los restos
también dirigidos a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} se pueden
unir a toxóforos de esta forma, sin que, de esta forma, el resto
que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} pierda su
capacidad para unirse a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
Las unidades de unión descritas en el documento
WO 96/31532 se usan específicamente para la unión del toxóforo a un
radical oligosacarídico. No se dice nada sobre si los restos también
dirigidos a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} se pueden
unir a toxóforos de esta forma, sin que, de esta forma, el resto
que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} pierda su
capacidad para unirse a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, la unidad de unión se puede escindir mediante
enzimas asociadas a tumores. Esto da lugar a un incremento adicional
en la especificidad tisular de los conjugados según la invención y
así, a una reducción adicional de los conjugados según la invención
en otros tipos tisulares.
Según una forma de realización preferida
adicional de la invención, la unidad de unión se puede escindir
mediante enzimas que están acopladas a anticuerpos con selectividad
por tejidos tumorales y así, se dirigen a tejidos tumorales. Esto
también se denomina aproximación ADEPT. Asimismo esto da lugar a un
incremento adicional en la especificidad tisular de los conjugados
según la invención y así, a una reducción adicional de los
conjugados según la invención en otros tipos tisulares.
Conjugados particularmente preferidos según la
presente invención son aquéllos de la fórmula general (I)
(I)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp-IA
en la
que
CT denota un radical citotóxico o un radical de
un citostático o de un derivado citostático, que adicionalmente
puede llevar un grupo hidroxilo, carboxilo o amino,
AA1 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
AA2 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
A4 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
en las que
Sp' es un radical arilaminocarbonilo o
arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de
carbono,
Sp está ausente, es un radical
arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene
7-11 átomos de carbono o es un radical ácido
alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un
radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los
radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico que se dirige a un
receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, que
es un radical de la fórmula (III)
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en la
que
R^{7} es OH,
R^{8} es hidrógeno,
R^{9} es hidrógeno,
R^{10} es -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''},
-COR^{10'}, -CONR^{10'} o -CS-NR^{10'}, o
representa un enlace directo a través del cual el radical de la
fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} independientemente de cualquier otro
es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin
sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical
heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a
través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente
unido al resto del conjugado;
R^{10''} es un radical alquilo o cicloalquilo
sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin
sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la
fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir o un radical arilo
sustituido o sin sustituir,
R^{16} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi
sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
R^{17} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi
sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
L es -NHSO_{2}-
R^{12} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido
X' es N, O o S;
p es 1;
R^{13} está ausente, es -H, un radical alquilo
o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, -NO_{2}, -CN,
-COR^{13'}, -COOR^{13'}.
R^{13'} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o
puede contener heteroátomos adicionales;
Y' es N
R^{14} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido
R^{15} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido;
y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente
aceptables.
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De los conjugados de la fórmula (I), según una
forma de realización preferida adicional se prefieren
particularmente aquellos conjugados en los que
CT es camptotecina o
9-aminocamptotecina, que se puede estar unida al
resto del conjugado a través del grupo C20-OH o, en
el caso de 9-aminocamptotecina, a través del grupo
amino libre;
AA1 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo
constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, y
fenilalanina;
AA2 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo
constituido por lisina, glutamato, histidina, glicina, arginina,
ornitina y leucina, y opcionalmente puede llevar grupos protectores
o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo
constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina y
fenilalanina;
AA4 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar
grupos protectores o un radical Sp',
en la que
Sp' es un radical fenilaminocarbonilo o
fenilaminotiocarbonilo,
Sp está ausente, es un radical
fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo o es un radical ácido
alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono o un
radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los
radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico de la fórmula
(III) que se dirige a un receptor de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3}, en la que
R^{7} es OH,
R^{8} es hidrógeno,
R^{9} es hidrógeno,
R^{10} es SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10'}',
-COR^{10'}, -CONR^{10'}_{2} o
-CS-NR^{10'}_{2} o representa un enlace
directo, a través del cual el radical de la fórmula (III) está
opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo,
ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus
derivados sustituidos,
-C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
-C_{6}(CH_{3})_{5},
-CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
2-clorofenilo, 3-clorofenilo,
4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo,
4-clorofenilmetilo,
2,4-diclorofenilmetilo,
2,6-diclorofenilmetilo,
3-aminofenilo, 4-aminofenilo,
2-metoxicarbonilfenilmetilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometil-fenilo,
3,5-bis(trifluorometil)fenilo,
4-trifluoro-metoxifenilo,
fenilmetilo,
2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo,
feniletilo, 1-fenilpropilo,
(S)-(+)-camfor-10-ilo,
(R)-(-)-camfor-10-ilo,
2-feniletenilo, 2-tiofenilo,
4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo,
3-metilfenilo, 4-metilfenilo,
4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo,
2,5-dimetilfenilo,
2-metoxi-5-metilfenilo,
2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo,
2-naftilo, 4-fluorofenilo,
2,4-difluorofenilo,
2-cloro-6-metilfenilo,
2-cloro-4-fluoro-fenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3-cloro-6-metoxifenilo,
2-trifluorometilfenilo,
2-alquilsulfonilfenilo,
2-arilsulfonilfenilo,
3-(N-acetil-6-metoxi)anilina,
4-acetamidofenilo,
2,2,2-trifluoroetilo,
5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo,
N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo,
tiofen-2-ilo,
isoxazol-5-ilo, etoxi,
2-cloropiridin-3-ilo,
piridin-3-ilo, benciloxi,
5-metilisoxazol-3-ilo,
1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo,
2,2-dimetiletenilo,
2-cloropiridin-5-metilo,
5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo,
(S)-camfan-1-ilo,
(R)-camfan-1-ilo o
8-quinolinilo;
R^{10''} es un radical alquilo
C_{1-6}, un radical cicloalquilo
C_{3-7}, un radical arilo sustituido o sin
sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la
fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
dialquil-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}
o
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R^{16} es hidrógeno, CN, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, trifluorometoxi,
etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro, bromo o
yodo;
R^{17} es hidrógeno, CN, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, etoxi,
trifluorometoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro,
bromo o yodo;
L es -NHSO_{2}-,
R^{12} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
uno de los radicales (a1) a (a28)
X' es N, O o S;
P es 1;
R^{13} está ausente, es -H, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, -NO_{2}, -CN,
-COR^{7'}, -COOR^{7'},
R^{13'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo,
ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus
derivados sustituidos;
Y' es N
R^{14} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
uno de los radicales (a1) a (a28),
y
R^{15} es hidrógeno metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
uno de los radicales (a1) a (a28).
\vskip1.000000\baselineskip
Asimismo, conjugados particularmente preferidos
de la fórmula (I) en esta forma de realización preferida adicional
son aquéllos en los que el radical de la fórmula (III) está unido al
resto del conjugado a través de un radical en posición \beta en
relación al grupo carboxilo, y los otros radicales de la fórmula
(III) son como se ha definido anteriormente.
Los compuestos de la fórmula (I) según la
invención también pueden estar presentes en forma de sus sales. En
general, en el presente documento se pueden mencionar sales con
ácidos o bases orgánicas o inorgánicas.
En particular, los compuestos de la fórmula (I)
según la invención se pueden emplear en forma de sus sales
fisiológicamente aceptables. Se entiende por sales fisiológicamente
aceptables según la invención como sales no tóxicas que en general
son accesibles por reacción de los compuestos de la fórmula (I)
según la invención con un ácido o base orgánica o inorgánica usados
de manera convencional para este propósito. Ejemplos de sales
preferidas de los compuestos de la fórmula (I) según la invención
son las sales de los metales alcalinos correspondientes, por
ejemplo, sal de litio, potasio o sodio, la sal de los metales
alcalino-térreos correspondientes tales como sal de
magnesio o calcio, una sal de amonio cuaternario tal como, por
ejemplo, sal de trimetilamonio, acetato, bencenosulfonato,
benzoato, dicarbonato, disulfato, di-tartrato,
borato, bromuro, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato,
fumarato, gluconato, glutamato, hexilresorcinato, bromhidrato,
clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, laurato,
malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato,
metilsulfato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pantotenato,
fosfato, difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato,
sulfato, succinato, tartrato, tosilato y valerato y otras sales
usadas para fines médicos.
La presente invención incluye tanto enantiómeros
o diastereómeros individuales como los correspondientes racematos,
mezclas diastereoméricas y sales de los compuestos según la
invención. Además, según la presente invención están incluidas
todas las posibles formas tautoméricas de los compuestos descritos
anteriormente. Además, la presente invención incluye tanto los
isómeros E y Z puros de los compuestos de la fórmula (I) como sus
mezclas E/Z en todas sus relaciones. Las mezclas diastereoméricas o
las mezclas E/Z se pueden separar en isómeros individuales mediante
procesos cromatográficos. Los racematos se pueden resolver en sus
respectivos enantiómeros tanto mediante procesos cromatográficos
sobre fases quirales como por resolución.
En el contexto de la presente invención, los
sustituyentes, a menos que se indique otra cosa, en general, tienen
los siguientes significados:
Alquilo en general representa un radical
hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 20
átomos de carbono. Ejemplos que se pueden mencionar son metilo,
etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentilo, isopentilo,
hexilo, isohexilo, heptilo, isoheptilo, octilo e isooctilo, nonilo,
decilo, dodecilo, eicosilo.
Alquenilo en general representa un
radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 2
a 20 átomos de carbono y uno o más, preferentemente que tiene uno o
dos, dobles enlaces. Ejemplos que se pueden mencionar son alilo,
propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, pentenilo,
isopentenilo, hexenilo, isohexenilo, heptenilo, isoheptenilo,
octenilo, isooctenilo.
Alquinilo en general representa un
radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 2
a 20 átomos de carbono y uno o más, preferentemente que tiene uno o
dos, triples enlaces. Ejemplos que se pueden mencionar son etinilo,
2-butinilo, 2-pentinilo y
2-hexinilo.
Acilo en general representa un alquilo
inferior de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 9 átomos de
carbono, que está unido a través de un grupo carbonilo. Ejemplos que
se pueden mencionar son: acetilo, etilcarbonilo, propilcarbonilo,
isopropilcarbonilo, butilcarbonilo e isobutilcarbonilo.
Alcoxi en general representa un radical
hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 14
átomos de carbono y está unido a través de un átomo de oxígeno.
Ejemplos que se pueden mencionar son metoxi, etoxi, propoxi,
isopropoxi, butoxi, isobutoxi, pentoxi, isopentoxi, hexoxi,
isohexoxi, heptoxi, isoheptoxi, octoxi o isooctoxi. Los términos
"alcoxi" y "alquiloxi" se usan como sinónimos.
Alcoxialquilo en general representa un
radical alquilo que tiene hasta 8 átomos de carbono, que está
sustituido por un radical alcoxi que tiene hasta 8 átomos de
carbono.
Alcoxicarbonilo puede estar representado,
por ejemplo, por la fórmula
Alquilo en general en el presente documento
representa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada
que tiene de 1 a 13 átomos de carbono. Ejemplos que se pueden
mencionar son los siguientes radicales alcoxicarbonilo:
metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo,
isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo o isobutoxicarbonilo.
Cicloalquilo en general representa un
radical hidrocarbonado cíclico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono.
Ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo son radicales preferidos.
Ejemplos que se pueden mencionar son ciclopentilo, ciclohexilo,
cicloheptilo y ciclooctilo.
Cicloalcoxi en el contexto de la
invención representa un radical alcoxi cuyo radical hidrocarbonado
es un radical cicloalquilo. El radical cicloalquilo en general
tiene hasta 8 átomos de carbono. Ejemplos que se pueden mencionar
son: ciclopropiloxi y ciclo-hexiloxi. Los términos
"cicloalcoxi" y "cicloalquiloxi" se usan como
sinónimos.
Arilo en general representa un radical
aromático que tiene de 6 a 10 átomos de carbono. Radicales arilo
preferidos son fenilo, bencilo y naftilo.
Halógeno en el contexto de la invención
representa flúor, cloro, bromo y yodo.
Heterociclo en el contexto de la
invención en general representa un heterociclo saturado, insaturado
o aromático de 3 a 10 miembros, por ejemplo, de 5 ó 6 miembros, que
puede contener hasta 3 heteroátomos del grupo constituido por S, N
y/u O y que, en el caso de un átomo de nitrógeno, también puede
estar unido a través de éste. Ejemplos que se pueden mencionar son:
oxadiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo,
piridacinilo, piracinilo, tienilo, furilo, pirrolilo,
pirrolidinilo, piperacinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo,
1,2,3-triazolilo, tiazolilo, oxazolilo,
imidazolilo, morfolinilo o piperidilo. Se prefieren los grupos
tiazolilo, furilo, oxazolilo, pirazolilo, triazolilo, piridilo,
pirimidinilo, piridacinilo y tetrahidropiranilo. El término
"heteroarilo" (o "hetarilo") representa un radical
heterocíclico aromático.
Los conjugados según la invención se
caracterizan porque un radical citotóxico o un radical de un
citostático o de un derivado citostático está unido a través de una
unidad de enlace a un resto no peptídico que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5}.
El resto no peptídico del conjugado que se
dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}
o \alpha_{v}\beta_{5} sirve para llevar a la parte
toxofórica del conjugado a las células tumorales, o a sus
inmediaciones, y así conseguir selectividad tisular. El tejido
tumoral en crecimiento estimula la formación de nuevos vasos
sanguíneos, es decir, angiogénesis, hasta un grado considerable para
cubrir sus crecientes necesidades nutricionales. Los vasos
sanguíneos recién formados por angiogénesis difieren del tejido
convencional por marcadores específicos sobre las superficies de las
células endoteliales formadas. Además, el receptor de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} es
expresado por muchos tumores humanos (cf. WO 98/10795 y las
referencias allí indicadas). Así, el conjugado es llevado
selectivamente al tejido tumoral a tratar, o a sus inmediaciones,
por la interacción de su parte no peptídica que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5} con los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}
encontrados sobre células endoteliales o sobre células tumorales
formadas por angiogénesis.
A diferencia de los radicales peptídicos que se
dirigen a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}
o \alpha_{v}\beta_{5} (tales como los descritos, por
ejemplo, en el documento WO 98/10795), los restos no peptídicos
según la invención que se dirigen a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} se
distinguen por una estabilidad sérica incrementada, mediante la que
se asegura en un mayor grado el transporte del toxóforo en el
conjugado hasta el tejido tumoral.
El conjugado según la invención puede liberar su
radical toxofórico en su sitio diana y así, esto puede hacer
posible la penetración en el tejido tumoral. Esto se lleva a cabo
con la elección específica de una unidad que une el radical
toxofórico al resto que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}. Para ser
capaz de liberar el radical toxofórico, la unidad de enlace se tiene
que poder escindir en condiciones fisiológicas. Esto significa que
la unidad de enlace debe ser escindible hidrolíticamente o por
enzimas endógenas.
Particularmente se prefiere que la unidad de
enlace sea escindida por enzimas asociadas al tumor. Esto da lugar
a un incremento adicional en la selectividad tisular de la acción de
los conjugados según la invención.
Un punto de partida adecuado adicional para
promover la selectividad tisular de la acción de los conjugados
según la invención consiste en la denominada aproximación ADEPT. En
ésta, los conjugados son escindidos por ciertas enzimas. Estas
enzimas son introducidas en el cuerpo acopladas a anticuerpos junto
con los conjugados según la invención, los anticuerpos que sirven
como vehículos se dirigen específicamente al tejido tumoral. Esto
da lugar a una concentración selectiva tanto del conjugado como del
sistema enzima/anticuerpo en el tejido tumoral, por lo que el
toxóforo se libera en el tejido tumoral con una selectividad incluso
mayor y puede presentar allí su actividad.
Las unidades de enlace adecuadas según la
invención son todas las unidades de enlace que comprenden al menos
uno de los criterios anteriormente mencionados y que se pueden unir
al resto que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} de tal
forma que éste retiene su actividad de unión a los receptores de la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5}.
En los conjugados según la invención, los
toxóforos usados pueden ser todos radicales citotóxicos o radicales
de un citostático o de un derivado citostático que se emplean
convencionalmente en terapia tumoral.
Según una forma de realización preferida, los
conjugados según la invención que se pueden emplear son compuestos
de la fórmula (I) en los que un toxóforo está unido a través de una
unidad de enlace que consta de 0 a 4 aminoácidos, preferentemente
de 1 a 3 aminoácidos y particularmente de manera preferente de 2
aminoácidos, y, si es apropiado, de un grupo espaciador no
peptídico, a un resto no peptídico que se dirige a los receptores de
la integrina \alpha_{v}\beta_{3} de la fórmula (III)
en la que los radicales de la
fórmula tienen los significados indicados
anteriormente.
En los conjugados de la fórmula (I) según la
invención, el toxóforo usado pueden ser radicales citostáticos o
radicales de un citostático o de un derivado citostático que se
emplean convencionalmente en terapia tumoral. En el presente
documento se prefiere la camptotecina o los derivados de
camptotecina tales como la 9-aminocamptotecina, que
se puede unir al resto del conjugado a través del grupo
CO-OH o a través de un grupo funcional que está
opcionalmente presente en la molécula, tal como el grupo amino en el
caso de la 9-aminocamptotecina. Según esta forma de
realización preferida, la unidad camptotecina usada como compuesto
de partida puede estar presente en configuración 20(R) o
20(S) o con una mezcla de estas dos formas esteroisoméricas.
Se prefiere la configuración 20(S).
En los conjugados de la fórmula (I), la unidad
de enlace preferentemente consta de una unidad de la fórmula
-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
Si están presentes, cada uno de los radicales
AA1 a AA4 representa un aminoácido en configuración D o L, que
opcionalmente pueden llevar grupos protectores o un radical Sp'. En
este contexto, particularmente se prefiere uno de los aminoácidos
de origen natural glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina,
serina, treonina, cisteína, metionina, aspartato, glutamato,
asparagina, glutamina, arginina, lisina, histidina, triptófano,
fenilalanina, tirosina, o prolina. Los aminoácidos usados en el
procedimiento según la invención se pueden encontrar en
configuración L o D o alternativamente como una mezcla de la forma D
y L.
El término "aminoácidos" se refiere en
particular, según la invención, a los
\alpha-aminoácidos de origen natural, pero además
también incluye sus homólogos, isómeros y derivados. Un ejemplo de
isómeros que se puede mencionar son los enantiómeros. Los derivados
pueden ser, por ejemplo, aminoácidos suministrados con grupos
protectores.
Según la presente invención, cada uno de los
aminoácidos puede estar unido a otro y al toxóforo o al resto que
se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} a través
de sus funciones \alpha-carboxilo o
\alpha-amino, pero también a través de grupos
funcionales opcionalmente presentes en las cadenas laterales, tales
como, por ejemplo, funciones amina.
En el caso de aminoácidos que tienen grupos
funcionales en sus cadenas laterales, estos grupos funcionales se
pueden desbloquear o proteger con grupos protectores convencionales
usados en la química de péptidos. Los grupos protectores empleados
para estos grupos funcionales de los aminoácidos pueden ser los
grupos protectores conocidos en la química de péptidos, por
ejemplo, del tipo uretano, alquilo, acilo, éster o amida.
Grupos aminoprotectores en el contexto de la
invención son los grupos aminoprotectores habituales usados en la
química de péptidos. Éstos incluyen preferentemente:
benciloxicarbonilo, 3,4-dimetoxibenciloxicarbonilo,
3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo,
2,4-dimetoxibenciloxicarbonilo,
4-metoxibenciloxicarbonilo;
4-nitrobenciloxi-carbonilo,
2-nitrobenciloxicarbonilo,
2-nitro-4,5-dimetoxibenciloxicarbonilo,
metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, terc-butoxicarbo-
nilo (Boc), aliloxicarbonilo, viniloxicarbonilo, 3,4,5-trimetoxibenciloxicarbonilo, ftaloilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, 2,2,2-tricloro-terc-butoxicarbonilo, mentiloxicarbonilo, 4-nitro-fenoxicarbonilo, fluorenil-9-metoxicarbonilo
(Fmoc), formilo, acetilo, propionilo, pivaloilo, 2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo, 2,2,2-trifluoroacetilo, 2,2,2-tricloroacetilo, benzoílo, bencilo, 4-clorobenzoílo, 4-bromobenzoílo, 4-nitrobenzoílo, ftalimido, isovaleroilo o benciloximetileno, 4-nitrobencilo, 2,4-dinitrobencilo, 4-nitrofenilo o 2-nitrofenilsulfenilo. El grupo Fmoc y el grupo Boc son particularmente preferidos.
nilo (Boc), aliloxicarbonilo, viniloxicarbonilo, 3,4,5-trimetoxibenciloxicarbonilo, ftaloilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, 2,2,2-tricloro-terc-butoxicarbonilo, mentiloxicarbonilo, 4-nitro-fenoxicarbonilo, fluorenil-9-metoxicarbonilo
(Fmoc), formilo, acetilo, propionilo, pivaloilo, 2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo, 2,2,2-trifluoroacetilo, 2,2,2-tricloroacetilo, benzoílo, bencilo, 4-clorobenzoílo, 4-bromobenzoílo, 4-nitrobenzoílo, ftalimido, isovaleroilo o benciloximetileno, 4-nitrobencilo, 2,4-dinitrobencilo, 4-nitrofenilo o 2-nitrofenilsulfenilo. El grupo Fmoc y el grupo Boc son particularmente preferidos.
La retirada de los grupos protectores en etapas
de reacción apropiadas se puede llevar a cabo, por ejemplo,
mediante la acción de un ácido o una base, hidrogenolítica o
reductoramente de otra forma.
Además, cada uno de los aminoácidos AA1 a AA4
puede llevar un radical Sp', en el que Sp' representa un radical
arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene
7-11 átomos de carbono. Preferentemente, este
radical Sp' es un radical fenilaminocarbonilo o
fenilaminotiocarbonilo.
El radical Sp' está preferentemente unido a la
cadena lateral del aminoácido correspondiente a través del grupo
funcional. No obstante, si el enlace del toxóforo al resto que se
dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}
o \alpha_{v}\beta_{5} en un aminoácido tiene lugar a través
del grupo funcional en la cadena lateral, el radical Sp' también
puede estar unido a la función carboxilo o
\alpha-amino del aminoácido correspondiente.
Según una forma de realización preferida, AA1,
si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen
cadenas laterales con requerimientos estéricos o no polares.
Ejemplos que se pueden mencionar son glicina, alanina, valina,
leucina, isoleucina, fenilalanina, prolina, triptófano y metionina.
La valina, leucina e isoleucina son particularmente preferidas.
Según una forma de realización preferida, AA2,
si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen
cadenas laterales básicas. Ejemplos que se pueden mencionar son
lisina, arginina, glutamato, histidina, ornitina, glicina, leucina
o ácido diaminobutírico. No obstante, también se pueden usar
aminoácidos que tienen cadenas laterales no polares. La lisina,
glutamato, histidina, leucina y glicina son particularmente
preferidos.
Según una forma de realización preferida, AA3,
si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen
cadenas laterales no polares. Ejemplos que se pueden mencionar son
glicina, alanina, valina, leucina, fenilalanina e isoleucina. La
glicina, valina y leucina son particularmente preferidas.
Según una forma de realización preferida, AA4,
si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen
cadenas laterales no polares. Ejemplos que se pueden mencionar son
alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, triptófano,
fenilalanina y metionina. La alanina, valina y prolina son
particularmente preferidas.
Según la forma de realización preferida según la
invención, la unidad espaciadora Sp es un radical arilaminocarbonilo
o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de
carbono o un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8
átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo.
Particularmente de manera preferente, Sp es un radical
fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo o un radical ácido
alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono o un
radical carbonilo o tiocarbonilo. En particular, se prefiere un
radical carbonilo o tiocarbonilo y un radical ácido succínico o
ácido glutárico.
Según la invención se prefiere que la unidad de
enlace conste de dos aminoácidos AA1 y AA2 y la unidad espaciadora
Sp, siendo posible, en particular, para la unidad AA2, estar
modificada en la cadena lateral mediante grupos protectores o el
radical Sp'. No obstante, también es posible que la unidad de enlace
conste de uno, tres o cuatro aminoácidos AA1 a AA4 y una unidad
espaciadora Sp. En estos casos, como norma, el enlace al toxóforo
tiene lugar a través de la función carboxilo del aminoácido AA1 y el
enlace al resto que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} a través
de la unidad espaciadora Sp tiene lugar usando un grupo amino o un
grupo hidroxilo del resto que se dirige a los receptores de la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5}. En el caso en el que el enlace tiene
lugar a través de la función carboxilo del resto que se dirige a
los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5}, se prefiere sin embargo, usar unidades
de enlace sin la unidad espaciadora Sp. En este caso, la unión
entre la unidad de enlace y el resto que se dirige a los receptores
de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o
\alpha_{v}\beta_{5} tiene lugar a través de una función
amino de un aminoácido. En este caso, se prefiere particularmente
una unidad de enlace que conste de dos aminoácidos AA1 y AA2.
Si el toxóforo contiene una función amino, por
ejemplo, 9-aminocamptotecina, la unión al resto que
se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} puede
tener lugar directamente a través de una unidad espaciadora Sp sin
que ninguno de los aminoácidos AA1 a AA4 esté contenido en la
unidad de enlace. En este caso se prefiere particularmente que Sp
represente una función carbonilo o tiocarbonilo, en particular una
función tiocarbonilo.
El resto que se dirige a los receptores de la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} además puede ser un radical
de la fórmula (III):
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que los radicales de la
fórmula (III) tienen los significados definidos
anteriormente.
En la siguiente descripción, se indican los
sustituyentes bivalentes de manera que su respectivo extremo
izquierdo está conectado al grupo izquierdo indicado del
sustituyente correspondiente en la fórmula (III) y su respectivo
extremo derecho está conectado al grupo derecho indicado del
sustituyente correspondiente en la fórmula (III). Si, por ejemplo,
el radical L es igual a -NHSO_{2}- en la fórmula (III), el átomo
de nitrógeno está conectado al grupo fenileno encontrado a la
izquierda del radical L en la fórmula (III). Los siguientes detalles
se refieren adicionalmente al radical de la fórmula (III) en el
estado no unido. La unión del radical de la fórmula (III) al
toxóforo a través de la unidad de enlace puede tener lugar mediante
un grupo funcional en la cadena lateral del radical de la fórmula
(III), es decir, a través del grupo amino o de un sustituyente unido
a él en posición \beta en relación al grupo carboxilo
terminal.
Los radicales de la fórmula (III) según la
invención se caracterizan porque tienen, como elemento estructural
principal, dos unidades fenilo conectadas a través de un grupo
enlazador L, un grupo fenileno que tiene un radical derivado de un
\beta-aminoácido, mientras que el otro grupo
fenileno tiene un grupo amino, grupo urea, grupo tiourea o un grupo
guanidina. Las unidades fenileno conectadas a través de un grupo
enlazador L además pueden llevar sustituyentes adicionales aparte
de los radicales anteriormente mencionados.
Preferentemente, los radicales de la fórmula
(III) según la invención se usan en una forma en la que la unidad
carboxilo terminal está presente en forma de ácido carboxílico
libre.
El radical unido a una de las dos unidades
fenileno centrales y derivado de un
\beta-aminoácido alternativamente puede llevar
uno o dos sustituyentes adicionales en posición \alpha en relación
al grupo carboxilo. Cada uno de estos sustituyentes se puede
seleccionar del grupo constituido por hidrógeno, un radical alquilo
o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo
sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o
insaturado opcionalmente sustituido, un radical alquenilo
opcionalmente sustituido, un radical alquinilo opcionalmente
sustituido, un radical hidroxilo o un radical alcoxi.
Según la invención, el grupo amino incluido en
el radical derivado de un \beta-aminoácido
preferentemente está sustituido de manera particular por
-SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''}, -CONR^{10'}_{2} o
-COR^{10'}, en las que R^{10'} y R^{10''} son como se ha
definido anteriormente. En particular, en el presente documento se
prefieren los radicales de la fórmula (III) puesto que el radical
derivado de un \beta-aminoácido no tiene
sustituyente en posición \alpha en relación a la unidad carboxilo
y el grupo amino incluido en este radical está sustituido por
-SO_{2}R^{10'}, -CONR^{10'}_{2} o -COR^{10'}, en las que
R^{10'} es como se ha definido anteriormente.
Además de uno de los radicales anteriormente
mencionados, el átomo de nitrógeno del grupo amino encontrado en
posición \beta puede tener un sustituyente seleccionado grupo
constituido por hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo
sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin
sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido o estar unidos entre sí y así, junto con el
átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un sistema anular
heterocíclico. Los sustituyentes preferidos en el presente
documento son aquéllos que se pueden seleccionar del grupo
constituido por hidrógeno, un alquilo C_{1-6} tal
como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo,
isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo o
hexilo, un cicloalquilo C_{3-7} tal como, por
ejemplo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo, un arilo tal como, por
ejemplo, fenilo, bencilo o tolilo, un radical heterocíclico tal
como, por ejemplo, pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol,
piridina, tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno,
imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol,
oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benxotiazol, bencimidazol,
quinolina, isoquinolina, tetrahidroquinolina,
tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina,
citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina y
alternativamente pueden estar sustituidos por uno o más radicales
alquilo C_{1-6} tal como metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo o hexilo, radicales cicloalquilo
C_{3-7} tal como ciclopropilo,
ciclo-propilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o
ciclohexilo, radicales arilo tal como fenilo, bencilo, tolilo,
naftilo, indolilo, radicales heterocíclicos tal como pirrolidina,
piperidina, piperacina, pirrol, piridina, tetrahidrofurano, furano,
tiofeno, tetrahidrotiofeno, imidazolidina, imidazol, oxazolidina,
oxazol, tiazolidina, tiazol, oxatiazol, benzofurano, benzoxazol,
benzotiazol, bencimidazol, quinolina, isoquinolina,
tetrahidroquinolina, tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol,
pirimidina, purina, citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o
xantina, o grupos funcionales tales como un doble enlace o un
heteroátomo tal como oxígeno, azufre o nitrógeno, un grupo amino
opcionalmente sustituido, un grupo nitro, un halógeno, un grupo
hidroxilo, un grupo éter, un grupo sulfuro, un grupo mercaptano, un
grupo ciano, un grupo isonitrilo, un grupo alquenilo, un grupo
alquinilo, un grupo aldehído, un grupo ceto, un grupo carboxilo, un
grupo éster, un grupo amida, un grupo sulfóxido o un grupo sulfona.
Además, uno o más de los anillos adicionalmente saturados o
insaturados pueden estar fusionados a los radicales cíclicos
anteriormente mencionados con la formación de, por ejemplo, una
unidad naftilo, indolilo, benzofuranilo, benzoxazolilo,
benzotiazolilo, bencimidazolilo, quinolinilo o isoquinolinilo o uno
de sus análogos parcial o completamente hidrogenados. El
sustituyente adicional sobre el átomo de nitrógeno del grupo
\beta-amino es particularmente de manera
preferible hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo,
isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo,
ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo,
ciclohexilo, 4-metil-ciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El radical derivado de un
\beta-aminoácido está unido a una de las dos
unidades fenileno centrales conectadas a través de un grupo
enlazador L, que se designa en el presente documento como unidad
fenileno A. Además del radical derivado de un
\beta-aminoácido y el grupo enlazador L, la unidad
fenileno A preferentemente no lleva sustituyentes adicionales, pero
puede tener uno o más radicales que se seleccionan del grupo
constituido por hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo
sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin
sustituir o un átomo de halógeno. Los radicales alquilo son
preferentemente radicales alquilo C_{1-6} tales
como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo. Los
radicales cicloalquilo son preferentemente radicales cicloalquilo
C_{3-7} tales como ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo.
Los radicales alcoxi son preferentemente
radicales alcoxi C_{1-6} tales como metoxi,
trifluorometoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, y los
átomos de halógeno son preferentemente F, Cl, Br o I.
Según la presente invención radicales
particularmente preferidos son aquéllos de la fórmula (III) cuya
unidad central fenileno A-enlazador
L-fenileno B consta, según la presente definición,
de una unidad fenileno A m-sustituida y una unidad
fenileno B m-sustituida.
Según la invención, el grupo enlazador L es
preferentemente -NHSO_{2}-.
La unidad fenileno B central lleva como
sustituyente un radical que se selecciona del grupo constituido por
una unidad guanidina, urea o tiourea. Esta unidad guanidina, urea o
tiourea puede ser de cadena abierta. Los átomos de nitrógeno de las
respectivas unidades, ambos opcionalmente presentes y unidos
solamente mediante enlaces sencillos, pueden llevar sustituyentes
adicionales R^{12}, R^{14} y R^{15}. Estos sustituyentes
pueden ser, independientemente los unos de los otros o
simultáneamente, hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo
sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin
sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido. Sustituyentes preferidos en el presente
documento son aquellos que se seleccionan del grupo constituido por
hidrógeno, un alquilo C_{1-6} tal como, por
ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo o hexilo, un
cicloalquilo C_{3-7} tal como, por ejemplo,
ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo,
ciclohexilo o cicloheptilo, un arilo tal como, por ejemplo, fenilo,
bencilo o tolilo, un radical heterocíclico tal como, por ejemplo,
pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol, piridina,
tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno,
imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol,
oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol,
quinolina, isoquinolina, tetrahidro-quinolina,
tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina,
citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina y
alternativamente pueden estar sustituidos por uno o más radicales
alquilo C_{1-6} tal como metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo o hexilo, radicales cicloalquilo
C_{3-7} tal como ciclopropilo, ciclopropilmetilo,
ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, radicales arilo tal como
fenilo, bencilo, tolilo, naftilo, indolilo, radicales
heterocíclicos tal como pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol,
piridina, tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno,
imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol,
oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol,
quinolina, isoquinolina, tetrahidro-quinolina,
tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina,
citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina, o grupos
funcionales tales como un doble enlace o un heteroátomo tal como
oxígeno, azufre o nitrógeno, un grupo amino, un grupo nitro, un
halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo éter, un grupo sulfuro, un
grupo mercaptano, un grupo ciano, un grupo nitrilo, un grupo
alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo aldehído, un grupo ceto, un
grupo carboxilo, un grupo éster, un grupo amida, un grupo sulfóxido
o un grupo sulfona opcionalmente sustituidos. Además, a los
radicales cíclicos anteriormente mencionados pueden estar fusionados
uno o más anillos saturados o insaturados con la formación de, por
ejemplo, una unidad naftilo, indolilo, benzofuranilo,
benzoxazolilo, benzotiazolilo, bencimidazolilo, quinolinilo o
isoquinolinilo o uno de sus análogos parcial o completamente
hidrogenados.
Sustituyentes particularmente preferidos son
aquéllos tales como hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo,
butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo,
hexilo, ciclopropilo, ciclo-propilmetilo,
ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}
o uno de los radicales (a1) a (a28) anteriormente mencionados.
\newpage
Como se ha mencionado anteriormente, la unidad
urea, tiourea o guanidina puede ser de cadena abierta y así, ser un
constituyente de una de las siguientes unidades funcionales
preferidas:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En las unidades estructurales mostradas
anteriormente, R^{12}, R^{14} y R^{15} son como se ha definido
anteriormente.
Además, en las unidades estructurales anteriores
R^{13} puede estar ausente, puede ser hidrógeno, un radical
alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir tal como, por
ejemplo, un alquilo C_{1-6} tal como metilo,
etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo,
pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo o un cicloalquilo
C_{3-7} tal como ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, -NO_{2}, -CN, -COR^{13'} o
-COOR^{13'}, en las que R^{13'} puede ser hidrógeno, un radical
alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo
sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o
insaturado opcionalmente sustituido, que puede estar saturado o
insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales, y es
preferentemente un alquilo C_{1-6} tal como, por
ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, un
cicloalquilo C_{3-7} tal como, por ejemplo,
ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, un arilo tal
como, por ejemplo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados
sustituidos.
Según la invención, radicales particularmente
preferidos de la fórmula (III) son aquéllos en los que el grupo
amino incluido en el radical derivado de un
\beta-aminoácido lleva un radical
-SO_{2}R^{10'}, en las que R^{10'} es preferentemente metilo,
etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo,
pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o
uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}
(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluoro-metil-fenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propil-fenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonilpiperidin-3-ilo, tio-fen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloropiridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo, el grupo enlazador L es -NHSO_{2}-,
-CH_{2}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluoro-metil-fenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propil-fenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonilpiperidin-3-ilo, tio-fen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloropiridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo, el grupo enlazador L es -NHSO_{2}-,
-CH_{2}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Además, según la presente invención los
radicales de la fórmula (III) son particularmente preferidos, en los
que el grupo amino incluido en el radical derivado de un
\beta-aminoácido lleva un radical
-SO_{2}R^{10'} o un radical -COOR^{10''}, en las que
R^{10'} o R^{10''} es preferentemente metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o
uno de sus derivados sustituidos,
-C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
-C_{6}(CH_{3})_{5},
-CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
2-clorofenilo, 3-clorofenilo,
4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo,
4-aminofenilo,
4-cloro-fenil-metilo,
2,4-diclorofenilmetilo,
2,6-diclorofenilmetilo,
2-metoxicarbonil-fenil-metilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometilfenilo,
3,5-bis(trifluoro-metil)fenilo,
4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo,
2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo,
feniletilo, 1-fenilpropilo,
(S)-(+)-camfor-10-ilo,
(R)-(-)-camfor-10-ilo,
2-feniletenilo, 2-tiofenilo,
4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo,
3-metil-fenilo,
4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo,
4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo,
2-metoxi-5-metilfenilo,
2,3,5,6-tetra-metilfenilo,
1-naftilo, 2-naftilo,
4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo,
2-cloro-6-metilfenilo,
2-cloro-4-fluorofenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3-cloro-6-metoxifenilo,
2-trifluorometilfenilo,
2-alquilsulfonilfenilo,
2-arilsulfonilfenilo,
3-(N-acetil-6-metoxi)anilina,
4-acetamidofenilo,
2,2,2-trifluoroetilo,
5-cloro-3-metil-benzo-tiazol-2-ilo,
N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo,
tiofen-2-ilo,
isoxazol-5-ilo, etoxi,
2-cloro-piridin-3-ilo,
piridin-3-ilo, benciloxi,
5-metilisoxazol-3-ilo,
1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo,
2,2-dimetiletenilo,
2-cloropiridin-5-metilo,
5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo,
(S)-camfan-1-ilo,
(R)-camfan-1-ilo o
8-quinolinilo, el grupo enlazador L es -NHSO_{2}-,
-CH_{2}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}- o -OCH_{2}-,
-CH_{2}O-, -CH_{2}OCH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}O-,
-OCH_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno
es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo
particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como,
por ejemplo, la unidad
4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Además, según la presente invención los
radicales de la fórmula (III) son particularmente preferidos, en los
que el grupo amino incluido en el radical derivado de un
\beta-aminoácido lleva un radical -COR^{10'},
en la que R^{10'} es preferentemente hidrógeno, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o
uno de sus derivados sustituidos,
-C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
-C_{6}(CH_{3})_{5},
-CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
2-clorofenilo, 3-clorofenilo,
4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo,
4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo,
2,4-diclorofenilmetilo,
2,6-diclorofenilmetilo,
2-metoxicarbonilfenilmetilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometilfenilo,
3,5-bis(trifluorometil)fenilo,
4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo,
2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo,
feniletilo, 1-fenilpropilo,
(S)-(+)-camfor-10-ilo,
(R)-(-)-camfor-10-ilo,
2-feniletenilo, 2-tiofenilo,
4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo,
3-metilfenilo, 4-metilfenilo,
4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo,
2,5-dimetilfenilo,
2-metoxi-5-metilfenilo,
2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo,
2-naftilo, 4-fluorofenilo,
2,4-difluorofenilo,
2-cloro-6-metilfenilo,
2-cloro-4-fluorofenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3-cloro-6-metoxifenilo,
2-trifluoro-metil-fenilo,
2-alquilsulfonilfenilo,
2-arilsulfonilfenilo,
3-(N-acetil-6-metoxi)-anilina,
4-acetamidofenilo,
2,2,2-trifluoroetilo,
5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo,
N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo,
tiofen-2-ilo,
isoxazol-5-ilo, etoxi,
2-cloro-piridin-3-ilo,
piridin-3-ilo, benciloxi,
5-metilisoxazol-3-ilo,
1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo,
2,2-dimetiletenilo,
2-cloropiridin-5-metilo,
5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo,
(S)-camfan-1-ilo,
(R)-camfan-1-ilo o
8-quinolinilo, el grupo enlazador L es
-NHSO_{2}-, -CH_{2} NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
-NHSO_{2}-, -CH_{2} NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Además, según la presente invención los
radicales de la fórmula (III) son particularmente preferidos, en los
que el grupo amino incluido en el radical derivado de un
\beta-aminoácido lleva un radical -COR^{10'},
en la que R^{10'} es preferentemente hidrógeno, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o
uno de sus derivados sustituidos,
-C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
-C_{6}(CH_{3})_{5},
-CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
2-clorofenilo, 3-clorofenilo,
4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo,
4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo,
2,4-diclorofenilmetilo,
2,6-diclorofenilmetilo,
2-metoxicarbonilfenilmetilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometilfenilo,
3,5-bis(trifluorometil)fenilo,
4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo,
2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo,
feniletilo, 1-fenilpropilo,
(S)-(+)-camfor-10-ilo,
(R)-(-)-camfor-10-ilo,
2-fenil-etenilo,
2-tiofenilo, 4-metoxifenilo,
3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo,
4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo,
4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo,
2-metoxi-5-metilfenilo,
2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo,
2-naftilo, 4-fluorofenilo,
2,4-difluorofenilo,
2-cloro-6-metilfenilo,
2-cloro-4-fluorofenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3-cloro-6-metoxifenilo,
2-trifluoro-metil-fenilo,
2-alquilsulfonilfenilo,
2-arilsulfonilfenilo,
3-(N-acetil-6-metoxi)-anilina,
4-acetamidofenilo,
2,2,2-trifluoroetilo,
5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo,
N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo,
tiofen-2-ilo,
isoxazol-5-ilo, etoxi,
2-cloro-piridin-3-ilo,
piridin-3-ilo, benciloxi,
5-metilisoxazol-3-ilo,
1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo,
2,2-dimetiletenilo,
2-cloropiridin-5-metilo,
5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo,
(S)-camfan-1-ilo,
(R)-camfan-1-ilo o
8-quinolinilo, el grupo enlazador L es
-NHSO_{2}-, -CH_{3}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
-NHSO_{2}-, -CH_{3}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Los nuevos conjugados según la reivindicación 1
se pueden preparar mediante la unión del toxóforo a la unidad
enlazadora y su posterior unión al resto que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}. No
obstante, también es posible conectar primero el resto que se dirige
a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} a la
unidad enlazadora y a continuación unir el toxóforo a la unidad
enlazadora.
La combinación de las unidades individuales de
los conjugados según la invención se puede llevar a cabo
preferentemente por medio de grupos funcionales que se pueden hacer
reaccionar entre sí y, como resultado, se pueden unir mediante
procedimientos conocidos por aquellos expertos en la materia. Por
ejemplo, las funciones carboxilo se pueden hacer reaccionar con
funciones amino con la formación de un enlace amida. También es
posible sintetizar paso a paso la unidad enlazadora sobre uno de
los dos radicales a conectar, es decir, el toxóforo o el resto que
se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3}, mediante procedimientos convencionales
conocidos por aquellos expertos en la materia y, a continuación,
unir la unidad de unión terminada al radical que aún está por
unir.
En particular, la presente invención se refiere
a un procedimiento para la preparación de conjugados según la
fórmula (I), que comprende:
[A] la reacción de un compuesto del grupo de
compuestos de la fórmula (III) que tiene una función carboxilo
libre u opcionalmente activada,
con un compuesto de la fórmula (Ia) que tiene un
grupo amino libre primario o secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales
tienen los significados indicados en la reivindicación
5,
en presencia de una base;
o
[B] la reacción de un compuesto del grupo de
compuestos de la fórmula (III) que tiene una función amino libre
primaria o secundaria,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por
ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster del ácido clorofórmico, si
fuese apropiado en presencia de una base,
seguida por la reacción con un compuesto de la
fórmula (Ia) que tiene un grupo amino libre primario o
secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales
tienen los significados indicados en la reivindicación
5,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en
puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
\vskip1.000000\baselineskip
[C] la reacción de un compuesto citotóxico o
citostático o de un derivado citostático CT que contiene un grupo
amino libre primario o secundario,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por
ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster de un ácido clorofórmico en
presencia de una base,
seguida de la reacción con un compuesto del
grupo de compuestos de la fórmula (III) que tiene una función amino
libre primaria o secundaria,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en
puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
\vskip1.000000\baselineskip
[D] la reacción de un compuesto del grupo de
compuestos de la fórmula (III) que contiene una función amino libre
primaria o secundaria,
con un compuesto de la fórmula (Ia) que contiene
una función carboxilo libre u opcionalmente activada
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales
tienen el significado indicado en la reivindicación
5,
en presencia de una base;
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en
puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica.
\vskip1.000000\baselineskip
Según una forma de realización preferida, todas
las etapas del proceso de preparación se llevan a cabo en fase
sólida.
En la variante [A] del procedimiento de
preparación según la invención, un resto que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de
radicales de la fórmula (III) se une a través de su función
carboxilo libre a la función amino de un conjugado de la unidad de
unión al toxóforo (Ia) con la formación de un enlace amida. Esta
reacción se lleva a cabo mediante procedimientos convencionales
conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J.
March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 370 ff.).
Según la invención se prefiere activar la función carboxilo del
resto que se dirige a los receptores de la
\alpha_{v}\beta_{3} y a continuación hacerla reaccionar con
el compuesto (Ia) en un disolvente orgánico en presencia de una
base.
Para la activación del grupo carboxilo, se
pueden usar reactivos acoplantes conocidos en la química de
péptidos, tal como se describe, por ejemplo, en Jakubke/Jeschkeit:
Aminosäuren, Peptide, Proteine [Amino acids, Peptides, Proteins];
Verlag Chemie 1982 o Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993). Los ejemplos
mencionados son anhídridos de ácido N-carboxílico,
cloruros de ácido o anhídridos mixtos, aductos con carbodiimidas,
por ejemplo, N,N'-dietil-,
N,N-diisopropil- o
N,N-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)N'-etil-carbodiimida,
meto-p-toluensulfonato de
N-ciclohexil-N'-(2-morfolinoetil)-carbodiimida,
o compuestos carbonilo tales como carbonildiimidazol, o compuestos
de 1,2-oxazolio tales como 3-sulfato
de
2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio
o perclorato de
2-terc-butil-5-metil-isoxazolio,
o compuestos de acilamino tales como
2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina
o anhídrido propano-fosfónico o cloroformato de
isobutilo o hexafluorofosfato de
benzotriazoliloxi-tris-(dimetil-amino)-fosfonio,
1-hidroxibenzotriazol o ésteres de
N-hidroxisuccinimida. Además se ha propuesto emplear
los componentes ácidos en forma de anhídrido de Leuchs.
La variante [A] del procedimiento de preparación
anterior según la invención se puede llevar a cabo a diversas
condiciones de presión y temperatura, por ejemplo, de 0,5 a 2 bar, y
preferentemente a presión normal, o de -30 a +100ºC y
preferentemente de -10 a +80ºC, en disolventes adecuados tales como
dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), diclorometano,
cloroformo, alcoholes inferiores, acetonitrilo, dioxano, agua o en
mezclas de los disolventes mencionados. Como norma, se prefiere la
reacción en DMF, diclorometano, THF, dioxano/agua o
THF/diclorometano a temperatura ambiente o enfriando en hielo y a
presión normal.
Las bases que se pueden emplear en la variante
[A] del procedimiento de preparación según la invención son, por
ejemplo, trietilamina, etil-diisopropilamina,
piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases
usadas convencionalmente en pasos de este tipo tales como, por
ejemplo, base de Hünig.
En la variante [B] del procedimiento según la
invención, un resto que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula
(III) se hace reaccionar a través de su función amino libre,
primero con un derivado de un ácido carbónico con la formación de un
isocianato, isotiocianato o carbamato correspondiente, que a
continuación se une a la función amino de un conjugado de la unidad
de unión al toxóforo (Ia) con la formación del conjugado (I).
La reacción del resto que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de
radicales de la fórmula (III) a través de su función amino libre con
un derivado de ácido carbónico se puede llevar a cabo mediante
procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la
materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª
ed., Wiley, p. 370 ff.). Según la invención, la reacción
preferentemente se lleva a cabo con fosgeno o un sustituto para el
fosgeno tal como, por ejemplo, cloroformato de triclorometilo,
tiofosgeno o un éster de ácido clorofórmico en un disolvente tal
como dimetilformamida (DMF) o una mezcla de dioxano y agua (1:1) o
de tetrahidrofurano (THF) y diclorometano (DCM) (1:1) a temperatura
ambiente o enfriando, preferentemente a temperatura ambiente, y
agitando durante 10 minutos aproximadamente hasta 3 horas
aproximadamente, si fuese apropiado en presencia de una
base.
base.
La reacción posterior del isocianato,
isotiocianato o carbamato así obtenido con la función amino de un
conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia) con la formación
de un enlace tiourea o urea correspondiente se puede llevar a cabo
mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos
expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced
organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 802 ff.).
Según la invención, el carbamato o tiocianato o
isotiocianato preferentemente se hace reaccionar con la función
amino del compuesto (Ia) a temperatura ambiente con agitación
durante 1 a 5 horas aproximadamente, preferentemente de 2 a 3 horas
aproximadamente, en presencia de una base en un disolvente tal como
dimetilformamida (DMF).
Las bases que se pueden emplear en la variante
[B] del procedimiento de preparación según la invención son, por
ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina,
N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas de
manera convencional en pasos de este tipo, tal como, por ejemplo,
base de Hünig.
En la variante [C] del procedimiento según la
invención, una función amino de un compuesto citotóxico o de un
citostático o de un derivado citostático CT primero se hace
reaccionar con un derivado de ácido carbónico con la formación de
un isocianato, isotiocianato o carbamato correspondiente, que a
continuación se hace reaccionar con una función amino de un resto
que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula
(III) con la formación del conjugado (I).
La reacción de la función amino de un compuesto
citotóxico o de un citostático o de un derivado citostático CT con
un derivado de ácido carbónico se puede llevar a cabo mediante
procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la
materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª
ed., Wiley, p. 370 ff.). Según la invención, la reacción con
fosgeno o un sustituto para el fosgeno tal como, por ejemplo,
cloroformato de triclorometilo, tiofosgeno o un éster de ácido
clorofórmico preferentemente se lleva a cabo en un disolvente tal
como dimetilformamida (DMF) o una mezcla de dioxano y agua (1:1) o
de tetrahidrofurano (THF) y diclorometano (DCM) (1:1) a temperatura
ambiente o enfriando, preferentemente a temperatura ambiente, y
agitando durante 10 minutos aproximadamente hasta 3 horas
aproximadamente, si fuese apropiado en presencia de una base.
\newpage
La reacción posterior del isocianato,
isotiocianato o carbamato así obtenido con la función amino de un
resto que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula
(III) con la formación de un enlace tiourea o urea correspondiente
se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales
conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J.
March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 802 ff.).
Según la invención, el carbamato o tiocianato o
isotiocianato preferentemente se hace reaccionar con la función
amino de un resto que se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula
(III) a temperatura ambiente con agitación durante 1 a 5 horas
aproximadamente, preferentemente de 2 a 3 horas aproximadamente, en
presencia de una base en un disolvente tal como dimetilformamida
(DMF).
Las bases que se pueden emplear en la variante
[C] del procedimiento de preparación según la invención son, por
ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina,
N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas de
manera convencional en pasos de este tipo, tal como, por ejemplo,
base de Hünig.
En la variante [D] del procedimiento de
preparación según la invención, un resto que se dirige a los
receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de
radicales de la fórmula (III) se une a través de su función amino
libre a la función carboxilo de un conjugado de la unidad de unión
al toxóforo (Ia) con la formación de un enlace amida. Esta reacción
se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales
conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J.
March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 802 ff.).
Según la invención se prefiere activar la función carboxilo del
compuesto (Ia) y a continuación hacerla reaccionar con un resto que
se dirige a los receptores de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula
(III) en un disolvente orgánico en presencia de una
base.
base.
Para la activación del grupo carboxilo, se
pueden usar reactivos de acoplamiento conocidos en la química de
péptidos, tal como se describe, por ejemplo, en Jakubke/Jeschkeit:
Aminosäuren. Peptide, Proteine [Amino acids, Peptides, Proteins];
Verlag Chemie 1982 o Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993). Los ejemplos
mencionados son anhídridos de ácido N-carboxílico,
cloruros de ácido o anhídridos mixtos, aductos con carbodiimidas,
por ejemplo, N,N'-dietil-,
N,N-diisopropil- o
N,N-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)N'-etil-carbodiimida,
meto-p-toluensulfonato de
N-ciclohexil-N'-(2-morfolinoetil)-carbodiimida,
o compuestos carbonilo tales como carbonildiimidazol, o compuestos
de 1,2-oxazolio tales como 3-sulfato
de
2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio
o perclorato de
2-terc-butil-5-metil-isoxazolio,
o compuestos de acilamino tales como
2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina
o anhídrido propano-fosfónico o cloroformato de
isobutilo o hexafluorofosfato de
benzotriazoliloxi-tris-(dimetil-amino)-fosfonio,
1-hidroxibenzotriazol o ésteres de
N-hidroxisuccinimida. Además se ha propuesto emplear
los componentes ácidos en forma de anhídrido de Leuchs. La variante
[D] del procedimiento de preparación anterior según la invención se
puede llevar a cabo a diversas condiciones de presión y temperatura,
por ejemplo, de 0,5 a 2 bar, y preferentemente a presión normal, o
de -30 a +100ºC y preferentemente de -10 a +80ºC, en disolventes
adecuados tales como dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano
(THF), diclorometano, cloroformo, alcoholes inferiores,
acetonitrilo, dioxano, agua o en mezclas de los disolventes
mencionados. Como norma, se prefiere la reacción en DMF,
diclorometano, THF, dioxano/agua o THF/diclorometano a temperatura
ambiente o enfriando en hielo y a presión normal.
Las bases que se pueden emplear en la variante
[D] del procedimiento de preparación según la invención son, por
ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina,
N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas
convencionalmente en etapas de este tipo tales como, por ejemplo,
base de Hünig.
Los compuestos obtenidos según el procedimiento
explicado anteriormente se pueden derivar adicionalmente con la
retirada de los grupos protectores que puedan estar presentes, la
posterior sustitución de los átomos de nitrógeno presentes en
posiciones preferidas en el procedimiento de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o sus sales
fisiológicamente aceptables. A modo de ejemplo, los grupos
t-butoximetoxicarbonilo usados convencionalmente como grupos
protectores para los átomos de nitrógeno se retiran en medio ácido,
por ejemplo, mediante la adición de ácido trifluoroacético. Agentes
alquilantes adecuados para la derivación de átomos de nitrógeno en
esta etapa son reactivos usados convencionalmente para este
propósito, con cuyo uso se puede unir, por ejemplo, un radical
alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo
sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o
insaturado opcionalmente sustituido al átomo de nitrógeno
apropiado. Con respecto a los sustituyentes preferentemente unidos a
los respectivos átomos de nitrógeno, se hace referencia a la
descripción anterior de los compuestos según la invención. Las
reacciones anteriores y su implementación son muy conocidas por
aquellos expertos en la materia y se describen con detalle en obras
de referencia tales como, por ejemplo, Houben-Weyl,
Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry],
Georg Thieme Verlag, Stuttgart.
Los derivados éster según la invención se pueden
convertir en los ácidos carboxílicos libres correspondientes de
manera convencional, tal como, por ejemplo, por hidrólisis básica
del éster.
Si se desea, los compuestos según la invención
se pueden convertir en sus sales fisiológicamente aceptables. Esto
se puede llevar a cabo por reacción con una base orgánica o
inorgánica tal como, por ejemplo, un hidróxido de un metal alcalino
o un hidróxido de un metal alcalino-térreo tales
como KOH, NaOH, LiOH, Mg(OH)_{2} o
Ca(OH)_{2}, cuyo resultado es la desprotonación del
grupo carboxilo terminal y la formación del carboxilato
correspondiente, o por reacción con un ácido orgánico o inorgánico
tal como, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido
fosfórico, ácido mandélico, ácido oleico, ácido linoleico o ácido
p-toluensulfónico, con lo que se protonan uno o más de los
átomos de nitrógeno presentes.
Los compuestos de la fórmula (Ia) que sirven
como sustancias de partida se pueden preparar mediante
procedimientos convencionales. La unión del toxóforo a las unidades
aminoácido se puede llevar a cabo mediante procedimientos
convencionales de la química de péptidos (cf., por ejemplo,
Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine [Amino acids,
Peptides, Proteins]; Verlag Chemie 1982,
Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie
[Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag Stuttgart, 4ª
Edición; Volumen 15.1 y 15.2, editado por E. Wünsch) y también se
describe, por ejemplo, en los documentos WO 96/31532 y WO 98/51703,
cuyos contenidos se incorporan en el presente documento por
referencia.
Si fuera apropiado, se debería unir una unidad
espaciadora Sp a un conjugado toxóforo-aminoácido
apropiado o a un toxóforo o a una modificación de la cadena lateral
de aminoácidos que puedan estar presentes, y se debe llevar a cabo
por la unión de una unidad espaciadora Sp'. Unidades espaciadoras Sp
posibles según la presente invención son un radical
arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene
7-11 átomos de carbono y un radical ácido
alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un
radical carbonilo o tiocarbonilo. Radicales de la cadena lateral
Sp' posibles según la presente invención son un radical
arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene
7-11 átomos de carbono.
La unión de los radicales arilaminocarbonilo o
arilaminotiocarbonilo apropiados se puede llevar a cabo como se ha
descrito anteriormente por reacción del toxóforo o del conjugado
toxóforo-aminoácido con un arilisocianato o
arilisotiocianato apropiado. Reacciones de este tipo también se
describen, por ejemplo, en el documento WO
96/31532.
96/31532.
La unión de los radicales carbonilo o
tiocarbonilo apropiados se puede llevar a cabo como se ha descrito
anteriormente por reacción del toxóforo o del conjugado
toxóforo-aminoácido con fosgeno o un sustituto para
el fosgeno tal como, por ejemplo, cloroformato de triclorometilo o
tiofosgeno.
La unión de los radicales ácido
alcanodicarboxílico apropiados se puede llevar a cabo mediante
procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la
materia, tal como se describe, por ejemplo, en
Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie
[Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag Stuttgart,
cuarta edición; Volumen 15.1 y 15.2, editado por E. Wünsch. Por
ejemplo, las funciones amino libres del toxóforo o del conjugado
toxóforo-aminoácido se pueden hacer reaccionar con
ácidos alcanodicarboxílicos apropiados opcionalmente activados como
se ha descrito anteriormente o anhídridos alcanodicarboxílicos tales
como anhídrido succínico o glutárico en presencia de una base en un
disolvente tal como diclorometano.
Las bases que se pueden emplear en el presente
documento son, por ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina,
piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases
usadas convencionalmente en etapas de este tipo tales como, por
ejemplo, base de Hünig.
Aunque según la invención se prefiere sinterizar
primero el conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia),
naturalmente también es posible construir primero en serie la unidad
de enlace sobre el resto que se dirige a los receptores de la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} o unirlo como un todo y a
continuación conectar el conjugado así obtenido al
toxóforo.
toxóforo.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, la síntesis de los compuestos según la
invención se lleva a cabo en fase sólida tal como una resina de
poliestireno, particularmente de manera preferible una resina de
poliestireno Wang disponible comercialmente. En este caso, la resina
primero se dilata en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF).
El resto de la fórmula (III) que se dirige a los receptores de la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} se une a continuación a la
resina a través de su función carboxilo mediante procedimientos
habituales. Por ejemplo, la unión del ácido carboxílico a la resina
se puede llevar a cabo en presencia de una base tal como piridina y
un reactivo que active la unidad carboxilo, tal como un haluro de
ácido, por ejemplo, cloruro de diclorobenzoílo, en un disolvente tal
como dimetilformamida (DMF). No obstante, también se pueden usar
otros reactivos usados de manera convencional para este propósito.
La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente y a presión
normal durante al menos 2 horas, preferentemente 12 horas,
particularmente de manera preferente 24 horas, el ácido carboxílico
que se emplea en exceso con respecto a la carga de la fase sólida,
preferentemente en un exceso de dos a tres veces. Todas las
reacciones descritas en el presente documento se pueden llevar a
cabo entonces sobre el resto de la fórmula (III) unido a la resina
y que se dirige al receptor de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3}, como se describe en el presente
documento.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, el toxóforo es camptotecina o un derivado de
camptotecina tal como 9-aminocamptotecina. La unión
de estos toxóforos a la unidad de enlace se puede llevar a cabo a
través del grupo C20-OH o, en el caso de la
9-aminocamptotecina, a través del grupo amino
libre.
La unidad camptotecina usada como compuesto de
partida puede estar presente en configuración 20(R) o
20(S) o como mezcla de estas dos formas esteroisoméricas. Se
prefiere la configuración 20(S).
Después de la unión del primer aminoácido a la
camptotecina, se pueden formar mezclas diastereoméricas. Los
diasterómeros puros de los compuestos según la invención se pueden
preparar mediante los procedimientos indicados anteriormente, por
ejemplo, mediante la separación de los diasterómeros de una manera
adecuada después del acoplamiento de la primera unidad aminoácido a
la camptotecina y la posterior retirada del grupo protector.
El radical de la fórmula (III) que se dirige a
los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} se puede
preparar a partir de compuestos de partida obtenibles comercialmente
mediante las siguientes etapas:
las etapas esenciales del procedimiento de
preparación según la invención son la reacción de un
\beta-aminoácido de la fórmula (IIIa)
en la
que
P es -(CH_{2})_{m}NO_{2},
-(CH_{2})_{m}O-alquilo
C_{1-6}, -(CH_{2})_{m}SO_{2}P',
-(CH_{2})_{m}COP',
-(CH_{2})_{m}CH_{2}O-alquilo
C_{1-6}, en las que m es en cada caso un número
entero de 0 ó 1;
P' es -OH, -O-alquilo
C_{1-6},
y los otros radicales son como se ha definido
anteriormente, en la que R^{7} adicionalmente puede ser una fase
sólida usada de manera convencional para llevar a cabo una reacción
en fase sólida;
con un compuesto R^{10}-A para
dar un compuesto de la fórmula (IIIb) en la que
R^{10} es -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''} o
- COR^{10'};
R^{10'} y R^{10''} son como se ha definido
anteriormente;
A es -Cl, -Br, -I, -O-triflilo,
-O-tosilo, -O-alquilo
C_{1-6},
-O-CO-alquilo
C_{1-6},
-O-CO-O-alquilo
C_{1-6}, -OC(CH_{3})=CH_{2};
y los otros radicales son como se ha definido
anteriormente;
la conversión del radical P en el radical Q,
en la que
Q es -(CH_{2})_{m}NH_{2},
-(CH_{2})_{m}OH, -(CH_{2})_{m}CH_{2}OH,
-(CH_{2})_{m}SO_{2}A, -(CH_{2})_{m}COA,
A es como se ha definido anteriormente;
m es un número entero de 0 ó 1;
la reacción del compuesto (IIIb) obtenido
anteriormente con un compuesto de la fórmula (IIIc) en la que
S es
ASO_{2}(CH_{2})_{n}-,
en la que
n es un número entero de 0
A es como se ha definido anteriormente; y
C es -NO_{2} o
y
X, R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15} son
como se ha definido anteriormente;
para dar un compuesto de la fórmula (IIId)
en la que los radicales son como se
ha definido
anteriormente;
si fuese apropiado la conversión de C, si C es
un grupo nitro, en una unidad urea, tiourea o guanidina
opcionalmente cíclica con la retención del radical (III); y
si fuese apropiado la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de los átomos de nitrógeno presentes
en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica.
Los derivados del
\beta-aminoácido de la fórmula (IIIa) están
disponibles comercialmente o son accesibles de forma simple
mediante procedimientos químicos habituales, tal como es sabido por
cualquier persona experta en la materia y se describen en obras de
referencia tales como Houben-Weyl, Methoden der
organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg
Thieme-Verlag, Stuttgart. En particular, se hace
referencia a los procesos de preparación para los derivados del
\beta-aminoácido descritos por Rodionow y col., J.
Am. Chem. Soc. 51, 1929, 844-846, Kunz y col.,
Angew. Chem. 101, 1989, 1042-1043 e Ishihara y col.,
Bull. Chem. Soc. Jpn., 68, 6, 1995, 1721-1730.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, los derivados del
\beta-aminoácido de la fórmula (IIIa) se obtienen
por reacción de ácido malónico con un derivado benzaldehído de la
fórmula (IIIa').
en la que R^{17} y P son como se
ha definido anteriormente, en presencia de amoniaco, compuestos de
amonio o aminas. En lugar de ácido malónico, también se puede usar
un éster, si fuese apropiado con la adición de una base empleada de
manera convencional para estos fines, tal como NaH o un alcóxido
sódico, preferentemente metóxido sódico o etóxido sódico.
Preferentemente, como compuesto de nitrógeno se emplea un compuesto
de amonio tal como, por ejemplo, acetato de
amonio.
Los derivados benzaldehído (IIIa') están
disponibles comercialmente o son accesibles de forma simple mediante
procedimientos químicos habituales, tal como es sabido por
cualquier persona experta en la materia y se describen en obras de
referencia tales como Houben-Weyl, Methoden der
organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg
Thieme-Verlag, Stuttgart.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, como compuesto de la fórmula (IIIa') se emplea
un derivado de nitrobenzaldehído tal como 3- o
4-nitrobenzaldehído o un derivado de
alcoxibenzaldehído tal como 3- o
4-metoxibenzaldehído.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, el \beta-aminoácido de la
fórmula (IIIa) se obtiene mediante reacción de cantidades
aproximadamente equimolares de ácido malónico, acetato de amonio y
3-nitrobenzaldehído o
3-metoxibenzaldehído en un disolvente tal como
isopropanol calentando durante unas horas, preferentemente de 2 a 6
horas, de 50 a 110ºC, preferentemente con el reflujo del disolvente,
en la atmósfera del entorno (es decir, al aire y a presión
normal).
Para las siguientes etapas de reacción, el grupo
carboxilo se bloquea mediante un grupo protector P convencional.
Grupos protectores de este tipo son conocidos por aquellos expertos
en la materia y no es necesario mencionarlos expresamente en el
presente documento. El grupo carboxilo está preferentemente de
manera particular esterificado, en el que P es un alquilo
C_{1-6} tal como, por ejemplo, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, un cicloalquilo
C_{3-7} tal como, por ejemplo, ciclopropilo,
ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, un arilo
tal como, por ejemplo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus
derivados sustituidos.
Además, el procedimiento de preparación según la
invención para los radicales de la fórmula (III) se puede llevar a
cabo en fase sólida. En este caso, el radical carboxilo puede estar
conectado a cualquier fase sólida usada de manera convencional para
reacciones de este tipo, tal como una resina de poliestireno, por
ejemplo, una resina de poliestireno Wang.
Según una forma de realización preferida de la
invención, el grupo carboxilo del \beta-aminoácido
anterior se esterifica por reacción con un alcohol tal como etanol
o un polímero usado de manera convencional para llevar a cabo una
reacción en fase sólida. Esto se puede llevar a cabo en condiciones
conocidas por aquellos expertos en la materia, tal como catálisis
ácida y, si fuese apropiado, la adición de un agente deshidratante
tal como diciclohexilcarbodiimida. No obstante, el
\beta-aminoácido se suspende preferentemente en el
alcohol apropiado presente en exceso, tal como etanol, se pasa HCl
a su través durante un período de 30 minutos aproximadamente a 2
horas aproximadamente y a continuación la mezcla se calienta en la
atmósfera ambiente durante unas horas, preferentemente de 1 a 6
horas aproximadamente y particularmente de manera preferente de 3 a
5 horas aproximadamente, de 50ºC aproximadamente a 100ºC
aproximadamente, preferentemente a temperatura de reflujo del
alcohol.
Los \beta-aminoácidos
protegidos en el grupo carboxilo accesibles de esta forma se hacen
reaccionar con un reactivo sulfonante, carbamoilante o acilante
adecuado para obtener los derivados sulfonamida, carbamato o amida
correspondientes. El reactivo sulfonante usado preferentemente es un
cloruro de sulfonilo de la fórmula
R^{10''}-SO_{2}Cl o un cloruro de carbamoilo de
la fórmula R^{10''}-OCOCl, en las que R^{10''}
es un alquilo C_{1-10} tal como metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo,
ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, o
camfor-10-ilo, un arilo tal como
fenilo, bencilo, tolilo, mesitilo o derivados sustituidos de éstos
tales como -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
-C_{6}(CH_{3})_{5},
-CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
2-clorofenilo,
3-cloro-fenilo,
4-clorofenilo, 3-aminofenilo,
4-aminofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo,
4-clorofenilmetilo,
2,4-diclorofenilmetilo,
2,6-diclorofenilmetilo,
2-metoxicarbonilfenilmetilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometilfenilo,
3,5-bis(trifluorometil)fenilo,
4-trifluorometoxifenilo,
fenil-metilo,
2-acetamido-4-metil-tiazol-5-ilo,
feniletilo, 1-fenilpropilo,
(S)-(+)-camfor-10-ilo,
(R)-(-)-camfor-10-ilo,
2-feniletenilo, 2-tiofenilo,
4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo,
3-metilfenilo, 4-metilfenilo,
4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo,
2,5-dimetilfenilo,
2-metoxi-5-metilfenilo,
2,3,5,6-tetrametilfenilo,
1-naftilo, 2-naftilo,
4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo,
2-cloro-6-metilfenilo,
2-cloro-4-fluorofenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3-cloro-6-metoxifenilo,
2-trifluorometilfenilo,
2-alquilsulfonilfenilo,
2-arilsulfonilfenilo,
3-(N-acetil-6-metoxi)anilina,
4-acetamidofenilo,
2,2,2-trifluoroetilo,
5-cloro-3-metil-benzotiazol-2-ilo,
N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo,
tio-fen-2-ilo,
isoxazol-5-ilo,
2-cloropiridin-3-ilo,
piridin-3-ilo,
5-metilisoxazol-3-ilo,
1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo,
2,2-dimetiletenilo,
2-cloropiridin-5-metilo,
5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo,
(S)-camfan-1-ilo,
(R)-camfan-1-ilo,
8-quinolinilo, o un análogo heterocíclico de los
radicales cíclicos anteriormente mencionados. En lugar de los
cloruros de sulfonilo o carbamoilo anteriormente mencionados,
también es posible emplear los fluoruros, bromuros o yoduros
correspondientes. Como reactivo acilante, los haluros de ácido
carboxílico o anhídridos de ácido carboxílico apropiados se hacen
reaccionar con el grupo amino, siendo preferidos según la invención
los cloruros de ácido
alquil-C_{1-6}-carboxílico
apropiados tal como cloruros de ácido metil-, etil-, propil-,
isopropil-, butil-, isobutil-, t-butil-, pentil-, isopentil-,
neopentil-, hexil-, cicloalquilo C_{3-7} tal como
ciclopropil-, ciclobutil-, ciclopentil-, ciclohexil-, arilo tal como
fenil-, bencil-, tolilcarboxílico o sus derivados sustituidos. Para
la preparación de los radicales urea o tiourea, el grupo amino
preferentemente primero se hace reaccionar con un derivado de ácido
carbónico o un ácido tiocarbónico tal como un éster del ácido
clorofórmico o tiofosgeno y a continuación con una amina deseada.
Las reacciones anteriores y su implementación son muy conocidas por
aquellos expertos en la materia y se describen con detalle en obras
de referencia tales como, por ejemplo, Houben-Weyl,
Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry],
Georg Thieme Verlag, Stuttgart.
Según una forma de realización preferida de la
invención, el \beta-aminoácido protegido en el
grupo carboxilo de la fórmula (IIIa) se trata con una cantidad
equimolar o un ligero exceso del agente sulfonante apropiado, por
ejemplo, cloruro de fenilsulfonilo, o de agente acilante, por
ejemplo, cloruro de mesitilacetilo, enfriando, preferentemente a
0ºC, en un disolvente tal como piridina o dioxano en atmósfera
ambiente en presencia de una base tal como una amina,
preferentemente trietilamina o diisopropiletilamina, y la mezcla se
agita a esta temperatura durante 10 minutos aproximadamente hasta 3
horas aproximadamente. En el caso de la sulfonilación, a esto le
sigue la agitación a temperatura ambiente durante unas horas,
preferentemente de 2 a 6 horas aproximadamente.
Antes de la síntesis del grupo enlazador L, el
radical P del compuesto de la fórmula (IIIb) se debe convertir en
un grupo Q que puede participar en una sustitución nucleófila bien
como reactivo nucleófilo o como sustrato. Si P incluye un grupo
nitro, éste se reducirá al grupo amino correspondiente, que según la
presente invención se puede llevar a cabo preferentemente con la
adición de cloruro de estaño (II) a una disolución del compuesto de
la fórmula (IIIb) en un disolvente tal como etanol y el
calentamiento posterior de 50ºC a 110ºC aproximadamente,
preferentemente con el reflujo del disolvente, durante unas horas,
preferentemente de 1 a 4 horas aproximadamente, en atmósfera
ambiente. Si P incluye un grupo éter, la liberación del grupo
hidroxilo correspondiente preferentemente se lleva a cabo mediante
la adición de un ácido de Lewis tal como tribromuro de boro en un
disolvente tal como diclorometano enfriando, preferentemente a
-78ºC, y la posterior agitación durante unas horas, preferentemente
de 6 a 24 horas, a temperatura ambiente. Si P incluye un grupo ácido
sulfónico o ácido carboxílico, preferentemente se lleva a cabo una
conversión en el haluro de sulfonilo o de ácido carboxílico
correspondiente. Esto se puede llevar a cabo de una manera conocida
por aquellos expertos en la materia, por ejemplo, por reacción del
ácido sulfónico o carboxílico correspondiente con cloruro de
tionilo.
El compuesto preparado de esta forma a
continuación se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula
(IIIc)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
S es
ASO_{2}(CH_{2})_{n}-,
en la que
n es un número entero de 0
A es como se ha definido anteriormente; y
C es -NO_{2} o y
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
X, R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15}
son como se ha definido anteriormente;
\newpage
para dar un compuesto de la fórmula (IIId)
en la que los radicales son como se
ha definido anteriormente. Esta reacción formalmente representa la
sustitución de un grupo saliente en uno de los compuestos de
partida por una unidad nucleófila en el otro compuesto de partida,
en cada
caso.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, los reactivos se mezclan juntos en cantidades
aproximadamente equimolares en presencia de una base tal como
piridina o hidruro sódico y, si fuera apropiado, en un disolvente
tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano (THF) o dimetilformamida
(DMF) en atmósfera ambiente a temperatura ambiente y enfriando,
preferentemente a 0ºC aproximadamente, y se agita durante unas
horas, preferentemente de 1 h aproximadamente a 24 horas
aproximadamente, a temperatura ambiente o enfriando, por ejemplo, a
0ºC.
Los compuestos de la fórmula (IIId) así
obtenidos se convierten en los radicales de la fórmula (III) según
la invención por conversión del grupo nitro terminal en una unidad
guanidina, urea o tiourea cíclica o de cadena abierta.
Para esto, el grupo nitro primero se convierte
según la invención en un grupo amino, preferentemente con la
adición de un agente reductor habitual tal como cloruro de estaño
(II), si fuera apropiado en presencia de disolventes tales como
etanol, agitando la mezcla de reacción y calentando de 50ºC a 110ºC,
preferentemente a temperatura de reflujo del disolvente, en
atmósfera ambiente durante 2 horas aproximadamente.
El grupo amino así obtenido se convierte a
continuación en una unidad guanidina, urea o tiourea. Para esto, el
grupo amino anterior primero se hace reaccionar preferentemente con
un derivado éster de ácido carbónico o éster de ácido tiocarbónico
en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF) en presencia de
cloruro de mercurio (II) enfriando, preferentemente a 0ºC
aproximadamente, y agitando durante 10 minutos aproximadamente a 3
horas aproximadamente enfriando, preferentemente a 0ºC
aproximadamente, y si fuera apropiado posteriormente a temperatura
ambiente. El derivado éster de ácido carbónico o éster de ácido
tiocarbónico empleado preferentemente puede ser fosgeno,
trifosgeno, tiofosgeno, ésteres de ácido clorofórmico o derivados de
tiopseudourea, prefiriéndose para la preparación de los derivados
de urea los ésteres de ácido clorofórmico obtenibles comercialmente,
prefiriéndose el tiofosgeno para la preparación de los derivados de
tiourea y prefiriéndose los derivados de tiopseudourea para la
preparación de los derivados de guanidina.
Los carbamatos o isotiocianatos formados de esta
forma se pueden convertir en los derivados de urea, tiourea y
guanidina correspondientes por reacción con aminas apropiadas. Las
aminas usadas pueden ser sustancias de la fórmula HNRR', en la que
R y R' independientemente la una de la otra o simultáneamente pueden
ser hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin
sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical
heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, un
radical alquilamina, un radical alquilamida o pueden estar
conectados entre sí y junto con el átomo de nitrógeno pueden formar
un sistema anular heterocíclico opcionalmente sustituido que puede
estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos
adicionales. Con respecto a los radicales preferidos sobre la amina,
se hace referencia a la descripción anterior de los compuestos
según la invención. Según la invención, el carbamato o isocianato
preferentemente se hace reaccionar con una amina a temperatura
ambiente con agitación durante 1 a 5 horas aproximadamente,
preferentemente de 2 a 3 horas aproximadamente, en presencia de una
base auxiliar tal como diisopropiletilamina en un disolvente tal
como dimetilformamida (DMF). En el caso de la preparación de
derivados de guanidina cíclicos, el isocianato correspondiente
preferentemente se calienta primero en etanol durante unas horas,
preferentemente de 12 a 24 horas aproximadamente, y a continuación
se calienta con una amina tal como diaminoetano en un disolvente
tal como tolueno, dimetilformamida (DMF) o una mezcla de ambos.
Según una forma de realización preferida
adicional de la presente invención también es posible generar el
grupo guanidina, urea o tiourea anterior sobre el compuesto de la
fórmula (IIIc) de la forma anterior y a continuación hacer
reaccionar el compuesto de la fórmula (IIIc) así obtenido con el
compuesto de la fórmula (IIIb) de la manera descrita
anteriormente.
Los compuestos obtenidos según el procedimiento
explicado anteriormente se pueden derivar adicionalmente con la
retirada de grupos protectores que pudieran estar presentes, la
sustitución posterior de átomos de nitrógeno presentes en
posiciones preferidas en el procedimiento de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o sus sales
fisiológicamente aceptables. Por ejemplo, los grupos
t-butoximetoxicarbonilo usados convencionalmente como grupos
protectores para átomos de nitrógeno se retiran en un medio ácido,
por ejemplo, con la adición de ácido trifluoroacético. Agentes
alquilantes adecuados para la derivación de átomos de nitrógeno son
reactivos usados convencionalmente para este fin en esta etapa, a
los que puede estar unido, por ejemplo, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado,
opcionalmente sustituido al átomo de nitrógeno correspondiente. Con
respecto a los sustituyentes unidos preferentemente a los
respectivos átomos de nitrógeno, se hace referencia a la
descripción anterior de los compuestos según la invención. Las
reacciones anteriores y su implementación son muy conocidas por los
expertos en la materia y se describen con detalle en obras de
referencia tales como, por ejemplo, Houben-Weyl,
Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry],
Georg Thieme Verlag, Stuttgart. Los derivados éster según la
invención se pueden convertir en los ácidos carboxílicos libres
correspondientes de una manera convencional, tal como, por ejemplo,
por hidrólisis básica del éster.
Si se desea, los compuestos según la invención
se pueden convertir en sus sales fisiológicamente aceptables. Esto
se puede llevar a cabo por reacción con una base orgánica o
inorgánica tal como, por ejemplo, un hidróxido de un metal alcalino
o un hidróxido de un metal alcalino-térreo tales
como KOH, NaOH, LiOH, Mg(OH)_{2} o
Ca(OH)_{2}, mediante la que se desprotona el grupo
carboxilo terminal y se forma el carboxilato correspondiente, o por
reacción con un ácido orgánico o inorgánico tal como, por ejemplo,
ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido
mandélico, ácido oleico, ácido linoleico o ácido
p-toluensulfónico, mediante la que se protonan uno o más de
los átomos de nitrógeno presentes.
Los conjugados según la invención se pueden usar
como componentes del compuesto activo para la producción de
medicamentos contra trastornos carcinomatosos. Para esto, se pueden
convertir en las formulaciones habituales tales como comprimidos,
comprimidos recubiertos, aerosoles, píldoras, gránulos, jarabes,
emulsiones, suspensiones y disoluciones de una manera conocida
usando excipientes o disolventes inertes no tóxicos
farmacéuticamente adecuados. Preferentemente, los compuestos según
la invención se usan en el presente documento en una cantidad tal
que su concentración en la mezcla total es del 0,5 aproximadamente
al 90% en peso aproximadamente, la concentración que depende, entre
otros, de la indicación correspondiente del medicamento.
Las formulaciones anteriormente mencionadas se
producen, por ejemplo, extendiendo los compuestos activos con
disolventes y/o excipientes que tienen las propiedades, en las que,
si es necesario, se tienen que añadir adicionalmente emulsionantes
o dispersantes y, en el caso del agua como disolvente,
alternativamente un disolvente orgánico.
Los medicamentos según la invención se pueden
administrar de la manera habitual.
La presente invención se ilustra a continuación
con la ayuda de ejemplos no restrictivos y ejemplos
comparativos.
En los siguientes ejemplos, todos los datos
cuantitativos, si no se indica otra cosa, se refieren a porcentajes
en peso. Las determinaciones de la masa se llevaron a cabo por
cromatografía de líquidos de alto
rendimiento-espectrometría de masas
(HPLC-MS) usando el método de ionización por
electropulverización (ESI) o por espectroscopia de masas FAB o
MALDI.
HPLC - cromatografía líquida de alto
rendimiento
RP - fase inversa
ACN - acetonitrilo
DMF - dimetilformamida
DCM - diclorometano
THF - tetrahidrofurano
DIEA - diisopropiletilamina (base de Hünig)
NMP - N-metilpirrolidona
TFA - ácido trifluoroacético
Fmoc -
9-fluorenilmetoxicarbonilo
RT - temperatura ambiente
MTBE - metil-terc-butil-éter
Boc - terc-butiloxicarbonilo
TLC - cromatografía de capa fina
DMAP - dimetilaminopiridina
DMSO - dimetilo sulfóxido
Una suspensión de 10 g (28,7 mmol) de
20(S)-camptotecina en 500 ml de diclorometano
absoluto se trató con agitación con 14 g (2 eq.) de
N-carboxianhídrido de
N-(terc-butoxicarbonil)-valina y 1 g de
4-(N,N-dimetilamino)-piridina.
Después de calentar a temperatura de reflujo durante 4 días, la
mezcla se concentró sobre vacío. El residuo se agitó con 100 ml de
MTBE durante 20 min. A continuación se añadieron 200 ml de éter de
petróleo y la mezcla se filtró. Se obtuvieron 14,9 g del compuesto
Boc-protegido intermedio, que puede contener
pequeñas cantidades de epímero D-valina que, no
obstante, se puede retirar sin problemas después de la retirada del
grupo protector.
A continuación se agitaron 11,65 g de este
compuesto Boc-protegido intermedio a 5ºC durante 1 h
en una mezcla de 300 ml de diclorometano y 70 ml de ácido
trifluoroacético anhidro. Después de concentrar sobre vacío hasta
un pequeño volumen, el producto se precipitó con dietiléter y se
lavó abundantemente con dietiléter. El producto se precipitó de
nuevo en diclorometano/metanol usando dietiléter. Si era apropiado,
el producto en bruto se recogió de nuevo en 40 ml de metanol, y la
disolución se trató con 120 ml de MTBE y se enfrió a 0ºC. El
precipitado se eliminó por filtración y se obtuvieron 9,4 g (80%)
de trifluoroacetato de
20-O-(valil)-camptotecina después
de secar. [TLC: acetonitrilo/agua (20: 1); R_{f} = 0,39].
400 mg (1,185 mmol) de
N-terc-butoxicarbonil-glutamato de bencilo se
disolvieron en 40 ml de DMF y se trataron con 273 mg (1,2 eq) de
clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida
y con 240 mg (1,5 eq) de hidroxibenzotriazol. Después de 1 h, se
añadieron 665 mg (1,185 mmol) del compuesto del Ejemplo I.1 y 811
\mul de base de Hünig. La reacción de acoplamiento se completó
después de 2 h. La mezcla de reacción se concentró sobre vacío. El
residuo se recogió en diclorometano, la mezcla se extrajo dos veces
con agua y a continuación la fase orgánica se secó y se concentró
de nuevo. A continuación el residuo se recogió en
diclorometano/metanol, se añadió un poco de éter y a continuación se
precipitó con éter de petróleo. Se repitió este proceso de
purificación y el intermedio se eliminó por filtración y se secó
(rendimiento: 752 mg = 83%).
A continuación se agitaron 100 mg (0,13 mmol) de
este compuesto Boc-protegido intermedio a
temperatura ambiente durante 1 h con 10 ml de diclorometano y 1 ml
de ácido trifluoroacético anhidro. Después de concentrar sobre
vacío, el producto se recogió en diclorometano/metanol, se precipitó
con dietiléter y se lavó abundantemente con dietiléter. El producto
se precipitó de nuevo en diclorometano/metanol usando dietiléter. El
precipitado se eliminó por filtración y se obtuvieron 85 mg (84%)
del compuesto diana después de secar.
[TLC: acetonitrilo/agua 10:1 R_{f} = 0,4].
Análogamente, se prepararon los siguientes conjugados de
camptotecina-péptido parcialmente protegido
mediante la reacción de los conjugados de
camptotecina-aminoácido apropiados con aminoácidos
parcialmente protegidos adicionales. Si era apropiado, los grupos
protectores se retiraron según procedimientos conocidos:
\vskip1.000000\baselineskip
Inicialmente se introdujo 1 g (2,9 mmol) de
camptotecina en 50 ml de diclorometano y se trataron con 100 mg de
dimetilaminopiridina (DMAP) y 600 mg de anhídrido succínico. Después
de un tiempo de reacción de 44 h, se añadieron de nuevo cantidades
iguales de DMAP y anhídrido succínico y la mezcla se agitó durante
48 h más. Se purificó por cromatografía súbita en gel de sílice
(acetonitrilo--> acetonitrilo/agua (20:1)). Las fracciones
correspondientes se concentraron y el producto se precipitó en
diclorometano/metanol usando éter. Rendimiento: 160 mg (13%). [TLC:
(acetonitrilo/agua (10:1); R_{f} = 0,6].
Se disolvieron 666 mg (0,73 mmol) del compuesto
del Ejemplo 1.4 en 40 ml de DMF y se trataron con 500 \mul de
base de Hünig. A continuación se añadieron 87 \mul (1 eq) de
fenilisocianato obtenible comercialmente y la mezcla se agitó
durante toda la noche. A continuación se concentró y el residuo se
precipitó dos veces en diclorometano/metanol usando éter. El
precipitado se eliminó por filtración y después de secar se
obtuvieron 614 mg (90%) del intermedio protegido. [TLC:
(acetonitrilo) R_{f} = 0,66].
614 mg (0,658 mmol) de este compuesto intermedio
se disolvieron en 20 ml de DMF y se trataron con 2 ml de
piperidina. Después de agitar a temperatura ambiente durante 45
minutos, la mezcla se concentró. El residuo se precipitó dos veces
en diclorometano/metanol usando éter. Se eliminó por filtración y
después de secar se obtuvieron 365 mg (78%) del compuesto diana.
[TLC: (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial 5:1:0,2) R_{f} =
0,46].
Se calentó 3-nitrobenzaldehído
(151 g), acetato de amonio (94 g) y ácido malónico (127 g) a
temperatura de reflujo en isopropanol (1 l) durante 5 h. La
disolución se filtró y el precipitado se lavó con isopropanol
caliente (0,71). El producto en bruto se secó sobre vacío
(rendimiento: 146 g). RMN ^{1}H (D_{4}-MeOH):
3,09 (m, 2 H), 4,88 (m, 1 H), 7,74 (t, 1 H), 7,90 (d, 1 H), 8,33 (d,
1 H), 8,43 (s, 1 H).
Se suspendió clorhidrato del ácido
3-amino-3-nitrofenilpropiónico
procedente de II.1a (60 g) en 660 ml de etanol y se pasó a su
través HCl gaseoso durante 1 h. A continuación la mezcla de reacción
se calentó a temperatura de reflujo durante 4 h y se enfrió y se
concentró. Se obtuvo un sólido blanco (rendimiento: 62 g). RMN
^{1}H (D_{4}-MeOH): 1,22 (t, 3 H), 3,12 (dd, 1
H), 3,20 (dd, 1 H), 4,18 (c, 2 H), 4,95 (t, 1 H), 7,77 (t, 1 H),
7,94 (d, 1 H), 8,35 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H).
Se añadió diisopropiletilamina (66 ml) y
cloroformato de alilo (22 ml) en 150 ml de cloruro de metileno a
0ºC a una disolución de clorhidrato de
3-amino-3-(3-nitrofenil)-propionato
de etilo procedente de II.1b (47 g) en 350 ml de cloruro de
metileno. Después de un tiempo de reacción de 30 min, se añadió HCl
(1N, 100 ml). La fase orgánica se separó, se lavó con agua, se secó
sobre MgSO_{4} y se concentró. Se obtuvo un sólido blanco
(rendimiento: 56,4 g).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,19 (t, 3 H), 2,91
(d, 2 H), 4,09 (c, 2 H), 4,57 (m, 2 H), 5,18-5,26
(m, 3 H), 5,92 (m, 1 H), 6,04 (m, 1 H), 7,52 (t, 1 H), 7,68 (d, 1
H), 8,14 (d, 1 H), 8,20 (s, 1 H).
Se añadió cloruro de estaño (II) (64,6 g) a una
disolución de
3-aliloxicarbonilamino-3-(3-nitrofenil)-propionato
de etilo procedente de II.1c (18,8 g) en 245 ml de etanol, y la
mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 2 h.
Después de enfriar la disolución, se ajustó a pH = 7 usando NaOH 2
N, se calentó brevemente, se enfrió de nuevo y se filtró. A
continuación se extrajo con diclorometano, y la fase orgánica se
secó (MgSO_{4}) y se concentró. Se obtuvieron 10,9 g de
producto.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,18 (t, 3 H), 2,80
(m, 2 H), 4,08 (c, 2 H), 4,56 (m, 2 H), 5,06 (m, 1 H), 5,20 (d, 1
H), 5,30 (d, 1 H), 5,70 (m, 1 H), 5,90 (m, 1 H), 6,57 (d, 1 H), 6,62
(s, 1 H), 6,68 (d, 1 H), 7,11 (t, 1 H).
Se añadió cloruro de
3-nitrobencenosulfonilo (9,9 g) a 0ºC a una
disolución de
3-aliloxicarbonilamino-3-(3-aminofenil)-propionato
de etilo procedente de II.1d (10,9 g) en 100 ml de piridina.
Después de un tiempo de reacción de 2 h a 0ºC, la mezcla se
concentró, se trató con HCl 1 N (150 ml) y se extrajo con
diclorometano. Después de secar (MgSO_{4}), se retiró el
disolvente, y se obtuvieron 16,8 g de producto. RMN ^{1}H
(CDCl_{3}): 1,18 (t, 3 H), 2,78 (m, 2 H), 4,06 (c, 2 H), 4,53 (m,
2 H), 5,04 (c, 1 H), 5,18-5,35 (m, 2 H),
5,80-5,95 (m, 2 H), 6,79 (d, 2 H), 7,00 (d, 1 H),
7,03 (s, 1 H), 7,11 (d, 1 H), 7,24 (t, 1 H), 7,65 (t, 1 H), 8,03 (d,
1 H), 8,38 (d, 1 H), 8,61 (s, 1 H).
Se añadió cloruro de estaño (II) (39,7 g) a una
disolución de
3-aliloxicarbonilamino-3-(3-[3-nitrofenilsulfonilamino]-fenil)-propionato
de etilo procedente de II.1e (16,8 g) en 155 ml de etanol y la
mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 2 h.
Después de enfriar, la disolución se ajustó a pH = 7 usando NaOH 2
N, se calentó brevemente, se enfrió de nuevo y se filtró. A
continuación se extrajo con diclorometano, y la fase orgánica se
secó (MgSO_{4}) y se concentró. Se obtuvieron 7,3 g de producto.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,12 (t, 3 H), 2,73 (m, 2 H), 3,91 (s, 2
H), 4,02 (c, 2 H), 4,49 (m, 2 H), 5,01 (c, 1 H), 5,15 (d, 1 H), 5,24
(d, 1 H), 5,75 (m, 1 H), 5,84 (m, 1 H), 6,47 (s, 1 H), 6,69 (d, 1
H), 6,81 (d, 1 H), 6,88 (s, 1 H), 6,99 (d, 1 H), 7,03 (d, 1 H),
7,08-7,15 (m, 3 H).
Se añadió trietilamina (6,5 ml),
1,3-bis(t-butoxicarbonil)-2-metil-2-isotiourea
(8,23 g) y cloruro mercúrico (7,7 g) a 0ºC a una disolución de
3-aliloxicarbonilamino-3-(3-[3-aminofenilsulfonilamino]-fenil)-propionato
de etilo procedente de II.1f (10,5 g) en 320 ml de DMF. Después de
un tiempo de reacción de 30 min a 0ºC, la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 1,5 h más. El precipitado se retiró por
filtración y la disolución se concentró. Después de la
cromatografía (cloruro de metileno/metanol (40:1)), se obtuvieron
13,5 g de producto. RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,16 (t, 3 H), 1,51
(s, 9 H), 1,56 (s, 9 H), 2,76 (m, 2 H), 4,05 (c, 2 H), 4,53 (m, 2
H), 5,05 (m, 1 H), 5,21 (m, 1 H), 5,30 (m, 1 H), 5,73 (m, 1 H), 5,90
(m, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 7,01-7,09 (m, 3 H), 7,19
(t, 1 H), 7,36 (m, 2 H), 7,79 (d, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 10,25 (s, 1
H), 11,80 (s, 1 H).
Se añadió ácido acético (1,6 ml), dicloruro de
bistrifenilfosfina de paladio (110 mg) e hidruro de tributilestaño
(3,5 g) a una disolución de II.1g en cloruro de metileno (150 ml).
Después de 2,5 h, se añadió de nuevo dicloruro de
bistrifenilfosfina de paladio (110 mg) e hidruro de tributilestaño
(3,5 g) y la mezcla se agitó durante 24 h. La disolución se trató
con NaHCO_{3} saturado, se extrajo con cloruro de metileno, se
secó sobre MgSO_{4} y se concentró. Después de la cromatografía
(cloruro de metileno/metanol), se obtuvieron 4,8 g de producto.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,23 (t, 3 H), 1,51
(s, 9 H), 1,56 (s, 9 H), 2,54 (m, 2 H), 4,12 (c, 2 H), 4,33 (dd, 1
H), 7,05 (d, 1 H), 7,11 (m, 2 H), 7,21 (t, 1 H), 7,37 (t, 1 H), 7,42
(d, 2 H), 7,90 (d, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 10,25 (s, 1 H), 11,80 (s, 1
H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se dilataron 1,2 g de resina de poliestireno
Wang (carga 1,08 mmol/g) en DMF. El disolvente se eliminó por
filtración con succión y se añadió una disolución de 841 mg de ácido
(3R,S)-3-(9-fluorenil-metoxicarbonilamino)-3-(3-nitrofenil)-propiónico
(reactivo aminoácido, preparado protegiendo la función amino libre
del ácido
3-amino-3-(3-nitrofenilpropiónico
con FMCO de una manera convencional conocida) en 15 ml de DMF.
Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 min, la
suspensión se trató con 350 \mul de piridina y 540 mg de cloruro
de 2,6-diclorobenzoílo. Se agitó durante toda la
noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con
DMF, MeOH y DCM.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg
de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó
durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la
resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 450
\mul de DIEA en 500 \mul de THF y una disolución de 430 mg de
cloruro de 3-nitrobencenosulfonilo en 500 \mul de
THF. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A
continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y THF.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg
de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó
durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la
resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 500
\mul de DIEA en 12 ml de THF/DCM 1:1 y una disolución de 2757 mg
de éster del ácido 4-nitrofenilclorofórmico en 12 ml
de THF/DCM 1:1. Después de agitar a temperatura ambiente durante 45
min, se lavó con THF y DMF y se añadió una disolución de 943 mg de
propilamina y 2780 \mul de DIEA en 20 ml de NMP. Después de
agitar durante 10 h, la resina se lavó con DMF, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 450
\mul de DIEA en 500 \mul de THF y una disolución de 430 mg de
cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo en 500 \mul de
THF. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A
continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y THF.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg
de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó
durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la
resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
Para la retirada del producto, la resina se
agitó durante 1 h con 12 ml de TFA/DCM y se eliminó por filtración,
y el filtrado se concentró sobre vacío.
Se dilataron 1,2 g de resina de poliestireno
Wang (carga 1,08 mmol/g) en DMF. El disolvente se eliminó por
filtración con succión y se añadió una disolución de 841 mg de ácido
(3R,S)-3-(9-fluorenil-metoxicarbonilamino)-3-(3-nitrofenil)-propiónico
(reactivo aminoácido) en 15 ml de DMF. Después de agitar a
temperatura ambiente durante 15 min, la suspensión se trató con 350
\mul de piridina y 540 mg de cloruro de
2,6-diclorobenzoílo. Se agitó durante toda la noche
a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con DMF,
MeOH y DCM.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg
de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó
durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la
resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 450
\mul de DIEA en 500 \mul de THF y una disolución de 430 mg de
cloruro de 3-nitrobencenosulfonilo en 500 \mul de
THF. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A
continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y THF.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg
de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó
durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la
resina se trató con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 500
\mul de DIEA en 12 ml de THF/DCM 1:1 y una disolución de 2757 mg
de éster del ácido 4-nitrofenilclorofórmico en 12 ml
de THF/DCM 1:1. Después de agitar a temperatura ambiente durante 45
min, se lavó con THF y DMF y se añadió una disolución de 943 mg de
propilamina y 2780 \mul de DIEA en 20 ml de NMP. Después de
agitar durante 10 h, la resina se lavó con DMF, MeOH, THF y DCM.
Para la retirada del producto, la resina se
agitó durante 1 h con 12 ml de TFA/DCM y se eliminó por filtración,
y el filtrado se concentró sobre vacío.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitaron 100 mg (0,165 mmol) del compuesto
II.1 con 1 equivalente de 4-nitrofenilisocianato
durante 3 h en 10 ml de DMF. La mezcla se concentró, y el residuo
se recogió en diclorometano y se precipitó usando pentano. El
intermedio a (106 mg; 83%) se secó.
Se disolvieron 120 mg (0,156 mmol) del
intermedio a en metanol y se hidrogenó sobre paladio/carbono. El
catalizador se separó, la disolución se concentró y el residuo se
liofilizó en dioxano/agua (86 mg; 75% de intermedio b).
Se recogieron 76 mg (0,1027 mmol) del intermedio
b en metanol y se trataron con 154 \mul (3 eq.) de una disolución
de hidróxido de litio 2 M. Después de 6 h, se añadieron 51 \mul
más de la disolución de hidróxido de litio y la mezcla se agitó
durante 2 días. Se concentró, se precipitó en diclorometano usando
éter y así se obtuvo el intermedio c.
A continuación se recogieron 10 mg del
intermedio precipitado c en 4 ml de diclorometano y se trataron con
0,5 ml de ácido trifluoroacético. Después de 1,5 h, la mezcla se
concentró y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando
éter. Se obtuvieron 3 mg (30%) del compuesto diana.
[ESI-MS: m/e = 512 (M+H)^{+}].
Se agitaron 70 mg (0,166 mmol) del compuesto
II.13 con 54 mg (2 eq) de 4-nitrofenilisocianato
durante 1 h en 10 ml de DMF. La mezcla se concentró y el residuo se
purificó por cromatografía súbita en gel de sílice usando
diclorometano/metanol/amoniaco con una fuerza del 17% (15:2:0,2).
Después de la precipitación en diclorometano/metanol usando éter,
se obtuvo el intermedio a (29 mg; 30%).
Éste se disolvió en metanol y se hidrogenó sobre
paladio/carbono. El catalizador se separó, la disolución se
concentró y el residuo se liofilizó en dioxano/agua. Se obtuvieron
18 mg (74%) del compuesto diana.
Ejemplo
3.1
Se agitaron 300 mg (0,5 mmol) de material de
partida II.1 con 80 \mul de piridina y 166 mg (1,5 eq) de cloruro
de m-nitrobencenosulfonilo durante toda la noche en 10 ml de
diclorometano. Se añadieron 200 ml de diclorometano y 200 ml de
agua adicionales y la mezcla se agitó vigorosamente. La fase
orgánica se recogió y se concentró, y el residuo se sometió a
cromatografía en gel de sílice usando diclorometano/metanol 99:1.
Después de secar, se obtuvieron 274 mg (70%) de la
nitro-bencenosulfonamida correspondiente.
Se recogieron 265 mg (0,33 mmol) de la
nitrobencenosulfonamida en 30 ml de metanol y se hidrogenó sobre
paladio/carbono. Después de precipitar, se obtuvo la
aminobencenosulfonamida correspondiente.
Se disolvieron 192 mg (0,25 mmol) de la
aminobencenosulfonamida correspondiente en 20 ml de metanol y la
disolución se agitó durante toda la noche con 504 \mul (4 eq) de
una disolución de hidróxido de litio 2 M. Se concentró, se destiló
dos veces con diclorometano, y, después de la precipitación en
metanol usando éter, se obtuvieron 180 mg del ácido carboxílico
libre correspondiente.
Se disolvieron 180 mg (0,25 mmol) de este ácido
carboxílico libre en 15 ml de dioxano/agua (1:1) y se trataron con
38,5 \mul de tiofosgeno. Después de agitar a temperatura ambiente
durante 15 min, se añadieron 172 \mul (4 eq) de base de Hünig, y
la mezcla se agitó durante 10 minutos más y a continuación se
concentró. El residuo se recogió en diclorometano, se volvió a
destilar dos veces y a continuación se precipitó en diclorometano
usando éter. Se obtuvieron 208 mg del isotiocianato correspondiente
en forma de sal de la base de Hünig.
A continuación se retiró el grupo protector Boc
en diclorometano usando 4 ml de ácido trifluoroacético y la
guanidina sin proteger se precipitó en diclorometano/metanol usando
éter. Se obtuvieron 80 mg de la guanidina correspondiente.
Se disolvieron 30 mg (0,037 mmol) de la
guanidina correspondiente en 3 ml de DMF y a continuación se
trataron con 24 mg (0,8 eq) del material de partida 1,3 y con 26
\mul de base de Hünig. Después de agitar a temperatura ambiente
durante 20 min, la mezcla se concentró y el residuo se agitó primero
con diclorometano y a continuación con metanol. Se añadió metanol
hasta que la disolución se hubo completado y la mezcla se precipitó
usando éter.
Se obtuvieron 20 mg (47%) del producto
objetivo.
[TLC: (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial
(5:1:0,2); R_{f} = 0,19]. [FAB-MS: m/e = 1159
(M+H)^{+}].
Ejemplo
3.2
La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al
Ejemplo 3.1 con la excepción de que en la primera etapa se empleó
cloruro de p-nitrobencenosulfonilo en lugar cloruro de
m-nitrobencenosulfonilo.
[TLC: (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial
(5:1:0,2); R_{f} = 0,18]. [FAB-MS: m/e = 1159
(M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.3
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al
Ejemplo 3.1 con la excepción de que en la primera etapa el material
de partida II.1 se acopló a ácido p-aminobenzoico en
presencia de clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida/hidroxibenzotriazol
según condiciones normales en lugar de cloruro de
m-nitro-bencenosulfonilo. [TLC del producto
final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%)
(15:6:0,6); R_{f} = 0,25]. [FAB-MS: m/e = 1123
(M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.4
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La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al
Ejemplo 3.2 con la excepción de que en la última etapa de reacción,
la reacción tiene lugar con el material de partida 1.4 en lugar de
con el material de partida 1.3 y a continuación el grupo protector
Fmoc se separa según condiciones normales usando piperidina. [TLC
del producto final: (diclorometano/- metanol/amoniaco (con una
fuerza del 17%) (10:10:1); R_{f} = 0,16]. [FAB-MS:
m/e = 1150 (M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.5
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\vskip1.000000\baselineskip
52 mg (0,073 mmol) del material de partida
Boc-protegido II.14 (intermedio c) se trataron con
7,8 \mul de tiofosgeno en 5 ml de dioxano/agua (1:1) y la mezcla
se agitó durante 30 min. A continuación se añadieron 37 \mul de
base de Hünig y la mezcla se concentró.
El residuo se recogió en diclorometano y se
trató con 1 ml de ácido trifluoroacético. Después de 3 h, la mezcla
se concentró y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol
usando éter.
El residuo obtenido se disolvió en DMF como se
ha descrito en el Ejemplo 3.1 en la última fase y a continuación se
hizo reaccionar con el material de partida 1.3 en presencia de base
de Hünig. Rendimiento: 53%. [TLC del producto final:
(diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:8:0,8);
R_{f} = 0,26]. [FAB-MS: m/e = 1138
(M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.12
La preparación se llevó a cabo de manera análoga
al Ejemplo 3.6 a partir de los materiales de partida II.12 y
I.3.
[TLC del producto final:
(diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:3:0,3);
R_{f} = 0,19]. [FAB-MS: m/e = 1202
(M+H)^{+}].
Ejemplo
3.13
La preparación se llevó a cabo de manera análoga
al Ejemplo 3.6 a partir de los materiales de partida II.16 y I.3.
[TLC del producto final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una
fuerza del 17%) (15:4:0,5); R_{f} = 0,36]. [FAB.MS: m/e = 1181
(M+H)^{+}].
Ejemplo
3.16
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La preparación se llevó a cabo de manera análoga
al Ejemplo 3.15 a partir de los materiales de partida II.13 y
9-aminocamptotecina ([preparada según Wani y col.
(J. Med. Chem. 29 (1986), 2358)] [TLC del producto final:
(diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:4:0,5);
R_{f} = 0,38]. [ESI-MS: m/e = 826
(M+H)^{+}].
Ejemplo
3.17
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En primer lugar, se disolvieron 200 mg del
material de partida II.1 en 10 ml de metanol y se trataron con 825
\mul de una disolución de hidróxido de litio 2 M y la mezcla se
agitó durante toda la noche. Después de que la reacción se hubo
completado, se concentró y el producto se precipitó en
diclorometano/metanol usando éter. Además de la escisión del éster,
uno de los dos grupos protectores Boc también se separó en este
paso. A continuación se preparó la tiourea a partir de este
intermedio y 9-aminocamptotecina ([preparada según
Wani y col. (J. Med. Chem. 29 (1986), 2358)] de manera análoga al
Ejemplo 3.15. En la última etapa, a continuación se separa el grupo
Boc restante usando ácido trifluoroacético en diclorometano.
[TLC del producto final: acetonitrilo/agua/ácido
acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,5].
[MALDI-MS: m/e = 783 (M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.18
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En primer lugar, se disolvieron 200 mg del
material de partida II.1 en 10 ml de metanol y se trataron con 825
\mul de una disolución de hidróxido de litio 2 M y la mezcla se
agitó durante toda la noche. Después de que la reacción se hubo
completado, se concentró y el producto se precipitó en
diclorometano/metanol usando éter. Además de la escisión del éster,
uno de los dos grupos protectores Boc también se separó en este paso
(intermedio a).
Se disolvieron 60 mg (0,134 mmol) del material
de partida I.11 en 5 ml de DMF y a continuación se trataron con 31
mg (1,2 eq) de clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida
y 27 mg (1,5 eq) de hidroxibenzotriazol. La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 30 min y se añadieron 64 mg del
intermedio a y a continuación 69 \mul de base de Hünig. Después
de agitar a temperatura ambiente durante 4 h, la mezcla se concentró
y el residuo se agitó con 5 ml de agua. La fase acuosa se concentró
y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice
(diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%)
15:1:0,1-> 15:2:0,2). Las fracciones correspondientes se
combinaron y se precipitaron en diclorometano/metanol usando éter
(intermedio b). Rendimiento: 31 mg (26%) [TLC del intermedio b:
(diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:4:0,5);
R_{f} = 0,44].
En la última etapa, el grupo Boc restante a
continuación se separa de 30 mg de intermedio b usando 1 ml de
ácido trifluoroacético en 5 ml de diclorometano. Se obtuvieron 30 mg
(100%) del compuesto diana. [TLC del producto final:
acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,45].
[FAB-MS: m/e = 808 (M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En primer lugar, se disolvieron 200 mg del
material de partida II.1 en 10 ml de metanol y se trataron con 825
\mul de una disolución de hidróxido de litio 2 M y la mezcla se
agitó durante toda la noche. Después de que la reacción se hubo
completado, se concentró y el producto se precipitó en
diclorometano/metanol usando éter. Además de la escisión del éster,
uno de los dos grupos protectores Boc también se separó en este paso
(intermedio a).
Se disolvieron 68 mg (0,11 mmol) del compuesto
del material de partida 1.6 en 5 ml de DMF y a continuación se
trataron con 25 mg (1,2 eq) de clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida
y 22 mg (1,5 eq) de hidroxibenzotriazol. La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 30 min y a continuación se añadieron
52 mg del intermedio a y 38 \mul de base de Hünig. Después de
agitar a temperatura ambiente durante 2 días, la mezcla se
concentró y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando
éter. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice
(acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (10:1:0,05). Las fracciones
apropiadas se combinaron, el disolvente se retiró por evaporación y
el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando éter
(intermedio b). Rendimiento: 29 mg (24%) [TLC del intermedio b:
acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (10:1:0,1); R_{f} =
0,25].
En la última etapa, el grupo Boc restante a
continuación se separa de 25 mg de intermedio b usando 1 ml de
ácido trifluoroacético en 5 ml de diclorometano. Después de repetir
la precipitación en diclorometano/metanol usando éter, se
obtuvieron 18 mg (72%) del compuesto diana.
[TLC: acetonitrilo/agua/ácido acético glacial
(5:1:0,2); R_{f} = 0,38] [MALDI-MS: m/e = 978
(M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron 125 mg (0,2 mmol) del compuesto
del material de partida I.11 en 5 ml de DMF y a continuación se
trataron con 42 mg (0,22 mmol) de clorhidrato de
N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida
y 34 mg (0,3 mmol) de N-hidroxisuccinimida. La
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y a continuación
se concentró y el residuo se precipitó dos veces en diclorometano
usando éter.
Se trataron 10 mg (0,014 mmol) del intermedio
activado con 5,8 mg del material de partida II.13 y con 4,8 \mul
(0,028 mmol) de base de Hünig en 4 ml de DMF y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 4 h. A continuación se concentró y el
residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice
(diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%)
15:2:0,2-> 15:3:0,3). Las fracciones apropiadas se combinaron y
se precipitaron en diclorometano/metanol usando éter. Rendimiento:
6 mg (42%) [TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del
17%) (15:3:0,3) R_{f} = 0,14] [ESI-MS: m/e = 1035
(M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al
Ejemplo 3.20 partiendo del material carboxi de partida 1.8 y el
material de partida betaína II.13.
[TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una
fuerza del 17%) (15:3:0,3) R_{f} = 0,18] [ESI-MS:
m/e = 1148 (M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al
Ejemplo 3.20 partiendo del material carboxi de partida 1.9 y el
material de partida betaína II.13.
[TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una
fuerza del 17%) (15:4:0,5) R_{f} = 0,42] [ESI-MS:
m/e = 1134 (M+H)^{+}].
\newpage
Ejemplo
3.23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al
Ejemplo 3.20 partiendo del material carboxi de partida I.10 y el
material de partida betaína II.13.
[TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una
fuerza del 17%) (15:3:0,3); R_{f} = 0,24] [ESI-MS:
m/e = 1245 (M+H)^{+}].
Se purificaron \alpha_{v}\beta_{3}
procedentes de células A375 humanas de manera análoga al
procedimiento descrito por Wong y col. (Molecular Pharmacology, 50,
529-537 (1996)). En cada caso, se incubaron 10
\mul de \alpha_{v}\beta_{3} (5 ng) en TBS pH 7,6,
CaCl_{2} 2 mM, MgCl_{2} 1 mM, 1% de
n-octil-glucopiranósido (Sigma); se
incubaron 10 \mul de sustancia de prueba en TBS pH 7,6, 0,1% de
DMSO y 45 \mul de TBS pH 7,6, CaCl_{2} 2 mM, MgCl_{2} 1 mM,
MnCl_{2} 1 mM a temperatura ambiente durante 1 h. En cada caso, a
continuación se añadieron 25 \mul de cuentas SPA de WGA
(Amersham, 4 mg/ml) y 10 \mul de equistatina (0,1 \muCi,
Amersham, marcadas con cloramina-T). Después de 16
horas a temperatura ambiente, las muestras se midieron en un
aparato de medición de centelleo (Wallac 1450). Los resultados de la
prueba se muestran en la Tabla 1 a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Las líneas celulares de intestino grueso humano
SW 480 y HT29 (Nº ATCC CCL 228 y HTB38), las líneas celulares de
mama humana MDA-MB 231, MCF-7 y BT20
(Nº ATCC HTB-, 26, 22 y 23) y la línea celular de melanoma de ratón
B16F10 (CRL 6475) se crecieron hasta confluencia en platos de Roux
en medio RPMI 1640 con la adición de FCS al 10%. A continuación se
tripsinizaron y se recogieron en RPMI más FCS al 10% hasta un
recuento de 50.000 células o, para B16F10, de 20.000 células por
ml. Se añadieron 100 \mul de la suspensión celular/pocillo a una
placa de microtitulación de 96 pocillos y se incubó a 37ºC durante 1
día en una incubadora de CO_{2}. Se añadieron 100 \mul más de
medio RPMI y a continuación se añadió 1 \mul de DMSO con las
sustancias de prueba. El crecimiento se controló después de 6 días.
Para esto, se añadieron 25 \mul de disolución MTT (bromuro de
3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltrazolio)
a cada pocillo a una concentración de partida de 5 mg/ml de
H_{2}O. La placa se incubó a 37ºC durante 5 horas en una
incubadora de CO_{2}. A continuación el medio se aspiró y se
añadieron 100 \mul de isopropanol/pocillo. Después de agitar con
100 \mul de H_{2}O durante 30 min, se midió la extinción a 595
nm usando un lector de multiplacas Multiplate Reader
(BIO-RAD 3550.UV).
La acción citostática está indicada en la Tabla
2 como valor de CI_{50}, en cada caso para las líneas celulares
individuales.
\vskip1.000000\baselineskip
En todos los experimentos in vivo para
investigar la inhibición del crecimiento tumoral, se usaron ratones
desnudos atímicos (cepa NMRI nu/nu). El tumor se desarrolló mediante
el paso seriado en ratones desnudos. El origen humano del tumor se
confirmó mediante procedimientos enzimáticos e
inmunohistoquímicos.
El tumor se implantó subcutáneamente en ambos
flancos de ratones desnudos nu/nu de 6 a 8 semanas de edad. El
tratamiento se inició, dependiendo del tiempo de doblado, tan pronto
como los tumores hubieron alcanzado un diámetro de
5-7 mm. Los ratones fueron asignados aleatoriamente
al grupo de tratamiento o al grupo control (5 ratones por grupo que
tienen 8-10 tumores evaluables). Todos los tumores
individuales del grupo control crecieron progresivamente.
El tamaño de los tumores se midió en dos
dimensiones por medio de un pie de rey. A continuación se usó el
volumen del tumor, que se correlaciona bien con el recuento de
células, para todas las evaluaciones. El volumen se calculó según
la fórmula "longitud x anchura x anchura /2" ([a x b^{2}]/2,
a y b representan dos diámetros dispuestos ortogonalmente).
Se calcularon los valores del volumen tumoral
relativo (RTV) para cada tumor individual dividiendo el tamaño del
tumor el día X por el tamaño del tumor el día 0 (en el momento de la
separación aleatoria). Los valores medios del RTV se usaron
entonces para una evaluación posterior.
La inhibición del incremento del volumen tumoral
(volumen tumoral del grupo de prueba/grupo control, T/C, en
porcentaje) fue el valor medido final.
Los compuestos se pueden administrar diariamente
o con un calendario de terapia intermitente cada dos días, ya sea
por vía intraperitoneal, intravenosa, oral o subcutánea.
El compuesto del ejemplo 3.8 inhibió el
crecimiento tumoral del xenoinjerto MX1 de cáncer de mama humano que
crece subcutáneamente con una T/C óptima de 15,9 a una dosis de 40
mg/kg administrada el día 1-3 y
14-16.
Se extrajeron células de médula ósea del fémur
de ratones. Se incubaron 10^{5} células en medio McCoy 5A (0,3%
de agar) junto con GM-CSF murino recombinante
(Genzyme; formación de la colonia celular parental) y las
sustancias (10^{-4} a 100 \mug/ml) a 37ºC y 7% de CO_{2}. 7
días más tarde, se contaron las colonias (<50 células) y los
grupos de colonias (17-50 células).
Una serie de compuestos presenta una toxicidad
drásticamente reducida contra células madre in vitro
comparada con la camptotecina.
Claims (6)
1. Conjugado caracterizado por la fórmula
general (I)
(I)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp-IA
en la
que
CT denota un radical citotóxico o un radical de
un citostático o de un derivado citostático, que adicionalmente
puede llevar un grupo hidroxilo, carboxilo o amino,
AA1 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
AA2 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
A4 está ausente o es un aminoácido en
configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos
protectores o un radical Sp',
en la que
Sp' es un radical arilaminocarbonilo o
arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de
carbono,
Sp está ausente, es un radical
arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene
7-11 átomos de carbono o es un radical ácido
alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un
radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los
radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico que se dirige a un
receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, que
es un radical de la fórmula (III)
en la
que
R^{10} es -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''},
-COR^{10'}, -CONR^{10'} o -CS-NR^{10'}, o
representa un enlace directo a través del cual el radical de la
fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} independientemente de cualquier otro
es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin
sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical
heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a
través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente
unido al resto del conjugado;
R^{10''} es un radical alquilo o cicloalquilo
sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin
sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la
fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir o un radical arilo
sustituido o sin sustituir,
R^{16} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi
sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
R^{17} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi
sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
R^{12} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido
X' es N, O o S;
R^{13} está ausente, es -H, un radical alquilo
o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, -NO_{2}, -CN,
-COR^{13'}, -COOR^{13'}.
R^{13'} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o
puede contener heteroátomos adicionales;
R^{14} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido
R^{15} es hidrógeno, un radical alquilo o
cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido
o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido;
y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente
aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Conjugado según la reivindicación 1,
caracterizado porque
CT es camptotecina o
9-aminocamptotecina, que se puede estar unida al
resto del conjugado a través del grupo C20-OH o, en
el caso de 9-aminocamptotecina, a través del grupo
amino libre;
AA1 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo
constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, y
fenilalanina;
AA2 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo
constituido por lisina, glutamato, histidina, glicina, arginina,
ornitina y leucina, y opcionalmente puede llevar grupos protectores
o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo
constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina y
fenilalanina;
AA4 está ausente o es un aminoácido de origen
natural en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar
grupos protectores o un radical Sp',
en la que
Sp' es un radical fenilaminocarbonilo o
fenilaminotiocarbonilo,
Sp está ausente, es un radical
fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo o es un radical ácido
alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono o un
radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los
radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico de la fórmula
(III) que se dirige a un receptor de la integrina
\alpha_{v}\beta_{3},
en la que
R^{10} es SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''},
-COR^{10'}, -CONR^{10'}_{2} o
-CS-NR^{10'}_{2} o representa un enlace
directo, a través del cual el radical de la fórmula (III) está
opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo,
ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus
derivados sustituidos,
-C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
-C_{6}(CH_{3})_{5},
-CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3},
2-clorofenilo, 3-clorofenilo,
4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo,
4-clorofenilmetilo,
2,4-diclorofenilmetilo,
2,6-diclorofenilmetilo,
3-aminofenilo, 4-aminofenilo,
2-metoxicarbonilfenilmetilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometil-fenilo,
3,5-bis(trifluorometil)fenilo,
4-trifluoro-metoxifenilo,
fenilmetilo,
2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo,
feniletilo, 1-fenilpropilo,
(S)-(+)-camfor-10-ilo,
(R)-(-)-camfor-10-ilo,
2-feniletenilo, 2-tiofenilo,
4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo,
3-metilfenilo, 4-metilfenilo,
4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo,
2,5-dimetilfenilo,
2-metoxi-5-metilfenilo,
2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo,
2-naftilo, 4-fluorofenilo,
2,4-difluorofenilo,
2-cloro-6-metilfenilo,
2-cloro-4-fluoro-fenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3-cloro-6-metoxifenilo,
2-trifluorometilfenilo,
2-alquilsulfonilfenilo,
2-arilsulfonilfenilo,
3-(N-acetil-6-metoxi)anilina,
4-acetamidofenilo,
2,2,2-trifluoroetilo,
5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo,
N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo,
tiofen-2-ilo,
isoxazol-5-ilo, etoxi,
2-cloropiridin-3-ilo,
piridin-3-ilo, benciloxi,
5-metilisoxazol-3-ilo,
1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo,
2,2-dimetiletenilo,
2-cloropiridin-5-metilo,
5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo,
(S)-camfan-1-ilo,
(R)-camfan-1-ilo o
8-quinolinilo;
R^{10''} es un radical alquilo
C_{1-6}, un radical cicloalquilo
C_{3-7}, un radical arilo sustituido o sin
sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado
opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la
fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
dialquil-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}
o
\vskip1.000000\baselineskip
R^{16} es hidrógeno, CN, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, trifluorometoxi,
etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro, bromo o
yodo;
R^{17} es hidrógeno, CN, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, etoxi,
trifluorometoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro,
bromo o yodo;
R^{12} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
uno de los radicales (a1) a (a28)
X' es N, O o S;
R^{13} está ausente, es -H, metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo,
isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, -NO_{2}, -CN,
-COR^{7'}, -COOR^{7'},
R^{13'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo,
ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus
derivados sustituidos;
R^{14} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
uno de los radicales (a1) a (a28),
y
R^{15} es hidrógeno metilo, etilo, propilo,
isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo,
4-metilciclohexilo,
3,3,5-trimetilciclohexilo,
5-metil-2-hexilo,
fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos,
alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4},
amino-alquilo-C_{1-4},
alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
uno de los radicales (a1) a (a28),
y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente
aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Procedimiento para la preparación de
conjugados según la reivindicación 1, que comprende:
[A] hacer reaccionar un compuesto de la fórmula
(III) que tiene una función carboxilo libre u opcionalmente
activada, con un compuesto de la fórmula (Ia) que tiene un grupo
amino libre primario o secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales
tienen los significados indicados en la reivindicación
1,
en presencia de una base;
o
[B] hacer reaccionar un compuesto de fórmula
(III) que tiene una función amino libre primaria o secundaria,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por
ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster del ácido clorofórmico, si
fuese apropiado en presencia de una base,
seguida por la reacción con un compuesto de la
fórmula (Ia) que tiene un grupo amino libre primario o
secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales
tienen los significados indicados en la reivindicación
1,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en
puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
[C] hacer reaccionar un compuesto citotóxico o
citostático o de un derivado citostático CT que contiene un grupo
amino libre primario o secundario,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por
ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster de un ácido clorofórmico en
presencia de una base,
seguida de la reacción con un compuesto de
fórmula (III) que tiene una función amino libre primaria o
secundaria,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en
puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
[D] hacer reaccionar un compuesto de fórmula
(III) que contiene una función amino libre primaria o
secundaria,
con un compuesto de fórmula (Ia) que contiene
una función carboxilo libre u opcionalmente activada
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales
tienen el significado indicado en la reivindicación
1,
en presencia de una base;
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos
protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en
puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la
conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la
conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas
por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Procedimiento según la reivindicación 3,
caracterizado porque todas las etapas del procedimiento se
llevan a cabo en fase sólida.
5. Medicamento, que comprende al menos uno de
los conjugados según una de las reivindicaciones 1 a 2.
6. Uso de los compuestos según una de las
reivindicaciones 1 a 2 para la producción de medicamentos para el
tratamiento de trastornos carcinomatosos.
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