ES2353137T3 - Procedimiento para el aislamiento en paralelo de ácidos nucleicos bicatenarios y monocatenarios, así como para la eliminación selectiva de ácidos nucleicos bicatenarios de una mezcla de ácidos nucleicos bicatenarios y monocatenarios. - Google Patents
Procedimiento para el aislamiento en paralelo de ácidos nucleicos bicatenarios y monocatenarios, así como para la eliminación selectiva de ácidos nucleicos bicatenarios de una mezcla de ácidos nucleicos bicatenarios y monocatenarios. Download PDFInfo
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Abstract
Procedimiento para el aislamiento en paralelo de ácidos nucleicos bi y monocatenarios, así como para la eliminación selectiva de ácidos nucleicos bicatenarios de una mezcla de ácidos nucleicos bi y monocatenarios o de fuentes que contienen estas sustancias, caracterizado por las siguientes etapas: a) la muestra lisada u homogeneizada se ajusta en ausencia de alcohol o sustancias complejantes de iones alcalinotérreos o detergentes, dispersantes o humectantes con una disolución salina acuosa con una concentración superior a 1 M de forma que el ácido nucleico bicatenario se adsorbe a un soporte sólido, mientras que el ácido nucleico monocatenario no se adsorbe y queda en la disolución b) eliminación del soporte con el ácido nucleico adsorbido c) la disolución con el ácido nucleico monocatenario se mezcla con una disolución alcohólica con una concentración del 1 al 90% en volumen y se pone en contacto con otro soporte sólido, adsorbiéndose el ácido nucleico monocatenario a este otro soporte.
Description
La invención se refiere a un procedimiento para el
aislamiento eficaz y extremadamente sencillo y rentable
en paralelo de ácidos nucleicos bicatenarios y
monocatenarios. Por ácido nucleico bicatenario se
entiende especialmente ADN genómico y por ácido nucleico
monocatenario, ARN.
El aislamiento en paralelo de ADN genómico y ARN
total celular de una muestra biológica está ligado hasta
el momento actual a sólo unos pocos procedimientos
practicables. Raha, S., Merante, F., Proteau, G. y Reed,
J.K. (GATA, 1990, 7(7): 173-177) describen un
procedimiento para la separación de ADN genómico y ARN
total celular mediante etapas de precipitación selectiva
usando cloruro de litio. Otra posibilidad del aislamiento
en paralelo de ADN y ARN usa técnicas de ultrafiltración
usando un gradiente de cloruro de cesio para la
peletización de ARN en combinación con posterior diálisis
de ADN (Coombs, L.M., Pigott, D., Proctor, A., Eydmann,
M., Denner, J. y Knowles, M.A.; Anal. Biochem. (1990);
- 188;
- 338-343). El procedimiento publicado requiere
- extremadamente
- mucho tiempo y necesita un gasto de
- aparatos especial.
Pero en este procedimiento son desventajosas las
complejas etapas de preparación y el uso de grupos de
sustancias altamente tóxicas y cancerígenas como
cloroformo y fenol. Finalmente, el tiempo necesario es
muy grande.
Un procedimiento simplificado para el aislamiento
simultáneo de ADN y ARN se da a conocer en la publicación
para información de solicitud de patente WO 97/28171 A1.
- A
- este respecto, la muestra biológica se lisa con un
- tampón
- caotrópico. Después de la lisis se realiza la
- adición
- de nanopartículas (inferiores a 40 nm) de
material de silicio monodisperso. A esta partícula se une
el ADN genómico. A continuación, la mezcla se centrifuga.
A este respecto se peletizan las partículas de silicio.
El sobrenadante se transfiere a un nuevo recipiente de
reacción. El material de soporte peletizado se lava a
continuación con un tampón de lavado que contiene etanol
y el ADN unido se eluye finalmente de nuevo del material
de soporte mineral con un tampón bajo en sales. El
sobrenadante restante se somete entonces de un modo
clásico a una extracción con fenol/cloroformo y el ARN
precipita finalmente de esta manera y se disuelve
mediante agua después de las etapas de lavado.
El procedimiento es más rápido que el procedimiento
anteriormente descrito. No obstante, en este
procedimiento también se trabaja con grupos de sustancias
altamente tóxicas y cancerígenas como cloroformo y fenol.
Otro procedimiento de separación y aislamiento de
ácidos nucleicos monocatenarios y bicatenarios se da a
conocer en la memoria de patente EP 1 146 049 B1.
El procedimiento se basa en el tratamiento de una
fuente que contiene ácidos nucleicos con al menos un
material de soporte mineral de forma que:
- 1.
- Se aísla el ácido nucleico monocatenario ajustando las condiciones de tratamiento mediante una mezcla acuosa de sales caotrópicas y alcoholes alifáticos inferiores de forma que el ácido nucleico monocatenario se adsorbe prioritariamente a continuación a un soporte mineral, por el contrario el ácido nucleico bicatenario no se adsorbe. El ácido nucleico monocatenario unido se lava a continuación y finalmente se eluye del material de
soporte mediante un tampón bajo en sales.
- 2.
- Se aísla el ácido nucleico bicatenario ajustando las condiciones de tratamiento mediante una mezcla de sustancias complejantes de iones alcalinotérreos sin alcoholes alifáticos inferiores de forma que el ácido nucleico bicatenario se adsorbe a continuación a un soporte mineral, por el contrario el ácido nucleico monocatenario no se adsorbe. El ácido nucleico bicatenario unido se lava a continuación y finalmente se eluye del material de soporte mediante un tampón bajo en sales.
- 3.
- Se aísla el ácido nucleico bicatenario ajustando las condiciones de tratamiento mediante la presencia de un sarcosinato, pero sin alcoholes alifáticos inferiores de forma que el ácido nucleico bicatenario se adsorbe prioritariamente a continuación a un soporte mineral, por el contrario el ácido nucleico monocatenario no se adsorbe. El ácido nucleico bicatenario unido se lava a continuación y finalmente se eluye del material de soporte mediante un tampón bajo en sales.
- 4.
- Se aíslan los ácidos nucleicos bicatenarios o monocatenarios ajustando las condiciones de tratamiento mediante una mezcla acuosa de sales caotrópicas y alcoholes alifáticos inferiores de forma que ambas fracciones de ácidos nucleicos se adsorben a un soporte mineral. La separación de los ácidos nucleicos se realiza mediante una elución selectiva. A este respecto, el ácido nucleico bicatenario se eluye del material de soporte mediante una disolución de fuerza iónica reducida y alcoholes alifáticos inferiores. El ácido nucleico monocatenario restante se lava a continuación y finalmente se eluye del material de soporte mediante un tampón bajo en sales.
Alternativamente a esto, el ácido nucleico
monocatenario puede eluirse selectivamente del material
de soporte mediante una disolución que contiene
sustancias complejantes de iones alcalinotérreos y/o
sarcosinatos. A su vez, el ácido nucleico bicatenario
desde ahora residual se lava a continuación y finalmente
se eluye del material de soporte mediante un tampón bajo
en sales.
El procedimiento es de realización sencilla y
renuncia por completo al uso de fenol o cloroformo.
Tampoco es necesaria una precipitación con etanol que
requiere mucho tiempo.
No obstante, frecuentemente también se muestra que
no se produce la selectividad del aislamiento de los
ácidos nucleicos respectivos. Así, por ejemplo, un kit de
extracción comercialmente ofertado para aislar ARN
basándose en uno de los procedimientos descritos siempre
necesita una digestión con ADNasa. Esto es necesario ya
que la selectividad representada para el aislamiento de
ARN solo no es suficiente con el procedimiento descrito.
El ADN bicatenario debe eliminarse adicionalmente
mediante un procedimiento enzimático.
El documento WO97/37040 A2 también remite a un
procedimiento para la separación de ácidos nucleicos
monocatenarios y bicatenarios, especialmente en lo
referente al aislamiento de ARN de VHC de fluidos
corporales. Como ya se ha dado a conocer en la memoria de
patente EP1 146 049 B1, en el documento WO 97/37040 A2
también se realiza la unión del ácido nucleico
bicatenario a un material de sílice de manera que el
tampón utilizado para esto necesita una alta
concentración de EDTA (al menos 100 mM). Para esto se
necesita la presencia de un formador de complejos en alta
concentración para unir ácido nucleico bicatenario a
partículas de sílice mineral y evitar la unión de ácido
nucleico monocatenario.
En la patente de EE.UU. 5.155.018 se describe un
procedimiento y un kit de prueba para el aislamiento de
ARN y la purificación de fuentes biológicas. En ella se
describe en el ejemplo 2 el aislamiento de ARN usando
como disolución una mezcla de tiocianato de guanidina 5
M, ácido acético al 0,25% y 2-mercaptoetanol al 1%.
El objetivo de la presente invención se basó en
suprimir las desventajas de los procedimientos conocidos
y poner a disposición un mejor procedimiento para la
separación de ácidos nucleicos mono y bicatenarios.
El objetivo se alcanzó según las características de
la reivindicación 1. Las reivindicaciones 2 a 9
representan formas de realización preferidas de la
invención.
El procedimiento según la invención para el
aislamiento en paralelo de ácidos nucleicos bi y
monocatenarios, así como para la eliminación selectiva de
ácidos nucleicos bicatenarios, de una mezcla de ácidos
nucleicos bi y monocatenarios o de fuentes que contienen
estas sustancias se caracteriza por las siguientes
etapas:
a) la muestra lisada u homogeneizada se ajusta en
ausencia de alcohol o sustancias complejantes de
iones alcalinotérreos, o detergentes, dispersantes o
humectantes con una disolución salina acuosa a una
concentración superior a 1 M de forma que el ácido
nucleico bicatenario se adsorbe a un soporte sólido,
mientras que el ácido nucleico monocatenario no se
adsorbe y queda en la disolución
b) se elimina el soporte con el ácido nucleico
adsorbido
c) la disolución con el ácido nucleico monocatenario
se mezcla con una disolución alcohólica con una
concentración del 1 al 90% en volumen y se pone en
contacto con otro soporte sólido, adsorbiéndose el
ácido nucleico monocatenario a este otro soporte.
El ácido nucleico adsorbido al soporte sólido
respectivo se lava y se eluye según procedimientos
conocidos. La disolución salina acuosa puede estar
constituida por sales caotrópicas o no caotrópicas,
preferiblemente por sales de guanidinio. Como soporte
sólido sirve preferiblemente un soporte mineral. El
soporte sólido puede ser constituyente de una minicolumna
de centrifugación.
Para la adsorción de ácidos nucleicos bicatenarios
se usa el mismo material de soporte que para la adsorción
de los ácidos nucleicos monocatenarios según una forma de
realización preferida.
Como disolución alcohólica se utilizan
preferiblemente alcoholes con 1 a 5 átomos de carbono. La
disolución alcohólica puede contener adicionalmente otras
sustancias como tampón de acetato de sodio o potasio o
una mezcla de alcohol-detergente, especialmente
detergentes no iónicos.
Para la absorción del ácido nucleico monocatenario,
como soporte sólido puede utilizarse un soporte mineral o
partículas magnéticas de óxido de hierro, preferiblemente
con superficies modificadas.
Un kit para la realización del procedimiento se
conoce fundamentalmente por el documento EP 1 146 049 A2
(párrafo [0041] en combinación con los párrafos [0038] a
[0040]) y comprende los siguientes constituyentes:
- •
- una disolución salina acuosa con una concentración de sales superior a 1 M
- •
- dos soportes sólidos
- •
- una disolución alcohólica con una concentración del 1 al 90% en volumen
- •
- tampones de lavado y de elución conocidos. En el caso de la disolución salina acuosa se trata
de una disolución de sales no formadoras de complejos.
Por tanto, también se describe el uso de una
disolución salina acuosa con una concentración de sales
superior a 1 M para la eliminación selectiva de ácidos
nucleicos bicatenarios de una mezcla de ácidos nucleicos
bi y monocatenarios o de fuentes que contienen estas
sustancias mediante unión de los ácidos nucleicos
bicatenarios a un soporte sólido.
También se describe el uso de una disolución salina
acuosa con una concentración de sales superior a 1 M para
aislar ARN total celular altamente puro que está libre de
ADN genómico de una mezcla de ARN total celular y ADN
genómico o de fuentes que contienen estas sustancias
mediante unión del ADN genómico a un soporte sólido.
Según la invención se proporcionó un procedimiento
que hacía posible aislar en paralelo ácidos nucleicos bi
y monocatenarios de una fuente que contenía ácidos
nucleicos, siendo el procedimiento sencillo y rápido de
realizar y renunciando por completo al uso de fenol o
cloroformo.
El procedimiento según la invención hace posible
separar ácidos nucleicos bi y monocatenarios de una
fuente que contiene ácidos nucleicos con el objetivo de
aislar selectivamente sólo el ácido nucleico
monocatenario, siendo a su vez el procedimiento sencillo
y rápido de realizar y renunciando por completo al uso de
fenol o cloroformo.
Se mostró que una separación de ácido nucleico
monocatenario y bicatenario puede conseguirse de una
forma completamente distinta a la descrita en la memoria
de patente EP 1 146 049 B1. En el documento EP 1 146 049
B1 se han mencionado dos alternativas de procedimiento
para la unión de ácido nucleico bicatenario a un soporte
sólido, concretamente:
- 1.
- Tampones que contienen una mezcla de sustancias
complejantes de iones alcalinotérreos, es decir, por
ejemplo, EDTA o
- 2.
- Tampones que contienen un humectante, detergente
o dispersante (sarcosinatos).
En el documento EP 1 146 049 B1, estas condiciones
provocan – después de la incubación con un material de
soporte mineral -justamente una unión selectiva del
ácido nucleico bicatenario, no uniéndose el ácido
nucleico monocatenario. El ácido nucleico bicatenario
unido se lava dado el caso a continuación y finalmente se
eluye del material de soporte mineral mediante tampón
bajo en sales o agua. El ácido nucleico monocatenario no
unido también puede aislarse a continuación ajustando,
por ejemplo, las condiciones de unión mediante la adición
de un alcohol de forma que se realice una adsorción
eficiente a otro material mineral. El ácido nucleico
monocatenario unido también se lava a continuación y
finalmente se eluye a su vez del material mineral.
Además, en el documento EP 1 146 049 B1 se menciona
que con la adición de una mezcla acuosa de sales
caotrópicas con una concentración superior a 1 M y
alcoholes alifáticos inferiores las condiciones de
tratamiento pueden ajustarse de forma que el ácido
nucleico monocatenario se adsorbe en su mayoría o bien el
ácido nucleico total al soporte sólido.
Una diferencia decisiva de la presente invención en
comparación con el documento EP 1 146 049 B1 también es
que la solución salina acuosa con una concentración
superior a 1 M - en ausencia de alcohol – provoca que el
ácido nucleico monocatenario o ácido nucleico total no se
adsorba (como en el documento EP 1 146 049 B1) al soporte
sólido, sino exclusivamente el ácido nucleico
bicatenario. Este resultado era sorprendente y no era
deducible del estado de la técnica.
En el documento WO 97/37040 A2 también se necesitan
altas concentraciones de sales de componentes
complejantes (EDTA; EGTA) para la unión de un ácido
nucleico bicatenario.
Por tanto, dos memorias de patente diferentes que
describen el mismo objetivo advierten explícitamente que
un componente complejante (EDTA; EGTA) representa el
componente esencial para la unión de un ácido nucleico
bicatenario.
Pero la presente invención muestra justamente
sorprendentemente el efecto contrario, concretamente que
la unión de ácido nucleico bicatenario se realiza
justamente excelentemente cuando no está presente ningún
- agente
- complejante. Por tanto, este efecto no era de
- ningún modo de esperar.
- En
- consecuencia, se ha comprobado que en el
procedimiento según la invención la unión de ácido
nucleico bicatenario a un material de soporte sólido se
realiza exactamente bajo condiciones de unión opuestas.
La adsorción de los ácidos nucleicos bicatenarios se
realiza cuando la solución salina anteriormente
mencionada no contiene alcohol. En este caso también
puede renunciarse a la adsorción de los ácidos nucleicos
bicatenarios sobre sustancias complejantes de iones
alcalinotérreos o sarcosinatos u otros detergentes,
dispersantes o humectantes.
Por tanto, el procedimiento para el aislamiento en
paralelo de ADN genómico y ARN celular se realiza
mediante el procedimiento según la invención del
siguiente modo:
La fuente que contiene ácido nucleico se homogeneíza
o se lisa dado el caso, conteniendo el tampón de lisis
una alta concentración de sales (> 1 M) pero, a
diferencia de la memoria de patente EP 1146049, no
contiene alcohol, ni sustancias complejantes de iones
alcalinotérreos ni detergentes, dispersantes o
humectantes. Después de la homogeneización/lisis, la
muestra solubilizada se pone en contacto con un soporte
sólido, preferiblemente un material de soporte mineral.
El material de soporte puede suministrarse a este
respecto en la forma más distinta posible. En una
variante de realización preferida, el material de soporte
es constituyente de una minicolumna de centrifugación.
Bajo las condiciones especificadas, el ADN genómico
(ácido nucleico bicatenario) se une al material de
soporte, pero no al ARN (ácido nucleico monocatenario).
El filtrado contiene el ARN y se guarda para el posterior
proceso de extracción. El ADN genómico unido al material
de soporte se lava a continuación dado el caso con un
tampón de lavado alcohólico y finalmente se eluye del
material de soporte mediante un tampón bajo en sales o
agua. El filtrado guardado y que contiene el ácido
nucleico monocatenario se mezcla con una disolución
alcohólica y ahora también se pone en contacto con otro
material de soporte mineral. A su vez, el material
mineral puede presentarse en la forma más distinta,
preferiblemente de nuevo como constituyente de una
columna de centrifugación. A este respecto, el material
de soporte para la unión de ARN puede ser del mismo
material mineral que para la unión del ADN genómico.
Para elevar la eficiencia de la unión del ARN, la
disolución alcohólica también puede contener dado el caso
otras sales, especialmente tampón de acetato de sodio o
acetato de potasio con valores de pH ácidos o una mezcla
de alcohol-detergente, especialmente detergentes no
iónicos (por ejemplo, Tween20, Tween80, TritonX-100).
Después de realizarse la unión del ARN al material
de soporte utilizado, dado el caso se realizan etapas de
lavado en sí conocidas. Finalmente, el ARN también se
eluye del material de soporte mediante un tampón bajo en
sales o mediante agua.
Mediante este control de procedimiento
- extremadamente
- sencillo puede aislarse rápida y
- eficazmente ADN y ARN de una muestra biológica.
- En
- otra alternativa de realización según la
invención, mediante la separación de ácido nucleico
bicatenario y monocatenario también puede aislarse de
forma altamente eficiente y rápida ARN total celular
altamente puro que está sustancialmente libre de ADN
genómico contaminante, de manera que ya no son necesarias
las etapas de digestión de ADN enzimáticas usadas hasta
la fecha.
Para esto se utiliza el mecanismo descrito según la
invención de la adsorción selectiva de ácido nucleico
bicatenario (ADN) a un material de soporte mineral, pero
no procesándose posteriormente ya con el ADN unido.
Después de la eliminación del ADN genómico de la muestra
de partida, éste se mezcla a continuación como se ha
descrito anteriormente con una disolución alcohólica que
dado el caso puede contener otros componentes de sales y
esta mezcla se ponen en contacto con otro material de
soporte mineral, el material de soporte con el ARN unido
se lava dado el caso con un tampón de lavado alcohólico y
finalmente el ARN se eluye del material de soporte
mediante un tampón bajo en sales o mediante agua. El
procedimiento para el aislamiento selectivo de ARN
altamente puro, libre de ADN genómico, impresiona por su
rapidez y sencillez.
Interesantemente, para la unión específica de ambas
fracciones de ácido nucleico pueden utilizarse los mismos
materiales minerales. Pero también existe la posibilidad
de utilizar diferentes materiales para la unión selectiva
de ADN y ARN. Así, por ejemplo, la eliminación selectiva
del ADN genómico puede realizarse rápida y eficientemente
usando una columna de centrifugación con un material de
fibra de vidrio, realizándose a continuación la unión del
ARN después de la adición del componente alcohólico
descrito a partículas magnéticas de óxido de hierro,
preferiblemente con superficies modificadas. A este
respecto se combina entonces, por ejemplo, una etapa
manual para la eliminación de ADN de una muestra
biológica con un procedimiento automatizado (por ejemplo,
separación automatizada de partículas magnéticas) con el
objetivo de aislar rápidamente ARN altamente puro.
Los ácidos nucleicos aislados mediante las variantes
de procedimiento según las invención (ADN genómico y/o
ARN) están sin degradar y son de excelente calidad
(DO260:DO280 = 1,8-2,0). La contaminación con ADN genómico
es despreciable y esto es sin las etapas enzimáticas
necesarias hasta la fecha (uso de ADNasa I).
Los procedimientos permiten tanto el aislamiento en
paralelo de ADN y ARN como también el aislamiento
selectivo de ARN a partir de fundamentalmente cualquier
muestra de partida biológica. A este respecto también
pueden ponerse a disposición cantidades extremadamente
bajas de material de partida para un aislamiento. Esto es
especialmente esencial en el procesamiento de muestras
microdiseccionadas. Justamente en estas cantidades de
muestra extremadamente limitadas, un aislamiento de ADN y
ARN en paralelo es representativamente ventajoso.
La invención se explica más detalladamente a
continuación en un ejemplo de realización en el que el
ejemplo de realización no representa ninguna limitación
del procedimiento según la invención.
Ejemplo de realización
Aislamiento en paralelo de ADN genómico y ARN total
celular de una muestra de tejido
Transferencia de 20 mg de tejido de hígado de ratón
a un recipiente de reacción de 1,5 ml. Adición de 450 µl
de tampón de lisis (tiocianato de guanidinio 4 M, citrato
de trisodio dihidratado 80 mM). Desmenuzamiento de la
- muestra
- de tejido mediante un microhomogeneizador.
- Incubación
- durante 30 min a temperatura ambiente.
- Transferencia
- de la mezcla de lisis a una columna de
filtración con colector (filtro de fibra de vidrio,
empresa Whatmann) y centrifugación durante 2 min a 10.000
x g. En esta etapa, el ADN genómico se une a la
superficie de la columna de filtración. La columna de
filtración con el ADN unido se inserta en un nuevo
colector. El filtrado obtenido contiene el ARN total
celular y se mezcla con un mismo volumen de etanol al
70%. Esta mezcla también se transfiere luego a una
columna de filtración (filtro de fibra de vidrio, empresa
Whatmann) con colector y también se centrifuga a 10.000 x
g durante 1 min. El filtrado se desecha y la columna de
filtración con el ARN unido se inserta en un nuevo
colector. Ambas columnas de filtración se lavan entonces
con un tampón de lavado que contiene etanol (por ejemplo,
etanol al 80%, NaCl 50 mM, Tris-HCl 10 mM) y a
continuación se secan mediante centrifugación. La elución
del ADN genómico unido se realiza mediante la adición de
100 µl de tampón de elución (Tris-HCl 10 mM) o agua. La
elución del ARN total celular se realiza mediante la
adición de 100 µl de agua libre de ARNasa. Ambas columnas
de filtración se centrifugan durante 1 min a 10.000 x g.
Las columnas de filtración se desechan, los filtrados
contienen las dos fracciones de ácido nucleico.
Claims (9)
- 1.
- Procedimiento para el aislamiento en paralelo de ácidos nucleicos bi y monocatenarios, así como para la eliminación selectiva de ácidos nucleicos bicatenarios de una mezcla de ácidos nucleicos bi y monocatenarios o de fuentes que contienen estas sustancias, caracterizado por las siguientes etapas:
a) la muestra lisada u homogeneizada se ajusta en
ausencia de alcohol o sustancias complejantes de
iones alcalinotérreos o detergentes, dispersantes o
humectantes con una disolución salina acuosa con una
concentración superior a 1 M de forma que el ácido
nucleico bicatenario se adsorbe a un soporte sólido,
mientras que el ácido nucleico monocatenario no se
adsorbe y queda en la disolución
b) eliminación del soporte con el ácido nucleico
adsorbido
c) la disolución con el ácido nucleico monocatenario
se mezcla con una disolución alcohólica con una
concentración del 1 al 90% en volumen y se pone en
contacto con otro soporte sólido, adsorbiéndose el
ácido nucleico monocatenario a este otro soporte.
- 2.
- Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el ácido nucleico adsorbido al soporte sólido respectivo se lava y se eluye según procedimientos conocidos.
- 3.
- Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la solución salina acuosa está constituida por sales caotrópicas o no caotrópicas, preferiblemente por sales de guanidinio.
- 4.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a
3, caracterizado porque como soporte sólido se usa un
soporte mineral.
- 5.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el soporte sólido es constituyente de una minicolumna de centrifugación.
- 6.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque para la adsorción de ácidos nucleicos bicatenarios se usa el mismo material de soporte que para la adsorción de ácidos nucleicos monocatenarios.
- 7.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la disolución alcohólica contiene alcoholes con 1 a 5 átomos de carbono.
- 8.
- Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado porque la disolución alcohólica contiene adicionalmente otras sustancias como
a) tampón de acetato de sodio o de potasio o
b) una mezcla de alcohol-detergente, especialmente
detergentes no iónicos.
- 9.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque para la absorción del ácido nucleico monocatenario se utiliza como soporte sólido un soporte mineral o partículas magnéticas de óxido de hierro, preferiblemente con superficies modificadas.
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