ES2338772T3 - Acilgliceridos funcionales. - Google Patents

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ES2338772T3 ES02788328T ES02788328T ES2338772T3 ES 2338772 T3 ES2338772 T3 ES 2338772T3 ES 02788328 T ES02788328 T ES 02788328T ES 02788328 T ES02788328 T ES 02788328T ES 2338772 T3 ES2338772 T3 ES 2338772T3
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Abstract

Un acilglicérido que tiene la siguiente estructura: **(Ver fórmula)** en la que a) R1 y R3 son restos acilo seleccionados entre el grupo que consiste en 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos acilo graso ω3, ω6 y ω9; o b) R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato y R1 y R3 se seleccionan entre el grupo que consiste en restos acilo graso ω3, ω6 y ω9.

Description

Acilglicéridos funcionales.
Campo de la invención
La presente invención se refiere al campo de la nutrición humana y animal y, en particular, a ciertas composiciones nuevas de ácidos linoleicos conjugados (CLA). En particular, la presente invención se refiere a ciertos isómeros de ácidos linoleicos conjugados en las posiciones SN1 y SN3 o SN2 de la molécula de acilglicérido y otro resto acilo graso en la otra de las posiciones SN1 y SN3 o SN2 de la molécula de acilglicérido.
Antecedentes de la invención
En 1978, los investigadores de la Universidad de Wisconsin descubrieron la identidad de una sustancia contenida en la ternera cocinada que parecía inhibir la mutagénesis. Se encontró que la sustancia era una mezcla de isómeros posicionales del ácido linoleico (C18:2) que tenía dobles enlaces conjugados. Los isómeros c9,t11 y t10,c12 están presentes en una mayor abundancia pero no hay certeza de qué isómeros son los responsables de la actividad biológica observada. Se ha observado a partir de los estudios de captación con marcador que el isómero 9,11 parece captarse más preferentemente e incorporarse en la fracción fosfolipídica de los tejidos animales y el isómero 10,12 en una menor extensión (Ha, et al., Cancer Res., 50: 1097 [1990]).
La actividad biológica asociada con los ácidos linoleicos conjugados (denominados CLA) es diversa y compleja. Actualmente, se sabe muy poco sobre los mecanismos de acción, aunque es probable que los diversos estudios preclínicos y clínicos en progreso aporten nueva luz sobre los modos de acción fisiológicos y bioquímicos. Las propiedades anticarcinogénicas de CLA están bien documentadas. La administración de CLA inhibe la tumorigénesis mamaria en ratas, como se demostró por Birt, et al., Cancer Res., 52: 2035s [1992]. Ha, et al., Cancer Res., 50:1097 informaron de resultados similares en un modelo de neoplasia en la boca del estómago de ratones. CLA se ha identificado también como un agente citotóxico fuerte contra melanoma humano diana, células de cáncer colorrectal y de mama in vitro. Un artículo de revisión principal reciente confirma las conclusiones extraídas de los estudios individuales (Ip, Am. J. Clin. Nutr., 66 (6 Supp): 1523s [1997]).
Aunque los mecanismos de la acción de CLA aún no están claros, es evidente que algún componente o componentes del sistema inmune pueden estar implicados, al menos in vivo. La Patente de Estados Unidos Nº 5.585.400 (Cook, et al., incorporada a este documento por referencia), describe un método para atenuar las reacciones alérgicas en animales mediadas por hipersensibilidad de tipo I o TgE administrando una dieta que contiene CLA. CLA en concentraciones de aproximadamente 0,1 al 1,0% demostró ser también un adyuvante eficaz en la conservación de los glóbulos blancos sanguíneos. La Patente de Estados Unidos Nº 5.674.901 (Cook, et al.), incorporada a este documento por referencia, describe que la administración oral o parenteral de CLA en forma de ácido libre o de sal da como resultado una elevación en las sub-poblaciones de linfocitos CD-4 y CD-8 asociadas con la inmunidad mediada por células. Los efectos adversos que surgen del pretratamiento con el factor de necrosis tumoral exógeno podrían aliviarse indirectamente mediante la elevación o mantenimiento de los niveles de CD-4 y CD-8 en animales a los que se administró CLA. Finalmente, la Patente de Estados Unidos Nº 5.430.066, incorporada en este documento como referencia, describe el efecto de CLA para evitar la pérdida de peso y anorexia por estimulación
inmune.
Aparte del potencial terapéutico y las aplicaciones farmacológicas de CLA como se ha indicado anteriormente, ha habido mucha excitación respecto al uso de CLA nutritivamente como un complemento de la dieta. Se ha encontrado que CLA ejerce un efecto generalizado profundo sobre la composición corporal, en particular dirigiendo la división de la masa de tejido graso y magro. La Patente de Estados Unidos Nº 5.554.646 (Cook, et al.), incorporada a este documento por referencia, describe un método que utiliza CLA como un complemento de la dieta en el que cerdos, ratones y seres humanos se alimentaron con dietas que contenían un 0,5 por ciento de CLA. En cada especie, se observó una caída significativa en el contenido de grasa con un aumento concomitante en la masa de proteína. Es interesante que, en estos animales, el aumento del contenido de ácido graso de la dieta por adición de CLA no diera como resultado un aumento en el peso corporal, sino que estaba asociado con una redistribución de la masa grasa y magra dentro del cuerpo. Otro fenómeno dietario de interés es el efecto de la complementación con CLA en la conversión del alimento. La Patente de Estados Unidos Nº 5.428.072 (Cook, et al., incorporada a este documento por referencia), proporcionó datos que mostraban que la incorporación de CLA en el alimento del animal (pájaros y mamíferos) aumentaba la eficacia de la conversión del alimento que conducía a una mayor ganancia de peso en los animales complementados con CLA.
Otra fuente importante de interés en CLA, y una que subraya su potencial comercial inicial, es que es de origen natural en la comida y los alimentos consumidos por seres humanos y animales similares. En particular, CLA es abundante en productos procedentes de rumiantes. Por ejemplo, se han realizado diversos estudios en los que CLA se ha suministrado en diversos productos lácteos. Aneja, et al., J. Dairy Sci., 43: 231 observaron que el procesado de la leche para la obtención de yogurt daba como resultado una concentración de CLA. (Shanta, et al., Food Chem., 47: 257 [1993]) mostró que un aumento combinado en la temperatura de procesado y la adición de suero aumentaba la concentración de CLA durante la preparación del queso procesado.
En un estudio diferente, Shanta, et al., J. Food Sci., 60: 695 [1995] informaban de que aunque el procesado y las condiciones de almacenamiento no reducían apreciablemente las concentraciones de CLA, no observaron ningún aumento. De hecho, diversos estudios han indicado que la variación estacional o de un animal a otro puede tener en cuenta una diferencia de tanto como tres veces en el contenido de CLA en leche de vaca. (Véase por ejemplo, Parodi, et al., J. Dairy Sci., 60: 1550 [1977]). También, se han visto implicados factores de la dieta en la variación del contenido de CLA, como se indica en Chin, et al., J. Food Camp. Anal., 5: 185. Debido a esta variación en el contenido de CLA en fuentes naturales, la ingestión de cantidades prescritas de diversos alimentos no garantiza que el individuo o el animal reciban la dosis óptima para asegurar que se consigue el efecto nutritivo deseado.
El ácido linoleico es un componente importante de los biolípidos y comprende una parte significativa de triglicéridos y fosfolípidos. El ácido linoleico se conoce como ácido graso "esencial", lo que significa que el animal debe obtenerlo a partir de fuentes de la dieta exógenas ya que no puede auto-sintetizarlo. La incorporación de la forma CLA del ácido linoleico puede dar como resultado una sustitución directa de CLA en las posiciones lipídicas donde el ácido linoleico no conjugado habría migrado. Sin embargo, esto no se ha demostrado, y algunos de los efectos altamente beneficiosos aunque inexplicados observados pueden ser el resultado incluso de una recolocación del CLA dentro de la arquitectura del lípido en sitios donde el ácido linoleico no conjugado de otra manera no habría migrado. Ahora está claro que una fuente de CLA animal, especialmente en los productos lácteos, procede de la acción bioquímica de ciertas bacterias del rumen sobre el ácido linoleico nativo, que isomerizan en primer lugar el ácido linoleico a CLA y después lo secretan en la cavidad del rumen. Kepler, et al., J. Nutrition, 56: 1191 aislaron bacterias del rumen, Butyrivibrio fibrisolvens, que cataliza la formación de 9,11-CLA como un intermedio en la biohidrogenación de ácido linoleico. Chin, et al., J. Nutrition, 124: 694 encontraron también que CLA se encontraba en los tejidos de roedores asociado con bacterias ya que las ratas sin gérmenes correspondientes no producían CLA.
Se ha informado en la técnica anterior de acilglicéridos que comprenden diversos restos de ácido graso. Por ejemplo Neff et al. (LIPIDS, Vol. 25, Nº 1 (1990)) describen triglicéridos de ácido linoleico y los hidroperóxidos formados por la oxidación de los mismos. Análogamente, Baba et al. (Biosci. Biotech. Biochem., 58 (8) 1547-1548, 1994) describen compuestos que tienen restos ácido linoleico en las posiciones 1 y 3 e hidroperóxidos de restos 9,11 CLA en la posición 2. Park et al. (Agric. Biol. Chem., 45 (11), 2443-2448, 1981) se refieren a hidroperóxidos de trilinoleoil glicerol.
Sjovall et al. (Journal of Chromatography A, 905 (2001) 119-132) describen un material de triglicérido con un resto ácido linoleico en la posición 3 en la estructura de glicerol. Steenhorst-Slikkerveer et al. (JAOCS, Vol. 77, Nº 8 (2000)) tratan con la detección de productos de oxidación de triglicéridos que comprenden restos palmitoílo y estearoílo usando HPLC-EM. Baba et al. (Biosci. Biotech. Biochem., 56 (10) 1694-1695, 1992) describen glicéridos con restos ácido esteárico en las posiciones 1 y 3. El documento WO 01/08652 describe triglicéridos generales en los que los restos en las posiciones 1 y 3 pueden ser de cualquier tipo de CLA y en el que aquellos en la posición 2 pueden esterificarse con cualquier lípido.
Aunque las formas ácido graso libre y acilglicérido de ácido linoleico conjugado descritas anteriormente son adecuadas para algunos usos, lo que se necesita en la técnica son formas de ácido linoleico conjugadas adaptadas para propósitos particulares.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere al campo de la nutrición humana y animal y, en particular, a ciertas composiciones nuevas de ácidos linoleicos conjugados (CLA). En particular, la presente invención se refiere a ciertos isómeros de ácidos linoleicos conjugados en las posiciones SN1 y SN3 o SN2 de la molécula de acilglicérido y otro resto acilo graso en otra de las posiciones SN1 y SN3 o SN2 de la molécula de acilglicérido.
La presente invención proporciona acilglicéridos que tienen la siguiente estructura:
1
en la que R1 y R3 son restos acilo seleccionados entre el grupo que consiste en 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9. La presente invención no se limita a acilglicéridos que comprenden cualquier resto acilo graso \omega3 particular. De hecho, se contemplan acilglicéridos que comprenden diversos restos acilo graso \omega3, incluyendo aquellos seleccionados entre el grupo que consiste en 9,12,15-octadecatrienoato; 6,9,12,15-octadecatetraenoato; 11,14,17-eicosatrienoato; 8,11,14,17-eicosatetraenoato; 5,8,11,14,17-eicosapentaenoato; 7,10,13,16,19-docosapentaenoato; y 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoato. La presente invención no se limita a acilglicéridos que comprenden un resto acilo graso \omega6 particular. De hecho, se contemplan acilglicéridos que comprenden diversos restos acilo graso \omega6, incluyendo aquellos seleccionados entre el grupo que consiste en 6,9,12-octadecatrienoato; 8,11,14-eicosatrienoato; 5,8,11, 14-eicosatetraenoato; 7,10,13,16-docosatetraenoato y 4,7,10,13,16-docosapentaenoato. La presente invención no se limita a acilglicéridos que comprenden un resto acilo graso \omega9 particular. De hecho, se contemplan acilglicéridos que comprenden diversos restos acilo graso \omega9, incluyendo aquellos seleccionados entre el grupo que consiste en 6,9-octadecadienoato; 8,11-eicosadienoato; y 5,8,11-eicosatrienoato. La presente invención contempla también polvos, aceites, composiciones alimentarias y composiciones farmacéuticas que comprenden los acilglicéridos anteriores. En algunas realizaciones estas composiciones comprenden adicionalmente un antioxidante. En algunas realizaciones particularmente preferidas, la composición alimentaria es un alimento funcional, un alimento nutricional complementario, un alimento para niños, un alimento para mujeres embarazadas o un alimento para ancianos. En otras realizaciones preferidas, las composiciones nutricionales o farmacéuticas comprenden uno de los acilglicéridos anteriores y un vehículo adecuado para la administración oral, intraintestinal o parenteral.
En otra realización, la presente invención proporciona acilglicéridos que tienen la siguiente estructura:
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2 
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en la que R1 y R2 son restos acilo seleccionados entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9 y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato. La presente invención no se limita a acilglicéridos que comprenden cualquier resto acilo graso \omega3 particular. De hecho, se contemplan acilglicéridos que comprenden diversos restos acilo graso \omega3, incluyendo aquellos seleccionados entre el grupo que consiste en 9,12,15-octadecatrienoato; 6,9,12,15-octadecatetraenoato; 11,14,17-eicosatrienoato; 8,11,14,17-eicosatetraenoato; 5,8,11,14,17-eicosapentaenoato; 7,10,13,16,19-docosapentaenoato; y 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoato. La presente invención no se limita a acilglicéridos que comprenden un resto acilo graso \omega9 particular. De hecho, se contemplan acilglicéridos que comprenden diversos restos acilo graso \omega9, incluyendo aquellos seleccionados entre el grupo que consiste en 6,9-octadecadienoato; 8,11-eicosadienoato; y 5,8,11-eicosatrienoato. La presente invención contempla también polvos, aceites, composiciones alimentarias y composiciones farmacéuticas que comprenden los acilglicéridos anteriores. En algunas realizaciones, estas composiciones comprenden adicionalmente un antioxidante. En algunas realizaciones particularmente preferidas, la composición alimentaria es un alimento funcional, un alimento nutricional complementario, un alimento para niños, un alimento para mujeres embarazadas o un alimento para ancianos. En otras realizaciones preferidas, las composiciones nutricionales o farmacéuticas comprenden uno de los acilglicéridos anteriores y un vehículo adecuado para administración oral, intraintestinal o parenteral.
En otras realizaciones más, la presente invención proporciona acilglicéridos que tienen la siguiente estructura:
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en la que R1 y R3 son 10,12 octadecadienoato y R2 es 9,11 octadecadienoato. En algunas realizaciones preferidas, el 10,12 octadecadienoato es t10,c12 octadecadienoato y el 9,11 octadecadienoato es c9,t11 octadecadienoato.
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En algunas realizaciones, la presente invención proporciona acilglicéridos que tienen la siguiente estructura:
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en la que R1 y R3 son 9,11 octadecadienoato y R2 es 10,12 octadecadienoato. En algunas realizaciones preferidas, el 10,12 octadecadienoato es t10,c12 octadecadienoato y el 9,11 octadecadienoato es c9,t11 octadecadienoato.
Definiciones
Como se usa en este documento, "ácido linoleico conjugado" o "CLA" se refiere a cualquier ácido linoleico conjugado o ácido graso octadecanodienoico libre. Se pretende que este término abarque e indique todos los isómeros posicionales y geométricos del ácido linoleico con dos dobles enlaces carbono-carbono conjugados en cualquier lugar en la molécula. CLA difiere del ácido linoleico ordinario en que el ácido linoleico tiene dobles enlaces en los átomos de carbono 9 y 12. Los ejemplos de CLA incluyen isómeros cis y trans ("isómeros E/Z") de los siguientes isómeros posicionales: ácido 2,4-octadecadienoico, ácido 4,6-octadecadienoico, ácido 6,8-octadecadienoico, ácido 7,9-octadecadienoico, ácido 8,10-octadecadienoico, ácido 9,11-octadecadienoico, ácido 10,12-octadecadienoico y ácido 11,13-octadecadienoico. Como se usa en este documento, "CLA" abarca un solo isómero, una mezcla seleccionada de dos o más isómeros y una mezcla no seleccionada de isómeros obtenida a partir de fuentes naturales, así como CLA sintético y semi-sintético.
Como se usa en este documento, la expresión "ácido linoleico conjugado isomerizado" se refiere a CLA sintetizado por métodos químicos (por ejemplo, isomerización alcalina acuosa, isomerización alcalina no acuosa o isomerización con alcoholato alcalino).
Como se usa en este documento, la expresión "resto ácido linoleico conjugado" se refiera a cualquier compuesto o pluralidad de compuestos que contienen ácidos linoleicos conjugados o sus derivados. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, ácidos grasos, ésteres de alquilo y triglicéridos de ácido linoleico conjugado.
Como se usa en este documento, se pretende que los "triglicéridos" o "acilglicéridos" de CLA contengan CLA en cualquiera o en las tres posiciones (por ejemplo, posiciones SN-1, SN-2, o SN-3) en la estructura del triglicérido. Por consiguiente, un triglicérido que contiene CLA puede contener cualquiera de los isómeros posiciones y geométricos de CLA.
Como se usa en este documento, se pretende que los "ésteres" de CLAN incluyan todos y cada uno de los isómeros posicionales y geométricos de CLA unidos mediante un enlace éster a un alcohol o cualquier otro grupo químico incluyendo, aunque sin limitación, alcoholes de origen natural fisiológicamente aceptables (por ejemplo, metanol, etanol, propanol). Por lo tanto, un éster de CLA o un CLA esterificado puede contener cualquiera de los isómeros posicionales y geométricos de CLA.
Se pretende que los "isómeros de origen no natural" incluyan, aunque sin limitación, c11,t13; t11,c13; t11,t13; d1,c13; c8;t10; t8,d0; t8,t10; c8,c10; e isómeros trans-trans de ácido octadecadienoico y no incluyan los isómeros t10,c12 y c9,t11 del ácido octadecadienoico. Los "isómeros de origen no natural" pueden denominarse también "isómeros minoritarios" de CLA puesto que estos isómeros generalmente se producen en pequeñas cantidades cuando CLA se sintetiza por isomerización alcalina.
Como se usa en este documento, CLA de "bajo contenido de impurezas" se refiere a composiciones de CLA que incluyen ácidos grasos libres, ésteres de alquilo y triglicéridos que contienen menos del 1% en total de ácidos 8,10 octadecadienoicos, ácidos 11,13 octadecadienoicos y ácidos octadienoicos trans-trans.
Como se usa en este documento, "c" se refiere a un enlace químico en la orientación cis, y "t" se refiere a un enlace químico en la orientación trans. Si un isómero posicional de CLA se designa sin una "c" o una "t", entonces esta designación incluye los cuatro posibles isómeros. Por ejemplo, el ácido 10,12 octadecadienoico incluye el c10,t12; t10,c12; t10,t12; y c10,c12 octadecadienoico mientras que el ácido t10,c12 octadecadienoico o CLA se refiere sólo a un único isómero.
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Como se usa en este documento, el término "aceite" se refiere a un líquido que fluye libremente que contiene ácidos grasos de cadena larga (por ejemplo, CLA), triglicéridos u otros grupos hidrocarburo de cadena larga. Los ácidos grasos de cadena larga incluyen, aunque sin limitación, los diversos isómeros de CLA.
Como se usa en este documento, el término "vehículo fisiológicamente aceptable" se refiere a cualquier vehículo o excipiente usado habitualmente con compuestos farmacéuticos oleosos. Dichos vehículos o excipientes incluyen, aunque sin limitación, aceites, almidón, sacarosa y lactosa.
Como se usa en este documento, la expresión "vehículo de administración oral" se refiere a cualquier medio para administrar un compuesto farmacéutico por vía oral incluyendo, aunque sin limitación, cápsulas, píldoras, comprimidos y jarabes.
Como se usa en este documento, la expresión "producto alimentario" se refiere a cualquier alimento o comida adecuados para consumo por seres humanos, animales no rumiantes o animales rumiantes. El "producto alimentario" puede ser un alimento preparado y envasado (por ejemplo, mayonesa, aliño para ensalada, pan o queso) o un pienso para animales (por ejemplo, un pienso para animales extruido y granulado o un pienso mixto grueso).
"Producto alimentario preparado" se refiere a cualquier producto pre-envasado aprobado para consumo humano.
Como se usa en este documento, el término "producto alimentario" se refiere a cualquier sustancia adecuada para consumo humano o animal.
Como se usa en este documento, el término "alimento funcional" se refiere a un producto alimentario al que se ha añadido un complemento biológicamente activo.
Como se usa en este documento, el término "alimento para niños" se refiere a un producto alimentario formulado para un niño tal como leche en polvo para bebés.
Como se usa en este documento, el término "alimento para ancianos" se refiere a un producto alimentario formulado para personas de edad avanzada.
Como se usa en este documento, el término "alimento para mujeres embarazadas" se refiere a un producto alimentario formulado para mujeres embarazadas.
Como se usa en este documento, el término "complemento nutricional" se refiere a un producto alimentario formulado como un complemento de la dieta o nutricional a usar como parte de una dieta.
Como se usa en este documento, la expresión "resto acilo graso de cadena media" se refiere a restos acilo grasos procedentes de ácidos grasos con una longitud de cadena de carbono igual a o menor de 14 carbonos.
Como se usa en este documento, la expresión "resto acilo graso de cadena larga" se refiere a restos acilo grasos procedentes de ácidos grasos con una longitud de cadena de carbono mayor de 14 carbonos.
Como se usa en este documento, la expresión "compuesto orgánico volátil" se refiere a cualquier compuesto pequeño que contiene carbono, que existe parcial o completamente en un estado gaseoso a una temperatura dada. Los compuestos orgánicos volátiles pueden formarse a partir de la oxidación de un compuesto orgánico (por ejemplo, CLA). Los compuestos orgánicos volátiles incluyen, aunque sin limitación, pentano, hexano, heptano, 2-butenal, etanol, 3-metil butanol, 4-metil pentanona, hexanal, heptanal, 2-pentilfurano y octanal.
Como se usa en este documento, la expresión "quelante de oxidante metálico" se refiere a cualquier antioxidante que sea capaz de quelar metales. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, lecitina y ésteres de ácido cítrico.
Como se usa en este documento, la expresión "catalizador de alcoholato" se refiere a compuestos de metal alcalino de cualquier alcohol monohídrico incluyendo, aunque sin limitación, metilato potásico y etilato potásico.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere al campo de la nutrición humana y animal y, en particular, a ciertas composiciones nuevas de ácidos linoleicos conjugados (CLA). En particular, la presente invención se refiere a ciertos isómeros de ácidos linoleicos conjugados en las posiciones SN1 y SN3 o SN2 de la molécula de acilglicérido y otro resto acilo graso en la otra posición SN1 y SN3 o SN2 de la molécula de acilglicérido.
I. Fuentes de Ácidos Linoleicos Conjugados
Los acilglicéridos de la presente invención contienen restos acilo linoleico conjugados. El ácido linoleico conjugado incorporado en estos acilglicéridos puede realizarse mediante diversos métodos, por ejemplo, los descritos en las Patentes de Estados Unidos Nº 6.015.833 y 6.060.514, cada uno de las cuales incorpora a este documento por referencia. En algunas realizaciones, se hacen reaccionar aceite de girasol, aceite de cártamo o aceite de maíz a presión ambiente en una atmósfera de gas inerte con un exceso de álcali en un disolvente de alto punto de ebullición, en concreto propilenglicol a una temperatura por debajo del punto de ebullición del disolvente. En algunas realizaciones particularmente preferidas, el aceite de girasol, el aceite de cártamo o el aceite de maíz se hacen reaccionar en presencia de un catalizador de alcoholato alcalino y una pequeña cantidad de un disolvente adecuado. Comprado con el aceite de semilla de soja, estos aceites tienen menores concentraciones de componentes indeseables tales como fosfatidas y esteroles. Estos componentes indeseables pueden contribuir a la formación de gomas que ensucian el equipo de conjugación y otros polímeros indeseables.
A. Isomerización con Propilenglicol como Disolvente
En algunas realizaciones de la presente invención el ácido linoleico conjugado se produce mediante isomerización alcalina no acuosa. Las condiciones de reacción del proceso de isomerización controlado permiten el control preciso de la temperatura (y presión ambiente constante) del proceso de conjugación. Preferiblemente, el álcali es un álcali inorgánico tal como hidróxido potásico, hidróxido de cesio, carbonato de cesio o un álcali orgánico tal como hidróxido de tetraetil amonio. El catalizador se proporciona preferiblemente en un exceso molar comparado con el contenido de ácido graso del aceite. El disolvente es propilenglicol. Preferiblemente, la reacción se realiza dentro de un intervalo de temperatura de 130 a 165ºC, más preferiblemente a aproximadamente 150ºC. El tiempo de reacción puede variar, sin embargo, hay una mayor probabilidad de formación de isómeros indeseables cuando la reacción se realiza durante periodos de tiempo más largos. Un tiempo de reacción relativamente corto de 2,0 a 6,5 horas ha resultado satisfactorio para obtener rendimientos excelentes.
Un experto en la materia entenderá que para producir la composición deseada, las condiciones de reacción descritas anteriormente pueden variarse dependiendo del aceite a conjugar, la fuente de álcali y el equipo. El pre-análisis de un aceite particular puede indicar si las condiciones deben variarse para obtener la composición deseada. Por lo tanto, el intervalo de temperatura, presión y otros parámetros de reacción representan un punto de partida para el diseño del proceso individual y únicamente pretenden ser una guía. Por ejemplo, no se insinúa que el intervalo de temperatura descrito sea el único intervalo que puede usarse. El aspecto esencial es proporcionar un control de temperatura preciso. Sin embargo, debe tenerse cuidado porque el aumento de la presión puede conducir a una isomerización menos completa y la formación de isómeros indeseables. Finalmente, la longitud de la reacción de conjugación puede variarse. Generalmente, se forman mayores cantidades de isómeros indeseables con el aumento de la longitud del tiempo de reacción. Por lo tanto, el tiempo de reacción óptimo permite que la reacción transcurra casi o básicamente hasta completarse, pero no da como resultado la formación de isómeros indeseables.
Después de la reacción de conjugación, la composición que contiene CLA resultante puede purificarse adicionalmente. Para separar los ácidos grasos de la mezcla de reacción de conjugación, la mezcla de reacción se enfría a aproximadamente 95º, se añade un exceso de agua a 50º y la mezcla se agita lentamente mientras la temperatura se reduce a aproximadamente de 50 a 60ºC. Tras la adición del agua, se forma un jabón de los ácidos grasos y se forma glicerol como subproducto. A continuación, se añade un exceso molar de HCl concentrado mientras se agita. Se permite entonces que las capas acuosas y no acuosas se separen a aproximadamente 80-90ºC. La capa inferior que contiene agua y propilenglicol se extrae posteriormente. El propilenglicol restante se retira por deshidratación al vacío a 60-80ºC.
La composición de CLA secada puede desgasificarse después preferiblemente en una unidad de desgasificación con una trampa fría para retirar cualquier propilenglicol residual. A continuación, el CLA se destila a 190ºC en una planta de destilación molecular a un vacío de 10^{-1} a 10^{-2} milibar. La ventaja de este sistema de purificación es el corto tiempo (menos de un minuto) que el CLA se mantiene a una temperatura elevada. Los procedimiento de destilación discontinuos convencionales deben evitarse rigurosamente, ya que implican una temperatura elevada de aproximadamente 180-200ºC durante hasta varias horas. A estas temperaturas elevadas ocurrirá la formación de isómeros trans-trans indeseables. Aproximadamente un 90% del material suministrado se recupera en forma de un destilado ligeramente amarillo. El CLA puede desodorizarse entonces calentándolo a aproximadamente 120-170ºC, preferiblemente a aproximadamente 150ºC durante 2 horas para mejorar el olor y el sabor. El calor excesivo puede dar como resultado la formación de isómeros trans-trans. Estos procedimientos producen una composición de CLA con un nivel de disolvente de menos de aproximadamente 5 ppm, preferiblemente menos de aproximadamente 1 ppm. Este proceso elimina los niveles traza tóxicos de disolvente, de manera que la composición resultante está esencialmente libre de residuos de disolvente tóxicos.
Los procesos descritos anteriormente pueden adaptarse fácilmente tanto a escala piloto como comercial. Por ejemplo, pueden conjugarse 400 kg de aceite de cártamo a 150ºC durante 5 horas en 400 kg de propilenglicol, añadiendo 200 kg de KOH como catalizador. El CLA resultante puede purificarse después como se ha descrito anteriormente. Adicionalmente, los sistemas discontinuos a escala comercial pueden modificarse fácilmente para producir la composición de CLA deseada. Por ejemplo, los reactores de acero inoxidable deberían estar, preferiblemente, revestidos de vidrio para evitar la corrosión debido a los niveles de pH por debajo de 3,0. Sin embargo, debería observarse que los procesos de conjugación que utilizan disolventes no acuosos generalmente son menos corrosivos que los realizados con agua.
B. Isomerización con Catalizadores de Alcoholato
En otras realizaciones, los acilglicéridos de la presente invención incorporan acilglicéridos preparados por isomerización de ácido linoleico en presencia de catalizadores de alcoholato. Después de la escisión de la grasa y la deshidratación, los ácidos grasos libres se combinan con metanol u otro alcohol monohídrico de bajo peso molecular y se calientan a la temperatura de ebullición del alcohol. La esterificación transcurre en condiciones de reflujo con retirada del agua de reacción a través de un condensador. Después de la adición de una cantidad adicional del mismo alcohol monohídrico o uno diferente, se mezcla un catalizador de alcoholato en la mezcla de éster (Véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 3.162.658).
Los catalizadores de alcoholato típico son etóxido sódico o potásico o sus homólogos de metilo, butilo o propilo.
En la esterificación, se prefieren metanol o etanol, aunque pueden usarse otros alcoholes monohídricos de cadena lineal o ramificada. Cuanto más larga sea la cadena alifática del grupo alquilo, más compatible a lípidos se hace el material. La viscosidad también tiende a aumentar. Para diferentes tipos de alimento o comida, cuya consistencia varía, el producto de viscosidad variable puede usarse para obtener el flujo deseado o características de formación de compuestos sin afectar a las propiedades terapéuticas o nutricionales que surgen de los restos CLA. La teoría y la práctica de la esterificación son convencionales. Una explicación básica de los métodos más habituales se indica en McCraw-Hill Encyclopedia of Science & Technology, McGraw-Hill Book Co., N.Y.: 1996 (5^{a} ed.). El cuerpo animal y humano tiene diversas esterasas, de manera que el CLA-éster se escinde para liberar los ácidos grasos libres fácilmente. La captación de tejido puede tener una cinética diferente dependiendo del tejido implicado y el beneficio buscado.
En la etapa de isomerización, se encontró que la catálisis de alcoholato producía un producto mucho mejor que la isomerización mediada por álcali acuosa. Este último proceso siempre producía isómeros indeseables incluso en condiciones de reacción moderadas. Las condiciones más moderadas dan cantidades menores de isómeros no deseados pero a costa de perder rendimiento, como se muestra en los ejemplos. En la mayoría de sistemas domina la aparición de isómeros c9,t11 y t10,c12 y se forman en cantidades casi equimolares. Hasta ahora no ha sido posible controlar la isomerización de un isómero para excluir el otro. Aunque es deseable aumentar el porcentaje de uno u el otro isómero (dependiendo del efecto fisiológico que se quiera conseguir), actualmente esto puede realizarse en gran medida añadiendo una fuente enriquecida del isómero deseado.
Los materiales de partida preferidos para la conjugación con catalizadores de alcoholato son aceite de girasol, aceite de cártamo y aceite de maíz. Cada uno de estos aceites contiene altos niveles de ácido linoleico y bajos niveles de ácido linolénico. La conjugación del ácido linolénico da como resultado la formación de diversos restos ácido graso no caracterizados, cuyas propiedades biológicas son desconocidas. Los procesos de conjugación previos no estaban relacionados con la producción de compuestos desconocidos porque los productos se usaron en aceites secantes, pinturas y barnices y no en productos destinados para consumo humano o animal.
En algunas realizaciones, se contempla adicionalmente que el glicerol y los ésteres de glicerol deberían retirarse antes de crear monoésteres de ácidos grasos. Las trazas de glicerol presentes durante la conjugación contribuyen a la producción de trimetoxipropano y trietoxipropano. Por lo tanto, antes de la conjugación es preferible destilar los monoésteres obtenidos por alcoholisis.
C. Síntesis de Otros Isómeros de CLA
La presente invención contempla también la síntesis de triglicéridos que comprenden los isómeros indicados en la Tabla 1 a continuación. En algunas realizaciones de la invención, un isómero parcialmente purificado o concentrado de CLA se trata en condiciones que provocan la migración del sistema de doble enlace. En las realizaciones preferidas, las condiciones comprenden calentar al menos un isómero a aproximadamente 200-240ºC, preferiblemente a aproximadamente 220ºC. En otras realizaciones, las condiciones comprenden adicionalmente hacer reaccionar el isómero o isómeros parcialmente purificados o concentrados en atmósfera de nitrógeno en un recipiente sellado. Con referencia a la Tabla 1, las preparaciones de isómeros en la columna 1 pueden usarse para producir preparaciones que contienen una cantidad sustancial de un isómero correspondiente en la columna 2. Después de la reacción de conversión inicial, la preparación contendrá tanto el isómero de partida como el isómero "hermano". Igualmente, las preparaciones de isómeros en la columna 2 pueden usarse para producir cantidades sustanciales del isómero correspondiente en la columna 1. Las preparaciones que contienen ambos isómeros pueden tratarse adicionalmente para purificar el isómero hermano (por ejemplo, por cromatografía de gases). Como entenderán los expertos en la materia, es posible partir de más de un isómero parcialmente purificado produciendo de esta manera una preparación que contiene cuatro, seis, ocho o más isómeros. En otras realizaciones, una preparación purificada del isómero hermano puede prepararse por métodos conocidos en la técnica (es decir, cromatografía gas-líquido) a partir de la preparación tratada que contiene el isómero inicial y su isómero hermano.
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Como se demuestra en los Ejemplos, el tratamiento de ácido t10,c12 octadecadienoico dio como resultado la producción de ácido c11,t13 octadecadienoico. Igualmente, el ácido c11,t13 octadecadienoico concentrado o parcialmente purificado puede usarse para producir ácido t10,c12 octadecadienoico.
D. Otras Fuentes de Isómeros de Ácido Linoleico Conjugado
En otras realizaciones, los ácidos linoleicos conjugados usados para producir los acilglicéridos de la presente invención se obtienen a partir de fuentes alternativas. Por ejemplo, algunos isómeros (por ejemplo, t10,c12 y c9,t11) están disponibles a partir de fuentes comerciales. En otras realizaciones, los CLA t10,c12 y c9,t11 pueden purificarse por los métodos descritos en Scholfield et al., JAOCS 47(8): 303 (1970) y Berdeau et al., JAOCS 74:1749-55 (1998). Este método permite la cristalización y precipitación del isómero t10,c12 a partir de una mezcla de isómeros. Si la mezcla inicial contiene predominantemente los isómeros t10,c12 y c9,t11 (es decir, la isomerización se realiza como se ha descrito anteriormente), entonces el aceite que queda después de la precipitación estará enriquecido en CLA c9,t11. En otras realizaciones adicionales, los isómeros de CLA pueden prepararse por cromatografía de gases o procedimientos de cromatografía de gases/espectrometría de masas.
II. Síntesis de Triglicéridos
La presente invención proporciona nuevos acilglicéridos, así como composiciones alimentarias, piensos para animales, composiciones farmacéuticas y composiciones nutricionales que comprenden los nuevos acilglicéridos. De acuerdo con la presente invención, se proporcionan acilglicéridos que tienen la siguiente estructura general:
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en la que R1 y R3 son restos acilo seleccionados entre el grupo que consiste en 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9.
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En otras realizaciones, se proporcionan acilglicéridos que tienen la siguiente estructura general:
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en la que R1 y R3 son restos acilo seleccionados entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9 y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato.
En otras realizaciones, se proporcionan acilglicéridos que tienen la siguiente estructura general:
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en la que R1 y R3 son 10,12 octadecadienoato y R2 es 9,11 octadecadienoato.
En otras realizaciones, se proporcionan acilglicéridos que tienen la siguiente estructura general:
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en la que R1 y R3 son 9,11 octadecadienoato y R2 es 10,12 octadecadienoato.
La presente invención se limita a acilglicéridos que comprenden restos de los isómeros particulares de ácido linoleico conjugado como se define en la reivindicación 1.
La presente invención no se limita a acilglicéridos que comprenden un resto acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9 particular. De hecho, la presente invención abarca, aunque sin limitación, acilglicéridos que incluyen restos de los siguientes ácidos grasos \omega3, \omega6 y \omega9:
ácido 9,12,15-octadecatrienoico (ácido \alpha-linolénico) [18:3, \omega3];
ácido 6,9,12,15-octadecatetraenoico (ácido estearidónico) [18:4, \omega3];
ácido 11,14,17-eicosatrienoico (ácido dihomo-\alpha-linolénico) [20:3, \omega3];
ácido 8,11,14,17-eicosatetraenoico [20:4, \omega3],
ácido 5,8,11,14,17-eicosapentaenoico [20:5, \omega3];
ácido 7,10,13,16,19-docosapentaenoico [22:5, \omega3];
ácido 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico [22:6, \omega3];
ácido 9,12-octadecadienoico (ácido linoleico) [18:2, \omega6];
ácido 6,9,12-octadecatrienoico (ácido \gamma-linolénico) [18:3, \omega6];
ácido 8,11,14-eicosatrienoico (ácido dihomo-\gamma-linolénico) [20:3 \omega6];
ácido 5,8,11,14-eicosatetraenoico (ácido araquidónico) [20:4, \omega6];
ácido 7,10,13,16-docosatetraenoico [22:4, \omega6];
ácido 4,7,10,13,16-docosapentaenoico [22:5, \omega6];
ácido 6,9-octadecadienoico [18:2, \omega9];
ácido 8,11-eicosadienoico [20:2, \omega9]; y
ácido 5,8,11-eicosatrienoico (ácido de Mead) [20:3, \omega9].
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Además, los restos acilo pueden ser restos acilo hidroxilados, epoxidados e hidroxiepoxidados.
En algunas realizaciones de la presente invención, los nuevos acilglicéridos de la presente invención se preparan por síntesis por métodos químicos. Estos métodos e intermedios para usar en este documento se describen en los ejemplos 8-12.
En otras realizaciones, los nuevos acilglicéridos de la presente invención se fabrican usando lipasas no específicas y de posición específica para insertar un primer resto acilo graso en la posición 2 (SN2) del acilglicérido y un segundo resto acilo graso en las posiciones 1 y 3 (SN1 y SN3) del acilglicérido. Las lipasas no específicas son lipasas que son capaces de hidrolizar o esterificar (es decir, la reacción inversa) ácidos grasos en todas las posiciones en un glicerol. Una lipasa de posición específica o específica-1,3 hidroliza casi exclusivamente o esterifica ácidos grasos en las posiciones 1 y 3 de la estructura del glicerol. Los acilglicéridos estructurados de la presente invención se sintetizan usando en primer lugar una lipasa no específica para unir el ácido graso deseado para la posición 2 a las 3 posiciones y después hidrolizar los restos acilo en las posiciones 1 y 3 usando una lipasa específica-1,3. Los ácidos hidrolizados se retiran después por destilación antes de que se añadan los ácidos que se desean unir a las posiciones 1 y 3 y se esterifican en las posiciones 1 y 3 por la misma lipasa. La dirección de la reacción (hidrólisis o esterificación) se controla fácilmente mediante la adición o retirada de agua, respectivamente. El siguiente ejemplo es una explicación general del método.
En las realizaciones particularmente preferidas, una alícuota purificada de un primer ácido graso (aproximadamente 3 moles), glicerol (aproximadamente 1 mol) y hasta el 10% en peso de ácido se mezclan con una lipasa no específica inmovilizada (disponible en el mercado). La mezcla se agita al vacío y se calienta ligeramente (50-60ºC). El agua producida durante la esterificación se retira continuamente por aspiración al vacío. Después de 24-48 horas, la reacción se termina y las enzimas se retiran y recuperan por filtración. El acilglicérido resultante tiene el primer ácido graso unido a las tres posiciones. El primer resto ácido graso en las posiciones 1 y 3 se retira entonces por adición de una lipasa inmovilizada específica-1,3 (disponible en le mercado) y un 1% de agua. La mezcla se calienta a 50-60ºC y se agita en una atmósfera de nitrógeno durante 24-48 horas. La mezcla de reacción comprende ahora los ácidos grasos libres liberados de las posiciones 1 y 3 y monoglicéridos (ácido graso B unido a la posición 2). A continuación, en las realizaciones preferidas, los ácidos grasos se destilan de la mezcla por destilación molecular. En otras realizaciones preferidas, se permite que reaccione aproximadamente 1 mol del monoglicérido durante 24-48 horas con 2 moles de un segundo ácido graso libre en presencia de una lipasa específica-1,3. En algunas realizaciones, esta reacción tiene lugar con agitación y al vacío a 50-60ºC para retirar el agua producida en el proceso de esterificación. El acilglicérido resultante es un triglicérido estructurado con el primer ácido graso en la posición 2 y el segundo ácido graso en las posiciones 1 y 3.
Como se ha descrito anteriormente, en algunas realizaciones de la presente invención, la lipasa que actúa específicamente sobre las posiciones 1 y 3 del triglicérido se usa como catalizador. La presente invención no se limita al uso de ninguna lipasa específica-1,3 particular. Los ejemplos de lipasas específicas-1,3 útiles en la presente invención incluyen lipasas producidas por un microorganismo que pertenece al género Rhizopus, Rhizomucor, Mucor, Penicillium, Aspergillus, Humicola o Fusarium, así como lipasa pancreática porcina. Los Ejemplos de lipasas disponibles en el mercado incluyen lipasa de Rhizopus delemar (Tanabe Pharmaceutical, Dalipasa), lipasa de Rhizomucor miehei (Novo Nordisk, Ribozima IM), lipasa de Aspergillus niger (Amano Pharmaceutical, Lipasa A), lipasa de Humicola lanuginosa (Novo Nordisk, Lipolasa), lipasa de Mucor javanicus (Amano Pharmaceutical, Lipasa M) y lipasa de Fusarium heterosporum. Estas lipasas pueden usarse en su forma nativa o en forma de lipasa que se ha inmovilizado sobre celite, resina de intercambio de iones o un vehículo cerámico.
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La cantidad de agua añadida al sistema de reacción afecta al resultado de la reacción. La transesterificación no transcurre en la ausencia absoluta de agua, mientras que si la cantidad de agua es demasiado grande, ocurre la hidrólisis, la velocidad de recuperación de triglicérido disminuye u ocurre la transferencia espontánea del grupo acilo en un glicérido parcialmente acilado que da como resultado la transferencia del ácido graso saturado en la posición 2 a la posición 1 ó 3. De esta manera, cuando se usa una enzima inmovilizada que no tiene agua unida, es eficaz activar en primer lugar la enzima usando un sustrato al que se ha añadido agua antes de realizar la reacción y después usar un sustrato al que el agua no se ha añadido durante la reacción. Para activar la enzima en reacciones discontinuas, debería usarse un sustrato que contiene agua al 0 al 1.000% (% en peso) de la cantidad de enzima añadida para pretratar la enzima y, en el caso de activación mediante un método en columna, debería permitirse que un sustrato saturado con agua fluyera continuamente a través de la columna. La cantidad de lipasa usada en una reacción discontinua puede determinarse de acuerdo con las condiciones de reacción. Aunque no hay limitaciones particulares sobre la cantidad de lipasa, del 1 al 30% (% en peso) de la mezcla de reacción es adecuado cuando se usa, por ejemplo, lipasa de Rhizopus delemar o lipasa de Rhizomucor miehei, inmovilizada sobre celite o un vehículo cerámico.
En algunas realizaciones preferidas, la enzima inmovilizada mencionada anteriormente puede usarse repetidamente. En concreto, la reacción puede continuar dejando la enzima inmovilizada en un recipiente de reacción después de la reacción y reponiendo la mezcla de reacción con mezcla de reacción preparada recientemente que comprende el sustrato. Además, para la transesterificación mediante un método en columna, puede permitirse que una mezcla de reacción que contiene el sustrato fluya continuamente a la velocidad de 0,05 a 20 ml/hora por gramo de enzima. En otras realizaciones preferidas, el contenido de triglicérido diana puede aumentarse realizando la transesterificación repetidamente. En concreto, se permite que la lipasa que actúa específicamente sobre las posiciones 1 y 3 del acilglicérido actúe en presencia del segundo ácido graso o un éster del mismo para obtener una mezcla de reacción en la que los ácidos grasos en las posiciones 1 y 3 se transesterifican al ácido graso deseado.
Los acilglicéridos diana de la presente invención pueden aislarse fácilmente por métodos rutinarios tal como cromatografía de líquidos, destilación molecular, fraccionamiento de membrana aguas abajo o superfraccionamiento al vacío o una combinación de los mismos. La purificación de los acilglicéridos diana de la presente invención puede realizarse por desacidación alcalina, destilación con vapor, destilación molecular, fraccionamiento de membrana aguas abajo, superfraccionamiento al vacío, cromatografía en columna, extracción con disolventes o separación de membranas o una combinación de los mismos para retirar los ácidos grasos mencionados anteriormente mediante la transesterificación y ácidos grasos insaturados no reaccionados.
III. Estabilización de Acilglicéridos de CLA
La presente invención contempla también la estabilización de acilglicéridos de CLA evitando la oxidación de los compuestos. La presente invención no se limita a un solo mecanismo. De hecho, no es necesaria una comprensión del mecanismo de la invención para producir la composición o realizar los métodos de la presente invención. Independientemente de ello, a diferencia de los ácidos grasos no conjugados, CLA no parecer formar productos de degradación de peróxido. Esto se demostró experimentalmente midiendo los valores de peróxido (PV) espectrofotométricamente mediante un método clorimétrico con tiocianato férrico. Después del almacenamiento en un vaso abierto, el PV de CLA era 32; en comparación, el valor para el ácido linoleico era 370.
CLA forma compuestos orgánicos volátiles durante la degradación, incluyendo hexano. Se encontró que los productos almacenados en un tambor de acero durante varias semanas contenían hasta 25 ppm de hexano. El hexano tiene un sabor y olor característico que es indeseable en productos alimentarios. La oxidación de CLA parece estar provocada por la presencia de contaminantes metálicos. De esta manera, un sistema para la retirada de dichos compuestos que promueven la oxidación durante la purificación es ventajoso.
Adicionalmente, también es ventajoso añadir compuestos a los acilglicéridos de CLA para disminuir la oxidación durante el almacenamiento. Los compuestos que evitan la oxidación (antioxidantes) tienen dos mecanismos de acción generales. El primero es la prevención de la oxidación por aceptación de radicales de peróxido de lípido. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, tocoferoles y palmitato de ascorbilo. El segundo mecanismo para evitar la oxidación es mediante la quelación de los iones metálicos. Los ejemplos de quelantes de oxidante metálico incluyen, aunque sin limitación, ésteres de ácido cítrico y lecitina. Algunos compuestos disponibles en el mercado (por ejemplo, Controx, Grumau (Henkel), lllertissen, DE) incluyen tanto aceptores de peróxido como quelantes metálicos (por ejemplo, lecitina, tocoferoles, palmitato de ascorbilo, y ésteres de ácido cítrico). En alguna realización de la presente invención, los quelantes de oxidante metálico se añaden a los compuestos que contienen CLA para evitar la oxidación. En otras realizaciones, se incluye una combinación de quelantes de oxidante metálico y aceptores de peróxido en la composición de acilglicérido de CLA.
En algunas realizaciones, se usa cromatografía de gases/espectroscopía de masas para detectar la presencia de productos de degradación orgánica de CLA. En otras realizaciones, se usan las mediciones del índice de estabilidad del aceite (OSI) para detectar la presencia de productos de degradación orgánica volátiles de CLA. En algunas realizaciones de la presente invención, los pro-oxidantes (por ejemplo, hierro) se retiran de las composiciones de acilglicérido de CLA. Los métodos para retirar los pro-oxidantes incluyen, aunque sin limitación, destilación o adsorción. En algunas realizaciones de la presente invención, los compuestos se añaden para evitar la oxidación de CLA.
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En las realizaciones preferidas, se toman precauciones durante la purificación para evitar la oxidación durante el almacenamiento. Estas precauciones incluyen la retirada de los compuestos que sirven como pro-oxidantes, incluyendo, aunque sin limitación, hierro u otros metales. En algunas realizaciones, los metales se retiran tratando con agente de adsorción, incluyendo aunque sin limitación, tierra blanqueante, zeolitas de carbón vegetal activo y sílice. En otras realizaciones, los pro-oxidantes se retiran por destilación.
En algunas realizaciones, los pro-oxidantes se retiran en un proceso de destilación. En algunas realizaciones preferidas, la destilación de un acilglicérido de la presente invención se realiza en un aparato de destilación molecular. La destilación se realiza a 150ºC y una presión de 10^{-2} mbar. La presente invención no pretende limitarse a las condiciones descritas para la destilación. Otras temperaturas y presiones están dentro del alcance de la presente invención.
En algunas realizaciones, la oxidación de los acilglicéridos de CLA de la presente invención se evita por la adición de quelantes de oxidante metálico o aceptores de peróxido al producto acabado. En algunas realizaciones, la cantidad de oxidación se mide mediante el índice de estabilidad del aceite (OSI). El OSI (Véase, por ejemplo, método oficial de AOCS Cd 12b-92) es una medición de la resistencia de un aceite a la oxidación. Se define matemáticamente como el tiempo de cambio máximo de la velocidad de oxidación. Esta velocidad puede determinarse matemáticamente. Experimentalmente, el OSI se calcula midiendo el cambio en la conductividad del agua desionizada en la que los ácidos orgánicos volátiles (productos de oxidación) están disueltos. Cuando se realizan las mediciones OSI, es importante evitar la contaminación con cantidades traza de metales, que pueden acelerar el proceso de oxidación. Esto se consigue generalmente mediante el lavado cuidadoso de todos los objetos de vidrio usados con una solución de limpieza que carece de cromato o tensioactivos. El agua debe desionizarse y todos los disolventes deben ser de una calidad altamente purificada.
IV. Formulación y Administración de Acilglicéridos de CLA
Los acilglicéridos de CLA de la presente invención pueden proporcionarse en diversas formas. En algunas realizaciones, la administración es oral. Los restos CLA pueden formularse con vehículos adecuados tales como almidón, sacarosa, lactosa en comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, soluciones, líquidos, pastas, suspensiones y emulsiones. Preferiblemente, las formulaciones CLA contienen antioxidantes incluyendo, aunque sin limitación, Controx, Covi-OX, lecitina y formas solubles en aceite de vitamina C (palmitato de ascorbilo). El acilglicérido de CLA puede proporcionarse en una solución oleosa, o en una de las otras formas analizadas anteriormente. El comprimido o cápsula de la presente invención puede recubrirse con un recubrimiento entérico que se disuelve a un pH de aproximadamente 6,0 a 7,0. Un recubrimiento entérico adecuado que se disuelve en el intestino delgado pero no en el estómago es ftalato acetato de celulosa. En algunas realizaciones, el CLA se proporciona como cápsulas de gelatina blandas que contienen 500-1500 mg de acilglicérido. El CLA puede proporcionarse también por cualquier número de otras vías, incluyendo, aunque sin limitación, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intratecal, intraventricular, transdérmica, subcutánea, intraperitoneal, intranasal, entérica, tópica, sublingual o medios rectales. Otros detalles sobre las técnicas para la formulación para administración y de administración pueden encontrare en la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, PA).
En las realizaciones particularmente preferidas, los acilglicéridos de la presente invención se combinan con un excipiente o agente en polvo. La mezcla se forma después en un polvo por métodos tales como secado por pulverización (Véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 4.232.052, incorporada a este documento por referencia). En general, el secado por pulverización implica licuar o emulsionar una sustancia y después atomizarla de manera que se retira todo, excepto un pequeño porcentaje de agua, produciendo un polvo fluido. Las unidades de secado por pulverización adecuadas incluyen tanto secadores de pulverización de boquilla de alta presión como secadores de pulverización de disco giratorio o centrífugos. Los presentes inventores han descubierto que los polvos que contienen altas cargas (por ejemplo, 40%-65%) de ácido linoleico conjugado y/u otros aceites (por ejemplo, aceite de prímula, aceite de borraja, aceite de lino, aceite de CLA) pueden formarse por el simple secado por pulverización de la emulsión del aceite, excipiente y agua. No es necesario incorporar métodos más complejos que impliquen pulverizar en un lecho fluido o pulverizar de una manera en contracorriente.
La presente invención no se limita a ningún excipiente particular. De hecho, se contemplan diversos excipientes incluyendo, aunque sin limitación, HI-CAP 100 (National Starch, Bridgewater, NJ) e HI-CAP 200 (National Starch, Bridge-water, NJ). El polvo de la presente invención contiene un alto porcentaje de aceite comparado con el excipiente. En algunas realizaciones, el aceite es un 20% del polvo en una base peso/peso (es decir, el polvo contiene 20 g del aceite por cada 100 g de polvo). En otras realizaciones, el aceite es un 35% del polvo en una base peso/peso. En otras realizaciones más, el aceite es al menos un 50% del polvo en una base peso/peso. En otras realizaciones más, el aceite es al menos un 60%-65% del polvo en una base peso/peso. En cada caso, el polvo de aceite fluye libremente y es inodoro. En las realizaciones preferidas, el aceite comprende un resto CLA. En las realizaciones particularmente preferidas, el aceite comprende acilglicéridos de CLA de la presente invención.
Una cantidad eficaz del resto CLA puede proporcionarse también como un complemento en diversos productos alimentarios, incluyendo piensos para animales, productos alimentarios funcionales humanos, productos alimentarios para niños, complementos nutricionales y bebidas. Para los propósitos de esta aplicación, los productos alimentarios que contienen acilglicéridos de CLA se refieren a cualquier producto alimentario natural, procesado, light o no light al que se ha añadido un acilglicérido de CLA exógeno. De esta manera, los acilglicéridos de CLA pueden incorporarse directamente en diversos productos alimentarios preparados, incluyendo, aunque sin limitación, bebidas light, barritas dietéticas, complementos, comidas congeladas preparadas, dulces, productos de aperitivo (por ejemplo, patatas fritas), productos cárnicos preparados, leche, queso, yogurt y cualquier otro alimento que contenga grasa o aceite.
Adicionalmente, como se ha mostrado anteriormente y en los Ejemplos, las composiciones de acilglicérido de CLA pueden contener niveles de compuestos orgánicos volátiles que provocan que el sabor y olor de los productos alimentarios que contienen el acilglicérido de CLA se vea afectado negativamente. Se contempla que los productos alimentarios de la presente invención que contienen composiciones de acilglicérido de CLA que tienen menos de 100 ppm de compuestos orgánicos volátiles y preferiblemente menos de 5 ppm de compuestos orgánicos volátiles tienen un mejor sabor y olor que los productos alimentarios que contienen mayores niveles de compuestos orgánicos volátiles y se preferirán en los ensayos ciegos de sabor y olor. Por consiguiente, algunas realizaciones de la presente invención proporcionan un producto alimentario que contiene un acilglicérido de CLA, en el que el resto ácido linoleico conjugado tiene una concentración de compuesto ácido orgánico volátil suficientemente baja, de manera que el sabor y el olor del producto alimentario no se vea afectado.
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Parte experimental
Los siguientes ejemplos se proporcionan para demostrar e ilustrar adicionalmente ciertas realizaciones preferidas y aspectos de la presente invención y no deben considerarse limitantes del alcance de la misma. El Ejemplo 9 no forma parte de la invención.
En la descripción experimental que sigue, se aplican las siguientes abreviaturas: M (molar), mM (milimolar); \muM (micromolar); kg (kilogramos); g (gramos); mg (miligramos); \mug (microgramos); ng (nanogramos); l (litros) ml (mililitros); \mul (microlitros); cm (centímetros); mm (milímetros); nm (nanómetros); ºC (grados centígrados); KOH (hidróxido potásico); HCl (ácido clorhídrico); Hg (mercurio).
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Ejemplo 1 Isomerización de Aceite de Cártamo Usando Propilenglicol a Baja Temperatura
El aceite de cártamo se isomerizó en propilenglicol a bajas temperaturas usando KOH como catalizador. El aparato de isomerización consistía en un matraz de dos bocas con un termómetro puesto en una boca, dejando una pequeña abertura para liberar el exceso de presión. Un suministro de nitrógeno se unión a la otra boca del matraz. Las soluciones añadidas al matraz se agitaron mediante el uso de una barra magnética y un agitador magnético. La temperatura del matraz se controló poniendo el matraz en un baño de aceite controlado por termostato puesto sobre el agitador magnético.
El matraz se llenó con 60,27 g de propilenglicol y 28,20 g de KOH y se sumergió en el baño de aceite. La temperatura se aumentó a 130ºC para disolver el KOH. Después de que el KOH se hubiera disuelto, se introdujeron 60,09 g de aceite de cártamo en el matraz. Se hizo circular un alto volumen de nitrógeno a través del matraz de dos bocas durante 5 minutos y después se redujo a un menor volumen. La mezcla se calentó a 150ºC, lo que tardó aproximadamente 40 minutos. Se permitió después que la mezcla reaccionara a 150ºC durante 3,5 horas. A intervalos, se extrajeron muestras de 3 ml para su análisis.
Las muestras se pusieron directamente en 6 ml de agua caliente y se añadió ácido cítrico en exceso hasta que los ácidos grasos libres se separaron como la capa superior. No fue necesario el calentamiento para evitar la solidificación mientras se añadía el ácido cítrico. Para convertir los ácidos grasos libres en ésteres de metilo para el análisis por Cromatografía de Gases, se añadieron 0,025 g de los ácidos grasos libres, 5 ml de una solución al 4% de HCl y etanol a un tubo de ensayo. Se añadió nitrógeno al tubo, después el tubo se selló y se puso en un baño de agua a 60ºC durante 20 minutos. El tubo se enfrió después y se añadieron 1 ml de agua purificada y 5 ml de isooctano. El nitrógeno se añadió al tubo y el tubo se agitó durante 30 segundos. La capa superior resultante se añadió a 1 \mul de agua purificada en un nuevo tubo de ensayo y se agitó nuevamente con nitrógeno. La capa superior resultante se lavó después con isooctano y se decantó en un tercer tubo de ensayo. Se añadió una pequeña cantidad de sulfato sódico para la absorción del agua. Después se inyectó 1 \mul de muestra directamente en el Cromatógrafo
de Gases.
Las condiciones de cromatografía de gases fueron las siguientes:
Sistema:
Sistema Automático Perkins-Elmer
Inyector:
Sin fraccionamiento a 240ºC
Detector:
Detector de Ionización de Llama a 280ºC
Vehículo:
Helio
Columna:
Sílice Fundida WCOT de 0,25 mm X 100 m, CP-SL 88 para FAME, DF 0,2
Programa del Horno:
80ºC (0 min.) aumentando hasta 220ºC a 10ºC por min. y manteniendo a 220ºC durante 10 min.
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Todos los resultados se expresan como el porcentaje de área de pico relativa. Los patrones generalmente no estaban disponibles, por lo que los picos que eluían se verificaron con otros sistemas. GC-EM determina el número pero no la posición de los enlaces cis y trans. Por lo tanto, se usó el análisis RMN para verificar las posiciones de los enlaces. Los picos principales fueron c9,t11 y t10,c12. Para el análisis RMN de isómeros CLA, por favor véase Marcel S.F. Lie Ken Jie y J. Mustafa, Lipids, 32 (10) 1019-34 (1997), incorporada a este documento por referencia.
Estos datos, presentados en la Tabla 2 y resumidos en la Tabla 10, demuestran que la isomerización del aceite de cártamo usando polipropilenglicol como disolvente, KOH como catalizador y bajas temperatura da como resultado la producción de ácido linoleico conjugado que carece de isómeros 8,10 y 11,13. Las columnas altamente polares utilizadas en este experimento pueden usarse satisfactoriamente para separar los isómeros 8,10 y 11,13 de los isómeros c9,t11 y t10,c12. Los isómeros 8,10 tienden a eluir conjuntamente o a eluir justo después del isómero c9,t11. El isómero 11,13 eluye delante del isómero t10,c11 o eluye junto con el isómero t10,c12, dependiendo de las condiciones de la columna.
TABLA 2
10
Ejemplo 2 Producción de CLA con Catalizadores de Alcoholato
Este ejemplo describe la producción de CLA a partir de aceite de cártamo usando metilato potásico como catalizador. El éster metílico destilado de aceite de cártamo (41,5 g) se puso en un reactor con 0,207 g de metanol y 0,62 g de metilato potásico y el reactor se purgó con nitrógeno antes del cierre. Los contenidos del reactor se agitaron mientras a 120ºC. Después, se dejó transcurrir la reacción a 120ºC durante 4 horas. El reactor se enfrió después a 80ºC y los contenidos se transfirieron a un embudo de separación y se lavaron con agua destilada caliente y después con agua caliente que contenía ácido cítrico. El éster metílico se secó después al vacío con calor moderado. El éster metílico secado se disolvió en isooctano y se analizó con GLC con un tomamuestras automático Perkin Elmer. La columna era de tipo sílice fundida altamente polar. Se usó el siguiente programa:
Inyección:
Sin fraccionamiento a 250ºC
Detector:
Detector de Ionización de Llama a 280ºC
Vehículo:
Helio a psig.
Programa del Horno:
80ºC-130ºC (45ºC/min.), después 1ºC/min. a 220ºC y 220ºC durante 10 min.
Columna:
SÍLICE FUNDIDA WCOT, de 0,25 mm, 100 m, CP-SIL 88 para FAME, df + 0,2
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El CLA obtenido consistía, aunque no exclusivamente, en isómeros c9,t11 y t10,c12 de CLA como se muestra en la Tabla 3.
11
Ejemplo 3 Producción de CLA en polvo
Este ejemplo describe la producción de un polvo que contiene acilglicéridos de CLA de la presente invención. Los acilglicéridos de CLA pueden prepararse como se ha descrito anteriormente. Agua templada (538,2 ml a 43,3-48,9ºC (110-120ºF)) e HI-CAP 100 (aproximadamente 230,9 g National Starch, Bridgewater, NJ) se combinan y agitan hasta que la dispersión queda libre de cualquier grumo. Después se añade el triglicérido de CLA (230,9 g) y la mezcla se homogeneiza durante 2 min. en un homogeneizador de laboratorio Arde Berinco ajustado a 30. La pre-emulsión se homogeniza después a toda velocidad durante 2-5 min (una pasada a 24,1 MPa (3500 psi) de presión total). Se comprueba el tamaño de partícula, que debería ser de aproximadamente 0,8 a 1,0 \mum. La emulsión se seca entonces por pulverización en un secador cónico de siete pies con el siguiente ajuste: temperatura de entrada (190-215ºC); temperatura de salida (95-100ºC). La temperatura de salida se mantiene ajustando la velocidad de suministro de la emulsión. Este proceso produce un polvo que fluye libremente que contiene aproximadamente un 50% de triglicérido de CLA.
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Ejemplo 4 Preparación de Isómeros de CLA
Este Ejemplo describe la producción de ácido c11,t13 octadecadienoico a partir de ácido t10,c12 octadecadienoico. Cincuenta gramos de KOH se disolvieron en propilenglicol con calentamiento moderado. Después, se añadieron a la mezcla cien gramos de ácido linoleico al 98% y la mezcla se calentó a 150ºC y se agitó durante 3 horas. La mezcla se enfrió después y se lavó varias veces con agua caliente y después se secó al vacío a calor moderado. La mezcla de CLA resultante consistía en ácido octadecadienoico c9,t11 y t10,c12 así como trazas de isómeros de CLA. La mezcla se convirtió en éster de metilo por ebullición a reflujo en metanol ácido. Cincuenta gramos de ácidos grasos libres conjugados se disolvieron en metanol que contenía un 4,5% de ácido sulfúrico y se llevó a ebullición en condiciones de reflujo durante 1 hora en un baño de agua. La mezcla se enfrió y la capa inferior se descartó. Se añadió metanol fresco con un 4,5% de ácido sulfúrico y la mezcla se llevó a ebullición durante 1 hora más en condiciones de reflujo. Después de la refrigeración, esta mezcla de éster de metilo se lavó varias veces con agua y después se secó a vacío a un calor moderado. Se disolvieron diez gramos del éster de metilo en acetona y se enfriaron durante una noche a -60ºC en un congelador. Un precipitado sólido se retiró por filtración y se re-disolvió en acetona y, de nuevo, se enfrío a -60ºC durante una noche. El precipitado se secó al vacío y se mostró por análisis GLC que contenía un 97% de t10,c12 CLA. El equipo analítico consistía en un GLC Perkin Elmer con tomamuestras automático. La columna era de tipo sílice fundida altamente polar. Se usó el siguiente programa de ajuste:
Inyección:
Sin fraccionamiento a 250ºC
Detección:
Detector de Ionización de Llama a 280ºC
Vehículo:
Helio a psig.
Programa del Horno:
80ºC-130ºC (45ºC/min.), después 1ºC/min. a 220ºC y 220ºC durante 10 min.
Columna:
SÍLICE FUNDIDA WCOT, de 0,25 mm X 100 m, CP-SIL 88 para FAME, df = 0,2.
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Un gramo del isómero t10,c12 purificado se cubrió después con nitrógeno en un tubo sellado y se calentó durante dos horas a 220ºC. Después de la refrigeración, los ésteres de metilo resultantes se analizaron por GC como en el caso anterior. El contenido relativo de t10,c12 en la mezcla se redujo al 52,32% y el isómero c11,t13 está presente a un nivel del 41,96% (Véase la Tabla 4).
12
Ejemplo 5 Preparación de Isómeros de CLA
Este ejemplo describe la producción de ácido t8,c10 octadecadienoico a partir de ácido c9,t11 octadecadienoico. El ácido c9,t11 octadecadienoico purificado puede obtenerse a partir de fuentes comerciales (Matreya, State College, PA) o por fermentación con microorganismos del rumen (Véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.674.901 incorporada a este documento por referencia). El ácido c9,t11 octadecadienoico purificado se convierte con un alto porcentaje (por ejemplo, del 25% al 50%) en ácido t8,c10 octadecadienoico poniendo el ácido octadecadienoico c9,t11 en un tubo sellado en atmósfera de nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.
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Ejemplo 6 Preparación de Isómeros de CLA
El ácido c7,t9 octadecadienoico purificado puede obtenerse mediante una cromatografía de gases a escala preparativa.
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Ejemplo 7 Preparación de Isómeros de CLA
El ácido t11,c13 octadecadienoico purificado puede obtenerse por cromatografía de gases a escala preparativa (por ejemplo, siguiendo el proceso descrito en el Ejemplo 1).
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Ejemplo 8 Intermedios para la Síntesis Química de Acilgliceroles
Los siguientes compuestos intermedios son útiles para la síntesis química de triglicéridos que contienen isómeros CLA y/o otros ácidos grasos. El uso de estos intermedios se describe adicionalmente en los Ejemplos 10-12.
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1,3-dipalmitoil acetona (Intermedio 1)
La 1,3-dipalmitoil acetona se prepara a partir de 1,3-dihidroxi acetona (como un dímero) y cloruro de palmitoílo con piridina como base de acuerdo con P.H. Bentley et al. en J. Org. Chem. 35: 2082 (1970).
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1,3-di(c9,t11-octadecadienoil) acetona (Intermedio 2)
El compuesto del título se prepara a partir de 1,3-dihidroxiacetona y cloruro ácido de c9,t11 octadecadienoílo (preparado a partir del cloruro de tionilo ácido correspondiente o pentacloruro de fósforo de acuerdo con métodos convencionales).
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1,3-di(t10,c12-octadecadienoil) acetona (Intermedio 3)
El compuesto del título se prepara como el intermedio 2 a partir de ácido t10,c12-octadecadienoico y 1,3-dihidroxiacetona.
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1,3-palmitoil glicerol (Intermedio 4)
El compuesto del título se prepara por reducción de 1,3-palmitoil acetona (Intermedio 1) usando borohidruro sódico de acuerdo con P.H. Bentley et al. en J. Org. Chem. 35: 2082 (1970).
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1,3-di(c9,t11-octadecadienoil)-glicerol (Intermedio 5)
El compuesto del título se prepara a partir de 1,3-di(c9,t11-octadecadienoil)acetona (Intermedio 2) de acuerdo con el método descrito para el Intermedio 4.
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1,3-di(t10,c12-octadecadienoil)glicerol (Intermedio 6)
El compuesto del título se prepara a partir de 1,3-di(t10,c12-octadecadienoil)acetona (Intermedio 3) de acuerdo con el método descrito para el Intermedio 4.
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1,3-Benciliden glicerol (Intermedio 7)
El 1,3-benciliden glicerol se prepara a partir de benzaldehído y glicerol anhidro como se describe por Hilbert et al en J. Am. Chem. Soc. 51: 1601 (1929).
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2-Nosil-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 8)
Se disuelven cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo (14,7 g, 12 equiv.) y benciliden glicerol (Intermedio 7) en diclorometano (400 ml). Se añaden trietilamina (20 ml) y 4-dimetilamino-piridina (400 mg) y la mezcla se agita a 0ºC durante 2 horas y se mantiene a 5ºC durante 2 horas. Se añade diclorometano (800 ml) y la solución se lava con solución acuosa saturado de hidrogenocarbonato sódico (3 x 200 ml). La solución orgánica se lava después con agua (2 x 200 ml), se seca con sulfato sódico y se evapora hasta 200 ml. La solución se filtra a través de un lecho corto de gel de sílice y se evapora. El compuesto del título se aísla por cristalización a partir de acetato de etilo.
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2-Palmitoil-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 9)
Se disuelve 2-nosil-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 8) (2 g, 1 equiv.) en dimetilformamida (100 ml). Se añade sal de cesio del ácido palmitínico (1 equiv.) (preparada a partir de ácido palmitínico y carbonato de cesio) y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla se evapora y el compuesto del título se aísla después de la purificación (columna de sílice, acetato de etilo y hexano).
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2-(c9,t11-octadecadienoil)-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 10)
El compuesto del título se prepara como el Intermedio 9 usando la sal de cesio del ácido c9,t11-octadecadienoico (preparada a partir del ácido y carbonato de cesio).
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2-(t10,c12-octadecadienoil)-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 11)
El compuesto del título se prepara como el Intermedio 10 usando la sal de cesio del ácido t10,c12-octadecadienoico (preparada a partir del ácido correspondiente y carbonato de cesio).
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2-Palmitoil-1,3-glicerol (Intermedio 12)
El compuesto del título se prepara por hidrólisis de 2-palmitoil-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 9). Se suspenden 2-palmitoil-1,3-benciliden glicerol (2 g, 1 equiv.) y ácido borónico (0,56, 2 equiv.) en trietilborato (20 ml). La mezcla se agita a temperatura ambiente hasta que la solución se hace transparente. La mezcla se evapora. El producto bruto se disuelve en éter dietílico (100 ml) y se lava con agua (2 x 50 ml). La fase orgánica se seca con sulfato sódico y se evapora produciendo el compuesto del título.
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2-(c9,t11-octadecadienoil)-1,3 glicerol (Intermedio 13)
El compuesto del título se prepara por hidrólisis de 2-c9,t11-octadecadienoil-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 10) de acuerdo con el método del Intermedio 12.
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2-(t10,c12-octadecadienoil)-1,3-glicerol (Intermedio 14)
El compuesto del título se prepara por hidrólisis de 2-t10,c12-octadecadienoil-1,3-benciliden glicerol (Intermedio 11) de acuerdo con el método del Intermedio 12.
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1,3-Ditosil-2-palmitoil-1,3-glicerol (Intermedio 15)
Se disuelve 2-palmitoil-1,3-glicerol (Intermedio 12) (0,4 g, 1 equiv.) en piridina (10 ml). Se añade gradualmente cloruro de p-toluenosulfonilo (0,5 g, 2,5 equiv.). La mezcla se agita durante 12 horas a temperatura ambiente, se evapora y el compuesto del título se cristaliza en etanol.
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1,3-Ditosil-2-(c9,t11-octadecadienoil)glicerol (Intermedio 16)
El compuesto del título se prepara de forma similar al Intermedio 15 partiendo del Intermedio 12.
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1,3-Ditosil-2-(t10,c12-octadecadienoil) glicerol (Intermedio 17)
El compuesto del título se prepara de forma similar al Intermedio 15 partiendo del Intermedio 14.
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1,3-Dipalmitoil-2-nosil-glicerol Intermedio 18)
Se disuelve 1,3-palmitoil glicerol (Intermedio 4) (2,5 g, 4,4 mmol) en diclorometano (60 ml), y se añaden cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo (1,2 g, 5,5 mmol), 4-dimetilaminopiridina (25 mg, 0,2 mmol) y trietilamina (1,12 g, 11 mmol). La mezcla se agita durante 3 días a 0ºC. Se añade diclorometano (200 ml) y la solución orgánica se lava con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato sódico (2 x 200 ml) y después se lava con agua (2 x 200 ml). La fase orgánica se seca con sulfato sódico y se evapora. El compuesto del título se purifica por cromatografía (sílice, acetato de etilo y hexano).
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1,3-di(c9,t11-octadecadienoil)-2-nosil glicerol (Intermedio 19)
El compuesto del título se prepara de forma similar al Intermedio 18 partiendo del Intermedio 5.
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1,3-di(t10,c12-octadecadienoil)-2-nosil glicerol (Intermedio 20)
El compuesto del título se prepara de una manera similar al Intermedio 18 partiendo del Intermedio 6.
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Ejemplo 9 1,3-di(c9,t11-octadecadienoil)-2-palmitoil glicerol (triglicérido)
Se suspenden 1,3-ditosil-2-palmitoil-1,3-glicerol (Intermedio 15) (1 equiv.) y sal de cesio del ácido c9,t11-octadecadienoico (2 equiv.) en tolueno y dimetilformamida (1:1). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 12 horas. Los disolventes se retiran por evaporación y el compuesto del título se aísla después de la cromatografía (sílice, acetato de etilo y hexano).
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Ejemplo 10 1,3-di(t10,c12-octadecadienoil-2-(c9,t11-octadecadienoil)-glicerol (triglicérido)
El compuesto del título se prepara de forma similar al Ejemplo 9 partiendo del Intermedio 16 y la sal de cesio del ácido t10,c12-octadecadienoico.
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Ejemplo 11 1,2,3-tri(t10,c12-octadecadienoil)-glicerol (triglicérido)
El compuesto del título se prepara de manera similar al Ejemplo 9 partiendo del Intermedio 17 y sal de cesio del ácido t10,c12-octadecadienoico. Este compuesto puede prepararse también directamente a partir de glicerol y ácido activado.
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Ejemplo 12 1,3-di(c9,t11-octadecadienoil)-2-(t10,c12-octadecadienoil)-glicerol (triglicérido)
El compuesto del título se prepara de forma similar al Ejemplo 9 a partir del Intermedio 17 y sal de cesio del ácido c9,t11-octadecadienoico.
Pueden prepararse triglicéridos similares a partir de otros ácidos grasos incluyen ácidos grasos saturados, insaturados y poliinsaturados. Los conjugados de triglicéridos de CLA pueden prepararse también con ácidos o fármacos biológicamente activos. Adicionalmente, pueden usarse mezclas de CLA para preparar mezclas de triglicéridos.
Los que debería quedar claro de lo anterior es que la presente invención proporciona nuevos acilglicéridos que comprenden CLA y, al menos, otro resto acilo graso (por ejemplo, restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9) que pueden usarse en composiciones farmacéuticas, piensos para animales y en productos adecuados para consumo humano. Todas las publicaciones y patentes mencionadas en la memoria descriptiva anterior se incorporan a este documento por referencia. Diversas modificaciones y variaciones del método y sistema descritos de la invención resultarán evidentes para los expertos en la materia sin alejarse del alcance y espíritu de la invención. Aunque la invención se ha descrito en conexión con las realizaciones preferidas específicas, debe entenderse que la invención de acuerdo a lo reivindicado no está limitada a dichas realizaciones específicas.

Claims (15)

1. Un acilglicérido que tiene la siguiente estructura:
13
en la que
a) R1 y R3 son restos acilo seleccionados entre el grupo que consiste en 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9; o
b) R2 se selecciona entre el grupo que consiste en restos 10,12; 9,11; 8,10; y 11,13 octadecadienoato y R1 y R3 se seleccionan entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3, \omega6 y \omega9.
2. El acilglicérido de la reivindicación 1 en el que R2 de a) y R1 y R3 de b) se seleccionan entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3 y \omega9.
3. El acilglicérido de la reivindicación 1 en el que R2 de a) y R1 y R3 de b) se seleccionan entre el grupo que consiste en restos acilo graso \omega3.
4. El acilglicérido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que tiene uno de dichos restos acilo graso \omega3 que se selecciona entre el grupo que consiste en 9,12,15-octadecatrienoato; 6,9,12,15-octadecatetraenoato; 11,14,17-eicosatrienoato; 8,11,14,17-eicosatetraenoato; 5,8,11,14,17-eicosapentaenoato; 7,10,13,16,19-docosapentaenoato; y 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoato.
5. El acilglicérido de la reivindicación 1, que tiene uno de dichos restos acilo graso \omega6 que se selecciona entre el grupo que consiste en 6,9,12-octadecatrienoato; 8,11,14-eicosatrienoato; 5,8,11,14-eicosatetraenoato; 7,10,13,16-docosatetraenoato y 4,7,10,13,16-docosapentaenoato.
6. El acilglicérido de la reivindicación 1 ó 2 que tiene uno de dichos restos acilo graso \omega9 que se selecciona entre el grupo que consiste en 6,9-octadecadienoato; 8,11-eicosadienoato; y 5,8,11-eicosatrienoato.
7. Un polvo que comprende al menos un tipo de acilglicérido como se ha indicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
8. Un aceite que comprende al menos un tipo de acilglicérido como se ha indicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
9. El aceite de la reivindicación 8, en el que dicho aceite comprende adicionalmente un antioxidante.
10. Una composición alimentaria que comprende al menos un tipo de acilglicérido como se ha indicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
11. La composición alimentaria de la reivindicación 10, en la que dicha composición alimentaria es un alimento funcional, un complemento alimentario nutricional, una comida para bebés, una comida para mujeres embarazadas o una comida para ancianos.
12. Una composición farmacéutica que comprende al menos un tipo de acilglicérido como se ha indicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
13. Una composición nutricional o farmacéutica que comprende al menos un tipo de acilglicérido como se ha indicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un vehículo adecuado para administración oral, intraintestinal o parenteral.
14. Un método para preparar un acilglicérido como se ha definido en la reivindicación 1, comprendiendo dicho método el uso de lipasas de posición no específica y específica para insertar un primer resto acilo graso en la posición 2 del acilglicérido y un segundo resto acilo graso en las posiciones 1 y 3 del acilglicérido.
15. Un método de acuerdo con la reivindicación 14 que comprende las siguientes etapas:
(a)
unir el primer ácido graso para la posición 2 del acilglicérido a las tres posiciones;
(b)
hidrolizar los restos acilo en las posiciones 1 y 3 usando una lipasa específica-1,3;
(c)
retirar los ácidos hidrolizados resultantes por destilación;
(d)
añadir el segundo ácido graso para las posiciones 1 y 3 en presencia de la misma lipasa específica-1,3.
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