ES2350032T3 - Medios de lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de los vegetales. - Google Patents

Medios de lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de los vegetales. Download PDF

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Abstract

Uso de composiciones de microorganismos en la lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de la vid, caracterizado porque las composiciones comprenden en mezcla al menos una bacteria de la especie Bacillus megaterium y/o de la especie Bacillus subtilis y al menos una levadura, no siendo la o las levaduras tóxicas para el vegetal.

Description

[0001] La invención se refiere a medios, a saber el uso de composiciones para la lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de los vegetales, es decir provocadas por hongos patógenos. [0002] La lucha biológica, es decir el uso de microorganismos vivos para combatir las enfermedades de las plantas, suscita un gran interés teniendo en cuenta los problemas crecientes presentados por el empleo de fungicidas químicos en la agricultura. Las capas freáticas contaminadas, los suelos contaminados y la resistencia de los hongos patógenos a los fungicidas son en efecto desafíos que deben superarse para la agricultura moderna. [0003] En el campo vitícola por ejemplo, se impone producir vinos de calidad cada vez más elevada y reducir las contaminaciones ocasionadas por el uso intenso de productos químicos. [0004] Ya se han propuesto bacterias, tales como Bacillus Thuringiencis, u hongos, tales como Beauveria o Endothia, como medios de lucha biológica. [0005] El documento US 5.270.059 describe una composición y un método de aplicación adaptados a la inhibición del desarrollo de hongos patógenos tales como Botrytis cinerea y Penicillium expansum en frutas pomáceas. La composición comprende una levadura Sporobolomyces roseus y una bacteria Pseudomonas syringae. [0006] El documento WO 94/19950 describe un agente de lucha biológica contra el hongo Colletrichum que comprende una mezcla de levadura del género Saccharomyces y una bacteria de tipo Lactobacilli. [0007] El documento FR 2 813 166 describe el uso de un microorganismo de la familia Geotrichum candidum, eventualmente asociado a una bacteria láctica, contra hongos o mohos productores de micotoxinas, concretamente de la especie Fusarium, en la vid entre otros vegetales.
[0008] El documento US 5.403.583 describe el uso de un cultivo de Bacillus megaterium para controlar un patógeno fúngico de la soja, Rhizoctonia solani. [0009] El artículo de Wilson y Chalutz en Scientia Horticulturae, 1989, vol. 40(2), páginas 105-112 describe el uso de levaduras y bacterias particulares contra Penicillium digitalum Sacc. y Penicillium italicum Wehmer en los cítricos. [0010] Ahora bien, los inventores han podido desarrollar medios de gran eficacia y desprovistos de toxicidad usando microorganismos en mezcla para luchar contra las enfermedades criptogámicas de la vid. Tales mezclas no solamente actúan en sinergia en la lucha biológica buscada, sino que además, con ventaja, tiene un efecto elicitor. [0011] Además, se descubrió que mezclas particulares de microorganismos eran particularmente eficaces para el tratamiento de las enfermedades criptogámicas de los vegetales en general. [0012] La invención tiene por tanto como objetivo el uso de microorganismos en la lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de la vid. [0013] También se refiere a proporcionar usos novedosos de composiciones de microorganismos en la lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de los vegetales, más especialmente de plantas cultivadas. [0014] El uso de composiciones de microorganismos en la lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de la vid se caracteriza porque las composiciones comprenden en mezcla al menos una bacteria y al menos una levadura, no siendo la o las bacterias y la o las levaduras tóxicas para el vegetal. [0015] De manera ventajosa, la o las bacterias se eligen de los grupos Bacillus, Pseudomonas, Serratia o Streptomyces. [0016] Se trata en particular de bacteria(s) de la especie Bacillus megaterium, y muy especialmente de la cepa depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM, 25 rue du Dr. Roux, 75724 Paris Cedex 15, con el n.º I-2897 y de bacteria(s) de la especie Bacillus subtilis depositada el 20 de junio de 2002 en la misma institución con el n.º I-2940. [0017] La o las levaduras de las composiciones usadas según la invención son ventajosamente del género Debaryomyces o Pichia. Se trata en particular de la levadura del género Debaryomyces depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM con el n.º I-2896. [0018] La invención se refiere en particular al uso de la cepa de Bacillus megaterium (BP B-01) depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM, 25 rue du Dr. Roux, 75724 Paris Cedex 15, con el n.º I-2897 y la cepa de Bacillus subtilis (BP B-10) depositada en la CNCM el 20 de junio de 2002 con el n.º I-2940. [0019] La invención también se refiere al uso de la levadura del género Debaryomyces (BP Y-01) depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM con el n.º I-2896. [0020] Las cepas de bacterias y de levaduras usadas según la invención se seleccionan ventajosamente a partir de microorganismos del suelo o extraídos del vegetal que va a tratarse. Por tanto no alteran el equilibrio biológico del ecosistema ya que proceden del mismo. [0021] Las composiciones de esos microorganismos permiten tratar las principales enfermedades fúngicas de los vegetales y por tanto son particularmente apropiadas para elaborar preparaciones biofungicidas. [0022] Preparaciones usadas según la invención se caracterizan porque encierran una cantidad eficaz de al menos una composición de microorganismos que comprende en mezcla al menos una bacteria y al menos una levadura, no siendo la o las bacterias y la o las levaduras tóxicas para el vegetal, así como una composición de hongos filamentosos, en particular del género Pichia, Pythium, Trichoderma, Gliocladium, Ampelomyces, Talaromyces, Epicococcum en asociación con un vehículo inerte.
[0023] El vehículo usado puede concretamente garantizar una buena dispersión y adhesión de los microorganismos sobre la parte aérea de la planta. [0024] Preparaciones biofungicidas preferiblemente usadas se caracterizan porque encierran una cantidad eficaz de las cepas bacterianas y de la cepa de levadura depositadas en la CNCM, tal como se definió anteriormente. De manera preferida, las preparaciones biofungicidas se caracterizan por concentraciones de levaduras de 0,5 a 0,75 X 1010 y de bacterias de 0,30 a 0,50 X 1010. [0025] Estas preparaciones presentan un gran espectro de eficacia frente a los hongos patógenos y se usan ventajosamente para el tratamiento de las enfermedades criptogámicas de los vegetales, concretamente de plantas cultivadas, en particular de las partes aéreas, por ejemplo, de la vid, tomate, fresa, trigo, patata, tabaco, caña de azúcar, maíz, arroz, árboles frutales, tubérculos por ejemplo patata o remolacha. [0026] La eficacia también se observó particularmente en las plantas hortícolas. [0027] Se aplican por ejemplo al tratamiento de oídio, de mildíu y de Botrytis de la vid, así como a enfermedades de la madera (yesca o Eutypa). [0028] Estas preparaciones también presentan la ventaja de ejercer un efecto elicitor que se traduce en una activación de las defensas naturales de la planta contra los agresores de origen fúngico. [0029] Los tratamientos se realizan concretamente mediante pulverización sobre las partes aéreas con preparaciones que encierran la o las bacterias y la o las levaduras, con cantidades modulables según la presión de los patógenos. Preparaciones apropiadas encierran por ejemplo dichas bacterias y levaduras en una razón de aproximadamente el 50/50%.
[0030] Se observará que la aplicación de estos tratamientos no necesita ningún cambio de material por parte del usuario. [0031] Según una disposición complementaria de la invención la composición usada comprende además una composición de hongos, más especialmente de hongos filamentosos, en particular del género Pythium, Trichoderma, Gliocladium, Ampelomyces, Talaromyces, Epicococcum. [0032] Tras la aplicación, las cepas de la preparación sólo permanecen algunos días sobre la planta antes de morir y degradarse. Su presencia en el suelo no es superior a una tasa normalmente constatada y es nula a más de treinta centímetros de profundidad. [0033] Estas mezclas de microorganismos no aportan por tanto ninguna forma nueva de contaminación. [0034] Estas mezclas también tienen un efecto elicitor para producir compuestos de interés, como el resveratrol, molécula que presenta concretamente un efecto protector del sistema cardiaco, o incluso el pterostilbeno, en cantidades más elevadas que las producidas por la vid tras una elicitación tal como la producida por Botrytis. [0035] El resveratrol puede usarse para la fabricación de medicamentos concretamente con objetivo cardiovascular, en cosmetología o como nutrimedicamento. El pterostilbeno puede usarse como compuesto antifúngico. [0036] Los siguientes ejemplos se facilitan con fines de ilustración de la invención y se refieren a la figura única que presenta la producción de resveratrol con diferentes combinaciones de bacterias y/o levaduras y/o hongos. [0037] Ejemplo I: Aislamiento y cultivo de la cepa de bacterias BP B01 y de la levadura BP Y01:
El aislamiento se realiza tal como sigue: Se cultivan los dos microorganismos en un medio nutritivo sólido, el PDA (“Potato dextrose agar” – “agar de dextrosa de patata”). Se siembran los dos microorganismos por separado en fermentadores de 20 litros que contienen PDB (“Potato dextrose broth” – “caldo de dextrosa de patata”). Se cultivan las levaduras a 28ºC y las bacterias a 37ºC. Se centrifugan los microorganismos así preparados y se recupera el residuo de bacterias y levaduras por separado en agua destilada estéril. En el momento del tratamiento del vegetal, se mezclan los dos microorganismos. Se somete el viñedo a tres tratamientos al mes, de abril a agosto, por tanto un total de 10 a 12 tratamientos por mezcla de la invención para la estación. Se usa el producto preparado mediante fermentación durante toda la estación, conteniendo cada litro 0,5-0,75 X 1010 para las levaduras y 0,30-0,50 X 1010 para las bacterias, a razón de 1 litro por pie de vid.
Caracterización del ADN genómico de BP B01 y de BP B10 [0038] El aislamiento del ADN genómico de BP B01 y de BP B10, así como la amplificación de su zona ITS, entre los genes 16S y 23S se realizó según Chen, W. Schneider RW y Hoy J.W. 1992, Phytopathology, 82, págs. 1234-1244. Las secuencias correspondientes SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 3 se depositaron en GENBANK (n.º de registro respectivos AY 125961 y AY 157575). [0039] Se aisló la levadura BP Y01 de bayas de uvas procedentes de diferentes viñedos de la región de Borgoña. [0040] Se aisló el ADN genómico de BP Y01 y se amplificó la zona ITS, entre los genes 18S y 28S, según los métodos siguientes. [0041] El fragmento ITS1 se encuentra entre los genes 18S y 5,8 S, mientras que ITS2 se encuentra entre los genes 5,8 y 28
S. La secuencia SEQ ID NO 2 se depositó en GENBANK (n.º de registro AY 125962).
Resultados de la lucha biológica sobre la variedad de cepa Chardonnay en 1999 y 2000 en el Centro Experimental de Marsannay - La Côte, Francia (Universidad de Borgoña) [0042] Año: 1999 Resultados
Número de pies 450 Controles no tratados 10 Número de tratamientos 15 Tipo de inóculo Bacterias + Levaduras Protección 39 pies enfermados (mildíu), O
Botrytis Controles Mildíu y después Botrytis en todos los pies, intervención química
Año: 2000 Resultados
Número de pies 241 Número de tratamientos 14 Tipo de inóculo Bacterias + Levaduras Protección 27 pies enfermados (Mildíu), O
Botrytis Controles Mildíu y después Botrytis en todos los pies
Resultados de lucha biológica sobre la variedad de cepa Pinotnoir en 2000 y 2001 en el Centro Experimental de Marsannay La Côte, Francia (Universidad de Borgoña) [0043]
Año: 2000 Resultados
Número de pies 120 Controles no tratados 13 Número de tratamientos 14 Tipo de inóculo Bacterias + Levaduras Controles Mildíu y después Botrytis en todos
los pies Protección 11 pies enfermados (mildíu), O Botrytis
Año: 2001 Resultados
Número de pies 614 Número de tratamientos 13 Tratamiento químico 02 Controles no tratados 13 Tipo de inóculo Bacterias + Levaduras Controles Mildíu + Botrytis en todos los
pies Protección 53 pies enfermados (Mildíu), algunos racimos infectados por
Botrytis
Rendimiento 1,18 kg de uva por pie en lugar de 1,2-1,5 kg
[0044] De manera general se observa, además del efecto fungicida y elicitor de las preparaciones usadas, una mejora de la calidad de la vendimia. Se constata concretamente un
5 aumento de la concentración de azúcar lo que permite reducir o evitar el azucarado. Además, se aumenta la tasa de resveratrol. Finalmente, las tasas de taninos y de antocianinas están en aumento, lo que concuerda con una mejor constitución y un color más vivo del vino.
10 [0045] Los resultados que se refieren al aumento de resveratrol se ilustran mediante el histograma de la figura única que proporciona en ug/gm de peso fresco la producción de resveratrol el 3er día tras la adición respectivamente de: BP Y01 (levadura depositada en la CNCM); BP B01 (bacteria
15 depositada en la CNCM); BC 03 (Botrytis cinerea); BP Y01 + B C03; BPB 01 + B C03; BP Y01 + BP B01; BP B01 + BP Y01 + B C03. [0046] El examen de este histograma demuestra que la formación de resveratrol aumenta cuando se añade la mezcla de levadura/bacteria de la invención al hongo Botrytis.
20 [0047] Teniendo en cuenta el conjunto de estas propiedades, las composiciones usadas como preparaciones fungicidas, según la invención, constituyen una respuesta particularmente satisfactoria a los problemas fúngicos que se le presentan a los labradores, concretamente a los viticultores y a la obligación de reducción de las contaminaciones de origen agrícola constituyendo sustitutos de los productos químicos.
LISTA DE SECUENCIAS
5 [0048]
<110> UNIVERSIDAD DE BORGOÑA
<120> Medios de lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de los vegetales.
<130> 60873 10 <160> 3
<170> PatentIn versión 3.1
<210> 1
<211> 335
<212> ADN 15 <213> Bacillus megaterium
<400> 1
imagen1
<210> 2
<211> 581
<212> ADN
<213> Debaryomyces hansenii
<400> 2
imagen1
<210> 3
<211> 581
<212> ADN
<213> Bacillus subtilis
<400> 3
imagen1
REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN
Esta lista de referencias citadas por el solicitante es sólo para la comodidad del lector. No forma parte del documento de
5 patente europea. Aunque se ha tomado especial cuidado en la compilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la OEP rechaza toda responsabilidad a este respecto.
10 Documentos de patentes citados en la descripción
•
US 5270059 A [0005]
•
WO 9419950 A [0006]
• FR 2813166 [0007] 15 • US 5403583 A [0008]
Documentos no de patentes citados en la descripción
• Wilson; Chalutz. Scientia Horticulturae, 1989, vol. 40 20 (2), 105-112 [0009]
• Chen, W. ; Schneider RW ; Hoy J.W. Phytopathology, 1992, vol. 82, 1234-1244 [0038]

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Uso de composiciones de microorganismos en la lucha biológica contra las enfermedades criptogámicas de la vid, caracterizado porque las composiciones comprenden en mezcla al menos una bacteria de la especie Bacillus megaterium y/o de la especie Bacillus subtilis y al menos una levadura, no siendo la o las levaduras tóxicas para el vegetal.
  2. 2.
    Uso según la reivindicación 1, caracterizado porque la o las levaduras son del género Debaryomyces o Pichia.
  3. 3.
    Uso según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la bacteria de la especie Bacillus megaterium es la cepa de Bacillus megaterium (BP B-01) depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM con el n.º 1-2897.
  4. 4.
    Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la bacteria de la especie Bacillus subtilis es la cepa de Bacillus subtilis (BP Bu-10) depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM con el n.º 1-2940.
  5. 5.
    Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la levadura es del género Debaryomyces.
  6. 6.
    Uso según la reivindicación 5, caracterizado porque se trata de la levadura Debaryomyces (BP Y-01) depositada el 20 de junio de 2002 en la CNCM con el n.º 1-2896.
  7. 7.
    Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque las composiciones encierran además una composición de hongos filamentosos en asociación con un vehículo inerte.
  8. 8.
    Uso según la reivindicación 7, caracterizado porque los hongos filamentosos se eligen de los del género Pichia, Pythium, Trichoderma, Gliocladium, Ampelomyces, Talaromyces, Epicococcum.
  9. 9.
    Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado por concentraciones de levaduras de 0,5 a 0,75 X 1010 y de bacterias de 0,30 a 0,50 X 1020.
  10. 10.
    Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8,
    5 para el tratamiento de oídio, de mildíu o de Botrytis de la vid, y de Eutypa y yesca.
  11. 11. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque las composiciones se aplican mediante pulverización con dicha o dichas bacterias y
    10 dicha o dichas levaduras, según la presión de los patógenos.
  12. 12. Uso según la reivindicación 11, caracterizado porque dicha o dichas bacterias y dicha o dichas levaduras están presentes en una razón del 50/50% en las
    15 composiciones.
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