ES2334155T3 - Marcadores bioquimicos para el embolismo pulmonar agudo. - Google Patents
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Abstract
Un método para diferenciar entre un embolismo pulmonar múltiple y uno único en un sujeto del que se sospecha que padece un embolismo pulmonar agudo y que muestra una falta aguda de aliento, condiciones similares al colapso y/o dolor de pecho que comprende a) determinar la cantidad de NT-pro BNP en una muestra del sujeto del que se sospecha que padece un embolismo pulmonar agudo y que muestra una falta aguda de aliento, condiciones similares al colapso y/o dolor de pecho; y b) comparar la cantidad determinada en el paso a) con una cantidad de referencia, en el que una cantidad inferior a la cantidad de referencia es indicativa de un embolismo pulmonar único y una cantidad superior a la cantidad de referencia es indicativa de un embolismo pulmonar múltiple.
Description
Marcadores bioquímicos para el embolismo
pulmonar agudo.
La presente invención está relacionada con un
método de diagnóstico y, en particular, con un método para
diferenciar entre un embolismo pulmonar múltiple y único en un
sujeto sospechoso de padecer de embolismo pulmonar agudo que
comprende determinar la cantidad de NT-proBNP en una
muestra de un sujeto sospechoso de padecer de embolismo pulmonar
agudo y comparar dicha cantidad con una cantidad de referencia.
Además, la presente invención también está relacionada con un
método para diferenciar entre embolismo pulmonar crónico y agudo en
un sujeto que comprende determinar la cantidad de
NT-proANP en un primer y segundo punto temporal y
comparar las cantidades determinadas entre ellas. La presente
invención también comprende el uso de dispositivos y equipos para
llevar a cabo los métodos mencionados.
El embolismo pulmonar es un episodio médico que
pone en peligro la vida, especialmente en su forma aguda. Los
síntomas clínicos característicos del embolismo pulmonar agudo,
normalmente, que tiene como resultado la hospitalización son falta
de aliento aguda, condiciones similares al colapso y dolor en el
pecho. El embolismo pulmonar está provocado por trombosis que a
menudo sucede en las venas femorales. Además, la trombosis puede
venir acompañada de otras enfermedades como los defectos genéticos
en la cascada de coagulación de la sangre o enfermedades
cancerígenas.
Como consecuencia de la trombosis, un trombo
flotante puede entrar y ocluir la arteria pulmonar. El tamaño del
émbolo determina la posición de la oclusión arterial. La oclusión de
una arteria pulmonar resulta en una sobrecarga de volumen en el
ventrículo derecho del corazón y, como consecuencia del mismo, a
menudo un bajo soporte del lado izquierdo del corazón.
El embolismo pulmonar puede ocurrir como un
episodio único acompañado por los síntomas clínicos agudos
mencionados anteriormente que resultan, en particular en el caso de
los pacientes de emergencia, en la hospitalización o puede resultar
de múltiples pequeños embolismos pulmonares en los que tan solo el
más reciente viene acompañado con dichos síntomas clínicos. Esta
última condición se denomina "embolismo pulmonar múltiple" de
ahora en adelante.
Una distinción fiable entre un embolismo
pulmonar único y uno múltiple en base a los síntomas clínicos
aparentes es imposible. No obstante, dicha distinción así como la
identificación fiable de un episodio embólico pulmonar agudo es, en
principio, necesario para poder seleccionar una terapia adecuada.
Por ejemplo, un embolismo pulmonar único puede tratarse mediante
fármacos de acción trombolítica mientras que un episodio agudo como
resultado de un embolismo pulmonar múltiple puede necesitar de la
eliminación del trombo mediante cirugía.
Así, el problema técnico subyacente a la
presente invención puede verse como la provisión de medios y métodos
para cumplir con las necesidades anteriormente mencionadas. El
problema técnico se soluciona mediante las realizaciones descritas
en las reivindicaciones y a continuación.
De acuerdo con esto, la presente invención está
relacionada con un método para diferenciar entre un embolismo
pulmonar múltiple y uno único en un sujeto sospechoso de padecer un
embolismo pulmonar agudo que comprende
a) determinar la cantidad de
NT-proBNP en una muestra de un sujeto sospechoso de
padecer un embolismo pulmonar agudo; y
b) comparar la cantidad determinada en el paso
a) con una cantidad de referencia, en la que una cantidad inferior
a la cantidad de referencia es indicativa de un embolismo pulmonar
único y una cantidad superior a la cantidad de referencia es
indicativa de un embolismo pulmonar múltiple.
El término "diferenciación" tal como se
utiliza aquí significa distinguir entre un sujeto que padece de un
embolismo pulmonar único o un embolismo pulmonar múltiple en el que
los sujetos que padecen de dichas enfermedades muestran
esencialmente los mismos síntomas clínicos, es decir, falta aguda de
aliento, condiciones similares al colapso y/o dolor de pecho.
Además, los sujetos pueden además mostrar una sobrecarga del volumen
ventricular derecho del corazón y, como consecuencia del mismo, a
menudo un bajo soporte del lado izquierdo del corazón. El término
como se utiliza aquí, preferiblemente, incluye el diagnóstico
diferencial de cada enfermedad.
Diagnosticar tal como se utiliza aquí, se
refiere a evaluar la probabilidad de acuerdo con el que un sujeto
padezca las enfermedades referidas en la presente especificación.
Tal como deben entender los expertos en la materia, dicha
evaluación no pretende normalmente corregir al 100% los sujetos a
diagnosticar. El término, no obstante, requiere que una porción de
sujetos estadísticamente significativa pueda diagnosticarse si
padecen de dicha enfermedad (por ejemplo, una cohorte en un estudio
de cohortes). Si una porción es estadísticamente significativa
puede determinarse sin dificultad por el experto en la materia
utilizando varias herramientas de evaluación estadística bien
conocidas, por ejemplo, determinación de los intervalos de
confianza, determinación del valor p, prueba de t de Student,
prueba de Mann-Whitney etc. Los detalles se
encuentra en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley
& Sons, New York 1983. Los intervalos de confianza preferibles
son al menos del 90%, al menos del 95%, al menos del 97%, al menos
del 98% o al menos del 99%. Los valores de p son, preferiblemente,
0,1, 0,05, 0,01, 0,005, o 0,0001.
El diagnóstico de acuerdo con la presente
invención también incluye la monitorización, confirmación,
subclasificación y predicción de las enfermedades relevantes,
síntomas de riesgo de los mismos. La monitorización se refiere a
seguir el rastro de una enfermedad ya diagnosticada, o complicación,
por ejemplo, analizar la progresión de la enfermedad o la
influencia de una tratamiento particular en la progresión de una
enfermedad o complicación. La confirmación se refiere al refuerzo o
corroboración de un diagnóstico ya realizado utilizando otros
indicadores o marcadores. La subclasificación se refiere a definir
además un diagnóstico de acuerdo con diferentes subclases de
enfermedades diagnosticadas, por ejemplo, definir de acuerdo con las
formas medias y severas de la enfermedad. La predicción se refiere
al pronóstico de una enfermedad o complicación antes de que sus
síntomas o marcadores sean evidentes o se alteren
significativamente.
El término "embolismo pulmonar único" tal
como se utiliza aquí se refiere e una enfermedad o condición
acompañada con los síntomas clínicos anteriormente mencionados de
embolismo pulmonar, es decir, falta aguda de aliento, condiciones
similares al colapso y/o dolor de pecho y, opcionalmente, sobrecarga
del volumen ventricular derecho del corazón que puede estar
acompañada por un bajo soporte del corazón izquierdo. El embolismo
pulmonar único referido de acuerdo a la presente invención es el
resultado de una oclusión arterial única.
De acuerdo con la presente invención, el término
"embolismo pulmonar múltiple" se refiere a una enfermedad o
condición que está acompañada por los mismos síntomas clínicos
generales que los especificados para el embolismo pulmonar único
anterior. No obstante, está provocado por episodios oclusivos
múltiples en los que solo el episodio más reciente está acompañado
por dichos síntomas clínicos aparentes o, en otras palabras, los
episodios embólicos previos no han mostrado los síntomas
anteriormente mencionados hasta un grado clínico relevante.
El término "sujeto" tal como se utiliza
aquí se refiere a animales, preferiblemente mamíferos, y, más
preferiblemente, humanos. No obstante, la presente invención abarca
que el sujeto pueda, preferiblemente, presentar los anteriormente
mencionados síntomas clínicos aparentes de un embolismo pulmonar
múltiple y único, respectivamente.
Determinar la cantidad de un
NT-proBNP o cualquier otro polipéptido referido aquí
de acuerdo con la presente invención se refiere a medir la cantidad
o concentración, preferiblemente
semi-cuantitativamente o cuantitativamente. La
medición puede realizarse directamente o indirectamente. La medición
directa s refiere a la medición de la cantidad o concentración del
polipéptido sobre la base de la señal que se obtiene del polipéptido
en sí y la intensidad que se correlaciona directamente con el
número de moléculas del péptido presente en la muestra. Dicha señal
- a menudo referida aquí como intensidad de señal - puede obtenerse,
por ejemplo, midiendo un valor de intensidad de una propiedad
específica física o química del polipéptido. La medición indirecta
incluye la medición de una señal obtenida de un componente
secundario (es decir, un componente que no es el polipéptido en sí)
o un sistema biológico de lectura, por ejemplo, respuestas celulares
medibles, ligandos, marcas, o productos de reacción enzimática.
De acuerdo con la presente invención, determinar
la cantidad de polipéptido puede lograrse por todos los medios
conocidos para determinar la cantidad de un péptido en una muestra.
Dichos métodos comprenden dispositivo de inmunoensayo y métodos que
pueden utilizar moléculas marcadas en varios ensayos en sándwich, de
competición, o otros formatos. Dichos ensayos desarrollan una señal
que es indicativa de la presencia o ausencia del polipéptido.
Además, la fuerza de la señal puede, preferiblemente,
correlacionarse directa o indirectamente (por ejemplo, inversamente
proporcional) a la cantidad de polipéptido presente en una muestra.
Además los métodos adecuados comprenden medir una propiedad
específica física o química del polipéptido como su masa molecular
exacta o espectro de RMN. Dichos métodos comprenden,
preferiblemente, biosensores, dispositivos ópticos acoplados a
inmunoensayos, biochips, dispositivos analíticos como espectrómetros
de masas, analizadores de RMN, o dispositivos de cromatografía.
Además, los métodos incluyen métodos basados en microplacas de
ELISA, inmunoensayos totalmente automatizados o robóticos
(disponibles por ejemplo en los analizadores Elecsys^{TM}), CBA
(un ensayo enzimático de unión a Cobalto, disponible por ejemplo en
los analizadores Roche-Hitachi^{TM}), y ensayos de
aglutinación con látex (disponible por ejemplo en analizadores
Roche-Hitachi^{TM}).
Preferiblemente, determinar la cantidad de un
polipéptido comprende los pasos de (a) poner en contacto una célula
capaz de provocar una respuesta celular cuya intensidad es
indicativa de la cantidad de péptido con el péptido por un periodo
de tiempo adecuado, (b) medir la respuesta celular.
Para medir las respuestas celulares, la muestra
o muestra procesada se añade, preferiblemente, a un cultivo celular
y se mide una respuesta celular interna o externa. La respuesta
celular puede incluir a expresión medible de un gen marcador o la
secreción de una sustancia, por ejemplo, un péptido, polipéptido, o
molécula pequeña. La expresión o sustancia generará una intensidad
de señal que se correlaciona con la cantidad de péptido.
También preferiblemente, determinar la cantidad
de polipéptido comprende el paso de medir una intensidad de señal
específica obtenible del polipéptido o una proteína pulmonar
surfactante en la muestra.
Como se ha descrito antes, dicha señal puede ser
la intensidad de señal observada en una m/z variable específica
para el polipéptido observado en el espectro de masas o un espectro
de RMN específico del polipéptido.
Además, determinar la cantidad de un
polipéptido, preferiblemente, comprende los pasos de (a) poner en
contacto el péptido con un ligando específico, (b) (opcionalmente)
eliminar el ligando no unido, (c) medir la cantidad de ligando
unido. El ligando unido generará una intensidad de señal. La unión
de acuerdo con la presente invención incluye la unión covalente y
la no covalente. Un ligando de acuerdo con la presente invención
puede ser cualquier compuesto, por ejemplo, un péptido,
polipéptido, ácido nucleico, o molécula pequeña, que se une al
polipéptido descrito aquí. Los ligandos preferibles incluyen
anticuerpos, ácidos nucleicos, péptidos o polipéptidos como
receptores para el polipéptido y fragmentos de los mismos que
comprenden los dominios de unión para los péptidos, y aptámeros,
por ejemplo, aptámeros de ácido nucleico o de péptido. Los métodos
para preparar dichos ligandos son bien conocidos en la materia. Por
ejemplo, la identificación y producción de anticuerpos o aptámeros
adecuados se ofrece también por las casas comerciales. El experto
en la materia está familiarizado con los métodos para desarrollar
derivados de dichos ligandos con gran afinidad o especificidad. Por
ejemplo, las mutaciones aleatorias pueden introducirse en los
ácidos nucleicos, péptidos o polipéptidos. Estos derivados pueden
analizarse entonces por su unión de acuerdo con los procesos de
cribado conocidos en la materia, por ejemplo, presentación de
fagos. Los anticuerpos referidos aquí incluyen ambos anticuerpos
policlonales y monoclonales, así como fragmentos de los mismos,
como fragmentos Fv, Fab y F(ab)_{2} que son capaces
de unirse al antígeno o hapteno. La presente invención también
incluye anticuerpos híbridos humanizados en los que las secuencias
de aminoácido de un anticuerpo donante no humano que presenta una
especificidad de antígeno deseada se combina con secuencias de un
anticuerpo humano aceptor. Las secuencias donadoras incluirán
normalmente al menos los residuos de aminoácidos de unión al
antígeno del donador pero puede comprender otros residuos de
aminoácidos estructuralmente y/o funcionalmente relevantes del
anticuerpo donador también. Dichos híbridos pueden prepararse
mediante varios métodos bien conocidos en la materia.
Preferiblemente, el ligando o agente se une específicamente al
polipéptido. La unión específica de acuerdo con la presente
invención significa que el ligando o agente no se unirá
sustancialmente a ("reacción cruzada" con) otro péptido,
polipéptido o sustancia presente en la muestra a analizar.
Preferiblemente, el polipéptido unido específicamente se unirá con
al menos 3 veces más, más preferiblemente al menos 10 veces más y
aún más preferiblemente al menos 50 veces con más afinidad que
cualquier otro péptido o polipéptido relevante. La unión no
específica puede tolerarse, si puede distinguirse y medirse de forma
inequívoca, por ejemplo, de acuerdo con su tamaño en un Western
Blot, o mediante su mayor abundancia relativa en la muestra. La
unión del ligando puede medirse mediante cualquier método conocido
en la materia. Preferiblemente, dicho método es
semi-cuantitativo o cuantitativo. Los métodos
adecuados se describen a continuación. Primero, la unión de un
ligando puede medirse directamente, por ejemplo, mediante RMN,
espectrometría de masas o resonancia en plasmón de superficie.
Segundo, si el ligando también sirve como sustrato de una actividad
enzimática del péptido o polipéptido de interés, puede medirse el
producto de la reacción enzimática (por ejemplo, la cantidad de una
proteasa puede medirse midiendo la cantidad de sustrato escindido,
por ejemplo, en un Western Blot). Alternativamente, el ligando puede
presentar propiedades enzimáticas en sí y el complejo
ligando/polipéptido o el ligando que está unido mediante el
polipéptido, respectivamente, puede estar en contacto con un
sustrato adecuado que permite la detección mediante la generación
de una intensidad de señal. Para la medición de los productos
reacción enzimática, preferiblemente la cantidad de sustrato es
saturante. El sustrato puede también marcarse con una marca
detectable antes de la reacción. Preferiblemente, la muestra se pone
en contacto con el sustrato por un periodo de tiempo adecuado. Un
periodo de tiempo adecuado se refiere al tiempo necesario para una
cantidad detectable, preferiblemente medible, de producto a
producir. En lugar de medir la cantidad de producto, puede medirse
el tiempo necesario de aparición de una cantidad de producto
determinada (por ejemplo, detectable). Tercero, el ligando puede
acoplarse covalentemente o no covalentemente a una marca que permite
la detección y medición del ligando. El marcaje se puede realizar
mediante métodos directos o indirectos. El marcaje directo implica
el acoplamiento del marcaje directamente (covalentemente o no
covalentemente) al ligando. El marcaje indirecto implica la unión
(covalente o no covalente) de un ligando secundario al primer
ligando. EL ligando secundario se unirá específicamente al primer
ligando. Dicho ligando secundario puede acoplarse con un marcaje
adecuado y/o ser la diana (receptor) de un ligando terciario que se
une al ligando secundario. El uso de ligandos secundarios,
terciarios o incluso de un orden superior se utiliza a menudo para
aumentar la señal. Los ligandos secundarios y de orden superior
adecuados pueden incluir anticuerpos, anticuerpos secundarios, y el
sistema bien conocido de estreptavidina-biotina
(Vector Laboratories, Inc.). El ligando o sustrato puede también
"marcarse" con una o más marcajes conocidos en la materia.
Dichos marcajes pueden ser dianas de ligandos de orden superior. Los
marcajes adecuados incluyen biotina, digoxigenina,
His-Tag,
Glutatión-S-Transferasa, FLAG, GFP,
myctag, hemaglutinina A (HA) del virus de la gripe, proteína de
unión a maltosa, y similares. En el caso de un péptido o
polipéptido, el marcaje está preferiblemente en el extremo
N-terminal y/o C-terminal. Los
marcajes adecuados son cualquier marcaje detectable mediante un
método de detección apropiado. Los marcajes típicos incluyen
partículas de oro, cuentas de látex, ésteres de acridano, luminol,
rutenio, marcajes enzimáticamente activos, marcajes radioactivos,
marcajes magnéticos ("por ejemplo, cuentas magnéticas", que
incluye marcajes paramagnéticos y superparamagnéticos), y marcajes
fluorescentes. Los marcajes enzimáticamente activos incluyen por
ejemplo, peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina,
beta-Galactosidasa, Luciferasa, y derivados de los
mismos. Lo sustratos adecuados para la detección incluyen
di-amino-bencidina (DAB),
3,3'-5,5'-tetrametil-bencidina,
NBT-BCIP (cloruro de 4-nitro azul
de tetrazolio y
5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato,
disponibles como solución de reserva recién preparada de Roche
Diagnostics), CDP-Star^{TM} (Amersham
Biosciences), ECF^{TM} (Amersham Biosciences). Una combinación
adecuada de enzima-sustrato puede resultar en un
producto de reacción de color, fluorescente o quimioluminescente,
que puede medirse de acuerdo con los métodos conocidos en la materia
(por ejemplo, utilizando una película sensible a la luz o un
sistema de cámara adecuado). Para medir la reacción enzimática, los
criterios dados anteriormente se aplican de forma análoga. Los
marcajes fluorescentes típicos incluyen proteínas fluorescentes
(como GFP y sus derivados), Cy3, Cy5, Texas Red, Fluoresceína, y los
colorantes Alexa (por ejemplo, Alexa 568). Además los marcaje
fluorescentes están disponibles por ejemplo, de Molecular Probes
(Oregon). También se contempla el uso de puntos cuánticos como
marcajes fluorescentes. Los marcajes radioactivos típicos incluyen
35S, 125I, 32P, 33P y similares. Un marcaje radioactivo puede
detectarse mediante cualquier método conocido y apropiado, por
ejemplo, una película sensible a la luz o una pantalla de fósforo.
Los métodos de medición adecuados de acuerdo con la presente
invención también incluye precipitación (particularmente
inmunoprecipitación), electroquimioluminescencia
(quimioluminescencia electro-generada), RIA
(radioinmunoensayo), ELISA (ensayo inmunosorbente unido a enzima),
ensayos inmunoenzimáticos en sándwich, inmunoensayos
electroquimioluminescentes en sándwich (ECLIA), fluoroinmunoensayo
de disociación aumentada con lantánidos (DELFIA), ensayo de
proximidad de centelleo (SPA), turbidimetría, nefelometría,
turbidimetría o nefelometría aumentada por látex, inmunoensayos de
fase sólida. Además los métodos conocidos en la materia (como la
electroforesis en gel, electroforesis en gel 2D, electroforesis en
gel de poliacrilamida SDS (SDS-PAGE), Western
Blotting, y espectrometría de masas), pueden utilizarse solos o en
combinación con marcaje u otros métodos de detección como se ha
descrito anteriormente.
Además preferiblemente, determinar la cantidad
de un polipéptido comprende (a) contactar un soporte sólido que
comprende un ligando del polipéptido como se ha especificado antes
con una muestra que comprende el polipéptido y (b) medir la
cantidad de polipéptido que está unido al soporte. El ligando,
preferiblemente escogido de entre el grupo que consiste de ácido
nucleicos, péptidos, polipéptidos, anticuerpos y aptámeros, está
preferiblemente presente en un soporte sólido en su forma
inmovilizada. Los materiales para la elaboración de soportes sólidos
son bien conocidos en la materia e incluye, entre otros, materiales
en columna comercialmente disponibles, cuentas de poliestireno,
cuentas de látex, cuentas magnéticas, partículas coloidales de
metal, chips y superficies de vidrio y/o sílice, tiras de
nitrocelulosa, membranas, láminas, duracitas, pocillos y paredes de
tiras de reacción, tubos de plástico etc. El ligando o agente puede
unirse a muchos transportadores diferentes. Ejemplos de
transportadores bien conocidos incluye vidrio, poliestireno, cloruro
de polivinilo, polipropileno, polietileno, policarbonato, dextrano,
nylon, amilosas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas,
agarosas, y magnetita. La naturaleza del transportador puede ser
soluble o insoluble para el propósito de la invención. Los métodos
adecuados para fijar/inmovilizar dicho ligando son bien conocidos e
incluyen, pero no se limitan a interaccioines iónicas, hidrofóbicas,
covalentes y similares. También se contempla el uso de "matriz en
suspensión" como matrices de acuerdo con la presente invención
(Nolan JP, Sklar LA. (2002). Suspension array technology: evolution
of the flat-array paradigm. Trends Biotechnol.
20(1):9-12). En dichas matrices en
suspensión, el transportador, por ejemplo, una microcuenta o
microesfera, está presente en suspensión. La matriz consta de
diferentes microcuentas o microesferas, posiblemente marcadas, que
llevan diferentes ligandos. Los métodos para producir dichas
matrices, por ejemplo en base a la química en fase sólida y grupos
protectores foto lábiles, se conocen en general (US 5.744.305).
El término "cantidad" tal como se utiliza
aquí abarca la cantidad absoluta de NT-proBNP o
cualquier otro polipéptido referido aquí, la cantidad relativa o
concentración de NT-proBNP o cualquier otro
polipéptido referido aquí así como cualquier valor o parámetro que
se correlaciona con ellos. Dichos valores o parámetros comprenden
los valores de intensidad de señal de todas las propiedades
específicas físicas o químicas obtenidas del polipéptido referido
aquí mediante mediciones directas, por ejemplo, valores de
intensidad en el espectro de masas o espectro de RMN. Además, se
abarcan todos los valores o parámetros que se obtienen mediante las
mediciones indirectas especificadas en cualquier parte de esta
descripción, por ejemplo, niveles de expresión determinados de los
sistemas de lectura biológicos en respuesta al polipéptido o
cualquier otro polipéptido referido aquí o intensidad de señales
obtenidas de los ligandos específicamente unidos. Debe entenderse
que los valores que se correlacionan con las cantidades
anteriormente mencionadas o parámetros pueden también obtenerse
mediante cualquier operación matemática estándar.
El término "NT-proBNP" está
relacionado con un polipéptido que comprende, preferiblemente, 76
aminoácidos de longitud que corresponde con la porción
N-terminal de la molécula NT-proBNP
humana. La estructura del BNP y NT-proBNP humano se
ha descrito ya en detalle en la técnica anterior, por ejemplo, WO
02/089657, WO 02/083913, Bonow 1996, New Insights into the cardiac
natriuretic peptides. Circulation 93: 1946-1950.
Preferiblemente, el NT-proBNP humano tal como se
utiliza aquí es el NT-proBNP humano como se describe
en PE 0 648 228 B1 o bajo el número de acceso del GeneBank
NP-002512.1; GI:4505433. Estos documentos anteriores
se incorporan aquí por referencia respecto a las secuencias
específicas de NT-proBNP y las variantes de las
mismas descritas allí.
EL NT-proBNP referido de acuerdo
con la presente invención además abarca las variantes alélicas y
otras de dicha secuencia específica para el
NT-proBNP humano descrito anteriormente.
Específicamente, están comprendidas variantes de polipéptidos que
presentan una identidad de aminoácidos de al menos un 60%, más
preferiblemente de al menos un 70%, de al menos un 80%, de al menos
un 90%, de al menos un 95%, de al menos un 98% o de al menos un 99%
de identidad al NT-proBNP humano. Sustancialmente
similar y también comprendidos son los productos de degradación
proteolíticos que aún son reconocidos mediante los métodos de
diagnóstico o mediante ligandos dirigidos contra los
correspondientes péptidos de longitud completa. También están
comprendidas las variantes de polipéptidos con deleciones de
aminoácidos, sustituciones, y/o adiciones si se compara con la
secuencia de aminoácidos de NT-proBNP humano siempre
que dichos polipéptidos posean las propiedades de
NT-proBNP. Las propiedades de
NT-proBNP referidas aquí son las propiedades
inmunológicas esenciales y/o biológicas. Preferiblemente, las
variantes de NT-proBNP poseen propiedades
inmunológicas (es decir, composición de epítopos) comparables a
aquellas de NT-proBNP. Así, las variantes serán
reconocibles por los medios anteriormente mencionados o ligandos
utilizados para la determinación de la cantidad de secuencias de
NT-proBNP específicas humanas referidas
anteriormente. Las propiedades biológicas y/o inmunológicas de
NT-proBNP pueden detectarse mediante el ensayo
descrito por Karl et al. (Karl 1999. Development of a novel,
N-Terminal-proBNP
(NT-proBNP) assay with a low detection limit. Scand
J Clin Invest 59:177-181), Yeo et al. (Yeo
2003. Multicenter evaluation of the Roche NT-proBNP
assay and comparision to the Biosite Triage assay. Clinica Chimica
Acta 338:107-115). Las variantes también incluyen
NT-proBNP modificados después de la traducción como
variantes glicosiladas, miristiladas o fosforiladas.
Una variante de acuerdo con la presente
invención es también un péptido o un polipéptido que ha sido
modificado tras la recogida de la muestra, por ejemplo mediante
unión covalente o no covalente de un marcaje, particularmente un
marcaje radioactivo o fluorescente, al péptido.
El término "muestra" se refiere a una
muestra de fluido corporal, a una muestra de células separadas o a
una muestra de un tejido o un órgano. Las muestras de fluidos
corporales pueden obtenerse mediante técnicas bien conocidas e
incluyen, preferiblemente, muestras de sangre, plasma, suero u
orina. Las muestras de tejido u órganos pueden obtenerse a partir
de cualquier tejido u órgano mediante, por ejemplo, biopsia. Las
células aisladas pueden obtenerse a partir de los fluidos
corporales o de tejido u órgano mediante técnicas de separación
como la centrifugación o selección de células.
La comparación tal como se utiliza aquí
comprende comparar la cantidad de NT-proBNP o
cualquier otro polipéptido referido aquí comprendido por la muestra
a analizar con una cantidad de una fuente de referencia adecuada
especificada más adelante en esta descripción. Debe entenderse que
comparar, tal como se utiliza aquí, se refiere a la comparación de
los parámetros correspondientes o valores, por ejemplo, una cantidad
absoluta se compara con una cantidad de referencia absoluta
mientras que una concentración se compara con una concentración de
referencia o una intensidad de señal obtenida de una muestra de
pruebas se compara con el mismo tipo de intensidad de señal de una
muestra de referencia. La comparación referida en el paso (b) del
método de la presente invención puede llevarse a cabo manualmente o
asistido por ordenador. Para una comparación asistida por
ordenador, el valor de la cantidad determinada puede compararse a
los valores correspondientes a las referencias adecuadas que se
almacenan en una base de datos mediante un programa de ordenador. El
programa de ordenador puede además evaluar el resultado de la
comparación, es decir, proporciona automáticamente un diagnóstico
diferencial para las enfermedades referidas aquí en un formato de
salida adecuado.
El término "cantidad de referencia" tal
como se utiliza aquí se refiere a una cantidad que permite evaluar
si un sujeto sufre cualquiera de las anteriormente mencionadas
enfermedades o trastornos mediante una comparación como se ha
referido anteriormente. De acuerdo con esto, la referencia puede
derivar de un sujeto conocidos que padece un embolismo pulmonar
único o embolismo pulmonar múltiple. Debe entenderse que si se
utiliza una referencia de un sujeto que padece un embolismo
pulmonar único, una cantidad de NT-proBNP en una
muestra de un sujeto prueba que es esencialmente idéntica a dicha
cantidad de referencia será indicativa de un embolismo pulmonar
único. De forma similar, si se utiliza una referencia de un sujeto
conocido que padece un embolismo pulmonar múltiple, una cantidad de
NT-proBNP en una muestra de un sujeto prueba que es
esencialmente idéntica a dicha cantidad de referencia será
indicativa de un embolismo pulmonar múltiple. La cantidad de
referencia aplicable para un sujeto individual puede variar
dependiendo de varios parámetros fisiológicos como la edad, género,
o subpoblación. Así, una cantidad de referencia adecuada puede
determinarse mediante el método de la presente invención a partir
de una muestra de referencia a analizar en conjunto, es decir, de
forma simultánea o posteriormente, con la muestra prueba. Se ha
encontrado que una cantidad de un NT-proBNP superior
que un umbral (es decir, una cantidad de referencia) de 6 a 12
veces el límite superior de lo normal (ULN), es indicativo de un
embolismo pulmonar múltiple. Una cantidad inferior al umbral es
indicativa de un embolismo pulmonar único. Preferiblemente, el ULN
es de 80 a 150 pg/ml y, más preferiblemente, de 125 pg/ml. Más
preferiblemente, la cantidad de referencia es 1000 pg/ml. Debe
entenderse que las cantidades anteriormente mencionadas pueden
variar debido a la estadística y a los errores de medición.
De forma ventajosa, se ha detectado que la
cantidad de NT-proBNP presente en la muestra de un
sujeto que muestra los síntomas clínicos indicativos de un episodio
de embolismo pulmonar agudo permite el diagnóstico diferencial
respecto a la causa de dichos síntomas, es decir, puede
diagnosticarse tanto si el embolismo pulmonar es único como si es
un embolismo pulmonar múltiple. Gracias a la presente invención, los
sujetos y, en particular, los pacientes de urgencia pueden
diagnosticarse de forma más fácil y segura y, en consecuencia,
pueden tratarse de acuerdo con el resultado de dicho diagnóstico
diferencial.
Las explicaciones y definiciones de los términos
que se han mencionado anteriormente y a continuación, se aplican
por igual en todas las realizaciones caracterizadas en esta
especificación y en las reivindicaciones.
Las siguientes realizaciones son realizaciones
particularmente preferibles del método de la presente invención.
En una realización preferible del método de la
presente invención, dicha cantidad de referencia está entre 6 y 12
veces el límite superior de normalidad (LSN) de
NT-proBNP. Más preferiblemente, dicho LSN es de 125
pg/ml.
En otra realización preferible del método de la
presente invención dicha cantidad de referencia es de 1000
pg/ml.
En una realización preferible del método de la
presente invención, dicho método además comprende los pasos de:
c) determinar la cantidad de
NT-proANP en dicha muestra de forma simultanea a la
cantidad de NT-proBNP del paso a);
d) determinar la cantidad de
NT-proANP en otra muestra de dicho sujeto, siendo
esta muestra adicional de un momento posterior en el tiempo;
e) comparar la cantidad de
NT-proANP determinada en el paso d) con la cantidad
de NT-proANP determinada en el paso c), siendo
indicativa de un embolismo pulmonar agudo una disminución de
NT-proANP.
Por "simultáneamente", tal como se utiliza
aquí, debe entenderse que la cantidad de NT-proANP
debe determinarse al mismo tiempo que la cantidad de
NT-proBNP. La cantidad de NT-proANP
puede determinarse en la misma muestra que la cantidad de
NT-proBNP. Alternativamente, puede determinarse en
una muestra diferente. No obstante, dicha muestra diferente puede
obtenerse del mismo sujeto al mismo tiempo que la muestra utilizada
para la determinación de NT-proBNP.
El término "NT-proANP"
utilizado de acuerdo con la presente invención posee una secuencia
de aminoácidos de 98 aminoácidos de longitud que corresponden a la
porción N-terminal de la molécula de
NT-proANP humana. La estructura de ANP y
NT-proANP humanas ya se ha descrito en detalle en
anterior bibliografía, por ejemplo, Bonow 1996, New Insights into
the cardiac natriuretic peptides. Circulation 93:
1946-1950. Preferiblemente, la
NT-proANP humana tal como se utiliza aquí es la
NTproANP humana como se describe en el número de registro de
GeneBank NP 006163.1; GI:23510319. Estos documentos bibliográficos
se incorporan aquí como referencia relacionados con las secuencias
específicas de NT-proANP y las variantes de la misma
descritas aquí.
La NT-proANP de acuerdo con la
presente invención comprende además las variantes alélicas y otras
variantes de dicha secuencia específica de
NT-proANP humana anteriormente mencionada.
Específicamente, quedan incluidas las variantes polipeptídicas a
nivel de aminoácido con al menos un 60% de identidad, más
preferiblemente con al menos un 70%, con al menos un 80%, con al
menos un 90%, con al menos un 95%, con al menos un 98% o con al
menos un 99% de identidad con la NT-proANP humana.
Son sustancialmente similares y también se incluyen los productos
de degradación proteolítica que siguen siendo reconocibles mediante
métodos diagnósticos o mediante ligandos dirigidos contra el
respectivo péptido completo. También se contemplan las variantes
polipeptídicas con deleciones de aminoácidos, sustituciones y/o
adiciones comparado con la secuencia de aminoácidos de la
NT-proANP humana siempre que dichos polipéptidos
posean las propiedades de NT-proANP. Las propiedades
de NT-proANP referidas aquí son las propiedades
inmunológicas y/o biológicas esenciales. Preferiblemente, las
variantes de NT-proANP poseen propiedades
inmunológicas (es decir, la composición de epítopos) comparables a
las de NT-proANP. Así, las variantes deben ser
reconocibles por los anteriormente mencionados métodos o ligandos
utilizados para la determinación de la cantidad de las anteriormente
mencionadas secuencias específicas de la NT-proANP
humana. Las propiedades inmunológicas y/o biológicas de
NT-proANP pueden detectarse mediante el ensayo
descrito en Ruskoaho, 2003, Endocrine Reviews 24(3):
341-356. Las variantes también incluyen las
NT-proANP modificadas a nivel
post-traduccional como las variantes glucosiladas,
miristiladas o fosforiladas.
También es una variante de acuerdo con la
presente invención un péptido o polipéptido que se ha modificado
tras la recogida de la muestra, por ejemplo mediante la unión
covalente o no covalente de un marcaje, particularmente un marcaje
radioactivo o fluorescente del péptido.
De acuerdo con el método preferible mencionado
anteriormente, debe proporcionarse una muestra adicional del
sujeto, habiéndose obtenido esta muestra adicional de dicho sujeto
en un momento posterior. El periodo de tiempo debe ser el
suficiente como para permitir la degradación de la
NT-proANP, que se proporciona en exceso como
respuesta a un episodio de embolismo pulmonar agudo.
Preferiblemente, dicho periodo de tiempo es al menos de 2 horas, 4
horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11
horas o 12 horas.
El término "disminución" tal como se
utiliza aquí se refiere a una disminución significativa de la
cantidad de NT-proANP entre las muestras
comparadas. Si una disminución en la cantidad es significativa,
puede determinarse mediante las técnicas estadísticas que se
indican en otro apartado de esta especificación. Preferiblemente,
una disminución tal como se utiliza aquí es una disminución en la
cantidad de al menos un 10%, al menos un 15%, al menos un 20%, al
menos un 25%, al menos un 30%, al menos un 35%, al menos un 40%, al
menos un 45% o al menos un
50%.
50%.
En los estudios que originan la presente
invención Se ha detectado que una disminución significativa en la
cantidad de NT-proANP en la sangre de un sujeto tras
un episodio de embolismo pulmonar agudo es indicativa de un
embolismo pulmonar agudo. Si la cantidad de
NT-proANP, no obstante, aumenta o permanece
aproximadamente en el mismo nivel (es decir, no aparece una
reducción significativa), el embolismo pulmonar no debe considerarse
agudo y, por lo tanto, debe considerarse crónico. Debe entenderse
que la presente invención también está relacionada, en principio,
con la utilización de NT-proANP y
NT-proBNP o los métodos para la determinación de
NT-proANP y los métodos para la determinación de
NT-proBNP para la elaboración de una composición
diagnóstica para diferenciar entre un embolismo pulmonar agudo o
crónico. Dichas composiciones diagnósticas o métodos deben ser
útiles para realizar los métodos de acuerdo con la presente
invención.
De lo anterior se deriva que la presente
invención también incluye un método de diferenciación entre el
embolismo pulmonar agudo y el crónico en un sujeto, que comprende:
a) determinar la cantidad de NT-proANP en la
muestra de un primer punto temporal de un sujeto que padece un
embolismo pulmonar; b) determinar la cantidad de
NT-proANP en una muestra de un segundo punto
temporal tras un periodo de tiempo de un sujeto que padece un
embolismo pulmonar; y c) comparar la cantidad de
NT-proANP determinada en el paso a) con la cantidad
de NT-proANP determinada en el paso b), en el que
una disminución de NT-proANP es indicativa de un
embolismo pulmonar agudo.
Preferiblemente, dicho periodo de tiempo es de
al menos 2 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9
horas, 10 horas, 11 horas o 12 horas.
En una realización preferible del método de la
presente invención, dicho método además comprende la determinación
simultanea de la cantidad de NT-proBNP en el paso a)
y b) junto con la cantidad de NT-proANP y la
comparación de las cantidades de NT-proBNP del paso
a) con la cantidad de NT-proBNP determinada en el
paso b), en el que un aumento de NTproBNP es además indicativo de
embolismo pulmonar agudo.
Específicamente, se ha detectado que un episodio
de embolismo agudo puede confirmarse además a nivel bioquímico
mediante un aumento de la cantidad de NT-proBNP
determinada tras un periodo de tiempo en relación a lo anterior.
Así, mientras la cantidad de NT-proANP tras dicho
periodo de tiempo disminuye en los sujetos que padecen un embolismo
pulmonar agudo, la cantidad de NT-proBNP
aumentará.
Además, la presente invención está relacionada
con un método para seleccionar una terapia adecuada para el
embolismo pulmonar que comprende los pasos del método de la presente
invención y el paso adicional de seleccionar una terapia adecuada
basada en el diagnóstico obtenido mediante el método anteriormente
mencionado.
Como se ha discutido anteriormente, las
intervenciones terapéuticas que son necesarias difieren según sea
un embolismo pulmonar agudo o crónico así como entre un embolismo
pulmonar único o múltiple. Específicamente, si el diagnóstico es un
embolismo pulmonar único y/o agudo, la terapia adecuada es la lisis
del trombo mediante fármacos de acción trombolítica. La eliminación
del trombo mediante cirugía es la terapia preferible para el
embolismo pulmonar múltiple. Los fármacos de acción trombolítica que
pueden ser adecuados en una terapia como la anteriormente
mencionada son, preferiblemente, los activadores de plasminógeno
tisulares recombinantes (rtPA).
Gracias a la presente invención puede
distinguirse fácilmente entre embolismo pulmonar agudo y crónico, y
entre único y múltiple. Así, puede proporcionarse inmediatamente una
terapia adecuada que, en el caso particular de los pacientes de
urgencias, puede reducir significativamente la tasa de mortalidad
debida al embolismo pulmonar.
La presente invención también está relacionada
con la utilización de un dispositivo adaptado para realizar el
método de la presente invención, que comprende: a) métodos para
determinar la cantidad de NT-proANP; b) métodos
para determinar la cantidad de NT-proBNP; y/o c)
métodos para comparar las cantidades de NT-proANP y
NT-proBNP.
El término "dispositivo" tal como se
utiliza aquí está relacionado con un sistema de métodos que
comprenden al menos los métodos anteriormente mencionados unidos de
forma operativa entre ellos para dar lugar a la predicción. Los
métodos preferibles para determinar la cantidad de dichos
polipéptidos y los métodos para realizar la comparación se han
descrito anteriormente en relación con el método de la invención.
Como ligar los métodos de forma operativa dependerá del tipo de
métodos incluidos en el dispositivo. Por ejemplo, en el caso de que
se apliquen métodos para la determinación automática de la cantidad
de péptidos, los datos obtenidos mediante tales métodos que operan
automáticamente pueden procesarse mediante, por ejemplo, un programa
informático para diagnosticar o distinguir entre las enfermedades
aquí tratadas. Preferiblemente, en tal caso los métodos están
incluidos en un solo dispositivo. Tal dispositivo, de acuerdo con
esto, puede incluir una unidad de análisis para la medida de la
cantidad de péptidos en una muestra y una unidad de computerización
para procesar los datos resultantes para el diagnóstico
diferencial. Alternativamente, si se utilizan métodos como las tiras
analíticas para la determinación de la cantidad de péptidos, los
métodos para el diagnóstico pueden comprender las tiras o tablas
control que sitúan la cantidad determinada en relación a una
cantidad conocida como (i) un embolismo pulmonar agudo o crónico y
(ii) como un embolismo pulmonar único o múltiple. Las tiras
analíticas, preferiblemente, se acoplan a un ligando que se une
específicamente al péptido natriurético o la proteína surfactante
pulmonar. La tira o dispositivo, preferiblemente, comprende los
métodos para la detección de la unión de dichos péptidos a dicho
ligando. Los métodos preferibles para la detección se describen en
relación con las realizaciones relacionadas con el método de la
invención anterior. En tal caso, los métodos están ligados de forma
operativa de forma que el usuario del sistema relaciona el
resultado de la determinación de la cantidad y el valor diagnóstico
de la misma gracias a las instrucciones e interpretaciones que se
proporcionan en un manual. Los métodos pueden aparecer como
dispositivos separados en esta realización y, preferiblemente, se
empaquetan juntos como un equipo. El experto en la materia sabrá
como relacionar los métodos sin mayores problemas. Los dispositivos
preferibles son aquellos que pueden utilizarse sin el conocimiento
concreto de un clínico especializado, por ejemplo, los dispositivos
electrónicos o de tiras analíticas que simplemente requieren la
carga de una muestra. Los resultados pueden proporcionarse como una
salida de datos brutos del parámetro de diagnóstico,
preferiblemente, en cantidades absolutas o relativas. Debe
entenderse que estos datos necesitarán de la interpretación del
clínico. No obstante, también se incluyen los dispositivos con
sistemas para expertos en los que los datos de salida comprenden
los datos brutos de diagnóstico procesados, cuya interpretación no
requiere un clínico especializado. Otros dispositivos preferibles
comprenden las unidades/dispositivos de análisis (por ejemplo,
biosensores, chips, soportes sólidos acoplados a ligandos que
reconocen específicamente los polipéptidos, dispositivos de
resonancia de plasmón en superficie, espectrómetros de NMR,
espectrómetros de masas, etc.) o unidades/dispositivos de
evaluación mencionados anteriormente de acuerdo con el método de la
invención.
Por "escogido para realizar" debe
entenderse que el dispositivo es capaz de realizar automáticamente
los métodos anteriormente mencionados. De tal elección, se deriva
que el dispositivo comprende las reglas implementadas para realizar
la comparación entre la cantidad determinada de
NT-proBNP y una cantidad de referencia que puede
haberse determinado también mediante el dispositivo a partir de una
muestra de referencia o que puede existir virtualmente como un
valor almacenado. Además, el dispositivo puede comprender reglas
implementadas para la determinación de una disminución
significativa de la cantidad de NT-proANP entre al
menos dos muestras diferentes (es decir la muestra de un primer y
de un segundo momento temporal). La implementación de tales reglas
en el dispositivo, preferiblemente, se consigue mediante un
algoritmo proporcionado en forma de código de programa informático
almacenable que se ejecuta en un computador o unidad de
procesamiento de datos.
Finalmente, la presente invención está
relacionada con la utilización de un equipo para realizar el método
de la presente invención que comprende: a) métodos para determinar
la cantidad de NT-proANP; b) métodos para
determinar la cantidad de NT-proBNP; y/o c) métodos
para comparar las cantidades de NT-proANP y
NT-proBNP; y d) instrucciones para realizar los
métodos anteriormente mencionados.
El término "equipo" tal y como se utiliza
aquí se refiere a la recogida de los métodos anteriormente
mencionados, preferiblemente, proporcionados por separado o en un
único contenedor. El contenedor, preferiblemente, también comprende
instrucciones para realizar el método de la presente invención. La
invención, así, está relacionada con la utilización de un equipo
que comprende un método o un agente para la medida de un péptido
tipo BNP (es decir, NT-proANP o
NT-proBNP). Tales métodos o agentes pueden ser
cualquier método o agente adecuado conocido por el experto en la
materia. Ejemplos de tales métodos o agentes, así como los métodos
para su utilización se han proporcionado en esta especificación.
Por ejemplo, un agente adecuado puede ser cualquier tipo de ligando
o anticuerpo capaz de unirse específicamente a un polipéptido como
los descritos aquí anteriormente. El equipo también puede
comprender cualquier otro componente que se considere apropiado en
el contexto de la determinación de la(s) cantidad(es)
de los respectivos biomarcadores, como los tampones, filtros, etc.
adecuados. Preferiblemente, el equipo puede comprender
adicionalmente unas instrucciones, por ejemplo, un manual del
usuario para la interpretación de los resultados de cualquier
determinación respecto al diagnóstico proporcionado por los métodos
de la presente invención. En particular, tal manual puede incluir
la información para relacionar las cantidades determinadas de los
polipéptidos y el tipo de diagnóstico, es decir, con un embolismo
pulmonar único o múltiple, o con un embolismo pulmonar agudo o
crónico. Los detalles pueden encontrarse en otro lugar en esta
especificación. Adicionalmente, tal manual del usuario puede
proporcionar instrucciones sobre la utilización correcta de los
componentes del equipo para la determinación de la(s)
cantidad(es) del respectivo biomarcador. Un manual del
usuario puede proporcionarse en formato papel o electrónico, por
ejemplo, almacenado en un CD o CD ROM. La presente invención está
relacionada con la utilización de dicho equipo en cualquiera de los
métodos de acuerdo con la presente invención.
La Figura muestra: se muestran gráficos de cajas
de las cantidades de NT-proBNP y
NT-proANP en muestras de sangre de pacientes
tomadas en el momento de la admisión (0 horas, línea basal), ocho
horas y 24 horas tras la admisión. También se indican la mediana y
los percentiles 95, 75, 25 y 5. Las cantidades correspondientes
(pg/ml) se encuentran bajo los gráficos de cajas.
Los siguientes Ejemplos son meramente
ilustrativos de la invención. En ningún caso debe considerarse como
limitante del alcance de la invención.
Ejemplo
Se incluyó en el estudio un total de 34
pacientes con sospecha de embolismo pulmonar. Se realizó a todos los
pacientes una tomografía axial computerizada a las 4 horas tras la
presentación a la sala de emergencias.
Los paciente con embolismo pulmonar agudo pero
sin embolismo pulmonar previo (es decir, embolismo pulmonar único)
se encontró en la tomografía axial computerizada de los grupos 1 y 2
(véase Tabla 1). En el grupo 3 de pacientes se detectó embolismo
pulmonar múltiple mediante tomografía axial computerizada incluyendo
enfermedad de arterias pulmonares de diferentes tamaños (véase
Tabla 1). El grupo 1 y el grupo 2 difieren de los asignados al
grupo 3 en que tienen niveles de NT-proBNP por
debajo de 1000 pg/ml.
En el grupo 1, un descenso en los valores de
NT-proANP en más de un 10% se asoció con un aumento
significativo de los niveles de NT-proBNP. En el
grupo 2, un aumento de NT-proANP se asoció con un
aumento de los niveles de NT-proBNP.
Por lo tanto en el grupo 1 los pacientes tienen
un embolismo pulmonar agudo como lo indica el descenso de
NT-proANP seguido del aumento significativo en
NT-proBNP que está de acuerdo con el resultado de la
tomografía axial computerizada. En el grupo 2, los niveles de
NTproANP y NT-proBNP aumentaron, lo que indica una
evolución prolongada del embolismo pulmonar que fue de nuevo
consistente con el resultado de la tomografía axial computerizada.
El grupo 2 de pacientes no mejoró en lo referente a los
síntomas.
Los pacientes del grupo 3 mostraron respuestas
variables, un embolismo pulmonar prolongado se vio en cinco
pacientes lo que se asoció con un aumento de los niveles de
NT-proANP y NT-proBNP. En 10
pacientes, el episodio agudo no pudo verificarse, los embolismos
pulmonares previos se diagnosticaron mediante tomografía axial
computerizada. Esto se asoció con tan solo pequeños cambios en los
niveles de proANP y NT-proBNP.
El descenso de proANP se advirtió en 11
pacientes. En este grupo de pacientes variable se reconocieron
respuestas variables que incluyen un episodio pulmonar agudo menor
así como la resolución de la enfermedad bajo una terapia de
heparina.
En el presente estudio, los niveles de
NT-proBNP y NT-proANP se midieron en
muestras de sangre. Para la determinación de
NT-proBNP, se utilizó el test de Elecsys^{TM}
(Roche Diagnostics, Alemania). Los niveles de
NT-proANP se determinaron utilizando el ELISA de
proANP (Biomedica, Austria).
Los resultados del estudio se muestran también
en las siguientes tablas:
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (16)
1. Un método para diferenciar entre un embolismo
pulmonar múltiple y uno único en un sujeto del que se sospecha que
padece un embolismo pulmonar agudo y que muestra una falta aguda de
aliento, condiciones similares al colapso y/o dolor de pecho que
comprende a) determinar la cantidad de NT-pro BNP en
una muestra del sujeto del que se sospecha que padece un embolismo
pulmonar agudo y que muestra una falta aguda de aliento, condiciones
similares al colapso y/o dolor de pecho; y b) comparar la cantidad
determinada en el paso a) con una cantidad de referencia, en el que
una cantidad inferior a la cantidad de referencia es indicativa de
un embolismo pulmonar único y una cantidad superior a la cantidad
de referencia es indicativa de un embolismo pulmonar múltiple.
2. El método de la reivindicación 1, en el que
dicha cantidad de referencia está entre 6 y 12 veces el límite
superior de normalidad (LSN) de NT-pro BNP.
3. El método de la reivindicación 2, en el que
el LSN es 125 pg/ml.
4. El método de cualquiera de las
reivindicaciones de 1 a 3, en el que dicha cantidad de referencia es
de
1000 pg/ml.
1000 pg/ml.
5. El método de cualquiera de las
reivindicaciones de 1 a 4, que además comprende los pasos de: c)
determinar la cantidad de NT-pro ANP en dicha
muestra de forma simultanea a la cantidad de NT-pro
BNP del paso a); d) determinar la cantidad de
NT-pro ANP en una muestra adicional de dicho sujeto,
siendo dicha muestra adicional de un momento posterior; e) comparar
la cantidad de NT-pro ANP determinada en el paso d)
con la cantidad de NT-pro ANP determinada en el
paso c), en el que una disminución de NT-pro ANP es
indicativa de un embolismo pulmonar agudo.
6. El método de la reivindicación 5, en el que
dicho periodo de tiempo es al menos de 2 horas, 4 horas, 5 horas, 6
horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas o 12 horas.
7. Un método para diferenciar entre un embolismo
pulmonar agudo y crónico en un sujeto que sufre un embolismo
pulmonar y muestra una falta aguda de aliento, condiciones similares
al colapso y/o dolor de pecho y que comprende: a) determinar la
cantidad de NT-pro ANP en la muestra de un sujeto
que sufre un embolismo pulmonar, de un primer momento temporal; b)
determinar la cantidad de NT-pro ANP en la muestra
de un sujeto que sufre un embolismo pulmonar, de un segundo momento
temporal tras un periodo de tiempo; y c) comparar la cantidad de
NT-pro ANP determinada en el paso a) con la
cantidad de NT-pro ANP determinada en el paso b), en
el que una disminución de NT-pro ANP es indicativa
de un embolismo pulmonar agudo.
8. El método de la reivindicación 7, en el que
dicho periodo de tiempo es de al menos 2 horas, 4 horas, 5 horas, 6
horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas o 12 horas.
9. El método de la reivindicación 7 o 8, en el
que dicho método además comprende la determinación simultanea de la
cantidad de NTpro BNP del paso a) y b) junto con la cantidad de
NT-pro ANP y la comparativa de las cantidades de
NT-pro ANP del paso a) con la cantidad de
NT-pro BNP determinada en el paso b), en el que un
aumento de NT-pro BNP es indicativo de un embolismo
pulmonar agudo.
10. El método de cualquiera de las
reivindicaciones de 1 a 9, en el que dicha muestra es sangre, suero
o plasma.
11. El método de cualquiera de las de
reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho sujeto es un humano.
12. Un método para seleccionar una terapia
adecuada para el embolismo pulmonar que comprende los pasos del
método de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 11 y el paso
adicional de seleccionar una terapia adecuada basada en el
diagnóstico obtenido mediante el método anteriormente
mencionado.
13. El método de la reivindicación 12, en el que
la terapia adecuada es la lisis del trombo mediante fármacos de
acción trombolítica si el diagnóstico es un embolismo pulmonar único
y/o agudo.
14. El método de la reivindicación 12, en el que
la terapia adecuada es la eliminación del trombo mediante cirugía
si el diagnóstico es un embolismo pulmonar múltiple.
15. La utilización de un dispositivo para
diferenciar entre embolismo pulmonar único y múltiple o entre
crónico y agudo para realizar el método de cualquiera de las
reivindicaciones de 1 a 14, que comprende a) métodos para
determinar la cantidad de NT-pro ANP; b) métodos
para determinar la cantidad de NT-pro BNP; y c)
métodos para comparar las cantidades de NT-pro ANP y
NT-pro BNP.
16. La utilización de un equipo para diferenciar
entre embolismo pulmonar único y múltiple o entre crónico y agudo
para realizar el método de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a
14 que comprende a) métodos para determinar la cantidad de
NT-pro ANP; b) métodos para determinar la cantidad
de NT-pro BNP; c) métodos para comparar las
cantidades de NT-pro ANP y NT-pro
BNP; y d) instrucciones para realizar los métodos anteriormente
mencionados.
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