ES2331863B1 - Bacterias y productos derivados para fortalecer las defensas y reducir el riesgo de enfermedad. - Google Patents
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Abstract
Bacterias y productos derivados para fortalecer
las defensas y reducir el riesgo de enfermedad.
Esta invención aporta una nueva cepa del género
Bifidobacterium y los componentes de sus sobrenadantes de cultivo
en forma de diversos preparados (alimentos funcionales y nuevos,
probióticos, simbióticos, suplementos, nutracéuticos, y fármacos)
destinados a mejorar las defensas y reducir el riesgo de enfermedad.
Sus mecanismos de acción incluyen: (i) la regulación de la
glicosilación intestinal favoreciendo la propia de individuos
sanos, (ii) la modulación de las interacciones entre las células
epiteliales y la microbiota intestinal, favoreciendo la adhesión de
bifidobacterias beneficiosas y (iii) regulando la respuestas
inmunológicas. Los productos incluidos son estables en condiciones
gastrointestinales y tecnológicas, garantizando su explotación.
Description
Bacterias y productos derivados para fortalecer
las defensas y reducir el riesgo de enfermedad.
La presente invención pertenece al sector de la
Industria Alimentaria y Farmacéutica. Más concretamente, esta
invención se enmarca dentro del campo de los probióticos y
productos derivados en forma de alimentos funcionales y nuevos
alimentos, probióticos, simbióticos, nutracéuticos o suplementos
alimentarios y formulaciones farmacéuticas con aplicaciones
clínicas.
La mucosa del tracto gastrointestinal constituye
una de las principales zonas de contacto con agentes ambientales
potencialmente nocivos (bacterias, virus, toxinas y alérgenos).
Como consecuencia el tracto gastrointestinal ha desarrollado
complejos mecanismos de defensa, desempeñando una importante
función protectora adicional a la digestiva. La microbiota comienza
a adquirirse después del nacimiento, y su composición tiene una
gran repercusión en el desarrollo de las funciones fisiológicas del
individuo así como en la predisposición a padecer infecciones y
patologías de base inmunológica. El género Bifidobacterium es uno
de los predominantes en el colon (10^{9}-10^{11}
ufc/g de heces) y representa normalmente entre el 3 y el 7% de la
microbiota intestinal en adultos y hasta el 91% en lactantes
(Harmsen et al., 2000). La menor susceptibilidad de los
niños amamantados con leche materna a sufrir enfermedades se
considera asociada a su relación con el predominio de
bifidobacterias intestinales. Estas bacterias contribuyen al estado
de salud del individuo a través de diversos mecanismos como la
exclusión de patógenos y la regulación de las respuestas
inmunológicas y funciones metabólicas del mismo (Boirivant y Strober
2007. The mechanism of action of probiotics. Curr Opin
Gastroenterol. 23:679-692; Sanz et al. 2007
Probiotics as drugs against human gastrointestinal infections.
Recent Patents Anti-Infect Drug Disc. 2;
2:148-56; Toba Takahiro et al. 2007.
Bifidobacterium or lactic acid bacterium having effect of
preventing infection via ss-defensin and
food/pharmaceutical composition containing the same. WO2007023912;
Petay et al., 2006. Immunomodulatory product obtained from a
Bifidobacterium culture and compositions containing the
same. EP1615657, etc.). Como consecuencia, cepas del género
Bifidobacterium constituyen uno de los principales probióticos
comercializados para consumo humano con distintas finalidades.
El mucus que cubre la mucosa intestinal, las
células epiteliales, el flujo sanguíneo que la irriga, y las
secreciones (fosfolípidos, bilis, péptidos antimicrobianos, etc.)
constituyen conjuntamente una barrera protectora innata de
naturaleza físico-química (Bourlioux et al.
2002. The intestine and its microflora are partners for the
protection of the host. Am J Clin Nutr 2003; 78,
675-683). El mucus intestinal, integrado por
mucinas, representa uno de los primeros mecanismos de defensa
previo a la activación de las células inmunocompetentes. Las
mucinas son glicoproteínas de alto peso molecular secretadas por
las células epiteliales (Singh y Hollingsworth 2006. Cell
surface-associated mucins in signal transduction
Trends in Cell Biol. 16, 467-476). La mucinas
pueden estar compuestas por los siguientes hidratos de carbono:
N-acetilgiucosamina, galactosa,
N-acetilgalactosamina, fucosa, ácido
N-acetilneuramínico, ácido siálico, manosa, glucosa
y xilosa (Freitas et al. 2005. Indigenous microbes and their
soluble factors differentially modulate intestinal glycosylation
steps in vivo. Histochem. Cell. Biol. 124:
423-433). Las mucinas están implicadas en el
reconocimiento celular, la adhesión e invasión de patógenos, la
transducción de señales, y la proliferación y diferenciación de
células tumorales (Sudha et al. 2001. Adherence of
Shigella dysenteriae 1 to human colonic mucin Curr.
Microbiol. 42: 381-387; Leteurtre et al.
2004. Differential mucin expression in colon carcinoma
HT-29 clones with variable resistance to
5-fluorouracil and methotrexate Biol.of the cell 96:
145-151; Singh y Hollingsworth 2006. Cell
surface-associated mucins in signal transduction
Trends in Cell Biol. 16: 467-476). La expresión y
composición de las mucinas está regulada genéticamente en cada
individuo; además, se ha descrito que la microbiota intestinal
puede contribuir a su regulación modificando la expresión génica de
las enzimas del hospedador implicadas en su síntesis (por ejemplo
glicosiltransferasas y glicosidasas) o bien mediante su utilización
como nutrientes (Hooper y Gordon. 2001. Commensal
host-bacterial relationships in the gut. Science;
292: 1115-1118.). Utilizando animales libres de
gérmenes y convencionales se ha demostrado que el proceso de
colonización por bacterias comensales favorecía la síntesis de
glicoconjugados fucosilados [fucosa
\alpha(1,2)-galactosa \beta] en el
intestino delgado (Hooper y Gordon. 2001. Commensal host–bacterial
relationships in the gut. Science; 292: 1115-1118).
Posteriormente, se demostró que Bacteroides thetaiotaomicron
VPI-5482 secretaba un compuesto soluble que
modificaba el proceso de galactosilación en cultivos celulares y
modelos animales; no obstante su posibles efectos beneficiosos sobre
la salud no han sido investigados (Freitas et al., 2001;
Freitas et al., 2005. Indigenous microbes and their soluble
factors differentially modulate intestinal glycosylation steps
in vivo. Histochem. Cell. Biol. 124:
423-433). Los cambios en la glicosilación pueden
favorecer la adhesión y retención de bacterias y antígenos que de
otro modo pasarían por el lumen intestinal sin interaccionar con el
epitelio. Un determinado patrón de glicosilación puede favorecer la
adhesión y colonización de bacterias comensales con efectos
beneficiosos sobre la salud, mientras que otro puede aumentar la
adhesión a patógenos y susceptibilidad a infecciones microbianas, o
favorecer las enfermedades inflamatorias (alergias, enfermedades
inflamatorias intestinales, autoinmunidad, cáncer, etc.). Por
ejemplo los receptores que permiten la adhesión de Escherichia
coli contienen galactosa y ácido siálico, y los que permiten la
adhesión de Helicobacter pylori contienen fucosa por lo que
patrones de glicosilación ricos en estos residuos serían buenos
receptores para estos patógenos favoreciendo su colonización. Por
otro lado, el aumento en el contenido de ácido siálico en los
extremos terminales y la reducción de la sulfatación se han
asociado a enfermedades inflamatorias intestinales y cáncer
(Campbell et al., 2001. Altered glycosylation in inflammatory
bowel disease: a possible role in cancer development. Glycoconj J.
18, 851-8). En algunos estudios los cambios en la
glicosilación intestinal se han detectado mediante el uso de
lectinas, que son proteínas que unen específicamente determinados
residuos de hidratos de carbono, actuando como marcadores de la
composición de los glicoconjugados. En el yeyuno de individuos con
sensibilidad al gluten se ha detectado unión de la lectina UEA
(L-fucosa) pero no en sanos, indicando que los
correspondientes residuos de hidratos de carbono eran
característicos de la mucosa de los pacientes estudiados (Vecchi
et al., 1989. Evidence of altered structural and secretory
glycoconjugates in the jejunal mucosa of patients with gluten
sensitive enteropathy and subtotal villous atrophy. Gut. 30,
804-10). Estudios más recientes han demostrado que
la mucosa de pacientes celfacos presenta una estructura particular
que hace que se tiñan fuertemente con la lectina UEA (\alpha
1,2-fucosa) y no con la PNA (Gal \beta [1
\rightarrow 3] GaINAc) característica de sanos (Forsberg et
al. 2004. Presence of bacteria and innate immunity of intestinal
epithelium in childhood celiac disease. Am. J. Gastroenterol.
99:894-904).
Se han atribuido numerosos efectos beneficiosos
a cepas del género Bifidobacterium; no obstante, la función
de distintas especies de este género en la glicosilación de la
mucosa intestinal como mecanismo para modificar el proceso de
colonización de la flora beneficiosa y su influencia en el riesgo de
enfermedad no se ha descrito, tal como se propone en la presente
invención. Tampoco se han caracterizado los compuestos bioactivos
de origen bacteriano implicados en este proceso, producidos por
cepas del género Bifidobacterium, que puedan constituir la
base de aplicaciones para mejorar el estado de salud. Los estudios
realizados hasta ahora sólo se han centrado en la caracterización
de enzimas implicadas en la degradación mucus como fuente de carbono
para el crecimiento de estas bacterias en el colon
(Ruas-Madiedo et al. 2008. Mucin degradation
by Bifidobacterium strains isolated from the human intestinal
microbiota. Appl Environ Microbiol. 2008 Jan 25) o en la
utilización de prebióticos que administrados a través de la dieta
favorezcan su crecimiento y posibilidad de supervivencia (Viscomi,
et al. 2006. S11398369T; Vriesema et al. 2006.
WO2006112714). Por otro lado, existe un método para seleccionar
microorganismos que modulen la glicosilación, incluyendo bacterias
lácticas; sin embargo, no se han caracterizado los compuestos
responsables de estos procesos, ni se han demostrado los efectos
beneficiosos que estas modificaciones pueden tener para mejorar la
salud (Jean-Michel et al., 2004.
Micro-organisms with glycosylation modulating
action of intestinal cell surface. 20040058409).
La microbiota intestinal también regula
distintos aspectos de la inmunidad innata y adquirida, protegiendo
al hospedador frente a las infecciones y procesos de inflamación
crónica (por ejemplo enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca, etc.)
Las células epiteliales y las células presentadoras de antígenos
del sistema inmune innato poseen receptores celulares
("Toll-like receptors" y
"Nod-like recpetors") capaces de discriminar
entre la microbiota comensal y la patógena, induciendo la síntesis
de distintos mediadores de la repuesta inmune innata (citoquinas,
quemoquinas, moléculas de adhesión, etc.) y de adecuadas respuestas
adaptativas destinadas a combatir al patógeno (Werner y Haller.
2007. Intestinal epithelial cell signalling and chronic
inflammation: From the proteome to specific molecular mechanisms.
Mutat Res.
1;622(1-2):42-57). La
inducción moderada de la síntesis de quemoquinass y citoquinas
pro-inflamatorias por bacterias beneficiosas, como
las del género Bifidobacterium, puede contribuir a activar
las defensas frente a infecciones. Por otro lado, la inducción de
la síntesis de altas concentraciones de citoquinas reguladoras y
anti-inflamatorias puede ayudar al desarrollo de un
correcto equilibrio de las repuestas de los linfocitos Th1/h2
evitando los procesos patológicos de inflamación crónica (Sanz
et al. 2007 Probiotics as drugs against human
gastrointestinal infections. Recent Patents
Anti-Infect Drug Disc. 2;
2:148-56). Dichas propiedades aportan un valor
adicional a cepas de Bifidobacterium con miras a su
aplicación para mejorar las defensas naturales del hospedador y
reducir el riesgo de enfermedad tal, y como se propone en la
presente invención.
La presente invención aporta una nueva cepa del
género Bifidobacterium (IATA-ES2), los
compuestos liberados a los sobrenadantes de cultivo y su
formulación a modo de diversos preparados (alimentos funcionales y
nuevos alimentos, probióticos, simbióticos, suplementos,
nutracéuticos, y formulaciones farmacéuticas) con capacidad de
modular la composición de las glicoproteínas de las células
epiteliales intestinales que constituyen el mucus y representan la
primera línea de defensa frente a agentes nocivos. Los productos
objeto de la invención favorecen, de este modo, el patrón de
glicosilación propio de un intestino sano y la residencia de la
microbiota intestinal beneficiosa en detrimento de la perjudicial,
reduciendo globalmente el riesgo de enfermedad.
La bifidobacteria objeto de la invención,
Bifidobacterium IATA-ES2, fue aislada a
partir de heces de lactantes sanos e identificadas por secuenciación
del gen del ARNr 16S y del gen tuf con la especie
Bifidobacteium bifidum y diferenciada por RAPDs de otras
cepas pertenecientes a la misma especie, demostrando su
exclusividad. La nueva cepa secreta compuestos capaces de modular el
patrón de glicosilación del mucus intestinal, que constituye la
primera línea de defensa innata, favoreciendo el patrón de
glicosilación propio de un intestino sano caracterizado por una
elevada abundancia de residuos galactosil \beta(1
\rightarrow 3) N-acetil galactosamina demostrado
por la alta tinción con la lectina PNA que reconoce estos residuos
(Ejemplo 1, Figura 1). El aumento de la síntesis de estos residuos
por acción de bifidobacterias o sus metabolitos u otras bacterias
no ha sido demostrado en ninguno de los estudios precedentes
(Freitas et al., 2001. A heat labile soluble factor from
Bacteroides thetaiotaomicron VPI-5482
specifically increases the galactosylation pattern of
HT29-MTX cells. Cell Microbiol.
3:289-300; Freitas et al. 2005. Indigenous
microbes and their soluble factors differentially modulate
intestinal glycosylation steps in vivo. Histochem. Cell.
Biol. 124: 423-433). Por el contrario, esta cepa no
favorece especialmente la presencia de residuos como la fucosa
\alpha (1,2) Gal \beta (1,4) GIcNAc, cuya abundancia es propia
de pacientes con enfermedades inflamatorias crónicas (como la
enfermedad celíaca) y que favorecen la adhesión de patógenos como
Helicobacter pylori, y se caracterizan por teñirse con la
lectina UEA-I.
La modificación del patrón de glicosilación
producido por la cepa y productos secretados al medio actúa también
favoreciendo la adhesión de especies de bifidobacterias
beneficiosas típicas de niños lactantes, como B. longum by
longum, B. longum by infantis, B breve, y B. bifidum,
y reduciendo la adhesión de Bifidobacterias no propias de niños
como B. animalis así como de bacterias
pro-inflamatorias como Bacteroides spp.
(Ejemplo 2; Figura 2). El aumento de adhesión más significativo a
células epiteliales es el de la propia cepa objeto de la patente,
demostrando un relación de simbiosis con el hospedador que favorece
su propia colonización. Los compuestos con actividad biológica
secretados por la bifidobacteria objeto de la invención son de
naturaleza proteica, y su masa molecular determinada por
ultrafiltración es mayor de 30 kDa y no son activados por acción de
amilasas ni de lipasas. Sus características bioquímicas no
coinciden con las descritas con anterioridad en el caso de los
productos secretados por Bacteroides thetaiotaomicron
VPI-5482 (Freitas et al., 2005. Indigenous
microbes and their soluble factors differentially modulate
intestinal glycosylation steps in vivo. Histochem. Cell.
Biol. 124: 423-433).
La bifidobacteria objeto de la invención también
poseen propiedades inmunoreguladoras y
anti-inflamatorias caracterizadas por estimular la
síntesis de altas concentraciones de IL-10, y
moderadas de citoquinas pro-inflamatorias IL8,
TNF-alpha e IFN-\gamma en células
mononucleares de sangre periférica (PBMCs) y epiteliales
HT29-MTX. Además, esta cepa reduce ligeramente la
expresión de los marcadores de activación de superficie de las PBMCs
como los co-receptores CD4.y CD8 y la molécula
co-estimuladora CD86, evitando una activación
excesiva de la población de linfocitos T. La cepa B. bifidum
ES-2 induce globalmente la síntesis de mediadores
de la inflamación en proporciones equilibradas, lo que le permitiría
activar las defensas de forma controlada evitando el desarrollo de
procesos de inflamación excesivos y crónicos.
La cepa objeto de la invención y los productos
secretados toleran las condiciones gastrointestinales y los
procesos tecnológicos, garantizado así su explotación comercial. Su
formulación incluye y sin que limite el alcance de la invención su
incorporación a alimentos funcionales, nuevos alimentos,
suplementos, nutracéuticos, prebióticos, simbióticos y formulaciones
farmacéuticas de forma individual o combinada con otros
microorganismos o ingredientes funcionales de otra naturaleza.
Globalmente, la invención constituye un método
natural para mejorar las defensas naturales del individuo y reducir
el riesgo de enfermedad con diversas aplicaciones, tanto dirigidas
a la población general, como a grupos de riesgo de padecer
enfermedades específicas como infecciones o enfermedades
inflamatorias crónicas. Está especialmente indicada para grupos de
población con bajas defensas como los niños y ancianos o con
necesidades específicas ya que puede favorecer la colonización de
bifidobacterias propias de lactantes que aumentan nuestras defensas
y regulan nuestro sistema inmunológico. También posee la ventaja de
no tener efectos secundarios a diferencia de las estrategias
farmacológicas (antibióticos, anti-inflamatorios,
inmunosupresores, etc.).
El objeto de la presente invención es un
microorganismo útil para la producción de formulaciones que mejoran
las defensas del individuo y reducen el riesgo de padecer
enfermedades, preferentemente las infecciones microbianas y las
enfermedades de base inmunológica, mediante su capacidad para
modular la composición del mucus y sus interacciones con la
microbiota intestinal, caracterizado por ser un microorganismo no
modificado genéticamente, aislado y seleccionado de la flora
intestinal natural de individuos sanos. En adelante microorganismo
objeto de la presente invención.
La invención comprende un microorganismo y su
uso para mejorar las defensas del individuo y reducir el riesgo de
enfermedad con diversas aplicaciones, tanto dirigidas a la
población general, como a grupos de riesgo de padecer enfermedades
específicas como infecciones o enfermedades inflamatorias crónicas.
Está especialmente indicada para grupos de población con bajas
defensas como los niños y ancianos o con necesidades específicas ya
que puede favorecer la colonización de bifidobacterias propias de
lactantes que aumentan nuestras defensas y regulan nuestro sistema
inmunológico. También posee la ventaja de no tener efectos
secundarios a diferencia de las estrategias farmacológicas
(antibióticos, anti-inflamatorios, inmunosupresores,
etc.).
El microorganismo objeto de la presente
invención comprende esencialmente una cepa del género
Bifidobacterium. Las ventajas de la bifidobacteria
específicamente seleccionada para la formulación de preparados
farmacéuticos, probióticos, simbióticos, nutracéuticos o alimentos
funcionales destinados a aumentar las defensas del individuo son
múltiples. Las bifidobacterias tienen una habilidad especial para
colonizar el tracto intestinal de los recién nacidos, contribuyendo
de forma significativa al desarrollo de sus mecanismos de defensa
(inmunológicos y de otra naturaleza) y a la tolerancia oral a los
antígenos de la dieta y a los microorganismos comensales. Este
grupo bacteriano es uno de los constituyentes mayoritarios de la
microbiota intestinal en los primeros años de vida favorecido por
la lactancia materna (representando hasta el 91%) y su predominio
se asocia a una mayor resistencia a las infecciones y menor
susceptibilidad a enfermedades de base inmunológica (Harmsen, et
al. 2000. Analysis of intestinal flora development in
breast-feed and formula-feed infants
by using molecular identification and detection methods. J.
Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 30: 61-67; Biavati,
et al. 2001. The family Bifidobacteriaceae. In:
Dworkin, et al. (eds.), The Prokaryotes. pp.
1-70. Springer, Nueva York). Asimismo, las cepas del
género Bifidobacterium se consideran globalmente inductoras
de respuestas inmunológicas reguladoras, con un carácter menos
pro-inflamatorio que los lactobacilos y otras
bacterias comensales (Zeuthen et al. 2006. Lactic acid
bacteria inducing a weak interleukin-12 and tumor
necrosis factor alpha response in human dendritic cells inhibit
strongly stimulating lactic acid bacteria but act synergistically
with gram-negative bacteria. Clin Vaccine Immunol.
13(3):365-75).
Un objeto particular de la presente invención
consiste en la aportación de una nueva cepa de la especie
Bifidobacterium bifidum, y en particular
Bifidobacterium IATA-ES2. Un cultivo de
Bifidobacterium IATA-ES2 ha sido depositado
en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT), con sede en
Burjassot (Valencia), el día 20 de diciembre de 2007,
correspondiéndole el número de depósito CECT 7365. Esta cepa
pertenece a la especie B. bifidum de acuerdo con la
homología de la secuencia del gen del ARNr 16S y del gen tuf
con otras actualmente disponibles en las bases de datos (GenBank).
Constituye un ejemplo de una cepa de esta especie que posee las
propiedades y aplicaciones objeto de la invención.
Como ejemplo, y sin que limite el alcance de la
invención, la cepa ha sido aislada a partir de heces de lactantes
sanos e identificadas por secuenciación del gen del ARNr 16S. El
fragmento secuenciado (1304 bases) se amplificó por PCR utilizando
los cebadores Y1f y 1401r y para la secuenciación se empleó además
el cebador 530f de acuerdo con los procedimientos descrito por otros
autores (Satokari et al., 2001. Bifidobacterial Diversity in
Human Feces Detected by Genus-Specific PCR and
Denaturating Gradient Gel Electrophoresis. Appl. Environ.
Microbiol. 67, 504-513; Favier et al. 2002.
Molecular Monitoring of Sucesión of Bacterial Communities in Human
Neonatos. Appl. Environ. Microbiol. 68, 219-226).
Mediante el alineamiento de la secuencia obtenida con las
existentes en las bases de datos se detectó máxima similitud con
las secuencias equivalentes de cepas de la especie B.
bifidum. La máxima identidad (99%) se obtuvo con la cepa
Bifidobacterium bifidum KCTC 3202 depositada en el GenBank
(número de acceso U25952.1). Asimismo, se ha confirmado la
identidad mediante secuenciación del gen tuf. El fragmento
secuenciado se amplificó por PCR utilizando los cebadores
Btuf-1 y Btuf-2 de acuerdo con los
procedimiento descrito por otros autores (Ventura et al.,
2003. Analysis, characterization, and loci of the tuf genes in
lactobacillus and Bifidobacterium species and their direct
application for species identification. Appl Environ Microbiol.
2003 Nov;69(11):6908-22). Al igual que en el
caso anterior, mediante el alineamiento de la secuencia obtenida
(392 pb) con las existentes en las bases de datos se detectó máxima
similitud (100%) con la secuencia equivalente de la cepa B.
bifidum ATCC 29521 depositada en el GenBank (número de acceso
AY372041.1).
La diferenciación de esta cepa con otras de la
misma especie se realizó mediante el estudio del perfil de ADN
obtenido por PCR realizando amplificaciones aleatorias con
cebadores inespecíficos (RAPDS). Por ejemplo, el uso de la técnica
de RAPD con el cebador M13 permitió diferenciar la cepa
ES-2 de otras dos cepas de la misma especie aisladas
en el laboratorio y de la cepa de colección B. longum LMG
1041T en al menos 3 bandas de ADN. Esto indica que se aporta una
cepa exclusiva.
La nueva cepa objeto de esta invención sintetiza
y secreta al medio de cultivo compuestos que modulan la composición
en carbohidratos de los glicoconjugados que forman el mucus
intestinal y esto conlleva modificaciones en las interacciones con
la microbiota intestinal, favoreciendo la adhesión y por tanto los
tiempos de residencia de especies de bifidobacterias típicamente
detectadas en lactantes alimentados con leche materna y asociadas a
efectos beneficiosos sobre la salud y muy especialmente al
fortalecimiento de las defensas innatas del individuo reduciendo el
riesgo de infecciones y de sufrir enfermedades de base inmunológica
(Parracho et al., 2007.Probiotics and prebiotics in infant
nutrition. Proc Nutr Soc. 2007
Aug;66(3):405-11; Penders et al.,
2006. Factors influencing the composition of the intestinal
microbiota in early infancy. Pediatrics. 2006
Aug;118(2):511-21.
La nueva cepa produce compuestos capaces de
modular la composición del mucus y sus interacciones con la
microbiota intestinal. Los compuestos con actividad biológica
secretados por la bifidobacteria al medio de cultivo son de
naturaleza proteica, ya que su actividad se destruye por incubación
como proteasas como la proteinasa K, pero no por incubación en
presencia de amilasas ni de lipasas. Su masa molecular determinada
por filtración es mayor de 30 kDa. Sus características bioquímicas,
por tanto, no coinciden con las descritas con anterioridad para los
productos secretados por Bacteroides thetaiotaomicron
VPI-5482 (Freitas et al., 2005. Indigenous
microbes and their soluble factors differentially modulate
intestinal glycosylation steps in vivo. Histochem. Cell.
Biol. 124: 423-433).
La cepa objeto de la invención produce
compuestos capaces de modular el patrón de glicosilación del mucus
intestinal, que constituye la primera línea de defensa innata,
favoreciendo el patrón de glicosilación propio de un intestino sano
caracterizado por una elevada abundancia de residuos galactosil
\beta(1 \rightarrow 3) N-acetil
galactosamina demostrado por la alta tinción con la lectina PNA que
reconoce estos residuos (Ejemplo 2, Figura 2). Por ejemplo, en
células HT29-MTX que constituyen un modelo de
células intestinales la adición del sobrenadante libre de células
de un cultivo de Bifidobacterium IATA-ES2 da
lugar a una tinción con la lectina PNA hasta 7 veces superior a la
detectada en el control y con los sobrenadantes de cultivo de otras
especies de bifidobacterias, como B. animalis, B. longum y
B. breve. El aumento de la síntesis de estos residuos a los
que se une la lectina PNA por acción de otras bacterias o sus
metabolitos no ha sido demostrado en ninguno de los estudios
precedentes (Freitas et al., 2001. A heat labile soluble
factor from Bacteroides thetaiotaomicron
VPI-5482 specifically increases the galactosylation
pattern of HT29-MTX cells. Cell Microbiol.
3:289-300; Freitas et al. 2005. Indigenous
microbes and their soluble factors differentially modulate
intestinal glycosylation steps in vivo. Histochem. Cell.
Biol. 124: 423-433). Por el contrario, esta cepa no
favorece especialmente la síntesis de residuos propios de pacientes
con enfermedades inflamatorias crónicas (por ejemplo la enfermedad
celíaca) como la Fucosa \alpha (1,2) Gal \beta (1,4) GIcNAc
caracterizados por alta tinción con la lectina
UEA-I y que también favorece la adhesión de
patógenos como Helicobacter pylori (Ejemplo 1).
La modificación del patrón de glicosilación
producido por la cepa y productos secretados al medio actúa también
favoreciendo la adhesión de especies de bifidobacterias
beneficiosas típicas de niños lactantes, como B. longum by
longum, B. longum by infantis, B breve, y B.
bifidum, y reduciendo la adhesión de Bifidobacterias no
propias de niños como B. animalis así como de bacterias
patógenas oportunistas o potencialmente
pro-inflamatorias como Bacteroides spp.
(Ejemplo 3; Figura 3). El aumento de adhesión más significativo a
células epiteliales es el de la propia cepa objeto de la invención,
demostrando un relación de simbiosis con el hospedador que favorece
su propia colonización.
Además, la bifidobacteria objeto de la invención
y los productos secretados al medio de cultivo poseen propiedades
inmunoreguladoras y anti-inflamatorias
caracterizadas por estimular la síntesis de altas concentraciones de
IL-10, y moderada de citoquinas
pro-inflamatorias como el
TNF-\alpha, e IFN-\gamma en
células mononucleares de sangre periférica (PBMCs), y también
moderada de la quemoquina IL8, en células HT29-MTX
(Ejemplo 4, Tabla 1). La estimulación de la síntesis de citoquinas
pro-inflamatorias (por ejemplo
TNF-\alpha, IFN-\gamma) y de la
quemoquina IL-8 que atraerán células fagocíticas
para activar las defensas frente a patógeno, es inferior a las
generadas por bacterias Gram-negativas como
Bacteroides y otras bifidobacterias evaluadas, y por el
contrario la síntesis de la citoquina
anti-inflamatoria IL-10, que
evitaría una activación excesiva de los mediadores de la
inflamación, es superior a la detectada en la mayoría de cepas.
Además, esta cepa reduce ligeramente la expresión de los marcadores
de activación de superficie de las PBMCs como por ejemplo los co-
receptores CD4 y CD8 y la molécula co-estimuladora
CD86, evitando una activación excesiva de la población de linfocitos
T citotóxicos y T colaboradores. Así, se demuestra que la cepa
B. bifidum ES-2 globalmente induce la
síntesis de mediadores de la inflamación en proporciones
equilibradas, lo que le permitiría activar las defensas de forma
controlada evitando el desarrollo de procesos de inflamación
excesivos y crónicos.
El microorganismo objeto de la invención
pertenece a una de las especies del género Bifidobacterium
identificada predominantemente en niños y a la que se atribuyen
propiedades beneficiosas para la salud del recién nacido así como
administrada en forma de probiótico en otros grupos de población de
forma individual o combinada con otros pro- y prebióticos. Por
ejemplo la administración de una cepa de la especie B.
bifidum combinada con otros prebióticos fue efectiva para el
tratamiento de la diarrea aguda en niños (Canani et al.,
2007 Probiotics for treatment of acute diarrhoea in children:
randomised clinical trial of five different preparations. BMJ. 2007
Aug 18;335(7615):340), una combinación de Lactobacillus
acidophilus y B. bifidum mostró eficacia significativa
en la prevención de la diarrea del viajero (McFarland. 2007.
Meta-analysis of probiotics for the prevention of
traveler's diarrhea. Travel Med Infect Dis.
Mar;5(2):97-105), la administración de B.
bifidum Bb12 a adultos aumentó la capacidad fagocítica frente a
patógenos (Schiffrin et al., 1997. Immune modulation of
blood leukocytes in humans by lactic acid bacteria: criteria for
strain selection. Am J Clin Nutr. 1997 Aug;
66(2):515S-520S). El consumo de
Lactobacillus gasseri PA 16/8, B. longum SP 07/3,
B. bifidum MF 20/5 durante 3 semanas redujo los episodios y
duración del resfriado común (De Verse, et al., 2005. Effect
of Lactobacillus gasseri PA 16/8, Bifidobacterium
longum SP 07/3, B. bifidum MF 20/5 on common cold
episodes: a double blind, randomized, controlled trial.Clin Nutr.
2005 Aug;24(4):481-91).
La cepa objeto de la invención presenta una
supervivencia superior al 50% tras su incubación en condiciones
gástricas (solución salina con 3 g/l de pepsina, ajustada a pH 3,0)
y una capacidad de crecimiento del 70% en presencia de las
concentraciones de bilis presentes en el intestino delgado (0,5%
oxgall, Sigma), lo que confirma que es capaz de mantener su
viabilidad en condiciones gastrointestinales y por tanto su posible
uso como probiótico. También es capaz de crecer en matrices
alimentarias, como la leche, que puedan actuar como vehículo del
probióticos y ser origen de nuevos alimentos funcionales. La cepa
objeto de la invención también resiste la liofilización, lo que
asegura su comercialización y posible administración en forma,
entre otras, de preparados farmacéuticos.
Los productos activos liberados al medio de
cultivo, descritos anteriormente, son estables a los tratamientos
industriales y de conservación como por ejemplo y sin que limite el
alcance de la invención la congelación, la concentración por
filtración, cromatrografía y liofilización, lo que permite su
formulación en forma de diversos preparados. El hecho de que los
compuestos activos sean secretados al medio de cultivo por la cepa
objeto de la invención hace que su aplicación no requiera
necesariamente el mantenimiento de la viabilidad de la bacteria en
el producto en el que se comercialice ampliando el número de
aplicaciones industriales.
Las formulaciones elaboradas mediante el
microorganismo objeto de la presente invención puede desarrollarse
industrialmente dando lugar a, entre otras y sin que limite el
alcance de la invención, diferentes formas de presentación al
consumidor: alimentos, alimentos nuevos suplementos, nutracéuticos,
preparados farmacéuticos, probióticos y/o simbióticos.
Un objeto particular de la presente invención
comprende el uso del microorganismo de la presente invención o los
compuestos bioactivos derivados en la elaboración de formulaciones
en forma de un alimento. De esta manera el microorganismo objeto de
la presente invención, formaría parte de un alimento formulado para
aportar, más allá de su valor nutricional habitual, un efecto
beneficioso sobre la reducción de riesgos de padecer
enfermedades.
Otro objeto particular de la presente invención
comprende el uso del microorganismo objeto de la misma o los
compuestos bioactivos derivados en la elaboración de preparados en
forma de nutracéuticos, definidos como sustancias naturales
bioactivas presentadas en una matriz no alimenticia.
Otro objeto de la presente invención es el uso
del microorganismo objeto de la misma o los compuestos bioactivos
derivados para la obtención de un suplemento dietético o
alimentario, que incluiría en su composición el microorganismo o
los compuestos bioactivos derivados del mismo a fin de complementar
la dieta con fines saludables.
Otro objeto particular de la presente invención
comprende el uso del microorganismo o los compuestos activos
derivados en la elaboración de preparados farmacéuticos. De esta
forma se utilizarían en la preparación de composiciones
biológicamente activas, capaces de ser utilizadas como medicamentos
para obtener los efectos beneficiosos descritos sobre la salud.
Otro objeto adicional de la presente invención
es el uso del microorganismo en la preparación de probióticos y/o
simbióticos (combinaciones de probióticos y prebióticos), que
contendrían estos microorganismos vivos o liofilizados, mantendrían
su actividad biológica en el intestino e ingeridos en cantidades
adecuadas ejercerían efectos beneficiosos.
Otro objeto particular de la presente invención
es su uso como nuevo alimento, entendiendo como tal cualquier
alimento o ingrediente que no se haya usado de forma habitual para
consumo humano en la Unión Europea a partir del 15 de mayo de
1997.
Un último objeto de la invención sería su uso en
forma de alimentos, alimentos nuevos, suplementos, nutracéuticos,
composiciones farmacéuticas, probióticos y/o simbióticos en
combinación con otros microorganismos (probióticos o cultivos
iniciadores) u otros ingredientes funcionales distintos de los
microorganismos vivos.
Figura 1. Efecto de la incubación de células
epiteliales HT29-MTX con los compuestos secretados
al sobrenadante de cultivos de distintas bacterias sobre el marcaje
con la lectina PNA marcada con fluoresceína, que reconoce los
residuos galactosil \beta(1 \rightarrow 3)
N-acetil galactosamina propios de un intestino
sano. Control (PBS); BH (control de bacteroides); MRS (control de
bifidobacterias); Bac (Bacteroides spp.), ES1
(Bifidobacterium longum IATA-ES1); B.
breve LMG11042T; ES2 (Bifidobacterium bifidum
IATA-ES2), 324 (Bifidobacterium longum
BIR-324), A2 (Bifidobacterium animalis). *El
efecto del sobrenadante de ES2 fue significativamente diferente al
del resto aplicando el test de Mann-Whitney
U a P< 0.05.
Figura 2. Diferencias significativas entre el
porcentaje de adhesión de B. bifidum ES2 y otras bacterias
intestinales a células HT29-MTX, tras su
estimulación con los compuestos secretados al sobrenadante de
cultivo por la misma cepa frente y con medio de cultivo estéril
como control (MRS) aplicando el test de
Mann-Whitney (*P < 0.05).). ES1,
Bifidobacterium longum IATA-ES1; ES2,
Bifidobacterium bifidum IATA-ES2; 324,
Bifidobacterium longum BIR-324; B.
breve LMG11042T; Bac (Bacteroides spp.), ES1; A2
(Bifidobacterium animalis).
Las cepas del género Bifidobacterium se
inocularon en 10 ml de caldo MRS (Scharlau Chemie S.A., Barcelona,
España) conteniendo un 0,05% de cisterna (MRS-C) al
10/0 con un cultivo de 24 h y se incubaron durante 22 h a 37ºC en
anaerobiosis. (AnaeroGen; Oxoid, Basingstoke, UK). Las cepas del
género Bacteroides se inocularon en caldo Brain Herat (Scharlau
Chemie S.A., Barcelona, España) siguiendo el mismo procedimiento.
Las células se recogieron por centrifugación (6,000 g, 15 min.), se
lavaron dos veces en PBS (10 mM fosfato sódico,130 mM cloruro
sódico, pH 7,4), y se re-suspendieron en PBS
conteniendo un 20% de glicerol. Alícuotas de estas suspensiones se
congelaron con nitrógeno líquido y se conservaron a -80ºC. El número
de viables tras el ciclo de
congelación-descongelación se determinó mediante
recuento en placas de MRSC tras incubar 48 h. La viabilidad fue
superior al 90% en todos los casos. Los sobrenadantes de los medios
de cultivo se esterizaron por filtración (0.22-pm
tamaño de poro, Millipore, Bedford, MA) para eliminar la posible
presencia de células viables y alícuotas de éstos sobrenadantes
libres de células se conservaron a -80ºC hasta su uso.
El patrón de glicosilación se determinó
utilizando el modelo de células epiteliales intestinales secretoras
de mucus HT29-MTX, proporcionadas por la Dra.
Lesuffleur (INSERM U843, Paris, Francia). Las células se cultivaron
en medio DMEM glutamax, conteniendo 4.5 g/L
D-glucosa, 25 mM de piruvato (Gibco, Barcelona,
España), 100 U/ml penicilina, 100 \mul/ml estreptomicina (Sigma,
St. Luis, MO) y 10% de suero fetal bovino (Gibco, Barcelona, España)
inactivado durante 30 minutos a 56ºC. Las células se crecieron en
frascos de 75 cm^{2}, y placas de 6 y 24 pocillos (Corning,
Madrid, España) a 37ºC en una atmósfera de un 5% CO_{2}. Los
cultivos se inocularon en las placas a una densidad de 5 x 10^{5}
células por ml. Para la detección del patrón de glicosilación por
marcaje con lectinas, las células HT29-MTX células
se incubaron 7 días en placas de 6 pocillos hasta que alcanzar
confluencia. Las monocapas se lavaron con PBS estéril libre de
Ca^{2+} y Mg^{2+} (Gibco, Barcelona, España) y se incubaron en
presencia de medio fresco DMEM conteniendo un 20% (v/v) del
sobrenadante libre de células de los cultivos de las bacterias
evaluadas o medio fresco BHI o MRS, utilizados como controles,
durante 7 días adicionales. Las células también se incubaron en
presencia de suspensiones de células bacterianas adicionadas a una
concentración de 10^{6} cfu/ml durante 2 días. Después de la
estimulación las células HT29-MTX se lavaron 3
veces con PBS libre de Ca^{2+} y Mg^{2+} PBS (Gibco, Barcelona,
España) y se incubaron durante 5 minutos a 37ºC con un 0.25% de
tripsina y 1 mM EDTA, resuspendidos en DMEM y, posteriormente, se
centrifugó para recoger las células (1800 r.p.m., 10 min., a 4ºC).
Las células se lavaron 2 veces con PBS y se tiñeron con lectinas
marcadas con fluoresceína (FITC) durante 40 minutos. Las lectinas
utilizadas y sus concentraciones fueron las siguientes: UEA
(Ulex europaeus)
[\alpha(1,2)-fucosa] (Sigma), 50 \mug/ml;
PNA (Arachys hypogaea, \beta-gal(1
\rightarrow 3)galNAc (Sigma), 10 \mug/ml; HPA (Helix
pomatia), \alpha-NAc residuos (Molecular
Probes, Barcelona, Spain), 10 \mug/ml; SBA (Gycine max),
\alpha-y \beta-Nac. y
galactopiranosil (Molecular Probes, Barcelona, Spain), 10 \mug/ml.
Las células se lavaron 3 veces y se resuspendieron en 400 \mul de
PBS. El grado de tinción con las lectinas se cuantificó en un
citómetro de flujo (EPICS® XL-MCL flow cytometer;
Beckman Coulter, Florida, US).
Las suspensiones de bacterias se tiñeron
mediante incubación con 10 mM de 5-diacetato de
carboxifluoresceina (Sigma, St. Louis, MO), a 37ºC, durante 1 hora.
Las suspensiones de células marcadas se ajustaron a una densidad
óptica de 0.50 \pm 0.05 a 600 nm y se adicionaron a cultivos
confluentes de células HT29-MTX y se incubaron a
37ºC durante 1 hora. Las células se lavaron con PBS para eliminar
las bacterias no adheridas y las adheridas se recogieron mediante
incubación con 200 \mul de 1% SDS (Sigma, St Louis, MO) en 0.1 M
NaOH a 37ºC durante 1 hora. La fluorescencia liberada se midió en
un fluorímetro de placas multipocillo (Fluoroskan Ascent, Labsystem,
Oy, Finland) a 485 y 538 nm de longitud de onda de excitación y
emisión, respectivamente. La adhesión se expresó como porcentaje de
la fluorescencia recuperada tras la adhesión de las bacterias a
células HT29-MTX respecto a la fluorescencia
inicial de la suspensión bacteriana añadida por pocillo.
Las cepas se inocularon en 10 ml de caldo MRS
(Scharlau Chemie S.A., Barcelona, España) conteniendo un 0.05% de
cisterna (MRS-C) al 1% con un cultivo de 24 h y se
incubaron durante 22 h a 37ºC en anaerobiosis. (AnaeroGen; Oxoid,
Basingstoke, UK). Las células se recogieron por centrifugación
(6,000 g, 15 min), se lavaron dos veces en PBS (10 mM fosfato
sódico, 130 mM cloruro sódico, pH 7.4), y se
re-suspendieron en PBS conteniendo un 20% de
glicerol. Alícuotas de estas suspensiones se congelaron con
nitrógeno líquido y se conservaron a -80ºC. El número de viables
tras el ciclo de congelación-descongelación se
determinó mediante recuento en placas de MRSC tras incubar 48 h. La
viabilidad fue superior al 90% en todos los casos. Cada alícuota se
utilizó para un solo ensayo. A fin de evaluar los efectos de
bacterias muertas, algunas de las alícuotas se inactivaron por frío
(3 ciclos de congelación a -20ºC y descongelación) y por calor (30
min a 80ºC). Los valores de pH de los sobrenadantes obtenidos se
ajustaron a 7.2 con NaOH y se esterizaron por filtración
(0.22-\mum tamaño de poro, Millipore, Bedford,
MA) para eliminar la posible presencia de células viables.
Alícuotas de los sobrenadantes libres de células se conservaron a -
80ºC hasta su uso.
Las PBMCs se aislaron de sangre periférica de 4
voluntarios sanos (edad media 30 años, intervalo
24-40) en tubos con heparina. El aislamiento de
PBMCs se realizó por centrifugación en gradiente de Ficoll (Amersham
Biosciences, Piscataway, NJ). Las células se lavaron con medio RPMI
1640 (Cambrex, New York, USA) y se ajustaron a una densidad de 1 x
10^{6} células/ml en medio RPMI 1640 conteniendo además 10% de
suero fetal bovino (Gibco, Barcelona, España), 2 mM de
L-glutamina, 100 \mug/ml de estreptomicina y 100
U/ml penicilina (Sigma). Las PBMCs se incubaron en placas de
poliestireno de fondo plano de 24 pocillos (Corning, Madrid, España)
en presencia o ausencia de agentes estimulantes a 37ºC, al 5% de
CO_{2}, durante 24 h. Como estímulo se utilizaron suspensiones
bacterias vivas y muertas de 1 x 10^{6} CFU/ml, y volúmenes de
sobrenadantes de 150 \mul. Como control positivo se uso
lipopolisacárido (LPS) purificado de E. coli O111:B4 (Sigma,
St. Louis, MO) a una concentración de 1 \mug/ml. Como control
negativo se ensayó la producción de citoquinas en PBMCs no
estimuladas. Cada tipo de estímulo fue ensayado por duplicado en
cada experimento. Los sobrenadantes de los cultivos se recogieron
por centrifugación, se fraccionaron y se almacenaron en alícuotas a
-20ºC hasta la detección de citoquinas.
Las células epiteliales intestinales secretoras
de mucus HT29- MTX, se cultivaron como se ha descrito en el ejemplo
1 y, posteriormente, se incubaron en presencia de suspensiones
celulares y sobrenadantes de cultivo libres de células de
bifidobacterias y otras bacterias intestinales durante 24 h,
siguiendo el mismo procedimiento descrito para la estimulación de
PBMCs. Tras este período, se recogieron los sobrenadantes de los
cultivos por centrifugación, se fraccionaron y se almacenaron en
alícuotas a -20ºC hasta la detección de citoquinas.
Las concentraciones de citoquinas
(IL-8, IL-1,
IFN-\gamma, IL-10, y
TGF-\beta) de los sobrenadantes se midieron
mediante kits ELISA de Bioscience (BD Biosciences, San Diego, CA)
de acuerdo con las instrucciones de la casa comercial.
\vskip1.000000\baselineskip
ND, no detectada
-, no evaluada
^{1}Bifidobacterium animalis
IATA-A2, ^{3}Bifidobacterium bifidum
IATA-ES2,
^{4}Bifidobacterium longum
BIR-324, ^{5}Bifidobacterum longum W11,
^{6}Bifldobacterum longum BB536.
<110> Consejo Superior Investigaciones
Científicas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> BACTERIAS Y PRODUCTOS DERIVADOS PARA
FORTALECER LAS DEFENSAS INNATAS Y REDUCIR EL RIESGO DE
ENFERMEDAD
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> ES1641.144
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1304
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Bifidobacterium bifidum
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\hskip1cm
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 392
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Bifidobacterium bifidum
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\hskip1cm
Claims (21)
1. Microorganismo útil para la producción de
formulaciones que mejoran las defensas del individuo y reducen el
riesgo de padecer enfermedades, y preferentemente las infecciones
microbianas y las enfermedades de base inmunológica,
caracterizado por su capacidad para modular la composición
del mucus y sus interacciones con la microbiota intestinal, y por
ser un microorganismo no modificado genéticamente, aislado y
seleccionado de la flora intestinal natural de individuos
sanos.
2. Microorganismo según la reivindicación 1,
caracterizado porque es una bacteria del género
Bifidobacterium.
3. Microorganismo según las reivindicaciones de
la 1 a la 2, caracterizado por ser una cepa bacteriana que
pertenece a la especie Bifidobacterium bifidum.
4. Microorganismo según las reivindicaciones de
la 1 a la 3, caracterizado por ser una cepa bacteriana que
pertenece a la especie Bifidobacterium bifidum
(IATA-ES2) (CECT 7365).
5. Microorganismo según las reivindicaciones de
la 1 a la 4, caracterizado porque libera al medio de cultivo
parte de los compuestos con capacidad para modular la composición
del mucus y sus interacciones con la microbiota intestinal.
6. Microorganismo según las reivindicaciones de
la 1 a la 5, caracterizado porque los compuestos con
actividad biológica que produce y libera al medio de cultivo son de
naturaleza proteica, y de masa molecular mayor de 30 kDa.
7. Microorganismo y compuestos producidos por el
microorganismo según reivindicaciones de la 1 a la 5,
caracterizados por su capacidad de modular el patrón de
glicosilación del mucus intestinal, a través del aumento de la
síntesis de residuos galactosil \beta(1 \rightarrow 3)
N-acetil galactosamina, siendo este hasta 7 veces
superior al control.
8. Microorganismo y compuestos producidos por el
microorganismo según las reivindicaciones de la 1 a la 5,
caracterizados por ser capaz de favorecer la adhesión de
especies bacterianas beneficiosas.
9. Microorganismo y compuestos producidos por el
microorganismo según la reivindicación 8 caracterizados
porque las especies beneficiosas cuya adhesión favorece pueden ser
B. longum by longum, B. longum by infantis, B
breve, y B. bifidum.
10. Microorganismo y compuestos producidos por
el microorganismo según las reivindicaciones de la 1 a la 5,
caracterizados por reducir la adhesión de especies
perjudiciales y de otras comensales que aún no siendo patógenas
pueden reducir la adhesión de las especies bacterianas
beneficiosas.
11. Microorganismo y compuestos producidos por
el microorganismo según la reivindicación 10 caracterizados
porque las especies perjudiciales cuya adhesión se reduce pueden
ser del género Bacteroides.
12. Microorganismo y compuestos producidos por
el microorganismo según las reivindicaciones de la 1 a la 5,
caracterizados por poseer propiedades inmunoreguladoras y
anti-inflamatorias, capaces de estimular la síntesis
de citoquinas y reducir levemente los marcadores celulares de
activación, contribuyendo a estimular las defensas y evitando los
procesos de inflamación crónica derivados de una activación
excesiva del sistema inmunológico.
13. Microorganismo y compuestos producidos por
el microorganismo según la reivindicación 12, caracterizados
por estimular la síntesis de altas concentraciones de las
citoquinas anti-inflamatoria IL-10,
y moderadas concentraciones de las citoquinas y quemoquinas
pro-inflamatorias IL8, TNF-alpha e
IFN-\gamma y reducción de los marcadores celulares
de activación CD4, CD8 y CD86.
14. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, de manera aislada o en combinación
entre sí o con otros microorganismos y/o ingredientes en la
producción de formulaciones con fines preventivos o
terapéuticos.
15. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según la reivindicación 14,
caracterizado porque los microorganismos con los que se
pueden combinar son probióticos o cultivos iniciadores.
16. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según reivindicación 14
caracterizados porque la formulación elaborada es un
alimento.
17. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según reivindicación 14
caracterizados porque la formulación elaborada es un
nutraceutico.
18. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según reivindicación 14
caracterizados porque la formulación elaborada es un
suplemento.
19. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según reivindicación 14
caracterizados porque la formulación elaborada es un
preparado farmacéutico.
20. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según reivindicación 14
caracterizados porque la formulación elaborada es un
probiótico y/o simbiótico.
21. Uso del microorganismo y compuestos
producidos por el microorganismo según reivindicación 14
caracterizado porque la formulación elaborada es un nuevo
alimento.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| ES200802102A ES2331863B1 (es) | 2008-07-15 | 2008-07-15 | Bacterias y productos derivados para fortalecer las defensas y reducir el riesgo de enfermedad. |
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