ES2349662T3

ES2349662T3 - 2-metileno-18,19-dinor-1alfa-hidroxi-homopregnacalciferol y sus usos.

Info

Publication number: ES2349662T3
Application number: ES05848578T
Authority: ES
Inventors: Lori A. Plum; Hector F. Deluca; Rafal Barycki; Margaret Clagett-Dame
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 2004-11-22
Filing date: 2005-11-18
Publication date: 2011-01-10
Anticipated expiration: 2025-11-18
Also published as: WO2006057932A3; DE602005022098D1; AU2005309747A1; US20060122157A1; JP5043674B2; US7238681B2; NZ555280A; EP1817278A2; JP2008520716A; ATE472528T1; MX2007006544A; CA2588417C; EP1817278B1; WO2006057932A2; CA2588417A1

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula: en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi- protector. caracterizado porque X2 es hidrógeno. caracterizado porque X1 es hidrógeno.

Description

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

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Esta invención describe compuestos de vitamina D, y más particularmente a 2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-homopregnacalciferol y sus usos farmacéuticos.

La hormona natural, 1,25-dihidroxivitamina D3 y su análogo en la serie ergosterol, es decir 1,25-dihidroxivitamina D2 son conocidos por ser 10 reguladores altamente potentes de homeostasis de calcio en animales y humanos, y su actividad en diferenciación celular se ha establecido, Ostrem et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 2610 (1987). Muchos análogos estructurales de estos metabolitos se han preparado y analizado, incluyendo 1-hidroxivitamina D3, 1-dihidroxivitamina D2, varias vitaminas homólogas de cadena lateral y análogos fluorados. Algunos de estos 15 compuestos exhiben una separación interesante de actividades en diferenciación celular y regulación de calcio. Esta diferencia en actividad puede ser útil en el tratamiento de una variedad de enfermedades tales como osteodistrofia renal, raquitismo resistente a vitamina D, osteoporosis, psoriasis, y ciertas malignidades.

Otra clase de análogos de vitamina D, es decir, los llamados 20 compuestos 19-nor-vitamina D, se caracteriza por el reemplazo del grupo metileno exocíclico de anillo A (carbono 19), usual del sistema de vitamina D, por dos átomos de hidrógeno. Análisis biológico de dichos 19-nor-análogos (por ejemplo, 1,25-dihidroxi-19-nor-vitamina D3) revelan un perfil de actividad selectiva con alta potencia en introducir diferenciación celular, y actividad de movilización de calcio muy baja. De esta 25 manera, estos compuestos son potencialmente útiles como agente terapéuticos para el tratamiento de malignidades, o el tratamiento de varios trastornos de la piel. Dos diferentes métodos de síntesis de dichos análogos 19-nor-vitamina D se han descrito (Perlman et al., Tetrahedron Lett, 31, 1823 (1990); Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991), y DeLuca et al., Patente de E.U.A No. 5,086,191). 30

En la Patente de E.U.A. No. 4,666,634, análogos 2-hidroxi y alcoxi (por ejemplo, ED-71) de 1,25-dihidroxivitamina D3 se ha descrito y examinado por grupo Chugai como fármacos potenciales para osteoporosis y unos agentes antitumorales. Véase también Okano et al., Biochem. Biophys. Res. Común 163, 1444 (1989). Otros análogos del anillo A 2-sustituidos (con hidroxialquilo, por ejemplo, ED-35

120, y grupos fluoroalquilo) de 1,25-dihidroxivitamina D3 se han preparado y analizado (Miyamoto et al., Chem. Pharm. Bull. 41, 1111 (1993); Nishii et al., Osteoporosis Int. Suppl. 1, 190 (1993); Posner et al., J. Org. Chem. 59, 7855 (1994), y J. Org. Chem. 60, 4617 (1995)).

Análogos 2-sustituidos de 1,25-dihidroxi-19-nor-vitamina D3 5 también han sido sintetizados, es decir, compuestos sustituidos en la posición 2 con grupos hidroxi o alcoxi (DeLuca et al., Patente de E.U.A. No. 5,536,713), con grupos 2-alquilo (DeLuca et al Patente de E.U.A. No. 5,945,410), y con grupos 2-alquilideno (DeLuca et al Patente de E.U.A. No. 5,843,928), que exhibe perfiles de actividad selectiva e interesante. Todos estos estudios indican que sitios de unión en receptores 10 de vitamina D pueden acomodar diferentes sustituyentes en C-2 en los análogos de vitamina D sintetizados.

En un esfuerzo continuo para explorar la clase 19-nor de compuestos de vitamina D importantes farmacológicamente, análogos que se caracterizan por la presencia de un sustituyente de metileno en carbono 2 (C-2), un 15 grupo hidroxi en el carbono 1 (C-1), y una cadena lateral acortada unida al carbono 20 (C-20) se han sintetizado y analizado. 1-hidroxi-2-metileno-19-nor-pregnacalciferol se describe en Patente de E.U.A. 6,566,352 mientras 1-hidroxi-2-metileno-19-nor-homopregnacalciferol se describe en Patente de E.U.A. 6,579,861 y 1-hidroxi-2-metileno-19-nor-bishomopregnacalciferol se describe en la patente de E.U.A. 6,627,622. 20 Todos los tres de estos compuestos tienen actividad de unión relativamente alta al receptor de vitamina D y actividad de diferenciación celular relativamente alta, pero pequeña si cualquier actividad calcémica como la comparada con 1,25-dihidroxivitamina D3. Sus actividades biológicas hacen estos compuestos excelentes candidatos para una variedad de usos farmacéuticos, como se expone en las patentes 25 „352, „861 y „622.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION

La presente invención está dirigida hacia análogos de 2-metileno-30 18,19-dinor-vitamina D, y más específicamente hacia 2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-homopregnacalciferol, su actividad biológica, y varios usos farmacéuticos para estos compuestos.

Estructuralmente estos análogos de 2-metileno-18,19-dinor-vitamina D se caracterizan por la fórmula general I mostrada posteriormente: 35

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5

en donde X1 y X2, que pueden ser lo mismo o diferente, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo protector hidroxi. El análogo preferido es 2-metileno-18,19-10 dinor-1-hidroxi-homopregnacalciferol que tiene la siguiente fórmula Ia:

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Los compuestos I anteriores, y particularmente Ia, exhiben un patrón deseado, y altamente ventajoso de actividad biológica. Estos compuestos se 20 caracterizan por unión relativamente alta a receptores de vitamina D, pero actividad de transporte de calcio intestinal muy baja, como la comparada con la 1,25-dihidroxivitamina D3, y tienen capacidad muy baja para movilizar calcio de huesos, como la comparada con 1,25-dihidroxivitamina D3. Por lo tanto, estos compuestos se pueden caracterizar como que tienen poca, si existe, actividad calcémica. Es 25 indeseable elevar el calcio de suero a niveles suprafisiológicos cuando suprimen el gen hormonal preproparatiroide (Darwish & DeLuca Arch, Biochem, Biophys, 365, 123-130, 1999) y proliferación de la glándula paratiroide. Estos análogos que tienen poca o nada de actividad calcémica mientras es muy activa en la diferenciación se espera que sean útiles como una terapia para supresión de hiperparatiroidismo secundario de 30 osteodistrofia renal.

Los compuestos I, y particularmente Ia, de la invención también se ha descubierto que son específicamente adecuados para el tratamiento y profilaxis de trastornos humanos que se caracterizan por un desequilibrio en el sistema inmune, por ejemplo, en enfermedades auto-inmunes, que incluyen esclerosis múltiple, lupus, 35 diabetes mellitus, huésped contra rechazo de injerto, y rechazo de transplantes de

órgano, y adicionalmente para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, tales como artritis reumatoide, asma, y enfermedades inflamatorias de intestino tales como enfermedad celiaca, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. Acné, alopecia e hipertensión son otras condiciones que se pueden tratar con compuestos de la invención. 5

Los compuestos I anteriores, y particularmente Ia, también se caracterizan por actividad de diferenciación celular relativamente alta. De esta manera, estos compuestos también proveen agentes terapéuticos para el tratamiento de soriasis, o como un agente anti-cancerígeno, especialmente contra leucemia, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de la piel y cáncer de próstata. Además, debido a su 10 actividad de diferenciación celular relativamente alta, estos compuestos proveen un agente terapéutico para el tratamiento de varias condiciones de la piel que incluyen arrugas, falta de hidratación dérmica adecuada, es decir, piel seca, falta de firmeza de la piel adecuada, es decir, piel flácida, y secreción de sebo insuficiente. Uso de estos compuestos de esta manera no solamente resulta en humectación de la piel sino 15 también mejora la función barrera de la piel.

Los compuestos de la invención de fórmula I, y particularmente fórmula Ia, también son útiles en prevenir o tratar obesidad, inhibir diferenciación de adiposito, inhibir la transcripción genética SCD-1, y/o reducir la grasa corporal en sujetos animales. Por lo tanto, en algunas modalidades, un método para prevenir o 20 tratar obesidad, inhibir diferenciación de adiposito, inhibir transcripción genética de SCD-1, y/o reducir la grasa corporal en un sujeto animal incluye la administración al sujeto animal, de una cantidad efectiva de uno o más de los compuestos o una composición farmacéutica que incluye uno o más de los compuestos de fórmula I. La administración de uno o más de los compuestos o composiciones farmacéuticas al 25 sujeto inhibe diferenciación de adiposito, inhibe transcripción de gen y/o reduce grasa corporal en el sujeto animal.

Uno o más de los compuestos puede estar presente en una composición para tratar las enfermedades y trastornos anotados anteriormente en una cantidad de aproximadamente 0.01 g/gm a aproximadamente 1000 g/mg de la 30 composición, preferiblemente de aproximadamente 0.1 g/mg a aproximadamente 500 g/mg de la composición, y se pueden administrar tópicamente, transdérmicamente, oralmente, rectalmente, nasalmente, sublingualmente o parenteralmente en dosificaciones de aproximadamente 0.01 g/día a aproximadamente 1000 g/día, preferiblemente de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 500 g/día. 35

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

Las figuras 1-5 ilustran varias actividades biológicas de 2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-homopregnacalciferol, más adelante referido como “18,19-dinor-2MP”, como la comparada con la hormona nativa 1,25-dihidroxivitamina 5 D3, más adelante “1,25(OH)2D3”.

La figura 1 es una gráfica que ilustra la actividad relativa de 18,19-dinor-2MP y 1,25(OH)2D3 para competir por la unión con [3H]-1,25-(OH)2-D3 al receptor de vitamina D de rata recombinante de longitud completa.

La figura 2 es una grafica que ilustra el porcentaje de 10 diferenciación celular HL-60 como una función de la concentración de 18,19-dinor-2MP y 1,25(OH)2D3.

La figura 3 es una grafica que ilustra la actividad de transcripción in vitro de 1,25(OH)2D3 como la comparada con 18,19-dinor-2MP.

La figura 4 es una gráfica de barras que ilustra la actividad de 15 movilización de calcio óseo de 1,25(OH)2D3 así como el compuesto 2-metileno-19-nor-1-hidroxi-homopregnacalciferol (más adelante referido como “2-MP”), como la comparada con 18,19-dinor-2MP; y

La figura 5 es una grafica de barras que ilustra la actividad de transporte de calcio intestinal de 1,25(OH)2D3 así como 2-MP, como la comparada con 20 18,19-dinor-2MP.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

Se sintetiza y se analiza 2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-25 homopregnacalciferol (referido aquí como 18,19-dinor-2MP). Estructuralmente, este análogo de 2-metileno-18,19-dinor vitamina D se caracteriza por la fórmula general Ia previamente ilustrada aquí, y su pro-fármaco (en forma de hidroxi protegido) se caracteriza por la fórmula general I previamente ilustrada aquí.

La preparación de 2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-30 homopregnacalciferol que tiene la estructura Ia y su pro-fármaco se puede realizar por un método general común, es decir, la condensación de una cetona II tipo Windaus-Grundmann bicíclica con el óxido de fosfina alílica III al análogo IV de 2-metileno-18,19-dinor-vitamina D correspondiente seguido por la desprotección en C-1 y C-3 en el compuesto tardío: 35

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En las estructuras III y IV, grupos X1 y X2 son grupos protectores hidroxi, preferiblemente t-butildimetilsililo, también siendo entendido que cualquiera de las funcionalidades que deben ser sensibles, o que interfieren con la reacción de 10 condensación, sean protegidas adecuadamente como es bien conocido en la técnica. El procedimiento mostrado anteriormente representa una aplicación del concepto de síntesis convergente, que se ha aplicado efectivamente para la preparación de compuestos de vitamina D [por ejemplo, Lythgoe et al., Chem. Soc. Perkin Trans. I, 590 (1978); Lythgoe, Chem. Soc. Rev. 9, 449 (1983); Toh et al., J. Org. Chem 48, 1414 15 (1983); Baggiolini et al., J. Org. Chem. 51 3098 (1986); Sardina et al., J. Org. Chem 51, 1264 (1986); J. Org. Chem. 51, 1269 (1986); DeLuca et al., Patente de E.U.A. No. 5,086,191; DeLuca et al., Patente de E.U.A. No. 5,536,713].

La hidrindanona de la estructura general II no es conocida. Se puede preparar por el método mostrado en el esquema I aquí (véase la preparación del 20 compuesto 18,19-dinor-2MP).

Para la preparación de los óxidos de fosfina requerido de estructura general III, una ruta sintética se ha desarrollado iniciando a partir de un derivado de quinicato de metilo que se obtiene fácilmente a partir de ácido (1R,3R,4S,5R)-(-)-quinínico comercial como se describe por Perlman et al., 25 Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991) y DeLuca et al., Patente de E.U.A. No. 5,086,191.

El procedimiento completo de la síntesis de compuestos I y Ia es similar al procedimiento descrito en la Patente de E.U.A. No. 5,843,928 titulada “Compuestos 2-alquilideno-19-nor-vitamina D” la especificación de la cual se incorpora específicamente aquí para referencia. 30

Como se usa en la descripción y en las reivindicaciones, el término “grupo protector hidroxi” significa cualquier grupo comúnmente usado para la protección temporalmente de funciones hidroxi, tal como por ejemplo, grupos alcoxicarbonilo, acilo, alquilsililo o alquilarilsililo (más adelante referido simplemente como grupos “sililo”), y grupos alcoxialquilo. Grupos protectores alcoxicarbonilo son 35 agrupaciones alquil-O-CO- tal como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo,

isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, isobutoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo o alquiloxicarbonilo. El término “acilo” significa un grupo alcanoilo de 1 a 6 carbonos, en todas sus formas isoméricas, o un grupo carboxialcanoilo de 1 a 6 carbonos, tal como un grupo oxalilo, malonilo, succinilo, glutarilo o un grupo acilo aromático tal como un grupo benzoilo, o un halo, nitro o benzoilo sustituido con alquilo. 5 La palabra “alquilo” como se usa en la descripción o las reivindicaciones, denota un radical alquilo de cadena recta o ramificada de 1 a 10 carbonos, en todas sus formas isoméricas. Grupos protectores alcoxialquilo son agrupaciones tal como metoximetilo, etoximetilo, metoxietoximetilo o tetrahidrofuranilo y tetrahidropiranilo. Grupos protectores sililo preferidos son trimetilsililo, trietilsililo o t-butildimetilsililo, 10 dibutilmetilsililo, difenilmetilsililo, fenildimetilsililo, difenil-t-butilsililo y radicales sililo alquilados análogos. El término “arilo” especifica un fenilo o un grupo fenilo alquil-, nitro- o halo-sustituido.

Un grupo “hidroxi protegido” es un grupo hidroxi derivado o protegido por cualquiera de los grupos anteriores comúnmente usados para la 15 protección temporalmente o permanente de funciones hidroxi, por ejemplo, los grupos sililo, alcoxialquilo, acilo o alcoxicarbonilo, como se define previamente. Los términos “hidroxialquilo”, “deuterioalquilo” y “fluoroalquilo” se refieren a un radical alquilo sustituido por uno o más grupos hidroxi, deuterio o fluoro respectivamente.

Más específicamente, la referencia se debe hacer a la siguiente 20 descripción así como al esquema I aquí para una ilustración detallada de la preparación del compuesto 18,19-dinor-2MP.

ESQUEMA I

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(i) O3, MeOH, py, NaBH4, 76%. (ii) TsCI, Et3N, DMAP, CH2CI2, 97%. (iii) LIAIH4, Et2O, 85%. (iv) t-BuONO, CHCI3. (v) hv, C6H6; i-PrOH, 67% (de 3). (vi) Ac2O, 98%. (vii) MeONa/MeOH, 97%. (viii) K, HMPA, t-BuOH, Et2O, 69%. (ix) PDC, PPTS, CH2CI2, 81%. (x) 10, PhLI, THF, 64%. (xi) CSA, n-BuOH, 93%. 10

Des-A,B-23,24-dinorcolano-8-22-diol (1)

Una solución de vitamina D2 (5 g, 12.7 mmol) en metanol (400 ml) y piridina (5 ml) se enfría a -78°C mientras se purga con argón. La corriente de argón se detiene y la corriente de ozono se pasa hasta que el color azul aparece. La solución 15 se purga con oxígeno hasta que el color azul desaparece y se trata con NaBH4 (1.2 g, 32 mmol). Después de 20 minutos, la segunda porción de NaBH4 (1.2 g, 32 mmol) se añade y la reacción se deja calentar a temperatura ambiente. La tercera porción de NaBH4 (1.2 g, 32 mmol) se añade y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se templa con 70 ml de agua y se concentra bajo 20 vacío. El residuo se extrae con cloruro de metileno (3 x 100 ml). La fase orgánica se lava con solución acuosa 1M de HCl (2 x 100 ml), solución acuosa saturada de NaHCO3 (100 ml), se seca sobre MgSO4 anhidro y se concentra bajo vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía instantánea (25% de acetato de etilo/hexano) para producir 2.05 g (9.69 mmol, 76% de rendimiento) de diol 1 como cristales blancos. []D 25 + 56.0 (c 0.95, CHCl3); p.f. 110-111°C;

1H NMR (400 MHz, CDCl3)  0.96 (3H, s), 1.03 (3H, d, J= 6.6 Hz), 3.38 (1H, dd, J= 10.5 Hz, J= 6;8 Hz), 3.64 (1H, dd, J= 10.5 Hz, J= 3.2 Hz), 4.09 (1H, d, J = 2.3 Hz);

13C NMR (100 MHz, CDCl3)  13.6, 16.6, 17.4, 22.6, 26.6, 33.5, 30 38.2, 40.2, 41.3, 52.3, 52.9, 67.8, 69.2; MS (EI) m/z 212 (2, M+), 194 (17), 179 (18), 163 (10), 135 (19), 125 (34), 111 (100); masa exacta calculada para C13H22O ([M-H2O]+) 194.1671, encontrado 194.1665.

Des-A,B-23,24-dinor-22-(tosiloxi)colano-8-ol (2) 35

A una solución agitada de 1 (450 mg, 2.12 mmol), trietilamina

(975 l, 708 mg, 7.00 mmol) y DMAP (20 mg, 0.16 mmol) en dicloruro de metileno anhidro (20 ml) cloruro de tosilo (444 mg, 2.33 mmol) se añade a 0°C. La mezcla de reacción se mantiene a 4°C toda la noche. Después dicloruro de metileno (30 ml) se añade y la mezcla de reacción se lava con solución acuosa saturada de NaHCO3 (2 x 30 ml), se seca sobre Na2SO4 anhidro y se concentra bajo presión reducida. El residuo 5 se purifica mediante cromatografía de columna (25-30% de acetato de etilo/hexano) para proporcionar 754 mg (2.06 mmol, 97% de rendimiento) de 2. []D + 21.0 (c 1.10, CHCl3);

1H-NMR (500 MHz, CDCl3) 6 0.89 (3H, s), 0.96 (3H, d, J=.6.7 Hz), 2.45 (3H, s), 3.81 (IH, dd, J= 9.2 Hz, J= 6.2 Hz), 3.95 (2H, dd, J= 9.2 Hz, J= 3.0 Hz), 10 4.07 (1H, br d), 7.34 (2H, d, J= 8.2 Hz), 7.78 (2H, d, J= 8.2. Hz);

13C NMR (125 MHz, CDCl3) 6 13.4, 16.8, 17.3, 21.6, 22.4, 26.4, 33.5, 35.7, 40.0, 41.8, 52.2, 69.0, 75.6, 127.9, 129.8, 133.1, 144.6; MS (EI) m/z 366 (7, M+), 348 (5), 194 (16), 179 (19), 161 (11), 155 (19), 150 (16), 135 (15), 125 (37), 111 (100); masa exacta calculada para C20H30O4S 366.1865, encontrado 366.1876. 15

Des-A,B-23,24-dinorcolano-8-ol (3)

A una suspensión agitada de LiAlH4 (290 mg, 7.65 mmol) en dietil éter (30 ml) una solución de 2 (700 mg, 1.91 mmol) en dietil éter (20 ml) se añade gota a gota vía cánula. La mezcla de reacción se agita durante 1 hora bajo argón. Después 20 varias gotas de acetato de etilo, solución acuosa al 5% de HCl (25 ml, a 0°C) y agua (30 ml) se añade y la mezcla se extrae con dietil éter (3 x 40 ml). La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 anhidro, se concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica mediante cromatografía de columna (5-10% de acetato de etilo/hexano) para proporcionar 320 mg (1.60 mmol, 85% de rendimiento) de 3. []D + 23.5 (c 0.90, CHCl3); 25

1HNMR (400 MHz, CDCl3)  0.84 (3H, d5 J= 6.6 Hz), 0.91-0.93 (6H, m), 4.07 (1H, br d, J- 2.2 Hz);

13C NMR (100 MHz, CDCl3)  13.6; 17.4, 22.4, 22.5, 23.0, 27.4, 30.5, 33.5, 40.3, 41,8, 52.6, 58.7, 69.4; MS (EI) m/z 196(15, M+), 181 (16), 135 (13), 125 (16), 111 (100); masa exacta calculada para C13H24O 196.1827, encontrado 30 196.1828.

Nitrito de des-A,B-23,24-dinorcolano-8-ilo (4)

A una solución agitada de 3 (285 mg, 1.53 mmol) en cloroformo (8 ml) nitrito de terc-butilo (2.2 ml) se añade gota a gota en oscuridad. Después de 1 35

hora se añade benceno y se remueven solventes bajo presión reducida.

(18E)-18-(hidroxiimino)-des-A,B-23,24-dinorcolano-8-ol (5)

Se disuelve nitrito crudo en benceno anhidro (150 ml) y se irradia en un aparato que consiste de un recipiente Pyrex con un pozo de inmersión enfriado 5 con agua y lámpara de arco de mercurio de alta presión Hanovia equipada con filtro Pirex. Una corriente lenta de argón se pasa a través de la solución y la temperatura se mantiene a aproximadamente 10°C. Un progreso de reacción se monitorea por TLC. Después de 45 minutos, la reacción se completa. Se remueve benceno bajo presión reducida y el residuo se disuelve en 2-propanol (5 ml) y se mantiene toda la noche para 10 realizar isomerización de un compuesto nitroso a una oxima. El solvente se evapora y el residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (15-25% de acetato de etilo/hexano) para proporcionar 230 mg (1.02 mmol, 67% de rendimiento iniciando de 3) de 5. []D + 45.7 (c 0.90, CHCl3), p.f. 144°C;

1HNMR (400 MHz, CDCl3)  0.88 (3H, d, J= 6.5 Hz), 1.02 (3H, d, 15 J= 6.5 Hz), 2.20 (1H, d, J= 13.2 Hz), 4.04 (1H, s), 6.78 (1H, s), 7.34 (1H, s), 10.94 (1H, s);

13C NMR (100 MHz, CDCl3)  17.4, 21.9, 22.3, 23.1, 27.7, 30.9, 34.2, 36.5, 49.5, 52.5, 58.9, 67.5, 151.9; MS (EI) m/z 225 (20, M+), 208 (92), 190 (70), 183 (78), 175 (40), 164 (43), 136 (66), 121 (51), 87 (100);masa exacta (ESI) calculado 20 para C13H23NO2Na ([M+Na]+) 248.1626, encontrado 248.1620.

8-(Acetoxi)-des-A,B-23,24-dinorcolano-18-nitrilo (6)

Una solución de 5 (220 mg, 0.98 mmol) en anhídrido acético (15 ml) se calienta a reflujo durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se enfría, se vierte en 25 cuidadosamente en hielo y se extrae con benceno (3 x 60 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavan con solución acuosa saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml), agua (30 ml), se seca sobre Na2SO4 anhidro y se evapora. El residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (8-10 % de acetato de etilo/hexano) para proporcionar 239 mg (0.96 mmol, 98% de rendimiento) de 6. []D -5.2 (c 0.95, CHCl3); 30 p.f. 40°C.

1HNMR (400 MHz, CDCl3)  0.94 (3H, d, J= 6.6 Hz), 1.05 (3H, d, J= 6.6 Hz), 2.14 (3H, s), 2.49 (IH, br d, J= 13.8 Hz), 5.20 (IH, s);

13C NMR (100 MHz, CDCl3)  18.7, 20.9, 22.3, 23.4, 27.4, 29.8, 32.1, 36.2, 45.7, 51.9, 56.2, 68.6, 121.1, 170.9; MS (EI) m/z 249 (2, M+), 224 (9), 207 35

(66), 189 (43), 183 (100); masa exacta calculada para C15H23NO2 249.1729, encontrado 249.1733.

Des-A,B-23,24-dinorcolano-18-nitrilo-8-ol (7)

Se disuelve 6 (225 mg, 0.90 mmol) en metanol (10 ml) y se trata 5 con 10% de solución de MeONa en metanol (10 ml) durante 2 horas. Después de que el solvente se remueve bajo presión reducida, el residuo se trata con agua (20 ml) y solución acuosa saturada de NH4Cl (15 ml) y se extrae con dicloruro de metileno (3 x 50 ml). La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 anhidro y se evapora. El residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (20-30% de acetato de 10 etilo/hexano) para proporcionar 180 mg (0.87 mmol, 97% de rendimiento) de 7. []D + 20.6 (c 1.15, CHCl3);

1H NMR (500 MHz, CDCl3)  0.94 (3H, d, J= 6.6 Hz), 1.04 (3H, d, J= 6.6 Hz), 2.46 (1H, br d, J= 13.0 Hz), 4.11 (1H, m);

13C NMR (125 MHz, CDCl3)  18.0, 22.2, 22.2, 23.0, 27.5, 32.0, 15 32.7, 36.3, 44.9, 53.4, 56.2, 67.4, 122.3; MS (EI) m/z 207 (14, M+), 180 (16), 174 (26), 162 (39), 147 (20), 136 (39), 121 (100); masa exacta calculada para C13H21NO 207.1623, encontrado 207.1618.

Des-A,B-18,23,24-trinorcolano-8-ol (8) 20

A una mezcla agitada de potasio (270 mg, 6.75 mmol) en HMPA (950 l, 979 mg, 5.46 mmol) y dietil éter (2 ml) una solución de 7 (185 m g, 0.89 mmol) en alcohol terc-butílico (220 l) y dietil éter (850 l) se añade gota a gota a 0°C bajo argón. La mezcla se deja calentar a temperatura ambiente y se agita toda la noche. Se remueve el potasio restante, algunas gotas de 2-propanol y benceno (40 ml) se añaden. 25 La fase orgánica se lava con agua (10 ml), se seca sobre Na2SO4 y se concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (5-10% de acetato de etilo/hexano) para proporcionar 112 mg (0.62 mmol, 69% de rendimiento) de 8. []D + 54.9 (c 0.85, CHCl3);

1H NMR (500 MHz, CDCl3)  0.82 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.90 (3H, d, 30 J = 6.8 Hz), 1.83 (1H, br dd, J= 13.4 Hz, J= 2.3 Hz), 1.92 (1H, br dd, J=.12.5 Hz, J= 2.3 Hz), 4.07 (1H, s);

13C NMR (125 MHz, CDCl3)  18.1, 20.8, 21.8, 24.0 24.6, 29.4, 31.1. 33.2, 40.1, 50.1, 50.3, 67.9; MS (EI) m/z 163 (4), 149 (3), 1.39 (12), 121 (100); masa exacta calculada para C9H15O ([M-C3H7]+) 139.1123, encontrado 139.1124. 35

Des-A,B-18,23,24-trinorcolano-8-ona (9)

A una solución agitada de 8 (15 mg, 82 mol) y PPTS (2-cristales) en dicloruro de metileno (4 ml) PDC (110 mg, 290 mol) se añade a 0°C. Después de 5 minutos, el baño de enfriamiento se remueve y la mezcla de reacción se agita durante 5 6 horas. Después el solvente se remueve bajo presión reducida y el residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (2-5% de acetato de etilo/hexano) para proporcionar 12 mg (67 mol, 81% de rendimiento) de 9.

1H NMR (400 MHz, CDCl3)  0.82 (3H, d, J= 6.8 Hz), 0.92 (3H5 d, J = 6:8 Hz); 10

13C NMR (100 MHz, CDCl3)  18,0, 21.4, 21.6, 24.1, 27.8, 29.3, 30.3, 41.5, 51.3, 51.6, 58.3, 212.0; MS (EI) m/z 180 (4O5 M+), 137 (100); masa exacta calculada para C12H20O 180.1514, encontrado 180.1520.

2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-homopregnacalciferol (12) 15

A una solución agitada de óxido de fosfato 10 (45 mg, 77 mol) en THF anhidro (600 l) una solución 1.5 M de fenilo litio en THF (75 l, 105 mol) se añade a -20°C bajo argón. La mezcla se agita durante 20 minutos y después se enfría a -78°C. Una solución pre-enfriada de 9 (6 mg, 33 mol) en THF anhidro (200 l) se añade vía cánula y la mezcla de reacción se agita durante 3 horas a -78°C. Después la 20 mezcla de reacción se agita a 4°C toda la noche. Se añade acetato de etilo y la fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre Na2SO4 anhidro y se concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (hexano a 3% de acetato de etilo/hexano) y después en HPLC (0.03% de 2-propanol/hexano, 4 ml/min; Zorbax-sílice 10 x 250 mm) para proporcionar 11.4 mg (21 25 mmol, 64% de rendimiento) de 11 a Rt = 7.08 minutos. UV (hexano) max = 242, 250, 261 nm;

1H NMR (400 MHz, CDCl3)  0.03 (3H, s), 0.04 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.08 .(3H, s), 0.80 (3H, d, J= 6,8 Hz), 0.86 (9H, s), 0.89 (9H, s), 2.18 (1H, dd, J= 12.4 Hz, J= 7.7 Hz), 2.86 (1H, br d, J = 13.8 Hz), 4.42 (1H, m), 4.93 (1H, s), 4.96 (1H, s), 30 5.93 (1H, d, J= 11.2 Hz), 6.20 (1H, d, J= 11.2 Hz);

13C NMR (100 MHz, CDCl3)  -5.1,-4.9, 4.8, 18.2, 18,2, 18.3, 21.6, 24.6, 25.8, 25.8, 27.8, 28.9, 29.8, 31.9, 38.7, 47.5, 50.7, 50.8, 52.7, 71.9, 72.3, 106.3, 113.7, 122.4, 132.9, 143.7, 153.0; MS (ET) m/z 544 (3, M+), 448 (9), 412 (36), 366 (14), 313 (11), 290 (100); masa exacta calculada para C33H60O2Si2 544.4132, encontrado 35

544.4131.

A una solución agitada de 11 (11 mg, 20 mol) en n-butanol anhidro (1 ml), ácido (1S)-(+)-10-canforsulfónico (7 mg, 30 mol) se añade a 0°C. Entonces se retira el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agita durante 4 días. Después que la solución acuosa saturada de NaHCO3 (1 ml) y agua (3 ml) se 5 añaden y la mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 7 ml). La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 anhidro, se concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica en un cartucho Sep-Pack de gel de sílice Waters (acetato de etilo/hexano 20-30%). La vitamina cruda se purifica nuevamente en HPLC (2-propanol/hexano 10%, 4 ml/minuto, 10 x 250 mm Zorbax-sílice) para dar 6 mg (19 mol, rendimiento del 93%) de 12 a Rt = 10 7.78 minuto. UV (EtOH) max = 242, 250, 260 nm;

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.80 (3H, d, J= 6.8 Hz), 0.88 (3H, d, J= 6.8 Hz), 2.58 (1H, dd, J= 13.2 Hz, J= 3.8 Hz), 4.48 (1H, br s), 5.09 (1H, s), 5.10 (1H, s), 5.97 (1H, d, J= 11.3 Hz), 6.35 (1H, d, J= 11.3 Hz);

13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.3, 21.7, 24.5, 25.8, 27.8, 29.1, 15 29.8, 31.7, 38.0, 45.9, 50.7, 50.9, 52.7, 70.9, 71.7, 107.7, 112.9, 124.3, 130.7, 146.0, 152.0, MS (EI) m/z 316 (14, M+), 298 (10), 280 (15), 237 (19), 84 (71), 66 (100); masa exacta calculada para C21H32O2 316.2402, encontrada 316.2387.

ACTIVIDAD BIOLOGICA DE 2-METILENO-18,19-DINOR-1-HIDROXI-20 HOMOPREGNACALCIFEROL

La introducción de un grupo metileno a la posición-2, la sustitución de un hidrógeno para el metilo normalmente encontrado en la posición 18, y la eliminación de carbonos 23, 24, 25, 26 y 27 en la cadena lateral de 1-hidroxi-19-25 nor-vitamina D3 tiene poco o ningún efecto sobre la unión al receptor de vitamina D recombinante de rata de longitud completa, en comparación con 1α,25-hidroxivitamina D3. El compuesto 18,19- dinor-2MP unido una quinta parte también al receptor en comparación con el estándar 1,25-(OH)2D3 (Figura 1). Se podría esperar de estos resultados que el compuesto 18,19-dinor-2MP que tiene actividad biológica similar. 30 Sorprendentemente, sin embargo, el compuesto 18,19-dinor-2MP es un análogo muy selectivo con actividad biológica única.

La figura 5 muestra que 18,19-dinor-2MP no tiene actividad medible en comparación con aquella de 1,25-dihidroxivitamina D3 (1,25(OH)2D3), la hormona natural, en la estimulación del transporte de calcio intestinal. 35

La figura 4 demuestra que 18,19-dinor-2MP no tiene actividad de movilización de calcio óseo medible, en comparación con 1,25(OH)2D3.

Las figuras 4 y 5 muestran que por lo tanto 18,19-dinor-2MP puede ser caracterizado por tener poca, si es que la hay, actividad calcémica.

La figura 2 muestra que 18,19-dinor-2MP es casi tan potente 5 como 1,25(OH)2D3 en la diferenciación de células HL-60, haciéndolo un excelente candidato para el tratamiento de psoriasis y cáncer, especialmente contra la leucemia, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de piel y cáncer de próstata. Además, debido a su actividad de diferenciación celular relativamente alta, este compuesto proporciona un agente terapéutico para el tratamiento de diversas condiciones de la 10 piel como arrugas, la falta de una adecuada hidratación dérmica, es decir, piel seca, la falta de firmeza de la piel adecuada, es decir, piel floja, e insuficiente secreción de sebo. El uso de este compuesto no sólo resulta, por lo tanto, en la hidratación de la piel sino que también mejora la función de barrera de la piel.

La Figura 3 muestra que el compuesto 18,19-dinor-2MP tiene una 15 décima parte de la actividad transcripcional de 1α,25-dihidroxivitamina D3 en células óseas. Este resultado, junto con la actividad de diferenciación de células de la figura 2, indica que 18,19-dinor-2MP será muy eficaz en la psoriasis, ya que tiene una actividad directa celular en la causa de la diferenciación celular y en la supresión del crecimiento celular. Estos datos también indican que 18,19-dinor-2MP puede tener una importante 20 actividad como un agente anti-cáncer, especialmente contra la leucemia, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de piel y cáncer de próstata.

La fuerte actividad de 18,19-dinor-2MP en la diferenciación HL-60 y aumento de la transcripción de genes sugieren que será activo en la supresión del crecimiento de glándulas paratiroides y en la supresión del gen preproparatiroide. 25

METODOS EXPERIMENTALES

Unión del receptor de vitamina D

30

Material de prueba

Fuente de proteínas

El receptor de rata recombinante de longitud completa se expresa en células Codón Plus RIL E.coli BL21 (DE3) y se purifica a homogeneidad mediante 35 dos sistemas diferentes de cromatografía en columna. El primer sistema es una resina

de afinidad de níquel que utiliza la etiqueta de histidina C-terminal en esta proteína. La proteína que se eluye de esta resina se purifica aún más usando cromatografía de intercambio iónico (S-Sefarosa, Flujo rápido). Las alícuotas de la proteína purificada se congelan rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenan a -80°C hasta su uso. Para su uso en ensayos de unión, la proteína se diluye en TEDK50 (50 mM Tris, 1.5 mM 5 EDTA, pH7.4, 5 mM DTT, 150 mM KCl) con 0.1 % de detergente Chaps. La proteína del receptor y la concentración de ligando se optimizan de tal manera que no más del 20% del ligando añadido radiomarcado se une al receptor.

Fármacos de estudio 10

Ligandos no marcados se disuelven en etanol y las concentraciones se determinan mediante espectrofotometría UV (1,25(OH)2D3: coeficiente de extinción molar = 18,200 y λmax = 265 nm; Análogos: coeficiente de extinción molar = 42,000 y λmax= 252 nm). Ligando radiomarcado (3H-1,25(OH)2D3, ~159 Ci/mmol) se añade en etanol con una concentración final de 1 nM. 15

Condiciones del ensayo

Ligandos radiomarcados y no marcados se añaden a 100 mcl de la proteína diluida a una concentración de etanol final de  10%, se mezclan y se incuban en hielo durante la noche para alcanzar el equilibrio de unión. Al día siguiente, 20 100 mcl de suspensión de hidroxiapatita (50%) se añade a cada tubo y se mezcla a intervalos de 10 minutos durante 30 minutos. La hidroxilapaptita se recolecta por centrifugación y se lavan entonces tres veces con regulador de pH Tris-EDTA (50 mM Tris, 1.5 mM EDTA, pH 7.4) que contiene 0.5% Titron X-100. Después del último lavado, las pellas se transfieren a viales de centelleo que contienen 4 ml de cóctel de 25 centelleo Biosafe II, se mezclan y se colocan en un contador de centelleo. Unión total de se determina a partir de los tubos que contienen sólo ligando radiomarcado.

Diferenciación HL-60

Material de prueba 30

Fármaco de estudio

Los fármacos del estudio se disuelven en etanol y las concentraciones se determinan mediante espectrofotometría con UV. Una serie de diluciones se preparan de manera que una gama de concentraciones del fármaco se 35 puedan analizar sin cambiar la concentración final de etanol ( 0.2%) presentes en los

cultivos celulares.

Células

Células de leucemia promielocítica humana (HL60) se desarrollan en medio RPMI-1640 que contiene 10% de suero fetal bovino. Las células se incuban a 5 37°C en presencia de 5% de CO2.

Condiciones del ensayo

Células HL60 se colocan en placas en 1.2x105 células/ml. Dieciocho horas después de la colocación, las células por duplicado se tratan con el 10 fármaco. Cuatro días después, las células se recolectan y un ensayo de reducción de tetrazolio nitro azul se lleva a cabo (Collins et al., 1979; J. Exp. Med. 149:969-974). El porcentaje de células diferenciadas se determina contando un total de 200 células y registrando el número que contiene depósitos intracelulares formazan negro-azul. Verificación de la diferenciación a células monocíticas se determina midiendo la 15 actividad fagocítica (datos no mostrados).

Ensayo de transcripción in vitro

La actividad de transcripción se mide en células ROS 17/2.8 (hueso) que se transfectan establemente con un promotor de genes 24-hidroxilasa (24Ohasa) corrientes arriba de un gen reportero de luciferasa (Arbour et al., 1998). Las 20 células se proporcionan en un intervalo de dosis. Dieciséis horas después de la administración de las dosis las células se recolectan y las actividades de luciferasa se miden utilizando un luminómetro.

RLU = unidades de luciferasa relativa 25

Transporte de calcio intestinal y movilización de calcio óseo

Ratas Sprague-Dawley, destetadas, macho se ponen a dieta 11 (0.47% Ca) AEK+dieta durante una semana seguido de dieta 11 (0.02% Ca) AEK+ durante 3 semanas. Las ratas después se cambian a una dieta que contiene 0.47% de 30 Ca durante una semana seguido de dos semanas en una dieta que contiene 0.02 % de Ca. La administración de dosis se inicia durante la última semana con dieta de calcio 0.02%. Cuatro dosis ip consecutivas se dan aproximadamente con 24 horas de diferencia. Veinticuatro horas después de la última dosis, se recolecta sangre del cuello cortado y la concentración de calcio en suero se determina como una medida de la 35 movilización de calcio óseo. Los primeros 10 cm del intestino también se recolecta para

el análisis de transporte de calcio intestinal mediante el método del saco intestinal con eversión.

INTERPRETACION DE LOS DATOS

Unión de VDR, diferenciación celular HL60, y la actividad de 5 transcripción. 18,19-dinor-2MP (Ki=2.2x-10M) es ligeramente menos activo frente a la hormona natural 1,25-hidroxivitamina D3 (Ki=4.1x-11M) en su capacidad de competir con [3H]-1,25(OH)2D3 para unirse al receptor de vitamina D de rata recombinante de longitud completa (Figura 1). Compuesto 18,19-dinor-2MP (CE50=1.5x10-8M) es un poco menos activo en la promoción de la diferenciación de HL60 en comparación con 10 lα,25- dihidroxivitamina D3 (EC50= 3.2x10-9M) (Ver Figura 2). Además, el compuesto 18,19-dinor-2MP (EC50 1.5x10-8M) tiene una actividad transcripcional en células de hueso que es un poco menor de 1α,25-dihidroxivitamina D3 (EC50 =3.2x10-9M) (Ver Figura 3). Estos resultados sugieren que 18,19-dinor-2MP será muy eficaz en la psoriasis ya que tiene actividad directa celular en la causa de la diferenciación celular y 15 la supresión en el crecimiento celular. Estos datos también indican que 18,19-dinor-2MP tendrá una importante actividad como un agente anti-cáncer, especialmente contra leucemia, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de piel y cáncer de próstata, así como contra las enfermedades de la piel tal como la piel seca (falta de hidratación dérmica), flacidez de la piel indebida (firmeza de la piel insuficiente), secreción sebácea 20 insuficiente y arrugas. También se esperaría que sea muy activo en suprimir hiperparatiroidismo secundario.

Movilización de calcio de los huesos y absorción intestinal de calcio en animales con deficiencia de vitamina D. Utilizando ratas con deficiencia de vitamina D en una dieta baja en calcio (0.02%), las actividades de 18,19-dinor-2MP y 25 1,25(OH)2D3 en el intestino y el hueso se analizan. Como era de esperar, la hormona nativa (1,25(OH)2D3) incrementa los niveles de calcio en suero en todas las dosis (Figura 4). La figura 4 muestra que 18,19-dinor-2MP tiene poca, si la hay, actividad en la movilización de calcio de los huesos, y su actividad es aproximadamente equivalente a 2MP. 30

Administración de 18,19-dinor-2MP a 780 pmol/día durante 4 días consecutivos no resulta en la movilización del calcio óseo, y aumento de la cantidad de 18,19-dinor-2MP a 2340 pmol/día o a 7020 pmol/día también es sin ningún efecto sustancial.

Transporte de calcio intestinal se evalúa en los mismos grupos de 35 animales mediante el método de saco intestinal con eversión (Figura 5). Estos

resultados muestran que el compuesto 18,19-dinor-2MP no fomenta el transporte intestinal de calcio cuando se administra a 780 pmol/día, 2340 pmol/día o 7020 pmol/día, mientras que 1,25(OH)2D3 promueve un aumento significativo en la dosis de 780 pmol/día, y 2MP también proporciona un aumento significativo en una dosis de 2340 pmol/día. Por lo tanto, se puede concluir que 18,19-dinor-2MP es esencialmente 5 carente de la actividad intestinal de transporte de calcio en las dosis probadas.

Estos resultados muestran que 18,19-dinor-2MP es un excelente candidato para numerosas terapias humanas como se describe en este documento, y que puede ser particularmente útil en un número de circunstancias tales como supresión del hiperparatiroidismo secundario de la osteodistrofia renal, enfermedades 10 autoinmunes, cáncer, y psoriasis. 18,19-dinor-2MP es un excelente candidato para el tratamiento de psoriasis, ya que: (1) tiene unión de VDR significativa, actividad de transcripción y actividad de diferenciación celular, (2) carece de responsabilidad hipercalcémica a diferencia de 1,25(OH)2D3; (3) se sintetiza fácilmente. Ya que 18,19-dinor-2MP tiene actividad significativa de unión al receptor de la vitamina D, pero tiene 15 poca capacidad para elevar el calcio del suero de sangre, también puede ser particularmente útil para el tratamiento del hiperparatiroidismo secundario de osteodistrofia renal.

Estos datos también indican que el compuesto 18,19-dinor-2MP de la invención puede ser especialmente apropiado para el tratamiento y profilaxis de 20 enfermedades humanas que se caracterizan por un desequilibrio en el sistema inmunológico, por ejemplo, en enfermedades autoinmunes, como esclerosis múltiple, lupus, diabetes mellitus, rechazo de huésped frente a injerto, y rechazo de trasplantes de órganos; y además para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, como artritis reumatoide, asma y enfermedades inflamatorias intestinales tales como enfermedad 25 celíaca, colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn. Acné, alopecia e hipertensión son otras condiciones que se pueden tratar con el compuesto 18,19-dinor-2MP de la invención.

Los compuestos de la invención de la fórmula I, y en particular la fórmula Ia, también son útiles para prevenir o tratar la obesidad, inhibir la diferenciación 30 de adipocitos, inhibir la transcripción de SCD-1 génico, y/o reducir la grasa corporal en sujetos animales. Por lo tanto, en algunas modalidades, un método para prevenir o tratar la obesidad, inhibir la diferenciación de adipocitos, inhibir la transcripción génica de SCD-1, y/o reducir la grasa corporal en un sujeto animal incluye la administración al sujeto animal, de una cantidad efectiva de una o más de los compuestos o una 35 composición farmacéutica que incluye uno o más de los compuestos de fórmula I. La

administración del compuesto o las composiciones farmacéuticas para el sujeto inhibe la diferenciación de adipocitos, inhibe la transcripción génica, y/o reduce la grasa corporal en el sujeto animal. El animal puede ser un ser humano, un animal doméstico como un perro o un gato, o un animal agrícola, especialmente aquellos que proporcionan carne para el consumo humano, tales como las aves de corral como 5 pollos, pavos, faisanes o codornices, así como animales de especie bovina, ovina, caprina, o porcina.

Para la prevención y/o propósitos de tratamiento, los compuestos de esta invención definidos por la fórmula I se pueden formular para aplicaciones farmacéuticas como una solución en solventes inocuos, o como una emulsión, 10 suspensión o dispersión en solventes adecuados o portadores, o como píldoras, tabletas o cápsulas, supositorios, o aerosoles junto con portadores sólidos, de acuerdo a métodos convencionales conocidos en la técnica. Cualquiera de tales formulaciones puede contener también otros excipientes farmacéuticamente aceptables y no tóxicos tales como estabilizantes, antioxidantes, aglutinantes, colorantes o emulsionantes o 15 agentes modificadores del sabor.

Los compuestos de fórmula I y en particular 18,19-dinor-2MP, se pueden administrar por vía oral, tópica, parenteral, rectal, nasal, sublingual o transdérmica. Los compuestos se pueden administrar ventajosamente por inyección o por infusión intravenosa o soluciones estériles adecuadas, o en forma de dosis líquidas 20 o sólidas a través del tubo digestivo, o en forma de cremas, ungüentos, parches, o vehículos similares adecuados para aplicaciones transdérmicas. Una dosis de entre 0.01 g a 1000 g por día de los compuestos I, particularmente 18,19-dinor-2MP, preferiblemente de aproximadamente 0.1 μg a aproximadamente 500 g por día, es apropiado para propósitos de prevención y/o tratamiento, dicha dosis se ajustará de 25 acuerdo a la enfermedad a tratar, su severidad y la respuesta del sujeto como está bien entendido en la técnica. Dado que el compuesto presenta una especificidad de acción, cada uno se puede administrar convenientemente solo o junto con dosis graduadas de otro compuesto activo de vitamina D -- 1α-hidroxivitamina D2 o D3, o 1α,25-dihidroxivitamina D3 -- en situaciones donde diferentes grados de movilización mineral 30 ósea y estimulación del transporte de calcio se encuentra que es ventajosa.

Composiciones para su uso en los tratamientos antes mencionados comprenden una cantidad efectiva de los compuestos I, en especial 18,19-dinor- 2MP, tal como se define por la fórmula anterior I y Ia como el ingrediente activo, y un portador adecuado. Una cantidad efectiva de dichos compuestos para su 35 uso de acuerdo con la presente invención es de aproximadamente 0.01 g a

aproximadamente 1000 g por gramo de composición, de preferencia de aproximadamente 0.1 g a aproximadamente 500 g por gramo de composición, y se puede administrar por vía tópica, transdérmica, por vía oral o parenteral en dosis de aproximadamente 0.01 μg/día a aproximadamente 100 0 g/día, y preferentemente de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 500 g/día. 5

Los compuestos I, en particular 18,19-dinor-2MP, se pueden formular como cremas, lociones, ungüentos, parches tópicos, pastillas, cápsulas o tabletas, supositorios, aerosoles, o en forma líquida como soluciones, emulsiones , dispersiones o suspensiones en solvente farmacéuticamente aceptables e inocuos o aceites y dichas preparaciones pueden contener además otros componentes 10 farmacéuticamente inocuos o benéficos, tales como estabilizantes, antioxidantes, emulsionantes, agentes colorantes, aglutinantes o agentes modificadores del sabor.

Los compuestos I, en particular 18,19-dinor-2 MP, se puede administrar ventajosamente en cantidades suficientes para efectuar la diferenciación de promielocitos a macrófagos normales. Las dosis como se describe anteriormente son 15 adecuadas, teniendo en cuenta que las cantidades provistas se deben ajustar de acuerdo con la severidad de la enfermedad, y la condición y respuesta del sujeto como es bien entendido en la técnica.

Las formulaciones de la presente invención comprenden un ingrediente activo en asociación con un portador farmacéuticamente aceptable del 20 mismo y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El portador deberá ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de las formulaciones y no perjudicial para su receptor.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral pueden estar en forma de unidades discretas como cápsulas, 25 sobres, tabletas o pastillas, cada uno con una predeterminada cantidad del ingrediente activo, en forma de un polvo o gránulos; en la forma de una solución o suspensión en un líquido acuoso o líquido no acuoso; o en forma de una emulsión aceite en agua o una emulsión agua en aceite.

Formulaciones para administración rectal pueden estar en la 30 forma de un supositorio para incorporar el ingrediente activo y portador como la manteca de cacao, o en la forma de un enema.

Formulaciones adecuadas para la administración parenteral convenientemente comprenden una preparación estéril aceitosa o acuosa del ingrediente activo que es preferentemente isotónica con la sangre del receptor. 35

Formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen

una preparación líquida o semilíquida tal como linimentos, lociones, aplicaciones, emulsiones de aceite en agua o agua en aceite como las cremas, ungüentos o pastas; o soluciones o suspensiones, como gotas; o como aerosoles.

Para la administración nasal, inhalación de polvo, formulaciones auto-propulsoras o en aerosol, dispensadas con una lata de aerosol, un nebulizador o 5 un atomizador se pueden utilizar. Las formulaciones, cuando se dispensan, de preferencia tienen un tamaño de partícula en el intervalo de 10 a 100μ.

Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Por el término “unidad de dosificación” se 10 entiende una dosis unitaria, es decir, sencilla, que sea capaz de administrarse a un paciente como una dosis unitaria estable física y químicamente que comprende ya sea el ingrediente activo como tal, o una mezcla de ella con diluyentes o portadores farmacéuticos sólidos o líquidos.

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Claims

REIVINDICACIONES

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

5
1.- Un compuesto que tiene la fórmula:

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10

15

en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi- protector.
2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X2 es hidrógeno.
3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 20 caracterizado porque X1 es hidrógeno.
4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X1 y X2 son ambos t-butildimetilsililo.
5.- 2-metileno-18,19-dinor-1-hidroxi-homopregnacalciferol de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula: 25

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6.- Una composición farmacéutica que contiene una cantidad efectiva de al menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o 35 reivindicación 5 junto con un excipiente aceptable farmacéuticamente.
7.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque dicha cantidad efectiva comprende de 0.01 g a 1000 g por gramo de composición, preferiblemente de 0.1 g a 500 g por gramo de composición.
8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 5 caracterizado porque tiene la fórmula:

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10

en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se 15 selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento de psoriasis.
9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula:

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25

en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consta de leucemia, cáncer de colon, cáncer 30 de mama, cáncer de piel o cáncer de próstata.
10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula:

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5

en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento de una enfermedad autoinmune seleccionada del grupo que consta de esclerosis múltiple, lupus, diabetes mellitus, rechazo de huésped frente a injerto, y rechazo de trasplantes 10 de órganos.
11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula:

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15

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en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria seleccionada del grupo que consta de artritis reumatoide, 25 asma y enfermedades inflamatorias intestinales.
12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula:

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en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento de una condición de la piel seleccionada del grupo que consta de arrugas, falta de firmeza de la piel adecuada, falta de hidratación dérmica adecuada e insuficiente secreción de 5 sebo.
13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula:

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en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento de osteodistrofia renal.

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14.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula:

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en donde X1 y X2, que pueden ser los mismos o diferentes, cada uno se selecciona de hidrógeno o un grupo hidroxi-protector para usarse en el tratamiento, o prevención de obesidad de una animal, inhibición de diferenciación de adipocitos, inhibición de transcripción de genes SCD-1, y/o reducción de grasa corporal en un animal. 35
15.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14, caracterizado porque el compuesto se debe administrar por vía oral, parenteral, transdérmica, rectal, nasal, o sublingual.
16.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 8 o 12, caracterizado porque el compuesto se debe administrar por vía tópica. 5
17.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14, caracterizado porque el compuesto se debe administrar en una dosificación de 0.01 g/día a 1000 g/día.
18.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14, caracterizado porque el compuesto es 2-metileno-18,19-dinor-10 1-hidroxi-homopregnacalciferol que tiene la fórmula:

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19.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el animal es un humano, un animal doméstica o un animal agrícola.