ES2332363T3

ES2332363T3 - Nuevos derivados de alfa-cetoamida y su uso.

Info

Publication number: ES2332363T3
Application number: ES03765283T
Authority: ES
Inventors: Masayuki Nakamura; Jun Inoue
Original assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-07-22
Filing date: 2003-07-11
Publication date: 2010-02-03
Anticipated expiration: 2023-07-11
Also published as: ATE448198T1; EP1557407A1; JP4549851B2; EP1557407A4; WO2004009537A1; DE60330038D1; EP1557407B1; JPWO2004009537A1; US7022738B2; US20050165113A1; AU2003248059A1

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula (I) **(Ver fórmula)** en la que R1, R2 y R3 representa cada uno un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 6 átomos de carbono.

Description

Nuevos derivados de \alpha-cetoamida y su uso.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un derivado de \alpha-cetoamida que tiene actividad inhibidora de calpaína. Asimismo, la presente invención se refiere a un medicamento que comprende el nuevo derivado de \alpha-cetoamida.

Técnica antecedente

Calpaína es una de las proteasas intracelulares presente por todas partes en un cuerpo vivo, y que es activada por Ca^{2+}. Se ha esclarecido hoy en día que la activación anormal de calpaína está implicada en diversas enfermedades tales como apoplejía cerebral, hemorragia subaracnoidea, enfermedad de Alzheimer, enfermedad isquémica, distrofia muscular, catarata, trastorno de agregación plaquetaria, artritis o similares (Trends in Pharmacological Sciences, vol. 15, página 412, 1994).

Por otra parte, se ha reseñado que un inhibidor de calpaína es eficaz para mantener la permeabilidad de lentes en un modelo experimental de catarata de lentes cultivadas (Current Eye Research, vol. 10, páginas 657 a 666, 1991) y es útil como agente terapéutico para catarata, etc. (WO-A-93/23032).

Ejemplos de inhibidores de calpaína que se han reseñado hasta ahora incluyen derivados de peptidilhalometano (JP-B-29229/1994), derivados de peptidildiazometano (The Biochemical Journal, vol. 253, páginas 751 a 758, 1988, Journal of Medicinal Chemistry, vol. 35, páginas 216 a 220, 1992), derivados de peptidilaldehído (EP-A-0771565, US-A-6057290), sin embargo, ninguno de los inhibidores anteriores ha sido puesto en uso práctico.

Descripción de la invención

Los inventores de la presente han realizado estudios intensivos para proporcionar un compuesto que tiene actividad inhibidora de calpaína y, como resultado, han creado un derivado de \alpha-cetoamida que tiene potente actividad inhibidora de calpaína. Han realizado estudios adicionales y finalmente han formalizado la presente invención.

Concretamente, la presente invención se refiere a

(1) Un compuesto representado por la fórmula (I)

1

en la que R^{1}, R^{2} y R^{3} representa cada uno un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 6 átomos de carbono;

(2) el compuesto según el punto anterior (1) en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} representa cada uno un grupo alquilo que tiene 3 ó 4 átomos de carbono;

(3) el compuesto según el punto anterior (1) que es (3S)-N-butil-3-((2S)-2-(((4-fluorfenil)sulfonil)amino)-3-metilbutanoilamino)-5-metil-2-oxohexanamida;

(4) una composición farmacéutica que comprende el compuesto según se ha definido en cualquiera de (1) a (3);

(5) la composición farmacéutica según el punto anterior (4), que es inhibidora de calpaína;

(6) el compuesto de (1) a (3) o una composición farmacéutica de (4) para el tratamiento y profilaxis de

enfermedad isquémica, enfermedad inmunológica, enfermedad de Alzheimer, osteoporosis, enfermedades causadas por lesión de tejido cerebral, catarata, glaucoma, enfermedad retinocoroidea, complicaciones en el globo ocular posterior debidas a fotocoagulación y enfermedad de neovascularización.

En la fórmula anterior (I) el grupo alquilo representado por R^{1}, R^{2} o R^{3} es un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 6 átomos de carbono, preferiblemente metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, secbutilo, tercbutilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, tercpentilo, 1-metilbutilo, 2-metilbutilo, 1,2-dimetilpropilo, hexilo, 1-metilpentilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo, 3,3-dimetilbutilo, 1-etilbutilo, 2-etilbutilo, 1-etil-2-metilpropilo, 1,1,2-trimetilpropilo, y más preferiblemente un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 3 ó 4 átomos de carbono. Ejemplos particularmente preferibles de alquilo inferior para R^{1}, R^{2} y R^{3} son isopropilo, isobutilo y butilo, respectivamente.

Además, la presente invención incluye una diversidad de solvatos, polimorfos del compuesto (I) de la presente invención además del compuesto (I).

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar, por ejemplo según el siguiente esquema de reacción:

2

en el que cada símbolo tiene el mismo significado que se ha definido anteriormente.

Un compuesto representado por la fórmula (IV) (de aquí en adelante, se puede denominar compuesto (IV)) se puede preparar disolviendo un compuesto de peptidilaldehído representado por la fórmula (II) (de aquí en adelante, se puede denominar compuesto (II)) que se sintetiza según el procedimiento descrito, por ejemplo, en EP-A-0771565 ó US-A-6057290 y un reactivo de isocianuro representado por la fórmula (III) (de aquí en adelante, se puede denominar compuesto (III)) en un disolvente orgánico usado comúnmente, y sometiendo la solución resultante a reacción de Passerini en presencia de ácido trifluoracético y piridina (Org. Lett., vol. 2, páginas 2769 a 2772, 2000). Ejemplos del disolvente orgánico usado comúnmente incluyen disolventes convencionales que no afectan adversamente a la reacción ni a la mezcla resultante de la misma, tales como diclorometano, N,N-dimetilformamida, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano, metanol, etanol, benceno, tolueno, acetato de etilo y entre los que es preferible diclorometano. La cantidad usada de reactivo de isocianuro es aproximadamente 1 a 10 veces los equivalentes molares, preferiblemente aproximadamente 1 a 2 veces los equivalentes molares del compuesto (II). La cantidad usada de ácido trifluoracético es aproximadamente 1 a 20 veces los equivalentes molares, preferiblemente aproximadamente 1 a 3 veces los equivalentes molares del compuesto (II). La cantidad usada de piridina es aproximadamente 1 a 20 veces los equivalentes molares, preferiblemente aproximadamente 3 a 5 veces los equivalentes molares del compuesto (II). La temperatura de reacción no está particularmente limitada siempre que caiga dentro del intervalo en el que no ocurran reacciones laterales indeseables, y habitualmente la reacción se lleva a cabo con enfriamiento, a temperatura ambiente o con calentamiento suave, preferiblemente a una temperatura dentro del intervalo de enfriamiento con hielo a temperatura ambiente.

El compuesto (I) se puede obtener sometiendo el compuesto (IV) a una reacción de oxidación. La reacción de oxidación se lleva a cabo mediante métodos convencionales per se, incluyendo aquellos que se clasifican en (i) oxidación con cromo tal como oxidación con dicromato de piridinio (PDC), oxidación con clorocromato de piridinio (PCC), oxidación de Jones y oxidación de Collins, y (ii) oxidación con DMSO tal como la oxidación de Swern, oxidación con complejo de DMSO/trióxido de azufre-piridina, oxidación con DMSO/diciclohexilcarbodiimida (DCC), oxidación con DMSO/cloruro de oxalilo, oxidación de Dess-Martin usando peryodano de Dess-Martin, oxidación con ácido hipohaloso y oxidación con amida N-halogenocarboxílica, y entre los que es preferible la oxidación de Dess-Martin. Para llevar a cabo la oxidación de Dess-Martin, el compuesto (IV) se disuelve en un disolvente orgánico usado comúnmente y se añade reactivo de Dess-Martin a los mismos. Ejemplos de disolventes orgánicos usados comúnmente incluyen disolventes convencionales que no afectan adversamente a la reacción ni a la mezcla resultante de la misma, tales como diclorometano, N,N-dimetilformamida, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano, metanol, etanol, benceno, tolueno, acetato de etilo y entre los que es preferible diclorometano. La cantidad del reactivo de Dess-Martin es aproximadamente 1 a 20 veces los equivalentes molares, preferiblemente 1 a 3 veces los equivalentes molares del compuesto (IV). La temperatura de reacción no está particularmente limitada siempre que caiga dentro del intervalo en el que no ocurran reacciones laterales indeseables, y habitualmente la reacción se lleva a cabo con enfriamiento, a temperatura ambiente o con calentamiento suave, preferiblemente a una temperatura dentro del intervalo de enfriamiento con hielo a temperatura ambiente.

Los derivados de cetoamida así obtenidos se pueden separar y purificar mediante métodos convencionales de separación y purificación que incluyen, por ejemplo, concentración, concentración al vacío, extracción con disolventes, cristalización, recristalización, transferencia de disolventes, cromatografía.

Ejemplos específicos de compuestos (I) preparados según el método anterior incluyen (3S)-N-butil-3-((2S)-2-(((4-fluorfenil)sulfonil)amino)-3-metilbutanoil-amino)-5-metil-2-oxohexanamida.

Según se muestra en los Ejemplos de Prueba que se describirán de aquí en adelante, los compuestos de la presente invención tienen una excelente actividad inhibidora de calpaína. Por consiguiente, un medicamento que contiene un compuesto de la presente invención como ingrediente activo, opcionalmente en combinación con un vehículo, etc., que se describirá de aquí en adelante, es útil como inhibidor de calpaína.

El medicamento que contiene un compuesto de la presente invención es útil como agente profiláctico o terapéutico para enfermedades de mamíferos (por ejemplo ser humano, rata, ratón, conejo, ganado bovino, cerdo, perro, gato) relacionadas con calpaína tales como enfermedad isquémica, enfermedad inmunológica, enfermedad de Alzheimer, osteoporosis, enfermedades causadas por lesión de tejido cerebral, catarata, glaucoma, enfermedad retinocoroidea, complicaciones en el globo ocular posterior debidas a fotocoagulación (por ejemplo edema macular, desprendimiento de retina, neuritis óptica, defecto de campo visual, defecto de la sensibilidad a la luz, discromatopsia, etc.), una enfermedad que implica neovascularización. Además, un compuesto de la presente invención tiene excelente transporte en tejido y alta capacidad de absorberse así como alta seguridad y muy baja toxicidad.

El medicamento que contiene un compuesto de la presente invención se puede administrar sistémicamente o localmente. Aparte de administración oral, la administración sistémica incluye la ruta de administración parenteral tal como inyección intravenosa, inyección subcutánea, inyección intramuscular, y similares. En caso de administración local, el medicamento se aplica por vía transdérmica, ruta de membrana mucosa, nasal o intraocular.

La forma farmacéutica del medicamento que contiene un compuesto de la presente invención incluye preparaciones sólidas (por ejemplo, polvos, gránulos comprimidos, cápsulas, supositorios) y preparaciones líquidas (por ejemplo, jarabes, inyecciones, colirios, gotas nasales. En la producción de gránulos o comprimidos, cualquier forma farmacéutica se puede preparar con el uso, por ejemplo, de excipientes (por ejemplo, lactosa, sacarosa, glucosa, almidón, celulosa cristalina), lubricantes (por ejemplo, estearato magnésico, talco, ácido esteárico, estearato cálcico), desintegradores (por ejemplo, almidón, carmelosa sódica, carbonato cálcico), y aglutinantes (por ejemplo, pasta de almidón, solución de hidroxipropilcelulosa, solución de carmelosa, solución de goma arábiga, solución de gelatina, solución de alginato sódico. Además, se pueden revestir gránulos y comprimidos con un agente de revestimiento (por ejemplo, gelatina, azúcar blanco, goma arábiga, cera carnauba) o un agente de revestimiento entérico (por ejemplo, acetato ftalato de celulosa, copolímero metacrílico, ftalato de hidroxietilcelulosa, carboximetiletil celulosa).

En la producción de cápsulas, se seleccionan y se añaden apropiadamente al compuesto de la presente invención excipientes adecuados tales como estearato magnésico, estearato cálcico, talco, y anhídrido de ácido silícico ligero, para mejorar fluidez y lubricidad; celulosa cristalina, lactosa para aumentar la fluidez bajo presión, y los desintegradores anteriormente mencionados, mezclados o granulados homogéneamente y se llenan en cápsulas, o como alternativa, los productos granulados se pueden revestir con un agente de revestimiento adecuado y se pueden llenar en cápsulas. Se pueden encapsular con una base de cápsula apropiada (por ejemplo gelatina) que tenga plasticidad aumentada conferida mediante adición de glicerina o sorbitol. Si se requiere, se pueden añadir agentes colorantes, conservantes (por ejemplo dióxido de azufre, parabenos tales como p-oxibenzoato de metilo, p-oxibenzoato de etilo y p-oxibenzoato de propilo) a las preparaciones de cápsulas. Además de las preparaciones de cápsulas convencionales, se pueden formular cápsulas revestidas entéricas, cápsulas resistentes a jugos gástricos o cápsulas de liberación controlada. En el caso de preparaciones de cápsulas revestidas entéricas, se pueden preparar llenando cápsulas regulares con un compuesto que está revestido con un agente de revestimiento entérico o con el compuesto al que se añade dicho excipiente apropiado. Como alternativa, la propia cápsula se puede revestir con un agente de revestimiento entérico, o se puede moldear un polímero entérico como base a las cápsulas revestidas entéricas.

En la producción de supositorios, se puede seleccionar y usar una base de supositorios adecuada (por ejemplo, manteca de cacao, macrogol).

En la producción de jarabes, se pueden seleccionar y usar un estabilizante adecuado (por ejemplo sal sódica de EDTA), agente de suspensión (por ejemplo goma arábiga, carmelosa), correctivo (por ejemplo jarabe de azúcar, glucosa), perfume.

En la producción de inyecciones, colirios o gotas nasales, éstas se pueden producir disolviendo o dispersando el compuesto de la presente invención en una solución que contiene un aditivo farmacéuticamente aceptable tal como solución isotónica (por ejemplo cloruro sódico, cloruro potásico, glicerina, manitol, sorbitol, ácido bórico, bórax, glucosa, propilenglicol), tampón (por ejemplo tampón de fosfato, tampón de acetato, tampón de borato, tampón de carbonato, tampón de citrato, tampón Tris, tampón de glutamato, tampón de \varepsilon-aminocapronato), conservante (por ejemplo p-oxibenzoato de metilo, p-oxibenzoato de etilo, p-oxibenzoato de propilo, clorobutanol, alcohol bencílico, cloruro de benzalconio, deshidroacetato sódico, sal sódica de EDTA, ácido bórico, bórax), espesante (por ejemplo hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, poli(alcohol vinílico), polietilenglicol), estabilizante (por ejemplo hidrógenosulfito sódico, tiosulfato sódico, sal sódica de EDTA, citrato sódico, ácido ascórbico, dibutilhidroxitolueno), agente controlador del pH (por ejemplo ácido clorhídrico, hidróxido sódico, ácido fosfórico, ácido acético.

Aunque la cantidad de aditivo para jarabe, inyección, colirio y gota nasal anteriores depende de la clase y finalidad de dicho aditivo, es suficiente añadir la cantidad del aditivo que pueda conseguir la finalidad. Habitualmente se añade una solución isotónica en una cantidad de 0,5 a 5,0% peso/volumen de manera que la presión osmótica alcance 229 mOsm a 343 mOsm. Concentraciones de tampón, espesante y estabilizante que se han de añadir son 0,01 a 2,0% peso/volumen, 0,01 a 1,0% peso/volumen y 0,001 a 1,0% peso/volumen, respectivamente. Se añade apropiadamente un agente controlador del pH para ajustar el pH habitualmente de 3 a 9, preferiblemente de 4 a 8.

La dosis del compuesto de la presente invención depende de las enfermedades diana, síntoma de la enfermedad, sujeto al que se ha de administrar, ruta de administración. Por ejemplo, en el caso de administración oral a un paciente adulto, la dosis es de 1 a 200 mg, preferiblemente 10 a 100 mg para una dosis sencilla, de una vez a varias veces al día. En el caso de inyección a un paciente adulto, la dosis es de 0,1 a 50 mg, preferiblemente 1 a 30 mg, una vez al día. Para administración tópica a los ojos, es preferible administrar colirios que contienen habitualmente 0,001 a 1,0% peso/volumen, preferiblemente 0,01 a 0,5% peso/volumen en una cantidad de 20 a 50 \muL por dosis, varias veces al día.

Mejor modo para llevar a cabo la invención

La presente invención se ilustrará a continuación con más detalle por medio de Ejemplos de Referencia, Ejemplos de Trabajo, Ejemplos de Prueba y Ejemplos de Formulación.

En los datos analíticos de los compuestos que se describen en los Ejemplos, los puntos de fusión se determinaron en un aparato MP-500V de micropunto de fusión Yanaco sin corrección. Los espectros de RMN ^{1}H se registraron en un JNM-GSX270 (270 MHz) (JAPAN ELECTRON OPTICS LABORATORY CO., LTD.) y un Gemini 2000 (300 MH) (Varian Inc.). Se midió la rotación óptica específica [a]_{D} usando SEPA-2000 (Horiba, Ltd.). Se midió el análisis elemental usando CHNS/02400 (Perkin Elmer, Inc.).

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Ejemplo de Referencia 1

N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valil-L-leucinal (Compuesto de Referencia 1)

Etapa 1

Se disolvió valina (11,7 g, 100 mmol) en hidróxido sódico acuoso 1M (100 mL), y a continuación se añadieron a la misma agua purificada (150 mL) y tetrahidrofurano (100 mL). Se agitó la solución bajo enfriamiento con hielo, y se añadió hidróxido sódico acuoso 1M (100 mL) gota a gota a la solución y simultáneamente una solución de cloruro de 4-fluorbencenosulfonilo (17,5 g, 90 mmol) en tetrahidrofurano (100 mL). Se agitó la solución mezclada y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 18 horas. Tras la terminación de la reacción, se ajustó el pH de 2 a 3, y se extrajo la solución con acetato de etilo. El extracto se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico diluido y salmuera saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se concentró al vacío para retirar acetato de etilo. El residuo se lavó con una mezcla de hexano-acetato de etilo (preparada mezclando aproximadamente 10 a 20 veces la cantidad de hexano con 1 vez la cantidad de acetato de etilo; de aquí en adelante denominada mezcla de hexano-acetato de etilo) para dar N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valina (15,5 g, rendimiento de 56%) como cristales blancos.

Etapa 2

Se disolvieron N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valina (15,0 g, 55 mmol) y N-hidroxisuccinimida (7,6 g, 66 mmol) en tetrahidrofurano (200 mL). A la solución se añadió gradualmente una solución de hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (12,6 g, 66 mmol) en diclorometano (200 mL) con agitación bajo enfriamiento con hielo, y se agitó la mezcla y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante aproximadamente 4 horas. Tras la terminación de la reacción, se evaporó el disolvente al vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo. La solución se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico diluido, bicarbonato sódico acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se concentró al vacío para retirar acetato de etilo. El residuo se lavó con una mezcla de hexano-acetato de etilo para dar éster de N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valina N-hidroxisuccinimida (17,6 g, rendimiento de 87%) como cristales blancos.

Etapa 3

Se disolvió éster de N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valina N-hidroxisuccinimida (2,0 g, 5,4 mmol) en diclorometano (50 mL) y a esta solución se añadió leucinol (0,82 g, 7,0 mmol). La solución se dejó reaccionar al tiempo que se agitó durante 2 horas, y se lavó, tras la terminación de la reacción, sucesivamente con ácido clorhídrico diluido, bicarbonato sódico acuoso saturado y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato magnésico anhidro. Después de la retirada del diclorometano mediante evaporación al vacío, el residuo se lavó con la mezcla de hexano-acetato de etilo para dar N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valil-L-leucinol (1,9 g, rendimiento de 94%) como cristales blancos.

Etapa 4

Se disolvió N-((4-fluorfenil)sulfonil)-L-valil-L-leucinol (1,8 g, 4,8 mmol) en dimetilsulfóxido (20 mL) y diclorometano (10 mL), y se añadió a esta solución diisopropiletilamina (2,5 g, 19 mmol). A la solución mezclada se añadió una solución de complejo de trióxido de azufre-piridina (3,1 g, 19 mmol) en dimetilsulfóxido (15 mL) al tiempo que se agitó a temperatura ambiente. La mezcla se agitó adicionalmente durante 40 minutos, y tras la terminación de la reacción, se añadió acetato de etilo a la misma. La mezcla de reacción se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico diluido, bicarbonato sódico acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se concentró al vacío para retirar el disolvente. El residuo se recristalizó con acetato de etilo para dar Compuesto de Referencia 1 (1,1 g, rendimiento de 60%) como cristales blancos. P.f. 157ºC. RMN-^{1}H (270MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 0,74 (d, 3H, J=5,9 Hz), 0,80 (d, 6H, J=6,4 Hz), 0,85 (d, 3H, J=6,8 Hz), 1,14-1,46 (m, 3H) 1,81-1,93 (m, 1H), 3,56-3,62 (dd, 1H, J=6,6, 9,5 Hz), 3,80-3,88 (m, 1H), 7,33-7,42 (m, 2H), 7,79-7,86 (m, 2H), 7,96 (d, 1H, J=9,8 Hz), 8,27 (d, 1H, J=7,3 Hz), 9,14 (s, 1H). Análisis calculado para C_{17}H_{25}FN_{2}O_{4}S: C, 54,82; H, 6,77; N, 7,52. Encontrado: C, 54,82; H, 6,76; N, 7,57. [\alpha]^{25} + 8,99º (c = 0,20, DMSO).

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Ejemplo de Referencia 2

(3S)-N-butil-3-((2S)-2-(((4-fluorfenil)sulfonil)amino)-3-metilbutanoilamino)-2-hidroxi-5-metilhexanamida

(Compuesto de Referencia 2)

A una solución de Compuesto de Referencia 1 (4,0 g, 11 mmol), isocianuro de n-butilo (1,0 g, 12 mmol) y piridina (3,4 g, 43 mmol) en diclorometano (100 mL) se añadió gota a gota ácido trifluoracético (2,4 g, 21 mmol) bajo enfriamiento con hielo. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, y a continuación se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y la solución resultante se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico 1M, bicarbonato sódico acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante un sistema de HPLC (columna: YMC Pack ODS-A 250 x 20 mm I.D.; fase móvil: acetonitrilo/agua/ácido trifluoracético = 40:60:0,1) para dar el Compuesto de Referencia 2 (1,0 g, rendimiento de 20%) como cristales incoloros. P.f. 192,3-194,2ºC. RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 0,69 (d, 3H, J=6,9 Hz), 0,70 (d, 3H, J=5,4 Hz), 0,75 (d, 3H, J=6,0 Hz), 0,79 (d, 3H, J=6,6 Hz), 0,85 (t, 3H, J=7,4 Hz), 0,94 (m, 1H), 1,05-1,09 (m, 2H), 1,18-1,27 (m, 2H), 1,30-1,39 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 2,92-3,07 (m, 2H), 3,63 (dd, 1H, J=9,2, 5,7 Hz), 3,72 (dd, 1H, J=6,0, 2,6 Hz), 3,93 (m, 1H), 5,65 (d, 1H, J=6,0 Hz), 7,31-7,36 (m, 3H), 7,53 (t, 1H, J=5,9 Hz), 7,59 (d, 1H, J=9,2 Hz), 7,80-7,85 (m, 2H).

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Ejemplo 1 (3S)-N-butil-3-((2S)-2-(((4-fluorfenil)sulfonil)amino)-3-metilbutanoilamino)-5-metil-2-oxohexanamida (Compuesto 1)

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3

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Se añadió reactivo de Dess-Martin (peryodano de Dess-Martin) (1,3 g, 3,2 mmol) a una solución de Compuesto de Referencia 2 (1,0 g, 2,1 mmol) en diclorometano (100 mL). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y se añadieron a la misma tiosulfato sódico acuoso al 10% (50 mL) y bicarbonato sódico acuoso al 10% (50 mL). Después de agitar durante 10 minutos, se separó la capa orgánica, se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico 1M, bicarbonato sódico acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se cristalizó con mezcla de hexano-acetato de etilo para dar el Compuesto 1 (0,80 g, rendimiento de 80%) como cristales incoloros.

P.f. 107,6-109,9ºC. RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 0,73 (d, 3H, J=5,7 Hz), 0,79-0,88 (m, 12H), 1,15-1,45 (m, 7H), 1,82 (m, 1H), 3,04-3,11 (m, 2H), 3,59 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 7,33-7,39 (m, 2H), 7,78-7,83 (m, 2H), 7,88 (d, 1H, J=9,3 Hz), 8,15 (d, 1H, J=6,3 Hz), 8,65 (t, 1H, J=5,9). Análisis calculado para C_{22}H_{34}N_{3}O_{5}SF: C, 56,03; H, 7,27; N, 8,91. Encontrado: C, 55,99; H, 7,00; N, 8,91.

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Ejemplo de Prueba 1

(1) Medición de actividad inhibidora frente a \mu-calpaína y m-calpaína

Se analizó la actividad inhibidora frente a \mu-calpaína y m-calpaína según el método descrito en Anal. Biochem. 1993, vol. 208, p. 387-392. Esto es, a 2,5 \muL de una solución de dimetilsulfóxido (DMSO) que contenía una concentración variable del compuesto de prueba en una placa de 96 pocillos se añadieron 200 a \muL de una solución de reacción que contenía 0,5 mg/mL de caseína, tampón de Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), ditiotreitol 20 mM y 1,0 mmol de \mu-calpaína (derivada de glóbulos rojos de sangre humana; disponibles de Cosmo Bio Co. Ltd.) o m-calpaína (derivada de riñón porcino; disponible de Cosmo Bio Co. Ltd.). Después de que se añadiera a la misma cloruro cálcico acuoso 20 mM (50 \muL), se incubó la mezcla a 30ºC durante 60 minutos. A continuación, se transfirieron 100 \muL de la solución de reacción a otra placa de 96 pocillos, y se añadieron a la misma agua purificada (50 \muL) y solución acuosa al 50% (100 \muL) de reactivo de color de análisis de proteínas (disponibles de Bio-Rad Laboratories, Inc.; Nº de catálogo 500-600). La mezcla de reacción se dejó reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos, y se midió su absorbancia a 595 nm.

Se usó como valor de control la absorbancia de una mezcla de reacción preparada de la misma manera que se ha mencionando anteriormente, excepto que la solución de DMSO no contenía compuesto de prueba, y se usó como valor en blanco la de una mezcla de reacción preparada de la misma manera que se ha mencionando anteriormente, excepto que se usó solución de EDTA acuoso 1 mM (50 \muL) en lugar de cloruro cálcico acuoso 20 mM, y como corresponde se determinó la concentración requerida para inhibición del 50% (IC_{50}).

Índice de inhibición (%) = {1-(valor medido menos valor en blanco)/(valor de control menos valor en blanco)} x 100

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Resultados del ejemplo de prueba 1

En la Tabla 1 se muestran las actividades inhibidoras de calpaína.

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TABLA 1 Actividades inhibidoras del compuesto de la invención frente a \mu-calpaína y m-calpaína

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Como resultado de la prueba anterior, se comprobó que el compuesto de la presente invención tiene excelente actividad inhibidora frente a calpaína.

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Ejemplo de Prueba 2

Prueba de permeabilidad con células Caco-2

Se sembraron 0,5 x 10^{6}/cm^{2} de células de Caco-2 (Catálogo de ATCC Nº HTB-37, Manassas, VA, EE.UU.) en Transwell (filtro de policarbonato: diámetro de poro 0,4 \mum; área de cultivo 0,33 cm^{2}; disponible de Costar Co.), y se incubaron en medio esencial mínimo de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM; disponible de Fisher Scientific International Inc.) durante 21 a 30 días bajo las condiciones de 37ºC, 5% de CO_{2} y humedad relativa de 95%, de modo que se preparó una monocapa celular. Se evaluó la confluencia de dicha monocapa celular midiendo la resistencia electrónica transepitelial (TEER). Se añadió al Compuesto 1 una solución equilibrada de sal de Hank (denominada HBSS: disponible de Fisher Scientific International Inc.) en el lado de la membrana apical a una concentración de 10 \muM, y se añadió HBSS al lado de la membrana basolateral. Se cuantificó la concentración del Compuesto 1 en el lado de la membrana basolateral después de 30 y 60 minutos, y la concentración de Compuesto 1 en el lado de la membrana apical después de 60 minutos mediante cromatografía líquida de alto rendimiento. Sobre la base de los resultados de la cuantificación, se calculó el coeficiente de permeación aparente (P_{app}) según la fórmula:

P_{app} = (\delta Q/ \delta t) \ x \ (1/60AC_{0}).

P_{app}: coeficiente de permeación aparente (cm/seg)

\deltaQ/\deltat: velocidad de permeación (pmol/min)

A: área de la monocapa celular = 0,33 cm^{2}

C_{0}: concentración inicial en el lado de la membrana apical (pmol/mL)

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Resultados del Ejemplo de Prueba 2

El coeficiente de permeación aparente (P_{app}) del Compuesto 1 fue 1,7 x 10^{-5} (cm/seg).

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Ejemplo de Formulación 1

Comprimido

Compuesto 1: 5 g

Almidón: 12 g

Lactosa: 27,2 g

Estearato magnésico: 0,4 g

Se mezclaron a fondo Compuesto 1, lactosa y almidón, y se formularon en gránulos para formar comprimidos según el método húmedo de formar comprimidos con gránulos. Tras adición de estearato magnésico, se comprimieron los gránulos para elaborar 400 comprimidos. Si se requería, los comprimidos se revestían con agente de revestimiento entérico (copolímero de ácido metacrílico).

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Ejemplo de Formulación 2

Colirio

Compuesto 1: 100 mg

Ácido bórico: 700 mg

Bórax: c.s.

Cloruro sódico: 500 mg

Sal sódica de EDTA: 0,05 mg

Cloruro de benzalconio: 0,0005 mg

Agua purificada estéril para tener un volumen total de 100 mL

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Se mezclaron los componentes anteriores bajo condiciones estériles según el método convencional para preparar colirios.

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Ejemplo de Formulación 3

Inyección

Compuesto 1: 100 mg

Cloruro sódico: 900 mg

Hidróxido sódico 1N: c.s.

Agua destilada para inyección para tener un volumen total de 100 mL

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Se mezclaron los componentes anteriores bajo condiciones estériles según el método convencional para preparar una preparación para inyección.

Aplicabilidad industrial

Dado que los compuestos de la fórmula (I) de la presente invención tienen excelente actividad inhibidora de calpaína, son útiles como agente profiláctico y terapéutico para diversas enfermedades relacionadas con calpaína tales como enfermedad isquémica, enfermedad inmunológica, enfermedad de Alzheimer, osteoporosis, enfermedades causadas por lesión de tejido cerebral, catarata, glaucoma, enfermedad retiniana, enfermedad retinocoroidea, complicaciones en el globo ocular posterior debidas a fotocoagulación o una enfermedad que implica neovascularización.

Claims

1. Un compuesto representado por la fórmula (I)

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en la que R^{1}, R^{2} y R^{3} representa cada uno un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 6 átomos de carbono.

2. El compuesto según se describe en la reivindicación 1, en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} representa cada uno un grupo alquilo que tiene 3 ó 4 átomos de carbono.

3. El compuesto de la reivindicación 1 que es (3S)-N-butil-3-((2S)-2-(((4-fluorofenil)sulfonil)amino)-3-metilbutanoilamino)-5-metil-2-oxohexanamida.

4. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. La composición farmacéutica según se describe en la reivindicación 4, que es inhibidora de calpaína.

6. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una composición farmacéutica de la reivindicación 4 para el tratamiento y profilaxis de enfermedad isquémica, enfermedad inmunológica, enfermedad de Alzheimer, osteoporosis, enfermedades causadas por lesión de tejido cerebral, catarata, glaucoma, enfermedad retinocoroidea, complicaciones en el globo ocular posterior debidas a fotocoagulación y enfermedad de neovascularización.