ES2341741T3 - Utilizacion de los actynomycetales para el tratamiento de la diabetes de tipo ii. - Google Patents

Abstract

Utilización de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos en el orden de los Actinomycetales en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la diabetes de tipo II y/o la obesidad y/o uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II.

Description

Utilización de los Actinomycetales para el tratamiento de la diabetes de tipo II.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a la utilización de una composición y/o composición farmacéutica para el tratamiento y/o la prevención de la diabetes de tipo II, y a un paquete farmacéutico que comprende una composición y/o composición farmacéutica.

Antecedentes de la invención

La diabetes de tipo II (diabetes no insulinodependiente) es un trastorno metabólico común cuya incidencia crece rápidamente, particularmente en el mundo desarrollado. Se puede caracterizar por resistencia a la insulina, deficiencia de insulina e hiperglucemia. Los factores asociados a la diabetes de tipo II incluyen el colesterol elevado, la obesidad y la hipertensión.

La diabetes de tipo II puede permanecer sin diagnosticar durante muchos años, dado que los síntomas pueden ser esporádicos y son ciertamente más leves que los asociados a la diabetes de tipo I. Sin embargo, los niveles elevados de azúcar en sangre en los afectados de diabetes de tipo II no tratados pueden provocar deficiencias funcionales en los riñones, los ojos y el sistema cardiovascular.

Se ha puesto de manifiesto que las células enteras de Mycobacterium (tales como Mycobacterium avium, Mycobacterium leprae y Mycobacterium bovis) desempeñan un papel en el tratamiento de la diabetes de tipo I. Sin embargo, dichas bacterias no se han implicado en la prevención y/o el tratamiento de la diabetes de tipo II.

Para evitar cualquier duda, la diabetes mellitus de tipo I insulinodependiente (IDDM o diabetes T1) y la diabetes de tipo II difieren en su origen respectivo.

La diabetes de tipo I se puede caracterizar por un ataque inmune de las células productoras de insulina en los islotes pancreáticos. Algunos estudios en el ratón NOD, una cepa endogámica derivada en Japón, han puesto de manifiesto que una elevada proporción de ratones NOD desarrollan espontáneamente una diabetes de tipo I debido a la destrucción de los islotes pancreáticos mediada por linfocitos T autorreactivos muy similar a la patología humana.

La aparición de una enfermedad autoinmune puede reflejar principalmente la debilidad de las respuestas tolerogénicas a estos autoantígenos, más que un aumento de los estímulos inmunogénicos. Además de la tolerancia mediada por las respuestas celularmente intrínsecas de eliminación y anergia, se ha especulado mucho sobre la posibilidad de que la tolerancia esté mediada por células reguladoras/supresoras inducidas por estimulación con autoantígenos en el timo.

En contraposición, la diabetes de tipo II puede estar causada por el fallo de las células beta a la hora de compensar la resistencia a la insulina. Las dietas altamente calóricas y una actividad muscular insuficiente parecen factores ambientales importantes implicados en la patogénesis de la obesidad y la diabetes de tipo II. Los factores ambientales parecen actuar a través de dos dianas principales. Una es el procesamiento de la glucosa, los ácidos grasos y otros metabolitos, regulado por la insulina y otras hormonas en la mayoría de tejidos, y la otra es la función de las células beta.

La obesidad se ha convertido en un problema de salud pública de primer orden. Las afecciones patológicas causadas o agravadas por la obesidad incluyen hipertensión, diabetes mellitus, apnea del sueño, hipoventilación asociada con la obesidad, problemas de espalda y articulaciones, enfermedades cardiovasculares, esteatosis hepática no alcohólica y reflujo gastroesofágico.

El índice de masa corporal (IMC) (calculado como el peso en kilogramos dividido por el cuadrado de la estatura en metros) es la medida más comúnmente aceptada para el sobrepeso y/o la obesidad. Un IMC superior a 25 se considera sobrepeso, mientras que la obesidad se define como un IMC de 30 o superior, considerándose un IMC de 35 o superior comorbilidad grave, y considerándose un IMC de 40 o superior obesidad mórbida.

Sumario de la invención

Un descubrimiento fundamental de la presente invención es que la diabetes de tipo II se puede tratar y/o prevenir y/o reducir mediante la administración de una célula entera de una bacteria de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales, particularmente mediante la administración de una célula entera de una bacteria de un Actinomycete aeróbico.

Otro descubrimiento fundamental de la presente invención es que la obesidad se puede tratar y/o prevenir y/o reducir mediante la administración de una célula entera de una bacteria de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales, particularmente mediante la administración de una célula entera de una bacteria de un Actinomycete aeróbico.

Descripción detallada de la invención

En un aspecto, la presente invención da a conocer la utilización de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales en la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la diabetes de tipo II y/o la obesidad, preferentemente la diabetes de tipo II.

Se da a conocer un procedimiento para tratar o prevenir la diabetes de tipo II y/o la obesidad en un sujeto que comprende la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de una composición, preferentemente una composición farmacéutica, que comprende una célula entera de una bacteria de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

Adecuadamente, la cantidad eficaz de la composición, preferentemente la composición farmacéutica, se puede administrar como dosis única. Alternativamente, la cantidad eficaz de la composición, preferentemente la composición farmacéutica, se puede administrar en dosis múltiples (repetidas), por ejemplo dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más, seis o más, diez o más, veinte o más dosis repetidas.

Se da a conocer un procedimiento, incluyendo la inmunización, para proteger a un sujeto de la diabetes de tipo II y/o la obesidad, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz de una composición, preferentemente una composición farmacéutica, que comprende una célula entera de una bacteria de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer un paquete farmacéutico para su utilización en el tratamiento de la diabetes de tipo II y/o la obesidad, en el que, por lo menos, un compartimento comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

La diabetes de tipo II se puede caracterizar porque presenta resistencia a la insulina, deficiencia de insulina y/o hiperglucemia. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "afección asociada a la misma" se refiere a una afección que caracteriza la diabetes de tipo II, tal como resistencia a la insulina, deficiencia de insulina, hiperglucemia y síndrome metabólico.

En otro aspecto de la presente invención, se da a conocer la utilización de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales en la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "síndrome metabólico" se puede definir como intolerancia a la glucosa, o diabetes y/o resistencia a la insulina, junto con dos o más de los siguientes factores de riesgo: regulación defectuosa de glucosa o diabetes; resistencia a la insulina; presión arterial elevada \geq 160/90 mmHg; niveles de triglicéridos en plasma elevados (\geq 1,7 mmol/l) y/o nivel de colesterol HDL bajo (< 0,9 mmol/l en hombres, < 1,0 mmol/l en mujeres); obesidad central (relación entre cintura y cadera \geq 0,9 en hombres, \geq 0,85 en mujeres) y/o un índice de masa corporal (IMC) \geq 30; y microalbuminuria (Diabet Med, 1998;15:539-553).

Se da a conocer un procedimiento para tratar o prevenir (preferentemente tratar) en un sujeto uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

Adecuadamente, además de las utilizaciones y los procedimientos descritos anteriormente y/o alternativamente a los mismos, la utilización de la composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales puede tratar o prevenir una reducción del tamaño, preferentemente del tamaño promedio, de los islotes de Langerhans, asociada con la diabetes de tipo II.

En un aspecto, la presente invención da a conocer la utilización de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales en la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la reducción de tamaño, preferentemente el tamaño promedio, de los islotes de Langerhans.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer un procedimiento para tratar o prevenir en un sujeto la reducción o prevención del tamaño, preferentemente el tamaño promedio, de los islotes de Langerhans, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

Mediante la expresión "reducción del tamaño de los islotes de Langerhans", se hace referencia a una reducción del tamaño, preferentemente el tamaño promedio, de los islotes de Langerhans, en comparación con el tamaño, preferentemente el tamaño promedio, de los islotes de Langerhans en un individuo sano. Típicamente, la reducción del tamaño de los islotes de Langerhans estará causada por el hecho de que el sujeto padece diabetes, tal como diabetes de tipo II.

En consecuencia, dicho de otro modo, además de las utilizaciones y procedimientos descritos anteriormente y/o alternativamente a los mismos, la utilización de la composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales puede aumentar el tamaño, preferentemente el tamaño promedio, de los islotes de Langerhans en individuos que padecen diabetes de tipo II. Adecuadamente, los islotes de Langerhans aumentan hasta el tamaño normalmente asociado a un individuo sano.

Un islote de Langerhans con un diámetro comprendido entre un diámetro de 1 y menos de 3 ácinos pancreáticos se puede definir como pequeño; en cambio, un islote con un tamaño igual o mayor a 3 ácinos pancreáticos se puede considerar grande.

Preferentemente, en los individuos tratados con la composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales, la proporción de islotes grandes con respecto a islotes pequeños aumenta. Dicho aumento se compara con la proporción en un individuo de control sin tratar.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "diabetes de tipo II" hace referencia a la diabetes mellitus no insulinodependiente.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales" comprende células enteras de una o más cepas bacterianas. Adecuadamente, cuando las células enteras proceden de más de una cepa bacteriana, dichas cepas pueden pertenecer a una o más especies dentro del mismo género y/o uno o más géneros. Adecuadamente, cuando dichas células enteras proceden de más de un género, dichos géneros pueden pertenecer a una o más familias. Así, a título de ejemplo, el término puede comprender células enteras de una cepa bacteriana particular (por ejemplo, células enteras de una cepa particular de Gordonia bronchialis) y/o células enteras de bacterias procedentes de más de una especie y/o géneros de organismos aeróbicos, tales como, únicamente a título de ejemplo, células enteras de bacterias de las especies Gordonia bronchialis y Rhodococcus coprophilus.

Las células enteras de bacterias de los géneros aeróbicos actinomycetes pueden tener una influencia correctiva en los daños inmunológicamente mediados.

En otra forma de realización, adecuadamente, el organismo u organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales para su utilización según la presente invención puede ser Nocardioform actinomycetes (tal como las bacterias mencionadas en el grupo 22 del Bergy's Manual of Determinative Bacteriology, 9ª edición; tal como, por ejemplo, bacterias que contienen ácido micólico).

Preferentemente, el organismo u organismos aeróbicos son bacterias que contienen ácido micólico (tales como las bacterias del grupo 22, subgrupo 1, del Bergy's Manual of Determinative Bacteriology, 9ª edición; tal como, por ejemplo, Tsukamurella, Rhodococcus, Norcardia y Gordonia).

Sin la intención de vincularse a la teoría, se cree que un lípido o lípidos de pared celular poco habituales presentes en dichas bacterias pueden tener un papel en el tratamiento y/o prevención de la diabetes de tipo II, la obesidad y/o una afección asociada a las mismas.

Preferentemente, las bacterias pueden pertenecer a uno o más de los géneros siguientes: Gordonia (tal como G. bronchialis, G. amarae, G. sputi y G. terrae, preferentemente G. bronchialis); Rhodococcus (tal como Rhodococcus ruber (anteriormente conocido como Nocardia rubra), R. rhodnii, R. coprophilus, R. opacus y R. eritopolis, preferentemente R. coprophilus); Tsukamurella (tal como T. inchonensis y T. paurometabola, preferentemente T. inchonensis); y Norcardia (tal como Norcardia asteroides y N. brasiliensis).

En otra forma de realización, adecuadamente, las bacterias del orden de los Actinomycetales para su utilización de acuerdo con la presente invención pueden pertenecer al género o géneros que contienen ácido micólico como componente de la pared celular. Los ejemplos de dichos géneros incluyen: Tsukamurella, Mycobacterium, Dietzia, Rhodococcus, Norcardia y Gordonia.

Preferentemente, la bacteria o bacterias del orden de los Actinomycetales para su utilización de acuerdo con la presente invención pertenecen a uno o más de los géneros siguientes: Gordonia (tal como G. bronchialis, G. amarae, G. sputi y G. terrae, preferentemente G. bronchialis); Rhodococcus (tal como Rhodococcus ruber (anteriormente conocido como Nocardia rubra), R. rhodnii, R. coprophilus, R. opacus y R. erythopolis, preferentemente R. coprophilus); Tsukamurella (tal como T. inchonensis y T. paurometabola, preferentemente T. inchonensis); Mycobacterium (tal como M. vaccae y M. obuense, preferentemente M. obuense); Dietzia (tal como Dietzia maris) y Norcardia (tal como Norcardia asteroides y N. brasiliensis).

Adecuadamente, dichas bacterias pueden pertenecer al género Gordonia. Preferentemente, dichas bacterias pertenecen a uno o más de entre los siguientes: G. bronchialis, G. amarae, G. sputi y G. terrae, más preferentemente G. bronchialis.

El género Gordonia utilizado en la presente memoria también se puede designar Gordona. En el contexto de la presente memoria, estos dos términos son intercambiables.

Adecuadamente, las bacterias se pueden seleccionar pertenecientes al género Rhodococcus. Adecuadamente, las bacterias se pueden seleccionar entre una o más de entre las siguientes especies: Rhodococcus ruber (anteriormente conocida como Nocardia rubra), R. rhodnii, R. coprophilus, R. opacus y R. erythopolis, más preferentemente R. coprophilus.

Adecuadamente, dichas bacterias pueden pertenecer al género Tsukamurella. Preferentemente, las bacterias son T. inchonensis y/o T. paurometabola; más preferentemente T. inchonensis.

Adecuadamente, dichas bacterias pueden pertenecer al género Mycobacterium. Adecuadamente, las bacterias pueden ser M. vaccae y/o M. obuense, preferentemente M. obuense.

Una cepa de M. obuense para su utilización de acuerdo con la presente invención ha sido depositada por BioEos Limited, 67 de Lakers Rise, Woodmansterne, Surrey, SM7 3LA, Reino Unido, según el Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a los fines del Procedimiento en Materia de Patentes en la National Collection of Type Cultures (NCTC), Central Public Health Laboratory, 61 Colindale Avenue, Londres, NW9 5HT, Reino Unido, el 14 de julio de 2005, bajo Número de Acceso NCTC 13365.

Adecuadamente, las bacterias pueden pertenecer al género Dietzia. Adecuadamente, las bacterias pueden ser Dietzia maris.

Adecuadamente, las bacterias se pueden seleccionar pertenecientes al género Norcardia. Adecuadamente, las bacterias se pueden seleccionar entre una o más de entre las especies siguientes: Norcardia asteroides y/o N. brasiliensis.

Preferentemente, las bacterias utilizadas en la presente invención se matan antes de su utilización. En consecuencia, en una forma de realización preferida, resulta preferida la utilización de bacterias de célula entera muertas.

En una forma de realización preferida, un paquete farmacéutico según la presente invención comprende además una etiqueta que indica que el mismo es adecuado para su utilización en la prevención o el tratamiento de la diabetes de tipo II y/o la obesidad.

En una forma de realización, el paquete farmacéutico según la presente invención puede comprender una etiqueta que indica que el mismo es adecuado para su utilización en la prevención o tratamiento de uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II.

La composición se puede administrar al sujeto en una dosis individual o en múltiples dosis. En una forma de realización, la composición se puede administrar preferentemente al sujeto en múltiples dosis.

La composición se puede administrar en más de una dosis. Las dosis se pueden administrar secuencialmente, e incluso mediante diferentes vías de administración.

En una forma de realización, inicialmente la composición se puede administrar, por lo menos, en dos dosis. Únicamente a título de ejemplo, la composición se puede administrar semanalmente, cada dos semanas, cada tres semanas, cada mes, cada seis semanas, cada dos meses, cada tres meses o cada cuatro meses. La composición se puede administrar, por lo menos, una vez cada cuatro semanas.

En una forma de realización, la composición se puede administrar a lo largo de toda la vida del sujeto. Adecuadamente, el sujeto puede recibir hasta tres o cuatro dosis por año (es decir, se le puede practicar la administración cada tres o cuatro meses, por ejemplo).

En una forma de realización particular, la composición se puede administrar inicialmente a un sujeto en intervalos regulares (por ejemplo, semanal o mensualmente) y las administraciones posteriores se pueden realizar en intervalos de tres o cuatro meses. Por ejemplo, un sujeto puede recibir tres dosis en intervalos mensuales (o alternativamente 6 dosis en intervalos de dos semanas), y las dosis posteriores en intervalos de tres meses.

Preferentemente, cada dosis se administra en forma de inyección.

Tal como se utilizan en la presente memoria, los términos "tratamiento" y/o "tratar" pueden incluir "controlar" la diabetes de tipo II, la obesidad y/o una condición asociada a las mismas, preferentemente diabetes de tipo II y/o obesidad. Por ejemplo, tal como se utilizan en la presente memoria, los términos "tratamiento" y/o "tratar" se pueden referir a tratamientos paliativos o profilácticos. Dicho de otro modo, cuando se administra la composición a un sujeto, el mismo puede no estar tratado completamente de la diabetes de tipo II y/o de una condición asociada a la misma, pero la diabetes de tipo II y/o una condición asociada a la misma puede experimentar remisión.

En algunas formas de realización, los términos "tratamiento" y/o "tratar" se refieren al hecho de que la diabetes de tipo II y/o una condición asociada a la misma, preferentemente la diabetes de tipo II, está controlada.

Tal como se utilizan en la presente memoria, los términos "prevención" y/o "prevenir" se refieren al hecho de que el sujeto es menos susceptible a la diabetes de tipo II y/o a una enfermedad y/o trastorno asociados a la misma en comparación con un sujeto al que no se administran las composiciones según la presente invención y/o al hecho de que el sujeto es más capaz de combatir o superar la diabetes de tipo II y/o una enfermedad y/o trastorno asociados a la misma en comparación con un sujeto al que no se administran las composiciones según la presente invención.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "célula entera" se refiere a una bacteria intacta o sustancialmente intacta. Particularmente, tal como se utiliza en la presente memoria, el término "intacta" se refiere a una bacteria compuesta por todos los componentes presentes en una célula entera, particularmente en una célula viable entera, y/o a una bacteria que no ha sido específicamente tratada para eliminar de la misma uno o más componentes. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "sustancialmente intacta" se refiere al hecho de que, aunque el procedimiento de aislamiento y/o purificación utilizado en la obtención de la bacteria puede resultar, por ejemplo, en una pequeña modificación de la célula y/o en la eliminación de uno o más de sus componentes, el grado en el que tiene lugar dicha modificación y/o eliminación es insignificante. Particularmente, una célula sustancialmente intacta según la presente invención no ha sido específicamente tratada para eliminar de la misma uno o más componentes.

Para evitar cualquier duda, en la forma de realización preferente la bacteria no es una bacteria triturada o no se ha sometido a trituración antes de su administración.

Para evitar cualquier duda, en el caso en que la bacteria se mate antes de su utilización, por ejemplo mediante tratamiento térmico, dicho tratamiento térmico puede inactivar o destruir constituyentes de la bacteria. Dicha bacteria muerta, por ejemplo sometida a tratamiento térmico, se puede seguir considerando una célula entera sustancialmente intacta de acuerdo con la presente invención.

Los documentos WO2004/022093 y WO2005/049056 dan a conocer una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) que comprende una célula entera de una bacteria perteneciente a los géneros Rhodococcus, Gordonia, Nocardia, Dietzia, Tsukamurella y Nocardioides. Sin embargo, ninguno de estos documentos describe o propone la utilización de una composición moduladora del sistema inmunitario o composición farmacéutica de este tipo para el tratamiento y/o prevención de la diabetes de tipo II.

La Mycobacterium vaccae, o parte de la misma (tal como se describe en el documento WO2002/032455), ha sido utilizada en una vacuna contra enfermedades provocadas por micobacterias (por ejemplo, la tuberculosis). Sin embargo, la utilización de M. vaccae en la prevención o tratamiento de la diabetes de tipo II no ha sido descrita ni propuesta anteriormente.

Adecuadamente, la composición o composición farmacéutica utilizada en la presente invención puede comprender un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptables.

Adecuadamente, la composición y/o composición farmacéutica puede comprender más de una célula entera, y más preferentemente comprende una pluralidad de células enteras.

En un aspecto, la composición y/o una composición farmacéutica que comprende una célula entera de una bacteria perteneciente a un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales puede comprender además, por lo menos, un antígeno o determinante antigénico, o, por lo menos, uno más.

Adecuadamente, la composición para su utilización según la presente invención puede comprender dos o más bacterias, o tres o más, pertenecientes a un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

Preferentemente, las bacterias para su utilización según la presente invención son especies que se pueden cultivar en un medio que es poco antigénico, preferentemente no antigénico. Únicamente a título de ejemplo, un medio no antigénico adecuado es el medio de Sauton.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "sujeto" se refiere a un humano y/o un animal. Preferentemente, el sujeto es un mamífero, incluyendo, por ejemplo, animales domesticados (tal como gatos y perros) y/o humanos. Sin embargo, si se identifica diabetes de tipo II y/o un obesidad en otro sujeto, tal como un animal diferente, se prevé que la composición y/o composición farmacéutica descrita en la presente memoria sea efectiva para tratar y/o prevenir la diabetes de tipo II y/o la obesidad en otros sujetos, tal como en otros animales. En una forma de realización, el sujeto es preferentemente un humano. Preferentemente, el sujeto es un adulto.

Preferentemente, el sujeto presenta diabetes de tipo II o una predisposición para la misma. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "predisposición para la diabetes de tipo II" se refiere a un sujeto que presenta una probabilidad elevada de desarrollar diabetes de tipo II en comparación con un sujeto sano. Por ejemplo, los sujetos con una predisposición para la diabetes de tipo II según la presente invención incluyen los que presentan uno o más de entre los siguientes: nivel alto de colesterol, hipertensión, obesidad o disposición genética.

Preferentemente, la composición según la presente invención se utiliza en el tratamiento de la diabetes de tipo II administrando la composición a un sujeto que padece diabetes.

Adecuadamente, la composición según la presente invención se puede utilizar en el tratamiento de la obesidad administrando la composición a un sujeto que padece obesidad.

En algunas formas de realización según la presente invención, el sujeto puede ser un sujeto que presenta sobrepeso (por ejemplo, con un IMC mayor de 25, preferentemente mayor de 30) y/o presenta riesgo de presentar obesidad (por ejemplo, debido a la dieta de dicho sujeto o por razones médicas, tales como razones metabólicas o efectos secundarios de medicación).

Adecuadamente, las composiciones según la presente invención pueden prevenir que un sujeto presente obesidad. El término "prevenir" se refiere al hecho de que las composiciones según la presente invención pueden impedir que un sujeto se vuelva obeso o bien retrasar el inicio de la obesidad (es decir, disminuir la velocidad a la cual el sujeto presenta obesidad) en comparación con el mismo sujeto si no se le hubiera administrado la composición según la presente invención.

Adicional o alternativamente, el sujeto puede presentar una infección vírica (tal como una infección vírica asociada con la adquisición de peso).

Preferentemente, la bacteria según la presente invención se destruye antes de su utilización.

Preferentemente, la bacteria según la presente invención se destruye mediante tratamiento térmico, por ejemplo tratamiento térmico en una autoclave a 121ºC durante 15 minutos.

Otros tratamientos adecuados para destruir la bacteria pueden incluir radiación ultravioleta o ionizante, o tratamiento con sustancias químicas, tales como fenol, alcohol o formalina. Adecuadamente, la radiación ionizante se puede aplicar mediante exposición a 2,5 Mrad procedentes una fuente de Co_{60}.

Preferentemente, la bacteria según la presente invención se purifica y/o aísla.

Preferentemente, la bacteria según la presente invención se suspende en una solución acuosa (tal como agua o solución salina tamponada, adecuadamente borato tamponado a pH 8). Preferentemente, la bacteria no se administra en un aceite.

Adecuadamente, la composición según la presente invención puede ser una composición "terapéutica" que se administra a individuos con una afección existente a efectos de reducir o minimizar dicha afección o de eliminar las consecuencias inmunopatológicas de la misma.

Sobrepeso/obesidad

En humanos, el índice de masa corporal (IMC) (calculado como el peso en kilogramos dividido por el cuadrado de la estatura en metros) es la medida más comúnmente aceptada para el sobrepeso y/o la obesidad.

Un IMC mayor de 25 se considera sobrepeso.

La obesidad se define como un IMC de 30 o mayor, considerándose un IMC de 35 o mayor como comorbilidad grave y un IMC de 40 o mayor como obesidad mórbida.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "obesidad" incluye obesidad, obesidad con comorbilidad y obesidad mórbida. En consecuencia, tal como se utiliza en la presente memoria, el término "obesidad" se puede definir como un sujeto que presenta un IMC mayor o igual a 30.

Adecuadamente, en algunas formas de realización, un sujeto obeso puede presentar un IMC mayor igual a 30, adecuadamente 35, adecuadamente 40.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "exceso de peso" se refiere al exceso de peso del sujeto. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "exceso de peso" se refiere al hecho de que se considera que el sujeto presenta sobrepeso. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "sobrepeso" se refiere al hecho de que el sujeto tiene un IMC mayor de 25.

El exceso de peso y/o la obesidad se pueden medir utilizando el IMC. En consecuencia, una reducción en el exceso de peso y/o la obesidad se puede medir utilizando el IMC.

En una forma de realización, en el tratamiento de la obesidad, el IMC del sujeto se puede reducir en 5 unidades (es decir, de 35 a 30 unidades de IMC; o de 30 a 25 unidades de IMC), preferentemente en 10 unidades.

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Adecuadamente, en el tratamiento de la obesidad, el IMC del sujeto se puede reducir a menos de 28, preferentemente menos de 25, más preferentemente menos de 20.

Una reducción en el exceso de peso y/o la obesidad se puede medir adicionalmente (o alternativamente) sencillamente midiendo el peso del sujeto en relación con un control y/o antes y después de la administración de los microorganismos y/o un metabolito de los mismos según la presente invención.

Sin la intención de vincularse a la teoría, puede existir también una relación entre los marcadores inflamatorios en suero o sangre (tales como proteína C reactiva y/o interleucina 6 y/o TNF-RII, por ejemplo) y la obesidad. Además, también puede haber una correlación entre los marcadores inflamatorios en suero o sangre y el IMC. En consecuencia, en una forma de realización, se pueden medir los marcadores inflamatorios en sangre con el fin de determinar la obesidad y/o una reducción en la obesidad en un sujeto.

Similarmente, son bien conocidos procedimientos para determinar si los animales (por ejemplo, animales domesticados tales como gatos y perros) presentan sobrepeso y/o obesidad. Por ejemplo, se puede utilizar una puntuación de condicionamiento corporal en gatos y perros en la que la evaluación se lleva a cabo de acuerdo con criterios simples, tales como el tamaño y la localización de los principales depósitos adiposos, la estructura esquelética visible e invisible y/o la silueta del animal (véase Diez, The Royal Canin cut-out and keep guide to body condition scoring in cats and dogs, 2006, volumen 16, No. 1).

Trastornos/enfermedades asociados al exceso de peso y/o la obesidad o causados por los mismos

Las afecciones patológicas (es decir, trastornos y/o enfermedades) causadas o agravadas por la obesidad incluyen hipertensión, diabetes mellitus, por ejemplo diabetes de tipo II, apnea del sueño, hipoventilación asociada con la obesidad, problemas de espalda y articulaciones, enfermedades cardiovasculares, esteatosis hepática no alcohólica y reflujo gastroesofágico.

Las composiciones adecuadas según la presente invención pueden aliviar y/o mejorar las condiciones asociadas a la obesidad o causadas por la misma.

Administración

Típicamente, el médico determinará la dosis efectiva de la composición o composición farmacéutica más adecuada para el sujeto individual, y la misma variará según la edad, el peso y la respuesta del sujeto en particular. Las dosificaciones indicadas a continuación son ejemplos del caso promedio. Evidentemente, pueden existir casos individuales en los que resulten indicados intervalos de dosificación más elevados o más reducidos.

Preferentemente, la dosificación efectiva utilizada da lugar a una toxicidad mínima para el sujeto.

Las composiciones según la presente invención se pueden administrar por inyección directa. La composición se puede formular para la administración parenteral, mucosal, intramuscular, intravenosa, subcutánea, intraocular, intradérmica o transdérmica.

Adecuadamente, la composición según la presente invención se puede administrar en una dosis de 10^{3}-10^{11} organismos, preferentemente 10^{4}-10^{10} organismos, más preferentemente 10^{4}-10^{9}, más preferentemente 10^{6}-5 x 10^{9} organismos, y aún más preferentemente 10^{7}-2 x 10^{9} organismos. Típicamente, la composición según la presente invención se puede administrar en una dosis de 10^{8}-2 x 10^{9} bacterias para utilización en humanos y animales. Adecuadamente, dichas dosificaciones se consideran una "cantidad efectiva" de acuerdo con la presente invención.

Preferentemente, la composición se puede administrar en una dosis de 10^{4}-10^{10} organismos. Adecuadamente, dichas dosificaciones se consideran una "cantidad efectiva" de acuerdo con la presente invención.

Tal como apreciará el experto en la materia, la dosificación administrada dependerá del organismo al cual se administra dicha dosis. Por ejemplo, en humanos, una dosis típica puede llegar y/o estar dentro del orden de 1 mg/0,1 ml.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "administrar" se refiere a la administración de bacterias según la presente invención para proporcionar un medicamento. Preferentemente, el término "administrar" se refiere a la administración para prevenir, tratar y/o controlar la diabetes de tipo II y/o los síntomas de la misma (por ejemplo, niveles elevados de azúcar en sangre). Dicho de otro modo, en una forma de realización, el término "administrar" se refiere al hecho de que las bacterias se suministran (preferentemente en forma de medicamento) al sujeto, es decir, no incluye la situación en la que el sujeto pueda comprender o adquirir las bacterias de forma natural.

El término "administrado" incluye la administración mediante mecanismos de administración que incluyen inyección, transfección mediada por lípidos, liposomas, inmunoliposomas, lipofectina, compuestos anfifílicos faciales catiónicos (CFA) y combinaciones de los mismos, o incluso mediante administración vírica. Las vías para dichos mecanismos de administración incluyen, sin limitarse a las mismas, las vías mucosal, nasal, oral, parenteral, gastrointestinal, tópica o sublingual.

El término "administrado" incluye, sin limitarse a la misma, la administración por una vía mucosal, por ejemplo, en forma de pulverizador nasal o aerosol para inhalación, o en forma de solución ingerible; una vía parenteral en la que la administración se lleva a cabo mediante una forma inyectable, tal como, por ejemplo, una vía intravenosa, intramuscular, intradérmica o subcutánea.

El término "coadministrado" se refiere al hecho de que el lugar y el momento de administración de cada una de las composiciones, adyuvante o adyuvantes, antígeno o antígenos y/o determinante o determinantes antigénicos según la presente invención son tales que se alcanza la necesaria modulación del sistema inmunitario. De este modo, aunque la composición y el antígeno o antígenos y/o el adyuvante o adyuvantes se pueden administrar en el mismo momento y en el mismo sitio, puede resultar ventajoso administrar la composición y/o el antígeno o antígenos y/o el determinante o determinantes antigénicos en momentos y en sitios diferentes a aquellos en los que se administran el adyuvante o adyuvantes. La composición y/o el antígeno o antígenos y/o el determinante o determinantes antigénicos y el adyuvante o adyuvantes se pueden administrar incluso en el mismo vehículo de administración, y el antígeno o antígenos y/o el determinante o determinantes antigénicos y el adyuvante o adyuvantes pueden estar acoplados y/o no acoplados y/o genéticamente acoplados y/o no acoplados. Únicamente a título de ejemplo, la composición según la presente invención se puede administrar antes, en el mismo momento o después de la administración de uno o más antígenos o antígenos adicionales.

La composición se puede administrar al sujeto en una dosis individual o en múltiples dosis. Preferentemente, la composición se administra en múltiples dosis.

La composición y/o composición farmacéutica para su utilización de acuerdo con la presente invención se puede administrar a través de diversas vías diferentes, tales como administración por inyección (que incluye inyección parenteral, subcutánea, intradérmica e intramuscular), o administración intranasal, mucosal, oral, intravaginal, uretral u ocular.

Preferentemente, en la presente invención, la administración se lleva a cabo por inyección. Más preferentemente, dicha inyección es intradérmica, subcutánea y/o intravenosa, preferentemente intradérmica o subcutánea.

Preferentemente, en la presente invención, la administración se lleva a cabo mediante una composición oralmente aceptable.

Para la administración, la composición se puede proporcionar en una solución acuosa, por ejemplo en 0,1 a 0,2 ml de una solución acuosa, preferentemente solución salina fisiológica tamponada. Adecuadamente, la composición se puede administrar parenteralmente, por ejemplo por inoculación intradérmica. Preferentemente, la composición según la presente invención se inyecta intradérmicamente. En el sitio de inyección pueden aparecer inflamación y rubor, y a veces incluso picor. El experto en la materia podrá optimizar del modo conocido el modo de administración, la dosis y el número de administraciones.

Antígenos

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "antígeno" se refiere a una entidad que, al ser introducida en un huésped inmunocompetente, modifica la producción de un anticuerpo o anticuerpos específicos que se pueden combinar con dicha entidad, y/o modifica la respuesta de los linfocitos T auxiliares relevante, tal como una respuesta Th2 y/o Th1. Dicho antígeno puede ser una sustancia pura, una mezcla de sustancias o material soluble o particulado (incluyendo células o fragmentos celulares o sonicado celular). En este sentido, el término incluye cualquier determinante antigénico adecuado, antígeno de reacción cruzada, aloantígeno, xenoantígeno, tolerógeno, alérgeno, hapteno e inmunógeno, o partes de los mismos, así como cualquier combinación de los mismos, y dichos términos se utilizan de forma intercambiable a lo largo del texto.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "determinante antigénico o epítope" se refiere a un sitio sobre un antígeno que es reconocido por un anticuerpo o receptor de linfocitos T, o es responsable de desencadenar la respuesta de linfocitos T auxiliares. Preferentemente, se trata de un péptido corto derivado de un antígeno proteínico o que forma parte del mismo. Sin embargo, el término también pretende incluir glicopéptidos y epítopes de hidratos de carbono. El término también incluye secuencias modificadas de aminoácidos o hidratos de carbono que estimulan respuestas que reconocen al organismo completo.

Adyuvantes

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "adyuvante" se refiere a una entidad capaz de aumentar o participar en la modificación de una respuesta inmunitaria. Un adyuvante es cualquier sustancia o mezcla de sustancias que facilita, aumenta, regula a la baja, modifica o diversifica la respuesta inmunitaria a un antígeno.

La composición y/o composición farmacéutica según la presente invención puede comprender uno o más adyuvantes que aumenten la eficacia de la composición y/o composiciones farmacéuticas. Los ejemplos de adyuvantes adicionales que pueden ser efectivos incluyen, de manera no limitativa: hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, sulfato de aluminio y potasio (alumbre), sulfato de berilio, sílice, caolín, carbón, emulsiones agua-en-aceite, emulsiones aceite-en-agua, dipéptido muramilo, endotoxina bacteriana, lípido X, Corynebacterium parvum (Propionobacterium acnes), Bordetella pertussis, Mycobacterium vaccae, polirribonucleótidos, alginato de sodio, lanolina, lisolecitina, vitamina A, interleucinas tales como interleucina 2 e interleucina 12, saponina, liposomas, levamisole, DEAE dextrano, copolímeros de bloque u otros adyuvantes sintéticos. Dichos adyuvantes están disponibles comercialmente a través de diversas fuentes, por ejemplo, Merck Adjuvant 65 (Merck and Company, Inc., Rahway, N.J.) o Freund's Incomplete Adjuvant and Complete Adjuvant (Difco Laboratories, Detroit, Michigan). Únicamente el hidróxido de aluminio está aprobado para uso en humanos. Algunos de los otros adyuvantes, tal como M. vaccae, por ejemplo, han sido aprobados para ensayos clínicos.

Adecuadamente, el adyuvante puede ser una célula entera de una bacteria perteneciente al género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales.

En la técnica se conoce el hecho de que las vacunas de ADN, que esencialmente son secuencias de ADN fijadas sobre partículas de oro que se disparan al interior de la piel mediante una pistola de helio, son sistemas eficientes de administración de vacunas. A diferencia de las vacunas convencionales, estas vacunas de ADN no requieren un componente adyuvante tradicional. De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, la composición tal como se define en la presente memoria se puede utilizar adecuadamente junto con dichas vacunas de ADN a efectos de aumentar o participar en la modificación de una respuesta inmunitaria.

Composiciones farmacéuticas

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula entera de una bacteria perteneciente a un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales y opcionalmente un portador, diluyente o excipientes farmacéuticamente aceptables (incluyendo combinaciones de los mismos).

Dicha composición farmacéutica puede comprender dos componentes: un primer componente que comprende un antígeno y un segundo componente que comprende un adyuvante del mismo. El primer y/o segundo componentes se pueden administrar secuencialmente, simultáneamente o conjuntamente, e incluso por vías de administración diferentes.

Adecuadamente, el antígeno puede incluso ser generado en los tejidos del huésped como parte de un proceso patológico. De este modo, el antígeno se puede originar a partir de una invasión bacteriana, huésped o parasitaria, o puede ser una sustancia liberada en los tejidos, tal como una proteína de estrés, equivalente a las proteínas de choque térmico de bacterias o un antígeno tumoral.

Las composiciones farmacéuticas pueden ser para utilización en humanos o animales, en medicina humana y veterinaria, y típicamente comprenden uno o más de entre diluyentes, portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los portadores o diluyentes aceptables para uso terapéutico son bien conocidos en la técnica farmacológica, y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). La elección del portador, excipiente o diluyente farmacéuticos se puede llevar a cabo teniendo en cuenta la vía de administración que se pretende utilizar y la práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender como portador, excipiente o diluyente, o además de los mismos, cualquier aglutinante o aglutinantes, lubricante o lubricantes, agente o agentes de suspensión, agente o agentes de recubrimiento, agente o agentes de solubilización adecuados.

Se pueden incluir en la composición farmacéutica conservantes, estabilizantes, colorantes e incluso aromatizantes. Los ejemplos de conservantes incluyen benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido p-hidroxibenzoico. También se pueden utilizar antioxidantes y agentes de suspensión.

Pueden existir diferentes requisitos de composición/formulación, en función de los diferentes sistemas de administración. A título de ejemplo, la composición farmacéutica según la presente invención se puede formular para ser administrada utilizando una minibomba o a través de una vía mucosal, por ejemplo, como un pulverizador nasal o aerosol para inhalación o solución ingerible, o parenteralmente, en cuyo caso la composición se formula como forma inyectable para la administración, por ejemplo, por una vía intravenosa, intramuscular, intradérmica o subcutánea. Alternativamente, la formulación se puede concebir para ser administrada por ambas vías.

Preferentemente, en la presente invención la formulación es de forma inyectable. Más preferentemente, la formulación se inyecta por vía intradérmica.

Preferentemente, en la presente invención, la formulación es una composición oralmente aceptable.

Cuando el agente se pretende administrar por vía mucosal a través de la mucosa gastrointestinal, el mismo debe ser capaz de permanecer estable durante el tránsito a través del tracto gastrointestinal; por ejemplo, debe ser resistente a la degradación proteolítica, estable a pH ácido y resistente a los efectos detergentes de la bilis.

Cuando resulte apropiado, las composiciones farmacéuticas se pueden administrar por inhalación, en forma de supositorio o pesario, tópicamente en forma de loción, solución, crema, pomada o polvos, mediante la utilización de un parche térmico, oralmente en forma de comprimidos que contienen excipientes tales como almidón o lactosa, o en forma de cápsulas u óvulos, ya sea solos o junto con excipientes, o en forma de elixires, soluciones o suspensiones que contienen agentes aromatizantes o colorantes, o bien se pueden inyectar parenteralmente, por ejemplo por vía intravenosa, intramuscular, intradérmica o subcutánea. Para la administración parenteral, las composiciones se pueden utilizar del mejor modo en forma de solución acuosa estéril, que puede contener otras sustancias, por ejemplo sales o monosacáridos suficientes para hacer que la solución sea isotónica con la sangre. Para la administración bucal o sublingual, las composiciones se pueden administrar en forma de comprimidos o grageas, que se pueden formular del modo convencional, o las composiciones se pueden administrar mediante su incorporación a la comida y/o alimentación del sujeto.

Combinaciones farmacéuticas

El agente según la presente invención se puede administrar con una o más sustancias farmacéuticamente activas adicionales. A título de ejemplo, la presente invención comprende los tratamientos simultáneos o secuenciales con una composición y/o composición farmacéutica según la presente invención, y uno o más esteroides, analgésicos, antivíricos, interleucinas tales como IL-2, u otra u otras sustancias farmacéuticamente activas.

En una forma de realización, la composición según la presente invención se puede administrar con una o más sustancias farmacéuticamente activas utilizadas típicamente en el tratamiento de la diabetes de tipo II. Únicamente a título de ejemplo, dichas sustancias farmacéuticamente activas pueden incluir sulfonilureas, biguanidas (por ejemplo, metformina), tiazolidindionas, inhibidores de la \alpha-glucosidasa (por ejemplo, acarbosa y/o miglitol), meglitinidas (por ejemplo, nateglinida, repaglinida y/o sus análogos), exenatida y/o pramlintida.

Para evitar cualquier duda, dichas una o más sustancias farmacéuticamente activas se pueden administrar a través de la misma vía de administración o de una vía de administración diferente de la composición tal como se utiliza en la presente invención.

Debe apreciarse que estos regímenes incluyen la administración de las sustancias secuencialmente, simultáneamente o conjuntamente.

Estimulante del sistema inmunitario

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "estimulante del sistema inmunitario" se refiere a una o más bacterias, aisladas o en cultivo, que, al ser administradas a un sujeto, mejoran la salud del mismo. Preferentemente, esta mejora se alcanza mediante la modificación de la respuesta inmunitaria celular de dicho sujeto.

Según la presente invención, los estimulantes del sistema inmunitario se pueden utilizar para el tratamiento y/o la prevención de la diabetes de tipo II y/o la obesidad.

Los estimulantes del sistema inmunitario se pueden administrar mediante el consumo en alimentos especialmente concebidos o en comida para animales, por ejemplo comida para animales complementada con las bacterias según la presente invención.

Los estimulantes del sistema inmunitario también se pueden administrar por otras vías, tal como inyección directa.

Preferentemente, las bacterias se matan a efectos de evitar las dificultades de mantener productos vivos y/o evitar exponer sustancias inmunológicamente activas a menudo escondidas en las bacterias vivas.

Identificación de una bacteria que puede ser utilizada para tratar la diabetes de tipo II

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento para identificar una o más células enteras de bacterias pertenecientes a un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales con el que se puede tratar y/o prevenir la diabetes de tipo II, que comprende las etapas que consisten en: (a) administrar a un primer grupo de animales de ensayo un estimulante del sistema inmunitario; (b) administrar a un segundo grupo de animales de ensayo un estimulante del sistema inmunitario mezclado con una bacteria perteneciente a un género de organismos aeróbicos del orden de los Actinomycetales; (c) medir el número o los casos y/o la gravedad de diabetes de tipo II en cada uno de los animales de ensayo (tal como mediante los niveles de glucosa en sangre en ayuno y/o los niveles de glucosa 2 horas después de una sobredosis de glucosa); y (d) comparar los resultados en cada uno de los grupos de animales de ensayo, siendo indicativa una menor incidencia y/o gravedad de la diabetes de tipo II en el grupo con inmunoestimulante mezclado con bacteria en comparación con el grupo tratado solo con inmunoestimulante (por ejemplo, un nivel más bajo de glucosa en sangre en ayuno) de una bacteria adecuada para su utilización de acuerdo con la presente invención.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "animal de ensayo" se refiere a cualquier animal que desencadena una respuesta inmunitaria celular al inmunoestimulante. Preferentemente, el animal o animales de ensayo es un mamífero.

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Preferentemente, la bacteria modifica la respuesta de los linfocitos T auxiliares. De forma adecuada, la bacteria puede modificar la respuesta de los linfocitos T auxiliares aumentando la respuesta Th1 y regulando a la baja la respuesta Th2.

Preferentemente, el inmunoestimulante induce/potencia una respuesta Th1 y Th2 conocida. Por ejemplo, con el inmunoestimulante BCG, la reacción a la tuberculina llega habitualmente a su máximo a las 24 horas cuando se trata de un indicador de la respuesta Th1; la reacción a las 48 horas es habitualmente menor e incluye una contribución de respuesta Th2. Se conoce el hecho de que el BCG estimula preferentemente una respuesta Th1 en un animal no sometido previamente a experimentación.

Mediante la utilización de estos inmunoestimulantes es posible determinar la respuesta Th1/Th2 de una bacteria de ensayo y, en consecuencia, es posible identificar una o más bacterias que presenten una respuesta Th1/Th2 deseada para tratar y/o prevenir una enfermedad y/o trastorno en particular.

Preferentemente, la respuesta inmunitaria celular se mide utilizando el ensayo cutáneo de la tuberculina. En los ratones, el ensayo cutáneo de la tuberculina se lleva a cabo preferentemente a través del parche podal. En una reacción Th1 predominante, la respuesta inmunitaria positiva en el parche podal alcanza un máximo a las 24 horas y disminuye a las 48 horas. Sin embargo, a medida que aumenta la reactividad Th2, aumenta la respuesta inmunitaria positiva del parche podal a las 48 horas y puede incluso superar la respuesta inmunitaria en el parche podal a las 24 horas.

La vacunación con un inmunoestimulante (tal como BCG) induce una respuesta al ensayo cutáneo con tuberculina (una preparación soluble de tubercle bacilli) cuando se somete a ensayo posteriormente. La reacción local se mide en diversos intervalos, por ejemplo a las 24 horas, 48 horas y 72 horas tras la inyección de la tuberculina. En resumen, se utiliza un inmunoestimulante (por ejemplo BCG) que induce una respuesta inmunitaria positiva a la tuberculina. En el animal de ensayo, el ensayo cutáneo de la tuberculina se lleva a cabo preferentemente a través del parche podal. En una reacción Th1 predominante, la respuesta inmunitaria positiva en el parche podal alcanza un máximo a las 24 horas y disminuye a las 48 horas. Sin embargo, a medida que aumenta la reactividad Th2, aumenta la respuesta inmunitaria positiva del parche podal a las 48 horas y puede incluso superar la respuesta inmunitaria en el parche podal a las 24 horas. El ensayo se puede así utilizar para evaluar si la introducción de una composición moduladora en el sistema inmunitario según la presente invención modula la respuesta celular inmune o no.

Preferentemente, el inmunoestimulante es BCG.

Figuras

La figura 1 muestra un gráfico que representa el aumento relativo de la glucemia en ratas eSMT a los 7 meses (es decir, 3 meses tras la inyección) en comparación con las ratas eSMT a los cuatro meses (es decir, inmediatamente antes de la inyección). (Gb) se refiere al grupo inyectado con Gordonia bronchialis, (Rc) al grupo inyectado con Rhodococcus coprophilus; y

la figura 2 muestra un gráfico que representa el aumento relativo de peso en ratas eSMT a los 7 meses (es decir, 3 meses tras la inyección) en comparación con las ratas eSMT a los cuatro meses (es decir, inmediatamente antes de la inyección). (Gb) se refiere al grupo inyectado con Gordonia bronchialis, (Rc) al grupo inyectado con Rhodococcus coprophilus;

la figura 3 muestra islotes de Langerhans en ratas diabéticas. A muestra un islote grande (hematoxilina y eosina) 100x, mientras que B muestra un islote pequeño (hematoxilina y eosina) 200x.

A continuación, la presente invención se describe mediante los ejemplos indicados no limitativos del alcance de la presente invención para la puesta en práctica de la invención por parte del experto en la materia.

Ejemplos Ejemplo 1

Determinación de los efectos de la administración de células enteras de Gordonia bronchialis (Gb) y Rhodococcus coprophilus (Rc) sobre el peso, los niveles de glucosa en sangre en ayuno y los niveles de glucosa en sangre tras sobredosis de glucosa de ratas diabéticas.

Se llevaron a cabo estudios en un modelo de rata de diabetes de tipo II espontánea (ratas eSMT-Rat Newsletter 1991; 25: 28-29; Supplement IV of the international Survey on the Supply, Quality and Use of Laboratory Animals, Carshalton, Surrey, noviembre de 1964, y Tarrés y otros, The eSMT rat: a murine model of type 2 diabetes, proceedings of the international joint meeting twelfth general assembly and conference and seventh FELASA symposium, 26-28 de mayo de 1999) para emular lo que ocurre en los humanos.

A tres grupos de ratas de 4 meses de edad se les extrajo sangre mediante punción en la vena de la cola en ayuno y 120 minutos tras una sobredosis oral de glucosa para determinar los niveles de glucosa, y también se pesaron (primera evaluación). Los niveles de glucosa se midieron mediante un procedimiento enzimático de glucosa oxidasa utilizando un kit comercial (Wiener Laboratorios, Argentina).

A continuación, se les inyectó por el pescuezo solución salina, 1 \mug/0,1 ml de Rhodococcus coprophilus en solución salina tamponada con borato o 1 \mug/0,1 ml de Gordonia bronchialis en solución salina tamponada con borato, con una segunda administración idéntica tres semanas más tarde.

Tres meses más tarde, a los tres grupos de ratas se les extrajo sangre en ayuno y 120 minutos tras una sobredosis oral de glucosa a efectos de determinar los niveles de glucosa, y también se pesaron (primera evaluación).

Resultados El estudio se llevó a cabo en un modelo de rata de diabetes de tipo II espontánea

La tabla 1 muestra los niveles de glucosa en ayuno (G0) y 120 minutos tras una sobredosis oral de glucosa (G120), y el peso de las ratas eSMT macho (diabéticas) a los 4 meses (antes del tratamiento) y a los siete meses.

Los datos son valores promedio \pm SD

TABLA 1

1

La tabla 2 muestra el aumento relativo al comparar los resultados a los 4 meses frente a los resultados a los 7 meses.

2

Ejemplo 2 Animales

24 ratas beta macho. Las ratas beta (y 2 otras sub-lineas: eSS y eSMT) se utilizan como modelo para la diabetes humana no insulinodependiente (véase Tarrés y otros, The eSS rat, American Journal of Pathology, septiembre de 1992, Vol. 141, No. 3 y Calderari y otros, Rat News Letter, No. 25, julio de 1991, pág. 28-29; Olguín y otros, Diabetes, Nutrition & Metabolism Clinical and Experimental 11: 314-319, 1998). Se dispone de las ratas a través de la Dra. Maria Tarrés, Silvana Montenegro, Maria del Carmen Gayol y la Dra. Stella Maris Martínez (Cátedra de Biología, Facultad de Ciencias Médicas, UNR Santa Fe 3100.2000 Rosario, Argentina).

Reactivos de ensayo

Células enteras muertas por calor de G. bronchialis 100 \mug/0,1 ml en solución salina tamponada con borato. Células enteras muertas por calor de T. inchonensis 100 \mug/0,1 ml en solución salina tamponada con borato placebo.

Protocolo

Con 4 meses de edad, a todos los animales se les midió el nivel de glucosa en sangre en ayuno y a los 120 minutos (tras la administración de glucosa).

Todos los animales se pesaron.

Con estos datos, los animales se distribuyeron al azar, de tal modo que 12 ratas permanecieron como controles, 6 ratas recibieron 3 dosis profilácticas de G. bronchialis (Gb) y 6 ratas recibieron 3 dosis profilácticas de T. inchonensis (Ti).

Las dosis profilácticas se administraron cuando las ratas tenían 4, 5 y 6 meses de edad.

A los 7 meses de edad, las ratas se pesaron y se midieron nuevamente sus niveles de glucosa en ayuno y tras la administración de glucosa.

Sobre la base de los pesos y los niveles de glucosa, se escogieron aleatoriamente 6 animales de entre los animales de control para administrarles inyecciones de tratamiento de G. bronchialis. Dichas inyecciones se administraron cuando las ratas tenían 7, 8 y 9 meses de edad.

Al alcanzar 1 año, los animales se pesaron y se midieron nuevamente sus niveles de glucosa en sangre en ayuno y tras administración de glucosa.

Se llevaron a cabo estudios microscópicos del páncreas de las ratas a los 360 días y se contó el número de islotes de Langerhans grandes y pequeños por campo microscópico (por lo menos, 3 campos/páncreas), a 100x según un procedimiento descrito (Martinez SM, Tarrés MC, Picena JC, Montenegro SM, Gagliardino JJ, Gómez Dumm CL, D'Ottavio AE, Naves A, Rabasa SL. eSS rat, an animal model for the study of spontaneous non-insulin-dependent diabetes. En: Lessons from Animal Diabetes IV. E Shafrir, Ed. Smith-Gordon, Londres, 75-90, 1993; Martinez SM, Tarrés MC, Robledo HA, Liborio MM, Picena JC, Rabasa SL. Modelo murino de la diabetes clínicamente benigna de los jóvenes (MODY). Medicina (Buenos Aires) 44: 145-152, 1984; y Martinez SM, Tarrés MC, Montenegro SM, Milo R, Picena JC, Figueroa N, Rabasa SL. Spontaneous diabetes in eSS rats. Acta diabetol lat 25: 303-313, 1988).

Un islote con un diámetro comprendido entre 1 y menos de 3 ácinos pancreáticos se definió como pequeño; en cambio, un islote con un tamaño igual o mayor a 3 ácinos pancreáticos se consideró grande. Para llevar a cabo el cálculo del área insular, se asignaron a los islotes pequeños y grandes valores de 1 y 3, respectivamente. Utilizando una escala lineal calibrada (Shimadzu^{R}) colocada en la lente de un microscopio (400x), se descubrió que los islotes pequeños tenían un diámetro máximo de 35 líneas (118,3 \mum) y los islotes grandes un diámetro máximo de 36 líneas (121,7 \mum). Dicho de otro modo, 120 \mum establecía el límite entre los islotes pequeños y grandes.

Tal como se observa la figura 3, los islotes pequeños tenían un diámetro < 3 ácinos (< 120 \mum), mientras que los grandes tenían un diámetro => 3 ácinos (> 120 \mum).

Las muestras histológicas analizadas comprendían únicamente parénquima pancreático.

Resultados

La tabla 3 muestra los niveles de glucosa en ayuno (G0) y 120 minutos tras una sobredosis oral de glucosa (G120), el peso (w), los triglicéridos (TG) y el colesterol (Col) de ratas beta macho (diabéticas) a los 4, 6, 8 y 12 meses. Al grupo A se le inoculó G. bronchialis (Gb) a los 120, 150 y 180 días; al grupo B se le inoculó T. inchonensis (Ti) a los 120, 150 y 180 días; al grupo C se le inoculó G. bronchialis (Gb) a los 7, 8 y 9 meses y el grupo D es el grupo de control. Los datos son valores promedio \pm SD.

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(Tabla pasa a página siguiente)

3

En línea con los estudios de laboratorio, los animales a los que se administró Gb o Ti tendían a mostrar islotes más grandes en comparación con el grupo de control en los resultados microscópicos.

Todas las publicaciones mencionadas en la descripción anterior se incorporan a la presente memoria como referencia. Diversas modificaciones y variaciones de los procedimientos y el sistema descritos en la presente invención serán evidentes para los expertos en la materia sin apartarse del alcance y el espíritu de la presente invención. Aunque la presente invención se ha descrito haciendo referencia a las formas de realización específicas preferidas, debe apreciarse que la invención tal como se reivindica no se debe limitar a dichas formas de realización específicas. De hecho, diversas modificaciones de los modos descritos de poner en práctica la invención que resultan evidentes para los expertos en bioquímica y biotecnología, o campos relacionados, están comprendidos en el del alcance de las reivindicaciones siguientes.

Claims (14)

1. Utilización de una composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos en el orden de los Actinomycetales en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la diabetes de tipo II y/o la obesidad y/o uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II.

2. Composición que comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos en el orden de los Actinomycetales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la diabetes de tipo II y/o la obesidad y/o uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II.

3. Composición o utilización según la reivindicación 1 ó 2, en la que dichas bacterias son bacterias que contienen ácido micólico.

4. Composición o utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dichas bacterias se seleccionan de entre uno o más de los géneros siguientes: Gordonia, Rhodococcus, Tsukamurella, Nocardia, Dietzia y Mycobacterium.

5. Composición o utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dichas bacterias se seleccionan de entre una o más de las especies siguientes: Gordonia bronchialis, Rhodococcus coprophilus, Tsukamurella inchonensis, Tsukamurella paurometabola, G. amarae, G. sputi, G. terrae, Nocardia asteroides, N. brasiliensis, Dietzia maris, Rhodococcus ruber, R. rhodnii, R. coprophilus, R. opacus, R. erythopolis, Mycobacterium vaccae and M. obuense.

6. Composición o utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que dichas bacterias son del género Gordonia.

7. Composición o utilización según la reivindicación 6, en la que dichas bacterias son de la especie Gordonia bronchialis.

8. Composición o utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que dichas bacterias son del género Rhodococcus.

9. Composición o utilización según la reivindicación 9, en la que dichas bacterias son de la especie Rhodococcus coprophilus.

10. Composición o utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que dichas bacterias son del género Tsukamurella.

11. Composición o utilización según la reivindicación 10, en la que dichas bacterias son de la especie Tsukamurella inchonensis.

12. Paquete farmacéutico para su utilización en el tratamiento de la diabetes de tipo II y/o la obesidad, en el que, por lo menos, un compartimento comprende células enteras de bacterias de un género de organismos aeróbicos en el orden de los Actinomycetales.

13. Paquete farmacéutico según la reivindicación 12, en el que dicho paquete comprende una etiqueta que indica que resulta apropiado para su utilización en la prevención o el tratamiento de la diabetes de tipo II.

14. Paquete farmacéutico según la reivindicación 12 ó 13, en el que dicho paquete comprende una etiqueta que indica que resulta apropiado para su utilización en la prevención o el tratamiento de uno o más de entre resistencia a la insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, deficiencia de insulina cuando está asociada a la diabetes de tipo II, hiperglucemia cuando está asociada a la diabetes de tipo II y síndrome metabólico cuando está asociado a la diabetes de tipo II.