ES2333638B2 - Uso del acido maslinico para el tratamiento de dolores de naturaleza nociceptiva, inflamatoria y neurogenica. - Google Patents
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Abstract
Uso del ácido maslínico para el tratamiento de
dolores de naturaleza nociceptiva, inflamatoria y neurogénica. La
presente invención se refiere al uso del ácido maslínico y
cualquiera de sus derivados para el tratamiento de procesos
patológicos dolorosos, de naturaleza (1) nociceptiva, (2)
inflamatoria o (3) neurogénica, por cualquier medio galénicamente
aceptable y muy especialmente por vía tópica, incluyendo
composiciones que contengan ácido maslínico, cualquiera de sus
derivados, o mezclas naturales, sintéticas o semisintéticas ricas
en maslínico o sus derivados.
Description
Uso del ácido maslínico para el tratamiento de
dolores de naturaleza nociceptiva, inflamatoria y neurogénica.
La presente invención se refiere al uso del
ácido maslínico y cualquiera de sus derivados para el tratamiento
de procesos patológicos dolorosos, de naturaleza (1) nociceptiva,
(2) inflamatoria o (3) neurogénica, por cualquier medio
galénicamente aceptable y muy especialmente por vía tópica,
incluyendo composiciones que contengan ácido maslínico, cualquiera
de sus derivados, o mezclas naturales, sintéticas o semisintéticas
ricas en maslínico o sus derivados.
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El ácido oleanólico
(3-betahidroxi-28-carboxiolean-12-eno)
es un ácido triterpénico ubicuamente repartido en el reino vegetal.
Así, la base de datos fitoquimica del Departamento de Agricultura
de los Estados Unidos recoge su presencia en casi un centenar de
plantas, entre las que se encuentra la Olea europaea, así
como una serie de actividades biológicas comprobadas (antiabortivo,
anticariogénico, antifertilidad, antihepatotóxico, antiinflamatorio,
antisarcómico, preventivo del cáncer, cardiotónico, diurético,
hepatoprotector y uterotónico). Existen algunas referencias que
demuestran la eficacia del ácido oleanólico en modelos
experimentales de dolor nociceptivo somático y visceral en ratón
[Maia et al., Pharmacol Res. (2006) 54:
282-286; Maia et al., Biol Pharm
Bull. (2006) 29:82-5]. Igualmente, los
resultados obtenidos en un ensayo clínico piloto [Lukaczer et
al., Phytother Res. (2005) 19: 864-869],
también sugieren cierta eficacia del ácido oleanólico en la
reducción del dolor en pacientes con artritis, aunque en este caso
el ácido oleanólico fue administrado en comprimidos, en combinación
con un extracto de romero (Rosmarinus officinalis) e
iso-alfa ácidos reducidos procedentes del lúpulo
(Humulus lupulus). En dichos comprimidos se desconoce la
proporción de cada uno de los componentes, incluido el ácido
oleanólico.
El ácido maslínico
(2-alfa,3-betadihidroxi-28-carboxiolean-12-eno),
también denominado ácido crataególico, es un ácido mucho menos
repartido en la naturaleza, habiendo sido detectado en una decena
de plantas. Se conoce su actividad como antihistamínico y
anticanceroso, aunque su escasez hace que no se haya estudiado
extensamente. El aislamiento de los ácidos oleanólico y maslínico
de las ceras de la superficie del fruto de la Olea europaea,
ha sido descrito [Bianchi,G., Pozzi,N. And Vlahov, G.
Phytochemistry (1994) 37, 205-207] mediante
la extracción metanólica de olivas previamente lavadas con
cloroformo. La separación de este tipo de ácidos ha sido descrita
mediante cromatografía en contracorriente de alta velocidad (HSCCC)
[Du, Q.Z., Xiong, X.P. and Ito, Y.; Journal of Liquid
Chromatography (1995) 18. 1997-2004].
La Universidad de Granada, en su solicitud de
patente ES2111498 describe un procedimiento de aprovechamiento
industrial de los ácidos oleanólico y maslínico contenidos en los
subproductos de la molturación de la aceituna. Este procedimiento
permite obtener un material adecuado para multitud de
aplicaciones.
Existe en la actualidad, un gran número de
patentes en las que el ácido maslínico actúa como componente
activo: agente antitumoral US2003153538 o WO0252956; inductor de
apoptosis WO03057224; alimento anorético WO203039270 y WO03011267;
agente externo para la piel y blanqueador US2003133958; tratamiento
de lesiones vasculares WO02078685.
En algunas publicaciones se sugiere que este
triterpeno puede tener también una actividad antiinflamatoria y
antioxidante al inhibir la liberación de las citoquinas
pro-inflamatorias IL-6 y TNF\alpha
y la producción de NO y del peroxido de hidrogeno (ROS) en
macrófagos peritoneales murinos estimulados con LPS
[Marquez-Martín et al., Free Radic.
Res. (2006) 40: 295-302]. Sin embargo, los
mismos autores no encuentran un efecto claro del ácido maslínico
sobre la producción de citoquinas pro-inflamatorias
en células mononucleares de sangre periférica humana
[Marquez-Martín et al., Cytokine
(2006) 36: 11-17]. En todo caso, lo que estas
discrepancias ponen de manifiesto es que las respuestas no son
homogéneas y por tanto no son predecibles, lo que hace necesario el
estudio en cada modelo y/o tipo de tejido.
No aparecen referencias bibliográficas que
relacionen el ácido maslínico con tratamientos de dolor.
Actualmente el tratamiento del dolor es de gran
importancia en medicina ya que es necesario el hallazgo de nuevas
terapias más eficaces y/o mejor toleradas que las actualmente
disponibles para combatirlo. Esto se pone de manifiesto en el gran
número de trabajos científicos en investigación básica y clínica
sobre nuevas estrategias para el tratamiento del dolor que en los
últimos años han ido apareciendo.
Entre las distintas definiciones de dolor, la
más aceptada es la que propone la Asociación Internacional para el
Estudio del Dolor (International Association for the Study of Pain,
IASP) que define al dolor como "una experiencia sensorial y
emocional desagradable con daño tisular real o potencial o descrito
en términos de dicho daño". A pesar de que el dolor es siempre
subjetivo, es posible clasificarlo. Los principales subtipos de
dolor sobre los que versa esta invención son: (1) dolor nociceptivo
(es decir, dolor causado por activación directa de los nociceptores
[2008 IASP Pain Terminology,
http://www.iasp-pain.org]), (2) dolor inflamatorio
(es decir, dolor causado por lesión tisular con inflamación [Woolf,
Br. J. Anaesth. 75: 169-176, 1995]) y (3)
dolor neurogénico (es decir, dolor causado por una lesión primaria,
disfunción o alteración transitoria en el sistema nervioso
periférico o central [1994 IASP Pain Terminology,
http://www.iasp-pain.org]).
El dolor (1) de tipo nociceptivo suele responder
bien al tratamiento con analgésicos antiinflamatorios no
esteroideos (AINES) y con analgésicos opiáceos, según la escalera
de la OMS [Krakowski et al., Br. J. Cancer (2003) 89,
S67-S72]. No obstante, ambos tipos de fármacos
producen con frecuencia efectos secundarios. Por ejemplo, los AINEs
pueden producir alteraciones y lesiones gastrointestinales,
reducción de la función renal con retención de agua, sodio y
potasio y reacciones de hipersensibilidad entre otras. Los
analgésicos opiáceos producen con frecuencia nauseas y vómitos,
estreñimiento, depresión respiratoria, así como tolerancia y
dependencia entre otros efectos secundarios.
El dolor (2) de tipo inflamatorio responde a
tratamientos con AINEs, aunque como se ha comentado anteriormente
estos fármacos producen con frecuencia efectos secundarios [Munir
et al., Med Clin North Am (2007)91:
97-111]. Así mismo, los antiinflamatorios
esteroideos, también denominados corticosteroides, son eficaces
para el tratamiento de la inflamación [Stephens et al.,
Am. Fam. Physician (2008) 78: 971-976], pero
pueden provocar la supresión de la secreción endógena de
esteroides, ulcera peptídica, insuficiencia cardiaca congestiva,
hipertensión, diabetes, osteoporosis y glaucoma entre otros efectos
secundarios.
El dolor neurogénico (3) responde a la
administración de algunos antiepilépticos (como gabapentina,
pregabalina o carbamazepina) y de antidepresivos tricíclicos (como
amitriptilina) [Jackson, Pain Pract. (2006) 6:
27-33], pero más de una tercera parte de los
pacientes no responden a ningún tratamiento, por lo que son
necesarios nuevos fármacos eficaces para su tratamiento.
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La presente invención describe el uso del ácido
maslínico o cualquiera de sus derivados para el tratamiento
sintomático de cualquier clase de dolor clínicamente adscribible a
tipo (1) nociceptivo, y/o tipo (2) inflamatorio y/o tipo (3)
neurogénico.
En esta invención, se demuestra la eficacia del
tratamiento incluso por administración tópica. Es muy importante
destacar este hecho puesto que permite localizar de una forma
rápida y eficaz altas concentraciones del producto activo o sus
sales biológicamente aceptables, por lo que se logra un efecto
rápido sobre el dolor experimentado.
En la presente invención, y como consecuencia de
los resultados obtenidos, mostrados en la sección de ejemplos, se
demuestra que:
La administración subcutánea de ácido maslínico
inhibe el dolor inducido por estímulos de tipo químico en el ratón,
en este caso, la segunda fase del dolor en el test de la formalina
al 5%, en la que se produce un fenómeno de inflamación localizada
en la pata inyectada con formalina (ver apartado 6.1 y tabla 1 en
la sección de ejemplos).
La administración tópica cutánea del ácido
maslínico también inhibió el dolor inflamatorio de la segunda fase
del test de la formalina. El efecto analgésico se debió a una
acción local pues la aplicación del maslínico en una pata no
produjo analgesia en la pata contralateral (ver apartado 6.2 y tabla
2 en la sección de ejemplos).
La administración subcutánea de ácido maslínico
también fue eficaz en un modelo de dolor neurogénico inducido por
la administración de capsaicina [Baumann et al., J.
Neurophysiol. (1991) 66: 212-227]. En este
modelo el ácido maslínico inhibió la alodinia mecánica a un
estímulo puntiforme inducida por la administración intraplantar de
capsaicina en el ratón (ver apartado 6.3 y tabla 3 en la sección de
ejemplos). Puesto que este es un modelo de dolor neurogénico
causado por sensibilización central [lannetti et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2005)102:
18195-18200] estos datos indican que el maslínico
es capaz de actuar en el sistema nervioso central para ejercer sus
efectos.
Es interesante destacar que la administración
del inhibidor de la COX-2 rofecoxib no fue capaz de
inhibir el dolor neurogénico (hipersensibilidad mecánica) inducida
por la capsaicina (ver apartado 6.7 y tabla 7 en la sección de
ejemplos). Puesto que según se demuestra en los ejemplos (apartado
6.3), el ácido maslínico sí es capaz de hacerlo, el efecto
analgésico del ácido maslínico tiene que ser debido a un mecanismo
diferente al de la inhibición de la COX-2.
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El ácido maslínico administrado subcutáneamente
en el ratón también consiguió inhibir el dolor nociceptivo somático
inducido por un estímulo cutáneo térmico (modelo de la placa
caliente a 50ºC) y el dolor nociceptivo visceral, inducido por la
administración intraperitoneal de ácido acético al 0,6% en el ratón
(ver apartados 6.4 y 6.5, y tablas 4 y 5 en la sección de
ejemplos).
El ácido maslínico (administrado por vía
subcutánea a la dosis más alta evaluada en los modelos de dolor) no
tuvo ningún efecto secundario apreciable al observar el
comportamiento espontáneo del animal y tampoco alteró la
coordinación motora de los animales cuando estos fueron sometidos al
test del Rotarod (ver apartado 6.6 y tabla 6 en la sección de
ejemplos). Esto indica que la acción antinociceptiva y
antialodínica del ácido maslínico no se debe a una inhibición
inespecífica del sistema nervioso central.
Preferentemente se utiliza un principio activo
natural en la que el ácido maslínico está acompañado de cantidades
menores de ácido oleanólico, todo ello en un vehículo
farmacéuticamente aceptable. En todo caso, el ácido maslínico, o
cualquiera de sus derivados, o la combinación de éstos o la
combinación de éstos con ácido oleanoico, constituye más del 66% del
este principio activo natural y preferentemente más del 85% del
mismo.
En caso de incluir ácido oleanóico en la mezcla
de principios activos, la relación entre el ácido maslínico y el
ácido oleanólico es de entre 2:1 y 7:1.
Es decir, el ácido maslínico, sus sales,
derivados farmacéuticamente aceptables o sus profármacos, se
formularán en una composición farmacéutica apropiada, en la
cantidad terapéuticamente efectiva, junto con uno o más vehículos,
adyuvantes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Concretamente, para la administración tópica el
ácido maslínico, sus derivados, o la mezcla de ácido maslínico y
ácido oleanólico antes descrita como principio activo, se encuentra
en una proporción de entre 0,5% y 10% del total de la composición,
preferentemente entre el 0,5% y el 5% y aún más preferentemente
entre el 1% y el 3%.
En cualquiera de los casos, se utilizará,
preferentemente, ácido maslínico o alguno de sus derivados,
procedentes de subproductos industriales de plantas del género
Olea.
Esta composición, se puede administrar de
distintas formas, entre ellas, pero sin limitarse a éstas,
oralmente, bucalmente, rectalmente, intramuscularmente, de forma
tópica, de forma subcutánea, intraarticularmente o por
inhalación.
Preferiblemente se administra de forma tópica,
oral, subcutánea o mediante infiltraciones articulares. En otra
realización preferida, dicha composición se presenta en una forma
adaptada a la administración tópica.
En cada caso la composición se adaptará al tipo
de administración utilizada, por ello, la composición descrita
anteriormente se puede presentar bajo la forma de tabletas,
grageas, cápsulas, soluciones, emulsiones, cremas, leche corporal,
ungüentos, inhalantes, aerosoles, supositorios o cualquier otra
forma de administración clínicamente permitida y en una cantidad
terapéuticamente eficaz. Más preferiblemente en forma de solución,
emulsión, crema, leche corporal o ungüento.
Por un derivado farmacéuticamente aceptable se
entiende cualquier sal, farmacéuticamente aceptable o cualquier
otro compuesto que, después de su administración, es capaz de
proporcionar (directa o indirectamente) el ácido maslínico.
En el sentido utilizado en esta descripción, la
expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a
aquellas sustancias, o combinación de sustancias, conocidas en el
sector farmacéutico, utilizadas en la elaboración de formas
farmacéuticas de administración e incluye sólidos o líquidos,
disolventes, tensioactivos, etc.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos,
ventajas y características de la invención se desprenderán en parte
de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los
siguientes ejemplos y tablas se proporcionan a modo de ilustración,
y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
A continuación se ilustrará la invención
mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de
manifiesto, entre otros aspectos, la actividad y eficacia del ácido
maslínico y demuestran lo que de forma general se ha descrito en
los apartados anteriores.
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De forma genérica para todos los ejemplos, se
describen los animales de experimentación, compuestos, materiales y
métodos utilizados y resultados obtenidos:
Se utilizaron ratones hembra de la cepa
CD-1 (Charles River España, Barcelona) de
25-30 g de peso, con al menos 8 animales en cada
grupo experimental. Los animales fueron alojados en cajas de
makrolón y se mantuvieron en una habitación a 22 \pm 1ºC de
temperatura ambiente, con cambio de aire cada 20 minutos y con un
ritmo de luz-oscuridad de 12 horas (luz desde las 8
a las 20 horas). Los animales dispusieron de comida y agua "ad
libitum" hasta el momento del experimento. Los animales
fueron manejados de acuerdo con la directiva comunitaria de 24 de
noviembre de 1986 (86/609/EEC).
Los compuestos químicos que se emplearon fueron
las sustancias algógenas capsaicina, formalina (formaldehído al
38%) y ácido acético, y los fármacos ácido maslínico (en su forma
de sal sódica), rofecoxib, baclofeno y gabapentina.
Para el tratamiento sistémico se utilizaron tres
tipos de solvente: a) dimetilsulfóxido (DMSO), en el que se
disolvió la capsaicina; b) suero salino esteril, que se utilizó
para diluir las soluciónes de capsaicina en DMSO (hasta obtener una
concentración de 1 \mug de capsaicina en DMSO al 1%), de
formalina (hasta obtener una concentración de 5%) y de ácido acético
(hasta una concentración de 0,6%); así como para disolver el
rofecoxib, el baclofeno y la gabapentina; y c) una solución de
tween 80 al 2% en agua ultrapura, en la que se disolvió el ácido
maslínico en su forma de sal sódica.
Para la evaluación del efecto local del ácido
maslínico, se utilizó un tratamiento tópico por formación de la sal
del ácido maslínico con trietanolamina en propilenglicol, que fue
vehiculizada en un gel carbopol alcanzando una proporción final de
ácido maslínico del 1%. Las experiencias también se realizaron en
animales controles tratados con el hidrogel base de propilenglicol,
trietanolamina y carbopol (sin ácido maslínico).
La solución madre de capsaicina en DMSO puro se
preparaba a una concentración de 5 mg/ml la cual se fraccionaba y
congelaba (durante un máximo de 5 días) a -20ºC en alícuotas. Cada
día de experimento la alícuota correspondiente se descongelaba y se
diluía en salino a la concentración de 0,05 \mug/\mul. La
solución de formalina se preparaba el mismo día del experimento y
se diluía a la concentración del 5% en suero salino. Igualmente la
solución de ácido acético se preparaba el mismo día del
experimento, diluyendo el ácido acético a la concentración de 0,6%
en suero salino.
La solución de ácido maslínico se preparaba
diariamente antes del comienzo de los experimentos a la
concentración necesaria para administrar la dosis estudiada,
disolviéndolo en una solución de tween 80 al 2% en agua ultrapura.
El baclofeno, el rofecoxib y la gabapentina se administraron y
prepararon siguiendo el mismo procedimiento, pero en este caso el
solvente fue suero salino.
Para la administración de los fármacos por vía
subcutánea se utilizaron jeringuillas de insulina. Para la
administración intraperitoneal del ácido acético se usaron las
mismas jeringuillas, pero provistas de una aguja de 30^{1/2} G.
Para la inyección intraplantar de capsaicina se utilizó una jeringa
Hamilton de 100 \mul modelo 1710 TLL provista de una aguja de
30^{1/2} G. Para la aplicación tópica del ácido maslínico en
hidrogel y el hidrogel base en la pata trasera del animal, se
utilizó una espátula de aluminio.
Para la medición de la respuesta de lamido
inducida por la formalina se utilizaron: cronómetros digitales con
una precisión de 0,01 segundos, vasos de precipitado de vidrio
transparente de 1 litro con un diámetro de 12 cm y 14 cm de alto en
los que se introducía el animal para observar su comportamiento y
espejos de 20 x 20 cm colocados detrás del vaso para facilitar la
visión de la pata inyectada.
Para la medición de las contorsiones inducidas
por la solución de ácido acético, se usaron cajas de makrolón, con
el suelo cubierto de virutas de madera. Igualmente se usaron
espejos de 20 x 20 cm colocados detrás de la caja de makrolon para
facilitar la visión de las contorsiones.
Para la valoración de la alodinia mecánica
inducida por capsaicina, se utilizó un aparato denominado Dynamic
Plantar Aesthesiometer modelo 37400 (Ugo Basile, Italia). El
aparato consta de un habitáculo para mantener a los animales
durante el estudio y de una unidad electrónica que permite la
estimulación de la pata del animal mediante un filamento
(controlando electrónicamente la fuerza aplicada y la velocidad con
la que se aplica) y el registro de los datos (tiempo de latencia
desde la aplicación del estímulo hasta la retirada de la pata).
Para la realización del test de la placa
caliente se utilizó una placa caliente comercial (Letica, España)
rodeada de paredes de metacrilato transparentes de 16 cm de altura
y conectada a un baño de agua termostatizada (JP Selecta, España).
Se usó una sonda para medición de temperatura de superficie
conectada a un termómetro electrónico (Fisher Bioblock Scientific,
España) para comprobar que la temperatura de la superficie de la
placa era la adecuada.
Para comprobar si el ácido maslínico produce
alteraciones en la coordinación motora, se utilizó un aparato
denominado Accelerating Rotarod (Cibertec, Madrid, España). El
aparato consta de un cilindro giratorio dividido en 5
compartimentos, separados por paredes de plástico opacas, en donde
se sitúan los ratones. El aparato dispone de un motor que permite
aplicar una aceleración constante (desde 4 a 40 rpm en 5 minutos) y
cronometrar automáticamente el tiempo que tarda en caerse del
cilindro cada ratón.
Para la inyección intraplantar se utilizó el
procedimiento descrito previamente [Cendán et al.,
Psychopharmacology (Berl.) (2005) 182:
485-493]: se introdujo la aguja de la jeringa
Hamilton en la pata trasera derecha del animal, desde la parte
posterior de la planta en dirección a los dedos, se inyectaron los
20 \mul de solución de capsaicina o de formalina (o sus solventes
respectivos) en un tiempo de aproximadamente 5 segundos y se
extrajo lentamente la aguja, con la precaución de presionar sobre
el lugar por donde penetró la aguja para que no se perdiera
líquido. La solución de ácido acético se inyectó por vía
intraperitoneal en un volumen de 10 ml/kg del modo descrito
previamente [Del Pozo et al., Eur. J. Pharmacol.
(1987)137: 155-160].
Para valorar el efecto sistémico de los fármacos
en estudio, éstos se administraron por vía subcutánea en el área
interescapular, en un volumen de 5 ml/kg siguiendo procedimientos
estándares [Del Pozo et al., Eur. J. Pharmacol.
(1987) 137: 155-160]. Los animales de los grupos
control recibieron por la misma vía de administración el mismo
volumen de los solventes (tween 80 al 2% en agua para el maslínico
o suero salino para el rofecoxib, el baclofeno y la
gabapentina).
Para la aplicación cutánea del hidrogel con
ácido maslínico al 1% o su solvente (hidrogel base) se extendía una
cantidad de 0.1 ml de hidrogel por toda la pata trasera, desde el
tobillo hasta los dedos, siguiendo el procedimiento experimental
previamente descrito [Li et al., Anesthesiology (2007)
107: 486-494]. Dependiendo del objetivo del
experimento el hidrogel se aplicó en la pata trasera derecha, que
posteriormente iba a ser inyectada con formalina (pata ipsilateral)
o, en otro grupo experimental, en la pata trasera izquierda
(pata-contralateral), es decir en la pata no tratada
con formalina. En este caso se trataba de comprobar que el efecto
del ácido máslinico al aplicarlo de forma tópica es local y no
sistémico.
Se utilizó el procedimiento previamente descrito
[Cendán et al., Psychopharmacology (Berl.)
(2005) 182: 485-493]. Los animales permanecieron al
menos 30 min en la habitación donde se realizó el experimento,
antes de iniciarse éste. Pasado el tiempo de habituación a la sala,
recibieron una inyección de ácido maslínico (o su solvente) por vía
s.c. y se les devolvió a las cajas de makrolón. En los experimentos
en los que se aplicó el hidrogel de ácido maslínico o su solvente,
cada animal se colocó directamente en un vaso de precipitado, para
evitar que las virutas se pegaran en la pata untada con el
hidrogel. A los 30 minutos de la administración s.c. del ácido
maslínico o su solvente (solución de tween 80 al 2% en salino) y a
los 15 minutos de la aplicación tópica ipsilateral de ácido
maslínico (administrado en forma de hidrogel) o su solvente
(hidrogel base), los animales recibieron en la pata trasera derecha
una inyección intraplantar de formalina. Para comprobar, que el
efecto del hidrogel del ácido maslínico es local, también se
llevaron a cabo experimentos en los que el hidrogel se aplicaba en
la pata contralateral (pata izquierda) a la inyectada con
formalina.
Inmediatamente después de la inyección de la
formalina, cada ratón se colocó bajo un vaso de precipitado de 1
litro invertido, y el tiempo que los animales se
lamían/mordisqueaban la pata inyectada se evaluó durante 50 min
(divididos en 10 periodos de 5 min cada uno). Tal y como había sido
previamente descrito [Cendán et al., Psychopharmacology
(Berl.) (2005) 182: 485-493] el tiempo de
lamido/mordisqueo observado durante el periodo de
0-5 min tras la inyección de formalina fue
considerado indicativo de la primera fase de dolor, mientras que el
tiempo de lamido/mordisqueo observado entre los 10 y los 50 min
posteriores a la inyección fue considerado indicativo de la segunda
fase del dolor.
El procedimiento experimental utilizado fue el
descrito previamente [Entrena et al., Pain (2009)
143:252-261]. Para evitar que las conductas
exploratorias del ratón interfiriesen en los resultados obtenidos,
se colocó a cada animal en el compartimiento correspondiente del
aparato 2 horas antes de administrar los fármacos (tiempo de
habituación). Seguidamente cada animal fue sacado de su
compartimiento, recibió el producto en estudio por vía s.c. en el
área interescapular e inmediatamente después fue devuelto a su
compartimiento. El ácido maslínico o su solvente fueron
administrados 30 minutos antes de la inyección intraplantar de
capsaicina. Transcurridos 15 minutos desde la inyección de
capsaicina o su solvente (tiempo en el que se consigue la máxima
sensibilización por capsaicina) cada ratón fue expuesto a un
estímulo mecánico de 0.5 g mediante un filamento rígido de 0,5 mm
de diámetro. El tiempo transcurrido desde el estímulo de la pata
hasta que el animal la retiraba fue registrado automáticamente por
el aparato. El tiempo máximo de exposición al estímulo mecánico fue
de 50 segundos en cada una de las determinaciones. Se realizaron en
cada animal 3 medidas de la latencia de retirada de la pata,
dejando un intervalo mínimo de 5 segundos entre cada una de las
medidas. La media de las tres medidas fue considerada la latencia de
respuesta del animal.
Para su realización se utilizó un método
previamente descrito [Del Pozo et al., Eur. J.
Pharmacol. (1987) 137: 155-160]. Los animales
permanecieron al menos 30 min en la habitación donde se realizó el
experimento, antes de iniciarse éste. Pasado este tiempo recibieron
una inyección de ácido maslínico (o su solvente) por vía s.c. y se
les devolvió a las cajas de makrolón. A los 30 minutos de la
administración del ácido maslínico los animales recibieron una
inyección intraperitoneal de ácido acético al 0,6%. Inmediatamente
después de la inyección del acético, cada ratón se colocó en otra
caja de makrolón más pequeña con el suelo cubierto de virutas de
madera, y se evaluó el número de contorsiones que el animal
realizaba durante 30 min (divididos en 6 periodos de 5 min cada
uno). Se consideró que el ratón hacía una contorsión, cuando al
arquear el cuerpo estiraba al menos una de las patas traseras
completamente.
La metodología experimental utilizada fue
descrita previamente [Del Pozo et al., Gen.
Pharmacol. (1990) 21: 681-685]. El termostato
del baño de agua fue ajustado, para que la temperatura de la
superficie de la placa fuese de 50ºC. Los animales permanecieron al
menos 30 min en la habitación donde se realizó el experimento,
antes de iniciarse éste. Pasado este tiempo recibieron una
inyección de ácido maslínico (o su solvente) por vía s.c. y se les
devolvió a las cajas de makrolón. A los 30 minutos de la
administración del fármaco o su solvente los animales se colocaron
en la placa a esta temperatura y mediante un cronómetro se midió el
tiempo que tardaban en lamerse alguna de las patas traseras, lo que
llamamos tiempo de latencia de lamido de la pata trasera (LPT). Se
impuso un tiempo de corte de 60 segundos para evitar daños al
animal.
La metodología utilizada fue descrita
previamente [Nieto et al., Pain (2008) 137:
520-531]. Los animales permanecieron al menos 30 min
en la habitación donde se realizó el experimento, antes de
iniciarse éste. El protocolo experimental consta de dos fases que
se realizan en dos días consecutivos: el primer día, se lleva a
cabo la fase de aprendizaje, ya que es necesario que los
animales aprendan a mantenerse encima del cilindro y a correr en una
determinada dirección. Por ello, el primer día, los animales, se
colocan encima del cilindro que gira a una velocidad
progresivamente creciente con una aceleración constante de
4-40 rpm en 5 min y se cronometra el tiempo que
tardan en caerse del cilindro. Este procedimiento se repite 3 veces
dejando un intervalo de tiempo de 30 minutos entre cada una. Con
esto se consigue, que los animales se acostumbren al aparato y
alcancen una latencia media de caída de unos 200 segundos. Después,
los animales son devueltos a las cajas de makrolon.
Al día siguiente, se lleva a cabo la fase de
evaluación: en primer lugar se comprueba que los animales siguen
teniendo una latencia media de 200 seg, cuando son sometidos a una
aceleración constante de 4-40 rpm en 5 minutos.
Seguidamente reciben una inyección s.c. de ácido maslínico,
baclofeno, gabapentina o sus solventes y se les devuelve a las cajas
de makrolón; 30 minutos después se vuelven a colocar encima del
cilindro para someterlos a la misma aceleración, y se comprueba su
latencia de caída. Este mismo procedimiento se repitió a los 60,
90, 120 y 180 minutos tras la administración subcutánea. El tiempo
de corte fue de 300 segundos, lo cual ocurre justo cuando el
cilindro alcanza la aceleración máxima de 40 rpm.
Las comparaciones estadísticas de las medias de
los valores obtenidos en los distintos grupos de tratamiento o de
los porcentajes de analgesia, se realizaron mediante un análisis de
la varianza (ANOVA) de una vía o de dos vías seguido de un test de
Bonferroni. En los casos en que solo había dos grupos, las
comparaciones estadísticas se hicieron mediante el test de la t de
Student para datos no apareados. Todas las comparaciones se
realizaron usando el programa SigmaStat versión 2.03 (Systat
Software Inc., San Jose, California, USA). En todos los casos se
consideró que existían diferencias significativas cuando el valor
de P fue menor de 0,05.
Para el cálculo del porcentaje de analgesia en
los modelos de alodinia mecánica inducida por capsaicina y de placa
caliente se empleó la siguiente fórmula: % Analgesia = [TLT -
TLC/TC - TLC] x 100; donde TLT es el tiempo de latencia de los
ratones tratados con ácido maslínico, TLC es el tiempo de latencia
de los ratones pertenecientes al grupo control (tratados con
solvente) y TC es el tiempo de corte (tiempo de latencia máximo: 50
seg para el modelo de alodinia y 60 seg para el modelo de placa
caliente). Para el cálculo del porcentaje de analgesia en el modelo
de formalina se empleo la siguiente fórmula: % Analgesia = [(TLC -
TLT)/TLC] x 100; donde TLT es el tiempo de lamido de los ratones
tratados con ácido maslínico, y TLC es el tiempo de lamido de los
ratones pertenecientes al grupo control (tratados con solvente).
Para el cálculo del porcentaje de analgesia en el modelo de
contorsiones por ácido acético se empleo la siguiente fórmula: %
Analgesia = [(NCC - NCT)/NCC] x 100; donde NCT es el número de
contorsiones de los ratones tratados con ácido maslínico, y NCC es
el número de contorsiones de los ratones pertenecientes al grupo
control (tratados con solvente).
\newpage
El ácido maslínico (64-512
mg/kg), administrado por vía subcutánea, no produjo cambios
estadísticamente significativos en la primera fase
(0-5 min) del dolor inducido por la formalina
(datos no mostrados), pero fue capaz de reducir el dolor de la
segunda fase (10-50 min) (Tabla 1). Se encontraron
diferencias estadísticamente significativas con las dosis de ácido
maslínico 256 y 512 mg/kg con respecto al grupo control (Tabla
1).
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El ácido maslínico al 1% en hidrogel aplicado
directamente en la pata 15 minutos antes de la inyección i.pl. de
formalina no modificó la primera fase (0-5 min) de
la respuesta dolorosa inducida por la capsaicina (datos no
mostrados); en cambio, fue capaz de inhibir la segunda fase del
dolor inducido por la formalina (tabla 2). En esta segunda fase, se
encontraron diferencias estadísticamente significativas, con
respecto al grupo control (Tabla 2). Por el contrario cuando el
ácido maslínico al 1% en hidrogel se aplicó en la pata
contralateral a la que sería inyectada con formalina no tuvo ningún
efecto en el dolor inducido por el irritante (tabla 2).
Estos datos indican que el ácido maslínico
aplicado localmente consigue suficiente concentración en la pata
ipsilateral como para inhibir la respuesta a la formalina, pero no
se absorbe en grado suficiente como para ejercer efectos sistémicos
(y por tanto un efecto analgésico en la pata contralateral).
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\newpage
La administración subcutánea del ácido maslínico
fue capaz de inhibir la alodinia mecánica a un estímulo puntiforme
inducida por capsaicina (Tabla 3). Se encontraron diferencias
estadísticamente significativas entre las latencias de retirada de
la pata del grupo control y las obtenidas en los grupos tratados
con ácido maslínico a las dosis de 64, 256 y 512 mg/kg.
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La administración subcutánea de ácido maslínico
fue capaz de reducir el número de contorsiones inducidas por la
administración intraperitoneal de ácido acético al 0,6% (Tabla 4).
Se encontraron diferencias estadísticamente significativas, con
respecto al grupo control, en el número de contorsiones que
mostraron los grupos de animales tratados con todas las dosis de
maslínico que se usaron (64, 128 y 256 mg/kg).
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La administración subcutánea de ácido maslínico
fue capaz de aumentar el tiempo de latencia de lamido de cualquiera
de las patas traseras, cuando el animal fue colocado en la placa
caliente a 50ºC (Tabla 5). Se encontraron diferencias
estadísticamente significativas con respecto al grupo control en los
tiempos de lamido obtenidos en los grupos tratados con las dosis de
128, 256 y 512 mg/kg de ácido maslínico (Tabla 5).
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La dosis más alta de ácido maslínico que se usó
por vía sistémica en los experimentos en los que se evaluaba su
efecto analgésico o antialodínico (512 mg/kg; s.c.) no tuvo ningún
efecto en la coordinación motora cuando los animales fueron
sometidos al test del Rotarod (Tabla 6). Por el contrario los
fármacos controles que se usaron, gabapentina (60 mg/kg, s.c.) y
baclofeno (8 mg/kg, s.c.), si alteraron claramente la coordinación
motora de los animales (Tabla 6), lo que concuerda con los datos
previamente descritos en la literatura con ambos controles
[Hong-Ju et al., Bioorg Med Chem Lett
(2004) 14:2537-2541; Patel et al.,
Pain (2001) 90: 217-226].
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Como se ha descrito en la experiencia 3 el ácido
maslínico es capaz de inhibir la hipersensibilidad mecánica
inducida por capsaicina. Con el fin de descartar que la causa de la
eficacia del ácido maslínico se deba a su posible acción como
inhibidor de la COX-2, se ha evaluado el efecto del
inhibidor de COX-2 rofecoxib en este modelo. Hemos
encontrado que ambas dosis del rofecoxib (8 y 32 mg/kg) fueron
incapaces de modificar significativamente la hipersensibilidad
mecánica inducida por capsaicina (Tabla 7). Estos datos concuerdan
con otros previamente descritos en la literatura que demuestran que
los inhibidores selectivos de la COX-2 celecoxib y
rofecoxib y el inhibidor de la COX1 y COX-2
ibuprofeno no tuvieron efecto en la alodinia mecánica inducida por
capsaicina [Joshi et al., Neuroscience (2006)
143:587-596; Entrena et al.,
Psychopharmacology (2009) 205: 21-23], ni en
otros modelos de dolor neurogénico [Broom et al.,
Neuroscience (2004) 124: 891-900].
Por tanto, puede concluirse que la acción
analgésica del ácido maslínico descrita en el experimento 3 no
puede ser explicable por un posible efecto inhibidor de la
COX-2.
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Claims (3)
1. Uso del ácido maslínico o cualquiera de sus
derivados para la elaboración de un medicamento para el tratamiento
de patologías dolorosas de naturaleza nociceptiva (somática o
visceral), inflamatoria o neurogénica.
2. Uso del ácido maslínico o cualquiera de sus
derivados según cualquiera de las reivindicaciones 1 para la
elaboración de un medicamento para el tratamiento de patologías
dolorosas seleccionadas de la lista que comprende: dolor canceroso,
dolor postoperatorio, dolor reumatológico, dolor neurogénico, dolor
neuropático, dolor postraumático (incluyendo el dolor asociado a las
lesiones deportivas), dolor inducido por fármacos (antineoplásicos,
antiretrovirales, etc), dolor causado por patologías viscerales.
3. Uso de extracto glicolado o análogo de alto
contenido en ácido maslínico según cualquiera de las
reivindicaciones 1 y 2.
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| ES200901745A ES2333638B2 (es) | 2009-07-29 | 2009-07-29 | Uso del acido maslinico para el tratamiento de dolores de naturaleza nociceptiva, inflamatoria y neurogenica. |
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Applications Claiming Priority (1)
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Non-Patent Citations (2)
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|---|
| JUN, L. et al.: "{}Maslinic acid reduces blood glucose in KK-AY mice"{}. Biol. Pharm. Bull, 2007, vol. 30, páginas 2075-2078, página 2075, primera columna, segunda columna, líneas 1-5. * |
| LUTTERODT, G.D. et al.: "{}Effects on mice locomotor activity of a narcotic-like principle from Psidium Guajava leaves"{}. Journal of Ethnopharmacology, 1988, vol. 24, páginas 219-231, páginas 220, 3$^{o}$ y 4$^{o}$ párrafo. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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