ES2338256T3

ES2338256T3 - Procedimiento de formacion de complejos y procedimiento de separacion.

Info

Publication number: ES2338256T3
Application number: ES06802235T
Authority: ES
Inventors: Tomohisa Kawabata; Shinji Satomura; Henry Garrett Wada
Original assignee: Wako Pure Chemical Industries Ltd
Current assignee: Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Priority date: 2005-09-02
Filing date: 2006-08-24
Publication date: 2010-05-05
Anticipated expiration: 2026-08-24
Also published as: CN101300488B; JP5257072B2; EP1920255B1; DE602006011756D1; US20090152114A1; JP2009507223A; US9429572B2; ATE455302T1; CN101300488A; EP1920255A1; CA2620403A1; WO2007027495A1

Abstract

Un procedimiento para separar un complejo que comprende las siguientes etapas: (1) una etapa de disponer (a) una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una sustancia capaz de formar el complejo con dicho analito o dicho análogo del mismo (la sustancia formadora de complejos), como cada zona separada en un capilar, de manera que al aplicar un voltaje a dicho capilar se forma el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejos, en el que entre dichas disoluciones, una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja; (2) una etapa de poner en contacto dicho analito o dicho análogo del mismo con la sustancia formadora de complejos por medio de la utilización de las diferencias en la movilidad electroforética, concentrando al mismo tiempo dicho analito o dicho análogo del mismo y/o al menos un tipo de sustancia formadora de complejos electroforéticamente, juntando dicho analito o dicho análogo del mismo y/o dicha sustancia formadora de complejos tras la aplicación de un voltaje en un capilar al aplicar un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones para formar el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejos; y (3) una etapa de separar dicho complejo, y la sustancia formadora de complejos no involucrada en la formación de dicho complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo por otro movimiento eléctrico.

Description

Procedimiento de formación de complejos y procedimiento de separación.

Antecedente de la invención Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende formar un complejo entre un analito o un análogo del mismo en una muestra, y una sustancia capaz de formar un complejo con dicho analito o su análogo (abreviado a continuación en el presente documento como sustancia formadora de complejo o SFC), un procedimiento para separar un complejo formado y una SFC o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, junto con un procedimiento para medir un analito en una muestra, basándose en la cantidad de un complejo separado, o en la cantidad de una SFC o un análogo no involucrado en la formación de un complejo.

Técnica anterior

El análisis de un analito en una muestra usualmente requiere mezclar una pluralidad de disoluciones tales como una muestra y diversas disoluciones de reactivos (por ejemplo, una disolución de reactivos que incluye un anticuerpo contra un analito, una disolución de reactivos que contiene una sustancia marcadora), y someter un analito en una muestra y un reactivo en una disolución de reactivos (un anticuerpo contra un analito o una sustancia marcadora) a una reacción.

En el micro Sistema de Análisis Total (\mu-TAS) que usa dispositivos de microfluídica, en el que recientemente se ha estado desarrollando su tecnología y sobre el que se han realizado diversas investigaciones, se ha descubierto un procedimiento para mezclar previamente esta pluralidad de disoluciones y para someterlas a una reacción fuera de un capilar (canal), introduciendo a continuación la disolución mezclada en un capilar (canal), o un procedimiento para introducir simultáneamente una pluralidad de disoluciones en un capilar mezclador (canal) para llevar a cabo la mezcla y la reacción (documento JP-A-2005-31070).

Sin embargo, en el procedimiento anterior, es necesaria una muestra o una disolución de reactivos en una cantidad del orden de microlitros (\mul) para realizar la mezcla por adelantado, perdiendo así la ventaja del \mu-TAS, a saber la posibilidad del microanálisis de una muestra o una disolución de reactivos en una cantidad del orden de nanolitros (nl) hasta picolitros (pl). Además, en el último procedimiento, el flujo laminar generado en un capilar tras la introducción hace difícil la mezcla de una pluralidad de disoluciones, dando como resultado la necesidad de depender de la difusión molecular, que plantea un problema tal como, en el caso de mezclar una pluralidad de disoluciones con diferente peso molecular o viscosidad, la variación del tiempo de mezcla completa de estas disoluciones por la variación del coeficiente de difusión, o la variación en la relación de la viscosidad de las disoluciones a mezclar varía la relación de volúmenes de una pluralidad de disoluciones a introducir en un canal, dando como resultado la variación de la relación de mezcla según los tipos de disoluciones a mezclar, que plantea el problema de hacer imposible la mezcla en una relación de mezcla constante.

Además, como procedimientos diferentes del anterior, existen procedimientos dados a conocer en Bao, J. M, Regnier, F. E, J. Chromatogr. 1992, 608, 217-224 o Documento JP-A-10-512371.

S. Kiessig y col. J. Chromatogr. A 1999, 853, 469-477 describen la evaluación de la formación de complejos entre ciclofilina y ciclosporina A o sus derivados (CsH y bCsA). En este enfoque, las características de la electroforesis capilar de afinidad (ACE) se combinaron con la técnica de microanálisis mediada electroforéticamente (EMMA).

El Documento US 5958202 da a conocer la determinación de analitos por medio de electroforesis capilar. En la misma, se forma un complejo entre un analito y un competidor que lleva un resto de biorreconocimiento fuera del capilar. Posteriormente, el aducto-analito-competidor se detecta por medio de una funcionalidad enzimática del competidor que al reaccionar con un sustrato en el dispositivo analítico consume o forma un producto detectable.

En estos procedimientos, en un capilar para análisis, se dispone una disolución que incluye una molécula con movilidad electroforética más elevada detrás de una disolución que contiene una molécula con movilidad electroforética más baja, de modo que una molécula con una movilidad electroforética más elevada alcanza a una molécula con movilidad electroforética más baja, por la aplicación de un campo eléctrico, por el que se lleva a cabo una reacción entre estas mismas moléculas. Estos procedimientos hacen posible la mezcla molecular de manera uniforme y en un tiempo corto comparado con los procedimientos de mezcla convencionales que dependen de la difusión molecular.

Sin embargo, estos procedimientos no son satisfactorios en eficacia de reacción y son necesarias contramedidas para asegurar suficiente eficacia de reacción para detectar un analito en una muestra con alta sensibilidad, por ejemplo, aumentar la concentración de moléculas a proporcionar a una reacción, o prolongar el tiempo de reacción retardando la velocidad de movimiento molecular por electroforesis.

Descripción de la invención Problemas a resolver por la invención

La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende formar un complejo entre dicho analito o su análogo y dicha SFC en un tiempo corto y con alta eficacia de reacción, a un procedimiento para separar un complejo formado y a una SFC o su análogo no involucrado en la formación de dicho complejo de manera rápida, fácil y con un alto grado de precisión, junto con un procedimiento para medir un analito en una muestra con alta sensibilidad.

Medios para resolver los problemas

La presente invención está compuesta por el siguiente esquema:

(I) Un procedimiento para separar un complejo que comprende las siguientes etapas:

(1) una etapa de disponer (a) una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una sustancia capaz de formar el complejo con dicho analito o dicho análogo del mismo (la sustancia formadora de complejos), como cada zona separada en un capilar, de manera que al aplicar un voltaje a dicho capilar se forma el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejos, en el que entre dichas disoluciones, una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja;

(2) una etapa de poner en contacto dicho analito o dicho análogo del mismo con la sustancia formadora de complejos por medio de la utilización de las diferencias en la movilidad electroforética, concentrando al mismo tiempo dicho analito o dicho análogo del mismo y/o al menos un tipo de sustancia formadora de complejos electroforéticamente, juntando dicho analito o dicho análogo del mismo y/o dicha sustancia formadora de complejos tras la aplicación de un voltaje en un capilar al aplicar un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones para formar el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejos; y

(3) una etapa de separar dicho complejo y la sustancia formadora de complejos no involucrada en la formación de dicho complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo por otro movimiento eléctrico.

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(II) El procedimiento de la forma de realización (I) anterior para medir un analito que además comprende:

(4) una etapa de medir la cantidad del complejo separado de esa manera, o la cantidad de la sustancia formadora de complejos o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo para determinar la cantidad de dicho analito basándose en el resultado.

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(III) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que la etapa (3) se lleva a cabo usando un principio de electroforesis diferente del usado en la etapa (2) y/o cambiando la intensidad de voltaje a aplicar, de la utilizada en la etapa (2).

(IV) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que la etapa (3) se lleva a cabo en una región de separación independiente de una parte donde se lleva a cabo la etapa (2) en dicho capilar.

(V) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que dicho analito o dicho análogo del mismo y/o al menos un tipo de sustancia formadora de complejos se concentran no menos de 1,5 veces como resultado de la aplicación del voltaje en la etapa (2).

(VI) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que la etapa (2) se lleva a cabo por ITP (isotacoforesis) o FASS (Apilación de muestras con amplificación de campo).

(VII) El procedimiento de la forma de realización (VI) anterior, en el que la etapa (3) se lleva a cabo por CGE (Procedimiento de electroforesis capilar en gel).

(VIII) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que no menos de un tipo de sustancia formadora de complejos está unido con una sustancia marcadora y/o una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo.

(IX) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que dicho análogo es uno unido con una sustancia marcadora o una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo.

(X) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que se usan no menos de dos tipos de sustancias formadoras de complejos, y se usan no menos de dos tipos de disoluciones que contienen cada una de tales sustancias formadoras de complejos, y (1) al menos un tipo de las sustancias formadoras de complejos es uno unido con una sustancia marcadora, y al menos un tipo de otra sustancia formadora de complejos es uno unido con una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo, o (2) al menos un tipo de las sustancias formadoras de complejos es uno unido con una sustancia marcadora y una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo.

(XI) El procedimiento de las formas de realización (I) o (II) anteriores, en el que un tipo de las sustancias formadoras de complejos es un anticuerpo contra dicho analito o dicho análogo del mismo, o una proteína que se une a dicho analito o dicho análogo del mismo.

A saber, los autores de la presente invención encontraron que disponiendo una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y una disolución que contiene una SFC, en un canal, sin mezclar previamente estas disoluciones, para formar un complejo entre dicho analito y análogo y la SFC, concentrando al mismo tiempo dicho analito o análogo del mismo y/o SFC electroforéticamente al aplicar un voltaje en este capilar, por medio de la utilización de las diferencias en la movilidad electroforética, dicho complejo puede formarse en un tiempo corto y con elevada eficacia de reacción usando sólo una cantidad ultra pequeña de una muestra de dicha disolución del orden de nanolitros (nl) a picolitros (pl), y sin tener en consideración la variación en la relación de mezcla causada por diferencia de viscosidad de una muestra y dicha disolución, y de esta manera tienen completa la presente invención.

Efecto de la invención

Según un procedimiento de la presente invención, puede llevarse a cabo una reacción entre un analito o un análogo del mismo en una disolución y una SFC en una disolución en un tiempo corto y con elevada eficacia de reacción. Como resultado, la separación de un complejo con una SFC, y una SFC o un análogo no involucrado en la formación de un complejo se vuelve posible de manera rápida, simple y con alta precisión y, además, se hace posible la medición de alta sensibilidad de un analito en una muestra, basándose en la cantidad de complejo separado o en la cantidad de una SFC o análogo no implicado en la formación de un complejo.

Mejores modos para llevar a cabo la invención 1. Un procedimiento que comprende formar un complejo de la presente invención

Un procedimiento de la presente invención está caracterizado porque (a) se introduce una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una disolución que contiene una SFC y se disponen en cada zona separada en un capilar, sin formar un complejo entre ellos mezclando previamente estas disoluciones fuera de un capilar, y posteriormente (b) se forma un complejo entre dicho analito o análogo del mismo y la SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito o análogo del mismo y/o la SFC electroforéticamente para que éstos se pongan en contacto aplicando un voltaje en dicho canal, antes de mezclar uniformemente estas disoluciones en un capilar.

Un procedimiento que comprende formar un complejo de la presente invención comprende específicamente la etapa (1) y la etapa (2) siguientes:

1-1. Una etapa de introducción [una etapa (1)]

Una etapa (1) de la presente invención es una etapa de introducir y disponer una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y disoluciones que contienen no menos de un tipo de SFC en un capilar, de modo que se forma un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar, y aplicando un voltaje en un capilar, a saber llevando a cabo una etapa (2) de la presente invención como se describe a continuación.

En el presente documento, "de modo que se forma un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, aplicando un voltaje en un capilar" significa formar un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC al poner en contacto el analito o análogo del mismo con la SFC, no por (independientemente de) la difusión molecular y por medio de la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) está dispuesta corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta) y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con una movilidad electroforética más alta (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza a una sustancia con una movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

A saber, la presente invención tiene como objetivo formar de un complejo entre (1) un analito o un análogo del mismo, o un complejo entre un analito o un análogo del mismo, y determinada SFC, y (2) al menos un tipo de una SFC (nota: una SFC diferente de una de las descritas anteriormente) en un capilar aplicando un voltaje en un capilar. En otras palabras, la presente invención incluye no sólo el caso de que se forme un complejo entre un analito o un análogo del mismo y todas las SFC sólo en un capilar, sino que se incluye también un caso tal como, por ejemplo, cuando se usan 2 o más tipos de SFC, se forma previamente un complejo (un complejo intermedio) entre un analito o un análogo del mismo y una parte de SFC entre 2 o más tipos de SFC fuera de un capilar, o en un capilar sin la aplicación de un voltaje, y posteriormente se ponen en contacto dicho complejo intermedio y el residuo no inferior a un tipo de SFC en un capilar aplicando un voltaje en un capilar, para formar un complejo entre el complejo intermedio formado previamente y el residuo no inferior a un tipo residual de SFC.

Por ejemplo, cuando se usan 2 tipos de SFC, se incluye naturalmente un caso tal que (1) se forma un complejo (un complejo intermedio) entre un analito o un análogo del mismo y un tipo de una SFC y un complejo entre dicho complejo intermedio y un tipo residual de una SFC en un capilar aplicando un voltaje en un capilar, y se incluye también un caso tal que (2) se forma previamente un complejo intermedio entre un analito o un análogo del mismo y un tipo de una SFC fura de un capilar, o en un capilar sin la aplicación de un voltaje, y posteriormente se forma dicho complejo intermedio y un tipo residual de una SFC en un capilar aplicando un voltaje en un capilar. Además, por ejemplo, cuando se usan 3 tipos de SFC, se incluye naturalmente el caso tal que (1) se forma un complejo (un complejo intermedio 1) entre un analito o un análogo del mismo y un tipo de una SFC (una SFC-1), un complejo (un complejo intermedio 2) entre dicho complejo intermedio 1 y el tipo residual de una SFC (una SFC-2), y un complejo entre el complejo intermedio 2 y un tipo residual de una SFC (una SFC-3) en un capilar aplicando un voltaje en un capilar, y se incluyen también casos tales que (2) se forma previamente un complejo intermedio 1entre un analito o un análogo del mismo y una SFC-1 fuera de un capilar, o en un capilar sin la aplicación de un voltaje, y a continuación se forma un complejo intermedio 2 entre dicho complejo intermedio 1 y una SFC-2, junto con un complejo entre dicho complejo intermedio 2 y una SFC-3 en un capilar aplicando un voltaje en un capilar; o (3) se forma un complejo intermedio 1 entre un analito o un análogo del mismo y una SFC-1, y se forma previamente un complejo intermedio 2 entre dicho complejo intermedio 1 y una SFC-2 fuera de un capilar, o en un capilar sin la aplicación de un voltaje y, a continuación, se forma un complejo entre dicho complejo intermedio 2 y una SFC-3 en un capilar aplicando un voltaje en un capilar. (A este respecto, se consideran de la misma manera los casos en los que se usan 4 o más tipos de SFC).

Por consiguiente, en la presente invención, "sin mezclar previamente las disoluciones" significa sin mezclar previamente una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y una disolución que contiene al menos un tipo de una SFC, pero no significa necesariamente la exclusión de ninguna mezcla previa de una disolución que contenga un analito o un análogo del mismo, y una disolución que contenga al menos un tipo de una SFC (en otras palabras, no significa no mezclar nunca algo de una muestra que incluye un analito y disoluciones que contienen todas las SFC, junto con, de ser necesario, una disolución que contiene análogos).

En la presente invención, se define como lado "corriente abajo" a la dirección hacia la que se mueve un complejo entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC, formado finalmente cuando se aplica el voltaje, y la dirección opuesta se define como lado "corriente arriba" (como se utiliza a continuación en el presente documento).

Además, en la presente invención, la "velocidad electroforética" (de un analito o un análogo del mismo, o una SFC sometida a electroforesis) es "lenta" o la "movilidad electroforética (de un analito o un análogo del mismo, o una SFC sometida a electroforesis) es baja" significa no solo el caso en que la velocidad electroforética es más lenta (la movilidad electroforética es baja) que las de al menos no menos de un tipo de otras sustancias sino también significa el movimiento en dirección opuesta a la dirección de al menos, no menos de un tipo de otras sustancias.

El orden de la disposición de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFS no está especialmente limitado, siempre que sea un orden capaz de formar un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC aplicando un voltaje en un capilar.

En las Tablas 1-1 a 1-5, se muestran las relaciones entre el orden de disposición de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una disolución que incluye una SFC, y la movilidad electroforética (velocidad electroforética) de un analito o un análogo del mismo y una SFC, sin embargo, la presente invención no está limitada a las mismas de ninguna manera.

A este respecto, en las Tablas 1-1 a 1-5, se muestran los casos en los que se usan desde un tipo hasta 3 tipos de SFC, sin embargo, también se aplica con el mismo criterio que en las Tablas 1-1 a 1-5 en la disposición adecuada, en el caso en que se usan 4 o más tipos de SFC.

En las Tablas 1-1 a 1-5, Ana representa un analito o un análogo del mismo, SFC-1 representa una SFC-1, SFC-2 representa una SFC-2 y SFC-3 representa una SFC-3. Además, en las Tablas 1-1 a 1-5, el orden de disposición A en un capilar es una zona de una disolución dispuesta en el lado más corriente arriba, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, B es una zona de una disolución dispuesta en el lado corriente abajo de la zona A, C es una zona de una disolución dispuesta en el lado corriente abajo de la zona B, y D es una zona de una disolución dispuesta en el lado corriente abajo de la zona C. A este respecto, las órdenes de disposición (A a D) en dicho capilar son solamente los órdenes entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, y se permitirán naturalmente disposiciones tales que una disolución diferente de dichas disoluciones esté dispuesta en el lado corriente abajo más lejos de dicha disolución dispuesta en el lado más corriente abajo entre estas, o en el lado corriente arriba más lejos de dicha disolución dispuesta en el lado más corriente arriba.

TABLA 1-1

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TABLA 1-2

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TABLA 1-3

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TABLA 1-4

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TABLA 1-5

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En las Tablas 1-1 a 1-5, "se forma antes que" significa que el complejo anterior se forma sustancialmente antes de que forme el complejo posterior, pero no excluye cuando una parte del complejo anterior y el complejo posterior se forman simultáneamente o en orden inverso, por ejemplo, en el siguiente caso.

(1) El caso en que colocando cada zona de manera adyacente (zona de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, zona de disoluciones que contienen SFC) y por la difusión molecular generada en la proximidad de la interfase líquido-líquido entre cada una de estas zonas, una parte del complejo anterior y el complejo posterior se forman simultáneamente o en orden inverso.

(2) El caso en que a partir de la relación de la velocidad electroforética de un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC, una parte del complejo anterior y del complejo posterior se forman simultáneamente o en orden inverso.

(3) El caso en que debido a que al menos un tipo de una SFC entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC se mueve en una dirección opuesta de las de otras sustancias, una parte del complejo anterior y del complejo posterior se forman simultáneamente o en orden inverso.

En tales casos, una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que contienen SFC pueden disponerse adecuadamente con el mismo criterio que en las Tablas 1-1 a 1-5.

Además, para el caso en que se usan 2 o más tipos de SFC, entre los casos en las Tablas 1-1 a 1-5, se muestra un caso tal que todas las SFC (una SFC-1 hasta -3) se unen a un analito o a un análogo del mismo, a saber todos los sitios de unión de 2 o más tipos de SFC están presentes sólo en un analito o un análogo del mismo [forma de unión (1): un complejo sándwich con Ana intercalado por SFC-1 y SFC-2]. Los otros casos siguientes pueden entenderse de la siguiente manera: Un caso, por ejemplo, una SFC-1 en 2 tipos de SFC (una SFC-1 y -2) se une a un analito o un análogo del mismo, y una SFC-2 se une a nuevos sitios generados por la formación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo, y una SFC-1, es decir los sitios de unión de al menos un tipo de una SFC (por ejemplo, una SFC A) entre 2 o más tipos de SFC están presentes sólo en un analito o un análogo del mismo, y los sitios de unión de al menos otro tipo de una SFC (por ejemplo, una SFC B) están presentes en nuevos sitios generados por la formación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo, y una SFC A, [forma de unión (2)]; o un caso, por ejemplo, una SFC-1 en 2 tipos de SFC (una SFC-1 y -2) se une a un analito o a un análogo del mismo, y una SFC-2 se une a una SFC-1 unida a un analito o un análogo del mismo, es decir los sitios de unión de al menos un tipo de una SFC (por ejemplo, una SFC A) entre 2 o más tipos de SFC están presentes sólo en un analito o un análogo del mismo, y los sitios de unión de al menos un tipo de una SFC (por ejemplo, una SFC B) están presente sólo en una SFC A, [forma de unión (3)]; son los casos en los que se forma un complejo sándwich de SFC-1, intercalado por Ana y SFC-2, en la forma de unión (1) [un analito o un análogo del mismo en el caso de usar 2 tipos de SFC en las Tablas 1-1 a 1-5 se lee como alternativa como una SFC-1, y una SFC-1 en las Tablas 1-1 a 1-5 se lee como alternativa como un analito o análogo del mismo]. Además, en los casos tales que se usan 3 tipos o más de SFC en las formas de unión (2) y (3) descritas anteriormente, o en los casos tales que las formas de unión (1) a (3) descritas anteriormente están combinadas adecuadamente, puede disponerse una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que contienen SFC con el mismo criterio que en las Tablas 1-1 a 1-5 y los anteriores.

A este respecto, al llevar a cabo la presente invención en un procedimiento competitivo usando un análogo de un analito, puede adoptarse también cualquiera de las siguientes disposiciones; un analito en una muestra (a saber, una muestra que incluye un analito) y un análogo [por ejemplo, un análogo marcado por medio de una sustancia marcadora (un análogo marcado), y un análogo unido con una sustancia que mejora la reacción (una análogo que mejora de la reacción)], están simultáneamente presentes en la misma disolución y se introducen y disponen en un capilar como una zona de la disolución (a saber, una zona de una disolución que contiene una muestra que incluye un analito y un análogo); una muestra que incluye un analito, y una disolución que contiene un análogo (por ejemplo, un análogo marcador o análogo que mejora la reacción) se introducen y disponen en un capilar como cada zona separada (disolución); o una disolución que contiene un analito en una muestra (a saber, una muestra que incluye un analito) y no menos de un tipo de SFC, y una disolución que incluye un análogo (por ejemplo, un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) se introducen y disponen en un capilar como cada zona separada (disolución).

A este respecto, en el procedimiento competitivo descrito anteriormente, disponer, en un capilar, (1) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (una disolución que contiene un analito y un análogo), junto con disoluciones que contienen no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción y sus combinaciones); o (2) una muestra que incluye un analito (una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo), junto con una disolución que contiene un análogo marcado y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción y sus combinaciones); o (3) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción y sus combinaciones), junto con una disolución que contiene un análogo marcado; de manera que se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC, y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC al aplicar un voltaje en un canal, el orden de disposición de estas disoluciones puede determinarse, según el orden de disposición de una disolución que incluye un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que contienen no menos de un tipo de SFC, como se explicó anteriormente, considerando la movilidad electroforética de un analito, un análogo marcado y una SFC. Además, disponer, en un capilar, (1) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo que mejor la reacción (una disolución que contiene un analito y un análogo), junto con una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que tiene la propiedad de ser capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo y que está marcada con una sustancia marcadora (abreviada a continuación en el presente documento como una sustancia de unión marcada o una SFC marcada); o (2) una muestra que incluye un analito (una disolución que contiene un analito o un análogo), junto con una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada; o (3) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC marcada, junto con una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción; de manera que se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC marcada, y un complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada al aplicar un voltaje en un capilar, el orden de disposición de estas disoluciones puede determinarse, según el orden de disposición de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, como se explicó anteriormente, considerando la movilidad electroforética de un analito, un análogo que mejora la reacción y una SFC marcada.

Además, una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que contienen no menos de un tipo de SFC no necesariamente se colocan de manera adyacente, y puede insertarse entre estas disoluciones un líquido tal como agua, una disolución salina fisiológica, diversas disoluciones de tampón o un disolvente orgánico. A este respecto, puede usarse como una de tales disoluciones de tampón, cualquiera que no inhiba la formación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC, incluidos los tampones usados habitualmente en este campo, por ejemplo, tampón Tris, tampón de Good, tampón TE, tampón TAE, tampón TBE, tampón TBS, un tampón fosfato o un tampón borato.

A este respecto, se forma una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, junto con los líquidos, de ser necesario, y se disponen como cada zona separada en un capilar. Es decir, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, junto con los líquidos, de ser necesario, entre la disolución que contiene un analito o análogo del mismo y el líquido o entre la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y el líquido, se forma y se mantiene la interfase líquido-líquido en el momento en que se disponen estas disoluciones y, de ser necesario, los líquidos.

En una etapa (1), como un procedimiento para introducir una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar, está permitido cualquier procedimiento siempre que se formen por separado una zona de la disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una zona de las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar, de manera que se forme la disposición según se describió anteriormente, es decir, está permitido cualquier procedimiento siempre que sea capaz de formarse la interfase líquido-líquido entre la disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, junto con el líquido, de ser necesario, entre la disolución que contiene un analito o análogo del mismo y un líquido o entre la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y el líquido, y puede usarse cualquier procedimiento bien conocido para la introducción. Tal procedimiento bien conocido para la introducción incluye, por ejemplo, un procedimiento para introducir eléctricamente estas disoluciones (y los líquidos) en un capilar aplicando un voltaje en un capilar; un procedimiento para introducir estas disoluciones (y los líquidos) en un capilar aumentando y/o reduciendo una presión del interior del capilar; un procedimiento para introducir estas disoluciones (y los líquidos) en un capilar usando el fenómeno de capilaridad.

Además, como un procedimiento para introducir y disponer una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar, pueden usarse los mismos procedimientos conocidos para la introducción y disposición. Tales procedimientos conocidos para introducir y disponer incluyen, por ejemplo, (1) un procedimiento para introducir primero un tipo de una disolución entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar desde la punta de un capilar, por un procedimiento para la introducción según se describió anteriormente, e introducir posteriormente un tipo de las disoluciones restantes en un capilar desde la punta de un capilar de manera similar por un procedimiento para la introducción según se describió anteriormente, que se repite hasta que todas las disoluciones estén dispuestas en un capilar; (2) un procedimiento para dejar caer primero un tipo de una disolución entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un depósito de líquidos (un pocillo), e introducir el contenido en un capilar por un procedimiento para la introducción según se describió anteriormente, y reemplazar a continuación la disolución en el depósito de líquidos (el pocillo) con un tipo de una disolución entre las disoluciones restantes, e introducir el contenido en un capilar por un procedimiento para la introducción según se describió anteriormente, que se repite hasta todas las disoluciones estén dispuestas en un capilar; (3) un procedimiento para dejar caer una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, por separado en una pluralidad de depósitos de líquidos (pocillos), e introducir éstos por separado en el mismo capilar por un procedimiento para la introducción según se describió anteriormente, para disponer todas las disoluciones en un capilar. A este respecto, un procedimiento para introducir una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar, y un procedimiento para introducir y disponer una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar no están limitados a los procedimientos descritos anteriormente.

Además, un procedimiento para introducir lo siguiente: una muestra que contiene un analito; una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción (una disolución que contiene un analito o un análogo); una disolución que contiene un analito y no menos de un tipo de SFC (por ejemplo, una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, sus combinaciones); una disolución que incluye un análogo marcado; o una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción; en un capilar es el mismo que un procedimiento para introducir una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar, según se describió anteriormente.

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1-2. Una etapa de concentrar la reacción [una etapa (2)]

Una etapa (2) de la presente invención es una etapa de poner en contacto dicho analito o análogo del mismo y la SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito o análogo del mismo y/o la SFC electroforéticamente para formar un complejo entre dicho analito o su análogo y la SFC, no por (independientemente de) la difusión molecular.

"Antes de que las disoluciones (una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y disoluciones que contienen no menos de un tipo de SFC) se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) de la presente invención, se mezclen uniformemente por difusión molecular".

A este respecto, en la presente invención, "interfase" significa, el límite donde están en contacto una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, o de ser necesario el límite donde están en contacto la disolución que contiene un analito o análogo del mismo y el líquido o el límite donde están en contacto la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y el líquido, y dicha interfase no significa necesariamente que no existe por completo mezcla, por la presencia de difusión desde un punto de vista práctico.

Además, en un procedimiento competitivo usando un análogo de un analito, y cuando se usa un análogo marcado, la frase descrita anteriormente significa "antes de mezclar uniformemente las siguientes zonas (interfase líquido-líquido) dispuestas en un capilar por una etapa (1), por difusión molecular"; (1) cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (una disolución que contiene un analito y un análogo) junto con una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora de la reacción, sus combinaciones) y el líquido, de ser necesario; (2) cada zona (interfase líquido-líquido) de una muestra que contiene un analito, una disolución que contiene un análogo marcado y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora de la reacción, sus combinaciones) y el líquido, de ser necesario; o (3) cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora de la reacción, sus combinaciones) y una disolución que contiene un análogo marcado y el líquido, de ser necesario.

En un procedimiento competitivo usando un análogo del analito, cuando se usa un análogo que mejora la reacción, la frase descrita anteriormente significa "antes de mezclar uniformemente las siguientes zonas (interfase líquido-líquido) por difusión molecular"; (1) cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (una disolución que contiene un analito y un análogo) junto con una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada y el líquido, de ser necesario; (2) cada zona (interfase líquido-líquido) de una muestra que contiene un analito, una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada y el líquido, de ser necesario; o (3) cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC marcada, sus combinaciones) y una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción y el líquido, de ser necesario.

A este respecto, "interfase" también tiene el mismo significado que anteriormente.

En una etapa (2), "concentrar un analito o un análogo del mismo, y/o al menos un tipo de una SFC aplicando un voltaje en un capilar" significa que al menos un tipo entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber significa que un analito o un análogo del mismo y/o una SFC se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o la concentración de una SFC pasa a ser más alta que la de un analito o un análogo y/o la de una SFC en una zona de una disolución (por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, una zona de una disolución que contiene una SFC) dispuesta en una etapa (1).

A este respecto, por nivel (grado) de concentración en la presente invención, la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de una SFC en una parte agrupada (similar a una banda) de dicha sustancia tras la aplicación de un voltaje en un capilar, con relación a la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de SFC en una zona dispuesta en una etapa (1) es, como límite inferior, usualmente no inferior a 1,5 veces, de preferencia no inferior a 5 veces, de más preferencia no inferior a 10 veces, y aún de más preferencia no inferior a 25 veces, y límite superior no está especialmente limitado, sin embargo usualmente no es superior a 10^{7} veces, de preferencia no es superior a 10^{6} veces y de más preferencia no es superior a 10^{5} veces.

Además, en la presente invención, "poner en contacto dicho analito o análogo del mismo con la SFC" significa que, como se describió anteriormente, el contacto entre un analito o un análogo del mismo y una SFC se produce no por (independientemente de) la difusión molecular sino por el fenómeno de que una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), por la utilización del hecho de que cuando la electroforesis se lleva a cabo bajo la condición de que una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

A saber, en una etapa (2) de la presente invención, un analito o un análogo del mismo en una disolución, y una SFC en una disolución se ponen en contacto por el movimiento (migración) electroforéticamente, sin mezclar por (independientemente de) la difusión molecular generada al dejar en reposo una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar, o también sin la mezcla física de los mismos en un capilar.

Como se describió anteriormente, una etapa (2) de la presente invención forma un complejo entre dicho analito o su análogo y la SFC haciendo migrar electroforéticamente un analito o análogo del mismo en una disolución y una SFC en una disolución y poniéndolos en contacto concentrando al mismo tiempo un analito o análogo del mismo y/o una SFC electroforéticamente, antes de que una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y las disoluciones que incluyen una SFC, junto con el líquido, de ser necesario, se mezclen uniformemente por difusión molecular, y además sin mezclar estos físicamente de manera uniforme en un capilar, es decir, manteniendo una interfase líquido-líquido entre estas disoluciones adyacentes y, de ser necesario, entre el líquido y la disolución.

En la presente invención, "poner en contacto dicho analito o su análogo con la SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito o su análogo y/o al menos un tipo de SFC aplicando un voltaje a un capilar" significa los siguientes dos casos: (1) el caso en el que la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o una SFC mencionada anteriormente, y el contacto de un analito o un análogo del mismo y una SFC se realizan simultáneamente; o (2) el caso en el que después de la terminación sustancial de la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o una SFC mencionada anteriormente, se lleva a cabo la puesta en contacto de un analito o un análogo del mismo y una SFC. Por consiguiente, la frase incluye los casos diferentes del caso en el que la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o una SFC se realiza después de la terminación sustancial del contacto entre un analito o un análogo del mismo y una SFC.

Es decir, puede llevarse a cabo una etapa (2) de la presente invención aplicando un voltaje en dicho capilar bajo la condición de que pueda formarse un complejo entre dicho analito o un análogo del mismo y la SFC poniendo en contacto dicho analito o su análogo y la SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito o su análogo y/o al menos un tipo de SFC como se describió anteriormente aplicando un voltaje en dicho capilar como se describió anteriormente, antes de que una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y las disoluciones que contienen no menos de un tipo de SFC estén uniformemente mezcladas.

Tales condiciones son específicamente las utilizadas en un así llamado procedimiento de concentración de electroforesis para la concentración de sustancias en un capilar.

Un procedimiento de concentración de electroforesis incluye, por ejemplo, los procedimientos que usan las diferencias en la movilidad electroforética en un capilar tales como (1) Apilación de muestras con amplificación de campo (FASS) [Documento US-A-2003-0057092 A1; Weiss, D. J., Saunders, K., Lunte, C.E. Electrophoresis 2001, 22, 59-65; Britz-McKibbin, P., Bebault, G.M., Chen, D.D.Y. Anal Chem. 2000, 72, 1729-1735; Ross, D., Locascio, L.E. Anal Chem. 2002, 71, 5137-5145; (2) Procedimiento de inyección de muestra con campo amplificado (FASI) [Chien, R. L y col. J. Chromatogr. 1991, 559, 141-148; (3) Isotacoforesis (ITP) [Everaerts, F.M., Geurts, M. Mikkers, F.E.P., Verheggen, T.P.E.M J Chromatogr. 1976, 119, 129-155; Mikkers, F.E.P., Everaerts, F.M., Peek, J.A.F. J. Chromatogr. 1979, 168, 293-315; Mikkers, F.E.P., Everaerts, F.M., Peek, J.A.F. J. Chromatogr. 1979, 168, 317-332; Hirokawa, T, Okamoto, H. Ikuta, N., and Gas, B., Analytical Sciences 2001, Vol. 17 Suplemento il85; (4) procedimiento de enfoque isoeléctrico (IF) [Wehr T, y col., Am. Biotechnol. Lab. 1990, 8, 22; Kilar F. y col., Electrophoresis 1989, 10, 23-29; (5) Procedimiento de acumulación de muestra a partir de gran volumen (LVSS) [Siri, N. y col., J. Chromatogr. B, (2003), 793, 151-157; (6) procedimiento de unión de pH dinámica (acumulación mediada por pH) [P. Britz-McKibbin y col., 2000, Anal. Chem., 72, 1242, P. Britz-McKibbin y col., 2002, Anal. Chem., 74, 3736]; (7) procedimiento de barrido (cromatografía electrocinética micelar de apilamiento) [J. P. Quirino y col., 1998, Science, 282, 465, J. P. Quirino y col., 1999, Anal. Chem., 71, 1638, Y. Sera y col., 2001, Electrophoresis, 22, 3509].

Entre los procedimientos de condensación de electroforesis descritos anteriormente, por ejemplo, ITP y FASS son de preferencia, y la ITP es particularmente de preferencia.

A este respecto, la ITP se basa en el principio de que una sustancia objetivo puede concentrarse cuando la sustancia objetivo se intercala entre un medio de electroforesis (un tampón líder) que incluye un ion líder que tiene velocidad electroforética más rápida que la de una sustancia objetivo, y un medio de electroforesis (un tampón terminal) que incluye un ion terminal que tiene velocidad electroforética más lenta que la de una sustancia objetivo y se somete a la electroforesis.

Por consiguiente, al llevar a cabo una etapa (2) de la presente invención por ITP, son necesarios al menos un medio de electroforesis (tampón líder) que incluye un ion líder que tiene velocidad electroforética más rápida que la de un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC, y un medio de electroforesis (un tampón terminal) que incluye un ion terminal que tiene velocidad electroforética más lenta que la de un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC, y estos componentes están también incluidos en "la condición de que se concentra un analito o un análogo del mismo y/o al menos no menos de un tipo de SFC" de la presente invención.

A este respecto, un tampón líder se dispone más allá del lado corriente abajo de una disolución dispuesta en el extremo del lado corriente abajo de un capilar, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, y un tampón terminal se dispone más allá del lado corriente arriba de una disolución dispuesta en el extremo corriente arriba de un capilar, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC.

En la descripción anterior, como ion líder, puede usarse cualquier ion que tenga velocidad electroforética más rápida que la de un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC, y se selecciona adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo. Tal ion incluye, por ejemplo, el Cl^{-}. Además, la concentración de uso de un ion líder puede también seleccionarse adecuadamente de un intervalo utilizado usualmente en este campo. La concentración de uso es, por ejemplo, usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia
1 \muM a 500 mM.

También se usa un tampón líder que incluye uno de tales iones líderes seleccionado adecuadamente de uno utilizado usualmente en este campo, incluidos, por ejemplo, el tampón de Good, tampón Tris, un tampón borato, un tampón fosfato, un tampón histidina, un tampón imidazol y un tampón glicina. La concentración de uso y su pH pueden seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo, y la concentración de uso es usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a 500 mM, y el pH es usualmente 2 a 12, de preferencia 4 a 10 y de más preferencia 6 a 9.

En la descripción anterior, como ion terminal, puede usarse cualquier ion que tenga velocidad electroforética más lenta que la de un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC, y se selecciona adecuadamente de uno utilizado usualmente en este campo. Tal ion incluye, por ejemplo, el tampón de Good, tales como HEPES, TAPS, MES y MOPS, o un aminoácido tales como por ejemplo glicina y treonina. Además, la concentración de uso de un ion terminal puede también seleccionarse adecuadamente de un intervalo utilizado usualmente en este campo. La concentración de uso es, por ejemplo, usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a 500 mM.

También se usa un tampón terminal que incluye uno de tales iones terminales seleccionado adecuadamente de uno utilizado usualmente en este campo, incluidos, por ejemplo, el tampón de Good, tampón Tris, un tampón borato, un tampón fosfato, un tampón histidina, un tampón imidazol o un tampón glicina. La concentración de uso y su pH pueden seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo, y la concentración de uso es usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a 500 mM, y el pH es usualmente 2 a 12, de preferencia 4 a 10 y de más preferencia 6 a 9.

A este respecto, las condiciones descritas anteriormente (un ion líder, un tampón líder, un ion terminal y un tampón terminal), otros reactivos, los procedimientos de operación y otras condiciones pueden seleccionarse según la descripción en las referencias descritas anteriormente.

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Los procedimientos FASS, FASI y LVSS se basan en el principio de que el movimiento electroforético de una sustancia objetivo disminuye y una sustancia objetivo se concentra, cuando una sustancia objetivo alcanza la interfase entre un medio en el que está presente una sustancia objetivo y un medio que tiene conductividad eléctrica más alta que la de un medio en el que está presente una sustancia objetivo.

Por consiguiente, cuando una etapa (2) de la presente invención se lleva a cabo por FASS, LVSS o FASI, es necesario que al menos un tipo de una disolución entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC tenga conductividad eléctrica más alta que la de al menos un tipo de las disoluciones; o es necesario un medio de electroforesis (medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta) que tenga conductividad eléctrica más alta que la de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y/o las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC para utilizar por separado, y estos componentes también están incluidos en "la condición de que se concentra un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC" de la presente invención.

A este respecto, un medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta se dispone más allá del lado corriente abajo de una disolución dispuesta en el extremo corriente abajo en un capilar, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC.

Además, un medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta puede ser uno cualquiera siempre que tenga concentración salina más alta que la de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y/o las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, y se utilizan los seleccionados adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo. Tal medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta incluye, por ejemplo, un medio de electroforesis que contiene NaCl o KCl. Como medio de electroforesis, se incluyen por ejemplo, el tampón de Good, tampón Tris, un tampón borato, un tampón fosfato, un tampón histidina, un tampón imidazol y un tampón glicina. La concentración de uso y su pH pueden seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo, y la concentración de uso es usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M, de más preferencia 1 mM a 500 mM, y el pH es usualmente 2 a 12, de preferencia 4 a 10 y de más preferencia 6 a 9.

A este respecto, las condiciones descritas anteriormente (medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta), otros reactivos, los procedimientos de operación y otras condiciones pueden seleccionarse adecuadamente según la descripción en las referencias descritas anteriormente.

El IF se basa en el principio de que una sustancia objetivo se concentra al rellenar un capilar (canal) con una disolución de sustancias anfóteras que tienen diversos puntos isoeléctricos, formando a continuación un gradiente de pH en un capilar (canal) al aplicar un voltaje, y cuando una sustancia objetivo alcanza la región de pH correspondiente a un punto isoeléctrico.

Por consiguiente, en el caso en el que una etapa (2) de la presente invención se lleva a cabo por IF, es necesario al menos medio de electroforesis capaz de formar un gradiente de pH en un capilar, y este componente también está incluido en "la condición para concentrar un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de SFC" de la presente invención.

En la descripción anterior, como medio de electroforesis capaz de formar un gradiente de pH, puede usarse uno cualquiera capaz de formar un gradiente de pH en un capilar al aplicar un voltaje seleccionando adecuadamente de uno utilizado usualmente en este campo. Como uno de tales medios capaces de formar un gradiente de pH en un capilar, por ejemplo, se incluye un medio de electroforesis que contiene una sustancia capaz de formar un gradiente de pH en un capilar, tal como un anfólito. Como uno de tales medios de electroforesis, se incluyen por ejemplo, el tampón de Good, tampón Tris, un tampón borato, un tampón fosfato, un tampón histidina, un tampón imidazol y un tampón glicina. La concentración de uso y su pH también pueden seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo, y la concentración de uso es usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a 500 mM.

A este respecto, las condiciones descritas anteriormente (un medio de electroforesis que contiene una sustancia capaz de formar un gradiente de pH en un capilar), otros reactivos, los procedimientos de operación y otras condiciones pueden seleccionarse según la descripción en las referencias descritas anteriormente.

Un procedimiento de unión del pH dinámica es uno para llevar a cabo la concentración de una sustancia objetivo contenida en una muestra en la superficie límite entre una muestra y un medio de electroforesis alcalino al formar una región (zona) ácida o débilmente ácida de la muestra en el medio de electroforesis alcalino.

Por consiguiente, en el caso en el que una etapa (2) de la presente invención se lleva a cabo por un procedimiento de unión del pH, es necesario al menos un medio de electroforesis que tenga un pH en el intervalo más alcalino que el de una disolución que contiene una muestra, y este componente también está incluido en "la condición para concentrar un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC" de la presente invención.

En la descripción anterior, como medio de electroforesis que tiene un pH en el intervalo alcalino, se usa uno cualquiera capaz de formar una superficie límite con diferente pH, entre una disolución que contiene una muestra y dicho medio de electroforesis en un capilar aplicando un voltaje, seleccionado adecuadamente de uno utilizado usualmente en este campo. Como uno de tales medios de electroforesis, están incluidos por ejemplo, el tampón de Good tales como HEPES, TAPS, MES y MOPS, un tampón borato, un tampón fosfato, un tampón histidina, un tampón imidazol y un tampón glicina. La concentración de uso y su pH pueden seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo, y la concentración de uso es usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a 500 mM, y el pH es usualmente 7 a 11, de preferencia 7 a 10 y de más preferencia 7 a 9.

A este respecto, las condiciones descritas anteriormente (un medio de electroforesis que tiene pH en el intervalo alcalino), otros reactivos, los procedimientos de operación y otras condiciones, pueden seleccionarse según la descripción en las referencias descritas anteriormente.

Un procedimiento de barrido se basa en el siguiente principio:

A saber, se dispone un medio de electroforesis que incluye una sustancia cargada que forma una micela en el lado corriente arriba de una zona de la disolución que incluye una sustancia objetivo. Al aplicar un voltaje aquí, la micela formada alcanza una sustancia objetivo y forma un complejo de micela con una sustancia objetivo. Cuando el complejo de micela alcanza la interfase entre un medio en el que está presente una sustancia objetivo, y un medio que tiene conductividad eléctrica más alta que la de un medio en el que está presente una sustancia objetivo, la velocidad electroforética de una sustancia objetivo disminuye y de esta manera se concentra una sustancia objetivo.

Por consiguiente, cuando se lleva a cabo una etapa (2) de la presente invención por un procedimiento de barrido, es necesario que al menos un tipo de una disolución entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC tenga conductividad eléctrica alta comparada con la de otro de al menos un tipo de las disoluciones; o es necesario un medio de electroforesis (medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta) que tenga conductividad eléctrica más alta que la de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y/o las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, para utilizar por separado; y es necesario un medio de electroforesis que incluya una sustancia cargada que forme una micela con una velocidad electroforética más alta que la de un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC, y que tenga conductividad eléctrica más baja que la de una disolución (o un medio de electroforesis) que tiene conductividad eléctrica más alta; y estos componentes también están incluidos en "la condición para concentrar un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC" de la presente invención.

A este respecto, se dispone un medio de electroforesis de conductividad eléctrica alta más allá del lado corriente abajo de una disolución dispuesta en el extremo del lado corriente abajo un capilar, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC, y se dispone un medio de electroforesis que incluye una sustancia cargada que forma una micela más allá del lado corriente arriba de una disolución dispuesta en el extremo del lado corriente arriba de un capilar, entre una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC.

En la descripción anterior, como sustancia cargada que forma una micela, puede usarse cualquier sustancia cargada siempre que tenga velocidad electroforética más rápida que la de un analito o un análogo del mismo y/o no menos de un tipo de SFC, y se selecciona adecuadamente de una utilizada usualmente en este campo. Tal sustancia cargada incluye, por ejemplo, un tensioactivo tal como SDS. Además, la concentración de uso de dicha sustancia cargada puede también seleccionarse adecuadamente de un intervalo utilizado usualmente en este campo, y se usa la cantidad superior a la concentración crítica de la micela, y, más específicamente, la concentración de uso de dicha sustancia cargada es por ejemplo, usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a
500 mM.

También se usa un medio de electroforesis seleccionado adecuadamente de uno utilizado usualmente en este campo, y, están incluidos, por ejemplo, el tampón de Good, el tampón Tris, un tampón borato, un tampón fosfato, un tampón histidina, un tampón imidazol o un tampón glicina. La concentración de uso y su pH pueden seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo, y la concentración de uso es usualmente 1 \muM a 10 M, de preferencia 100 \muM a 1 M y de más preferencia 1 mM a 500 mM, y el pH es usualmente 2 a 12, de preferencia 4 a 10 y de más preferencia 6 a 9.

A este respecto, las condiciones descritas anteriormente [una sustancia cargada que forma una micela y un medio de electroforesis], otros reactivos, los procedimientos de operación y otras condiciones pueden seleccionarse adecuadamente según la descripción en las referencias descritas anteriormente.

El voltaje aplicado en una etapa (2) puede estar en un intervalo en el que se concentra suficientemente un analito o un análogo del mismo y/o una SFC, y se forma suficientemente un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y puede seleccionarse adecuadamente de los que se usan habitualmente en este campo. Más específicamente, el voltaje se aplica de modo que la intensidad del campo eléctrico esté en el siguiente intervalo: como límite inferior, usualmente no más bajo que 5 V/cm, de preferencia no más bajo que 10 V/cm, de más preferencia no más bajo que 50 V/cm, de más preferencia aún no más bajo que 500 V/cm, y particularmente de preferencia no más bajo que 1000 V/cm, y como límite superior, usualmente no más alto que 10000 V/cm, de preferencia no más alto que 5000 V/cm, de más preferencia no más alto que 2000 V/cm.

Además, otras condiciones de reacción (por ejemplo, pH, temperatura, tiempo) están de preferencia en un intervalo que no inhiba la concentración de un analito o análogo del mismo y/o una SFC, y la formación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC.

Específicamente, aunque no para describirlos simplemente debido a la dependencia de la propiedad de un analito o un análogo del mismo y una SFC, el límite inferior de pH es usualmente no más bajo que 2, de preferencia no más bajo que 5, y el límite superior de pH es usualmente no más alto que 10, y de preferencia no más alto que 9; y un límite inferior de temperatura es usualmente no más bajo que 0ºC, de preferencia no más bajo que 5ºC y de más preferencia no mas bajo que 10ºC, y el límite superior de temperatura es usualmente no más alto que 50ºC, de preferencia no más alto que 40ºC y de más preferencia no más alto que 30ºC. El tiempo de reacción depende de la constante de unión de una SFC a utilizar con un analito o un análogo del mismo, y una constante de unión relativamente baja requiere un tiempo de reacción relativamente largo pero una constante de unión relativamente alta requiere un tiempo de reacción relativamente corto. Más específicamente, por ejemplo, el límite inferior es usualmente no más corto que 1 minuto, de preferencia no más corto que 3 minutos y de más preferencia no más corto que 5 minutos; y el límite superior es usualmente no más largo que 24 horas, de preferencia no más largo que 12 horas, de más preferencia no más largo que 1 hora y de más preferencia aún no más largo que 30 minutos.

1-3. Un capilar (canal)

Un capilar (canal) utilizado en la presente invención es uno cualquiera de los que se utilizan en este campo tales como un procedimiento de electroforesis capilar o un procedimiento de electroforesis capilar en chip, y no está especialmente limitado.

El material de un capilar (canal) utilizado en la presente invención es uno cualquiera de los que se usan habitualmente este campo, y no está especialmente limitado siempre que pueda formar finalmente complejo entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC al poner en contacto un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC. Los ejemplos de un material del capilar (canal) son, por ejemplo, compuestos basados en sílice tales como el vidrio, el cuarzo y el silicio, polímeros sintéticos tales como el copolímero del olefina cíclica (COC), el polímero de olefina cíclica (COP), el polimetilmetacrilato, el polimetilsiloxano, el cloruro de polivinilo, el poliuretano, el poliestireno, la polisulfona, el policarbonato y el politetrafluoroetileno. Además, el diámetro interno y la longitud del capilar (canal) no están especialmente limitados siempre que sean suficientes para concentrar un analito o un análogo del mismo y/o una SFC, y formar un complejo entre un analito o análogo del mismo y una SFC. Por ejemplo, el diámetro interno es usualmente de 1 a 1000 \mum, de preferencia de 1 a 200 \mum y de más preferencia de 1 a 100 \mum, y la
longitud es usualmente de 0,1 mm a 100 cm, de preferencia de 0,1 mm a 20 cm y de preferencia de 0,1 mm a 10 cm.

Una etapa (2) de la presente invención se lleva a cabo usualmente en un estado en el que el capilar mencionado anteriormente se llena con un medio de electroforesis. Como medio de electroforesis, se incluye una disolución tampón para electroforesis o dicha disolución tampón para electroforesis que contiene materiales de relleno. A este respecto, un medio de electroforesis puede usarse solo o en combinación con dos o más tipos. Además, como procedimiento para introducir un medio de electroforesis en un capilar se incluye un procedimiento para introducir una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar como se describió anteriormente. Y puede adoptarse cualquiera de los siguientes tiempos de introducción de un medio de electroforesis en un capilar: (1) antes de la introducción de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y/o de las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar; (2) simultáneamente con la introducción de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y/o de las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar; y (3) después de la introducción de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y/o de las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en un capilar.

Tal disolución tampón para electroforesis no está especialmente limitada siempre que se utilice habitualmente en este campo. Los ejemplos de una disolución tampón para electroforesis son, por ejemplo, las disoluciones tampón utilizadas usualmente en el campo de un procedimiento de hibridación o de una inmunización tales como el tampón Tris, un tampón fosfato, tampón Veronal, un tampón borato, tampón de Good, tampón SSC, tampón TBE o tampón TAE. La concentración de estas disoluciones tampón es usualmente de 0,1 mM a 10 M, de preferencia de 1 mM a 5 M y de más preferencia de 5 mM a 1M. Además, puede usarse cualquier pH de dicha disolución tampón siempre que no de un mal efecto en la separación de las sustancias, y es usualmente 2 a 13, de preferencia 4 a 11 y de más preferencia 5 a 9. A este respecto, estas disoluciones tampón pueden usarse solas o en combinación con dos o más tipos.

Los materiales de relleno (polímeros) cargados en un capilar no están especialmente limitados siempre que se utilicen habitualmente en este campo. Los ejemplos de materiales de relleno son, por ejemplo, poliéteres tales como óxido de polietileno (polietilenglicol), óxido de polipropileno; polialquileniminas tales como polietilenimina; polímeros del ácido poliacrílico tales como ácido poliacrílico, ésteres de poliacrilato, y poli (acrilato de metilo); polímeros basados en poliamida tales como poliacrilamida, polimetacrilamida; polímeros basados en ácido polimetacrílico tales como ácido polimetacrílico, ésteres de polimetacrilato y poli (metacrilato de metilo); polímeros basados en polivinilo tales como acetato de polivinilo, polivinil pirrolidona y polivinil oxazolidona; polímeros hidroxilo hidrosolubles tales como pululano, elsinano, xantano, dextrano y goma guar; compuestos celulósicos hidrosolubles tales como metilcelulosa, hidroxietilcelulosa e hidroxipropilcelulosa; sus derivados, y los copolímeros que tienen una pluralidad de tipos de unidades de monómeros que componer estos polímeros. A este respecto, estos materiales de relleno pueden usarse solos o en combinación con dos o más tipos.

El peso molecular de los materiales de relleno según se describió anteriormente es usualmente de 500 Da a 6000 kDa, de preferencia de 1 a 1000 kDa y de más preferencia de 50 a 500 kDa.

La concentración de uso de los materiales de relleno como según se describió anteriormente puede seleccionarse adecuadamente de un intervalo utilizado usualmente en este campo, y es usualmente de 0,01 a 40% (peso/volumen), de preferencia de 0,01 a 20% (peso/volumen) y de más preferencia de 0,1 a 10% (peso/volumen).

A este respecto, la viscosidad de una disolución tampón para electroforesis cuando se añaden a la misma los materiales de relleno descritos anteriormente es usualmente de 1 a 1000 centipoises, de preferencia de 1 a 200 centipoises y de más preferencia de 1 a 10 centipoises.

1-4. El analito, la muestra, el análogo y la disolución que contiene el analito o el análogo (1) El analito

Un analito en la presente invención incluye, por ejemplo, una cadena de nucleótidos (una cadena de oligonucleótidos y una cadena de polinucleótidos); un cromosoma; una cadena peptídica (péptido C y angiotensina I), una proteína [procalcitonina, inmunoglobulina A (IgA), inmunoglobulina E (IgE), inmunoglobulina G (IgG), inmunoglobulina M (IgM), inmunoglobulina D (IgD), \beta_{2}-microglobulina, albúmina, sus productos de desnaturalización, y proteínas del suero tales como la ferritina]; una enzima [una amilasa (tipo pancreática, tipo salival y tipo X), una fosfatasa alcalina (hepática, ósea, placentaria y del intestino delgado), una fosfatasa ácida (PAP), una \gamma-glutamil transferasa (renal, pancreática y hepática), una lipasa (tipo pancreática y tipo gástrica), una creatina cinasa (CK-1, CK-2 y CKm), una lactato deshidrogenasa (LDH1 a LDH5), una glutamato oxaloacetato transaminasa (ASTm y ASTs), una glutamato-piruvato transaminasa (ALTm y ALTs), una colina esterasa (ChE1 a ChE5), una leucina aminopeptidasa (C-LAP, AA y CAP), renina, una proteína cinasa y una tirosina cinasa]; microorganismos tales como bacterias (bacterias de la tuberculosis, neumococos, microorganismos de la difteria, meningococos, gonococos, estafilococos, estreptococos, bacterias entéricas, bacilos coliformes y Helicobacter pylori), virus (virus de la rubéola, herpesvirus, virus de la hepatitis, virus de ATL, virus del SIDA, virus de la influenza, adenovirus, enterovirus, poliovirus, virus de EB, VHA, VHB, VHC, VIH y VLTH), hongos (candida y Cryptococcus), espiroquetas (leptospira, Treponema pallidum), clamidias y micoplasmas; una proteína, un antígeno peptídico o carbohidrato derivado de dichos microorganismos; diversos alérgenos causantes de broncoespasmos, rinitis alérgica y dermatitis atópica (alérgenos derivados del polvo del hogar, ácaros tales como Dermatophagoides farinae y Dermatophagoides pteronyssinus, polen del cedro, ciprés, Pasupalum thunbergii, ambrosía, hierba timotea, grama de olor y centeno, un animal tal como un gato, un perro o un cangrejo, alimentos tales como el arroz y la clara de huevo, hongo, insecto, madera, fármaco o sustancia química); lípidos (lipoproteína); una proteasa (tripsina, plasmina y serina proteasa); un marcador tumoral antigénico proteico (PSA, PGI y PGII); un antígeno hidrato de carbono [AFP (L1 a L3), GCh (familia de GCh), transferrina, IgG, tiroglobulina, factor acelerador de la degradación (DAF), antígeno carcinoembrionario (CEA, NCA, NCA-2 y NFA), CA19-9, PIVKA-II, CA125, antígeno específico de la próstata, un marcador tumoral antigénico hidrato de carbono que tiene un hidrato de carbono (azúcar) particular producido por la célula cancerosa y un antígeno hidrato de carbono del ABO]; una cadena de hidrato de carbono (azúcar) [ácido hialurónico, \beta-glucano y cadena de hidrato de carbono (azúcar) contenida en el antígeno hidrato de carbono descrito anteriormente]; una proteína de unión de cadenas de hidratos de carbono (azúcar) (proteína de unión del ácido hialurónico y proteína de unión de \beta-glucano); lectina (concanavalina A, lectina de la lenteja, lectina de la judía riñón, lectina del estramonio y lectina del germen del trigo); un fosfolípido (cardiolipina); un lipopolisacárido (endotoxina); sustancias químicas (hormonas tales como PTH, T3, T4, TSH, insulina, LH, FSH y prolactina, productos químicos que perturban la función endocrina tales como tributilestaño, nonilfenol, 4-octilfenol, ftalato de di-n-butilo, ftalato de diciclohexilo, benzofenona, octacloroestireno y ftalato de di-2-etilhexilo); un receptor (receptor para el estrógeno y TSH); un ligando (estrógeno y TSH); y anticuerpos contra estos.

Entre los descritos anteriormente, el procedimiento de la presente invención es útil para el análisis (determinación cuantitativa) de glicoproteínas que tienen diferentes estructuras de la cadena de hidrato de carbono (azúcar), una cadena de nucleótidos (cadena de oligonucleótidos y cadena de polinucleótidos) y una cadena peptídica (incluidos polipéptidos), es especialmente útil para las glicoproteínas que tienen diferentes estructuras de la cadena de hidrato de carbono (azúcar). A este respecto, como se sabe que la estructura de la cadena del hidrato de carbono (azúcar) está cambiada en una enfermedad particular tal como el cáncer, e informada su utilidad en el laboratorio clínico (química clínica), la glicoproteína que tiene diferente estructura de la cadena del hidrato de carbono (azúcar) puede evaluarse nuevamente para su utilidad en el laboratorio clínico (química clínica) usando el procedimiento de la presente invención. Además, la separación de un tipo mutante generado por la mutación o sustitución diminuta, de una cadena de nucleótidos (una cadena de oligonucleótidos o una cadena de polinucleótidos) o una cadena peptídica (incluidos polipéptidos) del tipo silvestre se ha considerado como una diana analítica importante en el campo de la biología molecular y del laboratorio clínico molecular (química clínica), y por consiguiente, analizando (determinando la cantidad) este tipo mutante y/o tipo silvestre usando el procedimiento de la presente invención, aumentará la posibilidad de descubrir algunos factores valiosos en el laboratorio clínico (química clínica).

(2) La muestra que contiene el analito

Una muestra que contiene un analito de la presente invención descrito anteriormente puede ejemplificarse por medio de las siguientes: las muestras derivadas de origen biológico que incluyen líquidos corporales tales como suero, plasma, líquido espinal, líquido sinovial, líquido linfático, excreciones tales como orina, heces, expectoración, materia purulenta, exfoliación dérmica, muestras ambientales tales como alimentos, bebidas, agua de grifo, agua marina, agua de lagos y pantanos, agua de ríos, agua residual de fábricas, lavados para semiconductores, lavados tras la limpieza de instrumentos médicos; y sus productos procesados reconstituidos disolviendo en agua o en un tampón utilizado usualmente en este campo tales como tampón Tris, tampón fosfato, tampón Veronal, tampón borato, tampón de Good. A este respecto, una muestra relevante para la presente invención abarca una que contiene un analito como se describió anteriormente producido por medio de síntesis química.

(3) El análogo (un análogo marcado y un análogo que mejora la reacción)

Un análogo utilizado en la presente invención es una sustancia a la que es capaz de unirse una SFC, unida a un analito diana para el análisis en una muestra. Es decir, un análogo es una sustancia que tiene el mismo sitio de unión que el sitio de unión presente en un analito en dicha muestra a la que es capaz de unirse una SFC.

Tal sustancia incluye, por ejemplo, la misma que un analito en una muestra, una diana de un análisis; una en la que una parte de la estructura de un analito en una muestra está modificada, alterada, desnaturalizada, eliminada (denominada análogo). Los ejemplos de estas sustancias son, por ejemplo, proteínas recombinantes introducidas con mutación parcial en un analito en una muestra, una diana de una análisis; péptidos con secuencia peptídica parcialmente modificada de un analito en una muestra, una diana de una análisis; una cadena de nucleótidos con secuencia de nucleótidos parcialmente modificada de un analito en una muestra, una diana de una análisis. A este respecto, los ejemplos específicos de un analito en una muestra, una diana de un análisis, son como se describieron anteriormente.

A este respecto, un análogo marcado y un análogo que mejora la reacción utilizados en la presente invención son unos en los que una sustancia marcadora o una sustancia que mejora la reacción está unida a las sustancias descritas anteriormente, y los ejemplos específicos y las formas de realización de preferencia de una sustancia marcadora y de una sustancia que mejora la reacción son como se describirán a continuación. Además, un procedimiento para unir una sustancia marcadora o una sustancia que mejora la reacción a las sustancias descritas anteriormente puede estar de acuerdo con un procedimiento similar a un procedimiento para realizar la unión entre una sustancia que mejora la reacción y una SFC o un procedimiento para marcar una SFC por medio de una sustancia marcadora, que se describirán a continuación.

La cantidad de uso de un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) no se describe simplemente debido a la dependencia de los tipos de un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) a utilizar, o los tipos o concentraciones de uso de una SFC.

Más específicamente, un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) puede estar contenido en una disolución (por ejemplo, una disolución que contiene un analito y un análogo, una disolución que contiene un análogo, una disolución que contiene un análogo y una SFC), de modo que la cantidad de uso de un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) en una disolución como se describió anteriormente es, como límite inferior, usualmente no más baja que 10 pM, de preferencia no más baja que 1 nM y de más preferencia no más baja que 100 nM, y como límite superior, usualmente no más alta que 10 \muM, de preferencia no más alta que 1 \muM y de más preferencia no más alta que 500 nM.

(4) La disolución que contiene el analito o el análogo

"Una disolución que contiene un analito o un análogo" en la presente invención significa una disolución que incluye un analito (una muestra que incluye el analito) o un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) de la presente invención, como se describió anteriormente.

Tal disolución incluye (a) una muestra que incluye en sí misma un analito, como se describió anteriormente, (b) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (es decir, una disolución que incluye un complejo entre un analito y no menos de un tipo de SFC), (c) una disolución que contiene un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción), (d) una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) (es decir, una disolución que incluye un analito y un análogo), (e) una disolución que contiene un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) y no menos de un tipo de SFC (es decir, una disolución que incluye un complejo entre un análogo y no menos de un tipo de SFC), (f) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) y no menos de un tipo de SFC.

A este respecto, como la disolución (b) o (e) anterior, por ejemplo, cuando se usan 2 o más tipos de SFC en la presente invención, está incluida específicamente una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre una parte de las SFC entre todas las SFC que se unen finalmente con un analito o un análogo del mismo (una parte de las SFC completas), y un analito o un análogo del mismo, es decir, una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre la(s) SFC(s) en menor cantidad que las SFC que compone un complejo finalmente formado entre un analito o un análogo del mismo y 2 o más tipos de SFC, y un analito o un análogo del mismo.

A saber, por ejemplo, cuando se usan 2 tipos de SFC, es una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un tipo de una SFC y un analito o un análogo del mismo. Y por ejemplo, cuando se usan 3 tipos de SFC, es una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un tipo de una SFC y un analito o un análogo del mismo, y una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre 2 tipos de SFC y un analito o un análogo del mismo. (En este caso, también cuando se usan 4 o más tipos de SFC, el criterio es el mismo que en estos casos).

Más específicamente, por ejemplo, como se describirá a continuación, cuando se usa SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reacción, y una SFC que mejora la reacción en combinación como una SFC, una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un analito y dicha SFC, y una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un analito y una SFC que mejora la reacción corresponde a una disolución (b) como se describió anteriormente; y cuando se usa una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción en combinación como una SFC, una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un analito y una SFC marcada, y una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un analito y una SFC que mejora la reacción corresponde a una disolución (b) como se describió anteriormente. Además, cuando se usa una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reacción, y se usa una SFC marcada que mejora la reacción en combinación como una SFC, una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un analito y dicha SFC, y una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre un analito y una SFC marcada que mejora la reacción corresponde a una disolución (b) como se describió anteriormente.

A este respecto, en la descripción anterior, usualmente, una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC es por lo general una disolución de reacción obtenida mezclando de manera adecuada una muestra que incluye un analito como se describió anteriormente (no se incluye una SFC) y una disolución que incluye una SFC como se describirá a continuación.

La disolución (e) anterior incluye, más específicamente, por ejemplo, cuando se usa un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción, y cuando se usan 2 o más tipos de SFC, una disolución que contiene, de manera similar a como se describió anteriormente, un complejo (un complejo intermedio) entre una parte de las SFC entre todas las SFC que finalmente se unen con un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción (una parte de las todas las SFC), y una análogo marcado o un análogo que mejora la reacción, es decir, una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre la(s) SFC(s) en menor cantidad que las SFC que compone un complejo finalmente formado entre un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción y 2 o más tipos de SFC, y un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción. A este respecto, en la descripción anterior, usualmente, una disolución que contiene un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) es por lo general una disolución de reacción obtenida mezclando de manera adecuada una disolución que incluye un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción, y una disolución que incluye una SFC como se describirá a continuación.

Además, como la disolución (d) anterior, por ejemplo, está incluida una disolución que contiene un analito en una muestra, y un análogo marcado con una sustancia marcadora (un análogo marcado) o un análogo unido con una sustancia que mejora la reacción (un análogo que mejora la reacción). A este respecto, una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo es usualmente y generalmente una disolución mixta obtenida mezclando de manera adecuada una muestra que incluye un analito (no está contenida una SFC) y una disolución que incluye un análogo.

Como la disolución (f) anterior, más específicamente, por ejemplo, cuando se usa un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción, y cuando se usan 2 o más tipos de SFC, una disolución que contiene, de manera similar a como se describió anteriormente, un complejo (un complejo intermedio) una parte de las SFC entre todas las SFC que finalmente se unen con un analito y/o un análogo marcado (o un análogo que mejora la reacción), y un analito y/o un análogo marcado (o un análogo que mejora la reacción) (una parte de las SFC completas), es decir, una disolución que contiene un complejo (un complejo intermedio) entre la(s) SFC(s) en menor cantidad que las SFC que compone un complejo finalmente formado entre un analito y/o un análogo marcado (o un análogo que mejora la reacción) y 2 o más tipos de SFC, y un analito y/o un análogo marcado (o un análogo que mejora la reacción). A este respecto, una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) y no menos de un tipo de SFC es usualmente y generalmente una disolución de reacción obtenida mezclando de manera adecuada una disolución que incluye una muestra que tiene un analito como se describió anteriormente, una disolución que contiene un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC.

En la descripción anterior, (a) una muestra que incluye un analito es como se describió anteriormente. Además, como disoluciones (b) a (f), se utiliza cualquiera siempre que no se inhiba la formación de un complejo entre un analito y una SFC, y/o un complejo entre un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) y una SFC, y se incluyen, por ejemplo, el agua y una disolución tampón.

Como una de tales disoluciones tampón, se incluye una que tenga acción de tampón en un intervalo de pH usualmente de 5 a 11, y que se utilice usualmente en este campo. Los ejemplos de disoluciones tampón incluyen el tampón Tris, el tampón de Good, tampón TE, tampón TAE, tampón TBE, tampón TBS, un tampón fosfato o un tampón borato, y su concentración de uso está usualmente en un intervalo de 1 mM a 2 M, y de preferencia de 10 mM a 1 M, y el pH es usualmente 5 a 11, de preferencia 5 a 10, de más preferencia 5,5 a 8,5, de más preferencia aún 6 a 8 y particularmente de preferencia aproximadamente 7.

1-5. La SFC y una disolución que la contiene

En la presente invención, "una sustancia capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo (SFC)" significa una sustancia que tiene una propiedad capaz de formar un complejo entre un analito o un análogo del mismo y la SFC, a saber, un complejo que contiene el analito o el análogo del mismo y la SFC como constituyente por medio de la unión con un analito o el análogo del mismo como se describió anteriormente, o por medio de la unión con el analito o el análogo del mismo a través de otra SFC.

Tal SFC significa la sustancia que se une con un analito o un análogo del mismo por una interacción tal como una reacción "antígeno"-"anticuerpo", una reacción "cadena de hidrato de carbono (azúcar)"-"proteína", una reacción "cadena de hidrato de carbono (azúcar)"-"lectina", una reacción "enzima"-"inhibidor", una reacción "proteína"-"cadena peptídica" o una reacción "cromosoma o cadena de nucleótidos"-"cadena de nucleótidos". Cuando una de las sustancias en los pares mencionados anteriormente es el analito o el análogo del mismo, la otra es la SFC. Por ejemplo, cuando un analito o un análogo del mismo es un "antígeno", una SFC es un "anticuerpo", y cuando un analito o un análogo del mismo es un "anticuerpo", una SFC es un "antígeno" (lo mismo se aplica a los otros pares mencionados anteriormente).

Más específicamente, tal sustancia incluye, por ejemplo, una cadena de nucleótidos (una cadena de oligonucleótidos y una cadena de polinucleótidos); un cromosoma; una cadena peptídica (péptido C y angiotensina I), una proteína [procalcitonina, inmunoglobulina A (IgA), inmunoglobulina E (IgE), inmunoglobulina G (IgG), inmunoglobulina M (IgM), inmunoglobulina D (IgD), \beta_{2}-microglobulina, albúmina, sus productos de desnaturalización, y proteínas del suero tales como la ferritina]; una enzima [una amilasa (tipo pancreática, tipo salival y tipo X), una fosfatasa alcalina (hepática, ósea, placentaria y del intestino delgado), una fosfatasa ácida (PAP), una \gamma-glutamil transferasa (renal, pancreática y hepática), una lipasa (tipo pancreática y tipo gástrica), una creatina quinasa (CK-1, CK-2 y CKm), una lactato deshidrogenasa (LDH1 a LDH5), una glutamato oxaloacetato transaminasa (ASTm y ASTs), una glutamato-piruvato transaminasa (ALTm y ALTs), una colina esterasa (ChE1 a ChE5), una leucina aminopeptidasa (C-LAP, AA y CAP), renina, una proteína cinasa y una tirosina cinasa]; microorganismos tales como bacterias (bacterias de la tuberculosis, neumococos, microorganismos de la difteria, meningococos, gonococos, estafilococos, estreptococos, bacterias entéricas, bacilos coliformes y Helicobacter pylori), virus (virus de la rubéola, herpesvirus, virus de la hepatitis, virus de ATL, virus del SIDA, virus de la influenza, adenovirus, enterovirus, poliovirus, virus de EB, VHA, VHB, VHC, VIH y VLTH), hongos (candida y Cryptococcus), espiroquetas (leptospira, Treponema pallidum), clamidias y micoplasmas; una proteína, un antígeno peptídico o carbohidrato derivado de dichos microorganismos; diversos alérgenos causantes de broncoespasmos, rinitis alérgica y dermatitis atópica (alérgenos derivados del polvo del hogar, ácaros tales como Dermatophagoides farinae y Dermatophagoides pteronyssinus, polen del cedro, ciprés, Pasupalum thunbergii, ambrosía, hierba timotea, grama de olor y centeno, un animal tal como un gato, un perro o un cangrejo, alimentos tales como el arroz y la clara de huevo, hongo, insecto, madera, fármaco o sustancia química); lípidos (lipoproteína); una proteasa (tripsina, plasmina y serina proteasa); un antígeno de proteína marcadora tumoral (PSA, PGI y PGII); un antígeno hidrato de carbono [AFP (L1 a L3), GCh (familia de GCh), transferrina, IgG, tiroglobulina, factor acelerador de la degradación (DAF), antígeno carcinoembrionario (CEA, NCA, NCA-2 y NFA), CA19-9, PIVKA-II, CA125, antígeno específico de la próstata, un marcador tumoral antigénico hidrato de carbono que tiene un hidrato de carbono (azúcar) particular producido por la célula cancerosa y un antígeno hidrato de carbono del ABO]; una cadena de hidrato de carbono (azúcar) [ácido hialurónico, \beta-glucano y cadena de hidrato de carbono (azúcar) contenida en el antígeno hidrato de carbono descrito anteriormente]; una proteína de unión de cadenas de hidratos de carbono (azúcar) (proteína de unión del ácido hialurónico y proteína de unión de \beta-glucano); lectina (concanavalina A, lectina de la lenteja, lectina de la judía riñón, lectina del estramonio y lectina del germen del trigo); un fosfolípido (cardiolipina); un lipopolisacárido (endotoxina); sustancias químicas (hormonas tales como PTH, T3, T4, TSH, insulina, LH, FSH y prolactina, productos químicos que perturban la función endocrina tales como tributilestaño, nonilfenol, 4-octilfenol, ftalato de di-n-butilo, ftalato de diciclohexilo, benzofenona, octacloroestireno y ftalato de di-2-etilhexilo); un receptor (receptor para el estrógeno y TSH); un ligando (estrógeno y TSH); y anticuerpos contra estos. A este respecto, el anticuerpo utilizado en la presente invención abarca un producto de descomposición tal como los fragmentos Fab y F(ab')2 producidos por la degradación con una enzima proteolítica (proteinasa) tal como la papaína o la pepsina o por degradación química.

La SFC descrita anteriormente puede usarse sola o en combinación con dos o más tipos.

A este respecto, cuando se usan dos o más tipos de SFC en combinación (juntas), el sitio de unión de cada SFC no está especialmente limitado siempre que dos o tipos de las SFC puedan formar un complejo con un analito o un análogo del mismo. Los sitios de unión a unir por tales SFC incluyen, por ejemplo, un caso en el que todos los sitios de unión a unir por dos o más de las SFC están presentes en el analito o el análogo del mismo [forma de unión (1)]; un caso en el que el sitio de unión a unir por al menos un tipo de SFC (por ejemplo, SFC A) entre dos o más de las SFC está presente solamente en el analito o el análogo del mismo, y el sitio de unión a unir por al menos otro tipo de SFC (por ejemplo, sustancia B de unión al complejo) está presente en un sitio generado nuevo por la formación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y la SFC A [forma de unión (2)]; y un caso en el que el sitio de unión a unir por al menos un tipo de SFC (por ejemplo, SFC A) entre dos o más de las SFC está presente solamente en el analito o el análogo del mismo, y el sitio de unión a unir por al menos otro tipo de la SFC (por ejemplo, SFC B) está presente solamente en la SFC A [forma de unión (3)]. Entre éstos, resulta preferible que los sitios de unión a unir por cada una de dos o más de las SFC sean diferentes. A este respecto, en la forma de unión (2), la sustancia que tiene la propiedad de unirse específicamente a un sitio generado nuevo (una SFC) incluye, por ejemplo, un anticuerpo, una cadena peptídica y una cadena de nucleótidos, que pueden reconocer un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y son capaces de unirse al mismo.

Como una SFC como se describió anteriormente, resulta preferible una que se une con un analito o un análogo del mismo por una reacción "antígeno"-"anticuerpo" o por una reacción "cadena de hidrato de carbono (azúcar)'-'proteína". Específicamente, resulta preferible un anticuerpo contra un analito o un análogo del mismo, o un antígeno unido con un analito o un análogo del mismo, o una proteína unida a un analito o a un análogo del mismo y de más preferencia un anticuerpo contra un analito o un análogo del mismo, o una proteína unida a un analito o a un análogo del mismo.

Una SFC como se describió anteriormente puede estar unida con una sustancia marcadora y/o una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética (abreviada a continuación en el presente documento como una sustancia que mejora la reacción) de un analito o un análogo del mismo y puede dar como resultado (1) una SFC que tiene la propiedad de ser capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo y de ser capaz de cambiar la movilidad electroforética de un analito o un análogo del mismo (abreviada a continuación en el presente documento como una SFC que mejora la reacción o una SFC mejoradora de la reacción), (2) una SFC que tiene la propiedad de ser capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo y que está marcada con una sustancia marcadora (una SFC marcada), y (3) una SFC marcada con una sustancia marcadora, que tiene la propiedad de ser capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo y de ser capaz de cambiar la movilidad electroforética de un analito o un análogo del mismo (una SFC marcada que mejora la reacción).

Al usar una SFC unida con una sustancia que mejora la reacción, puede cambiarse la movilidad electroforética de una SFC, y el orden de disposición de una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y las disoluciones que incluyen no menos de un tipo de SFC en una etapa (1), pueden controlarse arbitrariamente, y puede aumentarse la eficacia en la concentración de un analito o un análogo del mismo y/o una SFC, y una reacción de un analito o un análogo del mismo y una SFC (una reacción de formación de complejo).

Además, al usar una SFC unida con una sustancia marcadora, puede medirse (detectarse) un analito en una muestra.

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(1) Una SFC que mejora la reacción

Una SFC que mejora la reacción es una que tiene la propiedad de ser capaz de formar un complejo entre un analito o un análogo del mismo y la sustancia, y que es capaz de cambiar la movilidad electroforética de un analito o un análogo del mismo, es decir, una que tiene la propiedad de ser capaz de generar una diferencia en el comportamiento (movilidad electroforética) de dicho analito o análogo del mismo correspondiente a la operación de electroforesis formando un complejo con un analito o un análogo del mismo, y una que es capaz de hacer que la movilidad electroforética de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC que mejora la reacción (o un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC diferente de una SFC que mejora la reacción) sea más alta o más baja que la movilidad electroforética (más rápida o más lenta que la movilidad electroforética) de un analito o uno de sus análogos en sí mismo (un analito o un análogo del mismo no unido con una SFC que mejora la reacción).

Como una de tales SFC que mejoran la reacción, las SFC descritas anteriormente unidas con las siguientes sustancias que mejoran la reacción son generales: Por ejemplo, un óxido de metal inorgánico tal como sílice y alúmina; un metal tal como el oro, titanio, hierro y níquel; un óxido de metal inorgánico introducido con un grupo funcional por una operación tal como el tratamiento de acoplamiento con silano; organismos tales como diversos microorganismos y células eucariotas; polisacáridos tal como agarosa, celulosa y dextrano insoluble; compuestos de polímeros sintéticos tales como látex de poliestireno, un copolímero de estireno-butadieno, un copolímero de estireno-ácido metacrílico, un copolímero de acroleína-dimetacrilato de etilenglicol, un látex de estireno-ácido estirenosulfónico, poliacrilamida, poliglicidil metacrilato, partículas recubiertas con poliacroleína, poliacrilonitrilo reticulado, polímeros basados en ácido acrílico o éster de acrilato, un copolímero de acrilonitrilo-butadieno, un copolímero de cloruro de vinilo-éster de acrilato y un copolímero de acetato de polivinilo-acrilato; biomoléculas tales como eritrocitos, azúcar, ácido nucleico (polinucleótido tal como ARN, ADN), proteína, polipéptido y poliaminoácido (ácido poliglutámico, ácido poliaspártico, polilisina); y lípidos.

Sin embargo, por ejemplo, una sustancia que mejora la reacción puede estar unida a un analito o a un análogo del mismo por un procedimiento de unión química tal como un procedimiento para introducir un grupo funcional en la superficie de una sustancia que mejora la reacción y posteriormente unir a un analito o un análogo del mismo a través de este grupo funcional; por un procedimiento para unir entre una sustancia que mejora la reacción y un analito o un análogo del mismo a través de un conector. A este respecto, en la descripción anterior, una sustancia que mejora la reacción es una que tiene la propiedad de ser capaz de proporcionar a dicha SFC la propiedad como una SFC que mejora la reacción como se describió anteriormente, al unirse a una SFC. A saber, una sustancia que mejora la reacción es una que tiene la propiedad de ser capaz de proporcionar a dicha SFC la propiedad como una SFC que mejora la reacción como se describió anteriormente, al unirse a una SFC. A saber, una sustancia que mejora la reacción es una que tiene la propiedad de ser capaz de cambiar la movilidad electroforética de un analito o un análogo del mismo, es decir, una que tiene la propiedad de ser capaz de generar una diferencia en el comportamiento (movilidad electroforética) de dicho analito o análogo del mismo correspondiente a la operación de electroforesis, a través de una SFC, formando un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC (o un complejo entre un analito o un análogo del mismo, una SFC que mejora la reacción y una SFC diferente de una SFC que mejora la reacción), y de esta manera es capaz de hacer que la movilidad electroforética de de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC que mejora la reacción sea más alta o más baja que la movilidad electroforética (más rápida o más lenta que la movilidad electroforética) de un analito o uno de sus análogos en sí mismo o un complejo entre un analito o un análogo del mismo no unido con una SFC que mejora la reacción y una SFC.

Entre esas, como una SFC que mejora la reacción, son de preferencia las obtenidas por la unión de un ácido nucleico (una cadena de nucleótidos), proteína, polipéptido o poliaminoácido a una SFC como se describió anteriormente y de más preferencia las obtenidas por la unión de un ácido nucleico (una cadena nucleótidos) o poliaminoácido a una SFC. Además, como una sustancia que mejora la reacción, son de preferencia las que incluyen un anticuerpo como un SFC, específicamente, son de preferencia las obtenidas por la unión de un ácido nucleico (una cadena de nucleótidos), proteína, polipéptido o poliaminoácido como una sustancia que mejora la reacción a un anticuerpo como una SFC, y son particularmente de preferencia las obtenidas por la unión de un ácido nucleico (una cadena de nucleótidos) o poliaminoácido como una sustancia que mejora la reacción, a un anticuerpo como una SFC.

Para realizar la unión de una sustancia que mejora la reacción a una SFC, a saber, para preparar una SFC que mejora la reacción, puede aplicarse cualquier procedimiento común utilizado en este campo, por ejemplo, un mismo procedimiento de marcado conocido usado generalmente en los mismos procedimientos de EIA, RIA, FIA o un procedimiento de hibridación conocidos (por ejemplo, Ikagaku Jikken Koza (Experimental Manual in Medical Chemistry), vol. 8, editado por Yuichi Yamamura, 1ª Ed., Nakayama Shoten Co., Ltd., 1971; Zusetu (Illustrative Description) Fluorescent Antibodies, Akira Kawao, 1ª Ed., Softscience Co., Ltd., 1983; Enzyme Immunoassay, Eiji Ishikawa, Tadashi Kawai, Kiyoshi Miyai, 3ª Ed., Igaku-Shoin Ltd., 1987; Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2ª Ed., J. Sambroock, E.F. Fritsch, T. Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Handbook of Fluorescent Probe and Research Chemicals, 7ª Ed., Capítulo 8, Molecular Probe Inc.; Documento WO 2002/082083); o procedimiento común que utiliza una reacción entre avidina (o estreptavidina) y biotina.

A este respecto, cuando se usa una SFC que mejora la reacción como una SFC, resulta preferible el uso combinado (uso paralelo) de una SFC marcada como se describió anteriormente. Sin embargo, cuando una SFC que mejora la reacción puede medirse (detectarse) en por cualquier procedimiento, o permite ser marcada por una sustancia marcadora, no es necesario el uso combinado de una SFC marcada.

Además, cuando se usan una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción en combinación (se usan de forma paralela) como una SFC, y siempre que se forme un complejo entre 3 componentes de un analito o un análogo del mismo, una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción, las formas de unión de estos 3 componentes o sitios de unión de una SFC marcada y una SFC que la mejora la reacción no están especialmente limitadas. Tales formas de unión incluyen, por ejemplo, (1) un complejo denominado sándwich en el que un analito o un análogo del mismo está intercalado por un SFC marcada y una SFC que mejora la reacción, (2) un complejo en el que una SFC que mejora la reacción o una SFC marcada está unida además en un sitio de unión con un analito o un análogo del mismo y una SFC marcada o una SFC que mejora la reacción y (3) un complejo en el que SFC que mejora la reacción o una SFC marcada está unida además en una SFC marcada o una SFC que mejora la reacción unida con un analito o un análogo del mismo. Además, dichos restos de unión incluyen, por ejemplo, (1) el caso en el que todos los sitios de unión de una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción están presentes solo en un analito o un análogo del mismo [forma de unión (1)], (2) el caso en el que cualquiera de los sitios de unión de una SFC marcada o una SFC que mejora la reacción está presente solo en un analito y un análogo del mismo, y el otro sitio de unión está presente en un sitio nuevo generado por la formación de un complejo entre un analito y cualquiera de dicha SFC marcada y dicha SFC que mejora la reacción [forma de unión (2)], (3) cualquiera de los sitios de unión de una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción está presente solo en un analito o un análogo del mismo, mientras que el otro sitio de unión está presente solo en cualquiera de dicha SFC marcada y dicha SFC que mejora la reacción [forma de unión (3)] y (4) el caso de sus combinaciones. Entre esos, un sitio de unión de una SFC marcada, y un sitio de unión de una SFC que mejora la reacción resulta preferible uno diferente. A este respecto, en la descripción anterior (2), como uno que tiene la propiedad para unirse específicamente en un sitio generado nuevo (una SFC marcada y/o una SFC que mejora la reacción), por ejemplo, están incluidos un anticuerpo, una cadena peptídica, una cadena de nucleótidos, que permiten reconocer un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC marcada y/o una SFC que mejora la reacción, y son capaces de unirse al mismo.

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(2) Una SFC marcada

Una SFC como se describió anteriormente es generalmente una que puede medirse (detectarse) por cualquier procedimiento, o permite ser marcada por una sustancia marcadora. Al usar una que tiene tal propiedad, puede medirse (detectarse) un analito en una muestra. A este respecto, cuando un analito o un análogo del mismo puede detectarse en sí mismo por cualquier procedimiento (por ejemplo, una enzima), o un analito o un análogo del mismo es directamente capaz de unirse a una sustancia marcadora sin usar (no a través de) una SFC, puede medirse (detectarse) un analito en una muestra incluso cuando dicha SFC pueda no tener la propiedad descrita anteriormente. Los ejemplos de los que pueden detectarse por cualquier procedimiento incluyen una enzima, un colorante, una sustancia fluorescente, una sustancia luminiscente, una sustancia que tiene absorción en la región UV.

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Entre esos, como una SFC usada en la presente invención, resulta preferible una sustancia capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo y que está marcada por una sustancia marcadora (una SFC marcada).

Como una sustancia marcadora usada en la presente invención, puede adoptarse una cualquiera de las usadas en este campo tales como un inmunoensayo enzimático (EIA), un radioinmunoensayo (RIA), un inmunoensayo fluorescente (FIA) y un procedimiento de hibridación. Tal sustancia marcadora incluye, por ejemplo, enzimas tales como fosfatasa alcalina (ALP), \beta-galactosidasa \beta-Gal), peroxidasa (POD), microperoxidasa, glucosa oxidasa (GOD), glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH), malato deshidrogenasa y luciferasa; colorantes tales como azul brillante de Coomassie R250, y naranja de metilo; isótopos radiactivos tales como ^{99m}Tc, ^{131}I, ^{125}I, ^{14}C, ^{3}H, ^{32}P y ^{35}S; colorantes del tipo de HiLyte tales como HiLyte Fluor 488, HiLyte Fluor 555, HiLyte Fluor 647, HiLyte Fluor 680 y HiLyte Fluor 750 (todos ellos son nombres comerciales de HiLyte Bioscience, Inc.); colorantes del tipo Alexa tales como Alexa Fluor Dye 350, Alexa Fluor Dye 430, Alexa Fluor Dye 488, Alexa Fluor Dye 532, Alexa Fluor Dye 546, Alexa Fluor Dye 555, Alexa Fluor Dye 568, Alexa Fluor Dye 594, Alexa Fluor Dye 633, Alexa Fluor Dye 647, Alexa Fluor Dye 660, Alexa Fluor Dye 680, Alexa Fluor Dye 700 y Alexa Fluor Dye 750 (todos ellos son nombres comerciales de Molecular Probes, Inc.); colorantes del tipo de CyDye tales como Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5 y Cy7 (todos ellos son nombres comerciales de Amersham Biosciences, Inc.); materiales fluorescentes tales como fluoresceína, rodamina, dansilo, fluorescamina, cumarina, naftilamina, o sus derivados, colorantes fluorescentes de tierras raras [combinaciones de un metal tierra rara tal como samario (SM), europio (Eu), terbio (Tb) o disprosio (Dy) y un compuesto quelato tal como 4,4'-bis(1'',1'',1'',2'',2'',3'',3''-heptafluoro-4'',6''-hexanediona-6''-il)clorosulfo-O-terfenilo (BHHCT), ácido 4,7-bis(clorosulfonil)-1,10-fenantorolin-2,9-dicarboxílico (BCPDA), ácido \beta-naftiltrifluoroacético (\beta-NTA)], colorantes intercaladores [por ejemplo, colorantes de acridina tales como naranja de acridina; compuestos de etidio tales como bromuro de etidio, homodímero-1 de etidio (EthD-1), homodímero-2 de etidio (EthD-2), monoazida de bromuro de etidio (EMA) y dihidroetidio; compuestos de yodo tales como yoduro del propidio y yoduro del hexidio; 7-aminoactinomicina D (7-AAD); colorantes del tipo dímero de cianina tales como POPO-1, BOBO-1, YOYO-1, TOTO-1, JOJO-1, POPO-3, LOLO-1, BOBO-3, YOYO-3, y TOTO-3 (todos ellos son nombres comerciales de Molecular Probes, Inc.); colorantes del tipo SYTOX tales como SYBR Gold, SYBR Green I y SYBR Green II, SYTOX Green, SYTOX Blue y SYTOX Orange (todos ellos son nombres comerciales de Molecular Probes, Inc.)], una unida a un grupo menor de doble hélice de ADN [por ejemplo, 4'',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI: nombre comercial de Molecular Probes, Inc.), pentahidrato (bis-benzimida) (Hoechst 33258: nombre comercial de Molecular Probes, Inc.), y trihidrocloruro (Hoechst 33342: nombre comercial de Molecular Probes, Inc.)]; colorantes del tipo del benzimida (Hoechst 34580: nombre comercial de Molecular Probes, Inc.)], una unida específicamente a la secuencia de adenina-timina (A-T) [por ejemplo, colorantes de acridina tales como 9-amino-6-cloro-2-metoxiacridina (ACMA), y bis(6-cloro-2-metoxi-9-acridinil) espermina (homodímero de acridina), hidroxiestilbamidina]; materiales luminiscentes tales como luciferina, isoluminal, luminal y oxalato de bis(2,4,6-trifluorofenilo); material que tienen absorción en la región ultravioleta tales como fenol, naftol, antraceno o sus derivados; sustancias que tienen propiedad como agente marcador de rotación "spin" representadas por compuestos que tienen un grupo de oxilo tales como 4-amino-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1 -oxilo, 3-amino-2,2,5,5-tetrametilpirrolidin-1 -oxilo, y 2,6-di-t-butil-\alpha-(3,5-di-t-butil-4-oxo-2,5-ciclohexadin-1-iliden)-p-toliloxilo.

El marcado de una SFC con una sustancia marcadora puede realizarse según un procedimiento similar a un procedimiento para marcar una SFC con una sustancia marcadora como se describió anteriormente, o un procedimiento común descrito en el documento WO 2002/082083.

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(3) Una SFC marcada que mejora la reacción

Además, en la presente invención, como una SFC, puede usarse también una sustancia que está marcada por medio de una sustancia marcadora, capaz de formar un complejo con un analito o un análogo del mismo, y que es capaz de cambiar la movilidad electroforética de un analito (una SFC marcada que mejora la reacción), a saber, una SFC que mejora la reacción marcada por medio de una sustancia marcadora. A este respecto, una sustancia marcadora y una SFC que mejora la reacción son como se describió anteriormente, y también el marcado de una SFC que mejora la reacción con una sustancia marcadora puede realizarse según un procedimiento similar a un procedimiento para marcar una SFC con una sustancia marcadora como se describió anteriormente, o un procedimiento común descrito en el documento WO 2002/082083.

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(4) Combinaciones de SFC

Como se describió anteriormente, en la presente invención, por ejemplo, se usan los diversos SFC siguientes. A este respecto, pueden usarse naturalmente en combinaciones adecuadas.

(a) Una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reacción

(b) Una SFC marcada

(c) Una SFC que mejora la reacción

(d) Una SFC marcada que mejora la reacción

(e) Una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reacción y una SFC que mejora la reacción

(f) Una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción

(g) Una ASFC no unida con una sustancia marcadora, una sustancia que mejora la reacción y una SFC marcada que mejora la reacción.

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(5) Una disolución que contiene una SFC

Como disolución que contiene una SFC de la presente invención, como se describió anteriormente, puede usarse una cualquiera siempre que no inhiba la formación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y dicha SFC. Tal disolución incluye, por ejemplo, agua, una disolución tampón.

Como una de tales disoluciones tampón, puede usarse una cualquiera siempre que tenga acción de tampón usualmente en un intervalo de pH de 5 a 11, y que no inhiba la formación de dicha reacción de formación de complejo.

Los ejemplos de la disolución tampón son los que se utilizan usualmente en este campo tales como el tampón Tris, tampón de Good, tampón TE, tampón TAE, Tampón TBE, tampón TBS, un tampón fosfato o un tampón borato. La concentración de uso de estos tampones es usualmente de 1 mM a 2 M, de preferencia 10 mM a 1 M, y el pH es usualmente 5 a 11, de preferencia 5 a 10, de más preferencia 5,5 a 8,5, de más preferencia aún 6 a 8 y particularmente de preferencia aproximadamente 7.

La concentración de una SFC contenida en una disolución como se describió anteriormente, a saber la cantidad de uso de una SFC no se describe simplemente por la dependencia de los tipos de SFC utilizadas, sin embargo, resulta usualmente preferible que la SFC esté presente en la disolución de reacción (una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una SFC) en una concentración que no sea más baja que (de preferencia no más baja que 2 veces, de más preferencia no más baja que 5 veces) una concentración en la que la SFC pueda unirse a la totalidad de los analitos o análogos de los mismos de una concentración que corresponde al límite de medición.

Además, el límite superior de la concentración no está especialmente limitado, sin embargo, en vista de la eficiencia económica, usualmente no es más alta que 10^{12} veces (de preferencia no es más alta que 10^{9} veces, de más preferencia no más alta que 10^{6} veces) una concentración en la que la SFC pueda unirse a la totalidad de los analitos a análogos de los mismos de una concentración que corresponde al límite de medición.

Más específicamente, una SFC puede estar contenida en una disolución como se describió anteriormente, de manera que la concentración de una SFC en una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y una SFC es, como límite inferior, usualmente no más baja que 10 pM, de preferencia no más baja que 1 nM y de más preferencia no más baja que 100 nM, y como límite superior, usualmente no más no alta que 10 \muM, de preferencia no más alta que 1 \muM y de más preferencia no más alta que 500 nM.

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1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo

Los modos para llevar a cabo los procedimientos para formar un complejo de la presente invención se muestran específicamente a continuación.

(a) Un caso en el que se usan una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho
analito y la SFC al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito y/o al menos un tipo de las SFC aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito y la SFC.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezclen uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y/o al menos un tipo de SFC aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y/o al menos un tipo de SFC se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber significa que un analito y/o al menos un tipo de SFC se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y/o la concentración de no menos de un tipo de SFC pasa a ser más alta que la de un analito y/o no menos de un tipo de SFC en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una zona de una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto entre dicho analito y la SFC se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(b) Un caso en el que se usa una SFC marcada

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una zona de la disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho analito y la SFC al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada concentrando al mismo tiempo dicho analito y/o al menos un tipo de las SFC marcada aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito y la SFC marcada.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y/o al menos un tipo de SFC marcada aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y/o al menos un tipo de SFC marcada se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber significa que un analito y/o al menos un tipo de SFC marcada se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y/o la concentración de al menos de un tipo de SFC marcada pasa a ser más alta que la de un analito y/o al menos de un tipo de SFC marcada en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una zona de una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito y la SFC marcada se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(c) Un caso en el que se usa una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho analito y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción concentrando al mismo tiempo dicho analito y/o al menos un tipo de la SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito y la SFC que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y/o al menos un tipo de SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y/o al menos un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber significa que un analito y/o al menos un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y/o la concentración de no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito y/o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una
zona de una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha sustancia que mejora la reacción" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito y la SFC que mejora la reacción se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(d) Un caso en el que se usa una SFC marcada que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho analito y la SFC marcada que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada que mejora la reacción concentrando al mismo tiempo dicho analito y/o al menos un tipo de la SFC marcada que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito y la SFC marcada que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y/o al menos un tipo de SFC marcada que mejora la reacción aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y/o al menos un tipo de SFC marcada que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber significa que un analito y/o al menos un tipo de SFC marcada que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y/o la concentración de no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito y/o no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una zona de una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada que mejora la reacción" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito y la SFC marcada que mejora la reacción se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(e) Un caso en el que se usa una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reac- ción, y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC, y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción concentrando al mismo tiempo al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de la SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando al menos uno seleccionado de un analito y no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, al menos uno seleccionado de un analito, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que al menos uno seleccionado de un analito, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito, la concentración de no menos de un tipo de SFC o la concentración de no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito, no menos de un tipo de SFC o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(f) Un caso en el que se usa una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada, y una zona de la disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho analito, la SFC marcada y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada y la SFC que mejora la reacción concentrando al mismo tiempo al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de la SFC marcada y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito, la SFC marcada y la SFC que mejora la reacción.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de SFC marcada y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de SFC marcada y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que al menos uno seleccionado de un analito, no menos de un tipo de SFC marcada y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito, la concentración de no menos de un tipo de SFC marcada o la concentración de no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito, no menos de un tipo de SFC o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada y la SFC que mejora la reacción" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito, la SFC marcada y la SFC que mejora la reacción se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(g) Un caso en el que se usa una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reac- ción, y una SFC marcada que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC marcada que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC, y una zona de la disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo entre dicho analito, la SFC y la SFC marcada que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC marcada que mejora la reacción concentrando al mismo tiempo al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de la SFC y no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo entre dicho analito, la SFC y la SFC marcada que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, al menos uno seleccionado de dicho analito, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que al menos uno seleccionado de un analito, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito, la concentración de no menos de un tipo de SFC o la concentración de no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito, no menos de un tipo de SFC o no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que contiene un analito (por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y una zona de una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC marcada que mejora la reacción" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito, la SFC y la SFC marcada que mejora la reacción se lleva a cabo, no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

Un procedimiento para formar un complejo de la presente invención también puede usarse en un procedimiento denominado competitivo. El procedimiento para llevarlo a cabo en un procedimiento competitivo es el siguiente:

(h) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o la disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC) concentrando al mismo tiempo dicho analito y el análogo marcado y/o no menos de un tipo de SFC aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y el análogo marcado, y/o no menos de un tipo de SFC aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y el análogo marcado y/o no menos de un tipo de SFC se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que un analito y un análogo marcado, y/o no menos de un tipo de SFC se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y un análogo marcado, y/o la concentración de una SFC pasa a ser más alta que la de un analito y un análogo marcado, y/o no menos de un tipo de SFC en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), una zona de una disolución que contiene las SFC] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito, el análogo marcado y la SFC se lleva a cabo (se lleva a cabo el contacto de dicho analito y la SFC, y el análogo marcado y la SFC), no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(i) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o la disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción) concentrando al mismo tiempo dicho analito y el análogo marcado y/o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y el análogo marcado, y/o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y el análogo marcado y/o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que un analito y un análogo marcado, y/o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y un análogo marcado, y/o la concentración de una SFC que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito y un análogo marcado, y/o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo
de SFC), una zona de una disolución que contiene las SFC que mejoran la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito, el análogo marcado y la SFC que mejora la reacción se lleva a cabo (se lleva a cabo el contacto de dicho analito y la SFC que mejora la reacción, y el análogo marcado y la SFC que mejora la reacción), no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(j) Un caso en el que se usa un análogo marcado, una SFC y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), (b) una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y (c) una disolución que incluye no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o la disolución que contienen una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo A entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SDC que mejora la reacción, y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción) concentrando al mismo tiempo al menos uno seleccionado de dicho analito y el análogo marcado, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo A entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando al menos uno seleccionado de dicho analito y el análogo marcado, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, al menos uno seleccionado de dicho analito y el análogo marcado, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que al menos uno seleccionado de un analito y un análogo marcado, no menos de un tipo de SFC y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y un análogo marcado, la concentración de no menos de un tipo de SFC o la concentración de no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción pasa a ser más alta que la de un analito y un análogo marcado, no menos de un tipo de SFC o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC, y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejoran la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, el contacto de dicho analito y el análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción se lleva a cabo (a saber, se lleva a cabo el contacto de dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción, y dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción), no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

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(k) Un caso en el que se usa un análogo que mejora la reacción y una SFC marcada

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (o la disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC), y una zona de la disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC marcada y un complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo que mejora la reacción se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada y dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada) concentrando al mismo tiempo dicho analito y el análogo que mejora la reacción y/o no menos de un tipo de SFC marcada aplicando un voltaje en dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC marcada y el complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC), y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho analito y el análogo que mejora la reacción, y/o no menos de un tipo de SFC marcada aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho analito y el análogo que mejora la reacción y/o no menos de un tipo de SFC marcada se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que un analito y un análogo que mejora la reacción, y/o no menos de un tipo de SFC marcada se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un analito y un análogo que mejora la reacción, y/o la concentración de no menos de un tipo de una SFC marcada pasa a ser más alta que la de un analito y un análogo que mejora la reacción, y/o no menos de un tipo de SFC marcada en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC), una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito y el análogo que mejora la reacción se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada y dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, se lleva a cabo el contacto de dicho analito, el análogo que mejora la reacción y la SFC marcada (a saber, se lleva a cabo el contacto de dicho analito y la SFC marcada, y dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada), no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

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(l) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC

(1) (a) Una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC, y (b) una disolución que contiene un análogo marcado se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC, y una zona de una disolución que incluye un análogo marcado (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con la SFC (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que contiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) concentrando al mismo tiempo dicho análogo marcado y/o dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo A aplicando un voltaje en dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC, y una disolución que incluye un análogo marcado, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho análogo marcado, y/o dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo A, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho análogo marcado y/o dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo A se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que dicho análogo marcado, y/o dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo A se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un análogo marcado, y/o la concentración de una SFC no involucrada en la formación de un complejo A pasa a ser más alta que la de un análogo marcado, y/o una SFC no involucrada en la formación de un complejo A en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC, y una zona de una disolución que incluye un análogo marcado] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con la SFC (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC no involucrada en la formación del complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, se lleva a cabo el contacto de dicho análogo marcado y la SFC (a saber, se lleva a cabo el contacto de dicho análogo marcado y dicha SFC no involucrada en la formación del complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC), no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(m) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, y (b) una disolución que contiene un análogo marcado se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, y una zona de una disolución que incluye un análogo marcado (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en un capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que contiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción) concentrando al mismo tiempo dicho análogo marcado y/o dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo A aplicando un voltaje en dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, y una disolución que incluye un análogo marcado, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando dicho análogo marcado, y/o dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo A, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, dicho análogo marcado y/o dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo A se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que dicho análogo marcado, y/o dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo A se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un análogo marcado, y/o la concentración de una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo A pasa a ser más alta que la de un análogo marcado, y/o una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo A en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, y una zona de una disolución que incluye un análogo marcado] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, se lleva a cabo el contacto de dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción (a saber, se lleva a cabo el contacto de dicho análogo marcado y dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación del complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción), no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

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(n) Un caso en el que se usa un análogo marcado, una SFC y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), (b) una disolución que contiene un análogo marcado y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y al menos un tipo de SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), una zona de la disolución que incluye un análogo marcado y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo A entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción [a saber, un complejo entre dicho analito y la SFC (o la SFC que mejora la reacción) en dicha disolución (a) se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c), y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC (o la SFC que mejora la reacción) no involucrada en la formación de dicho complejo con dicho analito en dicha disolución (a) y dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c)] concentrando al mismo tiempo uno seleccionado del complejo A entre dicho analito y no menos de un tipo de SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), un análogo marcado, y no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de SFC) aplicando un voltaje en dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo A entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), una disolución que incluye un análogo marcado y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC), junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando al menos uno seleccionado de dicho complejo entre dicho analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), dicho análogo marcado, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, al menos uno seleccionado de dicho complejo entre dicho analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), dicho análogo marcado, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que al menos uno seleccionado de un complejo entre dicho analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), un análogo marcado, y no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un complejo entre dicho analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), la concentración de un análogo marcado o la concentración de no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) pasa a ser más alta que la de un complejo entre dicho analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), un análogo marcado, y no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), una zona de una disolución que incluye un análogo marcado y una zona de una disolución que incluye no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC)] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción [a saber, un complejo entre dicho analito y la SFC (o la SFC que mejora la reacción) en dicha disolución (a) se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c), y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC (o la SFC que mejora la reacción) no involucrada en la formación de dicho complejo con dicho analito en dicha disolución (a) y dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c)]" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, se lleva a cabo el contacto de dicho analito, el análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción [a saber, se lleva a cabo el contacto de dicho complejo entre dicho analito y la SFC (o la SFC que mejora la reacción) en dicha disolución (a) y dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c), y dicho análogo marcado, dicha SFC (o la SFC que mejora la reacción) no involucrada en la formación de dicho complejo con dicho analito en dicha disolución (a) y dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c)], no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

(o) Un caso en el que se usa un análogo que mejora la reacción y una SFC marcada

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada, y (b) una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar de modo que se forman por separado una zona de la disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada, y una zona de una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción (de modo que se forma la interfase líquido-líquido), y se forma un complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada al aplicar un voltaje en dicho capilar, sin mezclar previamente estas disoluciones fuera de un capilar.

(2) Posteriormente, dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con la SFC marcada (a saber, dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada) concentrando al mismo tiempo dicho análogo que mejora la reacción y/o dicha SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo A aplicando un voltaje en dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, no por (independientemente de) la difusión molecular y sin mezclar físicamente, para formar el complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada.

En la descripción anterior, "antes de que estas disoluciones se mezclen uniformemente" significa "antes de que cada zona (interfase líquido-líquido) de una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada, y una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción, junto con el líquido, de ser necesario, dispuestos en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente por difusión molecular". A este respecto, "interfase" significa lo mismo según se describió anteriormente.

Además, en la etapa (2) descrita anteriormente, "concentrando un análogo que mejora la reacción, y/o una SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo A, aplicando un voltaje en un capilar" significa que, como se describió de manera similar anteriormente, un análogo que mejora la reacción y/o una SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo A se juntan con forma similar a una banda (similar a un tapón) tras la aplicación de un voltaje en un capilar. Es decir, significa que dichas sustancias se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar de manera que se genera una porción en la que la concentración de dicha sustancia pasa a ser más alta que la de una sustancia en una zona dispuesta en una etapa (1), a saber, significa que dicho análogo que mejora la reacción y/o dicha SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo A se juntan tras la aplicación de un voltaje en un capilar, y se genera una porción en la que la concentración de un análogo que mejora la reacción, y/o la concentración de una SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo A pasa a ser más alta que la de un análogo que mejora la reacción, y/o una SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo A en una zona de la disolución [por ejemplo, una zona de una disolución que incluye un analito y no menos de un tipo de SFC marcada, y una zona de una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción] dispuesta en una etapa (1).

En la etapa (2) anterior, "dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con la SFC marcada (a saber, dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada)" significa que, de manera similar a como se describió anteriormente, se lleva a cabo el contacto de análogo que mejora la reacción y la SFC marcada (a saber, se lleva a cabo el contacto de dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada) no por (independientemente de) la difusión molecular sino por la utilización del fenómeno de que cuando una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) se dispone corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta), y se lleva a cabo la electroforesis, una sustancia con movilidad electroforética más elevada (velocidad electroforética más rápida) en una disolución alcanza una sustancia con movilidad electroforética más baja (velocidad electroforética más lenta).

En los procedimientos (a) a (o) descritos anteriormente, por nivel (grado) de concentración de una sustancia a concentrar [por ejemplo, un analito, una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción, un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción, un complejo entre un analito y una SFC, un complejo entre un analito y una sustancia que mejora la reacción, un complejo entre un analito y una SFC marcada, un complejo entre un análogo marcado y una SFC y un complejo entre un análogo que mejora la reacción y una SFC], la concentración de una sustancia [por ejemplo, un analito, una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción, un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción, un complejo entre un analito y una SFC, un complejo entre un analito y una sustancia que mejora la reacción, un complejo entre un analito y una SFC marcada, un complejo entre un análogo marcado y una SFC y un complejo entre un análogo que mejora la reacción y una SFC] en una parte de reunión (similar a una banda) de dicha sustancia tras la aplicación de un voltaje en un capilar, con relación a la concentración de una sustancia [por ejemplo, un analito, una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción, un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción, un complejo entre un analito y una SFC, un complejo entre un analito y una sustancia que mejora la reacción, un complejo entre un analito y una SFC marcada, un complejo entre un análogo marcado y una SFC y un complejo entre un análogo que mejora la reacción y una SFC] en una zona de la disolución dispuesta en una etapa (1) es, como límite inferior, usualmente no más no baja que 1,5 veces, de preferencia no más no baja que 5 veces, de más preferencia no más baja que 10 veces y de más preferencia aún no más baja que 25 veces, y el límite superior no está especialmente limitada, sin embargo usualmente no es más alta que 10^{7} veces, de preferencia no más no alta que 10^{6} veces y de más preferencia no más alta que 10^{5} veces.

Además, en los procedimientos (a) a (o) descritos anteriormente "se pone en contacto concentrando al mismo tiempo" significa, de manera similar a como se describió anteriormente, ambos casos, cuando la concentración y el contacto se llevan a cabo simultáneamente, y un caso cuando el contacto se lleva a cabo después de que la concentración se ha completado sustancialmente, y por consiguiente abarca todos los demás casos diferentes del caso en el que la concentración se lleva a cabo después de que el contacto se ha completado sustancialmente.

En los procedimientos (a) a (o) descritos anteriormente, puede llevarse a cabo una etapa (2), de manera similar a como se describió anteriormente, antes de que una disolución por una etapa (1) se mezcle uniformemente bajo condiciones que permitan la concentración, el contacto y la formación de un complejo, al aplicar un voltaje en dicho capilar.

En los procedimientos (a) a (o) descritos anteriormente, puede llevarse a cabo una etapa (2), de manera similar a como se describió anteriormente, aplicando un voltaje en dicho capilar bajo condiciones en las que la concentración, el contacto y la formación de un complejo pueden llevarse a cabo aplicando un voltaje en dicho capilar, antes de que una disolución dispuesta en un capilar por una etapa (1) se mezcle uniformemente.

Los ejemplos específicos y las formas de realización de preferencia de tales condiciones son como se describieron anteriormente y, por ejemplo, la etapa (2) anterior puede llevarse a cabo según el procedimiento para concentrar descrito anteriormente, considerando de manera adecuada la movilidad electroforética de un analito, una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción, un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción, un complejo compuesto de 2 o más tipos de los mismos, a usar, o la conductividad eléctrica de las disoluciones que los incluyen.

Además, el voltaje aplicado y otras condiciones de reacción (por ejemplo, pH, temperatura, tiempo) en una etapa (2) pueden también determinarse adecuadamente de un intervalo como se describió anteriormente, considerando un analito, una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción, un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción, un complejo compuesto de 2 o más tipos de los mismos y las disoluciones que los incluyen.

2. Un procedimiento para la separación de la presente invención

Un procedimiento para la separación de la presente invención se caracteriza por la separación eléctrica de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC, formado por un procedimiento para la formación de un complejo de la presente invención según se describió anteriormente, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo.

A saber, la característica es que un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC en una disolución, formado por el contacto de cada uno al moverse (migrar) electroforéticamente en un capilar en una etapa (2) de la presente invención, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo se hacen mover (migrar) electroforéticamente nuevamente y se separan.

Un procedimiento para la separación de la presente invención puede llevarse a cabo según un procedimiento conocido excepto en la separación eléctrica de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y no menos de un tipo de SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, en un procedimiento conocido para separar una sustancia por movimiento eléctrico (migración) usando, por ejemplo, un capilar, y también como material y reactivos a usar, pueden usarse los utilizados en los procedimientos conocidos.

Por consiguiente, un procedimiento para la separación de la presente invención incluye las siguientes etapas (1) a (3):

(1) una etapa de disponer (a) una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una sustancia capaz de formar el complejo con dicho analito o dicho análogo del mismo (la sustancia formadora de complejo), como cada zona separada en un capilar, de manera que al aplicar un voltaje a dicho capilar se forma el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejo, en la que entre dichas disoluciones, se dispone una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más alta corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja;

(2) una etapa de poner en contacto dicho analito o dicho análogo del mismo con la sustancia formadora de complejo utilizando las diferencias en la movilidad electroforética concentrando al mismo tiempo dicho analito o dicho análogo del mismo y/o al menos un tipo de las sustancias formadoras de complejo electroforéticamente juntando dicho analito o dicho análogo del mismo y/o dicha sustancia formadora de complejo al aplicar un voltaje en un capilar aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones para formar el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejo; y

(3) una etapa de separar dicho complejo, y la sustancia formadora de complejo no involucrada en la formación de dicho complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo por otro movimiento eléctrico.

A este respecto, en la descripción anterior, las formas de realización, un ejemplo específico o un ejemplo de preferencia, de un analito, un análogo (un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción), una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, una muestra que incluye un analito, una SFC (una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción), las disoluciones que los incluyen, una etapa de introducción [una etapa (1)], una etapa de una reacción de concentración [una etapa (2)], son como se describieron anteriormente.

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2-1. Una etapa de separación [una etapa (3)]

Como se describió anteriormente, un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, obtenido por las etapas (1) y (2) de la presente invención, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, se separan en un capilar, por otro movimiento eléctrico (migración).

Un procedimiento para la separación de la presente invención es para la separación de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, y más específicamente, (1) para la separación de un complejo entre dicho analito y la SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, por otro movimiento eléctrico (migración); o (2) para la separación de un complejo entre dicho análogo y la SFC, y un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo o un complejo entre dicho analito y la SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, por otro movimiento eléctrico (migración).

Por ejemplo, cuando se usa un procedimiento para la separación de la presente invención en un procedimiento no competitivo (por ejemplo, los procedimientos (a) a (g) que se describirán a continuación), y cuando se usa una SFC que incluye una sustancia marcadora (una SFC marcada o una SFC marcada que mejora la reacción), es suficiente la separación de al menos de una SFC que incluye una sustancia marcadora no involucrada (sustancias marcadora libres) en la formación de un complejo entre un analito y una SFC, y un complejo que incluye un analito. Aunque no se requiere necesariamente la separación de una SFC que no incluye una sustancia marcadora, de dicho complejo, resulta preferible la separación de dicho complejo y todas las SFC no involucradas (SFC libres) en la formación de un complejo.

Además, por ejemplo, cuando se usa un procedimiento para la separación de la presente invención en un procedimiento competitivo (por ejemplo, los procedimientos (h) a (o) que se describirán a continuación), y cuando se usa un análogo marcado, es suficiente la separación de al menos un complejo (final) entre un análogo marcado y (todas) las SFC, y un análogo marcado no involucrado (análogo marcado libre) en la formación de dicho complejo. No se requiere necesariamente la separación de un complejo entre un analito y una SFC, y un complejo (final) entre un análogo marcado y (todas) las SFC. Además, cuando se usa un análogo que mejora la reacción, es suficiente la separación de al menos un complejo entre un análogo que mejora la reacción y una SFC marcada, y un complejo entre un analito y una SFC marcada.

Una etapa (3) de la presente invención puede llevarse a cabo usando un procedimiento que permita separar suficientemente un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo. Como uno de tales procedimientos, puede usarse un procedimiento de electroforesis conocido y utilizado usualmente en este campo.

Específicamente, pueden usarse procedimientos de electroforesis basados en diversos principios (modos de separación). Los ejemplos de tales procedimientos son ITP, IF, como se describieron anteriormente; el procedimiento de electroforesis capilar de zona (CZE) para la separación de una sustancia objetivo al mover cada sustancia a diferente velocidad dependiendo de la intensidad de su carga, en el que se llena un capilar fundamentalmente solo con una disolución tampón para electroforesis, [referencia: H. Hisamoto y col.; Chem. Commun., (2001), 2662]; la denominada cromatografía electrocinética de micelas (MEKC) que usa una sustancia cargada que forma una micela iónica, y que separa una sustancia objetivo por la interacción con dicha micela, [referencia: S. Terabe, Trends Anal. Chem., (1989), 8, 129]; el denominado procedimiento de electroforesis capilar en gel (CGE) para separar una sustancia objetivo usando un material de relleno tal como un polímero que tiene efecto de tamiz molecular, y por la carga de una molécula y el tamaño de una molécula al inducir la interacción con un polímero, [referencia: S. Hjerten, J. Chromatogr., (1987), 397, 409].

A este respecto, en la presente invención, pueden usarse según sea adecuado los reactivos utilizados en un procedimiento de electroforesis como se describió anteriormente. Además, estos reactivos, un procedimiento de operación en la separación y las condiciones pueden seleccionarse adecuadamente según la descripción en las referencias, como se describió anteriormente.

Como procedimiento de electroforesis usado en una etapa (3) de la presente invención, puede usarse cualquier procedimiento de electroforesis basado en el mismo principio (modo de separación) que en un procedimiento de concentración usado en una etapa (2), o un procedimiento de electroforesis basado en un principio diferente (modo de separación) que en un procedimiento de concentración usado en una etapa (2).

A este respecto, cuando el uso de un procedimiento de electroforesis basado en el mismo principio (modo de separación) que en una etapa (2) proporciona separación insuficiente de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, es deseable el uso de un procedimiento de electroforesis basado en un principio diferente (modo de separación) que en un procedimiento de concentración usado en una etapa (2) para lleva a cabo una etapa (3) de la presente invención.

En tal caso, resulta particularmente preferible la ejecución de ITP, y FASS, en una etapa (2), y posteriormente CZE en una etapa (3).

Como se describió anteriormente, en un procedimiento de separación de la presente invención, están incluidos los siguientes 2 casos: (i) el contacto de dicho analito o su análogo y la SFC se lleva a cabo concentrando al mismo tiempo un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de una SFC, para formar un complejo entre dicho analito o el análogo del mismo y la SFC por una etapa (2) (es decir, el contacto de dicho analito o análogo del mismo y la SFC se lleva a cabo aplicando un voltaje en dicho capilar bajo condiciones tales que se concentra un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de una SFC, para formar un complejo entre dicho analito o análogo del mismo y la SFC), y posteriormente usando el mismo modo de separación sin cambiar el voltaje aplicado (es decir, aplicando un voltaje con la misma intensidad bajo las mismas condiciones que en una etapa (2)), dicho complejo y la SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración); (ii) o el contacto de dicho analito o análogo del mismo y la SFC se lleva a cabo concentrando al mismo tiempo un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de una SFC, para formar un complejo entre dicho analito o análogo del mismo y la SFC por una etapa (2) (es decir, el contacto de dicho analito o análogo del mismo y la SFC se lleva a cabo aplicando un voltaje en dicho capilar bajo condiciones tales que se concentra un analito o un análogo del mismo y/o al menos un tipo de una SFC, para formar un complejo entre dicho analito o análogo del mismo y la SFC), y posteriormente usando un modo de separación diferente y/o un voltaje aplicado diferente [es decir, cambiando las condiciones (el modo de separación usado) de las de una etapa (2) y/o la intensidad de voltaje a aplicar], dicho complejo y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración).

En cuanto al voltaje aplicado en una etapa (3), puede adoptarse cualquier intervalo siempre que se separen suficientemente un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, y se selecciona adecuadamente de un intervalo utilizado usualmente en este campo. Más específicamente, el voltaje se aplica de modo que la intensidad del campo eléctrico esté en un intervalo de usualmente, como límite inferior, no más bajo que 5 V/cm, de preferencia no más baja que 10 V/cm, de más preferencia no más bajo que 50 V/cm, de más preferencia aún no más bajo que 500 V/cm, particularmente de preferencia no más bajo que 1000 V/cm, y como límite superior, usualmente no más alto que 10000 V/cm, de preferencia no más alto que 5000 V/cm y de más preferencia no más alto que 2000 V/cm. A este respecto, como se describió anteriormente, el voltaje aplicado en una etapa (3) puede ser el mismo o puede ser diferente del aplicado en una etapa (2).

Además, otras condiciones de separación (por ejemplo, pH, temperatura, tiempo) pueden estar en cualquier intervalo siempre que se separe suficientemente un complejo de un analito o un análogo del mismo y una SFC, y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, y se seleccionan adecuadamente según un procedimiento conocido usado habitualmente en este campo.

Específicamente, aunque no se describen simplemente por la dependencia de la propiedad de un analito o un análogo del mismo y una SFC, sin embargo, el límite inferior del pH es usualmente no inferior a 2, de preferencia no inferior a 4 y de más preferencia no inferior a 5, y el límite superior no es superior a 13, de preferencia no superior a 11 y de más preferencia no superior a 9. El límite inferior de la temperatura es usualmente no inferior a 0ºC, de preferencia no inferior a 5ºC y de más preferencia no inferior a 10ºC, y el límite superior es usualmente no superior a 90ºC, de preferencia no superior a 80ºC, de más preferencia no superior a 50ºC, de más preferencia aún no superior a 40ºC, y particularmente de preferencia no superior a 30ºC. Además, el límite inferior del tiempo es usualmente no más corto que 1 minutos, de preferencia no más corto que 2 minutos y de más preferencia no más corto que 3 minutos, y el límite superior no es más prolongado que 20 minutos y de más preferencia no más prolongado que 10 minutos.

Como se describió anteriormente, una etapa (3) se lleva a cabo en un capilar, y como tal capilar, se incluye el mismo usado en una etapa (2), y el material y el diámetro interno del capilar también son como se describieron anteriormente.

Además, una etapa (3) de la presente invención se lleva a cabo usualmente en un estado en el que se carga un medio de electroforesis tal como una disolución tampón para electroforesis o dicha disolución tampón para electroforesis que contiene materiales de relleno, en un capilar (en la región de separación como se describió anteriormente). A este respecto, un ejemplo específico, la concentración de uso, el pH, el peso molecular, la viscosidad y un procedimiento de introducción en un capilar y el tiempo de introducción de un medio de electroforesis son los mismos a los descritos anteriormente.

A este respecto, como se describió anteriormente, cuando una etapa (3) de la presente invención se lleva a cabo usando un procedimiento de electroforesis basado en un principio diferente (modo de separación) del usado en un procedimiento de concentración en una etapa (2), no es necesario que el medio de electroforesis usado en una etapa (2) y el medio de electroforesis usado en una etapa (3) sean iguales, y puede usarse un medio de electroforesis diferente seleccionando los mismos adecuadamente.

A este respecto, las etapas (2) y (3) de la presente invención se llevan a cabo usualmente utilizando el mismo capilar (en el mismo capilar). A saber, un capilar utilizado en un procedimiento de separación de la presente invención tiene al menos una parte que permite llevar a cabo una etapa (1) de la presente invención, una parte que permite llevar a cabo una etapa (2) de la presente invención, y una parte que permite llevar a cabo una etapa (3) de la presente invención. Estas partes pueden estar presentes cada una independientemente en un capilar, o una parte o todas estas partes pueden estar presentes en estado superpuesto. Es decir, como resultado, un capilar utilizado en un procedimiento de separación de la presente invención es uno que permite disponer en un capilar (a) una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de sustancias que forman un complejo (una SFC) con dicho analito o análogo del mismo, de modo que al aplicar un voltaje en dicho capilar se forma el complejo entre dicho analito o análogo del mismo y la SFC sin mezclar previamente estas disoluciones, y que permite poner en contacto dicho analito o análogo del mismo y la SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito o análogo del mismo y/o al menos un tipo de SFC aplicando un voltaje en dicho capilar, antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, para formar el complejo entre dicho analito o análogo del mismo y la SFC, y que permite además separar dicho complejo y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, por otro movimiento eléctrico (migración).

2-2. Procedimientos específicos para la separación

Los modos para llevar a cabo los procedimientos para la separación de la presente invención se muestran específicamente a continuación.

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(a) Un caso en el que usa una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (a) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC para formar el complejo entre dicho analito y la SFC, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (a) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo y la SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(b) Un caso en el que se usa una SFC marcada

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (b) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada para formar el complejo entre dicho analito y la SFC marcada, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (b) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(c) Un caso en el que se usa una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (c) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción para formar el complejo entre dicho analito y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (c) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo y la SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(d) Un caso en el que se usa una SFC marcada que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (d) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada que mejora la reacción para formar el complejo entre dicho analito y la SFC marcada que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (d) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo y la SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (e) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción para formar el complejo entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (e) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo y dicha SFC no involucrada en la formación de dicho complejo y opcionalmente una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(f) Un caso en el que se usa una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC marcada y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (f) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada y la SFC que mejora la reacción para formar el complejo entre dicho analito, la SFC marcada y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (f) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo y opcionalmente una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC marcada que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (g) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC marcada que mejora la reacción para formar el complejo entre dicho analito, la SFC y la SFC marcada que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (g) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",
y

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo y opcionalmente una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

También puede usarse un procedimiento para la separación de la presente invención en un procedimiento denominado competitivo. El procedimiento para llevarla a cabo en un procedimiento competitivo es el siguiente:

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(h) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (h) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC, y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC) para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC y el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (h) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(1) (a) Una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (i) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción, y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción) para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (i) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

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(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), (b) una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC y (c) una disolución que incluye no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (j) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción, y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción) para formar el complejo A entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (j) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

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(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC marcada se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (k) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo que mejora la reacción se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada, y dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada) para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC marcada y el complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (k) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo B y dicho complejo A se separan en una región de separación de un capilar por otro movimiento eléctrico (migración).

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(l) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC

(1) (a) Una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC, y (b) una disolución que contiene un análogo marcado se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (l) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con la SFC (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC) para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (l) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

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(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción, y (b) una disolución que contiene un análogo marcado se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (m) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción) para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (m) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

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(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (o no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción), (b) una disolución que contiene un análogo marcado y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o y no menos de un tipo de una SFC) se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (n) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción [a saber, un complejo entre dicho analito y la SFC (o la SFC que mejora la reacción) en dicha disolución (a) se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c), y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC (o la SFC que mejora la reacción) no involucrada en la formación de dicho complejo con dicho analito en dicha disolución (a) y dicha SFC que mejora la reacción (o la SFC) en dicha disolución (c)], como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (n) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

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(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada, y (b) una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (o) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con la SFC marcada (a saber, dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC marcada) para formar el complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (o) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

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3. Un procedimiento para la medición de la presente invención

Por medio de la medición de la cantidad de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, y la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, que se separan por un procedimiento para la separación de la presente invención, por un procedimiento correspondiente a la propiedad de, por ejemplo, una sustancia marcadora en un complejo, o una sustancia marcadora en una SFC o su análoga no involucrada en la formación de un complejo, puede determinarse la cantidad de un analito presente en una muestra con alta sensibilidad y en un tiempo corto.

Por consiguiente, un procedimiento para la medición de la presente invención se caracteriza por comprender:

(1) una etapa de disponer (a) una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de una sustancia capaz de formar el complejo con dicho analito o dicho análogo del mismo (la sustancia formadora de complejo), como cada zona separada en un capilar, de modo que al aplicar un voltaje a dicho capilar se forma el complejo entre el dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejo, en el que entre dichas disoluciones, se dispone una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más alta corriente arriba de una disolución que contiene una sustancia con movilidad electroforética más baja;

(2) una etapa de poner en contacto dicho analito o dicho análogo del mismo con la sustancia formadora de complejo utilizando las diferencias en la movilidad electroforética concentrando al mismo tiempo dicho analito o dicho análogo del mismo y/o al menos un tipo de las sustancias formadoras de complejo electroforéticamente juntando dicho analito o dicho análogo del mismo y/o dicha sustancia formadora de complejo al aplicar un voltaje en un capilar aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones para formar el complejo entre dicho analito o dicho análogo del mismo y la sustancia formadora de complejo; ^{y}

(3) una etapa de separar dicho complejo, y la sustancia formadora de complejo no involucrada en la formación de dicho complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo por otro movimiento eléctrico; y

(4) una etapa de medir la cantidad de complejo separado de esa manera, o de la cantidad de la sustancia formadora de complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo para determinar la cantidad de dicho analito basándose en el resultado.

A este respecto, en la descripción anterior, las formas de realización, un ejemplo específico y un ejemplo de preferencia de un analito, un análogo (un análogo marcado, un análogo que mejora la reacción), una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, una muestra que incluye un analito, una SFC (una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción), las disoluciones que los incluyen, una etapa de introducción [una etapa (1)], una etapa de una reacción de concentración [una etapa (2)], una etapa de separación [etapa (3)] son como se describieron anteriormente.

Un procedimiento para la medición de la presente invención es para medir la cantidad de un complejo entre un analito o un análogo del mismo y una SFC, o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o la cantidad de un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, que se separan por una etapa (3) de la presente invención como se describió anteriormente, y para determinar la cantidad de un analito, basándose en el resultado, y más específicamente, (1) para medir la cantidad de un complejo entre un analito y una SFC, o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, que se separan por una etapa (3) de la presente invención, y para determinar la cantidad de un analito, basándose en los resultados; o (2) para medir la cantidad de un complejo entre un análogo y una SFC, o la cantidad de un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, o la cantidad de un complejo entre un analito y una SFC, que se separan, y para determinar la cantidad de un analito, basándose en los resultados.

Un procedimiento para la medición de la presente invención es aplicable a cualquiera de los procedimientos no competitivos o procedimientos competitivos.

A saber, cuando se lleva a cabo un procedimiento para la medición de la presente invención por medio de un procedimiento no competitivo, por ejemplo, puede realizarse de la siguiente manera:

(1) Por una etapa (1) de la presente invención, (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y de no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC marcada, una SFC que mejora la reacción, una SFC marcada que mejora la reacción, sus combinaciones) se disponen en un capilar, de modo que aplicando un voltaje a dicho capilar se forma el complejo entre dicho analito y la SFC [complejo (analito-SFC), complejo (analito-SFC marcada), complejo (analito-SFC que mejora la reacción), complejo (analito-SFC marcada que mejora la reacción), complejo (SFC-analito-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC marcada-analito-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC-analito-SFC marcada que mejora la reacción), y sus combinaciones], sin mezclar previamente estas disoluciones;

(2) por una etapa (2) de la presente invención, dicho analito se pone en contacto con dicha SFC concentrando al mismo tiempo dicho analito y/o al menos un tipo de SFC aplicando un voltaje a dicho capilar antes de mezclar uniformemente estas disoluciones para formar el complejo entre dicho analito y la SFC;

(3) por una etapa (3) de la presente invención, dicho complejo y una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración); y

(4) la cantidad de complejo separado o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se mide para determinar la cantidad de un analito en una muestra basándose en el resultado.

Además, cuando se lleva a cabo un procedimiento para la medición de la presente invención por medio de un procedimiento competitivo, por ejemplo, puede realizarse de la siguiente manera:

(1) Por una etapa (1) de la presente invención, (i) (a) una muestra que incluye un analito (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC), (b) una disolución que contiene un análogo marcado, marcado por medio de una sustancia marcadora (o una disolución que incluye un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción, sus combinaciones), o (ii) (a) una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción, sus combinaciones), o (iii) (a) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción, sus combinaciones), o (iii) (a) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC que mejora la reacción, sus combinaciones), y (b) una disolución que contiene un análogo marcado (o una disolución que incluye un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), se disponen en un capilar, de modo que aplicando un voltaje a dicho capilar se forma un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC [complejo (análogo marcado-SFC), complejo (análogo marcado-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC-análogo marcado-SFC que mejora la reacción), y sus combinaciones], o se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC [complejo (analito-SFC), complejo (analito-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC-analito-SFC que mejora la reacción) y sus combinaciones] y tal complejo B, sin mezclar previamente estas disoluciones;

(2) por una etapa (2) de la presente invención, (i) dicho análogo marcado se pone en contacto con dicha SFC [a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto con una SFC no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) que incluye dicho analito] o (ii) dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto con dicha SFC (a saber, dicho analito se pone en contacto con dicha SFC y dicho análogo marcado se pone en contacto dicha SFC) concentrando al mismo tiempo al menos uno de dicho analito, dicho análogo marcado y de no menos de un tipo de SFC antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC o para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC y el complejo B;

(3) por una etapa (3) de la presente invención, dicho complejo B, y un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan por otro movimiento eléctrico (migración); y

(4) se mide la cantidad de complejo B separado, o la cantidad de dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B para determinar la cantidad de un analito en una muestra basándose en el resultado.

Además, cuando se lleva a cabo un procedimiento para la medición de la presente invención por medio de un procedimiento competitivo, por ejemplo, puede también realizarse de la siguiente manera:

(1) Por una etapa (1) de la presente invención, (i) (a) una muestra que incluye un analito (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC), (b) una disolución que contiene un análogo unido con una sustancia que mejor la reacción (un análogo que mejora la reacción) (o una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC), y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC marcada, sus combinaciones), o (ii) (a) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC), y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC marcada, sus combinaciones), o (iii) (a) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (una SFC, una SFC marcada, sus combinaciones), y (b) una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC), se disponen en un capilar, de modo que aplicando un voltaje a dicho capilar se forma un complejo B entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada, o se forma un complejo A entre dicho analito y la SFC marcada y tal complejo B, sin mezclar previamente estas disoluciones;

(2) por una etapa (2) de la presente invención, (i) dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto con dicha SFC marcada [a saber, dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto con una SFC marcada no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) que incluye dicho analito] o (ii) dicho analito y el análogo que mejora la reacción se ponen en contacto con dicha SFC marcada (a saber, dicho analito se pone en contacto con dicha SFC marcada y dicho análogo que mejora la reacción se pone en contacto dicha SFC marcada) concentrando al mismo tiempo al menos uno de dicho analito, dicho análogo que mejora la reacción y de no menos de un tipo de SFC marcada antes de mezclar uniformemente estas disoluciones, para formar el complejo B entre dicho análogo que mejora
la reacción y la SFC marcada o para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC marcada y el complejo B;

(3) por una etapa (3) de la presente invención, dicho complejo B y el complejo A se separan por otro movimiento eléctrico (migración); y

(4) se mide la cantidad de complejo B separado, o la cantidad de complejo A separado para determinar la cantidad de un analito en una muestra basándose en el resultado.

A este respecto, se usa un análogo (un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción) por (i) presencia conjunta con un analito en una muestra (a saber, una muestra que incluye un analito) como una disolución que incluye un análogo marcado o un análogo que mejora la reacción y un analito (una disolución que contiene un analito y un análogo); o (2) sin presencia conjunta con un analito en una muestra (a saber, una muestra que incluye un analito) y por separado de una disolución que contiene un analito, como una disolución que contiene un análogo.

3-1. Una etapa de medición [una etapa (4)]

En una etapa (4) de la presente invención, puede medirse la cantidad de un complejo o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o la cantidad de un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, que están separados, por ejemplo, por un procedimiento correspondiente a la propiedad de una sustancia marcadora en dicho complejo, o una sustancia marcadora en una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o una sustancia marcadora en un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, y basándose en los resultados de medición de dicha sustancia marcadora. A saber, en un procedimiento no competitivo, puede determinarse la cantidad de un complejo entre un analito y una SFC, o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, que están separados, por ejemplo, por un procedimiento correspondiente a la propiedad de una sustancia marcadora en dicho complejo, o la sustancia marcadora en la SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, y basándose en el resultado de medición de dicha sustancia marcadora. En un procedimiento competitivo, puede determinarse la cantidad de un B complejo o la cantidad de un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o la cantidad de un B complejo o la cantidad de un complejo A), que están separados, por un procedimiento correspondiente a la propiedad de una sustancia marcadora en dicho complejo B, o una sustancia marcadora en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o una sustancia marcadora en un complejo A), y basándose en el resultado de medición de dicha sustancia marcadora.

La medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según cada procedimiento especificado correspondiente a un tipo de sustancia marcadora. Por ejemplo, cuando dicha propiedad es la actividad enzimática, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según un procedimiento común tal como EIA o un procedimiento de hibridación [por ejemplo, un procedimiento descrito en el "Enzyme immunoassay method, protein, nucleic acid, enzyme, separate vol., Nº 31, editado por T. Kitagawa, T. Nannbara, A. Tuji, 51 a 63, KYORITSU SHUPPAN Co., Ltd., publicado el 10 de septiembre 10 de 1987"]; cuando la propiedad dicha es la radiactividad, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo usando un instrumento de medición seleccionado adecuadamente tal como un contador GM del tipo de inmersión líquida, un contador de centelleo líquido, y un contador de centelleo de tipo pocillo, según el tipo y la intensidad de rayo de radiación emitido por dicha sustancia radiactiva según un procedimiento común tal como RIA o un procedimiento de hibridación, [por ejemplo, Medical Chemistry Experimental Course, volumen 8, editado por el U. Yamamura, 1ª Edición, publicado por Nakayama Bookstore en 1971; Biochemistry Experimental Course 2, A Tracer Experiment Method (parte 2), A. Takemura, H, Honjo, 501 a 525, publicado por TOKYO KAGAKU DOJIN Co., Ltd. el 25 febrero de 1977]; cuando dicha propiedad es la fluorescencia, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según un procedimiento común tal como FIA o un procedimiento de hibridación usando un instrumento de medición tal como un fluoroespectrómetro o un microscopio confocal de exploración láser [un procedimiento descrito en, por ejemplo, "Illustration Explanation, Fluorescent antibody, A. Kawao, 1ª Ed., publicado por Softscience Co., Ltd., 1983"; "Medical Chemistry Experimental Course, vol. 2, Chemistry of nucleic acid III, M. Saneyoshi, 299 a 318, publicado por TOKYO KAGAKU DOJIN Co., Ltd. el 15 de diciembre de 1977"]; cuando dicha propiedad es la luminiscencia, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según un procedimiento común usando un instrumento de medición tal como un contador de fotones [por ejemplo, un procedimiento descrito en "Enzyme immunoassay method, protein, nucleic acid, enzyme, separate vol., Nº 31, Editado por T. Kitagawa, T. Nannbara, A. Tuji, 252 a 263, KYORITSU SHUPPAN Co., Ltd., publicado el 10 de septiembre de 1987"; además cuando dicha propiedad es la absorción UV, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según un procedimiento común usando un instrumento tal como un espectrómetro; cuando la dicha propiedad es un fenómeno de color, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según un procedimiento común usando un instrumento de medición tal como un espectrómetro o un microscopio; cuando dicha propiedad es la rotación, la medición de una sustancia marcadora puede llevarse a cabo según un procedimiento común usando un instrumento de resonancia de spin electrónico [por ejemplo, un procedimiento descrito en el "Enzyme immunoassay method, protein, nucleic acid, enzyme, separate vol., Nº 31, editado por T. Kitagawa, T. Nannbara, A. Tuji, 264 a 271, KYORITSU SHUPPAN Co., Ltd., publicado el 10 de septiembre de 1987".

Además, la determinación de la cantidad de un analito presente en una muestra, basándose en la cantidad medida de un complejo o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o la cantidad de un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, a saber, la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo o la cantidad de una sustancia marcadora en una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o una sustancia marcadora en un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, puede llevarse a cabo, por ejemplo, de la siguiente manera:

En un procedimiento competitivo, el determinación de la cantidad de un analito presente en una muestra basándose en la cantidad medida de un complejo o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, a saber, la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo o la cantidad de una sustancia marcadora en una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, obtenida como anteriormente, puede llevarse a cabo, por ejemplo, preparando una curva de calibración que muestre la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo o la cantidad de una sustancia marcadora en una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, obtenida por medición con un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito, y aplicando la cantidad de una sustancia marcadora obtenida por la medición de una muestra que contiene un analito a dicha curva de calibración. Además, en un procedimiento no competitivo, la determinación de la cantidad de un analito presente en una muestra basándose en la cantidad de un complejo B o la cantidad de un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o la cantidad de un complejo B o la cantidad de complejo A), a saber, la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo B o la cantidad de una sustancia marcadora en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo A), obtenida como anteriormente, puede llevarse a cabo, por ejemplo, preparando una curva de calibración que muestre la relación entre la cantidad de un analito, y la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo B o la cantidad de una sustancia marcadora en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo A), obtenida por la medición con un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito, y aplicando la cantidad de una sustancia marcadora obtenida por la medición de una muestra que contiene un analito a dicha curva de calibración.

Además, por medio de la adición de una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno en una muestra, y comparando la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno, con la cantidad de un complejo no involucrado en la formación de dicho complejo, o la cantidad de una SFC o la cantidad de un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo [a saber, la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo o la cantidad de una sustancia marcadora en una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, o la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo B o la cantidad de una sustancia marcadora en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo B o la cantidad de una sustancia marcadora en un complejo A)], puede calcularse la cantidad relativa de un analito en una muestra. Además, tal cálculo también puede corregir un error en el equipo (dispositivo) de electroforesis. Además, usando la movilidad de un pico de un patrón interno es posible también corregir la movilidad de un pico del objetivo.

Tales sustancias detectables (patrones internos) incluyen, por ejemplo, un péptido, proteína, ácido nucleico (ADN, ARN), un aminoácido, azúcar, una cadena de azúcar marcada con la sustancia marcadora descrita anteriormente; y una sustancia fluorescente.

Además, en la presente invención, cuando se usa una enzima como una sustancia marcadora, pueden ser necesarios sustratos u otras enzimas que se acoplan a dicha enzima para medir la actividad de dicha enzima. En tal caso, por ejemplo, estos sustratos u otras enzimas de acoplamiento pueden disponerse en un capilar en el lado corriente abajo de una disolución que incluye un complejo o una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo [a saber, un complejo entre un analito y una SFC o una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo, o un complejo B o un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B (o un complejo B o un complejo A)], separados por una etapa (3) de la presente invención, al menos antes de llevar a cabo una etapa (4) de la presente invención. Resulta de preferencia que en una etapa (1) de la presente invención, se disponga una disolución que incluye estos sustratos u otras enzimas de acoplamiento más allá del lado corriente abajo de la disolución (zona) dispuesta en el extremo del lado corriente abajo entre una disolución (zona) que incluye un analito o análogo del mismo y una disolución (zona) que incluye no menos de un tipo de SFC, y se lleven a cabo las etapas (1) (4) de la presente invención.

Además, cuando se usa un colorante intercalador como sustancia marcadora, en una etapa (1) de la presente invención, no es necesario que dicho colorante intercalador se introduzca y disponga en un capilar con una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y una disolución que incluye no menos de un tipo de SFC. Y también, en una etapa (2) de la presente invención, no es necesario poner en contacto dicho colorante intercalador con un analito o un análogo del mismo y una SFC. Solamente es necesario llevar a cabo al menos una etapa (3) de la presente invención en presencia de dicho colorante intercalador. En tal caso, específicamente, por ejemplo, dicho colorante intercalador puede estar contenido en un medio de electroforesis y/o disolución tampón usados en una etapa (3) de la presente invención. Entre otros, en la presente invención, resulta de preferencia que una etapa (2) y una etapa (3) de la presente invención se lleven a cabo en presencia de dicho colorante intercalador. En este caso, dicho colorante intercalador puede estar contenido en un medio de electroforesis y/o disolución tampón usados en una etapa (2) y en una etapa (3) de la presente invención.

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3-2. Uso de un polímero cargado

En la presente invención, resulta de preferencia que una etapa (2) se lleve a cabo en presencia de un polímero cargado.

A saber, (i) poniendo en contacto un analito o un análogo del mismo, y una SFC en presencia de un polímero cargado para formar un complejo entre dicho analito o el análogo del mismo y la SFC, o (ii) poniendo el contacto un analito, un análogo (un análogo marcado) y una SFC en presencia de un polímero cargado para formar un complejo A entre dicho analito y la SFC, y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC; o (iii) poniendo en contacto un analito, un análogo que mejora la reacción y una SFC marcada en presencia de un polímero cargado para formar un complejo A entre dicho analito y la SFC marcada y un B complejo entre dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada, puede reducirse el efecto de una sustancia que está presente conjuntamente en una muestra (particularmente en una muestra de suero) que tiene mal efecto sobre el análisis. Específicamente, por ejemplo, (i) poniendo en contacto un analito y una SFC en presencia de un polímero cargado, se forma un complejo entre dicho analito y la SFC [complejo (analito-SFC), complejo (analito-SFC marcada), complejo (analito-SFC que mejora la reacción), complejo (analito-SFC marcada que mejora la reacción), complejo (SFC-analito-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC marcada-analito-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC-analito-SFC marcada que mejora la reacción), y sus combinaciones]; o (ii) poniendo en contacto un analito, un análogo marcado y una SFC en presencia de un polímero cargado (a saber, poniendo en contacto dicho analito y la SFC, y dicho análogo marcado y la SFC), se forma un complejo A entre dicho analito y dicha SFC [complejo (analito-SFC), complejo (analito-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC-analito-SFC que mejora la reacción) y sus combinaciones] y un B complejo entre el dicho análogo marcado y la SFC [complejo (análogo marcado-SFC), complejo (análogo marcado-SFC que mejora la reacción), complejo (SFC-análogo marcado-SFC que mejora la reacción), y sus combinaciones]; o (iii) poniendo en contacto un analito, un análogo que mejora la reacción y una SFC marcada (a saber, poniendo en contacto dicho analito y la SFC marcada, y dicho análogo que mejora la reacción y la SFC marcada) en presencia de un polímero cargado, se forma un complejo A entre dicho analito y dicha SFC marcada y un B complejo entre dicho análogo que mejora la reacción analógica y dicha SFC marcada.

Como polímero cargado usado en la presente invención, se usa uno que tiene la carga opuesta (positiva o negativa) a la de una sustancia que está presente conjuntamente en una muestra. Además, resulta preferible un polímero cargado que tenga la misma carga que la de una SFC usada. Como uno de tales polímeros cargados, están incluidos los polímeros polianiónicos y los polímeros policatiónicos.

Los polímeros polianiónicos incluyen, polisacáridos tales como heparina, sulfato de heparina, sulfato de condroitina, sulfato de dextrano, ácido politúngstico, ácido tungstofosfórico, ácido hialurónico, sulfato de dermatano y polianetol sulfato; polinucleótidos tales como ADN (ADN plasmídico, ADN de timo de ternera, ADN de esperma de salmón, ADN unido con celulosa y ADN sintético), y ARN; polipéptidos tales como poliaminoácidos (ácido poliaspártico, ácido poliglutámico), un polipéptido sintético; compuestos de polímeros sintéticos tales como poli-dldC, sulfato de polivinilo, ácido poliacrílico; cerámicas tales como partícula de vidrio, vidrio coloidal, polvo de vidrio; y sus complejos.

Además, los polímeros policatiónicos incluyen, polisacáridos tales como quitosano, sus derivados; polipéptidos tales como polilisina, polihistidina, poliarginina, protamina, histona, ornitina; compuestos de polímero sintéticos tales como polialilamina, polietilenimina, polivinilamina; poliaminas tales como espermina, espermidina; lípido catiónico; cerámicas; sus complejos.

Entre ellos, resulta de preferencia un polisacárido aniónico, y particularmente de preferencia el sulfato de heparina.

Los polímeros cargados descritos anteriormente pueden usarse solos o en combinación adecuada con dos o más tipos.

Un procedimiento para hacer que los polímeros cargados descritos anteriormente estén presentes al llevar a cabo una etapa (2) no está especialmente limitado siempre que la formación de un complejo pueda llevarse a cabo finalmente en presencia de un polímero cargado.

Tal procedimiento incluye, por ejemplo, un procedimiento para hacer que un polímero cargado esté presente conjuntamente en un medio de electroforesis a cargar en un capilar como se describió anteriormente; un procedimiento para hacer que un polímero cargado esté presente conjuntamente en una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo, y/o en una disolución que contiene la SFC.

Entre estos, el polímero cargado está presente conjuntamente de preferencia en una disolución (zona) diferente de la disolución (zona) que contiene un analito, de más preferencia en al menos una disolución (zona) dispuesta de manera adyacente al lado corriente arriba o al lado corriente abajo de la disolución (zona) que contiene un analito.

La cantidad de uso del polímero cargado descrito anteriormente no se describe simplemente por la dependencia del tipo del polímero cargado usado, sin embargo, por ejemplo, la concentración en un medio de electroforesis a cargar en un canal es, como límite inferior, usualmente no más baja que 0,01% (p/v), de preferencia no más baja que 0,05% (p/v) y de más preferencia no más baja que 0,5% (p/v), y como límite superior, usualmente no más alta que 50% (p/v), de preferencia no más no alta que 10% (p/v) y de más preferencia no más no alta que 5% (p/v), y entre otras resulta particularmente de preferencia aproximadamente 1% (p/v). Además, la concentración en una disolución que contiene un analito o un análogo del mismo o en una disolución que contiene una SFC es, como límite inferior, usualmente no más baja que 0,001% (p/v), de preferencia no más baja que 0,01% (p/v), de más preferencia no más baja que 0,02% (p/v) y de más preferencia aún no más baja que 0,025% (p/v), y como límite superior, usualmente no más no alta que 10% (p/v), de preferencia no más no alta que 5% (p/v), de más preferencia no más alta que 1% (p/v) y de más preferencia aún no más alta que 0,05% (p/v).

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3-3. Un procedimiento específico para la medición

Los modos para llevar a cabo los procedimientos para la medición de la presente invención se muestran específicamente a continuación.

(1) Un procedimiento no competitivo

Un procedimiento para la medición para el caso de un procedimiento no competitivo es el siguiente:

(a) Un caso en el que se usa una SFC no unida con una sustancia marcadora y una sustancia que mejora la reac- ción

En este caso, por ejemplo, puede llevarse a cabo como el siguiente [procedimiento A] o [procedimiento B].

Procedimiento A

(3) Dicho complejo y dicha SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (a) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una SFC contenida en el complejo separado o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una SFC, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de una SFC, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno de una disolución que contiene un analito y una disolución que contiene la SFC en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una SFC contenida en el complejo separado o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una SFC, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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(b) Un caso en el que se usa una SFC marcada

Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC] y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (a) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (b) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de una sustancia marcadora, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno de una disolución que contiene un analito y una disolución que contiene una SFC marcada en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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(c) Un caso en el que se usa una SFC que mejora la reacción

Procedimiento A

(3) Dicho complejo y dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (c) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una SFC que mejora la reacción contenida en el complejo separado o la cantidad de una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una SFC que mejora la reacción, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de una SFC que mejora la reacción, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Prodedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno de una disolución que contiene un analito y una disolución que contiene una SFC que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una SFC que mejora la reacción contenida en el complejo separado o la cantidad de una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una SFC que mejora la reacción, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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(d) Un caso en el que se usa una SFC marcada que mejora la reacción

Procedimiento A

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (d) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de sustancia marcadora, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno de una disolución que contiene un analito y una disolución que contiene una SFC marcada que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (e) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo y dicha SFC no involucrada en la formación de dicho complejo y opcionalmente una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (e) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una SFC contenida en el complejo separado o la cantidad de una SFC que mejora la reacción contenida en el complejo separado, o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o la cantidad de una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una SFC o una SFC que mejora la reacción, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito, y la cantidad de una SFC o la cantidad de una SFC que mejora la reacción, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno seleccionado de una disolución que contiene un analito, una disolución que contiene una SFC y una disolución que contiene una SFC que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una SFC contenida en el complejo separado o la cantidad de una SFC que mejora la reacción contenida en el complejo separado, o la cantidad de una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo o la cantidad de una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una SFC o una SFC que mejora la reacción, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando
el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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(f) Un caso en el que se usa una SFC marcada y una SFC que mejora la reacción

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC marcada y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (f) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo y opcionalmente una SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (f) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito, y la cantidad de una sustancia marcadora, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno seleccionado de una disolución que contiene un analito, una disolución que contiene una SFC marcada y una disolución que contiene una SFC que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene un analito [por ejemplo, (i) una muestra que incluye un analito, (ii) una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC], (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo una SFC marcada que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (g) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo y dicha SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo y opcionalmente una SFC no involucrada en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (g) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito, y la cantidad de una sustancia marcadora, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno seleccionado de una disolución que contiene un analito, una disolución que contiene una SFC y una disolución que contiene una SFC marcada que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en una SFC marcada que mejora la reacción no involucrada en la formación de dicho complejo por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

(2) Un procedimiento competitivo

Un procedimiento para la medición para el caso de un procedimiento competitivo es el siguiente:

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(h) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC

Procedimiento A

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC, y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC) para formar el complejo A entre dicho analito y la SFC y un complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (h) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (h) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de una sustancia marcadora, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) o una disolución que contiene la SFC en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) y (b) una disolución que contiene no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (i) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (i) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC) o una disolución que contiene una SFC que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), (b) una disolución que incluye no menos de un tipo de una SFC y (c) una disolución que incluye no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (j) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho analito y el análogo marcado se ponen en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción (a saber, dicho analito se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y dicha SFC que mejora la reacción y dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC y la SFC que mejora la reacción) para formar el complejo A entre dicho analito, la SFC y la SFC que mejora la reacción y un complejo B entre dicho análogo marcado, la SFC y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (j) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (j) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno seleccionado de una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo marcado (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo marcado y no menos de un tipo de SFC), una disolución que contiene la SFC y una disolución que contiene una SFC que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(3) Dicho complejo B y dicho complejo A se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (k) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

(4) La cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo A separado se mide por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra aplicando el resultado de la medición (valor de medición) a una curva de calibración que muestra la relación entre la cantidad de un analito y la cantidad de una sustancia marcadora, obtenida por un procedimiento similar usando una muestra que contiene una concentración conocida de un analito.

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Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y un análogo que mejora la reacción (o una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, un análogo que mejora la reacción y no menos de un tipo de SFC) o una disolución que contiene una SFC marcada en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en dicho complejo A separado por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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(l) Un caso en el que se usa un análogo marcado y una SFC

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que incluye una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC y (b) una disolución que contiene un análogo marcado se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (l) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con la SFC (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC) para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (l) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (l) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

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Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC o una disolución que contiene un análogo marcado en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción y (b) una disolución que contiene un análogo marcado se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (m) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(2) Posteriormente, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción (a saber, dicho análogo marcado se pone en contacto electroforéticamente con dicha SFC que mejora la reacción no involucrada en la formación de un complejo (complejo A) con dicho analito en dicha disolución que incluye una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción) para formar el complejo B entre dicho análogo marcado y la SFC que mejora la reacción, como en la etapa (2) descrita anteriormente en el caso (m) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo", y

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (m) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC que mejora la reacción o una disolución que contiene un análogo marcado en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), (b) una disolución que contiene un análogo marcado y (c) una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (n) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo B y dicho análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (n) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a al menos uno seleccionado de una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de una SFC (o no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción), una disolución que contiene un análogo marcado y una disolución que contiene no menos de un tipo de una SFC que mejora la reacción (o no menos de un tipo de una SFC) en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida en un análogo marcado no involucrado en la formación de dicho complejo B por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

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Procedimiento A

(1) (a) Una disolución que contiene una muestra que tiene un analito, y no menos de un tipo de SFC marcada y (b) una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción se introducen y se disponen en un capilar, como en la etapa (1) descrita anteriormente en el caso (o) de "1-6. Procedimientos específicos para formar un complejo",

(3) Dicho complejo B y dicho complejo A se separan por otro movimiento eléctrico (migración), como en la etapa (3) descrita anteriormente en el caso (o) de "2-2. Procedimientos específicos para la separación", y

Procedimiento B

Se añade una concentración conocida de una sustancia detectable como un patrón interno a una disolución que contiene una muestra que tiene un analito y no menos de un tipo de SFC marcada o una disolución que contiene un análogo que mejora la reacción en la etapa (1) descrita anteriormente del [procedimiento A], y se llevan a cabo las etapas (1) a (3) descritas anteriormente usando la disolución que contiene el patrón interno. Se mide la cantidad de una sustancia marcadora contenida en el complejo B separado o la cantidad de una sustancia marcadora contenida dicho complejo A separado por un procedimiento correspondiente a la propiedad (tipo) de una sustancia marcadora, y se calcula la cantidad de un analito en una muestra comparando el resultado de la medición (valor de medición) con la cantidad de dicha sustancia añadida como patrón interno.

\newpage

Un procedimiento para la medición de la presente invención puede llevarse a cabo según los procedimientos conocidos descritos anteriormente excepto por el uso de un procedimiento para la separación de la presente invención, y los reactivos a usar pueden seleccionarse también, según sea adecuado, según los mismos procedimientos conocidos.

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4. Un kit de la presente invención

Un kit de la presente invención es uno a utilizar para realizar el procedimiento para la formación de un complejo, el procedimiento para la separación y el procedimiento para la medición de la presente invención descritos anteriormente.

Como tal kit, deben estar incluidos los siguientes artículos:

(1) Al menos (i) la SFC descrita anteriormente, (ii) de ser necesario un análogo, y (iii) un libro de instrucciones para usar en el procedimiento para formar un complejo, el procedimiento para la separación y el procedimiento para la medición de la presente invención descritos anteriormente; o

(2) (i) un dispositivo de electroforesis (o un dispositivo de microfluídica) equipado con un capilar (canal) que tenga al menos una parte que permita llevar a cabo la etapa (1) descrita anteriormente de la presente invención y una parte que permita llevar a cabo la etapa (2) descrita anteriormente de la presente invención, de preferencia un capilar (canal) que tenga una parte que permita llevar a cabo la etapa (1) descrita anteriormente, una parte que permita llevar a cabo la etapa (2) descrita anteriormente y además una parte que permita llevar a cabo la etapa (3) descrita anteriormente de la presente invención, (ii) una SFC, (iii) de ser necesario un análogo, y (iv) un libro de instrucciones para usar en el procedimiento para formar un complejo, el procedimiento para la separación y el procedimiento para la medición de la presente invención descritos anteriormente.

A este respecto, dicho "libro de instrucciones" significa un manual de manipulación (manual de instrucciones) de dicho kit, documentos adjuntos (carta adjunta) o un folleto (prospecto), en el que las características, los principios y el procedimiento de operación de un procedimiento de la presente invención están sustancialmente descritos por medio de textos o dibujos.

Las formas de realización de preferencia y los ejemplos específicos de estos elementos de composición son como se describieron anteriormente.

Además, un kit de la presente invención puede también contener reactivos diferentes de los anteriores. Tales reactivos incluyen, por ejemplo, una disolución tampón para la separación por electroforesis, un diluyente de reactivos, un patrón interno, un calibrador (una disolución patrón), controles, reactivos (sustrato de enzimas, enzimas de acoplamiento) para la medición de sustancias marcadoras (por ejemplo, enzimas, colorantes, sustancias luminiscentes y sustancias fluorescentes), reactivos para enfocar un detector, pero no están limitados a los mismos.

La presente invención se explica con más detalle a continuación por referencia a los Ejemplos y Ejemplos comparativos, sin embargo, la presente invención no debe estar limita por los mismos.

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Ejemplos Ejemplo 1 Un analito (un antígeno)

\alpha-fetoproteína (AFP) (fabricada por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).

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Una SFC que mejora la reacción (un anticuerpo marcado con ADN)

Según el procedimiento mostrado en la Figura 1, se preparó el fragmento Fab' del anticuerpo anti-AFP unido con ADN.

A saber, en primer lugar se purificó un fragmento de ADN de 250 pb con un grupo NH_{2} introducido en el extremo 5' terminal por medio de un procedimiento común. Posteriormente, se sometió el grupo NH_{2} introducido al fragmento de ADN, y un grupo succinimidilo de un conector sulfosuccinimidil 4-(p-maleimidofenil)butirato (Sulfo-SMPB) (un conector que tiene un grupo succinimidilo y un grupo maleimido: fabricado por Pierce Co.) a una reacción por un procedimiento común. A continuación, por medio del tratamiento de filtración en gel, se eliminaron los conectores sin reaccionar dando un fragmento de ADN de 250 pb unido con un conector. El fragmento de ADN resultante de 250 pb unido con un conector, y un fragmento Fab' del anticuerpo anti-AFP WA1, preparado previamente usando un anticuerpo anti-AFP WA1 (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) según un procedimiento común, se sometieron a una reacción. Los productos resultantes de la reacción se purificaron cada uno usando una columna de DEAE para preparar un fragmento Fab' del anticuerpo anti-AFP WA1 unido con un fragmento de ADN de 250 pb (un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb).

Una SFC marcada (un anticuerpo marcado con fluorescencia)

Se trató un anticuerpo anti-AFP WA2 (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) que reconoce un epítopo de AFP diferente del anticuerpo WA1, por un procedimiento común para dar un fragmento Fab' del anticuerpo anti-AFP WA2. Se introdujo una sustancia fluorescente Alexa647 (fabricada por Molecular Probes Inc.) a un grupo amino de dicho fragmento por un procedimiento común para preparar un fragmento Fab' del anticuerpo anti-AFP WA2 marcado con Alexa647 (un anticuerpo marcado con fluorescencia).

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Un chip capilar

Se produjo un chip capilar con una disposición que se muestra en la Fig. 2 según un procedimiento descrito en "Technology and application of microchemistry chip", T. Kitamori y col., publicado en 2004 (Maruzen Co., Ltd.) de la siguiente manera:

A saber, se formó una película fotorresistente en una película de Si que se formó en un sustrato de cuarzo. Esta película fotorresistente se expuso usando una máscara con un diseño del capilar (disposición) que se muestra en la Fig. 2 y se desarrolló. Se eliminó el Si por bombardeo iónico en la parte donde la capa fotorresistente se había eliminado por el desarrollo, y a continuación se realizó el grabado húmedo usando una disolución de fluoruro de hidrógeno para producir una ranura del canal capilar (capilar) en el sustrato de cuarzo. Tras la eliminación, quedó una parte fotorresistente y una película de Si en el sustrato de cuarzo, dicho sustrato de cuarzo y una tapa de cubierta con un agujero para un depósito de líquidos se adhirieron juntos por una técnica de unión con HF para producir un chip capilar.

A este respecto, en la Fig. 2, L1 y L2 muestran un pocillo para introducir un tampón líder, R1 muestra un pocillo para introducir una disolución de reactivos (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb), y W1 y W2 muestran un pocillo para el drenaje, respectivamente.

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Electroforesis (1) Una muestra de electroforesis

En un tubo de 0,5 ml, se mezclaron 1 \mul de AFP con una concentración predeterminada, 1 \mul de un anticuerpo marcado con fluorescencia 2 \muM y 8 \mul de un tampón líder que contenía ión Cl^{-} 50 mM para preparar 10 \mul de una disolución de reacción. La disolución de reacción se siguió manteniendo en hielo para someterla a una reacción antígeno-anticuerpo durante aproximadamente 30 minutos para formar un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP]. A este respecto, la concentración final de AFP fue 0 pM, 25 pM, 50 pM o 100 pM, y la concentración final del anticuerpo marcado con fluorescencia fue 200 nM.

La disolución de reacción obtenida que contenía el complejo inmune se usó como una muestra de electroforesis.

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(2) Una disolución de reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb)

Se usó un tampón terminal (que contenía 75 mM de HEPES) que contenía 20 nM de un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb como disolución de reactivo.

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(3) Procedimiento de electroforesis a) Introducción de una muestra de electroforesis y una disolución de reactivo

En un pocillo S (un pocillo para introducir una muestra de electroforesis) que se muestra en la Fig. 1, se administraron 10 \mul en gotas de una muestra de electroforesis (una disolución que contiene un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP]), se administraron 10 \mul en gotas de una disolución de reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con ADN) en un pocillo R1 (un pocillo para introducir una disolución de reactivo) y se administraron 10 \mul en gotas de un tampón líder en los pocillos L1 y L2, respectivamente, y por medio de la aplicación de una presión de -0,34 atmósferas (-5 psi) durante 100 segundos entre W1 (un pocillo para drenaje) y W2 (un pocillo para drenaje) se introdujeron una muestra de electroforesis, una disolución de reactivo y un tampón líder en el canal. La relación de la disposición de una muestra de electroforesis y una disolución de reactivo en un capilar se muestra de manera esquemática en la Fig. 3. A este respecto, en la Fig. 3, un área marcada muestra un área de disposición de una muestra de electroforesis y un área punteada muestra un área de disposición de una disolución de reactivo, respectivamente.

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b) Concentración y reacción

Aplicando un voltaje de 312 V, 625 V ó 2500 V entre un pocillo R1 y un pocillo L1, se puso en contacto un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb en la disolución de reactivo con un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP] en la muestra de electroforesis, concentrando al mismo tiempo un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb en una disolución de reactivo, para formar un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP-anticuerpo marcado con ADN de 250 pb] concentrando al mismo tiempo un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb en una disolución de reactivo a 10ºC.

A este respecto, el tiempo de reacción fue de aproximadamente 200 segundos en la aplicación de un voltaje de 312 V, aproximadamente 100 segundos en la aplicación de un voltaje de 625 V, y aproximadamente 25 segundos en la aplicación de un voltaje de 2500 V.

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c) Separación y detección

Cuando un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP-anticuerpo marcado con ADN de 250 pb] alcanzó la parte del cruce de un canal L2 y un canal principal, se aplicaron 2800 V en el pocillo L2 y se aplicaron 300 V en el pocillo L1, durante 100 segundos para separar y detectar dicho complejo inmune.

A este respecto, la detección se llevó a cabo por medición en series de la intensidad de fluorescencia por excitación láser de 635 nm en una parte del capilar a 2 cm de la parte del cruce del canal L2, usando un microscopio fluorescente (BX-50, fabricado por KS Olympus Co., Ltd.)

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Resultados

La Fig. 4 muestra la relación (linealidad) entre la concentración de AFP y el área del pico, y la Fig. 5 muestra cada uno de los cromatogramas de electroforesis cuando se usa una muestra de electroforesis de una concentración de AFP de 0 pM y 100 pM. A este respecto, en la Fig. 4, el eje vertical muestra el área del pico y el eje horizontal muestra la concentración de AFP, respectivamente. Además, en la Fig. 5, una línea continua (- - -) muestra el caso en el que se usó una muestra de electroforesis de una concentración de AFP de 100 pM y una línea de puntos (\cdot \cdot \cdot) muestra el caso en el que se usó una muestra de electroforesis de una concentración de AFP de 0 pM, respectivamente.

De las Fig.4 y 5, se encuentra que se observa un pico de un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP-anticuerpo marcado con ADN de 250 pb] y el área de su pico es proporcional a la concentración de AFP. A saber, puede entenderse que se forma un complejo inmune electroforéticamente en un capilar (canal) y que no hay necesidad de hacer reaccionar y formar el complejo inmune previamente fuera de un capilar (canal).

Además, la Tabla 2 muestra la relación entre un voltaje aplicado y tasa de reacción de AFP en la concentración y la reacción. Como ejemplo comparativo, también se muestra la tasa de reacción de AFP obtenida cuando se hace reaccionar estas disoluciones durante 120 segundos por un procedimiento convencional introduciendo una pluralidad de disoluciones en un capilar (canal) de mezclado simultáneamente para someterlas a la mezcla y reacción (documento JP-A-2005-31070).

A este respecto, la tasa de reacción de AFP es un valor relativo obtenido cuando se detectó una señal de AFP (área del pico) de manera similar a la anterior tras hacer reaccionar un anticuerpo marcado con fluorescencia, AFP y un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb a 10ºC durante 30 minutos previamente fuera de un capilar para obtener 10 \mul de una disolución de reacción que contiene 200 nM de un anticuerpo marcado con fluorescencia, 100 pM de AFP y 20 nM de un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb, e introduciendo la disolución de reacción obtenida desde un pocillo S, se tomó como el 100%.

TABLA 2

16

Como resulta claro a partir de la Tabla 2, se encuentra que incluso en la aplicación de 2500 V (un tiempo de reacción de aproximadamente 25 segundos), puede obtenerse una tasa de reacción equivalente o superior a la de un procedimiento convencional, y en el caso de la aplicación de 625 V (un tiempo de reacción de aproximadamente 100 segundos) que muestra casi el mismo tiempo de reacción que un procedimiento convencional, puede obtenerse una tasa de reacción significativamente más alta que en un procedimiento convencional. A saber, puede entenderse que por medio de un procedimiento de la presente invención se forma un complejo con una tasa de reacción excelentemente más alta que en un procedimiento convencional.

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Ejemplo 2 Un analito (un antígeno)

Se usó el mismo que en el Ejemplo 1.

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Una SFC que mejora la reacción (un anticuerpo marcado con ADN

Se usó el mismo que en el Ejemplo 1.

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Una SFC marcada (un anticuerpo marcado con fluorescencia)

Se usó el mismo que en el Ejemplo 1 era utilizado.

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Un chip capilar

Se produjo un chip capilar con una disposición que se muestra en la Fig. 6 según un procedimiento descrito en "Technology and application of microchemistry chip", T. Kitamori y col., publicado en 2004 (Maruzen Co., Ltd.) de la siguiente manera:

A saber, se formó una película fotorresistente en una película de Si que se formó en un sustrato de cuarzo. Esta película fotorresistente se expuso usando una máscara con un diseño del capilar (disposición) que se muestra en la Fig. 6 y se desarrolló. Se eliminó el Si por bombardeo iónico en la parte donde la capa fotorresistente se había eliminado por el desarrollo, y a continuación se realizó el grabado húmedo usando una disolución de fluoruro de hidrógeno para producir una ranura del canal capilar (capilar) en el sustrato de cuarzo. Tras la eliminación, quedó una parte fotorresistente y una película de Si en el sustrato de cuarzo, dicho sustrato de cuarzo y una tapa de cubierta con un agujero para un depósito de líquidos se adhirieron juntos por una técnica de unión con HF para preparar un chip capilar.

A este respecto, en la Fig. 6, L1 y L2 muestran un pocillo para introducir un tampón líder, y SR muestra un pocillo para introducir una muestra de electroforesis, la disolución del 1º reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb) y la disolución del 2º reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con fluorescencia), respectivamente.

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Electroforesis (1) Una muestra de electroforesis

Los tampones líderes (que contienen 50 mM de ion Cl^{-}) que contienen cada uno 0 nM, 0,8 nM, 4 nM, 20 nM, 50 nM y 100 nM de AFP se usaron como muestras de electroforesis.

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(2) La disolución del 1º reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb)

Se usó un tampón líder (que contiene 50 mM de ion Cl^{-}) que contiene 100 nM de un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb como la disolución del 1º reactivo.

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(3) La disolución del 2º reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con fluorescencia)

Se usó un tampón líder (que contiene 50 mM de ion Cl^{-}) que contiene 400 nM de 250 pb de un anticuerpo marcado con fluorescencia como la disolución del 2º reactivo.

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(4) Procedimiento de electroforesis a) Introducción de una muestra de electroforesis, la disolución del 1º reactivo y la disolución del 2º reactivo

Después de llenar todo el canal que se muestra en la Fig. 6 con un tampón líder, se administraron 10 \mul en gotas de la disolución del 2º reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con fluorescencia) en un pocillo SR, y por medio de la aplicación de una presión de -0,34 atmósferas (-5 psi) durante 2 segundos sobre un pocillo L1 para introducir la disolución del 2º reactivo, se introdujeron en el canal. A continuación, se sustituyó la disolución del 2º reactivo en el pocillo SR por 10 \mul de la muestra de electroforesis (una disolución que contiene AFP) y, de manera similar, por la aplicación de una presión de -0,34 atmósferas (-5 psi) durante 2 segundos al pocillo L1 se introdujo la muestra de electroforesis en el canal. Además, se sustituyó la muestra de electroforesis en el pocillo SR por 10 \mul de la disolución del 1º reactivo (una disolución que contiene un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb), y por la aplicación de una presión de -0,34 atmósferas (-5 psi) durante 2 segundos al pocillo L1 se introdujo la disolución del 1º reactivo en el canal. Por este procedimiento, se formó la zona de la disolución del 2º reactivo, una zona de la muestra de electroforesis y la zona de la disolución del 1º reactivo en el canal en orden desde el lado corriente abajo. La relación de la disposición de la muestra de electroforesis, la disolución del 1º reactivo y la disolución del 2º reactivo en un capilar se muestra esquemáticamente en la Fig. 7. A este respecto, en la Fig. 7, el área con líneas verticales muestra un área de disposición de la disolución del 1º reactivo, el área sombreada muestra la muestra de electroforesis y el área punteada muestra la disolución del 2º reactivo, respectivamente.

Posteriormente, se sustituyó la disolución del 1º reactivo en el pocillo SR por 10 \mul de tampón terminal que contenía 75 mM de HEPES, y por la aplicación de una presión de -0,34 atmósferas (-5 psi) durante 2 segundos sobre el pocillo L1 se introdujo el tampón terminal y se dispuso en el lado corriente arriba de la zona de la disolución del 1º reactivo.

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b) Concentración y reacción

Aplicando un voltaje de 312 V entre el pocillo SR y el pocillo L1 (un pocillo para introducir un tampón líder), se pusieron en contacto un anticuerpo marcado con ADN en la disolución del 1º reactivo, AFP en la muestra de electroforesis y un anticuerpo marcado con fluorescencia en la disolución del 2º reactivo, concentrándolos al mismo tiempo, para formar un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP-anticuerpo marcado con ADN de 250 pb] a 10ºC.

A este respecto, el tiempo de reacción es de aproximadamente 200 segundos.

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c) Separación y detección

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Resultados

La Fig. 8 muestra la relación (linealidad) entre la concentración de AFP y el área del pico, y la Fig. 9 muestra también la relación (linealidad) entre la concentración de AFP y el área del pico, en la región de concentración baja de AFP (resultados para usar muestras de electroforesis de una concentración de AFP de 0 nM, 0,8 nM, 4 nM y 20 nM). A este respecto, en las Figuras 8 y 9, el eje vertical muestra el área del pico y el eje horizontal muestra la concentración de AFP, respectivamente. Además, como ejemplo comparativo, también se mostró en las Figuras 8 y 9 el resultado obtenido por la detección similar a la anterior tras introducir una disolución de reacción obtenida por la reacción de un anticuerpo marcado con fluorescencia, AFP y un anticuerpo marcado con ADN de 250 pb a 10ºC durante 30 minutos previamente fuera del capilar desde el pocillo SR hacia el capilar. A este respecto, la concentración final de un anticuerpo marcado con fluorescencia en la reacción fue 200 nM, la concentración final de AFP fue 0 nM, 0,8 nM, 4 nM, 20 nM, 50 nM o 100 nM, y la concentración final del anticuerpo marcado con ADN de 250 pb fue 20 nM.

En Figuras 8 y 9, la marca \bullet muestra el resultado obtenido por un procedimiento en el Ejemplo 2 y la marca o muestra el resultado obtenido por un procedimiento en el Ejemplo comparativo, respectivamente. Además, en la Fig. 9, la línea continua muestra una línea de regresión en el resultado obtenido por el procedimiento en el Ejemplo 2 y una línea de puntos muestra una línea de regresión en el resultado obtenido por un procedimiento en Ejemplo comparativo, respectivamente.

De las Figuras 8 y 9, se encuentra que se observa un pico de un complejo inmune [anticuerpo marcado con fluorescencia-AFP-anticuerpo marcado con ADN de 250 pb] y el área de su pico es proporcional a la concentración de AFP. Particularmente, en el caso en el que se forma previamente un complejo inmune, y a continuación se lleva a cabo el tratamiento de electroforesis, la linealidad es pobre en la región de concentración baja de AFP (los valores de detección caen debajo de la línea de regresión), mientras que se encuentra que se obtiene buena linealidad en cualquiera de las regiones de AFP de concentración baja o alta, en el caso de la presente invención, en el que se lleva a cabo una reacción inmune en un capilar electroforéticamente, y a continuación se lleva a cabo el tratamiento de electroforesis.

Aplicabilidad industrial

La presente invención se refiere a un procedimiento para formar un complejo entre un analito o un análogo del mismo en una muestra, y una sustancia capaz de formar un complejo con dicho analito o análogo del mismo (una SFC), un procedimiento para separar un complejo formado, y una SFC o un análogo no involucrado en la formación de dicho complejo, junto con un procedimiento para medir un analito en una muestra, basándose en la cantidad de un complejo separado, o la cantidad de una SFC o un análogo no involucrado en la formación de un complejo.

Según un procedimiento de la presente invención, una reacción entre un analito o un análogo del mismo en una disolución y una sustancia capaz de formar un complejo con dicho analito o análogo del mismo (una SFC) en una disolución, puede levarse a cabo en un tiempo corto y con alta eficacia de reacción. Como resultado, la separación de un complejo con una sustancia capaz de formar un complejo con dicho analito o análogo del mismo (una SFC), y una SFC o un análogo no involucrado en la formación de un complejo se vuelve posible rápidamente, simplemente y con alta precisión, y además, se vuelve posible la medición de alta sensibilidad de un analito en una muestra, basándose en la cantidad de complejo separado o la cantidad de una SFC o análogo no involucrado en la formación de un complejo.

Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 muestra un esquema de preparación de un anticuerpo marcado con ADN [un fragmento Fab' del anticuerpo anti-AFP WA1 unido con un fragmento de ADN de 250 pb (una SFC que mejora la reacción)], preparado en el Ejemplo 1.

La Fig. 2 muestra una disposición de un chip capilar preparado en el Ejemplo 1.

La Fig. 3 muestra una relación de disposición de una muestra de electroforesis y una disolución de reactivo introducidas en un capilar en el Ejemplo 1.

La Fig. 4 muestra una relación (linealidad) entre la concentración de AFP y el área del pico, obtenida en el Ejemplo 1.

La Fig. 5 muestra los cromatogramas de electroforesis en los casos en los que se usan muestras de electroforesis con concentraciones de AFP de 0 pM y 100 pM, obtenidas en el Ejemplo 1.

La Fig. 6 muestra una disposición de un chip capilar preparado en el Ejemplo 2.

La Fig. 7 muestra una relación de disposición de una muestra de electroforesis, la 1ª muestra de prueba y la disolución del 2º reactivo introducidas en un capilar en el Ejemplo 2.

La Fig. 8 muestra una relación (linealidad) entre la concentración de AFP y el área del pico, obtenida en el Ejemplo 2.

La Fig. 9 muestra una relación (linealidad) entre la concentración de AFP y el área del pico, en las regiones de concentración baja de AFP (resultados para usar muestras de electroforesis de una concentración de AFP de 0 nM,
0,8 nM, 4 nM y 20 nM), obtenida en el Ejemplo 2.

Claims

1. Un procedimiento para separar un complejo que comprende las siguientes etapas:

(3) una etapa de separar dicho complejo, y la sustancia formadora de complejos no involucrada en la formación de dicho complejo o el análogo no involucrado en la formación de dicho complejo por otro movimiento eléctrico.

2. Un procedimiento de la reivindicación 1 para medir un analito que además comprende

3. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que la etapa (3) se lleva a cabo usando un principio de electroforesis diferente del usado en la etapa (2) y/o cambiando la intensidad de voltaje a aplicar, de la utilizada en la etapa (2).

4. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que la etapa (3) se lleva a cabo en una región de separación independiente de una parte donde se lleva a cabo la etapa (2) en dicho capilar.

5. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho analito o dicho análogo del mismo y/o al menos un tipo de sustancia formadora de complejos se concentran no menos de 1,5 veces como resultado de la aplicación del voltaje en la etapa (2).

6. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que la etapa (2) se lleva a cabo por ITP (isotacoforesis) o FASS (apilación de muestras con amplificación de campo).

7. El procedimiento de la reivindicación 6, se en el que la etapa (3) se lleva a cabo por CGE (procedimiento de electroforesis capilar en gel).

8. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que no menos de un tipo de sustancia formadora de complejos está unido con una sustancia marcadora y/o una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo.

9. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho análogo es uno unido con una sustancia marcadora o una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo.

10. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que se usan no menos de dos tipos de sustancias formadoras de complejos, y se usan no menos de dos tipos de disoluciones que contienen cada una de tales sustancias formadoras de complejos, y (1) al menos un tipo de las sustancias formadoras de complejos es uno unido con una sustancia marcadora, y al menos un tipo de otra sustancia formadora de complejos es uno unido con una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo, o (2) al menos un tipo de las sustancias formadoras de complejos es uno unido con una sustancia marcadora y una sustancia capaz de cambiar la movilidad electroforética de dicho analito o dicho análogo del mismo.

11. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que un tipo de las sustancias formadoras de complejos es un anticuerpo para dicho analito o dicho análogo del mismo, o una proteína que se une a dicho analito o dicho análogo del mismo.