ES2344549T3 - Dispositivo de medicion de las caracteristicas de absorcion de luz de una muestra de tejido biologico. - Google Patents
Dispositivo de medicion de las caracteristicas de absorcion de luz de una muestra de tejido biologico. Download PDFInfo
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Abstract
Dispositivo de medición de las características de absorción luminosa de una muestra de tejido biológico, que consta de: - unos medios (7; 307) de iluminación de la muestra (1), adaptados para emitir alternativamente al menos una primera y una segunda radiaciones luminosas hacia la muestra, siendo dichas radiaciones respectivamente de una primera y de una segunda longitud de onda diferentes la una de la otra; - unos medios (9) de recepción y de análisis de la radiación luminosa de salida procedente de la muestra (1), constando dichos medios de recepción y de análisis (9) de medios convertidores (23) de dicha radiación de salida en señal de control (S0); - unos medios de control y mando (31; 331) que reciben de entrada la señal de control (S0) y emiten de salida al menos la primera (S1) y la segunda (S2) señales de mando de los medios de iluminación (7; 307), que corresponden respectivamente a la primera y segunda radiaciones, y al menos una señal de medición (Sm); y - unos medios de cálculo (33) de las características de absorción de la muestra (1), adaptados para recibir de entrada dicha señal de medición (Sm) y calcular dichas características en función de dicha señal de medición (Sm), caracterizado, porque dichos medios de control y mando (31; 331) están adaptados para que la intensidad luminosa (IUV, IR) de cada una de las radiaciones varíe de forma periódica, con el mismo periodo, en desfase una con respecto a la otra, y para regular al menos una de las señales de mando (S1, S2) en función de la señal de control (S0), de modo que, en un intervalo de tiempo de integración (Ti) de al menos un periodo (Tp) de variación de dichas radiaciones, la amplitud de dicha señal de control (S0), tomada en las fases de emisión de una de las radiaciones, sea igual a la amplitud de la señal de control (So), tomada en las fases de emisión de la otra radiación, y porque la señal de medición (Sm) representa al menos una de dichas señales de mando (S1, S2) en el intervalo de tiempo de integración (Ti).
Description
Dispositivo de medición de las características
de absorción de luz de una muestra de tejido biológico.
\global\parskip0.900000\baselineskip
La invención se refiere a un dispositivo de
medición de las características de absorción de luz de una muestra
de tejido biológico.
En particular, la invención está destinada a
analizar el contenido de hojas de vegetales, es decir la
concentración de ciertos compuestos químicos.
Durante su ciclo de vida las plantas deben
adaptarse a unas variaciones, a veces importantes de sus condiciones
ambientales, como por ejemplo la luz o la disponibilidad de agua y
de recursos minerales. Estas adaptaciones, a menudo van acompañadas
de variaciones en el contenido de determinados metabolitos de las
hojas, en particular los del metabolismo llamado secundario, tal
como los polifenoles. Esta clase de metabolitos designan los
compuestos que tienen al menos una función fenol o que derivan
directamente de compuestos fenólicos, por esterificación, por
ejemplo. Otra denominación habitual, que se empleará en lo sucesivo
para estos compuestos y los de las familias vecinas, es la
denominación "fenilpropanoides", por su origen
biosintético.
Se ha establecido que los fenilpropanoides
varían de una especie a otra, que se acumulan principalmente en las
vacuolas de las células epidérmicas y que pueden presentar
variaciones importantes de concentración en función de las
condiciones ambientales.
Por ejemplo, M.M. Cadwell y col., han demostrado
en un artículo titulado "Internai filters: prospects for
UV-acclimation in higher plants" (Physiol
Plant. (1983) 58, pág. 445-450) que los
fenilpropanoides se acumulan después de la exposición a la luz,
probablemente con el fin de proteger a las hojas de la radiación
ultravioleta.
Otra razón igualmente enunciada para las
variaciones del contenido de fenilpropanoides de las hojas, implica
el ajuste de las rutas metabólicas en función de las proporciones
relativas de recursos disponibles de carbono y de nitrógeno. Cuando
el nitrógeno es abundante en relación con la cantidad de carbono
fijada, la planta invierte en la producción de biomasa consumidora
de nitrógeno y favorece su crecimiento. Esto da como resultado una
tasa baja de fenilpropanoides. Cuando el nitrógeno se enrarece con
respecto al carbono, entonces la producción fotosintética se vuelve
hacia la síntesis de compuestos pobres en nitrógeno que son los
fenilpropanoides. A este respecto se puede consultar en la revista
Oikos (1983, vol. 40, pág. 357-368), el artículo de
J.P. Bryant y col. "Carbon/nutrient balance of boreal plants in
relation to vertebrate herbivory"; en la revista "Journal of
Chemical Ecology" (1989, vol. 15, pág.
1117-1131), el artículo de P. Price y col.
"Carbon-nutrient balance hypothesis in
within-species phytochemical variation of Salix
lasiolepis"; en la revista "Quart. Rev. Biol." (1992, vol.
67, pág. 283-335), el artículo de D.A. Herms y W.J.
Mattson "The dilemma of plants: To grow or to defend".
Se han mostrado otras funciones de los
fenilpropanoides, como la selección de la nutrición por los
herbívoros o la protección contra los agentes patógenos (Plant
Cell, 1995, vol. 7, pág. 1085-1097, R.A. Dixon y
N.L. Paiva, Stress-induced phenylpropanoid
metabolism).
Por lo tanto, el seguimiento in situ del
contenido de fenilpropanoides de las hojas o de la epidermis de las
hojas aportaría unas informaciones susceptibles de ser usadas en
diferentes campos de aplicación. En ecofisiología, permitiría
seguir los efectos del aumento de las radiaciones UV debido al
agujero de ozono y los del aumento del contenido de CO_{2}
atmosférico seguido del uso de los hidrocarburos fósiles, y estudiar
las interacciones entre plantas y herbívoros. En biología vegetal,
permitiría una evaluación de la productividad del metabolismo
secundario y un seguimiento del desarrollo vegetal. En silvicultura,
se dispondría de una herramienta de descripción de la estructura
vegetal, que podría cuantificar el reparto de luz en el seno de la
cubierta, o también calcular el reparto de los recursos nutritivos.
Finalmente, en agricultura, se dispondría de una herramienta de
diagnóstico rápido, no invasivo para el control de los aportes
nutritivos o del ataque de agentes patógenos.
Un procedimiento conocido de análisis del
contenido de fenilpropanoides consiste en extraer primero de todo
sus pigmentos foliares por trituración e inmersión en un disolvente,
tal como por ejemplo metanol. Después, se determina el contenido de
fenilpropanoides del extracto por medición de la transmitancia en el
ultravioleta donde los fenilpropanoides tienen una o varias bandas
de absorción. (A este respecto, véase "Analysis of Phenolic Plant
Metabolites. Methods in Ecology" de P.G. Waterman y S. Mole, eds.
J.H. Lawton et G.E. Likens, 1994, Oxford: Blackwell Scientific
Publications. 238). Pero este último procedimiento es destructivo y
no puede aplicarse sobre el terreno debido al equipo de laboratorio
que requiere. Una medición in situ por absorción
ultravioleta tampoco es aplicable debido a la fuerte absorción de
los pigmentos fotosintéticos (clorofila a y b) que interfiere con
la absorción debida a los fenilpropanoides que se quieren medir.
Para poder usarse sobre el terreno, en el marco
de sus diferentes aplicaciones, la medición del contenido de
fenilpropanoides debe ser rápida, sencilla y debe poder efectuarse
in situ de manera no destructiva con el fin de permitir un
seguimiento regular.
Además, un procedimiento de evaluación in
situ ventajoso consiste en determinar la transmitancia de la
epidermis de las hojas, a partir de mediciones de la fluorescencia
roja procedente de la clorofila excitada por una radiación
ultravioleta de análisis por un lado, y excitada por una radiación
visible de referencia por otra parte.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Así pues, a la longitud de onda de análisis
\lambda1, la fluorescencia medida F1 vale:
F1 = k1 T1
I1
donde T1 es la transmitancia de la
epidermis a la longitud de onda \lambda1, I1 la intensidad de la
radiación de medición de incidencia a la misma longitud de onda, y
k1 un factor de
proporcionalidad.
\vskip1.000000\baselineskip
A la longitud de onda de referencia \lambda0,
la fluorescencia medida F0 se determina por una ecuación
análoga:
F0 = k0 T0
I0
en la que T0 es la transmitancia de
la epidermis a la longitud de onda \lambda0, I0 la intensidad de
la radiación de medición de incidencia a la misma longitud de onda,
y k0 un factor de
proporcionalidad.
\vskip1.000000\baselineskip
La absorbancia A debida a los fenilpropanoides
presentes en la epidermis se define por la relación:
(1)A =
-Log[T1/T0] = -Log[F1/F0 \ x \ (I0 \ k0)/(I1 \
k1)]
y si I1, k1 y k0 se mantienen
constantes de una medición a
otra:
A =
-Log[F1/F0] + C,
donde C es una
constante.
\vskip1.000000\baselineskip
Como la absorbancia y el contenido de
fenilpropanoides varían de manera paralela, se puede, por lo tanto,
calcular el contenido de fenilpropanoides a partir de las mediciones
de F1 y F0, y de un calibrado que determina el valor de la
constante.
Ahora bien, C en realidad depende no solamente
del instrumento de medición, sino también de las variaciones del
rendimiento de la fluorescencia de la clorofila que pueden
intervenir entre la medición a la longitud de onda de análisis
\lambda1 y la medición a la longitud de onda de referencia
\lambda0.
La patente DE 3518527 A1 describe un fluorómetro
de pulsos adecuado para detectar las variaciones rápidas del
rendimiento de la fluorescencia de la clorofila después de una
irradiación de luz.
Efectivamente, en la fotosíntesis y en
ecofisiología vegetal es sabido que el rendimiento cuántico de la
fluorescencia de la clorofila es muy variable, y que depende en
parte de la intensidad luminosa recibida anteriormente, por
intermedio de mecanismos de "atenuación" fotoquímicos y no
fotoquímicos.
En consecuencia, la medición de referencia a la
longitud de onda \lambda0 es delicada de llevar a cabo, puesto
que hay que asegurarse que el rendimiento cuántico de fluorescencia
de la clorofila no ha variado, o ha variado en un factor conocido,
entre el momento de la medición a la longitud de onda de análisis y
el momento de la medición a la longitud de onda de referencia.
Una manera de hacerlo ha sido descrita por W.
Bilger y col., en el artículo titulado "Measurement of leaf
epidermal transmittance of UV radiation by chlorophyll
fluorescence" aparecido en "Physiologia Plantarum" (Vol
101, pág. 754-763, 1997). Los autores utilizan un
fluorómetro denominado "Xe-PAM" comercializado
por la sociedad Walz (Effeltrich, Alemania). Para obtener un estado
estable del rendimiento de fluorescencia de la clorofila, realizan
la medición en hojas adaptadas a la oscuridad y reducen la
intensidad de los haces de luz de análisis y de referencia. Sin
embargo, resulta un tiempo de medición extremadamente largo (para
asegurarse de una buena relación señal/ruido) que se reparte en 30
min de adaptación a la oscuridad y 2 min de medición propiamente
dicha. Por lo tanto, dicho dispositivo no está adaptado para ser
usado sobre el terreno.
Por lo tanto, la invención se dirige más
precisamente a un dispositivo de medición de las características de
la absorción de luz de una muestra de tejido biológico según la
reivindicación 1.
Uno de los objetivos principales de la invención
es proporcionar un dispositivo que sea ligero, portátil, fácilmente
utilizable sobre el terreno, y que permita realizar rápidamente con
una gran precisión, un gran número de toma de muestras para
mediciones de rutina, de modo que permita en especial, en una
primera aplicación particularmente interesante, evaluar in
vivo el contenido en la epidermis de las hojas de compuestos de
la familia de los fenoles o de los fenilpropanoides.
Otro objetivo importante de la invención es
realizar un dispositivo de diseño sencillo, de coste bajo, de uso
fácil.
Por lo tanto, se puede usar la fluorescencia de
una muestra como valor representativo de sus características de
absorción de la luz, incluso si la muestra, como es el caso de una
muestra biológica fluorescente que contiene, por ejemplo,
clorofila, presenta una fluorescencia variable. El bucle de
regulación permite franquear la medición de estas variaciones.
En las reivindicaciones dependientes se
presentan otras características del dispositivo de acuerdo con la
invención, tomadas de forma aislada o siguiendo todas las
combinaciones técnicamente posibles.
La invención se refiere también a un
procedimiento de medición de las características de absorción de luz
de una muestra de tejido biológico según la reivindicación 25.
En las reivindicaciones dependientes se
presentan características opcionales del procedimiento de acuerdo
con la invención.
Como se ha mencionado anteriormente, un uso del
dispositivo o el procedimiento antes descrito, consiste en medir
las características de absorción de luz de una hoja de vegetal, en
particular para realizar la medición de la concentración de
compuestos de la familia de fenoles o de fenilpropanoides de una
epidermis de hoja.
Dicho uso puede permitir de forma ventajosa,
calcular las necesidades nutricionales, en particular de nitrógeno,
de un cultivo.
Naturalmente, el dispositivo y el procedimiento
se aplican a mediciones de concentración de otros compuestos
químicos. Para ello, es suficiente adaptar la longitud de onda de
análisis, es decir la longitud de onda de los rayos de luz emitidos
por los medios de iluminación, a los compuestos que se van a
medir.
Otros usos del dispositivo o el procedimiento
descritos previamente, consisten en medir las características de
absorción de luz de un tejido animal o humano que contenga derivados
de la hemoglobina, o también en realizar un diagnóstico médico o
veterinario.
Ahora se van a describir unos modos particulares
de realización de la invención, dados a título de ejemplos no
limitativos, en referencia a los dibujos adjuntos, en los
cuales:
la fig. 1 representa el espectro de absorción
de los pigmentos fotosintéticos in vivo y el espectro de
fluorescencia de la clorofila en función de la longitud de onda
(dada en nanómetros) de la radiación incidente;
la fig. 2 representa el espectro de absorción
de un fenilpropanoide particular, el kampferol, en función de la
longitud de onda (dada en nanómetros) de la radiación incidente;
la fig. 3 es un esquema sinóptico del conjunto
del dispositivo de medición de acuerdo con la invención, en el cual
se dispone una muestra para analizar constituida por una hoja de
vegetal;
la fig. 4 es un esquema sinóptico del
dispositivo de mando y control de la figura 3;
las fig. 5A, 5B, 5C, 5D representan la evolución
con el tiempo, en un intervalo de medición, de las intensidades
luminosas respectivamente del rayo ultravioleta de análisis, del
rayo rojo de referencia, de la radiación de fluorescencia detectada
de salida de la muestra, y de la amplitud de la señal de mando de la
segunda fuente luminosa;
la fig. 6 ilustra un primer modo particular de
puesta en práctica del dispositivo de la figura 1;
la fig. 7 ilustra un segundo modo particular de
puesta en práctica del dispositivo de la figura 1; y
la fig. 8 representa una variante de acuerdo con
la invención, del dispositivo representado en la figura 1.
En la descripción que sigue, se ilustrarán los
modos particulares de realización de la invención adaptados en
particular a la medición de la concentración de fenilpropanoide de
una epidermis de hoja.
Previamente a la descripción detallada de un
dispositivo de acuerdo con la invención, es útil mencionar las
propiedades ópticas por una parte de los pigmentos fotosintéticos
in vivo (figura 1) y por otra parte, de un fenilpropanoide
particular, el kampferol, elegido a título de ejemplo (figura
2).
El espectro de absorción de los pigmentos
fotosintéticos in vivo, muestra un primer máximo de absorción
cercano a 430 nanómetros, y un segundo máximo de absorción en la
banda de la luz roja, cercano a 670 nanómetros.
El espectro de fluorescencia de la clorofila
in vivo (representado en línea de puntos) muestra dos máximos
muy cercanos a aproximadamente 685 nanómetros y aproximadamente 735
nanómetros.
En la figura 2, se ha representado el espectro
de absorción del kamperol, que muestra un máximo de absorción
principal a aproximadamente 370 nanómetros y una absorbancia
prácticamente nula para longitudes de onda superiores a 420
nanómetros.
En el marco del uso de la invención para medir
la concentración de kampferol en la epidermis de una hoja de
vegetal, los pigmentos fotosintéticos contenidos en la hoja son
utilizados como sensor que emite, por intermedio de la clorofila,
una radiación de fluorescencia en el rojo en respuesta a una señal
de excitación, constituida por una radiación ultravioleta
parcialmente absorbida por el compuesto que se va a dosificar
contenido en la epidermis. Se ve que una señal de referencia en la
banda del rojo visible no es absorbida por el fenilpropanoide, de
modo que la absorción de esta radiación se debe solamente a los
pigmentos fotosintéticos.
En la figura 3 se ha representado el esquema de
un dispositivo de acuerdo con la invención y una muestra de tejido
biológico, en la cual hay que evaluar la concentración en un
compuesto químico absorbedor.
La muestra 1 en este ejemplo particular, es una
hoja de vegetal que comprende, dispuestos en capas superpuestas,
una primera capa de epidermis 3, una capa central de tejido que
contiene la clorofila 4 y una segunda capa de epidermis 5.
El dispositivo consta esencialmente de medios de
iluminación 7 de la muestra 1 y de medios de recepción y análisis 9
de la radiación luminosa de salida procedente de la muestra 1. Los
medios de iluminación 7 y los medios de recepción y análisis 9 en
este particular modo de realización, están representados de un lado
y otro de la muestra 1, siendo la radiación luminosa de salida una
radiación transmitida por la muestra 1.
Los medios de iluminación 7 constan de una
primera fuente luminosa 11 y una segunda fuente luminosa 12,
constituidas por ejemplo, por diodos electroluminiscentes,
emitiendo la primera fuente 11 en un intervalo de longitud de onda
correspondiente a la banda ultravioleta, preferiblemente en el
intervalo de 300-390 nm, más preferiblemente a 370
nm, mientras que la segunda fuente luminosa 12 emite en un intervalo
de longitud de onda correspondiente a la banda de la luz roja, de
preferencia aproximadamente 670 nm. Cada una de las fuentes 11, 12
está alimentada eléctricamente por una alimentación eléctrica
respectiva 15, 16, y es dirigida hacia la ubicación de la muestra
1.
Un primer filtro óptico 19 se ha interpuesto
entre las fuentes luminosas 11, 12, y la ubicación de la muestra 1,
de modo que las radiaciones luminosas procedentes de las fuentes 11,
12, presentan un espectro de longitud de onda concentrado en las
cercanías de la longitud de onda principal, es decir 370 nm y 670 nm
respectivamente. Naturalmente, el filtrado de la primera radiación
luminosa emitida por la primera fuente 11 por una parte y de la
segunda radiación luminosa emitida por la segunda fuente 12 por otra
parte, se puede realizar mediante dos filtros distintos que
funciona cada uno para una longitud de onda dada.
Los medios de recepción y de análisis 9 constan
de un segundo filtro óptico 21 y de medios convertidores 23,
estando el segundo filtro óptico 21 interpuesto entre la ubicación
de la muestra 1 y los medios convertidores 23. Por lo tanto, los
medios convertidores 23 reciben la radiación luminosa transmitida
por la muestra 1 y filtrada por el segundo filtro óptico 21 para
eliminar las radiaciones parásitas, en particular las radiaciones
procedentes de la primera y segunda fuentes 11, 12. Gracias a esta
disposición, sólo llegan a los medios convertidores 23 la radiación
de fluores-
cencia.
cencia.
Los medios convertidores 23 están esencialmente
constituidos por un fotodetector 25 que convierte la señal óptica
procedente del filtro 21 en señal eléctrica, y de un preamplificador
27 de la señal eléctrica procedente de dicho fotodetector 25.
La señal eléctrica procedente de los medios
convertidores 23 y correspondiente a la radiación detectada de
salida de la muestra 1, se llamará en lo sucesivo "señal de
control" S_{0}. Los medios de recepción y de análisis 9
constan por otra parte de medios electrónicos de control y de mando
31 conectados a los medios convertidores 23 de forma que reciben la
señal de control S_{0}.
La primera alimentación eléctrica 15 está
dirigida por una señal de mando S_{1} procedente de un dispositivo
regulador 32, de modo que la intensidad suministrada por la
alimentación 15 es constante a un nivel opcionalmente regulable.
Por lo tanto, la intensidad luminosa suministrada por una primera
fuente 11 depende de la señal de mando S_{1}, en el caso de que
sea constante.
El dispositivo regulador 32 puede estar provisto
opcionalmente de un mando manual de regulación de la amplitud.
Los medios de control y de mando 31 están
conectados de salida a la alimentación eléctrica 16 de modo que
emiten hacia ésta una señal de mando respectiva S_{2}. Por lo
tanto, la intensidad luminosa suministrada por la segunda fuente
luminosa 12 depende de la señal de mando S_{2} suministrada a la
alimentación eléctrica 16 por los medios de control y mando 31.
Los medios de control y mando 31 por otra parte
suministran una señal de medición S_{m} a un ordenador 33
adaptado para calcular las características de absorción de la
muestra 1 analizada, en función de la señal de medición
S_{m}.
El ordenador 33 está conectado preferentemente a
un periférico 35, tal como una pantalla de visualización y/o un
dispositivo de almacenamiento de datos.
Los medios de control y mando 31 constan de
medios de sincronización 41 y de un dispositivo de mando y control
43 que posee dos entradas, una de las cuales está conectada a los
medios convertidores 23 de modo que recibe la señal de control
S_{0}, y la otra está conectada a los medios de sincronización 41
de modo que recibe la señal de sincronización S_{s} procedente de
los medios de sincronización 41. El dispositivo de mando y control
43 posee además una salida conectada al ordenador 33, de modo que la
señal de mando S_{c} producida por el dispositivo de mando y
control 43 es transmitida al ordenador 33.
Los medios de sincronización 41 están también
conectados a entradas respectivas de la primera 15 y de la segunda
16 alimentaciones eléctricas, para transmitirles la señal de
sincronización S_{s}.
En el ejemplo representado, la señal de medición
S_{m} está constituida por la señal de mando S_{c} la cual
también es transmitida a una segunda entrada de la segunda
alimentación eléctrica 16.
La primera alimentación eléctrica 15 es, por
ejemplo, una alimentación en pulsos que funciona con una base de
tiempo definida por la señal de sincronización, por ejemplo, una
señal pulsada de frecuencia del orden de 1 kHz o superior a este
valor. La primera señal de mando S_{1} que ordena el
funcionamiento de la alimentación en pulsos 15 se define entonces
como la señal de sincronización S_{s}, suministrando el suministro
en pulsos 15 a la primera fuente luminosa 11 una señal en franjas
(figura 5A) de amplitud constante, de modo que la intensidad de la
radiación UV emitida en respuesta por la primera fuente 11 tiene una
intensidad variable entre 0 y un valor máximo fijo (o amplitud
fija) siguiendo un perfil en franjas.
El funcionamiento del segundo suministro
eléctrico 16 se basa en el funcionamiento del suministro en pulsos
15 con la misma base de tiempo definida por la señal de
sincronización S_{s}, de modo que la intensidad luminosa del rayo
emitido por la segunda fuente luminosa 12 es variable siguiendo un
perfil de franjas (figura 5B) del mismo periodo T_{p}, entre 0 y
un valor máximo de cresta modulada por la señal de mando S_{2}.
En el ejemplo representado, la segunda señal de mando S_{2} está
constituida por la señal de mando S_{c} procedente del
dispositivo de mando y control 43.
Se define así un bucle de regulación que actúa
en retroacción sobre el mando de la segunda alimentación eléctrica
16, en función de la señal de control S_{o} que corresponde a la
intensidad luminosa de la radiación transmitida por la muestra
1.
Con referencia a la figura 4, ahora se va a
describir con más detalle el dispositivo de mando y control 43
representado en la figura 3.
Este dispositivo 43 recibe de entrada la señal
de control S_{0}, y consta, directamente de entrada, de un filtro
de paso alto 51 que permite eliminar las señales parásitas de
frecuencias bajas y medias.
Consta además de un desmultiplicador 53 y un
amplificador diferencial 55, estando dirigido el desmultiplicador
53 por la señal de sincronización S_{s} y constando, por ejemplo,
de dos muestreadores-bloqueadores (o interruptores
analógicos de memoria) 57, 58 que conectan la salida del filtro de
paso alto 51 a la entrada inversora del amplificador diferencial 55
y a su entrada no inversora, respectivamente. Cada interruptor 57,
58 está provisto de un medio de memorización 60 en forma, por
ejemplo, de un componente capacitivo conectado a una línea de
referencia de potencial de 0 voltios. La señal de sincronización
S_{s} manda alternativamente la apertura y cierre de los
interruptores
57, 58.
57, 58.
El dispositivo de control y de mando 43 consta
conectado a la salida del amplificador diferencial 55, de un
circuito integrador 61 de estructura clásica, que es inútil detallar
aquí, que produce una señal integrada en uno o varios periodos de
la señal de sincronización. Esta señal constituye la señal de
medición S_{m} y la señal de mando S_{c}.
El funcionamiento del dispositivo descrito
previamente se comprenderá mejor con referencia a las figuras 5A,
5B, 5C y 5D.
Como se ilustra en las figuras 5A y 5B, las
primera y segunda radiaciones luminosas son emitidas por los medios
de iluminación 7 en desfase, más exactamente en oposición de fase.
Eligiendo la señal de sincronización S_{s} a una frecuencia de 1
kHz, las señales luminosas son periódicas en bloques de periodo
T_{p} igual a 1 ms, siendo la intensidad de cada radiación máxima
en un semiperiodo y nula en el otro semiperiodo.
La amplitud de la intensidad luminosa de la
radiación UV de análisis es, como ya se ha mencionado anteriormente,
de amplitud constante, mientras que la amplitud de la intensidad
luminosa de la radiación roja de referencia (de la segunda fuente
luminosa) es de amplitud regulada.
Una fase de intensidad máxima de la radiación UV
(o radiación de análisis) corresponde a una intensidad nula de la
radiación roja (o radiación de referencia), y a la inversa.
\newpage
Se definen los siguientes intervalos de
tiempo:
- -
- un intervalo de medición T_{m} en el que se efectúa la medición propiamente dicha, correspondiendo preferiblemente a un gran número de periodos T_{p}. La duración de la medición T_{m} se elige de modo que se tenga una buena reproducibilidad de la medición con ayuda de un promediado suficiente realizado por los medios de cálculo 33, que pueden ser analógicos o digitales. En el ejemplo considerado 600 ms;
- -
- un intervalo de integración T_{i} de al menos un periodo T_{p} preferiblemente de duración muy inferior al del intervalo de medición T_{m}. En el ejemplo considerado, T_{i} es de duración igual a 5 periodos T_{p} es decir 5 ms;
- -
- un intervalo de estabilización T_{s} que se explicará más adelante.
La regulación se realiza de modo que, en el
intervalo de integración T_{i}, la intensidad de la radiación de
fluorescencia I_{F} tomada, en el caso considerado, en las fases
de emisión de la radiación UV, sea igual a la intensidad de la
radiación de fluorescencia I_{F} tomada, en el caso considerado,
en las fases de emisión de la radiación roja.
En la figura 5C, en la que se ha representado la
evolución de la intensidad de fluorescencia I_{F} (o intensidad
de la radiación de salida), se ve que después del intervalo de
estabilización T_{S}, I_{F} varía de forma lenta y casi
continua de modo que ya no presenta más variaciones rápidas debidas
a la alternancia de las fuentes luminosas. Este es el resultado
buscado por el bucle de regulación descrito a continuación.
Para ello, la señal de control S_{0}, de
salida del filtro 51, es "desmultiplicada", es decir se
descompone en una primera señal elemental S_{e1} dirigida a la
entrada inversora del amplificador diferencial 55, y en una segunda
señal elemental S_{e2} dirigida hacia la entrada no inversora del
amplificador diferencial 55. En una fase de emisión de la primera
radiación (radiación UV), es decir para I_{UV} máxima, el primer
interruptor 57 está cerrado y el segundo interruptor 58 está
abierto. A la inversa, en una fase de emisión de la segunda
radiación (radiación roja), es decir para I_{R} máxima y I_{UV}
nula, el segundo interruptor 58 está cerrado mientras que el primer
interruptor 57 está abierto. Gracias a los medios de memorización
60, las señales elementales S_{e1}, S_{e2} en cada momento son
representativas de la amplitud de intensidad de la respectiva
radiación I_{UV}, I_{R} detectada en el semiperiodo
correspondiente.
El circuito integrador 61 en el intervalo de
tiempo de integración T_{i} integra una señal alternativa que
representa, en sus fases positivas, la diferencia entre la
intensidad de la radiación de referencia y la intensidad de la
radiación de análisis durante el semiperiodo precedente, y en sus
fases negativas, la diferencia entre la intensidad de la radiación
de análisis y la intensidad de la radiación de referencia durante el
semiperiodo precedente. La integración de la señal de salida del
amplificador diferencial 55 proporciona una señal diferencial que
representa la diferencia de las contribuciones de la radiación de
análisis por una parte y de la radiación de referencia por otra
parte, en la radiación de fluorescencia detectada.
La regulación se dirige a alcanzar y mantener un
valor de intensidad de la radiación de referencia tal que este
valor diferencial sea nulo de media en el intervalo de integración,
a pesar de las posibles variaciones del rendimiento de
fluorescencia inducidas por los medios de iluminación.
Partiendo de la ecuación dada en el preámbulo de
esta solicitud, la expresión de la absorbancia de la muestra se
convierte entonces en:
A =
-Log[F1/F0 \ x \ (I0.k0)/(I1.k1)] = -Log[1 \ x \
(I0.k0)/(I1.k1)]
es decir, identificando I_{R} con
I0: A = -Log(I_{R}) + K, donde K es una constante
instrumental que no varía de una medición a
otra.
La señal de medición S_{m} que aquí es igual a
la señal de mando S_{c}, es entonces directamente significativa
de la absorbancia de la muestra debido al fenilpropanoide presente
en la epidermis.
Como se muestra en las figuras 5B y 5C, el
dispositivo lleva la intensidad de la radiación I_{R} a un valor
de amplitud de manera que la radiación de salida es de intensidad
I_{F}, presentando una evolución lenta y continua, al final de un
intervalo de tiempo T_{S} de estabilización del bucle de
regulación. El bucle de regulación está diseñado para conseguir
este equilibrio al final del intervalo de tiempo T_{S}
relativamente corto, a saber, por ejemplo, una decena de periodos
T_{P}.
A partir de este momento, la amplitud de
intensidad I_{R} se mantiene sensiblemente constante, incluso en
el caso de variación sensible de la intensidad de salida I_{F}
inducida por los medios de iluminación, o por una modificación de
las condiciones experimentales.
En la figura 5D, se ha ilustrado la evolución de
la señal de mando S_{c} en función del tiempo, es decir la
evolución de la señal de mando S_{2} de la alimentación 16 de la
fuente roja 12.
La medición de las características de absorción
se da, como se ha visto, por el valor de I_{R} tomado como media
en este intervalo de medición, es decir por la amplitud (media) de
la señal de mando S_{2} (o S_{C}).
Finalmente hay que precisar que la intensidad
I_{UV} de la radiación UV preferiblemente es constante de una
medición a la otra, por simplicidad del dispositivo, mientras que la
intensidad I_{R} de la luz roja es constante en el intervalo de
medición, pero variable de una medición a la otra.
Ni que decir tiene que se pueden obtener una
regulación y un resultado análogos manteniendo constante no la
radiación de análisis (UV), sino la radiación de referencia
(roja).
En las figuras 6 y 7, se han representado dos
modos particulares de puesta en práctica de la invención.
En la figura 6, el dispositivo se presenta bajo
la forma de una pinza 100 que consta de dos ramas, 101, 102,
articuladas a nivel de una articulación de pivote 103. La primera
rama 101 está provista de medios de iluminación 7, mientras que la
segunda rama 102 está provista de medios de recepción y de análisis
9. Cada una de las ramas 101, 102 está igualmente provista de una
junta anular respectiva 105, 106, de material elástico opaco,
dispuestas enfrentadas entre sí, de modo que cuando las ramas 101,
102 están en posición cerrada, se asegura una oscuridad suficiente
en la región de la muestra 1 para evitar las perturbaciones debidas
a la luz ambiente, y se evita cualquier contacto entre la muestra 1
y las partes duras del aparato que podrían dañarla.
Por lo tanto, dicho dispositivo está
particularmente adaptado para realizar, con una gran rapidez,
mediciones in vivo en muestras tales como hojas de
vegetales.
Siguiendo un segundo modo particular de puesta
en práctica de la invención representado en la figura 7, el
dispositivo 200 puede constar de un haz de fibras ópticas 201. El
haz de fibras ópticas 201 consta de tres haces secundarios 203, 204
y 205, de los cuales los dos primeros 203, 204, están conectados a
los medios de iluminación 7, de forma individual a cada fuente
luminosa, y el tercero está conectado a los medios de recepción y
de análisis 9, en particular a un módulo 207 que consta del segundo
filtro óptico 21 y los medios convertidores 23. El módulo 207 está
conectado eléctricamente a un instrumento 209 que comprende los
medios de control y de mando, el ordenador y el periférico.
Durante una medición, un extremo del haz 201 se
lleva cerca de la muestra 1, transmitiendo el haz los rayos de luz
procedentes de los medios de iluminación 7 hasta la muestra 1, y el
rayo reflejado procedente de la muestra 1, en sentido inverso,
hasta el módulo 207.
En la figura 8, se ha representado un
dispositivo 300 que corresponde a un modo particular de realización
de la invención, en la que las fuentes luminosas están en un número
superior a dos, en este caso tres fuentes luminosas que emiten a
longitudes de onda diferentes.
Por ejemplo, una de las fuentes luminosas emite
en la banda del rojo, constituyendo la radiación procedente de esta
fuente luminosa la radiación de referencia. Las otras dos fuentes
luminosas pueden emitir en la banda de ultravioleta, a unas
longitudes de onda diferentes, de modo que se permita la medición de
la concentración de diferentes compuestos de la muestra 1, por
ejemplo dos compuestos químicos diferentes de la familia de los
fenilpropanoides, cuyos espectros de absorción presenten máximos a
las longitudes de onda de las dos fuentes luminosas. Los medios de
iluminación que comprenden estas tres fuentes luminosas se han
representado en la figura con la referencia 307.
Los medios de recepción y de análisis 309 son
similares a lo que se ha descrito anteriormente, pero se han
simplificado sensiblemente para la claridad del esquema.
De la misma manera que en el modo de realización
de la figura 3, los medios de recepción y de análisis 309 constan
de medios convertidores 323, de medios de sincronización 341,
conectados por una parte a medios de iluminación 307 y por otra
parte a cada uno de los tres
muestreadores-bloqueadores (o interruptores
analógicos de memoria) 371, 372, 373. De modo análogo a lo que se
ha descrito anteriormente, el primer interruptor 371 está conectado
por una parte a la entrada inversora de un primer amplificador
diferencial 381 y por otra parte a la entrada inversora de un
segundo amplificador diferencial 382. Los otros dos interruptores
372, 373 están conectados cada uno a la entrada no inversora
respectivamente del primer amplificador diferencial 381 y del
segundo amplificador diferencial 382.
Las tres fuentes luminosas de los medios de
iluminación 307 funcionan de forma alternativa en cada periodo de
sincronización, es decir que una de las fuentes emite al valor
máximo de intensidad luminosa en el tercio de un periodo, mientras
que las dos otras fuentes no emiten, emitiendo cada fuente de forma
periódica en el mismo periodo definido por los medios de
sincronización 341. La amplitud de la intensidad de la radiación de
una de las fuentes es constante del mismo modo que la amplitud de la
radiación UV del primer modo de realización, mientras que la
amplitud de la intensidad de la radiación de las otras dos fuentes
está regulada por unos medios análogos a los del primer modo de
realización.
La contribución en la intensidad de la radiación
de fluorescencia detectada, debida a cada radiación cuya intensidad
es de amplitud variable, se compara con la contribución de la
radiación de amplitud constante. Esta diferencia se realiza
mediante los amplificadores diferenciales 381, 382, y se integra en
varios periodos de señal de sincronización, de modo que se
establezcan las señales de referencia en amplitud para las dos
fuentes de alimentación variable. El dispositivo que realiza la
integración de las señales diferenciales y que elabora las señales
de referencia transmitidas a las fuentes luminosas, así como las
señales de medición S_{m1}, S_{m2} transmitidas al ordenador,
se designa en este esquema por la referencia 390. La constitución
de este dispositivo 390 no se describirá con más detalle, puesto que
es suficiente la analogía con el funcionamiento del primer modo de
realización representado en la figura 3, para comprender el
funcionamiento. En este modo de realización, hay dos señales de
medición S_{m1}, S_{m2}, que corresponden respectivamente a la
absorbancia a cada una de las dos longitudes de onda
consideradas.
\vskip1.000000\baselineskip
En la lista de documentos indicados por el
solicitante se ha recogido exclusivamente para información del
lector, y no es parte constituyente del documento de patente
europeo. Ha sido recopilada con el mayor cuidado; sin embargo, la
EPA no asume ninguna responsabilidad por posibles errores u
omisiones.
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet DE 3518527 A1 [0017]
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet Internal filters: prospects for
UV-acclimation in higher plants. Physiol
Plant., 1983, vol. 58, 445-450 [0005]
\bulletLa revue Oikos, 1983,
vol. 40, 357-368 [0006]
\bullet J. P. Bryant.
"Carbon/nutrient balance of boreal plants in relation to
vertebrate herbivory"; dans la revue. Journal of Chemical
Ecology, 1989, vol. 15, 1117-1131
[0006]
\bullet P. Price.
Carbon-nutrient balance hypothesis in
within-species phytochemical variation of Salix
lasiolepis. Quart. Rev. Biol., 1992, vol. 67,
283-335 [0006]
\bullet R.A. Dixon; N. L.
Paiva. Stress-induced phenylpropanoid
metabolism. Plant Cell, 1995, vol. 7,
1085-1097 [0007]
\bullet Analysis of Phenolic Plant
Metabolites. Methods in Ecology. Blackwell Scientific
Publications, 1994, 238 [0009]
\bulletPhysiologia Plantarum, 1997, vol. 101, 754-763 [0020]
Claims (31)
1. Dispositivo de medición de las
características de absorción luminosa de una muestra de tejido
biológico, que consta de:
- -
- unos medios (7; 307) de iluminación de la muestra (1), adaptados para emitir alternativamente al menos una primera y una segunda radiaciones luminosas hacia la muestra, siendo dichas radiaciones respectivamente de una primera y de una segunda longitud de onda diferentes la una de la otra;
- -
- unos medios (9) de recepción y de análisis de la radiación luminosa de salida procedente de la muestra (1), constando dichos medios de recepción y de análisis (9) de medios convertidores (23) de dicha radiación de salida en señal de control (S_{0});
- -
- unos medios de control y mando (31; 331) que reciben de entrada la señal de control (S_{0}) y emiten de salida al menos la primera (S_{1}) y la segunda (S_{2}) señales de mando de los medios de iluminación (7; 307), que corresponden respectivamente a la primera y segunda radiaciones, y al menos una señal de medición (S_{m}); y
- -
- unos medios de cálculo (33) de las características de absorción de la muestra (1), adaptados para recibir de entrada dicha señal de medición (S_{m}) y calcular dichas características en función de dicha señal de medición (S_{m}),
caracterizado, porque dichos medios de
control y mando (31; 331) están adaptados para que la intensidad
luminosa (I_{UV},_{ }I_{R}) de cada una de las radiaciones
varíe de forma periódica, con el mismo periodo, en desfase una con
respecto a la otra, y para regular al menos una de las señales de
mando (S_{1}, S_{2}) en función de la señal de control
(S_{0}), de modo que, en un intervalo de tiempo de integración
(T_{i}) de al menos un periodo (T_{p}) de variación de dichas
radiaciones, la amplitud de dicha señal de control (S_{0}),
tomada en las fases de emisión de una de las radiaciones, sea igual
a la amplitud de la señal de control (S_{o}), tomada en las fases
de emisión de la otra radiación,
y porque la señal de medición (S_{m})
representa al menos una de dichas señales de mando (S_{1},
S_{2}) en el intervalo de tiempo de integración (T_{i}).
2. Dispositivo de medición según la
reivindicación 1, caracterizado porque los medios de control
y mando están adaptados para suministrar una primera señal de mando
(S_{1}), de manera que la amplitud de la intensidad luminosa
(I_{UV}) de la primera radiación sea constante, mientras que la
amplitud de la segunda señal (S_{2}) está regulada por dichos
medios de control y mando (31).
3. Dispositivo de medición según la
reivindicación 2, caracterizado porque dicha señal de
medición (S_{m}) está constituida por dicha segunda señal
(S_{2}) en el intervalo de tiempo de integración (T_{i}).
4. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque los
medios de iluminación constan de la primera (11) y la segunda (12)
fuentes luminosas adaptadas para emitir respectivamente la primera
y la segunda radiaciones, alimentadas eléctricamente por la primera
(15) y la segunda (16) alimentación eléctrics respectivas, estando
dirigidas dichas alimentaciones (15, 16) respectivamente por la
primera y la segunda señales de mando.
5. Dispositivo de medición según la
reivindicación 4, caracterizado porque una al menos de las
fuentes luminosas (11, 12) es un diodo electroluminiscente.
6. Dispositivo de medición según la
reivindicación 4 ó 5, caracterizado porque la primera fuente
luminosa (11) emite la primera radiación en un intervalo de
longitud de onda correspondiente a la banda ultravioleta, en
particular de 300 a 390 nm, en particular aproximadamente 370
nm.
7. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 4 a 6, caracterizado porque la
segunda fuente luminosa (12) emite la segunda radiación en un
intervalo de longitud de onda correspondiente a la banda de la luz
roja, en particular 670 nm.
8. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 4 a 7, caracterizado porque los
medios de iluminación (7; 307) constan de al menos un filtro óptico
(19) adaptado para filtrar las radiaciones de las fuentes luminosas
(11, 12) emitidas hacia la muestra (1).
9. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque los
medios de control y de mando (31; 331) constan de medios de
sincronización (41) conectados a los medios de iluminación (7), que
emiten al menos una señal periódica de sincronización (S_{S})
hacia dichos medios de iluminación (7), de modo que la intensidad
luminosa (I_{UV}, I_{R}) de cada una de las radiaciones varía de
manera periódica, en desfase la una con respecto a la otra.
10. Dispositivo de medición según la
reivindicación 9, caracterizado porque los medios de
sincronización (41) están adaptados para hacer variar la intensidad
luminosa (I_{UV}, I_{R}) de la primera y segunda radiaciones
con una frecuencia superior a un valor mínimo sustancialmente igual
a 1 kHz.
11. Dispositivo de medición según la
reivindicación 9 ó 10, caracterizado porque los medios de
control y mando (31; 331) constan de un dispositivo de mando y
control (43) conectado a los medios de sincronización (41) de tal
modo que reciben la señal de sincronización (S_{S}), y reciben de
entrada la señal de control (S_{0}).
12. Dispositivo de medición según la
reivindicación 11, caracterizado porque dicho dispositivo de
mando y control consta de un filtro de paso alto (51) adaptado para
filtrar la señal de control (S_{0}) de entrada.
13. Dispositivo de medición según la
reivindicación 11 ó 12, caracterizado porque dicho
dispositivo de mando y control (43) consta de un dispositivo
desmultiplicador (53) que recibe de entrada, por una parte una señal
que representa la señal de control (S_{0}) y por otra parte la
señal de sincronización (S_{S}), estando adaptado dicho
dispositivo desmultiplicador para proporcionar de salida una primera
señal elemental (S_{e1}) que representa el nivel de intensidad de
la radiación de salida (I_{F}) durante una fase de emisión de la
primera radiación, y una segunda señal elemental (S_{e2}) que
representa el nivel de intensidad de la radiación de salida durante
una fase de emisión de la segunda
radiación.
radiación.
14. Dispositivo de medición según la
reivindicación 13, caracterizado porque el dispositivo
desmultiplicador (53) consta de al menos dos medios de interrupción
(57, 58) dirigidos alternativamente para abrirse y cerrarse por la
señal de sincronización (S_{S}) y un medio de memorización (60)
asociado a cada uno de dichos medios de interrupción
(57, 58).
(57, 58).
15. Dispositivo de medición según las
reivindicaciones 12 y 13 consideradas en conjunto,
caracterizado porque dicha señal que representa la señal de
control (S_{0}) es la señal de control filtrada por dicho filtro
de paso alto (51).
16. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 13 a 15, caracterizado porque el
dispositivo de mando y control (43) consta de un amplificador
diferencial (55) cuya entrada inversora recibe la primera señal
elemental (S_{e1}) y la entrada no inversora recibe la segunda
señal elemental (S_{e2}).
17. Dispositivo de medición según la
reivindicación 16, caracterizado porque el dispositivo de
mando y control (43) consta de un circuito integrador (61)
alimentado de entrada por la señal de salida de dicho amplificador
diferencial (55) y adaptado para emitir una señal integrada a lo
largo de al menos un periodo de señal de sincronización
(S_{S}).
(S_{S}).
18. Dispositivo de medición según la
reivindicación 17, caracterizado porque dicha señal integrada
constituye la señal de medición (S_{m}).
19. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque los
medios convertidores (23) constan de un fotodetector (25) que
convierte una señal óptica en señal eléctrica, y un preamplificador
(27) de la señal eléctrica procedente de dicho fotodetector
(25).
20. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque los
medios de recepción y análisis (9) constan de un filtro óptico (21)
interpuesto entre la muestra (1) y los medios convertidores
(23).
21. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque los
medios de cálculo (33) está conectados de salida al menos a un
periférico (35), en particular una pantalla de visualización y/o un
dispositivo de almacenamiento de datos.
22. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque los
medios de iluminación (307) están adaptados para emitir
alternativamente tres radiaciones de longitudes de onda diferentes,
estando los medios de control y de mando (331) adaptados para
suministrar tres señales de mando (S_{1}, S_{2}, S_{3})
correspondientes, siendo una primera señal de mando (S_{1}) de
manera que la amplitud de la intensidad luminosa de la primera
radiación sea constante, mientras que las amplitudes de la segunda
(S_{2}) y tercera (S_{3}) señales respectivas están reguladas
por dichos medios de control y de mando (331).
23. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 22, caracterizado porque presenta
una estructura de pinza (100) que consta de dos ramas (101, 102),
articuladas la una sobre la otra de modo que pueden encerrar una
muestra, estando provista la primera rama (101) de medios de
iluminación (7) y estando provista la segunda rama (102) de medios
de recepción y de análisis (9).
24. Dispositivo de medición según una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 22, caracterizado porque consta
de un haz de fibras ópticas (201) por el que transitan la radiación
procedente de los medios de iluminación (7) y la radiación
procedente de la muestra (1), siendo esta última radiación una
radiación reflejada.
\newpage
25. Procedimiento de medición de las
características de absorción luminosa de una muestra de tejido
biológico, en el que se realizan las siguientes operaciones:
- -
- se ilumina la muestra (1) alternativamente con la primera y la segunda radiaciones de longitudes de onda diferentes y de intensidades (I_{UV}, I_{R}) periódicas y del mismo periodo, mediante unos medios de iluminación (7; 307);
- -
- se detecta la radiación procedente de la muestra (1) y se analiza dicha radiación;
- -
- se dirigen dichos medios de iluminación (7; 307) en función de dicha radiación detectada;
caracterizado porque se lleva a cabo
dicha orden del siguiente modo:
- -
- se regula la intensidad de la primera y segunda radiaciones (I_{UV}, I_{R}) de modo que en un intervalo de tiempo de integración (T_{i}) de al menos un periodo (T_{P}) de variación de dichas radiaciones, la intensidad (I_{F}) de la radiación de salida, tomada en las fases de emisión de una de la primera y segunda radiaciones, sea igual a la intensidad (I_{F}) de la radiación de salida, tomada en las fases de emisión de la otra de la primera y segunda radiaciones; y
- -
- se calculan las características de absorción de luz de la muestra en función de la intensidad de referencia de una (I_{R}) de dichas primera y segunda radiaciones, tomada en un intervalo de tiempo de medición (T_{m}).
\vskip1.000000\baselineskip
26. Procedimiento según la reivindicación 25,
caracterizado porque se mantiene constante la amplitud de
intensidad (I_{UV}) de una de dichas primera y segunda
radiaciones, mientras que se regula la amplitud de intensidad
(I_{R}) de la otra de dichas radiaciones.
27. Procedimiento según la reivindicación 25 ó
26, caracterizado porque se filtra la radiación procedente
de la muestra (1) antes de analizarla.
28. Uso del dispositivo según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 24 o procedimiento siguiendo una
cualquiera de las reivindicaciones 25 a 27, para medir las
características de absorción de luz de una hoja de vegetal, en
particular para realizar la medición de la concentración de
compuestos de la familia de fenoles o de fenilpropanoides de una
epidermis de hoja.
29. Uso del dispositivo según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 24 o procedimiento siguiendo una
cualquiera de las reivindicaciones 25 a 27, para calcular las
necesidades nutricionales, en particular de nitrógeno, de un
cultivo.
30. Uso del dispositivo según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 24 o procedimiento siguiendo una
cualquiera de las reivindicaciones 25 a 27, para medir las
características de absorción de luz de un tejido animal o humano
que contiene derivados de hemoglobina.
31. Uso del dispositivo según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 24 o procedimiento siguiendo una
cualquiera de las reivindicaciones 25 a 27, para realizar un
diagnóstico médico o veterinario.
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