ES2351046T3

ES2351046T3 - Composiciones para su uso contra uno o más patógenos.

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Publication number: ES2351046T3
Application number: ES05788135T
Authority: ES
Inventors: Philippe Pujos; Mohamed Haissam Jijakli
Original assignee: Bionext; Bionext SA
Current assignee: Bionext; Bionext SA
Priority date: 2004-09-24
Filing date: 2005-09-23
Publication date: 2011-01-31
Anticipated expiration: 2025-09-23
Also published as: US20080160101A1; BRPI0516019A; MA28999B1; EP1802196A1; PT1802196E; IL182086A0; PL1802196T3; AU2005287470A1; NZ554528A; CA2581504C; CA2581504A1; MX2007003453A; ATE481878T1; CN101031203A; JP4993608B2; IL182086A; AU2005287470B2; EP1802196B1; ZA200703309B; BE2019C548I2

Abstract

Composición para su uso contra uno o más patógenos, que comprende al menos un microorganismo antagonista y al menos una sal seleccionada de entre fosfato de calcio monobásico Ca(H2PO4)2, fosfato de calcio dibásico (CaHPO4), fosfato de calcio tribásico (Ca3(PO4)2), lactato de calcio, gluconato de calcio, lactogluconato de calcio, citrato de calcio o ascorbato de calcio, en la cual dicho microorganismo antagonista es Candida oleophila,y caracterizada porque la cantidad de la sal está comprendida entre 0,005 y 5 g/l, preferiblemente entre 0,01 y 4 g/l, más preferiblemente entre 0,1 y 3 g/l, más preferiblemente entre 0,01 y 2,5 g/l, y todavía más preferiblemente entre 0,1 y 2,2 g/l.

Description

Descripción

Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a composiciones que contienen microorganismos antagonistas y sales. La presente invención se refiere además a dicha composición para su uso como biopesticida.

Antecedentes de la invención [0002] Las infecciones patógenas, tales como infecciones fúngicas, de animales incluyendo seres humanos y plantas producen pérdidas significativas en la capacidad productiva a nivel mundial. Un gran número de patógenos son responsables de importantes pérdidas económicas en cultivos y productos cosechados. Por ejemplo, las especies de Penicillium y Botrytis son responsables de importantes pérdidas económicas. La existencia común de estas especies en alimentos es un problema particular. Algunas especies producen toxinas y pueden hacer que los alimentos se vuelvan incomestibles

o incluso peligrosos. Las especies de Penicillium pueden provocar una grave descomposición de la fruta por ejemplo en manzanas (Malus), peras (Pyrus) y limón (Citrus spp). [0003] Los pesticidas contra patógenos se conocen bien en la técnica y se han usado intensamente durante muchos años. Los métodos para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de infecciones bacterianas y fúngicas en animales y plantas generalmente implican la aplicación de productos agroquímicos antibacterianos y antifúngicos o el uso de biopesticidas más respetuosos con el medioambiente basándose en agentes de biocontrol. El interés por el control biológico con respecto al control químico está creciendo rápidamente por algunos motivos, tales como reducción de residuos, preocupaciones medioambientales, aparición de cepas de patógenos resistentes a pesticidas químicos o limitación del uso de pesticidas químicos. [0004] Como agentes de biocontrol, se conocen microorganismos que son antagonistas a los patógenos. Se han publicado documentos que se refieren al uso de composiciones que comprenden levaduras u otros microorganismos contra patógenos de plantas, entre los cuales el documento EP 1 238 587 que da a conocer en sus ejemplos una composición que comprende un microorganismo antagonista con alta concentración de CaCl2 al 2% (20 g/l). Pueden citarse el documento WO 99/62340, el documento WO 99/62341, la patente US 5525132, la patente US 5741699, la patente US 6060429, el documento WO 00/44230, la patente US 5288488 y la patente US 5780023 como otros ejemplos. [0005] Diversos microorganismos entre bacterias, hongos y levaduras se han usado con éxito contra enfermedades de plantas provocadas por patógenos. Productos para biocontrol comerciales tales como AspireTM (Candida oleophila Montrocher, 1-182) y BiosaveTM (Pseudomonas syringae van Hall, Esc-11) estaba y ya están disponibles respectivamente de Ecogen Inc. (Longhorn, PA) y Ecoscience Corp. (Worcester, MA) y se usan entre otros en manzanas de postcosecha contra enfermedades por corte. [0006] Sin embargo, a menudo se encontró que estos biopesticidas no eran lo suficientemente eficientes. Estos productos para biocontrol de primera generación, que se basan en el uso de antagonistas individuales, han recibido críticas por no proporcionar una actividad protectora fiable y estable cuando se usan en condiciones comerciales. Para mejorar su capacidad natural de controlar infecciones por hongos y particularmente por Penicillium expansum, reducir el volumen a manipular y los costes, se han buscado nuevos agentes estimulantes. [0007] En efecto, composiciones más eficientes permiten usar cantidades menores de microorganismos antagonistas por tratamiento, sin disminuir la eficiencia de la composición contra patógenos y sin restringir la duración de la eficiencia de la composición contra patógenos y, por tanto, alcanzar el umbral económico de rentabilidad. [0008] En vista de lo anterior, es un objeto principal de la presente invención proporcionar composiciones novedosas que sean adecuadas para su uso contra enfermedades provocadas a plantas, producto de las mismas y animales por patógenos, tales como enfermedades inducidas por mohos. Otro objeto de la presente invención es proporcionar composiciones que sean al menos igual de eficientes que las del estado de la técnica. Un objeto adicional de la invención es proporcionar composiciones que comprenden concentraciones inferiores de microorganismos antagonistas mientras que tienen una eficiencia similar o mejor contra los patógenos.

Descripción resumida de la invención [0009] En un primer aspecto, la presente invención proporciona una composición novedosa tal como se define en las reivindicaciones adjuntas. [0010] En particular, la presente invención se refiere a una composición para su uso contra uno o más patógenos, que comprende al menos un microorganismo antagonista y al menos una sal seleccionada de entre fosfato de calcio monobásico Ca(H2PO4)2, fosfato de calcio dibásico (CaHPO4), fosfato de calcio tribásico (Ca3(PO4)2), lactato de calcio, gluconato de calcio, lactogluconato de calcio, citrato de calcio o ascorbato de calcio, en la cual dicho microorganismo antagonista es Candida oleophila,y caracterizada porque la cantidad de la sal está comprendida entre 0,005 y 5 g/l, preferiblemente entre 0,01 y 4 g/l, más preferiblemente entre 0,1 y 3 g/l, más preferiblemente entre 0,01 y 2,5 g/l, y todavía más preferiblemente entre 0,1 y 2,2 g/l. Las realizaciones preferidas se definen en la reivindicación 2. [0011] La presente invención también se refiere al uso de una composición de acuerdo con la invención tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8 y 11, y a métodos tal como se definen en cualquiera de las reivindicaciones 9 y 10. [0012] De acuerdo con la invención dicho microorganismo antagonista es Candida oleophila. [0013] De acuerdo con la invención la sal es gluconato de calcio, citrato de calcio, lactato de calcio, fosfato de calcio monobásico Ca(H2PO4)2, fosfato de calcio dibásico (CaHPO4), fosfato de calcio tribásico (Ca3(PO4)2), lactogluconato de calcio, ascorbato de calcio. [0014] Se encontró que la sal tenía propiedades potenciadoras sorprendentes sobre la actividad biológica de los microorganismos antagonistas. La asociación era particularmente activa a baja concentración de sales es decir inferior a 5 g/l. Se demostró que la asociación era más eficaz que cuando se usaba el microorganismo solo. Para la misma cantidad de sales, los presentes inventores han obtenido una eficacia similar que cuando se usaba una alta concentración de CaCl2 al 2% (20 g/l) junto con el microorganismo antagonista. La composición de acuerdo con la invención mostró sorprendentemente muy buena eficacia a bajas dosis de sal, es decir inferior a 5 g/l, y mostró similar o mejor eficiencia que la composición con microorganismo antagonista que comprendía una alta concentración de CaCl2 al 2% (20 g/l). La presente composición tiene una eficacia mejorada y/o más prolongada contra enfermedades provocadas por patógenos a plantas y/o animales. La presente composición es particularmente eficaz por ejemplo contra enfermedades provocadas por mohos que colonizan partes de plantas, o bien tras la cosecha o bien durante el ciclo de vida de la planta. [0015] Se demostró que la asociación era más eficaz que cuando se usaba el microorganismo solo. La presente composición permite el uso de cantidades inferiores de microorganismo y/o cantidades inferiores de sales mientras que tiene una eficiencia similar o incluso mejor contra los patógenos. [0016] La presente composición es útil contra uno o más patógenos que pueden provocar enfermedades a plantas o animales incluyendo seres humanos. Dicho patógeno puede ser hongo, levadura, bacterias y virus. [0017] La composición de acuerdo con la presente invención es particularmente útil contra patógenos que pueden provocar enfermedades a material vegetal. Tal como se usa en la presente memoria el término “planta” abarca la planta completa, partes de la planta, frutos y otro material relacionado con la planta. Un ejemplo no limitativo de plantas incluye material vegetal que puede seleccionarse del grupo que comprende partes de la planta, frutas tales como las especies Malus spp., Pyrus spp., Citrus spp. (por ejemplo, naranja, limón, pomelo, mandarina), y cultivos tales como las especies tomate, pimiento, pepino, vid y fresa); cultivos de raíces (por ejemplo, patata, zanahorias); fruta tropical (por ejemplo, mango, plátano, guayaba, piña, aguacate); melón, y flores y otros cultivos ornamentales. La eficacia de la composición de acuerdo con la invención es superior a la obtenida con el microorganismo antagonista solo a la misma concentración y similar a la obtenida con alta concentración de CaCl2 (2% p/v) con el microorganismo. [0018] La presente invención también se refiere a un método para el biocontrol de enfermedades provocadas por patógenos a material vegetal, que comprende la etapa de aplicar una composición de acuerdo con la invención a dicho material vegetal. [0019] La presente invención se refiere además al uso de una composición de acuerdo con la invención como biopesticida, preferiblemente como biofungicida, biovirucida y/o como biobactericida, y a un método para la fabricación de un biopesticida que comprende una composición de acuerdo con la invención. [0020] La presente invención se dará a conocer adicionalmente en detalle a continuación en la presente memoria. Se proporcionan ejemplos que darán soporte adicionalmente a la descripción.

Descripción detallada [0021] La presente invención se refiere a composiciones y métodos para el control de patógenos bacterianos y fúngicos de plantas tal como se definen en las reivindicaciones adjuntas. [0022] Se encontró sorprendentemente que la combinación de la composición proporcionaba un control superior al del microorganismo antagonista solo. [0023] La cantidad de la al menos una sal está comprendida entre 0,005 y 5 g/l p/v, preferiblemente entre 0,01 y 4 g/l p/v, más preferiblemente entre 0,1 y 3 g/l p/v, más preferiblemente entre 0,01 y 2,5 g/l p/v, y todavía más preferiblemente entre 0,1 y 2,2 g/l p/v. En otra realización, dicho microorganismo antagonista se aplica a una concentración que va desde 103 hasta 10111 ufc/ml, preferiblemente desde 104 hasta 1010 ufc/ml. Otro ejemplo de concentración adecuada incluye de 105 a 108 ufc/ml y preferiblemente la concentración del microorganismo es de desde 106 hasta 108 ufc/ml, cuando dicho microorganismo antagonista es un hongo y de 105 a 1011, y preferiblemente de 109 a 10” cuando dicho microorganismo antagonista es una bacteria. [0024] La sal puede estar en una forma hidratada o anhidra. Por supuesto, la presente composición también puede contener mezclas de sales y/o polímeros de las mismas. [0025] La sal se selecciona del grupo que comprende fosfato de calcio monobásico Ca(H2PO4)2, fosfato de calcio dibásico (CaHPO4), fosfato de calcio tribásico (Ca3(PO4)2), citrato de calcio, lactato de calcio, lactogluconato de calcio, ascorbato de calcio y mezclas de las mismas. Se encontró sorprendentemente que la composición era un inhibidor particularmente eficaz de enfermedades postcosecha en frutas y verduras. Se ha encontrado sorprendente e inesperadamente que el uso de al menos una sal tal como se definió anteriormente con al menos un microorganismo antagonista de acuerdo con la presente invención facilita un control mejorado de patógenos de plantas. La combinación de las sales tal como se describen en la presente memoria y el microorganismo antagonista ofrece un control eficaz de una importante descomposición postcosecha de la fruta y proporciona un mejor control con respecto al uso de un antagonista solo a la misma concentración

o proporciona un control similar con respecto al uso de una alta cantidad de CaCl2 (2%) con el microorganismo. La composición tiene actividad particularmente antifúngica y antibacteriana. [0026] Dicho microorganismo antagonista es Candida oleophila. [0027] La cepa de Candida oleophila puede estar en la forma de una cepa que consiste en Candida oleophila Montrocher cepa O depositada con MUCL-40564, depositada el 17 de junio de 1997 en la Colección de cultivos BBCMTM/MUCL de la Micoteca de la Universidad Católica de Lovaina, y Candida oleophila Montrocher cepa comercial 1-182. [0028] En una realización, la composición de acuerdo con la invención comprende una combinación de una sal con un microorganismo antagonista, seleccionándose dicha combinación de CaHPO4 + Candida oleophila, Ca3(PO4)2 + Candida oleophila, [0029] En otra realización, dicha combinación se selecciona de gluconato de calcio + Candida oleophila, tartrato de calcio + Candida oleophila, citrato de calcio + Candida oleophila, [0030] En otra realización, dicha combinación se selecciona de lactogluconato de calcio + Candida oleophila, ascorbato de calcio. + Candida oleophila, [0031] La presente invención también abarca composiciones que comprenden al menos un microorganismo antagonista y al menos dos sales tal como se describió anteriormente en la presente memoria. La presente invención también abarca composiciones que comprenden al menos dos microorganismos antagonistas y al menos una sal tal como se describió anteriormente en la presente memoria. [0032] Tal como se usa en la memoria y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “un”, “una” y “el/la” incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. A modo de ejemplo, “un compuesto” significa un compuesto o más de un compuesto. [0033] La enumeración de intervalos numéricos mediante puntos finales incluye todos los números enteros y, cuando sea apropiado, fracciones incluidas dentro de ese intervalo (por ejemplo de 1 a 5 puede incluir 1, 1,1, 1,15, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,80, 4 y 5). [0034] Tal como se usa en la presente memoria, el término “derivados” es significa derivados químicos, tales como por ejemplo solvatos, hidratos formas estereoisoméricas, mezclas racémicas y ésteres. Tal como se usa en la presente memoria y a menos que se mencione lo contrario, el término “solvato” incluye cualquier combinación que puede formarse mediante la sal con un disolvente inorgánico adecuado (por ejemplo hidratos) o disolvente orgánico, tal como, pero sin limitarse a, alcoholes, cetonas, ésteres y similares. [0035] Todos los estereoisómeros de las sales tal como se describen en la presente memoria están incluidos dentro del alcance de la invención, como compuestos puros así como, como mezclas de los mismos. La presente invención abarca los enantiómeros, diastereómeros, isómeros geométricos individuales y combinaciones y mezclas de los mismos. Las formas estereoisoméricas puras de las sales y productos intermedios tal como se menciona en la presente memoria se definen como isómeros sustancialmente libres de otras formas diastereoméricas o enantioméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o productos intermedios. [0036] Tal como se usa en la presente memoria, la expresión “compuesto potenciador”, significa, un compuesto que puede potenciar las propiedades biológicas de un microorganismo. Por ejemplo, puede estimular las propiedades biológicas de microorganismos antagonistas contra patógenos que pueden provocar enfermedades a material vegetal. [0037] Tal como se usa en la presente memoria, la expresión “microorganismo antagonista” significa un microorganismo que es un antagonista frente a un patógeno tal como por ejemplo un patógeno que puede provocar enfermedades a plantas o un animal incluyendo seres humanos. En una realización preferida, dicho microorganismo es un antagonista frente a un patógeno tal como por ejemplo un patógeno que puede provocar enfermedades a material vegetal. Tal microorganismo antagonista puede seleccionarse del grupo que comprende bacterias, hongo y levadura. [0038] Tal como se usa en la presente memoria, el término “biopesticida” abarca biofungicida, biobactericida y biovirucida. [0039] Las composiciones de la presente invención pueden comprender adicionalmente además de la sal y el microorganismo, al menos un manano y/o derivados del mismo. La cantidad de dicho manano puede estar en el intervalo del 0,001% y el 2% p/v, preferiblemente en el intervalo del 0,001 y el 0,2% p/v. [0040] Por tanto, la presente invención proporciona una composición que puede usarse como composición fitofarmacéutica y farmacéutica en el tratamiento de plantas y animales contra infecciones microbianas incluyendo infecciones bacterianas, por levaduras, fúngicas, virales y por protozoos. [0041] En particular, las presentes composiciones mostraron una eficacia mejorada contra enfermedades provocadas por patógenos a material vegetal, por ejemplo enfermedades provocadas por mohos que colonizan partes de plantas, o bien tras la cosecha o bien durante el ciclo de vida de la planta. Especies a modo de ejemplo de patógenos de plantas que pueden inhibirse

por la presente composición incluyen, pero no se limitan a, Alternaria spp., Ascochyta spp., Aspergillus spp., Botrytis spp., Cercospora spp., Cladosporium spp., Claviceps spp., Colletotrichum spp., Erysiphe spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Gilbertella spp., Gloeosporium spp., Helminthosporium spp., Monilia spp., Monilinia spp., Mucov spp., Nectria spp., Penicillium spp., Peronospora spp., Pezicula spp., Phomopsis spp., Phytophthora spp., Plasmopara spp., Podosphaera spp., Pseudocercosporium spp., Puccinia spp., Rhizoctonia spp., Rhizopus spp., Rynchosporium spp., Sclerotinia spp., Septoria spp., Sphaerotheca spp., Uncinula spp., Ustilago spp., Venturia spp., Verticillium spp. y patógenos virales o bacterianos. En una realización particular, los patógenos de plantas pueden seleccionarse del grupo que comprende Alternaria alternata, Ascochyta sp., Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Botrytis alii, Botrytis cinerea, Botrytis fabae, Cercospora sp., Cladosporium sp., Claviceps purpurea, Colletotrichum sp., Erysiphe betae, Erysiphe graminis, Fusarium oxysporum, Geotrichum candidum, Gilbertella persicovia, Gloeosporium perennans, Gloeosporium fructigenum, Helminthosporium sp., Monilia sp., Monilinia fructicola, Monilinia laxa, Mucov sp., Nectria cinnabarina, Penicillium digitatum, Penicillium expansum, Penicillium italicum, Peronospora sp., Pezicula malicorticas, Phomopsis viticola, Phytophthora infestans, Plasmopara viticola, Podosphaera leucotricha, Pseudocercosporium sp., Puccinia graminis, Rhizoctonia sp., Rhizopus arrhizus, Rhizopus stolonifer, Rynchosporium sp., Sclerotinia Cepivorum, Sclerotinia sclerotiorum, Septoria apicola, Sphaerotheca sp., Uncinula necator, Ustilago sp., Venturia inaequalis; Verticillium albo-atrum y Verticillium dahliae. En una realización particular, los patógenos de plantas pueden seleccionarse del grupo que comprende Botrytis spp., Penicillium spp., Pezicula spp. y Rhizopus spp. Por ejemplo los patógenos pueden ser Botrytis cinerea, Penicillium digitatum, Penicillium expansum, Penicillium italicum, Pezicula spp. y Rhizopus spp. [0042] En una realización preferida, la composición de la presente invención es particularmente útil como biopesticida. [0043] De acuerdo con la presente invención, el microorganismo antagonista y la sal tal como se describe en la presente memoria y/o derivados de la misma pueden proporcionarse como una mezcla del microorganismo y la sal tal como se describe en la presente memoria. De acuerdo con otra realización de la presente invención, el microorganismo antagonista y la sal tal como se describen en la presente memoria pueden proporcionarse como

preparaciones no mezcladas, separadas, que deben mezclarse para preparar la presente composición. Por ejemplo, el microorganismo antagonista y la sal tal como se describen en la presente memoria pueden estar presentes en un kit, envasados individualmente o envasados juntos en una forma mezclada lista. El microorganismo antagonista y la sal tal como se describen en la presente memoria pueden estar presentes en el kit como preparaciones no mezcladas, separadas, o juntas en una preparación. [0044] La presente invención abarca además un método para la fabricación de una composición de acuerdo con la presente invención que comprende la etapa de mezclar al menos un microorganismo antagonista con al menos una sal tal como se describe en la presente memoria. [0045] Un aspecto adicional de la invención es una composición que comprende al menos un microorganismo antagonista y al menos una sal tal como se describe en la presente memoria y/o derivados de la misma, para administración simultánea, separada o secuencial a un sujeto que va a tratarse. [0046] Tal como se usa en la presente memoria el término “sujeto’ abarca, plantas o animales incluyendo seres humanos que van a tratarse. En una realización de la presente invención, el sujeto son plantas tales como material vegetal. [0047] Todavía un aspecto adicional de la invención es un método para tratar material de plantas que comprende administrar al mismo una cantidad eficaz de al menos un microorganismo antagonista de la invención y al menos una sal tal como se describe en la presente memoria y/o derivados de la misma, simultáneamente, por separado o secuencialmente. [0048] Por administración simultánea significa que el microorganismo antagonista y la sal tal como se describen en la presente memoria se administran a la planta al mismo tiempo. Por ejemplo, como una mezcla del microorganismo antagonista y la sal tal como se describe en la presente memoria, o una composición que comprende dicho microorganismo antagonista y dicha sal tal como se describe en la presente memoria. [0049] Por administración separada significa que el microorganismo antagonista y la sal se administran a un material de planta al mismo tiempo o sustancialmente el mismo tiempo. El microorganismo antagonista y la sal se administran como preparaciones no mezcladas, separadas. Por ejemplo, el microorganismo antagonista y la sal pueden estar presentes en el kit como envasados individualmente.

[0050] La capacidad potenciada del microorganismo antagonista para controlar patógenos de plantas en presencia de al menos una sal tal como se describió anteriormente en la presente memoria es especialmente inesperada. La presente invención proporciona una composición biopesticida que comprende concentraciones inferiores de microorganismos antagonistas mientras que prolonga la duración de la eficiencia de las composiciones contra los patógenos. [0051] La memoria también describe el uso de una sal tal como se describe en la presente memoria como un compuesto para potenciar la eficacia de la composición que comprende al menos un microorganismo antagonista, en comparación de la eficacia de ese microorganismo solo. Se demostró que sales tales como gluconato de calcio, citrato de calcio, fosfato de calcio, lactato de calcio, lactogluconato de calcio, ascorbato de calcio, estimulan particularmente la eficacia biológica antipatógenos de una composición que comprende al menos un microorganismo. [0052] La memoria también describe el uso de al menos una sal tal como se describe en la presente memoria como un compuesto potenciador para disminuir la concentración de un microorganismo antagonista sin disminuir la eficiencia de la composición contra patógenos. La presente memoria describe además el uso de al menos una sal tal como se describe en la presente memoria como un compuesto potenciador para disminuir la concentración de un microorganismo antagonista mientras que prolonga la duración de la eficiencia de la composición contra patógenos. [0053] En dicho método, la estimulación de las propiedades biológicas del microorganismo o una composición a base del microorganismo puede comprender disminuir la concentración de un microorganismo antagonista sin disminuir la eficiencia de la composición contra patógenos. La potenciación y amplificación de las propiedades biológicas también puede comprender disminuir la concentración de un microorganismo antagonista mientras que prolonga la duración de la eficiencia de la composición contra patógenos. Debido al sorprendente aumento del efecto de la presente composición, la presente invención permite usar una concentración inferior de la composición. [0054] La presente invención también se refiere a un método para tratar material de plantas tal como frutas y verduras para el control de enfermedades postcosecha mediante la aplicación de cantidades eficaces de la composición novedosa.

[0055] La memoria también describe un método para estimular las propiedades de un biofungicida, biobactericida y/o biovirucida en una composición que comprende añadir al menos una sal tal como se describe en la presente memoria como un compuesto potenciador a dicha composición.

5 [0056] La presente invención también proporciona una composición para su uso contra uno o más patógenos que comprende una composición de acuerdo con la invención y al menos un compuesto agroquímico. En una realización de la presente invención, el compuesto agroquímico puede seleccionarse del grupo que comprende fungicida, bactericida, nematicida,

10 insecticida, herbicida y similares. [0057] La invención se ilustrará adicionalmente a continuación mediante la descripción de algunas maneras de llevarla a cabo.

Ejemplo 1

15 [0058] Las sales y el microorganismo antagonista abarcados en la composición de la presente invención se enumeran en las tablas 1 y 2.

Tabla 1

Sales

2: Ca(H2PO4)2

3: CaHPO4

4: Ca3(PO4)2

19: gluconato de calcio

36: citrato de calcio

39: lactogluconato de calcio

40: ascorbato de calcio

imagen1

[0059] La presente invención abarca cualquier combinación de una o más sales 1 a 43 con uno o más microorganismos antagonistas a a ii. En una realización, la composición de acuerdo con la invención comprende una

25 combinación de una sal con un microorganismo antagonista, seleccionándose dicha combinación del grupo que comprende 2+e, 3+e, 4+e. [0060] En otra realización, la composición de acuerdo con la invención comprende una combinación de una sal con un microorganismo antagonista, seleccionándose dicha combinación del grupo que comprende 19+e. [0061] En otra realización, la composición de acuerdo con la invención comprende una combinación de una sal con un microorganismo antagonista, seleccionándose dicha combinación del grupo que comprende 39+e, 40+e.

Ejemplo 2 [0062] El ejemplo 2 ilustra el hecho de que puede obtenerse un buen efecto protector usando composiciones de la invención que comprenden una sal tal como se define en la presente memoria, tal como gluconato de calcio (GC) y levaduras antagonistas activas contra enfermedades postcosecha provocadas por mohos en frutas de las especies de Malus.

Material vegetal [0063] Se recogieron manzanas (Malus domestica Borkh cv. Golden) de huertos comerciales mantenidos con prácticas de cultivo convencionales en Bélgica y se pusieron en almacenamiento a largo plazo regular. Se usaron frutas de clase comercial I. Se compraron de mayoristas y se almacenaron en una sala fría a 4  1ºC durante como máximo 15 días antes de su uso.

Patógenos [0064] Se aislaron inicialmente cepas de Penicillium expansum (moho azul) a partir de manzanas de Gembloux, Bélgica. Se pusieron conidios del patógeno en suspensión en una disolución de glicerol (25%) y se almacenaron a -70ºC. Partiendo de este material almacenado, se transfirió la cepa fúngica a medio PDA a 25ºC. Se prepararon suspensiones de conidios en una disolución estéril acuosa de Tween 20 (0,05%), y se ajustaron a la concentración requerida (106 esporas/ml) usando una cámara de Bürker.

Microorganismos antagonistas [0065] La cepa de levadura antagonista fue Candida oleophila Montrocher depositada con el número 40564 en la Colección de cultivos BBCMTM/MUCL de la Micoteca de la Universidad Católica de Lovaina, designada a continuación en la presente memoria como “cepa O”. [0066] Se aisló esta cepa de levadura antagonista a partir de la superficie de manzanas y se almacenó a -70ºC en una disolución de glicerol (25%). Antes de su uso, se subcultivó la cepa de levadura tres veces sucesivamente a intervalos de 24 horas en PDA (Patata Dextrosa Agar). En la tercera generación, se retiraron células de levadura del medio de cultivo y se suspendieron en agua isotónica (NaCl al 0,85%). Se ajustaron las concentraciones de suspensión a los valores requeridos tras el establecimiento de una línea de regresión en relación con la absorbancia de suspensión de microorganismos (a 595 nm) y el número de unidades formadoras de colonia (ufc) de la misma suspensión extendida sobre PDA.

Tratamiento [0067] Se desinfectaron las frutas mediante inmersión durante 2 minutos en hipoclorito de sodio (10% del producto comercial). Se aclararon en agua estéril y se secaron bajo flujo laminar antes de cortarlas retirando bloques de 4 mm de diámetro y 2-3 mm de profundidad de tejido de tres sitios separados por 4-5 cm a lo largo de un lado de la superficie de las frutas. [0068] Se trataron los cortes mediante aplicación de 40 l de composiciones del estado de la técnica o composiciones de acuerdo con la invención. [0069] Tras un periodo de incubación de 24 h a 20ºC en cajas de plástico, se inocularon los cortes con 40 l de las respectivas suspensiones de conidios de los patógenos. Se incubaron las frutas a 25ºC. [0070] Se midieron los diámetros de las lesiones que se desarrollaron alrededor de los cortes tras 7 días tras la inoculación del patógeno. Se usaron al menos cinco frutas (15 cortes) por tratamiento. La mayor parte del tiempo, se usaron 15 frutas y 45 cortes por tratamiento. [0071] Se calculó el porcentaje de protección proporcionada por los diferentes tratamientos a partir del diámetro de la lesión provocada por el agente de descomposición de la fruta tras el tiempo de incubación usando la siguiente fórmula:

D  D

T X x100  Y%

DT

en la cual Y es el porcentaje de protección; DT es el diámetro medio de las lesiones para el control no tratado y DX es el diámetro medio de las lesiones para las frutas tratadas. [0072] Se evaluó el efecto de las composiciones de acuerdo con la invención contra descomposiciones de manzana postcosecha provocadas por P. expansum en condiciones controladas. [0073] En las partes restantes de la descripción, GC representa gluconato de calcio en forma monohidratada (número CAS: 299-28-5), calidad alimentaria,

Jungbunzlauer, Alemania. NC representa nitrato de calcio (tetrahidratado), al 98%, VWR. Estos productos se conocen per se y están disponibles comercialmente. [0074] En una primera serie de experimentos, se usaron composiciones

5 convencionales de cepa O como control. La concentración convencional para el uso de cepa O es 107 unidades formadoras de colonia por mililitro (ufc/ml), mientras que la concentración de 105 ufc/ml se considera como subóptima. En efecto, puede observarse en la tabla 3 que los resultados (que se expresan en términos de porcentaje de protección calculada tal como se

10 definió anteriormente) obtenidos con esta concentración cuando se usó cepa O sola no son satisfactorios.

Tabla 3 Protección contra Penicillium expansum

Contro l

Cepa O: 0 107 105 105 105 105

Sal de calcio: 0 0 0 GC 2 g/l NC 1,2 g/l NC 2,4 g/l

Infección promedio: 11,5 0,8 2,00 1,5 7,6 10,9

Eficiencia de protección (%): - 93,1 82,7 87,3 34,1 5,8

15 [0075] De acuerdo con la presente invención, se encontró sorprendentemente que una composición que comprendía la concentración subóptima de 105 ufc/ml de cepa O y 2 g/l de GC mejoraba la protección. [0076] Además, se encontró que una composición que comprendía la concentración subóptima de 105 ufc/ml de cepa O y nitrato de calcio o bien a

20 1,2 g/l o bien a 2,4 g/l era menos eficiente en la protección de la fruta contra

P. expansum que una composición que contenía la cepa O sola, o que una composición de acuerdo con una realización de la presente invención es decir que comprendía la cepa O con GC a 2 g/l. [0077] En una segunda serie de experimentos en manzanas, cuyos

25 resultados se proporcionan en la tabla 4, se han usado composiciones convencionales de cepa O como control.

Tabla 4

Control

Cepa O: 0 107 105 105

GC: 0 0 0 2 g

Infección promedio: 12,9 6,1 8,4 1,2

% de eficiencia de protección: 52,6 35,1 90,7

[0078] En la primera composición, la concentración de cepa O usada fue la concentración convencional de 107 ufc/ml, mientras que en la segunda, la concentración usada fue la concentración subóptima de 105 ufc/ml.

5 [0079] De nuevo, se encontró sorprendentemente que una composición que comprendía la concentración subóptima de 105 ufc/ml de cepa O y 2 g/l de GC mejoraba la protección de la fruta contra el patógeno. [0080] En una tercera serie de experimentos en manzanas, cuyos resultados se proporcionan en la tabla 5, se han usado composiciones convencionales

10 de cepa O como control.

Tabla 5

Control

Cepa O: 0 107 105 105

GC: 0 0 0 2 g

Infección promedio: 13,2 3,7 7,1 2,7

% de eficiencia de protección: 71,7 46,0 79,3

[0081] De acuerdo con la invención, la adición de GC permite reducir la concentración de cepa O cien veces hasta 105 ufc/ml mientras que se obtiene

15 una eficacia mejor y potenciada contra P. expansum que con la concentración convencional de 107 ufc/ml. Este resultado ilustra las propiedades notables de la composición de acuerdo con la presente invención.

20 Ejemplo 3 Material vegetal [0082] Las manzanas (Malus domestica Borkh cv. Golden) son tal como se describen en el ejemplo 2.

25 Patógenos [0083] Penicillium expansum tal como se describe en el ejemplo 2.

Microorganismos antagonistas [0084] La cepa de levadura antagonista fue Candida oleophila tal como se

describe en el ejemplo 2.

Tratamiento

5 [0085] Se cortaron las manzanas tal como se describe en el ejemplo 2 y se trataron mediante aplicación de composiciones que comprendían una sal de acuerdo con la invención y 105 ufc de C. oleophila, o composiciones del estado de la técnica. Las sales usadas fueron: gluconato de calcio (GC), citrato de tricalcio: (CT) lactato de calcio (LC), lactogluconato de calcio

10 (LGC), ascorbato de calcio (AC). [0086] Tras la incubación, se inocularon los cortes con Penicillum expansum. Se incuban adicionalmente las frutas. Se midieron los diámetros de las lesiones que se desarrollaron alrededor de los cortes tras 7 días tras la inoculación del patógeno. Se calculó el porcentaje de protección

15 proporcionada por los diferentes tratamientos tal como se describe en el ejemplo 2. Los resultados del efecto protector de la combinación del antagonista y las sales en el deterioro de la manzana a partir de dos series de experimentos se muestran en las tablas 6a y 6b. Se han usado composiciones convencionales de cepa O (107) como control.

20

Tabla 6a

Cepa O: Control sin cepa 107 105 105 105 105 105 105

Sal: GC CT LC LGC AC

concentración: 0 0 0 2 g/l 0,87 g/l 1,34 g/l 1,3 g/l 1,96 g/l

Infección promedio: 18,4 5,2 9,2 4,8 2,8 7,7 5,6 5,4

% de

eficiencia: 0 71,8 50,3 73,8 84,8 58,1 69,4 70,9

Tabla 6b

Cepa O: Control sin cepa 107 105 105 105 105 105 105

Sal: GC CT LC LGC AC

concentración: 0 0 0 2 g/l 0,87 g/l 1,34 g/l 1,3 g/l 1,96 g/l

Infección promedio: 4,07 6,20 5,53 6,50 6,67 6,06 6,21 5,31

% de eficiencia: 0 84,3 67,0 74,2 83,3 82,5 86,3 86,7

[0087] De acuerdo con la invención, la adición de las diferentes sales permite reducir la concentración de cepa O cien veces hasta 105 ufc/ml y permite obtener mejor protección a esta concentración en comparación con

5 cepa O sola. [0088] En otra serie de experimentos en manzanas, cuyos resultados se proporcionan en la tabla 7, se han usado composiciones convencionales de cepa O como control, y las sales usadas fueron: gluconato de calcio (GC), citrato de tricalcio (CT) y carbonato de calcio (CaC).

10

Tabla 7

Cepa O: Control sin cepa 105 107 105 105 105

Sal: CaCl2 GC CT

concentración: 20 g/l 2 g/l 0,87g/l

Infección promedio: 26,5 6,5 3,4 0,7 1,7 1,0

% de eficiencia: 75,5 87,1 97,4 93,5 96,4

[0089] La combinación de microorganismos antagonistas con las diferentes sales de acuerdo con la invención, permite reducir la concentración de cepa

15 O cien veces hasta 105 ufc/ml mientras que se obtiene una eficacia mejor y potenciada contra P. expansum que con la concentración de 107 ufc/ml. Adicionalmente, la composición de acuerdo con la invención permite reducir significativamente la cantidad de sales necesarias cuando se compara con cantidades de CaCl2 de la técnica anterior usadas para obtener protección

20 equivalente.

Ejemplo 4

Material vegetal

25 [0090] Las manzanas (Malus domestica Borkh cv. Golden) son tal como se describen en el ejemplo 2.

Patógenos [0091] Penicillium expansum tal como se describe en el ejemplo 2.

Microorganismos antagonistas 5 [0092] La cepa de levadura antagonista fue Candida oleophila tal como se describe en el ejemplo 2.

Tratamiento [0093] Se cortaron las manzanas tal como se describe en el ejemplo 2 y se

10 trataron mediante aplicación de composiciones que comprendían una sal de acuerdo con la invención y 105 ufc de C. oleophila, o composiciones del estado de la técnica. [0094] Tras la incubación, se inocularon los cortes con Penicillum expansum. Se incuban adicionalmente las frutas. Se midieron los diámetros de las

15 lesiones que se desarrollaron alrededor de los cortes tras 7 días tras la inoculación del patógeno. Se calculó el porcentaje de protección proporcionada por los diferentes tratamientos tal como se describe en el ejemplo 2. Los resultados se muestran en la tabla 8. Se han usado composiciones convencionales de cepa O como control. Las sales usadas

20 fueron: gluconato de calcio (GC), fosfato de calcio monobásico (FCM) y fosfato de calcio tribásico (FCT).

Tabla 8

Cepa O: Control 107 105 105 105 105 105

Sal: CaCl2 GC FCT FCM

Concentración: 20 g/l 2 g/l 0,486 g/l 1,485 g/l

Infección promedio: 2,3 1,0 1,2 0,3 0,5 0,4 0,1

% de eficiencia: 55,8 45,4 87,6 77,4 84,1 94,4

25 [0095] En el mismo experimento, se midieron los diámetros de las lesiones que se desarrollaron alrededor de los cortes tras 11 días tras la inoculación del patógeno. Se calculó el porcentaje de protección proporcionada por los diferentes tratamientos tal como se describe en el ejemplo 2. Los resultados se muestran en la tabla 9. Se han usado composiciones convencionales de

30 cepa O como control. Las sales usadas fueron: gluconato de calcio (GC),

fosfato de calcio monobásico (FCM) y fosfato de calcio tribásico (FCT). Tabla 9

Cepa O: Control 107 105 105 105 105 105

Sal: CaCl2 GC FCT FCM

Concentración: 20 g/l 2 g/l 0,486 g/l 1,485 g/l

Infección promedio: 5,1 2,8 2,8 0,6 1,5 0,9 0,7

% de eficiencia: 45,2 44,1 87,7 70,5 82,1 86,6

[0096] Puede observarse a partir de los resultados de las tablas 8 y 9 que el gluconato de calcio, el carbonato de calcio, el bicarbonato de calcio, el

5 fosfato de calcio monobásico y el fosfato de calcio tribásico proporcionan una buena protección contra Penicillium expansum cuando se comparan con el uso del microorganismo antagonista solo a la misma concentración.

Ejemplo 5

10

Material vegetal [0097] Las manzanas (Malus domestica Borkh cv. Golden) son tal como se describen en el ejemplo 2.

15 Patógenos [0098] Botrytis cinerea.

Microorganismos antagonistas [0099] La cepa de levadura antagonista fue Candida oleophila tal como se 20 describe en el ejemplo 2.

Tratamiento [0100] Se cortaron las manzanas tal como se describe en el ejemplo 2 y se trataron mediante aplicación de composiciones que comprendían una sal de

25 acuerdo con la invención y 105 ufc de C. oleophila, o composiciones del estado de la técnica. [0101] Tras la incubación, se inocularon los cortes con Penicillum expansum. Se incuban adicionalmente las frutas. Se midieron los diámetros de las lesiones que se desarrollaron alrededor de los cortes tras 5 días tras la

30 inoculación del patógeno. Se calculó el porcentaje de protección proporcionada por los diferentes tratamientos tal como se describe en el ejemplo 2. Los resultados se muestran en la tabla 10. Se han usado composiciones convencionales de cepa O como control. Las sales usadas fueron: gluconato de calcio (GC), citrato de tricalcio: (CT), glutamato de calcio (GtC).

Tabla 10

Cepa O: Contro l 107 105 105 105 105 105

Sal: CaCl2 GC GtC CT

Concentración: 20 g/l 2 g/l 1,805 g/l 0,848 g/l

Infección promedio: 1,6 0,3 0,9 0,3 0,6 0,8 0,3

% de eficiencia: 84,2 43,3 82,4 60,7 51,3 78,9

Conclusiones

10 [0102] Todos los resultados proporcionados en estos ejemplos muestran que las composiciones de acuerdo con la presente invención demuestran una eficiencia superior que la proporcionada por composiciones del estado de la técnica que contienen cepas de microorganismos usadas a la misma concentración de aplicación. Las sorprendentes propiedades de las sales tal

15 como se describen en la presente memoria sobre las propiedades protectoras del microorganismo antagonista se demostraron claramente mediante los presentes ejemplos. Se han obtenido muy buenos resultados usando una combinación de gluconato de calcio, citrato de calcio, fosfato de calcio monobásico, fosfato de calcio tribásico, ascorbato de calcio, lactato de

20 calcio o lactogluconato de calcio con C. oleophila. [0103] Las sales usadas en la presente invención son compuestos estimulantes sorprendentemente buenos que permiten disminuir la concentración de un microorganismo antagonista sin disminuir la eficiencia de las composiciones contra patógenos. También permiten disminuir la

25 concentración de un microorganismo antagonista mientras prolongan la duración de la eficiencia de la composición contra patógenos.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

Esta lista de referencias citadas por el solicitante es únicamente para la comodidad del lector. No forma parte del documento de la patente europea. A

5 pesar del cuidado tenido en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la EPO niega toda responsabilidad en este sentido.

10 Documentos de patentes citados en la descripción

imagen2

Claims

Reivindicaciones

1.

Composición para su uso contra uno o más patógenos, que comprende al menos un microorganismo antagonista y al menos una sal seleccionada de entre fosfato de calcio monobásico Ca(H2PO4)2, fosfato de calcio dibásico (CaHPO4), fosfato de calcio tribásico (Ca3(PO4)2), lactato de calcio, gluconato de calcio, lactogluconato de calcio, citrato de calcio o ascorbato de calcio, en la cual dicho microorganismo antagonista es Candida oleophila,y caracterizada porque la cantidad de la sal está comprendida entre 0,005 y 5 g/l, preferiblemente entre 0,01 y 4 g/l, más preferiblemente entre 0,1 y 3 g/l, más preferiblemente entre 0,01 y 2,5 g/l, y todavía más preferiblemente entre 0,1 y 2,2 g/l.
2.

Composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la cual dicho microorganismo antagonista se aplica a una concentración que va desde 103 hasta 1011 ufc/ml, preferiblemente desde 104 hasta 1010 ufc/ml.
3.

Uso de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 contra patógenos que pueden provocar enfermedades a material vegetal.
4.

Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en el cual dicho material vegetal se selecciona del grupo que comprende frutas incluyendo las especies Malus spp., Pyrus spp., Citrus spp. incluyendo naranja, limón, pomelo, mandarina; cultivos tales como las especies tomate, pimiento, pepino, vid y fresa; cultivos de raíces incluyendo patata, zanahorias; fruta tropical incluyendo mango, plátano, guayaba, piña, aguacate; melón, y flores y otros cultivos ornamentales.
5.

Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 3 ó 4, en el cual los patógenos se seleccionan del grupo que comprende Alternaria spp., Ascochyta spp., Aspergillus spp., Botrytis spp., Cercospora spp., Cladosporium spp., Claviceps spp., Colletotrichum spp., Erysiphe spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Gilbertella spp., Gloeosporium spp., Helminthosporium spp., Monilia spp., Monilinia spp., Mucov spp., Nectria spp., Penicillium spp., Peronospora spp., Pezicula spp., Phomopsis spp., Phytophthora spp., Plasmopara spp., Podosphaera spp.,

Pseudocercosporium spp., Puccinia spp., Rhizoctonia spp., Rhizopus spp.; Rynchosporium spp., Sclerotinia spp., Septoria spp., Sphaerotheca spp., Uncinula spp., Ustilago spp., Venturia spp., Verticillium spp. y patógenos virales o bacterianos.
6.

Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 5, en el cual los patógenos se seleccionan del grupo que comprende Alternaria alternata, Ascochyta sp., Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Botrytis alii, Botrytis cinerea, Botrytis fabae, Cercospora sp., Cladosporium sp., Claviceps purpurea, Colletotrichum sp., Erysiphe betae, Erysiphe graminis, Fusarium oxysporum, Geotrichum candidum, Gilbertella persicovia, Gloeosporium perennans, Gloeosporium fructigenum, Helminthosporium sp., Monilia sp., Monilinia fructicola, Monilinia laxa, Mucov sp., Nectria cinnabarina, Penicillium digitatum, Penicillium expansum, Penicillium italicum, Peronospora sp., Pezicula malicorticas, Phomopsis viticola, Phytophthora infestans, Plasmopara viticola, Podosphaera leucotricha, Pseudocercosporium sp., Puccinia graminis, Rhizoctonia sp., Rhizopus arrhizus, Rhizopus stolonifer, Rynchosporium sp., Sclerotinia Cepivorum, Sclerotinia sclerotiorum, Septoria apicola, Sphaerotheca sp., Uncinula necator, Ustilago sp., Venturia inaequalis; Verticillium albo-atrum y Verticillium dahliae.
7.

Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6, en el cual los patógenos se seleccionan del grupo que comprende Botrytis spp., Penicillium spp., Pezicula spp. y Rhizopus spp.
8.

Uso de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para administración simultánea, separada o secuencial a una planta que va a tratarse.
9.

Método para el biocontrol de enfermedades provocadas por patógenos a material vegetal, que comprende la etapa de aplicar una composición tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 a dicho material vegetal.
10.

Método para la fabricación de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende la etapa de mezclar al menos un microorganismo antagonista con al menos una sal y/o derivados

de la misma.
11.

Uso de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 como biopesticida.