ES2344127T3 - Efectos biologicos mejorados de composiciones que comprenden acido rosmarinico. - Google Patents
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Abstract
Composición que comprende ácido rosmarínico y/o derivados del mismo, en combinación con un microorganismo que contiene o que produce un enzima hidrolítico, en la que el microorganismo es un probiótico.
Description
Efectos biológicos mejorados de composiciones
que comprenden ácido rosmarínico.
La presente invención se refiere composiciones
que comprenden ácido rosmarínico o extractos que contienen ácido
rosmarínico y a la utilización de un enzima hidrolítico o de
microorganismos que contienen o que son capaces de producir enzimas
hidrolíticos en estas composiciones. Asimismo, la invención se
refiere a métodos para mejorar los efectos biológicos de
composiciones que contienen ácido rosmarínico y derivados del
mismo.
El ácido rosmarínico es un polifenol presente en
varias fuentes naturales, incluyendo el romero, el orégano, la
mejorana, el tomillo, la menta, la consuelda, el perejil, el
bálsamo, la salvia, el hisopo, la albahaca, la lavanda, etc. Se ha
informado que estas plantas son remedios herbarios que presentan
propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, anticarcinogénicas y
hepatoprotectoras. Estos efectos biológicos se han relacionado con
la presencia de polifenoles, notablemente ácido rosmarínico,
flavonas y flavanoles que han sido identificados, por ejemplo, en
las hojas del romero.
No existe modo descrito en la técnica para
mejorar los efectos biológicos de las composiciones que comprenden
ácido rosmarínico o extractos vegetales que comprenden dicho ácido
rosmarínico.
Al-Sereiti M.R. et al.,
"Pharmacology of rosemary (Rosmarinus officinalis linn) and
its therapeutic potentials", Indian Journal of Experimental
Biology 37, febrero de 1999 (1999-02) informan de la
utilización conocida de extractos de romero (Rosmarinus
officinalis) en alimentos, cosméticos, así como en medicina
popular, incluyendo su utilización para tratar eccemas del cuero
cabelludo, forúnculos y heridas, indicando además que los
constituyentes más importantes del extracto de romero son el ácido
cafeico y derivados del mismo, tales como el ácido ros-
marínico.
marínico.
La patente US nº 2004/037901 A1 da a conocer la
utilización de un extracto acuoso de una planta del género
Rosmarinus, en particular Rosmarinus officinalis, para
el tratamiento de los efectos adversos del envejecimiento de la
piel mediante la estimulación de la síntesis del colágeno y mediante
la inhibición de la expresión de las proteasas de la matriz
extracelular, en particular las metaloproteinasas, incluyendo las
metaloproteinasas de tipo 1.
La base de datos WPI, Week 200419, Derwent
Publications Ltd., London, Reino Unido; AN
2004-199501 y KR 2003 082 764 A (SK CHEM CO LTD.),
23 de octubre de 2003, dan a conocer una composición para la
protección de la articulación (es decir, la protección articular),
comprendiendo dicha composición un extracto de Prunella
asiatica Nakai que contiene 2,0% en peso de ácido rosmarínico y
0,1% en peso de ácido cafeico como ingredientes activos.
Psotova et al., "Photoprotective
properties of Prunella vulgaris and rosmarinic acid on human
keratinocytes", Journal of Photochemistry and Photobiology B:
Biology, Elsevier Science S.A., Basel, CH, vol. 34, nº 3, 1 de
septiembre de 2006 (2006-09.01), páginas 167 a 174,
informan de los efectos fotoprotectores de un extracto
acuoso/etanólico de Prunella vulgaris y del ácido
rosmarínico, indicando el uso beneficioso potencial en las
preparaciones dermatológicas fotoprotectoras.
Wojciechowski H. et al., "Analysis of
the components of Lycopus europaeus L. in body fluids during
metabolism studies. Comparison of capillary electrophoresis and
high-performance liquid chromatography", Journal
of Chromatography A, Elsevier, Amsterdam, Países Bajos, vol. 717, nº
1, 24 de noviembre de 1995, informan del uso médico tradicional de
extractos de Lycopus europaeus L. (Lamiaceae) contra formas
leves de hipertiroidismo, indicando además que el ácido rosmarínico
y el ácido cafeico son algunos de los componentes principales de
dichos extractos.
La patente US nº 2005/03094 A1 da a conocer
composiciones para el tratamiento de enfermedades cardiacas,
comprendiendo dichas composiciones, entre otros, sal sódica de
ácido rosmarínico,
3,4-dihidroxifenil-lactato y ácido
salvianólico (A, B, C, D, E o F). El presente documento también da
a conocer composiciones para el propósito indicado, comprendiendo
dichas composiciones ácido rosmarínico o ácido salvianólico (C o D)
y Lactobacillus. Además, las composiciones dadas a conocer
en dicha patente pueden formularse en forma de pellet, píldora,
cápsula, gránulo, tableta, suspensión, inyección, jarabe, tinción,
polvos, té, solución tópica, nebulizado, supositorio, microcápsula
u otra forma farmacéuticamente aceptable.
La patente US nº 2004/009244 A1 da a conocer
composiciones farmacéuticas, cosméticas o alimentarias que
comprenden extracto de hoja de Melissa para la inhibición de
la actividad de metaloproteinasa y la utilización del mismo para el
tratamiento de una diversidad de enfermedades, incluyendo el
envejecimiento de la piel. Además, también se indica que los
extractos de Melissa contienen ácido cafeico y derivados del
mismo, siendo el ácido rosmarínico el componente más abundante del
extracto de la hoja.
La patente US nº 2006/172402 A1 enseña que la
hidrólisis de los ésteres del ácido cafeico (tales como el ácido
chicórico, el ácido rosmarínico y el ácido clorogénico) puede
conseguirse con calor, presión y una solución alcalina suave, o
enzimáticamente con esterasas, indicando además que las esterasas
adecuadas para catalizar la conversión de los ésteres de ácido
cafeico en ácido cafeico son conocidas de la técnica y se encuentran
presentes en plantas, animales y muchos microorganismos.
La patente WO nº 96/39859 A da a conocer un
método para la preparación de ácido cafeico y/o ácido quínico
mediante el tratamiento de material vegetal que contiene ácido
clorogénico con un enzima hidrolítico en un ambiente acuoso, dando
a conocer además una diversidad de enzimas derivados de
microorganismos que resultan adecuados para dicho fin.
De esta manera, sigue existiendo una necesidad
de mejorar los efectos biológicos de las composiciones que
comprenden ácido rosmarínico o de extractos vegetales que comprenden
dicho ácido rosmarínico y derivados del mismo.
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, dicho
objetivo se consigue mediante las características de las
reivindicaciones independientes. Las reivindicaciones dependientes
desarrollan adicionalmente la idea central de la invención.
De esta manera, en un primer aspecto, la
presente invención se refiere a una composición que comprende ácido
rosmarínico y/o derivados del mismo en combinación con un
microorganismo que contiene o que produce un enzima hidrolítico, en
el que el microorganismo es un probiótico.
En un segundo aspecto, la invención se refiere a
una composición que comprende ácido rosmarínico y/o derivados del
mismo en combinación con un producto de hidrólisis del mismo.
También es parte de la presente invención una
composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para
la utilización en la mejora o prevención de daños a la piel.
Además, la invención comprende el uso cosmético
de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a
11.
Se encuentra comprendida dentro de un aspecto
adicional de la invención la utilización de un enzima hidrolítico o
de un microorganismo que contiene o que produce dicho enzima en una
composición que comprende ácido rosmarínico y/o derivados del mismo
para la mejora del efecto biológico de dicha composición.
Además, la invención también proporciona un
método para la preparación de una composición que comprende ácido
rosmarínico y/o derivados del mismo, que presenta un efecto
biológico incrementado, que comprende las etapas siguientes:
a. proporcionar ácido rosmarínico y/o derivados
del mismo,
b. proporcionar un enzima hidrolítico o un
microorganismo que contiene o que produce dicho enzima, y
c. mezclar dicho ácido rosmarínico y/o derivados
del mismo y un enzima hidrolítico o un microorganismo que contiene
o que produce dicho enzima, con ingredientes adicionales para
producir dicha composición, de manera que la hidrólisis del ácido
rosmarínico se produce en la composición o in vivo.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se describe adicionalmente
a continuación haciendo referencia a algunas de sus realizaciones,
mostradas en los dibujos adjuntos, en los que:
- la fig. 1 ilustra la estructura molecular del
ácido rosmarínico,
- la fig. 2 ilustra la estructura molecular del
ácido cafeico,
- la fig. 3 ilustra la estructura molecular del
ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico,
- la fig. 4 es un gráfico que muestra la
influencia de la cantidad de enzima clorogenato esterasa sobre la
hidrólisis del ácido rosmarínico ((\ding{115}) 0,01 U/mg,
(\blacklozenge) 0,02 U/mg) y sobre la formación de ácido cafeico
((\Box) 0,01 U/mg, (\bullet) 0,02 U/mg),
- la fig. 5 es un gráfico que muestra la
influencia del pH sobre la formación del ácido cafeico a partir de
ácido rosmarínico utilizando el enzima clorogenato esterasa a pH 5,0
(\bullet), pH 6,0 (\Box), pH 7,0 (\ding{115}) y pH 8,0
(\blacklozenge),
- la fig. 6 es un gráfico que muestra el efecto
de la temperatura sobre la hidrólisis del ácido rosmarínico
(\Box) y sobre la formación del ácido cafeico (\bullet) a 30ºC,
40ºC y 50ºC utilizando 0,02 U de enzima por mg de ácido
rosmarínico,
- la fig. 7 es un gráfico que muestra la
influencia de la concentración de sustrato sobre la tasa de
hidrólisis del ácido rosmarínico y el rendimiento utilizando:
(\bullet) 1 mg, (\blacklozenge) 2 mg, (\Delta) 4 mg y
(\Box) 6 mg de ácido rosmarínico y 0,02 unidades de enzima a pH
6,6 y 40ºC,
- la fig. 8 es un gráfico que muestra el efecto
biológico mejorado de un extracto que contiene ácido rosmarínico
tras la hidrólisis (Naturex PE20 hidrolizado) en comparación con un
extracto que comprende ácido rosmarínico (Naturex PE20).
La presente invención se refiere a composiciones
que comprenden ácido rosmarínico y derivados del mismo. Las
composiciones pueden ser "composiciones alimentarias" o
"composiciones tópicas". La expresión "composiciones
alimentarias" se refiere a cualquier producto consumible que
puede utilizarse con fines nutricionales, farmacéuticos y/o
cosméticos. La expresión "composiciones tópicas" se refiere a
cualquier composiciones que puede aplicarse en la piel, pelaje,
uñas o cabello de un sujeto con fines farmacéuticos y/o cosméticos.
Preferentemente las composiciones son composiciones
alimentarias.
El ácido rosmarínico (fig. 1) y los derivados
del mismo se encuentran comúnmente en plantas tales como el romero,
el orégano, la mejorana, el tomillo, la menta, la consuelda, el
perejil, el bálsamo, la salvia, el hisopo, la albahaca, la lavanda,
la perilla, etc.
El término "derivados" referido al ácido
rosmarínico se refiere a cualquier compuesto que comprende por lo
menos un grupo ácido rosmarínico. Entre ellos se incluyen
oligómeros, polímeros y glucósidos del ácido rosmarínico, etc.
El ácido rosmarínico y los derivados del mismo
pueden proporcionarse en forma de compuestos puros u obtenerse a
partir de diversas hierbas, tales como la perilla (Perilla
frutescens L.), la salvia (Salvia officinalis L.), la
menta (Mentha arvense L.), la albahaca (Ocimum
basilicum L.), el tomillo (Thymus vulgaris L.), la
dulcamara china (Celastrus hindsii), etc. Preferentemente se
proporcionan a partir del romero (Rosmarinus officinalis
L.).
Además, la extracción de plantas que contienen
una fuente de ácido rosmarínico puede llevarse a cabo utilizando
métodos conocidos de la técnica. En efecto, la composición de la
presente invención preferentemente comprende extractos vegetales
que comprenden ácido rosmarínico y/o derivados del mismo.
Preferentemente los extractos se encuentran presentes en la
composición en una cantidad comprendida entre 0,01 g y 20 g en peso
seco.
De esta manera, la presente invención
proporciona una composición que comprende ácido rosmarínico y/o
derivados del mismo en combinación con un microorganismo que
contiene o que produce un enzima hidrolítico (por ejemplo esterasa)
capaz de hidrolizar el ácido rosmarínico o los derivados del
mismo.
Debido al efecto hidrolítico del enzima sobre el
ácido rosmarínico y/o sobre los derivados del mismo, la composición
puede comprender además los productos de hidrólisis del ácido
rosmarínico y/o de los derivados del mismo junto con dicho enzima.
Entre ellos pueden incluirse el ácido cafeico, el ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico, etc., y
las mezclas de los mismos.
Las composiciones de la presente invención
pueden ser composiciones secas, húmedas o semihúmedas. El término
"seca" se refiere a composiciones que presentan una actividad
acuosa inferior a 0,6. El término "semihúmeda" se refiere a
composiciones que presentan una actividad acuosa comprendida entre
0,6 y 0,9, y el término "húmeda" se refiere a composiciones
que presentan una actividad acuosa superior a 0,9.
Las composiciones pueden comprender portadores
alimentarios o farmacéuticos adecuados. Entre ellos se incluyen
leche, yogur, queso, leche fermentada, productos fermentados de base
láctea, helados, productos de base cereal fermentados, polvos de
base láctea, fórmulas para niños y bebés, alimentos para animales,
en particular para animales de compañía; tabletas o pastillas,
suspensiones bacterianas líquidas, suplementos orales en forma seca
y suplementos orales en forma líquida.
De esta manera, la composición puede ser una
composición alimentaria en forma de alimentos nutricionales
completos, bebidas, aguas minerales, sopas, suplementos
alimentarios y alimentos de sustitución, soluciones,
pulverizaciones, polvos, tabletas, cápsulas, barritas alimenticias,
suspensiones bacterianas líquidas, productos de confitería,
productos de base láctea o fermentados de base láctea, yogures,
polvos de base láctea, productos de nutrición entérica,
composiciones para niños y/o bebés, productos de base cereal o
productos fermentados de base cereal, productos basados en la soja,
helados, chocolate, café, productos "culinarios" tales como
mayonesa, salsa de tomate o aliños para ensaladas, alimentos para
animales, etc. De esta manera, la composición también puede estar
destinada a animales.
Para la ingestión, resultan posibles muchas
realizaciones de composiciones orales y en particular de suplementos
dietéticos. Se formulan mediante los métodos habituales para la
producción de tabletas recubiertas de azúcar, cápsulas de gelatina,
geles, emulsiones, tabletas, cápsulas o soluciones. En particular,
la composición que comprende ácido rosmarínico y/o un derivado del
mismo en combinación con un enzima hidrolítico o con un
microorganismo que contiene o que produce dicho enzima puede
incorporarse en cualquier otra forma de suplemento alimentario o de
alimento enriquecido, por ejemplo barritas alimenticias, o polvos
compactados o no compactados. Los polvos pueden diluirse en agua,
en una bebida gaseosa, en un producto lácteo o derivado de la soja,
o pueden incorporarse en barritas alimenticias.
Alternativamente, la composición puede ser una
composición tópica en forma de solución acuosa,
acuoso-alcohólica o aceitosa, de dispersión de tipo
solución, o de dispersión de tipo loción o suero, de emulsión que
presente una consistencia líquida o semilíquida del tipo de la
leche, obtenidos mediante dispersión de una fase lipídica en una
fase acuosa (O/W) o viceversa (W/O), o de suspensiones o emulsiones
que presentan una consistencia blanda, semisólida o sólida del tipo
crema, gel acuoso o gel anhidro, o alternativamente de
microemulsiones, microcápsulas, micropartículas o de dispersiones
vesiculares de tipo iónico y/o no iónico.
Las composiciones de la invención pueden
comprender los excipientes y constituyentes habituales, por ejemplo
constituyentes grasos y/o acuosos, agentes humectantes, espesantes,
agentes conservantes, texturizantes, agentes saborizantes y/o de
recubrimiento, antioxidantes, pigmentos que son habitualmente en el
dominio alimentario y/o tópico.
Preferentemente, el enzima hidrolítico presente
en la composición es una esterasa.
El principio subyacente de la presente invención
es que determinados enzimas hidrolíticos son capaces de cortar el
ácido rosmarínico (fig. 1) formando ácido cafeico (fig. 2) y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico (fig. 3),
que se encuentran más fácilmente disponibles biológicamente que el
ácido rosmarínico. De esta manera, se mejora la eficacia biológica
de las composiciones que comprenden ácido rosmarínico o extractos
vegetales que comprenden ácido rosmarínico.
Mediante la provisión de una composición que
comprende dicho enzima hidrolítico, la presente invención permite
que el procedimiento de conversión del ácido rosmarínico en ácido
cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico indicado
anteriormente se produzca en la matriz alimenticia misma, en el
producto mismo para la aplicación tópica, o en una etapa temprana
del proceso de digestión in vivo o tras la aplicación tópica,
incrementando de esta manera la eficacia biológica de las
composiciones que comprenden ácido rosmarínico y/o derivados del
mismo.
De esta manera, las composiciones de la
invención que contienen ácido rosmarínico y/o derivados del mismo
presentan efectos biológicos mejorados.
Alternativamente o adicionalmente, la
composición de la presente invención puede comprender un
microorganismo que contiene o que produce dicho enzima
hidrolítico.
La cantidad de enzima o del microorganismo
presente en la composición de la invención es suficiente para que
por lo menos 10%, preferentemente por lo menos 30%, más
preferentemente por lo menos 50% del ácido rosmarínico (fig. 1)
pueda hidrolizarse para formar ácido cafeico (fig. 2) y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico (fig. 3).
Esto puede ser fácilmente determinado por el experto en la materia
mediante métodos conocidos de la técnica.
Dependiendo de la aplicación, el enzima
hidrolítico puede encontrarse presente en la composición en una
cantidad comprendida entre 0,01 y 1.000 U/g.
En el caso de que se utilice un microorganismo
en la composición, preferentemente se encuentra presente en una
cantidad comprendida entre 1x10^{3} y 1x10^{12} cfu/g.
El microorganismo utilizado en la composición de
la invención puede seleccionarse de entre bacterias, levaduras u
hongos. Preferentemente el microorganismo es un microorganismo
probiótico. Más preferentemente, se selecciona de entre
Lactobacillus johnsonii (CNCM nº I-1225),
Bifidobacterium longum (ATCC nº BAA-999),
Bifidobacterium lactis (CNCM nº I-3446) o
mezclas de los mismos.
En otro aspecto de la invención, se proporciona
una composición que comprende ácido rosmarínico o extractos
vegetales que comprenden ácido rosmarínico y/o derivados del mismo,
en combinación con un producto de hidrólisis de los mismos.
Preferentemente, el producto de hidrólisis puede obtenerse mediante
corte enzimático del ácido rosmarínico y/o de derivados del mismo.
Dicho producto de hidrólisis puede seleccionarse de entre ácido
cafeico, ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico, etc. y
mezclas de los mismos.
Las composiciones de la invención resultan
particularmente útiles para mejorar o evitar daños a la piel. En
efecto, se ha encontrado que resultan particularmente útiles para
inhibir la expresión de la metaloproteinasas de matriz.
Preferentemente, la metaloproteinasa de matriz es del tipo 1. La
figura 8 muestra el efecto de la hidrólisis sobre un extracto que
comprende ácido rosmarínico en la liberación constitutiva de MMP1.
Puede observarse que, en comparación con un control, con el ácido
ferúlico, y con un extracto que comprende ácido rosmarínico (no
hidrolizado), el ácido rosmarínico por lo menos parcialmente
hidrolizado presenta un efecto considerable sobre la liberación
constitutiva de MMP1, lo que provoca que resulte particularmente
útil para mejorar y/o mejorar los daños a la piel.
Según una realización, la composición de la
invención puede utilizarse cosméticamente. En la presente
realización, las composiciones pueden diseñarse para el consumo
oral o para aplicaciones tópicas.
La expresión "uso cosmético" se refiere a
un uso no terapéutico que puede mejorar el aspecto estético o la
comodidad de la piel, pelaje y/o cabello de seres humanos o animales
de compañía.
En el presente contexto, el uso cosmético puede
incluir evitar daños y/o mejorar la piel, pelaje y/o cabello de
seres humanos o animales de compañía. Entre dichos daños se
incluyen, en particular, daños actínicos y del envejecimiento de la
piel, tales como sequedad, pigmentación irregular (notablemente la
formación de pecas, lentiginas, hipomelanosis gutata e
hiperpigmentación persistente), el arrugamiento (principalmente las
líneas finas superficiales y los surcos profundos),
pseudocicatrices estrelladas, elastosis, inelasticidad,
telangiectasia, lagunas venosas, comedones, hiperplasia sebácea,
acrocordón y queratosis seborreica.
El uso cosmético también puede presentar
beneficios particulares sobre el pelo y el pelaje, tales como una
densidad mejorada del cabello o pelaje, diámetro de la fibra, color,
aceitosidad, brillo, producción de sebo y puede ayudar a evitar la
pérdida del cabello o del pelaje.
En su uso cosmético, la composición de la
invención puede adoptar cualquier forma de composición alimenticia
indicada anteriormente. Preferentemente, se presenta en forma de
suplemento dietético, que puede encontrarse en forma líquida o
seca, tal como una solución, pulverización, tableta, cápsula,
cápsula de gelatina, pastilla, polvos, gel, emulsión, etc. Más
preferentemente, se encuentra en forma de una cápsula.
Alternativamente, la composición puede adoptar
la forma de una composición tópica que puede encontrarse en forma
de una solución acuosa, acuoso-alcohólica o
aceitosa, de dispersión de tipo solución o dispersiones del tipo
loción o suero, de emulsiones que presentan una consistencia líquida
o semilíquida del tipo de la leche, obtenida mediante dispersión de
una fase lipídica en una fase acuosa (O/W) o viceversa (W/O), o de
suspensión o emulsión que presenta una consistencia blanda,
semisólida o sólida del tipo crema, gel acuoso o gel anhidro, o
alternativamente de microemulsión, microcápsula o micropartícula o
de dispersión vesicular del tipo iónico y/o no iónico.
Dichas composiciones se preparan mediante los
métodos habituales conocidos por el experto en la materia. En una
realización preferente, estas composiciones tópicas se diseñan de
manera que el enzima y/o microorganismo interactúe con el ácido
rosmarínico únicamente tras la aplicación tópica.
Las composiciones para las aplicaciones tópicas
pueden constituir en particular cremas limpiadoras, protectoras, de
tratamiento o cuidado de la cara, para las manos, para los pies,
para los pliegues anatómicos principales o para el cuerpo (por
ejemplo cremas de día, cremas de noche, cremas desmaquilladoras,
cremas de base, cremas solares), productos de maquillaje, tales
como bases líquidas, leches desmaquilladoras, leches protectoras o
de cuidado del cuerpo, leches para después de la exposición solar,
lociones para el cuidado de la piel, geles o espumas, tales como
lociones limpiadoras o desinfectantes, lociones solares, lociones
bronceadoras artificiales, composiciones para el baño,
composiciones desodorantes que contienen un agente bactericida,
geles o lociones para después del afeitado, cremas depilatorias, o
composiciones para picaduras de insecto, jabones, pastas
limpiadoras, cremas, geles, emulsiones o espumas, composiciones de
aerosol para el cabello, etc.
Otro aspecto descrito en la presente memoria es
la utilización de un enzima hidrolítico o de un microorganismo que
contiene o que produce un enzima hidrolítico para la hidrólisis del
ácido rosmarínico (fig. 1). Con referencia a las figuras 4 a 7, la
hidrólisis del ácido rosmarínico para formar ácido cafeico (fig. 2)
y ácido 3,4-dihidroxifenil-láctico
(fig. 3) puede depender de la cantidad de enzima utilizada, del pH y
de la temperatura a la que se lleva a cabo la hidrólisis, y de la
cantidad de ácido rosmarínico presente.
De esta manera, la presente invención
proporciona la utilización de un enzima hidrolítico o de un
microorganismo que contiene o que produce dicho enzima hidrolítico
en una composición que comprende ácido rosmarínico y/o derivados
del mismo para mejorar la eficacia biológica de dicha composición.
En el caso de que se utilice un microorganismo para este fin,
preferentemente se seleccionan de entre bacterias, levaduras u
hongos. Más preferentemente es un microorganismo probiótico.
Todavía más preferentemente se selecciona de entre Lactobacillus
johnsonii (CNCM 1-1225), Bifidobacterium
longum (ATCC nº BAA-999), Bifidobacterium
lactis (CNCM nº I-3446) o mezclas de los
mismos.
Según otra realización de la presente invención,
se proporciona un método para la preparación de una composición que
comprende ácido rosmarínico y/o derivados del mismo que presentan
una eficacia biológica mejorada.
El método comprende la primera etapa de
proporcionar ácido rosmarínico y/o derivados del mismo. Estos pueden
ser proporcionados por diversas hierbas, tales como romero,
orégano, mejorana, tomillo, perilla, menta, consuelda, perejil,
bálsamo, salvia, hisopo, albahaca, lavanda, etc., o mezclas de los
mismos, o mediante la extracción a partir de fuentes naturales.
Preferentemente se proporciona ácido rosmarínico
en una cantidad comprendida entre 0,01 g y 10 g en peso seco.
En segundo lugar, se proporciona un enzima
hidrolítico o un microorganismo que contiene o que produce dicho
enzima hidrolítico.
En el caso de que se utilice un enzima como tal,
preferentemente se proporciona en una cantidad comprendida entre
0,01 y 1.000 U/g.
\newpage
En el caso de que se utilice el microorganismo,
preferentemente se proporciona en una cantidad comprendida entre
1x10^{3} y 1x10^{12} cfu/g. El microorganismo puede
seleccionarse de entre bacterias, levaduras u hongos. Según una
realización preferente, el microorganismo es un probiótico. Más
preferentemente, se selecciona de entre Lactobacillus
johnsonii (CNCM nº I-1225), Bifidobacterium
longum (ATCC nº BAA-999), Bifidobacterium
lactis (CNCM nº I-3446) o mezclas de los
mismos.
La tercera etapa del método consiste en la
mezcla de ácido rosmarínico y/o derivados del mismo, y el enzima
hidrolítico y/o el microorganismo que contiene o que produce dicho
enzima, con ingredientes adicionales para producir dicha
composición, de manera que se produce la hidrólisis del ácido
rosmarínico en la composición o in vivo.
El procedimiento de conversión de ácido
rosmarínico en ácido cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico indicado
anteriormente puede producirse, de esta manera, en la matriz
alimentaria misma, o en el producto mismo para la aplicación
tópica, o en una etapa temprana del proceso de digestión in
vivo, o tras la aplicación tópica, incrementando de esta manera
la eficacia biológica de dichas composiciones que comprenden ácido
rosmarínico y/o derivados del mismo.
Entre los ingredientes adicionales pueden
incluirse cualquier ingrediente utilizado en la preparación de
productos alimentarios, de composiciones tópicas e ingredientes
funcionales. Entre ellos se incluyen carbohidratos, proteínas,
lípidos, fibras, vitaminas, prebióticos, minerales, extractos
vegetales, etc.
La composición resultante puede presentarse en
cualquier forma, tal como las composiciones indicadas
anteriormente.
La presente invención comprende además un método
para mejorar la salud de un sujeto, que comprende la etapa de
administrar una composición según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 15. La administración puede ser tópica u oral.
La composición de la invención en efecto puede
actuar como antioxidante, o como antiinflamatorio y
antihipertensivo. Además, presenta efectos positivos en la
prevención o tratamiento de enfermedades cardiovasculares y
cerebrovasculares, en la prevención de la diabetes de tipo 2, y en
enfermedades degenerativas del cerebro.
Además, las composiciones según la presente
invención pueden administrarse para el tratamiento y/o la prevención
de daños a la piel que son producidos, por ejemplo, por una
situación de estrés, por ejemplo por un estrés químico, biológico o
físico, por ejemplo por la exposición a oxidantes o carcinógenos, la
exposición a bacterias, virus, hongos, lípidos derivados de células
y/o microbios circundantes, o la exposición a irradiación UV.
Dichos daños comprenden además queratosis
actínicas, púrpura, angiodema de la piel, carcinoma de las células
basales y carcinoma de células escamosas, quemadura y/o ampollas en
la piel, hiperplasia epidérmica, inflamación, supresión
inmunológica y cáncer, por ejemplo cánceres de piel no melanoma y
melanoma.
El efecto de las composiciones según la presente
invención sobre la piel de seres humanos o animales de compañía
puede medirse mediante la utilización de métodos convencionales,
incluyendo la dosis eritémica mínima (MED), la colorimetría, la
pérdida transepidérmica de agua, la reparación del ADN, la medición
de la producción de interleuquinas y proteoglicanos, o la actividad
de colagenasa, la función de barrera o la renovación celular. De
esta manera, una composición según la invención resulta útil para
mejorar y prevenir daños a la piel.
Se entenderá que el concepto de la presente
invención puede aplicarse de manera similar como terapia adyuvante
asistiendo en medicaciones utilizadas actualmente. Debido a que las
composiciones de la presente invención pueden administrarse
fácilmente por vía oral conjuntamente con material alimentario,
pueden administrarse alimentos clínicos especiales que contengan
una cantidad elevada de las sustancias de la invención.
La presente invención se ilustra adicionalmente
mediante los ejemplos no limitantes proporcionados a
continuación.
\newpage
Una composición en forma de una cápsula dura
presenta la formulación siguiente:
La composición puede administrarse en el
individuo en una cantidad de entre 2 y 3 cápsula al día.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó una receta alimentaria mediante la
mezcla de extracto de romero (o ácido rosmarínico) con
Lactobacillus johnsonii (La1, CNCM nº
I-1225) en la proporción de 1x10^{5} a 1x10^{12}
cfu de bacterias por cada 1 a 10 gramos del extracto de romero (o
ácido rosmarínico). La mezcla resultante se añadió o se mezcló
uniformemente con cualquier portador adecuado, por ejemplo leche
fermentada, yogur, queso fresco, leche cuajada, una barrita de
confitería, copos o barritas de cereal de desayuno, una bebida,
leche en polvo, un producto basado en la soja, un producto
fermentado no lácteo o un suplemento nutricional para la nutrición
clínica.
\vskip1.000000\baselineskip
Se llevaron a cabo ensayos en tampón fosfato (50
mM, pH 6,6) a 40ºC utilizando diferentes cantidades de enzima (0,01
U, 0,02 U y 1 U de enzima/mg de ácido rosmarínico). Tal como se
muestra en la fig. 4, la velocidad de reacción era proporcional a
la cantidad de enzima y al utilizar la clorogenato esterasa en una
proporción de 1 U/mg de sustrato, se transformó por completo el
ácido rosmarínico en ácido cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico tras
sólo 30 minutos de reacción (datos no mostrados).
Se estudió la influencia del pH sobre la
hidrólisis enzimática (0,02 U/mg) del ácido rosmarínico. La figura
5 muestra la generación de ácido cafeico a los valores de pH de 5,0,
6,0, 7,0 y 8,0. A pH 8,0, se transformó por completo el ácido
rosmarínico tras 2 horas de reacción, mientras que la velocidad de
reacción era muy baja a pH 6,0, y no se observó hidrólisis a pH
5,0.
Para estudiar la influencia de la temperatura
sobre la velocidad de reacción y sobre la estabilidad de los
productos, se llevaron a cabo ensayos a pH 6,6, en tampón fosfato
(50 mM) utilizando enzima en una cantidad de 0,02 U/mg de sustrato
y a 30ºC, 40ºC y 50ºC. Tal como se muestra en la figura 6, no se
observaron diferencias significativas entre reacciones producidas a
40ºC y a 50ºC, mientras que a 30ºC la velocidad de reacción fue
mucho más lenta.
Se investigó la influencia de la concentración
de sustrato sobre la velocidad y rendimiento de la reacción a 40ºC,
pH 6,6 utilizando 0,02 unidades de enzima y 1 mg, 2 mg, 4 mg ó 6 mg
de ácido rosmarínico. La figura 7 muestra que la velocidad y
rendimiento de la reacción se encontraban fuertemente influidos por
la proporción enzima/sustrato.
En efecto, más del 90% del ácido rosmarínico
resultó hidrolizado tras 4 horas al utilizar 1 mg de sustrato,
mientras que únicamente se observó un 40% de hidrólisis al utilizar
6 mg de sustrato bajo las mismas condiciones.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cultivaron las bacterias en medio MRS durante
16 horas a 37ºC bajo condiciones anaeróbicas. Tras la
centrifugación, los pellets celulares se lavaron 3 veces con 10 ml
de tampón de fosfato sódico (50 mM, pH 8). Las células (0,60 g) se
suspendieron en 1 ml de tampón de fosfato sódico (50 mM, pH 8), se
añadió ácido rosmarínico (5 mg/ml) y la mezcla se incubó a 45ºC
durante 24 horas. Se extrajo una alícuota cada 1/2 hora para el
estudio de la cinética. Tras la centrifugación, se analizaron los
sobrenadantes mediante HPLC. Tras incubar durante 4 horas, la
totalidad del ácido rosmarínico se había transformado en ácido
cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico.
Se cultivó la bacteria en MRS + medio cisteína
al 0,05% durante 16 horas a 37ºC bajo condiciones anaeróbicas. Tras
la centrifugación, los pellets celulares se lavaron 3 veces con 10
ml de tampón de fosfato sódico (50 mM, pH 8). Las células (0,60 g)
se suspendieron en 1 ml de tampón de fosfato sódico (50 mM, pH 8),
se añadió ácido rosmarínico (5 mg/ml) y la mezcla se incubó a 45ºC
durante 24 horas. Se extrajo una alícuota cada 1/2 hora para el
estudio de la cinética. Tras la centrifugación, se analizaron los
sobrenadantes mediante HPLC. Tras incubar durante 24 horas, se
había transformado más de 50% del ácido rosmarínico en ácido cafeico
y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico.
\vskip1.000000\baselineskip
Se introdujeron células fibroblásticas en un
medio de cultivo en placas de 96 pocillos. Tras precultivar durante
24 horas, se sustituyó el medio por un medio que contenía el
producto que debía someterse a ensayo (o sin producto, a modo de
referencia). Se utilizó cada condición experimental por triplicado
(utilizando 3 pocillos de cultivo).
Tras el cultivo durante 24 horas en presencia (o
en ausencia) de producto a someter a ensayo, se eliminó el medio de
cultivo y se sustituyó por una solución de tampón (EBSS) y las
células se mantuvieron alejadas de cualquier fuente de luz.
Al final de la incubación, se sustituyó la
solución de EBSS por un medio que contenía el compuesto que debía
someterse a ensayo y las placas se incubaron a 37ºC, 5% de
CO_{2}.
Tras un tratamiento de 48 horas, se recogió el
sobrenadante de cultivo para la realización de ELISA de la
dosificación de MMP-1. A continuación, se evaluó la
viabilidad celular en una capa celular mediante la medición de la
reducción del MTT por parte de las deshidrogenasas presentes en
células viables según el procedimiento estándar.
Se midió la dosis de MMP-1
(colagenasa intersticial humana) mediante ELISA utilizando un kit
"BIOTRACK MMP-1 humana, sistema ELISA, Amersham
RPN2610" siguiendo las instrucciones del proveedor.
Los datos de los recuentos se transfirieron y se
procesaron con el software PRISM (Graph Pad Software). Las
comparaciones entre grupos se llevaron a cabo mediante análisis de
la varianza (ANOVA) utilizando la prueba de múltiples comparaciones
de Dunnett.
La Tabla proporcionada a continuación muestra la
liberación constitutiva de MMP-1 por parte de los
fibroblastos. *Indica una diferencia significativa con respecto a la
referencia (p<0,01). El Naturex es un extracto natural
comercialmente disponible que comprende ácido rosmarínico.
El Naturex hidrolizado se obtiene mediante
tratamiento del extracto natural que comprende ácido rosmarínico
con una cepa probiótica de Lactobacillus johnsonii (CNCM nº
I-1225). El ácido rosmarínico fue por lo menos
parcialmente transformado en ácido cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico durante
la incubación.
Los resultados mostrados en la tabla
proporcionan evidencia de los beneficios para la piel proporcionados
por el ácido rosmarínico por lo menos parcialmente hidrolizado en
comparación con el ácido rosmarínico no hidrolizado. Más
particularmente, demuestra el efecto de inhibición de la expresión
de MMP-1 proporcionado por las composiciones de la
invención.
Claims (29)
1. Composición que comprende ácido rosmarínico
y/o derivados del mismo, en combinación con un microorganismo que
contiene o que produce un enzima hidrolítico, en la que el
microorganismo es un probiótico.
2. Composición según la reivindicación 1, que
comprende los productos de hidrólisis del ácido rosmarínico y/o
derivados del mismo conjuntamente con dicho enzima.
3. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, en la que el enzima es una esterasa.
4. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en la que el enzima es capaz de
hidrolizar el ácido rosmarínico formando ácido cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico.
5. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en la que el microorganismo se
selecciona de entre bacterias, levaduras u hongos.
6. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en la que el microorganismo probiótico
se selecciona de entre Lactobacillus johnsonii (CNCM nº
I-1225), Bifidobacterium longum (ATCC nº
BAA-999), Bifidobacterium lactis (CNCM nº
I-3446), o mezclas de los mismos.
7. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, formulada para la utilización como
producto nutricional, farmacéutico o cosmético.
8. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en la que dicha composición es una
composición alimenticia.
9. Composición según la reivindicación 8, en la
que la composición alimenticia se encuentra en la forma de un
alimento nutricional completo, bebida, agua mineral, sopa,
suplemento alimentario y alimento de sustitución, solución,
pulverización, polvos, tableta, cápsula, barrita nutricional,
suspensión bacteriana líquida, producto de confitería, producto de
base láctea o producto fermentado de base láctea, yogur, polvos de
base láctea, producto de nutrición entérica, composición para niños
y/o bebés, producto de base cereal o producto fermentado de base
cereal, producto basados en la soja, helado, chocolate, café,
producto "culinario" tal como mayonesa, salsa de tomate o
aliño para ensaladas y alimento para animales de compañía.
10. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, en la que dicha composición es una
composición tópica.
11. Composición según la reivindicación 10, en
la que la composición se encuentra en la forma de solución acuosa,
acuoso-alcohólica o aceitosa, de dispersión de tipo
solución o de dispersión de tipo loción o suero, de emulsión que
presenta una consistencia líquida o semilíquida del tipo de la
leche, obtenidas mediante dispersión de una fase lipídica en una
fase acuosa (O/W) o viceversa (W/O), o de una suspensión o emulsión
que presenta una consistencia blanda, semisólida o sólida de tipo
crema, gel acuoso o gel anhidro, o alternativamente, de
microemulsión, microcápsula, micropartícula o de dispersión
vesicular de tipo iónico y/o no iónico.
12. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11, para la utilización en la mejora o la
prevención de los daños a la piel.
13. Uso cosmético de una composición según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.
14. Uso de un enzima hidrolítico o de un
microorganismo que contiene o que produce dicho enzima, en una
composición que comprende ácido rosmarínico y/o derivados del
mismo, para la mejora de la eficacia biológica de dicha
composición.
15. Uso según la reivindicación 14, en el que
el enzima es una esterasa.
16. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones 14 ó 15, en el que el microorganismo se selecciona
de entre bacterias, levaduras u hongos.
17. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones 14 a 16, en el que el microorganismo es un
probiótico.
18. Uso según la reivindicación 17, en el que
el probiótico se selecciona de entre Lactobacillus johnsonii
(CNCM nº 1-1225), Bifidobacterium longum
(ATCC nº BAA-999), Bifidobacterium lactis
(CNCM nº 1-3446) o mezclas de los mismos.
19. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones 14 a 18, en el que la composición es una
composición alimenticia en la forma de alimentos nutricionales
completos, bebidas, aguas minerales, sopas, suplementos alimentarios
y alimentos de sustitución, soluciones, pulverizaciones, polvos,
tabletas, cápsulas, barritas alimenticias, suspensiones bacterianas
líquidas, productos de confitería, productos de base láctea o
productos fermentados de base láctea, yogures, polvos de base
láctea, productos de nutrición entérica, composiciones para niños
y/o bebés, productos de base cereal o productos fermentados de base
cereal, productos basados en la soja, helados, chocolate, café,
productos "culinarios" tales como mayonesa, salsa de tomate o
aliños para ensalada, y alimentos para animales de compañía.
20. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones 14 a 19, en el que la composición es una
composición tópica en la forma de solución acuosa,
acuoso-alcohólica o aceitosa, de dispersión de tipo
solución o de dispersión de tipo loción o suero, de emulsión que
presenta una consistencia líquida o semilíquida del tipo de la
leche, obtenidas mediante dispersión de una fase lipídica en una
fase acuosa (O/W) o viceversa (W/O), o de una suspensión o emulsión
que presenta una consistencia blanda, semisólida o sólida de tipo
crema, gel acuoso o gel anhidro, o alternativamente de
microemulsión, microcápsula o micropartícula, o de dispersión
vesicular de tipo iónico y/o no iónico.
21. Método para la preparación de una
composición que comprende ácido rosmarínico y derivados del mismo,
que presenta una eficacia biológica incrementada, que comprende las
etapas de:
- a.
- proporcionar un extracto vegetal que comprende ácido rosmarínico y/o derivados del mismo,
- b.
- proporcionar un enzima hidrolítico o un microorganismo que contiene o que produce dicho enzima, y
- c.
- mezclar dicho ácido rosmarínico y/o derivados del mismo, y un enzima hidrolítico o microorganismo que contiene o que produce dicho enzima, con ingredientes adicionales para producir dicha composición, de manera que la hidrólisis del ácido rosmarínico se produce en la composición o in vivo.
\vskip1.000000\baselineskip
22. Método según al reivindicación 21, en el
que el ácido rosmarínico y/o derivados del mismo son proporcionados
por diversas hierbas, tales como romero, orégano, mejorana, tomillo,
perilla, menta, consuelda, bálsamo, salvia, hisopo, albahaca,
lavanda, mediante extracción a partir de fuentes naturales o de
mezclas de las mismas.
23. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 21 y 22, en el que el enzima es una esterasa.
24. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 21 a 23, en el que el microorganismo se selecciona
de entre bacterias, levaduras u hongos.
25. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 21 a 24, en el que el microorganismo es un
probiótico.
26. Método según la reivindicación 25, en el que
el microorganismo probiótico se selecciona de entre Lactobacillus
johnsonii (CNCM nº 1-1225), Bifidobacterium
longum (ATCC nº BAA-999), Bifidobacterium
lactis (CNCM nº 1-3446), o mezclas de los
mismos.
27. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 21 a 26, en el que el ácido rosmarínico se
hidroliza en ácido cafeico y ácido
3,4-dihidroxifenil-láctico.
28. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 21 a 27, en el que los ingredientes adicionales se
seleccionan de entre carbohidratos, proteínas, lípidos, vitaminas,
probióticos, minerales, extractos vegetales, fibras, excipientes y
saborizantes.
29. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 21 a 28, en el que la composición se encuentra en
forma de una composición alimenticia, tal como un alimento
nutricional completo, bebida, agua mineral, sopa, suplemento
alimentario y alimento de sustitución, solución, pulverización,
polvos, tabletas, cápsulas, barritas alimenticias, suspensión
bacteriana líquida, producto de confitería, producto de base láctea
o producto fermentado de base láctea, yogur, polvos de base láctea,
producto de nutrición entérica, composición para niños y/o bebés,
producto de base cereal o producto fermentado de base cereal,
producto basado en la soja, helado, chocolate, café, producto
"culinario" tal como mayonesa, salsa de tomate o aliño para
ensaladas, alimento para animales de compañía, o en forma de una
composición tópica, tal como una solución acuosa,
acuoso-alcohólica o aceitosa, una dispersión de
tipo solución o una dispersión de tipo loción o suero, una emulsión
que presenta una consistencia líquida o semilíquida del tipo de la
leche, obtenidas mediante dispersión de una fase lipídica en una
fase acuosa (O/W) o viceversa (W/O), o de una suspensión o emulsión
que presenta una consistencia blanda, semisólida o sólida de tipo
crema, gel acuoso o gel anhidro, o alternativamente, de
microemulsión, microcápsula, micropartícula o de dispersión
vesicular de tipo iónico y/o no iónico.
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