ES2349746T3 - Compuestos derivados del cromeno con actividad de diana anti-tibulina y vascular. - Google Patents

Compuestos derivados del cromeno con actividad de diana anti-tibulina y vascular. Download PDF

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Abstract

Un compuesto de la fórmula (I): **(Ver fórmula)** en la que R1 se selecciona entre OH, nitro, amina, alquilo C1 a C8, alcoxi C1 a C8, fosfato y halógeno; n es 1, 2, ó 3; Y1 es un enlace covalente, Y2 es -CO-; Y3 es un enlace covalente; A es hidrógeno; C es hidrógeno; B es fenilo sustituido con grupos n(R2) en el que R2 se selecciona entre H, OH, nitro, amina, alquilo C1 a C8, alcoxi C1 a C8, fosfato y halógeno y n es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN
Se han descubierto ligandos de indol trimetoxifenil sustituidos que demuestran una citotoxicidad elevada además de una capacidad notable para inhibir la polimerización de tubulina. Esos compuestos, así como sus derivados relacionados, son candidatos clínicos excelentes para el tratamiento del cáncer en seres humanos. Además, algunos de estos ligandos, en forma de profármacos, pueden resultar ser buenos agentes quimioterapeúticos de acción vascular selectivos para tumores o tener una actividad de acción vascular que da como resultado la prevención y/o destrucción selectiva de vasculatura en proliferación no maligna.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La proteína citoesquelética tubulina está entre las dianas de fármacos terapéuticos más atractivas para el tratamiento de tumores sólidos. Una clase de agentes quimioterapeúticos de éxito particular media su efecto antitumoral a través de una interacción de unión directa con la tubulina. Esta clase de agentes terapéuticos clínicamente prometedores, denominados agentes de unión a tubulina o agentes anti-tubulina, presenta una potente citotoxicidad contra células tumorales inhibiendo eficazmente el ensamblaje de los heterodímeros de αβ-tubulina a las estructuras de los microtúbulos que son necesarias para facilitar la división celular mitótica (Li & Sham, Expert Opin. Ther. Patents., 2002).
Actualmente, los agentes quimioterapeúticos anti-tubulina más ampliamente reconocidos y clínicamente útiles son los alcaloides de la vinca, tales como vinblastina y vincristina (Owellen y col., Cancer Res., 1976) junto con taxanos tales como el taxol (Schiff y col., Nature, 1979). Además, se sabe que productos naturales tales como la rizoxina (Rao y col., Tetrahedron Lett., 1992), las combretastatinas (Pettit y col., Can. J. Chem., 1982), curacina A (Gerwick y col., J. Org. Chem., 1994), podofilotoxina (Coretese y col., J. Biol. Chem., 1977), epotilonas A y B (Nicolau y col., Nature, 1997), dolastatina-10 (Pettit y col., J. Am. Chem. Soc., 1987), y welwistatina (Zhang y col., Molecular Pharmacology, 1996), así como ciertos análogos sintéticos incluyendo la fenstatina (Pettit GR y col., J. Med. Chem., 1998), 2-estirilquinazolin-4(3H)-onas ("SQOs", Jiang y col., J. Med. Chem., 1990), y derivados altamente oxigenados de cis-y trans-estilbeno y dihidrostilbeno (Cushman y col., J. Med. Chem., 1991) median todos en la actividad citotóxica tumoral a través de un modo de acción que incluye la unión a tubulina y la posterior inhibición de la mitosis.
Normalmente, durante la metafase de la mitosis celular, la membrana nuclear se ha roto y la tubulina es capaz de formar los centrosomas (también denominados centros de organización de los microtúbulos) que facilitan la formación del huso acromático de microtúbulos al cual quedan anclados los cromosomas en división. El ensamblaje y desensamblaje posterior del huso acromático mitiga la separación de los cromosomas hermanos durante la anafase de manera que cada célula hija contenga una dotación completa de cromosomas. Como agentes antiproliferativos o antimitóticos, los agentes de unión a tubulina aprovechan la mitosis relativamente rápida que se produce en las células tumorales en proliferación. Con la unión a la tubulina y con la inhibición de la formación del huso acromático en células tumorales, el agente de unión a tubulina puede provocar una citotoxicidad de las células tumorales significativa con efectos relativamente poco importantes sobre las células normales del paciente que se dividen lentamente.
La naturaleza exacta de las interacciones del sitio de unión a la tubulina sigue siendo desconocida en su mayoría, y varía definitivamente entre cada clase de agentes de unión a tubulina. El marcaje de fotoafinidad y otras técnicas de elucidación del sitio de unión han identificado tres sitios de unión claves sobre la tubulina: 1) el sitio de la colchicina (Williams y col., J. Biol. Chem., 19851); 2) el sitio de los alcaloides de la vinca (Safa y col., Biochemistry, 1987); y 3) un sitio sobre los microtúbulos polimerizados al cual se une el taxol (Lin y col., Biochemistry, 1989). Un aspecto importante de este trabajo requiere una comprensión detallada, a nivel molecular, del dominio de unión de "moléculas pequeñas" tanto de las subunidades α y β de la tubulina. La estructura terciaria del heterodímero de α,β-tubulina fue presentada en 1998 por Downing y sus colaboradores a una resolución de 3,7 Å usando una técnica conocida como cristalografía electrónica (Nogales y col., Nature, 1998). Esta brillante consecución culminó décadas de trabajo dirigidas a la elucidación de esta estructura y debe facilitar la identificación de sitios de unión de moléculas pequeñas, tales como el sitio de la colchicina, usando técnicas tales como el marcaje de fotoafinidad y la afinidad química (Chavan y col., Bioconjugate Chem., 1993; Hahn y col., Photochem. Photobiol., 1992).
Se da una mayor importancia a nuevos fármacos que se unen al sitio de la colchicina puesto que recientemente se ha demostrado que muchos agentes de unión a tubulina también presentan actividad contra la vasculatura del tumor maligno en proliferación, en contraposición al propio tumor. La quimioterapia anti-vascular es un área emergente de la quimioterapia contra el cáncer que se centra en el desarrollo de fármacos dirigidos contra la proliferación de la vasculatura que mantiene el crecimiento del tumor. Mucha de la investigación en terapia anti-vascular del cáncer se ha centrado en la comprensión del proceso de formación de nuevos vasos sanguíneos, conocida como angiogénesis, y en la identificación de agentes antiangiogénicos que inhiban la formación de nuevos vasos sanguíneos. La angiogénesis está caracterizada por la proliferación de células endoteliales tumorales y la generación de la vasculatura para mantener el crecimiento de un tumor. Este crecimiento es estimulado por ciertos factores de crecimiento producidos por el propio tumor. Uno de estos factores de crecimiento, el factor de crecimiento endotelial vascular ("VEGF"), es relativamente específico de las células endoteliales, en virtud de la expresión restringida y regulada hacia arriba de su receptor cognado. Se han desarrollado diversas estrategias antiangiogénicas para inhibir este proceso de señalización en una o más etapas en la vía bioquímica para prevenir el crecimiento y el establecimiento de la vasculatura del tumor. No obstante, las terapias antiangiogénicas actúan lentamente y se deben administrar de manera crónica durante un periodo de meses a años para producir el efecto deseado.
Los agentes de acción vascular ("VTA") o agentes de daño vascular, son una clase independiente de agentes quimioterapeúticos antivasculares. A diferencia de los fármacos antiangiogénicos que interrumpen la formación de nuevos microvasos de tumores en desarrollo, los VTA atacan a tumores sólidos dirigiéndose selectivamente contra la vasculatura del tumor establecida y provocando un estrangulamiento masivo del flujo sanguíneo hacia el tumor. Una sola dosis de un VTA puede provocar un estrangulamiento rápido y selectivo de la neovasculatura del tumor en un período de minutos a horas, conduciendo eventualmente a la necrosis tumoral por inducción de hipoxia y agotamiento de nutrientes. Este mecanismo de citotoxicidad por mediación vascular de la acción de los VTA está bastante alejado del de los agentes antiangiogénicos, que inhiben la formación de nueva vascularización tumoral en lugar de interferir con la vasculatura del tumor existente. Se conocen otros agentes que alteran la vasculatura del tumor, pero difieren en que también pueden manifestar una toxicidad sustancial contra los tejidos normales a sus dosis toleradas máximas. En contraste, los VTA genuinos retienen su actividad de estrangulamiento vascular a una fracción de sus dosis toleradas máximas. Se piensa que los VTA que se unen a tubulina desestabilizan selectivamente el citoesqueleto de microtúbulos de las células endoteliales tumorales, provocando una alteración profunda en la forma de la célula que en último término da lugar a la oclusión de los vasos sanguíneos tumorales y al estrangulamiento del flujo sanguíneo hacia el tumor (Kanthou y col., Blood, 2002).
El profármaco fosfato de combretastatina A4 (CA4P) es uno de los principales candidatos novedosos entre una colección relativamente pequeña de compuestos mundiales conocidos con actividad de acción vascular (patente U.S. No. 5.561.122; Chaplin y col., Anticancer Res., 1999; Tozer y col., Cancer Res., 1999; Pettit y Rhodes, Anti-Cancer Drug Des., 1998; Iyer y col., Cancer Res., 1998; Dark y col., Cancer Res., 1997). Su compuesto fenólico parental, la combretastatina A-4 (CA4) fue descubierto por el profesor George R. Pettit (Arizona State University) como un aislado del sauce sudafricano (Combretum caffrum) en la década de los 70. La CA4 es un potente inhibidor de la polimerización de tubulina y se une al sitio de la colchicina sobre la β-tubulina. De manera interesante, la CA4 por sí misma no demuestra la destrucción de la vasculatura del tumor, mientras que el CA4P es muy activo en términos de destrucción de la vasculatura del tumor. Por tanto, la fracción éster de fosfato del CA4P experimenta la desfosforilación para revelar la potente molécula CA4 que se une a tubulina que destruye las células tumorales a través de la inhibición de la polimerización de tubulina.
El CA4P es actualmente el fármaco principal de un grupo de VTA de unión a tubulina en desarrollo clínico. Otros VTA de unión a tubulina que han sido descubiertos incluyen el colchicinoide ZD6126 (Davis y col., Cancer Research, 2002) y el análogo de combrestatina AVE8032 (Lejeune y col., Proceedings of the AACR., 2002).
Bellassoued-Fargeau, y col., J. Heterocyclic Chem 22, 45, (1985) se refiere a benzoilcromenos. El documento WO 01/81288 se refiere al derivado de benzofenona de la combrestatina A-1 y a la inhibición de la polimerización de tubulina. El documento WO 99/34788 se refiere a la inhibición de la polimerización de tubulina mediante fenestatina.
Una estrategia quimioterapéutica agresiva para el tratamiento y mantenimiento de cánceres de tumores sólidos sigue dependiendo del desarrollo de compuestos estructuralmente nuevos y biológicamente más potentes. La presente invención aborda esta necesidad urgente proporcionando una clase estructuralmente nueva de composiciones de agentes de unión a tubulina con una potente actividad antiproliferativa y citotoxicidad de las células tumorales. Además, la presente invención proporciona el importante descubrimiento de que las construcciones de profármacos correspondientes de estos agentes tienen efectos selectivos sobre la vasculatura del tumor que son independientes de cualquier efecto antimitótico sobre las células del tumor. Estos agentes son capaces de estrangular selectivamente el flujo de sangre hacia un tumor y provocar la muerte secundaria de las células tumorales. Así, las presentes composiciones han expandido la utilidad clínica sobre los agentes de unión a tubulina conocidos.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere al descubrimiento de compuestos de cromeno que funcionan como agentes de unión a tubulina capaces de inhibir el ensamblaje de la tubulina y la proliferación de células tumorales. Estos compuestos de cromeno resultan de la combinación sensata de un patrón molecular de unión a compuestos que no son tubulina, modificado convenientemente con características estructurales tales como restos hidroxilo y grupos arilalcoxi.
En un primer aspecto general, la presente invención proporciona un compuesto de cromeno de la siguiente fórmula general I:
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10 en la que R1 es OH, nitro, amina, alquilo C1 a C8, alcoxi C1 a C8, fosfato y halógeno; n es 1, 2, ó 3; Y1 es un enlace covalente, Y2 es -CO-; Y3 es un enlace covalente; y 15 A es hidrógeno; C es hidrógeno; y B es fenilo sustituido con grupos n(R2) en el que R2 es H, OH, nitro, amina, alquilo C1 a C8, alcoxi C1 a C8, fosfato y halógeno y n es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5. En un aspecto preferido, el compuesto se selecciona entre
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En un segundo aspecto general, la invención contempla los compuestos con la fórmula (1) para uso en la inhibición del ensamblaje in vitro de la tubulina poniendo en contacto una célula con una cantidad eficaz. En un aspecto preferido, la célula es una célula tumoral. Los compuestos con la fórmula (1) también se proporcionan para uso en el tratamiento de un mamífero afectado con una
10 enfermedad neoplásica. En una forma de realización preferida, el efecto antiproliferativo tiene el resultado directo de provocar la citotoxicidad de la célula tumoral debido a la inhibición de la mitosis. En un tercer aspecto, la invención contempla los compuestos con la fórmula (1) para uso en el tratamiento del cáncer. El cáncer puede ser leucemia, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de tiroides, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer
15 pancreático, y cáncer de mama. Los compuestos también se pueden usar en la destrucción selectiva de la vasculatura del tumor. En otro aspecto más, la invención contempla la provisión de los compuestos con la fórmula
(1) para uso en la reducción selectiva del flujo sanguíneo hacia, al menos, una porción de una región neoplásica, en la que está afectada de necrosis sustancial del tejido en la región neoplásica sin 20 necrosis sustancial del tejido en las regiones adyacentes. En un aspecto preferido, el efecto de la
reducción del flujo sanguíneo del tumor es reversible. En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende los compuestos con la fórmula (1) como componente activo junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Los detalles de una o más formas de realización de la invención se exponen en la descripción acompañante a continuación. Otras características, objetos, y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la descripción. A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen los mismos significados entendidos de manera general por alguien con conocimientos ordinarios en la materia a la cual pertenece esta invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La Figura 1 representa una vía para la síntesis de un cromeno a modo de ejemplo de la invención.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Los inventores han desarrollado una hipótesis de trabajo que sugiere que el descubrimiento de nuevos agentes antimitóticos se puede conseguir con una combinación sensata de un patrón molecular (andamio) que interaccione con el receptor de estrógenos (ER), y se puede modificar de manera conveniente con características estructurales consideradas imperativas para la unión de la tubulina (es decir, grupos hidroxilo, arilalcoxi, ciertas sustituciones con halógeno, etc.). En particular, la función metoxiarilo parece ser importante para incrementar la interacción en el sitio de unión de la colchicina en ciertos análogos (Shirai y col., Biomedical Chem. Lett. 1994). Tras la formulación de esta hipótesis que se refiere a patrones moleculares del ER, nuestro diseño y esfuerzos sintéticos iniciales se centraron en los ligandos de benzo[b]tiofeno que contienen motivos estructurales que recuerdan al raloxifeno, el modulador selectivo del receptor de estrógeno (SERM) desarrollado por Eli Lilly and Co. (Jones y col., J. Med Chem. 1984; Grese y col., J. Med Chem., 1997; Palkowitz y col., J. Med Chem., 1997), así como a los agentes de unión a tubulina, la colchicina y combrestatina.
La premisa de diseño de que los esqueletos moleculares de los compuestos que se unen al receptor de estrógenos tradicional (ER) se pueden modificar con motivos estructurales que recuerdan a la colchicina y combrestatina A4 para producir especialmente inhibidores de la polimerización de tubulina ha sido validada por nuestra preparación de agentes anti-tubulina y antimitóticos benzo[b]tiofeno, benzo[b]furano, e indol muy activos (patentes U.S. Nos. 5.886.025; 6.162.930; 6.350.777; y 6.593.374; publicación PCT No. WO 01/19794; Mullica y col., J. Chem. Cryst., 1998; Pinney, y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999). Los principales compuestos de cada serie demuestran una actividad biológica remarcable contra una variedad de líneas celulares cancerígenas humanas.
Como apoyo adicional de la teoría de los autores, estudios recientes han demostrado que ciertos compuestos de unión al receptor de estrógenos (ER) (por ejemplo, 2-metoxiestradiol) pueden interaccionar con la tubulina e inhibir el ensamblaje de la tubulina en forma de congéneres estructuralmente modificados del estradiol (D'Amato y col., Proc. Natl. Acad Sci. 1994; Cushman y col., J. Med Chem., 1995; Hamel y col., Biochemistry, 1996; Cushman y col., J. Med. Chem., 1997). El estradiol es, quizás, el estrógeno más importante en seres humanos, y es intrigante e instructivo que la adición del motivo metoxiarilo a este compuesto lo vuelva interactivo con la tubulina. También cabe destacar que el 2-metoxiestradiol es un metabolito natural del estradiol en mamíferos y puede desempeñar un papel regulador del crecimiento celular, especialmente importante durante el embarazo.
Los inventores acometieron el diseño y la síntesis de agentes antimitóticos según una estructura molecular flavonoide que estaba diseñada para unirse al sitio de unión a la colchicina sobre la βtubulina. La síntesis de estos compuestos se inició con la síntesis fortuita de derivados de 3aroilcromeno y la demostración de que estos compuestos tienen unas actividades antimitóticas muy buenas sin efectos secundarios apreciables. Su estructura molecular flavonoide se modificó con la introducción de anillos de trimetoxifenilo que recuerdan a la combrestatina A4 y la colchicina. Se encontró que estos ligandos modificados no tienen afinidad de unión hacia el ER pero tienen una fuerte afinidad por la tubulina. Nuestros análisis previos de las relaciones estructura-actividad de construcciones de benzo[b]tiofeno han destacado la importancia de la colocación sensata del anillo trimetoxifenilo y los anillos 4-metoxifenilo. El pseudo-apilamiento π de los dos anillos arilo junto con la hibridación sp2 en los átomos puente entre los anillos es importante para las propiedades de unión a la tubulina. Además de estos factores, las distancias de centroide a centroide entre los dos anillos arilo son importantes. La optimización de esta distancia hasta aproximadamente la de la CA-4 (4,7 Å) ayuda a desarrollar mejores ligandos que se unan en el sitio de unión a la colchicina. Un ligando espaciador de dos átomos contiguos tenía más libertad para alinearse él mismo para un pseudoapilamiento π que el ligando espaciador de 1 átomo, y por tanto tenía una mejor actividad antimitótica. De manera similar, la restricción de la rotación libre mediante la introducción de un doble enlace dio como resultado una mejor actividad biológica. El intercambio de las posiciones de los anillos trimetoxifenilo y 4-metoxifenilo dio como resultado la reducción de la actividad anti-mitótica.
De manera sorprendente, los nuevos ligandos basados en cromeno descritos en el presente documento, que están estructuralmente relacionados con la CA4, han mejorado la actividad antiproliferativa y la actividad dirigida contra los elementos vasculares sobre los compuestos diseñados previamente. Claramente, la capacidad para interrumpir selectivamente el flujo sanguíneo hacia células tumorales en desarrollo es un progreso potencial en la siempre ardua batalla contra el cáncer. Se ha demostrado que ciertos flavonoides tales como las 4-arilcoumarinas (Bailly y col., J. Med Chem., 1998) se unen a la tubulina con una elevada afinidad, pero no presentan propiedades antivasculares. Adicionalmente, a diferencia de los compuestos flavonoides conocidos en la materia, los nuevos compuestos de cromeno descritos en esta solicitud se deben disponer en una conformación molecular apropiada de manera que pueda tener lugar una interacción de pseudo-apilamiento pi ariloarilo. Esa interacción arilo-arilo de la distancia centroide a centroide apropiada (4,7 Angstroms aproximadamente) se cree que es importante para mejorar la afinidad de unión al sitio de la colchicina sobre la β-tubulina. Es esta unión la que en último término da lugar a la inhibición del ensamblaje de la tubulina, que se manifiesta como un evento citotóxico o un evento antivascular.
Los compuestos del 3-aroilcromeno de la presente invención se pueden sintetizar según el siguiente esquema general:
imagen1
El tratamiento posterior del producto de esta reacción se puede usar para preparar los siguientes derivados usando procedimientos que son muy conocidos en la materia.
imagen1
10 Tratamiento del cáncer y otros trastornos proliferativos malignos Los compuestos de cromeno de la presente invención demuestran una citotoxicidad remarcable frente a una variedad de líneas de células cancerígenas humanas. La capacidad de un agente para inhibir el ensamblaje de la tubulina y la formación de microtúbulos es una propiedad importante de muchos agentes anticancerígenos. La ruptura de los microtúbulos que conforman el citoesqueleto
15 y el uso acromático mitótico puede interferir dramáticamente con la capacidad de una célula para completar con éxito la división celular. Los compuestos de la presente invención son altamente cito-tóxicos para células activamente en proliferación, inhibiendo su división mitótica y a menudo causando su apoptosis selectiva mientras deja las células quiescentes normales relativamente inalteradas.
Por consiguiente, las propiedades antiproliferativas o antimitóticas de los compuestos de la presente invención se pueden usar para inhibir directamente la proliferación de, o conferir una citotoxicidad directa contra, las células de tumores o cánceres malignos o neoplásicos incluyendo:
1)
carcinomas, tales como los de vejiga, mama, colon, recto, riñón, hígado, pulmón (incluyendo
cáncer de pulmón de células pequeñas), faringe, esófago, vesícula biliar, tracto urinario,
ovarios, cérvix, útero, páncreas, estómago, glándulas endocrinas (incluyendo tiroides, glán
dulas adrenales, y pituitaria), próstata, testículos y piel, incluyendo carcinoma de células es
camosas;
2)
tumores hematopoyéticos del linaje linfoide, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda,
leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin,
linfoma no de Hodgkin, linfoma de células pilosas, y linfoma de Burkitt;
3)
tumores hematopoyéticos del linaje mieloide, incluyendo leucemias mielagenosas agudas y
crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica;
4)
tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma;
5)
tumores del sistema nervioso central y periférico y las meninges, incluyendo astrocitoma,
neuroblastoma, glioma, schwannomas, retinoblastomas, neuroma, glioma, glioblastoma; y
6)
otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroder
ma pigmentoso, queratoctantoma, cáncer anaplásico de tiroides y sarcoma de Kaposi.
Alternativamente, los compuestos de la presente invención pueden conferir control indirecto del crecimiento y la proliferación de los tumores y cánceres anteriores debido a sus efectos sobre la vasculatura maligna en proliferación, tales como el endotelio, las arterias, los vasos sanguíneos, o la neovasculatura formada por un tumor. Estas propiedades antivasculares incluyen, pero no están limitadas a, la destrucción, daño, u oclusión selectivas, ya sea reversible o irreversible, parcial o completa, de la vasculatura del tumor en proliferación.
Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles para el tratamiento de los tumores y cánceres descritos anteriormente cuando se usan solos o en combinación con radioterapia y/u otros tratamientos quimioterapéuticos convencionalmente administrados a pacientes para el tratamiento de cánceres de tumores sólidos. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden administrar con agentes quimioterapeúticos seleccionados entre una de las siguientes clases mecanicistas:
1.
Agentes alquilantes: compuestos que donan un grupo alquilo a nucleótidos. El ADN alquilado es incapaz de replicarse a sí mismo y la proliferación celular se detiene. Ejemplos de agentes alquilantes incluyen melfalano, clorambucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, busulfano, decarbazina, metotrexato, 5-FU, arabinósido de citosina, o 6-tioguanina.
2.
Agentes antiangiogénicos: compuestos que inhiben la formación de la vasculatura del tumor. Ejemplos de agentes antiangiogénicos incluyen el TNP-470 o Avastin™.
3.
Antibióticos antitumorales: compuestos que tienen actividad antimicrobiana y citotóxica. Estos compuestos también pueden interferir con el ADN inhibiendo químicamente enzimas y la
mitosis o alterando las membranas celulares. Ejemplos de antibióticos antitumorales incluyen actinomicina D, bleomicina, mitomicina C, dactinomicina, daunorubicina, y doxorubicina.
4.
Inhibidores de la topoisomerasa: agentes que interfieren con la actividad topoisomerasa inhibiendo así la replicación del ADN. Esos agentes incluyen el CPT-11 y el topotecán.
5.
Terapia hormonal: incluye, pero no está limitada a, antiestrógenos. Un ejemplo de antiestrógenos es el tamoxifeno.
6.
Compuestos antimicrotúbulos. Vincristina, Paclitaxel, taxotere, etopósido, vinblastina, etc.
Tratamiento de trastornos proliferativos vasculares no malignos
La invención proporciona el descubrimiento de que los compuestos de la invención al igual que sus análogos, son agentes de acción vascular (VTA), y así también son útiles para el tratamiento de trastornos proliferativos vasculares no malignos, en los que el endotelio, las arterias, los vasos sanguíneos, o la neovasculatura no están asociados a un tumor pero no obstante se forma por angiogénesis no deseable o patológica. Esos estados de enfermedad incluyen, sin limitación:
1)
enfermedades oculares tales como, degeneración macular húmeda o relacionada con la
edad, degeneración macular miope, retinopatía diabética, retinopatía de precocidad, edema
molecular diabético, uveítis, glaucoma neovascular, rubeosis, fibroplasias retrolentales, es
trías angioides, histoplasmosis ocular, y neovascularización de la córnea;
2)
trastornos inflamatorios tales como endometriosis, psoriasis, artritis reumatoide, síndrome
de Osler-Webber, granulación de heridas, y
3)
enfermedades cardiovasculares tales como ateroesclerosis, ateroma, restenosis, heman
gioma, restenosis.
Los compuestos de la invención se pueden usar preferentemente para el tratamiento de trastornos proliferativos vasculares no malignos en el tejido de la retina del ojo. La neovascularización del tejido retinal o "retinopatía" es una dolencia patógena caracterizada por la proliferación vascular y se produce en una variedad de enfermedades oculares con grados variables de pérdida de la visión. La barrera hemato-retinal (BRB) está compuesta de células endoteliales especializadas no fenestradas fuertemente unidas que forman una barrera al transporte de ciertas sustancias entre los capilares retinales y el tejido de la retina. Los vasos en formación de la retina asociados a las retinopatías son aberrantes, al igual que los vasos asociados a tumores sólidos. Los agentes de unión a la tubulina, los inhibidores del ensamblaje de la tubulina, y los agentes de acción vascular pueden ser capaces de atacar a los vasos aberrantes debido a que estos vasos no comparten similitudes arquitectónicas con la BRB. Los agentes de unión a la tubulina pueden detener la progresión de la enfermedad de la misma manera que ocurre con la vasculatura del tumor. La administración de un VTA para el control farmacológico de la neovascularización retinal asociada a retinopatías como la degeneración macular húmeda, retinopatía diabética proliferativa o retinopatía de precocidad, beneficiaría potencialmente a pacientes para los cuales están disponibles pocas opciones terapéuticas.
Los compuestos de la presente invención también están contemplados para uso en el tratamiento de enfermedades vasculares, particularmente ateroesclerosis y restenosis. La aterosclerosis es la forma más común de enfermedad vascular y da lugar a un suministro sanguíneo insuficiente para órganos del cuerpo críticos, dando como resultado ataques cardiacos, ictus, y fallo renal. Adicionalmente, la aterosclerosis provoca complicaciones importantes en aquellos que padecen de hipertensión y diabetes, así como en fumadores. La aterosclerosis es una forma de lesión vascular crónica en la que parte de las células del músculo liso vascular normal (VSMC) en la pared arterial, que normalmente controla el tono vascular, regula el flujo sanguíneo, cambia su naturaleza y desarrolla un comportamiento "similar al cáncer". Estas VSMC se vuelven anormalmente proliferativas, segregando sustancias (factores de crecimiento, enzimas de degradación de tejidos y otras proteínas) que les permiten invadir y expandirse hacia el revestimiento de los vasos internos, bloqueando el flujo sanguíneo y volviendo esos vasos anormalmente susceptibles de quedar completamente bloqueados por un coágulo sanguíneo local, dando como resultado la muerte del tejido irrigado por esa arteria.
La restenosis, recurrencia de la estenosis o la constricción arterial después de cirugía correctiva, es una forma acelerada de ateroesclerosis. Evidencias recientes han apoyado una hipótesis unificadora de lesión vascular en la que la restenosis de las arterias coronarias junto con la aterosclerosis por injerto de la vena coronaria y aloinjerto cardíaco se puede considerar que representan una forma muy acelerada del mismo proceso patógeno que resulta de la ateroesclerosis espontánea. La restenosis es debida a una serie de respuestas fibroproliferativas complejas a una lesión vascular que implica a potentes moléculas reguladoras del crecimiento, incluyendo el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGF), también habitual en las fases tardías de las lesiones ateroescleróticas, dando como resultado la proliferación, migración y acumulación neoíntima de las células del músculo liso vascular.
La restenosis se produce después de cirugía de bypass coronario (CAB), endarterectomía, y transplante cardíaco, y particularmente después de angioplastia cardiaca con globo, aterectomía, ablación con láser o cateterización endovascular (en cada una de las cuales un tercio de los pacientes vuelve a desarrollar restenosis en los siguientes 6 meses), y es responsable de la reaparición de los síntomas (o la muerte), lo cual requiere a menudo la repetición de la cirugía de revascularización. A pesar de más de una década de investigación y mejoras significativas en la tasa de éxito primario de los diversos tratamientos médicos y quirúrgicos de la enfermedad ateroesclerótica incluyendo la angioplastia, el injerto de bypass y la endarterectomía, se sigue produciendo fallo secundario debido a restenosis tardía en el 30-50% de los pacientes. La repetición de la cirugía de revascularización consume tiempo y dinero, es molesta para el paciente, y pueden acarrear un riesgo significativo de complicaciones o muerte. La forma más eficaz de prevenir la restenosis es a nivel celular.
Definiciones
Como se usa en el presente documento, los siguientes términos entre comillas tendrán los significados indicados, ya sea en plural o en singular:
"Grupo aminoácido acilo" en el grupo aminoácido acilamino es un grupo acilo derivado del aminoácido. Los aminoácidos se pueden clasificar por α-aminoácidos, β-aminoácidos y γaminoácidos. Ejemplos de aminoácidos preferidos incluyen glicina, alanina, leucina, serina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, treonina, valina, isoleucina, ornitina, glutamina, asparaginas, tirosina, fenilalanina, cisteína, metionina, arginina, β-alanina, triptófano, prolina, histidina, etc. El aminoáci
do preferido es la serina y el grupo aminoácido acilo preferido es la serinamida. "Amina" se refiere a una amina libre NH2. "Animal" se refiere a cualquier mamífero de sangre caliente, preferentemente un ser humano. "Alquilo" se refiere a un grupo que contiene entre 1 y 8 átomos de carbono y puede ser de
5 cadena lineal o ramificada.
"Arilo" se refiere a grupos aromáticos, incluyendo grupos aromáticos de un único anillo de 5 y 6 miembros que pueden incluir entre cero y cuatro heteroátomos, así como sistemas multicíclicos con al menos un anillo aromático. Ejemplos de grupos arilo incluyen benceno, fenilo, pirrol, furano, tiofeno, tiazol, isotiazol, imidazol, triazol, tetrazol, pirazol, oxazol, isoxazol, piridina, piracina, piridacina, y
10 pirimidina, y similares. El anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo con sustituyentes tales como los descritos anteriormente, como por ejemplo, halógeno, hidroxilo, alcoxi, etc. El grupo arilo preferido de la presente invención es un anillo benceno opcionalmente sustituido de la siguiente estructura
imagen1
15 enlaqueR1esOH,amina,ometoxiynes1,2,ó3. "Aroilo" se refiere a los grupos -(C=O)-arilo, en los que arilo se define como anteriormente. El grupo arilo está unido al compuesto central a través de un puente carbonilo. "Cicloalquilo" es una especie de alquilo que contiene entre 3 y 15 átomos de carbono, sin dobles enlaces alternados o en resonancia entre los átomos de carbono. Puede contener entre 1 y 4
20 anillos. Ejemplos de esos grupos sin sustituir incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, adamantilo, etc. Los sustituyentes ejemplares incluyen uno o más de los siguientes grupos: halógeno, alquilo, alcoxi, hidroxialquilo, amino, nitro, ciano, tiol y/o alquiltio.
"Flavonoides" son compuestos que tienen una estructura central que consta de un anillo benceno de 6 miembros conjugado con un anillo heterocíclico de 6 miembros en el que el heteroáto25 mo es un átomo de oxígeno. Los compuestos incluidos dentro de este grupo son los cromenos, las
coumarinas, las flavanonas, y las flavonas de las estructuras siguientes:
imagen1
"Halógeno" o "halo" se refiere a cloro, bromo, flúor o yodo.
"Alcoxi inferior" se refiere a grupos -O-alquilo, en los que alquilo es como se ha definido anteriormente. El grupo alcoxi está unido al compuesto central a través de un puente de oxígeno. El grupo alcoxi puede ser de cadena lineal o ramificada; aunque se prefiere la cadena lineal. Ejemplos incluyen metoxi, etiloxi, propoxi, butiloxi, t-butiloxi, i-propoxi, y similares. Los grupos alcoxi preferidos contienen 1-4 átomos de carbono, y los grupos alcoxi especialmente preferidos contienen 1-3 átomos de carbono. El grupo alcoxi más preferido es metoxi.
"Alquilamino inferior" se refiere a un grupo en el que uno o dos grupos alquilo están unidos a un nitrógeno amino, es decir, NH(alquilo). El nitrógeno es el puente que conecta el grupo alquilo con el compuesto central. Los ejemplos incluyen NHMe, NHEt, NHPr, y similares.
El "resto fenólico" significa en el presente documento un grupo hidroxi cuando se refiere a un grupo R sobre un anillo arilo.
"Fosfato", "resto fosfato", o "sal fosfato del profármaco" se refiere al resto de la sal del éster fosfato (-OP(O)(O-M+)2), un resto triéster fosfato (-OP(O)(OR)2) o un resto diéster fosfato (OP(O)(OR)(O-M+), en las que M es una sal y R se selecciona para que sea cualquier sustituyente alquilo o alquilo ramificado apropiado (los dos grupos R pueden ser el mismo grupo alquilo o pueden estar mezclados), o bencilo, o grupos arilo. La sal M es de manera ventajosa Na, K y Li, pero la invención no está limitada en este aspecto.
"Fosforamidato" se refiere a un resto de la sal del éster fosforamidato (-NP(O)(O-M+)2), un resto diéster fosforamidato (-NP(O)(OR)2), o un resto disal fosfamidato (-NP(O)(OR)(O-M+), en las que M es una sal y R se selecciona para que sea cualquier sustituyente alquilo o alquilo ramificado apropiado (los dos grupos R pueden ser el mismo grupo alquilo o pueden estar mezclados), o bencilo,
o grupos arilo. La sal M es de manera ventajosa Na, K y Li, pero la invención no está limitada en este aspecto.
"Sal" es una sal farmacéuticamente aceptable y puede incluir sales de adición ácida tales como clorhidratos, bromhidratos, fosfatos, sulfatos, hidrógenosulfatos, alquilsulfonatos, arilsulfonatos, acetatos, benzoatos, citratos, maleatos, fumaratos, succinatos, lactatos, y tartratos; cationes de metales alcalinos tales como Na, K, Li; sales de metales alcalino-térreos tales como Mg o Ca; o sales de aminas orgánicas tales como aquellas descritas en las Solicitudes Internacionales PCT Nos. WO02/22626 o WO00/48606.
"Tratamiento" (o "tratar") como se usa en el presente documento incluye su significado aceptado de manera general que engloba la prohibición, prevención, restricción, y reducción, detención, o reversión de la progresión, o la gravedad, de un síntoma resultante. Como tales, los procedimientos engloban tanto la administración terapéutica como profiláctica.
"Agente de unión a tubulina" se referirá a un ligando de la tubulina o a un compuesto capaz de unirse a cualquiera de los heterodímeros de αβ-tubulina o los microtúbulos e interferir con el ensamblaje o desensamblaje de los microtúbulos.
"Cantidad eficaz" se refiere a la cantidad o dosis del compuesto, tras la administración en una sola dosis o en múltiples dosis al paciente, que proporciona el efecto deseado en el paciente bajo diagnóstico o tratamiento. Una cantidad eficaz puede ser determinada fácilmente por el facultativo que atiende, tal como alguien experto en la materia, con el uso de técnicas conocidas y con la observación de los resultados obtenidos en circunstancias análogas. En la determinación de la cantidad o dosis eficaz de compuesto administrado, el facultativo que atiende considerará una serie de factores, incluyendo, pero no limitado a: la especie de mamífero; su tamaño, edad, y estado de salud general; la enfermedad específica involucrada; el grado o la implicación o la gravedad de la enfermedad; la respuesta del paciente individual; el compuesto particular administrado; el modo de administración; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; el régimen de dosificación seleccionado; el uso de medicación concurrente; y otras circunstancias relevantes.
Dosificación y administración de compuestos
Una dosis diaria típica contendrá entre 0,1 mg/kg aproximadamente y 1000 mg/kg aproximadamente del compuesto activo de esta invención. Preferentemente, las dosis diarias estarán entre 10 mg/kg aproximadamente y 100 mg/kg aproximadamente, lo más preferentemente serán de 10 mg aproximadamente.
En la realización del tratamiento de un paciente afectado con una dolencia, enfermedad o trastorno descrito en el presente documento, un compuesto de la presente invención se puede administrar sistémicamente en cualquier forma o modo que haga que el compuesto esté biodisponible en cantidades eficaces. La administración sistémica se puede conseguir mediante la administración de un compuesto de la presente invención en el torrente sanguíneo en un lugar que esté separado del órgano o tejido enfermo o afectado por una distancia medible. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden administrar oral, parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, intranasal, rectal, bucalmente, y similares. La administración oral o intravenosa en general se prefiere para el tratamiento de enfermedades neoplásicas o cáncer. Alternativamente, el compuesto se puede administrar no sistémicamente por administración local del compuesto de la presente invención directamente en el órgano o tejido enfermo o afectado. El tratamiento de enfermedades oculares caracterizadas por la presencia de una vasculatura proliferativa no maligna o neovascularización se puede conseguir usando procedimientos de administración no sistémicos tales como inyección intravitreal, inyección sub-Tenon, gotas oftálmicas, iontoforesis, formulación tópica e implantes y/o insertos. Alguien experto en materia de preparación de formulaciones puede seleccionar fácilmente la forma y modo de administración apropiados dependiendo de las características particulares del compuesto seleccionado, el estado de enfermedad a tratar, la fase de la enfermedad, y otras circunstancias relevantes.
El lector experto entenderá que todos los compuestos usados en la presente invención son capaces de formar sales, y que las formas salinas de compuestos farmacéuticos se usan habitualmente, a menudo debido a que cristalizan y se purifican más fácilmente que las bases libres. En todos los casos, el uso de los compuestos farmacéuticos descritos anteriormente en forma de sales está contemplado en la descripción del presente documento, y a menudo es preferible, y las sales farmacéuticamente aceptables de todos los compuestos están incluidas en sus nombres.
Según otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de la presente invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como se ha definido anteriormente y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones farmacéuticas se preparan mediante procedimientos conocidos usando principios muy conocidos y fácilmente disponibles. En la preparación de las composiciones de la presente invención, el principio activo normalmente se mezclará con un vehículo, o se diluirá con un vehículo, o se encerrará dentro de un vehículo, y puede estar en forma de cápsula, bolsita, papel, u otro contenedor. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido, o líquido que actúa como vehículo, excipiente, o medio para el principio activo. Las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, losanges, bolsitas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, disoluciones, jarabes, aerosoles, ungüentos que contienen, por ejemplo, hasta el 10% en peso de compuesto activo, cápsulas de gelatina dura y blanda, supositorios, disoluciones inyectables estériles, y polvos empaquetados estériles.
Algunos ejemplos de vehículos, excipientes, y diluyentes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, féculas, goma, goma arábiga, fosfato de calcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, jarabe acuoso, metilcelulosa, metil y propilhidroxi-benzoatos, talco, estearato de magnesio, y aceite mineral. Las formulaciones adicionalmente pueden incluir agentes lubricantes, agentes humectantes, emulsionantes y agentes suspensores, agentes conservantes, agentes edulcorantes, o agentes aromatizantes. Las composiciones de la invención se pueden formular para así proporcionar una liberación rápida, sostenida, o retardada del principio activo después de la administración al paciente empleando procedimientos muy conocidos en la materia.
Las composiciones preferentemente se formulan en una forma de dosificación unitaria, cada dosificación que contiene entre 1 mg aproximadamente y 500 mg aproximadamente, más preferentemente entre 5 mg aproximadamente y 300 mg aproximadamente (por ejemplo 25 mg) del principio activo. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada como dosificación unitaria para pacientes humanos y otros mamíferos, cada unidad que contiene una cantidad predeterminada del material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un vehículo, diluyente, o excipiente farmacéuticamente adecuado. Los siguientes ejemplos de formulación son solamente ilustrativos y no se pretende que limiten de ninguna forma el alcance de la invención.
Las composiciones de la presente invención se pueden formular de una manera convencional usando uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Así, los compuestos activos de la invención se pueden formular para la administración por vía oral, bucal, transdérmica (por ejemplo, parche), intranasal, parenteral (por ejemplo, intravenosa, intramuscular o subcutánea) o rectal o en una forma adecuada para la administración por inhalación o insuflación.
Alternativamente, los compuestos de la presente invención se pueden administrar en forma de liposomas. Como es sabido en la materia, los liposomas en general proceden de fosfolipoides u otras sustancias lipídicas. Los liposomas están formados por cristales líquidos hidratados mono-o multi-lamelares que se dispersan en un medio acuoso. Se puede usar cualquier lípido no tóxico, fisiológicamente aceptable y metabolizable capaz de formar liposomas. Las composiciones en forma de liposomas pueden contener, además de un compuesto de la presente invención, estabilizantes, conservantes, excipientes, y similares. Los lípidos preferidos son los fosfolípidos y las fosfatidilcolinas (lecitinas), tanto naturales como sintéticas. Los procedimientos para formar liposomas son muy conocidos en la materia (véase por ejemplo, Prescott Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, Nueva York, NY, 1976, p 33).
Para la administración por vía oral, las composiciones farmacéuticas pueden adoptar la forma de, por ejemplo, comprimidos o cápsulas preparadas por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, fécula de maíz pregelatinizada, polivinilpirrolidona o hidroxipropil metilcelulosa); agentes de relleno (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina de fosfato cálcico); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); desagregantes (por ejemplo, fécula de patata o glicolato sódico de fécula); o agentes humectantes (por ejemplo, laurilsulfato sódico). Los comprimidos se pueden recubrir mediante procedimientos muy conocidos en la materia. Las preparaciones líquidas para la administración por vía oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo, disoluciones, jarabes o suspensiones, o se pueden presentar en forma de producto seco para su reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Esas preparaciones líquidas se pueden preparar por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes suspensores (por ejemplo, jarabe de sorbitol, metilcelulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleosos o alcohol etílico); y conservantes (por ejemplo, metil o propil p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico).
Para la administración bucal la composición puede adoptar la forma de comprimidos o pastillas formulados de manera convencional.
Los compuestos activos de la invención se pueden formular para la administración por vía parenteral mediante inyección, incluyendo el uso de técnicas de cateterización convencional o infusión. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en formas de dosificación unitarias, por ejemplo, en ampollas o en contenedores multidosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos acuosos u oleosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes suspensores, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el principio activo puede estar en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, pirógeno estéril exento de agua, antes de su uso.
Los compuestos activos de la invención también se pueden formular en composiciones recta-les tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases para supositorio convencionales tales como manteca de coco u otros glicéridos.
Para la administración por vía intranasal o para la administración por inhalación, los compuestos activos de la invención se administran de manera conveniente en forma de disolución o suspensión desde un contenedor de pulverización mediante bomba que es oprimido o bombeado por el paciente o en forma de presentación de pulverización en aerosol desde un contenedor presurizado o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación se puede determinar proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. El contenedor presurizado o el nebulizador pueden contener una disolución o suspensión del compuesto activo. Las cápsulas y cartuchos (hechos, por ejemplo, de gelatina) para uso en un inhalador o un insuflador se pueden formular para que contengan una mezcla en polvo de un compuesto de la invención y de una base en polvo adecuada tal como lactosa o fécula.
Los comprimidos o cápsulas de los compuestos se pueden administrar en solitario o dos o más a la vez según sea apropiado. También es posible administrar los compuestos en formulaciones de liberación sostenida.
El facultativo determinará la dosificación real que será más conveniente para un paciente individual y variará con la edad, el peso y la respuesta del paciente particular. Las dosificaciones anteriores son ejemplares del caso medio. Naturalmente puede haber casos particulares en los que se requieran intervalos de dosificación superiores o inferiores, y tales casos están dentro del alcance de esta invención.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por inhalación o en forma de supositorio o pesario, o se pueden aplicar tópicamente en forma de loción, disolución, crema, ungüento o polvos de talco. Un medio alternativo de administración transdérmica es con el uso de un parche cutáneo. Por ejemplo, se pueden incorporar en una crema que consta de una emulsión acuosa de polietilenglicoles o parafina líquida. También se pueden incorporar, a una concentración de entre el 1 y el 10% en peso, a un ungüento que consta de una cera blanca o una base de parafina blanda blanca junto con tantos estabilizantes y conservantes como sea necesario.
"Administración" significa cualquiera de los procedimientos de administración habituales de un compuesto a un sujeto, conocidos por aquellos expertos en la materia. Ejemplos incluyen, pero no están limitados a administración intravenosa, intramuscular o intraperitoneal.
Para los propósitos de esta invención, "vehículos farmacéuticamente aceptables" significa cualquiera de los vehículos farmacéuticos habituales. Ejemplos de vehículos habituales son muy conocidos en la materia y pueden incluir, pero no están limitados a, cualquiera de los vehículos farmacéuticos habituales tales como disoluciones de tampón fosfato salino, tampón fosfato salino que contiene POLYSORB 80, agua, emulsiones tales como emulsión de aceite/agua, y diversos tipos de agentes humectantes. Otros vehículos también pueden incluir disoluciones estériles, comprimidos, comprimidos recubiertos, y cápsulas.
Normalmente esos vehículos contienen excipientes tales como fécula, leche, azúcar, ciertos tipos de gelatina de arcilla, ácido esteárico o sus sales, estearato de magnesio o de calcio, talco, grasas o aceites vegetales, gomas de glicoles, u otros excipientes conocidos. Esos vehículos también pueden incluir aditivos aromatizantes y colorantes u otros principios. Las composiciones que comprenden estos vehículos se formulan mediante procedimientos convencionales muy conocidos.
Los procedimientos de determinación de una "cantidad eficaz" son muy conocidos por aquellos expertos en la materia y dependen de factores que incluyen, pero no están limitados a, el tamaño del paciente y el vehículo usado.
EJEMPLOS
La invención se define en profundidad por referencia a los siguientes ejemplos y preparaciones que describen la manera y el proceso de elaboración y uso de la invención y son ilustrativos más que limitantes.
Materiales y procedimientos
Los compuestos químicos se obtuvieron comercialmente en la Aldrich Chemical Company, Fisher Scientific y ACROS Chemicals y se usaron directamente tal y como se habían adquirido. Los disolventes tales como acetona, dietiléter y acetato de etilo se usaron tal y como se habían adquirido, y otros disolventes se purificaron mediante procedimientos habituales. El tetrahidrofurano (THF) se secó sobre potasio metálico y benzofenona y se destiló justo antes de su uso; el cloruro de metileno (CH2Cl2) se secó usando hidruro de calcio y se destiló antes de su uso. La trietilamina se destiló sobre hidruro de calcio y se almacenó en una botella sellada.
Las reacciones se siguieron mediante cromatografía de capa fina (TLC) y/o cromatografía de gases. La purificación de los productos se llevó a cabo usando cromatografía instantánea en columna con gel de sílice. Las placas de gel de sílice para la cromatografía de capa fina y el gel de sílice (red 260-400) para la cromatografía en columna se obtuvieron en Merck EM Science.
Los espectros de RMN 1H y RMN 13C se registraron en cloroformo deuterado o dimetilsulfóxido deuterado u óxido del deuterio usando un espectrómetro de RMN Brüker AMX 360 MHz (90 MHz para el 13C, y 145 MHz para el 31P) o un DPX Avance 300 MHz (75 MHz para el 13C, y 120 MHz para el 31P). Los picos se clasificaron como singlete (s), doblete (d), doble doblete (dd), triplete (t), o multiplete (m) con la constante de acoplamiento (J) expresada en Hz. El espectro de masas de alta resolución se obtuvo usando un espectrómetro de masas VG/Fisons GC/NASS High Resolution Mass Spectrometer. Los análisis elementales se obtuvieron en el Atlantic Microlab Inc., Norcross, Georgia. Los puntos de fusión se determinaron usando un aparato de puntos de fusión Thomas-Hoover y están sin corregir.
Ejemplo 1: Síntesis de análogos de 3-aroilcromeno y sus profármacos correspondientes
El cromeno (3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-7-metoxi-8-(t-butildimetilsililoxi)-2H-cromeno a modo de ejemplo y su profármaco de fosfato correspondiente se sintetizaron como se describe en la Figura 1. En condiciones de Stetter, la amina básica libre 4 y el diol 2 condensaron en el fenol 5 esperado con un rendimiento razonable.
La cristalografía de rayos X confirmó que la estructura de 5 era un derivado de cromeno único, que tenía el grupo trimetoxibenzoilo en posición β con respecto al anillo arilo.
i) 2,3-Dihidroxi-4-metoxi-benzaldehído, 2
Se disolvió 2,3,4-trimetoxibenzaldehído,1 (9,8 g, 50 mmol) en diclorometano anhidro (150 ml) en argón a temperatura ambiente. Se agitó durante 10 minutos y se añadió tricloruro de boro (100 ml, 100 mmol, 2 eq; disolución 1,0 M en diclorometano). La mezcla de reacción oscura se agitó durante 24 horas y a continuación se vertió lentamente en bicarbonato sódico al 10% (ac) (40 g/360 ml). La disolución resultante se acidificó con ácido clorhídrico a pH 1. La fase de diclorometano se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (4x100 ml) y se secó. La evaporación del disolvente sobre vacío dio un aceite pardo que se absorbió sobre gel de sílice y se sometió a cromatografía instantánea (70:30, hexano-acetato de etilo). El diol 2 se obtuvo como un sólido amarillo pálido (6,70 g, 80%).
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,99 (3H, s, OCH3), 5,54 (1H, s, OH), 6,62 (1H, d, J = 8,67 Hz, ArH), 7,14 (1H, d, J = 8,04 Hz, ArH), 9,75 (1H, s, CHO), 11,12 (1H, s, OH); RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 195,21, 153,05, 149,08, 133,05, 126,10, 116,11, 103,66, 56,39.
ii) 3-Dimetilamino-1-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-propan-1-ona, 4
Una mezcla de 3’,4’,5’-Trimetoxiacetofenona 3 (42,20 g, 200 mmol), clorhidrato de dimetilamina (16,31 g, 200 mmol), paraformaldehído (9 g, 300 mmol), ácido clorhídrico concentrado (1,5 ml), y etanol (80 ml) en argón se calentó a temperatura de reflujo durante 1,5 horas. A continuación se le añadió un equivalente de paraformaldehído (6 g, 200 mmol) y se calentó a temperatura de reflujo durante otras 6 horas. Se añadieron 300 ml de acetona y la disolución se calentó a temperatura de reflujo durante 15 minutos aproximadamente. Se obtuvo un sólido blanco que se cristalizó en la
nevera durante toda la noche, se filtró y se secó. El clorhidrato de amina así obtenido se neutralizó con NaOH 1M, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con cloruro sódico saturado, y se secar con sulfato de magnesio anhidro. La evaporación del disolvente sobre vacío dio la amina básica libre 4 en forma de aceite pardo amarillento (27,60 g, 52%).
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,31 (6H, s, 2 x CH3), 2,76 (2H, t, CH2), 3,14 (2H, t, CH2), 3,92 (9H, s, 3 x OCH3), 7,24 (2H, s, J = 3,54 Hz, ArH). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 196,59, 152,09, 141,60, 131,25, 104,64, 59,18, 55,14, 53,69, 44,50, 35,68.
iii) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-7-metoxi-8-hidroxi-2H-cromeno, 5
Una mezcla de 2-(N,N-dimetilamino)etil-(3',4',5'-trimetoxifenil)cetona (4, 1,17 g, 4,37 mmol), 2,3-dihidroxi-4-metoxibenzaldehído (2, 0,74 g, 4,37 mmol), bromuro de 3-etil-5-(2-hidroxiethil)-4metiltiazolio (0,12 g, 0,44 mmol) y Et3N (1 ml) se calentó a reflujo a 115°C durante 3,5 horas. Después de inactivar con HCl 1 M, el producto se extrajo con CH2Cl2. El extracto combinado se lavó con agua, se enjuagó con salmuera y se secó con sulfato de magnesio anhidro. La purificación se realizó por cromatografía instantánea en columna de gel de sílice (60:40, hexano-acetato de etilo) que dio el fenol puro de color amarillo (0,179 g, 0,48 mmol) con un rendimiento del 11%. El fenol tenía un punto de fusión de 189-190°C.
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,91 (6H, s, 2 x OCH3), 3,94 (6H, s, 2 x OCH3), 5,20 (2H, s, CH2), 5,50 (1H, s, OH), 6,54 (1H, d, J = 8,5 Hz, ArH), 6,71 (1H, d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,97 (2H, s, ArH), 7,17 (1H, s, CH=C). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 193,58, 153,43, 150,85, 142,80, 141,85, 137,47, 134,09, 133,30, 128,27, 121,02, 115,81, 106,88, 105,10, 6,28, 61,40, 56,77, 56,70. Anal. calculado para C20H20O7 : C, 64,51; H, 5,41; O, 30,08. Hallado C, 64,48; H, 5,41; O, 30,25.
iv) Dibencilfosfato, 6
A una disolución agitada del fenol (0,2 g, 0,54 mmol) en acetonitrilo (1 ml) en argón enfriado a -20ºC se le añadió tetracloruro de carbono (0,26 ml, 2,70 mmol). La disolución resultante se agitó durante 10 minutos antes de añadir diisopropiletilamina (0,21 ml, 1,3 mmol) y DMAP (0,01 g, 0,11 mmol). Aproximadamente 1 minuto más tarde, se llevó a cabo la adición lenta gota a gota de dibencilfosfato manteniendo la temperatura por debajo de -20ºC. Después de 45 minutos, se añadió KH2PO4 0,5 M y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Se lavó un extracto de acetato de etilo con cloruro sódico saturado (ac), seguido de agua y se secó. La retirada del disolvente sobre vacío dio un aceite amarillo que se separó adicionalmente por cromatografía en gel de sílice (súbita, 60:40, hexano-acetato de etilo) para dar (0,34 g, 0,54 mmol, 100%) del dibencilfosfato en forma de aceite verde claro.
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,78 (3H, s, OCH3), 3,89 (6H, s, 2 x OCH3), 3,92 (3H, s, OCH3), 5,11 (2H, s, CH2), 5,31 (4H, m, 2 x CH2-Ph), 6,54 (1H, d, J = 8,59 Hz), 6,94 (1H, d, J = 8,66 Hz, ArH), 6,97 (2H, s, ArH), 7,15 (1H, s, ArH), 7,37 (10H, m, 2 x C6H5); RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 192,60, 154,63, 154,59, 152,79, 147,63, 147,58, 141,31, 136,11, 135,78, 135,68, 132,47, 128,41, 128,27, 128,15, 127,89, 127,48, 125,88, 115,44, 106,25, 104,98, 69,52, 69,44, 65,51, 60,67, 60,09, 56,09, 55,94; RMN 31P (120 MHz, CDCl3) δ -5,56
v) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-7-metoxi-2H-cromeno-sal de fosfato, 7
El dibencilfosfato (0,19 g, 0,30 mmol) se disolvió en acetonitrilo (1,0 ml), en argón, enfriado a 0ºC y se le añadió bromotrimetilsilano (0,12 ml, 0,902 mmol). Después de 3 horas aproximadamente, la TLC confirmó la finalización de la desbencilación, a continuación la mezcla de reacción se trató con metóxido sódico (25% en peso en metanol, 0,21 ml, 0,902 mmol) y se dejó en agitación durante toda
5 la noche. El producto se filtró y se secó para dar el 74% (0,11 g, 0,221 mmol) de la sal pura.
RMN 1H (300 MHz, D2O) δ 3,72 (3H, s, OCH3), 3,74 (6H, s, 2 x OCH3), 3,77 (3H, s, OCH3), 4,92 (2H, s, CH2), 6,56 (1H, d, J = 8,62 Hz, ArH), 6,80 (1H, d, J = 8,66 Hz, ArH), 6,84 (2H, s, ArH), 7,03 (1H, s, CH=C)
10 RMN 31P (120 MHz, D2O) δ -3,01
Los siguientes cromenos se prepararon de una manera similar a la vía sintética representada en la Figura 1.
15 vi) 3-(3’,4’,5’-Trimetoxibenzoil)-7-metoxi-2H-cromeno,(8, 0,108 g, 0,30 mmol, 15% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,82 (3H, s, OCH3), 3,90 (6H, s, 2 x OCH3), 3,93 (3H, s, OCH3), 5,13 (2H, bs, CH2), 6,47 (1H, d, J = 2,4 Hz, ArH), 6,52 (1H, dd, J = 8,4 Hz, 2,4 Hz, ArH), 6,96 (1H, s, ArH), 7,05 (1H, d, J = 8,4 Hz, ArH), 7,17 (1H, s, 1H, CH=C); RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 193,03, 163,51, 157,23, 152,94, 137,17, 133,00, 130,47, 126,68, 114,18, 108,64,
20 106,30, 101,51, 65,57, 60,94, 60,38, 56,28, 55,51, 14,16. Anal calculado para C20H20O6: C, 67,41; H, 5,66; O, 26,94. Hallado C, 67,20; H, 5,63; O, 27,09.
imagen1
vii) 3-(3’,4’,5’-Trimetoxibenzoil)-6-hidroxi-7-metoxi-2H-cromeno,(9, 0,30 g, 0,81 mmol, 12,16% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,90 (6H, s, 2 x OCH3), 3,92 (3H, s, OCH3), 3,93 (3H, s, OCH3), 5,08 (2H, s, CH2), 6,50 (1H, s, ArH), 6,69 (1H, s, ArH), 6,96 (2H, s, ArH), 7,11 (1H, s, CH=C); RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 192,95, 153,70, 150,30, 149,96, 141,57, 140,61, 137,09, 133,00, 127,48, 113,82, 113,66, 106,59, 99,72, 65,56, 60,99, 56,38, 56,21.
imagen1
viii) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-6-fosfato-7-metoxi-2H-cromeno, sal disódica (10, 0,04 g, 0,08 mmol, 58% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, D2O δ 3,76 (6H, s, 2 x OCH3), 3,83 (6H, s, 2 x OCH3), 4,90 (2H, s, CH2), 6,52 (1H, s, ArH), 6,89 (2H, s, ArH), 7,06 (1H, s, ArH), 7,13 (1H, s, CH=C); RMN 31P (120 MHz, D2O) δ -2,77.
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ix) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-7-metoxi-8-fluorometoxi-2H-cromeno (11, 0,22 g, 0,55 mmol, 28% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,90 (9H, s, 3 x OCH3), 3,94 (3H, s, OCH3), 5,15 (2H, s, CH2), 5,59 (2H, d, OCH2F, J = 51,18 Hz), 6,57 (1H, d, J = 8,58 Hz, ArH), 6,95 (1H, d, J = 858 Hz), 6,98 (2H, s, ArH), 7,15 (1H, s, CH=C) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 192,90, 155,80, 153,05, 148,77, 141,60, 136,41, 133,16, 132,74, 127,90, 126,00, 119,39, 115,80, 106,55, 105,31, 102,15, 65,86, 60,97, 56,38, 56,30 estructura confirmada por DEPT 45, 90, 135; RMN 19F (282 MHz, CDCl3) δ -146,09.
imagen1
10 x) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-7,8-dimetoxi-2H-cromeno (12, 0,24 g, 0,62 mmol, 3% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,90 (6H, s, 2 x OCH3), 3,91 (3H, s, OCH3), 3,93 (3H, s, OCH3), 5,18 (2H, s, CH2), 6,53 (1H, d, J = 8,52 Hz), 6,89 (1H, d, J = 8,49 Hz), 6,97 (2H, s, ArH), 7,15 (1H, s, CH=C); RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 193,00, 156,41, 153,08, 148,93, 141,59, 137,32, 136,91, 132,93, 127,70, 124,63, 115,88, 106,60, 105,35, 65,73, 61,12, 61,00, 56,42, 56,17.
15 xi) 3-(3’,4’,5’-Trimetoxibenzoil)-6,7-dimetoxi-2H-cromeno (13, 0,11 g, 29 mmol, 3% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,83 (3H, s, OCH3), 3,91 (6H, s, 2 x 3 OCH3), 3,93 (3H, s, OCH3), 5,10 (2H, s, CH2), 6,52 (1H, s, ArH), 6,57 (1H, s, ArH), 6,96 (2H, s, ArH), 7,15 (1H, s, CH=C) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 192,92,152,99, 151,14, 144,30, 141,34,
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20 137,30, 133,12, 126,86, 112,81, 111,16, 107,17, 106,45, 105,63, 100,38, 65,54, 60,93, 56,38, 56,12.
imagen1
xii) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-5,7-dimetoxi-2H-cromeno (14, 0,12 g, 0,31 mmol, 1,5% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,79 (3H, s, OCH3), 3,81 (3H, s, OCH3), 3,90 (6H, s, 2 x OCH3), 3,94 (3H, s, OCH3), 5,09 (2H, s, CH2), 6,04 (1H, d, J = 8,2,13 Hz, ArH), 6,12 (1H, d, J = 2,05 Hz, ArH), 7,00 (2H, s, ArH), 7,52 (1H, s, CH=C); RMN 13C (75 MHz, CDCl3) δ 192,82, 164,46, 158,48, 158,02, 152,95, 141,25, 133,33, 132,93, 124,49, 106,64, 104,85, 93,54, 92,29, 65,34, 60,95, 56,32, 55,68, 55,59.
imagen1
xiii) 3-(3',4',5'-Trimetoxibenzoil)-8-hidroxi-2H-cromeno (15, 1,94 g, 5,67 mmol, 15,7% de rendi
10 miento): RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 3,91 (6H, s, 2 x OCH3), 3,94 (3H, s, OCH3), 5,19 (2H, d, CH2), 5,63 (1H, s, OH), 6,72 (1H, dd, J = 7,57 Hz, J = 1,51 MHz, ArH), 6,86 (1H, t, J = 7,98 Hz, ArH), 6,97 (1H, dd, J = 8,07 Hz, J = 1,54 Hz, ArH), 6,99 (2H, s, ArH), 7,19 (1H, s, -CH=C); RMN 13C (75 MHz, DMSO) δ 193,56, 153,49, 144,88, 142,22, 136,80, 132,85, 130,33, 122,57, 121,58, 120,99, 118,96, 107,02, 66,35, 61,40, 56,79.
15 xiv) 3-(3’,4’,5’-Trimetoxibenzoil)-8-fosfato-2H-cromeno, sal disódica (16, 0,20 g, 0,43 mmol, 50% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 3,75 (3H, s, OCH3), 3,84 (6H, s, 2 x OCH3), 5,02 (1H, s, CH2), 6,85 (1H, t, J = 7,91 Hz, ArH), 7,02 (2H, s, ArH), 7,10 (1H, d, J = 6,94 Hz, ArH), 7,37 (1H, s, CH=C), 7,39 (1H, d, J = 8,15 Hz, ArH); RMN 13C (75 MHz, DMSO) δ 192,24, 152,59, 145,55, 145,46,
imagen1
20 140,80, 136,16, 132,17, 129,33, 123,95, 123,82, 122,25, 120,95, 106,37, 64,59, 60,04, 55,96; RMN 31P (120 MHz, DMSO) δ -4,70.
imagen1
xv) 3-(3’,4’,5’-Trimetoxibenzoil)-7,8-dihidroxi-2H-cromeno (17, 0,1 g, 27,90 mmol 15,0% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 3,78 (3H, s, OCH3), 3,82 (6H, s, 2 x OCH3), 4,98 (1H, s, CH2), 6,41 (1H, d, J = 8,10 Hz, ArH), 6,75 (1H, d, J = 8,31 Hz, ArH), 6,94 (2H, s, ArH), 7,29 (1H, s, -CH=C); RMN 13C (75 MHz, DMSO) δ 192,02, 152,54, 150,39, 143,71, 140,39, 132,93, 132,81, 125,32, 121,00, 113,69, 109,37, 106,15, 64,55, 60,02, 55,94.
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xvi) 3-(3’,4’,5’-Trimetoxibenzoil)-7,8-difosfato-2H-cromeno, sal tetrasódica (18, 0,07 g, 0,12 mmol, 44,4% de rendimiento): RMN 1H (300 MHz, D2O) δ 3,70 (3H, s, OCH3), 3,71 (6H, s, 2 x OCH3), 4,96 (2H, s, CH2), 6,87 (4H, s, ArH), 7,09 (1H, s, -CH=C); RMN 31P (120 MHz, D2O) δ -2,99, -2,59,
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Ejemplo 2: Síntesis de análogos de 3-aroilcromeno nitrogenados
Además de los profármacos de éster fosfato que se describen en esta solicitud para agentes
15 antimitóticos basados en cromeno, está contemplado que profármacos de base fosforosa derivados de cromenos nitrogenados puedan tener ventajas terapéuticas como agentes para la destrucción selectiva de la vasculatura del tumor. Estos compuestos son principalmente serinamidas, fosforamidatos, y dianiones de fosfato relacionados que se acoplan a un sustituyente amino de un análogo de cromeno. Cuando se utilizan in vivo, los análogos de fosforamidatos son capaces de proporcionar un
20 compuesto más soluble que la amina correspondiente, incrementando así la biodisponibilidad del fármaco parental. El enlace P-N se puede escindir enzimáticamente mediante fosfatasas séricas liberando la amina que puede inhibir el ensamblaje de la tubulina de una manera análoga al CA4P. Además, el grupo carbonilo del sustituyente benzoilo se puede sustituir con un oxígeno para generar un nuevo compuesto que mantiene la misma eficacia biológica o una eficacia biológica simi
lar con la tubulina. Estos compuestos se pueden preparar mediante una reacción de adición-eliminación utilizando el anión trimetoxifenólico como nucleófilo. También se contemplan otros átomos de unión entre los anillos arilo-arilo, incluyendo tioéteres (-S-), alcoholes secundarios (-CH(OH)-), y metilenos (-CH2-). Se pretende que estos compuestos formen un puente de un átomo entre el arilo
5 sustituido y el anillo cromeno. Por ejemplo, los alcoholes secundarios se pueden generar por reducción de las cetonas correspondientes (-C=O)-con borohidruro sódico, y los metilenos se pueden generar por reducción con ácido trifluoroacético. Alternativamente, un único enlace covalente puede ser el sustituto del enlazador de 1 átomo.
10 Ejemplo 3: Inhibición de la polimerización de la tubulina Los valores de CI50 para la polimerización de la tubulina se determinaron según un procedimiento descrito previamente (Bai y col., Cancer Research, 1996). La tubulina purificada se obtuvo de células cerebrales de ganado bovino como se ha descrito previamente (Hamel y Lin, Biochemistry, 1984). Se preincubaron diversas cantidades de inhibidor durante 15 minutos a 37ºC con tubulina
15 purificada. Después del periodo de incubación, la reacción se enfrió y se añadió GTP para inducir la polimerización de la tubulina. A continuación la polimerización se controló en un espectrofotómetro Gilford a 350 nm. Las mezclas de reacción finales (0,25 ml) contenían 1,5 mg/ml de tubulina, 0,6 mg/ml de proteínas asociadas a microtúbulos (MAP), GTP 0,5 mM, MgCl2 0,5 mM, DMSO al 4% y tampón 4-morfolinetanosulfonato 0,1 M (MES, pH 6,4). La CI50 es la cantidad de inhibidor necesaria
20 para inhibir la polimerización de tubulina al 50% con respecto al grado de inhibición que se produce en ausencia del inhibidor.
Tabla 1. Inhibición in vitro de la polimerización de la tubulina
Compuesto
CI50 (µM)
CA-4
0,73
5
1-2
8
4-10
9
> 40
10
-
11
-
12
20
13
20
14
20
15
2-4
16
> 40
17
10-20
18
> 40
Ejemplo 4: Actividad citotóxica in vitro contra líneas de células cancerígenas
Los compuestos recién preparados se evaluaron para su actividad citotóxica contra una variedad de líneas celulares derivadas de tumores humanos usando un sistema de ensayo similar al procedimiento del Instituto nacional para el cáncer descrito previamente (Monks y col., J. Natl. Cancer Inst., 1991). Resumiendo, las suspensiones celulares, diluidas según el tipo celular particular y la densidad celular objetivo esperada (5.000-40.000 células por pocillo basado en las características del crecimiento celular), se añadieron con una pipeta (100 µl) a placas de microvaloración de 96 pocillos. Los inoculados se dejaron durante un periodo de preincubación de 24-28 horas a 37ºC para su estabilización. La incubación con los compuestos inhibidores se prolongó durante 48 horas en atmósfera
5 de CO2 al 5% y en humedad del 100%. La determinación de crecimiento celular se llevó a cabo mediante la fijación in situ de las células, seguido por tinción con un colorante de unión a proteínas, la sulforodamina B (SRB), que se une a los aminoácidos básicos de las macromoléculas celulares. La tinción solubilizada se midió espectrofotométricamente.
Se evaluaron diversos compuestos para su actividad citotóxica contra las líneas celulares de
10 leucemia humana P388. Se midió la dosis eficaz o el valor DE50 (definido como la dosificación eficaz necesaria por inhibir el 50% de crecimiento celular). Se evaluaron éstos y otros compuestos en términos de actividad inhibitoria del crecimiento frente a diversas otras líneas de células cancerígenas humanas incluyendo: sistema nervioso central ("SNC", SF-268), páncreas (BXPC-3), cáncer de pulmón de células no pequeñas ("pulmón-NSC", NCI-H460), mama (MCF-7), colon (KM20L2), ovario
15 (OVCAR-3), y próstata (DU-145). Los resultados se describen en la Tabla 2 a continuación. La inhibición del crecimiento GI50 (definida como la dosificación necesaria para inhibir el crecimiento de células tumorales en un 50%) se representa para cada línea celular.
Tabla 2. Citotoxicidad in vitro contra líneas de células cancerígenas humanas
GI50 (µg/ml) para la línea celular
Compuesto
DE50 (µg/ml) para la línea P-388 SF-268 BXPC-3 NCI-H460 MCF-7 KM20L2 DU-145
5
N.D. 0,022 3,5 0,46 0,055 3,2 0,049
7
0,173 0,034 0,44 0,14 0,056 3,5 0,18
8
2,04 0,32 0,27 0,30 0,27 0,47 0,26
9
28,2 >10 7,1 5,5 7,3 > 10 3,9
10
N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
11
N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
12
0,41 0,34 0,46 0,37 0,48 0,40 0,16
13
2,5 0,50 0,38 0,40 0,56 0,40 0,42
14
16,3 0,40 0,43 0,40 0,47 0,37 0,24
15
0,093 0,048 2,4 0,044 0,21 4,0 0,026
16
0,019 0,058 1,6 0,12 0,45 5,4 0,046
17
1,8 0,32 3,0 0,34 0,48 6,3 0,23
18
0,56 3,4 > 10 3,5 4,2 > 10 2,2
20
Ejemplo 5: Inhibición del flujo sanguíneo tumoral
Los efectos antivasculares del profármaco fosfato de cromeno se valoraron en ratones que
portan un tumor usando un ensayo de cuentas fluorescentes. Se estableció un modelo tumoral de
hemangioendotelioma MHEC-5T mediante inyección subcutánea de 0,5 x 106 células transformadas
25 en cultivo de la línea de células endoteliales vasculares de miocardio murina ("MHEC5-T") en el flanco derecho de ratones Fox Chase CB-17 Severe Combined Immunodeficient ("SCID"). Cuando los tumores transplantados alcanzaron un tamaño de 500 mm³ (un tamaño sin el desarrollo de necrosis),
los ratones recibieron una única inyección intraperitoneal (i.p.) de control salino o de compuesto a dosis que abarcan entre 3,2 y 25 mg/kg. 24 horas después del tratamiento, los ratones fueron inyectados intravenosamente con 0,25 ml de cuentas FluoSphere diluidas (1:6 en solución salina fisiológica) en la vena de la cola, se sacrificaron después de tres minutos, y el tumor se escindió por criosec5 cionamiento. Las criosecciones tumorales de un grosor de 8 µm se examinaron directamente usando microscopía fluorescente cuantitativa. Los vasos sanguíneos estaban marcados por una fluorescencia azul procedente de las cuentas inyectadas. Para su cuantificación, se analizó la imagen de tres secciones procedentes de tres tumores tratados en cada grupo y el estrangulamiento vascular se expresó como área del vaso (mm²) por área del tejido tumoral (mm²) como un porcentaje del control
10 ("%VAPM").
Tabla 3. Actividad de acción vascular de los cromenos
Compuesto
%VAPM a una dosis de 100 mg/kg %VAPM a una dosis de 10 mg/kg
5
90 80
7
33 57
Ejemplo 6: Evaluación del control del crecimiento del tumor in vivo mediante el ensayo de 15 fibras huecas
Se crecieron células tumorales humanas en fibras huecas de fluoruro de polivinilideno (PVDF) y cada línea celular se inyectó en los compartimentos de la membrana intraperitoneal (IP) y subcutánea (SC) de los ratones. Los ratones fueron inyectados intraperitonealmente con dos dosis de prueba diferentes del agente antitumoral potencial. Los animales control se inyectan con el diluyente. Se usó
20 el ensayo de conversión de la tinción de formazán (MTT) para determinar la masa de células viables para valorar los efectos anticancerígenos del ligando. El %T/C se calculó usando la densidad óptica promedio de la muestra tratada con el compuesto dividido por la densidad óptica promedio de los animales control.
25 FORMAS DE REALIZACIÓN ALTERNATIVAS Todas las composiciones y procedimientos descritos y reivindicados en el presente documento se pueden realizar y ejecutar sin experimentación indebida en vista de la presente descripción. Aunque las composiciones y procedimientos de esta invención se han descrito en términos de formas de realización preferidas, será evidente para aquellos expertos en la materia que se pueden aplicar
30 variaciones a las composiciones y/o procedimientos y en las etapas o en la secuencia de etapas del procedimiento descrito en el presente documento sin apartarse del alcance de la invención. Más específicamente, será evidente que ciertos agentes que están tanto química como fisiológicamente relacionados se pueden sustituir por los agentes descritos en el presente documento consiguiendo resultados idénticos o similares.
35 Será fácilmente evidente para cualquier experto en la materia que existen diversas formas de unión de grupos trimetoxiarilo y trimetoxiaroilo alrededor de un andamio molecular cromeno de una manera que dará como resultado una conformación molecular similar capaz de experimentar un pseudo apilamiento pi-pi. Además, aunque el motivo trimetoxiarilo parece ser óptimo para mejorar la unión a tubulina, también es muy posible que otra combinación de sustituyentes alcoxi (tal como etoxi, propoxi, isopropoxi, aliloxi, etc.) ya sea en forma de patrón trisustituido o disustituido (con un tipo de resto alcoxi) o monosustituido (con un resto alcoxi diferente), o con tres tipos distintos de restos alcoxi, también pueda tener unas buenas características de unión a la tubulina. También es concebible que en lugar de tener grupos arilalcoxi, es posible sustituir simplemente restos aril-alquilo y aril-alquenilo y aún mantener el perfil de citotoxicidad mejorado. Los grupos fenólicos también pueden tener actividad sobre estos ligandos cromeno descritos. La síntesis de cualquiera de estos ligandos cromeno modificados será muy evidente para alguien experto en la materia, y a menudo sólo supondrá una elección diferente de los materiales de partida iniciales. Para preparar estos ligandos alternativos, se pueden emplear los mismos esquemas sintéticos que se han descrito en el presente documento o esquemas similares sólo con ligeras modificaciones.
REFERENCIAS
Las siguientes citas se incorporan en las partes pertinentes por referencia en el presente documento por las razones citadas.
(1)
Bai, R.; Schwartz, R. E.; Kepler, J. A.; Pettit, G. R.; Hamel, E., Characterization of the Interaction of Cryptophycin with Tubulin: Binding in the Vinca Domain, Competitive Inhibition of Dolastatin 10 Binding, and an Unusual Aggregation Reaction, Cancer Res., 1996, 56, 4398-4406.
(2)
Bai, R.; Schwartz, R. E.; Kepler, J. A.; Pettit, G. R.; Hamel, E., Characterization of the Interaction of Cryptophycin with Tubulin: Binding in the Vinca Domain, Competitive Inhibition of Dolastatin 10 Binding, and an Unusual Aggregation Reaction, Cancer Res., 1996, 56 , 43984406.
(3)
Bailly, C, Bal C, Barbier P, Combes S, Finet J-P, Hildebrand M-P, Peyrot V, Wattez N. Synthesis and biological evaluation of 4-Arylcoumarin analogues of Combretastatins. Journal of Medicinal Chemistry. 2003. 46, 5437-44.
(4)
Boyd, M. R.; Paull, K. D., Some Practical Considerations and Applications of the National Cancer Institute In Vitro Anticancer Drug Discovery Screen, Drug Development Research, 1995,34,91.
(5)
Chaplin, D. J.; Dougherty, G. J. Tumor vasculature as a target for cancer therapy. Br. J. Cancer Therapy. 1999, 80 (Suppl. 1), 57-64.
(6)
Chaplin DJ, Pettit GR, Hill SA. Anti-vascular approaches to solid tumor therapy: Evaluation of combretastatin A4 phosphate. Anticancer Res., 1999; 19:189-196.
(7)
Chaplin JH, Flynn BL. A multi-component coupling approach to benzo[b]furans and chromenes. Chem. Commun. 2001, 1594-5.
(8)
Chavan, A. J.; Richardson, S. K.; Kim, H.; Haley, B. E.; Watt, D. S., Forskolin Photoaffinity Probes for the Evaluation of Tubulin Binding Sites, Bioconjugate Chem. 1993, 4, 268.
(9)
Cortese, F.; Bhattacharyya, B.; Wolff, J., Podophyllotoxin as a Probe for the Colchicine Binding Site of Tubulin, J. Biol. Chem., 1977, 252, 1134.
(10)
Cushman, M.; He, H.-M.; Katzenellenbogen, J. A.; Varma, R. K.; Hamel, E.; Lin, C. M.; Ram, S.; Sachdeva, Y. P., Synthesis of Analogs of 2-Methoxyestradiol with Enhanced Inhibitory Effects on Tubulin Polymerization and Cancer Cell Growth, J. Med. Chem., 1997.
(11)
Cushman, M.; He, H-M.; Katzenellenbogen, J. A.; Lin, C. M.; Hamel, E., Synthesis, Antitubulin and Antimitotic Activity, and Cytotoxicity of Analogs of 2-Methoxyestradiol, an Endogenous Mammalian Metabolite of Estradiol That Inhibits Tubulin Polymerization by Binding to the Colchicine Binding Site, J. Med Chem., 1995, 38, 2041.
(12)
Cushman, M.; Nagarathnam, D.; Gopal, D.; Chakraborti, A. K.; Lin, C.M.; Hamel, E. Synthesis and Evaluation of Stilbene and Dihydrostilbene Derivatives as Potential Anticancer Agents That Inhibit Tubulin Polymerization, J. Med Chem, 1991, 34, 2579.
(13)
D'Amato, R. J.; Lin, C. M.; Flynn, E.; Folkman, J.; Hamel, E., 2-Methoxyestradiol, an endogenous mamalian metabolite, inhibits tubulin polymerization by interacting at the colchicine site, Proc. Natl. Acad Sci. 1994, 91, 3964.
(14)
Dark, G. G., Hill, S. A., Prise, V. G., Tozer, G. M., Pettit, G. R., Chaplin, D. J., Combretastatin A-4, an Agent That Displays Potent and Selective Toxicity Toward Tumor Vasculature, Cancer Res., 1997, 57, 1829-1834
(15)
Davis PD, Dougherty GJ, Blakey DC, Galbraith SM, Tozer GM, Holder AL, Naylor MA, Nolan J, Stratford MR, Chaplin DJ, Hill SA. ZD6126: A Novel Vascular-targeting Agent that causes selective destruction of tumor vasculature. Cancer Research. 2002. 62(24): 7247-53.
(16)
Dorr, R. T.; Dvorakova, K.; Snead, K.; Alberts, D. S.; Salmon, S. E.; Pettit, G. R., Antitumor Activity of Combretastatin A4 Phosphate, a Natural Product Tubulin Inhibitor, Invest. New Drugs, 1996,14, 131.
(17)
Fischer, B.; and Sheihet, L., J. Org. Chem. 1998, 63, 393-395.
(18)
Gerwick, W. H.; Proteau, P. J.; Nagle, D. G.; Hamel, B.; Blokhin, A.; Slate, D. L., Structure of Curacin A, a Novel Antimitotic, Antiproliferative, and Brine Shrimp Toxic Natural Product from the Marine Cyanobacterium Lyngbya majuscula, J. Org. Chem. 1994, 59, 1243.
(19)
Gianna Kakou, P.; Sackett, D.; Fojo, T.; Tubulin/Microtubes: Still a promising Target for New Chemotherapeutic Agents, J. Natl Cancer Inst., 2000, 92, 182.
(20)
Grese, T. A.; Cho, S.; Finley, D. R.; Godfrey, A. G.; Jones, C. D.; Lugar III, C. W.; Martin, M. J.; Matsumoto, K.; Pennington, L. D.; Winter, M. A.; Adrian, M. D.; Cole, H. W.; Magee, D. E.; Phillips, D. L.; Rowley, E. R.; Short, L.; Glasebrook, A. L.; Bryant, H. R., Structure-Activity Relationships of Selective Estrogen Receptor Modulators: Modifications to the 2Arylbenzothiophene Core of Raloxifene, J Med Chem., 1997, 40, 146.
(21)
Hadimani, M. B.; Kessler, R. J.; Kautz, J. A.; Ghatak, A.; Shirali, A. R.; O'Dell, H.; Garner, C. M.; Pinney, K. G. 2-(3-tert-Butyldimethylsiloxy-4-methoxyphenyl)-6-methoxy-3-(3,4,5trimethoxybenzoyl)indole. Acta Cryst. 2002, C58, o330-o332.
(22)
Hahn, K. M.; Hastie, S. B.; Sundberg, R. J., Synthesis and Evaluation of 2-Diazo-3,3,3trifluoropropanoyl Derivatives of Colchicine and Podophyllotoxin as Photoaffinity Labels: Reactivity, Photochemistry, and Tubulin Binding, Photochem. Photobiol. 1992, 55, 17.
(23)
Hamel, E.; Lin, C. M.; Flynn, E.; D'Amato, R. J. D., Interactions of 2-Methoxyestradiol, and Endogenous Mammalian Metabolite, with Unpolymerized Tubulin and with Tubulin Polymers, Biochemistry, 1996, 35, 1304.
(24)
Hamel, E.; Lin, C. M., Separation of Active Tubulin and Microtubule-Associated Proteins by Ultracentrifugation and Isolation of a Component Causing the Formation of Microtubule Bundles, Biochemistry, 1984, 23, 4173-4184.
(25)
Hamel, E.; Lin, C. M. Interactions of combretastatin, a new plant-derived antimitotic agent, with tubulin. Biochem. Pharmacol. 1983, 32, 3864-3867.
(26)
Inion, H.; De Vogelaer, H.; Descamps, M.; Bauthier, J.; Colot, M.; Richard, J; Charlier, R Study of the chromene series. IV. 2-Alkyl or 2-aryl 3-(4-aminoalkoxybenzoyl)indoles as potential antianginal and antiinflammatory compounds. Eur. J. Med. Chem. 1977, 12, 483-487.
(27)
Iyer, S.; Chaplin, D.J.; Rosenthal, D.S.; Boulares, A.H.; Li, L.Y.; y Smulson, M.E., Cancer Res. 1998, 58, 4510-4514.
(28)
Jiang, J. B.; Hesson, D. P.; Dusak, B. A.; Dexter, D. L.; Kang, G. J.; Hamel, B., Synthesis and Biological Evaluation of 2-Styrylquinazolin-4(3H)-ones, a New Class of Antimitotic Anticancer Agents Which Inhibit Tubulin Polymerization, J. Med. Chem. 1990, 33, 1721.
(29)
Jones, C. K.; Jevnikar, M. G.; Pike, A. J.; Peters, M. K.; Black, L. J.;Thompson, A. R.; Falcone,
J. F.; Clemens, J. A., Antiestrogens. 2. Structure-Activity Studies in a Series of 3-Aroyl-2arylbenzo[b]thiophene Derivatives Leading to [6-Hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl) benzo[b]thiphene-3-yl][4-[2-(1-piperidinyl) ethoxy] phenylimethanone Hydrochloride (LY156758), a Remarkably Effective Estrogen Antagonist with Only Minimal Intrinsic Estrogenicity, J. Med Chem. 1984, 27, 1057.
(30)
Kanthou C, Tozer GM. The tumor vascular targeting agent CA4P induces reorganization of the actin cytoskeleton and early membrane blebbing in human endothelial cells. Blood. 2002. 99(6):2060-9.
(31)
Lejeune P, Hodge TG, Vrignaud, Bissery M-C. In vivo antitumor activity and tumor necrosis induced by AVE8062A, a tumor vasculature targeting agent. Proceedings of the AACR. ABSTRACT#781. 2002, 43: 156.
(32)
Li Q y Sham HL. Discovery and development of antimitotic agents that inhibit tubulin polymerization for the treatment of cancer. Expert. Opin. Ther. Patents. 2002, 12(11): 1663-1702.
(33)
Lin, C. M.; Ho, H. H.; Pettit, G. R.; Hamel, E., Antimitotic Natural Products Combretastatin A-4 and Combretastatin A-2: Studies on the Mechanism of Their Inhibition of the Binding of Colchicine to Tubulin, Biochemistry 1989, 28, 6984.
(34)
Monks, A.; Scudiero, D.; Skehan, P.; Shoemaker, R.; Paull, K.; Vistica, D.; Hose, C.; Langley, J.; Cronise, P.; Vaigro-Wolff, A.; Gray-Goodrich; Campbell; Mayo; Boyd, M., Feasibility of a High-Flux Anticancer Drug Screen Using a Diverse Panel of Cultured Human Tumor Cell Lines, J. Natl. Cancer Inst., 1991, 83, 757-766.
(35)
Mossman, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assay. J. Immunol. Methods, 1983, 16, 195-200.
(36)
Mullica, D. F.; Pinney, K. G.; Mocharla, V. P.; Dingeman, K. M.; Bounds, A. D.; Sappenfield, E. L., Characterization and Structural Analyses of Trimethoxy and Triethoxybenzo[b]thiophene, J. Chem. Cryst., 1998, 28, 289-295.
(37)
Nicolaou, K. C., Winssinger, N., Pastor, J., Ninkovic, S., Sarabia, F., He, Y., Vourloumis, D., Yang, Z., Oi, T., Giannakakou, P., Hamel, B., Synthesis of Epothilones A and B in Solid and Solution Phase, Nature, 1997, 3 87, 268-272.
(38)
Owellen, R. J.; Hartke, C. A.; Kickerson, R. M.; Hams, F. 0., Inhibition of Tubulin-Microtubule Polymerization by Drugs of the Vinca Alkaloid Class, Cancer Res. 1976, 36, 1499.
(39)
Pallcowitz, A. D.; Glasebrook, A. L.; Thrasher, K. J.; Hauser, K. L.; Short, L. L.; Phillips, D. L.; Muehl, B. S.; Sato, M.; Shetler, P. K.; Cullinan, G. J.; Pell, T. R.; Bryant, H. U., Discovery and Synthesis of [6-Hydroxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenoxy]-2-(4-hydroxyphenyl)] benzo[b]thiophene: A Novel, Highly Potent, Selective Estrogen Receptor Modulator, J. Med Chem., 1997, 40, 1407.
(40)
Pamess, J.; Horwitz, S. B., Taxol Binds to Polymerized Tubulin In Vitro, J. Cell Biol. 1981,91,479.
(41)
Pettit, G. R., Toki, B., Herald, D. L., Verdier-Pinard, P., Boyd, M. R., Hamel, E., Pettit, R. K., Antineoplastic Agents 379. Synthesis of Phenstatin Phosphate, J. Med Chem., 1998, 41, 1688-1695.
(42)
Pettit, G. R., Srirangam, J. K., Barkoczy, J., Williams, M. D., Boyd, M. R., Hamel, E., Pettit, R. K., Hogan F., Bai, R., Chapuis, J. C., McAllister, S. C., Schmidt, J. M., Antineoplastic Agents
365: Dolastatin 10 SAR Probes, Anti-Cancer Drug Des., 1998,13, 243-277.
(43)
Pettit, G. R.; Cragg, G. M.; Sing, S. B., Antineoplastic agents, 122. Constituents of Combretum caffrum, J. Nat. Prod 1987, 50, 386.
(44)
Pettit, G. R., Kamano, Y., Herald, C. L., Tuinman, A. A., Boettner, F. E., Kizu, H., Schmidt, J. M., Baczynskyj, L., Tomer, K. B., Bontems, R. J., The Isolation and Structure of a Remarkable Marine Animal Antineoplastic Constituent: Dolastatin 10, J. Am. Chem. Soc., 1987, 109, 68836885.
(45)
Pettit, G. R.; Singh, S. B.; Cragg, G. M., Synthesis of Natural (-)Combretastatin, J. Org. Chem. 1985, 50, 3404.
(46)
Pettit, G. R.; Cragg, G. M.; Herald, D. L.; Schmidt, J. M.; Lohavanijaya, P., Isolation and Structure of combretastatin, Can. J. Chem. 1982, 60, 1374.
(47)
Pinney y col., Synthesis of a Benzo[b]thiophene-based Vascular Targeting Prodrug and Rela
ted Anti-Tubulin Ligands, 220th American Chemical Society, National Meeting, Division of Organic Chemistry, Abstract No. 196, Washington, D.C., August 20-24,2000.
(48)
Pinney, K. G.; Dingeman, K. D.; Bounds, A. D.; Mocharla, V. P.; Pettit, G. R.; Bai, R.; Hamel, E., A New Anti-Tubulin Agent Containing the Benzo[b]thiophene Ring System, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 1999, 9, 1081-1086.
(49)
Rao, A. V. R.; Sharma, G. V. M.; Bhanu, M. N., Radical Mediated Enantioselective Construction of C-I to C-9 Segment of Rhizoxin, Tetrahedron Lett. 1992, 33, 3907.
(50)
Sawada, T.; Kato, Y.; Kobayashi, H.; Hashimoto, Y.; Watanabe, T.; Sugiyama, Y.; Iwasaki, S., A Fluorescent Probe and a Photoaffinity Labeling Reagent to Study the Binding Site of Maytansine and Rhizoxin on Tubulin, Bioconjugate Chem.,1993, 4, 284.
(51)
Safa, A. R.; Hamel, E.; Felsted, R. L., Photoaffinity Labeling of Tubulin Subunits with a Photoactive Analog of Vinblastine, Biochemistry 1987, 26, 97.
(52)
Schiff, P. B.; Fant, J.; Horwitz, S. B., Promotion of Microtubule Assembly In Vitro by Taxol, Nature, 1979, 277, 665.
(53)
Taylor, S.D.; Chen, M,J,; Dinaut, A.N.; and Batey, R.A., Tetrahedron 1998,54,4223-4242.
(54)
Tozer, G. M.; Prise, V. E.; Wilson, J.; Locke, R. J.; Vojnovic, B.; Stratford, M. R. L.; Dennis, M. F.; Chaplin, D. J., Combretastatin A-4 Phosphate as a Tumor Vascular-Targeting Agent: Early Effects in Tumors and Normal Tissues. Cancer Res., 1999, 59, 1626.
(55)
Von Angerer, E. Tubulin as a target for anticancer drugs. Current opinion in Drug Discovery and Development. 2000, 3, 575-584.
(56)
Von Angerer, E.; Prekajac, J.; Strohmeier, J. 2-Phenylchromenes. Relationship between Structure, Estrogen Receptor Affinity, and Mammary Tumor Inhibiting Activity in the Rat. J. Med. Chem. 1984, 27, 1439-1447.
(57)
Williams, R. F.; Mumford, C. L.; Williams, G. A.; Floyd, L. J.; Aivaliotis, M. J.; Martinez, R. A.; Robinson, A. K.; Bames, L. D., A Photoaffinity Derivative of Colchicine: 6-(4'-Azido-2'nitrophenylamino)hexanoyldeacetylcolchicine. Photolabeling and Location of the Colchicinebinding Site on the alpha-subunit of Tubulin, J Biol. Chem. 1985, 260, 13794.
(58)
Zhang, X.; Smith, C. D., Microtubule Effects of Welwistatin, a Cyanobacterial Indolinone that Circumvents Multiple Drug Resistance, Molecular Pharmacology, 1996, 49, 288.

Claims (7)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de la fórmula (I): 5
    imagen1
    5
    en la que
    R1 se selecciona entre OH, nitro, amina, alquilo C1 a C8, alcoxi C1 a C8, fosfato y halóge
    no;
    n es 1, 2, ó 3;
    Y1 es un enlace covalente,
    10
    Y2 es -CO-;
    Y3 es un enlace covalente;
    A es hidrógeno;
    C es hidrógeno;
    B es fenilo sustituido con grupos n(R2) en el que R2 se selecciona entre H, OH, nitro,
    15
    amina, alquilo C1 a C8, alcoxi C1 a C8, fosfato y halógeno y n es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
  2. 2.
    El compuesto de la reivindicación 1, en el que el compuesto se selecciona entre:
    imagen2
    imagen1
  3. 3. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para uso en la inhibición del ensamblaje de la tubulina in vitro mediante la puesta en contacto de una célula con una cantidad eficaz.
    10 4. Un compuesto de la reivindicación 3 en el que dicha célula es una célula tumoral.
  4. 5. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para uso en el tratamiento de un mamífero afectado con una enfermedad neoplásica.
    15 6. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para uso en el tratamiento del cáncer, en el que dicho cáncer se selecciona entre leucemia, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de tiroides, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer pancreático y cáncer de mama.
    20 7. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para uso en la destrucción selectiva de la vasculatura del tumor.
  5. 8. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para uso en la reducción selectiva del flujo sanguíneo hacia al menos una porción de una región neoplásica, en la que se produce una necrosis sustancial de tejido en la región neoplásica sin una necrosis sustancial de tejido en las regiones adyacentes.
    5
  6. 9. El compuesto de la reivindicación 8 en el que el efecto del flujo sanguíneo reducido del tumor es reversible.
  7. 10. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 o la 10 reivindicación 2 como componente activo junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
ES05760509T 2004-05-03 2005-05-03 Compuestos derivados del cromeno con actividad de diana anti-tibulina y vascular. Expired - Lifetime ES2349746T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US851445 1992-03-16
US10/837,841 US20050245489A1 (en) 2004-05-03 2004-05-03 Chromene-containing compounds with anti-tubulin and vascular targeting activity
US837841 2004-05-03

Publications (1)

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Application Number Title Priority Date Filing Date
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Country Status (2)

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US (1) US20050245489A1 (es)
ES (1) ES2349746T3 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006037996A1 (en) * 2004-10-05 2006-04-13 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Novel cyclic and acyclic propenones for treating cns disorders
JP5315060B2 (ja) 2006-02-03 2013-10-16 バイオノミックス リミテッド 置換ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾセレノフェンおよびインドールおよびそれらのチューブリン重合阻害剤としての使用
GB0610804D0 (en) * 2006-05-31 2006-07-12 Portela & Ca Sa New crystal forms
TW200927740A (en) * 2007-11-13 2009-07-01 Bial Portela & Ca Sa Process
WO2009072915A1 (en) * 2007-12-05 2009-06-11 Bial - Portela & Ca., S.A. New salts and crystal forms

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4133814A (en) * 1975-10-28 1979-01-09 Eli Lilly And Company 2-Phenyl-3-aroylbenzothiophenes useful as antifertility agents
US4656187A (en) * 1981-08-03 1987-04-07 Eli Lilly And Company Treatment of mammary cancer
IT1212882B (it) * 1983-07-29 1989-11-30 Della Valle Francesco Derivati basici della cumarina
US5596106A (en) * 1994-07-15 1997-01-21 Eli Lilly And Company Cannabinoid receptor antagonists
US6277879B1 (en) * 1994-08-03 2001-08-21 Sarawak Medichem Pharmaceuticals, Inc. Calanolide analogues and methods of their use
US5532382A (en) * 1995-03-13 1996-07-02 Eli Lilly And Company Benzothiophenes substituted at the 3-carbonyl
CA2214070C (en) * 1996-08-29 2006-03-14 Eli Lilly And Company Dihydronaphthalene and naphthalene compounds, intermediates, formulations, and methods
CA2215647A1 (en) * 1996-10-24 1998-04-24 Eli Lilly And Company Naphthyl compounds, compositions, and methods
US5886025A (en) * 1997-03-06 1999-03-23 Baylor University Anti-mitotic agents which inhibit tubulin polymerization
US6162930A (en) * 1998-03-06 2000-12-19 Baylor University Anti-mitotic agents which inhibit tubulin polymerization
US6331562B1 (en) * 1998-12-30 2001-12-18 Signal Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of estrogen receptors
US6291456B1 (en) * 1998-12-30 2001-09-18 Signal Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of estrogen receptors
DE19937772A1 (de) * 1999-08-10 2001-02-15 Bayer Ag Substituierte Heterocyclyl-2GH-chromene
CA2407967C (en) * 2000-03-10 2010-10-05 Baylor University Tubulin binding ligands and corresponding prodrug constructs

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