ES2354965T3

ES2354965T3 - POSITIONING AXIS FOR MULTIPOCILLO TESTING DEVICE.

Info

Publication number: ES2354965T3
Application number: ES02741965T
Authority: ES
Inventors: Kenneth Desilets; Donald Rising
Original assignee: Millipore Corp
Current assignee: EMD Millipore Corp
Priority date: 2001-06-14
Filing date: 2002-06-11
Publication date: 2011-03-21
Anticipated expiration: 2022-06-11

Abstract

Un aparato (10) para pruebas dotado de múltiples pocillos que comprende una placa filtrante (12) con múltiples pocillos y una placa receptora (14; 60) que soporta a dicha placa filtrante (12) con múltiples pocillos, cuya placa filtrante (12) con múltiples pocillos tiene una multiplicidad de primeros pocillos (18) que se extienden desde una placa (16), comprendiendo cada uno de dichos primeros pocillos (18) (a ) un miembro hueco (22) que tiene dos aberturas (24) y que se extiende desde dicha placa (16) y (b.) una barrera permeable (26) sujeta alrededor de una abertura inferior (24) de dichas aberturas, y dos vástagos (34, 36) formados sobre la superficie inferior de la placa filtrante (12) que ajustan en unos agujeros (40, 38) practicados en la superficie superior de dicha placa receptora (14), cuya placa receptora (14; 60) tiene uno o más segundos pocillos (19; 62) para acomodar dichos primeros pocillos (18) de la placa filtrante (12), estando conformados dichos vástagos (34, 36) y dichos agujeros (40, 38) para impedir el contacto de dichos primeros pocillos (18) y dichos uno o más segundos pocillos (19; 62) cuando dichos vástagos (34, 36) están totalmente posicionados dentro de dichos agujeros (40, 38) y para permitir el movimiento lateral controlado de dicha placa filtrante (12) con múltiples pocillos con el fin de permitir el contacto de dichos primeros pocillos (18) y dichos uno o más segundos pocillos (19; 62) cuando dichos vástagos (34, 36) se han extraído parcialmente de dichos agujeros (40, 38).A test apparatus (10) provided with multiple wells comprising a filter plate (12) with multiple wells and a receiver plate (14; 60) supporting said filter plate (12) with multiple wells, whose filter plate (12) with multiple wells it has a multiplicity of first wells (18) extending from a plate (16), each of said first wells (18) (a) comprising a hollow member (22) having two openings (24) and which from said plate (16) and (b.) a permeable barrier (26) is held around a lower opening (24) of said openings, and two rods (34, 36) formed on the lower surface of the filter plate ( 12) which fit in holes (40, 38) made in the upper surface of said receiving plate (14), whose receiving plate (14; 60) has one or more second wells (19; 62) to accommodate said first wells ( 18) of the filter plate (12), said stems being formed (34, 36 ) and said holes (40, 38) to prevent contact of said first wells (18) and said one or more second wells (19; 62) when said stems (34, 36) are fully positioned within said holes (40, 38) and to allow controlled lateral movement of said filter plate (12) with multiple wells in order to allow contact of said first wells (18) and said one or more second wells (19; 62) when said stems (34, 36) have been partially removed from said holes (40, 38).

Description

ANTECEDENTES DEL INVENTO BACKGROUND OF THE INVENTION

Este invento se refiere a un aparato para pruebas dotado de múltiples pocillos para promover interacciones de fluidos tales como mediante la monitorización de metabolismos de células dentro de los pocillos del aparato de pruebas. Más particularmente, este invento se refiere a dicho aparato para pruebas dotado de múltiples 5 pocillos que comprende una placa filtrante con múltiples pocillos y una placa receptora que permite añadir o retirar líquido de la placa receptora sin perturbar a un material tal como las células dentro de los pocillos de la placa filtrante de múltiples pocillos. This invention relates to a test apparatus equipped with multiple wells to promote fluid interactions such as by monitoring cell metabolisms within the wells of the test apparatus. More particularly, this invention relates to said multi-well test apparatus comprising a multi-well filter plate and a receiving plate that allows to add or remove liquid from the receiving plate without disturbing a material such as cells within the wells of the multiwell filter plate.

En la actualidad, un aparato para pruebas dotado de múltiples pocillos para probar muestras incluye una placa filtrante con múltiples pocillos, una placa receptora con múltiples pocillos y una tapa. Los pocillos de la placa 10 filtrante con múltiples pocillos incluyen un miembro hueco, típicamente tubular, con un extremo abierto al que se fija una membrana tal como una membrana microporosa. Los miembros tubulares se pueden insertar en una bandeja de alimentación que contiene un medio nutriente de tal manera que las células contenidas en los pocillos se puedan fijar a la membrana y crecer en la misma. Las células se alimentan a medida que los nutrientes pasan desde el medio nutriente a través de la membrana y llegan a las células a una velocidad controlada por el gradiente de 15 concentración de los nutrientes desde el medio hasta las células. El medio nutriente contenido en la bandeja de alimentación se rellena periódicamente para mantener el crecimiento de las células. Currently, a multi-well test apparatus for testing samples includes a multi-well filter plate, a multi-well receiver plate and a lid. The wells of the multi-well filter plate 10 include a hollow, typically tubular member, with an open end to which a membrane such as a microporous membrane is attached. The tubular members can be inserted into a feed tray containing a nutrient medium such that the cells contained in the wells can be fixed to the membrane and grow therein. The cells feed as the nutrients pass from the nutrient medium through the membrane and reach the cells at a rate controlled by the gradient of concentration of the nutrients from the medium to the cells. The nutrient medium contained in the feed tray is periodically refilled to maintain cell growth.

Una vez que se ha alcanzado el nivel previsto de crecimiento de las células en la membrana de los pocillos, se puede utilizar la placa filtrante con múltiples pocillos en métodos de ensayo convencionales. Estos métodos de ensayo en general se efectúan mediante el posicionamiento de las membranas y las células en la placa filtrante con 20 múltiples pocillos en los pocillos de la placa receptora con múltiples pocillos, tal como una placa receptora con 96 pocillos situada por debajo de la placa filtrante con múltiples pocillos, o bien tiene justamente el mismo número de pocillos en coincidencia con la placa filtrante/células Los pocillos de la placa receptora con múltiples pocillos contienen una composición líquida a ensayar. La composición que se va a ensayar se difunde en la membrana y luego a través de la misma. Luego, los productos líquidos resultantes contenidos dentro de los pocillos de la placa 25 filtrante con múltiples pocillos o en los pocillos de la placa receptora con múltiples pocillos se ensayan para determinar la capacidad de la composición que se esté ensayando para penetrar la barrera de células. Once the expected level of cell growth in the membrane of the wells has been reached, the filter plate with multiple wells can be used in conventional test methods. These test methods are generally carried out by positioning the membranes and cells in the filter plate with 20 multiple wells in the wells of the multi-well receiver plate, such as a 96-well receptor plate located below the plate filter with multiple wells, or it has just the same number of wells in coincidence with the filter plate / cells The wells of the receiver plate with multiple wells contain a liquid composition to be tested. The composition to be tested is diffused in the membrane and then through it. Then, the resulting liquid products contained within the wells of the multi-well filter plate 25 or in the wells of the multi-well receptor plate are tested to determine the ability of the composition being tested to penetrate the cell barrier.

Un componente importante en el proceso de descubrimiento y desarrollo de fármacos es la determinación de la absorción oral y biodisponibilidad de los compuestos nuevos. Con el fin de realizar esta evaluación en un ensayo rentable, con elevada producción y sensible, es ideal usar un dispositivo in vitro con una multitud de pocillos 30 que contengan células, una pequeña cantidad de material de ensayo, y automatización. Clásicamente, la determinación de las características de absorción oral se realiza usando una estirpe definida de células epiteliales y midiendo la velocidad aparente de transporte del fármaco a través de un monoestrato de las células. Más recientemente, es posible clasificar/ordenar la velocidad pasiva de transporte de los posibles fármacos candidatos usando una barrera de membrana artificial. Los valores generados de estos experimentos in vitro son métodos 35 valiosos para la detección sistemática de los fármacos candidatos con mayores probabilidades de resultados satisfactorios mucho tiempo antes de que se valide la velocidad de absorción oral mediante medidas in vivo. Un experimento típico para determinar las características de absorción de fármacos de un compuesto químico conocido o desconocido se realiza del modo siguiente. El dispositivo con múltiples pocillos se siembra con células epiteliales en la parte más alta del filtro en un medio de nutrientes definido. El mismo medio se añade también a la bandeja de 40 alimentación de un solo pocillo situada debajo y en contacto para paso de fluidos con el dispositivo que contiene las células. Se deja que las células proliferen y se diferencien durante un número de días. El medio nutriente se reemplaza periódicamente con medio fresco para reponer los nutrientes agotados y retirar las células residuales y las células muertas. Al término de un período de crecimiento, las células y el dispositivo con múltiples pocillos se lavan suavemente con un amortiguador isotónico para retirar el medio nutriente residual y de proteínas. En este 45 momento, la placa filtrante con múltiples pocillos se transfiere a la placa receptora con múltiples pocillos y los productos químicos a ensayar se introducen, o bien al compartimiento situado por encima del estrato de células, o bien por debajo del soporte de células y filtro en la bandeja receptora con múltiples pocillos. La cámara opuesta se llena con un amortiguador exento de fármaco y el dispositivo con múltiples pocillos se incuba durante cierto período de tiempo, típicamente a 37º centígrados, con agitación. Si se desean múltiples puntos de tiempo, se puede 50 conseguir la toma de muestras de cualquiera de los dos componentes sin separar el dispositivo. La cantidad de productos químicos y fármacos que se transporta a través de la barrera de células se puede determinar mediante una variedad de métodos analíticos, pero típicamente se determina por cromatografía de líquidos- espectrometría de masas- espectrometría de masas (en adelante LC- MS/MS). An important component in the drug discovery and development process is the determination of oral absorption and bioavailability of new compounds. In order to perform this evaluation in a cost-effective, high-yield and sensitive assay, it is ideal to use an in vitro device with a multitude of wells containing cells, a small amount of test material, and automation. Classically, the determination of oral absorption characteristics is performed using a defined line of epithelial cells and measuring the apparent rate of transport of the drug through a monolayer of cells. More recently, it is possible to classify / sort the passive transport speed of possible candidate drugs using an artificial membrane barrier. The values generated from these in vitro experiments are valuable methods for the systematic detection of candidate drugs with a higher probability of satisfactory results long before the oral absorption rate is validated by in vivo measurements. A typical experiment to determine the drug absorption characteristics of a known or unknown chemical compound is performed as follows. The multi-well device is seeded with epithelial cells in the highest part of the filter in a defined nutrient medium. The same medium is also added to the single well feed tray below and in contact for fluid passage with the device containing the cells. The cells are allowed to proliferate and differentiate for a number of days. The nutrient medium is periodically replaced with fresh medium to replenish depleted nutrients and remove residual cells and dead cells. At the end of a period of growth, the cells and the multi-well device are gently washed with an isotonic buffer to remove residual nutrient and protein media. At this time, the multi-well filter plate is transferred to the multi-well receiver plate and the chemicals to be tested are introduced either to the compartment above the cell stratum or below the cell support and filter in the receiving tray with multiple wells. The opposite chamber is filled with a drug-free buffer and the multi-well device is incubated for a certain period of time, typically at 37 degrees Celsius, with shaking. If multiple time points are desired, sampling of any of the two components can be achieved without separating the device. The amount of chemicals and drugs that are transported through the cell barrier can be determined by a variety of analytical methods, but typically determined by liquid chromatography-mass spectrometry-mass spectrometry (hereinafter LC-MS / MS).

En los diseños de la técnica anterior, se producen efectos de acoplamiento perjudiciales entre la placa 55 filtrante con múltiples pocillos y una placa receptora con múltiples pocillos debidos a la acción de fuerzas capilares entre las paredes exteriores de los pocillos de la placa filtrante y las paredes interiores de los pocillos de la placa receptora. Estas fuerzas dan lugar a que el líquido contenido en la placa receptora con múltiples pocillos se traslade desde la pared del pocillo hasta la parte más alta de la placa receptora con múltiples pocillos, lo que resulta en un derrame al interior de un pocillo adyacente y en su contaminación. Esta contaminación es inaceptable. 60 In prior art designs, harmful coupling effects occur between the multi-well filter plate 55 and a multi-well receiver plate due to the action of capillary forces between the outer walls of the filter plate wells and the walls inside the wells of the receiving plate. These forces result in the liquid contained in the receiving plate with multiple wells being transferred from the wall of the well to the highest part of the receiving plate with multiple wells, resulting in a spill into an adjacent well and in Your pollution This contamination is unacceptable. 60

Además, la placa filtrante con múltiples pocillos y la placa receptora, ya sea una bandeja de alimentación con un solo pocillo o una placa receptora con múltiples pocillos, se deben separar fácilmente una de otra, en particular cuando la placa con múltiples pocillos de pruebas se procesa en un entorno automatizado. In addition, the multi-well filter plate and the receiving plate, either a single-well feed tray or a multi-well receiving plate, must be easily separated from each other, particularly when the multi-well test plate is Process in an automated environment.

Es también conveniente retirar cualesquiera gotitas de líquido retenidas sobre las superficies inferiores de las membranas durante la retirada de la placa filtrante con múltiples pocillos del líquido contenido en los pocillos de 5 la placa receptora, ya se trate de una bandeja de alimentación de un solo pocillo o de una placa receptora con múltiples pocillos. It is also convenient to remove any liquid droplets retained on the lower surfaces of the membranes during the removal of the filter plate with multiple wells of the liquid contained in the wells of the receiving plate, whether it is a single well feed tray or of a receiver plate with multiple wells.

El documento US5801055A describe un conjunto de placa de cultivo con múltiples pocillos que comprende una placa filtrante con múltiples pocillos y una placa receptora con múltiples pocillos que soporta a la placa filtrante con múltiples pocillos. La placa filtrante con múltiples pocillos tiene una agrupación de pocillos que se extienden 10 desde una placa y de los que cada uno comprende un miembro hueco con dos aberturas, estando cerrada la inferior de dichas aberturas por una barrera permeable. La placa receptora tiene un número correspondiente de pocillos para alojar a los pocillos de la placa filtrante. El posicionamiento de la placa filtrante con respecto a la placa receptora se consigue mediante una faldilla periférica de la placa filtrante que se acopla con un reborde periférico de la placa receptora. 15 US5801055A describes a multi-well culture plate assembly comprising a multi-well filter plate and a multi-well receiver plate that supports the multi-well filter plate. The filter plate with multiple wells has a grouping of wells extending 10 from a plate and of which each comprises a hollow member with two openings, the bottom of said openings being closed by a permeable barrier. The receiving plate has a corresponding number of wells to accommodate the wells of the filter plate. The positioning of the filter plate with respect to the receiving plate is achieved by a peripheral skirt of the filter plate that is coupled with a peripheral flange of the receiving plate. fifteen

El documento US6159368A describe otro aparato de micro-filtración con múltiples pocillos que comprende una placa filtrante con múltiples pocillos, una placa receptora con múltiples pocillos y una bandeja directora de goteo colocada entre las mismas. Document US6159368A describes another multi-well micro filtration apparatus comprising a multi-well filter plate, a multi-well receiving plate and a drip director tray placed between them.

SUMARIO DEL INVENTO SUMMARY OF THE INVENTION

De acuerdo con lo anteriormente expuesto, sería conveniente proveer un aparato para pruebas dotado de 20 múltiples pocillos que comprende una placa receptora y una placa filtrante con múltiples pocillos que facilite la extracción del líquido en exceso de las paredes de la placa filtrante con múltiples pocillos. Adicionalmente, sería conveniente proveer dicho aparato para pruebas dotado de múltiples pocillos que impida el trasiego de pocillo a pocillo cuando la placa filtrante con múltiples pocillos y la placa receptora con múltiples pocillos están situadas una junto a otra. 25 In accordance with the foregoing, it would be convenient to provide a test apparatus equipped with 20 multiple wells comprising a receiving plate and a multi-well filter plate that facilitates the extraction of excess liquid from the walls of the multi-well filter plate. Additionally, it would be convenient to provide said test apparatus equipped with multiple wells that prevents the transfer from well to well when the filter plate with multiple wells and the receiver plate with multiple wells are located next to each other. 25

Para solucionar este problema, el invento provee un aparato para pruebas dotado de múltiples pocillos según se define en la reivindicación 1. En las reivindicaciones subordinadas se definen realizaciones preferidas. To solve this problem, the invention provides a test apparatus provided with multiple wells as defined in claim 1. Preferred embodiments are defined in the dependent claims.

En la presente memoria se describirá el invento con referencia al crecimiento y uso de células sobre una barrera permeable, tal como una membrana, posicionada y sujeta al fondo de cada uno de una multiplicidad de pocillos. Sin embargo, se entenderá que el presente invento no necesita usarse en conjunción con células. Otros 30 usos representativos incluyen filtración, diálisis, y operaciones similares. The present invention will be described with reference to the growth and use of cells on a permeable barrier, such as a membrane, positioned and attached to the bottom of each of a multiplicity of wells. However, it will be understood that the present invention does not need to be used in conjunction with cells. Another 30 representative uses include filtration, dialysis, and similar operations.

El presente invento provee una placa filtrante con múltiples pocillos que comprende una multiplicidad de pocillos cada uno de los cuales incluye una membrana para retener una muestra, tal como unas células, sobre la membrana para uso en un aparato para pruebas dotado de múltiples pocillos. La placa filtrante con múltiples pocillos está provista de como mínimo dos vástagos que casan con unos agujeros de una placa receptora 35 complementaria. Los vástagos y los agujeros correspondientes se han conformado para permitir que la placa filtrante con múltiples pocillos y la placa receptora se separen una de otra fácilmente con el fin de permitir el transporte lateral controlado de la placa filtrante con múltiples pocillos con respecto a la placa receptora. Este transporte lateral permite el establecimiento de contacto de las paredes exteriores del pocillo de la placa filtrante con múltiples pocillos con las paredes interiores de pocillo de la placa receptora. Este contacto proporciona unos medios para extraer el 40 exceso de líquido de las membranas de la placa filtrante con múltiples pocillos por la acción de la tensión superficial y la acción capilar. The present invention provides a filter plate with multiple wells comprising a multiplicity of wells each of which includes a membrane for retaining a sample, such as cells, on the membrane for use in a test apparatus equipped with multiple wells. The multi-well filter plate is provided with at least two stems that match holes of a complementary receiver plate 35. The corresponding stems and holes have been shaped to allow the filter plate with multiple wells and the receiving plate to separate easily from each other in order to allow controlled lateral transport of the filter plate with multiple wells with respect to the receiving plate . This lateral transport allows the establishment of contact of the outer walls of the well of the filter plate with multiple wells with the inner well walls of the receiving plate. This contact provides means for extracting the excess liquid from the membranes of the filter plate with multiple wells by the action of surface tension and capillary action.

Los vástagos y los agujeros conjugados se han conformado también y posicionado de tal manera que los pocillos de la placa filtrante con múltiples pocillos estén espaciados de – y no contacten con - los pocillos del entorno de múltiples pocillos de la placa receptora mientras las dos placas están posicionadas una junto a otra. Esta 45 separación de pocillos impide que el líquido contenido en los pocillos se transporte a un pocillo adyacente por acción capilar. The conjugate stems and holes have also been shaped and positioned such that the wells of the filter plate with multiple wells are spaced from - and do not contact - the wells of the multi-well environment of the receiving plate while the two plates are positioned next to each other. This separation of wells prevents the liquid contained in the wells from being transported to an adjacent well by capillary action.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

La Figura 1 es una vista desde arriba en despiece ordenado de un aparato para pruebas dotado de múltiples pocillos que utiliza la placa filtrante con múltiples pocillos de este invento. 50 Figure 1 is an exploded top view of a multi-well test apparatus using the multi-well filter plate of this invention. fifty

La Figura 2 es una vista parcial en corte transversal de una placa filtrante con múltiples pocillos y una placa receptora con múltiples pocillos de este invento. Figure 2 is a partial cross-sectional view of a multi-well filter plate and a multi-well receiver plate of this invention.

La Figura 2A es una vista desde arriba en corte parcial de los vástagos y agujeros conjugados para recibir la placa filtrante con múltiples pocillos a la placa receptora con múltiples pocillos de este invento.. Figure 2A is a partial sectional top view of the conjugate stems and holes for receiving the multi-well filter plate to the multi-well receiver plate of this invention.

La Figura 3 es una vista en corte transversal de la posición de la placa filtrante con múltiples pocillos y de la placa receptora con múltiples pocillos cuando se extrae el exceso de líquido de una membrana de una placa filtrante con múltiples pocillos. Figure 3 is a cross-sectional view of the position of the multi-well filter plate and the multi-well receiver plate when excess fluid is removed from a membrane of a multi-well filter plate.

La Figura 4 es una vista de una realización adicional de una placa filtrante con múltiples pocillos y una placa receptora. con un solo pocillo. 5 Figure 4 is a view of a further embodiment of a multi-well filter plate and a receiving plate. with a single well. 5

Vista de la DESCRIPCIÓN DE REALIZACIONES ESPECÍFICAS View of the DESCRIPTION OF SPECIFIC EMBODIMENTS

Aunque el presente invento se describe con referencia a efectuar el crecimiento de células en una multiplicidad de pocillos, se entenderá que el presente invento es aplicable a manipulaciones que involucren áreas de acceso para introducir o extraer un líquido con el fin de efectuar el tratamiento previsto, por ejemplo la diálisis o la separación por difusión al mismo tiempo que se evita el movimiento de las membranas en los pocillos. 10 Although the present invention is described with reference to effecting cell growth in a multiplicity of wells, it will be understood that the present invention is applicable to manipulations involving access areas for introducing or extracting a liquid in order to effect the intended treatment, for example dialysis or diffusion separation while preventing movement of membranes in wells. 10

Refiriéndose a la Figura 1, una primera realización del aparato 10 para pruebas dotado de múltiples pocillos comprende una placa filtrante 12 con múltiples pocillos y una placa receptora 14 con múltiples pocillos. La placa filtrante 12 con múltiples pocillos incluye una placa 16 que tiene una pluralidad de pocillos 18, cada uno de los cuales está apareado con un agujero 20 de acceso. Los agujeros 20 de acceso permiten el acceso a través de la placa 16 a los pocillos 19 de la placa receptora 14 con múltiples pocillos con un dispositivo de manipulación de 15 líquido tal como una jeringuilla, una cánula, una pipeta o un elemento similar. Cada pocillo 18 comprende un miembro hueco 22, preferiblemente tubular, y que tiene una abertura inferior 24 a la que está sujeta una barrera permeable 26 tal como una membrana microporosa (figura 2). Por el término de una barrera “permeable”, se quiere decir que la barrera es permeable a líquidos y gases pero no a materiales en partículas sobre el tamaño de poros homologado de la barrera. Las membranas, en especial las membranas microporosas constituyen un material 20 preferido para la barrera, aunque se podrían usar otros materiales tales como membranas de ultrafiltración, telas o tejidos de vidrio, o materiales de plástico tejidos o sin tejer. El miembro 22 es hueco y se podría conformar en una variedad de formas. Se prefieren los diseños tubulares y los estándar de la industria para dichos pocillos, aunque se podrían usar pocillos de otras formas tales como triangulares, rectangulares, cuadrados o hexagonales. Referring to Figure 1, a first embodiment of the test apparatus 10 provided with multiple wells comprises a filter plate 12 with multiple wells and a receiver plate 14 with multiple wells. The filter plate 12 with multiple wells includes a plate 16 having a plurality of wells 18, each of which is paired with an access hole 20. The access holes 20 allow access through the plate 16 to the wells 19 of the receiving plate 14 with multiple wells with a liquid handling device such as a syringe, a cannula, a pipette or a similar element. Each well 18 comprises a hollow member 22, preferably tubular, and having a lower opening 24 to which a permeable barrier 26 such as a microporous membrane is attached (Figure 2). By the term of a "permeable" barrier, it is meant that the barrier is permeable to liquids and gases but not to particulate materials on the approved pore size of the barrier. Membranes, especially microporous membranes, constitute a preferred material for the barrier, although other materials such as ultrafiltration membranes, glass fabrics or fabrics, or woven or non-woven plastic materials could be used. The member 22 is hollow and could be shaped in a variety of ways. Tubular designs and industry standards are preferred for such wells, although wells of other shapes such as triangular, rectangular, square or hexagonal could be used.

Los agujeros 28 y 30 de acceso proporcionan acceso a una bandeja de alimentación (que no se ha 25 mostrado) en la que se introduce un medio nutriente en estado líquido o de gel y se extrae antes de utilizar la placa filtrante 12 con múltiples pocillos con la placa receptora 14 con múltiples pocillos. El medio nutriente se puede extraer e introducir a través de los agujeros 28 y 30 de acceso con un dispositivo convencional de manipulación de líquidos, tal como una jeringuilla, que se extienda a través de los agujeros 28 y 30 de acceso. Access holes 28 and 30 provide access to a feed tray (which has not been shown) into which a nutrient medium is introduced in a liquid or gel state and removed before using filter plate 12 with multiple wells with the receiving plate 14 with multiple wells. The nutrient medium can be extracted and introduced through the access holes 28 and 30 with a conventional liquid handling device, such as a syringe, which extends through the access holes 28 and 30.

La placa filtrante 12 con múltiples pocillos está provista de unos vástagos 34 y 36 que encajan 30 respectivamente en unos agujeros 40 y 38 de la placa receptora 14 con múltiples pocillos cuando la placa receptora 14 con múltiples pocillos se sitúa por debajo de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos. Con referencia a la Figura 2A, el agujero 40 tiene una sección transversal de aspecto triangular, preferiblemente con intersticios redondeados 44, 46 y 48. El agujero 40 comprende una ranura que permite que los vástagos 36 se muevan lateralmente en la dirección de la flecha 37. Los vástagos 34 y 36 están posicionados en una forma diferente entre sí con respecto a 35 una línea central de la placa en la dirección de la flecha 50 (o asimétricamente opuestos entre sí) de tal manera que el pocillo 18a esté siempre en la posición izquierda superior mientras el pocillo 18b está siempre en la posición derecha inferior de la Figura 1. Posicionando de ese modo a los pocillos 18a y 18b, todos los pocillos 18 de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos se pueden identificar por su posición. The filter plate 12 with multiple wells is provided with stems 34 and 36 that fit 30 respectively in holes 40 and 38 of the receiving plate 14 with multiple wells when the receiving plate 14 with multiple wells is located below the filter plate 12 with multiple wells. With reference to Figure 2A, the hole 40 has a triangular-shaped cross section, preferably with rounded interstices 44, 46 and 48. The hole 40 comprises a groove that allows the rods 36 to move laterally in the direction of the arrow 37 The stems 34 and 36 are positioned differently from each other with respect to a center line of the plate in the direction of the arrow 50 (or asymmetrically opposed to each other) such that the well 18a is always in the position upper left while well 18b is always in the lower right position of Figure 1. Thus positioning wells 18a and 18b, all wells 18 of the filter plate 12 with multiple wells can be identified by their position.

El uso del aparato 10 para pruebas dotado de múltiples pocillos se ejemplifica en la Figura 1. Según se 40 muestra en la Figura 1, la placa filtrante 12 con múltiples pocillos se posiciona encima de la placa receptora 14 con múltiples pocillos. La placa receptora 14 con múltiples pocillos se sitúa de tal manera que cada una de las membranas 26 (Figura 2) de cada uno de los pocillos 18 se extienda solamente en un pocillo 19 de la placa receptora 14 con múltiples pocillos. Cada uno de los pocillos 18 tiene en relación de asociación con él un agujero 20 de acceso que permite el acceso a una parte del pocillo 19 de la placa receptora 14 con múltiples pocillos utilizada 45 durante una etapa de ensayo de muestra. La placa filtrante 12 con múltiples pocillos se puede proveer de cuatro patas 54 que ajusten en los rebajos 56 de la placa receptora 14 con múltiples pocillos para de ese modo proveer la estabilidad mecánica de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos. Las patas 54 sirven también para posicionar la membrana 26 con el fin de evitar el contacto con la superficie del fondo de los pocillos 19, para proveer de ese modo el contacto de líquido con la membrana 26. 50 The use of the multi-well test apparatus 10 provided is exemplified in Figure 1. As shown in Figure 1, the multi-well filter plate 12 is positioned on top of the multi-well receiver plate 14. The receiving plate 14 with multiple wells is positioned such that each of the membranes 26 (Figure 2) of each of the wells 18 extends only in a well 19 of the receiving plate 14 with multiple wells. Each of the wells 18 has an access hole 20 in association with it that allows access to a part of the well 19 of the receiving plate 14 with multiple wells used 45 during a sample test stage. The filter plate 12 with multiple wells can be provided with four legs 54 that fit in the recesses 56 of the receiving plate 14 with multiple wells to thereby provide the mechanical stability of the filter plate 12 with multiple wells. The legs 54 also serve to position the membrane 26 in order to avoid contact with the bottom surface of the wells 19, thereby providing liquid contact with the membrane 26. 50

Refiriéndose a las Figuras 2 y 2A, los vástagos 34 y 36 ajustan respectivamente en el agujero 40 y en la ranura 38. El agujero 40 se ha conformado con un perímetro de tres lados, de tal manera que el vástago 34 contacta con las paredes del agujero 40 en tres puntos 41, 43 y 45. Este modo de contacto impide que la placa filtrante 12 con múltiples pocillos se mueva lateralmente con respecto a la placa receptora 14 con múltiples pocillos. El vástago 36 contacta con las paredes de la ranura 38 en dos puntos 47 y 49, de tal manera que las variaciones de una pieza 55 a otra pieza, o la desalineación, se puedan acomodar solamente en la dirección mostrada por la flecha 37. Los extremos más inferiores de los vástagos 34 y 36 son biselados, para promover la facilidad de inserción de los vástagos 34 y 36 en los agujeros 40 y 38. Además, como se ha mostrado en la Figura 3, como la punta del vástago 36 es más pequeña que el agujero 40, y el vástago 34 es más largo que el pocillo 22, y como la punta del vástago Referring to Figures 2 and 2A, the stems 34 and 36 respectively fit in the hole 40 and in the groove 38. The hole 40 has been formed with a perimeter of three sides, such that the stem 34 contacts the walls of the hole 40 at three points 41, 43 and 45. This contact mode prevents the filter plate 12 with multiple wells from moving laterally with respect to the receiving plate 14 with multiple wells. The rod 36 contacts the walls of the groove 38 at two points 47 and 49, such that variations from one piece 55 to another piece, or misalignment, can be accommodated only in the direction shown by arrow 37. lower ends of the stems 34 and 36 are beveled, to promote the ease of insertion of the stems 34 and 36 into the holes 40 and 38. Also, as shown in Figure 3, as the tip of the stem 36 is more smaller than the hole 40, and the stem 34 is longer than the well 22, and as the tip of the stem

36 es más pequeña que el agujero 38 y el vástago 36 es más largo que el pocillo 22, esto permite que la placa filtrante con múltiples pocillos se mueva lateralmente según se ha ejemplificado por la flecha 37 cuando se levanta parcialmente de la placa filtrante con múltiples pocillos como se muestra en la Figura 3. Este movimiento lateral no se limita a la dirección de la flecha 37 si los vástagos 34 y 36 se estrechan progresivamente de un modo uniforme como se ha mostrado en las Figuras. Este movimiento lateral permite el contacto de la gotita 41 en la pared interior 5 32 del pocillo 19, de tal manera que la gotita 41 se mueve al interior del pocillo 19 de la membrana 26. Esta explosión de la gotita 41 previene la contaminación por un efecto de acoplamiento perjudicial del líquido situado en el interior de un pocillo adyacente al pocillo 19 mostrado. 36 is smaller than the hole 38 and the rod 36 is longer than the well 22, this allows the filter plate with multiple wells to move laterally as exemplified by arrow 37 when partially raised from the filter plate with multiple wells as shown in Figure 3. This lateral movement is not limited to the direction of the arrow 37 if the stems 34 and 36 are progressively narrowed uniformly as shown in the Figures. This lateral movement allows the contact of the droplet 41 in the inner wall 5 32 of the well 19, such that the droplet 41 moves inside the well 19 of the membrane 26. This explosion of the droplet 41 prevents contamination by a harmful coupling effect of the liquid located inside a well adjacent to the well 19 shown.

Se entenderá que los vástagos 34 y 36 pueden ser de la misma longitud o más cortos que los pocillos 18 siempre que sean más largos que los agujeros 40 y 38. El movimiento lateral controlado de la placa filtrante 12 con 10 múltiples pocillos se efectúa mediante la conformación de los vástagos 34 y 36 y los agujeros 40 y 38 de tal manera que, cuando los vástagos 34 y 36 se extraen parcialmente de los agujeros 40 y 36, se forme un espacio entre los vástagos 34 y 36 y las paredes interiores de los agujeros 40 y 38 que permite el movimiento lateral de los vástagos 34 y 36 dentro de los agujeros 40 y 38 y, de ese modo, el movimiento lateral de la placa filtrante con múltiples pocillos de tal manera que se efectúe la explosión de las gotitas 41. Esto puede efectuarse, por ejemplo, mediante la 15 formación de superficies inclinadas en los vástagos 34 y 36 desde la parte más alta de los vástagos hasta la parte inferior de éstos donde las paredes de los agujeros 40 y 38 son verticales. It will be understood that the stems 34 and 36 can be of the same length or shorter than the wells 18 as long as they are longer than the holes 40 and 38. The controlled lateral movement of the filter plate 12 with 10 multiple wells is effected by the shaping of the stems 34 and 36 and the holes 40 and 38 such that, when the stems 34 and 36 are partially removed from the holes 40 and 36, a space is formed between the stems 34 and 36 and the inner walls of the holes 40 and 38 which allows lateral movement of the stems 34 and 36 inside holes 40 and 38 and, thus, lateral movement of the filter plate with multiple wells such that the droplet explosion 41 is effected This can be done, for example, by forming inclined surfaces on the stems 34 and 36 from the highest part of the stems to the bottom of these where the walls of the holes 40 and 38 are v Ertical

La Figura 4 presenta la misma placa filtrante 12 con múltiples pocillos en uso con una placa 60 de un solo pocillo. En esta realización, la placa receptora 60 de un solo pocillo contiene todos los elementos de la placa receptora 14 con múltiples pocillos de la Figura 1, con la excepción del número de pocillos individuales. Se usa 20 principalmente para la alimentación de las células que podrían crecer en la placa filtrante. Se podría usar también en las aplicaciones en las que el filtrado de las paredes de la placa filtrante no se recoja para su análisis y simplemente se dirija al drenaje. Los vástagos 34, 36 tienen la misma configuración y las mismas dimensiones que las descritas anteriormente en relación con la placa receptora 14 con múltiples pocillos de la Figura 1. Análogamente, los agujeros 38, 40 de la placa 60 de un solo pocillo son idénticos a los de la realización descrita 25 anteriormente con respecto a la placa receptora 14 con múltiples pocillos y desempeñan la misma función exacta. Adicionalmente, la placa 60 de un solo pocillo podría tener los rebajos 56 de la placa receptora 14 con múltiples pocillos en los que ajustasen las cuatro patas 54 de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos para proporcionar estabilidad mecánica de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos. Las patas 54 y los rebajos 56 sirven también para posicionar las membranas (que no se han mostrado) de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos con el fin de evitar 30 el contacto con la superficie del fondo de los pocillos 18 de la placa filtrante 12 con la superficie del fondo del único pocillo 62 de la placa 60, para promover de es modo el contacto de líquido con cada pocillo 18 de la placa filtrante 12. La placa 60 de un solo pocillo podría tener un fondo plano (que no se ha mostrado) o bien podría tener un fondo inclinado 64 que permita la circulación de líquido desde un extremo de la placa 60 adyacente al agujero 28 de acceso a la placa filtrante 12 con múltiples pocillos hasta el otro extremo de la placa 60 de un solo pocillo adyacente 35 al agujero 60 de acceso de la placa filtrante 12 con múltiples pocillos. De este modo, se puede cambiar o añadir fácilmente fluido a la placa 60 de un solo pocillo a través de uno o más agujeros 28, 30 de acceso de la placa filtrante 12 sin perturbar a las células situadas en la membrana de la placa filtrante 12. Se ha mostrado también en la Figura 4 la tapa opcional 66 que se coloca sobre la parte superior de la placa filtrante 12 para prevenir la contaminación o la evaporación de líquido del sistema en pruebas. 40 Figure 4 shows the same filter plate 12 with multiple wells in use with a single well plate 60. In this embodiment, the single-well receiver plate 60 contains all the elements of the multi-well receiver plate 14 of Figure 1, with the exception of the number of individual wells. 20 is used primarily for feeding the cells that could grow in the filter plate. It could also be used in applications where the filtering of the walls of the filter plate is not collected for analysis and is simply directed to the drain. The stems 34, 36 have the same configuration and the same dimensions as those described above in relation to the receiving plate 14 with multiple wells of Figure 1. Similarly, the holes 38, 40 of the single well plate 60 are identical to those of the embodiment described above with respect to the receiving plate 14 with multiple wells and perform the same exact function. Additionally, the single well plate 60 could have the recesses 56 of the receiving plate 14 with multiple wells in which the four legs 54 of the filter plate 12 with multiple wells fit to provide mechanical stability of the filter plate 12 with multiple wells . The legs 54 and the recesses 56 also serve to position the membranes (which have not been shown) of the filter plate 12 with multiple wells in order to avoid contact with the bottom surface of the wells 18 of the filter plate 12 with the bottom surface of the single well 62 of the plate 60, to thereby promote liquid contact with each well 18 of the filter plate 12. The single well plate 60 could have a flat bottom (which has not been shown) or it could have an inclined bottom 64 that allows the circulation of liquid from one end of the plate 60 adjacent to the access hole 28 to the filter plate 12 with multiple wells to the other end of the plate 60 of a single adjacent well 35 to the access hole 60 of the filter plate 12 with multiple wells. In this way, fluid can be easily changed or added to the single well plate 60 through one or more access holes 28, 30 of the filter plate 12 without disturbing the cells located in the membrane of the filter plate 12 The optional cover 66 is also shown in Figure 4 which is placed on top of the filter plate 12 to prevent contamination or evaporation of liquid from the system under test. 40

Claims

1. A test apparatus (10) equipped with multiple wells comprising

a filter plate (12) with multiple wells and a receiver plate (14; 60) that supports said filter plate (12) with multiple wells,

whose filter plate (12) with multiple wells has a multiplicity of first wells (18) that extend from a plate (16), each of said first wells (18) comprising

(a) a hollow member (22) having two openings (24) and extending from said plate (16) and

(b.) a permeable barrier (26) holds around a lower opening (24) of said openings, and 10

two stems (34, 36) formed on the lower surface of the filter plate (12) that fit into holes (40, 38) made in the upper surface of said receiving plate (14),

whose receiver plate (14; 60) has one or more second wells (19; 62) to accommodate said first wells (18) of the filter plate (12), said stems (34, 36) and said holes (40, being formed, 38) to prevent contact of said first wells (18) and said one or more second wells (19; 62) when said 15 stems (34, 36) are fully positioned within said holes (40, 38) and to allow controlled lateral movement of said filter plate (12) with multiple wells in order to allow contact of said first wells (18) and said one or more second wells (19; 62) when said stems (34, 36) have been removed partially of said holes (40, 38).

2. The multi-well test apparatus according to claim 1, wherein said stems 20 (34, 36) have a beveled surface at least along the lower parts thereof.

3. The test apparatus provided with multiple wells according to claims 1 or 2, wherein one (40) of said holes has a perimeter of three sides and a second (38) of said holes is formed as a groove, an oval, or a rectangle.

4. The test apparatus provided with multiple wells according to claims 1 or 2, wherein one 25 (40) of said holes has a perimeter of three sides and a second (38) of said holes is shaped as a groove.

5. The multi-well apparatus of claim 1, having more than two stems (34, 36) and two holes (40, 38).

The test apparatus provided with multiple wells according to any one of claims 1 to 5, 30 in which an access hole (20) through said filter plate (12) is positioned next to each of said first wells (18).

7. The multi-well test apparatus according to any one of claims 1 to 6, wherein the permeable barrier (26) is selected from the group consisting of a membrane, a glass cloth, a glass fabric, a woven plastic sheet and a non-woven plastic sheet. 35

8. The multi-well test apparatus according to any one of claims 1 to 7, wherein the receiving plate is a multi-well receiving plate (14).

9. The multi-well test apparatus according to any one of claims 1 to 8, wherein the number of second wells (19) of the receiving plate (14) corresponds in number and position to the number of first wells (18 ) of the filter plate (12). 40

10. The multi-well test apparatus according to claim 9, wherein each of said second wells (19) has been sized to accommodate one of said first wells (18).

11. The multi-well test apparatus according to any one of claims 1 to 7, wherein the receiving plate is a single-well plate (60).

12. The test apparatus provided with multiple wells according to any one of claims 1 to 45 11, wherein said stems (34, 36) are longer than said hollow members (22) of said first wells (18).