ES2332655T3

ES2332655T3 - Metodo de preparacion de intermedios tripeptidicos para la preparacion de antagonistas de lhrh.

Info

Publication number: ES2332655T3
Application number: ES05004940T
Authority: ES
Inventors: Masakazu Nakazawa
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 2004-03-09
Filing date: 2005-03-07
Publication date: 2010-02-10
Anticipated expiration: 2025-03-07
Also published as: EP1584625B1; US20050203028A1; JP4407322B2; US7569548B2; US7915224B2; JP2005255556A; US20090234098A1; EP1584625A1; DK1584625T3; ATE444304T1; DE602005016857D1

Abstract

Un método de preparación de un tripéptido representado por la fórmula [I]: Ac - D - 2Nal - D - 4ClPhe - D - 3Pal - OH [I] O una sal del mismo, que comprende al menos una de (1) a (4): (1) condensar un compuesto representado por la fórmula [II]: Ac - D - 2Nal - OH [II] una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo, con un compuesto representado por la fórmula [III]: H - D - 4ClPhe - OR 1 [III] en la que R 1 representa metilo, etilo o bencilo, o una sal del mismo, para producir un compuesto representado por la fórmula [IV]: en la que R 1 es según se definió anteriormente; Ac - D - 2Nal - D - 4ClPhe - OR 1 [IV] (2) hidrolizar el compuesto representado por la fórmula [IV] para producir un compuesto representado por la fórmula [V]: o una sal del mismo; Ac - D - 2Nal - D - 4ClPhe - OH [V] (3) condensar el compuesto representado por la fórmula [V], una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo, con un compuesto representado por la fórmula [VI]: H - D - 3Pal - OR 2 [VI] en la que R 2 representa metilo, etilo o bencilo, o una sal del mismo, para producir un compuesto representado por la fórmula [VII]: Ac - D - 2Nal - D - 4ClPhe - D - 3Pal - OR 2 [VII] en la que R 2 es según se definió anteriormente, o una sal del mismo; y (4) hidrolizar el compuesto representado por la fórmula [VII] o una sal del mismo para producir el tripéptido representado por la fórmula [I] o una sal del mismo.

Description

Método de preparación de intermedios tripeptídicos para la preparación de antagonistas de LHRH.

Campo de la invención

En la presente invención se describe un método para la preparación de un péptido. En particular, se describe un método para la fabricación de un compuesto intermedio para la preparación de antagonistas de la hormona liberadora de la hormona luteinizante (en lo sucesivo denominada también "LHRH".

Antecedentes de la invención

Hasta ahora, se han identificado varios antagonistas de la LHRH, los cuales incluyen:

Centrolelix:

: Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH_{2};

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Antarelix:

: Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr-Hci-Leu-Lys(iPr)- Pro-D-Ala-NH_{2};

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Abarelix:

: Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr(NCH_{3})-D-Asn-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH_{2};

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Ganirelix:

: Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Lys(C(NHEt)_{2})-Leu-Lys(C(NHEt)_{2})-Pro-D-Ala-NH_{2}.

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Un compuesto intermedio importante para los antagonistas de la LHRH antes mencionados es un tripéptido representado por la fórmula [I]:

[I]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH

Un ejemplo de un tripéptido tal es la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanil-D-3-piridilalanina.

En la fórmula [I], y en la presente memoria descriptiva,

"Ac" representa acetilo,

"2Nal" representa un grupo divalente representado por la fórmula:

1

"4ClPhe" representa un grupo divalente representado por la fórmula:

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2

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"3Pal" representa un grupo divalente representado por la fórmula:

3

"D" es un prefijo para la configuración D, y

"L" es un prefijo para la configuración L.

En el método de preparación del tripéptido antes descrito representado por la fórmula [I], Boc-D-4ClPhe-OH [en la presente memoria descriptiva, "Boc" representa un grupo terc-butoxicarbonilo], por ejemplo, se activa mediante una reacción con N-hidroxisuccinimida, y a continuación se condensa con H-D-3Pal-OH 2 HCl para producir un dipéptido Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH. Posteriormente, mediante la desprotección de Boc, se prepara H-D-4ClPhe-D-3Pal-OH y a continuación se condensa con Boc-D-2Nal-OH, el cual era activado previamente de manera separada (por ejemplo mediante una reacción con N-hidroxisuccinimida, para producir Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH. La desprotección de Boc se efectúa de nuevo y el terminal N se acetila para producir el tripéptido deseado (véase el Documento WO 03/055902).

Sin embargo, debido a que este método emplea Boc-D-4ClPhe-OH y Boc-D-2Nal-OH, el grupo Boc se debe desproteger y/o ser convertido en un grupo acetilo, lo que da lugar a un número incrementado de etapas y a otros problemas. Adicionalmente, el péptido Boc-desprotegido N sin proteger es altamente higroscópico y por consiguiente difícil de manejar. Por lo tanto, la pureza del tripéptido que se obtiene es tan baja como del 93,9% (% de la superficie de la HPLC).

En un método de síntesis alternativo, se condensan Boc-D-4ClPhe-OH y H-D-3Pal-OMe 2 HCl para preparar un dipéptido Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OMe, el cual está desprotegido en Boc y a continuación se condensa con Boc-D-2Nal-OH para producir el tripéptido Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OMe (rendimiento del 85,4%) (véase el Documento WO 97/034924). Sin embargo, para obtener el tripéptido representado por la fórmula [I], el grupo Boc se debe convertir en un grupo acetilo según se describió anteriormente, y el procedimiento inevitablemente implica un péptido sin protección en N altamente higroscópico.

Se dispone todavía de otro método en el que la condensación de Boc-D-2Nal-OH y H-D-4ClPhe-OMe HCl viene seguida de la desprotección del grupo Boc y a continuación de la acetilación para proporcionar un dipéptido Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OMe (rendimiento del 85,7%), el cual dipéptido se usa (véase el Documento WO 99/026964). De nuevo, este método requiere la conversión del grupo de protección (Boc \rightarrow Ac), lo que da lugar a un número incrementado de etapas. Aunque es posible hidrolizar este dipéptido para producir Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OH (rendimiento del 88,0%), el cual se puede usar para sintetizar el tripéptido representado por la fórmula [I], el resto D-4ClPhe se racemiza, lo que da lugar a la contaminación de 2,6% de Ac-D-2Nal-L-4ClPhe-OH y a una pureza tan baja como un 93,7% (% de la superficie de la HPLC)(véase la Patente de EE.UU. Nº 6.492.490).

Se ha informado generalmente que la racemización procede a menudo cuando se usa un aminoácido acetilado como un material de partida (véase Int. J. Peptide Protein Res. 28, 1986, 444-449; Helvetica Chimica Acta, 74, 1991, 617-627). A medida que procede la racemización, se requerirá una compleja etapa de extracción y/o una etapa de purificación en columna para separar el diastereoisómero, lo que da lugar a un número incrementado de tapas.

De acuerdo con esto, existe una demanda crítica de un método para la preparación de compuestos intermedios para los antagonistas de la LHRH (es decir, el compuesto tri-péptido representado por la fórmula [I] en el que el procedimiento comprenda menos etapas, así como también de un método que permita la preparación del compuesto intermedio deseado con un elevado rendimiento y una pureza elevada.

Sumario de la invención

Se describe un método de preparación del compuesto intermedio para la síntesis de antagonistas de la LHRH con menos etapas que los métodos convencionales, y con un elevado rendimiento y una pureza elevada.

Por lo tanto, para resolver los problemas que existen en la técnica (véase anteriormente), el presente inventor efectuó unas amplias investigaciones. Como resultado de las mismas, las presentes inventores han descubierto que en la preparación del compuesto intermedio para los antagonistas de la LHRH, es posible obviar las complejas etapas de protección y desprotección, y obviar también las etapas de extracción, las etapas de purificación en columna, y las semejantes para separar el diastereoisómero, mediante el uso de un compuesto representado por la fórmula [II]: Ac-D-2Nal-OH, una sal del mismo, o un derivado reactivo del mismo, como un material de partida.

\newpage

De acuerdo con esto, un objeto de la presente invención es un método de preparación de un tripéptido representado por la fórmula [I]:

[I]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH

o una sal del mismo, que comprende al menos una de las etapas (1) a (4), lo que depende del material de partida:

Etapa (1) Condensar un compuesto representado por la fórmula [II]:

[II]Ac-D-2Nal-OH

una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo, con un compuesto representado por la fórmula [III]:

[III]H-D-4ClPhe-OR^{1}

en la que R^{1} representa metilo, etilo o bencilo (preferiblemente metilo), o una sal de los mismos, para producir un compuesto representado por la fórmula [IV]:

[IV]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{1}

en la que R^{1} es según se definió anteriormente;

Etapa (2) Hidrolizar el compuesto representado por la fórmula [IV] para producir un compuesto representado por la fórmula [V]:

[V]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OH

o una sal del mismo;

Etapa (3) Condensar el compuesto representado por la fórmula [V], una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo, con un compuesto representado por la fórmula [VI]:

[VI]H-D-3Pal-OR^{2}

en la que R^{2} representa metilo, etilo o bencilo (preferiblemente metilo) o una sal del mismo, para producir un compuesto representado por la fórmula [VII]:

[VII]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OR^{2}

en la que R^{2} es según se definió anteriormente, o una sal del mismo; y

Etapa (4) Hidrolizar el compuesto representado por la fórmula [VII] o una sal del mismo para producir el tripéptido representado por la fórmula [I] o una sal del mismo.

En una realización de la presente invención como representada por el objeto anterior, el derivado reactivo del compuesto representado por la fórmula [II] es un compuesto representado por la fórmula [IIa]:

[IIa]Ac-D-2Nal-OR^{a}

\newpage

en la que R^{a} representa un grupo seleccionado del grupo que consiste en

4

Dentro de una realización del objeto de la presente invención anterior, la sal del compuesto representado por la fórmula [III] es preferiblemente H-D-4ClPhe-OMe HCl.

Dentro de otra realización del objeto de la presente invención anterior, la sal del compuesto representado por la fórmula [VI] es H-D-3Pal-OMe 2 HCl.

En todavía otra realización del objeto de la presente invención anterior, el derivado reactivo del compuesto representado por la fórmula [V] es un compuesto representado por la fórmula [Va]:

[Va]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{a}

en la que R^{a} representa un grupo seleccionado del grupo que consiste en

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Dentro de una realización del objeto de la presente invención anterior, se usa una base en la reacción de hidrólisis de la etapa (2) y/o de la etapa (4). En una realización preferida la base es hidróxido de sodio.

También dentro de una realización del objeto de la presente invención anterior, se usa tetrahidrofurano o un disolvente mixto de agua y tetrahidrofurano como un disolvente en la reacción de hidrólisis de la etapa (2) y/o de la etapa (4).

Es otro objeto de la presente invención proporcionar nuevos métodos para la preparación del antagonista(s) de la LHRH mediante el uso del tripéptido representado por la fórmula [I]:

[I]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH

o una sal del mismo producida mediante el presente método.

Los objetos anteriores resaltan ciertos aspectos de la invención. Los objetos adicionales, aspectos y realizaciones de la invención se encuentran en la descripción detallada siguiente de la invención.

Descripción detallada de la invención

A menos que se defina específicamente, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente invención tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por una persona especializada en el campo de la química, la química orgánica, la química relacionada con la medicina, y las ciencias médicas.

Una realización de la presente invención es un método de preparación de un tripéptido [I] o de una sal del mismo, el cual incluye las etapas (1) a (4):

(1) una etapa de condensación de un compuesto [II], una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo con un compuesto [III] o una sal del mismo para dar el compuesto [IV];

(2) una etapa de someter el compuesto [IV] a una reacción de hidrólisis para dar el compuesto [V] o una sal del mismo;

(3) una etapa de condensación del compuesto [V], una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo con un compuesto [VI] o una sal del mismo para dar el compuesto [VII] o una sal del mismo; y

(4) una etapa de someter el compuesto [VII] o una sal del mismo a una reacción de hidrólisis para dar el tripéptido [I] o una sal del mismo:

en el que las fórmulas [I]-[VII] están representadas por:

Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH: [I]

Ac-D-2Nal-OH: [II]

H-D-4ClPhe-OR^{1}: [III]

Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{1}: [IV]

Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OH: [V]

H-D-3Pal-OR^{2}: [VI]

Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OR^{2}: [VII]

y en la que cada símbolo es como se definió en la memoria descriptiva.

Como se estableció anteriormente, el método para la preparación de un tripéptido [I] o de una sal del mismo, "el cual incluye al menos una de las etapas (1) a (4)" quiere decir que dependiendo de los materiales de partida seleccionados se pueden omitir una o más de las etapas. Por ejemplo, si las personas especializadas estuvieran en posesión de un compuesto representado por la fórmula [V], una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo, entonces la persona especializada podría comenzar en la etapa (3) del procedimiento más bien que en la etapa (1), y así sucesivamente.

Por lo tanto, en una realización sólo se efectúa la etapa (4) (es decir se usa un compuesto de fórmula [VII] como el material de partida).

En otra realización se efectúan las etapas (3) y (4) (es decir, se usa un compuesto de fórmula [V] como el material de partida, el cual se condensa con un compuesto de fórmula [VII]).

En todavía otra realización se efectúan las etapas (2), (3) y (4) (es decir se usa un compuesto de fórmula [IV] como el material de partida).

En todavía otra realización se efectúan cada una de las etapas (1), (2), (3) y (4). Dentro de esta realización, el método de la presente invención puede sólo contener las cuatro etapas antes mencionadas (es decir, se usa un compuesto de fórmula [II] como el material de partida, el cual se condensa con un compuesto de fórmula [III]. También dentro de esta realización, el método de la presente invención puede contener etapas adicionales (por ejemplo, etapas para la síntesis de uno o más de los compuestos [II] a [VII].

El método descrito anteriormente de preparación del tripéptido representado por la fórmula [I] (en lo sucesivo denominado también "tripéptido [I]" o una sal del mismo se describe en lo sucesivo en detalle con referencia al esquema que se muestra a continuación.

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En el esquema anterior, R^{1} representa metilo, etilo o bencilo, y R^{2} representa metilo, etilo o bencilo.

Como es evidente a partir de lo precedente, el presente método proporciona un esquema sintético para la preparación de un tripéptido [I] o de una sal del mismo mediante sólo a través de cuatro etapas, es decir, las etapas (1) a (4). Adicionalmente, el presente método no requiere la extracción, concentración y purificación en columna en cada etapa, y permite la preparación de tripéptido [I] o de una sal del mismo con una pureza elevada y con un rendimiento elevado con sólo la separación de la mezcla de reacción (por ejemplo, filtración etc.) y/o el lavado en suspensión.

En la presente memoria descriptiva, la sal del tripéptido [I] no está limitada, y se pone de ejemplo mediante las sales de adición de ácido [por ejemplo, sales con ácidos inorgánicos (por ejemplo ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico etc.), sales con ácidos orgánicos (por ejemplo ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluensulfónico, etc.) y los semejantes]; sales con bases inorgánicas (por ejemplo, de metal alcalino tales como de sodio y potasio, de metales alcalino-térreos tales como de calcio y magnesio; amoniaco etc.); y sales con bases orgánicas (por ejemplo trietil-amina, piridina, picolina, N-metil-morfolina, diisopropiletil-amina, ciclohexil-amina, diciclohexil-amina etc.) y los semejantes.

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Las etapas individuales se describen en detalle en lo que sigue:

Etapa (1)

La etapa (1) es una etapa para una reacción de condensación de un compuesto representado por la fórmula [II]:

[II]Ac-D-2Nal-OH

(en lo sucesivo denominado también Compuesto [II], una sal del mismo, o un derivado reactivo del mismo, y un compuesto representado por la fórmula [III]:

[III]H-D-4ClPhe-OR^{1}

en la que R^{1} representa metilo, etilo o bencilo (en lo sucesivo denominado también Compuesto [III]) o una sal del mismo.

Aunque el Compuesto [III] se puede sintetizar mediante el uso de un método conocido por las personas especializadas en la técnica, se puede usar también un producto disponible comercialmente.

\newpage

El derivado reactivo del Compuesto [III] usado en la etapa (1) no está limitado, siempre y cuando él se obtenga a partir del Compuesto [II] de acuerdo con un método conocido por las personas especializadas en la técnica, dichos derivados reactivos incluyen, por ejemplo, un compuesto representado por la fórmula [IIa]:

[IIa]Ac-D-2Nal-OR^{a}

en la que R^{a} representa un grupo seleccionado del grupo que consiste en

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(en lo sucesivo denominado también Compuesto [IIa] y los semejantes.

El compuesto [IIa] se puede preparar fácilmente a partir del Compuesto [II] mediante, por ejemplo, añadir un aditivo tal como N-hidroxisuccinimida (HOSu), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) anhídrido o monohidrato, preferiblemente monohidrato, N-hidroxiftalimida (HOPht), 1-hidroxi-7-aza-benzotriazol (HOAt), endo-N-hidroxi-5-norborneno-2,3-dicarboxiimida (HONB) ó 3-hidroxi-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona (HOOBt), y un agente de asociación puesto de ejemplo más adelante, al sistema de reacción.

Las estructuras químicas de dichos aditivos se muestran a continuación.

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La adición de un aditivo al sistema de reacción para facilitar la preparación del Compuesto [IIa] ofrece ventajas tales como una reactividad incrementada del Compuesto [II] y la supresión de la racemización. En particular, y desde la perspectiva de la supresión de la racemización, su fácil separación y los costes, se prefiere el HOBt mono-hidrato.

La cantidad del aditivo a añadir es de 0,5 a 2,0 mol, y preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, y más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, por mol de Compuesto [II].

Los reactivos de asociación incluyen, pero no se limitan a 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC), N,N'-diisopropil-carbodiimida (DIPCI) e hidrocloruro de 1-(3-dimetilamino)-3-etilcarbodiimida (EDCI HCl) y los semejantes. Sin embargo, se da preferencia al EDCI HCl debido a que el subproducto de derivado de urea se puede separar fácilmente después de la reacción.

La cantidad del agente de asociación a usar es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, y más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, por mol de Compuesto [II] o de una sal del mismo.

El Compuesto [IIa] se puede preparar por separado de antemano.

Las sales del Compuesto [IIa] incluyen, por ejemplo, las sales con bases inorgánicas y las sales con bases orgánicas para poner de ejemplos las sales de tripéptido [I] mencionadas anteriormente y las semejantes.

Aunque el Compuesto [III] usado en la etapa (1) se puede sintetizar usando un método conocido por las personas especializadas en la técnica, se puede usar un producto disponible comercialmente.

Desde la perspectiva de la facilidad de preparación y de los costes, el Compuesto [III] es preferiblemente H-D-4ClPhe-OMe (R^{1} = metilo).

Las sales del compuesto [III] incluyen, por ejemplo, las sales de adición de ácido para poner de ejemplo las sales de tripéptido [I] mencionadas anteriormente y las semejantes, dándose preferencia a los hidrocloruros (y más preferiblemente a los mono-hidrocloruros).

Una sal particularmente preferida del Compuesto [III] es H-D-4ClPhe-OMe HCl.

La cantidad de Compuesto [III] o de una sal del mismo a usar es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, y más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol por mol de Compuesto [II], una sal del mismo, o un derivado reactivo del mismo.

Se puede emplear cualquier disolvente de reacción, siempre y cuando él no afecte de manera adversa a la reacción. Los ejemplos de disolventes adecuados incluyen, por ejemplo, acetonitrilo, tetrahidrofurano (THF), N,N-dimetil-formamida (DMF), diclorometano (DCM), y los semejantes. Desde la perspectiva de la separación del producto del diastereoisómero, los aditivos, reactivos de asociación y los semejantes, se prefiere el acetonitrilo.

La cantidad de disolvente de reacción a emplear es de 5 a 50 veces, preferiblemente de 10 a 30 veces, y más preferiblemente de 20 a 25 veces, sobre la base del peso del Compuesto [II].

Cuando el Compuesto [III] es una sal, una base tal como la trietilamina, piridina, N-metil-morfolina (NMM), o N,N-diisopropiletilamina (DIEA) se añade adicionalmente al sistema de reacción. En particular, desde la perspectiva de la reactividad y de los costes, se prefieren la trietilamina y la NMM.

La cantidad de la base a usar es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, y todavía más preferiblemente de 1,0 mol, por mol de sal del Compuesto [III].

El tiempo de reacción para la etapa (1) es normalmente de 3 a 48 horas, preferiblemente de 6 a 24 horas, y más preferiblemente de 8 a 12 horas.

La temperatura de reacción para la etapa (1) es normalmente de -10 a 40ºC, preferiblemente de 0 a 25ºC, y más preferiblemente de 10 a 20ºC.

Después de la terminación de la reacción, los cristales precipitados se separan (por ejemplo, mediante filtración etc.) y, si fuera necesario, se secan (por ejemplo, bajo presión reducida a 40ºC), para producir un compuesto representado por la fórmula [IV]:

[IV]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{1}

en la que R^{1} se definió anteriormente (en lo sucesivo se referirá también como al Compuesto [IV]).

Después de la separación, el Compuesto [IV] se puede lavar con, por ejemplo, un disolvente tal como acetonitrilo, tetrahidrofurano, metanol, etanol, alcohol isopropílico, acetona, o agua, o un disolvente mixto de agua y al menos uno de esos disolventes (la relación de mezcla no está limitada) y los semejantes.

La cantidad del disolvente a usar para el lavado (cantidad total) es de 0,5 a 5 veces, preferiblemente de 1 a 3 veces, y más preferiblemente de 2 a 2,5 veces, sobre la base del peso del Compuesto [II].

En la etapa (1) debido a que el Compuesto [II], en el que el terminal N está protegido mediante un grupo acetilo, o una sal del mismo se usa como un material de partida, la protección y desprotección del terminal N y la conversión del grupo de protección en un grupo acetilo como se requiere en la técnica convencional no es necesaria. Por lo tanto, la presente invención puede evitar el uso del péptido sin proteger en N altamente higroscópico asociado con la protección y desprotección del terminal N y la conversión del grupo de protección. Adicionalmente, la racemización procede en la etapa (1), lo que da lugar a la producción del diastereoisómero: Ac-L-2Nal-D-4ClPhe-OR^{1} durante el procedimiento. Sin embargo, este diastereoisómero aparece en hasta 2 a 4% de la superficie respecto al compuesto [IV] y se elimina completamente en las aguas madres mediante separación (por ejemplo, filtración etc.), de tal manera que el Compuesto [IV] se obtiene con una elevada pureza y un elevado rendimiento (pureza no inferior a la de 99,0% de la superficie, rendimiento de 90,0 a 93,0%).

Por lo tanto, en la etapa (1), se pueden obviar la extracción, concentración, y purificación en columna para separar los diastereoisómeros requeridas convencionalmente, de tal manera que se puede reducir el número total de las etapas.

La unidad "porcentaje de la superficie" es el porcentaje de una relación de la superficie del pico en la HPLC (cromatografía líquida de alta resolución).

En la etapa (1), el sistema de HPLC se operó bajo las condiciones que se muestran a continuación. Columna: Inertsil ODS-2 (4,6 x 150 mm), eluyente: una mezcla de KH_{2}PO_{4} 0,05 M (pH 3) y CH_{3}CN (60:40), longitud de onda: 210 nm, caudal: 1,0 ml/min, temperatura: temperatura ambiente (aproximadamente 15 a 25ºC).

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Etapa (2)

La etapa (2) es una etapa en la cual el Compuesto [IV] se hidroliza para producir un compuesto representado por la fórmula [V]:

[V]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OH

(en lo sucesivo denominado también Compuesto [V]) o una sal del mismo.

Las sales de Compuesto [V] incluyen, por ejemplo, las sales con bases inorgánicas y las sales con bases orgánicas para poner de ejemplo las sales de tripéptido [I] mencionadas anteriormente y las semejantes.

Se puede usar en la etapa (2) cualquier disolvente, siempre y cuando él no afecte de manera adversa a la reacción, y dichos disolventes incluyen, por ejemplo, disolventes orgánicos tales como metanol, tetrahidrofurano, acetona, y N,N-dimetilformamida, y disoluciones mixtas de agua y al menos uno de estos disolventes orgánicos, y los semejantes. Desde el punto de vista de la velocidad de reacción y de la supresión de la racemización, se prefiere el tetra-hidrofurano.

Cuando se usa un disolvente mixto de agua y al menos uno de los disolventes orgánicos antes mencionados, su relación de mezcla (disolvente orgánico:agua) no está limitada, pero es normalmente de 99:1 a 1:99 (v/v), preferiblemente de 20:80 a 70:30 (v/v), y más preferiblemente de 40:60 a 50:50 (v/v).

La cantidad del disolvente a emplear (cantidad total) es de 5 a 30 veces, preferiblemente de 10 a 20 veces, y más preferiblemente de 10 a 15 veces, sobre la base del peso del Compuesto [IV].

La reacción de hidrólisis en la etapa (2) se efectúa preferiblemente en la presencia de una base. La presencia de una base es ventajosa debido a que una reacción de desacetilación puede tener lugar bajo condiciones ácidas.

Las bases para su uso en el presente método incluyen, por ejemplo, hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, e hidróxido de litio y los semejantes. En particular, desde el punto de vista de los costes, se prefiere el hidróxido de sodio.

La cantidad de la base a usar es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, y todavía más preferiblemente de 1,05 mol, por mol de sal del Compuesto [IV].

Se puede usar una disolución acuosa de la base. En la preparación de una disolución acuosa de la base, la cantidad de agua a usar es de 0,2 a 5 L, preferiblemente de 0,4 q 2 L, y más preferiblemente de 0,5 a 1 L por mol de la base.

El tiempo de reacción para la etapa (2) es normalmente de 2 a 24 horas, preferiblemente de 4 a 18 horas, y más preferiblemente de 6 a 12 horas.

La temperatura de reacción para la etapa (2) es normalmente de -20 a 50ºC, preferiblemente de -20 a 20ºC y más preferiblemente de 0 a 5ºC.

Después de la terminación de la reacción de hidrólisis, se añade un volumen de agua 1 a 3 veces, preferiblemente 1,5 veces con respecto al volumen del disolvente orgánico usado en la reacción, y la mezcla se ajusta generalmente a pH 4,0 a 1,0, preferiblemente 2,5 a 1,5, y más preferiblemente 2, mediante la adición de un ácido, para cristalizar el Compuesto [V].

Los ácidos para su uso en la adición de ácido antes mencionada incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, y ácido sulfúrico y los semejantes. La concentración y la cantidad del ácido a usar no están limitadas, siempre y cuando se pueda cumplir el intervalo de pH anteriormente descrito.

Mediante separación (por ejemplo filtración etc.) y, si fuera necesario, secado (por ejemplo, bajo presión reducida a 40ºC) de los cristales precipitados, el Compuesto [V] se puede obtener con una elevada pureza y con un elevado rendimiento (pureza no inferior al 98,0% de la superficie, y rendimiento del 93 a 98%). El Compuesto [V] obtenido se puede convertir en las sales con bases inorgánicas o bases orgánicas para poner de ejemplo las sales de tri-péptido [I] mencionadas anteriormente de acuerdo con un método conocido y las semejantes.

Después de la separación antes descrita (pero antes del secado), el Compuesto [V] se puede lavar con, por ejemplo, un disolvente tal como tetrahidrofurano, metanol, etanol, alcohol isopropílico, acetona, o agua, o con un disolvente mixto de agua y al menos uno de estos disolventes (relación de mezcla no limitada).

La cantidad de disolvente a usar para el lavado (cantidad total) es de 0,5 a 5 veces, preferiblemente de 1 a 3 veces, y más preferiblemente de 2 a 2,5 veces, sobre la base del peso del Compuesto [IV].

En la etapa (2), procede la racemización, lo que da lugar a la producción del diastereoisómero: Ac-D-2Nal-L-4ClPhe-OH. Sin embargo, este diastereoisómero se presenta en hasta 0,5 a 1,0% de la superficie con respecto al Compuesto [V], de tal manera que después de la separación y del lavado, el Compuesto [V] se obtiene con una elevada pureza y un elevado rendimiento (pureza no inferior al 99,0% de la superficie, y rendimiento del 93,0 al 98,0%).

Por lo tanto, en la etapa (2) también, la extracción, concentración y purificación en columna para la separación del diastereoisómero no son necesarias, de tal manera que se puede reducir el número total de las etapas.

En la etapa (2), el sistema de HPLC se operó bajo las condicione que se muestran a continuación. Columna: Inertsil ODS-2 (4,6 x 150 mm), eluyente: una mezcla de KH_{2}PO_{4} 0,05 M (pH 3) y CH_{3}CN (60:40), longitud de onda: 210 nm, caudal: 1,0 ml/min, temperatura: temperatura ambiente (aproximadamente 15 a 25ºC).

Etapa (3)

La etapa (3) es una etapa para la condensación del Compuesto [V], una sal del mismo, o un derivado reactivo del mismo, y un compuesto representado por la fórmula [VI]:

[VI]H-D-3Pal-OR^{2}

en la que R^{2} representa metilo, etilo o bencilo (en lo sucesivo se denomina también Compuesto [VI]) o una sal del mismo.

El derivado reactivo del Compuesto [V] para su uso en la etapa (3) no está limitado, siempre y cuando él pueda ser modificado a partir del Compuesto [V] de acuerdo con un método conocido por las personas especializadas en la técnica, y se pone de ejemplo mediante un compuesto representado por la fórmula [Va]:

[Va]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{a}

en la que R^{a} es según se definió anteriormente, y puede ser independientemente idéntico a R^{a} en el Compuesto [IIa] antes mencionado, o no (en lo sucesivo denominado también Compuesto [Va] y los semejantes.

El Compuesto [Va] se puede preparar fácilmente a partir del Compuesto [V], mediante, por ejemplo, añadir un aditivo tal como HOSu, HOBt anhídrido o monohidrato, preferiblemente monohidrato, HOPht, HOAt, HONB, ó HOOBt, y un agente de asociación puesto de ejemplo más adelante, al sistema de reacción.

La adición del aditivo mencionado anteriormente al sistema de reacción ofrece ventajas tales como una reactividad incrementada del Compuesto [V] y la supresión de la racemización. En particular, desde el punto de vista de la supresión de la racemización, facilidad de separación y costes y los semejantes, se prefiere el uso de HOBt mono-hidrato.

La cantidad de aditivo a usar es de 0,5 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, y más preferiblemente de 1,0 a 1,2 mol, por mol de Compuesto [V].

Los reactivos de asociación incluyen, por ejemplo, DCC, DIPCI, y EDCI HCl y los semejantes, dándose preferencia al EDCI HCl debido a la facilidad de separación del derivado de urea como subproducto después de la reacción.

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La cantidad del reactivo de asociación a usar es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, y más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, por mol de Compuesto [V] o una sal del mismo.

El Compuesto [Va] se puede preparar de manera separada de antemano.

Las sales de Compuesto [V] incluyen, por ejemplo, las sales con bases inorgánicas y las sales con bases orgánicas para poner ejemplos de las sales de tripéptido [I] mencionadas anteriormente, y las semejantes.

Aunque el Compuesto [VI], usado en la etapa (3), se puede sintetizar usando un método conocido por las personas especializadas en la técnica, se puede usar un producto disponible comercialmente.

Desde la perspectiva de su facilidad de preparación y de los costes, el Compuesto [VI] es preferiblemente H-D-3Pal-OMe (R^{2} = metilo).

Las sales de Compuesto [VI] incluyen, por ejemplo, las sales de adición de ácido para poner ejemplos de las sales de tripéptido [I] mencionadas anteriormente, y las semejantes dándose preferencia a los hidrocloruros (y más preferiblemente al dihidrocloruro).

Una sal particularmente preferida de Compuesto [VI] es H-D-3Pal-OMe 2HCl.

La cantidad de Compuesto [VI] o de una sal del mismo a usar es de 1,0 a 1,5 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,2 mol, y más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, por mol de Compuesto [V], una sal del mismo, o un derivado reactivo del mismo.

Se puede usar cualquier disolvente de reacción, siempre y cuando él no afecte de manera adversa a la reacción; dichos disolventes incluyen, por ejemplo, acetonitrilo, tetrahidrofurano (THF), N,N-dimetilformamida (DMF), diclorometano (DCM) y los semejantes. Desde el punto de vista de la facilidad de aislamiento del producto, los costes, y la pureza óptica, se prefieren el acetonitrilo y la DMF, y el acetonitrilo es particularmente preferido.

La cantidad de disolvente de reacción a usar es de 5 a 50 veces, preferiblemente de 10 a 40 veces, y más preferiblemente de 25 a 30 veces, sobre la base del peso del Compuesto [V].

Además, es preferible añadir una base tal como tri-etilamina, piridina, NMM, o DIEA al sistema de reacción, en particular, desde el punto de vista de la reactividad y de los costes, se prefiere la trietilamina.

La cantidad de la base a usar es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, más preferiblemente de 1,0 a 1,05 mol, y todavía más preferiblemente de 1,0 mol, por mol de Compuesto [VI].

Cuando el Compuesto [VI] es una sal, la cantidad de la base a usar es de 2,0 a 4,0 mol, preferiblemente de 2,0 a 3,0 mol, más preferiblemente de 2,0 a 2,1 mol, y todavía más preferiblemente de 2,0 mol, por mol de la sal de Compuesto [VI].

El tiempo de reacción para la etapa (3) es normalmente de 3 a 48 horas, preferiblemente de 6 a 24 horas, y más preferiblemente de 8 a 18 horas.

La temperatura de reacción para la etapa (3) es normalmente de -10 a 40ºC, preferiblemente de 0 a 25ºC, y más preferiblemente de 10 a 20ºC.

Después de la terminación de la reacción, es preferible añadir un volumen de agua igual al volumen de DMF usado al sistema de reacción cuando el disolvente es DMF.

Después de la terminación de la reacción, los cristales precipitados se separan (por ejemplo, filtración etc.) para producir un compuesto representado por la fórmula [VII]:

[VII]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OR^{2}

en la que R^{2} es según se definió anteriormente (en lo sucesivo denominado también Compuesto [VII] o una sal del mismo. Las sales del Compuesto [VII] incluyen, por ejemplo, las sales de adición de ácido para poner de ejemplo las sales de tripéptido [I] mencionadas anteriormente, y las semejantes.

Después de la separación, el Compuesto [VII] o una sal del mismo se puede lavar con, por ejemplo, un disolvente tal como acetonitrilo, tetrahidrofurano, metanol, etanol, alcohol isopropílico, acetona, o agua, o un disolvente mixto de agua y al menos uno de estos disolventes (la relación de mezcla no está limitada), y los semejantes.

La cantidad de disolvente a usar para el lavado (cantidad total) es de 1 a 15 veces, preferiblemente de 2 a 10 veces, y más preferiblemente de 4 a 5 veces, sobre la base del peso del Compuesto [V] o de una sal del mismo.

El Compuesto [VII] obtenido en la etapa descrita anteriormente contiene algunas veces el diastereoisómero: Ac-D-2Nal-L-4ClPhe-D-3Pal-OR^{2}, sin embargo, este diastereoisómero se presenta en no más de 1,0% de la superficie con respecto al Compuesto [VII] (pero no más de 0,5% de la superficie cuando el disolvente de reacción es el acetonitrilo).

En la etapa (3), el sistema de HPLC se operó bajo las condiciones que se muestran a continuación. Columna: Inertsil ODS-2 (4,6 x 150 mm), eluyente: una mezcla de KH_{2}PO_{4} 0,05 M (pH 3) y CH_{3}CN (65:35), longitud de onda: 210 nm, caudal: 1,0 ml/min, temperatura: temperatura ambiente (aproximadamente 15 a 25ºC).

Además, es posible separar el diastereoisómero indeseable a las aguas madres usando una técnica de separación tal como filtración, por medio de lo cual se obtiene el Compuesto [VII] o una sal del mismo con una elevada pureza y un elevado rendimiento. El Compuesto [VII] así obtenido o una sal del mismo se puede someter a un lavado en suspensión para conseguir su purificación de manera más conveniente y más eficazmente.

El lavado en suspensión del Compuesto [VII] o de una sal del mismo se efectúa usando un disolvente orgánico tal como metanol, tetrahidrofurano, acetona, o DMF, o una disolución mixta de agua y al menos uno de los disolventes orgánicos antes mencionados, y preferiblemente mediante el uso de un disolvente mixto de agua y tetrahidrofurano. Cuando se usa un disolvente mixto de agua y al menos uno de los disolventes orgánicos antes mencionados, su relación de mezcla (disolvente orgánico: agua) no está limitada, y es normalmente de 2:1 a 1:2 (v/v), preferiblemente de 1:1 a 1:3, y más preferiblemente de 3:4 (v/v).

La cantidad de disolvente a usar (cantidad total) es de 10 a 40 veces, preferiblemente de 15 a 30 veces, y más preferiblemente de 20 a 25 veces, sobre la base del peso del Compuesto [V] o de una sal del mismo.

El pH durante el lavado en suspensión es normalmente de 6 a 10, preferiblemente de 7,0 a 9,0, y más preferiblemente de 8,0 a 8,5.

Con el fin de ajustar el pH, se usa una base, por ejemplo, hidrogenocarbonato de sodio, carbonato de sodio, hidrógeno carbonato de potasio, o carbonato de potasio y los semejantes, la cual base se usa preferiblemente en una disolución acuosa. La concentración y la cantidad de la base a usar no están limitadas, siempre y cuando se pueda obtener el intervalo de PH descrito anteriormente.

Mediante separación (por ejemplo filtración etc.) y, si fuera necesario, secado (por ejemplo, bajo presión reducida a 40ºC) de los cristales obtenidos mediante el lavado en suspensión, el Compuesto [VII] o una sal del mismo se pueden obtener con incluso una pureza más elevada y con un rendimiento más elevado (pureza no inferior al 98,0% de la superficie, y rendimiento del 75 a 90%). Después del lavado en suspensión, el diastereoisómero: Ac-D-2Nal-L-4ClPhe-D-3Pal-OR^{2} se presenta en no más de 0,2% de la superficie (pero en no más de 0,1% de la superficie cuando el disolvente de reacción es acetonitrilo).

Además, después de la separación descrita anteriormente (pero antes del secado), el Compuesto [VII] o una sal del mismo se puede lavar adicionalmente con, por ejemplo, un disolvente tal como tetrahidrofurano, acetonitrilo, metanol, etanol, alcohol isopropílico, acetona, o agua, o un disolvente mixto de agua y al menos uno de estos disolventes (la relación de mezcla no está limitada), y los semejantes.

La cantidad del disolvente a usar para el lavado (cantidad total) es de 1 a 4 veces, preferiblemente de 1,5 a 3 veces, y más preferiblemente de 2 a 2,5 veces, sobre la base del peso del Compuesto [V] o de una sal del mismo.

La purificación del Compuesto [VII] o de una sal del mismo se consigue mediante filtración y/o lavado en suspensión. Por lo tanto, la extracción, concentración y purificación en columna para separar el diastereoisómero, que son etapas que se requieren en los métodos convencionales empleados en la técnica no son necesarias, de tal manera que se puede reducir el número total de las etapas.

Etapa (4)

La etapa (4) es una etapa en la que el Compuesto [VII] o una sal del mismo se hidrolizan para producir el tripéptido [I] o una sal del mismo.

Se puede usar cualquier disolvente en la etapa (4), siempre y cuando él no afecte de manera adversa a la reacción. Los disolventes aceptables incluyen, por ejemplo, disolventes orgánicos tales como metanol, tetrahidrofurano, acetona, y N,N-dimetilformamida, y disoluciones mixtas de agua y al menos uno de estos disolventes orgánicos, y los semejantes. Desde la perspectiva de la temperatura de reacción y de la supresión de la racemización, se prefiere un disolvente mixto de agua y tetrahidrofurano.

Cuando se usa un disolvente mixto de agua y al menos uno de los disolventes orgánicos antes mencionados, su relación de mezcla (disolvente orgánico: agua) no está limitada, y es normalmente de 2:1 a 1:4 (v/v), preferiblemente de 1:1 a 1:3, y más preferiblemente de 1:1 (v/v).

La cantidad de disolvente a usar (cantidad total) es de 10 a 50 veces, preferiblemente de 20 a 40 veces, y más preferiblemente de 30 a 35 veces, sobre la base del peso del Compuesto [VII] o de una sal del mismo.

La reacción de hidrólisis en la etapa (4) se efectúa preferiblemente en la presencia de una base. La preferencia para la presencia de una base proviene del hecho de que una reacción de desacetilación puede proceder bajo condiciones ácidas. Las bases adecuadas incluyen, por ejemplo, hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, e hidróxido de litio y los semejantes. En particular, desde el punto de vista de los costes, se prefiere el hidróxido de sodio.

La cantidad de la base a emplear es de 1,0 a 2,0 mol, preferiblemente de 1,0 a 1,5 mol, más preferiblemente de 1,0 a 1,1 mol, y todavía más preferiblemente de 1,05 mol, por mol del Compuesto [VII] o de una sal del mismo.

Se puede usar también una disolución acuosa de la base. En la preparación de la disolución acuosa de la base, la cantidad de agua a usar es de 0,2 a 5 L, preferiblemente de 0,4 a 2 L, y más preferiblemente de 0,5 a 1 L por mol de la base.

El tiempo de reacción para la etapa (4) es normalmente de 4 a 48 horas, preferiblemente de 6 a 24 horas, y más preferiblemente de 12 a 18 horas.

La temperatura de reacción para la etapa (4) es normalmente de -20 a 40ºC, preferiblemente de -10 a 20ºC, y más preferiblemente de 0 a 5ºC.

Después de la terminación de la reacción de hidrólisis, se añade un volumen de agua de 0,5 a 1 veces, preferiblemente de 0,5 veces, con respecto al volumen del disolvente orgánico usado en la reacción, y el pH de la mezcla se ajusta a un pH de normalmente 4 a 6, preferiblemente de 4,5 a 5,5, y más preferiblemente de 5, mediante la adición de un ácido, para cristalizar el tripéptido [I] o una sal del mismo.

Los ácidos a usar incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico y ácido sulfúrico y los semejantes. La concentración y la cantidad del ácido a usar no está limitada, siempre y cuando se pueda conseguir el intervalo de PH descrito anteriormente.

Mediante separación (por ejemplo, filtración etc.) y, si fuera necesario, secado (por ejemplo bajo presión reducida a 50ºC) de los cristales precipitados, es posible que se pueda obtener el tripéptido [I] o una sal del mismo con una elevada pureza y con un elevado rendimiento (pureza no inferior al 99,0% de la superficie, y rendimiento del 92 al 97%).

Además, después de la separación antes descrita (pero antes del secado), el tripéptido [I] o una sal del mismo se puede lavar con, por ejemplo, un disolvente tal como tetra-hidrofurano, acetonitrilo, metanol, etanol, isopropanol, acetona o agua, o un disolvente mixto de agua y al menos uno de estos disolventes (relación de mezcla no limitada).

La cantidad del disolvente a usar para el lavado (cantidad total) es de 1 a 10 veces, preferiblemente de 2 a 8 veces, y más preferiblemente de 4 a 5 veces, sobre la base del peso del tripéptido [VII] o de una sal del mismo.

En la etapa (4), la racemización procede y se produce el diastereoisómero: Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-L-3Pal-OH, sin embargo, este diastereoisómero aparece en no más de 1,0% de la superficie con respecto al tripéptido [I] o una sal del mismo, y es separado completamente en las aguas madres o en los lavados durante la separación (por ejemplo, filtración etc.) o el lavado, de tal manera que se obtiene el tripéptido [I] o una sal del mismo con una elevada pureza y un elevado rendimiento (pureza no inferior al 99,0% de la superficie, rendimiento del 92 a 97%).

Por lo tanto, en la etapa (4) también, la extracción, concentración y purificación en columna para la separación del diastereoisómero no son necesarias, de tal manera que se puede reducir el número total de las etapas.

En la etapa (4), el sistema de HPLC se operó bajo las condiciones que se muestran a continuación. Columna: Inertsil ODS-2 (4,6 x 150 mm), eluyente: una mezcla de KH_{2}PO_{4} 0,05 M (pH 3) y CH_{3}CN (70:30), longitud de onda: 210 nm, caudal: 1,0 ml/min, temperatura: temperatura ambiente (aproximadamente 15 a 25ºC).

Así, de acuerdo con la presente invención, el compuesto intermedio para los antagonistas de la LHRH se puede obtener con menos etapas que en los métodos convencionales, y con un elevado rendimiento y una elevada pureza.

En otra realización, la presente invención proporciona métodos para la preparación de los antagonistas de la hormona liberadora de la hormona luteinizante (en lo sucesivo denominada también "LHRH") mediante la conversión del compuesto intermedio de tripéptido representado por la fórmula [I]:

[I]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH

o una sal del mismo, producido por el presente método a dicho un antagonista de la LHRH. El compuesto intermedio de tripéptido representado por la fórmula [I] o una sal del mismo producido por el presente método se puede convertir en dicho un antagonista de la LHRH mediante los métodos descritos en, por ejemplo, los Documentos WO 03/055902, WO 97/034924, WO 99/026964, y el Documento U.S. 6.492.490.

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La descripción realizada anteriormente proporciona una manera y procedimiento de preparación y de uso de los métodos descritos de tal manera que cualquier persona especializada en esta técnica está facultada para preparar y usar los mismos, estando proporcionada en particular esta facultad por la materia objeto de las reivindicaciones adjuntas, las cuales constituyen una parte de la descripción original.

Como se usa en la presente invención, las frases "seleccionados del grupo que consiste en", "elegido a partir de" y las semejantes incluyen las mezclas de los materiales especificados.

Además en el método de la presente invención, los términos "comprenden" y "consisten en" tienen su forma y significado usual. La expresión "consiste esencialmente en" quiere significar que incluye la etapa(s) indicadas en las reivindicaciones, que se entiende comprende además los diversos aspectos de cada etapa según se definen en la "Descripción Detallada de la Invención" (véase anteriormente).

Cuando en la presente invención se establece un límite o intervalo numérico, se incluyen los puntos finales. También, todos los valores y los sub-intervalos dentro de un límite o intervalo numérico están incluidos específicamente tal como si estuvieran escritos de manera explícita.

La anterior descripción se presenta para permitir a una persona especializada en la técnica preparar y usar la invención, y se proporciona en el contexto de una aplicación en particular y de sus requerimientos.

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Ejemplos Ejemplo 1 Ester metílico de la N-acetil-D-naftilalanil-D-4-cloro-fenilalanina (Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OMe)

N-acetil-D-2-naftilalanina (25,7 g, 0,1 mol) y el hidro-cloruro del éster metílico de D-4-clorofenilalanina (25,0 g, 0,1 mol) se suspendieron en acetonitrilo (600 ml), posteriormente se añadió 1-hidroxibenzotriazol monohidrato (15,3 g, 0,1 mol) y la suspensión se enfrió a 5ºC. A continuación se añadieron N-metilmorfolina (11,0 ml, 0,1 mol) e hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (19,17 g, 0,1 mol) y la suspensión se agitó a 5ºC durante 1 hora seguido de agitación a temperatura ambiente durante la noche. Los cristales precipitados se separaron y se lavaron con acetonitrilo (100 ml). Los cristales se secaron bajo presión reducida a 40ºC para producir 42,0 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 92,3%, la pureza era del 99,53% de la superficie, y no se detectó el diastereoisómero (no detectable).

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 1,71 (s, 3H), 2,82-2,96 (m, 2H), 3,02-3,13 (m, 2H), 3,54 (s, 3H), 4,49 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 7,23 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,41-7,50 (m, 3H), 7,71 (s, 1H), 7,81 (m, 2H), 7,86 (m, 1H), 8,11 (m, 1H), 8,51 (m, 1H).

Espectro de masas m/e: 451 (MH^{-}).

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Ejemplo 2 N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina (Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OH)

El éster metílico de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina (42,0 g, 92,7 mmol) se suspendió en THF (460 ml) y la suspensión se enfrió entre 0 y 5ºC. Se añadió gota a gota una disolución acuosa 1 M de hidróxido de sodio (97,4 ml, 97,4 mmol) a una temperatura de 0 a 5ºC durante 30 minutos. A continuación la suspensión se agitó a la misma temperatura durante 6 horas hasta la terminación de la hidrólisis. A continuación la temperatura se incrementó a entre 15 y 20ºC seguido de la separación de los materiales insolubles por filtración. Después se añadió agua (690 ml), el filtrado se ajustó a pH 2 mediante la adición de ácido clorhídrico 6 M (19 ml) para facilitar la filtración. Los cristales precipitados se separaron posteriormente y se lavaron con una mezcla de THF y agua (2:3) (40 ml). Los cristales se secaron bajo presión reducida a 40ºC para producir 40,1 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 97,6%, la pureza era del 99,0% de la superficie, y la relación del diastereoisómero (DD:LL) era de 99,32:0,68.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 1,71 (s, 3H), 2,81-2,96 (m, 2H), 3,06-3,16 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,31 (m, 2H), 7,41-7,48 (m, 3H), 7,71 (s, 1H), 7,79 (m, 1H), 7,85 (m, 1H), 8,06 (m, 1H), 8,33 (m, 1H).

Espectro de masas m/e: 437 (MH^{-}).

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Ejemplo 3 Ester metílico de la N-acetil-D-naftilalanil-D-4-clorofenilalanil-D-3-piridilalanina (Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-O-Me)

N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina (4,39 g, 10 mmol) se suspendió en acetonitrilo (120 ml), se añadió 1-hidroxibenzotriazol monohidrato (1,68 g, 11 mmol), y la suspensión se enfrió a 5ºC. Posteriormente se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,0 g, 10,5 mmol) y la suspensión se agitó a 5ºC durante 1 hora, seguido de agitación a la temperatura ambiente durante la noche. La suspensión se enfrió de nuevo a 5ºC, y se añadieron dihidrocloruro del éster metílico de la D.3-piridilalanina (2,66 g, 10,5 mmol) y trietilamina (2,92 ml, 21 mmol), y la suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 4 horas. Los cristales precipitados se separaron y se lavaron con acetonitrilo (20 ml). La relación de diastereoisómero del cristal sin purificar (DDD:DLL) era de 99,6:0,4. Estos cristales sin purificar se suspendieron en agua (60 ml) y THF (45 ml) y el pH se ajustó a pH 8 mediante la adición de una disolución acuosa del 5% de hidrógeno carbonato de sodio, y se sometieron al lavado en suspensión durante la noche. Los cristales se separaron y se lavaron con una mezcla de THF y agua (3:4) (42 ml). Los cristales se secaron bajo presión reducida a 40ºC para producir 5,14 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 83,3%, la pureza era del 98,5% de la superficie, y el contenido en diastereoisómero era < 0,1% de la superficie.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 1,70 (s, 3H), 2,75-2,83 (m, 2H), 2,93-2,99 (m, 2H), 3,03-3,10 (m, 2H), 3,60 (s-3H), 4,53-4,58 (m, 3H), 7,23-7,31 (m, 5H), 7,38-7,48 (m, 3H), 7,63-7,78 (m, 5H), 8,04-8,15 (m, 2H), 8,40-8,44 (m, 2H), 8,52-8,54 (m, 1H).

Espectro de masas m/e: 601 (MH^{+}).

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Ejemplo 4 Ester de 1-benzotriazol de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina

N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina (4,39 g, 10 mmol) se suspendió en acetonitrilo (120 ml), seguido de la adición de 1-hidroxibenzotriazol monohidrato (1,68 g, 11 mmol), y la suspensión que se obtiene se enfrió a 5ºC. Posteriormente se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,0 g, 10,5 mmol) y la suspensión se agitó a 5ºC durante 1 hora, seguido de agitación a la temperatura ambiente durante la noche. Los cristales precipitados se separaron y se lavaron con acetonitrilo (20 ml). Los cristales se secaron bajo presión reducida a la temperatura ambiente para producir 5,3 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 95,3%.

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Ejemplo 5 Ester metílico de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanil-D-3-piridilalanina (Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-O-Me)

Se suspendió el dihidrocloruro del éster metílico de la D-3-piridilalanina en DMF (20 ml), y la suspensión se enfrió a 5ºC. Después se añadió N-metilmorfolina (0,46 ml, 4,2 mmol), se añadió el éster de 1-benzotriazol de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina (1,1 g, 2 mmol), y la suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 1 hora. A continuación se añadió agua (20 ml) y se separaron los cristales precipitados. La relación de dias-tereoisómero del cristal sin purificar (DDD:DLD) era de 99,4:0,6. Estos cristales sin purificar se suspendieron en agua (20 ml) y THF (15 ml), y el pH se ajustó a pH 8 mediante la adición de una disolución acuosa del 5% de hidrogeno carbonato de sodio, y se sometió al lavado en suspensión durante la noche. Los cristales se separaron y se lavaron con una mezcla de THF y agua (3:4) (14 ml). Los cristales se secaron bajo presión reducida a 40ºC para producir 1,1 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 89,3%, la pureza era del 99,3% de la superficie, y el contenido en diastereoisómero era del 0,2% de la superficie.

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Ejemplo 6 Ester metílico de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanil-D-3-piridilalanina (Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-O-Me)

Se suspendió el dihidrocloruro del éster metílico de la D-3-piridilalanina en acetonitrilo (24 ml), y la suspensión se enfrió a 5ºC. Después de la adición de trietilamina (0,59 ml, 4,2 mmol), se añadió el éster de 1-benzotriazol de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanina (1,1 g, 2 mmol), y la suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 1 hora. Se separaron los cristales precipitados. La relación de diastereoisómero del cristal sin purificar (DDD:DLD) era de 99,6:0,4. Estos cristales sin purificar se suspendieron en agua (20 ml) y THF (15 ml), y el pH se ajustó a pH 8 mediante la adición de una disolución acuosa del 5% de hidrogeno carbonato de sodio, y se sometió al lavado en suspensión durante la noche. Los cristales se separaron y se lavaron con una mezcla de THF y agua (3:4) (14 ml). Los cristales se secaron bajo presión reducida a 40ºC para producir 1,0 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 83,2%, la pureza era del 99,2% de la superficie, y el contenido en diastereoisómero no era de más del 0,1% de la superficie.

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Ejemplo 7 N-acetil-D-2-naftialanil-D-4-clñorofenilalanil-D-3-piridilalanina (Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH)

Se suspendió el éster metílico de la N-acetil-D-2-naftilalanil-D-4-clorofenilalanil-D-3-piridilalanina (2,4 g, 4 mmol) en THF (40 ml) y agua (40 ml), y la suspensión se enfrió a 0ºC. Se añadió una disolución acuosa 1 M de hidróxido de sodio (4,2 ml, 4,2 mmol), y la suspensión se agitó a la misma temperatura durante la noche. La temperatura se incrementó a 10ºC, y los materiales insolubles se separaron por filtración. Después se añadió agua (20 ml), el filtrado se ajustó a pH 5 mediante la adición de ácido clorhídrico 6 M para permitir la cristalización. Los cristales se lavaron con una mezcla de THF y agua (1:1) (10 ml) y agua (10 ml), respectivamente. Los cristales se secaron bajo presión reducida a 50ºC para producir 2,27 g del compuesto deseado. El rendimiento era del 96,5%, la pureza era del 99,8% de la superficie, y el contenido en diastereoisómero era < 0,1% de la superficie.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 1,69 (s, 3H), 2,75-2,83 (m, 2H), 2,94-3,12 (m, 4H), 4,48-4,60 (m, 3H), 7,23-7,29 (m, 5H), 7,37-7,47 (m, 3H), 7,68-7,78 (m, 5H), 8,03-8,13 (m, 2H), 8,37-8,46 (m, 3H).

Espectro de masas m/e: 586 (MH^{+}).

Como se demuestra mediante los Ejemplos precedentes, la presente invención hace posible un método de preparar compuestos intermedios para la síntesis de los antagonistas de la LHRH con menos etapas que en los métodos convencionales. Además, el método de la presente invención da lugar a elevados rendimientos y elevadas purezas.

Claims

1. Un método de preparación de un tripéptido representado por la fórmula [I]:

[I]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH

O una sal del mismo, que comprende al menos una de (1) a (4):

(1) condensar un compuesto representado por la fórmula [II]:

[II]Ac-D-2Nal-OH

[III]H-D-4ClPhe-OR^{1}

en la que R^{1} representa metilo, etilo o bencilo, o una sal del mismo, para producir un compuesto representado por la fórmula [IV]:

[IV]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{1}

en la que R^{1} es según se definió anteriormente;

(2) hidrolizar el compuesto representado por la fórmula [IV] para producir un compuesto representado por la fórmula [V]:

[V]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OH

o una sal del mismo;

(3) condensar el compuesto representado por la fórmula [V], una sal del mismo o un derivado reactivo del mismo, con un compuesto representado por la fórmula [VI]:

[VI]H-D-3Pal-OR^{2}

en la que R^{2} representa metilo, etilo o bencilo, o una sal del mismo, para producir un compuesto representado por la fórmula [VII]:

[VII]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OR^{2}

en la que R^{2} es según se definió anteriormente, o una sal del mismo; y

(4) hidrolizar el compuesto representado por la fórmula [VII] o una sal del mismo para producir el tripéptido representado por la fórmula [I] o una sal del mismo.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el derivado reactivo del compuesto representado por la fórmula [II] es un compuesto representado por la fórmula [IIa]:

[IIa]Ac-D-2Nal-OR^{a}

\newpage

en la que R^{a} representa un grupo seleccionado del grupo que consiste en

9

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R^{1} es metilo.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la sal del compuesto representado por la fórmula [III] es H-D-4ClPhe-OMe HCl.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R^{2} es metilo.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la sal del compuesto representado por la fórmula [VI] es H-D-3Pal-OMe 2HCl.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el derivado reactivo del compuesto representado por la fórmula [V] es un compuesto representado por la fórmula [Va]:

[Va]Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-OR^{a}

en la que R^{a} representa un grupo seleccionado del grupo que consiste en

10

8. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que se usa una base en dicha operación de hidrólisis en (2).

9. El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la base es hidróxido de sodio.

10. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que se usa tetrahidrofurano como un disolvente en dicha operación de hidrólisis en (2).

11. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que se usa una base en dicha operación de hidrólisis en (4).

12. El método de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la base es hidróxido de sodio.

\newpage

13. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que se usa un disolvente mixto de agua y de tetrahidrofurano como un disolvente en dicha operación de hidrólisis en (4).

14. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método comprende (4).

15. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método comprende (3) y (4).

16. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método comprende (2), (3) y (4).

17. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método comprende (1), (2), (3) y (4).

18. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método consiste esencialmente en (2), (3) y (4).

19. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho método consiste esencialmente en (1), (2), (3) y (4).

20. Un método para la producción de un antagonista de la LHRH que comprende el método de preparación de un tripéptido o de una sal del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, y convertir dicho tripéptido o la sal del mismo en dicho antagonista de la LHRH.