ES2358245T3 - Lh para su uso en el mantenimiento de uno o más embarazos mediante la inducción de la formación de un cuerpo lúteo accesorio. - Google Patents
Lh para su uso en el mantenimiento de uno o más embarazos mediante la inducción de la formación de un cuerpo lúteo accesorio. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2358245T3 ES2358245T3 ES04717460T ES04717460T ES2358245T3 ES 2358245 T3 ES2358245 T3 ES 2358245T3 ES 04717460 T ES04717460 T ES 04717460T ES 04717460 T ES04717460 T ES 04717460T ES 2358245 T3 ES2358245 T3 ES 2358245T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- day
- use according
- mammals
- luteinizing hormone
- micrograms
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 title description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 claims abstract description 127
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 126
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims abstract description 59
- 230000009027 insemination Effects 0.000 claims abstract description 56
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 47
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 25
- 230000000938 luteal effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 178
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 47
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 47
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 36
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 36
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 22
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 14
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims description 9
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims description 9
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims description 9
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 6
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 claims description 5
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000283726 Bison Species 0.000 claims description 4
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 claims description 4
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 claims description 4
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 claims description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 4
- 241000283899 Gazella Species 0.000 claims description 4
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 4
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 4
- 241000282838 Lama Species 0.000 claims description 4
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 claims description 4
- 241000283011 Rangifer Species 0.000 claims description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 4
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 claims description 4
- 241000282840 Vicugna vicugna Species 0.000 claims description 4
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 4
- 241000282979 Alces alces Species 0.000 claims description 3
- 241000030939 Bubalus bubalis Species 0.000 claims description 3
- 241000282818 Giraffidae Species 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 76
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 73
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 53
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 51
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 50
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 41
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 40
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 39
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 39
- 229940035638 gonadotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 39
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 35
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 35
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 33
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 24
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 21
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 20
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 16
- 230000001158 estrous effect Effects 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 14
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 14
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 13
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 13
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 12
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 12
- 244000144980 herd Species 0.000 description 12
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 12
- ZKFNOUUKULVDOB-UHFFFAOYSA-N 1-amino-1-phenylmethyl phosphonic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(N)C1=CC=CC=C1 ZKFNOUUKULVDOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 229960003846 melengestrol acetate Drugs 0.000 description 11
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 11
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 11
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 9
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 8
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 7
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 7
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 7
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 208000009774 Follicular Cyst Diseases 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 6
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N (E,Z)-(1R,2R,3R,5S)-7-(3,5-Dihydroxy-2-((3S)-(3-hydroxy-1-octenyl))cyclopentyl)-5-heptenoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)C=C[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1CC=CCCCC(O)=O PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N 0.000 description 5
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 5
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 5
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 4
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N Estradiol Cypionate Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H](C4=CC=C(O)C=C4CC3)CC[C@@]21C)C(=O)CCC1CCCC1 UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N 0.000 description 3
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 3
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 3
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 108010066058 beta Subunit Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 3
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 3
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 229960005416 estradiol cypionate Drugs 0.000 description 3
- 244000144992 flock Species 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- OKHAOBQKCCIRLO-IBVJIVQJSA-N melengestrol Chemical compound C1=C(C)C2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC(=C)[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 OKHAOBQKCCIRLO-IBVJIVQJSA-N 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 3
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 3
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 108010043461 Deep Vent DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 2
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800000477 Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 108700027921 interferon tau Proteins 0.000 description 2
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000624 ovulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 2
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 101150116497 sacm1l gene Proteins 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BGKHCLZFGPIKKU-UHFFFAOYSA-N (13E,15S)-15-hydroxy-9-oxo-prosta-10,13-dienoic acid Natural products CCCCCC(O)C=CC1C=CC(=O)C1CCCCCCC(O)=O BGKHCLZFGPIKKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 244000105975 Antidesma platyphyllum Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 101000692466 Bos taurus Prostaglandin F synthase 2 Proteins 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241001398967 Colonia Species 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000282819 Giraffa Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000956004 Homo sapiens Vitamin D-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 102000003864 Human Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010082302 Human Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 208000035752 Live birth Diseases 0.000 description 1
- YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N Melatonin Natural products COC1=CC=C2N(C(C)=O)C=C(CCN)C2=C1 YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 244000028344 Primula vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000016311 Primula vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000003142 Retained Placenta Diseases 0.000 description 1
- 206010038758 Retained placenta or membranes Diseases 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- PQKRYXHYWWQULJ-JMKYFRMNSA-N [(8r,9s,10r,13s,14s,17s)-13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl] 3-(4-hexoxyphenyl)propanoate Chemical compound C1=CC(OCCCCCC)=CC=C1CCC(=O)O[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@@H]3[C@H]4CCC(=O)C=C4CC[C@H]3[C@@H]2CC1 PQKRYXHYWWQULJ-JMKYFRMNSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002521 anti-luteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013377 clone selection method Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013267 controlled drug release Methods 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008011 embryonic death Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 229940032383 estrumate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 235000009424 haa Nutrition 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 231100000508 hormonal effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 102000051433 human GC Human genes 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N ketorolac tromethamine Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004140 ketosis Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 229940090213 lutalyse Drugs 0.000 description 1
- 210000002596 lutein cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029849 luteinization Effects 0.000 description 1
- 230000029860 luteolysis Effects 0.000 description 1
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000017346 meiosis I Effects 0.000 description 1
- 229960003987 melatonin Drugs 0.000 description 1
- DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N melatonin Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(CCNC(C)=O)C2=C1 DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004805 melengestrol Drugs 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- BYNHBQROLKAEDQ-CNDPCGPLSA-N methyl 7-[(1s,2s,3s,5r)-3,5-dihydroxy-2-[(e,3s)-3-hydroxy-4-phenoxybut-1-enyl]cyclopentyl]hepta-4,5-dienoate Chemical compound COC(=O)CCC=C=CC[C@@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@H]1\C=C\[C@H](O)COC1=CC=CC=C1 BYNHBQROLKAEDQ-CNDPCGPLSA-N 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000006259 progesterone secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000013812 regulation of steroid biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000031070 response to heat Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- IFEJLMHZNQJGQU-KXXGZHCCSA-M sodium;(z)-7-[(1r,2r,3r,5s)-2-[(e,3r)-4-(3-chlorophenoxy)-3-hydroxybut-1-enyl]-3,5-dihydroxycyclopentyl]hept-5-enoate Chemical compound [Na+].C([C@H](O)\C=C\[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)C[C@H]1O)C\C=C/CCCC([O-])=O)OC1=CC=CC(Cl)=C1 IFEJLMHZNQJGQU-KXXGZHCCSA-M 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000037359 steroid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Utilización de una cantidad eficaz de hormona luteinizante purificada o recombinante en la fabricación de un fármaco para mantener uno o varios embarazos mediante la inducción de la formación de cuerpo lúteo accesorio en uno o varios mamíferos, caracterizada porque dicho fármaco se administra a dichos mamíferos el día o entre el Día 2 y el Día 10 después de haber realizado la inseminación en dichos mamíferos, caracterizada porque dicha cantidad eficaz de hormona luteinizante purificada o recombinante se sitúa entre 10 microgramos y 25 miligramos.
Description
LH para su uso en el mantenimiento de uno o más
embarazos mediante la inducción de la formación de un cuerpo lúteo
accesorio.
Existen más de nueve millones de vacas lecheras
en Estados Unidos, más de un millón en Canadá y más de cincuenta
millones en el mundo. La industria lechera es extremadamente
competitiva y la capacidad de una granja para mantener gestaciones
después de la inseminación es crítica para la rentabilidad del
productor. Se estima que el coste de una vaca no preñada es de
aproximadamente cinco dólares al día. Se estima además que las
inseminaciones actuales resultan en alrededor de un treinta a un
cuarenta por ciento de vacas preñadas el día 45 y de entre estas
vacas, del noventa al noventa y cinco por ciento da a luz a terneros
al final del período de gestación de 283 días. La eficacia
reproductora en las vacas lecheras ha ido disminuyendo
constantemente durante un período de tiempo prolongado. La magnitud
y la firmeza de esta tendencia son de gran importancia para la
industria lechera y alcanzan una disminución constante de
aproximadamente el uno por ciento en los índices de concepción al
primer servicio al año durante los últimos diez años. El impacto de
este cambio en la productividad no se ha evidenciado fácilmente,
debido a que la producción de leche de vaca individual ha aumentado
de un veinte por ciento durante el mismo período. A la larga, la
industria lechera no puede permitirse continuar con el índice actual
de disminución del rendimiento reproductor.
La fuente de ingresos primarios en la industria
lechera es la producción de leche. El progreso en genética y gestión
de vacas lecheras ha conducido a incrementos notables en la
producción de leche durante las últimas varias décadas, con un
veinte por ciento de aumento en la producción por vaca en los
últimos diez años solo (USDA National Agricultural Statistics
Service, http//www.usda.gov/nass). Con el fin de mantener una alta
productividad del rebaño, sin embargo, las vacas deben estar
preñadas y dar a luz a un ternero para que se renueve el ciclo de
lactancia. Además, se deben producir suficientes números de novillas
para sustituir las vacas más viejas. Por lo tanto, la futura
productividad de la industria lechera depende en gran parte del
mantenimiento de la fertilidad y de la reproducción.
Durante el mismo tiempo en el que ha aumentado
la producción lechera por vaca, sin embargo, la eficacia
reproductora de las vacas lecheras ha disminuido constantemente. Los
rebaños lecheros de Colorado se sitúan entre los más productivos de
la nación, y el estado figura actualmente en segundo lugar en la
producción media anual por vaca (USDA National Agricultural
Statistics Service, http//www.usda.gov/nass). La industria lechera
de Colorado es típica de la tendencia nacional en la disminución de
fertilidad de las vacas. Desde 1992 hasta ahora, mientras la
producción lechera ha aumentado de 21.000 a 24.000 libras/vaca/año,
el promedio de días abiertos (días hasta la concepción) ha aumentado
de 130 a 173 días. El índice de concepción al primer servicio para
los rebaños de Colorado se ha reducido del 51% al 37%, y el índice
de servicios por concepción ha ascendido de 2 a 2,8 durante los
últimos 10 años (datos procedentes de Dairy Herd Improvement
Association, www.dhiprovo.com).
La reducción de la eficacia reproductora de
vacas lecheras se ha observado por todos Estados Unidos, y otras
partes del mundo donde la producción lechera ha ido aumentando
(Lucy, M.C., "Reproductive loss in high-producing
dairy cattle: Where will it end?", J. Dairy Sci.,
84:1277-1293, 2001; Roche, J.F. y col.,
"Reproductive management of postpartum cows", Anim. Reprod.
Sci., 60-61:703-712, 2000; Royal,
M.D. y col., "Declining fertility in dairy cattle: changes in
traditional and endocrine parameters of fertility", Anim. Sci.,
70:487-502, 2000; y Macmillan, K.L. y col., "The
effects of lactation on the fertility of dairy cows" Aust. Vet.
J., 73:141-147, 1996). La fuerte asociación temporal
entre la producción lechera en aumento y la fertilidad en
disminución no proporciona una causa conocida del fenómeno. Aunque
la relación entre la producción lechera y la fertilidad parece ser
antagónica (Dematawewa, C.M., y P.J. Berger, "Genetic and
phenotypic parameters for 305 day yield, fertility, and survival in
Holsteins", J. Dairy Sci., 81:2700-2709, 1998; y
Hansen, L.B., "Consequences of selection for milk yield from a
geneticist's viewpoint", J. Dairy Sci.,
83:1145-1150, 2000), algunos estudios demuestran un
efecto neutro de la producción lechera de por sí (Grohn, Y.T. y P.J.
Rajala-Schultz, "Epidemiology of reproductive
performance in dairy cows", Anim. Repro. Sci.,
60-61:605-614, 2000), y otros
estudios muestran que rebaños de mayor producción tienen mejor
rendimiento reproductor que rebaños de menor producción (Nebel, R.L.
y M.L. McGilliard, "Interactions of high milk yield and
reproductive performance in dairy cows", J. Dairy Sci.,
76:3257-3268, 1993; y Stevenson, J.S., "Can you
have good reproduction and high milk yield?", Hoard's Dairyman,
145:202-203, 1999). Numerosas características de
vacas de alta producción pueden influir negativamente en la
fertilidad, incluidos el equilibrio de energía negativa y eventos de
enfermedades tales como placenta retenida, cetosis, ovario cístico,
y mastitis (Lucy 2001, supra; Grohn 2000, supra; y
Staples, C.R. y col., "Relationship between ovarian activity and
energy status during the early postpartum period of high producing
dairy cows", J. Dairy Sci., 73:938-947, 1990).
Una tendencia destacada en la industria lechera de Estados Unidos es
el número reducido de granjas lecheras, el aumento constante del
tamaño de los rebaños y el desplazamiento de la producción lechera
hacia los estados del oeste (USDA National Agricultural Statistics
Service, http//www.usda.gov/nass). El mayor tamaño de los rebaños
puede contribuir al rendimiento reproductor reducido debido a los
cambios asociados en mano de obra lechera y gestión de las vacas,
resultando en trabajadores poco formados o con demasiado trabajo
para identificar un comportamiento estral, realizar inseminación
artificial, llevar a cabo programas de sincronización estral, e
identificar y tratar vacas enfermas (Lucy 2001, supra). El
estrés térmico, que ocurre durante la mayor parte del año en rebaños
lecheros del oeste y suroeste de Estados Unidos, tiene un impacto
negativo significativo sobre la fertilidad del ganado (Wolfenson, D.
y col., "Impaired reproduction in heat-stressed
cattle: basic and applied aspects", Anim. Reprod. Sci.,
60-61:535-547, 2000).
Estudios recientes con la detección del embarazo
por ultrasonidos demuestran pérdidas embrionarias de al menos un 20%
entre los 28 y 60 días de embarazo (Pursley, J.R. y col., "Effect
of time of artificial insemination on pregnancy rates, calving
rates, pregnancy loss, and gender ratio after synchronization of
ovulation in lactating dairy cows", J. Dairy Sci.,
81:2139-2144, 1998; y Vasconcelos, J.L. y col.,
"Pregnancy rate, pregnancy loss, and response to heat stress after
AI at 2 different times from ovulation in dairy cows", Biol.
Reprod., 56 (Supp. 1):140, 1997), y existen probablemente pérdidas
aún más elevadas antes de los 28 días que no se detectan mediante
examen por ultrasonidos (Lucy 2001, supra). Los datos
sugieren que las vacas lecheras modernas no logran mantener el
embarazo debido al ambiente uterino subóptimo (Gustafsson, H. y K.
Larsson, "Embryonic mortality in heifers after artificial
insemination and embryo transfer: differences between virgin and
repeat breeder heifers", Res. Vet. Sci.,
39:271-274, 1985). Aunque existan muchos factores
posibles que podrían ser responsables de las pérdidas embrionarias,
una causa potencial es la baja concentración de progesterona en
sangre.
Se necesita la progesterona para mantener el
embarazo en el ganado, y bajas concentraciones de progesterona se
asocian a la infertilidad. Las concentraciones de progesterona en
sangre están influidas por los índices de secreción y el
metabolismo/eliminación. Existen hechos de que las vacas lecheras
modernas mantienen concentraciones más bajas de progesterona en
sangre que las que se midieron en el ganado hace varias décadas
(Lucy, M.C. y col., "Reproductive endocrinology of lactating dairy
cows selected for increased milk production", J. Anim. Sci., 76
(Suppl. 1):296, 1998). Los cuerpos lúteos más grandes secretan más
progesterona y tienen un efecto positivo sobre el reconocimiento del
embarazo y velocidades de embarazo, pero se ha probado que las vacas
lecheras tienen cuerpos lúteos más pequeños de lo deseable en
algunas circunstancias (Lucy 2001, supra; Vasconcelos, J.L.M.
y col., "Reduction in size of the ovulatory follicle reduces
subsequent luteal size and pregnancy rate", Theriogenology,
56:307-314, 2001). El hígado es el sitio esencial
del metabolismo de la progesterona. Estudios recientes muestran que
la toma aumentada de alimentos incrementa el flujo de sangre en el
hígado y aumenta la velocidad de eliminación de la progesterona,
reduciendo así las concentraciones de progesterona en suero
(Sangsritavong, S. y col., "Liver blood flow and steroid
metabolism are increased by both acute feeding and hypertrophy of
the digestive tract", J. Anim. Sci., 78 (Suppl. 1) 221, 2000; y
Wiltbank, M.C. y col., "Novel effects of nutrition on reproduction
in lactating dairy cows", J. Dairy Sci., 84 (Suppl. 1):84,
2001).
Poca progesterona en suero durante la fase
luteal del ciclo estral estaría asociada con el bajo índice de
concepción al primer servicio. Bajas concentraciones de progesterona
pueden resultar de una secreción inadecuada, o alternativamente, de
altos niveles de metabolismo/eliminación, aun cuando la inseminación
ha producido un embrión potencialmente viable. Poca progesterona
permitiría la generación de prostaglandina por el endometrio uterino
alrededor del día 16 del ciclo estral, resultando en luteólisis e
inducción de la ovulación, por lo tanto la muerte embrionaria y el
hecho de no lograr mantener el embarazo (Binelli, M. y col.,
"Antiluteolytic strategies to improve fertility in cattle",
Theriogenology, 56:1451-1463, 2001).
Binelli y col., 2001, supra, revisan las
estrategias antilueolíticas para mejorar la fertilidad en el
ganado.
En vacas, el ciclo estral es de aproximadamente
21 días. Para determinar cuándo una vaca en su ciclo está lista para
la reproducción, se puede observar el estro comportamental de la
vaca. Alternativamente, se puede inducir o forzar una vaca al estro
con terapias hormonales eficaces. El estro de todo un rebaño se
puede sincronizar (Patentes de Estados Unidos Nº 3.892.855 publicada
a 1 de julio de 1975 y Nº 4.610.687 publicada a 9 de septiembre de
1986; Solicitud de Patente de Estados Unidos Nº 60/380.042; Wilson,
T.W., "Estrous Synchronization for Beef Cattle", (junio de
2003, Bulletin 1232, the University of Georgia College of
Agricultural and Environmental Sciences and the U.S. Department of
Agriculture Cooperating). La sincronización del estro, o
preferentemente la sincronización de la ovulación, se utiliza en
programas de reproducción por inseminación artificial a tiempo fijo
(TAI). Los programas de reproducción por TAI implican la
sincronización estral precisa, que permite la reproducción a tiempo
fijo sin monitorear el estro comportamental. Los ejemplos de métodos
para forzar el estro incluyen la patente de Estados Unidos Nº
5.589.457 (publicada a 31 de diciembre de 1996), Ovsynch (Pharmacia
Animal Health, Peapack, NJ), Cosynch, Select Synch, Modified Select
Synch, MGA/PGF, y Syncro-Mate-B.
Dichos métodos emplean típicamente hormonas tales como las
prostaglandinas, por ejemplo PGF2\alpha (Lutalyse®, Pharmacia
Upjohn, Peapack, NJ; Bovilene®, Syntex; Animal Health, Des Moines,
Iowa; y Estrumate® Haver Lockhart, Shawnee, Kansas), y la hormona
liberadora de gonadotropina (GnRH). Ovsynch implica una inyección de
GnRH seguida de una inyección de prostaglandina una semana más
tarde, seguida de una segunda inyección de GnRH 48 horas más tarde.
La inseminación se realiza entonces idealmente a las
12-18 horas, preferentemente alrededor de 16 horas,
después de la segunda inyección de GnRH. Ovsynch es eficaz al máximo
nivel cuando se lleva a cabo entre los Días 18-20 de
un ciclo estral bovino de 20 días (Thatcher, W.W. y col., (2000)
"New Strategies to Increase Pregnancy Rates"
www.naab-css.org/education/Thatcher.html). Se
puede utilizar Presynch (Pharmacia Animal Health, Peapack, NJ) para
sincronizar novillas antes de poner en práctica Ovsynch. Ovsynch es
eficaz al máximo nivel cuando se aplica entre los Días
18-20 de un ciclo estral bovino de 20 días (estudios
muestran que es mejor empezar entre los días 5 y 12). (Moreira, F. y
col., (2000) "Effect of day of the estrous cycle at the initiation
of a timed insemination protocol on reproductive responses in dairy
heifers", J. Anim. Sci. 78:1568-1576, 2000;
Vasconcelos JLM, y col., (1999) "Synchronization rate, size of the
ovulatory follicle, and pregnancy rate after synchronization of
ovulation beginning on different days of the estrous cycle in
lactating dairy cows", Theriogenology 52:
1067-1078, 1999). Presynch implica dos inyecciones
de prostaglandina. Algunos de los métodos mencionados anteriormente
se utilizan también en vacas que no están con el ciclo para inducir
el ciclo, tal como en vacas lecheras lactantes. Sin embargo, estos
protocolos no inducen la ciclicidad, sólo lo hace el cebado por
progesterona. El único programa de sincronización que induce
realmente la ciclicidad en vacas lactantes está utilizando un
dispositivo de liberación interna controlada de drogas (CIDR) que
libera la progesterona o el acetato de melengestrol (MGA), que es
ilegal en vacas lecheras lactantes). Después de la sincronización
estral precisa, los animales no necesitan ser monitoreados en su
estro comportamental y se pueden reproducir por cita. Algunos
animales pueden necesitar presincronización estral antes de la
sincronización estral. El acetato de melengesterol (MGATM) en la
alimentación (Imwalle, D.B. y col., (1998) "Effects of
melengesterol acetate on onset of puberty, follicular growth, and
patterns of luteinizing hormone secretion in beef heifers" Biol.
Repro. 58:1432-1436) o implantes (Publicación de
patente de Estados Unidos Nº 2001/0041697, publicada a 15 de
noviembre de 2001) se puede utilizar para presincronizar el estro en
novillas. Resynch es un programa por medio del cual se sincronizan y
reproducen los animales, y luego estos animales que son determinados
como abiertos (no embarazados) se vuelven a sincronizar y a
reproducir.
Una investigación previa ha mostrado resultados
contradictorios sobre los ciclos reproductores y velocidades de
concepción de las vacas que reciben hCG (Eduvie and Seguin (1982)
Theriogenology 17:415-422; Helmer and Britt (1986)
Theriogenology 26:683-695; Sianangama and
Rajamahendran (1992) Theriogenolgy 38:85-96; Diaz y
col., (1998) J. Anim. Sci. 76:1929-1936; Sianangama
and Rajamahendran (1996) Theriogenology 45:977-990;
Schmitt y col., (1996) J. Anim. Sci. 74:1074-1083; y
Schmitt y col., (1996) J. Anim. Sci.
74:1915-1929).
Thatcher y col., (2001 Theriogenology
55:75-89) describen los efectos de tratamientos
hormonales sobre el rendimiento reproductor del ganado. Los
tratamientos hormonales incluyen la administración de somatotrofina
bovina (bST) y hCG. D'Occhio y col., (2000 Anim. Reprod. Sci.
60-61:433-442) describen varias
estrategias para la gestión del vacuno por medio de implantes de
agonistas de la GnRH. De Rensis y col., (2002 Theriogenology
58(9):1675-1687) describen el efecto sobre
las vacas lecheras de la administración de GnRH o hCG antes de la
inseminación artificial. Martinez y col., (1999 Anim. Reprod. Sci.
57:23-33) describen la capacidad de la hormona
luteinizante porcina (LH) y de la hormona liberadora de
gonadotropina (GnRH) para inducir emergencia de la onda folicular en
novillas bovinas los Días 3, 6 y 9 del ciclo estral, después de la
ovulación (Día 0), sin inseminación. Santos y col., (2001 J. Animal
Science 79:2881-2894) describen el efecto sobre el
rendimiento reproductor de la administración intramuscular de 3.300
IU de gonadotropina coriónica humana (hCG) a vacas lecheras
altamente productoras el Día 5 después de la inseminación
artificial. Lee y col., (1983 Am. J. Vet. Res.
44(11):2160-2163) describen el efecto sobre
vacas lecheras de la administración de GnRH en el momento de la
inseminación artificial (AI). Las patentes de Estados Unidos Nº
5.792.785 (publicada a 11 de agosto de 1998) y 6.403.631 (publicada
a 11 de junio de 2002) describen métodos y composiciones para
administrar melatonina antes y después de la inseminación para
mejorar el éxito de embarazo en un animal. Chagas e Silva y col.,
(2002 Theriogenology 58(1):51-59) describen
perfiles de progesterona plasmática después de la transferencia
embrionaria en ganado lechero. Weems y col., (1998 Prostaglandins
and other Lipid Mediators) describen los efectos de las hormonas
sobre la secreción de la progesterona por el cuerpo lúteo (CL)
procedente de vacas embarazadas y no embarazadas. La patente de
Estados Unidos Nº 4.780.451 (publicada a 25 de octubre de 1988)
describe composiciones y métodos que utilizan la LH y la hormona
folículo estimulante (FSH) para producir la superovulación en el
ganado. Farin y col., (1988 Biol. Reprod.
38:413-421) describen el efecto sobre el peso luteal
ovino de la administración intravenosa de 300 IU de hCG los Días 5 y
7,5 del ciclo estral, sin inseminación. Hoyer y Niswender (1985 Can.
J. Physiol. Pharmacol. 63(3):240-248)
describen la regulación de la esteroidogénesis en células luteales
ovinas. Juengel y Niswender (1999, J. Reprod. Fértil. Suppl.
54:193-205) describen la regulación molecular de la
progesterona luteal en rumiantes domésticos. La patente de Estados
Unidos Nº 5.589.457 (publicada a 31 de diciembre de 1996) describe
métodos para sincronizar la ovulación en el ganado por medio de la
GnRH, LH y/o hCG y PGF2\alpha.
Las gonadotropinas forman una familia de
hormonas glicoproteícas estructuralmente relacionadas. Los elementos
incluyen la gonadotropina coriónica (CG), la hormona folículo
estimulante (FSH), la hormona luteinizante (LH), también conocida
como lutropina y la hormona estimulante del tiroides(TSH).
FSH, LH y TSH están presentes en la mayoría de las especies
vertebradas y son sintetizadas por la glándula pituitaria. Se ha
encontrado la CG solamente en primates, incluidos los humanos, y en
caballos, y es sintetizada por los tejidos placentarios. Las
gonadotropinas son heterodímeros de dos subunidades, \alpha y
\beta, que están asociadas con enlaces no covalentes. Dentro de
una especie, la subunidad \alpha es esencialmente idéntica a cada
elemento de la familia de gonadotropinas. Las subunidades \beta
son diferentes para cada elemento, pero son similares en su
estructura. La subunidad \beta de hCG es sustancialmente más
grande que las otras subunidades \beta, en lo que contiene 34
aminoácidos adicionales en el extremo terminal C de la proteína.
Los efectos de la LH dependen del sexo del
organismo. En hembras sexualmente maduras, la LH estimula el
folículo para que secrete estrógenos en la primera mitad del ciclo
menstrual. Una sobrecarga de LH desencadena la finalización de la
meiosis I del huevo y la liberación del huevo (ovulación) en la
mitad del ciclo estimula el folículo ahora vacío para que se
desarrolle en el cuerpo lúteo, que secreta la progesterona durante
la segunda mitad del ciclo menstrual. En machos, la LH actúa en las
células intersticiales de los testículos estimulándolos para que
sinteticen y secreten la hormona sexual masculina, la testosterona.
La LH en machos es conocida también como hormona estimulante de las
células intersticiales.
La GB 1274492 describe un método para aumentar
el embarazo y el porcentaje de nacimientos vivos en el que se
administra gonadotropina en las 24 horas que siguen el inicio del
estro, siendo inseminada la vaca 24 horas después de entrar en
estro.
La producción de LH recombinante bovina se
describe en WO 90/02757 (publicada a 22 de marzo de 1990), la
patente de Estados Unidos Nº 6.455.282 (publicada a 24 de septiembre
de 2002); la patente de Estados Unidos Nº 5.639.639 (publicada a 17
de junio de 1997), la patente de Estados Unidos Nº 5.767.251
(publicada a 16 de junio de 1998), Nilson (1987) J. Reprod. Fértil.
Suppl. 34:227-36, Boime y col., (1992) Seminars in
Reprod. Endocrin. 10:45-50, y Kaetzel (1985) PNAS
USA 82:7280-7283. Se describe un proceso para la
purificación de la LH recombinante en WO 01/62774 (publicada a 30 de
agosto de 2001). La patente de Estados Unidos Nº 5.929.028
(publicada a 27 de julio de 1999) describe gonadotropina líquida que
contiene formulaciones que pueden incluir LH. Otieno y col., (2002,
Reproduction 123(I):155-162) describe la
expresión de los genes de LH en cigotos bovinos.
Existe la necesidad en la técnica de una
terapéutica segura para mantener el embarazo de vacas
post-inseminadas.
Todas las publicaciones y solicitudes de
patentes mencionadas aquí se incorporan como referencia en su
totalidad hasta tal punto que no sean incoherentes con la presente
divulgación. La cita de los documentos anteriores no pretende ser
una admisión de que uno cualquiera de los anteriores sea una técnica
anterior pertinente. Todas las declaraciones sobre la fecha o la
representación sobre el contenido de estos documentos se basa en la
caracterización subjetiva de la información de la que dispone el
solicitante, y no constituye admisión alguna de la exactitud de las
fechas o contenidos de estos documentos.
De acuerdo con la presente invención, se
proporciona la utilización expuesta en la reivindicación 1.
El embarazo se mantiene mediante la
administración de cantidades eficaces de la hormona luteinizante
(LH). La LH se puede utilizar sola o en combinación con la
gonadotropina coriónica (CG) o en combinación con la hormona del
crecimiento (GH) o la hormona folículo estimulante (FSH). Las
hormonas se administran alrededor del Día 4 hasta alrededor del Día
7 después de la inseminación. Las cantidades eficaces de LH oscilan
entre aproximadamente 10 microgramos hasta aproximadamente 25
miligramos y las de CG oscilan entre alrededor de 100 IU (unidades
internacionales) y alrededor de 2000 IU. Los mamíferos tratables con
las utilizaciones de esta invención incluyen los ungulados y
mamíferos relacionados, incluidos los bovinos. Los kits
proporcionados por esta divulgación incluyen cantidades eficaces de
una o varias hormonas, un dispositivo para la administración de
la(s) hormona(s) e instrucciones.
Esta divulgación proporciona asimismo un método
para sincronizar la ovulación en un rebaño de animales hembras,
comprendiendo dicho método: la administración de la hormona
luteinizante a los animales de dicho rebaño, preferentemente
mediante inyección intramuscular. La sincronización de la ovulación
puede sincronizar el estro; sin embargo, los animales pueden
reproducirse, por ejemplo, mediante inseminación artificial, sin que
se observen señales de estro. Preferentemente, la hormona
luteinizante se utiliza en un método de sincronización del estro
conocido en la técnica en lugar de la hormona de liberación de
gonadotropina (GnRH). En protocolos típicos de sincronización, se
utilizan aproximadamente 100 mg de gonadotropina. Se describe una
cantidad de métodos de sincronización del estro conocidos en la
técnica en la Descripción Detallada al respecto. Preferentemente, la
cantidad de hormona luteinizante administrada se sitúa entre
aproximadamente 2 mg y aproximadamente 10 mg. Estos métodos inducen
la ovulación de manera más fiable que los métodos de sincronización
del estro que utilizan la GnRH; sin embargo, se puede utilizar
también una combinación de hormona luteinizante y de GnRH, por
ejemplo, en cualquier relación de hormona luteinizante con respecto
a la GnRH entre aproximadamente 99:1 y 1:99, preferentemente la
relación empleada se sitúa entre aproximadamente 25:75 y
aproximadamente 75:25.
Algunos métodos de sincronización del estro
implican la administración de prostaglandina a dichos animales en
una cantidad situada entre aproximadamente 25 mg y aproximadamente
35 mg después de la administración de GnRH. En estos métodos, se
puede utilizar la hormona luteinizante (o una mezcla de hormona
luteinizante y GnRH) en lugar de GnRH, en las dosificaciones
descritas en el párrafo anterior. Otros métodos de sincronización
del estro implican la administración de GnRH, luego la
prostaglandina, y luego GnRH adicional; y de nuevo, en estos métodos
se puede utilizar la hormona luteinizante (o una mezcla de hormona
luteinizante y GnRH) en lugar de GnRH en las dosificaciones
descritas en el párrafo anterior. La programación de administración
de hormona luteinizante y prostaglandina en estos métodos de
sincronización de la ovulación es tal como se describe en la técnica
para la programación de administración de GnRH y prostaglandina en
los métodos de sincronización del estro. Preferentemente, se
administra la prostaglandina entre aproximadamente 6 y
aproximadamente 8 días, y preferentemente alrededor de 7 días
después de la administración de la primera hormona luteinizante, es
decir, un tiempo suficiente para provocar la regresión del folículo
dominante. Preferentemente, se administra una segunda dosis de
hormona luteinizante entre aproximadamente 40 y aproximadamente 60
horas, y preferentemente alrededor de 48 horas después de la
administración de la prostaglandina, es decir, un tiempo suficiente
para permitir la suficiente maduración del folículo para producir un
ovario de buena calidad, pero no tan largo como para dejar que el
animal ovule espontáneamente (ya que la reproducción debería hacerse
antes de la ovulación).
Los métodos de sincronización de esta
divulgación pueden comprender asimismo la reproducción de los
animales por medios conocidos en la técnica, preferentemente
mediante inseminación artificial. La reproducción puede realizarse
inmediatamente después de la administración de la dosis final de
hormona, es decir, dentro de un período de un día, y preferentemente
en aproximadamente 16 horas, de modo que la reproducción puede
realizarse antes de que tenga lugar la ovulación.
Los métodos de sincronización de la ovulación de
esta divulgación pueden aplicarse a animales seleccionados del grupo
compuesto de bovinos, ovejas, cabras, yacs, búfalos de agua,
bisontes, antílopes, gacelas, ciervos canadienses, renos, alces,
muflones, jirafas, y camélidos incluidos los camellos y dromedarios,
llamas, cerdos, caballos, alpacas, y vicuñas. Preferentemente, el
animal es un bovino.
Los métodos de sincronización de la ovulación de
esta divulgación se pueden utilizar en combinación con los métodos
de presincronización conocidos en la técnica.
Esta divulgación proporciona también un método
para tratar el quiste folicular en un mamífero que comprende la
administración a un mamífero con diagnóstico de quiste folicular de
una cantidad eficaz de hormona luteinizante. La hormona luteinizante
se administra preferentemente de forma intramuscular, y en una
cantidad situada entre aproximadamente 2 y aproximadamente 10 mg. De
nuevo, se puede aplicar el tratamiento a un mamífero seleccionado
del grupo compuesto de bovinos, ovejas, cabras, yacs, búfalos de
agua, bisontes, antílopes, gacelas, ciervos canadienses, renos,
alces, muflones, jirafas, y camélidos incluidos los camellos y
dromedarios, llamas, cerdos, caballos, alpacas, y vicuñas,
preferentemente bovinos.
La hormona luteinizante recombinante se puede
utilizar en una cualquiera de las utilizaciones de esta invención.
La hormona luteinizante recombinante se puede elaborar por cualquier
medio conocido en la técnica, y se puede elaborar mediante nuevos
métodos descritos aquí. La hormona luteinizante recombinante es más
eficaz a dosis más bajas que la hormona luteinizante purificada a
partir de las glándulas pituitarias debido a que está glicosilada
adecuadamente de forma más uniforme. La cantidad de glicosilación
depende de la etapa de producción de la hormona luteinizante en la
glándula pituitaria a partir de la cual se está cosechando la
hormona. Típicamente, la hormona se cosecha de las glándulas
pituitarias en todas las etapas de producción hormonal. La hormona
luteinizante que se encuentra subglicosilada tiene una vida media
más corta que la hormona luteinizante que está glicosilada
adecuadamente. Por lo tanto, la hormona luteinizante recombinante
que está glicosilada adecuadamente se puede utilizar en
dosificaciones más bajas que la hormona luteinizante aislada de
origen natural.
Un método para producir la hormona luteinizante
recombinante comprende la expresión de ADN que codifica para dicha
hormona luteinizante en células de insectos. La LH recombinante se
puede producir también mediante la utilización de animales
transgénicos no humanos, tal como se conoce en la técnica. Otro
método útil para producir LH recombinante comprende la utilización
de un vector en el que las subunidades alfa y beta de las hormonas
luteinizantes se fusionan bajo el control de un único promotor. Los
métodos para elaborar LH recombinante pueden incluir "métodos de
expresión dual", lo que significa que las subunidades alfa y beta
se expresan a partir del mismo plásmido o ADN viral. En este caso,
se encuentran bajo el control de promotores individuales en la misma
molécula de ADN. Los métodos pueden utilizar la "coexpresión",
lo que significa que las subunidades alfa y beta son codificadas por
moléculas individuales de ADN (teniendo cada una un gen de
resistencia a antibióticos diferente). Para realizar la coexpresión,
se introducen dos plásmidos individuales en una línea celular (de
mamífero o de insecto). Se trata la línea celular con dos
antibióticos para seleccionar una línea celular que contenga ambos
plásmidos. Otro método para elaborar LH recombinante comprende la
expresión de ADN que codifica formas de una sola cadena de LH, donde
las subunidades alfa y beta están enlazadas de forma covalente.
Esta divulgación proporciona asimismo un
dispositivo de inyección para administrar una única dosis de hormona
luteinizante recombinante, donde dicha dosis comprende entre
aproximadamente 2 y aproximadamente 10 mg de hormona luteinizante
recombinante. El dispositivo de inyección puede formar parte de un
kit que incluye también dichos componentes como dispositivos de
inyección para administrar dosis únicas de otras hormonas necesarias
para la sincronización de la ovulación, y ensayos del embarazo.
SEQ ID NO:1 es una alfa de LH bovina procedente
del Genbank con Número de Acceso X00050.
SEQ ID NO:2 es una beta de LH bovina procedente
del Genbank con Número de Acceso M10077.
SEQ ID NO:3 es la secuencia de nucleótidos para
la subunidad alfa de LH bovina procedente del Genbank con Número de
Acceso NM_173901.
SEQ ID NO:4 es la secuencia de nucleótidos para
la subunidad beta de LH bovina procedente del Genbank con Número de
Acceso NM_173930.
Tal como se utiliza aquí, "listo para
reproducción" se refiere a un animal que no está preñado. El
animal puede haber sido monitoreado en cuanto al estro y que se le
haya detectado estro. El animal puede haber sido forzado al
estro.
Tal como se utiliza aquí, "vaca" se refiere
a bovinos hembras, incluidas las novillas.
Tal como se utiliza aquí, "primer ciclo
estral" se refiere al ciclo estral después de la inseminación. En
vacas, el primer ciclo estral es aproximadamente 21 días después de
un estro previo.
Tal como se utiliza aquí, "estro" se
refiere al período durante el cual es muy probable que un animal se
preñe.
Tal como se utiliza aquí, "en celo" se
refiere a encontrarse en el momento del estro, cuando un animal es
sexualmente muy receptivo. En vacas, este período dura
aproximadamente 12-18 horas.
Tal como se utiliza aquí, "estro
comportamental" se refiere a la demostración comportamental de
que un animal está en celo, mostrando incluso que se deja
montar.
Tal como se utiliza aquí, "dejarse montar"
se refiere al período durante el cual una vaca es receptiva a un
toro y se quedará parada para la reproducción o se dejará montar
por otras vacas.
Tal como se utiliza aquí, "Día 0" es el día
en el que un animal se encuentra en estro comportamental o el día de
reproducción.
Tal como se utiliza aquí, "estro forzado"
se refiere a métodos conocidos en la técnica para forzar el celo. El
estro forzado puede incluir períodos de espera, como
corresponde.
Tal como se utiliza aquí, "ovulación
forzada" se refiere a inducir la ovulación, generalmente a un día
del tratamiento utilizado para inducir la ovulación.
Tal como se utiliza aquí, "abierto" se
refiere a un animal que no está preñado.
Tal como se utiliza aquí, "con ciclo" se
refiere a un animal que está experimentando un ciclo estral, es
decir que no está preñado.
Tal como se utiliza aquí, "a la espera de
reproducción" se refiere a un momento en el ciclo estral en el
que es muy probable que la reproducción resulte en un embarazo.
Tal como se utiliza aquí, "reproducción" se
refiere a métodos conocidos en la técnica que pertenecen al hecho de
hacer que un animal hembra quede preñado. Dichos métodos incluyen la
inseminación natural y artificial. Los métodos de reproducción
pueden incluir un tiempo de espera después de observar un estro
comportamental o después de forzar el estro. En el ganado, el tiempo
de espera después de observar el estro comportamental es de
12-18 horas. En el ganado, después de forzar el
estro con prostaglandina el Día 17, el tiempo de espera es de
72-80 horas. Después de la última inyección de
hormonas utilizada para forzar la ovulación, la reproducción debería
tener lugar aproximadamente en 24 horas, por ejemplo entre
aproximadamente 0 y aproximadamente 24 horas, y preferentemente
alrededor de 16 horas después de aquella inyección, de modo que la
reproducción se realizará antes de que tenga lugar la ovulación.
Tal como se utiliza aquí, "anticuerpo
específico de" se refiere al anticuerpo que no se une
significativamente a componentes de muestra distintos del componente
deseado.
Tal como se utiliza aquí, "test del
embarazo" se refiere a pruebas del embarazo y/o no embarazo.
Tal como se utiliza aquí, "sangre total" se
refiere a la sangre según se saca. La sangre total contiene una
cantidad sustancial de células.
Tal como se utiliza aquí, "plasma" se
refiere a sangre sin ninguna cantidad sustancial de células. El
plasma contiene factores de coagulación.
Tal como se utiliza aquí, "sincronización del
estro" se refiere a un proceso mediante el cual se fuerza el
estro para un grupo de animales, de modo tal que probablemente cada
animal se encuentre en estro dentro de un abanico de aproximadamente
2-5 días.
Tal como se utiliza aquí, "sincronización de
la ovulación" se refiere a un proceso mediante el cual se fuerza
la ovulación para un grupo de animales, de modo tal que
probablemente cada animal ovule dentro de un abanico de
3-4 días.
Tal como se utiliza aquí, "presincronización
del estro" o "presincronización de la ovulación" se refiere
a un proceso mediante el cual el ciclo estral, a menudo para un
grupo de animales, está bloqueado o forzado en una etapa particular
del ciclo, de modo tal que los procedimientos de sincronización del
estro o de la ovulación que se deben realizar más tarde, tienen más
éxito.
Tal como se utiliza aquí, "entorno de la
vaca" se refiere a un ambiente en el que se encuentra un animal
domesticado, particularmente en contraste con un ambiente de
laboratorio.
Tal como se utiliza aquí, "tiempo del ciclo de
reproducción" se refiere al tiempo entre una reproducción de un
animal y la siguiente reproducción durante el siguiente ciclo estral
del mismo animal.
Tal como se utiliza aquí, "mamífero
embarazado" se refiere a un mamífero que ha sido inseminado y
puede estar embarazado o a una pluralidad de mamíferos inseminados,
de los cuales algunos probablemente estén embarazados.
Tal como se utiliza aquí, "mantener el
embarazo" se refiere a incrementar la probabilidad de que un
animal que ha sido inseminado dé positivo en el embarazo o dé a luz
a un ternero vivo o a incrementar la probabilidad de que una
pluralidad de animales que han sido inseminados den positivo en el
embarazo o den a luz a un ternero vivo.
Tal como se utiliza aquí, "cantidad eficaz"
se refiere a una cantidad de lo que es eficaz para producir el
resultado deseado.
Tal como se utiliza aquí, "administración"
se refiere a cualquier método de administración conocido en la
técnica que produzca aquel resultado deseado. Los ejemplos de
administración incluyen pero no se limitan a inyecciones
subcutáneas, intramusculares e intravenosas.
Tal como se utiliza aquí, "aproximadamente un
98% puro" se refiere a la pureza según se mide mediante cualquier
método conocido en la técnica, incluido pero no limitado a la
electroforesis de proteínas.
Tal como se utiliza aquí, "inseminación" se
refiere a introducir semen mediante cualquier método conocido en la
técnica, incluido pero no limitado a la inseminación artificial y
natural.
Tal como se utiliza aquí, "incrementar la
probabilidad de concepción" se refiere a incrementar la
probabilidad de concepción detectable. Por ejemplo, la concepción se
puede detectar en bovinos tan pronto como aproximadamente el Día 15
después de la inseminación mediante la presencia de proteínas
inducidas por interferón-tau.
Tal como se utiliza aquí, "reducción de la
probabilidad de pérdida embrionaria" se refiere a reducir la
posibilidad de que un mamífero inseminado dé negativo al embarazo.
Tal como se utiliza aquí, "reducción del porcentaje de pérdida
embrionaria" con respecto a una pluralidad de mamíferos que han
sido inseminados, se refiere a la reducción del porcentaje de dichos
animales que den negativo al embarazo.
Los sistemas de expresión de baculovirus son
bien conocidos en la técnica (O'Reilly y col., (1994) Baculovirus
Expresión Vectors: A Laboratory Manual, Oxford University
Press).
Existen muchas ventajas de utilización del
baculovirus para la expresión heteróloga de genes. Se expresa bien
el ADNc heterólogo. El procesamiento transcripcional adecuado de
genes con intrones tiene lugar pero la expresión es menos eficaz.
Como con otros sistemas de expresión eucarióticas, la expresión del
baculovirus de los genes heterólogos permite el plegamiento,
modificación post-translacional y oligomerización en
formas que son idénticas a menudo a las que tienen lugar en células
de mamíferos. El entorno citoplásmico de insectos permite el
plegamiento adecuado y la formación de enlaces S-S,
a diferencia del ambiente reductor del citoplasma de E. coli.
Se ha reportado para muchas proteínas el procesamiento
post-translacional idéntico al de las células de
mamíferos. Estas incluyen la proteólisis adecuada, N y O
glicosilación, acilación, amidación, carboximetilación,
fosforilación y prenilación. Las proteínas pueden ser secretadas a
partir de células o ser dirigidas hacia distintos emplazamientos
subcelulares. Se han expresado proteínas con un solo polipéptido,
diméricas y triméricas en baculovirus. Finalmente, la expresión de
las proteínas heterólogas está bajo el control del promotor
polihedrónico fuerte, permitiendo niveles de expresión de hasta un
30% de la proteína celular total.
Se utilizan comúnmente células de insectos
SF-9, SF-21 y
High-Five para la expresión del baculovirus.
SF-9 y SF-21 son líneas celulares
ováricas procedentes de Spodoptera frugiperda. Se cultivan en
medio de Grace (o similar) suplementado con un 10% de suero de
ternera fetal, lactalbúmina y yeastolato (extracto acuoso de
levadura de panadero). Las células High-Five son
células de huevos procedentes de Trichoplusia ni. Estas
células son menos caras de mantener ya que se pueden cultivar sin
suero de ternera fetal. Se asegura que expresan niveles más altos de
proteínas recombinantes, aunque hemos descubierto que estas
diferencias son mínimas. Las tres líneas celulares se pueden
cultivar a temperatura ambiente (óptima = 25-27ºC) y
no requieren incubadores de CO_{2}. Su tiempo de duplicación es de
18-24 horas. Las proteínas expresadas pueden ser
recuperadas por medio de métodos de purificación de proteínas
conocidos en la técnica, incluida la utilización de la tecnología de
proteínas de fusión, cromatografía de inmunoafinidad y cromatografía
de exclusión por tamaños.
Las construcciones de ADN preparadas para su
introducción en un huésped procariota o eucariota comprenderán
típicamente un sistema de replicación (es decir, un vector)
reconocido por el huésped, incluido el fragmento de ADN pretendido
que codifica el polipéptido deseado, e incluirán preferentemente
también secuencias reguladoras de la iniciación transcripcional y
translacional operativamente unidas al segmento de codificación del
polipéptido. Los sistemas de expresión (vectores de expresión)
pueden incluir, por ejemplo, un origen de replicación o la secuencia
de replicación autónoma (ARS) y secuencias de control de la
expresión, un promotor, un potenciador y sitios de información sobre
procesamiento necesarios, tales como sitios de unión al ribosoma,
sitios de empalme de ARN, sitios de poliadenilación, secuencias
terminadoras transcripcionales, y secuencias estabilizadoras de
ARNm. Cuando sea apropiado, se pueden incluir también péptidos de
señal procedentes de polipéptidos secretados de los mismos o
especies relacionadas,
que permiten que la proteína cruce y/o se aloje en membranas celulares o sean secretadas a partir de la célula.
que permiten que la proteína cruce y/o se aloje en membranas celulares o sean secretadas a partir de la célula.
Un promotor apropiado y otras secuencias del
vector necesarias se seleccionarán para ser funcionales en el
huésped. Ejemplos de combinaciones factibles de líneas celulares y
vectores de expresión se describen en Sambrook y col. (1989
Molecular Cloning, Second edition, Cold Spring Harbor
Laboratory, Plainview, NY; Ausubel y col. (Eds.) (1995) Current
Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley
Interscience, New York; y Metzger y col., (1988) Nature,
334:31-36. Numerosos vectores útiles para la
expresión en bacterias, levadura, hongos, mamíferos, insectos,
plantas u otras células son bien conocidos en la técnica y se pueden
obtener de vendedores tales como Stratagene, New England Biolabs,
Promega Biotech, y demás. Además, la construcción se puede unir a un
gen amplificable (por ejemplo, el gen de la dihidrofolato reductasa
DHFR) para poder realizar múltiples copias del gen. Para el
potenciador apropiado y otras secuencias de control de la expresión,
véase también Enhancers and Eukaryotic Gene Expresión, Cold
Spring Harbor Press, NY (1983). Aunque dichos vectores de expresión
se pueden replicar de forma autónoma, se pueden replicar de forma
menos preferente mediante su inserción en el genoma de la célula
huésped.
Los vectores de expresión y clonación contendrán
probablemente un marcador seleccionable, es decir, un gen que
codifica una proteína necesaria para la supervivencia o cultivo de
una célula huésped transformada con el vector. Aunque dicho gen
marcador puede ser llevado en otra secuencia polinucleotídica
co-introducida en la célula huésped, está contenido
más a menudo en el vector de clonación. Sólo aquellas células
huésped en las que se haya introducido el gen marcador sobrevivirán
y/o se desarrollarán en condiciones selectivas. Los genes de
selección típicos codifican proteínas que (a) confieren resistencia
a los antibióticos u otras sustancias tóxicas, por ejemplo,
ampicilina, neomicina, metotrexato, etc.; (b) complementan las
deficiencias auxotróficas; o (c) suministran nutrientes críticos no
disponibles de medios complejos. La elección del marcador
seleccionable adecuado dependerá de la célula huésped; se conocen en
la técnica marcadores apropiados para diferentes huéspedes.
Las células huésped recombinantes, en el
presente contexto, son aquellas que han sido modificadas
genéticamente para que contengan una molécula de ADN aislada de la
presente invención. Se puede introducir el ADN por cualquier medio
conocido en la técnica que sea adecuado para el tipo particular de
célula, incluidas sin limitación, la transformación, lipofección o
electroporación.
Además, los especialistas en la técnica
reconocerán que pueden tener lugar variaciones alélicas en las
secuencias de ADN, las cuales no cambiarán significativamente la
actividad de las secuencias de aminoácidos de los péptidos que las
secuencias de ADN codifican. Todas dichas secuencias de ADN
equivalentes están incluidas en el alcance de esta invención.
Las técnicas estándar para la clonación,
aislamiento de ADN, amplificación y purificación, para las
reacciones enzimáticas que implican la ADN ligasa, ADN polimerasa,
endonucleasas de restricción y similares, así como varias técnicas
de separación son aquellas que son bien conocidas y comúnmente
empleadas por los especialistas en la técnica. Se describe una
cantidad de técnicas estándar en Sambrook y col., (1989)
Molecular Cloning, Second Edition, Cold Spring Harbor
Laboratory, Plainview, New York; Maniatis y col., (1982)
Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview,
New York; Wu (ed.) (1993) Meth Enzymol. 218, Part I; Wu (ed.) (1979)
Meth. Enzymol. 68; Wu y col., (eds) (1983) Meth. Enzymol. 100 y 101;
Grossman and Moldave (eds.) Meth. Enzymol. 65; Miller (ed.) (1972)
Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor
Laboratory, Cold Spring Harbor, New York; Old and Primrose (1981)
Principles of Gene Manipulation, University of California
Press, Berkley; Schleif and Wensink (1982) Practical Methods in
Molecular Biology; Glover (ed.) (1985) DNA Cloning Vol. I
y II, IRL Press, Oxford, UK; Hames and Higgins (eds.) (1985)
Nucleic Acid Hybridization, IRL Press, Oxford, UK; Setlow and
Hollaender (1979) Genetic Engineering: Principles and
Methods, Vols. 1-4, Plenum Press, New York; y
Ausubel y col., (1992) Current Protocols in Molecular
Biology, Greene/Wiley, New York, NY. Las abreviaturas y la
nomenclatura, cuando se emplean, se consideran estándar en el campo
y se utilizan comúnmente en revistas profesionales tales como las
que se mencionan aquí.
Se dice que un polinucleótido codifica un
polipéptido si, en su estado nativo o cuando es manipulado mediante
métodos conocidos por los especialistas en la técnica, puede ser
transcrito y/o traducido para producir el polipéptido o un fragmento
del mismo. Se dice también que la hebra antisentido de dicho
polinucleótido codifica la secuencia.
Una secuencia nucleotídica está unida
operativamente cuando está colocada en una relación funcional con
otra secuencia nucleotídica. Por ejemplo, un promotor está unido
operativamente a una secuencia codificante si el promotor realiza su
transcripción o expresión. En general, unido operativamente
significa que las secuencias que están unidas son contiguas y,
cuando es necesario unir dos regiones codificantes de proteínas, son
contiguas y en el marco de lectura. Sin embargo, es bien sabido que
ciertos elementos genéticos, tales como los potenciadores, pueden
estar unidos operativamente aún a distancia, es decir, aunque no son
contiguos.
Esta invención proporciona métodos y kits para
mantener el embarazo en mamíferos. El embarazo se mantiene mediante
la administración de cantidades eficaces de hormona luteinizante
(LH) o gonadotropina coriónica (CG). Tanto la LH como la CG pueden
ser utilizadas solas, en combinación una con otra, o en combinación
con la hormona del crecimiento (GH) o la hormona folículo
estimulante (FSH). Las hormonas se administran preferentemente
alrededor del Día 4 hasta alrededor del Día 7 después de la
inseminación. Cantidades eficaces de LH oscilan entre
aproximadamente 25 microgramos y aproximadamente 25 miligramos y las
de CG oscilan entre aproximadamente 100 IU (unidades
internacionales) y aproximadamente 2000 IU. Los mamíferos tratables
con los métodos de esta invención incluyen los ungulados y mamíferos
relacionados, incluidos los bovinos. Los kits proporcionados por
esta invención incluyen cantidades eficaces de una o varias
hormonas, un dispositivo para administrar la(s)
hormona(s) e instrucciones.
En la práctica de esta invención, las
composiciones hormonales de esta invención se administran a
mamíferos que están posiblemente preñados como resultado de la
inseminación. La inseminación se realiza por medio de cualquier
método conocido en la técnica, incluida la inseminación artificial.
Preferentemente, la inseminación se realiza mediante inseminación
artificial programada después de la sincronización de la ovulación.
La sincronización de la ovulación incluye opcionalmente la
presincronización de la ovulación y se realiza preferentemente
mediante los métodos de esta invención.
En la práctica de esta invención, la hormona
luteinizante se administra a uno o varios mamíferos preñados para
mantener el embarazo. Un mamífero preñado puede ser un mamífero que
está posiblemente preñado desde que ha sido inseminado,
preferentemente durante el estro, que puede no estar incluso preñado
de forma detectable, y una pluralidad de mamíferos preñados puede
ser una pluralidad de mamíferos entre los cuales sólo algunos están
preñados.
En una realización de esta invención, la LH es
LH recombinante. La LH puede ser producida en un baculovirus o un
mamífero u otro sistema de expresión. En una realización, la LH
recombinante se recupera de la leche o de claras de huevos de un
animal transgénico. Los métodos para producir proteínas
recombinantes en animales transgénicos son bien conocidos y han sido
descritos en las patentes de Estados Unidos Nº 4.873.316, 5.322.775,
6.111.165, 6.472.584 y 6.528.699 así como otros medios conocidos en
la técnica.
En otra realización, la LH se purifica a partir
de células pituitarias o tejido pituitario. La LH bovina se puede
purificar por medio de métodos conocidos en la técnica, y se dispone
en el mercado de LH bovina purificada (AspenBio Inc., Castle Rock,
CO, Scripps Laboratories, San Diego, CA y BioTrend, Colonia,
Alemania). Se dispone también de LH bovina purificada de NIH
National Hormone and Pituitary Program (NHPP, Torrance, CA). Cuando
se utiliza en la práctica de esta invención LH recombinante, la LH
recombinante es similar estructuralmente y tiene una actividad
similar a la LH purificada, nativa. La LH recombinante se puede
elaborar por medio de genes de LH clonados y mutados que codifican
péptidos idénticos a la LH nativa, o con al menos alrededor del 80%
de homología con la misma, particularmente con al menos
aproximadamente un 90% de homología con la misma, y especialmente
con al menos aproximadamente un 95% de homología con la misma y
siendo capaces también de inducir la ovulación en un mamífero. La LH
recombinante se puede elaborar también mediante genes de LH clonados
y mutados que codifican péptidos que no son idénticos a la LH
nativa, de las especies seleccionadas, siempre que la LH
recombinante producida tenga una actividad similar a la LH
nativa.
La LH recombinante se puede elaborar también de
acuerdo con los métodos conocidos en la técnica, por ejemplo tal
como se describe en la Publicación de Solicitud de Patente de
Estados Unidos Nº 20030059898 cedida a Genzyme por Beck y col., y
los números de patentes 6.635.256, 6.242.580, 6.238.890, 6.225.449,
6.103.501, 6.028.177, 5.985.611, 5.958.737, 5.883.073, 5.792.460,
5.759.818, 5.733.735, 5.712.122, 5.705.478, 5.585.345, 5.405.945,
5.338.835 y 5.177.193, así como las Publicaciones de Patentes de
Estados Unidos Nº 20020160944 y 20010007757, y otros medios
conocidos en la técnica.
En la práctica de esta invención, la hormona
gonadotropina coriónica procede de primates, incluidos humanos y
caballos. Las hormonas procedentes de las especies que se deben
tratar, así como las hormonas procedentes de otras especies son
útiles en la práctica de esta invención. Es poco probable que la
utilización de hormonas procedentes de las especies que se deben
tratar provoque una respuesta inmune en el mamífero tratado.
En una realización de esta invención, la hormona
del crecimiento es somatotropina bovina (bST). En una realización de
esta invención, la FSH es FSH humana o FSH bovina.
En la práctica de esta invención se somete a
prueba el embarazo mediante cualquier test del embarazo conocido en
la técnica, incluido por ultrasonidos o sometiendo a prueba las
moléculas indicadoras del embarazo, en momentos apropiados para la
especie seleccionada, tal como se conoce en la técnica. Cuando el
animal tratado es un bovino, se puede someter a prueba el embarazo
ensayando la presencia de proteínas inducidas por
interferón-tau aproximadamente el Día 15
(Solicitudes de Patentes de Estados Unidos Nº 60/377.987;
60.377.166; 60/380.043; 60/377.921; 60/377.165; 60/377.355;
60/377.829; y 60/380.042) y/o por ultrasonidos aproximadamente los
Días 28, 45 o 56.
En la práctica de esta invención, si se
determina que un mamífero no está preñado después de poner en
práctica los métodos de esta invención, se puede forzar el siguiente
ciclo de estro mediante métodos conocidos en la
técnica.
técnica.
Los métodos de esta invención son útiles en
mamíferos que están en fase de estro por primera vez, que han estado
en estro más de una vez, que nunca han tenido cría, que han tenido
una o varias crías, a los que no se administró nunca una composición
hormonal de esta invención para mantener el embarazo, o a los que se
administró anteriormente una composición hormonal de esta invención
para mantener el embarazo. Los métodos de esta invención son
específicamente útiles en mamíferos a los que se administró
anteriormente composiciones hormonales de esta invención con el
propósito de mantener el embarazo.
En una realización de esta invención, se
administra la LH bovina a un bovino preñado, o una pluralidad de
bovinos preñados, aproximadamente el Día 4 hasta aproximadamente el
Día 7 después de la inseminación. En una realización de esta
invención, se administra la LH bovina a un bovino preñado, o una
pluralidad de bovinos preñados, aproximadamente el Día 4 hasta
aproximadamente el Día 5 después de la inseminación. En una
realización de esta invención, se administra la LH bovina a un
bovino preñado, o una pluralidad de bovinos preñados,
aproximadamente el Día 2 hasta aproximadamente el Día 10 después de
la inseminación.
En una realización de esta invención, se pueden
explorar los mamíferos preñados mediante ultrasonidos en busca de la
presencia de un folículo suficientemente maduro antes de la
administración de una composición hormonal de esta invención. En una
realización de esta invención, un folículo maduro de un bovino tiene
aproximadamente un diámetro de 10 mm. En una realización de esta
invención, después de la administración de LH, se aplican
ultrasonidos al mamífero para explorar la ovulación y luteinización
(producción de cuerpo lúteo).
En una realización de esta invención, se
administra LH bovina en una cantidad que oscila entre
aproximadamente 10 microgramos y aproximadamente 25 miligramos, de
aproximadamente 25 microgramos a aproximadamente 5 miligramos, de
aproximadamente 25 microgramos a aproximadamente 1 miligramo, de
aproximadamente 25 microgramos a aproximadamente 250 microgramos, de
aproximadamente 25 microgramos a aproximadamente 175 microgramos, o
de aproximadamente 25 microgramos a aproximadamente 100 microgramos,
o de aproximadamente 25 microgramos a aproximadamente 75
microgramos. Una vaca media pesa aproximadamente 1.000 a
aproximadamente 1.500 libras. En una realización de esta invención,
se administra la LH bovina en una cantidad que corresponde a
aproximadamente 10 nanogramos hasta aproximadamente 25 microgramos
por libra de vaca.
En una realización de esta invención, se
administra la CG humana en una cantidad que oscila entre
aproximadamente 100 IU a aproximadamente 2.000 IU, de
aproximadamente 100 IU a aproximadamente 1750 IU, o de
aproximadamente 250 IU a aproximadamente 1000 IU.
En una realización de esta invención, la
composición hormonal que se debe administrar es pura en
aproximadamente un 90%, pura aproximadamente en un 95%, pura en
aproximadamente un 98%, pura en aproximadamente un 99%, o pura en
aproximadamente un 100%, tal como lo determina un ensayo de
purificación de proteína conocido en la técnica.
Los mamíferos tratables mediante los métodos de
esta invención incluyen ungulados y mamíferos relacionados. Los
mamíferos tratables mediante los métodos de esta invención incluyen,
pero no se limitan a vacunos, ovejas, cabras, yacs, búfalos de agua,
bisontes, antílopes, gacelas, ciervos canadienses, renos, alces,
muflones, jirafas, y camélidos incluidos los camellos y dromedarios,
llamas, cerdos, caballos, alpacas, y vicuñas.
Preferentemente, una composición hormonal de
esta invención deriva de la misma especie que la especie de mamífero
al que se debe administrar dicha composición. Si el mamífero es
vacuno, la composición hormonal que se debe administrar en la
práctica de esta invención comprende preferentemente una o varias
hormonas que proceden todas de vacuno o de genes de vacuno.
En una realización de esta invención, una
composición hormonal que se debe administrar contiene también otros
componentes útiles para la inyección tal como se conoce en la
técnica. Otros componentes útiles para inyección incluyen, pero no
se limitan a un adyuvante y una solución salina.
En una realización de esta invención, una
composición hormonal de esta invención se administra más de una vez
después de la inseminación. En una realización de esta invención, se
administra más de una composición hormonal de esta invención.
En la práctica de esta invención, el embarazo se
mantiene en al menos un cuarenta por ciento aproximadamente, al
menos un cuarenta y dos por ciento aproximadamente, al menos un
cuarenta y cinco por ciento aproximadamente, al menos un cincuenta
por ciento aproximadamente, al menos un cincuenta y cinco por ciento
aproximadamente, o al menos un sesenta por ciento aproximadamente de
vacas tratadas mediante las composiciones y métodos de esta
invención.
Aunque el solicitante no desee estar ligado por
una teoría particular, la administración después de la inseminación
de la hCG y/o bLH puede actuar mediante la inducción de la formación
de cuerpo lúteo accesorio que aumenta la secreción de progesterona e
incrementa las concentraciones de progesterona en suero durante el
momento crítico en el que el útero debe reconocer el embarazo, lo
que resulta en un aumento de mantenimiento de los
emba-
razos.
razos.
Los quistes foliculares no tratados en un animal
abierto pueden impedir que un animal tenga ciclos normales. Esta
invención proporciona asimismo un método útil en el tratamiento de
quistes foliculares en mamíferos, en particular, vacas. Se deben
inyectar (preferentemente de forma intramuscular) al menos
aproximadamente 2 mg hasta aproximadamente 10 mg de hormona
luteinizante en una vaca en la que se ha diagnosticado un quiste
folicular. Los especialistas en la técnica son capaces de optimizar
dosificaciones basadas en el tamaño del animal, así como las
enseñanzas de las mismas sin experimentación indebida. La resolución
con éxito del quiste puede ser confirmada por ultrasonidos u otros
medios conocidos en la técnica. Si el animal está preñado y tiene un
cuerpo lúteo normal en presencia del quiste, generalmente no hace
falta ningún tratamiento.
Esta invención proporciona asimismo métodos para
sincronizar la ovulación en una pluralidad de animales hembras. Se
conocen varias técnicas para sincronizar el estro, muchas de las
cuales exigen la utilización de la hormona liberadora de
gonadotropina (GnRH), hormona que es secretada a partir del
hipotálamo y afecta a la pituitaria anterior. Esta invención implica
la sustitución de la GnRH por la hormona luteinizante. La LH
proporciona una sincronización más eficaz que la GnRH. La LH se
administra en cantidades eficaces, preferentemente en cantidades
situadas aproximadamente entre 2 mg y aproximadamente 10 mg en
vacunos. Un especialista en la técnica puede optimizar
dosificaciones basadas en el tamaño del animal y su respuesta sin
experimentación indebida.
Un sistema de sincronización del estro conocido
en la técnica es el Sistema de MGA/GnRH/PGF_{2} (Wood, S.L., y
col. (2001), "Improved synchrony of estrus and ovulation with the
addition of GnRH to a melengestrol
acetate-prostaglandin synchronization treatment in
beef heifers", J. Anim. Sci. 79:2210-2216). El
acetato de melengestrol (MGA) es una progestina sintética oralmente
activa que se desarrolló para controlar el estro en novillas de
cebadero (Lauderdale y col., 1977). Esta progestina se puede
utilizar en la sincronización del estro para imitar la progesterona
y puede estimular el estro en novillas. Como se utilizan pequeñas
cantidades de MGA, hay que tener cuidado cuando se mezclan dosis
masivas para asegurar una distribución uniforme por toda la dosis.
La PGF_{2} es prostaglandina, hormona liberada del útero una vez
la hembra reconoce que no está preñada. La prostaglandina provoca
que el CL regrese o disminuya y, una vez esto ocurra, las
concentraciones de progesterona disminuyen rápidamente.
El sistema de MGA/GnRH/PGF_{2} incluye las
siguientes etapas: se suministra MGA durante 14 días a 0,5
mg/cabeza/
día. El día 26, se administra una inyección de GnRH I.M.; se sigue, 7 días más tarde (día 33), con una inyección de prostaglandina I.M. Se comprueba el celo y la reproducción del día 33 al día 38.
día. El día 26, se administra una inyección de GnRH I.M.; se sigue, 7 días más tarde (día 33), con una inyección de prostaglandina I.M. Se comprueba el celo y la reproducción del día 33 al día 38.
En el sistema de esta invención, utilizado para
la sincronización de la ovulación, se administra LH en la
dosificación descrita anteriormente en lugar de GnRH. Si se desea,
el animal se puede reproducir inmediatamente después de este
tratamiento. En esta invención, se puede sustituir la progestina por
MGA. La utilización de MGA es ilegal en vacas lecheras lactantes,
pero el método es útil para productores de carne vacuna.
Otros sistemas de sincronización del estro
conocidos en la técnica incluyen el sistema Select Synch. Este
sistema comprende las siguientes etapas: se inyecta GnRH
intramuscularmente (I.M.) el día 0, seguido de prostaglandina I.M.
el día 7. La investigación por Geary and Whittier (Geary, T.W., and
J.C. Whittier (1999), "Varios protocols for synchronization of
estrus or ovulation using GnRH and prostaglandin", 1999 Beef
Program Report, Department of Anim. Sci., Colorado State University)
reporta índices de embarazo del 61 por ciento para ganado
reproducido sobre la base de celo constante.
Otro método de sincronización del estro es el
Sistema Co-Synch (Geary, T.W. and J.C. Whittier
(1999), "Various protocols for synchronization of estrus or
ovulation using GnRH and prostaglandin", 1999 Beef Program
Report, Department of Anim. Sci., Colorado State University), que
implica las siguientes etapas: se inyecta GnRH I.M. el día 0,
seguido de prostaglandina I.M. el día 7. Se vuelve a inyectar GnRH
el día 9; luego reproducción a tiempo fijo.
Otro sistema de sincronización del estro es el
Sistema Ov-Synch (Geary, T.W., and J.C. Whittier
(1999), "Various protocols for synchronization of estrus or
ovulation using GnRH and prostaglandin", 1999 Beef Program
Report, Department of Anim. Sci., Colorado State University), que
implica las siguientes etapas: se inyecta GnRH I.M. el día 0,
seguido de prostaglandina I.M. el día 7. Se vuelve a inyectar GnRH
el día 9; luego reproducción a tiempo fijo el día 10.
Otro programa común de sincronización del estro
en ganado lechero se llama Heatsynch que utiliza GnRH (día 0), PGF
(día 7), luego cipionato de estradiol (ECP) (día 8). Se observan las
vacas en cuanto a su celo y reproducción en cualquier celo. Las
vacas que no se descubren en celo son reproducidas a tiempo fijo 48
horas después de la inyección de ECP (día 10).
En los sistemas de esta invención, se sustituye
la LH por GnRH en las dosificaciones descritas anteriormente.
Los siguientes ejemplos se proporcionan con un
propósito ilustrativo y no pretenden limitar el alcance de la
invención tal como se reivindica aquí. Cualquier variación en los
ejemplos de artículos que le pueda ocurrir al especialista en la
técnica pretende formar parte del alcance de la presente
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Las secuencias de ADN que codifican las
subunidades alfa y beta de las hormonas luteinizantes bovinas están
ligadas en un vector bacteriano de transferencia. Se incluyen
opcionalmente insertos para la purificación de proteínas. El
inserto está flanqueado por porciones de genes virales para permitir
la recombinación homóloga con ADN viral, lineal, defectuoso en la
replicación. Se comprueba la dirección de los insertos con relación
al promotor polihedrónico. Se comprueban opcionalmente las
secuencias de los insertos. Se purifican los plásmidos para su
transfección en células de insectos.
Se cotransfectan las células de insectos con los
vectores de transferencia de las subunidades alfa y beta de LH
recombinante y el vector viral linearizado. Opcionalmente, se
realizan individualmente transfecciones de las subunidades alfa y
beta de LH. Los métodos de transfección y transformación son bien
conocidos en la técnica e incluyen los métodos de electroporación,
de lípidos, y transformación mediada por fosfato de calcio. Los
virus replicativos se forman mediante la recombinación intracelular
homóloga entre los extremos de las moléculas virales y las partes
del vector de transferencia que flanquea las subunidades alfa y beta
de LH. Las subunidades alfa y beta de LH bovina se insertan en el
virus y complementan el(los) gen(es) viral(es)
defectuoso(s) para permitir la replicación viral. Se incluyen
opcionalmente proteínas marcadoras y se expresan sobre eventos de
inserción seleccionados.
Se cosechan los sobrenadantes de células
transfectadas. Las células de insectos son infectadas con diluciones
del sobrenadante para aislar placas de un solo virus que expresan
opcionalmente proteínas marcadoras. Células de insectos adicionales
son infectadas con virus procedente de las placas seleccionadas para
ampliar la cantidad y titular los stocks virales. Se examina
opcionalmente la expresión de proteínas por Western blotting. Se
someten a prueba la expresión y actividad de las proteínas mediante
bioensayo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se indujo la ovulación en varios cientos de
vacas por medio de un protocolo estándar de sincronización del
estro, se inseminaron artificialmente, y se les administró por
inyección intravenosa agua estéril.
Los Días 14 y 21 se recogió suero para el ensayo
de progesterona. Estos tiempos de recogida representan el período
crítico para que la progesterona mantenga el embarazo, y el tiempo
esperado de concentración más baja de progesterona si el animal no
está preñado y vuelve al estro. El examen por ultrasonidos de las
estructuras ováricas se realizó los Días 14 y 21 para evaluar la
correlación del tamaño de CL y la concentración de progesterona, y
permitir la comparación de ambas mediciones con el tratamiento y con
el resultado de la reproducción. Después de la inseminación los Días
28, 35 y 56, se utilizó el examen por ultrasonidos del útero para
determinar el estado del embarazo. El Día 28 es el momento más
temprano para visualizar fiablemente un embarazo. Se monitorearon
estrechamente los embarazos en estos momentos para determinar los
índices de pérdida embrionaria y el resultado final de cada
reproducción.
Se analizaron los datos por software estadístico
(SAS). El rebaño y los efectos estacionales se analizaron mediante
ANOVA y análisis de regresión. El Día 56, un 38% de las vacas
tratadas estaba preñado.
\vskip1.000000\baselineskip
Sobre una base semanal, se indujeron a ovulación
vacas al final del período de espera electivo por medio de un
protocolo estándar de sincronización del estro, y en el momento de
la reproducción, se asignó a cada vaca al tratamiento o al grupo de
control (Ejemplo 2) sobre una base alterna. El Día 7, se
administraron por vía intramuscular a las vacas en
post-reproducción 1.660 IU de hCG. (Se ha
determinado por el estándar de la Organización Mundial de la Salud
que la actividad de hCG era de aproximadamente 10.000 IU por
miligramo).
\newpage
Los Días 14 y 21 se recogió suero para el ensayo
de progesterona. Estos tiempos de recogida representan el período
crítico para que la progesterona mantenga el embarazo, y el tiempo
esperado de concentración más baja de progesterona si el animal no
está preñado y vuelve al estro. El examen por ultrasonidos de las
estructuras ováricas se realizó los Días 14 y 21 para evaluar la
correlación del tamaño de CL y la concentración de progesterona, y
permitir la comparación de ambas mediciones con el tratamiento y con
el resultado de la reproducción. Después de la inseminación los Días
28, 35 y 56, se utilizó el examen por ultrasonidos del útero para
determinar el estado del embarazo. El Día 28 es el momento más
temprano para visualizar fiablemente un embarazo. Se monitorearon
estrechamente los embarazos en estos momentos para determinar los
índices de pérdida embrionaria y el resultado final de cada
reproducción.
Se sometieron a prueba varios cientos de vacas.
Los datos se analizaron por software estadístico (SAS). El rebaño y
los efectos estacionales se analizaron mediante ANOVA y análisis de
regresión. El Día 56, un 50% de las vacas tratadas estaba
preñado.
\vskip1.000000\baselineskip
Se indujeron a ovulación varios cientos de vacas
al final del período de espera electivo por medio de un protocolo
estándar de sincronización del estro, y en el momento de la
reproducción, se asignó a cada vaca al tratamiento o al grupo de
control (Ejemplo 2) sobre una base alterna. El Día 7, se
administraron por vía intramuscular a las vacas en
post-reproducción 1.660 IU de hCG.
Los Días 14 y 21 se recogió suero para el ensayo
de progesterona. El examen por ultrasonidos de las estructuras
ováricas se realizó los Días 14 y 21 para evaluar la correlación del
tamaño de CL y la concentración de progesterona, y permitir la
comparación de ambas mediciones con el tratamiento y con el
resultado de la reproducción. Después de la inseminación los Días
28, 35 y 56, se utilizó el examen por ultrasonidos del útero para
determinar el estado del embarazo. Se monitorearon estrechamente los
embarazos en estos momentos para determinar los índices de pérdida
embrionaria y el resultado final de cada reproducción.
Se sometieron a prueba varios cientos de vacas.
Los datos se analizaron por software estadístico (SAS). El rebaño y
los efectos estacionales se analizaron mediante ANOVA y análisis de
regresión. El Día 56, un 52% de las vacas tratadas estaba
preñado.
\vskip1.000000\baselineskip
Se fuerzan al estro las vacas, se inseminan
artificialmente y se les administran por vía intramuscular 830 IU de
hCG el Día 5 después de la inseminación. Se recoge suero los Días 14
y 21 y se somete a prueba en busca de progesterona. Se aplican
ultrasonidos los Días 14 y 21. Se realiza el examen por ultrasonidos
los Días 28, 35 y 56. El Día 56, al menos un 50% aproximadamente de
las vacas, está preñado.
\vskip1.000000\baselineskip
Se fuerzan al estro las vacas, se inseminan
artificialmente y se les administran por vía intramuscular 156, 83,
25 y 10 microgramos o 1, 10 y 25 mg de bLH purificada a partir de
pituitaria bovina, el Día 5 después de la inseminación. Se recoge
suero los Días 14 y 21 y se somete a prueba en busca de
progesterona. Se aplican ultrasonidos los Días 14 y 21. Se realiza
el examen por ultrasonidos los Días 28, 35 y 56. El Día 56, se
evidencia una mejora en el mantenimiento del embarazo en comparación
con las vacas sin administración de bLH u otra hormona, y las vacas
con administración de hCG solamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Se fuerzan al estro las vacas, se inseminan
artificialmente y se les administran por vía intramuscular 156, 83,
25 y 10 microgramos o 1, 10 y 25 mg de bLH recombinante, obtenida a
partir de un sistema de expresión de baculovirus (Ejemplo 1), el Día
5 después de la inseminación. Se recoge suero los Días 14 y 21 y se
somete a prueba en busca de progesterona. Se aplican ultrasonidos
los Días 14 y 21. Se realiza el examen por ultrasonidos los Días 28,
35 y 56. El Día 56, se evidencia una mejora en el mantenimiento del
embarazo en comparación con las vacas sin administración de bLH u
otra hormona, y las vacas con administración de hCG solamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Se fuerzan al estro las vacas, se inseminan
artificialmente y se les administran por vía intravenosa 10
microgramos de bLH purificada a partir de pituitaria bovina, el Día
5 después de la inseminación. Se recoge suero los Días 14 y 21 y se
somete a prueba en busca de progesterona. Se aplican ultrasonidos
los Días 14 y 21. Se realiza el examen por ultrasonidos los Días 28,
35 y 56. El Día 56, se evidencia una mejora en el mantenimiento del
embarazo en comparación con las vacas sin administración de bLH u
otra hormona, y las vacas con administración de hCG solamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizaron pruebas durante un período de tres
meses utilizando un total de 31 vacas en ocho pruebas diferentes. Se
administró a las vacas la hormona luteinizante bovina a varios
niveles de dosificación, desde 0,5 mg hasta 8 mg en solución salina
estéril cuatro días después de la inseminación artificial. Las
pruebas determinaron que un nivel de dosificación eficaz era de 2
mg, por vía intravenosa, o superior. Utilizando esta dosificación de
2 mg en un ensayo limitado a 15 vacas, fuimos capaces de crear al
menos un cuerpo lúteo accesorio en doce vacas (respuesta del 80%).
Se examinaron los ovarios por ultrasonidos tanto antes como después
del tratamiento por medio de un Sonosite VET180plus con un
transductor de sector de banda ancha de 11 mm con un rango de
4-7 mHz. La exploración después del tratamiento se
realizó siete días después de la inyección. Se muestran los
resultados en la Tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta respuesta es comparable con la formación
del cuerpo lúteo accesorio encontrado después de la administración
de una dosis de gonadotropina coriónica humana (hCG) a ganado
lechero lactante.
\vskip1.000000\baselineskip
Se examinaron mediante ultrasonidos tres vacas
no preñadas, no inseminadas para determinar la presencia de quistes
foliculares. Se trataron las vacas con inyecciones de 2 mg de
hormona luteinizante en solución salina. Se trataron de la misma
forma que anteriormente siete vacas más no preñadas, no inseminadas
con un diagnóstico de quistes foliculares. Cuarenta y ocho horas
después del tratamiento, se examinaron las vacas en busca de la
presencia de quistes utilizando ultrasonidos para confirmar que los
quistes se habían reducido.
\vskip1.000000\baselineskip
Se inyectan I.M. a diez vacas no preñadas que no
muestran señales de estar en celo 2 mg de hormona luteinizante.
Siete días más tarde, se inyectan I.M. a las vacas 25 mg de
prostaglandina. 9 días más tarde, se vuelven a inyectar a las vacas
2 mg de hormona luteinizante. Se inseminan artificialmente las vacas
pocas horas después de la segunda inyección de hormona luteinizante,
lo que resulta en un índice de embarazo superior a aproximadamente
el cuarenta por ciento. En comparación con la utilización de GnRH,
la utilización de LH proporciona una sincronización más fiable y un
mayor índice de embarazo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se extrajo ARN de 1 glándula pituitaria bovina
por medio de Rneasy Midiprep (Qiagen cat# 75142). Se realizó una
RT-PCR por medio de RT PCR en una Sola Etapa
Superscript con Platinum Taq (Invitrogen cat#
10928-034). Los cebadores utilizados en esta
reacción fueron bLH alfa BamHI U (GGATCCATGGGATTACTACAGAAA) y bLH
alfa RI L (GAATTCTTAGGATTTGTGATAATAAC). El producto para la
RT-PCR fue purificado en gel por medio de QiaQuick
(Qiagen cat# 28704). El producto purificado se pulió y se ligó en el
vector de clonación pCRScript utilizando reactivos del kit
(Statagene cat# 211188). La ligación se transformó en E. coli
electro competente Top 10 (Invitrogen cat#C4040-50)
y se colocó en placas sobre agar LB con ampicilina. Se analizaron
los transformantes mediante digestión con restricción utilizando
BamHI (NEB cat#R0136S) y la secuencia se confirmó mediante
secuenciación del ADN (MMR).
\vskip1.000000\baselineskip
Se extrajo ARN de 3 glándulas pituitarias
bovinas por medio de Tri-Reagent BD (Sigma cat#
T3809). Se sintetizó el ADN por medio del Kit de Síntesis de ADNc
iScript (BioRad cat# 170-8890). Se realizó la PCR
primaria utilizando el ADNc anterior, ADN Polimerasa Deep Vent (NEB
cat#M0258S) y los siguientes cebadores: bLH-B L
9-9-0 (TTTCCAGAGTTAGGATGGGCATGG) y
bLH-B U 9-9-03
(CAAGGATGGAGATGTTCCAGGGAC). Se realizó la PCR secundaria utilizando
el producto de PCR primaria como plantilla, ADN Polimerasa Deep Vent
y los siguientes cebadores: 5'bglMEbLHb
(AGATCTATGGAGATGTTCCAGGGACTG) y 3'bLHbetaR1
(GAATTCAGTGGGG
CATCCTTAGAGGAAGAG). El producto de PCR secundaria fue purificado en gel por medio de QiaQuick y la reacción por extensión de adenosina se realizó por medio de PCR Master Mix (Promega cat# M7501). El producto fue ligado en el Vector de Clonación pCR2.1 TOPO (Invitrogen cat# K4500-01). La ligación se transformó en E. coli químico competente Top 10F' (Invitrogen cat# C3030-03) y se colocó en placas sobre agar LB con ampicilina. Se analizaron los transformantes mediante digestión con restricción utilizando EcoRI (NEB cat#R0101S) y la secuencia se confirmó mediante secuenciación del ADN (Lark Technologies).
CATCCTTAGAGGAAGAG). El producto de PCR secundaria fue purificado en gel por medio de QiaQuick y la reacción por extensión de adenosina se realizó por medio de PCR Master Mix (Promega cat# M7501). El producto fue ligado en el Vector de Clonación pCR2.1 TOPO (Invitrogen cat# K4500-01). La ligación se transformó en E. coli químico competente Top 10F' (Invitrogen cat# C3030-03) y se colocó en placas sobre agar LB con ampicilina. Se analizaron los transformantes mediante digestión con restricción utilizando EcoRI (NEB cat#R0101S) y la secuencia se confirmó mediante secuenciación del ADN (Lark Technologies).
\vskip1.000000\baselineskip
Se insertan las subunidades alfa y beta de LH
bovina en pBac4x-1 (Novagen cat#
70045-3) separada y conjuntamente para la expresión
tanto individual como dual por medio del sistema de Expresión de
Baculovirus BacVector (Novagen cat# 70077) en células de insectos
Sf9, Sf21, y High Five. Se insertan las subunidades alfa y beta de
LH bovi-
na en pFastBack Dual (Invitrogen cat# 10712-024) para la expresión dual en células de insectos Sf9, Sf21 y High Five.
na en pFastBack Dual (Invitrogen cat# 10712-024) para la expresión dual en células de insectos Sf9, Sf21 y High Five.
\vskip1.000000\baselineskip
Las subunidades alfa de bLH en pCRScript y
pBac4x-1 fueron digeridas con NotI (NEB cat# R0189S)
y XhoI (NEB cat# R0146S). El inserto alfa de bLH y el vector de
corte fueron purificados en gel utilizando QiaQuick y se ligaron por
medio de ADN Ligasa T4 (NEB cat# M0202S). La ligación se transformó
en E. coli electro competente Top 10 y se colocó en placas
sobre agar LB con ampicilina. Se analizaron los transformantes
mediante digestión con restricción utilizando NotI y XhoI y la
secuencia se confirmó mediante secuenciación del ADN (Lark
Technologies).
\vskip1.000000\baselineskip
Las subunidades beta de bLH en pCR2.1 y
pBac4x-1 fueron digeridas con BglII (NEB cat#
R0144S) y EcoRI. El inserto beta de bLH y el vector de corte fueron
purificados en gel utilizando QiaQuick y se ligaron por medio de ADN
Ligasa T4 (NEB). La ligación se transformó en XLI Blue electro
competente y se colocó en placas sobre agar LB con ampicilina. Se
analizaron los transformantes mediante digestión con restricción
utilizando BglII y EcoRI y la secuencia se confirmó mediante
secuenciación del ADN (Lark Technologies).
\vskip1.000000\baselineskip
La subunidad alfa de bLH y la subunidad beta de
bLH en pBac4x-1 se cortaron con AgeI (NEB cat#
R0552S) y BglII. El fragmento que contenía el inserto alfa y el
fragmento que contenía la subunidad beta se purificaron en gel por
medio de QIAex II (Qiagen cat#20021). Se ligaron los fragmentos
conjuntamente utilizando ADN Ligasa T4 (NEB). La ligación se
transformó en E. coli químico competente Top 10 y se colocó
en placas sobre agar LB con ampicilina. Se analizaron los
transformantes mediante digestión con restricción utilizando EcoRI y
la secuencia se confirmó mediante secuenciación del ADN (Lark
Technologies).
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip0.900000\baselineskip
Las subunidades alfa y beta de LH bovina se
insertan en pIZ/V5-His (Invitrogen cat#
V8000-01) y pIB/V5-His (Invitrogen
cat# V8020-01) separadamente para su coexpresión por
medio del Sistema InsectSelect para la expresión de la línea celular
estable en células de insectos Sf9, Sf21 y High Five. Se realizó la
coexpresión mediante alfa de bLH/pIZ/V5-His con beta
de bLH/pIB/V5-His y también mediante alfa de
bLH/pIB/V5-His con beta de
bLH/pIZ/V5-His. Las líneas estables que expresan
cadenas únicas son infectadas también con el baculovirus que
codifica la cadena complementaria.
\vskip1.000000\baselineskip
Las subunidades alfa de bLH en
pBac4x-1 y pIZ/V5-His fueron
digeridas cada una con BamHI y EcoRI. Los fragmentos que contenían
las subunidades alfa de bLH y el corte pIZ/V5-His
fueron purificadas en gel por medio de QIAex II. Los fragmentos se
ligaron conjuntamente utilizando ADN Ligasa T4 (Invitrogen cat#
15224-017). La ligación se transformó en E.
coli electro competente Top 10 (Invitrogen cat#
C664-11) y se colocó en placas sobre agar LB con
zeocina. Se analizaron los transformantes mediante digestión con
restricción con Sac1 (NEB cat# R0156) y EcoRI y la secuencia se
confirmó mediante secuenciación del ADN (Lark Technologies).
\vskip1.000000\baselineskip
Las subunidades beta de bLH en pCR2.1 fueron
digeridas con BglII y EcoRI y pIZ/V5-His fue
digerida con BamHI y EcoRI. Los fragmentos que contenían las
subunidades beta de bLH y el corte pIZ/V5-His fueron
purificadas en gel por medio de QIAex II. Los fragmentos se ligaron
conjuntamente utilizando ADN Ligasa T4 (Invitrogen). La ligación se
transformó en E. coli electro competente Top 10 y se colocó
en placas sobre agar LB con zeocina. Se analizaron los
transformantes mediante digestión con restricción con Sac1 y EcoRI y
la secuencia se confirmó mediante secuenciación del ADN (Lark
Technologies).
\vskip1.000000\baselineskip
La estrategia de clonación sigue la
pIZ/V5-His excepto que la selección del clon tiene
lugar utilizando ampicilina y la selección celular tiene lugar
utilizando blasticidina.
\vskip1.000000\baselineskip
Se insertan las subunidades alfa y beta de LH
bovina en pBudCE4.1 (Invitrogen cat# V532-20) para
su expresión dual en las células de mamíferos COS7, CHO, 293 y 3T3.
Las subunidades alfa y beta de LH bovina se insertan también en
pBudCE4.1 y pWE1 (ATCC cat#87 678) separadamente para su coexpresión
en las células de mamíferos COS7, CHO, 293 y 3T3. Se realiza la
coexpresión por medio de alfa de bLH/pBudCE4.1 con beta de bLH/pWE1
y también por medio de alfa de bLH/pWE1 con beta de
bLH/pBudCE4.1.
Las subunidades alfa y beta de LH bovina en
pBudCE4.1 (Invitrogen cat# V532-20) para la
expresión dual en las células de mamíferos COS7, CHO, 293 y 3T3 son
como sigue: la subunidad alfa de bLH se inserta en pBudCE4.1
utilizando los sitios de NotI/XhoI. La subunidad beta de bLH se
inserta en pBudCE4.1 utilizando los sitios de BamHI/EcoRI. Las
subunidades alfa y beta de LH bovina se insertan en pWE1 utilizando
BamHI y EcoRI.
\vskip1.000000\baselineskip
Se puede elaborar la LH bovina recombinante de
una sola cadena de acuerdo con los métodos descritos en la patente
de Estados unidos 6.242.580, que describe LH recombinante en la que
la subunidad beta está unida de forma covalente a la subunidad alfa.
Alternativamente, un enlazador está presente entre las subunidades
alfa y beta. Las formas de cadena única necesitan solamente un único
gen que se debe transcribir durante la producción recombinante y son
ventajosas con respecto a las formas diméricas en términos de
estabilidad de la proteína. Las SEQ ID NO.1-4
presentan secuencias de nucleótidos para las subunidades alfa y beta
de LH bovina. Los vectores de expresión en los que el
terminal-C de la subunidad beta de LH bovina está
unido al terminal-N de la subunidad alfa de la LH
bovina son transfectados en células CHO para su expresión.
\global\parskip1.000000\baselineskip
SEQ ID
NO:1
SEQ ID
NO:2
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
SEQ. ID.
NO:3
\newpage
SEQ. ID.
NO:4
Claims (19)
1. Utilización de una cantidad eficaz de hormona
luteinizante purificada o recombinante en la fabricación de un
fármaco para mantener uno o varios embarazos mediante la inducción
de la formación de cuerpo lúteo accesorio en uno o varios mamíferos,
caracterizada porque dicho fármaco se administra a dichos
mamíferos el día o entre el Día 2 y el Día 10 después de haber
realizado la inseminación en dichos mamíferos, caracterizada
porque dicha cantidad eficaz de hormona luteinizante purificada o
recombinante se sitúa entre 10 microgramos y 25 miligramos.
2. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho fármaco mantiene los embarazos en
más de un 40%, y preferentemente en más del 50%, de dichos
mamíferos.
3. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque no se administra ninguna otra hormona a
dicho uno o varios mamíferos cuando se administra dicho fármaco a
dichos mamíferos.
4. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicha cantidad eficaz de hormona
luteinizante purificada o recombinante se sitúa entre 10 microgramos
y 5 miligramos.
5. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicha cantidad eficaz de hormona
luteinizante purificada o recombinante se sitúa entre 10 microgramos
y 1 miligramo.
6. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicha cantidad eficaz de hormona
luteinizante purificada o recombinante se sitúa entre 25 microgramos
y 250 microgramos.
7. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicha cantidad eficaz de hormona
luteinizante purificada o recombinante se sitúa entre 75 microgramos
y 175 microgramos.
8. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho fármaco se administra el día o
entre el Día 4 y el Día 7 después de dicha inseminación.
9. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicha hormona luteinizante se selecciona
de entre el grupo compuesto de: hormona luteinizante bovina, hormona
luteinizante recombinante y hormona luteinizante recombinante de una
sola cadena.
10. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicha hormona luteinizante purificada es
pura en al menos un 95%.
11. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho uno o varios mamíferos son
ungulados o bovinos.
12. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho uno o varios mamíferos se
seleccionan de entre el grupo compuesto de: bovinos, ovejas, cabras,
yacs, búfalos de agua, bisontes, antílopes, gacelas, ciervos
canadienses, renos, alces, muflones, jirafas, y camélidos incluidos
los camellos y dromedarios, llamas, cerdos, caballos, alpacas, y
vicuñas.
13. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho uno o varios embarazos se
mantienen el Día 15 después de la inseminación.
14. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho uno o varios embarazos se
mantienen el Día 30 después de la inseminación, y preferentemente el
Día 56 después de la inseminación.
15. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque la administración de dicho fármaco es
por vía intramuscular.
16. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque dicho fármaco se administra a dicho uno
o varios mamíferos el día o entre el Día 4 y el Día 7 después de la
inseminación, y caracterizada porque dicha cantidad eficaz de
hormona luteinizante purificada o recombinante se sitúa entre 75
microgramos y 1 miligramo, preferentemente entre 75 microgramos y
175 microgramos.
17. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque se administra con dicho fármaco una
cantidad eficaz de hormona del crecimiento, hormona folículo
estimulante, o gonadotropina coriónica a dicho uno o varios
mamíferos.
18. Utilización según la reivindicación 17,
caracterizada porque se administra a dicho uno o varios
mamíferos menos de 1000 IU de gonadotropina coriónica.
19. Utilización según la reivindicación 17,
caracterizada porque dicha gonadotropina coriónica es
gonadotropina coriónica humana.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US45229703P | 2003-03-04 | 2003-03-04 | |
| US452297P | 2003-03-04 | ||
| US516002P | 2003-10-31 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2358245T3 true ES2358245T3 (es) | 2011-05-06 |
Family
ID=43880338
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES04717460T Expired - Lifetime ES2358245T3 (es) | 2003-03-04 | 2004-03-04 | Lh para su uso en el mantenimiento de uno o más embarazos mediante la inducción de la formación de un cuerpo lúteo accesorio. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2358245T3 (es) |
-
2004
- 2004-03-04 ES ES04717460T patent/ES2358245T3/es not_active Expired - Lifetime
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Galli et al. | Bovine embryo technologies | |
| Baldassarre et al. | Advanced assisted reproduction technologies (ART) in goats | |
| Pursel et al. | Progress on gene transfer in farm animals | |
| TANAKA et al. | Artificial intravaginal insemination using fresh semen in cats | |
| AU2010201830A1 (en) | Methods and Kits for Maintaining Pregnancy, Treating Follicular Cysts, and Synchronising Ovulation Using Luteinising Hormone | |
| Yonai et al. | Growth, reproduction, and lactation in somatic cell cloned cows with short telomeres | |
| Gandolfi et al. | Failure to produce transgenic offspring by intra-tubal insemination of gilts with DNA-treated sperm | |
| Hamid et al. | Effects of GnRH on conception rate at the time of artificial insemination in crossbred dairy cows | |
| Kasai et al. | Comparison of the growth performances of offspring produced by a pair of cloned cattle and their nuclear donor animals | |
| Tsutsui et al. | Intratubal insemination with fresh semen in dogs | |
| Adachi et al. | Growth, reproductive performance, carcass characteristics and meat quality in F1 and F2 progenies of somatic cell-cloned pigs | |
| Heise | Artificial insemination in veterinary science | |
| AU2004218365B2 (en) | Methods and kits for maintaining pregnancy, treating follicular cysts, and synchronizing ovulation using luteinizing hormone | |
| Courot | Management of reproduction in farm animals: present and | |
| Garg | Biotechnological tools to enhance sustainable livestock production | |
| Berdugo-Gutiérrez et al. | Evaluation of a strategy to incorporate reproductive biotechnologies into buffalo farming without affecting reproductive parameters of the herd: A Colombian case | |
| Courot et al. | Management of reproduction in farm animals: present and future | |
| Kakar et al. | Reproductive biotechnologies in dairy industry in Pakistan | |
| Kurati et al. | Does eCG improve conception rate in Ongole (Bos indicus) ET recipient cows?-A Field Study | |
| Piper et al. | Qenetic and non-genetic approaches to increasing prolificacy in beef cattle. | |
| MIŠČEVIĆ et al. | Biotechnology and genetic improvement of domestic animals | |
| Adamowski et al. | P 1| Nod-like receptor protein 1 and 3 are ovarian specific mediators of inflammatory response in the course of diet-induced obesity in mice | |
| Brackett | of I utei n izing hormone t | |
| Estienne | MASTERING BREEDING IN AN ERA OF NEW TECHNOLOGY | |
| O'Donnell | Methods of Bovine Reproduction |