ES2330951T3 - Analogos de fosfolipido para el tratamiento de canceres. - Google Patents
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Abstract
El uso de un análogo de éter fosfolipídico para la producción de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer de pulmón, cáncer de mama o cáncer intestinal, en el que el análogo fosfolipídico se selecciona de: **(Ver fórmula)** en la que X se selecciona del grupo constituido por isótopos radiactivos de yodo; n es un número entero entre 16 y 30 e Y se selecciona del grupo que comprende NH2, N(R)2 y N+(R)3, en el que R es un sustituyente alquilo o arilalquilo o **(Ver fórmula)** en la que X es un isótopo radiactivo de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se selecciona del grupo constituido por H, OH, COOH, COOR y OR y Z se selecciona del grupo constituido por NH2, N(R)2 y N+(R)3, en el que R es un sustituyente alquilo o arilalquilo.
Description
Análogos de fosfolípido para el tratamiento de
cánceres.
La presente solicitud reivindica prioridad de la
solicitud provisional de EE.UU. 60/521.166, presentada el 2 de marzo
de 2004.
Se da a conocer en la presente memoria una
formación de imágenes de diagnóstico de tumores, y específicamente
una formación de imágenes de tumores usando análogos fosfolipídicos.
Sin embargo, la formación de imágenes de diagnóstico no es parte de
la invención.
La detección temprana del cáncer ha sido uno de
los objetivos principales de la tecnología de formación de imágenes
moderna, puesto que la identificación de un presunto tumor en una
etapa localizada mejora significativamente las oportunidades de
tratamiento exitoso y eliminación del tejido canceroso. Por lo
tanto, se han diseñado un gran número de estrategias de formación
de imágenes usando una variedad de técnicas y modalidades para
ayudar al médico a hacer un diagnóstico exacto lo antes posible.
Desgraciadamente, las técnicas de formación de
imágenes convencionales tales como tomografía computerizada (TC) e
IRM (formación de imágenes por resonancia magnética) están limitadas
en su capacidad de proporcionar un diagnóstico concluyente de una
presunta lesión, puesto que sólo son capaces de observar diferencias
en la densidad o morfología de los tejidos. A menudo es necesario
un procedimiento de biopsia más invasivo y costoso para
proporcionar un diagnóstico definitivo. En contraposición, las
técnicas de medicina nuclear tales como tomografía por emisión de
positrones (TEP) y tomografía por emisión monofotónica (SPECT)
pueden proporcionar información funcional o bioquímica sobre un
órgano o zona particular de interés. Sin embargo, el éxito de esas
técnicas de formación de imágenes nucleares depende en gran parte de
la captación selectiva y detección de productos radiofarmacéuticos
apropiados. La captación selectiva, a su vez, depende del desarrollo
de productos radiofarmacéuticos con un alto grado de especificidad
por el tejido diana. Desgraciadamente, los agentes localizadores de
tumor desarrollados hasta ahora para aplicaciones oncológicas tienen
sólo una aplicación limitada.
Por ejemplo, uno de estos compuestos de la
técnica anterior, citrato de galio ^{67}Ga, se identificó
originalmente por su capacidad de acumularse en tejido tumoral.
Desgraciadamente, el citrato de calcio ^{67}Ga se incorpora a una
variedad de otras lesiones no cancerosas también, incluyendo
lesiones inflamatorias, y pueden acumularse también cantidades
inaceptables de radiactividad en el tejido de hígado y bazo. El
rápido aumento de un producto radiofarmacéutico en estos órganos
puede interferir gravemente con la formación de imágenes de lesiones
cercanas y tener también un impacto negativo sobre la dosificación
que puede administrarse a un paciente con seguridad.
Ha sido un enfoque alternativo desarrollar
anticuerpos monoclonales (Mab) radiomarcados dirigidos a antígenos
específicos de tumores. Sin embargo, estos anticuerpos monoclonales
son sólo específicos del tejido tumoral particular para el que se
han producido, y por lo tanto no se localizarán generalmente en
tejido neoplásico. Además, el uso de Mab para formación de imágenes
de diagnóstico ha conducido a problemas adicionales, incluyendo
grados variables de expresión de antígeno, baja captación tumoral,
unión no específica y reacciones inmunogénicas adversas.
En un intento de enfrentarse a estos problemas,
los presentes inventores han identificado y desarrollado
recientemente una serie de compuestos novedosos que demuestran una
especificidad tumoral útil. Véanse, por ejemplo, las patentes de
EE.UU. nº 4.925.649, 4.965.391, 5.087.721, 5.437.030 y 6.417.384. Se
cree que estos análogos de éter fosfolipídico radioyodados
aprovechan una característica bioquímica única de las células
tumorales malignas, concretamente, la alta concentración de éteres
lipídicos de origen natural en las membranas celulares tumorales
respecto a los tejidos normales correspondientes. Aunque no se
entiende completamente el mecanismo preciso de acción, la hipótesis
predominante es que los análogos de éter fosfolipídico se atrapan en
las membranas tumorales. En consecuencia, estos compuestos se
localizan en tejido tumoral y permanecen en el sitio para
aplicaciones de diagnóstico y/o terapéuticas.
La retención selectiva de análogos de éter
fosfolipídico radiomarcados descrita en las patentes anteriores se
ha demostrado en una variedad de xenoinjertos de tumor de roedor y
animales y no en modelos tumorales espontáneos que se cree que
imitan más estrechamente la enfermedad humana. Desgraciadamente, los
datos obtenidos a partir de estos estudios han demostrado también
un aclaramiento relativamente rápido del compuesto radiofarmacéutico
de la sangre, y una acumulación indeseable en tejidos no diana.
Como se observa anteriormente, la captación por tejido no diana
puede reducir la eficacia de la formación de imágenes de
radiodiagnóstico al crear una alta actividad de fondo, o causar una
exposición excesiva de tejidos radiosensibles a la radiactividad
inyectada.
En consecuencia, sigue habiendo una necesidad
significativa en la técnica de productos radiofarmacéuticos que
exhiban un aclaramiento rápido de tejidos no diana así como una
semivida extendida en el plasma, reteniendo su especificidad y
avidez por tejidos neoplásico. Dicho agente no sólo debería ayudar a
la formación de imágenes no invasivas de tumores primarios y
metástasis, sino que debería servir también como portador de un
agente citotóxico para erradicación específica de sitio de tejidos
tumoral maligno, especialmente en lo que se refiere a las formas de
cánceres más frecuentemente diagnosticadas. Es adicionalmente
deseable que los productos radiofarmacéuticos sean selectivos de
tumores malignos y no de tejidos precancerosos, incluyendo adenomas
e hiperplasia.
Se diagnostican aproximadamente 147.000 nuevos
casos de cáncer colorrectal cada año en los Estados Unidos. Por
tanto, el cáncer colorrectal es el cuarto cáncer más común, dando
cuenta de 60.000 muertes al año^{1}. El tratamiento depende
principalmente de la etapa del cáncer, pero puede incluir cirugía,
radiación, quimioterapia y/o radiofrecuencia o crioablación. En los
seguimientos rutinarios de pacientes de cáncer colorrectal, sin
embargo, la determinación del antígeno carcinoembriónico (CEA), un
marcador de tumor colorrectal, y colonoscopias repetidas^{5} no
consiguen detectar la enfermedad recurrente en más del 50% de los
pacientes^{6}. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollo de
procedimientos adicionales para la detección de enfermedad
recurrente. Además, durante el tratamiento y diagnóstico usando
exploración por TC y ablación por RF, la información funcional de
exploraciones por TC es difícil de obtener. Con TC helicoidal de
contraste potenciado, puede valorarse la vascularidad del tumor en
cierto grado, pero no hay modo de determinar exactamente si las
células tumorales viables permanecen en la lesión por RF. Además,
las lesiones térmicas creadas por RF tienen normalmente un borde de
inflamación circundante en exploraciones por CT después del
procedimiento durante hasta 6 meses después del procedimiento. Se
ha usado exploración por TEP para seguir a los pacientes después de
ablación, pero el borde de inflamación circundante de las lesiones
térmicas por RF normalmente exhibe una captación aumentada, incluso
en ausencia de tumor viable. Esto reduce la sensibilidad y
especificidad para la detección temprana de tumor recurrente. En
consecuencia, son preferibles agentes como NM404 que son selectivos
y se retienen indefinidamente por células tumorales malignas, al
contrario que FDG que no es selectiva de células tumorales y va a
sitios infecciosos e hiperplasias (esófago de Barret). Además, los
compuestos como NM404 que contienen ^{124}I, que tiene una
semivida física de 4 días y puede enviarse a cualquier lugar del
mundo, son preferibles en comparación con FDG, que tiene una
semivida de 110 minutos y por lo tanto puede tener sólo una
distribución limitada a 321 km del sitio de producción. Se prefieren
además compuestos como NM404 que experimentan una retención
prolongada (no metabolizados) puesto que es más probable que puedan
tener un potencial terapéutico significativo cuando se emparejan
con un radioisótopo apropiado como ^{131}I. También los compuestos
como NM404, que pueden marcarse con una variedad de isótopos de
yodo y tienen una versatilidad elevada (diagnóstico y terapia, así
como herramienta para estudios animales experimentales), son
preferibles en comparación con FDG, que está limitada a ^{18}F
para exploración por TEP o potencialmente ^{19}F (estable) para
formación de imágenes por resonancia magnética aunque a niveles de
sensibilidad muy bajos. Independientemente de su capacidad de
orientación a tumor, la FDG, debido a su rápido metabolismo en
células tumorales, no tiene potencial para terapia. Por lo tanto,
son necesarios otros compuestos para investigar las recurrencias
locales después de RF. Igualmente, si el tumor se vuelve
metastásico por progresión o recurrencia del tumor local, es
altamente deseable una modalidad de formación de imágenes híbrida
(combinación de TEP y TC) que reemplaza a la exploración por TC y
TEP separada después del procedimiento.
Además, incluso cuando la quimioterapia es el
modo de tratamiento, es esencial una monitorización mejorada de la
respuesta a la quimioterapia. Por lo tanto, es deseable el
desarrollo de un marcador temprano para estudiar la respuesta a la
quimioterapia para permitir a los médicos detener rápidamente el uso
de regímenes quimioterapéuticos ineficaces sin exponer a los
pacientes a la toxicidad de tratamientos prolongados. Cuando la
terapia por radiación de haz externo es un tratamiento alternativo
para pacientes con tumores de histología similar, los tumores
pueden tener respuestas drásticamente diferentes ante la terapia por
radiación externa de intención curativa (XRT). Algunos pacientes
con cáncer colorrectal tratados con radiación preoperatoria tendrán
una respuesta completa, mientras que otros con histología similar
(a nivel de microscopio óptico) tendrán una mala respuesta al
tratamiento y la enfermedad recidivará. La respuesta a la radiación
es un factor predictivo del control tumoral último y supervivencia
para muchos cánceres, incluyendo muchos cánceres gastrointestinales,
cáncer de pulmón, cáncer de cabeza y cuello y cánceres
ginecológicos. La mayoría de procedimientos de caracterización de
la respuesta, aunque muy predictivos de respuesta, se efectúan
después de la terminación del tratamiento. Aunque algunas
evaluaciones clínicas durante el tratamiento son útiles para ajustar
el tratamiento^{14}, en la mayoría de los casos no hay un
procedimiento exacto de predecir la respuesta tumoral durante el
tratamiento real. Dicho ensayo, especialmente uno aplicable a un
amplio intervalo de sitios tumorales e histologías, sería
obviamente muy útil y deseable. Otros procedimientos de tratamiento
y diagnóstico incluyen ensayos moleculares que se han propuesto
para predecir la respuesta a terapia, y los esfuerzos recientes
incluyen el uso de micromatrices de ADN para identificar cambios
genéticos que se correlacionan con la respuesta o falta de respuesta
al tratamiento. Éstas están en investigación y ninguna en uso
clínico rutinario.
Aún otros procedimientos de diagnóstico y
tratamiento incluyen el uso de modalidades de formación de imágenes
para predecir la respuesta durante el tratamiento con XRT. Las
exploraciones por TEP durante el tratamiento usando FDG están bajo
investigación activa, en la que se compara la captación de isótopo
en el tumor primario a mitad de la terapia de radiación con la
captación antes del tratamiento. Varios estudios retrospectivos
sugieren que los pacientes con captación fuerte continuada durante
el tratamiento tienen peores resultados de control del tumor que
los pacientes cuyos tumores son menos ávidos por FDG durante el
tratamiento^{15}. Sin embargo, son extremadamente deseables
procedimientos de cribado, diagnóstico y tratamiento más eficaces
para diversos cánceres.
Otros tumores bien observados incluyen los
gliomas malignos, que son el tipo más común de tumores cerebrales
primarios. A pesar de un tratamiento agresivo con cirugía, radiación
y quimioterapia, la mayoría de los pacientes que alberga estos
tumores tiene menos de dos años de supervivencia después del
diagnóstico. Los avances recientes en neurorradiología y formación
de imágenes por resonancia magnética (IRM) han tenido un impacto
significativo sobre el diagnóstico temprano y el tratamiento de
estos tumores. Sin embargo, los gliomas más malignos tienen un
componente infiltrativo que se diferencia mal del tejido cerebral
edematoso mediante las técnicas de formación de imágenes actuales.
A menudo es este componente del tumor el que es más difícil de
tratar y el responsable de la recurrencia local. Indudablemente,
una mejor visualización de las células de glioma invasivas es
deseable para un tratamiento terapéutico significativo.
Igualmente, el cáncer pancreático es una
enfermedad altamente letal con la peor probabilidad de supervivencia
entre todas las malignidades importantes. Es la quinta causa de
muerte por cáncer en los Estados Unidos y, de todos los cánceres
recién diagnosticados en los Estados Unidos, el 2% al año son
debidos a cáncer pancreático. Sin embargo, es una de las
enfermedades más altamente letales, que da cuenta de un 5% de todas
las muertes por cáncer. Millar B.A. et al., Pub. NIH nº
96-4104, Bethesda, MD, 1996. Esto se demuestra por
el hecho de que no hay supervivientes de 5 años en pacientes con la
enfermedad no extirpable. Además, aunque la extirpación quirúrgica
ofrece la única esperanza de cura, la supervivencia de 5 años
después de la extirpación es sólo del 20%. Geer R.J., Brennan M.F.,
Am. J. Surg. 1993; 165: 68-72; Yeo C.J.,
Cameron J.L., et al., Ann. Surg. 1997. Aunque la exploración
por TEP con 18-FDG se ha mostrado prometedora en la
formación de imágenes de una variedad de otros cánceres primarios,
parece tener sólo una capacidad limitada de mejorar la capacidad de
formación de imágenes de exploración por TC para pacientes con
cáncer pancreático, particularmente para valorar la enfermedad
metastásica. Kasperk R.K., Riesener K.P. et al., World Surg.
2001; 25: 1134-1139; Sendler A., Avril N. et
al., World J. Surg. 2000; 24: 1121-1129. Por
tanto, continúa la necesidad de un procedimiento de formación de
imágenes exactas en pacientes con cáncer pancreático metastásico
oculto.
El cáncer hepatocelular es la malignidad de
órgano sólido más común en el mundo, debido a su etiología común de
lesión hepática crónica de hepatitis o alcoholismo. Los índices de
incidencia varían notablemente, de 2,1 por 100.000 en América del
Norte a 80 por 100.000 en regiones de alta incidencia de China. El
riesgo de desarrollar HCC en pacientes con cirrosis es de
1-6% al año. Aunque la extirpación es la única
opción curativa, sólo un 10-30% de los pacientes
son candidatos para cirugía en el momento de la presentación, debido
a una mala reserva hepática o a la presencia de enfermedad no
extirpable o metastásica. Confirmando la naturaleza agresiva de
esta enfermedad, la supervivencia a los 5 años es sólo del
15-35% después de extirpación curativa. Treiber G.
Digestive Diseases (2001) 19: 311-323.
El cáncer de mama es una preocupación sanitaria
importante para las mujeres de Estados Unidos hoy en día. Se
preveía que a casi 216.000 mujeres sólo en EE.UU. se les
diagnosticaría cáncer de mama en 2004 y de éstas se esperaba que
murieran 40.000. Una valoración exacta de la extensión metastásica
local, regional y distante es crítica para un tratamiento y gestión
óptimos de la enfermedad. El desarrollo de una modalidad de
formación de imágenes no invasiva que permita la detección y/o
caracterización de metástasis de cáncer de mama locales o distantes
incluyendo la implicación de nódulos linfáticos representaría un
avance significativo en la gestión de esta enfermedad. Aunque la
mamografía es el procedimiento de cribado actual de elección para la
detección inicial de cáncer de mama, la confirmación histológica y
la extensión regional a nódulos linfáticos vecinos se evalúan
típicamente mediante biopsia. Se han examinado extensamente ahora
procedimientos de formación de imágenes más sofisticados,
incluyendo exploración escintigráfica con
^{99m}Tc-Sestamibi y TEP con
^{18}F-FDG, pero no han tenido significativamente
impacto en la planificación del tratamiento debido principalmente a
su impredecible especificidad. Wahl, R.L., Quart J. of Nucl.
Med. (1998) 42: 1-7. El papel del la exploración
por TEP tiene la eficacia indicada, sin embargo, en la
monitorización de la respuesta tumoral a la quimioterapia. Smith
I.C., Welch A.E. et al., J. of Clin. Oncol. (2000) 18:
1676-1688; Schnelling M., Avril N. et al., J. of
Clin. Oncol. (2000) 18: 1689-1695. La terapia
con radiación tiene un papel bien establecido en el tratamiento del
cáncer de mama debido principalmente a la sensibilidad de muchos
tumores epiteliales sólidos, incluyendo carcinoma ductal
infiltrante, a la radiación ionizante. DeVita V., Hellman S.,
Rosenbert S., "Cancer: Principles and Practice of Oncology" 6ª
edición, Filadelfia (PA): Lippincott, Williams and Wilkins, 2002,
pág. 1667-1680. La indicación más común para
radiación en cáncer de mama es como tratamiento auxiliar después de
lumpectomía o mastectomía. En este contexto, se ha mostrado que la
terapia con radiación reduce drásticamente la incidencia de
recurrencia local y regional esterilizando depósitos microscópicos
en estos tejidos. La quimioterapia se ofrece cuando el paciente
tiene enfermedad metastásica o se considera que tiene un riesgo
aumentado de metástasis ocultas. En esta última indicación, la de
administración de quimioterapia auxiliar, los estudios confirman
una supervivencia mejorada en pacientes que reciben quimioterapia
auxiliar o terapia hormonal. La radiación se usa también en ajustes
paliativos con un buen efecto para reducir el dolor y los efectos de
volumen de metástasis en órganos sólidos y hueso. Muchos pacientes
recaen después de la terapia definitiva por razones que son
multifactoriales. La resistencia adquirida a la radiación y la
quimioterapia contribuyen indudablemente a la recurrencia después
de la terapia primaria. Adicionalmente, el uso de radiación está
asociado a toxicidades específicas que son generalmente de
aparición tardía y limitantes de la dosis. La fibrosis, lesión
nerviosa y necrosis de tejido blando pueden ser graves si se usan
dosis excesivas de radiación. El linfoedema de brazo es la
toxicidad más común y temida para pacientes con cáncer de mama, y es
el resultado lo más habitualmente de la combinación de disección
axilar (hecha con fines de diagnóstico) y radiación auxiliar en la
axila.
En contraposición con los nuevos medicamentos
anticancerosos que se orientan en gran medida a receptores o
moléculas específicos de cada tipo tumoral particular, los nuevos
compuestos que se basan en un mecanismo común aplicable a una
variedad de diferentes tipos tumorales son extremadamente
deseables.
Por tanto, continúa la necesidad clínica
perentoria de técnicas de formación de imágenes de cáncer de mama
no invasivas que proporcionen tanto una alta sensibilidad como
especificidad. Además, el potencial de suministrar una dosis
terapéutica de yodo 131 simultáneamente tanto a tumores primarios
como metastásicos es un beneficio añadido significativo.
El carcinoma broncopulmonar no microcítico
(NSCLC) es la causa principal de muerte por cáncer en los Estados
Unidos hoy en día. La extirpación quirúrgica en pacientes
apropiadamente seleccionados ofrece la mejor oportunidad de
supervivencia a largo plazo y puede ser curativa. La valoración
preoperatoria exacta de la extensión local, regional y metastásica
distante es por tanto crítica para una gestión óptima. La evaluación
del estado del nódulo linfático mediastínico es esencial porque la
metástasis nodal, que aparece en casi la mitad de los pacientes con
NSCLC, es probablemente la barrera más frecuente para la cura. Una
asignación de etapa exacta puede ahorrar también a pacientes la
morbilidad de procedimientos quirúrgicos innecesarios no
curativos.
La formación de imágenes con exploración
FDG-TEP se está convirtiendo rápidamente en el
método de referencia para la formación de imágenes de NSCLC debido
a sus índices de sensibilidad mejorados, particularmente cuando se
comparan con la formación de imágenes por TC. Sin embargo, es un
ensayo de formación de imágenes costoso que no está disponible en
la mayoría de prácticas en centros locales. Por tanto, continúa la
necesidad de una técnica de formación de imágenes que sea sensible,
específica y use recursos que estén fácilmente disponibles para la
mayoría de los pacientes.
La exploración por tomografía de emisión de
positrones (TEP) con ^{18}F-FDG ha generado un
considerable interés como técnica de formación de imágenes. Un
estudio reciente comparaba en perspectiva la capacidad de un
enfoque estándar de asignar la etapa de NSCLC (TC, ultrasonidos,
exploración ósea, etc.) y exploración por TEP para detectar
metástasis en nódulos linfáticos mediastínicos y sitios distantes.
Pieterman R.M., van Putten J.W.G., Meuzzelaar J.J., Mooyaart E.L.,
Valburg W., Koeter G.H., Fidler V., Prium J., Groen H.J.M.
"Preoperative Staging of Non-Smal Cell Lung Cancer
with Positron-Emission Tomography", New
England J. Med. 343: 254-261, 2000. Se confirmó
histopatológicamente la implicación mediastínica, y se confirmaron
las metástasis distantes mediante otros ensayos de formación de
imágenes. La sensibilidad y especificidad de la TEP para detectar
metástasis mediastínicas eran de 91% y 86%, respectivamente, para
detectar metástasis distantes de 82% y 93%, respectivamente. Esto
se compara con la sensibilidad y especificidad de la exploración por
TC de la implicación mediastínica de 75% y 66%, respectivamente.
Otro estudio comparó la formación de imágenes con
FDG-TEP, TC y resultados histológicos. La
sensibilidad, especificidad y exactitud global de la TEP para
asignación de etapa de nódulos mediastínicos (n= 168 en 54
pacientes) era de 96%, 93% y 94%, en comparación con 68%, 65% y 6%
con TC. Gupta, N.C., Graeber G.M., Bishop, H.A., "Comparative
efficacy of positron emission tomography with fluorodeoxyglucose in
evaluate of small (<1 cm), intermediate (1 to 3 cm), and large
(>3 cm) lymph node lesions", Chest 117(3):
773-778, 2000. Sin embargo, las limitaciones de la
exploración por TEP incluyen el coste, disponibilidad limitada,
incapacidad de detectar lesiones menores de 1 cm y falta de
especificidad, particularmente en pacientes con enfermedad
inflamatoria o granulomatosa. Stokkel M.P., Bakker P.F., Heine R.,
Schlosser N.J., Lammers J.W., Van Rijk P.P. "Staging of lymph
nodes with FDG dual headed PET in patients with
non-small cell lung cancer", Nucl. Med.
Communications 20(11): 1001-1007, 1999;
Kapuco L.O., Meltzer C.C., Townsend D.W., Keenan R.J., Luketich
J.D.,
"Fluorine-18-fluorodeoxyglucose
uptake in pneumonia", J. Nucl. Med. 39(7):
1267-1269, 1998.
Las técnicas de formación de imágenes anatómicas
convencionales tales como exploración por TC tampoco son buenas
para predecir la supervivencia después del tratamiento a pesar del
encogimiento tumoral después de la terapia. En un reciente estudio
que implicaba a 56 pacientes de NSCLC que recibieron tratamiento con
quimioterapia basada en cisplatino simultánea con radioterapia o
radioterapia sola para enfermedad avanzada, la respuesta por
formación de imágenes por TC convencional no se correlacionaba con
la supervivencia. MacManus M.P., Hicks R.J., Wada M., Hoff A.,
Matthews J., Wirth A., Rischin D., Ball D.L., "Early
F-18 FDG-PET response to radical
chemoradiotherapy correlates strongly with survival in unresectable
non-small cell lung cancer", Proc. ASCO
19: 483a, 2000. La respuesta por exploraciones por TEP de FDG, sin
embargo, se correlacionaba fuertemente con la supervivencia (p=
0,0006). La supervivencia desde la fecha de exploración por TEP de
seguimiento era de 84% y 84% a los 1 y 2 años, respectivamente,
para 24 pacientes que habían conseguido una respuesta completa en
TEP, pero sólo de 43% y 31% de los 32 pacientes que no lo hicieron
(p= 0,010). Estos resultados corroboran descubrimientos similares
reseñados recientemente por otros autores. Patz E.F. Jr., Connolly
J., Herndon J. "Prognostic value of thoracic FDG PET imaging
after treatment for non-small cell lung cancer",
Am. J. Roentgenology 174(3): 769-774,
2000; Vansteenkiste J.F., Stroobants S.G., Dupont P.J., DeLeyn P.R.
Verbeken E.K., Deneffe G.J., Mortelmans L.A., Demedts M.G.
"Prognostic importance of the standardized uptake value on
(18)F-fluoro-2-deoxy-glucose
positron emission tomography scan in non-small cell
lung cancer: An analyse of 125 cases". J. Clin. Oncol.
17(10): 3201-3206, 1999; Ahuja V., Coleman
R.E., Herndon J., Patz E.F. Jr. "The prognostic significance of
fluorodeoxyglucose positron emission tomography imaging for patients
with non-small cell lung carcinoma",
Cancer 83(5): 918-924, 1998.
Por lo tanto, un producto radiofarmacéutico
disponible que pudiera identificar exactamente y tratar
potencialmente la enfermedad metastásica temprana en los pacientes
con NSCLC tendría un importante impacto sobre el cuidado del
paciente, en términos tanto de asignación de etapa como de respuesta
a la terapia. Aunque los procedimientos de formación de imágenes
por TEP están ganando eficacia en esta área, el coste e
inaccesibilidad limitan seriamente su aplicación práctica. Continúa
la necesidad de una técnica de formación de imágenes funcional
exacta basada en una función específica de tumor que pueda cribar
no invasivamente el cuerpo entero usando dispositivos de formación
de imágenes relativamente económicos y ampliamente disponibles.
Los análogos de éter fosfolipídico radioyodados
tales como NM404 radioyodado se han sugerido para el tratamiento de
tumores de próstata en el documento US 2002/0065429. El uso
potencial de NM404 para el tratamiento de cáncer de mama primario y
metastásico se ha reseñado por Weichert et al. (2nd Annual
Meeting of the Society of Molecular Imaging'', San Francisco,
EE.UU. 15-18 de agosto de 2003, presentación número
304). El uso potencial de ^{131}I-NM404 se ha
reseñado también por Zasadny et al., (Journal of Nuclear
Medicine, vol. 40. nº 5 sup., mayo de 1999, página 39P).
Se dan a conocer en la presente memoria
composiciones farmacéuticas para el tratamiento de cánceres
seleccionados de: cáncer de pulmón, cáncer intestinal, cáncer de
mama en un sujeto que tiene o se sospecha que tiene cáncer.
Estas composiciones farmacéuticas comprenden el
análogo fosfolipídico seleccionado de:
en la que X se selecciona del grupo
constituido por isótopos radiactivos de yodo; n es un número entero
entre 16 y 30 e Y se selecciona del grupo que comprende NH_{2},
N(R)_{2} y N^{+}(R)_{3}, en el que
R es un sustituyente alquilo o arilalquilo
o
en la que X es un isótopo
radiactivo de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se
selecciona del grupo constituido por H, OH, COOH, COOR y OR y Z se
selecciona del grupo constituido por NH_{2},
N(R)_{2} y N^{+}(R)_{3}, en el
que R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. X se selecciona del
grupo de isótopos radiactivos de yodo constituido por ^{122}I,
^{123}I, ^{124}I, ^{125}I y ^{131}I. Preferiblemente, el
éter fosfolipídico es
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina,
1-O-[18-(p-yodofenil)octadecil]-1,3-propanodiol-3-fosfocolina
o
1-O-[18-(p-yodofenil)octadecil]-2-O-metil-rac-glicero-3-fosfocolina,
en los que el yodo está en forma de un isótopo radiactivo. Se da a
conocer también el uso de
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina en la
que el yodo es ^{125}I para la producción de una composición
farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de células escamosas
subcutáneas.
Se administran al sujeto composiciones
farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de una molécula que
comprende un análogo de éter fosfolipídico, como se describen
anteriormente, para el tratamiento de los cánceres anteriormente
mencionados.
Además, se da a conocer el uso de un análogo de
éter fosfolipídico para la producción de una composición
farmacéutica para el tratamiento del cáncer. Estos análogos
fosfolipídicos y los cánceres se seleccionan de los grupos
discutidos anteriormente.
Fig. 1. Hipótesis de formación de imágenes de
células tumorales de PLE.
Fig. 2. Escintigrafía del pecho anterior del
paciente 03 adquirida a los 1, 2 y 6 días después de la IV
administración de 1 mCi de ^{131}I-NM324. La
captación se observa en el cáncer pulmonar lingular izquierdo (T)
con relaciones crecientes con el tiempo de tumor a fondo.
Fig. 3. Estructuras de análogos de PLE.
Fig. 3A. Un análogo de NM404.
Fig. 4. Comparación de NM24 y NM404 en el modelo
de tumor pulmonar A549 de ratón SCID después de la IV
administración. Obsérvese que la mayoría de la actividad de NM324 se
encuentra en el intestino y no en el tumor (implantado en el muslo),
mientras que la NM404 identificaba un tumor en cada muslo.
Fig. 4A. Imágenes escintigráficas de NM404 de
tumores de próstata metastásicos Dunning R3327 en una rata de
Copenhague con sitio de tumor primario (pierna) extirpado
quirúrgicamente. Se verificaron dos tumores de nódulo linfático
post-mortem.
Fig. 6. Foto digital (A) de tumor
CT-26 extirpado (T) y nódulos linfáticos izquierdo y
derecho (LN). Imágenes de Bioscan (B) y foto/Bioscan fusionadas (C)
que muestran la correlación de la radiactividad en el tumor.
Fig. 7. Imágenes de microTC del ratón vivo de la
Fig. 6 que muestran el tamaño y localización de tumor
CT-26 (flechas). Superficie tridimensional
reproducida e imágenes de corte planas (A, B) así como cortes de
corona (C) y axial (D) (40 \mum de grosor).
Fig. 8. Sección histológica (H&E) de tumor
CT-26 normal (izquierda) y extirpado con RF
(derecha). La sección extirpada ha perdido la integridad de membrana
y parece picnótica.
Fig. 9. Imagen de Bioscan/foto digital fusionada
in vivo de tumor pancreático c-myc de ratón 4
días después de la inyección de ^{125}I-NM404 (A).
Imagen ex vivo de tumores extirpados (B) para comparación con
la foto digital (C). Intervalo de color igual que en la Fig. 10.
Fig. 10. Imágenes de Bioscan de tumor
pancreático c-myc de ratón 4 días después de la
administración de ^{125}I-NM404. Imagen in
vivo (A) comparada con la foto digital del ratón diseccionado
(B) que muestra la presencia de un gran (2 cm) tumor pancreático
(T). Se extirparon tres tumores y se exploró el cadáver restante
(C). Se exploraron los tumores extirpados (D) para comparación con
la foto digital (E). La escala de color está en el intervalo de 0
(negro) a 40 (blanco) cpm.
Fig. 11. Exploraciones por microTC axial de
ratones que portan tumor pancreático. Se observan fácilmente dos
tumores grandes (T) en la imagen axial del panel A. La imagen de un
ratón diferente en B representa un tumor pancreático (flecha)
localizado adyacente al bazo. En los ratones, el páncreas es un
tejido ubicuo. Se muestra una foto digital del bazo extirpado y el
tumor ligado en 11C para comparación.
Fig. 12. Imagen de Bioscan (4 días después de la
IV inyección de ^{125}I-NM404) de cerebro de rata
de control ficticio (A) y la misma imagen de Bioscan superpuesta
sobre la correspondiente fotografía digital de cerebro de rata
extirpado mostrando el bajo nivel de fondo de NM404 en tejido
cerebral normal.
Fig. 13. Fotografía digital (A) y
correspondiente imagen de Bioscan de cerebro de rata que porta
glioma C6 extirpado (B) 4 días después de la IV inyección de
^{125}I-NM404. La imagen de Bioscan y la
fotografía fusionadas (C) de posición y tamaño coincidentes indican
una intensa localización de NM404 en el tumor. La presencia del
tumor se confirmó histológicamente en una muestra teñida con H&E
en D.
Fig. 14. Imagen de Bioscan de exploración
microTC de corona (izquierda) y dorsal (derecha) de un ratón que
porta hematoma TGF\alpha 10 días después de la inyección de
^{125}I-NM404. El hígado se potencia en la imagen
de microTC con ITG, un agente de contraste de TC selectivo de
hepatocito (tumor= T).
Fig. 15. Fotografía (A) e imagen de Bioscan (B)
de hígado de ratón que porta tumor CT-26 extirpado 7
días después de la inyección de NM404. La implicación hepática era
extensa. El implante tumoral ocurrió 15 días antes de esta
exploración. Imagen de Bioscan (C) y fotografía (D) de los tumores
diseccionados extirpados (T) e hígado normal no implicado (L).
Fig. 16. MicroTC del mismo ratón presentado en
la Fig. 15 que muestra la presencia de múltiples tumores CT26. Se
potenció el hígado usando ITG, un agente de contrate selectivo de
hepatocito. Estas imágenes se adquirieron 10 días después de la
implantación de células tumorales y 5 días antes de las imágenes de
Bioscan anteriores. (Tumores representados por flechas y vesícula
biliar= GB).
Fig. 17. Imágenes de Bioscan de NM404 de ratón
Min con tumor mamario axilar espontáneo (10 mm de diámetro) a
diversos momentos después de la IV administración
deI-NM404 (15 \muCi). Se muestra una imagen de
microTC de corona (no potenciada con contraste) para comparación
anatómica (panel izquierdo, T= tumor).
Fig. 18. Fotografías teñidas con carmín (A, C) e
imágenes de Bioscan (B, D) de las glándulas mamarias abdominales
izquierda y derecha extirpadas. Obsérvese un tumor de 2 mm en el
panel A (T) que se detecta fácilmente en la imagen de Bioscan (B) de
la glándula izquierda. El nódulo linfático (flecha pequeña en A) no
muestra captación de NM404. No se detectaron visualmente tumores en
la glándula derecha (C, D). La fotografía (E) y la imagen de Bioscan
(F) del colon indican la no captación de NM404 en los pólipos
adenomatosos (flechas).
Fig. 19. Exploraciones de microTC del ratón Min
de la Fig. 18. El panel A es una reproducción de superficie de baja
densidad que muestra un tumor mamario axilar izquierdo. El panel B
es una reproducción de superficie de alta densidad después de
administrar el agente de contraste BP10 en TC del conjunto de la
sangre para ayudar a localizar vasos alimentadores de tumor. El
panel C es una imagen compuesta de TC de corona y reproducción de
superficie de alta densidad que muestra la localización de los vasos
alimentadores absolutos. La orientación es desde detrás en el panel
C, mientras que los paneles A y B se ven desde arriba.
Fig. 20. Imágenes de Bioscan NM404 de ratón Min
con adenocarcinoma mamario axilar derecho espontáneo (10 mm de
diámetro) a diversos momentos después de la IV administración de
^{125}I-NM404 (15 \muCi). Se muestra la imagen
de microTC de corona (no potenciado por contraste) para comparación
anatómica (panel izquierdo, T= tumor).
Fig. 21. Imagen de Bioscan de glándulas mamarias
extirpadas (A) y colon (E) de un ratón FVBxB6Min 8 días después de
la administración de NM404. Foto digital correspondiente de los
mismos tejidos extirpados en B y D, respectivamente. La fotografía
aumentada teñida con carmín (C) muestra la presencia de hiperplasias
(flechas) pero no de la actividad focal correspondiente en la imagen
de Bioscan (A). La captación tumoral en la imagen de Bioscan (A)
corresponde al adenocarcinoma grande en B. La fotografía (D) y la
imagen de Bioscan (E) del colon extirpado indican la no captación de
NM404 en pólipos adenomatosos (flechas).
Fig. 22. Exploraciones de microTC del ratón Min
mostrado en la Fig. 21. El panel A es una reproducción de superficie
de alta densidad que muestra un tumor mamario axial izquierdo
grande. El panel B es una reproducción de superficie de alta
densidad después de administrar el agente de contraste BP10 de TC
del conjunto de la sangre para ayudar a localizar vasos
alimentadores de tumor. El panel C es una imagen compuesta de TC de
corona y reproducción de superficie de alta densidad que muestra la
localización de los vasos alimentadores absolutos. La orientación es
desde detrás en el panel C, mientras que los paneles A y B se ven
desde arriba.
Fig. 23. Comparación de la captación de
^{125}I-NM404 (A y B) y NM324 (C y D) en pulmones
de ratón SCID extirpados que contienen micrometástasis CA de pulmón
A549 (< 1 mm de diámetro).
Fig. 24. Metabolismo enzimático de PLE.
Fig. 25. Tiempo hasta el primer tumor en ratones
Min/+ tratados con ENU. Tiempo hasta el primer tumor mamario
expresado como días después de ENU. Se trataron ratones Min/+
hembra con ENU y se comprobó dos veces por semana la presencia de
tumores mamarios. Se representa el tiempo después del tratamiento
con ENU hasta el primer tumor en intervalos de 5 días para B6
Min/+ (n= 45) (\blacksquare), BRB6 Min/+ (n= 18)
(\Delta), FVBB6 Min/+ (n= 18) (O).
Fig. 26. Las imágenes de Bioscan de ratón FVBxB6
min propenso a los 1 (A) y 7 (b) días después de la administración
de ^{125}I-NM404 indican la presencia de tumor
mamario axilar grande. La imagen de Bioscan de la glándula mamaria
extirpada (C) 10 días después de la inyección muestra la
incorporación de NM404 a un adenocarcinoma grande de 10 mm y un
tumor adyacente menor de 2 mm que no era visible en la exploración
in vivo.
Fig. 27. Imágenes de microTC del mismo ratón
FVBxB6 min mostrado en la Fig. 26, que muestran un gran tumor
mamario axilar. Se muestran los cortes de corona y axial en A y B,
mientras que la superficie tridimensional (dorada) y los cortes de
corona se exponen simultáneamente en las vistas posterior (C) y
anterior (D).
Fig. 28. Aparente regresión tumoral de SCC1 y 6
después de la inyección de ^{125}I-NM404.
Fig. 29. Imágenes de cámara gamma del paciente 1
(panel izquierdo) a los 4 y 11 días después de la inyección de
^{131}I-NM404 que muestran una retención intensa y
prolongada del agente en ambos tumores de NSCLC (flechas). Las
exploraciones por TC axial (panel derecho) muestran la localización
y el tamaño de la lesión focal de 3 mm en el pulmón izquierdo (A) y
una gran masa infiltrativa en el pulmón derecho (B) (flechas).
Fig. 30. Imágenes de medicina nuclear planas de
cuerpo entero anterior y posterior del paciente 2 (panel izquierdo)
después de la administración iv de ^{131}I-NM404.
Exploraciones por TC axial (A) y de corona (B) (panel derecho) que
muestran la localización de un NSCLC grande de 6 cm (flechas).
\newpage
Debe observarse que, como se usa en la presente
memoria y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares
"un", "una" y "el/la" incluyen las referencias
plurales a menos que el contexto dicte claramente otra cosa. Por
tanto, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una
pluralidad de dichas células y equivalentes de las mismas conocidos
por los expertos en la técnica y demás. Asimismo, los términos
"un" (o "una"), "uno/a o más" y "al menos
uno/a" pueden usarse intercambiablemente en la presente memoria.
Ha de observarse también que los términos "comprende",
"incluye" y "tiene" pueden usarse intercambiablemente.
A menos que se definan de otro modo, todos los
términos técnicos y científicos usados en la presente memoria
tienen los mismos significados que se entienden habitualmente por un
experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque
puede usarse cualquier procedimiento y material similar o
equivalente a los descritos en la presente memoria en la práctica o
ensayo de la presente invención, se describen ahora los
procedimientos y materiales preferidos. Todas las publicaciones
mencionadas en la presente memoria son con fines de describir y dar
a conocer los compuestos químicos, líneas celulares, vectores,
animales, instrumentos, análisis estadísticos y metodologías que se
reseñan en las publicaciones que podrían usarse junto con la
invención.
Como se define en la presente memoria, el
término "isómero" incluye, pero sin limitación, isómeros
ópticos e isómeros conformacionales. En una realización, esta
invención comprende el uso de diferentes isómeros ópticos de un
compuesto antitumoral de fórmula 3A. Se apreciará por los expertos
en la técnica que los compuestos antitumorales útiles en la
presente invención pueden contener al menos un centro quiral. En
consecuencia, los compuestos usados en la presente invención pueden
existir, y aislarse, en formas ópticamente activas o racémicas.
Algunos compuestos pueden exhibir también polimorfismo.
Ha de entenderse que la presente invención puede
comprender el uso de cualquier forma racémica, ópticamente activa,
polimórfica o estereoisomérica o mezclas de las mismas, poseyendo
dicha forma propiedades útiles en el tratamiento de las afecciones
relacionadas con tumores descritas y reivindicadas en la presente
memoria. En una realización, los compuestos antitumorales pueden
incluir isómeros (R) puros. En otra realización, los compuestos
antitumorales pueden incluir isómeros (S) puros. En otra
realización, los compuestos pueden incluir una mezcla de isómeros
(R) y (S). En otra realización, los compuestos pueden incluir una
mezcla racémica que comprende ambos isómeros (R) y (S). Es bien
conocido en la técnica cómo preparar formas ópticamente activas
(por ejemplo, mediante resolución de la forma racémica mediante
técnicas de recristalización, mediante síntesis a partir de
materiales de partida ópticamente activos, mediante síntesis quiral
o mediante separación cromatográfica usando una fase estacionaria
quiral).
La invención incluye el uso de sales
farmacéuticamente aceptables de los compuestos aminosustituidos de
la invención con ácidos orgánicos e inorgánicos, por ejemplo, ácido
cítrico y ácido clorhídrico. Las sales farmacéuticamente aceptables
pueden prepararse también a partir de compuestos fenólicos mediante
tratamiento con bases inorgánicas, por ejemplo, hidróxido de sodio.
Como se usa en la presente memoria, el término "sal
farmacéuticamente aceptable" designa un compuesto formulado a
partir de un compuesto básico de la invención que consigue
sustancialmente el mismo efecto farmacéutico que el compuesto básico
de la invención.
Además, esta invención incluye adicionalmente el
uso de hidratos de los compuestos antitumorales descritos en la
presente memoria. El término "hidrato" incluye, pero sin
limitación, hemihidrato, monohidrato, dihidrato y trihidrato.
El término "poner en contacto" significa
que el compuesto antitumoral usado en la presente invención se
introduce en un paciente que recibe tratamiento, y el compuesto se
deja entrar en contacto in vivo.
Como se usa en la presente memoria, el término
"tratamiento" incluye tratamiento preventivo así como remitente
del trastorno. Como se usan en la presente memoria, los términos
"reducir", "suprimir" e "inhibir" tienen su
significado entendido habitualmente de disminuir o reducir. Como se
usa en la presente memoria, el término "progresión" significa
aumentar el alcance o gravedad, avanzar, crecer o empeorar. Como se
usa en la presente memoria, el término "recurrencia" significa
la recaída en una enfermedad después de una remisión.
Como se usa en la presente invención, el término
"administrar" designa poner en contacto un paciente, tejido,
órgano o células in vivo con un compuesto de éter
fosfolipídico antitumoral descrito en la presente memoria. Como se
usa en la presente memoria, la administración se realiza in
vivo, concretamente, en células o tejidos de organismos vivos,
por ejemplo, seres humanos. Se da a conocer también la
administración de los compuestos dados a conocer a un paciente o
sujeto. Un "paciente" o "sujeto", usados equivalentemente
en la presente memoria, designa un mamífero, preferiblemente un ser
humano, que (1) tiene un trastorno remediable o tratable mediante
la administración de la sustancia antitumoral usando un compuesto de
éter fosfolipídico descrito en la presente memoria o (2) es
sensible a un trastorno que es prevenible mediante la administración
del compuesto antitumoral usando un compuesto de éter fosfolipídico
descrito en la presente memoria.
Como se usa en la presente memoria,
"composición farmacéutica" significa cantidades
terapéuticamente eficaces del compuesto antitumoral descrito en la
presente memoria junto con diluyentes, conservantes, solubilizantes,
emulsionantes y coadyuvantes adecuados, colectivamente "vehículos
farmacéuticamente aceptables". Como se usa en la presente
memoria, los términos "cantidad eficaz" y "cantidad
terapéuticamente eficaz" designan la cantidad de agente
terapéutico activo descrita en la presente memoria suficiente para
proporcionar una respuesta terapéutica deseada sin efectos
secundarios adversos indebidos tales como toxicidad, irritación o
respuesta alérgica. La "cantidad eficaz" específica variará,
obviamente, con factores tales como la afección particular que se
esté tratando, la condición física del paciente, el tipo de animal
que se esté tratando, la duración del tratamiento, la naturaleza de
la terapia concurrente (si la hubiera) y las formulaciones
específicas empleadas y la estructura de los compuestos descritos
en la presente memoria. En este caso, se considerará
terapéuticamente eficaz una cantidad si da como resultado uno o más
de los siguientes: (a) la prevención de la enfermedad (por ejemplo,
cáncer de mama) y (b) la inversión o estabilización de dicha
enfermedad. Las cantidades eficaces óptimas pueden determinarse
fácilmente por un experto en la técnica usando experimentación
rutinaria.
Las composiciones farmacéuticas son
formulaciones líquidas o liofilizadas o secadas de otro modo e
incluyen diluyentes de diverso contenido de tampón (por ejemplo,
Tris-HCl, acetato, fosfato), pH y fuerza iónica,
aditivos tales como albúmina o gelatina para evitar la absorción a
superficies, detergentes (por ejemplo Tween (polisorbato) 20, Tween
80, Pluronic F68, sales de ácidos biliares), agentes solubilizantes
(por ejemplo, glicerol, polietilenglicerol), antioxidantes (por
ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfito de sodio), conservantes (por
ejemplo, timerosal, alcohol bencílico, parabenos), sustancias
voluminizantes o modificadores de la tonicidad (concretamente,
lactosa, manitol), unión covalente de polímeros tales como
polietilenglicol a la proteína, complejación con iones metálicos o
incorporación del material en o sobre preparaciones particuladas de
compuestos poliméricos tales como poli(ácido láctico), poli(ácido
glicólico), hidrogeles, etc. o sobre liposomas, microemulsiones,
micelas, vesículas unilamelares o multilamelares, eritrocitos
fantasma o esferoplastos. Dichas composiciones influirán en el
estado físico, solubilidad, estabilidad, velocidad de liberación
in vivo y velocidad de aclaramiento in vivo. Las
composiciones de liberación controlada o sostenida incluyen la
formulación en depósitos lipófilos (por ejemplo, ácidos grasos,
ceras,
aceites).
aceites).
Se dan a conocer también composiciones
particuladas recubiertas con polímeros (por ejemplo, poloxámeros o
poloxaminas). Otras composiciones incorporan formas particuladas,
recubrimientos protectores, inhibidores de proteasa o potenciadores
de la permeación para diversas vías de administración, incluyendo
tópica, parenteral, pulmonar, nasal y oral. La composición
farmacéutica puede administrarse por vía parenteral, paracancerosa,
transmucosa, transdérmica, intramuscular, intravenosa, intradérmica,
subcutánea, intraperitoneal, intraventricular, intracraneal e
intratumoral.
Además, como se usa en la presente memoria, los
"portadores farmacéuticamente aceptables" son bien conocidos
por los expertos en la técnica e incluyen, pero sin limitación,
tampón fosfato 0,01-0,1 M y preferiblemente 0,05 M
o solución salina al 0,9%. Adicionalmente, dichos portadores
farmacéuticamente aceptables pueden ser soluciones acuosas o no
acuosas, suspensiones y emulsiones. Son ejemplos de disolventes no
acuosos propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales
como aceite de oliva y ésteres orgánicos inyectables tales como
oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones
alcohólicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solución
salina y medios tamponados.
Los vehículos parenterales incluyen solución de
cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio,
lactato de Ringer y aceites no volátiles. Los vehículos intravenosos
incluyen restauradores de fluido y nutrientes, restauradores de
electrolitos tales como aquellos basados en dextrosa de Ringer y
similares. Pueden estar presentes también conservantes y otros
aditivos tales como, por ejemplo, antimicrobianos, antioxidantes,
agentes intercalantes, gases inertes y similares.
Las composiciones de liberación controlada o
sostenida administrables según la invención incluyen la formulación
en depósitos lipófilos (por ejemplo, ácidos grasos, ceras, aceites).
Están también comprendidas por la invención composiciones
particuladas recubiertas con polímeros (por ejemplo, poloxámeros o
poloxaminas).
Otras realizaciones de las composiciones
administradas según la invención incorporan formas particuladas,
recubrimientos protectores, inhibidores de proteasa o potenciadores
de la permeación para diversas vías de administración, incluyendo
parenteral, pulmonar, nasal y oral.
Los compuestos modificados por la unión
covalente de polímeros solubles en agua tales como polietilenglicol,
copolímeros de polietilenglicol y polipropilenglicol,
carboximetilcelulosa, dextrano, poli(alcohol vinílico),
polivinilpirrolidona o poliprolina son conocidos por exhibir
semividas sustancialmente más largas en sangre después de inyección
intravenosa que los compuestos no modificados correspondientes
(Abuchowski et al., 1981: Newmark et al., 1982 y
Katre et al., 1987). Dichas modificaciones pueden aumentar
también la solubilidad del compuesto en solución acuosa, eliminar
la agregación, potenciar la estabilidad física y química del
compuesto y reducir en gran medida la inmunogenicidad y reactividad
del compuesto. Como resultado, puede conseguirse la actividad
biológica in vivo deseada mediante la administración de
dichos aductos de polímero-compuesto menos
frecuentemente o en dosis menores que con el compuesto no
modificado. Estos aductos de polímero-compuesto no
son sin embargo parte de la
invención.
invención.
En aún otro procedimiento, puede suministrarse
una composición farmacéutica en un sistema de liberación controlada.
Por ejemplo, el agente puede administrarse usando infusión
intravenosa, una bomba osmótica implantable, un parche
transdérmico, liposomas u otros modos de administración. En una
realización, puede usarse una bomba (véanse Langer, supra;
Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201 (1987); Buchwald
et al., Surgery 88: 507 (1980); Saudek et al., N. Engl.
J. Med. 321: 574 (1989). En otro procedimiento, pueden usarse
materiales poliméricos. En aún otro procedimiento, puede disponerse
un sistema de liberación controlada en la proximidad de la diana
terapéutica, por ejemplo el hígado, requiriendo por tanto sólo una
fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson en
"Medical Applications of Controlled Release", supra.,
vol. 2, pág. 115-138 (1984). Se discuten otros
sistemas de liberación controlada en la revisión de Langer
(Science 249: 1527-1533 (1990)).
La preparación farmacéutica puede comprender el
compuesto antitumoral solo, o puede incluir adicionalmente un
portador farmacéuticamente aceptable, y puede estar en forma sólida
o líquida tal como comprimidos, polvos, cápsulas, aglomerados,
soluciones, suspensiones, elixires, emulsiones, geles, cremas o
supositorios, incluyendo supositorios rectales y uretrales. Los
portadores farmacéuticamente aceptables incluyen gomas, almidones,
azúcares, materiales celulósicos y mezclas de los mismos. La
preparación farmacéutica que contiene el compuesto antitumoral de
la invención puede administrarse a un paciente, por ejemplo,
mediante implantación subcutánea de un aglomerado. El aglomerado
proporciona la liberación controlada del compuesto antitumoral
durante un periodo de tiempo. La preparación puede administrarse
también por inyección intravenosa, intraarterial o intramuscular de
una preparación líquida, la administración oral de una preparación
líquida o sólida o por administración tópica. La administración
puede realizarse también mediante el uso de un supositorio rectal o
un supositorio uretral.
Las preparaciones farmacéuticas administrables
de la invención pueden prepararse mediante procedimientos de
disolución, mezclado, granulación o formación de comprimidos
conocidos. Para administración oral, se mezclan los compuestos
antitumorales o sus sales farmacéuticamente aceptables con aditivos
habituales con este fin tales como vehículos, estabilizadores o
diluyentes inertes, y se convierten mediante procedimientos
habituales en formas de administración adecuadas tales como
comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas de gelatina dura o
blanda, soluciones acuosas, alcohólicas u oleosas. Son ejemplos de
vehículos inertes adecuados bases de comprimido convencionales
tales como lactosa, sacarosa o almidón de maíz en combinación con
aglutinantes tales como goma arábiga, almidón de maíz, gelatina,
con agentes disgregantes tales como almidón de maíz, almidón de
patata, ácido algínico o con un lubricante tal como ácido esteárico
o estearato de magnesio.
Son ejemplos de vehículos o disolventes oleosos
adecuados aceites vegetales o animales tales como aceite de girasol
o aceite de hígado de pescado. Las preparaciones pueden efectuarse
tanto en forma de gránulos secos como húmedos. Para administración
parenteral (inyección subcutánea, intravenosa, intraarterial o
intramuscular), los compuestos antitumorales o sus sales
farmacéuticamente aceptables se convierten en una solución,
suspensión o emulsión, si se desea, con las sustancias habituales y
adecuadas con este fin, por ejemplo, solubilizantes u otros
auxiliares. Son ejemplos líquidos estériles tales como agua y
aceites, con o sin la adición de un tensioactivo y otros
coadyuvantes farmacéuticamente aceptables. Son aceites ilustrativos
aquellos de origen del petróleo, animal, vegetal o sintético, por
ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja o aceite mineral. En
general, son portadores líquidos preferidos agua, solución salina,
dextrosa acuosa y soluciones de azúcar relacionadas, y glicoles
tales como propilenglicoles o polietilenglicoles, particularmente
para soluciones inyectables.
La preparación de composiciones farmacéuticas
que contienen un componente activo es bien entendida en la técnica.
Dichas composiciones pueden prepararse en forma de aerosoles
suministrados a la nasofaringe o en forma de inyectables, en forma
de soluciones o suspensiones líquidas; sin embargo, pueden
prepararse también formas sólidas adecuadas para solución, o
suspensión, en líquido antes de la inyección. La preparación puede
emulsionarse también. El ingrediente terapéutico activo se mezcla a
menudo con excipientes que son farmacéuticamente aceptables y
compatibles con el ingrediente activo. Son excipientes adecuados,
por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol, etanol o
similares o cualquier combinación de los mismos.
Además, la composición puede contener cantidades
minoritarias de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes
o emulsionantes y agentes tamponadores del pH que potencian la
eficacia del ingrediente activo.
Puede formularse un componente activo en la
composición en forma de sal farmacéuticamente aceptable
neutralizada. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las
sales de adición de ácidos, que se forman con ácidos inorgánicos
tales como, por ejemplo, ácidos clorhídrico o fosfórico o ácidos
orgánicos tales como acético, oxálico, tartárico, mandélico y
similares. Las sales formadas a partir de grupos carboxilo libres
pueden derivar también de bases inorgánicas tales como, por
ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férrico, y
sales orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina,
2-etilaminoetanol, histidina, procaína y
similares.
Para administración tópica a superficies
corporales usando, por ejemplo, cremas, geles, gotas y similares,
se preparan los compuestos antitumorales o sus sales
farmacéuticamente aceptables y se aplican en forma de soluciones,
suspensiones o emulsiones en un diluyente fisiológicamente aceptable
con o sin un portador farmacéutico.
En otro procedimiento, el compuesto activo puede
suministrarse en una vesícula, en particular un liposoma (véanse
Langer, Science 249: 1527-1533 (1990); Treat
et al., en "Liposomes in the Therapy of Infectious Disease
and Cancer", López-Berestein and Fidler (Ed.),
Liss, NY, pág. 353-365 (1989);
López-Berenstein ibid., pág.
317-327; véase en general ibid.).
Para uso en medicina, las sales del compuesto
antitumoral pueden ser sales farmacéuticamente aceptables. Sin
embargo, pueden ser útiles otras sales en la preparación de los
compuestos según la invención o de sus sales farmacéuticamente
aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los
compuestos incluyen sales de adición de ácido que pueden formarse,
por ejemplo, mezclando una solución del compuesto según la
invención con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable
tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico,
ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido
benzoico, ácido oxálico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido
carbónico o ácido fosfórico.
Generalmente, la NM404 es un agente de formación
de imágenes de diagnóstico selectivo de tumor nuevo y prometedor
para monitorizar la respuesta al tratamiento de varias modalidades
de tratamiento de tumor. La NM404 radioyodado, un análogo de éter
fosfolipídico de segunda generación, había exhibido una notable
selectividad de tumor en 10/10 modelos tumorales de xenoinjerto y
más recientemente en otros 14/14 modelos tumorales espontáneos en
roedor. Debido a la falta de enzimas fosfolipasa metabólicas en las
membranas de las células tumorales, la hipótesis predominante de
este enfoque es que los análogos de éter fosfolipídico se atrapan
exclusivamente en membranas de células tumorales debido a su
incapacidad de metabolizarse y eliminarse. Por tanto, las
velocidades de aclaramiento diferenciales de los éteres
fosfolipídicos de las células normales frente a las células
tumorales viables conforman la base de este concepto. Los
resultados obtenidos en una variedad de modelos tumorales indican
que la NM404 se secuestra y retiene selectivamente por células
tumorales viables y se localiza en lesiones tanto primarias como
metastásicas independientemente de la localización anatómica,
incluyendo aquellas encontradas en nódulos linfáticos. Al contrario
que la FDG, este agente no se localiza en sitios infecciosos. Otras
ventajas de la NM404 frente a la FDG incluyen las siguientes: la
NM404 es selectiva de y se retiene indefinidamente por células
tumorales malignas, mientras que la FDG no es selectiva de células
tumorales y va a sitios infecciosos e hiperplasias (esófago de
Barret). Además, puesto que el ^{124}I tiene una semivida física
de 4 días, puede enviarse a cualquier lugar del mundo, mientras que
la FDG con sus 110 min de semivida puede tener una distribución
limitada de 321 km del sitio de producción. La NM404 experimenta una
retención prolongada (no se metaboliza) y por lo tanto proporciona
un potencial terapéutico significativo cuando se acopla con un
radioisótopo apropiado como ^{131}I, mientras que la FDG no posee
ningún potencial terapéutico. La NM404 puede marcarse con una
variedad de isótopos de yodo aumentando su versatilidad (diagnóstico
y terapia así como herramienta para estudios animales
experimentales), mientras que la FDG está limitada a ^{18}F para
exploración por TEP o potencialmente ^{19}F (estable) para
formación de imágenes por resonancia magnética, aunque a niveles de
selectividad muy bajos. Independientemente de su capacidad de
orientación a tumor, debido a su rápido metabolismo en células
tumorales, no tiene potencial para terapia. La NM404 proporciona el
potencial no sólo para predecir exactamente la respuesta tumoral
local a diversas modalidades de tratamiento, sino que también
permite la detección de lesiones metastásicas distantes en casos de
tratamiento tumoral primario subterapéutico.
\vskip1.000000\baselineskip
Se dan a conocer en la presente memoria
composiciones farmacéuticas para el tratamiento de cánceres
seleccionados de: cáncer de pulmón, cáncer intestinal y cáncer de
mama en un sujeto que tiene o es sospechoso de tener cáncer.
Dichas composiciones farmacéuticas comprenden el
análogo fosfolipídico seleccionado de:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X se selecciona del grupo
constituido por isótopos radiactivos de yodo, n es un número entero
entre 16 y 30 e Y se selecciona del grupo que comprende NH_{2},
N(R)_{2} y N^{+}(R)_{3}, en el que
R es un sustituyente alquilo o arilalquilo
o
en la que X es un isótopo
radiactivo de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se
selecciona del grupo constituido por H, OH, COOH, COOR y OR y Z se
selecciona del grupo constituido por NH_{2},
N(R)_{2} y N^{+}(R)_{3}, en el
que R es un sustituyente alquilo o arilalquilo. X se selecciona del
grupo de isótopos radiactivos de yodo constituido por ^{122}I,
^{123}I, ^{124}I, ^{125}I y
^{131}I.
Preferiblemente, el éter fosfolipídico es
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina,
1-O-[18-(p-yodofenil)octadecil]-1,3-propanodiol-3-fosfocolina
o
1-O-[18-(p-yodofenil)octadecil]-2-O-metil-rac-glicero-3-fosfocolina,
en los que el yodo está en forma de un isótopo radiactivo. Se
describen diversos éteres fosfolipídicos y metodologías relacionadas
para la fabricación y uso de los compuestos de éter fosfolipídico
en las patentes de EE.UU. nº 4.925.649, 4.965.391, 5.087.721,
5.347.030, 6.255.519 y 6.417.384. Se da a conocer también el uso de
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina, en el
que el yodo es ^{125}I, para la producción de una composición
farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de células escamosas
subcutáneas.
Se administran al sujeto composiciones
farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de una molécula que
comprende un análogo de éter fosfolipídico, como se describen
anteriormente, para el tratamiento de los cánceres anteriormente
mencionados.
Además, se da a conocer el uso de un análogo de
éter fosfolipídico para la producción de una composición
farmacéutica para el tratamiento del cáncer. Estos análogos
fosfolipídicos y los cánceres se seleccionan de los grupos
discutidos anteriormente.
Por ejemplo, la NM404, un éter fosfolipídico, ha
demostrado una notable especificidad por tejido neoplásico pero no
tejido preneoplásico en muchos modelos tumorales experimentales. La
alta avidez de tumor respecto a fondo y selectividad tumoral de
NM404 sugiere que puede ser potencialmente superior a la exploración
por TEP de ^{18}F-FDG para la formación de
imágenes de tumor durante el tratamiento. El mecanismo preciso de
especificidad tumoral de NM404 está bajo investigación, y
actualmente no está tan bien descrito como el mecanismo de
utilización de glucosa para la captación de
^{18}F-FDG. No está bien establecido si la
captación de NM404 en tejido neoplásico depende de la viabilidad de
ese tejido o si este fenómeno de captación está relacionado con
algún componente de membrana o matriz que es independiente de la
viabilidad del tejido. Si esta captación y especificidad están
ligados a la viabilidad tumoral, se deduciría que la captación de
NM404 en tumores recientemente esterilizados por radiación sería
inexistente o baja, mientras que los tumores resistentes a radiación
mostrarían una captación continuada. Recientemente, los inventores
demostraron la captación de NM404 y la muerte en células cancerosas
escamosas tanto sensibles a radiación como resistentes a radiación
(SCC1 y 6) en ratones desnudos. Dicho ensayo sería inestimable para
gestionar pacientes tratados con terapia de radiación, puesto que
los pacientes que no manifiestan localización de NM404 después del
tratamiento indicarían cura, mientras que a aquellos con tumores
resistentes (captación continuada de NM404) podría ofrecerse otras
opciones sin radiación (cirugía, quimioterapia, etc.).
Un enfoque al desarrollo de exámenes de
formación de imágenes sensibles más disponibles es diseñar moléculas
portadoras que sean capaces de suministrar selectivamente una sonda
radiofarmacéutica al tejido diana deseado. El enfoque de los
inventores ha sido aprovechar las propiedades bioquímicas o
farmacológicas únicas de moléculas que exhiben un alto grado de
selectividad de tejido o tumor.
Snyder y colaboradores^{16,17} observaron que
una variedad de células tumorales animales y humanas contenían
concentraciones mucho mayores de éteres lipídicos de origen natural
en las membranas celulares que el tejido normal. Propuso que la
acumulación de éteres lipídicos en tumores era el resultado de una
menor capacidad de las células tumorales de metabolizar estos
lípidos debido a la falta de enzimas metabólicas clave. Los
inventores han aprovechado esta observación sintetizando una serie
de análogos de éter fosfolipídico (PLE) radioyodados como agentes
formadores de imágenes selectivos de tumor potenciales. Sin embargo,
la formación de imágenes de diagnóstico no es parte de la
invención. Varios de estos análogos de PLE han exhibido una
capacidad destacada y aparentemente universal de localizarse y
retenerse selectivamente por una amplia variedad de modelos
tumorales de rata, murino y humano espontáneos y transplantados.
La hipótesis imperante de los inventores (Fig.
1) es que los éteres fosfolipídicos se atrapan en membranas de
células tumorales viables debido a su incapacidad de metabolizarse y
eliminarse. La extracción de tumores después de la administración
de éteres fosfolipídicos radioyodados mostró la presencia de sólo el
agente intacto, mientras que el análisis de orina y heces reveló
sólo metabolitos. Por tanto, son las velocidades de aclaramiento
diferencial de los éteres fosfolipídicos de las células normales
frente a las células tumorales lo que conforma la base de este
concepto. Los resultados preliminares obtenidos en más de 24 modelos
tumorales de xenoinjerto y espontáneos han mostrado universalmente
que la NM404 experimenta una captación selectiva y una retención
prolongada en tumores. Debido a que el agente se metaboliza en
cierta medida en el hígado, los inventores evitaron la evaluación
de compuesto anterior en modelos de tumor hepático debido a los
altos niveles de radiactividad de fondo hepática. Además, debido a
que la NM404 proporciona menores niveles de fondo hepáticos que sus
predecesores, los inventores extendieron la evaluación a tumores
hepáticos a la vista del hecho de que la formación de imágenes de
pacientes con HCC ha sido problemática. Muchos pacientes tienen
cirrosis subyacente y por lo tanto es difícil distinguir los
nódulos regenerativos de HCC en una formación de imágenes de sección
transversal. Además, los estudios preliminares que evalúan la
exploración por TEP con FDG han mostrado sólo un
20-50% de sensibilidad en la detección de la
enfermedad. Verhoef C., Valkema R. et al., Liver (2002) 22:
51-56. Además, el TEP con FDG no es útil en el
cribado de diagnóstico en el cerebro. De forma similar, la FDG no ha
sido útil en la evaluación de la enfermedad en hígado debido a su
alta captación natural por hepatocitos.
A. Ejemplo
I
El enfoque sintético de los inventores estaba
basado en la reacción de acoplamiento cruzado catalizada por cobre
de reactivos de Grignard con tosilatos o haluros de alquilo para el
alargamiento de la cadena alquilo (véase el esquema siguiente). Se
inició la síntesis a partir de alcohol
p-yodobencílico I, que se convirtió en bromuro de
p-yodobencilo 2 mediante reacción con bromuro de
trimetilsililo. Se acopló adicionalmente el bromuro de
p-yodobencilo 2 con el reactivo de Grignard 3 en
presencia de Li_{2}CuCl_{4} como catalizador. Se convirtió el
12-(p-yodofenil)dodecanol 5 obtenido después
de la desprotección del primer producto de acoplamiento 4 en el
tosilato 6. En la siguiente etapa, se acopló el tosilato 6 con el
reactivo de Grignard 7 que contenía 6 átomos de carbono y esto
completó el procedimiento de alargamiento de cadena. La
desprotección con THP de 8 dio
18-(p-yodofenil)octadecanol 9, que se
convirtió en 10 (NM404) mediante un procedimiento en dos etapas como
se muestra en el esquema.
Además, se llevó a cabo un procedimiento de
síntesis rápida de alto rendimiento para marcar NM404 con cualquier
isótopo del yodo, incluyendo ^{124}I, ^{125}I y ^{131}I
mediante el siguiente procedimiento:
\global\parskip0.900000\baselineskip
En primer lugar, se precalentó un aparato de
bloque calentador de aluminio a 145ºC y se preparó un condensador
usando un cilindro de jeringuilla desechable de 5 ml ajustado con
una aguja desechable de calibre 18 de 3,81 cm curvada y un septo de
goma en la parte superior.
En segundo lugar, se inició un sistema HPLC y se
llenó el depósito con disolvente desgasificado filtrado
(hexano/isopropanol/agua (40:52:8)). Se equilibró el sistema
seguido de una comprobación sistemática de los sistemas auxiliares
tales como bomba, detectores, registradores de gráficos e
integradores informáticos.
En tercer lugar, se preparó una trampa de carbón
en jeringuilla desechable de 3 ml usando un tapón de lana de vidrio
en el fondo, llenando la jeringuilla con 2,5 ml de carbón granulado,
añadiendo otro tapón de lana de vidrio e insertando un septo en la
parte superior. Se dispuso una aguja con adaptador de tubo corto en
la jeringuilla y se insertó una aguja de calibre 18 a través del
septo de la parte superior. Se conectó la trampa de carbón con la
parte superior del condensador y se ventiló a la atmósfera a través
de una trampa de tiosulfato de sodio.
En cuarto lugar, se añadieron 5 mg de sulfato de
amonio en 20 \mul de agua desionizada en un vial de fondo cónico
de vidrio de borosilicato de 2 ml, seguido de 20 \mug de NM404 no
marcada en 20 \mul de etanol absoluto al vial. Se removió o
sacudió suavemente el vial para asegurar el mezclado y se añadieron
también al vial 6 perlas de vidrio de borosilicato (3 mm). Se selló
entonces el vial con un septo de goma de butilo cubierta con teflón
y un tapón de aluminio ondulado. Se pinchó el septo con una aguja de
calibre 18 y se añadió la cantidad deseada de
yoduro-131 de sodio acuoso (en NaOH 0,1 N,
típicamente 5 mCi en 15 \mul) mediante una microjeringuilla
Hamilton a través del septo. Se removió o sacudió suavemente de
nuevo el vial para asegurar el mezclado. Se ensayó el vial en un
calibrador de dosis.
En quinto lugar, se insertó la jeringuilla de
trampa de carbón en el vial de reacción y se metió el vial de
reacción en el bloque calentador (llenado a la mitad con arena). Se
calentó el vial de reacción a 145ºC durante 40 min, separándose la
mayoría del disolvente por destilación y condensándose en el
condensador. Se insertó lentamente una corriente de aire (4 x 25
ml) a través del vial de reacción con una jeringuilla de 25 ml. Se
aumentó la temperatura del vial de reacción a 155ºC y se continuó el
calentamiento durante 30 minutos adicionales. Se retiró el vial de
reacción del bloque calentador, se desconectó el conjunto de
condensador/trampa y se desechó, y se dejó enfriar el vial a
temperatura ambiente.
En sexto lugar, se añadieron 0,5 ml de etanol
absoluto al vial de reacción. Se removió o sacudió suavemente el
vial en el calibrador de dosis.
En séptimo lugar, se realizó un análisis de
radioTLC de la mezcla de producto marcado bruto en gel de sílice
(cloroformo/metanol/agua (65/35/4)).
En octavo lugar, se preparó una columna de
resina Amberlite IRA 400-OH preempapando 1,0 g de
resina con 5 ml de etanol absoluto durante 30 minutos. Se decantó
el etanol y se aclaró la resina con dos porciones adicionales de 5
ml de etanol. Se añadió la resina húmeda a un cilindro de
jeringuilla desechable de 3 ml con un tapón de lana de vidrio en el
fondo, se ajustó un filtro Acrodisc y una válvula de cierre de una
vía. Se eluyó gradualmente la solución etanólica del producto
radioyodado bruto a través de la columna de resina a un vial de 5
ml.
En noveno lugar, se insertó un septo y se aireó
el disolvente con una corriente de nitrógeno. Se unió una
jeringuilla de carbón a la salida del vial antes de iniciar el flujo
de nitrógeno. Una vez seco, se usaron 50 \mul de etanol para
diluir y transferir los contenidos a un vial de fondo cónico de 300
\mul. Se aclaró el vial fuente con un segundo lavado de 50 \mul
de etanol y se transfirió al vial de fondo cónico.
En décimo lugar, se estabilizó la bomba de HPLC
y se estableció un flujo de disolvente de 1,0 ml/min. Se purificó
la mezcla de reacción por HPLC en una columna de sílice con cartucho
Perkin-Elmer (4,3 x 33 mm, sílice de 3 \mum)
eluida con hexano/isopropanol/agua (40:52:8) a 1,0 ml/min. Se
efectuó la detección de picos con UV a 230 y 254 nm y mediante
radiactividad. Una vez se recogió el pico apropiado en un vial
estéril, se retiró una pequeña muestra para análisis radioTLC y se
evaporó el disolvente restante con una corriente de nitrógeno,
dando el compuesto deseado en forma de un residuo seco. Se calculó
la actividad específica según fuera necesario.
En undécimo lugar, se añadió polisorbato 20 a
una relación de 0,1 \mul/1,0 \mug de NM404 al matraz a partir
de una solución madre de polisorbato 20 al 5% en etanol absoluto. El
polisorbato 20 es Tween 20 de pureza farmacéutica que se usa ahora
en estudios tanto humanos como animales con NM404. Se retiró el
disolvente por rotavapor durante 10 min a <30ºC. Se disolvió el
residuo con mezclado en suficiente agua estéril para proporcionar
una solución de polisorbato 20 296. Se pasó el producto formulado a
través de un filtro estéril Acrodisc de Pall-Gelman
de 0,2 \mum (13 mm) a un vial seco estéril multidosis
(Hollister-Stier) aireado con otro filtro estéril de
0,2 \mum. Se desviaron 100 \mul de solución de producto a un
vial para análisis de CC.
En duodécimo lugar, se midió la radiactividad en
el calibrador de dosis y se efectuaron ensayos de control de calidad
(esterilidad, apirogenicidad).
Se tomó toda la NM404 no marcada del lote madre
original, que experimentó recientemente ensayos de toxicología
aguda para minimizar las diferencias sintéticas potenciales entre
estudios. Se consiguió rutinariamente la radioyodación de NM404
mediante una reacción de intercambio isotópico en una mezcla fundida
de ácido piválico desarrollada por los inventores^{19} o mediante
el nuevo procedimiento descrito en la presente memoria y se preparó
para inyección según procedimientos estándar descritos por los
inventores^{22}. Se usó eficazmente este procedimiento para
preparar material estéril para los ensayos humanos iniciales con
NM324, el predecesor de NM404, y se ha usado más de 40 veces para
preparar NM404 marcada con ^{125}I y ^{131}I. Generalmente,
después de la purificación y cuantificación exacta de la masa por
HPLC, se disolvió el producto radiofarmacéutico en etanol absoluto
(50-500 \mul) y polisorbato 20 (0,1 \mul/\mug
de compuesto). Se retiró el etanol a vacío y se disolvió el residuo
en agua estéril, dando una solución final que contenía no más de
2-3% de polisorbato 20. Se consiguió la
esterilización mediante filtración a través de una unidad de filtro
estéril de 0,2 \mum. La pureza radioquímica final debe superar el
97% antes de usarse en animales. La cuantificación y cálculo de la
actividad específica final se consiguieron mediante análisis de HPLC
usando patrones de masa conocidos y la cuantificación de la
radiactividad (^{125}I) se realizó mediante dilución y recuento en
un contador gamma PE Wallac para evitar problemas de atenuación. Se
hizo la cuantificación de los isótopos de mayor energía incluyendo
^{131}I con un calibrador de dosis con ajustes incorporados para
estos isótopos. Se consiguieron típicamente actividades específicas
de 1 mCi por 100 \mug de NM404 radioyodada. Los volúmenes de
inyección eran típicamente de aproximadamente 100 \mul por ratón.
Los datos de distribución en tejido se expresaron como porcentaje
de la dosis inyectada (\pmEE) por gramo de tejido y también como
porcentaje de dosis inyectada por órgano cuando se pesaban órganos
enteros según procedimientos publicados establecidos por los
inventores^{22}. En cada punto temporal, se calcularon las
relaciones de tumor a tejido basándose en el porcentaje de dosis
inyectada por gramo de tejido.
Análisis de distribución en tejido general (DD):
Se efectuaron estudios de biodistribución en ratones hembra según
el procedimiento estándar desarrollado por los inventores^{27}. Se
administró NM404 radioyodada (5 \muCi en 100 \mul) mediante
inyección en la vena de la cola. En puntos temporales
predeterminados, se sacrificaron los animales (3/punto temporal)
mediante desangrado con anestesia de pentobarbital. Se extrajeron
un total de 16 tejidos incluyendo sangre, plasma, glándulas
suprarrenales, vejiga, médula ósea, grasa, corazón, riñón, hígado,
pulmón, músculo, bazo, ovarios, piel, tiroides y tumor, se aclararon
y se limpiaron de tejido extraño. Se trituraron los órganos grandes
y se pesarán muestras de tejido por duplicado y se dispondrán en
tubos de plástico para recuento isotópico. Se determinaron también
la radiactividad del sitio de inyección y del cadáver residual en
un contador de pozo. Estos procedimientos estándar se han utilizado
durante muchos años en el laboratorio del inventor con un cuidado
animal apropiado y aprobación de la seguridad radiológica. Se
generaron las tablas de distribución en tejido mediante un programa
informático que produce los datos de concentración de radiactividad
en tejido corregidos por la descomposición basándose en el
porcentaje de dosis inyectada/g, porcentaje por kg de dosis y
porcentaje de dosis inyectada/órgano \pm EE. En cada punto
temporal, se calcularon las relaciones de tumor a tejido basándose
en el porcentaje de dosis inyectada por gramo de tejido. Se efectuó
un estudio de DT de control (3 ratones/punto temporal, 15 ratones
totales) en ratones portadores de tumor a los 4, 7, 14, 21 y 28
días después de la inyección de NM404 para establecer tablas de DT
comparativas para todos los regímenes terapéuticos.
Protocolos de formación de imágenes generales
descritos en la presente memoria como protocolos de referencia: Los
animales recibieron ^{125}I-NM404 (10 \muCi) por
inyección en la vena de la cola y se anestesiaron en puntos
temporales predeterminados después de ello (anestesia con
pentobarbital de sodio, 0,06 mg/g de peso corporal) y
experimentaron exploración con radionucleidos usando un escáner
radioTLC Bioscan AR2000 modificado para la formación de imágenes de
ratón (colimador de alta resolución de 1 mm/1 min de tiempo de
adquisición por carril/1 mm de incremento de carril). Se
cuantificaron los datos y se presentaron usando software Winscan 2D
de Bioscan. Una vez extirpados, se exploraron también los tumores de
control y tratados ex vivo en la unidad Bioscan para
permitir un análisis de ROI más exacto eliminando la atenuación de
radionucleidos de cuerpo entero. Los animales (con anestesia con
pentobarbital de sodio, 0,06 mg/g de peso corporal) experimentaron
exploración por microTC (MicroCAT I de Imtek, adquisición de 390
etapas/43 Kvp/410 \muA) usando parámetros de adquisición de
resolución media. Se reconstruyeron tridimensionalmente los
conjuntos de datos y se visualizan con software de visualización
tridimensional AMIRA. El software permite el análisis de densidad de
ROI y una medida en pantalla conveniente.
B. Ejemplo de referencia
II
Los éteres fosfolipídicos pueden marcarse
fácilmente con radioisótopos de yodo usando un procedimiento de
intercambio isotópico desarrollado por los inventores^{19}. Los
análogos de éter fosfolipídico yodofenílicos se diseñan
específicamente de modo que el radioyodo fijado a cada molécula sea
estable para facilitar la desyodación in vivo. Se
sintetizaron más de 20 compuestos de PLE radiomarcados y se
ensayaron in vitro e in
vivo^{20-22}. Dos de estos, a saber NM294 y
NM324 [12-(3-yodofenil)dodecilfosfocolina]
mostraron inicialmente ser los más prometedores en estudios de
localización de tumor animal. Estos compuestos prototípicos,
marcados con yodo 125, se localizaban selectivamente en tumores con
el tiempo en los siguientes modelos de tumor animal: 1) rata
Sprague-Dawley que porta carcinosarcoma Walker 256,
2) rata Lewis que porta tumor mamario, 3) rata Copenhague que porta
tumores de próstata Dunning R3327, 4) conejos que portan tumores Vx2
y 5) ratones atímicos que portan tumores de mama humanos (HT39),
pulmonar microcítico (NCI-69), colorrectal (LS174T),
de ovario (HTB77IP3) y de melanoma. La localización tumoral óptima
de estos agentes lleva de uno a varios días.
Estudios mecanísticos con análogos de PLE: NM324
y NM404 son similares en estructura a la miltefosina
(hexadecilfosfocolina), un éter lipídico antitumoral estudiado muy
extensamente en Europa. Las propiedades antitumorales de la
miltefosina y varios otros análogos de éter fosfolipídico
antitumorales se han demostrado en un amplio intervalo de líneas
celulares tumorales, incluyendo carcinomas de próstata, vejiga y
teratocarcinomas, leucemias de murino y humana, así como cánceres
de pulmón, colon, ovario, cerebro y mama^{23}. En contraposición
con muchos medicamentos anticancerosos, estos análogos de éter
fosfolipídico no se unen directamente al ADN y no son mutagénicos.
Aunque no se ha determinado el mecanismo de acción antiproliferativa
preciso, aparentemente actúan en varios sitios de células
tumorales. Estos compuestos se han asociado con una variedad de
efectos celulares incluyendo transporte, promoción de la formación
de citocina, inducción de la apoptosis e interferencia con una
variedad de enzimas clave del metabolismo lipídico y la
señalización celular, la mayoría de las cuales están localizadas en
la membrana celular. Aunque existe debate respecto al modo de
captación en células, la mayoría de los informes apoyan ahora la
idea de que estos éteres lipídicos se absorben directamente en las
membranas celulares donde se acumulan. Es una creencia extendida
que estos agentes actúan alterando el metabolismo fosfolipídico de
la membrana, sin embargo, los estudios de distribución celular con
estos agentes han estado limitados por la redistribución
compartimental celular espontánea durante los procedimientos de
homogeneización y fraccionamiento subcelular. En contraposición con
las dosis de formación de imágenes indicadoras (varios \mug) que
los inventores han empleado, los efectos antitumorales se observan
sólo a dosis generalmente superiores a 300-1.000 mg
al día^{23}.
Se ha realizado estudios formales del
metabolismo en varios análogos de PLE incluyendo NM324, el
predecesor de NM404. En estos estudios, se examinó cada agente para
determinar su capacidad de servir como sustrato para enzimas
asociadas al metabolismo de PLE. Como se muestra en la Fig. 24,
están implicadas tres rutas enzimáticas importantes en el
metabolismo del PLE. La O-alquilglicerol
monooxigenasa (AGMO) es la responsable de la escisión del engarce
alquiléter en C-1 para formar el alcohol graso de
cadena larga o posteriormente el correspondiente ácido graso. Las
fosfolipasas C (PL_{C}) y D (PL_{D}), por otra parte, dan lugar
a los productos glicerol o ácido fosfatídico, respectivamente.
Usando una preparación de enzima AGMO microsómica, la NM324 no era
un sustrato para esta enzima cuando se comparaba con
[^{3}H]-liso-PAF (factor activante
de plaquetas), que se metabolizaba extensamente. De modo similar,
se analizó la NM324 como sustrato de PL_{C} aislada de Bacillus
cereus, y no se hidrolizaba respecto a
1-palmitoil-2-[3H]-palmitoil-L-3-fosfatidilcolina
(DPPC), que experimentó una hidrólisis significativa.
Finalmente, se sometieron varios análogos de PLE
a un ensayo de PL_{D}. La PL_{D}, que se aisló de repollo, es
similar a la PL_{D} de mamífero en que la forma de repollo
proporciona productos de tipo fosfatidiletanol además de ácido
fosfatídico cuando la reacción enzimática se efectúa en presencia de
etanol. Varios de los análogos de PLE sometidos a estas condiciones
de ensayo dieron lugar al aducto de fosfatidiletanol, indicando una
posible interacción con PL_{D}.
Se sometieron también varios precursores de
NM404 a estudios de metabolismo in vitro en diversas líneas
celulares, incluyendo células tumorales Walker, de músculo de rata
(H9c2) y hepatocitos de rata. En estos estudios, se determinó la
extensión del metabolismo basándose en los productos radiomarcados
formados después de incubación durante diversos periodos de tiempo
y se normalizaron los resultados al número celular o a la cantidad
de proteína celular. La extracción lipídica posterior del medio de
incubación y la suspensión celular demostraron poca generación de
metabolitos de PLE en las células tumorales Walker, mientras que se
observó una producción significativa de metabolitos tanto en las
células musculares como en hepatocitos durante el periodo de 48 h
estudiado. Estos resultados se correlacionan bien con los estudios
de biodistribución in vivo completados en todos los
análogos. Aunque se han completado varios estudios, el papel del
atrapamiento metabólico en la captación y retención de análogos de
PLE radiomarcados en células tumorales no está bien definido y
actualmente sigue siendo un área activa de investigación.
Evaluación clínica de NM324: De los varios
análogos de PLE de primera generación prometedores, la NM324 era el
más fácilmente sintetizado y por tanto se seleccionó como compuesto
principal para los estudios clínicos iniciales. Aunque las imágenes
obtenidas en 5 pacientes de cáncer de pulmón humanos detectaron
tumores, las imágenes estaban complicadas por una alta radiactividad
hepática (Fig. 2).
Análogos de PLE de segunda generación: Para
reducir la captación hepática y prolongar la fase plasmática, se
sintetizaron 9 análogos estructurales de NM324 y se radiomarcaron
con ^{125}I para análisis de formación de imágenes inicial en
ratas Copenhague que portaban tumores de próstata Dunning R3327.
Basándose en este cribado inicial, se seleccionaron NM347, NM404
[18-(4-yodofenil)octadecilfosfocolina] y
NM412 (Fig. 3) para experimentar formación de imágenes y análisis de
biodistribución adicionales en modelos tumorales animales.
Los estudios de formación de imágenes más
recientes con NM404 y NM412 en modelos animales han mostrado que
ambos eran superiores a NM324 en la visualización de una variedad de
tumores. De forma significativa, las metástasis de nódulo linfático
estaban claramente delineadas en un modelo de tumor de próstata
metastásico después de la administración intravenosa de NM404 o
NM412. Lo más importante, el indicador no se retenía por nódulos
linfáticos no implicados^{24}. (Fig. 4A). Aunque realizado en un
modelo de próstata, este descubrimiento es particularmente
relevante para cáncer de mama, en el que la implicación de nódulos
linfáticos es un indicador de pronóstico tan importante. Un estudio
piloto preliminar realizado en ratones SCID portadores de tumores
NSCLC A549 humanos fue esperanzador y demostró que la NM404 supera
el problema de un alto aclaramiento de primer paso de NM324 por el
hígado. La NM404 muestra una excelente visualización tumoral,
especialmente notable en las imágenes retardadas, con captación de
hígado y riñón mínima en comparación con NM324 (Fig. 4). Los
estudios de biodistribución en tejido confirmaron adicionalmente los
altos niveles de radiactividad residente en los tumores. Aunque los
resultados de formación de imágenes fueron similares con NM404 y
NM412, los datos de dosimetría obtenidos en ratas revelaron que se
encontraron menores dosis de riñón con NM404 con respecto a NM412,
y por tanto se seleccionó NM404 para estudios adicionales. Los datos
de biodistribución comparativos para NM324 y NM404 en ratones SCID
con modelos tumorales de cáncer de próstata y de pulmón A549 han
revelado altas relaciones de tumor a tejido normal y una captación
tumoral superior al 25% de la dosis inyectada con NM404.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Los estudios de formación de imágenes animales
efectuados en modelos de ratón dirigidos a determinar las
características de captación en una amplia variedad de modelos
tumorales se resumen en la Tabla 1. Los resultados preliminares en
ratones B6 Apc^{Min}/+ indican que la NM404 no se incorpora
por pólipos adenomatosos sino que se incorpora y retiene por
adenocarcinomas mamarios en este modelo, indicando por tanto una
posible especificidad por células tumorales malignas. Estos
estudios están dirigidos a determinar el potencial de NM404 de
caracterizar tumores de forma no invasiva. La NM404 ha exhibido una
captación y retención tumorales significativas en cada modelo de
adenocarcinoma estudiado.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Relevancia del modelo tumoral de murino de CT26:
Los inventores exploraron a NM404 como pronóstico de la respuesta
tumoral en un modelo de murino (ratones BALB/c) con inoculación
subcutánea de células CT26 en los flancos del ratón. La línea
celular CT26 es un adenocarcinoma de murino poco diferenciado que se
indujo mediante la inyección rectal de
N-nitroso-N-metiluretano en los vasos (inyección en la
vena de la cola, modelo metastásico) o en la piel (Fig. 5) o el
hígado^{25, 26}. Debido a que la línea celular deriva de un cáncer
colorrectal, este modelo de murino es muy relevante clínicamente
para estos estudios.
Resultados de formación de imágenes preliminares
con NM404 en tumores CT26: En un experimento preliminar para
mostrar que la NM404 se localiza en xenoinjertos de CT26
subcutáneos, se inyectaron a dos animales (IV en la vena de la
cola) ^{125}I-NM404 (10 \muCi) y se formaron
imágenes posteriormente en un escáner de radioTLC modificado AR2000
de Bioscan (equipado con un colimador de alta resolución de 1 mm y
adquisición bidimensional y software de análisis) a los 1, 4 y 7
días después de la inyección. El día 7, se sacrificó el animal y se
retiró el tumor, se fotografió y se exploró ex vivo en el
Bioscan (Fig. 6). La exploración ex vivo es un protocolo
estándar en el laboratorio del inventor debido a los graves efectos
de atenuación en tejido asociados al yodo 125. Cada animal
experimentó también exploración por microTC (Fig. 7) el día 7 antes
del sacrificio y la disección del tumor. Los puntos focales
intensos se correlacionaban visualmente con todos los tumores de
las imágenes de Bioscan ex vivo (Fig. 6). Aunque los nódulos
linfáticos son visibles, no se asoció radiactividad con ellos,
indicando una falta de infiltración de células tumorales. El tumor
principal en las Fig. 6 y 7 se clasificó histológicamente como
adenocarcinoma. Los inventores han explorado una amplia variedad de
tumores subcutáneos mediante microTC y todos son muy fácilmente
detectables hasta menos de 300 \mum de diámetro.
La ablación por RF inicial del tumor CT26
subcutáneo de ratón fue exitosa y dio como resultado lesión celular
grave (Fig. 8) como se indica por la pérdida de membranas celulares
en la sección teñida con H&E tratada.
\vskip1.000000\baselineskip
C. Ejemplo de referencia
III
Se efectuaron estudios de formación de imágenes
y biodistribución en ratones SCID (mutación de inmunodeficiencia
combinada grave) portadores de la línea celular A549 de
adenocarcinoma de NSCLC humano (adenocarcinoma que se ha convertido
en el tipo histológico de cáncer de pulmón humano más frecuente).
Los resultados piloto preliminares en 5 animales fueron alentadores
y demostraron que el nuevo agente NM404 supera la limitación del
compuesto NM324. Aunque hay una captación en tumor razonablemente
buena con NM324, la formación de imágenes está comprometida por un
alto aclaramiento de primer paso por el hígado. Sin embargo, la
NM404 muestra una excelente visualización, especialmente notable en
las imágenes retardadas, con una captación mínima en hígado y riñón.
Además, los estudios de biodistribución en tenido confirmaron
adicionalmente los altos niveles de radiactividad residente en los
tumores. Se muestra una comparación de imágenes de NM324 y NM404 en
un modelo de NSCLC humano en ratón SCID en la Fig. 4. Obsérvese la
falta relativa de actividad en hígado, riñón e intestino con NM404,
acoplada con una excelente visualización de tumor. Aunque los
resultados de formación de imágenes eran similares con NM404 y
NM412, los datos recientes de dosimetría obtenidos en ratas han
revelado que se encontraron dosis menores en riñón con NM404 con
respecto a NM412, y por tanto se ha seleccionado NM404 para estudios
adicionales.
Se han reunido anteriormente extensos datos de
biodistribución para el agente prototípico
^{125}I-NM324 en varios modelos tumorales.
Counsell R.E., Schwendner S.W., Meyer K.L., Haradahira T., Gross
M.D., "Tumor visualization with a radioiodinated phospholipid
ether", J. Nucl. Med. 31(3):
332-336, 1990; Plotzke K.P., Fisher S.J., Wahl
R.L., Olken N.M., Skinner S., Gross M.D., Counsell R.E. "Selective
localization of a radioiodinated phospholipid ether analog in human
tumor xenografts", J. Nucl. Med. 34(5):
787-792, 1993; Rampy M.A., Brown R.S., Pinchuk
A.N., Weichert J.P., Skinner R.W., Fisher S.J., Wahl R.L., Gross
M.D., Etheir S.P., Counsell R.E. "Biological disposition and
imaging of a radioiodinated alkylphosphocoline in two rodent models
of breast cancer", J. Nucl. Med. 37(9):
1540-1545, 1996. Se observaron relaciones de tumor a
sangre superiores a 8:1 a tiempos retardados después de la
inyección. Por ejemplo, en un modelo de tumor mamario de rata, las
relaciones de tumor a tejido normal alcanzaron un máximo a las 96
horas con una relación de tumor a sangre de 8,6 y una relación de
tumor a músculo de 20:1. Rampy M.A., Brown R.S., Pinchuk A.N.,
Weichert J.P., Skinner R.W., Fisher S.J., Wahl R.L, Gross M.D.,
Etheir S.P., Counsell R.E. "Biological disposition and imaging of
a radioiodinated alkylphosphocoline in two rodent models of breast
cancer", J. Nucl. Med. 37(9):
1540-1545, 1996. Además, la biodistribución de la
radiactividad asociada a PLE es heterogénea en el tumor, como se
demuestra por estudios de microautorradiografía que muestran que la
radiactividad de PLE reside exclusivamente en células tumorales
viables localizadas hacia las regiones exteriores en lugar de las
regiones necróticas centrales. Rampy M.A., Brown R.S., Pinchuk
A.N., Weichert J.P., Skinner R.W., Fisher S.J., Wahl R.L., Gross
M.D., Etheir S.P., Counsell R.E., "Biological disposition and
imaging of a radioiodinated alkylphosphocoline in two rodent models
of breast cancer", J. Nucl. Med. 37(9):
1540-1545, 1996. Los datos de biodistribución
comparativos para NM324 y NM404 en ratones SCID se han efectuado
hasta ahora sólo en modelos tumorales de cáncer de próstata y de
pulmón A549. Estos estudios han revelado altas relaciones de tumor
a tejido normal y una captación tumoral superior al 25% de la dosis
inyectada con NM404, apoyando por tanto el deseo de estudiar la
biodistribución de análogos de PLE en modelos tumorales y humanos
más espontáneos.
Se efectuó un estudio adicional dirigido a la
sensibilidad relativa de NM404 respecto a NM324 en un modelo de
cáncer de pulmón A549 de ratón SCID. Se extirparon los pulmones de
cada animal 10 días después de la administración de dosis iguales de
cada agente y se formaron imágenes in vivo durante 1 hora
para potenciar la resolución.
Las imágenes de baja resolución y altamente
amplificadas mostradas en la Fig. 23 revelaron la presencia de
radiactividad focal en los pulmones de ambos animales con imágenes
formadas con NM404 y poca o ninguna captación en el par de NM324.
Los análisis patológicos posteriores confirmaron la presencia de
micrometástasis A549 pequeñas (menos de 1 mm de diámetro) en los 4
animales. El índice de recuento en los ratones NM404 era más de 2,5
veces el de los ratones NM324 correspondientes, indicando de nuevo
la superioridad de NM404 frente a NM324.
Es probable, que debido a que la estrategia
orientada a tumor parece implicar una retención selectiva en tumor
frente al tiempo, los nucleidos de vida relativamente corta, tales
como ^{18}F o incluso ^{99m}Tc, no sean prácticos para marcar
actualmente. Sin embargo, como con el uso temprano de anticuerpos
monoclonales que se marcaron exclusivamente con radioisótopos de
yodo, puede ser posible en el futuro marcar análogos de PLE con
marcadores alternativos, tales como yodo 124, en el que la semivida
física coincide bien con la cinética de captación y retención de
PLE en tumor. De hecho, la utilidad de la NM404 marcada con
^{124}I como agente de TEP selectivo de tumor es el objeto de un
proyecto piloto de adquisición de microTEP. El objetivo de este
proyecto es evaluar la factibilidad de marcar NM404 con yodo 124, un
isótopo positrónico relativamente nuevo con una semivida física de
4 días, y evaluar su prometedora formación de imágenes por TEP en
modelos de animales pequeños. Además de aprovechar la potenciación
de la resolución y las capacidades tridimensionales que proporciona
la formación de imágenes por TEP respecto a la formación de imágenes
por cámara gamma tradicional, este enfoque complementaría el uso de
FDG con flúor 18, en el que su captación en células tumorales ocurre
mediante un mecanismo bioquímico diferente de la utilización de
glucosa.
Como se ha discutido anteriormente, la utilidad
de los indicadores actualmente disponibles (por ejemplo, ^{67}Ga
y ^{18}F-FDG) está limitada por la falta de
especificidad para distinguir neoplasias de inflamación. Sin
embargo, los estudios preliminares con agentes de PLE han parecido
prometedores para superar esta limitación clínicamente
significativa, en los que no pudieron visualizarse granulomas
inducidos por carragenina en ratas por encima de la actividad de
fondo y no mostraron retención en tejido. Counsell R.E., Schwendner
S.W., Meyer K.L., Haradahira T., Gross M.D. "Tumor visualization
with a radioiodinated phospholipid ether", J. Nucl. Med.
31(3): 332-336, 1990. Sin embargo, el citrato
de galio utilizado como control en ese estudio se concentraba
significativamente en el granuloma. Dichos descubrimientos
justifican adicionalmente extender los estudios de los inventores a
agentes análogos de PLE como agentes formadores de imágenes
selectivos de tumor potencialmente útiles.
Estudios humanos: Basándose en la muy
prometedora farmacocinética y datos de formación de imágenes en
animales, los inventores se decidieron a realizar estudios de
éteres fosfolipídicos radiomarcados en el campo clínico. Se
valoraron inicialmente en la NM404 no marcada sus efectos tóxicos
agudos en ratas y conejos en estudios realizados en el Toxicology
Research Center, State University of New (SUNY) en Buffalo. No se
observaron efectos tóxicos al nivel de dosis de 3,2 mg/kg (>150
veces la dosis humana mayor prevista) en estos estudios
toxicológicos de dosis aguda. Además, no se demostraron propiedades
activadoras de plaquetas a este alto nivel de dosis.
Se administró NM324 no marcado a 5 seres humanos
normales no enfermos para obtener la aprobación del agente
radiomarcado para administración humana por el Radioactive Drug
Research Committee (RDRC). Estos sujetos no tuvieron evidencias de
toxicidad, como se manifiesta por síntomas, exámenes clínicos,
señales vitales y químicas sanguíneas secuenciales.
Como proyecto piloto de factibilidad, se
estudiaron 4 pacientes de cáncer de pulmón con la aprobación del
RDRC con NM324 marcads con ^{131}I en el hospital de Ann Arbor,
Michigan, VA. Los tumores pulmonares se visualizaron claramente en
los tres pacientes con cáncer de pulmón (dos con NSCLC y uno con
carcinoma broncopulmonar microcítico), descrito con detalle a
continuación. El grado de captación tumoral, en diversos puntos
temporales, varió de 1+ (apenas perceptible por encima del fondo) a
3+ (captación intensa, mucho mayor que las estructuras normales).
Obsérvese que los pacientes seleccionados para estos estudios
iniciales eran aquellos con cánceres conocidos relativamente
grandes. No se pretendía en esta etapa estudiar pacientes en los que
existieran problemas de asignación de etapa tumoral.
\vskip1.000000\baselineskip
El paciente 01 era una mujer de 55 años con una
masa en el lóbulo pulmonar derecho medio que atacaba las costillas
derechas, histológicamente un adenocarcinoma productor de mucina de
probable origen pulmonar. Las imágenes escintigráficas por
^{131}I-NM324 iniciales a las 6 horas mostraron un
foco de captación en el pulmón medio lateral derecho. Por razones
no relacionadas con el estudio escintigráfico, la paciente fue
incapaz de volver al hospital 6 horas después para una sesión de
formación de imágenes adicional.
El paciente 02 era un hombre de 62 años con una
masa mediastínica lobulada grande (9 x 7 x 7,5 cm) que se extendía
desde la ventana aortopulmonar al hilio izquierdo. El tipo de tejido
era un carcinoma broncopulmonar microcítico no diferenciado (célula
de grano de avena). Las imágenes escintigráficas por
^{131}I-NM324 revelaron un foco de captación en
el pulmón superior izquierdo, que aumentó en intensidad con el
tiempo respecto a la actividad de fondo normal.
El paciente 03, un hombre de 74 años, con un
lóbulo superior derecho de NSCLC (adenocarcinoma), se trató 5 meses
antes con terapia de radiación. La enfermedad recidivó en la língula
izquierda (masa de 2,5 x 2 x 3 cm), columna torácica inferior
(aprox. T8) y lóbulo derecho del hígado. La escintigrafía con
^{131}I-NM324 mostró una captación bien definida
en la masa pulmonar y la lesión de columna torácica, que demostró
relaciones crecientes de diana a fondo con el tiempo (Fig. 2). La
captación en la metástasis hepática no puedo resolverse por encima
del fondo hepático normal.
Estos estudios proporcionaron un vistazo
temprano a la promesa clínica de análogos de PLE radiomarcados.
Aunque el ^{131}I es un agente subóptimo con fines de formación
de imágenes, se representó claramente la captación en los tres
tumores pulmonares. Como se esperaba, basándose en experimentos de
biodistribución animal anteriores, la actividad en los tumores
aumentó con el tiempo, como se demuestra claramente en los pacientes
02 y 03. En el paciente 03, las relaciones de tejido tumoral a
normal aumentaron de 2,74 a los 2 días a 4,23 a los 7 días. El
paciente 01 no volvió para sesiones de formación de imágenes
posteriores a las 6 horas. Las relaciones de diana a fondo
crecientes constituyen una fuerte evidencia de que el mecanismo de
visualización tumoral no está basado simplemente en un flujo
sanguíneo anormal o hipervascularidad tumoral. Es más, los estudios
animales que usaban seroalbúmina humana con ^{99m}Tc confirmaron
esto^{1}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de
referencia
Aunque la NM404 ha exhibido una retención
tumoral selectiva y prolongada en 25/25 modelos de xenoinjerto y
espontáneos de roedores, un análisis de IND patrocinado por un
médico inició recientemente la evaluación clínica del agente en
pacientes de carcinoma broncopulmonar no microcítico de etapa 4 para
determinar si exhibiría unas propiedades de captación y retención
tumorales similares o no en seres humanos. Hasta la fecha, se han
formado imágenes de dos pacientes con NSCLC avanzado después de una
inyección de < 1 mCi de ^{131}I-NM404. Se
recogieron muestras de sangre y orina en momentos predeterminados, y
se efectuó la formación de imágenes gamma en diversos puntos
temporales después de la administración. En ambos pacientes, se
demostró una captación y retención tumorales significativas de
NM404 en el tumor pulmonar primario, como se observa en las figuras
29 y 30. Respecto a los altos valores de captación hepática
observados anteriormente con su predecesor de primera generación
NM324, las actividades hepática y abdominal son mucho menores con
NM404, sugiriendo la factibilidad de evaluar este agente en otros
cánceres abdominales incluyendo pancreático, de colon y de
próstata.
Materiales y procedimientos: Después de la
inyección intravenosa de NM404 marcada con yodo 131 (1 mCi/20
\mug), se exploraron pacientes con NSCLS avanzado a las 3, 6, 24,
48 y 96 h y a los 7 y 11 días en un escáner SPECT GE Maxxus dual
Head. Se recogieron muestras de sangre y orina para análisis
farmacocinético así como bioanálisis clínico hematológico, renal y
hepático.
Resultados: Los resultados de formación de
imágenes cualitativas indican que la NM404 marcada con yodo 131 se
localiza claramente en masas pulmonares bilaterales tan pronto como
24 horas después de la inyección y se retiene selectivamente en
estos tumores más de 11 días. Además, la radiactividad de fondo en
el hígado y la región abdominal inferior, incluyendo vejiga
urinaria, riñones e intestinos, era significativamente menor que la
observada anteriormente con su predecesor NM324. No se observaron
reacciones adversas en ninguno de los pacientes.
Conclusiones: Estos descubrimientos preliminares
sugieren que la NM404 exhibe unas propiedades de captación y
retención tumoral similares en NSCLC humano que las observadas
anteriormente en modelos de roedores.
Aunque basándose en sólo dos pacientes en este
momento, parece que la NM404 se localiza y experimenta retención
tumoral selectiva y prolongada en carcinoma broncopulmonar no
microcítico.
Paciente 1: Hombre de 55 años con NSCLC
bilateral en lóbulo izquierdo de 3 cm e infiltrativo en lóbulo
derecho, metástasis cerebral y una pequeña masa suprarrenal derecha.
Ha participado en numerosos regímenes de tratamiento estándares y
experimentales. Las imágenes se incluyen en la Fig. 29.
Paciente 2: Hombre de 70 años recientemente
diagnosticado con una masa no microcítica en el lóbulo superior de 6
cm, un masa hepática de 5 mm, una micrometástasis de hueso ilíaco y
una metástasis cerebral muy pequeña. Había completado recientemente
una quimioterapia de carboplatino/taxol de dosis baja y radioterapia
paliativa de las metástasis ilíaca y cerebral la semana antes de
iniciar el ensayo de NM404. Las imágenes se muestran en la Fig.
30.
\vskip1.000000\baselineskip
D. Ejemplo de referencia
IV
Los inventores estudiaron también la avidez de
NM404, un análogo de PLE de segunda generación, en el modelo de
adenocarcinoma pancreático de ratón c-myc, que es
conocido por producir tumores invasivos con fenotipo acinar/ductal
mixto.
Materiales y procedimientos: Se han desarrollado
dos cepas de murino que son endógenas de c-myc o
k-ras, oncogenes bien conocidos, en la Universidad
de Wisconsin. Sandgren E.P., Quaife C.J. et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 1991; 88: 93-97; Grippo P.J.,
Nowlin P.S. et al. Cancer Research 63(9):
2016-2019, 2003.
Se orienta la expresión de c-myc
a células acinares pancreáticas porque está ligado a un promotor de
elastasa, que se expresa sólo en el páncreas. Estos ratones
endógenos de ela-1-myc desarrollan
neoplasias acinar y ductal, que dan como resultado la muerte a
entre 2 y 7 meses de edad. A un mes de edad, el páncreas parece
engrosado y firme. Por tanto, los ratones entre las edades de 1 y 3
meses sirven como excelentes modelos para el estudio de cáncer
pancreático. La mayoría de los neoplasmas pancreáticos humanos
tienen una morfología ductal y las estrategias de orientación por
transgén del Dr. Sandgren están dirigidas a desarrollar tumores que
sean específicos del epitelio ductal pancreático.
El modelo c-myc produce tumores
que son adenocarcinomas invasivos, con fenotipo acinar/ductal mixto.
La biología del modelo k-ras es notablemente
diferente. Los tumores k-ras se han clasificado con
"carcinoma in situ", lo que significa que tienen rasgos
de neoplasia pero no invaden y generalmente permanecen pequeños
(<2 mm). Su apariencia celular es muy parecida a los tumores
humanos tempranos, así que desde una perspectiva histológica son un
modelo más relevante de enfermedad humana. Además, se parecen a las
etapas muy tempranas de la enfermedad humana. La capacidad de
detectar el desarrollo "temprano" de tumores
k-ras frente a los tumores grandes y más avanzados
en ratones c-myc sería una etapa excepcionalmente
importante hacia la identificación de lesiones tempranas (quizás
curables) en seres humanos. El hecho de que las mutaciones
k-ras sean la causa de más del 90% de los
adenocarcinomas pancreáticos humanos presta un apoyo adicional a la
validez de este modelo par la evaluación de nuevos agentes de
formación de imágenes tumorales.
Estudios de formación de imágenes: Para
determinar si la NM404 se localiza en tumores pancreáticos de ratón,
se exploraron seis ratones endógenos de c-myc en un
escáner de radioTLC AR-2000 de Bioscan (modificado
en el laboratorio de los inventores para la formación de imágenes
de ratón) de 2-21 días después de la inyección en
la vena de la cola de ^{125}I-NM404 (15 \muCi/20
g de peso corporal). El último día, los ratones experimentaron
también exploración por microTC (42 kvp, 410 \muA, 390 etapas,
MicroCAT-I, Imtek, Inc., Knoxville, TN). Después de
la formación de imágenes in vivo de ratones anestesiados, se
extirparon los tumores pancreáticos y se exploraron ex vivo
en el mismo escáner (equipado con colimador de alta resolución de 1
mm, adquisición bidimensional y software de análisis) para evitar
la atenuación en tejido asociada a la baja energía del yodo 125
(Fig. 9-10). En el sacrificio, se extirparon los
tejidos, se pesaron y se cuantificó la radiactividad en un contador
gamma.
Resultados y discusión: Los resultados de
formación de imágenes iniciales con NM404 en el modelo de
c-myc indicaron una notable captación y prolongada
retención (> 21 días) en todos los adenocarcinomas en el
intervalo de 5-12 mm de diámetro. Como se ha
observado en el cultivo celular previo en estudios de modelo animal
in vivo, la NM404 aparentemente se metaboliza y elimina de
células normales, pero se atrapa metabólicamente en membranas de
células tumorales. Los experimentos anteriores de autorradiografía
en otros modelos tumorales han sugerido que sólo las células
tumorales viables, y no tejido normal ni tejidos necróticos, son
capaces de acumular NM404. Los inventores fueron también capaces de
detectar tumores pancreáticos en ratones vivos con microTC a pesar
de la naturaleza ubicua del páncreas en los ratones (Fig. 11).
Aunque el número de animales portadores de tumor pancreático es
pequeño (n= 6), los datos de tumor a fondo preliminares de NM404
parecen prometedores.
Conclusiones: La NM404 exhibía una retención
selectiva y prolongada en los adenocarcinomas pancreáticos
espontáneos examinados en este estudio, extendiéndose por tanto la
selectividad tumoral de este agente.
\vskip1.000000\baselineskip
E. Ejemplo de referencia
V
Materiales y procedimientos: Se albergaron y
trataron todos los animales según las directrices del Research
Animal Resources Center de la Universidad de Wisconsin. Se
propagaron células de glioma C6 de rata en medio DMEM (Life
Technologies, Gaithersburg, MD) suplementado con FBS termoinactivado
al 10% (BioWhittaker, Walkersville, MD), 100 U/ml de penicilina G,
estreptomicina 100 mg/ml y HEPES 0,01 M (Life Technologies,
Gaithersburg, MD). Se efectuó un implante tumoral intracraneal como
se describe anteriormente (ref). Brevemente, se resuspendieron 1 x
10^{6} células C6 en 5 ml de metilcelulosa al 1,2% y se inyectaron
en los lóbulos frontales de ratas Wistar hembra anestesiadas
(Harlan Indianápolis, IN). Los animales operados ficticiamente
recibieron inyecciones intracraneales de un volumen igual de
metilcelulosa sin células tumorales.
Estudios de formación de imágenes: Diez días
después del implante, se confirmó la presencia de tumores
intracraneales con IRM. Brevemente, las ratas anestesiadas (6)
recibieron 2 ml de gadodiamida (Gd, Omniscan 287 mg/ml, Nycomed,
Princeton, NJ) por vía intraperitoneal y se formaron imágenes 10 min
después usando un sistema MR clínico de 1,5 tesla (GE Signa LX) y
una antena de superficie de extremo GE. Se inspeccionaron las
secuencias de cortes múltiples de T1 ponderados (TR= 500 ms, TE=
16,5 ms) que cubren todo el cerebro de cada rata para seleccionar
las ratas portadoras de tumor con tamaños tumorales variables, y las
ratas operadas ficticiamente para inyecciones de NM404.
Se radioyodó la NM404
[18-(4-yodofenil)octadecilfosfocolina] (Fig.
3A, 100 mg) con ^{125}I mediante intercambio isotópico con
Na^{125}I en una mezcla fundida de ácido piválico. Weichert et
al., Int. Appl. Rad. Isotopes 1986; 37:
907-913. Después de purificación por HPLC, se
disolvió la NM404 en una solución acuosa de polisorbato 20 al 2%
antes de inyección en la vena de la cola (5-20
\muCi/200 g de rata) en cuatro ratas portadoras de tumor y tres
operadas ficticiamente. A los 1 (n= 1), 2 (n=1) y 4 (n= 2) días
después de la inyección con NM404, se sacrificaron los animales
(CO_{2}), se extirparon los cerebros y se formaron imágenes en un
escáner radioTLC AR2000 de Bioscan (incrementos de 1 mm a 2 min de
adquisición/carril y colimador de alta resolución de 1 mm). Además,
se pesaron tejidos de cerebro, sangre, riñón, hígado, bazo y
tiroides normales y tumoral y se contó la radiactividad en un
contador gamma. Se correlacionó entonces la distribución en tejido
de la radiactividad con la histología cerebral.
Resultados y discusión: Los resultados de
formación de imágenes iniciales con NM404 indicaron una notable
captación y prolongada retención en todos los gliomas en el
intervalo de 3-5 mm de diámetro. La radiactividad
en el tejido cerebral normal era mínima en animales de control
operados ficticiamente (Fig. 12), mientras que la NM404 se
concentraba intensamente en los gliomas (Fig. 13). Las relaciones de
tumor a cerebro (% de dosis inyectada/g) en ratas portadoras de C6
eran de 10,5, 12,2 y 6,7 a 24, 48 y 96 h, respectivamente. Como se
ha observado en estudios de cultivo celular y de modelo animal in
vivo, la NM404 se metaboliza y elimina aparentemente de células
normales pero se atrapa metabólicamente en membranas celulares
tumorales. Los experimentos de autorradiografía anteriores en otros
modelos tumorales han sugerido que sólo las células tumorales
viables, y no tejido normal ni tejidos necróticos, son capaces de
acumular NM404. De forma interesante, incluso los tumores pequeños
que miden unos pocos mm de diámetro fueron detectados también
después de la administración de NM404. Estos descubrimientos
preliminares sugieren que la NM404 puede ser también útil para la
visualización de focos tumorales invasivos pequeños.
Conclusión: Como ha sido el caso en todos los
modelos tumorales examinados anteriormente, la NM404 exhibía una
retención selectiva y prolongada por los gliomas C6 de rata
evaluados en este estudio.
\vskip1.000000\baselineskip
F. Ejemplo de referencia
VI
Los resultados preliminares obtenidos en más de
14 modelos de xenoinjertos y tumor espontáneo han mostrado
universalmente que la NM404 experimenta una captación selectiva y
una retención prolongada en tumores. Además, debido a que la NM404
proporciona menores niveles de fondo hepáticos que sus predecesores,
los inventores extendieron la evaluación a tumores hepáticos a la
vista del hecho de que la formación de imágenes de pacientes con
HCC ha sido problemática. Muchos pacientes tienen cirrosis
subyacente, y por lo tanto es difícil distinguir los nódulos
regenerativos de HCC en la formación de imágenes de sección
transversal. Además, los estudios preliminares que evalúan la
exploración por TEP con FDG han mostrado sólo un
20-50% de sensibilidad en la detección de la
enfermedad. Verhoef C., Valkema R. et al., Liver (2002) 22:
51-56.
Materiales y procedimientos: Modelo de HCC en
ratón endógeno. Se ha evaluado extensamente el desarrollo de cáncer
hepatocelular espontáneo en ratones endógenos que sobreexpresan el
gen TGF\alpha y es un modelo animal extremadamente prometedor
para el estudio de esta enfermedad. Lee G.H., Merlino G., Fausto N.,
Cancer Research (1992) 52: 5162-5170. El
TGF\alpha es un mitógeno para células epiteliales y se une al
receptor de EGF; la expresión no regulada de TGF\alpha da como
resultado la formación de tumor. En ratones CD1 macho que expresan
el transgén TGF\alpha bajo el control del promotor de
metalotioneína inducible por cinc 1 (MT1), un
75-80% desarrollan HCC después de los 12 meses de
edad. Sin embargo, cuando se usa el agente alquilante
dietilnitrosamina (DEN), un carcinógeno químico, para inducir el
crecimiento tumoral a los 15 días de vida, el 90% de los ratones
desarrollan HCC a los 6 meses de edad. En el examen histológico,
estos tumores consisten en carcinomas hepatocelulares bien
diferenciados de un patrón sólido. Debido a que los tumores surgen
espontáneamente, los inventores utilizan estos animales como modelo
adecuado para estudios preclínicos.
Modelo de xenoinjerto de adenocarcinoma de colon
CT26: Además del modelo de HCC espontánea, se evaluó también la
NM404 en un modelo tumoral de adenocarcinoma de colon como
xenoinjerto mediante el que se inyectaron anteriormente células
CT26 (5 x 10^{5} células/50 \mul) directamente en el parénquima
hepático de ratones BALB/c hembra para la creación de tumores
hepáticos focales.
Estudios de formación de imágenes: Se radioyodó
NM404 (Fig. 3A, 100 \mug) con ^{125}I mediante intercambio
isotópico en una mezcla fundida de ácido piválico. Weichert J.P.
et al., Int. J. Applied Radiat. Isot. (1986) 37(8):
907-913. Después de la purificación por HPLC, se
disolvió en una solución acuosa de polisorbato 20 al 2% antes de la
inyección en la vena de la cola (15 \muCi/20 g de ratón) en 3
ratones endógenos de TGF\alpha o como alternativa en 3 ratones
portadores del tumor CT26. Se anestesiaron los ratones y se
exploraron durante hasta 21 días después de la inyección en un
escáner radioTLC AR2000 de Bioscan (incrementos de 1 mm a 2 min de
adquisición/carril y colimador de alta resolución de 1 mm) y también
en un escáner microTC de Imtel (390 etapas) para correlación
anatómica. Se exhibieron las imágenes por microTC usando software
Amira. En el sacrificio, se extirparon inicialmente los hígados
portadores de tumor y se exploraron ex vivo. Se extirparon
entonces los tumores, se pesaron, se exploraron ex vivo y se
cuantificó la radiactividad. Se remitieron las muestras de lesión a
clasificación histológica.
Resultados y discusiones: Los resultados de
formación de imágenes iniciales con NM404 (Fig. 14, 15) han mostrado
una notable captación (>20% de dosis/g) y una prolongada
retención tanto en carcinomas espontáneos como implantados en el
hígado. La retención tumoral de NM404 persistía en estos animales
durante 21 días, el punto final del estudio predeterminado. Las
imágenes de microTC de contraste potenciado confirmaron la presencia
y localización precisa de todos los tumores hepáticos (Fig. 14,
16). La extracción lipídica y posterior análisis por HPLC del
tejido tumoral indicaron que la radiactividad seguía asociada al
compuesto original. Como se ha observado en estudios de cultivo
celular y de modelo animal in vivo anteriores, la NM404 se
metaboliza y elimina aparentemente de células normales, pero se
atrapa metabólicamente en membranas de células tumorales.
Conclusiones: Como ha sido el caso en todos los
modelos tumorales anteriores examinados, la NM404 exhibía una
retención selectiva y prolongada tanto por los modelos tumorales
hepáticos de murino espontáneo como de xenoinjerto evaluados en este
estudio.
\vskip1.000000\baselineskip
G. Ejemplo de referencia
VII
Materiales y procedimientos: Modelo de ratón
Apc^{Min/+}: Este modelo comprende ratones portadores del alelo
Min de Apc (ratones Apc^{Min/+}). Este modelo ofrece
ventajas específicas frente a modelos de xenoinjerto en que los
ratones Apc^{Min/+} están predispuestos a desarrollar hiperplasias
y carcinomas mamarios y adenomas intestinales. En el fondo genético
de C57BL/6J, aproximadamente un 5% de las hembras no tratadas
desarrollarán un tumor mamario a los 100 días de edad. Moser A.R.,
Dove et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90:
8977-81. La incidencia y multiplicidad de las
lesiones mamarias pueden aumentarse mediante una sola dosis de
etinilnitrosourea (ENU), un agente alquilante de acción directa. El
tratamiento con ENU da como resultado que un 90% de hembras B6
Apc^{Min/+} desarrollan una media de 3 carcinomas de células
escamosas (SCC) mamarios pero pocas lesiones hiperplásicas a los 60
días después del tratamiento.
Los ratones Apc^{Min/+} portan un solo cambio
de pares de bases en el gen Apc (poliposis adenomatosa de colon).
El gen APC/Apc codifica una proteína grande con varios
dominios funcionales potenciales. Groden J., Thliveris A., Samowitz
W., Carlson M., Gelbert L., Albertsen H., Joslyn G., Stevens J.,
Spirio L., Robertson M, et al. "Identification and
characterization of the familial adenomatous polyposis coli
gene", Cell (1991) 66, 589-600; Kinzler
K.W., Nilbert M.C., Vogelstein B., Bryan T.M., Levy D.B., Smith
K.J., Preisinger A.C., Hamilton S.R., Hedge P., Markham A. et
al. "Identification of a gene located at chromosome 5q21 that
is mutated in colorrectal cancers", Science (1991) 251,
1366-1370. Las proteínas APC de ratón y humana son
un 90% idénticas y todos los dominios funcionales potenciales están
conservados. La APC regula los niveles de
\beta-catenina. La
\beta-catenina tiene múltiples papeles en la
célula, incluyendo la estabilización de E-cadherina
y la regulación de la transcripción mediante la familia LEF y TCF de
factores de transcripción. Aberle H., Schwartz H. y Kemler R.,
"Cadherin-Catenin Complex-Protein
Interactions and Their Implications For Cadherin Function",
Journal of Cellular Biochemistry (1996), 61,
514-523; Huber O., Korn R., McLaughlin J., Ohsugi
M., Herrmann B.G. y Kemler R. "Nuclear localization of
beta-catenin by interaction with transcription
factor LEF-1", Mechanisms of Development
(1996) 59, 3-10; Beherens J., Vonkries J.P., Kuhl
M.; Bruhn L., Wedlich D., Grosschedl R. y Birchmeier W.
"Functional Interaction of Beta-Catenin with the
Transcription Factor Lef-1", Nature
(1996) 382, 638-642. La regulación de los niveles de
\beta-catenina implica la interacción de APC,
axina o conductina y glucógeno sintasa cinasa 3\beta (GSK3\beta)
con \beta-catenina. Behrens J., Jerchow B.A.,
Wurtele M., Grimm J., Asbrand C., Wirtz R., Kuhl M., Wedlich D. y
Birchmeier W. "Functional interaction of an axin homolog,
conductin, with beta-catenin, APC and GSK3beta",
Science (1998) 280, 596-599; Ikeda S.,
Kishida S., Yamamoto H., Murai H., Koyama S. y Kikuchi A. "Axin, a
negative regulador of the Wnt signaling pathway, forms a complex
with GSK-3beta and beta-catenin and
promotes
GSK-3-beta-dependent
phosphorylation of beta-catenin", EMBO
Journal (1998) 17, 1371-1384; Kishida S.,
Yamamoto H., Ikeda S., Kishida M., Sakamoto I., Koyama, S. y
Kikuchi A. "Axin, a negative regulador of the wnt signaling
pathway, directly interacts with adenomatous polyposis coli and
regulates the stabilization of beta-catenin",
Journal of Biological Chemistry (1998) 273,
10823-10826; Sakanaka C., Weiss, J.B. y Williams
L.T. "Bridging of beta-catenin and glycogen
synthase kinase3-beta by axin and inhibition of
beta-catenin-mediated
transcription", Proceedings of the National Academy of
Sciences of the United States of America (1998) 95,
3020-3023; Rubinfeld B., Albert I., Porfiri E., Fiol
C., Munemitsu S. y Polakis P. "Binding of GSK3beta to the
APC-beta-catenin complex and
regulation of complex assembly", Science (1996) 272,
1023-1026; Rubinfeld B., Souza B., Albert I., Muller
O., Chamberlain S.H., Masiarz F.R., Munemitsu S. y Polakis P.
"Association of the APC gene product with
beta-catenin", Science (1993) 262,
1731-1734; Polakis P., "The adenomatous polyposis
coli (APC) tumor suppressor", Biochimica et Biophysica
Acta (1997), 1332, F127-147. Esta interacción da
lugar a la fosforilación de la \beta-catenina, lo
que la orienta a la degradación por la ruta de
ubiquitina-proteosoma. Rubinfeld B., Souza B.,
Albert I., Muller O., Chamberlain S.H., Masiarz F.R., Munemitsu S.
y Polakis P., "Association of the APC gene product with
beta-catenin", Science (1993), 262,
1731-1734; Su L.K., Vogelstein B. y Kinzler K.W.
"Association of the APC tumor suppressor protein with
catenins", Science (1993) 262, 1734-1737; Polakis
P. "Mutations in the APC gene and their implications for protein
estructure and function", Current Opinion in Genetics &
Development (1995) 5, 66-71; Aberle H., Bauer
A., Stappert J, Kispert A. y Kemler R.
"Beta-catenin is a target for the
ubiquitin-proteasome pathway", EMBO
Journal (1997) 16, 3797-3804. La mayoría de la
mutaciones de línea germinal y somáticas en APC dan como resultado
proteínas a las que les falta algunos o todos los sitios de unión a
\beta-catenina^{26,28,29}. Polakis P.
"Mutations in the APC gene and their implications for protein
estructure and function", Current Opinion in Genetics &
Development (1995) 5, 66-71; Nagase H. y
Nakamura Y. "Mutations of the APC (adenomatous polyposis coli)
gene" Human Mutation (1993) 2, 425-434;
Beroud C. y Soussi T. "APC gene: database of germline and somatic
mutations in human tumors and cell lines", Nucleic Acids
Research (1996) 24, 121-124. Son necesarias dos
regiones de APC para esta interacción; la proteína truncada
codificada por el alelo Min carece de ambas de estas
regiones; Polakis P. "Mutations in the APC gene and their
implications for protein structure and function", Current
Opinion in Genetics & Development (1995) 5,
66-71; Su L.K., Kinzler K.W., Vogelstein B.,
Preisinger A.C., Moser A.R., Luongo C., Gould K.A. y Dove W.F.
"Multiple intestinal neoplasia caused by a mutation in the murine
homolog of the APC gene", Science (1992) 256,
668-670. La APC tiene también un papel en el
transporte de \beta-catenina fuera del núcleo. Por
tanto, en ausencia de función APC, la
\beta-catenina se acumularía en el citoplasma y
núcleo, posiblemente afectando tanto la transcripción de genes diana
como a la interacción célula-célula mediante
E-cadherina. Las mutaciones de APC son
frecuentes en varios tipos de tumor en seres humanos, incluyendo
tumores intestinales y otros tumores epiteliales. Se ha encontrado
pérdida de heterocigosidad en el locus APC o niveles
aumentados de \beta-catenina en más de un 25% de
los cánceres de mama. Furuuchi K., Tada M., Yamada H., Kataoka A.,
Furuuchi N., Hamada J., Takahashi M., Todo S. y Moriuchi T.
"Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers",
American Journal of Pathology (2000) 156:
1997-2005; Jonsson M., Borg A., Nilbert M. y
Andersson T., "Involvement of adenomatous polyposis coli
(APC)/beta-catenin signaling in human breast
cancer", European Journal of Cancer (2000) 36:
242-248. Por tanto, los tipos de lesiones que
aparecen en estos ratones serán molecular e histológicamente
similares a los cánceres de mama en seres humanos.
El fondo genético puede afectar a la incidencia,
latencia y tipo de lesiones mamarias que se desarrollan. Por
ejemplo, los ratones FVBxB6 Apc^{Min/+} hembra desarrollan una
media de 0,2 tumores mamarios por ratón, pero 4 hiperplasias por
ratón al cabo de 120 días de tratamiento. Los BALB/xB6 Apc^{Min/+}
desarrollan una media de 1,8 tumores mamarios y 0,6 hiperplasias
por ratón. Moser A.R., Hegge L.F., Cardiff R.D. Cancer
Research (2001) 61: 3480-3485. Los ratones
FVBxB6 y BALBxB6 Apc^{Min/+} desarrollan tanto SCC mamarios como
adenocarcinomas (AC).
Las lesiones hiperplásicas en los ratones FVBxB6
Apc^{Min/+} pueden clasificarse como hiperplasias alveolares o
nódulos escamosos. Moser A.R., Hegge L.F. y Cardiff R.D. "Genetic
background affects susceptibility to mammary tumors and
hyperplasias in ApcMin+ mice", Cancer Research (2001) 61:
3480-3485. Las hiperplasias alveolares son
precursoras de los adenocarcinomas y los nódulos escamosos son
lesiones precursoras de SCC. Por tanto, mediante la manipulación
del fondo genético, pueden generarse ratones que desarrollan
múltiples tipos de hiperplasias y carcinomas, a menudo en el mismo
animal. Las hiperplasias alveolares se parecen a lóbulos atípicos
(de tipo A) encontrados habitualmente en muestras de mamas humanas.
Cardiff R.D. y Wellings S.R. "The comparative pathology of human
and mouse mammary glands" Journal of Mammary Gland Biology
& Neoplasia (1999) 4: 105-122. Estos lóbulos
atípicos son más comunes en mamas cancerosas o en la mama opuesta
en mujeres con cáncer de mama. Aunque el SCC no es un tipo
frecuente de tumor de mama, el AC se parece al tipo común de tumor
de mama humano. Además, los tumores con alteraciones en la ruta de
APC son comunes en cánceres de mama humanos. Se ha encontrado
pérdida de heterocigosidad en el locus APC o niveles
aumentados de \beta-catenina en más de un 25% de
los cánceres de mama. Furuuchi K., Tada M., Yamada H., Kataoka A.,
Furuuchi N., Hamada J., Takahashi M., Todo S. y Moriuchi T.
"Somatic mutations of the APC gene in primary breast cancers",
American Journal of Pathology (2000) 156:
1997-2005, 35; Jonsson M., Borg A., Nilbert M. y
Andersson T., "Involvement of adenomatous polyposis coli
(APC)/beta-catenin signaling in human breast
cancer", Eur. Journal of Cancer (2000) 36:
242-248. Por tanto, los tipos de lesiones que
aparecen en estos ratones serán molecular e histológicamente
similares a los cánceres de mama en seres humanos. Uno de los
aspectos y potencias únicos de este modelo es la capacidad de
generar ratones que desarrollan múltiples tipos de hiperplasias y
carcinomas mamarios, a menudo en el mismo animal. De este modo,
puede ensayarse la captación y retención de NM404 en múltiples tipos
de hiperplasias y tumores en el mismo animal.
La infección con virus de polioma de ratones
conduce al desarrollo de numerosos tipos tumorales, incluyendo
tumores mamarios. Los ratones endógenos que expresan el antígeno T
medio de polioma (PyVT) bajo el control del LTR del virus del tumor
mamario de ratón (MMTV) desarrollan displasias y tumores mamarios
multifocales rápidamente. Amy Moser, Guy C.T., Cardiff R.D. y
Muller W.J. "Induction of mammary tumors by expression of
polyomavirus middle T oncogene: a endogenous mouse model for
metastatic disease" Molecular & Cellular Biology
(1992) 12: 954-961. Puede observarse la evidencia de
carcinoma in situ tan temprano como a las tres semanas de
edad, con un 100% de incidencia de tumores mamarios tan temprano
como a las 5 semanas de edad. Los tumores se clasifican
principalmente como AC y/o adenoacantomas. Los ratones desarrollan
múltiples lesiones metastásicas en el pulmón al cabo de 50 días de
la aparición del tumor primario. Lifsted T., Le Voyer T., Williams
M., Muller W., Klein-Szanto A.A., Buetow K.H. y
Hunter K.W. "Identification of inbred mouse strains harboring
genetic modifiers of mammary tumor age of onset and metastatic
progression" Int. J. of Cancer (1998) 77:
640-644. Por tanto, estos ratones proporcionan un
modelo rápido de cáncer mamario metastásico. Como con los ratones
Apc^{Min/+}, el fondo genético afecta al curso temporal de
desarrollo del tumor y la dispersión metastásica. Lifsted T., Le
Voyer T., Williams M., Muller W., Klein-Szanto A.A.,
Buetow K.H. y Hunter K.W. "Identification of inbred mouse strains
harboring genetic modifiers of mammary tumor age of onset and
metastatic progression" Int. J. of Cancer (1998) 77:
640-644. Por tanto, los inventores usan cruces para
generar ratones con un curso de desarrollo tumoral más lento. El
PyVT puede asociarse con miembros de la familia de SRC cinasa,
fosfatidilinositol-3''-cinasa, la
proteína adaptadora SHC y proteína fosfatasa 2A. Dankort D.L. y
Muller W.J., "Transgenic models of breast cancer metastasis"
Cancer Treatment & Research (1996) 83:
71-88. Se observa frecuentemente la activación de
cinasas de la familia de SRC en tumores de mama humanos. Amy Moser,
Muthuswarmy S.K. y Muller W.J. "Activation of the Src family of
tyrosine kinases in mammary tumorigenesis", Advances in Cancer
Research (1994) 64: 111-123.
Estudios de formación de imágenes: Se radioyodó
NM404 (Fig. 3A, 100 \mug) con ^{125}I mediante intercambio
isotópico en una mezcla fundida de ácido piválico. Después de la
purificación por HPLC, se disolvió en una solución acuosa de Tween
20 al 2% antes de la inyección en la vena de la cola (15 \muCi/20
g de ratón) en 6 ratones Apc^{Min/+} hembra. Se anestesiaron los
ratones y se exploraron durante hasta 50 días después de la
inyección en un escáner radio TLC AR2000 de Bioscan modificado
(incrementos de 1 mm a 2 min de adquisición/carril y colimador de
alta resolución de 1 mm) y también en un escáner microTC de Imtek
(390 etapas) para comparación anatómica. Se exhibieron las imágenes
de microTC usando software Amira. En el sacrificio, se formaron
imágenes ex vivo de las glándulas mamarias o tumores
extirpados, se extirparon las lesiones, se pesaron y se cuantificó
la radiactividad. Se remitieron las muestras de lesión a
clasificación histológica. En caso necesario, se inyectó por vía
intravenosa antes de la exploración por TC un agente de contraste de
TC del conjunto de la sangre de larga acción (BP10), desarrollado
en el laboratorio de los inventores y adecuado para largos tiempos
de adquisición de microTC, para ayudar a la visualización de los
vasos sanguíneos (Fig. 19). Weichert J.P. et al., Radiology
(2000) 216: 865-871.
Resultados y discusión: Este modelo es único en
que se desarrollan lesiones mamarias hiperplásicas, carcinomas
mamarios y adenomas intestinales en el mismo ratón. Los resultados
de formación de imágenes iniciales con NM404 (Fig. 17, 18) han
mostrado una notable captación (>20% dosis/g) y una prolongada
retención en todos los carcinomas mamarios espontáneos en el
intervalo de 2-15 mm de diámetro. Aunque la
localización tumoral aparece rápidamente, la radiactividad de fondo
persiste durante varios días en el hígado e intestino durante la
fase de aclaramiento del cuerpo. El análisis por HPLC de la orina y
heces radiactivas indicó la presencia de metabolitos y no NM404
original. La retención tumoral de NM404 persistió durante 50 días,
el punto final predeterminado del estudio. Sin embargo, la NM404 no
se localizó en pólipos adenomatosos intestinales encontrados
frecuentemente en estos ratones (Fig. 18). Las imágenes de microTC
confirmaron la presencia y localización precisa de todos los
tumores mamarios (Fig. 19). La extracción lipídica y posterior
análisis por HPLC del tejido tumoral indicaron que la radiactividad
seguía asociada al compuesto original. Como se ha observado en
estudios de cultivo celular previos, la NM404 aparentemente se
metaboliza y elimina de células normales, pero se atrapa
metabólicamente en membranas de
células tumorales.
células tumorales.
Conclusiones: La NM404 ha exhibido una notable
avidez tumoral en los modelos de tumor por xenoinjerto animal y
humano examinados hasta la fecha. Además, aunque exhibía una
retención selectiva y prolongada por tumores mamarios en este
modelo tumoral espontáneo, no se localizaba en los pólipos
adenomatosos intestinales asociados.
\vskip1.000000\baselineskip
H. Ejemplo de referencia
VIII
Materiales y procedimientos: Modelo de ratón
Apc^{Min/+}: Este modelo comprende ratones portadores del alelo
Min de Apc (ratones Apc^{min/+}). Este modelo ofrece
ventajas específicas frente a modelos de xenoinjerto en que los
ratones Apc^{Min/+} hembra están predispuestos a desarrollar
hiperplasias y carcinomas mamarios y adenomas intestinales. En
fondo genético de C57BL/6J, aproximadamente un 5% de las hembras no
tratadas desarrollarán un tumor mamario al cabo de 100 días de
edad. Moser A.R., Dove et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
(1993) 90: 8977-8981. La incidencia y multiplicidad
de las lesiones mamarias puede aumentarse mediante una sola dosis
de etilnitrosourea (ENU), un agente alquilante de acción directa. El
tratamiento con ENU da como resultado que un 90% de las hembras B6
Apc^{Min/+} desarrollan una media de 3 carcinomas de células
escamosas mamarios (SCC), pero pocas lesiones hiperplásicas al cabo
de 60 días de tratamiento.
El fondo genético puede afectar a la incidencia,
latencia y tipo de lesiones mamarias que se desarrollan. Por
ejemplo, los ratones FVBxB6 Apc^{Min/+} hembra desarrollan una
media de 0,2 tumores mamarios por ratón, pero 4 hiperplasias por
ratón al cabo de 120 días de tratamiento. Los BALB/xB6 Apc^{Min/+}
desarrollan una media de 1,8 tumores mamarios y 0,6 hiperplasias
por ratón. Moser A.R, Hegge L.F., Cardiff R.D. Cancer
Research (2001) 61: 3480-3485. Los ratones
FVBxB6 y BALBxB6 Apc^{Min/+} desarrollan tanto SCC mamarios como
adenocarcinomas (AC).
Estudios de formación de imágenes: Se radioyodó
NM404 (Fig. 3A, 100 \mug) con ^{125}I mediante intercambio
isotópico en una mezcla fundida de ácido piválico. Después de la
purificación por HPLC, se disolvió en una solución acuosa de Tween
20 al 2% antes de la inyección en la vena de la cola (15 \muCi/20
g de ratón) en 6 ratones Apc^{Min/+} hembra. Se anestesiaron los
ratones y se exploraron durante hasta 30 días después de la
inyección en un escáner radioTLC AR2000 de Bioscan (incrementos de 1
mm a 2 min de adquisición/carril y colimador de alta resolución de
1 mm) y también en un escáner microTC de Imtek (390 etapas) para
comparación anatómica. Se exhibieron las imágenes de microTC usando
software Amira. En el sacrificio, se formaron imágenes ex
vivo de las glándulas mamarias o tumores extirpados, se
extirparon las lesiones, se pesaron y se cuantificó la
radiactividad. Se remitieron las muestras de lesión a clasificación
histológica. En caso necesario, se inyectó por vía intravenosa
antes de la exploración por TC un agente de contraste de TC del
conjunto de la sangre de larga acción (BP20), desarrollado en el
laboratorio de los inventores y adecuado para largos tiempos de
adquisición de microTC, para ayudar a la visualización de los vasos
sanguíneos (Fig. 19). Weichert J.P. et al., Radiology (2000)
216: 865-871.
Resultados y discusión: Este modelo es único en
que lesiones mamarias hiperplásicas, carcinomas mamarios y adenomas
intestinales se desarrollan en el mismo ratón. Los resultados de
formación de imágenes iniciales con NM404 (Fig. 20, 21) han
mostrado una notable captación (>20% dosis/g) y una prolongada
retención en todos los carcinomas mamarios espontáneos en el
intervalo de 2-15 mm de diámetro. Aunque la
localización tumoral aparece rápidamente, la radiactividad de fondo
persiste durante varios días en el hígado e intestino durante la
fase de aclaramiento del cuerpo. El análisis por HPLC de la orina y
heces radiactivas indicó la presencia de metabolitos y no de NM404
original. La retención tumoral de NM404 persistió durante >21
días, el punto final predeterminado del estudio. Sin embargo, la
NM404 no se localizó en hiperplasias alveolares locales ni en
pólipos adenomatosos intestinales encontrados frecuentemente en
estos ratones (Fig. 21). Las imágenes de microTC confirmaron la
presencia y localización precisa de todos los tumores mamarios (Fig.
22). La NM404 aparentemente se metaboliza y elimina de células
normales, pero se atrapa metabólicamente en membranas de células
tumorales.
Conclusiones: La NM404 ha exhibido una notable
avidez tumoral en 20/20 modelos de tumor por xenoinjerto animal y
humano examinados hasta la fecha. Además, aunque exhibía una
retención selectiva y prolongada por adenocarcinomas y carcinomas
de células escamosas mamarios en este modelo tumoral espontáneo, no
se localizaba en las hiperplasias alveolares focales ni pólipos
adenomatosos intestinales asociados y por tanto parece ser selectiva
de células tumorales malignas.
\vskip1.000000\baselineskip
I. Ejemplo de referencia
IX
Introducción: Ciertos análogos de éter
fosfolipídico tales como NM404 se retienen selectivamente en muchos
tipos de células tumorales durante un tiempo prolongado. Los
inventores buscaron evaluar el mecanismo de retención selectiva de
NM404 en células tumorales usando tanto un ensayo enzimático para
evaluar la actividad de la proteína fosfolipasa D (PLD) como PCR
cuantitativa. Los inventores teorizaron que los niveles reducidos de
PLD en células tumorales dan como resultado una reducción de la
capacidad de metabolizar y excretar NM404.
Procedimientos: Se analizaron suspensiones
monocelulares o líneas celulares tumorales de murino incluyendo
hepa-1 (hematoma), CT26 (adenocarcinoma colorrectal)
y TS/A (adenocarcinoma de mama) con dos ensayos: (1) ensayo Amplex®
Red, que usa un kit comercialmente disponible (Molecular Probes) que
evalúa la actividad de la proteína PLD usando un lector de
microplaca de fluorescencia, y (2) PCR cuantitativa para determinar
el nivel de ARNm de PLD. Se compararon las líneas celulares
tumorales con tejido hepático normal, que exhibe mayores niveles de
captación y eliminación de NM404 y por tanto probablemente tiene
niveles menores de PLD que otros tejidos normales. Para el ensayo
Amplex® Red, se extrajo la proteína total usando una solución
detergente (Triton X-100) y se comparó la cantidad
de PLD con un control positivo estándar. Para PCR, se purificó el
ARNm y se convirtió en ADNc usando transcriptasa inversa (Promega).
Las condiciones para la amplificación de ADN para PCR instantánea
incluían: 94ºC, 30 s; 50ºC, 30 s y 72ºC, 30 s) durante 50 ciclos
(iCycler, IQmix, Bio-Rad). Se usó el cebador de
PLD1 (de codificación)
5'-TCTGGTTTCACCCCGTCAGAA-3' (no de
codificación)
5'-TTGCTCATATCTGCGGCGAT-3'. Se
comparó el producto con un ADNc patrón (GAP-DH,
Biosource) diluido de 1 \mug a 10^{-7} \mug. Se efectuaron
todos los ensayos por duplicado.
Resultados: Se cuantificó la PLD como se muestra
en la Tabla 3. Tanto la actividad de proteína PLD como los niveles
de ARNm eran significativamente menores que en tejido hepático
normal (p<0,05, ensayo de t) en todas las líneas celulares.
Conclusión: Se observaron tanto actividad de
proteína PLD reducida como reducción de ARNm de PLD en líneas
celulares tumorales de murino. Por tanto, el mecanismo de retención
selectiva de NM404 debe ser debido a una reducción de la
degradación de NM404 por PLD. La actividad de PLD reducida en el
tumor puede servir como diana molecular potencial para agentes
antitumorales.
\vskip1.000000\baselineskip
J. Ejemplo
X
Modelos para el estudio de terapia de NM404:
Aunque la supervivencia a largo plazo no es esencial para estudios
de formación de imágenes, es ventajoso para los estudios de terapia
propuestos. Los modelos usados para estudios de formación de
imágenes padecen tumores intestinales concomitantes que
habitualmente conducen a la muerte del animal. Para aumentar el
número de tumores que se desarrollan por ratón y reducir el número
de tumores intestinales con la esperanza de aumentar el periodo de
vida de los ratones portadores de tumor, el Dr. Moser ha cruzado
recientemente ratones B6 Min/+ macho con ratones C57BR/cdJ
(BR) hembra. Los ratones BRB6 F1 Min/+ hembra resultantes
desarrollaron significativamente más tumores mamarios que los
ratones B6 Min/+ hembra (p= 0,016), una media de casi 5. El
número de ratones con tumores y el tiempo hasta el primer tumor no
fueron diferentes entre estas dos cepas (P= 1 y P= 0,06,
respectivamente) (Fig. 25). El número aumentado de tumores mamarios
de los ratones BRB6 F1 puede deberse, en parte, a los tiempos de
supervivencia significativamente más largos de los ratones BRB6 F1
Min/+ híbridos respecto a los ratones B6 Min/+ (P= 2 x
10^{-7}).
Los ratones B6 y BRB6 F1 Min/+ eran muy
similares con respecto al fenotipo de glándula mamaria, pero
bastante diferentes en susceptibilidad a tumores intestinales. Las
cepas B6 y BR pueden considerarse fondos sensibles para
tumorigénesis mamaria inducida por Min, ya que los ratones
desarrollaron un gran número de tumores en un corto tiempo después
de tratamiento con ENU. Sin embargo, la cepa BR porta alelos de
resistencia dominantes en loci modificadores que afectan al
desarrollo de tumor intestinal, lo que puede probarse relevante para
el estudio de terapia propuesto. Se presenta una comparación de
estas cepas en la Tabla 2.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Resultados de formación de imágenes preliminares
con NM404 en ratones Min: En un experimento preliminar para mostrar
que la NM404 se localiza en tumores de mama de ratón FVBxB6
Apc^{Min/+} endógeno, se inyectaron a dos animales (IV en vena de
la cola) ^{125}I-NM404 (15 \muCi) y se formaron
imágenes en un escáner radioTLC AR2000 de Bioscan modificado
(equipado con un colimador de alta resolución de 1 mm, adquisición
bidimensional y software de análisis) a los 1, 4 y 7 días después
de la inyección (Fig. 27A, B). Cada animal experimentó exploración
microTC (Fig. 27) el día 10 antes del sacrificio y disección para
extraer las glándulas mamarias y tumores asociados. Los puntos
focales intensos se correlacionaban visualmente con todos los
tumores en imágenes de Bioscan ex vivo (Fig. 27C). Aunque
los nódulos linfáticos son visibles, no se asoció radiactividad con
ellos, indicando una falta de infiltración de células tumorales. El
tumor principal en la Fig. 27C se clasificó histológicamente como
adenocarcinoma. Había cuatro tumores mamarios en ambos ratones y
todos eran fácilmente detectables en imágenes de Bioscan ex
vivo de las glándulas mamarias extirpadas.
Potencial radioterapéutico de NM404: Durante el
transcurso de los estudios recientes de captación y retención en
tumor de ratón con dosis "formadoras de imágenes"
(15-20 \muCi/20 g de ratón) de NM404 marcada con
^{125}I, se han observado varias respuestas terapéuticas
aparentes (resultados no publicados). En un modelo de tumor mamario
de ratón Apc^{Min/+}, se ha observado generalmente que el
crecimiento tumoral permanece estático después de una sola
inyección intravenosa de NM404. Algunos de estos animales perdieron
también todo su pelo sobre los tumores mamarios mayores
aproximadamente 8 días después de la inyección. Además, estos
ratones tienen también tumores intestinales y padecen hemorragias
intestinales que dan como resultado una grave anemia, que vuelve
sus pies blancos. El Dr. Moser observó que los pies de estos ratones
habían vuelto a un color rosa aproximadamente 5 días después de una
sola inyección de NM404. Tras la eventual disección de estos
animales, se observó que sólo unos pocos, o ninguno, de los 20 o
así tumores intestinales encontrados habitualmente a esta edad
permanecían realmente. El fenómeno de "pie blanco a rosa" se
observó también en un modelo de adenocarcinoma intestinal de ratón
separado, pero más agresivo, en el que la disección a los 12 días
después de administración de NM404 reveló de nuevo que la mayoría,
si no todos, los tumores intestinales esperados habían desaparecido.
En ambos modelos intestinales, los animales que recibieron NM404
superaron fácilmente el tiempo de vida de sus compañeros de camada
no tratados. Estos descubrimientos coincidentes se reconfirmaron en
dos grupos de edad similar separados cada uno de más de 6 ratones.
Estas observaciones con ^{125}I-NM404 indican el
potencial de aplicaciones radioterapéuticas, particularmente si se
marca con yodo 131. Los estudios de captación y retención tumorales
cuantitativos expuestos en este modelo de tumor mamario propuesto
proporcionarán también suficientes datos para iniciar un análisis
integral de dosimetría para este agente para estimar su verdadero
potencial radioterapéutico.
Elección del isótopo: Debido a su semivida
física de 60 días, y su baja energía de emisión de fotón de 28 keV,
el yodo 125 es adecuado para experimentos de formación de imágenes
en ratones y ratas. El yodo 125 ofrece también características
terapéuticas y se usa actualmente en implantes de braquiterapia de
próstata permanentes. En un experimento de formación de imágenes,
se inocularon a 2 ratones desnudos implantes de células tumorales
escamosas subcutáneas 1 y 6 cada uno en flancos opuestos. Se usaron
células SCC1 y 6 debido a que una es radiosensible respecto a la
otra. Después de 14 días, cuando el tamaño tumoral medio (4 en
total) se aproximaba a 0,5 cm de diámetro, uno de los ratones
recibió 20 \muCi de NM404 marcada con ^{125}I y el otro recibió
NM404 no marcada en una dosis por masa igual. El ratón que había
recibido sólo el compuesto no marcado tuvo que sacrificarse 20 días
después de la inyección debido a que ambos tumores alcanzaron el
límite de tamaño de terminación definido en el protocolo de uso
animal. Ambos tumores en el ratón con
^{125}I-NM404 tuvieron una regresión drástica e
inesperada a lo largo de varias semanas (Fig. 28). De hecho, los
tumores de este ratón nunca alcanzaron el tamaño terminal y el
ratón se sacrificó realmente después de 90 días para recoger
secciones histológicas. En ese momento, el centro del tumor se había
vuelto necrótico mientras que el borde periférico parecía algo
viable. El examen histológico confirmó un centro necrótico y un
borde viable. Aunque los factores de suministro de sangre pueden
contribuir a dichas observaciones, también es posible que la emisión
de fotones de ^{125}I diera como resultado un mal equilibrio de
protones en la periferia del tumor, dando como resultado una
subdosificación de la "corteza" del tumor. Este tema del
equilibrio electrónico es crítico en la oncología por radiación.
Los fotones viajan una distancia finita, determinada por su energía,
antes de interaccionar con tejido y ejercer su efecto biológico. Un
fotón con una energía demasiado alta puede dar como resultado la
subdosificación de la periferia del nódulo tumoral, ya que los
protones salen del nódulo (fuera del tumor) antes de depositar su
dosis. Esto podría ser un problema con los fotones de ^{125}I, sin
embargo, la baja energía asegura una deposición muy local. Cálculos
de Monte Carlo complejos podrían refinar dichas estimaciones, pero
el mejor procedimiento para determinar la selección óptima de
isótopo es la experimentación, ya que hay muchos factores en juego
que no pueden modelarse exactamente (detalles de la distribución en
tejido, paso múltiple, etc.). La única ventaja de ^{125}I es que
todos los fotones son de baja energía, asegurando una exposición muy
limitada de los tejidos normales que rodean el tumor.
El yodo 131 se ha usado con gran eficacia en el
tratamiento de cáncer de tiroides. Dosis muy seguras de ^{131}I
pueden controlar las deposiciones subclínicas de cáncer de tiroides
bien diferenciado, lo que concentra el yodo muy ávidamente como el
tiroides normal. Este procedimiento de captación activa limita la
dosis a tejidos normales. El yodo 131 tiene emisiones tanto beta
como algunas gamma, pero la dosis de tejido predominante surge de
las emisiones beta. Los inventores han seleccionado a NM404 marcada
con ^{131}I basándose en el éxito clínico con el cáncer de
tiroides acoplado a los resultados obtenidos con Bexxar (un agente
basado en anticuerpo marcado con yodo 131) en pacientes con linfoma
de grado bajo. Las emisiones beta predominantes y la mayoría de las
emisiones gamma de baja energía optimizan la homogeneidad de la
dosis en el nódulo tumoral mismo. Además, la corta semivida (8
días) proporciona una intensidad de dosis más clínicamente relevante
en comparación con la semivida de 60 días de ^{125}I. Estos
factores permitirán a los inventores hacer la mejor valoración de
la eficacia antitumoral de este agente. Es una desventaja potencial
de ^{131}I que hay también una emisión gamma de alta energía que
podría exponer realmente a tejidos circundantes adyacentes a más
radiación de la que aparecería con ^{125}I. Los tumores en el
modelo endógeno propuesto en la presente memoria están localizados
periféricamente en las glándulas mamarias y por tanto no deberían
representar una amenaza inmediata para el bienestar global del
animal. Puesto que la toxicidad de órganos es también uno de los
puntos finales del estudio, se valora la reacción del tejido
circundante y los sistemas de órganos clave (médula, hígado,
riñones, intestino, cerebro, etc.). Los datos de distribución en
tejido y dosimetría real de la NM404 radiomarcada determinarán su
potencial terapéutico óptimo. Es posible que diferentes isótopos se
complementen entre sí en el ajuste terapéutico.
\vskip1.000000\baselineskip
(1) Cancer Facts and Figures. American Cancer
Society 2001.
(2) Penna C., Nordlinger B.
"Colorectal metastasis (liver and lung". Surg. Clin. North.
Am. 2002; 82:1075-10xi.
(3) Fong Y., Fortner J.,
Sun R.L., Brennan M.F., Blumgart L.H.
"Clinical score for predicting recurrence after hepatic resection
for metastatic colorectal cancer: analysis of 1001 consecutive
cases". Ann. Surg. 1999;
230:309-318.
(4) Ike H., Shimada H.,
Ohki S., Togo S., Yamaguchi S., Ichikawa
Y. "Results of aggressive resection of lung metastases from
colorectal carcinoma detected by intensive
follow-up". Dis. Colon Rectum 2002;
45:468-473.
(5) O'Dwyer P.J., Stevenson J.P.,
Haller D.G., Rotman N., Giantonio B.J.
"Follow-up of stage B and C colorectal cancer in
the United States and France". Seminars in Oncology
2001; 28: supl 9.
(6) Wichmann M.W.,
Lau-Werner U., Muller C.,
Hornung H.M. Stieber P., Schildberg F.W.,
"The Colorectal Cancer Study Group. Carcinoembryonic antigen for
the detection of recurrent disease following curative resection of
colorectal cancer". Anticancer Research 2000; 20:
4953-4955.
(7) Lencioni R., Cioni D.,
Bartolozzi C., "Percutaneous radiofrequency thermal
ablation of liver malignancies: techniques, indications, imaging
findings, and clinical results", Abdom. Imaging
2001; 26: 345-360.
\newpage
(8) Curley S.A., Izzo F.,
Delrio P. et al. "Radiofrequency ablation of
unresectable primary and metastatic hepatic malignancies: Results in
123 patients". Ann. Surg. 1999; 230:
1-8.
(9) Solbiati L., Livraghi T.,
Goldberg S.N. et al. "Percutaneous
radio-frequency ablation of hepatic metastases from
colorectal cancer: long-term results in 117
patients". Radiology 2001; 221:
159-166.
(10) Saltz L.B., Cox J.V.,
Blanke C., Rosen L.S., Fehrenbacher L.,
Moore M.J., Maroun J.A., Ackland S.P.,
Locker P.K., Pirotta N., Elfring G.L.,
Miller L.L. "Irinotecan plus fluorouracil and leucovorin
for metastatic colorectal cancer. Irinotecan Study Group". N.
Engl. J. Med. 2000; 343: 905-914.
(11) De Gramont A., Bosset J.F.,
Milan C., Rougier P., Bouche O., Etienne
P.L., Morvan F., Louvet C., Guillot T.,
Francois E., Bedenne L. "Randomized trial comparing
monthly low-dose leucovorin and fluorouracil bolus
with bimonthly high-dose leucovorin and fluorouracil
bolus plus continuous infusion for advanced colorectal cancer: a
French intergroup study". J. Clin. Oncol. 1997; 15:
808-815.
(12) "Modulation of fluorouracil by leucovorin
in patients with advanced colorectal cancer: evidence in terms of
response rate. Advanced Colorectal Cancer
Meta-Analysis Project". J. Clin. Oncol.
1992; 10: 896-903.
(13) Giacchetti S., Perpoint B.,
Zidani R., Le Bail N., Faggiuolo R.,
Focan C., Chollet P., Llory J.F.,
Letourneau Y., Coudert B.,
Bertheaut-Cvitkovic F.,
Larregain-Fournier D., Le Rol A.,
Walter S., Adam R., Misset J.L., Levi F.
"Phase III multicenter randomized trial of oxaliplatin added to
chronomodulated fluorouracil-leucovorin as
first-line treatment of metastatic colorectal
cancer". Journal of Clinical Oncology 2000; 18:
136-147.
(14) Mayr N.A., Taoka T.,
Yuh W.T. et al. "Method and timing of tumor volume
measurement for outcome prediction in cervical cancer using magnetic
resonance imaging". International Journal of Radiation
Oncology, Biology, Physics 2002; 52;
1:14-22.
(15) Greven K., Williams D.,
Keyes J. et al. "Can positron emission tomography
distinguish tumor recurrence from irradiation sequelae in patients
treated for larynx cancer?" Cancer Journal Scientifica
American 1997; 3: 353-357.
(16) Snyder F., Wood R. "Alkyl
and alk-1-enyl ethers of glycerol in
lipids from normal and neoplastic human tissues". Cancer
Research. 1969; 29: 251-257.
(17) Snyder F., Blank M.L.,
Morris H.P. "Occurrence and nature of
o-alkyl and
o-alkyl-l-enyl
moieties of glycerol in lipids of Morris transplanted hepatomas and
normal rat livers". Biochem Biophys Acta. 1969;
176: 502-510.
(18) Rampy M.A., Pinchuk A.N.,
Weichert J.P., Skinner R.W., Fisher S.J.,
Wahl R.L., Gross M.D., Counsell R.E.
"Synthesis and biological evaluation of radioiodinated
phospholipid ether stereoisomers", J. Med. Chem.
1995; 38: 33156-3162.
(19) Weichert J.P., Van Dort M.E.,
Groziak M.P., Counsell R.E. "Radioiodination via
isotope exchange in pivalic acid". Int. J. Appl. Rad.
Isotopes. 1986; 37.907-913.
(20) Plotzke K.P., Haradahira T.,
Stancato L., Olken N.M., Skinner S.,
Gross M.D., Wahl R.L., Counsell R.E.
"Selective localization of radioiodinated alkylphosphocholine
derivatives in tumors". Int. J. RadPart B, Nucl. Med. &
Biology. 1992; 79(7): 765-773.
(21) Plotzke K.P., Fisher S.J.,
Wahl R.L., Olken N.M., Skinner S., Gross
M.D., Counsell R.E. "Selective localization of a
radioiodinated phospholipid ether analog in human tumor
xenografts". J. Nucl. Med. 1993; 34(5):
787-792.
(22) Rampy M.A., Brown R.S.,
Pinchuk A.N., Weichert J.P., Skinner R.W.,
Fisher S.J., Wahl R.L., Gross M.D.,
Ethier S.P., Counsell R.E. "Biological disposition
and imaging of a radioiodinated alkylphosphocholine in two rodent
models of breast cancer". J. Nucl. Med. 1996;
37(9): 1540-1545.
(23) Arthur G., Bittman R. "The
inhibition of cell signaling pathways by antitumor ether lipids".
Biochim Biophys Acta. 1998; 1390:
85-102.
(24) Counsell R.E., Longino M.,
Pinchuk A., Skinner S., Weichert J.
"Synthesis and evaluation of radioiodinated phospholipid ethers
for imaging of prostate cancer". Quart. J. Nucl. Med.
1997; 41(supl. 1): 14-16.
(25) Weber S.M., Shi F.,
Heise C., Warner T., Mahvi D.M.
"Interleukin-12 gene transfer results in
CD8-dependent regression of murine CT26 liver
tumors". Ann. Surg. Oncol. 1999; 6:
186-194.
(26) Imboden M., Murphy K.R.,
Rakhmilevich A.L., Neal Z.C., Xiang R.,
Reisfeld R.A., Gillies S.D., Sondel P.M. "The
level of MHC class I expression on murine adenocarcinoma can change
the antitumor effector mechanism of immunocytokine therapy".
Cancer Res. 2001; 61: 1500-1507.
(27) Weichert J.P., Longino M.A.,
Bakan D.A., Spigarelli M.G., Chou T.,
Schwendner S.W., Counsell R.E. "Polylodinated
Triglyceride Analogs as Potential CT Imaging Agents for the
Liver". J. Med. Chem. 1995;
38:636-646.
(28) "Rodent Tumor Models In Experimental
Cancer Therapy", Robert F. Kallman ed, Pergamon Press,
Nueva York, pág. 111-132, 1987.
"DIAPEUTIC" es una marca comercial de
Cellectar, LLC.
Claims (6)
1. El uso de un análogo de éter fosfolipídico
para la producción de una composición farmacéutica para el
tratamiento de cáncer de pulmón, cáncer de mama o cáncer intestinal,
en el que el análogo fosfolipídico se selecciona de:
en la que X se selecciona del grupo
constituido por isótopos radiactivos de yodo; n es un número entero
entre 16 y 30 e Y se selecciona del grupo que comprende NH_{2},
N(R)_{2} y N^{+}(R)_{3}, en el que
R es un sustituyente alquilo o arilalquilo
o
en la que X es un isótopo
radiactivo de yodo; n es un número entero entre 16 y 30; Y se
selecciona del grupo constituido por H, OH, COOH, COOR y OR y Z se
selecciona del grupo constituido por NH_{2},
N(R)_{2} y N^{+}(R)_{3}, en el que
R es un sustituyente alquilo o
arilalquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El uso de la reivindicación 1, en el que X se
selecciona del grupo de isótopos radiactivos del yodo constituido
por ^{122}I, ^{123}I, ^{124}I, ^{125}I y ^{131}I.
3. El uso de la reivindicación 2, en el que X es
^{125}I o ^{131}I.
4. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que el éter fosfolipídico es
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina,
1-O-[18-(p-yodofenil)octadecil]-1,3-propanodiol-3-fosfocolina
o
1-O-[18-(p-yodofenil)octadecil]-2-O-metil-rac-glicero-3-fosfocolina,
en los que el yodo está en forma de un isótopo radiactivo
5. El uso de la reivindicación 4, en el que el
éter fosfolipídico es
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina y X es
^{131}I.
6. El uso del éter fosfolipídico
18-(p-yodofenil)octadecilfosfocolina, en el
que el yodo es ^{125}I, para la producción de una composición
farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de células escamosas
subcutáneo.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| EP3885452A1 (en) * | 2020-03-23 | 2021-09-29 | Koninklijke Philips N.V. | Prediction of radiotherapy response for prostate cancer subject based on chemokine genes |
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Family Cites Families (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5851526A (en) * | 1985-04-19 | 1998-12-22 | Ludwig Institute For Cancer Research | Methods of treating colon cancer utilizing tumor-specific antibodies |
| US4873075A (en) * | 1985-09-10 | 1989-10-10 | The University Of Michigan | Polyiodinated triglyceride analogs as radiologic agents |
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| US5041859A (en) * | 1988-10-04 | 1991-08-20 | Nikon Corporation | Automatic focusing detection device for cameras |
| US5274113A (en) | 1991-11-01 | 1993-12-28 | Molecular Probes, Inc. | Long wavelength chemically reactive dipyrrometheneboron difluoride dyes and conjugates |
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| US5783170A (en) * | 1991-11-27 | 1998-07-21 | Diatide, Inc. | Peptide-metal chelate conjugates |
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| US6503478B2 (en) | 1999-01-13 | 2003-01-07 | Lightouch Medical, Inc. | Chemically specific imaging of tissue |
| AU5799200A (en) * | 1999-06-24 | 2001-01-31 | Academic Hospital At The University Of Amsterdam | Lpl variant therapeutics |
| ATE355374T1 (de) * | 2000-11-27 | 2006-03-15 | Praecis Pharm Inc | Therapeutische agentien und methoden ihrer verwendung zur behandlung von amyloidogenen erkrankungen |
| EP1404319B1 (en) * | 2001-06-06 | 2006-03-22 | Brookhaven Science Associates | Novel metalloporphyrins and their uses as radiosensitizers for radiation therapy |
| US7220539B1 (en) | 2002-06-12 | 2007-05-22 | The Salk Institute For Biological Studies | Protein kinase B/Akt modulators and methods for the use thereof |
| RU2005100777A (ru) * | 2002-06-14 | 2005-08-27 | Иммуномедикс, Инк. (Us) | Моноклональное антитело рам4 и его применение для диагностики и лечения рака поджелудочной железы |
| US20070037825A1 (en) * | 2002-07-19 | 2007-02-15 | Janina Baranowska-Kortylewicz | Enhancing the effect of radioimmunotherapy in the treatment of tumors |
| CA2539107A1 (en) | 2003-09-19 | 2005-03-31 | Arcturus Bioscience, Inc. | Predicting breast cancer treatment outcome |
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| US20080075660A1 (en) | 2006-08-15 | 2008-03-27 | Cellectar, Llc | Near infrared-fluorescence using phospholipid ether analog dyes in endoscopic applications |
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