ES2343217T3 - Cepa de brevibacillus laterosporus, composiciones que contienen la misma y procedimiento para el control biologico de dipteros. - Google Patents
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Abstract
Cepa bacteriana de Brevibacillus laterosporus depositada con el n.º NCIMB 41419 en NCIMB Ltd. Aberdeen, UK, para utilizar en el control biológico de insectos.
Description
Cepa de Brevibacillus laterosporus,
composiciones que contienen la misma y procedimiento para el control
biológico de dípteros.
La presente invención se refiere a una nueva
cepa bacteriana utilizada en el control biológico de insectos,
especialmente dípteros.
La Musca domestica es un insecto común de
importancia veterinaria y médica en todo el mundo. Su nocividad se
debe tanto a las molestias que provocan a los seres humanos y a los
animales, con el impacto que supone en la producción zootécnica,
como al riesgo de transmisión de diversos microorganismos que pueden
provocar enteropatías.
Los niveles favorables de temperatura y humedad
durante las estaciones de primavera y verano, y la abundancia de
sustratos para el desarrollo y proliferación de fases jóvenes en
entornos zootécnicos y vertederos, provocan un crecimiento
exponencial de la densidad de la población de moscas, por lo que se
requiere intervención y control.
Las medidas habituales de control se basan en la
utilización de insecticidas químicos con consecuencias negativas
inevitables en lo que se refiere al impacto ambiental. Los riesgos
para el medio ambiente y la salud humana, junto con los fenómenos
de la muy conocida resistencia a los insecticidas de dicho insecto,
apoyan la introducción de medidas de control ecológicas en el
contexto de los programas integrados de control, centrándose
especialmente en las medidas biológicas.
La introducción de formulaciones que contienen
cepas bacterianas efectivas contra la Musca domestica ha
constituido uno de los objetivos que han perseguido diversos
investigadores, considerando que se pudieron obtener unos
resultados positivos similares en el control de otros insectos
nocivos con la utilización de fórmulas comerciales basadas en
bacterias entomopatógenas, especialmente cepas específicas de
Bacillus thuringiensis (el principal insecticida biológico
del mercado).
El Brevibacillus laterosporus es una
bacteria aeróbica caracterizada por la producción de un cuerpo
paraesporal laminar en forma de canoa, que se adhiere fuertemente a
la pared de la espora. Ésta es una cepa bacteriana que se aisló
inicialmente en agua (Laubach, 1916) y ya se propuso como agente
entomopatógeno potencial a principios del siglo XX al observarse
que se podía aislar a partir de abejas enfermas (McCray, 1917).
Sólo recientemente se han demostrado sus
propiedades insecticidas contra larvas de mosquito (Culex
quinquefasciatus y Aedes aegypti) y contra larvas de
Simulium vittatum (Favret & Yousten, 1985; Rivers et
al., 1991), coleópteros, nemátodos, moluscos (Singer, 1996) y
lepidópteros (Oliveira et al., 2004). Además, algunas cepas
que producen unas inclusiones paraesporales similares a las
producidas por el Bacillus thuringiensis (Smirnova et
al., 1996) resultaron ser especialmente tóxicas contra larvas
de mosquitos (Aedes aegypti, Anopheles stephensi y Culex
pipiens) (Orlava et al., 1998).
Ruiu et al., 2006, describen una cepa de
la que se ha demostrado que afectan a las larvas y a los adultos de
Musca domestica, produciendo unos efectos letales y
subletales. Sin embargo, dicha cepa presenta un nivel inferior de
toxicidad en comparación con las que se pueden obtener con la cepa
UNISS18 objetivo de la presente invención.
La presente invención se refiere a una nueva
cepa bacteriana que pertenece al género Brevibacillus
laterosporus depositada con el n.º NCIMB 41419 en NCIMB Ltd.
Aberdeen, Reino Unido y a sus derivados obtenidos mediante la
mutación o transformación genética o mediante el crecimiento en unas
condiciones selectivas.
Los productos obtenidos mediante la extracción,
fraccionamiento subcelular y/o lisis de cultivos que contienen esta
bacteria se consideran también como derivados del Brevibacillus
laterosporus.
Según un aspecto principal de la presente
invención, dicha bacteria y sus derivados con actividad insecticida
constituyen el principio activo de composiciones y cebos
alimenticios utilizados para el control biológico de dípteros.
Según un aspecto adicional, la presente
invención se refiere a un método de control biológico de insectos
que pertenecen al orden de los dípteros caracterizado porque utiliza
el microorganismo según la presente invención o sus derivados y/o
composiciones según la presente invención o cebos alimenticios.
El principio activo presenta actividad contra
nematóceros y braquíceros (moscas, mosquitos, tábanos y
quironómidos) y especialmente contra la especie Musca
domestica.
El presente estudio se refiere al aislamiento a
partir de muestras de suelo de la Cerdeña central (Italia) de una
nueva cepa bacteriana de Brevibacillus laterosporus
depositada el 28 de julio de 2006 con el n.º NCIMB 41419 (NCIMB
Ltd. Aberdeen, Reino Unido) denominado asimismo UNISS18.
Junto con el presente descubrimiento, los
presentes inventores han desarrollados asimismo un método para el
control biológico y especialmente para el control microbiológico de
insectos que pertenecen a los dípteros, especialmente la Musca
domestica, utilizando unas formulaciones que contienen la nueva
cepa bacteriana y/o sus derivados.
El término derivado se refiere a esporas y
esporangios obtenidos a partir de la propia UNISS18 utilizando unos
procedimientos muy conocidos de cultivo y aislamiento, a partir de
cepas obtenidas mediante el crecimiento en unas condiciones
mutágenas o selectivas, así como a partir de cepas obtenidas
mediante la transformación genética con secuencias de ADN de origen
exógeno diverso o endógeno. Las fracciones subcelulares obtenidas
mediante la separación y/o lisis celular, tal como por ejemplo
inclusiones paraesporales, siempre que se conserven las propiedades
características de la cepa original (actividad insecticida), se
consideran asimismo como derivados de la
cepa.
cepa.
Los extractos celulares de cultivos bacterianos
total o parcialmente lisados, cepas liofilizadas o fracciones
obtenidas con enzimas o mediante un tratamiento a presión elevada o
con un tratamiento suave con detergentes, ácidos o bases se
consideran asimismo como derivados de la cepa.
Las propiedades como insecticida del
Brevibacillus laterosporus se han demostrado especialmente
contra larvas de mosquitos (Culex quinquefasciatus y
Aedes aegypti), larvas de Simulium vittatum,
coleópteros, nemátodos, moluscos y lepidópteros. Las inclusiones
paraesporales especialmente activas contra mosquitos se producen en
unas condiciones determinadas.
La actividad insecticida se puede observar
asimismo sin inclusiones.
Los mismos solicitantes han demostrado por
primera vez los efectos letales y subletales de cepas específicas
de Brevibacillus laterosporus contra la Musca
domestica mediante las pruebas de laboratorio publicadas por
Ruiu et al., 2006.
Sin embargo, cada uno de los distintos
componentes (esporas, esporangios, células vegetativas) de la
cepa
UNISS18, objetivo de la presente invención, presenta una actividad superior en comparación con otras cepas conocidas. Dicha actividad se determina como la capacidad para matar moscas, haciendo especial referencia al período de acción que, en condiciones similares, es más breve que el período requerido por la cepa descrita por Ruiu et al. 2006. Los datos comparativos de la actividad se presentan en la parte experimental, ejemplo 2.
UNISS18, objetivo de la presente invención, presenta una actividad superior en comparación con otras cepas conocidas. Dicha actividad se determina como la capacidad para matar moscas, haciendo especial referencia al período de acción que, en condiciones similares, es más breve que el período requerido por la cepa descrita por Ruiu et al. 2006. Los datos comparativos de la actividad se presentan en la parte experimental, ejemplo 2.
En particular, se ha demostrado que la cepa de
Brevibacillus laterosporus NCIMB 41419 es más efectiva para
el control de dípteros, especialmente de la especie Musca
domestica, en entornos zootécnicos. Aparte de las moscas,
presenta una actividad superior a cepas muy conocidas también en
otros tipos de dípteros, tales como los braquíceros y nematóceros,
tal como por ejemplo mosquitos (mosquito común: Culex
pipiens, anófeles: Anopheles maculipennis, mosquito
tigre: Aedes albopictus), tábanos y quironómidos.
Dicho amplio espectro de actividad, junto con la
falta de patogenicidad en seres humanos (Brevibacillus
laterosporus se clasifica como bacteria no patógena para los
seres humanos), hace que la cepa UNISS18 y sus derivados resulten
particularmente apropiados para el control biológico de
insectos.
El proceso de preparación de la
composición/formulación de insecticida comprende sustancialmente las
etapas siguientes:
a) Inocular la bacteria en un medio de cultivo y
amplificación en un medio de cultivo enriquecido (siendo un medio
de cultivo enriquecido un medio que contiene asimismo aminoácidos
y/o proteínas, además de sales y una fuente de carbono) según
procedimientos muy conocidos en la técnica, tal como, por ejemplo,
en un caldo L-B, a una temperatura comprendida
entre 20ºC. y 40ºC., comprendida preferentemente entre 25ºC. y
35ºC., aún más preferentemente entre 28ºC. y 32ºC.; se pueden
obtener unos resultados similares utilizando distintos medios de
cultivo líquidos o sólidos según procedimientos muy conocidos;
b) hacer crecer las bacterias preferentemente
hasta la etapa de esporulación; dicho crecimiento es habitualmente
espontáneo tras un período de por lo menos 24-48
horas de incubación en medio de cultivo enriquecido al intervalo
preferido de temperatura; se pueden obtener unos resultados
similares utilizando distintos medios de cultivo líquidos o sólidos
según procedimientos muy conocidos en la técnica; la esporulación se
puede observar directamente con un microscopio óptico de contraste
de fases;
c) proceder a una lisis y/o fraccionamiento
celular opcionales;
\newpage
d) recoger esporas, células vegetativas de
esporangios o sus etapas intermedias, por ejemplo, por
centrifugación, preferentemente con lavados secuenciales con agua
destilada estéril, tal como resulta muy conocido en la técnica, a
fin de retirar los componentes solubles (véase el ejemplo 1);
e) volver a suspender el sedimento de esporas,
células vegetativas o esporangios, o sus preparaciones intermedias
tal como se han obtenido en la etapa d), en agua o en una disolución
amortiguadora acuosa apta para obtener una suspensión sin
contaminantes y que presente actividad insecticida.
En general, el producto obtenido de este modo
correspondiente al principio activo se formula adecuadamente en
función de la utilización pretendida, mezclando directamente el
sedimento y/o suspensión con los excipientes y diluentes
apropiados.
Tal como se ha mencionado anteriormente, la
actividad insecticida se encuentra asimismo presente en suspensiones
que contengan células vegetativas o esporangios: de hecho, se
pueden obtener unos resultados similares utilizando bacterias en
etapas distintas de la etapa de espora (esporangios, células
vegetativas) o etapas intermedias.
Cada etapa del desarrollo o crecimiento se puede
obtener con un cultivo bacteriano sincronizado que se puede
conseguir tal como resulta muy conocido en la técnica. Se detiene el
cultivo y se recogen las bacterias tanto cuando se encuentran
simultáneamente en la fase vegetativa, como cuando hasta el 100% de
bacterias se encuentran en forma esporulada o cuando las bacterias
se encuentran en forma de esporangios o cuando se encuentran en las
diversas fases intermedias. Por cultivo sincronizado se entiende un
cultivo en el que las bacterias de la población bacteriana se
someten a reproducción simultánea, por lo tanto, en un momento
determinado, las bacterias se encuentran en la misma fase de
desarrollo o crecimiento (células vegetativas, esporangios, esporas,
diversas fases intermedias).
Las esporas, esporangios y células vegetativas,
o sus mezclas que contienen principios activos, se pueden tratar
y/o fraccionar adicionalmente antes de mezclarlos en formulaciones.
Dichos tratamientos o fraccionamientos comprenden, por ejemplo la
lisis y el fraccionamiento subcelular, la extracción parcial por
procedimientos fisicoquímicos (por ejemplo centrifugación) o
bioquímicos (por ejemplo enzimáticos). Las fracciones subcelulares
obtenidas utilizando la cepa UNISS18 y que presentan actividad
insecticida se incluyen asimismo en la presente invención.
Las formulaciones pueden ser de diversos tipos,
en función de la utilización pretendida: pueden ser cebos
alimenticios o composiciones para el tratamiento de prados o para el
tratamiento, por ejemplo, mediante irrigación o pulverización, de
áreas pequeñas o amplias, por ejemplo de áreas zootécnicas.
Se presentan preferentemente, pero no
necesariamente, en forma de pasta fluida que se ha demostrado que
resulta efectiva para el control de la Musca domestica tanto
en la etapa previa a la de imago y en la etapa adulta, en entornos
zootécnicos. Se puede obtener una efectividad similar en otros
ambientes poblados por los dípteros mencionados anteriormente.
Otros tipos de formulaciones comprenden la cepa
UNISS18 (o sus derivados) como principio activo solo o combinado
con uno o diversos principios activos distintos (por ejemplo
fertilizantes, sustancias que liberan micronutrientes, insecticidas
químicos o biológicos, fungicidas, nematodicidas, etc.) a unas
concentraciones comprendidas entre el 0,01 y el 99,9%. Tal como
resulta muy conocido en la técnica, se preparan las composiciones
con excipientes líquidos o sólidos, o incluso con excipientes en
forma de polvo, mezclando homogéneamente el principio activo con
disolventes, tensioactivos o vehículos sólidos o pulverulentos.
Según la presente invención, se entiende por
principio activo la cepa Brevibacillus laterosporus UNISS18
depositada con el número NCIMB 41419 y sus derivados definidos
anteriormente.
El efecto insecticida en los adultos se puede
alcanzar mediante la utilización de cebos alimenticios que
incorporen la formulación que contiene Brevibacillus
laterosporus, a fin de obtener una concentración final de por lo
menos 1 x 10^{5} esporas y/o esporangios y/o células
vegetativas/g, más preferentemente comprendida entre 1 x 10^{6} y
1 x 10^{12} o más preferentemente comprendida entre 1 x 10^{7} y
1 x 10^{1} esporas y/o esporangios y/o células vegetativas/g,
aunque la mortalidad de larvas o insectos adultos alcance el 100% en
24 y 48 horas, respectivamente, ya a una concentración de 1 x
10^{9} esporas y/o esporangios y/o células vegetativas/g. Los
cebos alimenticios se formulan preferentemente de tal modo que
contengan, además de Brevibacillus laterosporus, cualquier
tipo de agente que atraiga los insectos, por ejemplo azúcar,
sustancias de naturaleza proteica, sustancias con nitrógeno,
feromonas.
Por lo tanto el principio activo contenido en
las formulaciones de insecticida y en los cebos, en forma de
esporas o esporangios o de sedimento bacteriano o sus derivados, se
encuentra generalmente presente en el mismo intervalo de
concentración definido anteriormente: se utiliza una concentración
equivalente en el caso de los derivados u otros componentes.
Dentro de los intervalos de concentración
mencionados anteriormente relacionados con la actividad insecticida,
unas concentraciones más elevadas permiten un efecto letal más
inmediato, mientras que unas concentraciones inferiores tienen como
resultado una acción más lenta.
\newpage
Diversos ejemplos de formulación para las
preparaciones de la cepa bacteriana UNISS18 y sus derivados según
la presente invención resultan muy conocidos para los expertos en la
materia y comprenden:
- suspensiones acuosas de cápsulas
(microcápsulas): esta formulación aplicada a algunos insecticidas
hace posible la seguridad tanto toxicológica como medioambiental.
El principio activo insecticida se encapsula en microsferas de
material atóxico e inerte, por ejemplo nailon, en suspensión
acuosa;
- formulaciones microgranulares: dicha
formulación se denomina asimismo microgránulos hidrodispersables, se
produce mediante la aglomeración del principio activo sólido con un
sistema que actúa de sistema humectante/disper-
sante;
sante;
- suspensiones acuosas concentradas (SC): dichas
formulaciones se denominan asimismo: pasta fluida, pasta coloidal
(fluida), pasta líquida. El principio activo sólido e insoluble se
microniza finamente en suspensión acuosa.
- bioencapsulación, con respecto a Bacillus
thuringiensis. Se encapsula el principio activo en células
debilitadas de otro microorganismo, por ejemplo levaduras o
bacterias, por ejemplo, Pseudomonas fluorescens. El
procedimiento de bioingeniería de la encapsulación, denominado Cell
Cap, permite la protección del principio activo o de las
endotoxinas de la acción destructora de la luz solar, el calor, el
agua. Dicha protección biológica proporciona a la fórmula una mayor
duración, una eficacia más estable y un período de almacenamiento
más prolongado;
- bolsas hidrosolubles, que consisten en
recipientes realizados con una capa de plástico fino rápidamente
hidrosoluble que aísla completamente el principio activo del entorno
y del agricultor.
Según un aspecto adicional, la presente
invención se refiere a la utilización de la cepa UNISS18 para el
control de dípteros, braquíceros y nematóceros, más específicamente
de moscas, mosquitos (mosquito común: Culex pipiens,
anófeles: Anopheles maculipennis, mosquito tigre: Aedes
albopictus) de tábanos y quironómidos.
El control de las etapas previas a imago se
alcanza tratando el sustrato orgánico en el que se desarrollan. El
efecto insecticida es independiente del modo de incorporación de la
formulación que contiene Brevibacillus laterosporus en dicho
sustrato de desarrollo. De este modo se obtiene un efecto
significativo que depende de la dosis y la concentración en la
reducción de la capacidad de desarrollo de las larvas, así como un
aumento general de la mortalidad en las etapas previas a imago.
Estas técnicas comprenden asimismo la utilización de una cepa
formulada adecuadamente o de sus derivados, de aditivos y/o
complementos para alimentar animales en la producción zootécnica
con el resultado de una liberación fecal de residuos
bacterianos.
Los trabajos de laboratorio con experimentos
sobre la toxicidad, tras la ingestión de diversas fracciones
extraídas a partir de la bacteria, demuestran que la toxicidad es un
proceso en el que intervienen toxinas; por lo tanto, la presente
invención comprende todas las formulaciones que contienen la nueva
cepa UNISS18 de Brevibacillus laterosporus en forma de
células vegetativas y/o esporangios y/o esporas y/o toxinas
extraídas de la misma y/o derivados tal como se han definido
anteriormente, lo que produce un efecto insecticida en las larvas
y/o adultos de Musca domestica en ambientes poblados con
dicho insecto.
Por lo tanto, según un aspecto adicional, el
método de la presente invención se refiere asimismo a la prevención
de infestaciones por dípteros.
La cepa UNISS18 de Brevibacillus
laterosporus n.º NCIMB 41419 y sus derivados se pueden almacenar
en forma liofilizada o congelada en presencia de glicerol por lo
menos a 20ºC., o a temperatura ambiente en cultivo por picadura o
en placa de agar. Los métodos de almacenamiento, mantenimiento y
crecimiento bacteriano resultan conocidos en la técnica y se
describen en: MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation,
cultivation, identification, maintenance of medical bacteria
("Medios de aislamiento, cultivo, identificación, mantenimiento de
bacterias de interés en medicina"), Williams & Wilkins,
Baltimore, Md. O también en: Ted R. Johnson, Christine L. Case,
James G. Cappuccino, Natalie Sherman, Virginia Schurman, Janet
Savage, 1999. Biology 201: Microbiology Laboratory
Manual ("Manual del laboratorio de microbiología"), edición
de Addison-Wesley.
Algunas de las formas de realización de la
presente invención, que se ilustran a continuación, representan
únicamente ejemplos y, por lo tanto, no son exhaustivas ni limitan
lo que se ha descrito anteriormente.
Se aisló la cepa UNISS18 de Brevibacillus
laterosporus a partir de una muestra de suelo recogida en la
Cerdeña central (Italia). Se resuspendió 1 g de suelo en 10 ml de
disolución amortiguadora de fosfato 50 mM a un pH de 7,0 y se agitó
enérgicamente durante 20 minutos utilizando un agitador mecánico. La
suspensión obtenida de este modo se calentó hasta 70ºC durante 30
minutos a fin de debilitar las formas bacterianas vegetativas. Se
utilizó la suspensión para inocular placas de Petri que contenían
agar nutritivo o agar CCY. Tras 2 días de incubación a 30ºC, se
analizaron las colonias bacterianas simples mediante microscopía
óptica y electrónica. Las colonias simples de la cepa UNISS18 de
Brevibacillus laterosporus se trasladaron a unas nuevas
placas de Petri que contenían agar CCY y se incubaron hasta
alcanzar una esporulación completa (2-3 días). Se
volvieron a suspender las colonias simples con actividad
insecticida en 1 ml de caldo nutritivo y 15% de glicerol y se
almacenaron a 80ºC.
Se cultivó la cepa UNISS18 de Brevibacillus
laterosporus en un medio basado en el caldo
Luria-Bertani (LB) a 30ºC con agitación a 200 rpm.
Se recogió el cultivo por centrifugación (10.000 g) únicamente una
vez se hubo completado la esporulación de la población entera, lo
que se verificó mediante observación directa con microscopía óptica
de contraste de fases. Tras 3 ciclos consecutivos de
centrifugación-resuspensión (lavado) en agua
destilada estéril, el sedimento se volvió a suspender en agua hasta
una concentración de 2 x 10^{9} esporas/g.
La suspensión obtenida de este modo se
administró a moscas incorporándola en la alimentación hasta una
concentración final de 1 x 10^{9} (adultos) y 0,8 x 10^{9}
(larvas) esporas/g. En estas condiciones, se alcanzó un 100% de
mortalidad en las 24 ó 48 horas posteriores, en el caso de las
larvas y los adultos, respectivamente.
Se obtuvieron los mismos resultados utilizando
suspensiones purificadas de esporas, esporangios o células
vegetativas o mezclas de esporas y/o esporangios y/o células
vegetativas de la cepa UNISS18 de Brevibacillus
laterosporus.
Se pueden alcanzar las tres fases de crecimiento
mencionadas anteriormente, tal como resulta muy conocido en la
técnica, sincronizando el cultivo bacteriano en un medio de cultivo
líquido y recogiendo posteriormente el cultivo bacteriano en el
punto en que las bacterias se encuentran en la fase vegetativa o en
forma de esporangios o esporas.
Se pueden obtener unos resultados similares con
cultivos bacterianos no sincronizados que contengan mezclas de las
diversas etapas del crecimiento: células vegetativas y/o esporangios
y/o esporas.
Se pueden obtener unos resultados similares
utilizando bacterias en etapas intermedias entre las etapas
mencionadas anteriormente (esporas, esporangios, células
vegetativas).
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento y las concentraciones
del ejemplo 1, se administraron a moscas adultas unas preparaciones
de suspensiones de las cepas de Brevibacillus laterosporus
ATCC 9141, ATCC 6456 y ATCC 64 proporcionadas por el Bacillus
Genetic Stock Center, conocidas ya en parte por su toxicidad en
otros dípteros (Rivers et al., 1991), y con suspensiones de
la cepa utilizada por Ruiu et al. (2006), para comparar con
la cepa UNISS18 NCIMB 41419 según la presente invención. Los
valores de mortalidad obtenidos tras 72 h fueron de un 20% para la
cepa ATCC 9141, un 33% para la cepa ATCC 6456, un 13% para la cepa
ATCC 64, un 50% para la cepa la cepa utilizada por Ruiu et
al. (2006) y un 100% para la cepa UNISS18.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó en el laboratorio un cebo alimenticio
basado en una fruta confitada que contenía sacarosa y la cepa
UNISS18 de Brevibacillus laterosporus, a una concentración de
2 x 10^{8} esporas/g, y se probó con adultos de Musca
domestica, obteniéndose un 100% de mortalidad. Cuando se
administró el mismo cebo en una compañía zootécnica, se consiguió
contener satisfactoriamente la población de moscas hasta unos
niveles comparables con los detectados en compañías similares que
se sometían a tratamientos comunes con pesticidas químicos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incorporó una formulación fluida basada en un
cultivo esporulado de la cepa UNISS18 de Brevibacillus
laterosporus a una concentración de 1 x 10^{8} esporas/g en
muestras de abono que constituían el sustrato para el desarrollo de
fases jóvenes de Musca domestica. Dicho tratamiento provocó
un aumento en la mortalidad de las fases jóvenes que alcanzó el
60%, en comparación con otras muestras utilizadas como control
negativo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizaron en compañías zootécnicas unos
tratamientos del abono similares a los descritos en el ejemplo 4.
Al utilizar la formulación mencionada en el ejemplo 4, se alcanzó la
supresión del desarrollo de las fases jóvenes mediante unos
tratamientos con una dosis de 2 l/m^{2} de prado, que es el área
exterior a los establos en los que se desarrollan las etapas de las
moscas previas a la de imago (este área se encuentra poblada por
adultos de Musca domestica a fin de alimentarse de los
animales o del abono y de poner huevos).
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Claims (22)
1. Cepa bacteriana de Brevibacillus
laterosporus depositada con el n.º NCIMB 41419 en NCIMB Ltd.
Aberdeen, UK, para utilizar en el control biológico de
insectos.
2. Cepa bacteriana de Brevibacillus
laterosporus depositada con el n.º NCIMB 41419 según la
reivindicación 1 transformada genéticamente y que conserva su
actividad insecticida.
3. Composición insecticida que comprende como
principio activo, el Brevibacillus laterosporus según la
reivindicación 1 o su derivado transformado genéticamente según la
reivindicación 2.
4. Composición según la reivindicación 3 que
contiene una cantidad de bacilos/esporas de por lo menos 1 x
10^{5} esporas y/o esporangios y/o células vegetativas/g.
5. Composición según la reivindicación 4 en la
que dicha concentración se encuentra comprendida entre 1 x 10^{6}
y 1 x 10^{12} esporas/g (adultos) y entre 1 x 10^{6} y 1 x
10^{12} esporas/g (larvas) y/o esporangios y/o células
vegetativas/g.
6. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 3 a 5 en la que el principio activo se combina con
uno o más principios activos adicionales y/o con excipientes,
diluentes o un disolvente líquido, sólido o polvo.
7. Composición según la reivindicación 6 en
pasta fluida.
8. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 3 a 7 para utilizar en la preparación de
composiciones alimenticias para utilización zootécnica.
9. Composición según la reivindicación 8, que
comprende además una sustancia que atrae los insectos.
10. Composición según la reivindicación 9 en la
que dicha sustancia que atrae los insectos se selecciona de entre
el grupo de: azúcar, sustancias de naturaleza proteica, sustancias
con nitrógeno y feromonas.
11. Cebo alimenticio que comprende como
principio activo el Brevibacillus laterosporus según la
reivindicación 1, el derivado transformado genéticamente según la
reivindicación 2 o la composición según cualquiera de las
reivindicaciones 7 a 10.
12. Proceso para la preparación de una
suspensión concentrada de Brevibacillus laterosporus según la
reivindicación 1 que comprende las etapas siguientes:
a) inocular el cultivo de Brevibacillus
laterosporus n.º NCIMB 41419 en un medio enriquecido;
b) hacer crecer la bacteria en cultivo durante
por lo menos 3 horas a una temperatura comprendida entre 20ºC y
40ºC;
c) lisis y/o fraccionamiento celular
opcionales;
d) recoger la siembra de la fracción de células,
esporas o esporangios o de la fracción subcelular, y lavados
apropiados;
e) resuspensión en una disolución amortiguadora
apropiada.
13. Proceso según la reivindicación 12 en el que
la etapa b) se realiza durante por lo menos 20 horas a una
temperatura comprendida entre 25ºC y 35ºC.
14. Proceso según cualquiera de las
reivindicaciones 12 a 13 que comprende además una etapa de
formulación de la suspensión concentrada de Brevibacillus
laterosporus en cebos alimenticios, composiciones insecticidas
o con composiciones alimenticias.
15. Utilización del Brevibacillus
laterosporus según la reivindicación 1 o de su derivado
transformado genéticamente según la reivindicación 2 para la
preparación de cebos y/o composiciones y/o composiciones
alimenticias con actividad insecticida.
16. Procedimiento para el control biológico de
insectos que pertenecen al orden de los dípteros,
caracterizado porque se utiliza el microorganismo según la
reivindicación 1, su derivado transformado genéticamente según la
reivindicación 2, o la composición según cualquiera de las
reivindicaciones 3 a 10, o el cebo según la reivindicación 11.
17. Procedimiento según la reivindicación 16 en
el que dichos dípteros son braquíceros o nematóceros.
18. Procedimiento según la reivindicación 16 en
el que dichos dípteros son braquíceros, preferentemente Musca
domestica.
19. Procedimiento según la reivindicación 17 en
el que dichos dípteros son nematóceros y particularmente mosquitos:
mosquito común (Culex pipiens), anófeles (Anopheles
maculipennis), mosquito tigre (Aedes albopictus).
20. Procedimiento según la reivindicación 17 en
el que dichos dípteros son tábanos (Tabanus bovinus) o
quironómidos.
21. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 20 para el tratamiento de áreas
zootécnicas.
22. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 20 para la prevención en el terreno de
infestaciones por dípteros caracterizado porque se utiliza
el microorganismo según la reivindicación 1, el derivado
transformado genéticamente según la reivindicación 2, la
composición según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 10, y/o el
cebo según la reivindicación 11.
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