ES2358785T3

ES2358785T3 - Inhibidores de fosfatidilinositol 3-quinasa delta.

Info

Publication number: ES2358785T3
Application number: ES01928855T
Authority: ES
Inventors: Chanchal Sadhu; Ken Dick; Jennifer Treiberg; C. Gregory Sowell; Edward A. Kesicki; Amy Oliver
Original assignee: Icos Corp
Current assignee: Icos Corp
Priority date: 2000-04-25
Filing date: 2001-04-24
Publication date: 2011-05-13
Anticipated expiration: 2021-04-24
Also published as: PL213200B1; UA76103C2; ZA200208698B; SI1939203T1; PL358590A1

Abstract

Un compuesto con una estructura **(Ver fórmula)** donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno y NH;R4 se selecciona del grupo compuesto por H, halógeno, NO2, OH, OCH3, CH3, y CF3; R5 se selecciona del grupo compuesto por H, OCH3, y halo; o R4 y R5 junto con C-6 y C-7 del sistema del anillo de quinazolina definen un anillo aromático de 5 ó 6 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos de O, N, o S; R6 se selecciona del grupo compuesto por C1-C6alquilo, fenilo, halofenilo, alcoxifenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)OC2H5, y morfolinilo; Rd, independientemente, se selecciona del grupo compuesto por NH2, halo, C1-3alquilo, S(C1-3alquilo), OH, NH(C1-3alquilo), N(C1-3alquilo)2, NH(C1-3alquilenofenilo); y **(Ver fórmula)** q es 1 ó 2; y sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables,siempre que al menos uno de R4 y R5 sea distinto a H cuando R6 sea fenilo o 2-clorofenilo.

Description

Inhibidores de fosfatidilinositol 3-quinasa delta.

La presente solicitud reclama el beneficio de la solicitud provisional estadounidense con el número de serie 60/199.655, presentada el 25 de abril de 2000 y la solicitud provisional estadounidense con el número de serie 60/238.057, presentada el 25 de octubre de 2000.

La presente invención se refiere en general a las enzimas fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) y más concretamente a los inhibidores selectivos de la actividad de las PI3K y a los métodos de uso de estos materiales.

La señalización de las células mediante fosfoinosítidos fosforilados en posición 3 ha estado implicada en diversos procesos celulares, como la transformación maligna, la señalización del factor de crecimiento, la inflamación e inmunidad (véase Rameh et al., J. Biol Chem, 274:8347-8350 (1999) para una revisión). La enzima responsable de generar estos productos de señalización fosforilados, fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3-quinasa; PI3K), se identificó originalmente como una actividad asociada con oncoproteínas virales y el factor de crecimiento tirosina quinasa que fosforila el fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el hidroxilo de posición 3 del anillo de inositol (Panayotou et al., Trends Cell Biol 2:358-60 (1992)).

Los niveles de fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3), el principal producto de la activación de PI3-quinasa, aumentan tras el tratamiento de las células con diversos agonistas. Por tanto, se cree que la activación de PI 3-quinasa, está implicada en una serie de respuestas celulares entre las que se incluyen el crecimiento celular, la diferenciación y la apóptosis (Parker et al., Current Biology, 5:577-99 (1995); Yao et al., Science, 267:2003-05 (1995)). A pesar de que las descendentes de los lípidos fosforilados que se generan tras la activación de PI3-quinasa no han sido bien caracterizadas, las pruebas emergentes sugieren que las proteínas que contienen el dominio de homología con pleckstrina y el dominio tipo dedo FYVE se activan cuando se unen a diversos lípidos de fosfatidilinositol (Sternmark et al., J Cell Sci, 112:4175-83 (1999); Lemmon et al., Trends Cell Biol, 7:237-42 (1997)). In vitro, algunas isoformas de la proteína quinasa C (PKC) son activadas directamente por el PIP3; y se ha demostrado que la proteína quinasa relacionada con la PKC, PKB, es activada por la PI 3-quinasa (Burgering et al., Nature, 376:599-602 (1995)).

Actualmente, la familia de las enzimas PI 3-quinasas ha sido divida en tres clases basándose en las especificidades de su sustrato. Las PI3K de clase I pueden fosforilar fosfatidilinositol (PI), fosfatidilinositol-4-fosfato y fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2) para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3,4-bifosfato y fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato, respectivamente. Las PI3K de clase II fosforilan PI y fosfatidilinositol-4-fosfato, mientras que las PI3K de clase III solamente pueden fosforilar PI.

La purificación inicial y el clonado molecular de PI 3-quinasa revelaron que se trataba de un heterodímero compuesto por las subunidades p85 y p110 (Otsu et al., Cell, 65:91-104 {1991); Hiles et al., Cell, 70:419-29 (1992)). Desde entonces, se han identificado cuatro PI3K de clase I, denominadas PI3K \alpha, \beta, \delta, y \gamma, compuestas cada una por una subunidad catalítica de 110 kDa y una subunidad reguladora diferente. Más concretamente, tres de las subunidades catalíticas, es decir p110\alpha, p110\beta y p110\delta, interactúan cada una con la misma subunidad reguladora, p85; mientras que p110\gamma interactúa con una subunidad reguladora distinta, p101. Como se describe a continuación, los patrones de expresión de cada una de estas PI3K en los tejidos y células humanas también son distintos. A pesar de que recientemente se ha acumulado mucha información sobre las funciones celulares de las PI3-quinasas en general, las funciones que desempeñan las isoformas individuales son en gran medida desconocidas.

El clonado de la p110\alpha bovina ha sido descrito. Se identificó que esta proteína estaba relacionada con la proteína Saccharomyces cerevisiae: Vps34p, una proteína implicada en el procesamiento de la proteína vacuolar. También se demostró que el producto de la p110\alpha recombinante se asocia con p85\alpha, para generar una actividad de PI3K en las células COS-1 transfectadas. Véase Hiles et al., Cell, 70, 419-29 (1992).

El clonado de una segunda isoforma humana de p110, denominada p110\beta, se describe en Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993). Se dice que esta isoforma se asocia con p85 en las células, y que se expresa de forma omnipresente, dado que se ha encontrado p110\beta mRNA en numerosos tejidos humanos y murinos, así como en células endoteliales de la vena umbilical humana, células T de leucemia humana de Jurkat, células renales 293 del embrión humano, fibroblastos 3T3 murinos, células HeLA y células del carcinoma de vejiga en ratas NBT2. Esta expresión tan amplia sugiere que esta isoforma es muy importante para la señalización de las vías.

La identificación de la isoforma de p110\delta de la PT 3-quinasa se describe en Chantry et al., J Biol. Chem, 272:19236-41 (1997). Se observó que la isoforma de la p110\delta humana se expresa de forma limitada en los tejidos. Se expresa a elevados niveles en los linfocitos y tejidos linfoides, lo que sugiere que la proteína podría participar en la señalización mediada por la PI3-quinasa en el sistema inmunitario. Los detalles relativos a la isoforma de P110\delta se pueden encontrar también en las patentes estadounidenses nº 5.858.753; 5.822.910; y 5.985.589. Véase también Vanhaesebroeck et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:4330-5 (1997), y la publicación internacional WO 97/46688.

En cada uno de los subtipos PI3K\alpha, \beta, y \delta, la subunidad p85 actúa para localizar la PI 3-quinasa en la membrana plasmática mediante la interacción de su dominio SH2 con los restos de tirosina fosforilada (presentes en el contexto de una secuencia apropiada) en las proteínas diana (Rameh et al., Cell, 83:821-30 (1995)). Se han identificado dos isoformas de p85: p85a, que se expresa de forma omnipresente, y p85\beta, que se encuentra principalmente en el cerebro y los tejidos linfoides (Volinia et al., Oncogene, 7:789-93 (1.992)). La asociación de la subunidad p85 con las subunidades catalíticas p110\alpha, \beta o \delta de la PI3-quinasa parece ser necesaria para la actividad catalítica y estabilidad de estas enzimas. Por otra parte, la unión de proteínas Ras también regula al alza la actividad de la PI 3-quinasa.

El clonado de p110\gamma reveló una complejidad aún mayor dentro de la familia de enzimas PI3K (Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)). La isoforma de p110\gamma está estrechamente relacionada con p110\alpha y p110\beta (45-48% de identidad en el dominio catalítico), pero como se ha señalado no utiliza p85 como subunidad diana. En lugar de esto, p110\gamma contiene un dominio adicional denominado "dominio de homología con pleckstrina" cerca de su amino-terminal. Este dominio permite la interacción de p110\gamma con las subunidades \beta\gamma de las proteínas G heterotriméricas y esta interacción parece regular su actividad.

La subunidad reguladora p101 para PI3Kgamma se clonó originalmente en porcino y el ortólogo humano se identificó posteriormente (Krugmann et al., J Biol Chem, 274:17152-8 (1999)). La interacción entre la región N-terminal de p101 y la región N-terminal de p110\gamma parece ser crítica para la activación de PI3K\gamma mediante G\beta\gamma anteriormente mencionada.

En la publicación internacional WO 96/25488, se describe un polipéptido constitutivamente activo de PI3K. Esta publicación revela la preparación de una proteína de fusión quimérica en la que un fragmento del residuo 102 de la p85, conocido como región inter-SH2 (iSH2), se fusiona a través de una región de enlace al N-terminal de la p110 murina. Aparentemente el dominio iSH2 de p85 es capaz de activar la actividad de PI3K de manera comparable al p85 intacto (Klippel et al., Mol Cell Biol, 14:2675-85 (1994)).

De este modo, las PI 3-quinasas se pueden definir por la identidad de su aminoácido o por su actividad. Los miembros adicionales de esta creciente familia de genes incluyen más distantemente lípidos y proteínas quinasas relacionados, entre los que se incluyen Vps34 TOR1 y TOR2 de Saccharomyces cerevisiae (y sus homólogos mamíferos como FRAP y mTOR), el producto genético de la ataxia telangiectasia (ATR) y la subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente del DNA (DNA-PK). Véase, en general, Hunter, Cell, 83:1-4 (1995).

La PI 3-quinasa también parece estar implicada en diversos aspectos de la activación leucocitaria. Se ha demostrado que la actividad de la PI 3-quinasa asociada a p85 está físicamente asociada con el dominio citoplasmático de CD28, que es una importante molécula coestimuladora para la activación de las células T en respuesta al antígeno (Pages et al., Nature, 369:327-29 (1994); Rudd, Immunity, 4:527-34 (1996)). La activación de células T mediante CD28 reduce el umbral para la activación por parte del antígeno e incrementa la magnitud y duración de la respuesta proliferativa. Estos efectos están vinculados a incrementos en la transcripción de una serie de genes entre los que se incluyen la interleucina-2 (IL2), un importante factor de crecimiento de células T (Fraser et al., Science, 251:313-16 (1991)). La mutación de CD28 de forma que ya no pueda interactuar con la PI 3-quinasa impide que se inicie la producción de IL2, lo que sugiere un papel fundamental de la PI 3-quinasa en la activación de células T.

Los inhibidores específicos contra miembros individuales de una familia de enzimas representan herramientas sumamente valiosas para descifrar las funciones de cada enzima. Dos compuestos, LY294002 y wortmanina, se han utilizado ampliamente como inhibidores de la PI 3-quinasa. No obstante, estos compuestos son inhibidores no específicos de la PI3K, dado que no distinguen entre los cuatro miembros de la familia de las PI 3-quinasas de clase I. Por ejemplo, los valores IC_{50} de la wortmanina frente a cada una de las diversas PI 3-quinasas de clase I se encuentran en el rango de 1-10 nM. De igual modo, los valores IC_{50} de LY294002 frente a cada una de estas PI 3-quinasas se encuentran en torno a 1 \muM (Fruman et al., Ann Rev Bio-chem, 67:481-507 (1998)). Por eso, la utilidad de estos compuestos para estudiar las funciones de cada una de las PI 3-quinasas de Clase I es limitada.

Basándose en los estudios con wortmanina, existen pruebas de que la función de la PI 3-quinasa también es necesaria para algunos aspectos de la señalización leucocitaria a través de los receptores unidos a proteína G (Thelen et al., Proc Natl Acad Sci USA, 91:4960-64 (1994)). Por otra parte, se ha demostrado que la wortmanina y LY294002 bloquean la migración del neutrófilo y la liberación del superóxido. No obstante, puesto que estos compuestos no distinguen entre las diversas isoformas de PI3K, no está claro qué isoforma o isoformas de PI3K en concreto están implicadas en estos fenómenos.

1

1100

En vista de las consideraciones anteriores, está claro que no se dispone de suficiente información acerca de las características estructurales y funcionales de las enzimas PI 3-quinasa, incluyendo la localización subcelular, los estados de activación, la afinidad por el sustrato y similares. Por otra parte, las funciones que estas enzimas realizan tanto en tejidos sanos como en tejidos enfermos están por aclarar. En particular, la función de PI3K\delta en los leucocitos no se ha caracterizado anteriormente y los conocimientos relativos a su función en la fisiología humana siguen siendo limitados. La coexpresión en estos tejidos de otras isoformas de PI3K ha confundido hasta ahora los esfuerzos por segregar las actividades de cada enzima. Por otra parte, la separación de las actividades de las diversas isoenzimas PI3K puede no resultar posible sin la identificación de inhibidores que demuestren unas características de inhibición selectivas. De hecho, los Solicitantes no tienen constancia en estos momentos de que se haya demostrado la existencia de estos inhibidores selectivos de las isoenzimas PI3K.

Por tanto, existe la necesidad en el campo de profundizar en la caracterización estructural del polipéptido PI3K\delta. También existe la necesidad de profundizar en la caracterización funcional de PI3K\delta. Por otra parte, necesitamos ampliar nuestros conocimientos de PI3K\delta por lo que respecta a las interacciones estructurales de p110\delta, tanto con su subunidad reguladora como con otras proteínas de la célula. También sigue pendiente el descubrimiento de inhibidores selectivos o específicos de las isoenzimas PI3K, al objeto de poder caracterizar mejor las funciones de cada una de ellas. En particular, el descubrimiento de los inhibidores selectivos o específicos de PI3K\delta resulta recomendable para estudiar el papel de esta isoenzima y para el desarrollo de productos farmacéuticos que modulen su actividad.

Un aspecto de la presente invención consiste en proporcionar compuestos que puedan inhibir la actividad biológica de la PI3K\delta humana. Otro aspecto de la invención consiste en proporcionar compuestos que inhiban la PI3K\delta de forma selectiva, manteniendo una potencia inhibidora relativamente baja con respecto a las demás isoformas de PI3K. Otro aspecto de la invención consiste en proporcionar métodos para caracterizar la función de la PI3K\delta humana. Otro aspecto de la invención consiste en proporcionar métodos para modular de forma selectiva la actividad de la PI3K\delta humana, promoviendo así el tratamiento médico de enfermedades mediadas por la disfunción de la PI3K\delta. Otros aspectos y ventajas de la invención resultarán obvios de inmediato para el profesional con los conocimientos normales en el campo.

Ahora se ha descubierto que estos y otros aspectos se pueden conseguir con la presente invención, que, por una parte, es un método in vitro o ex vivo para alterar la función leucocitaria, consistente en poner en contacto los leucocitos con un compuesto que inhiba selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en los leucocitos. Según el método, los leucocitos pueden comprender células seleccionadas del grupo compuesto por neutrófilos, linfocitos B, linfocitos T y basófilos.

Por ejemplo, en los casos en los que los leucocitos comprendan neutrófilos, el método puede consistir en la alteración de la función de al menos un neutrófilo seleccionado del grupo, consistente en estimulación de la liberación del superóxido, estimulación de la exocitosis y migración quimiotáctica. Preferiblemente el método no altera de forma sustancial la fagocitosis o la eliminación de bacterias por parte de los neutrófilos. En los casos en los que los leucocitos comprendan linfocitos B, el método puede consistir en la alteración de la proliferación de los linfocitos B o de la producción de anticuerpos de los linfocitos B. En los casos en los que los leucocitos comprendan linfocitos T, el método puede consistir en la alteración de la proliferación de los linfocitos T. En los casos en los que los leucocitos comprendan basófilos, el método puede consistir en alterar la liberación de histamina de los basófilos.

En los métodos de la invención en los que se emplee un inhibidor de PI3K\delta selectivo, es preferible que el compuesto sea al menos 10 veces más selectivo para la inhibición de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K de clase I en un ensayo realizado con células. Más preferiblemente, el compuesto será al menos 20 veces más selectivo para la inhibición de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K de clase I en un ensayo realizado con células. Todavía más preferiblemente, el compuesto será al menos 50 veces más selectivo para la inhibición de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K de clase X en un ensayo bioquímico.

La presente invención proporciona los compuestos, métodos y usos recogidos en el conjunto de reivindicaciones adjunto. Las características preferibles de la presente invención se recogen en las reivindicaciones dependientes adjuntas.

Los compuestos selectivos preferibles útiles de acuerdo con la presente invención incluyen los compuestos que presentan la estructura (I):

2

donde A es un sistema de anillo bicíclico o monocíclico opcionalmente sustituido que contiene al menos dos átomos de nitrógeno y al menos un anillo del sistema es aromático;

X se selecciona del grupo compuesto por CHR^{b}, CK_{2}CHR^{b}, y CH=C(R^{b});

Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, SO, SO_{2}, NH, O, C(=O), OC(=O), C(=O)O, y NHC(=O)CH_{2}S;

R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno. C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, halo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, NO_{2}, OR^{a}, OCF_{3}, N(R^{a})_{3}, CN, OC(=O)R^{a}, C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, ariloOR^{b}, Het, NR^{a}C(=O)C_{1-3}alquilenoC(=O)OR^{a}, ariloOC_{1-3}alquileno-N(R^{a})_{2}, ariloOC(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, OC_{1-4}
alquilenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C(=O)-NR^{a}SO_{2}R^{a}, C_{1-4}alquilenoN,(R^{a})_{2}, C_{2-6}alqueni-
lenoN(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}-alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoCH
(OR^{b})CH_{2}N(R^{a})_{2}, OC_{1-4}al-quilenoHet, OC_{2-4}alquilenoOR^{a}, OC_{2-4}alquilenoNR^{a}C(=O)OR^{a}, NR^{a}C_{1-4}alquilenoN(R^{a}), NR^{a}C(=O)R^{a}, NR^{a}C(=O)N(R^{a})_{2}, N(SO_{2}C_{1-4}alquilo)_{2}, NR^{a}(SO_{2}C_{1-4}alquilo), SO_{2}N(R^{a})_{2}, OSO_{2}CF_{3}, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-6}alquilenoOR^{b}, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)N(R^{a})_{2}, NHC(=O)C_{1}-C_{3}alquileno-arilo, C_{3-8}aciclo-
alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, arilo-OC_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, ariloOC(=O)R^{b}, NHC(=O)C_{1-3}alquileno-C_{3-8}heteroci-
cloalquilo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoHet, OC_{1-4}al-quilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{b}, C(=O)C_{1-4}alquilenoHet, y
NHC(=O)haloC_{1-6}alquilo;

o R^{1} y R^{2} se unen para formar un componente con una cadena de alquenileno o alquileno de 3 ó 4 miembros de un anillo de 5 ó 6 miembros, que contiene al menos un heteroátomo;

R^{3} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno opcionalmente sustituido, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}ciclo-alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-4}alquilenocicloalquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{1-3}alquilenoarilo, ariloC_{1-3}alquilo, C(=O)R^{a}, arilo, heteroarilo, C(=O)OR^{a}, C(=O)N(R^{a})_{2}, C(=S)N(R^{a})_{2}, SO_{2}R^{a}, SO_{2}N(R^{a})_{2}, S(=O)R^{a}, S(=O)N(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alqui-
lenoOR^{a}, C(O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, C(=O)C_{1-4}alquilo-enearilo, C(=O)C_{1-4}alquilenoheteroazilo, C_{1-4}alquilenoarilo opcionalmente sustituido por uno o más halos, SO_{2}N(R^{a})_{2}, N(R^{a})_{2}, C(=O)OR^{a}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, CN, NO_{2}, C(=O)R^{a}, OR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{2-4}-alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquilenoC(=O)-C_{1-4}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquilenohetero-arilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)Het, C_{1-4}alquilenoC(=O)
N(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoO-C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}
alquilenoC(=O)-OR^{a}, y C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a};

R^{a} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterociclo-alquilo, C_{1-3}
alquilenoN(R^{a})_{2}, arilo, ariloC_{1-3}alquilo, C_{1-3}-alquilenoaxilo, heteroarilo, heteroariloC_{1-3}alquilo, y C_{1-3}alquilenohete-
ro arilo;

o se unen dos grupos R^{a} para formar un anillo de 5 ó 6 miembros, que puede contener opcionalmente al menos un heteroátomo;

R^{b} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, ariloC_{1-3}alquilo, heteroarilo
C_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, y C_{1-3}alquilo-eneheteroarilo;

Het es un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, saturado o parcial o totalmente insaturado que contiene al menos un heteroátomo seleccionado del grupo compuesto por oxígeno, nitrógeno y azufre, y opcionalmente sustituido por C_{1-4}alquilo o C(=O)OR^{a};

y sales y solvatos de los mismos (por ejemplo, hidratos) farmacéuticamente aceptables,

donde el compuesto es al menos 10 veces más selectivo para la inhibición de PI3K\delta con respecto a otras isoformas de PI3K de clase I en un ensayo realizado con células.

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En otro aspecto, se desvela un método para el tratamiento de una condición médica mediado por neutrófilos, que consiste en la administración a un animal que necesita una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PIK\delta) en los neutrófilos. Las condiciones médicas ejemplares que se pueden tratar de acuerdo con el método revelado incluyen aquellas caracterizadas por una función de los neutrófilos no deseada seleccionada del grupo compuesto por la estimulación de la liberación de superóxido, estimulación de exocitosis y migración quimiotáctica. Preferiblemente, según este aspecto, la actividad fagocítica o la eliminación de bacterias por parte de los neutrófilos se inhibe de forma sustancial.

En otro aspecto, se revela un método que altera una función de los osteoclastos, que comprende el contacto de los osteoclastos con un compuesto que inhibe selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en los osteoclastos.

Según el método, el compuesto puede comprender una fracción que preferiblemente se une al hueso.

En otro aspecto, se revela un método para mejorar un trastorno de reabsorción ósea en un animal que lo necesita, consistente en la administración al animal de una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en los osteoclastos del animal. Un trastorno de reabsorción ósea preferible que se puede someter al tratamiento según el método revelado es la osteoporosis.

En otro aspecto, se revela un método para inhibir el crecimiento o la proliferación de células cancerígenas de origen hematopoyético, que consiste en el contacto de las células cancerígenas con un compuesto que inhibe selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en las células cancerígenas. El método puede ser beneficioso para inhibir el crecimiento o la proliferación de cánceres seleccionados del grupo compuesto por linfomas, mielomas múltiples y leucemias. En otro aspecto, se revela un método para inhibir la actividad quinasa de un polipéptido de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta), que consiste en un contacto del polipéptido PI3K\delta con un compuesto que presente la estructura genérica (I): Los compuestos preferibles útiles de acuerdo con la invención incluyen compuestos seleccionados del grupo consistente en:

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donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, y NH;

R^{4} se selecciona del grupo compuesto por H, halógeno, NO_{2}, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y CF_{3};

R^{5} se selecciona del grupo compuesto por H, OCH_{3}, y halo;

o R^{4} y R^{5} junto con C-6 y C-7 del sistema del anillo de quinazolina definen un anillo aromático de 5 ó 6 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos de O, H, o S;

R^{6} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alcoxifenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)OC_{2}H_{5}, y morfolinilo;

R^{d}, independientemente, se selecciona del grupo compuesto por NH_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S (C_{1-3}alquilo), OH, NH(C_{1-3}alquilo), N(C_{1-3}alquilo)_{2}, NH(C_{1-3}alquilenofenilo), y

4

q es 1 o 2,

siempre que al menos uno de R^{4} y R^{5} sea distinto a H cuando R^{6} sea fenilo o 2-clorofenilo.

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Más preferiblemente, el compuesto se selecciona del grupo compuesto por:

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donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, y NH;

R^{7} se selecciona del grupo compuesto por H, halo, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y CF_{3};

R^{8} se selecciona del grupo compuesto por H, OGH_{3}, y halógeno;

o R^{7} y R^{8} junto con C-6 y C-7 del sistema del anillo de quinazolina definen un anillo aromático de 5 ó 6 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos de O, N, o S;

R^{9} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)-OC_{2}H_{5}, y morfolinilo;

R^{d}, independientemente, se selecciona del grupo compuesto por NH_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S(C_{1-3}alquilo), OH, NH(C_{1-3}alquilo), N(C_{1-3}alquilo)_{2}, NH(C_{1-3}alquilenofenilo); y

q es 1 o 2,

siempre que al menos uno de R^{7} y R^{8} sea distinto a los grupos 6-halo o 6,7-dimetoxi, y que R^{9} sea distinto a 4,-clorofenilo.

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En otro aspecto, se revela un método para alterar la función leucocitaria, consistente en poner en contacto los leucocitos con un compuesto con una estructura general (I).

En otro aspecto se revela una clase de compuestos que se ha observado que inhiben la actividad de PI3K\delta en ensayos bioquímicos y realizados con células, y se espera que demuestren un beneficio terapéutico en condiciones médicas en las que la actividad de PI3K\delta sea excesiva o indeseable. De este modo, la invención proporciona compuestos de clase a-1 con la estructura (II).

Preferiblemente, los compuestos tienen una estructura general (IV)

6

donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, y NH;

R^{10} se selecciona del grupo compuesto por H, halo, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y CF_{3};

R^{11} se selecciona del grupo compuesto por H, OCH_{3}, y halo;

o R^{10} y R^{11} junto con C-6 y G-7 del sistema del anillo de quinazolina definen un anillo aromático de 5 ó 6 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos de O, N, o S;

R^{12} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)C_{2}H_{5}, y morfolinilo;

q es 1 o 2,

siempre que:

(a) al menos uno de R^{10} y R^{11} sea diferente de los grupos 6-halo o 6,7-dimetoxi;

(b) R^{12} sea diferente de 4-clorofenilo; y

(c) al menos uno de R^{10} y R^{11} sea diferente de H cuando R^{12} es fenilo o 2-clorofenilo y X es S.

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Estas y otras características y ventajas de la presente invención se apreciarán en la descripción detallada y los ejemplos que se recogen en el presente documento. La descripción detallada y los ejemplos se proporcionan para facilitar la comprensión de la invención.

La Figura 1 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta de la invención sobre la actividad de las tres isoformas de PI3K.

La Figura 2 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la generación del superóxido por parte de los neutrófilos humanos en presencia de TNF o IgG.

La Figura 3 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la generación del superóxido por parte de los neutrófilos humanos en presencia de TNF o fMLP.

La Figura 4 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la exocitosis de elastasa en presencia fMLP por parte de los neutrófilos humanos.

La Figura 5 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la quimiotaxis inducida por fMLP por parte de los neutrófilos humanos.

La Figura 6 muestra que un inhibidor selectivo de PI3K\delta no afecta a la fagocitosis y eliminación de S. aureus por parte de los neutrófilos.

La Figura 7 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la proliferación y producción de anticuerpos por parte de los linfocitos B humanos.

La Figura 8 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la proliferación de linfocitos B esplénicos murinos estimulados por anti-IgM.

La Figura 9 muestra el efecto de un inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre la exocitosis de elastano en un modelo animal.

La invención proporciona compuestos que inhiben selectivamente la actividad de PI3K\delta. La invención proporciona también métodos in vitro y ex vivo para inhibir la actividad de PI3K\delta, incluyendo métodos para modular selectivamente la actividad de la isoenzima PI3K\delta en las células, especialmente leucocitos, osteoclastos y células cancerígenas.

Son particularmente beneficiosos los métodos para modular selectivamente la actividad de PI3K\delta en el entorno clínico, al objeto de mejorar la enfermedad o los trastornos mediados por la actividad de PI3K\delta. De este modo, el tratamiento de las enfermedades o los trastornos caracterizados por una actividad excesiva o inadecuada de PI3K\delta se puede abordar mediante el uso de moduladores selectivos de PX3K\delta.

Otros métodos de la invención incluyen una mejor caracterización de la función fisiológica de la isoenzima. Por otra parte, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden inhibidores selectivos de PI3K\delta. Asimismo se proporcionan artículos de fabricación que comprenden un compuesto inhibidor selectivo de PI3K\delta (o una composición farmacéutica que comprende el compuesto), así como instrucciones para utilizar el compuesto. Ahora se describen los detalles de estas y otras realizaciones útiles de la invención.

Los métodos descritos en el presente se benefician del uso de compuestos que inhiben de forma selectiva, y preferiblemente inhiben de forma específica, la actividad de PI3K\delta en las células, incluyendo células in vitro o ex vivo. Las células útiles en los métodos incluyen las que expresan PI3K\delta endógena, donde endógena indica que las células expresan la introducción recombinante ausente de PI3K\delta en las células de uno o más polinucleótidos que codifican un polipéptido de PI3K\delta o un fragmento biológicamente activo de ella. Los métodos también abarcan el uso de células que expresan PI3K\delta exógena, donde uno o más polinucleótidos que codifican PI3K\delta o un fragmento biológicamente activo de ella han sido introducidos en las células utilizando procedimientos recombinantes.

De especial relevancia, aunque no se afirma aquí, es que las células pueden ser in vivo, es decir, en un sujeto vivo, como un animal o un humano, donde se puede utilizar un inhibidor de PI3K\delta como terapéutico para inhibir la actividad de PI3K\delta en el sujeto. Alternativamente, las células se pueden aislar como células discretas o en un tejido, para los métodos ex vivo o in vitro. Los métodos in vitro también incluidos en la invención pueden comprender el paso de poner en contacto una enzima PI3K\delta o un fragmento biológicamente activo de ella con un compuesto inhibidor de la invención.

La enzima PI3K\delta puede incluir una enzima purificada y aislada, en la que la enzima es aislada de una fuente natural (por ejemplo, células o tejidos que expresan con normalidad una modificación ausente del polipéptido PI3K\delta mediante tecnología recombinante) o aislada de células modificadas mediante técnicas recombinantes para expresar la enzima exógena.

El término "inhibidor selectivo de PI3K\delta" utilizado aquí se refiere a un compuesto que inhibe la isoenzima PIK\delta de forma más efectiva que las demás isoenzimas de la familia PI3K. Se entiende que un compuesto "inhibidor selectivo de PI3K\delta" es más selectivo para la PI3K\delta que los compuestos denominados de forma convencional y genérica inhibidores de PI3K, como la wortmanina o LY294002. Concomitantemente, la wortmanina y LY294002 se consideran "inhibidores no selectivos de PI3K". Los compuestos de cualquier tipo que regulan negativamente la actividad o la expresión de PI3K\delta de forma selectiva se pueden emplear como inhibidores selectivos de PI3K\delta en los métodos de la invención. Por otra parte, los compuestos de cualquier tipo que regulan negativamente la actividad o la expresión de PI3K\delta de forma selectiva y que poseen unas propiedades farmacológicas aceptables se pueden emplear como inhibidores selectivos de PI3K\delta en los métodos terapéuticos de la invención.

Las eficacias relativas de los compuestos como inhibidores de la actividad de una enzima (u otra actividad biológica) se pueden establecer determinando las concentraciones a las que cada compuesto inhibe la actividad en un grado predefinido para, a continuación, comparar los resultados. Típicamente, la determinación preferible es la concentración que inhibe el 50% de la actividad en un ensayo bioquímico, es decir que la determinación de la concentración inhibidora del 50% o IC_{50} se puede conseguir utilizando técnicas convencionales conocidas en el campo. En general, una IC_{50} se puede determinar midiendo la actividad de una determinada enzima en presencia de una serie de concentraciones del inhibidor estudiado. A continuación, los valores obtenidos experimentalmente de la actividad de la enzima se relacionan con las concentraciones del inhibidor utilizadas. La concentración del inhibidor que demuestra una actividad de la enzima del 50% (en comparación con la actividad en ausencia de cualquier inhibidor) se toma como el valor EC_{50}. Del mismo modo, se pueden definir otras concentraciones inhibidoras a través de determinaciones apropiadas de la actividad. Por ejemplo, en algunos contextos puede resultar recomendable establecer una concentración inhibidora del 90, es decir IC_{90}, etc.

Por consiguiente, alternativamente se puede entender que un "inhibidor selectivo de PI3K\delta" se refiere a un compuesto que presenta una concentración inhibidora del 50% (IC_{50}) con respecto a PI3K\delta, que es al menos 10 veces, preferiblemente al menos 20 veces e idealmente al menos 30 veces inferior al valor IC_{50} con respecto a alguno o a todos los demás miembros de la familia de PI3K de clase I. El término "inhibidor específico de PI3K\delta" se puede entender que se refiere a un compuesto inhibidor selectivo de PI3K\delta que presenta un valor IC_{50} con respecto a PI3K\delta que es al menos 50 veces, preferiblemente al menos 100 veces, más preferiblemente al menos 200 veces e idealmente al menos 500 veces inferior al valor IC_{50} con respecto a alguno o a todos los demás miembros de la familia PI3K de clase I.

Entre otras cosas, la invención proporciona métodos para inhibir la función leucocitaria. Más concretamente, la invención proporciona métodos para inhibir o suprimir las funciones de los neutrófilos y de los linfocitos T y B. Con respecto a los neutrófilos, se ha averiguado de forma imprevista que la inhibición de la actividad de PI3K\delta inhibe las funciones de los neutrófilos. Por ejemplo, se ha observado que los compuestos de la invención provocan la inhibición de las funciones clásicas de los neutrófilos, tales como la estimulación de la liberación del superóxido, la estimulación de la exocitosis y la migración quimiotáctica. No obstante, también se ha observado que el método de la invención permite la supresión de determinadas funciones de los neutrófilos, sin afectar sustancialmente a otras funciones de esas células. Por ejemplo, se ha observado que la fagocitosis de las bacterias por parte de los neutrófilos no se ve sustancialmente inhibida por los compuestos inhibidores selectivos de PI3K\delta de la invención.

Así pues, la invención incluye métodos para inhibir las funciones de los neutrófilos, sin inhibir sustancialmente la fagocitosis de las bacterias. Las funciones de los neutrófilos susceptibles de inhibición de acuerdo con el método incluyen cualquier función mediada por la actividad o expresión de PIK\delta. Estas funciones incluyen, a título meramente enunciativo, la estimulación de la liberación de superóxido, la estimulación de la exocitosis o desgranulación, la migración quimiotáctica, la adhesión al endotelio vascular (por ejemplo, la captura/unión de los neutrófilos, la activación del neutrófilo, actividad y/o la unión de neutrófilos al endotelio), la diapédesis o emigración a través del endotelio a tejidos periféricos. En general, estas funciones se pueden denominar colectivamente "funciones inflamatorias", dado que por lo general están relacionadas con la respuesta del neutrófilo a la inflamación. Las funciones inflamatorias de los neutrófilos se pueden distinguir de las funciones de eliminación de bacterias que presentan estas células, como la fagocitosis y eliminación de bacterias. Por consiguiente, la invención incluye también métodos para el tratamiento de enfermedades en las que una o más de las funciones inflamatorias de los neutrófilos son anómalas o indeseadas.

También se ha establecido a través de la invención que PI3K\delta participa en la estimulación de la proliferación de linfocitos, incluyendo las células B y T. Por otra parte, parece que PI3K\delta participa en la estimulación de la secreción de los anticuerpos de las células B. Se han empleado compuestos inhibidores selectivos de PI3K\delta de la invención para establecer que estos fenómenos se pueden anular mediante la inhibición de PI3K\delta. Así pues, la invención incluye métodos para inhibir la proliferación linfocitaria, y métodos para inhibir la producción de anticuerpos de los linfocitos B. Entre otros métodos proporcionados por la invención se incluyen métodos para el tratamiento de enfermedades en las que una o más de estas funciones linfocitarias son anómalas o indeseables.

Ahora se ha determinado que la actividad de PI3K\delta se puede inhibir de forma selectiva o específica para facilitar el tratamiento de una enfermedad mediada por PI3K\delta, reduciendo o eliminando, al mismo tiempo, las complicaciones típicamente asociadas con la inhibición concomitante de la actividad de las demás I PI 3-quinasas de clase I. Para ilustrar esta realización, los métodos de la invención se pueden practicar utilizando miembros de una clase de compuestos que se haya averiguado que permiten una inhibición selectiva de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K.

Los métodos de esta realización se pueden practicar utilizando compuestos que presenten la estructura general (III). Los métodos preferibles emplean compuestos que se ha demostrado empíricamente que permiten como mínimo 10 veces la inhibición selectiva de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K. Por ejemplo, los métodos se pueden practicar utilizando los siguientes compuestos:

3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilo-sulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-fluorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo)-5-metil-2-(9H-purin-ilo-ilsulfanilmetilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2,6-diclorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilo-sulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-metoxifenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-butilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-morfolin-4-ilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona, sal de acetato;

8-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6,7-difluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-piridin-4-ilo-3H-quinazo1in-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-trifluorometilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(4-metilpiperazin-1-ilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona, sal de acetato;

3-(2-clorofenilo)-6-hidroxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

[5-fluoro-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo] éster etílico de ácido acético;

3-(2,4-dimetoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bifenilo-2-il-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-fenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-isopropilfenilo)-3H-quinazolin-4-ona; y

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona.

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También se ha determinado que los métodos de la invención se pueden practicar de forma provechosa utilizando miembros de una clase de compuestos que presentan una actividad inhibidora de PI3K\delta, facilitando así la inhibición de la actividad de PI3K\delta en enfermedades mediadas por la misma. Por ejemplo, en esta realización, los métodos de la invención se pueden practicar utilizando compuestos que presentan la estructura general (I).

7

X se selecciona del grupo compuesto por CHR^{b}, CH_{2}CHR^{b}, y CH=C(R^{b});

Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, SO, SO_{2}, NH, O, C(=O), OG(-O), C(=O)O, y NHC(=O)CH_{2}S;

R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, halo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, NO_{2}, OR^{a}, OCF_{3}, N(R^{a})_{2}, CN, OC(=O)R^{a}, C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, arilOR^{b}, Het, NR^{a}C(=O)C_{1-3}alquilenoC(=O)OR^{3}, arilOC_{1-3}alquileno-N(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, OC_{1-4}alqui-
lenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C(=O)-NR^{a}SO_{2}R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{2-6}alquenilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoCH(OR^{b})
CH_{2}N(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoOR^{a}, OC_{2-4}alquileno-NR^{a}C(=O)OR^{a}, NR^{a}C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, NR^{a}
C(=O)R^{a}, NR^{a}C(=O)N(R^{a})_{2}, N(SO_{2}C_{1-4}alquilo)_{2}, NR^{a}(SO_{2}C_{1-4}alquilo), SO_{2}N(R^{a})_{2}, OSO_{2}CF_{3}, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-6}alquilenoOR^{b}, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)N(R^{a})_{2}, NHC(=O)C_{1}-C_{3}alquilenoarilo, C_{3-8}cicloal-
quilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, arilOC_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{b}, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoC_{3-8}heterocicloalqui-
lo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoHet, OC_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{b}, C(=O)C_{1-4}alquilenoHet, y NHC(=O)halo
C_{1-6}alquilo;

R^{3} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno sustituido opcionalmente, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-4}alquilenocicloalquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{1-3}alquilenoarilo, arilC_{1-3}alquil, C(=O)R^{a}, arilo, heteroarilo, C(=O)OR^{a}, C(=O)N(R^{a})_{2}, C(=S)N(R^{a})_{2}, SO_{2}R^{a}, SO_{2}N(R^{a})_{2}, S(=O)R^{a}, S(=O)N(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}-alquile-
noOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, C(=O)C_{1-4}alquilo-enearilo, C(=O)C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoarilo opcionalmente sustituido por uno o más de halo SO_{2}N(R^{a})_{2}, N(R^{a})_{2}, C(=O)OR^{a}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, CN, NO_{2}, C(=O)R^{a}, OR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquileno-C(=O)C_{1-4}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquileno-heteroarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)Het, C_{1-4}alquilenoC(=O)-
N(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}
alquilenoC(=O)OR^{a}, y C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquileno-C(=O)OR^{a};

R^{a} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno C_{1-6}, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, arilo, arilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, heteroarilo, heteroarilC_{1-3}alquilo, y C_{1-3}alquilenoheteroarilo;

R^{b} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-5}alquilo, arilo, heteroarilo, ariloC_{1-3}alquilo, heteroarilo
C_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, y C_{1-3}alquilenoheteroarilo;

y sales y solvatos de los mismos (por ejemplo, hidratos) farmacéuticamente aceptables.

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Por ejemplo, los métodos de la invención pueden emplear compuestos que presenten una actividad inhibidora de PI3K\delta, como sigue:

3-(2-isopropilfenilo)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilo-sulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2,6-diclorofenilo)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-butilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

8-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-piridin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-trifluorometilo-3H-quinazolin-4ona;

3-bencilo-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(4-metilpiperazin-1-ilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-cruinazolin-4-ona, sal de acetato;

3-(2-clorofenilo)-6-hidroxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazo1in-4-ona;

3-bifenilo-2-ilo-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-t-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-fenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(4-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-bromo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-3H-quinazolin-4-ona;

6-bromo-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-benzo[g]quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona; y

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-3H-quinazolin-4-ona.

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La invención también proporciona compuestos que son inhibidores selectivos de la actividad de PI3K\delta. Los compuestos demuestran la inhibición de PIK\delta en ensayos bioquímicos, y alteran selectivamente la función de las células que expresan PI3K\delta en ensayos realizados con células. Como se describe en el presente, se ha demostrado que los compuestos de la invención inhiben determinadas funciones de los neutrófilos y otros leucocitos, así como funciones de los osteoclastos.

En general, los compuestos proporcionados por la invención presentan la estructura general (I), una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos:

8

X se selecciona del grupo compuesto por CHR^{b}, CH_{2}CHR^{b}, y CH=C(R^{b});

R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, halo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, NO_{2}, OR^{a}, OCF_{3}, N(R^{a})_{2}, CN, OC(=O)R^{a}, C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, arilOR^{b}, Het, NR^{a}C(=O)C_{1-3}alquilenoC(=O)OR^{a}, arilOC_{1-3}alquileno-N(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, OC_{1-4}alqui-
lenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C(=O)-NR^{a}SO_{2}R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{2-6}alquenilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)-NR^{a}C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoCH(OR^{b})
CH_{2}N(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoOR^{a}, OC_{2-4}alquileno-NR^{a}C(=O)OR^{a}, NR^{a}C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, NR^{a}
C(=O)R^{a}, NR^{a}C(=O)N(R^{a})_{2}, N(SO_{2}C_{1-4}alquilo)_{2}, NR^{a}(SO_{2}C_{1-4}alquilo), SO_{2}N(R^{a})_{2}, OSO_{2}CF_{3}, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-6}alquilenoOR^{b}, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)N(R^{a})_{2}, NHC(=O)C_{1}-C_{3}alquilenoarilo, C_{3-8}ciclo-
alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, arilOC_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{b}, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoC_{3-8}heterociclo-
alquilo, NHC(=O)C_{1-3}-alquilenoHet, OC_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{b}, C(=O)C_{1-4}alquilenoHet, y NHC(=O)haloC_{1-6}alquilo;

R^{3} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno sustituido opcionalmente, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-4}alquilenocicloalquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{1-3}alquilenoarilo, arilC_{1-3}alquilo, C(=O)R^{a}, arilo, heteroarilo, C(=O)OR^{a}, C(=O)N(R^{a})_{2}, C(=S)N(R^{a})_{2}, SO_{2}R^{a}, SO_{2}N(R^{a})_{2}, S(=O)R^{a}, S(=O)N(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}-al-
quilenoOR^{a}, C(=O)NR^{3}C_{1-4}alquilenoHet, C(=O)C_{1-4}alquilenoarilo, C(=O)C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoari-
lo opcionalmente sustituido por uno o más de halo SO_{2}N(R^{a})_{2}, N(R_{a})_{2}, C(=O)OR^{a}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, CN, NO_{2}, C(=O)R^{a}, OR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquilenoC(=O)-C_{1-4}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)Het, C_{1-4}alquilenoC(=O)N(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoO-C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquileno
C(=O)-OR^{a}, y C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a};

R^{a} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-3}
alquilenoN(R^{a})_{2}, arilo, arilC_{1-3}alquil, C_{1-3}alquilenoarilo, heteroarilo, heteroariloC_{1-3}alquilo, y C_{1-3}alquilenohetero-
arilo;

R^{b} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, ariloC_{1-3}alquilo, heteroarilo
C_{1-3} alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, y C_{1-2}alquil-eneheteroarilo;

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El término "alquilo" utilizado aquí incluye grupos de hidrocarburos de cadenas rectas y ramificadas que contienen el número indicado de átomos de carbono, típicamente metilo, etilo y los grupos de butilo y propilo de cadena recta y ramificada. El grupo de los hidrocarburos puede contener hasta 16 átomos de carbono, preferiblemente de uno a ocho átomos de carbono. El término "alquilo" incluye "alquilo unido", es decir un grupo de hidrocarburos policíclicos o bicíclicos C_{5}-C_{16}, por ejemplo, norbornilo, adamantilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[2.2.1]-heptilo, biciclo[3.2.1]octilo, o decahidronaftilo. El término "cicloalquilo" se define como un grupo de hidrocarburos C_{3}-C_{8} cíclicos, como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo y ciclopentilo.

El término "alquenilo" se define de forma idéntica a "alquilo", salvo por que contienen un enlace doble carbono-carbono. "Cicloalquenilo" se define de forma similar a cicloalquilo, salvo porque hay un enlace doble carbono-carbono presente en el anillo.

El término "alquileno" se refiere a un grupo de alquilos que tiene un sustituyente. Por ejemplo, el término "C_{1-3}alquilenoarilo" se refiere a un grupo de alquilos que contiene de uno a tres átomos de carbono, y sustituido por un grupo de arilos.

El término "halo" o "halógeno" utilizado aquí incluye flúor, bromo, cloro e yodo.

El término "haloalquilo" se define aquí como un grupo de alquilos sustituidos por uno o más sustituyentes halo, sea fluoro, cloro, bromo, yodo o combinaciones de los mismos. Del mismo modo, "halocicloalquilo" se define como un grupo de cicloalquilos que tiene uno o más sustituyentes halo.

El término "arilo", sólo o combinado, se define aquí como un grupo aromático monocíclico o policíclico, preferiblemente un grupo aromático monocíclico o policíclico, como fenilo o naftilo. A menos que se indique lo contrario, un grupo "arilo" puede ser o no ser sustituido, por ejemplo, por uno o más, y en particular entre uno y tres halos, alquilos, fenilos, hidroxialquilos, alcoxis, alcoxialquilos, haloalquilos, nitros, aminos, alquilaminos, acilaminos, alquiltios, alquilsulfinilos y alquilsulfonilos. Algunos grupos arilos incluyen fenil, naftil, bifenil, tetra-hidronaftil, clorofenil, fluorofenil, amino-fenil, metilfenil, metoxifenil, trifluoro-metilfenil, nitrofenil, carboxifenil y similares. Los términos "arilC_{1-3}alquil" y "heteroaril-C_{1-3}alquil" se definen como un grupo arilo o heteroarilo que cuenta con un sustituyente C_{1-3}alquilo.

El término "heteroarilo" se define aquí como un sistema de anillo monocíclico o bicíclico que contiene uno o dos anillos aromáticos y al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, y que puede ser o no ser sustituido, por ejemplo, por uno o más, y en particular de uno a tres sustituyentes, como halo, alquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo. Algunos ejemplos de los grupos heteroarilos incluyen tienilo, furilo, piridilo, oxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, indolilo, triazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, imidizolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, tiazolilo y tiadiazolilo.

El término "Het" se define como grupos monocíclicos, bicíclicos y tricíclicos que contienen uno o más heteroátomos seleccionados del grupo compuesto por oxígeno, nitrógeno y azufre. Un grupo "Het" también puede contener un grupo oxo (=O) unido al anillo.

Algunos ejemplos de grupos Het incluyen 1,3-dioxolano, 2-pirazolina, pirazolidina, pirrolidina, piperazina, 1-pirrolina, 2H-pirano, 4H-pirano, morfolina, tiofolina, piperidina, 1,4-ditiano, y 1,4-dioxano.

El término "hidroxi" se define como -OH.

El término "alcoxi" se define como -OR, donde R es alquilo.

El término "alcoxialquilo" se define como un grupo alquilo en el que se ha sustituido un hidrógeno por un grupo alcoxi. El término "(alquiltio) alquilo" se define de forma similar a un alcoxialquilo, salvo por que hay un átomo de azufre, en lugar de un átomo de oxígeno, presente.

El término "hidroxialquilo" se define como un grupo hidroxi unido a un grupo alquilo.

El término "amino" se define como -NH_{2}, y el término "alquilamino" se define como -NR_{2}, donde al menos una R es alquilo y la segunda R es alquilo o hidrógeno.

El término "acilamino" se define como RC(=O)N, donde R es alquilo o arilo.

El término "alquiltio" se define como -SR, donde R es alquilo.

El término "alquilsulfinilo" se define como R-SO_{2}, donde R es alquilo.

El término "acilamino" se define como RC(=O)N, donde R es alquilo o arilo.

El término "alquiltio" se define como -SR, donde R es alquilo.

El término "alquilsulfinilo" se define como R-SO_{2}, donde R es alquilo.

El término "alquilsulfonilo" se define como R-SO_{3}, donde R es alquilo.

El término "nitro" se define como -NO_{2}.

El término "trifluorometilo" se define como -CF_{3}.

El término "trifluorometoxi" se define como -OCF_{3}.

El término "ciano" se define como -CN.

En las realizaciones preferibles, X se selecciona del grupo compuesto por CH_{2}, CH_{2}CH_{2}, CH=CH, CH(CH_{3}), CH_{2}CH(CH_{3}), y C(CH_{3})_{2}. En otras realizaciones preferibles, Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, y NH.

El anillo A puede ser monocíclico o bicíclico. Los sistemas de anillo A monocíclico son aromáticos. Los sistemas de anillo A bicíclico contienen al menos un anillo aromático, pero ambos anillos pueden ser aromáticos. Algunos ejemplos de sistema de anillo A incluyen, a título meramente enunciativo, imidazolilo, pirazolilo, 1,2,3-triazolilo, piridizinilo, pirimidinilo, pirazinilo, 1,3,5-triazinilo, purinilo, cinnolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1,8-naftiridinilo, pteridinilo, 1H-indazolilo, y benzimidazolilo.

En un grupo preferible de compuestos de fórmula (I), A se representa con un sistema de anillo opcionalmente sustituido seleccionado del grupo compuesto por:

9

900

El sistema de anillo A puede ser sustituido opcionalmente por uno a tres, y preferiblemente por uno o dos, sustituyentes seleccionados del grupo compuesto por N(R^{a})_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S(C_{1-3}alquilo), OR^{a}, y

10

Los sustituyentes específicos incluyen, aunque sin limitación a, NH_{2}, NH(CH_{3}), N(CH_{3})_{2}, NHCH_{2}C_{6}H_{5}, NH(C_{2}H_{5}), Cl, F, CH_{3}, SCH_{3}, OH, y

11

En otro grupo preferible de compuestos de fórmula (I), R^{1} y R^{2}, independientemente, están representados por hidrógeno, OR^{a}, halo, C_{1-6}alquilo, CF_{3}, NO_{2}, N(R^{a})_{2}, NR^{a}C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-3}alquilenoOR^{a}. Los sustituyentes específicos incluyen, aunque sin limitarse a, H, OCH_{3}, Cl, Br, F, CH_{3}, CF_{3}, NO_{2}, OH, N(CH_{3})_{2},

12

y O(CH_{2})_{2}OCH_{2}C_{6}H_{5}. R^{1} y R^{2} también se pueden unir para formar un anillo, por ejemplo, un anillo de fenilo.

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En una realización preferible, R^{3} se selecciona del grupo compuesto por uno de los siguientes elementos opcionalmente sustituidos: C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, C_{3-8}acicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquileno
Het, C_{1-4}alquileno-cicloalquilo, C_{1-4}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquileno-C(=O)N(R^{a})_{2}, C_{1_4}alquilenoC(=O)Het, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}. Los grupos R^{3} específicos incluyen, aunque sin limitarse a,

13

\vskip1.000000\baselineskip

14

\newpage

El grupo R^{3} se puede sustituir por uno a tres sustituyentes, por ejemplo, halo, OR^{a}, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, NO_{2}, N(R^{a})_{2}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, NR^{a}C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, N(R^{a})C_{1-4}alquileno(R^{a})_{2}, SO_{2}N(R^{a})_{2}, CN, C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}. Los sustituyentes específicos para el grupo R^{3} incluyen, aunque sin limitarse a, Cl, F, CH_{3}, CH(CH_{3})_{2}, OCH_{3}, C_{6}H_{5}, NO_{2}, NH_{2}, NHC(=O)CH_{3}, CO_{2}H, y N(CH_{3})CH_{2}CH_{2}N(CH_{3})_{2}.

Conforme se ha utilizado aquí, la estructura del anillo de quinazolina, y la numeración de la estructura del anillo, es

15

La estructura del anillo de purina, y la numeración de la estructura del anillo, es

16

Los compuestos proporcionados por la invención se ejemplifican como sigue;

3-(2-isopropilfenilo)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-butilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

8-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-piridin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-8-trifluorometilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bifenilo-2-ilo-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(4-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-bromo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-3H-quinazolin-4-ona;

6-bromo-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-benzo[g]quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona; y

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-3H-quinazolin-4-ona.

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Los compuestos preferibles proporcionados por la invención tienen la estructura (IV), ejemplificada como sigue:

3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-butilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

8-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin4-ona;

3-(3-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-piridin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bifenilo-2-ilo-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(S-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona; y

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona.

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El término "profármaco" utilizado aquí se refiere a compuestos que se transforman rápidamente in vivo en un compuesto con la fórmula estructural (I) mencionada, por ejemplo, mediante hidrólisis. El diseño del profármaco se debate en términos generales en Hardma et al. (Eds.), Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th ed., pp. 11-16 (1996). Un debate a fondo se recoge en Higuchi et al., Prodrugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ASCD Symposium Series, y en Roche (ed.), Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press (1987). Explicado brevemente, la administración de un fármaco está seguida por la eliminación del organismo o alguna biotransformación por la que la actividad biológica del fármaco se reduce o anula. Alternativamente, un proceso de biotransformación puede provocar un subproducto metabólico, que es más activo o igualmente activo en comparación con el fármaco inicialmente administrado. Un conocimiento más profundo de estos procesos de biotransformación permite el diseño de los denominados "profármacos" que, tras una biotransformación, se vuelven fisiológicamente más activos en su estado alterado. Por lo tanto, los profármacos comprenden compuestos farmacológicamente inactivos que se convierten en metabolitos biológicamente activos.

A modo ilustrativo, los profármacos se pueden convertir en una forma farmacológicamente activa mediante la hidrólisis de, por ejemplo, un éster o enlace amida, introduciendo de este modo o exponiendo un grupo funcional al producto resultante. Los profármacos se pueden diseñar para que reaccionen con un compuesto endógeno al objeto de formar un conjugado soluble en agua que mejore las propiedades farmacológicas del compuesto, por ejemplo, aumentando la vida media circulatoria. Alternativamente, los profármacos se pueden diseñar para someterse a una modificación covalente en un grupo funcional con, por ejemplo, ácido glucurónico, sulfato, glutationa, aminoácidos o acetato. El conjugado resultante puede ser inactivado y excretado en la orina o dotado de una mayor potencia que el compuesto matriz. Los conjugados con un elevado peso molecular también se pueden excretar en la bilis, sujetos a la escisión enzimática, y ser devueltos a la circulación, aumentando así de forma efectiva la vida útil biológica del compuesto originalmente administrado.

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Métodos para identificar los reguladores negativos de la actividad de PI3K\delta

La proteína PIK\delta, así como los fragmentos de la misma que poseen actividad biológica, se pueden utilizar para investigar supuestos compuestos reguladores negativos con alguna de las diversas técnicas de investigación de fármacos. Un regulador negativo de PI3K\delta es un compuesto que reduce o elimina la capacidad de PI3K\delta para desempeñar cualquiera de sus funciones biológicas. Un ejemplo de este compuesto es un agente que reduce la capacidad de un polipéptido PI3K\delta para fosforilar fosfatidilinositol o dirigirse a las estructuras apropiadas de una célula. La selectividad de un compuesto que regula negativamente la actividad de PI3K\delta se puede evaluar comparando su actividad sobre PIK\delta con su actividad sobre otras proteínas. Los reguladores negativos selectivos incluyen, por ejemplo, anticuerpos y otras proteínas o péptidos que se unen específicamente a un polipéptido PI3K\delta, oligonucleótidos que se unen específicamente a polipéptidos PI3K\delta, y otros compuestos no péptidos (como moléculas orgánicas sintéticas o aisladas) que interactúan específicamente con polipéptidos PI3K\delta. Los reguladores negativos también incluyen compuestos anteriormente descritos, pero que interactúan con otro compuesto de unión específico de los polipéptidos PIK\delta.

En la actualidad, los objetivos preferibles para el desarrollo de reguladores negativos selectivos de PI3K\delta incluyen, por ejemplo:

(1) las regiones citoplasmáticas de los polipéptidos PI3K\delta que contactan con otras proteínas y/o localizan PI3K\delta dentro de una célula;

(2) las regiones de los polipéptidos PI3K\delta que se unen a otros compuestos de unión específicos;

(3) las regiones de los polipéptidos PI3K\delta que se unen al sustrato;

(4) los sitios reguladores alostéricos de los polipéptidos PI3K\delta que pueden interactuar directamente o no con el lugar activo tras la señal reguladora;

(5) las regiones de los polipéptidos PI3K\delta que median en la multimerización.

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Por ejemplo, un objetivo para el desarrollo de moduladores es la interacción reguladora identificada de p85 con p110\delta, que puede estar implicada en la activación y/o localización subcelular de la fracción p110\delta. Sin embargo, otros moduladores selectivos incluyen aquellos que reconocen el regulador específico o las secuencias de nucleótidos que codifican PI3K\delta. Los moduladores de la actividad de PIK\delta pueden ser terapéuticamente útiles en el tratamiento de una amplia gama de enfermedades y condiciones fisiológicas que implican una actividad de PI3K\delta aberrante.

Por consiguiente, la invención proporciona métodos para caracterizar la potencia de un compuesto de prueba como un inhibidor del polipéptido PI3K\delta, comprendiendo dicho método los pasos de (a) medición de la actividad de un polipéptido PI3K\delta en presencia de un compuesto de prueba; (b) comparación de la actividad del polipéptido PI3K\delta en presencia del compuesto de prueba con la actividad del polipéptido PI3K\delta en presencia de una cantidad equivalente de un compuesto de referencia (por ejemplo, un compuesto inhibidor de PI3K\delta de la invención descrito en el presente), donde una actividad inferior del polipéptido PI3K\delta en presencia del compuesto de prueba que en presencia del compuesto de referencia indica que el compuesto de prueba es un inhibidor más potente que el compuesto de referencia y una actividad superior del polipéptido PI3K\delta en presencia del compuesto de prueba que en presencia del compuesto de referencia indica que el compuesto de prueba es un inhibidor menos potente que el compuesto de referencia.

La invención también proporciona métodos para caracterizar la potencia de un compuesto de prueba como un inhibidor del polipéptido PI3K\delta, que comprende los pasos de (a) determinación de una cantidad de un compuesto de control (por ejemplo, un compuesto inhibidor de PI3K\delta de la invención descrito en el presente): que inhibe una actividad de un polipéptido PI3K\delta en un porcentaje de referencia de inhibición, definiendo así una cantidad inhibidora de referencia para el compuesto de control; (b) determinación de una cantidad de un compuesto de prueba que inhibe una actividad de un polipéptido PI3K\delta en un porcentaje de referencia de inhibición, definiendo así una cantidad inhibidora de referencia para el compuesto de prueba; (c) comparación de la cantidad inhibidora de referencia para el compuesto de prueba con la cantidad inhibidora de referencia para el compuesto de control, donde una cantidad inhibidora de referencia inferior para el compuesto de prueba que para el compuesto de control indica que el compuesto de prueba es un inhibidor más potente que el compuesto de control y una cantidad inhibidora de referencia superior para el compuesto de prueba que para el compuesto de control indica que el compuesto de prueba es un inhibidor menos potente que el compuesto de control. En un aspecto, el método utiliza una cantidad inhibidora de referencia, que es la cantidad del compuesto que inhibe la actividad del polipéptido PI3K\delta en un 50%, 60%, 70%, u 80%. En otro aspecto, el método utiliza una cantidad inhibidora de referencia, que es la cantidad del compuesto que inhibe la actividad del polipéptido PI3K\delta en un 90%, 95%, o 99%. Estos métodos comprenden la determinación de la cantidad inhibidora de referencia de los compuestos en un ensayo bioquímico in vitro, en un ensayo con células in vitro, o en un ensayo in vivo.

La invención también proporciona métodos para identificar un regulador negativo de la actividad de PI3K\delta, que comprende los pasos de (i) medición de la actividad de un polipéptido PI3K\delta en presencia y ausencia de un compuesto de prueba, e (ii) identificación como regulador negativo de un compuesto de prueba que reduce la actividad de PI3K\delta y que compite con un compuesto de la invención para unirse a PI3K\delta. Por otra parte, la invención proporciona métodos para identificar compuestos que inhiben la actividad de PI3K\delta, que comprenden los pasos de (i) puesta en contacto de un polipéptido PI3K\delta con un compuesto de la invención en presencia y ausencia de un compuesto de prueba, e (ii) identificación de un compuesto de prueba como regulador negativo de la actividad de PI3K\delta donde el compuesto compite con un compuesto de la invención para unirse a PI3K\delta. Por tanto, la invención proporciona un método para investigar reguladores negativos candidatos de la actividad de PI3K\delta y/o confirmar el modo de acción de los mismos. Estos métodos se pueden emplear con otras isoformas de PI3K en paralelo, para establecer la actividad comparativa del compuesto de prueba con las isoformas y/o con respecto a un compuesto de la invención.

En estos métodos, el polipéptido PI3K\delta puede ser un fragmento de p110\delta que registra actividad quinasa, es decir un fragmento que comprende el lugar catalítico de p110\delta. Alternativamente, el polipéptido PI3K\delta puede ser un fragmento del dominio de unión a p110\delta de p85 y proporciona un método para identificar moduladores alostéricos de PI3K\delta. Los métodos se pueden emplear en células que expresan PI3K\delta o sus subunidades, de forma endógena o exógena. Por consiguiente, el polipéptido empleado en estos métodos puede estar libre en solución, fijado a un soporte sólido, modificado para desplegarse sobre la superficie de una célula o localizado intracelularmente. De este modo, se puede medir la modulación de la actividad o la formación de complejos de unión entre el polipéptido PI3K\delta y el agente que se pretende probar.

Los polipéptidos PI3K humanos son aptos para ensayos de cribado de alto rendimiento (HTS) realizados con células o bioquímicos de acuerdo con los métodos conocidos y practicados en el campo, incluyendo los sistemas de ensayo con melanóforos para investigar las interacciones receptor-ligando, sistemas de ensayo con levaduras y sistemas de expresión en células de mamíferos. Para una revisión, véase Jayawickreme y Kost, Curr Opin Biotechnol, 8:629-34 (1997). Los ensayos HTS miniaturizados y automatizados también se incluyen como se describe, por ejemplo, en Houston y Banks, Curr Opin Biotechnol, 8:734-40 (1997).

Estos ensayos HTS se utilizan para analizar bancos de compuestos, al objeto de identificar determinados compuestos que presentan una propiedad deseada. Se puede utilizar cualquier banco de compuestos, incluyendo bancos químicos, bancos de productos naturales, y bancos de combinación que comprenden oligopéptidos, oligonucleótidos u otros compuestos orgánicos aleatorios o diseñados.

Los bancos químicos pueden contener compuestos conocidos, análogos con una estructura patentada de compuestos conocidos o compuestos identificados de estudios con productos naturales.

Los bancos de productos naturales son colecciones de materiales aislados de fuentes naturales, típicamente microorganismos, animales, plantas u organismos marinos. Los productos naturales son aislados de sus fuentes mediante fermentación de microorganismos, seguida del aislamiento y la extracción de los caldos de fermentación o mediante la extracción directa de los propios microorganismos o tejidos (plantas o animales). Los bancos de productos naturales incluyen polipéptidos, péptidos no ribosomales y variantes (incluyendo variantes no presentes en la naturaleza) de los mismos. Para una revisión, véase Cane et al., Science, 282:63-68 (1998).

Los bancos de combinación se componen de grandes cantidades de compuestos relacionados, como péptidos, oligonucleótidos u otros compuestos orgánicos en forma de mezcla. Estos compuestos son relativamente fáciles de diseñar y preparar mediante protocolos de síntesis automatizados tradicionales, PCR, clonado o métodos sintéticos patentados. Los bancos de combinación de péptidos y oligonucleótidos son particularmente interesantes.

No obstante, otros bancos de interés incluyen los péptidos, proteínas, peptidomiméticos, colecciones de sintéticos multiparalelo, recombinatorios y polipéptidos. Para una revisión de los bancos y químicos combinatorios así creados, véase Myers, Curr Opin Biotechnol, 8:701-07 (1997).

Una vez que se hayan identificado compuestos que demuestran una actividad como reguladores negativos de la función de PI3K\delta, se puede realizar un programa de optimización en un esfuerzo por mejorar la potencia y selectividad de la actividad. Este análisis de las relaciones estructura-actividad (SAR) implica normalmente una serie iterativa de modificaciones selectivas de las estructuras de los compuestos y su correlación con la actividad bioquímica o biológica. Se pueden diseñar familias de compuestos relacionados que registren todos la actividad deseada, con ciertos miembros de la familia, en concreto los que poseen unos perfiles farmacológicos adecuados, potencialmente aptos como candidatos terapéuticos.

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Usos terapéuticos de los inhibidores de la actividad de PI3K\delta

En el presente se revela un método para inhibir de forma selectiva o específica la actividad de PI3K\delta terapéutica o profilácticamente. El método comprende la administración de un inhibidor selectivo o específico de la actividad de PI3K\delta en una cantidad efectiva del mismo. Este método se puede emplear en el tratamiento de humanos o animales que presentan o pueden presentar cualquier condición cuyos síntomas o patología están asociados con la actividad o expresión de PI3K\delta.

En el presente documento, "tratamiento" se refiere a la prevención del desarrollo de un trastorno en un animal que pueda presentar una predisposición a ese trastorno, pero al que todavía no se le haya diagnosticado; la inhibición del trastorno, es decir la detención de su desarrollo; el alivio del trastorno, es decir causando su regresión; o la mejora del trastorno, es decir reduciendo la gravedad de los síntomas asociados con el mismo. Se entiende que "trastorno" abarca trastornos médicos, enfermedades, condiciones, síndromes y similares, sin limitación.

Los métodos de la invención abarcan diversos modos de tratamiento de un animal, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un primate e idealmente un humano. Entre los animales mamíferos que se pueden tratar se encuentran, por ejemplo, animales de compañía (mascotas), incluyendo perros y gatos; animales de granja, incluyendo ganado, caballos, ovejas, cerdos y cabras; animales de laboratorio, incluyendo ratas, ratones, conejos y cobayas, y primates no humanos y ejemplares del zoo. Los animales no mamíferos incluyen, por ejemplo, aves, peces, reptiles y anfibios.

En un aspecto, el método se puede emplear para tratar sujetos terapéutica o profilácticamente que padecen o pueden padecer un trastorno inflamatorio. Un aspecto de la presente invención se deriva de la implicación de PI3K\delta en los aspectos mediadores del proceso inflamatorio. Sin intención de vincularse a ninguna teoría, se teoriza que, dado que la inflamación implica procesos típicamente mediados por los leucocitos (por ejemplo, neutrófilos, linfocitos, etc.), la activación y transmigración quimiotáctica, y dado que la PI3K\delta puede mediar en estos fenómenos, los antagonistas de PI3K\delta se pueden utilizar para contener las lesiones asociadas con la inflamación.

En el presente documento, "trastorno inflamatorio" se puede referir a cualquier enfermedad, trastorno o síndrome en el que una respuesta inflamatoria excesiva o no regulada provoque unos síntomas inflamatorios excesivos, daños en el tejido anfitrión, o pérdida de función tisular. "Trastorno inflamatorio" también se refiere a un estado patológico mediado por el influjo de leucocitos y/o la quimiotaxis de neutrófilos.

En el presente documento, "inflamación" se refiere a una respuesta de protección localizada provocada por lesiones o por la destrucción de tejidos, que sirve para destruir, diluir o aislar tanto el agente perjudicial como el tejido perjudicado. La inflamación está particularmente asociada con el influjo de leucocitos y/o la quimiotaxis de neutrófilos. La inflamación puede resultar de la infección por organismos patógenos y virus y de medios no infecciosos, como traumatismos o reperfusión, tras un accidente o infarto de miocardio, como respuesta inmunológica a un antígeno extraño y respuestas autoinmunitarias. Por consiguiente, los trastornos inflamatorios aptos para la invención abarcan trastornos asociados con reacciones del sistema de defensa específico así como con reacciones del sistema de defensa no específico.

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En el presente documento, el término "sistema de defensa específico" se refiere al componente del sistema inmunológico que reacciona ante la presencia de antígenos específicos. Entre los ejemplos de inflamación resultante de una respuesta del sistema de defensa específico se incluye la respuesta clásica a antígenos extraños, enfermedades autoinmunes y la respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado mediada por las células T. Enfermedades inflamatorias crónicas, el rechazo de órganos y tejidos trasplantados sólidos, como los trasplantes de médula ósea y de riñón, y la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) son otros ejemplos de reacciones inflamatorias del sistema de defensa específico.

En el presente documento, el término "sistema de defensa no específico" se refiere a trastornos inflamatorios mediados por leucocitos sin memoria inmunológica (como granulocitos y macrófagos). Entre los ejemplos de la inflamación resultante, al menos en parte, de una reacción del sistema de defensa no específico se incluye la inflamación asociada con condiciones como el síndrome de dificultad respiratoria (aguda) del adulto (ARDS) o el síndrome de disfunción orgánica múltiple; lesiones de reperfusión, glomerulonefritis aguda, artritis reactiva, dermatosis con componentes inflamatorios agudos, meningitis purulenta aguda u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central, como el accidente cerebrovascular, lesiones térmicas, enfermedades inflamatorias del intestino, síndromes asociados con la transfusión del granulocito y toxicidad inducida por la citoquina.

En el presente documento "enfermedad autoinmune" se refiere a cualquier grupo de trastornos en el que la lesión tisular esté asociada con respuestas humorales o mediadas por células a los propios componentes del organismo. En el presente documento "enfermedad alérgica" se refiere a cualquier síntoma, daño tisular o pérdida de función tisular resultante de la alergia. En el presente documento "enfermedad artrítica" se refiere a cualquier enfermedad caracterizada por lesiones inflamatorias de las articulaciones atribuibles a diversas etiologías. En el presente documento "dermatitis" se refiere a cualquiera de una amplia familia de enfermedades de la piel caracterizadas por la inflamación de la piel atribuible a diversas etiologías. En el presente documento "rechazo de trasplante" se refiere a cualquier reacción inmunológica dirigida contra el tejido injertado, como órganos o células (por ejemplo, médula ósea) caracterizada por la pérdida de función del tejido injertado y los tejidos circundantes, dolor, tumefacción, leucocitosis y trombocitopenia.

Los métodos terapéuticos incluyen métodos para el tratamiento de trastornos asociados con la activación de células inflamatorias. "Activación de células inflamatorias" se refiere a la inducción de un estímulo (incluyendo, a título meramente enunciativo, citoquinas, antígenos o autoanticuerpos) de una respuesta celular proliferativa, la producción de mediadores solubles (incluyendo, a título meramente enunciativo, citoquinas, radicales de oxígeno, enzimas, prostanoides o aminas vasoactivas), o la expresión en la superficie de la célula de mediadores nuevos o en cantidades aumentadas (incluyendo, a título meramente enunciativo, los principales antígenos de histocompatibilidad o moléculas de adhesión a células) en células inflamatorias (incluyendo, a título meramente enunciativo, monocitos, macrófagos, linfocitos T, linfocitos B, granulocitos -es decir, leucocitos polimorfonucleares, como neutrófilos, basófilos y eosinófilos-, mastocitos, células dendríticas, células de Langerhans y células endoteliales). Los entendidos en el campo apreciarán que la activación de uno de estos fenotipos o de una combinación de ellos en estas células puede contribuir a la iniciación, perpetuación o empeoramiento de un trastorno inflamatorio.

Se ha descubierto que los compuestos de la invención inhiben la liberación de superóxido por parte de los neutrófilos. El superóxido es liberado por los neutrófilos en respuesta a diversos estímulos, entre los que se incluyen los signos de infección, como un mecanismo de eliminación de células. Por ejemplo, se sabe que la liberación de superóxido está inducida por el factor de necrosis tumoral alfa (TNF\alpha), que es liberado por los macrófagos, mastocitos y linfocitos tras el contacto con los componentes bacterianos de la pared de la célula, como liposacáridos (LPS). TNF\alpha es un activador extraordinariamente potente y promiscuo de los procesos inflamatorios, participando en la activación de los neutrófilos y varios otros tipos de células, la inducción de la adhesión leucocito/célula endotelial, la pirexia, el aumento de la producción de MHC clase I y la estimulación de la angiogenesis. Alternativamente, la liberación de superóxido puede ser estimulada por formil-metionil-leucina-fenilalanina (fMLP) u otros péptidos bloqueados en el N-terminal mediante metionina formilada. Por lo general estos péptidos no se encuentran en eucariotas, pero son fundamentalmente característicos de las bacterias e indican la presencia de bacterias en el sistema inmunológico. Los leucocitos que expresan el receptor de fMLP, como los neutrófilos y macrófagos, son estimulados para que migren a los gradientes de estos péptidos (es decir, quimiotaxis) hacia el lugar de la infección. Como se ha demostrado aquí, los compuestos de la invención inhiben la liberación de superóxido estimulada por los neutrófilos en respuesta a TNF\alpha o fMLP. También se ha demostrado que otras funciones de los neutrófilos, incluyendo la estimulación de la exocitosis y la migración quimiotáctica dirigida, son inhibidas por los inhibidores PI3K\delta de la invención. Por consiguiente, cabe esperar que los compuestos de la invención sean útiles para tratar trastornos como los trastornos inflamatorios mediados por cualquiera de estas funciones de los neutrófilos o por todas ellas.

La presente invención proporciona métodos para tratar trastornos como las enfermedades artríticas, como la artritis reumatoide, la artritis monoarticular, osteoartritis, artritis gotosa, espondilitis, enfermedad de Behcet, sepsis, shock séptico, shock endotóxico, sepsis por gram-negativos, sepsis por gram-positivos y síndrome del shock tóxico; síndrome de disfunción orgánica múltiple secundario a una septicemia, traumatismo o hemorragia; trastornos oftámicos, como conjuntivitis alérgica, conjuntivitis vernal, uveítis y oftalmopatía asociada con la tiroides; granuloma eosinofílico; trastornos respiratorios o pulmonares, como asma, bronquitis crónica, rinitis alérgica ARJD3, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica (como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica), silicosis, sarcoidosis pulmonar, pleuresía, alveolitis, vasculitis, enfisema, neumonía, bronquiectasis y toxicidad del oxígeno del pulmón; lesión de reperfusión de miocardio, cerebro o extremidades; fibrosis como fibrosis cística; formación de queloides o formación de tejido de cicatriz; ateroesclerosos; enfermedades autoinmunes, como lupus sistémico eritematoso (SLE), tiroiditis autoinmune, esclerosis múltiple, algunas formas de diabetes y el síndrome de Reynaud; trastornos de rechazo de transplantes, como GVHD y rechazo de aloinjertos; glomerulonefritis crónica; enfermedades inflamatorias del intestino, como la enfermedad de intestino inflamatoria crónica (CIBD), enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y enterocolitis necrotizante; dermatosis inflamatorias como la dermatitis por contacto, dermatitis atópica, psoriasis o urticaria; fiebre y mialgias debido a una infección; trastornos inflamatorios del sistema nervioso central o periférico, como meningitis, encefalitis, y lesiones cerebrales o de la médula espinal debido a traumatismos leves; síndrome de Sjögren; enfermedades que implican una diapedesis leucocitaria; hepatitis alcohólica; neumonía bacteriana; enfermedades mediadas por el complejo antígeno-anticuerpo; shock hipovolémico; diabetes mellitus de tipo I; hipersensibilidad aguda y retardada; enfermedades provocadas discrasis leucocitaria y metástasis; lesión térmica; síndromes asociados con la transfusión de granulocitos y toxicidad inducida por la citoquina.

El método puede resultar útil para tratar sujetos que padezcan o puedan padecer lesiones por reperfusión, es decir lesiones resultantes de situaciones en las que un tejido u órgano experimenta un período de isquemia seguido de reperfusión. El término "isquemia" se refiere a una anemia localizada de un tejido debido a la obstrucción del flujo entrante de sangre arterial. Una isquemia temporal seguida de una reperfusión provoca característicamente una activación del neutrófilo y la transmigración por el endotelio de los vasos sanguíneos de la zona afectada. La acumulación de neutrófilos activados, a su vez, provoca la generación de metabolitos del oxígeno reactivos, que dañan los componentes del tejido u órgano afectado. Este fenómeno de "lesión por reperfusión" está normalmente asociado con estados como el accidente vascular (incluyendo isquemia focal y global), shock hemorrágico, infarto o isquemia de miocardio, transplante de órganos y vasoespasmo cerebral. A título ilustrativo, la lesión por reperfusión se produce a la conclusión de los procedimientos de bypass coronario o durante un fallo cardíaco cuando el corazón, después de haber dejado de recibir sangre, comienza a reperfundir. Se espera que la inhibición de la actividad de PI3K\delta resulte en una disminución de las lesiones por reperfusión en estas situaciones.

Con respecto al sistema nervioso, la isquemia global se produce cuando el flujo de sangre de todo el cerebro se interrumpe durante un período. La isquemia global puede ser consecuencia de un fallo cardíaco. La isquemia focal se produce cuando una parte del cerebro se ve privada de su suministro de sangre normal. La isquemia focal puede ser resultado de una oclusión tromboembólica de un vaso cerebral, un traumatismo craneoencefálico, un edema o un tumor cerebral. Incluso cuando sea temporal, la isquemia focal y global puede provocar importantes daños neuronales. A pesar de que el daño en el tejido nervioso se produce durante horas o incluso días después, la aparición de la isquemia, algunos daños permanentes en los tejidos y nervios se pueden desarrollar en los primeros minutos tras la interrupción del flujo de sangre del cerebro.

La isquemia también puede ocurrir en el corazón en el infarto de miocardio y otros trastornos cardiovasculares en los que las arterias coronarias se obstruyen como resultado de una ateroesclerosis, un trombo o espasmo. Por consiguiente, se cree que la invención resultará útil para el tratamiento de daños en el tejido cardíaco, particularmente los daños resultantes de la isquemia cardíaca o causados por lesiones de reperfusión en mamíferos.

En otro aspecto, los inhibidores selectivos de la actividad de PIK\delta, como los compuestos de la invención, se pueden emplear en métodos para el tratamiento de enfermedades de huesos, especialmente enfermedades en las que la función del osteoclasto es anómala o indeseable. Como se muestra en el Ejemplo 6, más abajo, los compuestos de la invención inhiben la función del osteoclasto in vitro. Por consiguiente, el uso de estos compuestos y otros inhibidores selectivos de PI3K\delta puede resultar útil para el tratamiento de la osteoporosis, la enfermedad de Paget y otros trastornos de reabsorción ósea relacionados.

En otro aspecto, la invención incluye métodos para utilizar compuestos inhibidores de PI3K\delta para inhibir el crecimiento o la proliferación de células cancerígenas de origen hematopoyético, preferiblemente células cancerígenas de origen linfoide y más preferiblemente células cancerígenas relacionadas o derivadas de linfocitos B o progenitores de linfocitos B. Los tipos de cáncer aptos para el tratamiento utilizando el método de la invención incluyen, a título meramente enunciativo, linfomas, como neoplasias malignas de tejidos linfoides y reticuloendoteliales, como linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkins, linfomas no Hodgkins, linfomas linfocíticos y similares; mielomas múltiples; así como leucemias, tales como leucemias linfocíticas, leucemias (mielogenas) mieloides crónicas y similares. Los compuestos inhibidores de PI3K\delta se pueden utilizar para inhibir o controlar el crecimiento o la proliferación de células de leucemia (mielogena) mieloide crónica.

En otro aspecto, la invención incluye un método para suprimir una función de los basófilos y/o mastocitos y, por lo tanto, permite el tratamiento de enfermedades o trastornos caracterizados por una actividad excesiva o indeseable de los basófilos y/o mastocitos. De acuerdo con el método, se puede utilizar un compuesto que inhiba selectivamente la expresión o actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en los basófilos y/o mastocitos. Preferiblemente, el método emplea un inhibidor de PI3K\delta en una cantidad suficiente para inhibir la liberación de histamina estimulada por parte de los basófilos y/o mastocitos. Por consiguiente, el uso de estos compuestos y otros inhibidores selectivos de PI3K\delta pueden resultar útiles para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por la liberación de histamina, tales como trastornos alérgicos, incluyendo trastornos como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), asma, ARDS, enfisema y trastornos relacionados.

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Composición farmacéutica de los inhibidores de la actividad de PI3K\delta

Un compuesto de la presente invención se puede administrar como producto químico puro, aunque normalmente es preferible administrar el compuesto en forma de una formulación o composición farmacéutica. Por consiguiente, la presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto químico o biológico ("agente") que es activo como modulador de la actividad de PI3K\delta y un vehículo, adyuvante o portador farmacéutico biocompatible. La composición puede incluir el agente como la única fracción activa o en combinación con otros agentes, tales como oligo o polinucleótidos, oligo o polipéptidos, fármacos u hormonas mezcladas con un excipiente o excipientes u otros portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores y otros ingredientes se pueden considerar farmacéuticamente aceptables en la medida en que sean compatibles con otros ingredientes de la formulación y no sean perjudiciales para el receptor de los mismos.

Se pueden encontrar técnicas para la formulación y administración de composiciones farmacéuticas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co, Easton, PA, 1990. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden fabricar utilizando cualquier método convencional, como la mezcla, disolución, granulado, elaboración de grageas, levigación, emulsificación, encapsulación, atrapamiento, solidificación rápida, secado por atomización o procesos de liofilización. No obstante, la formulación farmacéutica óptima será determinada por un profesional en el campo dependiendo de la vía de administración y de la dosis deseada.

Estas formulaciones pueden influir en el estado físico, la estabilidad, el índice de liberación in vivo y el índice de eliminación in vivo del agente administrado. Dependiendo del estado que se vaya a tratar, estas composiciones farmacéuticas se pueden formular y administrar sistémica o localmente.

Las composiciones farmacéuticas se formulan de forma que contengan portadores farmacéuticamente aceptables y opcionalmente pueden contener excipientes y auxiliares que faciliten el procesamiento de los compuestos activos en las preparaciones que se pueden utilizar con fines farmacéuticos. Por lo general, la modalidad de administración determinará la naturaleza del portador. Por ejemplo, las formulaciones para administración parenteral pueden comprender soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Los portadores adecuados para la administración parenteral se pueden seleccionar entre soluciones salinas, soluciones salinas tampón, dextrosa, agua y otras soluciones fisiológicamente compatibles. Los portadores preferibles para la administración parenteral son tampones fisiológicamente compatibles, tales como la solución de Hank, la solución de Ringer o una solución salina tampón fisiológica. Para la administración celular o tisular, se utilizan los penetrantes apropiados para la barrera en particular en la formulación. Estos penetrantes son generalmente conocidos en el campo. Para las preparaciones que comprenden proteínas, la formulación puede incluir materiales estabilizadores, tales como polioles (por ejemplo, sucrosa) y/o surfactantes (por ejemplo, surfactantes no iónicos) y similares.

Alternativamente, las formulaciones para uso parenteral pueden comprender dispersiones o suspensiones de los compuestos activos elaborados en forma de suspensiones de inyección oleaginosas. Los vehículos o solventes lipofílicos apropiados incluyen aceites grasos, como aceite de sésamo y ésteres de ácido graso sintético, tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones de inyección acuosas pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener agentes o estabilizadores apropiados que aumentan la solubilidad de los compuestos, para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. También se pueden utilizar polímeros acuosos que proporcionan una solubilización sensible al pH y/o una liberación sostenida del agente activo como revestimientos o estructuras matriz, por ejemplo, polímeros metacrílicos, como la serie EUDRAGIT® disponible en Röhm America Inc. (Piscataway, NJ). También se pueden utilizar emulsiones, por ejemplo dispersiones de aceite en agua y agua en aceite, opcionalmente estabilizadas con un dispersante o agente emulsionante (materiales activos de superficie; surfactantes). Las suspensiones pueden contener agentes de suspensión como alcoholes de isostearil etoxilado, sorbitol de polioxietileno y ésteres de sorbitan, celulosa microcristalina, bentonita/metahidróxido de aluminio, agar-agar, goma tragacanto y mezclas de los mismos.

También se pueden utilizar liposomas que contienen el agente activo para la administración parenteral. Por lo general, los liposomas se derivan de fosfolípicos u otras sustancias lípidas. Las composiciones en forma de liposoma también pueden contener otros ingredientes, como estabilizadores, conservantes, excipientes y similares. Los lípidos preferibles incluyen fosfolípidos y colinas de fosfatididilo (lecitinas), tanto naturales como sintéticos. Los métodos para formar liposomas son conocidos en el campo. Véase, por ejemplo, Prescott (Ed.), Methods in Cell Biology, Vol. XIV, p. 33, Academic Press, New York (1976).

Las composiciones farmacéuticas que comprenden el agente en dosis apropiadas para la administración oral se pueden formular utilizando portadores farmacéuticamente aceptables conocidos en el campo. Las preparaciones formuladas para la administración oral pueden ser en forma de tabletas, píldoras, cápsulas, comprimidos, grageas, pastillas para chupar, líquidos, geles, jarabes, pastas, elixires, suspensiones o polvos. A título ilustrativo, las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener mediante la combinación de los compuestos activos con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir excipientes adecuados si es necesario, para obtener tabletas o grageas. Las formulaciones orales pueden emplear portadores líquidos de tipo similar a las descritas para uso parenteral, como soluciones acuosas tampón, suspensiones y
similares.

Las formulaciones orales preferibles incluyen tabletas, grageas y cápsulas de gelatina. Estas preparaciones pueden contener uno o más excipientes, entre los que se incluyen, a título meramente enunciativo:

a) diluyentes, como azúcares, incluyendo lactosa, dextrosa, sucrosa, manitol o sorbitol;

b) aglutinantes, como silicato de aluminio de magnesio, almidón de maíz, trigo, arroz, patata, etc.;

c) materiales de celulosa, como metilcelulosa, celulosa de hidroxipropilmetilo y carboximetilcelulosa de sodio, polivinilpirrolidona, gomas, como goma arábiga y goma tragacanto, y proteínas, como gelatina y colágeno;

d) agentes de desintegración o solubilización, como pirrolidona de polivinilo, almidones, agar, ácido algínico o una sal del mismo, como alginato sódico o composiciones efervescentes;

e) lubricantes, como sílice, talco, ácido esteárico o su sal de magnesio o calcio, y glicol de polietileno;

f) aromatizantes y edulcorantes;

g) colorantes o pigmentos, por ejemplo para identificar el producto o caracterizar la cantidad (dosis) del compuesto activo; y

h) otros ingredientes, como conservantes, estabilizadores, agentes lentantes, emulsionantes, promotores de la solución, sales para la regulación de la presión osmótica y tampones.

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Las cápsulas de gelatina incluyen cápsulas duras hechas de gelatina, y cápsulas blandas, que son cápsulas selladas, hechas de gelatina y con un revestimiento como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras pueden contener el ingrediente o los ingredientes activos mezclados con rellenadores, aglutinantes, lubricantes y/o estabilizadores, etc. En las cápsulas blandas, los componentes activos se pueden disolver o suspender en líquidos apropiados, como aceites grasos, parafina líquida, o glicol de polietileno líquido, con o sin estabilizantes.

Las grageas se pueden suministrar recubrimientos, como soluciones de azúcar concentrada, que también pueden contener goma arábiga, talco, pirrolidona de polivinilo, gel de carbopol, glicol de polietileno y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y solventes orgánicos apropiados o mezclas solventes.

La composición farmacéutica se puede proporcionar como una sal del agente activo. Las sales tienden a ser más solubles en solventes acuosos u otros solventes protónicos que las correspondientes formas en base o ácido libre. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en el campo. Los compuestos que contienen fracciones ácidas pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con los cationes apropiados. Los cationes farmacéuticamente aceptables apropiados incluyen, por ejemplo, metal alcalino (por ejemplo, sodio o potasio) y cationes alcalinotérreos (como calcio o magnesio).

Los compuestos de la fórmula estructural (I) que contienen fracciones básicas pueden formar sales de adición ácidas farmacéuticamente aceptables con los ácidos apropiados. Por ejemplo, Berge et al. describen sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J Pharm Sci, 66:1 (1977). Las sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento final y la purificación de los componentes de la invención o por separado, reaccionando una función de base libre con un ácido apropiado.

Las sales de adición ácidas representativas incluyen, a título meramente enunciativo, acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforol-sulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietano-sulfonato (isotionato), lactato, maleato, metano-sulfonato o sulfato, nicotinato, 2-naftaleno-sulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, fosfato o hidrógeno fosfato, glutamato, bicarbonato, p-toluenosulfonato, y undecanoato.

Los ejemplos de ácidos que se pueden emplear para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen, a título meramente enunciativo, ácidos inorgánicos como ácido hidroclórico, ácido hidrobrómico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, y ácidos orgánicos como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succínico y ácido
cítrico.

En vista de lo anterior, cualquier referencia a los compuestos de la presente invención de este documento incluirá los compuestos de la fórmula estructural (I)-(V), así como solvatos y sales farmacéuticamente aceptables, y profármacos, de los mismos.

Las sales de adición básicas se pueden preparar in situ durante el aislamiento final y la purificación de los compuestos de la invención o por separado mediante la reacción de una fracción que contiene ácido carboxílico con una base apropiada como hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable o con amonio o una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria. Las sales de adición básicas farmacéuticamente aceptables incluyen, a título meramente enunciativo, cationes basados en metales alcalinos o metales alcalinotérreos, como litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y sales de aluminio y similares, y amonio cuaternatio no tóxico y cationes de amina, incluyendo amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, etilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, dietilamonio, trietilamonio y similares. Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de las sales de adición básicas incluyen etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina, piperazina y similares.

Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden ser cuaternizados con agentes como haluros de alquilo menores, tales como metilo, etilo, propilo y cloruros de butilo, bromuros y yodos; sulfatos de dialquilo, tales como dimetilo, dietilo, dibutilo y sulfatos de dialquilo; haluro de alquilo de cadena larga, tales como decilo, laurilo, miristilo y cloruros de estearilo, bromuros y yodos; haluros arilo-alquilo, tales como bencilo y bromuros de fenetilo, y otros. De este modo se obtienen productos con una dispersibilidad o solubilidad modificada.

Se pueden preparar composiciones que comprenden un compuesto de la invención formuladas en un portador farmacéuticamente aceptable, introducirlas en un contenedor apropiado y etiquetarlas para el tratamiento de un determinado estado. Por consiguiente, también se contempla un artículo de fabricación, como un contenedor que comprende una dosis de un compuesto de la invención y una etiqueta que contiene instrucciones de uso del compuesto. Los kits también se contemplan en la invención. Por ejemplo, el kit puede comprender una dosis de una composición farmacéutica y un texto insertado en el envase con las instrucciones de uso del compuesto para el tratamiento de un estado médico. En cualquier caso, los estados indicados en la etiqueta pueden incluir el tratamiento de trastornos inflamatorios, cáncer, etc.

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Métodos de administración de los inhibidores de la actividad de PI3K\delta

Las composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor de la actividad de PI3K\delta se pueden administrar al sujeto por cualquier método convencional, incluyendo técnicas enterales y parenterales. Las modalidades de administración parenteral incluyen aquellas en las que la composición se administra por una vía distinta a la del tracto gastrointestinal, por ejemplo, por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramedular, intramuscular, intraarticular, intratecal e inyecciones intraventriculares. Las modalidades de administración enteral incluyen, por ejemplo, la administración oral (incluyendo bucal y sublingual) y rectal. Las modalidades de administración transepitelial incluyen, por ejemplo, administración transmucosal y administración transdérmica. La administración transmucosal incluye, por ejemplo, administración enteral, así como nasal, inhalación y pulmonar; administración vaginal y rectal. La administración transdérmica incluye modalidades transcutáneas o transdérmicas activas o pasivas, incluyendo, por ejemplo, parches y dispositivos de iontoforesis, así como la aplicación tópica de pastas, pomadas o ungüentos. La administración parenteral también se puede realizar con una técnica de alta presión, por ejemplo POWDERJECT®.

Las técnicas quirúrgicas incluyen la implantación de composiciones de reserva (depósito), bombas osmóticas y similares. Una vía preferible de la administración para el tratamiento de la inflamación puede ser la administración local o tópica para los trastornos localizados, tales como la artritis, o la administración sistémica para los trastornos diseminados, como la administración intravenosa para la lesión por reperfusión o para estados sistémicos como la septicemia. Para otras enfermedades, incluyendo aquellas que afectan al tracto respiratorio, como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma y enfisema, la administración se puede realizar por inhalación o administración pulmonar de atomizadores, aerosoles, polvos y similares.

Para el tratamiento de enfermedades neoplásicas, especialmente leucemias y otros cánceres diseminados, normalmente es preferible la administración parenteral. Se recomiendan las formulaciones de los compuestos para optimizarlos para la biodistribución tras la administración parenteral. Los compuestos inhibidores de PI3K\delta se pueden administrar antes, durante o después de la administración de quimioterapia, radioterapia y/o cirugía.

Por otra parte, el índice terapéutico de los compuestos inhibidores de PI3K\delta se puede mejorar, modificando o derivatizando los compuestos para la administración prevista para las células cancerígenas que expresan un marcador que identifica las células como tales. Por ejemplo, los compuestos se pueden unir a un anticuerpo que reconoce un marcador que es selectivo o específico para las células cancerígenas, de forma que los compuestos sean llevados junto a las células para que ejerzan sus efectos localmente, como se ha descrito anteriormente (véase, por ejemplo, Pietersz et al., Immunol Rev, 129:57 (1992); Trail et al., Science, 261:212 (1993); y Rowlinson-Busza et al., Curr Opin Oncol, 4:1142 (1992)). La administración objetivada al tumor de estos compuestos mejora el beneficio terapéutico, entre otras cosas, minizando las posibles toxicidades no específicas que pueden resultar del tratamiento con radiación o quimioterapia. En otro aspecto, los compuestos inhibidores de PI3K\delta y radioisótopos o agentes quimioterapéuticos se pueden conjugar con el mismo anticuerpo contra el tumor.

Para el tratamiento de los trastornos de reabsorción ósea o trastornos mediados por osteoclastos, los inhibidores de PI3K\delta se pueden administrar por cualquier método apropiado. La administración focal puede ser recomendable, como la inyección intraarticular. En algunos casos, puede ser recomendable unir los compuestos a una fracción que pueda dirigir los compuestos al hueso. Por ejemplo, un inhibidor de PI3K\delta se puede unir a compuestos con una gran afinidad por la hidroxiapatita, que es un componente principal del hueso. Esto se puede realizar, por ejemplo, adaptando un método de unión a tetraciclina desarrollado para la administración selectiva del estrógeno al hueso (Orme et al., Bioorg Med Chem Lett, 4(11):1375-80 (1994)).

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Para que sean terapéuticamente efectivos en la modulación de los objetivos del sistema nervioso central, los agentes utilizados en los métodos de la invención deberían penetrar rápidamente en la barrera hematoencefálica cuando se administran periféricamente. No obstante, los compuestos que no pueden penetrar en la barrera hematoencefálica también pueden ser efectivos si se administran por vía intravenosa.

Como se ha señalado, las características del propio agente y la formación del agente pueden influir en el estado físico, la estabilidad, el índice de liberación in vivo y el índice de eliminación in vivo del agente administrado. Esta información farmacocinética y farmacinámica se puede recopilar a través de estudios preclínicos in vitro e in vivo, confirmada posteriormente en humanos durante el transcurso de ensayos clínicos. De este modo, para cualquier compuesto utilizado en el método de la invención, se puede calcular una dosis terapéuticamente efectiva inicialmente con ensayos bioquímicos o realizados con células. A continuación, la dosis se puede formular en modelos animales para conseguir un rango de concentración en la circulación deseable que module la expresión o actividad de PI3K\delta. Cuando se realicen estudios con humanos, se obtendrá más información relativa a los niveles de la dosis adecuada y la duración del tratamiento para diversas enfermedades y estados.

La toxicidad y eficacia terapéutica de estos compuestos se puede determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos de células o animales experimentales, por ejemplo para determinar la LD_{50} (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED_{50} (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población). El ratio de la dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el "índice terapéutico", que se expresa normalmente como el ratio LD50/ED50. Los compuestos que presentan unos elevados índices terapéuticos, es decir en los que la dosis tóxica es sustancialmente superior a la dosis efectiva, son preferibles. Los datos obtenidos de estos ensayos de cultivo de células y otros estudios con animales pueden utilizarse para formular una serie de dosis para uso humano. La dosis de estos compuestos se encuentra preferiblemente dentro del rango de las concentraciones de circulación que incluyen la ED_{50} con escasa o ninguna toxicidad.

Para los métodos de la invención, se puede utilizar cualquier régimen de administración efectivo que regule los tiempos y la secuencia de las dosis. Las dosis del agente incluyen preferiblemente unidades de dosis farmacéuticas que comprenden una cantidad efectiva del agente. En el presente documento, "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad suficiente para modular la expresión o actividad de PI3K\delta y/o provocar un cambio mensurable en un parámetro fisiológico del sujeto mediante la administración de una o más unidades de dosis farmacéuticas.

Los niveles de dosis ejemplares para un sujeto humano van desde unos 0,001 miligramos del agente activo por kilogramo de peso corporal (mg/kg) hasta unos 100 mg/kg. Típicamente, las unidades de dosis del agente activo comprenden desde unos 0,01 mg hasta unos 10.000 mg, preferiblemente desde unos 0,1 mg hasta unos 1.000 mg, dependiendo de la indicación, vía de administración, etc. Dependiendo de la vía de administración se podrá calcular una dosis adecuada con arreglo al peso corporal, la superficie corporal o el tamaño del órgano. El régimen de la dosis final será determinado por el médico responsable, teniendo en cuenta las buenas prácticas médicas, los diversos factores que modifican la acción de los fármacos, tales como la actividad específica del agente, la identidad y gravedad de la enfermedad, la capacidad de respuesta del paciente, la edad, condición, el peso corporal, sexo y la dieta del paciente, así como la gravedad de cualquier infección. Otros factores que se pueden tener en cuenta son el tiempo y la frecuencia de administración, las combinaciones del fármaco, las sensibilidades a la reacción y la tolerancia/respuesta a la terapia. Un ajuste más preciso de la dosis apropiada para el tratamiento en el que participa cualquiera de las formulaciones mencionadas en el presente es realizado de forma rutinaria por el médico especializado sin una experimentación excesiva, especialmente en vista de la información de la dosis y los ensayos publicados, así como de los datos farmacocinéticos observados en ensayos clínicos con humanos. Las dosis apropiadas se pueden averiguar mediante el uso de ensayos establecidos para determinar la concentración del agente en un fluido corporal u otra muestra junto con los datos de respuesta a la dosis.

La frecuencia de las dosis dependerá de los parámetros farmacocinéticos del agente y la vía de administración. La dosis y administración se ajustan para proporcionar unos niveles suficientes de la fracción activa o para mantener el efecto deseado. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas se pueden administrar en una dosis única, múltiples dosis discretas, infusión continua, liberación sostenida, reservas o combinaciones de ellas, conforme sea necesario para mantener el nivel mínimo deseado del agente. Las composiciones farmacéuticas de actuación breve (es decir con una vida útil reducida) se pueden administrar una vez al día o más de una vez al día (por ejemplo, dos, tres o cuatro veces al día). Las composiciones farmacéuticas de actualización prolongada pueden ser administradas cada 3 ó 4 días, cada semana o cada dos semanas. Las bombas, como las bombas subcutáneas, intraperitoneales o subdurales, pueden ser preferibles para la infusión continua.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ayudar a entender la invención y presuponen un conocimiento de los métodos convencionales bien conocidos por las personas con unos conocimientos normales en el campo a los que se refieren los ejemplos, por ejemplo la construcción de vectores y plásmidos, la inserción de polipéptidos de codificación genética en estos vectores y plásmidos, o la introducción de vectores y plásmidos en células huésped.

Estos métodos se describen en detalle en numerosas publicaciones, entre las que se incluyen, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), Ausubel et al. (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994); y Ausubel et al. (Eds.), Short Protocols in Molecular Biology, 4th ed., John Wiley & Sons, Inc. (1999). Las condiciones y los materiales en particular descritos a continuación tienen por objeto ejemplificar determinados aspectos de la invención.

Ejemplo 1 Preparación y purificación de Pl3K\alpha, \beta, y \delta recombinante

Fueron sobreexpuestos complejos heterodiméricos de PI3K recombinante compuestos de una subunidad catalítica p110 y una subunidad reguladora p85 empleando el sistema de expresión de baculovirus BAC-TO-BAC® H9 (GIBCO/-BRL), y posteriormente purificados para su uso en ensayos bioquímicos. Las cuatro PI 3-quinasas de clase I fueron clonadas en vectores de baculovirus como sigue:

p110\delta: Una versión marcada con FLAG® de p110\delta humana (SEQ ID NO:1) (véase Chantry et al., J Biol Chem, 272:19236-41 (1997)) fue subclonada utilizando técnicas de DNA recombinante estándar en el sitio BamHI-XbaI del vector de expresión de la célula del insecto pFastbac HTb (Life Technologies, Gaithersburg, MD), de modo que el clon estaba en el mismo marco de lectura que la marca His del vector. El sistema FLAG® se describe en las patentes estadounidenses nº 4.703.004; 4.782.137; 4.851.341; y 5.011.912, y los reactivos están disponibles en Eastman Kodak Co.

p110\alpha: de manera similar al método utilizado para p110\delta, anteriormente descrito, una versión marcada con FLAG® de p110\alpha (véase Volinia et al., Genomics, 24 (3):427-477 (1994)) fue subclonada en los sitios BamHI-HindIII de pFastbac HTb (Life Technologies) de modo que el clon estaba en el mismo marco de lectura que la marca His del vector.

p110\beta: Un clon de p110\beta (véase Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993)) fue amplificado del banco de cDNA esplénico humano MARATHON® Ready (Clontech, Palo Alto CA) de acuerdo con el protocolo del fabricante empleando los siguientes cebadores:

Cebador 5'
5'-GATCGAATTCGGCGCCACCATGGACTACAAGGACGACGATGACAAGTGCTT
\hskip0.3cm CAGTTTCATAATGCCTCC-3'	(SEQ ID NO:3)

Cebador 3'
5'-GATCGCGGCCGCTTAAGATCTGTAGTCTTTCCGAACTGTGTG-3'	(SEQ ID NO:4)

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El cebador 5' se creó para contener una marca FLAG® en el mismo marco de lectura que la secuencia p110\beta. Tras la amplificación, la secuencia FLAG®-p110\beta fue subclonada utilizando técnicas recombinantes estándar en los sitios EcoRI-NotI de pFastbac HTa (Life Technologies), de forma que el clon estaba en el mismo marco de lectura que la marca His del vector.

p110\gamma: El cDNA de p110\gamma cDNA [véase Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)) fue amplificado de un banco de cDNA espénico humano Marathon Ready (Clontech de acuerdo con el protocolo del fabricante, utilizando los siguientes cebadores:

Cebador 5'
5'-AGAATGCGGCCGCATGGAGCTGGAGAACTATAAACAGCCC-3'	(SEQ ID NO: 5)

Cebador 3'
5'-AGAATGCGGCCGCATGGAGCTGGAGAACTATAAACAGCCC-3'	(SEQ ID NO: 6)

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Posteriormente se añadió una marca FLAG® al extremo 5' de la secuencia p110\gamma y fue clonado en los sitios BamHI-SpeI de pFastbac HTb (Life Technologies) utilizando técnicas de DNA recombinante estándar, con la secuencia FLAG®-110\gamma en el mismo marco de lectura que la marca His del vector.

p85\alpha: Un fragmento BamHI-EcoRI de cDNA de p85 marcado con FLAG® (véase Skolnik et al., Cell, 65:83-89 (1991)) fue subclonado en los sitios BamHI-EcoRI del vector pFastbac dual (Life Technologies).

Los baculovirus recombinantes que contienen los anteriores clones fueron generados utilizando el protocolo recomendado del fabricante (Life Technologies). Los baculovirus que expresan la subunidad catalítica marcada con His p110\alpha, p110\beta, o p110\delta y la subunidad p85 fueron coinfectados en células de insecto Sf21. Para enriquecer el complejo de la enzima heterodimérico, una cantidad excesiva de baculovirus que expresaba la subunidad p85 fue infectada y el complejo de la subunidad catalítica p110 marcada con His y p85 fue purificado en una columna de afinidad del níquel. Dado que p110\gamma no se asocia con p85, las células Sf21 fueron infectadas con baculovirus recombinantes que expresan solamente p110\gamma marcada con His. En un planteamiento alternativo, p101 se puede clonar en baculovirus, para permitir la coexpresión con su elemento de unión preferible p110\gamma.

Las células Sf21 72 horas después de la infección (3 litros) fueron recogidas y homogeneizadas en un tampón hipotónico (20 mM HEPES-KOH, pH 7,8, 5 mM KCl, cóctel inhibidor de proteasa completo (Roche Biochemicals, Indianapolis, IN), utilizando un homogeneizador Dounce. Los homogeneizados fueron centrifugados a 1.000 x g durante 15 min. Los supernadantes también fueron centrifugados a 10.000 x g durante 20 min, seguido de una ultracentrifugación a 100.000 x g durante 60 min. La fracción soluble fue inmediatamente cargada en 10 ml de una columna de afinidad del níquel HITRAP® (Pharmacia, Piscataway, NJ) equilibrada con 50 mL del Tampón A (50 mM HEPES-KOH, pH 7.8, 0.5 M NaCl, 10 mM imidazole). La columna fue lavada ampliamente con Tampón A y eluída con un gradiente linear de 10-500 mM de imidazol. La subunidad p85 libre fue eliminada de la columna durante el paso de lavado y solamente el complejo de la enzima heterodimérico fue eluido a 250 mM de imidazol. Fracciones alícuotas de níquel fueron analizadas por electroféresis en gel 10% SDS-propilacrilamida (SDS-PAGE), teñidas con SYPRO® Red (Molecular Probes, Inc., Eugene, OR), y cuantificadas con STORM® PhosphoImager (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA). Las fracciones activas fueron unidas y cargadas directamente en una columna de heparina de 5 mL Hi-trap preequilibrada con el Tampón B que contiene 50 mM HEPES-KOH, pH 7,5, 50 mM NaCl, 2 mM ditiotreitol (DTT). La columna fue lavada con 50 mL de Tampón B y eluida con un gradiente linear de 0,05-2 M NaCl. Un único pico que contenía el complejo de la enzima PI3K fue eluido a 0,8 M NaCl. El análisis del gel de SDS-poliacrilamida demostró que las fracciones de la enzima PI3K purificadas contenían un complejo estoiquiométrico 1:1 de las subunidades p110 y p85.

El perfil de la proteína del complejo enzimático durante la cromatografía de heparina se correspondía con el de la actividad de la quinasa lípida. Las fracciones activas fueron reunidas y congeladas bajo nitrógeno líquido.

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Ejemplo 2 Análisis de alta resolución (HTS) de PI3K\delta y ensayo de selectividad

Se realizó un análisis de alta resolución de un banco químico patentado para identificar los posibles inhibidores de la actividad de PI3K\delta. PI3K\delta cataliza una fototransferencia de \gamma-[^{32}P]ATP a liposomas PIP_{2}/PS en la posición D3' del anillo de inositol lípico PIP_{2}. Esta reacción es dependiente de MgCl_{2} y es apagada con un tampón de fosfato de potasio de alta molaridad con un pH 8,0 que contiene 30 mM EDTA. En el análisis, esta reacción se realiza en presencia o ausencia de compuestos del banco. Los productos de la reacción (y todos los productos no etiquetados) son transferidos a una placa de filtración de PVDF precalentada de 96 pocillos, filtrada y lavada con fosfato de potasio de alta molaridad. Se añade escintilante a los pocillos secados y la radiactividad incorporada es cuantificada.

La mayoría de las operaciones de ensayo se realizaron utilizando una estación de trabajo robótica BIOMEK® 1000 (Beckman) y todas las placas fueron leídas utilizando protocolos de conteo de placas de escintilación líquida Wallac.

Los inventarios del ensayo de 3X del sustrato y la enzima se realizaron y almacenaron en una cubeta (para ensayos robóticos) o una placa de propileno de fondo V y 96 pocillos (para ensayos manuales). Los reactivos fueron estables durante al menos tres horas a temperatura ambiente.

El sustrato 3X para HTS contenía 0,6 mM Na_{2}ATP, 0.10 mCi/mL \gamma-[^{32}P]ATP (NEN, Pittsburgh, PA), 6 \muM PIP_{2}/PS liposomas (Avanti Polar Lipids, Inc., Atlanta, GA), en 20 mM HEPES, pH 7.4.

El inventario de la enzima 3X para HTS contenía 1,8 nM PI3K\delta, 150 \mug/mL IgG de caballo (utilizada únicamente como estabilizador), 15 mM MgCl_{2}, 3 mM DTT en 20 mM HEPES, pH 7,4.

Las muestras del banco (conteniendo cada una un grupo de 22 compuestos) del análisis de alta resolución (HTS) químico en sulfóxido de dimetilo (DMSO) fueron diluidas a 18,75 \muM o 37,8 \muM en agua bidestilada y 20 \muL de las diluciones se colocaron en la placa de polipropileno de 96 pocillos para el ensayo. El control inhibidor negativo (o control enzimático positivo) fue DMSO diluido en agua y los controles inhibidores positivos emplearon concentraciones de LY294002 suficientes para proporcionar una inhibición del 50% y 100%.

A las diluciones del banco químico agrupadas de 20 \muL se añadieron 20 \muL de sustrato 3X. La reacción se inició con 20 \muL de la enzima 3X y se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Esta dilución estableció una concentración final de 200 \muM ATP en el volumen de reacción. La reacción se detuvo con un tampón de templado de 150 \muL (1,0 M fosfato de potasio, pH 8,0, 30 mM EDTA). Una parte de la solución templada (180 \muL) fue entonces transferida a una placa de filtrado PVDF (Millipore #MAIP NOB prehumedecida con lavados secuenciales de 200 \muL de 100% metanol, agua, y finalmente un tampón de lavado de 1,0 M de fosfato de potasio pH 8,0).

La placa de filtrado de PVDF fue aspirada bajo un vacío moderado (2-5 mm Hg), lavada con 5 x 20C \muL de tampón de lavado, y secada por aspiración. El filtro fue posteriormente secado, se dejó secar al aire por completo y se insertó en una caja de conteo Wallac con 50 \muL de un cóctel de escintilación Ecoscint añadido por pocillo. Se cuantificó la radioactividad incorporada y se analizaron los datos, tras la normalización con respecto al control positivo de la enzima (fijado al 100%), para identificar la intersección de la curva al valor de inhibición del 50% para estimar los valores IC_{50} para los inhibidores.

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Un total de 57 pocillos unidos fueron seleccionados para la desconvolución, basándose en criterios combinados de <42% de actividad residual en la concentración testada y un índice de acierto total aceptado no superior a 0,2%. A 22 compuestos por pocillo, un total de 1254 compuestos fueron identificados a través de esta desconvolución y testados individualmente a la concentración IX de 27,7 \muM para identificar qué compuestos presentaban la actividad deseada. De estos ensayos, se seleccionaron 73 compuestos y se testaron para desarrollar curvas de IC_{50}. De los resultados de la curva de IC_{50}, se seleccionaron 34 compuestos para los ensayos de selectividad contra PI3K\alpha y PI3K\beta (véase el protocolo del ensayo en el Ejemplo 11).

De los ensayos de selectividad, un compuesto, 3-(2-clorofenil)-2-(9H-purin-S-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona (Compuesto D-000), fue seleccionado como un compuesto relativamente potente y selectivo. Las búsquedas en catálogos y ensayos de selectividad de muchos compuestos análogos de los compuestos potentes y selectivos dieron como resultado solamente un compuesto que era tanto un análogo activo como selectivo de D-000. Este compuesto fue adquirido a Contract Services Corporation (Catálogo #7232154) y difería de D-000 por sustituir un grupo fenilo para el grupo 2-clorofenilo de D-000.

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Como se ha descrito, el inhibidor de PI 3-quinasa LY294002 (Calbiochem, La Jolla, CA) no tiene una selectividad significativa entre las diferentes isoformas de PI 3-quinasa testadas. En las condiciones de nuestro ensayo, LY294002 inhibió las tres isoformas de PI 3-quinasas con un IC_{50} de 0,3 a 1 \muM. No obstante, cuando el compuesto D-000 fue testado para las mismas isoformas de PI 3-quinasa, se observó una selectividad diferente. Específicamente, como se muestra en la Figura 1, D-000 inhibió la actividad de la isoforma \delta de PI3K con un IC_{50} de unos 0,3 \muM, mientras que en condiciones similares no inhibió las actividades de las isoformas \alpha y \beta a un límite de 100 \muM de compuesto. Estos resultados demuestran que D-000 inhibe selectivamente la actividad de PI3K\delta.

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Ejemplos 3-7

Dado que PI3K\delta se expresa a unos niveles significativos solamente en los leucocitos, es importante estudiar los efectos del inhibidor selectivo de PI3K\delta sobre las funciones del leucocito. Por consiguiente, se examinaron los efectos de la inhibición de PI3K\delta en varios tipos de leucocitos. Los neutrófilos fueron examinados para determinar los efectos que la inhibición selectiva de PIK\delta podría provocar (Ejemplo 3, a continuación). Sorprendentemente se averiguó que la inhibición selectiva de la actividad de PI3K\delta parece estar significativamente asociada con la inhibición de alguna, pero no de todas las funciones características de los neutrófilos activados. Por otra parte, los efectos de la inhibición de PI3K\delta sobre la función de las células B y T, también fueron testados (Ejemplos 4-5, a continuación). Asimismo, dado que PI3K\delta también se expresa en los osteoclastos, se estudió el efecto de la inhibición de PI3K\delta sobre la función de estas células especializadas (Ejemplo 6, a continuación).

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Ejemplo 3

Caracterización del papel de PI3K\delta en la función de los neutrófilos

Se testaron los efectos de un inhibidor de PI3K\delta de la invención, es decir D-000, sobre las funciones del neutrófilo como la generación de superóxido, la exocitosis de elastasa, la quimiotaxis y la eliminación bacteriana.

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A. Preparación de neutrófilos de sangre humana

Partes alícuotas (8 mL) de sangre heparinizada de voluntarios sanos fueron estratificadas sobre tampones de 3 mL de 7,3% FICOLL® (Sigma, St. Louis, MO) y 15,4% HYPAQUE® (Sigma) y centrifugadas a 900 rpm durante 30 a temperatura ambiente en una centrifugadora de mesa (Beckman). La banda rica en neutrófilos inmediatamente superior al tampón FICOLL®-HYPAQUE® fue recogida y lavada con una solución de sal equilibrada de Hanks (HBSS) que contenía 0,1% de gelatina. Los eritrocitos residuales fueron retirados mediante lisis hipotónica con 0,2% NaCl. La preparación del neutrófilo fue lavada dos veces con HBSS que contenía 0,1% de gelatina y fue utilizada de inmediato.

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B. Medición de la producción de superóxido por parte de los neutrófilos

La generación de superóxido es una de las características de la activación del neutrófilo. Diversos activadores potencian la generación del superóxido por parte de los neutrófilos. Se midió el efecto del inhibidor de PI3K\delta D-000 sobre la generación de superóxido por parte de tres agonistas diferentes: TNF1\alpha, IgG, y fMLP, representando cada una clases separadas del activador. El superóxido generado por los neutrófilos fue medido controlando el cambio en la absorbancia tras la reducción del citocromo C mediante la modificación del método descrito por Green et al., (pp. 14.5.1-14.5.11 in Supp. 12, Curr Protocols Immunol (Eds., Colligan et al.) (1994)), como sigue. Los pocillos individuales de una placa de 96 pocillos fueron cubiertos durante una noche a 4ºC con 50 \muL de solución 2 mg/mL de IgG o fibrinógeno humano.

Los pocillos fueron lavados con PBS y se añadieron los siguientes reactivos a cada pocillo: 50 \muL de HBSS o dismutasa del superóxido (1 mg/mL), 50 \muL de HBSS o TNF1\alpha (50 ng/mL), 50 \muL citocromo C (2.7 mg/mL), y 100 \muL de suspensión de neutrófilo humano purificado (2 x 10^{6} cells/mL). La placa fue centrifugada durante dos minutos a 200 rpm y la absorbancia a 550 nm se controló durante dos horas. Para medir las cantidades relativas de superóxido generado, los valores obtenidos de los pocillos que contenían dismutasa del superóxido fueron sustraídos de todos y normalizados con respecto a los valores obtenidos de los pocillos sin ningún inhibidor.

Como se muestra en la Figura 2, el inhibidor de PI3K\delta D-000 inhibe la generación de superóxido inducida por TNF de los neutrófilos de una forma dependiente de la concentración. La generación de superóxido inducida por TNF fue reducida a su valor máximo medio a unos 3 \muM D-000. La Figura 2 también revela que la generación de superóxido inducida por IgG no se veía significativamente inhibida por D-000. De hecho, incluso a 10 \muM este inhibidor de PI3K\delta no tuvo ningún efecto sobre la generación de superóxido inducida por IgG.

A continuación se estudió el efecto de D-000 sobre la generación de superóxido inducida por otro potente inductor, el péptido bacteriano formilado fMLP. Al igual que la generación de superóxido inducida por TNF, la generación de superóxido inducida por fMLP también se vio inhibida por D-000 (Figura 3). Estos resultados demuestran que el inhibidor de PI3K\delta D-000 puede prevenir la inducción específica del estímulo de la generación de superóxido por parte de los neutrófilos, lo que indica que PI3K\delta está implicada en este proceso.

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C. Medición de la exocitosis de elastasa de los neutrófilos

Además de la generación de superóxido, los neutrófilos activados también responden liberando varias proteasas que son responsables de la destrucción de tejidos y cartílago durante la inflamación. Se midió el efecto de D-000 sobre la exocitosis de elastasa, como un indicativo de la liberación de proteasa. La exocitosis de elastasa se cuantificó mediante la modificación del procedimiento descrito por Ossanna et al. (J Clin Invest, 77:1939-1951 (1986)), como sigue. Los neutrófilos humanos purificados (0,2 x 10^{6}) (tratados con DMSO o una dilución en serie de D-000 en DMSO) fueron estimulados con fMLP en PBS conteniendo 0,01 mg/mL de citocolasina B, 1,0 \muM de azida de sodio (NaN_{3}), 5 \mug/mL de L-metionina y 1 \muM fMLP durante 90 min. a 37ºC en una placa de 96 pocillos. Al finalizar el período de incubación, la placa fue centrifugada durante 5 minutos a 1000 rpm, y 90 \muL del supernadante fueron transferidos a 10 \muL de 10 mM de solución de un péptido del sustrato de elastasa, MeO-suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA, donde MeO-suc = metoxi-succinilo; pNA = p-nitroanilida (Calbiochem, San Diego, CA). La absorbancia a 410 nm fue controlada durante dos horas en un lector de placas de 96 pocillos. Para medir las cantidades relativas de elastasa excitada, todos los valores de absorbancia fueron normalizados con respecto a los valores sin ningún inhibidor. Como se muestra en la Figura 4, el inhibidor de PI3K\delta D-000 inhibe notablemente la exocitosis de elastasa inducida por fMLP y lo hace de una forma dependiente de la dosis. La inhibición alcanzó la máxima media a una concentración de unos 2-3 de \muM D-000.

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D. Medición de la migración del neutrófilo humano inducida por fMLP

Los neutrófilos tienen la capacidad intrínseca de migrar a través de los tejidos y son uno de los primeros tipos de células en llegar a los lugares de la inflamación o lesión tisular. Se midió el efecto de D-000 sobre la migración del neutrófilo hacia un gradiente de concentración de gMLP. El día antes se realizaron los ensayos de migración: se cubrieron placas de seis pocillos con una proteína de fusión ICAM-I/Fc recombinante (Van der Vieren et al., Immunity, 3:683-690 (1995)) (25 \mug/mL en tampón de bicarbonato, pH 9.3) y se dejaron una noche a 4ºC. Después del lavado, se añadió una solución de agarosa al 1% en RPMI-1640 con albúmina sérica bovina 0,5% (BSA) a los pocillos con o sin un inhibidor y se pusieron las placas en un frigorífico antes de realizar los agujeros en la agarosa gelificada para generar la proliferación (un agujero central rodeado de seis periféricos por pocillo).

Los neutrófilos humanos fueron obtenidos como se describe arriba y resuspendidos en un medio de RPMI suplementado con 0,5% BSA a 5 x 10^{6} células/mL. Después de combinar volúmenes iguales del medio y la suspensión del neutrófilo (sea con DMSO o una dilución en serie del compuesto de prueba en DMSO), los neutrófilos fueron alicuotados en los agujeros periféricos, mientras que el agujero central recibió fMLP (5 \muM). Las placas fueron incubadas a 37ºC en presencia de 5% CO_{2} durante cuatro horas, seguida de la terminación de la migración mediante la adición de una solución de glutaraldehído al 1% en D-PBS. Después de retirar la capa de agarosa, los pocillos fueron lavados con agua destilada y secados.

El análisis de la migración del neutrófilo se realizó en una estación de trabajo de vídeo con microscopio invertido DIAPHOT® (objetivo de 1x) utilizando el programa NIH 1.61. Utilizando los programas Microsoft Excel y Table Curve 4 (SSPS Inc., Chicago IL), se obtuvo un índice de migración para cada una de las condiciones estudiadas. El índice de migración fue definido como la superficie bajo una curva que representa el número de neutrófilos migrados frente a la distancia neta de migración por célula.

Como se muestra en la Figura 5, el inhibidor de PI3K\delta D-000 tuvo un profundo efecto sobre la migración del neutrófilo, inhibiendo esta actividad de una forma dependiente de la dosis. El EC_{50} de este compuesto para la inhibición de la migración del neutrófilo en este ensayo es aproximadamente de 1 \muM. En base a una inspección visual de las trayectorias registradas de las células de este ensayo, parece que la longitud de la trayectoria total de los neutrófilos no se vio significativamente afectada por el compuesto de prueba. Sin embargo, el compuesto afectó a la dirección o la orientación del neutrófilo, de forma que en lugar de migrar a lo largo del eje del gradiente quimioatractante, las células migraron de forma no dirigida o menos dirigida.

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E. Medición de la capacidad bactericida de los neutrófilos

Dado que el inhibidor de PI3K\delta D-000 afecta a ciertas funciones del neutrófilo anteriormente detalladas, resultaba interesante comprobar si el compuesto afecta a la eliminación de bacterias mediada por el neutrófilo. El efecto de D-000 sobre la eliminación de Staphylococcus aureus mediada por el neutrófilo fue estudiado conforme al método descrito por Clark y Nauseef (pp. 7.23.4-7.23.6 in Vol. 2, Supp. 6, Curr Protocols Immunol (Eds., Colligan et al.) (1994)). Los neutrófilos humanos purificados (5 x 10^{6} células/mL) (tratadas con DMSO o una dilución en serie de D-000 en DMSO) se mezclaron con suero autólogo. Las células S. aureus generadas durante la noche fueron lavadas, resuspendidas en HBSS y se les añadieron neutrófilos opsonizados en suero a una proporción de 10:1. Se dejó que los neutrófilos internalizaran la bacteria mediante fagocitosis por incubación a 37ºC durante 20 minutos. Las bacterias no internalizadas fueron eliminadas mediante 10 unidades/mL de lisostafina a 37ºC durante 5 minutos y la mezcla total fue girada a 37ºC. Se extrajeron muestras en varios momentos hasta 90 minutos y los neutrófilos fueron lisados mediante dilución en agua. Las bacterias viables fueron contadas poniendo diluciones apropiadas en una placa de tripticasa-soja-agar y se contaron las colonias de S. aureus tras dejarlas crecer durante una noche.

Como se muestra en la Figura 6, la eliminación de S. aureus mediada por el neutrófilo fue similar en las muestras tratadas con DMSO (control) y con D-000. Estos resultados indican que el inhibidor de PI3K\delta no afecta significativamente a la capacidad de los neutrófilos para eliminar S. aureus, lo que sugiere que PI3K\delta no está implicada en esta trayectoria de la función del neutrófilo.

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Ejemplo 4

Caracterización del papel de PI3K\delta en la función de los linfocitos B

También se estudió el efecto del inhibidor de PI3-quinasa sobre las funciones de las células B, incluyendo los índices clásicos como la producción de anticuerpos y la proliferación inducida por un estímulo específico.

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A. Preparación y estimulación de células B de la sangre humana periférica

Se mezcló sangre heparinizada (200 mL) de voluntarios sanos con un volumen igual de D-PBS, se estratificó sobre 10 x 10 mL FICOLL-PAQUE® (Pharmacia), y se centrífugo a 1600 rpm durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) fueron recogidas de la combinación F1COLL®/suero, cubiertas con 10 mL de suero bovino fetal (FBS) y centrifugadas a 800 rpm durante 10 min para eliminar las plaquetas. Después del lavado, las células fueron incubadas con DYNAL® Antibody Mix (B cell kit) (Dynal Corp., Lake Success, NY) durante 20 minutos a 4-8ºC. Tras retirar el anticuerpo no unido, se mezcló PBL con perlas magnéticas recubiertas contra IgG de ratón (Dynal) durante 20 minutos a 4-8ºC, agitando suavemente para después eliminar las células no B marcadas en el separador de perlas magnéticas. Este procedimiento se repitió una vez más. Las células B fueron resuspendidas en RPMI-1640 con 10% FBS, y mantenidas en hielo hasta su utilización.

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B. Medición de la producción de anticuerpos de las células B humanas

Para estudiar la producción de anticuerpos, las células B fueron alicuotadas a 50-75 x 10^{3} células/pocillo en una placa de 96 pocillos con o sin inhibidor, a las que se añadió IL-2 (100 U/mL) y PANSORBIN® (Calbiochem) células Staphylococcus aureus (1:90,000). Parte del medio se retiró después de 24-36 horas y se añadió un medio nuevo (con o sin inhibidor) e IL-2. Los cultivos fueron incubados a 37ºC, en presencia de un incubador de CO_{2} durante otros siete días. Se tomaron muestras de cada condición (por triplicado) y se analizaron para comprobar los valores de IgG e IgM, con un ELISA. Dicho brevemente, se recubrieron cuatro placas de 96 pocillos IMMULON® (50 \muL/well) con 150 ng/mL de suero de burro anti-IgG humana (H+L) (Jackson ImmunoResearch, West Grove PA), o 2 \mug/mL de burro anti IgG+IgM humana (H+L) (Jackson ImmunoResearch) en un tampón de bicarbonato, y se dejaron una noche a 4ºC. Después de un triple lavado con una solución salina tampón de fosfato con TWEEN®-80 (PBST) (350 \muL/pocillo), y del bloqueo con suero de cabra al 3% en PBST (100 \muL/pocillo) durante una hora a temperatura ambiente, se añadieron muestras (100 \muL/pocillo) del supernadante de células B diluido en PBST. Para las placas de IgG el rango de dilución fue de 1:500 a 1:10000, y para el IgM de 1:50 a 1:1000. Después de una hora, las placas fueron expuestas a suero anti-IgG humana conjugado con biotina (100 ng/mL) o anti-IgM humana (200 ng/mL) (Jackson ImmunoResearch) durante 30 minutos, seguido de estreptavidina-HRP (1:20000) durante 30 min., y finalmente, a una solución de TMB (1:100) con H_{2}O_{2} (1:10000) durante 5 min., con tres lavados en PBST entre estos pasos. El desarrollo del color se frenó con una solución de H_{2}SO_{4} y las placas fueron leídas en un lector de placas ELTSA.

Como se muestra en la Figura 7, D-000 inhibió significativamente la producción de anticuerpos. La producción de IgM se vio afectada en mayor medida que la producción de IgG: la inhibición de la producción de IgM máxima media se observó aproximadamente a 1 \muM, frente a 7 \muM para la inhibición comparable de la producción de IgG.

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C. Medición de la proliferación de células B en respuesta a la estimulación de IgM en la superficie de la célula

En el experimento anterior, las células B fueron estimuladas utilizando PANSORBIN®. También se midió el efecto de D-000 sobre la respuesta de proliferación de células B cuando se estimulaba a través de la IgM de su superficie celular utilizando un anticuerpo anti-IgM. Los esplenocitos murinos (Balb/c) se colocaron en placas de microtitración de 96 pocillos a 2 x 10^{5} células por pocillo en 10% FBS/RPMI. Se añadieron las diluciones apropiadas del inhibidor de prueba en el medio completo a las células y se incubaron las placas durante 30-60 minutos antes de la adición del estímulo. Tras la preincubación con el inhibidor de prueba, se añadió una preparación F(ab^{1})_{2} de anticuerpo de cabra específico para la cadena p de IgG de ratón a los pocillos, a una concentración final de 25 \mug/mL. Las placas fueron incubadas a 37ºC durante 3 días y se añadió 1 \muCi de [^{3}H]-timidina a cada pocillo durante las cuatro últimas horas de cultivo. Las placas se recogieron sobre filtros de fibra, se lavaron y la incorporación de la radiomarca se determinó utilizando un contador beta (Matrix 96, Packard Instrument Co., Downers Grove, IL) y se expresó como recuentos por minuto (CPM).

La Figura 8 muestra el efecto de D-000 sobre la proliferación de células B estimulada con anti-IgM. El compuesto inhibió la proliferación de células B estimulada con anti-IgM de forma dependiente de la dosis. Aproximadamente a I \muM, la proliferación se redujo hasta su valor máximo medio.

Dado que el compuesto D-000 inhibe la proliferación de células B, se prevé que este compuesto y otros inhibidores de PI3K\delta se podrían utilizar para suprimir una proliferación células B en entornos clínicos. Por ejemplo, en la malignidad de las células B, las células B de diversas fases de diferenciación muestran una proliferación desregulada. En base a los resultados mostrados arriba, se puede deducir que los inhibidores selectivos de PI3K\delta se podrían emplear para controlar, limitar o inhibir el crecimiento de dichas células.

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Ejemplo 5

Caracterización del papel de PI3K\delta en la función de los linfocitos T

Se midió la proliferación de células T en respuesta a la coestimulación de CD3+CD28. Las células T fueron purificadas de sangre humana sana mediante selección negativa utilizando perlas magnéticas revestidas de anticuerpos, de acuerdo con el protocolo del fabricante (Dynal) y resuspendidas en RPMI. Las células fueron tratadas con DMSO o una dilución en serie de D-000 en DMSO y colocadas a 1 x 10^{5} células/pocillo en una placa de 96 pocillos precubiertos con suero de cabra anti-IgG de ratón. Los anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28 monoclonales de ratón fueron entonces añadidos a cada pocillo a 0,2 ng/mL y 0.2 \mug/mL, respectivamente. La placa fue incubada a 37ºC durante 24 horas y se añadió [^{3}H]-thimidina (1 \muCi/well). Después de otras 18 horas de incubación se recogieron las células con un recolector de células automático, se lavaron y se cuantificó la radioactividad incorporada.

A pesar de que el inhibidor de PI3K\delta D-000 inhibió la proliferación de células T inducida por anti-CD3 y anti-CD28, su efecto no es tan fuerte como su efecto sobre las células B o sobre algunas de las funciones de los neutrófilos.

La inhibición máxima media de la incorporación de timidina no se consiguió a la máxima concentración testada, es decir 10 \muM D-000.

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Ejemplo 6

Caracterización del papel de PI3K\delta en la función de los osteoclastos

Para analizar el efecto del inhibidor de PI3K\delta D-000 sobre los osteoclastos, se aislaron células de médula ósea de ratón y se diferenciaron de los osteoclastos tratando las células con el Factor Estimulador de Colonias de Macrófagos^{-1} (mCSF-^{1}) y el Ligando de Osteoprotegerina (OPGL) en un medio con suero (\alphaMEM con 10% FBS inactivado por calor; Sigma) durante tres días. El cuarto día se habían desarrollado los osteoclastos, se retiró el medio y se recogieron las células. Los osteoclastos se colocaron sobre porciones de dentina a 10^{5} células/pocillo en un medio de crecimiento, es decir \alphaMEM con 1% suero y 2% BSA con 55 \mug/mL OPGL y 10 ng/mL mCSF-1. Después de 3 horas, el medio se cambió por 1% suero y 1% BSA, con o sin osteopontina (25 \mug/mL) y los inhibidores de PI3K (100 nM). El medio se cambió cada 24 horas por osteopontina nueva y los inhibidores. A las 72 horas se retiró el medio y las superficies de dentina se lavaron con agua para retirar los restos celulares, y se tiñó con hematoxilina ácida. El exceso de tinte se lavó y se cuantificaron las profundidades de los agujeros mediante microscopía confocal.

Como se muestra en la Tabla 1, en los dos experimentos, los inhibidores de PI 3-quinasa tuvieron un efecto inhibidor sobre la función del osteoclasto.

Los dos inhibidores no específicos, LY294002 y wortmanina, inhibieron la actividad del osteoclasto. Sin embargo, el inhibidor de PI3K\delta D-000 tuvo el efecto más pronunciado, dado que a 100 nM este compuesto inhibió casi por completo la actividad del osteoclasto.

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Ejemplo 7

Caracterización del papel de PI3K\delta en la función basófila

La evaluación del efecto de un compuesto de la invención sobre la función basófila se probó utilizando un ensayo convencional de liberación de histamina, en general conforme al método descrito en Miura et al., J Immunol, 162:4198-206 (1999). Explicado brevemente, los basófilos enriquecidos se preincubaron con compuestos de prueba a distintas concentraciones desde 0,1 nM a 1.000 nM, durante 10 minutos a 37ºC. A continuación, se añadió policlonal de cabra anti-IgE humana (0,1 \mug/mL) o fMLP y se dejó incubando durante otros 30 minutos. La liberación de histamina en el supernadante se midió utilizando una técnica fluorométrica automatizada. Se probaron los dos compuestos que se muestran a continuación.

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Se observó una reducción dependiente de la dosis en la liberación de histamina para 3-(2-clorofenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona (D-026) cuando se estimularon los basófilos con anti-IgE. Esta supresión de la liberación de histamina fue básicamente del 100% a 1.000 nM, con un EC_{50} cercano a 25 nM.

Otro compuesto, 3-(2-clorofenil)-2-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona (D-999), en el que se reorganiza la estructura del anillo de purina, fue menos eficaz en la inhibición de la liberación de histamina. Ningún compuesto provocó ningún efecto cuando los basófilos fueron estimulados con fMLP. Por comparación, el inhibidor de PI3K no selectivo LY294002 fue testado a 0,1 nM y 10.000 nM, registrando una inhibición cercana al 100% de la liberación de histamina a la máxima concentración.

Estos datos indican que los inhibidores de la actividad de PI 3-quinasa delta se pueden utilizar para suprimir la liberación de histamina, que es uno de los mediadores de la alergia. Dado que la actividad de las diversas PI 3-quinasas es necesaria para la exocitosis, secreción y el tráfico de proteínas en muchos tipos de células, los datos anteriores sugieren que la liberación de histamina por parte de otras células, como los mastocitos, también puede ser alterada por los inhibidores selectivos de PI 3-quinasa delta.

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Ejemplos de síntesis química

A continuación se recogen ejemplos específicos de compuestos de la invención. Se entiende en el campo que los grupos de protección se pueden emplear cuando resulta necesario, de conformidad con los principios generales de la química sintética. Estos grupos de protección son retirados en los últimos pasos de la síntesis en condiciones básicas, ácidas o hidrogenolíticas rápidamente evidentes para las personas entendidas en el campo. Empleando una manipulación y protección apropiadas de cualesquiera de las funcionalidades químicas, la síntesis de compuestos de la fórmula estructural (I) no específicamente recogida en el presente se puede realizar mediante métodos análogos a los esquemas que se recogen debajo.

A menos que se indique lo contrario, todos los materiales de partida se obtuvieron de proveedores comerciales y se utilizaron sin otras purificaciones. Todas las reacciones y fracciones de cromatografía fueron analizadas mediante cromatografía en capa fina (TLC) sobre placas de gel de sílice de 250 mm, visualizadas con luz ultravioleta (UV) y teñidas con yodo (I_{2}). Los productos e intermedios fueron purificados mediante cromatografía flash o cromatografía liquida de alta resolución en fase inversa.

En los ejemplos sintéticos se utilizan las siguientes abreviaturas: aq (acuoso), H_{2}O (agua), CHCJ_{3} (cloroformo), HCl (ácido hidroclórico), MeOH (metanol), NaOH (hidróxido de sodio), NaOMe (metóxido de sodio), TFA (ácido trifluoroacético), K_{2}CO_{3} (carbonato de potasio), SOCl_{2} (cloruro de tionilo), CH_{2}Cl_{2} (cloruro de metileno), EtOAC (acetato etílico), DMF (dimetilformamida), EtOH (etanol), DMSO (dimetil sulfóxido), NaHCO_{3} (bicarbonato sódico), TLC (cromatografía en capa fina), HPLC (cromatografía líquida de alta resolución), HOBT (hidroxibenzotriazol), EDC (etildietilaminopropilcarbodiimida), DIEA (diisopropiletilamina), y HOAc (ácido acético).

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I. Procedimientos generales

Procedimiento A

Se añadió cloruro de trionilo a una solución agitada rápidamente de ácido antranílico o ácido benzoico en benceno, y la mezcla fue agitada bajo reflujo durante 5 a 18 horas. La reacción fue concentrada in vacuo, y limpiada dos veces con benceno. El aceite resultante fue disuelto en CHCl_{3} y a esa solución se le añadió la anilina correspondiente. La mezcla de la reacción fue calentada bajo reflujo y agitada hasta que el TLC determinó su conclusión, momento en el que la mezcla de la reacción fue enfriada hasta alcanzar la temperatura ambiente. El precipitado fue filtrado y el resultado concentrado in vacuo. El producto en bruto fue purificado mediante cromatografía y/o recristalizado con MeOH para proporcionar amidas 1a-1r.

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Procedimiento B

A una suspensión agitada rápidamente de una amida en ácido acético glacial se añadió cloruro de cloroacetilo. La mezcla de la reacción fue calentada a 120ºC y se agitó a esa temperatura hasta que el TLG determinó que se había completado. Tras enfriarse brevemente, la mezcla de la reacción fue concentrada in vacuo. El residuo en bruto fue purificado mediante extracción, cromatografía y/o recristalización para proporcionar cloruros 2a-2r.

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Procedimiento C

Una mezcla de un cloruro, sea nitrógeno o un nucleófilo de azufre, por ejemplo, monohidrato de mercaptopurina o adenina, y K_{2}CO_{3} en DMF se agitó a temperatura ambiente durante 15-72 horas. La suspensión resultante se vertió en agua y se mantuvo a 4ºC durante varias horas. El sólido en bruto fue filtrado, lavado con agua y purificado mediante cromatografía o recristalización para proporcionar los productos finales.

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Ejemplo 8 Preparación de compuestos intermedios: amidas 2-amino-N-(2-clorofenilo)-4,5-dimetoxibenzamida (1a)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 4,5-dimetoxiantranílico (5,0 g, 25,4 mmol) y SOCl_{2} (5,5 mL, 76,1 mmol) en benceno (100 mL), seguido de 2-cloroanilina (6,7 mL, 63,5 mmol) y CHCl_{3} (75 mL). El producto fue lavado con NaHCO_{3} (2 x 25 mL) acuoso y HCl (0.5 M, 75 mL) y purificado por cromatografía en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 4,3 g de una espuma marrón (55%). ^{2}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.42 (dd, J=1.5, 8.3 Hz, 1H); 8-32 (br s, 1H); 7.40 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); -7.31 (dt, J=1.4, 7.9 Hz, 1H); 7.05 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 7.03 (s, 1H); 6.24 (s, 1H); 3.88 (s, 3H); 3.87 (s, 3H). MS (ES): m/z 307,0 (M+).

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2-amino-5-bromo-N-(2-clorofenilo)benzamida (1b)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-5-bromobenzoico (5,0 g, 23,1 mmol) y SOCl_{2} (7,0 mL, 95,9 mmol) en benceno (50 mL), seguido de 2-cloroanilina (7,3 mL, 69,3 mmol) y CHCl_{3} (50 mL). El producto fue purificado mediante dos cromatografías en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 1,48 g de un sólido naranja amarillento (20%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.36 (dd, J=1.2, 8.2 Hz, 1H); 8.20 (br s, 1H); 7.62 (d, J=2.1 Hz, 1H); 7.42 (dd, J=1.3, 8.0 Hz, 1H); 7.34 (dd, J=2.2, 8,8 Hz, 1H); 7.28-7.33 (m, 1H); 7.09 (dt, J=1.4, 7,7 Hz, 1H); 6.62 (d, J=8.7 Hz, 1H); 5.57 (br s, 2H).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-4-fluorobenzamida (1c)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-4-fluorobenzoico (1,15 g, 7,41 mmol) y SOCl_{2} (1,4 mL, 18,5 mmol) en benceno (25 mL), seguido de 2-cloroanilina (1,6 mL, 14,8 mmol) y CHCl_{3} (25 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} y, a continuación, triturado de hexanos para proporcionar 1,02 g de un sólido blanquecino (52%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 12.91 (br S, 1H); 8.72 (dd, J=2.7, 12 Hz, 1H); 8.34 (dd, J=6.4, 9.2 Hz, 1H); 8.29 (dd, J=5.9, 8.8 Hz, 1H); 7.81 (dd, J=6.2, 8.8 Hz, 1H); 7.28 (dt, J=2.4, 8.4 Hz, 1H); 7.21 (dd, J=2.4, 9.0 Hz, 1H); 6.92 (ddd, J=2.4, 7.3, 9.1 Hz, 1H); 6.54 (ddd, J=2.4, 7.8, 8.8 Hz, 1H); 6.45 (dd, J=2.4, 11 Hz, 1H); 5.93 (br s, 2H). MS (ES): m/z 265.0 (M+).

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2-amino-5-cloro-N-(2-clorofenilo)benzamida (1d)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-5-clorobenzoico (2,0 g, 11,7 mmol) y SOCl_{2} (2,2 mL, 29,2 mmol) en benceno (50 mL), seguido de 2-cloroanilina (2,5 mL, 23,3 mmol) y CHCl_{3} (50 mL). El producto fue purificado mediante recristalización con MeOH para proporcionar 1,72 g de un sólido amarillo oscuro (52%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.37 (dd, J=1.5, 8.3 Hz, 1H); 3.22 (br S, 1H); 7.48 (d, J=2.3 Hz, 1H); 7.42 (dd, J=1.5, 8.1 Hz, 1H); 7.31 (dt, J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 7.22 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H); 7.09 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6.67 (d, J=8.8 Hz, 1H); 5.56 (br s, 2H).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-6-fluorobenzamida (1e)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-fluorobenzoico (2,0 g, 12,9 mmol) y SOCl_{2} (2,3 mL, 32,2 mmol) en benceno (50 mL), seguido de 2-cloroanilina (2,7 mL, 25,8 mmol) y CHCl_{3} (50 mL). El producto fue purificado mediante cromatografía en EtOAc/hexanos para proporcionar 2,06 g de un sólido naranja claro (60%). ^{1}H MR (CDCl_{3}) \delta: 9.00 (d, J=17 Hz, 1H); 8.47 (d, J=8.3 Hz, 1H); 7.41 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7.30 (t, J=7,9Hz, 1H); 7.10-7.20 (m, 1H); 7.07 (t, J=7.7 Hz, 1H); 6.49 (d, J=8.3 Hz, 1H); 6.03 (br s, 2H). MS (ES): m/z 265.0 (M+).

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2-amino-6-cloro-N-(2-clorofenilo)benzamida (1f)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-clorobenzoico (2,5 g, 14,6 mmol) y SOCl_{2} (2,7 mL, 36,4 mmol) en benceno (75 mL), seguido de 2-cloroanilina (3,1 mL, 29,1 mmol) y CHCl_{3} (75 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 1,05 g de un sólido naranja amarillento (26%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.54 (d, J=8.1 Hz, 1H); 8.30 (br s, 1H); 7.41 (dd, J=1,5, 8.0 Hz, 1H); 7.33 (t, J=7,.8 Hz, 1H); 7.10 (t, J=8,1 Hz, 1H); 7.09 (dt, J=1.6, 7.8 Hz, 1H); 6.78 (dd, J=0.4, 7.9 Hz, 1H); 6.63 (dd, J=0.9, 8.2 Hz, 1H); 4.69 (br s, 2H). MS (ES): m/z 303.0 (M+22), 281.0 (M+).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-6-metilbenzamida (1g)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-metilbenzoico (2,5 g, 16,5 mmol) y SOCl_{2} (3,0 mL, 41,3 mmol) en benceno (75 mL), seguido de 2-cloroanilina (3,5 mL, 33,0 mmol) y CHCl_{3} (75 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 2,19 g de un aceite marrón (51%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.58 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.99 (br s, 1H); 7.40 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7.34 (t, J=7.7 Hs, 1H); 7.11. (t, J=7.8 Hz, 1H); 7.09 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6.64 (d, J=7.5Hz, 1H); 6.59 (d, J=8.1 Hz, 1H); 4.29 (br s, 2H); 2.45 (s, 3H). MS (ES): m/z 283.0 (M+22).

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2-amino-3-cloro-N-(2-clorofenilo)benzamida (1h)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-3-clorobenzoico (1,0 g, 5,82 mmol) y SOCl_{2} (1,1 mL, 14,6 mmol) en benceno (25 mL), seguido de 2-cloroanilina (1,2 mL, 11,7 mmol) y CHCl_{3} (25 mL). El producto fue recristalizado de MeOH para proporcionar 1,29 g de un sólido amarillo (78%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.43 (dd, J=1.4, 8 3 Hz, 1H); 8.30 (br s, 1H); 7.47 (dd, J=1.1, 8.0 Hz, 1H); 7.42 (d, J=8.0 Hz, 2H); 7.33 (dt, J=1.4, 7.9Hz, 1H); 7.09 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6.68 (t, J=7.9 Hz, 1.H); 6.13 (br s, 2H), MS (ES): m/z 281,0 (M+).

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2-amino-N-bifenil-2-ilo-6-clorobenzamida (1i)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-clorobenzoico (2,0 g, 11,7 mmol) y SOCl_{2} (2,1 mL, 29,3 mmol) en benceno (60 mL), seguido de 2-aminobifenilamina (4,15 g, 24,5 mmol) y CHCl_{3} (60 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 2,16 g de un residuo ámbar oscuro espumoso (57%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.48 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7.79 (br s, 1H); 7.34-7.46 (ra, 6H); 7.20-7.30 (m, 2H); 7.00 (t, J=8.1 Hz, 1H); 6.63 (dd, J=0.6, 7.9 Hz, 1H); 6.54 (d, J=8.3 Hz, 1H); 4.58 (br s, 2H). MS (ES): m/z 323,1 (M+).

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2-amino-6-cloro-N-o-tolilbenzamida (1j)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-clorobenzoico (1,0 g, 5,83 mmol) y SOCl_{2} (1,1 mL, 14,6 mmol) en benceno (30 mL), seguido de o-toluidina (1,4 mL, 12,8 mmol) y CHCl_{3} (30 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 840 mg de un sólido amarillo oleaginoso (55%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.96 (d, J=7. 9 Hz, 1H); 7.60 (br s, 1H); 7.23-7.30 (m, 2H); 7.14 (t, J=7.5 Hz, 1H) 7.11 (t, J=8.3 Hz, 1H); 6.78 (d, J=7.9 Hz, 1H); 6.64 (d, J=8.2 Hz, 1H); 4.73 (br s, 2H); 2.35 (s, 3H). MS (ES): m/z 261,0 (M+).

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2-amino-6-cloro-N-(2-fluorofenilo)benzamida (1k)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-clorobenzoico (2,0 g, 11,7 mmol) y SOCl_{2} (2,1 mL, 29,1 mmol) en benceno (60 mL), seguido de 2-fluoroanilina (2,3 mL, 23,4 mmol) y CHCl_{3} (60 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 1,05 g de un sólido amarillo (34%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.45 (t, J=8.0 Hz, 1H); 8.01 (br s, 1H); 7.02-7.22 (m, 4H); 6.78 (dd, J=0.5, 7.9 Hz, 1H); 6.64 (dd, J=0.8, 8.2 Hz, 1H); 4.73 (br s, 2H). MS (ES): m/z 265.0 (M+).

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2-amino-6-cloro-N-(2-metoxifenilo)benzamida (1l)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-6-clorobenzoico (2,0 g, 11,7 mmol) y SOCl_{2} (2,1 mL, 29,1 mmol) en benceno (60 mL), seguido de o-anisidina (2,6 mL, 23,4 mmol) y CHCl_{3} (60 mL). El producto fue cromatografiado en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 2,61 g de un aceite amarillo oscuro (81%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.53 (dd, J=1.7, 7.9 Hz, 1H); 8.39 (br s, 1H); 7.11 (dt, J=1.6, 7.8 Hz, 1H); 7.09 (t, J=8.1 Hz, 1H); 7.02 (dt, J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 6.92 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 6.62 (dd, J=0.9, 8.2 Hz, 1H); 4.66 (br s, 2H); 3.87 (s, 3H). MS (ES): m/z 277,0 (M+).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-3-trifluorometilbenzamida (1m)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 3-trifluorometilantranílico (2,0 g, 9,75 mmol) y SOCl_{2} (1,8 mL, 24,4 mmol) en benceno (50 mL), seguido de 2-cloroanilina (2,1 mL, 19,5 mmol) y CHCl_{3} (50 mL). El producto fue purificado mediante recristalización con MeOH para proporcionar 2,38 g de cristales amarillos (78%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.40 (dd, J=1.4, 8.3 Hz, 1H); 8.25 (br s, 1H); 7.71 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7.60 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7.43 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7.34 (dt, J=1.3, 7.9 HZ, 1H); 7.11 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6.77 (t, J=7.8 Hz, 1H); 6.24 (br s, 2H). MS (ES): m/z 315,0 (M+).

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Ácido 3-aminonaftaleno-2-carboxílico (2-clorofenil)amida (1n)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 3-amino-2-naftoico (2,0 g, 10,7 mmol) y SOCl_{2} (1,9 mL, 26,7 mmol) en benceno (50 mL), seguido de 2-cloroanilina (2,3 mL, 21,4 mmol) y CHCl_{3} (50 mL). El producto fue recristalizado de MeOH para proporcionar 1,71 g de un sólido marrón (54%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 10.88 (br s, 1H); 9.21 (s, 1H); 8.91 (s, 1H); 8.70 (dd, J=1.0, 8.3 Hz, 1H); 7.95-8.01 (m, 1H); 7.87-7.94 (m, 1H); 7.60-7.68 (m, 2H); 7.41 (dd, J=1.3, 8-0 Hz, 1H); 7.34 (dt, J=1.2, 7.8 Hz, 1H); 7.07 (dt, J=1.4, 7.7 Hz, 1H). MS (ES): m/z 297,1 (M+).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-4-nitrobenzamida (1o)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 4-nitroantranílico(5,0 g, 27,5 mmol) y SOCl_{2} (5,0 mL, 68,6 mmol) en benceno (150 mL), seguido de 2-cloroanilina (5,8 mL, 55,0 mmol) y CHCl_{3} (150 mL). El producto fue purificado por cromatografía en CH_{2}Cl_{2} seguido por recristalización con MeOH para proporcionar 2.20 g de un sólido marrón anaranjado 31%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.41 (dd, J=1.3, 8.3 Hz, ^{1}H); 8.31 (br s, 1H); 7.67 (d, J=8.6 Hz, 1H); 7.57 (d, J=2.1 Hz, 1H); 7.52 (dd, J=2.2, 8.5 Hz, 1H); 7.44 (dd, J=1.3, 8.1 Hz, 1H); 7.35 (dt, J=1.3, 7.9 Hz, 1H); 7.13 (dt, J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 5.88 (br s, 2H). MS (SS): m/z 292,0 (M+).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-5-hidroxibenzamida (1p)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-5-hidroxibenzoico (5,0 g, 32,7 mmol) y SOCl_{2} (6,0 mL, 81,6 mmol) en benceno (150 mL), seguido de 2-cloroanilina (6,9 mL, 65,4 mmol) y CHCl_{3} (150 mL). El producto fue purificado mediante dos cromatografías en MeOH/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 990 mg de un sólido marrón (12%). ^{1}H NMR (MeOH-d_{4}) \delta: 7.92 (dd, J=1.6, 8.1 Hz, 1H); 7.48 (dd, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 7.34 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 7.20 (dt, J=1.7, 7.7 HZ, 1H); 7.16 (d, J=2.7 Hz, 1H); 6.83 (dd, 3=2.7, 8.7 Hz, 1H); 6.76 (d, J=8.7 Hz, 1H); [6.24 (br s, 2H)]. MS (ES): m/z 263,0 (M+).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-4,5-difluorobenzamida (1q)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 4,5-difluoroantranílico(2,0 g, 11,6 mmol) y SOCl_{2} (2,1 mL, 28,9 mmol) en benceno (60 mL), seguido de 2-cloroanilina (2,4 mL, 23,2 mmol) y CHCl_{3} (60 mL). El producto fue purificado mediante dos cromatografías en CH_{2}Cl_{2} y EtOAc/hexanos para proporcionar 769 mg de un sólido amarillo (23%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.69-8.82 (m, 1H); 8.00 (dd, J=8.4, 9.0 Hz, 1H); 7.90 (dd, J=8.9, 12 Hz, 1H); 7.39 (dd, J=6,8, 10 Hz, 1H); 6.53 (dd, J=6.6, 12 Hz, 1H); -6.41 (br s, 2H); 5.79 (br s, 1H). MS (ES): m/z 283,1 (M+).

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2-amino-N-(2-clorofenilo)-5-fluorobenzamida (1r)

Preparado conforme al Procedimiento A utilizando ácido 2-amino-5-fluorobenzoico (1,0 g, 6,45 mmol) y SOCl_{2} (1,2 mL, 16,1 mmol) en benceno (30 mL), seguido de 2-cloroanilina (1,4 mL, 12,9 mmol) y CHCl_{3} (30 mL). El producto fue triturado de CH_{3}Cl_{2} para proporcionar 985 mg de un sólido amarillo mostaza (58%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.66 (dd, J=2.9, 8.7 Hz, 1H); 7.52-7.55 (m, 1H); 7.32-7.37 (m, 3H); 7.09 (dt, J=3.0, 8.5 Hz, 1H); 6.71 (dd, J=4.3, 8.7 Hz, 1H). MS (ES): m/z 305,0 (M+40).

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Ejemplo 9 Preparación de compuestos intermedios: cloruros 2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-3H-quinazolin-4-ona (2a)

Preparado conforme al Procedimiento B con la (2,95 g, 9,63 mmol) y cloruro de cloroacetilo (2,3 mL, 28,9 mmol) en ácido acético (30 mL). Purificado mediante la extracción de K_{2}CO_{3} acuoso y recristalización con isopropanol para proporcionar 1,61 g de un sólido cristalino marrón (46%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.59-7.66 (m, 2H); 7.45-7.56 (m, 3H); 7.20 (s, 1H); 4.37 (d, J=I2 Hz, 1H), 4.08 (d, J=12 Hz, 1H); 4.04 (s, 3H); 4.00 (s, 3H). MS (ES): m/z 365,0 (M+).

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6-bromo-2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona (2b)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1b (500 mg, 1,54 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,37 mL, 4,61 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado por recristalización con isopropanol para proporcionar 490 mg de un sólido blanquecino (83%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.43 (d, J=2.3 Hz, 1H); 7.91 (dd, J=2.3, 8.7 Hz, 1H); 7.67 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7.60-7.65 (m, 1H); 7.47-7.56 (m, 2H); 7.52 (t, J=5.3 Hz, 1H); 7.47-7.56 (m, 1H); 4.37 (d, J=12 Hz, 1H), 4.06 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 385,0 (M+).

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\global\parskip0.930000\baselineskip

2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona (2c)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1c (500 mg, 1,89 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,45 mL, 5,67 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado mediante la extracción de K_{2}CO_{3} acuoso seguido de recristalización con isopropanol para proporcionar 501 mg de un sólido cristalino amarillo (82%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.32 (dd, J=6.0, 8.9 Hz, 1H); 7.59-7.66 (m, 1H); 7.50-7.55 (m, 3H); 7.44 (dd, J=2.4, 9.4HZ, 1H); 7.27 (dt, J=2.5, 8.5 Hz, 1H); 4.37 (d, J=12 Hz, 1H), 4.07 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 323,0 (M+).

\vskip1.000000\baselineskip

6-cloro-2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona (2d)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1d (500 mg, 1,78 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,42 mL, 5,33 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado por recristalización con isopropanol para proporcionar 555 mg de un sólido amarillo (92%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.27 (d, J=1.9 Hz, 1H); 7.74-7.78 (m, 2H); 7.60-7.66 (m, 1H); 7.48-7.57 (m, 3H); 4.37 (d, J=12 Hz, 1H), 4.07 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 339,0 (M+).

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2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona (2e)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1e (500 mg, 1,89 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,45 mL, 5,67 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado mediante la extracción de K_{2}CO_{3} acuoso y recristalización con isopropanol para proporcionar 430 mg de un sólido cristalino blanquecino (70%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.76 (dt, J=5.3, 8.2 Hz, 1H); 7.56-7.65 (m, 2H); 7.47-7.56 (m, 3H); 7.16-7.25 (m, 1H); 4.35 (d, J=12 Hz, 1H), 4.07 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 323,0 <M+).

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5-cloro-2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona (2f)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1f (1,00 g, 3,56 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,85 mL, 10,7 mmol) en ácido acético (15 mL). Purificado por recristalización con isopropanol para proporcionar 791 mg de un sólido cristalino blanquecino (65%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.70 (s, 1H); 7.68 (d, J=3.8 Hz, 1H); 7.61-7.65 (m, 1H); 7.55 (dd, J=2.7, 6.4 Hz, 1H); 7.51 (d, J=3.1 Hz, 1H); 7.50 (s, 2H); 4.35 (d, J=12 Hz, 1H), 4.05 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 339,0 (M+).

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2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona (2g)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1g (2,18 g, 8,36 mmol) y cloruro de cloroacetilo (2,0 mL, 25,1 mmol) en ácido acético (40 mL). Purificado mediante dos cromatografías en CH_{2}Cl_{2} y EtOAc/hexanos, seguidas de recristalización con isopropanol para proporcionar 638 mg de un sólido cristalino blanquecino (24%). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 7.73-7.80 (m, 3H); 7.58-7.64 (m, 3H); 7.41 (d, J=7.4 Hz, 1H); 4.40 (d, J=12 Hz, 1H), 4.26 (d, J=12 Hz, 1H); 2.74 (s, 3H). MS (ES): m/z 319,0 (M+).

\vskip1.000000\baselineskip

8-cloro-2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona (2h)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1h (500 mg, 1,78 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,49 mL, 6,13 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado mediante la extracción de K_{2}CO_{3} acuoso seguido de recristalización con isopropanol para proporcionar 448 mg de un sólido amarillo (74%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.23 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7.90 (dd; J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 7.61-7.66 (m, 1H); 7.51-7.55 (m, 3H); 7.47 (t, J=8,0 Hz, 1H); 4.48 (d, J=12 Hz, 1H), 4.12 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 339,0 (M+).

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3-bifenilo-2-ilo-5-cloro-2-clorometilo-3H-quinazolin-4-ona (2i)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1i (2,0 g, 6-20 mmoL) y cloruro de cloroacetilo (1,5 mL. 18,6 mmol) en ácido acético (30 mL). Purificado mediante cromatografía en CH_{2}Cl_{2}, seguida de recristalización con isopropanol para proporcionar 1,44 g de un sólido blanquecino (61%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.61-7.64 (m, 1 1H); 7.58-7.59 (m, 1H); 7.54-7.57 (m, 2H); 7.52-7.53 (m, 1H); 7.45-7.52 (m, 2H); 7.24 (m, 5H); 3.92-4.03 (m, 2H). MS (ES): m/z 381,0 (M+).

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5-cloro-2-clorometilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (2j)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1j (750 mg, 2,88 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,69 mL, 8,63 mmol) en ácido acético (15 mL). Purificado mediante cromatografía en CH_{2}Cl_{2}, seguida de recristalización con isopropanol para proporcionar 340 mg de un sólido blanco (37%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.69 (d, J=2.1 Hz, 1H); 7:68 (q, J=7.4 Hz, 1H); 7.54 (dd, J=2.2, 7.0 Hz, 1H); 7.35-7.47 (m, 3H); 7.21-7.25 (m, 1H); 4.27 (d, J=12 Hz, 1H); 4.11 (d, J=12 Hz, 1H); 2.18 (s, 3H). MS (ES): m/z 319,0 (M+).

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5-cloro-2-clorometilo-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona (2k)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1k (1,0 g, 3,78 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,90 mL, 11,3 mmol) en ácido acético (20 mL). Purificado por cromatografía en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 484 mg de un sólido rosa claro (40%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.69 (s, 1H); 7.68 (d, J=3.2 Hz, 1H); 7.56 (d, J=3.0 Hz, 1H); 7.54 (d, J=3.0 Hz, 1H); 7.40-7.47 (m, 1H); 7.35-7.38 (m, 1H); 7.27-7.32 (m, 1H); 4.35 (d, J=12 Hz, 1H); 4.18 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 323,0 (M+).

\vskip1.000000\baselineskip

5-cloro-2-clorometilo-3-(2-metoxifenilo)-3H-quinazolin-4-ona (2l)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1l (2,6 g, 9,41 mmol) y cloruro de cloroacetilo (2,2 mL, 28,2 mmol) en ácido acético (40 mL). Purificado mediante cromatografía en CH_{2}Cl_{2}, seguida de recristalización con isopropanol para proporcionar 874 mg de un sólido amarillo claro (28%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.55-7.74 (m, 2H); 7.47-7.54 (m, 2H); 7.34 (dd, J = 1.7, 7.8 Hz, 1H); 7.13 (dt, J=1.2, 7.7 Hz, 1H); 7.08 (dd, J=1.0, 8.4 Hz, 1H); 4.29 (d, J=12 Hz, 1H); 4.11 (d, J=12 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H). MS (ES): m/z 335,0 (M+).

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2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-8-trifluorometilo-3H-quinazolin-4-ona (2m)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1m (500 mg, 1,59 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,38 mL, 4,77 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado por recristalización con isopropanol para proporcionar 359 mg de un sólido cristalino blanco (61%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.51 (dd, J=1.0, 8.0 Hz, 1H); 8.14 (d, J=7.3 Hz, 1H); 7.65 (dd, J=2.5, 5.6 Hz, 1H); 7.62 (d, J=3.9 Hz, 1H); 7.48-7.60 (m, 3H); 4.44 (d, J=12 Hz, 1H), 4.12 (d, J=12 HZ, 1H). MS (ES): m/z 373,0 (M+).

\vskip1.000000\baselineskip

2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-3H-benzo[g]quinazolin-4-ona (2n)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1n (500 mg, 1,68 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,40 mL, 5,05 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado mediante cromatografía en CH_{2}Cl_{2}, seguida de recristalización con isopropanol para proporcionar 232 mg de un sólido marrón claro (39%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.92 (s, 1H); 8.29 (s, 1H); 8.81 (d, J=8.3, 1H); 8.32 (d, J=8.3 Hz, 1H); 7.51-7.69 (m, 4H); 7.55 (d, J=5.2 Hz, 1H); 7.53 (d, J=3.8 Hz, 1H); 4.43 (d, J=12 Hz, 1H), 4.12 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 355,0 (M+).

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2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-7-nitro-3H-quinazolin-4-ona (2o)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1o (500 mg, 1,71 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,41 mL, 5,14 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado mediante la extracción de K_{2}CO_{3} acuoso seguido de dos cromatografías en CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 338 mg de un aceite amarillo (56%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.64 (d, J=2.2 Hz, 1H); 8.48 (d, J=8.8 Hz, 1H); 8.32 (dd, J=2.2, 8.7 Hz, 1H); 7.66 (dd, J=2.5, 6.0 Hz, 1H); 7.52-7.59 (m, 3H); 4.41 (d, J=12 Hz, 1H), 4.10 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 350,0 (M+).

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Éster de ácido acético 2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-6-ilo (2p)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1p (670 mg, 255 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,61 mL, 7,65 mmol) en ácido acético (10 mL). Purificado mediante cromatografía en 0-3% MeOH/CH_{2}Cl_{2}, seguida de recristalización con isopropanol para proporcionar 523 mg del acetato en forma de cristales anaranjados (57%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.00 (d, J=2.7 Hz, 1H); 7.82 (d, J=8.8 Hz, 1H); 7.60-7.66 (m, 1H); 7.56 (dd, J=2.7, 8.8 Hz, 1H); 7.51 (t, J=4.7 Hz, 2H); 7.50 (s, 1H); 4.38 (d, J=12 Hz, 1H), 4.08 (d, J=12 Hz, 1H); 2.36 (s, 3H). MS (ES): m/z 363,0 (M+).

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2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-6,7-difluoro-3H-quinazolin-4-ona (2q)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1q (700 mg, 2,48 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,60 mL, 7,43 mmol) en ácido acético (12 mL). Purificado mediante cromatografía en CH_{2}Cl_{2}, seguida de recristalización con isopropanol para proporcionar 219 mg de un sólido cristalino amarillo (26%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 8.07 (dd, J=8.5, 9.7 Hz, 1H); 7.64 (dd, J=2.5, 5.6 Hz, 1H); 7.60 (dd, J=3.5, 11 Hz, 1H), -7.55 (q, J=2.9 Hz, 3H); 7.52 (d, J=1.9Hz, 1H); 7.49-7.51 (m, 1H); 4.36 (d, J=12 Hz, 1H), 4.06 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 341,0 (M+).

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2-clorometilo-3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-3H-quinazolin-4-ona (2r)

Preparado conforme al Procedimiento B con 1r (850 mg, 3,21 mmol) y cloruro de cloroacetilo (0,77 mL, 9,63 mmol) en ácido acético (15 mL). Purificado mediante extracción de K_{2}CO_{3} acuoso, seguido de cromatografía en EtOAc/hexanos. Una segunda cromatografía en acetona/hexanos proporcionó 125 mg de un sólido blanco (12%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta: 7.95 (dd, J=2.9, 8.2Hz, 1H); 7.81 (dd, J=4.8, 9.0 Hz, 1H); 7.61-7.66 (m, 1H); 7.57 (dd, J=2.7, 8.6 Hz, 1H); 7.57 (dd, J=2,7, 8.6 Hz, 1H); 7.52 (dd, J=3.2, 6.9 Hz, 1H); 7.52 (br s, 2H); 4.38 (d, J=12 Hz, 1H), 4.08 (d, J=12 Hz, 1H). MS (ES): m/z 323,0 (M+).

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Ejemplo 10 Preparación de compuestos inhibidores de PI3K\delta

Compuesto D-001

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2a (200 mg, 0,546 mmol), adenina (81 mg, 0,601 mmol), K_{2}CO_{3} (83 mg, 0,601 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de (EtOH) para proporcionar 164 mg de un sólido beige (65%), mp 281,5-282,7ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.06 (s, 1H); 8.04 (s, 1H); 7.76-7.81 (m, 1H); 7.70-7.76 (m, 1H); 7.60-7.67 (m, 2H); 7.45 (s, 1H); 7.22 (s, 2H); 6.90 (s, 1H); 5.08 (d, J=17 Hz, 1H); 4.91 (d, J=17 Hz, 1H); 3.87 (s, 3H); 3.87 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.9, 156.2, 155.4, 152.9, 150,0, 149.7, 149.4, 143.0, 141.9, 133.7, 132.1, 131.9, 131.2, 130.8, 129.3, 118.4, 113.6, 108.4, 105.8, 56.5, 56.1, 44.7. MS (ES): m/z 464,1 (M+). Anal, calcd. para C_{22}H_{18}ClN_{7}O_{3}\cdot0.1C_{2}H_{6}O\cdot0.05KCl: C, 56.47; H, 3.97; Cl, 7.88; N, 20.76. Encontrado: C, 56,54; H, 4,05; Cl, 7,77; N, 20,55.

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Compuesto D-002

2-(6-aminopurin-o-ilmetilo)-6-bromo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2b (100 mg, 0,260 mmol), adenina (39 mg, 0,286 mmol), K_{2}CO_{3} (40 mg, 0,286 mmol), y DMF (2 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 52 mg de un sólido blanquecino (41%), mp 284,2-284,7ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.24 (d, J=2,0 Hz, ^{1}H); 8.05 (s, 1H); 8.03 (s, 1H); 7.98 (dd, J=1.9, 8.6 Hz, 1H); 7.74-7.83 (m, 2H); 7.59-7.68 (m, 2H); 7.46 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7.22 (s, 2H); 5.12 (d, J=17 Hz, 1H); 4.94 (d, J=17 Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.5, 156.2, 152.9, 152.0, 150.1, 145.8, 141.8, 138.4, 133.1, 132.2, 131.9, 131.1, 130.9, 130.1, 129.4, 128.9, 122.4, 120.4, 118,4, 45.0, MS (ES): m/z 482,0 (M+). Anal, calcd. para C_{20}H_{13}ClBrN_{7}O\cdot0.1.KCl: C, 49,01; H, 2,67; Cl, 7,96; N, 20,00. Encontrado: C, 48.82; H, 2.82; Cl, 8.00; N, 19.79.

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Compuesto D-003

2-(6-aminopurin-o-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2c (100 mg, 0,310 mmol), adenina (46 mg, 0,340 mmol), K_{2}CO_{3} (47 mg, 0,340 mmol), y DMF (1 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 57 mg de un sólido beige (44%), mp 216,8-217,2ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.22 (dd, J=6.3, 8.7 Hz, 1H); 8.05 (s, 1H); 8.03 (s, 1H); 7.78-7.80 (m, 2H); 7.61-7.64 (m, 2H); 7.46 (dt, J=2.1, 8.6 Hz, 1H); 7.32 (d, J=9.8 Hz, 1H); 7.22 (s, 2H); 5.13 (d, J=17 Hz, 1H); 4.95 (d, J=17 Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 166.1 (d, J=253 Hz), 159.6, 155.8, 152.5, 149.7, 148.6 (d, J=14 Hz), 141.4, 132.8, 131.8, 131.6, 130.8, 130.5, 129.8, (d, J=11 Hz), 129.0 118.1, 117.4, 116.2 (d, J=24 Hz), 112.7 (d, J=22 Hz), 44.6. MS (ES): m/z 422 0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{13}ClFN_{7}O\cdot0.1H_{2}O (0.15KCl: C, 55.25; H, 3.06; Cl, 9,38; N, 22.55. Encontrado: C, 55.13; H, 2.92; Cl, 9.12; N, 22.30.

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Compuesto D-004

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2d (100 mg, 0,294 mmol), adenina (44 mg, 0,323 mmol), K_{2}CO_{3} (45 mg, 0,323 mmol), y DMF (1 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 50 mg de un sólido amarillo (39%), mp 294,5-294,8ºC (se descompone) ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.10 (d, J=2.2 Hz, 1H); 8.05 (s, 1H); 8.03 (s, 1H); 7.86 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H); 7.75-7.82 (m, 2H); 7.59-7.67 (m, 2H); 7.53 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7.22 (br s, 2H); 5.13 (d, J=17 Hz, 1H); 4.95 (d, J=17 Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.7, 156.2, 152.9, 151.9, 150,1, 145.5, 141.8, 135.7, 133.1, 132.3, 132.2, 131.9, 131.1, 130.9, 130.0, 129.4, 125.9, 122.0, 118.4, 44.9. MS (ES): m/z 438.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{13}Cl_{2}N_{7}O: C, 54.81; H, 2.99; N, 22.37. Encontrado: C, 54.72; H, 2.87; N, 22.18.

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Compuesto D-005

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2e (200 mg, 0,619 mmol), adenina (92 mg, 0,681 mmol), K_{2}CO_{3} (94 mg, 0,680 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue cromatografiado en MeOH/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 168 mg de un sólido blanquecino (64%), mp 159-172ºC (se descompone gradualmente). ^{1}H NMR
(DMSO-d_{6}) \delta: 8.10 (s, 1H); 8.08 (s, 1H); 7.73-7.89 (m, 3H); 7.57-7.71 (m, 2H); 7.37-7.48 (m, 2H); 7.34 (d, J=11 Hz, 1H); 7.30 (d, J=8.3 Hz, 1H); 5.14 (d, J=17 Hz, 1H); 4.94 (d, J=17Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.8 (d, J=264 Hz), 157.5 (d, J=4.2 Hz), 155.8, 152.4, 152.4, 150.0, 148.7, 142.1, 136.4 (d, J=11 Hz), 133.0, 132.2, 132.1, 131.2, 130.9, 129.4, 123.8 (d, J=3,6 Hz), 118.4, 114.5 (d, J=20 Hz), 110.2 (d, J = 6.0 Hz), 44.9, MS (ES): m/z 422,0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{13}ClFN_{7}O; C, 56.95; H, 3.11; Cl, 8.40; N, 23.24, Encontrado: C, 54.62; H, 3.32; Cl, 9.40; M, 21.29.

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Compuesto D-006

2-(6-aminopurin-o-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2f (300 mg, 0,883 mmol), adenina (131 mg, 0,972 mmol), K_{2}CO_{3} (134 mg, 0,972 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue cromatografiado en MeOH/CH_{2}Cl_{2} y recristalizado de EtOH para proporcionar 188 mg de un sólido cristalino naranja claro (49%), mp 245,7-246,0ºC (comienza a transpirar a 220ºC). ^{1}H NMR <DMSO-d_{6}) \delta: 8.06 (s, 1H); 8.04 (s, 1H); 7.76-7.81 (m, 2H); 7.72 (d, J=8.,0 Hz, 1H); 7.59-7.66 (m, 3H); 7.41 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.26 (br S, 2H); 5.11 (d, J=17 Hz, 1H); 4.93 (d, J=17 Hz, 1H), ^{13}C NMR (DMSO-_{6}) pmm: 158.5, 156.2, 152.9, 152.2, 150.1, 149.2, 141.8, 135.4, 133.3, 133.2, 132.1, 132.0, 131.2, 130.4, 129.4, 127.3, 118.4, 117.7, 44.9. MS (ES): m/z 438.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{13}Cl_{2}N_{7}O\cdot0.1C_{2}H_{6}O\cdot0.05H_{2}O: C, 54.67; H, 3.11; Cl, 15.98; N, 22.09. Encontrado: C, 54.35; H, 3.00; Cl, 15.82; N, 22.31.

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Compuesto D-007

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2g (250 mg, 0,783 mmol), adenina (116 mg, 0,862 mmol), K_{2}CO_{3} (119 mg, 0,862 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 93 mg de un sólido amarillo claro (28%), mp 190,7-190,9ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.05 (s, 1H); 8.03 (s, 1H); 7.76-7.79 (m, 1H), 7.71-7.74 (m, 1H); 7.59-7.67 (m, 1H); 7.34 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7.28 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7.24 (br s, 2H); 5.07 (d, J=17 Hz, 1H); 4.92 (d, J=17 Hz, 1H); 2.73 (s, 3H), ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 161.1, 156.2, 152.8, 150.9, 150.1, 148.3, 141.9, 141.0, 134.6, 133.6, 132.2, 131.9, 131.3, 130.8, 130.3, 129.3, 125.9, 119.1, 118.4, 44.8, 22.8. MS (ES): m/z 418.1 (M+). Anal, calcd, para C_{21}H_{16}ClN_{7}O\cdotH_{2}O: C, 57.87; H, 4.16; Cl, 8.13; N, 22.49. Encontrado: C, 57.78; H, 3.99; Cl, 8.38; N, 22.32.

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Compuesto D-008

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2h (100 mg, 0,294 mmol), adenina (44 mg, 0,324 mmol), K_{2}CO_{3} (45 mg, 0,324 mmol), y DMF (1 mL). El producto en bruto fue cromatografiado en MeOH/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 50 mg de un sólido amarillo claro (39%), mp 273,3-273,5ºC (se decolora). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.11 (dd, J=1.3, 8.0 Hz, 1H); 8.08 (s, 1H); 8.05 (s, 1H); 8.00 (dd, J=1.3, 7.8Hz, 1H); 7.79-7.83 (m, 2H); 7.63-7.66 (m, 2H); 7.56 (t, J=7.9Kz, 1H); 7.21 (br s, 2H); 5.17 (d, J=17 Hz, 1H); 4.97 (d, J=17 Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.2, 156.1, 152.8, 152.2, 150.2, 143.3, 142.0, 135.6, 133.1, 132.3, 131.9, 131.1, 131.0, 130.9, 129.4, 128.4, 126.0, 122.5, 118.4, 45.0. MS (ES): m/z 438.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{13}Cl_{2}N_{7}O\cdot0.1CH_{4}O\cdot0.6H_{2}O(0.15KCl: C, 52.09; H, 3.18; N, 21.15. Encontrado: C, 51.85; H, 2.93; N, 21.01.

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Compuesto D-009

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2i (400 mg, 1,05 mmol), adenina (155 mg, 1,15 mmol), K_{2}CO_{3} (159 mg, 1,15 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 344 mg de un sólido blanco (68%), mp 299,9-300,1ºC (se decolora). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.08 (s, 1H); 7.89 (s, 1H); 7.58-7.73 (m, 5H); 7.51 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.46 (d, J=1.5 Hz, 2H); 7.27-7.41 (m, 3H); 7.14-7.27 (m, 3H); 5.14 (d, J=17 Hz, 1H); 4.82 (d, J=17 Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.6, 156.2, 152.8, 152.5, 150.0, 149.0, 141.7, 140.2, 137.7, 135.0, 133.3, 133.2, 131.8, 130.7, 130.1, 129.8, 129.5, 128.8, 128.6, 128.4, 127.1, 118.4, 117.6, 45.3. MS (ES): m/z 480.1 (M+). Anal. calcd. para C_{26}H_{18}ClN_{7}O: C, 65.07; H, 3.78; Cl, 7.39; N, 20.43. Encontrado: C, 64.77; H, 3.75; Cl, 7.43; N, 20.35.

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Compuesto D-010

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2j (200 mg, 0,626 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (93 mg, 0,546 mmol), K_{2}CO_{3} (95 mg, 0,689 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 125 mg de un sólido blanquecino (46%), mp 213,9ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.53 (br s, 1H); 8.49 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 7.78 (t, J=7.9 Hz, 1.H); 7.63 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7.59 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7.49 (d, J=6.9 Hz, 1H); 7.24-7.41 (m, 3H); 4:32-4.45 (m, 2H); 2.14 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.9, 157.2, 154.2, 151.5, 149.6, 143.5, 136.1, 135.9, 135.1, 133.2, 131.3, 130.3, 130.0, 129.9, 129.1, 127.6, 127.1, 32.4, 17.5. MS (ES): m/z 438.0 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{15}ClN_{6}OS. -C, 58.00; H, 3.48; Cl, 8.15; N, 19.32; S, 1.31. Encontrado: C, 58.05; H, 3.38; Cl, 8.89; N, 18.38; S, 7.00.

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Compuesto D-011

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2k (210 mg, 0,650 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (122 mg, 0,715 mmol), K_{2}CO_{3} (99 mg, 0,715 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 240 mg de un sólido blanquecino (84%), mp 244,0ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.56 (br s, 1H); 8.50 (s, 1H); 8.45 (s, 1H); 7.81 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7.74 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.62 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7.46-7.55 (m, 1H); 7.29-7.42 (m, 2H); 4.47-4.59 (m, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.4, 157.3 (d, J=249 Hz), 156.4, 153.8, 151.0, 149.1, 143.2, 135.0, 132.9, 131.8 (d, J=8.0 Hz), 130.8, 129.9, 126.7, 125.3 (d, J=3.5 Hz), 123.6 (d, J=13 Hz), 117.0, 116.2 (d, J=19 Hz), 31.7. MS (ES): m/z 439.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}ClFN_{6}OS; C, 54.74; H, 2.76; Cl, 8.08; N, 19.15; S, 7.31. Encontrado: C, 54.42; H, 2.88; Cl, 8.08; N, 18.87; S, 7.08.

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Compuesto D-012

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2k (210 mg, 0,650 mmol), adenina (97 mg, 0,715 mmol), K_{2}CO_{3} (99 mg, 0,715 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 137 mg de un sólido marrón claro (50%), mp 295,6-295,8ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.05 (s, 1H); 8.04 (s, 1H); 7.75 (t, J=7.6 Hz, 1H); 7.74 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7.62-7.69 (m, 1H); 7.61 (d, J=7.6 Hz, 1H); 7.47-7.55 (m, 1H); 7.48 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7.41 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7.24 (br S, 2H); 5.19 (d, J=17 Hz, 1H); 5.03 (d, J=17 Hz, 1H); ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.7, 157.6 (d, J=250 Hz), 156.2, 152.8, 152.4, 150.0, 149.2, 141.8, 135.4, 133.3, 132.5 (d, J=8.0 Hz), 131.0, 130.4, 127.3, 126.2 (d, J=3.5 Hz), 123.1 (d, J=14 Hz), 118.4, 117.6, 117.2 (d, J=19 Hz), 45.1. MS (ES): m/z 422.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{13}ClFN_{7}O\cdot0.05C_{2}H_{6}O: C, 56.92; H, 3.16; Cl, 8.36; N, 23.12. Encontrado: C, 56.79; H, 3.20; Cl, 8.46; N, 22.79.

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Compuesto D-013

3-bifenilo-2-ilo-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2i (400 mg, 1,05 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (196 mg, 1,15 mmol), K_{2}CO_{3} (159 mg, 1,15 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue cromatografiado en MeOH/CH_{2}Cl_{2} y posteriormente recristalizado de EtOH para proporcionar 439 mg de un sólido cristalino amarillo claro (84%), mp 222,0-222,5ºC (dec.). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.56 (br s, 1H); 8.55 (s, 1H); 8.45 (s, 1H); 7.73 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7.64 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7.50-7.59 (m, 4H); 7.41-7.48 (m, 1H); 7.25-7.38 (m, 5H); 4.41 (d, J=16 Hz, 1H); 4.16 (d, J=16 Hz, 1H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.2, 157.0, 153.7, 151.5, 149.7, 149.3, 143.5, 139.9, 137.8, 135.1, 134.1, 133.3, 131.5, 130.5, 130.3, 129.1, 128.9, 128.4, 128.4, 126.9, 117.5, 32.3. MS (ES): m/z 497.0 (M+). Anal. calcd. para C_{26}H_{17}ClN_{6}OS: C, 62.84; H, 3.45; Cl, 7.13; N, 16.91; S, 6.45. Encontrado: C, 62.60; H, 3.47; Cl, 7.15; N, 16.65; S, 6.41.

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Compuesto D-014

5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 21 (250 mg, 0,746 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (140 mg, 0,821 mmol), K_{2}CO_{3} (113 mg, 0,821 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 254 mg de un sólido blanquecino (76%), mp 237,0ºC (dec.; se decolora a 154,6ºC). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.53 (br s, 1H); 8.52 (s, 1H); 8.45 (s, 1H); 7.78 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7.64 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7.59 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7.48 (d, J=7.3 Hz, 1H); 7.42 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.15 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7.03 (t, J=7.5 Hz, 1H); 4.45 (s, 2H); 3.76 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.9, 157.1, 154.8, 154.7, 151.5, 149.6, 143.6, 135.1, 133.2, 131.3, 130.4, 130.0, 127.0, 124.8, 121.2, 117,8, 112.7, 56.1, 32.0. MS (ES): m/z 451.0 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{15}ClN_{6}O_{2}S\cdot0.15C_{2}H_{6}O\cdot0.05KCl: C, 55.43; H, 3.47; Cl, 8.07; N, 18.21; S, 6.95. Encontrado: C, 55.49; H, 3.68; Cl, 7.95; N, 17.82; S, 6.82.

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Compuesto D-015

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2e (200 mg, 0,619 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (116 mg, 0,681 mmol), K_{2}CO_{3} (94 mg, 0,681 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 152 mg de un sólido blanco (56%), mp 222,7-223,8ºC (se decolora). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.56 (br s, 1H); 8.48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 7.89 (dt, J=5.6, 8.1 Hz, 1H); 7.76 (dd, J=1.6, 7.3 Hz, 1H); 7.67 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7.56 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.47 (t, J=7.1 Hz, 1H), 7.41-7.53 (m, 2H); 7.37 (dd, J=8.7, 11 Hz, 1H); 4.38-4.52 (m, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.9 (d, J=264 Hz), 157.6, 156.8, 154.1, 151.5, 149,6, 149.0, 143.6, 136.4 (d, J=11 Hz), 133.9, 132.2, 131.7, 131.6, 130.5, 130.2, 128.8, 123.6, 114.4 (d, J=20 Hz), 110.2, 32.0. MS (ES): m/z 439.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}ClFN_{6}OS\cdot0.5C_{2}H_{6}O: C, 54.61; H, 3.27; Cl, 7.68; N, 18.19; S, 6.94. Encontrado: C, 54.37; H, 3.26; Cl, 7.89; N, 18.26; S, 6.55.

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Compuesto D-016

3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2a (200 mg, 0,546 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (102 mg, 0,601 mmol), K_{2}CO_{3} (83 mg, 0,601 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 172 mg de un sólido blanquecino (65%), mp 160-180ºC (se descompone gradualmente). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.55 (br s, 1H); 8.49 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 7.72 (d, J=6.9 Hz, 1H); 7.66 (d, J=6.9 Hz, 1H) 7.38-7.54 (m, 3H); 7.22 (s, 1H); 4.36-4.52 (m, 2H); 3.94 (s, 3H); 3.89 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.1, 155.4, 151.5, 151.1, 149.4, 143.2, 134.6, 132.3, 131.6, 131.5, 130.4, 128.7, 113.6, 108.4, 105.8, 56.5, 56.1, 32.0. MS (ES): m/z 481.1 (M+). Anal. calcd. para C_{22}H_{17}ClN_{6}O_{3}S\cdot0.5C_{2}H_{6}O\cdot0.05KCl: C, 54.41; H, 3.97; Cl, 7.33; N, 16.55; S, 6.32. Encontrado: C, 54.43; H, 3.94; Cl, 7.69; N, 16.69; S, 6.52.

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Compuesto D-017

6-bromo-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2b (200 mg, 0,519 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (97 mg, 0,570 mmol), K_{2}CO_{3} (79 mg, 0,572 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 123 mg de un sólido blanquecino (47%), mp 212-242ºC (se descompone gradualmente). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.07 (br s, 1H); 8.48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 8.24 (d, J=2.3 Hz, 1H); 8.06 (dd, J=2.3, 8.7 Hz, 1H); 7.76 (dd, J=1.9, 7.4 Hz, 1H); 7.70 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.51 (dd, J=2.1, 7.9 Hz, 1H); 7.46 (dd, J=1.9, 7.9 Hz, 1H); 4.47 (a, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.7, 156.8, 153.6, 151.5, 146.1, 143.6, 138.5, 134.0, 132.1, 131.8, 131.5, 130.5, 130.2, 129.9, 128.9, 128.8, 122.2, 120.3, 32.0. MS (ES): m/z 499.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}ClBrN_{6}OS\cdot0.2C_{2}H_{6}O\cdot0.05KCl: C, 47.79; H, 2.59; N, 16.39; S, 6.25, Encontrado: C, 47.56; H, 2.54; N, 16.25; S, 6.58.

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Compuesto D-018

3-(2-clorofenilo)-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-trifluorometilo-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2m (200 mg, 0,536 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (100 mg, 0,588 mmol), K_{2}CO_{3} (82 mg, 0,593 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 148 mg de un sólido blanco (56%), mp 218,5-219,4ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.52 (br S, 1H); 8.48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 8.43 (d, J=6.0 Hz, 1H); 8.26 (d, J=7. 5 Hz, 1H); 7.84 (dd, J=2.5, 6.7 Hz, 1H); 7.70-7.75 (m, 2H); 7.51-7.59 (m, 2H); 4.40-4.55 (m, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.0, 157.2, 154.2, 151.4, 149.6, 144.4, 143.4, 133.8, 133.0 (q, J=5.1 Hz), 132.0, 131.9, 131.6, 131.4, 130.6, 129.0, 127.3, 125.2 (q, J=30 Hz), 123.6 (q, J=273 Hz), 121.8, 32.6. MS (ES): m/z 489.0 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{12}ClF_{3}N_{6}OS: C, 51.59; H, 2.47; Cl, 7.25; N, 17.19; S, 6.56. Encontrado: C, 51.51; H, 2.55; Cl, 7.37; N, 17.05; S, 6.38.

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Compuesto D-019

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-benzo[g]quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2n (200 mg, 0,563 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (105 mg, 0,619 mmol), K_{2}CO_{3} (86 mg, 0,619 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 128 mg de un sólido amarillo oscuro (48%), mp 247,8-254,4ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13,56 (br s, 1H); 8.90 (S, 1H); 8.50 (s, 1H); 8.46 (s, 1H); 8.34 (s, 1H); 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1H); 8.16 (d, J = 8.2 Hz, 1H); 7.81 (dd, J=1.6, 7.3 Hz, 1H); 7.70 (t, J=7.5 Hz, 1H); 7.61-7.74 (m, 2H); 7.49 (t, J=7.5 Hz, 1H); 7.44-7.53 (m, 1H); 4.44-4.56 (m, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 161.3, 151.6, 151.5, 143.9, 142.2, 136.7, 134.4, 131.8, 131.6, 130.5, 129.7, 129.3, 128.8, 128.6, 128.3, 127.1, 125.2, 119.5, 32.4. MS (ES): m/z 471.0 (M+). Anal. calcd. para C_{24}H_{15}ClN_{6}OS\cdot0.2C_{2}H_{6}O\cdot0.05KCl: C, 60.57; H, 3.37; Cl, 7.69; N, 17.37; S, 6.63. Encontrado: C, 60.24; H, 3.46; CL, 7.50; N, 17.34; S, 6.69.

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Compuesto D-020

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2d (200 mg, 0,587 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (110 mg, 0,646 mmol), K_{2}CO_{3} (90 mg, 0,651 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 113 mg de un sólido cristalino amarillo (42%), mp 237,1-238,2ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.55 (br s, 1H); 8.48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 8.11 (s, 1H); 7.94 (d, J=8.3 Hz, 1H); 7.78 (d, J=8.1 Hz, 2H); 7.66 (d, J=6.7 Hz, 1H); 7.48-7.56 (m, 2H); 4.48 (s, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.8, 156.8, 153.5, 151.5, 149.6, 145.8, 143.6, 135.7, 134.0, 132.2, 132.1, 131.7, 131.5, 130.5, 130.2, 129.8, 128.8, 125.8, 121.9, 32.0. MS (ES): m/z 455.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}Cl_{2}N_{6}OS\cdot0.1C_{2}H_{6}O\cdot0.6H_{2}O(0.15KCl: C, 50.34; H, 2.89; Cl, 15.82; N, 17.44; S, 6,65= Encontrado; C, 50.02; H, 2.63; Cl, 15.51; N, 17.39; S, 6.81.

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Compuesto D-021

8-cloro-3-(2-clorofenilo)2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2h (200 mg, 0,589 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (124 mg, 0,726 mmol), K_{2}CO_{3} (100 mg, 0,726 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 202 mg de un sólido blanco (75%), mp 211,9-212,7ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.54 (br s, 1H); 8.47 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 8.12 (d, J=7.9 Hz, 1H); 8.07 (d, J=7.6 Hz, 1H); 7.78 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7.67 (d, J=7.1 Hz, 1H); 7.58 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7.42-7.54 (m, 2H); 4.52 (s, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.3, 156.9, 153.9, 151.5, 149.7, 143.5, 135.7, 134.0, 132.1, 131.8, 131.4, 131.1, 130.5, 130.3, 128.9, 128.3, 126.1, 122.4, 32.5. MS (ES): m/z 455.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}Cl_{2}N_{6}OS: C, 52.76; H, 2.66; Cl, 15.57; N, 18.46; S, 7.04: Encontrado: C, 52.65; H, 2.79; Cl, 15.32; N, 18.47; S, 7.18.

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Compuesto D-022

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2c (200 mg, 0,619 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (116 mg, 0,681 mmol), K_{2}CO_{3} (95 mg, 0,687 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 143 mg de un sólido cristalino blanco (53%), mp 151,4-154,2ºC (se decolora). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.55 (br s, 1H); 8.48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 8.23 (dd, J=6.3, 8.7 Hz, 1H); 7.77 (dd, J=1.7, 7.4 Hz, 1H); 7.64 (d, J=74 Hz, 1H); 7.57 (d, J=9.8 Hz, 1H); 7.45-7.52 (m, 3H); 4.48 (s, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 169.0 (d, J=253 Hz), 162.6, 159.3, 157.0, 154.0, 152.2, 151.7 (d, J=13 Hz), 146.1, 136.5, 134.7, 134,2, 134.0, 133.0, 132.6 (d, J=11 Hz), 131.3, 120.2, 118.9 (d, J=24 Hz), 115.3 (d, J=22 Hz), 34.6, MS (ES): m/z 439.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}ClFN_{6}OS\cdot0.4-C_{2}H_{6}O\cdot0.4H_{2}O(0.15KCl: C, 52.52; H, 3.22; Cl, 8.57; N, 17.67. Encontrado: C, 52.25; H, 3.11; Cl, 8.20; N, 17.69.

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Compuesto D-023

3-(2-clorofenilo)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2o (216 mg, 0,617 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (116 mg, 0,681 mmol), K_{2}CO_{3} (94 mg, 0,680 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 212 mg de un sólido cristalino amarillo (74%), mp 218,0-218,3ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.56 (br s, 1H); 8.49 (s, 1H); 8.42 (s, 1H); 8.38-8.45 (m, 2H); 8.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.81 (d, J=6.5 Hz, 1H); 7.68 (d, J=6.7 Hz, 1H); 7.43-7.58 (m, 2H); 4.53 (s, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 157.7, 154.4, 153.3, 149.8, 149.3, 147.6, 145.2, 141.4, 131.5, 129.8, 129.7, 129.2, 1.28.4, 127.1, 126.7, 122.7, 120.3, 119.4, 29.9. MS (ES): m/z 466.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}ClN_{7}O_{3}S\cdot0.4C_{2}H_{6}O\cdot0.05KCl: C, 51.19; H, 2.97; Cl, 7.63; N, 20.09; S, 6.57. Encontrado: C, 51.27; H, 2.88; Cl, 7.40; N, 20.04; S, 6.52.

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Compuesto D-024

3-(2-clorofenilo)-6-hidroxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2p (200 mg, 0,552 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (117 mg, 0,685 mmol), K_{2}CO_{3} (95 mg, 0,687 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 182 mg de un sólido blanco, una mezcla del producto deseado y el derivado del acetilo. Una porción de este material (120 mg) fue suspendida en una mezcla de MeOH (2 mL) y NaHCO_{3} acuoso (satd., 1 mL) y agitada rápidamente durante 4 horas. La mezcla fue concentrada in vacuo, suspendida en H_{2}O (10 mL), y almacenada a 4ºC durante una noche. El sólido blanco fue recogido y secado a 103 mg (66%), mp 186-214ºC (se descompone gradualmente). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.48 (s, 1H); 8.45 (s, 1H); 7.71 (d, J=6.8 Hz, 1H); 7.62-7.64 (m, 2H); 7.43-7.51 (m, 2H); 7.40-7.43 (m, 1H); 7.35 (d, J=8.8 Hz, 1H); 4.39-4.52 (m, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.6, 157.1, 156.2, 151.4, 150.8, 149.3, 144.1, 140.2, 134.5, 132.2, 131.6, 131.4, 130.4, 129.3, 128.7, 124.8, 121.7, 109.8, 32.0. MS (ES): m/z 437.0 (M+). Anal. calcd. para (2 C_{20}H_{13}ClN_{6}O_{2}S\cdot0.1C_{2}H_{6}O.6H_{2}O: C, 49.68; H, 3.88; Cl, 7.26; N, 17.21/S, 6.57. Encontrado: C, 49.43; H, 3.62; Cl, 7.32; N, 17.07; S, 6.58.

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Compuesto D-025

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2f (300 mg, 0,883 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (165 mg, 0,972 mmol), K_{2}CO_{3} (134 mg, 0,972 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 341 mg de un sólido cristalino naranja claro (85%), mp 233,7-234,4ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.58 (br s, 1H); 8.50 (s, 1H); 8.47 (s, 1H); 7.77-7.85 (m, 2H); 7.68 (d, J=8.1 Hz, 2H); 7.65 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7.41-7.56 (m, 2H); 4.45 (d, J=1.2 Hz, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.7, 156.8, 153.8, 151.5, 149.6, 149.5, 143.5, 135.4, 134.1, 133.3, 132.2, 131.6, 131.6, 130.5, 130.2, 128.8, 127.1, 117.6, 32.0. MS (ES): m/z 455.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}Cl_{2}N_{6}-OS\cdotC_{2}H_{6}O\cdot0.3H_{2}: C, 52.14; H, 3.70; Cl, 13.99; N, 16.58; S, 6.33. Encontrado: C, 52.07; H, 3.37; Cl, 13.40; N, 16.65; S, 6.42.

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Compuesto D-026

3-(2-clorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2g (300 mg, 0,940 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (176 mg, 1,03 mmol), K_{2}CO_{3} (142 mg, 1,03 mmol), y DMF (5 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 324 mg de un sólido cristalino blanco (79%), mp 227,8-230,1ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.57 (br s, 1H); 8.49 (s, 1H); 8.47 (s, 1H); 7.69-7.78 (m, 2H); 7.66 (d, J=7.3 Hz, 1H); 7.55 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.39-7.52 (m, 2H); 7.36 (d, J=6.9 Hz, 1H); 4.38-4.50 (m, 2H); 2.74 (s, 3H). ^{13}C NMR. (DMSO-d_{6}) ppm: 161.2, 156.3, 152.4, 151.5, 148.6, 143.9, 141.0, 134.6, 134.5, 132.3, 131.7, 131.4, 130.4, 130.2, 128.7, 125.7, 119.0, 32.0, 22.8. MS (ES): m/z: 435.0 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{15}ClN_{6}OS\cdot0.65C_{2}H_{6}O\cdot0.1H_{2}O: C, 57.40; H, 4.13; Cl, 7.60; N, 18.01; S, 6.87. Encontrado: C, 57.11; H, 3.96; Cl, 7.45; N, 17.79; S, 6.90.

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Compuesto D-027

3-(2-clorofenilo)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2q (200 mg, 0,586 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (110 mg, 0,645 mmol), K_{2}CO_{3} (89 mg, 0,645 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 143 mg de un sólido cristalino amarillo claro (53%), mp 207,8ºC (se decolora; transpira a 136ºC). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.57 (br S, 1H); 8.49 (s, 1H); 8.46 (s, 1H); 8.11 (t, J=9,4 Hz, 1H); 7.88 (dd, J=7.3, 11 Hz, 1H); 7.77 (dd, J=1.7, 7.3 Hz, 1H); 7.67 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7.42-7.55 (m, 2H); 4.48 (s, 2H), ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 159.5 (d, J=2,5 Hz), 154.6 (dd, J=14, 255 Hz), 154.0 (d, J=1.5Hz), 151.5, 149.3 (dd, J=14, 250 Hz), 145.1 (d, J=12 Hz), 143.9, 133.9, 132.1, 131.8, 131.4, 130.5, 128.9, 118.0 (d, J=4.9Hz), 115.8 (d, J=18 Hz), 114.6 (d, J=20 Hz), 32.0, MS (ES): m/z 457.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{11}ClF_{2}N_{6}OS: C, 52.58; H, 2.43; Cl, 7.76; N, 18.40; S, 7.02. Encontrado: C, 51.81; H, 2.37; Cl, 7.49; N, 18.04; S, 7.55.

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Compuesto D-028

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando el Intermedio 2r (118 mg, 0,365 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (68 mg, 0,402 mmol), K_{2}CO_{3} (56 mg, 0,402 mmol), y DMF (2 mL). El producto en bruto fue recristalizado de EtOH para proporcionar 103 mg de un sólido cristalino blanquecino (64%), mp 232,8-233,0ºC (se decolora), ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.56 (br s, 1H); 8.48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 7.81-7.86 (m, 3H); 7.76 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7.67 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7.40-7.54 (m, 2H); 4.48 (br s, 2H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 160.8 (d, J=247 Hz), 160.2 (d, J=3.3 Hz), 156.9, 152.3 (d, J=1.9Hz), 151.5, 149.7, 144.0, 143.6, 134.1, 132.1, 131.7, 131.5, 130.5, 130.4, 130.2, 128.8, 124.0 (d, J=24 Hz), 122.0 (d, J=8.7 Hz), 111.7 (d, J=24 Hz), 32.0, MS (ES): m/z 439.0 (M+). Anal. calcd. para C_{20}H_{12}
ClFN_{6}OS\cdot0.2C_{2}H_{6}O\cdot0.1H_{2}O: C, 54.46; H, 3.00; Cl, 7.88; N, 18.68. Encontrado: C, 54.09; H, 2.73; Cl, 7.80; N, 18.77.

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Compuesto D-029

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

Se añadió cloruro de tionilo (2,2 mL, 30 mmol) a una solución agitada de 2-amino-6-ácido metilbenzoico (1,51 g, 10 mmol) en benceno (50 mL) y la mezcla fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. Una vez enfriada, el solvente fue retirado in vacuo y eliminado en dos ocasiones con benceno (25 mL). El residuo fue disuelto en CHCl_{3} (50 mL) y tratado con 2-isopropilanilina (2.83 mL, 20 mmol). La solución acuosa fue posteriormente calentada bajo reflujo durante 3 horas. Entonces el TLC (50% EtOAc/hexano) indicó que la reacción se había completado. Después de enfriarse hasta alcanzar la temperatura ambiente, la mezcla de la reacción fue vertida sobre un tapón de gel de sílice de 4 cm y pasada por 20% EtOAc/hexano. Las fracciones con el producto fueron combinadas y concentradas in vacuo. El residuo fue disuelto en HOAc (50 mL) y tratado con cloruro de cloroacetilo (1.6 mL, 20 mmol) y la mezcla fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. La reacción fue enfriada y concentrada in vacuo. Los restos de HOAc fueron eliminados mediante destilación azeotrópica con tolueno (25 mL) tres veces. El residuo fue disuelto en tolueno (10 mL) y vertido a través de un tapón de gel de sílice de 4 cm, pasando por 20% EtOAc/hexano. Las fracciones con el producto fueron identificadas mediante LCMS (MS (ES): m/z 327 (M+)), y concentradas in vacuo para proporcionar 975 mg (30%) en forma de espuma blanca. El cloruro de espuma blanca (450 mg, 1,36 mmol) fue disuelto en DMF (10 mL) y tratado con adenina (275 mg, 2,04 mmol) y K_{2}CO_{3} (281 mg, 2,04 mmol) y la mezcla fue agitada durante una noche a temperatura ambiente. A continuación se vertió la suspensión en 200 mL de agua, agitada a temperatura ambiente durante 30 min. y después enfriada en el frigorífico durante 30 minutos. El sólido resultante se recogió mediante filtrado al vacío y fue recristalizado con EtOH para proporcionar 285 mg (49%) de un sólido blanquecino. mp 258.0-258.2ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.19 (S, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.60 (m, 3H), 7.45 (m, 2H), 7.23 (m, 3H), 5.11 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4.71 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.73 (q, J=6.9 Hz, 1H), 1.34 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.13 (d, J=6.8 Hz, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 161.9, 156.2, 152.8, 151.6, 150.1, 148.4, 146.1, 142.2, 140.8, 134.3, 133.7, 130.6, 130.0, 129.0, 127.7, 127.6, 125.8, 119.2, 118.4, 44.8, 28.3, 24.4, 23.3, 22.9. MS (ES): m/z 426.4 (M+). Anal. calcd. para C_{24}H_{23}N_{7}O: C, 67.75; H, 5.45; N, 23.04. Encontrado: C, 67.60; H, 5.45; N, 22.82.

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Compuesto D-030

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

Se añadió cloruro de tionilo (2,2 mL, 30 mmol) a una solución agitada de 2-amino-6-ácido metilbenzoico (1,51 g, 10 mmol) en benceno (50 mL) y la mezcla fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. Una vez enfriada, el solvente fue retirado in vacuo y eliminado en dos ocasiones con benceno (25 mL). El residuo fue disuelto en CHCl_{3} (50 mL) y tratado con o-toluidina (2,13 mL, 20 mmol). La solución acuosa fue posteriormente calentada bajo reflujo durante 3 horas. Entonces el TLC (50% EtOAc/hexano) indicó que la reacción se había completado. Después de enfriarse hasta alcanzar la temperatura ambiente, la mezcla de la reacción fue vertida sobre un tapón de gel de sílice de 4 cm y pasada por 20% EtOAc/hexano. Las fracciones con el producto fueron combinadas y concentradas in vacuo. El residuo fue disuelto en HOAc (50 mL) y tratado con cloruro de cloroacetilo (1.6 mL, 20 mmol) y la mezcla fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. La reacción fue enfriada y concentrada in vacuo. Los restos de HOAc fueron eliminados mediante destilación azeotrópica con tolueno (25 mL) tres veces. El residuo fue disuelto en tolueno (10 mL) y vertido a través de un tapón de gel de sílice de 4 cm, pasando por 20% EtOAc/hexano. Las fracciones con el producto fueron identificadas mediante LCMS [MS (ES): m/z 299 (M+)), y concentradas in vacuo para proporcionar 476 mg (16%) en forma de espuma blanca. El cloruro de espuma blanca (470 mg, 1,57 mmol) fue disuelto en DMF (10 mL) y tratado con adenina (423 mg, 3,14 mmol) y K_{2}CO_{3} (433 mg, 3,14 mmol) y la mezcla fue agitada durante una noche a temperatura ambiente. A continuación se vertió la suspensión en 200 mL de H_{2}O, agitada a temperatura ambiente durante 30 min. y después enfriada en el frigorífico durante 30 minutos. El sólido resultante se recogió mediante filtrado al vacío y fue recristalizado con EtOH para proporcionar 123 mg (20%) de un sólido blanquecino. mp 281,5-282,7ºC (se descompone). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.07 (s, 1H); 8.05 (s, 1H); 7.61 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.48 (m, 4H), 7.25 (m, 3H), 5.09 (d, J=17,4 Hz, 1H), 4.76 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.18 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 161.3, 156.2, 152.8, 151.4, 150.0, 148.5, 142.2, 140.9, 136.1, 135.4, 134.3, 131.7, 130.1, 130,6, 129.0, 128.0, 125.8, 119.2, 118.5, 44.8; 22.9, 17.4, MS (ES): m/z 398.2 (M+). Anal. calcd. para C_{22}H_{19}N_{7}O: C, 66.49; H, 4.82; N, 24.67. Encontrado: C, 66.29; H, 4.78; N, 24.72.

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Compuesto D-031

3-(2-fluorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Se añadió cloruro de tionilo (2,2 mL, 30 mmol) a una solución agitada de 2-amino-6-metil-ácido benzoico (1,51 g, 10 mmol) en benceno (50 mL) y la mezcla fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. Una vez enfriada, el solvente fue retirado in vacuo y eliminado en dos ocasiones con benceno (25 mL). El residuo fue disuelto en CHCl_{3} (50 mL) y tratado con 2-fluoroanilina (1,93 mL, 20 mmol). La solución acuosa fue posteriormente calentada bajo reflujo durante 3 horas. Entonces el TLC (50% EtOAc/hexano) indicó que la reacción se había completado. Después de enfriarse hasta alcanzar la temperatura ambiente, la mezcla de la reacción fue vertida sobre un tapón de gel de sílice de 4 cm y pasada por 20% EtOAc/hexano.

Las fracciones con el producto fueron combinadas y concentradas in vacuo. El residuo fue disuelto en HOAc (50 mL) y tratado con cloruro de cloroacetilo (1.6 mL, 20 mmol) y la mezcla fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. La reacción fue enfriada y concentrada in vacuo. Los restos de HOAc fueron eliminados mediante destilación azeotrópica con tolueno (25 mL) tres veces. El residuo fue disuelto en tolueno (10 mL) y vertido a través de un tapón de gel de sílice de 4 cm, pasando por 20% EtOAc/hexano. Las fracciones con el producto fueron identificadas mediante LCMS [MS (ES): m/z 303 (M+)), y concentradas in vacuo para proporcionar 1,12 g (37%) en forma de espuma blanca. El cloruro de espuma blanca (455 mg, 1,50 mmol) fue disuelto en DMF (10 mL) y tratado con 6-mercaptopurina monohidrato (510 mg, 3,0 mmol) y K_{2}CO_{3} (414 mg, 3,0 mmol) y la mezcla fue agitada durante una noche a temperatura ambiente. A continuación se vertió la suspensión en 200 mL de agua, agitada a temperatura ambiente durante 30 min. y después enfriada en el frigorífico durante 30 minutos. El sólido resultante se recogió mediante filtrado al vacío y fue recristalizado con EtOH para proporcionar 487 mg (77%) de un sólido blanquecino. mp 151,9-152,2ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.48 (s, 1H0, 8.44 (s, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.48 (m, 2H), 7.33 (m, 3H), 4.55 (d, J=15.1 Hz, 1H), 4.48 (d, J=15.1, Hz, 1H), 2.73 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 161.3, 157.8 (d, J=249.1 Hz), 156.9, 152.8, 151.5, 149.6, 148.6, 143.6, 140.9, 134.7, 131.9 (d, J=8.0Hz), 131.4, 130.2, 125.6 (d, J=3.6Hz), 125.5, 124.4 (d, J=13.5Hz), 118.8, 116.6 (d, J=19.6 Hz), 56.4, 22.9. MS (ES): m/z 419.5 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{15}FN_{6}OS\cdot0.15 C_{2}H_{6}O: C, 60.14; H, 3.77; F, 4.47; N, 19.76; S, 7.54. Encontrado: C, 59.89; H,3.88; F,4.42; N,19.42; S,7.23.

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Compuesto D-032

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando 2j (200 mg, 0,626 mmol), adenina (93 mg, 0,689 mmol), K_{2}CO_{3} (95 mg, 0,689 mmol), y DMF (3 mL). El producto en bruto fue cromatografiado en MeOH/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar 101 mg de un sólido blanquecino (39%), mp 262,0-266,5ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.08 (s, 1H); 8.07 (s, 1H); 7.70 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7.58 (dd, J=0.6, 7.9 Hz, 1H); 7.43-7.57 (m, 4H); 7.36 (dd, J=0.7, 8.0 Hz, 1H); 7.26 (br s, 2H); 5.12 (d, J=18 Hz 1H); 4.78 (d, J=18 Hz, 1H); 2.20 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.7, 156.2, 152.9, 152.7, 150.0, 149.4, 142.1, 136.1, 135.1, 135.0, 133.2, 131.8, 130.3, 130.1, 128.9, 128.1, 127.2, 118.5, 117.9, 44.9, 17.4. MS (ES): m/z 418.1 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{16}ClN_{7}O\cdot0.1H_{2}O\cdot0.05KCl: C, 59.57; H, 3.86; Cl, 8.79; N, 23.16. Encontrado: C, 59.65; H, 3.80; Cl, 8.70; N, 22.80.

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Compuesto D-033

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado conforme al Procedimiento C utilizando 21 (250 mg, 0,746 mmol), adenina (111 mg, 0,821 mmol), K_{2}CO_{3} (113 mg, 0,821 mmol), y DMF (4 mL). El producto en bruto fue cromatografiado en MeOH/CH_{2}Cl_{3} y recristalizado con EtOH para proporcionar 124 mg de un sólido marrón (38%), mp 257,0-257,1ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.06 (s, 1H); 8.01 (s, 1H); 7.71 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7.57 (dd, J=0.9, 7.9 Hz, 1H); 7.52-7.59 (m, 1H); 7.50 (dd, J=1.6, 7.8 Hz, 1H); 7.38 (dd, J=1.1, 8.2 Hz, 1H); 7.27 (dd, J=0.6, 8.3 Hz, 1H); 7.24 (br s, 2H); 7.17 (dt, J=0.9, 7.6 Hz, 1H); 5.07 (d, J=17 Hz, 1H); 4.97 (d, J=17Hz, 1H); 3.79 (s, 3H). ^{13}C NMR (DMSO-d_{6}) ppm: 158.8, 156.2, 154.7, 153.2, 152.8, 150.1, 149.3, 142.0, 135.1, 133.2, 131.8, 130.1, 130.1, 127.2, 123.8, 121.6, 118.4, 117.9, 113.1, 56.2, 44.8. MS (ES): m/z 434.0 (M+). Anal. calcd. para C_{21}H_{16}ClN_{7}O_{2}\cdot0.5H_{2}O\cdot0.04KCl: C, 56.57; H, 3.84; Cl, 8.27; N, 21.99. Encontrado: C, 56.29; H, 3.75; Cl, 8.21; N, 21.61.

En general, los siguientes compuestos se realizaron de acuerdo con los métodos descritos y sirven para ilustrar mejor las realizaciones específicas de los compuestos de la invención:

3-(2,6-diclorofenilo)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-034) 3-(2-isopropilfenilo)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-035) 3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-036)

\newpage

3-bencilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-037) 3-butilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-038) 3-morfolin-4-ilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona, sal de acetato (D-039) 3-(3-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-040) 3-(3-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-041) 2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-J3-piridin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona (D-042) 3-bencilo-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-043) 3-(4-metilpiperazin-1-ilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona, sal de acetato (D-044) [5-fluoro-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo] éster etílico de ácido acético (D-045) 3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-046) 3-(2-metoxifenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-047) 2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona (D-048) 2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona (D-049) 2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butilo-3H-quinazolin-4-ona (D-050) 2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona, sal de acetato (D-051) 3-(4-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-052).

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Se prepararon compuestos adicionales de la presente invención mediante los siguientes procedimientos sintéticos.

Los siguientes compuestos intermedios se prepararon con el Procedimiento A anteriormente descrito.

21

3a R=ciclopropilo

3b R=ciclopropilmetilo

3c R=fenetilo

3d R=ciclopentilo

3e R=3-(2-cloro)piridilo

3f R=ácido 4-(2-metil)benzoico

3g R=4-nitrobencilo

3h R-ciclohexilo

3i R=E-(2-fenil)ciclopropilo

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Otros compuestos de la presente invención (D-053 a D-070) con la siguiente estructura central se comentan en la siguiente Sección experimental. Todos se prepararon siguiendo el Procedimiento C.

Estructura central:

22

23

24

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25

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2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-ciclopropil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-053)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3a (100mg, 0,4 mmol), 2-amino-6-mercaptopurina (80 mg, 0.48 mmol), y K_{2}CO_{3} (77 mg, 0,56 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 7.89 (d, J=0.9 Hz, 1H); 7.54 (t, J=7.4 Hz, 1H); 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.19 (d, J=7.2 Hz, 1H); 6.28 (S, 2H); 4,94 (s, 2H); 2.70 (s, 3H); 1.24 (d, J=6.5 Hz, 2H); 0.91 (s, 2H), MS (ES): m/z 380 (M+H), 190.

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3-ciclopropilmetil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3b (300 mg, 1,14 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (214 mg, 1,26 mmol), y K_{2}CO_{3} (189 mg, 1,37 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O, seguida de recristalización con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.60 (br S, 1H); 8.72 (s, 1H); 8.48 (s, 1H); 7.63 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7.42 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7.28 (d, J=7.3 Hz, 1H); 5.01 (s, 2H), -4.11 (d, J=6.8 Hz, 2H); 2.78 (s, 3H); 1.35 (quint, J=6.2 Hz, 1H); 0.44-0.59 (m, 4H). MS (ES): m/z 379 (M+H), 325.

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2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclopropilmetil-5-metil-30-quinazolin-4-ona (D-055)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3b (300 mg, 1,14 mmol), adenina (170 mg, 1,26 mmol), y K_{2}CO_{3} (189 mg, 1,37 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O, seguida de recristalización con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.21 (s, 1H); 8.10 (s, 1H); 7.52 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.18-7.31 (m, 3H); 7.06 (d, J=8.1 Hz, 1H); 5.68 (s, 2H); 4.14 (d, J=6.8 Hz, 2H); 2.77 (s, 3H); 1.34 (quint, J=6.4 Hz, 1H); 0.45-0.60 (m, 4H). MS (ES): m/z 362 (M+H), 308.

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2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-ciclopropilmetil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-056)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3b (280 mg, 1,1 mmol), 2-amino-6-mercaptopurina (200 mg, 1,2 mmol), y K_{2}CO_{3} (180 mg, 1,3 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 12.70 (br s, 1H); 7.95 (s, 1H); 7.64 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7.44 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.28 (d, J=7.4 Hz, 1H); 6.41 (s, 2H); 4.91 (s, 2H); 4.05 (d, J=6.8 HZ, 2H); 2.78 (s, 3H); 1.26-1.43 (m, 1H); 0.36-0.56 (m, 4H). MS (ES): m/z 394 (M+H), 340.

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5-metil-3-fenetilo-2-(90-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-057)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3c (750 mg, 2,4 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (442 mg, 2,6 mmol), y K_{2}CO_{3} (398 mg, 2,9 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O, ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.61 (s, 1H); 8.71 (s, 1H); 8.48 (s, 1H); 7.65 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.44 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.16-7.35 (m, 6H); 4.89 (s, 2H); 4.29 (br t, J=7.9 Hz, 2H); 3.08 (br t, J=7.8 Hz, 2H); 2.81 (s, 3H). MS (ES): m/z 429 (M+H), 105.

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2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-5-metil-3-fenetil-3H-quinazolin-4-ona (D-058)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3c (750 mg, 2,4 mmol), 2-amino-6-mercaptopurina (435 mg, 2,6 mmol), y K_{2}CO_{3} (398 mg, 2,9 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 12.61 (s, 1H); 7.95 (s, 1H); 7.65 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.45 (d, J=7.9Hz, 1H); 7.14-7.32 (m, 6H); 6.44 (s, 2H); 4.81 (s, 2H); 4.24 (br t, J=7.9 Hz, 2H); 3.04 (br t, J = 7.8 Hz, 2H); 2.81 (s, 3H). MS (ES): m/z 444 (M+H), 340.

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3-ciclopentil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-059)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3d (100mg, 0,36 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (73 mg, 0,43 mmol), y K_{2}CO_{3} (100 mg, 0,72 mmol). El producto fue purificado mediante recristalización con MeOH. ^{1}H NMR, (DMSO-d_{6}) \delta: 13.62 (br s, 1H); 8.77 (s, 1H); 8.48 (s, 1H); 7.62 (t, J=7.7 Hz,: 1H); 7.42 (d, J=7.8 Hz, 2H); 7.26 (d, J=7.4 Hz, 1H); 5.03 (s, 2H); 4.80 (quint, J=8.0 Hz, 1H); 2.76 (s, 3H),2.12-2.31 (m, 2H); 1.79-2.04 (m, 4H); 1.44-1.58 (m, 2H). MS (ES): m/z 393 (M+H), 325.

\vskip1.000000\baselineskip

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclopentil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-060)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3d (100 mg, 0,36 mmol), adenina (58 mg, 0,43 mmol), y K_{2}CO_{3} (100 mg, 0,72 mmol). El producto fue purificado mediante recristalización con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.15 (S, 1H); 8.11 (s, 1H); 7.52 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.16-7.31 (m, 3H); 7.10 (d, J=8,0 Hz, 2H); 5.68 (s, 2H); 4.78 (quint, J=8.3 Hz, 1H); 2.74 (s, 3H); 2.09-2.32 (m, 2H); 1.86-2.04 (m, 2H); 1.68-1.86 (m, 2H); 1.43-1.67 (m, 2H). MS (ES): m/z 376 (M+H), 308, 154.

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3-(2-cloro-piridin-3-ilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-061)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3e (500 mg, 1,6 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (289 mg, 1,7 mmol), y K_{2}CO_{3} (262 mg, 1,9 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O. MS (ES): m/z 436 (M+H), 200.

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2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-cloro-piridin-3-ilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-062)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3e (500 mg, 1,6 mmol), adenina (230 mg, 1,7 mmol), y K_{2}CO_{3} (262 mg, 1,9 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.59 (dd, J=1.7, 4.8 Hz, 1H); 8.22 (dd, J=1.7, 7.8 Hz, 1H): 8.025 (s, 1H); 8.017 (s, 1H); 7.60-7.72 (m, 2H); 7.35 (t, J=8.2 Hz, 2H); 7.22 (s, 2H); 5,12 (d, J=17.0 Hz, 1H); 5.02 (d, J=17.0 Hz, 1H); 2.72 (s, 3H). MS (ES): m/z 419 (M+H).

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3-metilo-4-[5-metil-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo]-ácido benzoico (D-063)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3f (400 mg, 1,17 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (219 mg, 1,29 mmol), y K_{2}CO_{3} (226 mg, 1,64 mmol). El producto fue purificado mediante recristalización con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.54 (br S, 1H); 8.44 (s, 1H); 8.42 (s, 1H); 7.80 (s, 2H); 7.71 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.59 (d, J=8.6 Hz, 1H); 7.52 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.34 (d, J=7.4 Hz, 1H); 4.46 (d, J=15.4 Hz, 1H); 4.34 (d, J=15.7 Hz, 1H); 3.17 (d, J=4. 4 Hz, 1H); 2.73 (s, 3H); 2.17 (s, 3H). MS (ES): m/z 459 (M+H).

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3-ciclopropil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-064)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3a (100 mg, 0,40 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (90 mg, 0,53 mmol), y K_{2}CO_{3} (97 mg, 0,7 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.69 (d, J=0.8 Hz, 1H); 8.47 (s, 1H); 7.57 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.23 (d, J=7.3 Hz, 1H); 5.08 (s, 2H); 3.06-3.18 (m, 1H); 2.74 (s, 3H); 1.14-1.36 (m, 2H); 0.92-1.06 (m, 2H).

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2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclopropil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-065)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3a (100 mg, 0,40 mmol), adenina (94 mg, 0,7 mmol), y K_{2}CO_{3} (121 mg, 0,88 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con H_{2}O. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.19 (d, J=0.9 Hz, 1H); 8.09 (d, J=1.0 Hz, 1H); 7.48 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7.13-7.29 (m, 3H); 7.04 (d, J=8.1 Hz, 1H); 5.74 (s, 2H); 3.00-3.13 (m, 1H); 2.73 (s, 3H); 1.18-1.38 (m, 2H); 0.94-1.09 (m, 2H).

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5-metil-3-(4-nitro-bencilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-066)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3g (200 mg, 0,58 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (148 mg, 0,87 mmol), y K_{2}CO_{3} (160 mg, 1,16 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con MeOH, ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.44 (br s, 1H); 8.50 (s, 1H); 8.31 (s, 1H); 8.03 (d, J=8.6 Hz, 2H); 7.58 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7.37 (d, J=8.3 Hz, 3H); 7.22 (d, J=7.5Hz, 1H); 5.44 (s, 2H); 4.70 (s, 2H); 2.66 (s, 3H). MS (ES): m/z 460 (M+H).

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3-ciclohexil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-067)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3h (150 mg, 0,52 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (97 mg, 0,57 mmol), y K_{2}CO_{3} (86 mg, 0,62 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.66 (br s, 1H); 8.82 (s, 1H); 8.50 (s, 1H); 7.62 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.42 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7.26 (d, J=7.3 Hz, 1H); 5.01 (s, 2H); 4.11 (br s, 1H); 2.75 (s, 3H); 2.38-2.65 :(m, 2H); 1.58-1.90 (m, 4H); 1.37-1.57 (m, 1H); 0.71-1.26 (m, 3H). MS (ES): m/z 407 (M+H), 325.

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2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclohexil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-068)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3h (150 mg, 0,52 mmol), adenina (77 mg, 0,57 mmol), y K_{2}CO_{3} (86 mg, 0,62 mmol). El producto fue purificado mediante trituración con MeOH. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.15 (s, 2H); 7.54 (t, J=7.9Hz, 1H); 7.06-7.35 (m, 4H); 5.65 (S, 2H); 4.09 (br s, 1H); 2.73 (s, 3H); 1,41-1.90 (m, 6H); 0.99-1,34 (m, 4H). MS (ES): m/z 390 (M+H), 308.

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2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-ciclo-hexil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona (D-069)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3h (150 mg, 0,52 mmol), 2-amino-6-mercaptopurina (95 mg, 0,57 mmol), y K_{2}CO_{3} (86 mg, 0,62 mmol). El producto fue purificado mediante HPLC en fase invertida (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a: 18 min., detector a 220). MS (ES): m/z 422 (M+H), 340, 170.

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5-metil-3-(E-2-fenil-ciclopropilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-070)

Preparado de acuerdo con el procedimiento C utilizando 3i y 6-mercaptopurina monohidrato. El producto fue purificado mediante HPLC en fase invertida (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220). MS (ES): m/z 441.

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A continuación se recogen otros compuestos de la invención, junto con la ruta sintética hasta los compuestos D-071 a D118.

26

260

Procedimiento D: Una mezcla de amida 4a o 4b, FMOC-glicil-cloruro, y ácido acético glacial se calentó a 120ºC durante 1 a 4 horas. La mezcla resultante se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía flash para proporcionar una amina ciclizada protegida. Este material fue combinado con 10 equivalentes de octanetiol y una cantidad catalizadora de DBU en THF, y se agitó a temperatura ambiente hasta que la LCMS indicó que el material de agitado se había consumido. La reacción fue vertida directamente en una columna flash (equilibrada en CH_{2}Cl_{2}) y eluida con 0-5% MeOH/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar la amina libre, 5a o 5b. El compuesto 5c se preparó de forma parecida utilizando (\pm) FMOC-alanil-cloruro en lugar de FMOC-glicil cloruro.

Procedimiento E: Se combinaron cantidades equimolares de 5a o 5b, la cantidad apropiada de 6-cloropurina, y DIEA con EtOH en un vial pequeño y se calentaron a 80ºC. La reacción fue controlada regularmente mediante LCMS y se purificó como se ha indicado.

Procedimiento F: Se calentó una mezcla de amida 4b, cloruro de acetoxiacetilo y ácido acético glacial a 120ºC y se agitó durante dos horas. La reacción enfriada fue filtrada y los sólidos lavados con CH_{2}Cl_{2} para proporcionar el acetato ciclizado en forma de sólido blanco. Este material se combinó con K_{2}CO_{3} en metanol acuoso y se agitó durante una hora. Posteriormente se concentró in vacuo. Los sólidos resultantes fueron triturados con H_{2}O para proporcionar 6a en forma de sólido blanco.

27

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-[(9H-purin-6-ilamino)-metilo]-3H-quinazolin-4-ona (D-072)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 5b (50 mg, 0,165 mmol) y 6-cloropurina (26 mg, 0,165 mmol) en 1 mL EtOH. Después de cinco días, la reacción purificada por HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220A). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 12.99 (br s, 1H); 8.14 (br s, 1H); 8.12 (s, 1H); 7.85 (dt, J=5,7, 8.1 Hz., 1H); 7.68-7.79 (m, 3H); 7.57 (t, J=6.2 Hz., 1H); 7.57 (d, J=7.7 Hz., 1H); 7.50 (d, J=8.1 Hz., 1H); 7.35 (dd, J=8.4, 10.7 Hz., 1H); 4.15-4.55 (m, 2H). MS (ES): m/z 422 (M+H), 21.1.

28

2-[(2-amino-9H-purin-6-ilamino)metilo]-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona (D-074)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 5b (50 mg, 0,165 mmol) y 2-amino-6-cloropurina (28 mg,0,165 mmol) en 1 ml EtOH. Después de cinco días, la reacción purificada por HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220A). ^{1}H NMR. (DMSO-d_{6}) \delta: 12.13 (br s, 1H); 7.86 (dt, J=5.6, 8.2 Hz., 1H); 7.76-7.83 (m, 2H); 7.68 (br s, 1H); 7.61. (t, J=5.7 Hz., 1H); 7.61 (d, J=7.2 Hz., 1H); 7.53 (d, J=8.2 Hz., 1H); 7.35 (dd, J=8.2, 10.9 Hz., 1H); 5.66 (br s, 2 H); 4.16-4.50 (m, 1H); 4.09 (q, J=5.3 Hz., 2H). MS (ES): m/z 437 (M+H), 219.

29

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5-metilo-2-[(9H-purin-6-ilamino)metilo]-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-071)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 6-cloropurina (11 mg, 0,072 mmol) y 5a (20 mg, 0,072 mmol). Después de cinco días, la reacción fue enfriada con agua y se filtró la suspensión resultante. Los sólidos fueron purificados por HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220A). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 12.98 (br s, 1H); 8.14 (br s, 1H); 8.10 (s, 1H); 7.58-7.79 (m, 2H); 7.37-7.48 (m, 4H); 7.26-7.36 (m, 2H); 3.93-4.39 (m, 2H); 2.75 (s, 3H); 2.18 (s, 3H) MS (ES): m/z 398 (M+H), 199.

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30

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2-[(2-amino-9H-purin-6-ilamino)metilo]-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-073)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 5a (189 mg, 0,677 mmol) y 2-amino-6-cloropurina (115 mg, 0,677 mmol) en 3 ml EtOH. Después de tres días, la reacción fue filtrada para eliminar el exceso de purina y el filtrado purificado mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220ë) para proporcionar 7 mg del producto como sal TFA. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.88 (br s, 1H); 8.21 (s, 1H); 7.71 (t, J=7.7 Hz., 1H); 7.45-7.56 (m, 2H); 7.38-7.44 (m, 3H); 7.35 (d, J=7.5 Hz., 1H); 7.30 (br s, 1H); 4.40 (dd, J=4.5, 17.5 Hz., 1H); 4.27 (dd, J=5.3, 17,4 Hz., 1H); 2.75 (s, 3H); 2.09 (s, 3H). MS (ES): m/z 413 (M+H), 207, 163.

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31

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2-[(2-fluoro-9H-purin-6-ilamino)metilo]-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-076)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 5a (20 mg, 0,072 mmol) y 2-fluoro-6-cloropurina (16 mg, 0,094 mmol) en 1 ml EtOH. Después de 18 horas, la reacción fue purificada mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 1,5 min, 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda) y posteriormente recristalizada con EtOH para proporcionar 1,4 mg del producto en forma de un sólido amarillo, ^{1}H NMR (DMSO-d_{6})\delta: 13.12 (br s, 1H); 8.40 (br s, 1H); 8.15 (s, 1H); 7.66 (t, J=7.7Hz, 1H); 7.35-7.49 (m, 4H); 7.31 (d, J=7.2 Hz., 1H); 4.00-4.22 (m, 2H); 3.17 (s, 1H); 2.74 (s, 3H); 2.18 (s, 3H). MS (ES): m/z 416 (M+H), 208.

32

(2-clorofenilo)-dimetilamino-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-075)

D-015 (100 mg, 0,228 mmol) se combinó con hidróxido de amonio (28-30%, 1 mL) en DMF (2 mL) y se calentó a 80ºC. Después de 2 días, la reacción fue purificada mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 47 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda) para proporcionar el producto en forma de un sólido amarillo, \sim2 mg. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 13.52 (br s, 1H); 8.46 (s, 1H); 8.42 (s, 1H); 7.69 (dd, J=2.1, 7.3 Hz, 1H); 7.62 (dd, J=1.6, 7.6 Hz., 1H); 7.61 (t, J=8.0 Hz., 1H); 7.37-7.48 (m, 2H); 7.05 (d, J= 7.9 Hz., 1H); 6.96 (d, J=7.8 Hz., 1H); 4.32-4.45 (m, 2H); 2.80 (s, 6H). MS (ES): m/z 464 (M + H), 232.

33

5-(2-benciloxietoxi)-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-078)

A una solución de 2-benciloxietanol (0,3 mL) en DMF (1,0 mL) se añadió NaH (50 mg, 2,08 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, 0,5 mL se añadieron a una solución de IC-87185 (50 mg, 0,114 mmol) en DMF anhidro (0,75 mL). La reacción se calentó a 50ºC y se agitó durante 3 días. La purificación mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda) proporcionó el producto como un sólido heterogéneo, 150 \mug. MS (ES): m/z 571 (M+H), 481.

34

Éster de 6-aminopurina-9-ácido carboxílico 3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilmetilo (D-079)

A una solución de 3b (20 mg, 0,066 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (500 \muL) a 0ºC se añadió fosgeno (2M/tolueno, 36 \muL, 0,072 mmol), seguido de adenina (10 mg, 0,072 mmol), y DIEA (25 \muL, 0,145 mmol). Se dejó que la reacción alcanzase la temperatura ambiente y se agitó durante ocho días. La purificación mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda) proporcionó el producto en forma de mezcla. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 11.04 (br s, 1H); 8.61 (s, 1H); 8.40 (s, 1H); 7.85-7.95 (m, 1H); 7.76 (dd, J=5.4, 9.6 Hz, 1H); 7.70-7.78 (m, 1H); 7.52-7.63 (m, 3H); 7.38 (dt, J=8.3, 10.6 Hz., 1H); 4.76-4.89 (m, 2H). MS (ES): m/z 466 (M+H), 331, 305.

35

N-[3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilmetilo]-2-(9H-purin-6-ilsulfanilo)-acetamida (D-077)

Se combinó (9H-purin-6-ilsulfanilo)-ácido acético (63 mg, 0,296 mmol), 5b (108 mg, 0,355 mmol), EDC (68 mg, 0,355 mmol), HOBT (48 mg, 0,355 mmol), DIEA (62 \muL, 0,355 mmol), y DMF (1 mL) en un recipiente y se agitó a temperatura ambiente durante una hora. La reacción se diluyó con EtOAc (20 mL) y se lavó con salmuera diluida (2 x 13 mL). La fase orgánica fue concentrada in vacuo y cromatografiada en 5% MeOH/CH_{2}Cl_{2} para proporcionar los 91 mg del producto en forma de una espuma naranja viscosa. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 12.88 (br s, 1H); 8.72 (s, 1H); 8.62 (t, J=5.0 Hz, 1H); 8.49 (s, 1H); 7.88 (dt, J=5.6, 8.2 Hz, 1H); 7.73-7.78 (m, 1H); 7.67-7.72 (m, 1H); 7.57-7.65 (m, 2H); 7.38 (d, J=8.1 Hz., 1H); 7.36 (dd, J=8.3, 11,1 Hz., 1H); 4.11-4.24 (m, 2H); 3.96 (dd. J=5.0, 17.4 Hz, 1H); 3.78 (dd, J=5.2, 17.4 Hz, 1H). MS (ES): m/z 496 (M+H), 248.

36

2-[1-(2-fluoro-9H-purin-6-ilamino)etilo]-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-080)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 5c (50 mg, 0,17 mmol) y 2-fluoro-6-cloropurina (35 mg, 0,204 mmol) en 1,2 ml EtOH. La purificación mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda) proporcionó dos atropisómeros en forma de sólidos blancos. Los datos de uno de ellos son los siguientes: ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.48 (br d, J=6,4 Hz, 1H); 8.17 (s, 1H); 7.69 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7.53 (d, J=7,8 Hz, 1H); 7.44 (d, J=7.8 Hz, 2H); 7.33 (d, J=7.2 Hz, 2H); 7.07 (br t, J=7.2 Hz, 1H); 4.80 (br t, J=6.8 Hz, 1H); 2.74 (s, 3H), -2.09 (s, 3H); 1.38 (d, J=6.7 Hz, 3H. MS (ES): m/z 430 (M+H), 215.

37

5-metilo-2-[1-(9H-purin-6-ilamino) etilo]-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-081)

Preparado conforme al procedimiento E utilizando 5c (50 mg, 0,17 mmol) y 6-cloropurina (32 mg, 0,204 mmol) en 1,2 mL EtOH. La purificación mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda) proporcionó dos atropisómeros en forma de sólidos amarillos. Los datos de uno de ellos son los siguientes: _{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 8.39 (br s, 1H); 8.34 (s, 1H); 8.18 (s, 1H); 7.71 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.56 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7.49 (d, J=6.9 Hz, 1H); 7.28-7.43 (m, 3H), -7.20 (br s, 1H); 5.06 (br s, 1H); 2.73 (s, 3H); 2.04 (S, 3H); 1.51 (d, J=6.6 Hz, 3H), MS (ES): m/z 412 (M+H), 206.

38

Los siguientes compuestos de la presente invención (D-082 a D-109) fueron preparados como se señala en el Procedimiento C, utilizando 2-clorometilo-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (10 mg), el correspondiente nucleófilo XH (20 mg, exceso), y carbonato de potasio (10 mg) en DMF(0.25mL). La mezcla de la reacción fue agitada durante 16 horas a temperatura ambiente, enfriada con agua, y se recogió el producto sólido en bruto mediante filtrado y secado con aire. El material en bruto fue disuelto en 0,5 ml de DMSO y purificado mediante HPLC en fase invertida (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Se concentraron fracciones apropiadas in vacuo para generar los productos finales.

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2-(6-dimetilaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-082)

39

Rendimiento: 8,1 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.13 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.60 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.54-7.38 (m, 4H), 7.30 (d, J=7,4 Hz, 1H), 7.20 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.11 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4.76 (d, J=17.4 Hz, 1H), 3.33 (s, 6H), 2.73 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). LRMS (ES pos.) m/z = 426 (M+1).

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5-metilo-2-(2-metilo-6-oxo-1,6-dihidro-purin-7-ilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-083)

40

Rendimiento: 3,3 mg

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 12.06 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.60 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.55-7.38 (m, 4H), 7.30 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.15 (d, J=7.9 Hz, 1H), 5.26 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4.94 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s, 3H). Alquilación en purina N_{7} asignada de forma arbitraria basándose en el desplazamiento campo abajo de los protones de metileno debido al grupo carbonilo.

LRMS (ES pos.) m/z = 413 (M+1).

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5-metilo-2-(2-metilo-6-oxo-1,6-dihidro-purin-9-ilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-084)

41

Purificado de la misma mezcla de la reacción que D-083, Rendimiento: 3,6 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) 12.17 (s, 1H), 7.96 (s, 1H) 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57-7.39 (m, 4H), 7.32 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.08 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4.70 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2.73 (5, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.17 (s, 3H). LRMS (ES pos.) m/z = 413 (M+1).

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2-(amino-dimetilaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-085)

42

Rendimiento: 6,7 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 7.66 (s, 1H0, 7.61 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.55-7.40 (m, 4H), 7.32-7.26 (m, 2H), 6.74 (S, 2H), 4.94 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4.63 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4.63 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2.97 (s, 6H), 2.73 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2,08 (s, 3H). LRMS (ES pos.) m/z = 441 (M+1).

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2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-086)

43

Rendimiento: 9,5 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 12.54 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.69 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.43 (t, J=3.9 Hz, 1H), 7.34 = 7.26 (m, 4H), 6.16 (s, 2H), 4.32 (AB quartet, J_{AB}=14.8 Hz, \Deltan=23.7), 2.74 (s, 3H), 2.09 (s, 3H). LRMS (ES pos.) m/z = 430 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

2-(4-amino-1,3,5-triazin-2-ilsulfanilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-087)

44

Rendimiento: 5,8 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.10 (s, 1H), 7.70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.52 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.48-7.26 (m, 6H), 4.08 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.09 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 391 (M+1).

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5-metilo-2-(7-metilo-7H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-088)

45

Rendimiento: 3,1 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.52 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.45 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.35-7.20 (m, 4H), 4.41 (AB quartet, J_{AB}=15.3 Hz, \Deltav=19.2 Hz), 4.08 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.12 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 406 (M+1).

\newpage

5-metilo-2-(2-oxo-1,2-dihidro-pirimidin-4-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-089)

46

Rendimiento: 2,4 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 11.49 (s, 1H), 7.70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.60 (brt, J=6.0 Hz, 1H), 7.53-7.48 (m, 2H), 7.46-7.28 (m, 4H), 6.31 (d, J=6.7Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.12 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 391 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

5-metilo-2-purin-7-ilmetilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-090)

47

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 9.04 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.65.-7.54 (m, 2H), 7.53-7.39 (m, 3H), 7.31 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5.31 (d, J=17.6 Hz, 1H), 5.16 (d, J=17.6 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.09 (s, 3H). La alquilación en purina N7 vino determinada por el aumento del NOE entre el protón de posición 6 de la purina y los protones de metileno en el enlace entre la purina y los grupos de quinazolinona. LRMS (ES pos.) m/z = 383 (M+1).

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5-metilo-2-purin-9-ilmetilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-091)

48

De la misma reacción que produjo D-090. ^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 9.17 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.55 (S, 1H), 7.59 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.55-7.42 (m, 4H), 7.30 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5.26 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4.92 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.19 (s, 3H). Alquilación en purina N9 sugerida por la inexistencia de aumento del NOE entre los protones de posición 6 de la purina y los protones de metileno del enlace.

LRMS (ES pos.) m/z = 383 (M+1).

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5-metilo-2-(9-metilo-7H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-092)

49

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.52 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.69 (t, J=7, 7 Hz, 1H), 7.50 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7.44 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.36-7.27 (m, 4H), 4.38 (AB quartet, J_{AB}=15.5 Hz, \Deltav=21.0 Hz), 3.80 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.12 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 429 (M+1).

\newpage

2-(2,6-diamino-pirimidin-4-ilsulfanilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-093)

50

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 7.70 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.45-7.27 (m, 5H), 6.22 (br s, 1H), 5.80 (br s, 1H), 3.99 (AB quartet, J_{AB}=14.6 Hz, \Deltav=26.9 Hz, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.08 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 405(M+1).

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5-metilo-2-(5-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolil-3H-quinazolin-4-ona (D-094)

51

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.57 (s, 1H), 7.73 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.55-7.35 (m, 4H), 7.18 (s, 1H), 4.27 (s, 2H), 2.74 (s, 3H0, 2.55 (s, 3H), 2.08 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 429(M+1).

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5-metilo-2-(2-metilsulfanil-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-095)

52

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.30 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.72 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.47 9d, J=6.3 Hz, 1H), 7.38-7.26 (m, 4H), 4.34 (AB quartet, J_{AB}=16.1 Hz, \Deltav=23.6 Hz, 2H), 2.74 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 461(M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

2-(2-hidroxi-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-096)

53

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.08 (s, 1H), 7.69 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (brd, J=t 8 Hz, 2H), 7.33-7.50 (m, 4H), 4.28 (AB quartet, J_{AB}=15.5 Hz, \Deltav=21.3 Hz, 2H), 2.74 (s, 3H), 2.12 (a, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 431(M+1).

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5-metilo-2-(1-metil-1H-imidazol-2-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-097)

54

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 7.69 t, J=7.8 Hz, 1H), 7.46-7.37 (m, 5H), 7.32 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.20 (d, J=1.0 Hz, 1H), 6.48 (d, J=1.0 Hz), 3.83 (AB quartet, 0 Hz, Av=18.8 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.09 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 364(M+1).

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5-metil-3-o-tolilo-2-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-098)

55

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.98 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.44-7.31 (m, 5H), 4.04 (AB quartet, J_{AB}=15.5 Hz, \Deltav=19.1 Hz, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.10 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 364(M+1).

LRMS (ES pos.) 432 (M+1).

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2-(2-amino-6-cloro-purin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-099)

56

LRMS (ES pos.) 432 (M+1).

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2-(6-aminopurin-7-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-100)

57

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.19 (s, 3H), 7.66 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.59-7.43 (m, 5H), 7.34 9d, J=7.4 Hz, 1H), 7.23 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.90 (s, 2H), 5.21 (AB quartet, J_{AB}17.4 Hz, \Deltav=22.1 Hz, 2H), 2.72 (s, 3H), 1.93 (s, 3H). La alquilación en purina N7 fue confirmada por el aumento del NOE entre los siguientes protones: 1) protones de metileno y amina exocíclicos; 2) protones de amina y tolil metil.

LRMS (ES pos.) m/z = 398(M+1).

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2-(7-amino-1,2,3-triazolo[4,5-d]pirimidina-3-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-101)

58

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.43 (br s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.10 (br s, 1H), 7.62 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.49-7.28 (m, 5H), 7.22 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.49 (d, J=17.0 Hz, 1H), 5.19 (d, J=17.0 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). Alquilación en purina N7 determinada por similaridad con el espectro nmr de D-030.

LRMS (ES pos.) m/z = 399(M+1).

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2-(7-amino-1,2,3-triazolo[4,5-d]pirimidina-3-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-102)

59

De la misma mezcla de la reacción que D-101.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.27 (s, 1H), 8.20 (br s, 1H), 8.05 (br s. 1H), 7.70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.47-7.26 (m, 6H), 5.61 (AB quartet, J_{AB}=16.0 Hz, \Deltav=20.7 HZ, 2H), 2.75 (s, 3H), 1.98 (s, 3H)). Alquilación en purina N7 determinada por similaridad con el espectro nmr de D-100.

LRMS (ES pos.) m/z = 399(M+1).

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2-(6-amino-9H-purin-2-ilsulfanilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-103)

60

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 12.62 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.69 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.51 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=7.6,1.7 Hz, 1H), 7.35-7.15 (m, 6H), 4.12 (AB quartet, J_{AB}=1.45 Hz, \Deltav=18.2 Hz, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.10 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 430(M+1).

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2-(2-amino-etilamino-pirimidina-4-ilsulfanilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-104)

61

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 7.70 (T, J=7,8 Hz, 1H), 7.53 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.44-7.31 (m, 5H), 6.69 (br s, 1H), 5.83, (br s, 2H), 5.61 (s, 1H), 4.03 (d, J=14.6 Hz, 1H), 3.95 (d, J=1.4.6 Hz, 1H), 3.22-3.11 (m, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.06 (t, J=7.1 Hz, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 433(M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

2-(3-amino-5-metilsulfanil-1,2,4-triazol-1-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-105)

62

Rendimiento: 5,0 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{4}-MeOH) \delta: 7.67 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.55-7.37 (m, 4H), 7.35-7.27 (m, 2H), 4.77 (d, J=17.1 Hz, 1H), 4.60 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.14 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 393 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

2-(5-amino-3-metilsulfanil-1,2,4-triazol-1-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-106)

63

Rendimiento: 0,6 mg.

Purificado de la misma mezcla de la reacción que D-105. ^{1}H NMR (300 MHz, d_{4}-MeOH) \delta: 7.67 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.50-7.24 (m, 6H), 4.83 (d, J=16.5 Hz,1H), 4.70 (d, J=16.5 Hz, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.14 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 393 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

5-metilo-2-(6-metilaminopurin-9-ilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-107)

64

Rendimiento: 5,0 mg

^{1}H NMR (300 MHz, d_{4}-MeOH) \delta: 8.17 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.54-7.43 (m 4H), 7.31-7.23 (m, 2H), 5.14 (d, J=17,5 Hz, 1.H), 4.90 (d, J=17,5 Hz, 1H), 3.14 (br s, 3H), 2.79 (a, 3H), 2.22 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 412 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

2-(6-bencilaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-108)

65

Rendimiento: 6,7 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{4}-MeOH) \delta: 8.13 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.58 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.51-7.21 (m, 11H), 5.15 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4.91 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H, under H_{2}O Peak), 2.79 (s, 3H), 2.22 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 488 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

2-(2,6-diaminopuril-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona (D-109)

66

Duplicadas las cantidades de todos los reactantes. Rendimiento: 14 mg.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.53 (br s, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.64 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.53-7.40 (m, 4H), 7.33 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.27 9d, J=7,9 Hz, 1H), 4.96 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4.64 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.17 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 413 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos D-110 a D-115 de la siguiente estructura general se elaboraron a partir de los siguientes compuestos E-1 a E-3.

67

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Intermedio E-1

5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3,1-benzoxazin-4-ona

68

Paso 1. Una suspensión de ácido 6-metilantranílico (2 g, 13,2 mmol) en cloruro de cloroacetilo (12 mL, amplio exceso) fue agitada a 115ºC en un vial sellado durante 30 minutos. La solución resultante fue enfriada hasta alcanzar la temperatura ambiente y tratada con éter (-5 mL). Tras enfriarse a 4ºC durante una noche, el precipitado marrón resultante fue recogido mediante filtrado, lavado con éter y secado in vacuo para obtener el intermedio de cloro (1,39 g, 50%).

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 7.67 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 2.81 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 210, (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Paso 2. Una mezcla del intermedio de cloro (50 mg, 0,25 mmol), 6-mercaptopurina monohidrato (43 mg, 0,25 mmol), y carbonato de potasio (25 mg, 0,25 mmol) en DMF seco (0,5 mL) fue agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla fue vertida en acetato de etilo (20 mL) y se filtró y descartó todo el material insoluble. El filtrado fue concentrado in vacuo para eliminar todo el acetato de etilo y el residuo fue tratado con éter, dando como resultado un precipitado naranja claro. El precipitado fue recogido mediante filtrado, lavado con éter y secado in vacuo para obtener el Intermedio E-1 (41 mg, 51%).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 8.64 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.73 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.44-7.37 (m, 2H), 4.69 (s, 2H), 2.69 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 326 (M+1).

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Intermedio E-2

69

Una solución de 2-nitroacetanilida (1,0 g, 5,6 mmol) en EtOH fue purgada con nitrógeno, tratada con Pd(OH)_{2} (20% por peso en C, 200 mg, cat.), y agitada durante dos horas bajo H2 (20 psi). Se eliminó el catalizador por filtrado a través de una membrana de acetato de celulosa de 0.22 um (Corning), y el filtrado fue concentrado in vacuo para obtener un producto sólido cristalino blanco (800 mg, 96%).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 9.12 (s, 1H), 7.14 (dd, J=7.8, 1.3 Hz, 1H), 6.88 (dt, J=7.6, 1.5 Hz, 1H), 6.70 (dd, J=8.0, 1.3 Hz, 1H), 6.52 (dt, J=7.5, 1.4 Hz, 1H), 4.85 (br s, 2H), 2.03 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 151 (M+1).

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Intermedio E-3

70

Una mezcla de 2-fluoro-nitrobenceno (1,41 g, 10 mmol) y NaHCO_{3} en EtOH (20 mL) fue tratada con (N,N,N'-trimetilo)-1,2-diaminoetano (1,1 g, 11 mmol) y agitada durante 16 horas a 80ºC. El solvente fue eliminado in vacuo, el residuo fue tratado con 0,1 M NaOH (120 mL), y la mezcla fue extraída con acetato de etilo (2 x 50 mL).

Las capas orgánicas fueron combinadas y lavadas con 20 mL de agua (1x) y salmuera (2x), secadas con sulfato de sodio y concentradas in vacuo para obtener un líquido naranja (2,2 g, 100%; ESMS: m/z = 224, M+1).

Este intermedio fue disuelto en EtOH, la solución fue purgada con nitrógeno, tratada con Pd(OH)_{2} (20% por peso en C, 180 mg, cat.), y agitada durante dos horas bajo H2 (50 psi). Se eliminó el catalizador por filtrado a través de una membrana de acetato de celulosa de 0.22 um (Corning), y el filtrado fue concentrado in vacuo para obtener el producto líquido rojo E-3 (1,8 g, 95%).

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta: 8.64 (s, 1H), 7.03 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1H), 6.91 (ddd, J=7.6, 7.2, 1.4 Hz, 1H), 6.73-6.67 (m, 2H), 4.20 (br s, 2H), 2.95 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.68 (s, 3H), 2.41 (t, J=6.7 Hz, 1H), 2.26 (s, 6H).

LRMS (ES pos,) m/z=194 (M+1).

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Los compuestos D-110 a D-115 se prepararon como sigue:

5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolil-3H-quinazolin-4-ona (D-110)

71

Una mezcla del Intermedio E-1, (40 mg) y o-toluidina (0,3 mL, amplio exceso) fue calentada a 100ºC en un vial sellado durante 16 horas. La mezcla de la reacción fue enfriada, tratada con 1N HCl (2 mL) y éter (2 mL), y el precipitado gris resultante fue recogido mediante filtrado, lavado con éter y secado con aire (19 mg en bruto). El sólido en bruto fue disuelto en 0,5 mL DMSO y purificado por HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220A). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco (4 mg).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.52 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.69 (t, J=7:8 Hz, 1H), 7.50 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.46-7.43 (m, 1H), 7.37-7.25 (m, 4H), 4.37 (AB quartet, J_{AB}=15.4 Hz, \Deltav=22.4 Hz, 2H), 2.74 (5, 3H), 2.12 (5, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 415 (M+1).

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3-isobutil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-111)

72

Una mezcla del Intermedio E-1 (40 mg) e isobutilamina (0,4 mL, amplio exceso) fue calentada a 120ºC en un vial sellado durante 16 horas. Se dejó evaporar el exceso de isobutilamina y el residuo se disolvió en 1 mL DMSO y se purificó mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco (4 mg).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.75 (br s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.63 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.42 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.00 (d, J=7.5 Hz, 2H), 2.77 (s, 3H), 2.30-2.15 (m, 1H), 0.98 (d, J=6.7 Hz, 1H).

LRMS (ES pos.) m/z = 381 (M+1).

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N-{2-[5-metil-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo]-fenilo}-acetamida (D-112)

73

Una mezcla del Intermedio E-1 (80 mg, 0,25 mmol) y el Intermedio E-2 (75 mg, 0,5 mmol, 2 eq) fue calentada hasta la fundirse en un vial sellado utilizando una pistola térmica. La mezcla de la reacción fue triturada con éter y los sólidos fueron recogidos mediante filtrado. El material en bruto fue disuelto en 1 mL DMSO y se purificó en dos porciones mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.52 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.48 (s, 3H), 8.42 (s, 3H), 8.02 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.69 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.45-7.37 (m, 2H), 7.31 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.19 (t, J=7.5 Hz, 1H), 4.38 (s, 2H), 2.74 (s, 3H), 1.93 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 458 (M+1).

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5-metilo-3-(E-2-metil-ciclohexilo)-2-(9H-purin-5-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-113)

74

Una mezcla del intermedio E-1 (80 mg, 0,25 mmol) y trans-2-metil-1-aminociclohexano (0,25 mL, amplio exceso) fue calentada en un vial sellado a 100ºC durante 16 horas. La mezcla de la reacción fue triturada con éter y los sólidos fueron recogidos mediante filtrado. El material en bruto fue disuelto en 0,5 mL DMSO y se purificó mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco (1,5 mg).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.5 (br s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.51 (3, 1H), 7.63 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.27 (d, J=7.4 Hz, 1H), 5.11 (d, J=14.5 Hz, 1H), 3.78-3.69 (m, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.55-2.40 (m, 3H), 1.88-1.46 (m, 4H), 1.31-1.11 (m, 1H), 0.90-0.65 (m, 1H), 0.74 (d, J=6.7 Hz, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 421 (M+1).

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2-[5-metil-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo]-ácido benzoico (D-114)

75

Una mezcla del intermedio E-1 (80 mg, 0,25 mmol) y antranilato metílico (0,25 mL, amplio exceso) fue calentada en un vial sellado a 100ºC durante 16 horas. La mezcla de la reacción fue triturada con éter y los sólidos fueron recogidos mediante filtrado. El material en bruto fue disuelto en 0,5 mL DMSO y se purificó mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x -250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco (8 mg)

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.51 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.11 (dd, J=7.4, 1.1 Hz, 1H), 7.88 (dt, J=7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.49-7.35 (m, 3H), 4.58 (d, J=15.5 Hz, 1H), 4.35 (d, J=15.5 Hz, 1H), 2.44 (s, 3H).

LRMS (ES pos.) m/z = 445 (M+1).

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3-{2-[(2-dimetilamino-etilo)-metil-amino]-fenilo}-5-metilo-2-(90-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-115)

76

Una mezcla del intermedio E-1 (40 mg, 0,25 mmol) y el Intermedio E-3 (0,2 mL, amplio exceso) fue calentada en un vial sellado a 100ºC durante 16 horas. La mezcla de la reacción fue triturada con éter y los sólidos fueron recogidos mediante filtrado. El material en bruto fue disuelto en 1 mL DMSO y se purificó mediante HPLC en dos porciones (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., 0,05% TFA en todos los solventes, detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sal de TFA (11 mg).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.4 (br s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.52 (S, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.72 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.40-7.33 (m, 4H), 7.10-7.04 (m, 1H), 4.42 (s, 3H), 3.5 (m, 2H), 3.23-3.03 (m, 3H), 2.75 (s, 3H), 2.68-2.56 (m, 8H).

LRMS (ES pos.) m/z = 501 (M+1).

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Los compuestos D-116 a D-118 se prepararon como sigue:

77

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3-(2-clorofenilo)-5-metoxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona (D-116)

(R = Me, X = O)

Una mezcla de D-015 (25 mg) en 0,5 M NaOMe (2 mL in MeOH; amplio exceso) se agitó a 50ºC durante 16 horas en un vial sellado. La mezcla de la reacción fue enfriada hasta alcanzar la temperatura ambiente, tratada con agua (5 mL) y el precipitado resultante fue recogido por filtrado, lavado con agua y secado con aire. El material en bruto fue disuelto en 0,5 mL DMSO y se purificó mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,6 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco (5,3 mg).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.52 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8,44 (br s, 1H), 7.77 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.71-7.60 (m, 2H), 7.51-7.34 (m, 2H), 7.23 (d, J=8.2Hz, 1H), 7.10 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.39 (AB quartet, J_{AB}=5.2 Hz,\Delta=23.2 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H).

LRMS (ES positivo) m/z = 451 (M+1).

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3-(2-clorofenil)-5-(2-morfolin-4-ilo-etilamino)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona (D-117)

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78

Una mezcla de D-015 (25 mg) y 4-(aminoet-2-ilo)-morfolina (650 mg, amplio exceso) fue agitada a 50ºC durante 16 horas. La mezcla de la reacción en bruto fue purificada mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min, 100% acetonitrilo a 18 min., detector at 220\lambda). Se concentraron fracciones apropiadas in vacuo para generar el producto final.

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-acetona) \delta: 8.57 (br s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.72 (dd, J=7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.65 (dd, J=8.0, 1,2 Hz, 1H), 7.57 (t, J=8,l Hz, 1H), 7.49 (dt, J=7.7,1.6 Hz, 1H), 7:40 (dt, J=7.7,1.5 Hz, 1.H), 6.86 (d, 0 = 7.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.55 (d, J=15.0 Hz, 1H), 4.42 (d, J=15.1 Hz, 1H), 4.05-3.90 (m, 4H), 3.90 (t, J=6.9 Hz, 2H), 3.75-3.4 (m, 4H), 3.54 (t, J=6.9 Hz, 2H).

LRMS (ES positivo) m/z = 549 (M+1).

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3-bencil-5-metoxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona (D-118)

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79

Una mezcla de D-043 (25 mg) en 0,5 M NaOMe (2 mL en MeOH; amplio exceso) se agitó a 50ºC durante 16 horas en un vial sellado. La mezcla de la reacción fue tratada con 1 N HCl (1 mL) y se purificaron partes alícuotas de esta solución (0,5 mL cada una) mediante HPLC (columna C18 Luna, 4,6 x 250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitrilo/agua durante 15 min., 100% acetonitrilo a 18 min., detector a 220\lambda). Las fracciones apropiadas fueron concentradas in vacuo para obtener el producto final en forma de sólido blanco (6,6 mg).

^{1}H NMR (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta: 13.57 (s, 1H), 8.60 (S, 1H), 8.45 (S, 1H), 7.72 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.42-7.30 (m, 2H), 7.30-7.19 (m, 3H), 7.15 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J=8.3 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 3.87 (s, 3H).

LRMS (ES positivo) m/z = 431 (M+1).

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Compuesto D-999 (comparativo)

3-(2-clorofenil)-2-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona

Un compuesto análogo, 3-(2-clorofenil)-2-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona, también fue sintetizado en general de acuerdo con los métodos descritos, salvo porque un 4-mercapto-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina fue sustituido por la mercaptopurina en el paso final.

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Ejemplo 11 Ensayos bioquímicos de la selectividad y potencia de PI3K A. Ensayo bioquímico utilizando 20 \muM ATP

Utilizando el método descrito en el Ejemplo 2, anterior, los compuestos de la invención fueron testados para comprobar su actividad inhibidora y su potencia frente a PI3K\delta, así como su selectividad para PI3K\delta frente a otras isoenzimas PI3K de clase I. En la Tabla 2, los valores de IC_{50} se proporcionan para PI3K\alpha ("Alfa"), PI3K\alpha ("Beta")/PI3\gamma ("Gammaº"), y PI3K\beta ("Delta"). Para ilustrar la selectividad de los compuestos, se proporcionan los ratios de los valores IC_{50} de los compuestos para PI3K\alpha, PI3K\beta, y PX3K\gamma en relación con PI3K\delta, respectivamente, como "Ratio Alfa/Delta", "Ratio Beta/Delta" y "Ratio Gamma/Delta".

Los ensayos de selectividad inicial se realizaron de forma idéntica al protocolo del ensayo de selectividad del Ejemplo 2, salvo que se utilizaron 100 \muL de Ecoscint para la detección radiomarcada. Los ensayos de selectividad posteriores se realizaron de forma similar, utilizando las mismas existencias de sustrato 3X, salvo por que contenían 0,05 mCi/mL \gamma[^{32}P]ATP y 3 mM PIP_{2}.

Los ensayos de selectividad posteriores también utilizaron las mismas existencias de enzimas 3X, salvo porque ahora contenían 3 nM de cualquier isoforma de PI3K determinada.

Para todos los ensayos de selectividad, los compuestos de prueba fueron pesados y disueltos en existencias de 10-50 mM en 100% DMSO (dependiendo de sus respectivas solubilidades) y almacenados a -20ºC. Los compuestos fueron descongelados (hasta la temperatura ambiente o 37ºC), diluidos hasta 300 \muM en agua, con los que se realizó una triple serie de dilución en agua. Con estas diluciones, se añadieron 20 \muL en los pocillos de ensayo junto con blancos del agua utilizados para el control enzimático (positivo) y el control no enzimático (referencia). El resto del ensayo se realizó esencialmente conforme al protocolo del ensayo de selectividad del Ejemplo 2.

En aquellos casos en los que la máxima concentración utilizada en el ensayo, es decir 100 \muM, no inhibió la actividad de la enzima en, al menos un 50%, la tabla indica el porcentaje de actividad restante a esa concentración (es decir a 100 \muM): En estos casos, el verdadero ratio o ratios de actividad para los compuestos no se puede calcular, dado que falta uno de los valores IC50 necesarios. No obstante, para dar una idea de las características de estos compuestos, se calcula un ratio de actividad hipotético utilizando 100 \muM en sustitución del valor que falta. De hecho, en estos casos, el ratio de selectividad debe ser mayor que el valor hipotético, y esto se indica por el uso de un símbolo mayor que (>).

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B. Ensayo bioquímico utilizando 200 \muM ATP

En la Parte A anterior, los compuestos de la invención fueron testados para establecer su IC_{50} para la inhibición de las isoformas alfa, beta, delta y gamma de PI3K utilizando 20 \muM ATP. Se realizó otro estudio para establecer el IC_{50} para la inhibición de las cuatro isoformas de PI3K a una concentración final de 200 \muM ATP, 10 veces mayor, y sustancialmente más cercana a la concentración fisiológica normal de ATP en las células. Este protocolo de selectividad es idéntico al descrito anteriormente, salvo porque la concentración de ATP en el inventario 3X era de 600 \muM. Los datos de este ensayo se resumen en la Tabla 3, a continuación. La sensibilidad observada a la concentración ATP sugiere que estos compuestos inhibidores de PI3K\delta actúan como competidores de ATP.

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Ejemplo 12 Datos del ensayo realizado con células para los inhibidores de la actividad de PI3K\delta

Utilizando los métodos descritos en los Ejemplos 3-5 anteriores, los compuestos de la invención fueron testados para comprobar la potencia y actividad inhibidora en ensayos de estimulación de la proliferación de células T y B, migración de neutrófilos (PMN) y liberación de elastasa de neutrófilos (PMN). Los datos de estos ensayos se recogen en la Tabla 4, a continuación. En la Tabla 4, los valores mostrados son concentraciones efectivas del compuesto (EC_{50}; \muM). Cuando no se proporciona ningún valor significa que no se realizó ningún ensayo.

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Ejemplo 13 Ensayo de inhibidores de la actividad de PI3K\delta en células cancerígenas

El efecto de los compuestos de la invención sobre la proliferación de células cancerígenas se evaluó testando uno de los compuestos frente a un grupo de líneas celulares de leucemia mieloide crónica (CML), incluyendo KU812, RWLeu4, K562, y MEG-01.

La actividad inhibidora del compuesto (D-000, disuelto en DMSO) se determinó como sigue. El compuesto testado fue añadido en una serie de concentraciones (0,001 \muM a 20 \muM) a placas de microtitración de 96 pocillos con células (1000 a 5000 células/pocillo). Las placas fueron incubadas durante cinco días a 37ºC durante los cuales los cultivos de control sin el compuesto de prueba pudieron someterse al menos a dos ciclos de división celular. El crecimiento celular se midió mediante la incorporación de [^{3}H]-timidina durante dieciocho horas, añadida en los días tres, cuatro y cinco. Las células fueron transferidas a un filtro, fueron lavadas y la radioactividad se midió utilizando un contador beta Matrix 96 (Packard). El porcentaje del crecimiento celular se midió como sigue:

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El valor EC_{50} en estos experimentos se determinó mediante la concentración del compuesto de prueba que resultó en un recuento de radioactividad un 50% inferior al obtenido utilizando el control sin inhibidor. El compuesto D-000 demostró una actividad inhibidora con un EC_{50} de aproximadamente 2 \muM para las líneas KU812 y RWLeu4. El compuesto no demostró ningún efecto en las líneas K562 y MEG-01.

Los inhibidores de PI3K\delta de la invención parecen inhibir el crecimiento celular de CML y, por lo tanto, podrían ser útiles para el tratamiento de tumores benignos o malignos. La expresión de PI3K\delta se ha demostrado hasta ahora principalmente en las células de origen hematopoyético. No obstante, podría estar presente en una variedad más amplia de células en proliferación. Así pues, los compuestos de la invención se podrían utilizar para inducir la regresión del tumor y prevenir la formación de metástasis tumorales tanto en la leucemia como en el tumor sólido o en la proliferación de origen no tumoral. Por otra parte, los compuestos se podrían utilizar solos o combinados con otros compuestos farmacológicamente activos o junto con radiación como agente sensibilizante.

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Ejemplo 14 Medición de la exocitosis de elastasa con el modelo air pouch en ratón

Se testó el efecto de D-030 sobre el influjo de leucocitos y la exocitosis de la elastasa de los neutrófilos en modelos animales. El modelo air pouch de seis días es un modelo de inflamación in vivo que se parece histológicamente a un sinovio articular. Se desarrolla una película de fibroblastos y células mononucleares organizadas que recuerda mucho a una cavidad sinovial. El modelo representa un modelo "agudo" de una enfermedad crónica (como artritis reumatoide). Este modelo permite la evaluación in vivo de agentes para bloquear el influjo celular en la bolsa de aire (air pouch) bajo la influencia de un estímulo inflamatorio.

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La prueba se realizó como sigue: el día cero, rasuraron grupos de ratas y se les inyectó 10 ml de aire simultáneamente en el lomo de cada una, formando una bolsa. El día tres, se inyectaron otros 10 ml de aire. Seis horas antes de la prueba TNF del día seis, un grupo de ratas (n=6) recibió D-030 (100 mg/kg en un vehículo de PEG 400) por vía oral, y otro grupo (n=12) recibió solamente el vehículo por vía oral. Seis horas después de la dosis, las bolsas de aire de ambos grupos recibieron 2,5 ng de TNF. Doce horas después de la dosis, las bolsas fueron lavadas con solución salina, y el fluido del lavado resultante fue analizado para comprobar los recuentos de leucocitos y la actividad de la elastasa del neutrófilo. También se les extrajo sangre para determinar los niveles de D-030 en circulación. Los resultados fueron los siguientes: las ratas que recibieron D-030 durante doce horas tenían una media de 8,7 \muM del compuesto en circulación y tenían una reducción del 82% en el total de leucocitos en el fluido de lavado en comparación con los controles del vehículo. Las reducciones en los recuentos de leucocitos específicos fueron las siguientes: neutrófilos (90%), eosinófilos (66%), y linfocitos (70%). La cuantificación de la elastasa del neutrófilo demostró que las ratas tratadas con D-030 tenían unos niveles de elastasa ligeramente reducidos (15%) con respecto a los controles del vehículo.

En otra prueba, una zona del lomo del ratón se rasuró utilizando una esquiladora y se creó una bolsa de aire inyectando 3 ml de aire subcutáneamente. El día tres, se repitió la inyección de aire. El día seis, se administró a los animales D-030 (32 mg/kg en LABRAFIL®) o LABRAFIL® solamente una hora antes y dos horas después de la prueba con TNF-\alpha (0,5 ng en 1 ml PBS), o PBS solamente. PBS es solución salina tampón fosfato. Cuatro horas después de la prueba TNF, los animales fueron anestesiados y las bolsas se lavaron con 2 mL de 0,9% de solución salina con 2 mM EDTA. Los lavados fueron centrifugados a 14.000 rpm en una microcentrifugadora.

Se utilizaron 50 microlitros del supernadante para medir la exocitosis de elastasa conforme al procedimiento anteriormente descrito.

Como se muestra en la Figura 9, la prueba de TNF indujo un elevado nivel de exocitosis de elastasa en comparación con los animales de la PBS. No obstante, cuando los animales de la prueba TNF fueron tratados con D-030, se observó un significativo descenso de la actividad de la elastasa en los lavados de la bolsa de aire.

A pesar de que la presente invención ha sido descrita con referencia específica a determinadas realizaciones preferibles con el fin de claridad y conocimiento, resultará evidente para el profesional cualificado que se pueden practicar otros cambios y modificaciones dentro del ámbito de aplicación de la invención, como se define en las reivindicaciones recogidas a continuación. Por consiguiente, no se deberá establecer ningún límite a la invención salvo por los específicamente recogidos en las reivindicaciones.

Claims

1. Un compuesto con una estructura

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donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno y NH;

R^{5} se selecciona del grupo compuesto por H, OCH_{3}, y halo;

o R^{4} y R^{5} junto con C-6 y C-7 del sistema del anillo de quinazolina definen un anillo aromático de 5 ó 6 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos de O, N, o S;

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q es 1 ó 2; y sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables,

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2. El compuesto de la reivindicación 1 seleccionado del grupo compuesto por:

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-bromo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona; y

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-metoxi-fenilo)-3H-quinazolin-4-ona.

\vskip1.000000\baselineskip

3. El compuesto de la reivindicación 1, donde R^{4} se selecciona del grupo compuesto por H, halo, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y CF_{3};

R^{6} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)OC_{2}H_{5}, y morfolinilo; donde

(a) R^{4} y R^{5}, independientemente, son diferentes de los grupos 6-halo o 6,7-dimetoxi; y

(b) R^{6} es diferente de 4-clorofenilo.

(c) al menos uno de R^{4} y R^{5} sea diferente de H cuando R^{6} es fenilo o 2-clorofenilo e Y es S.

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4. El compuesto de la reivindicación 1 se selecciona del grupo compuesto por:

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona; y

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona.

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5. Un compuesto con una fórmula estructural general

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donde A es 1000 sustituido o no sustituido por uno a tres sustituyentes seleccionados del grupo compuesto por N(R^{a})_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S(C_{1-3}alquilo), OR^{a}, halo, y

92

X se selecciona del grupo compuesto por CHR^{b}, CH_{2}CHR^{b}, y CH=C(R^{b});

\global\parskip0.850000\baselineskip

Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, NH, O, C(=O), OC(=O), C(=O)O, y NHC(=O)CH_{2}S;

R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, halo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, NO_{2}, OR^{a}, OCF_{3}, N(R^{a})_{2}, CN, OC(=O)R^{a}, C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, arilOR^{b}, Het, NR^{a}C(=O)C_{1-3}alquilenoC(=O)OR^{a}, arilOC_{1-3}alquileno-N(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, OC_{1-4}alqui-
lenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C(=O)-NR^{a}SO_{2}R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{2-6}alquenilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)-NR^{a}C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoCH(OR^{b})
CH_{2}N(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoOR^{a}, OC_{2-4}alquileno-NR^{a}C(=O)OR^{a}, NR^{a}C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, NR^{a}
C(=O)R^{a}, NR^{a}C(=O)N(R^{a})_{2}, N(SO_{2}C_{1-4}alquilo)_{2}, NR^{a}(SO_{2}C_{1-4}alquilo), SO_{2}N(R^{a})_{2}, OSO_{2}CF_{3}, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-6}alquilenoOR^{b}, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)N(R^{a})_{2}, NHC(=O)C_{1}-C_{3}alquilenoarilo, C_{3-8}cicloal-
quilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, arilOC_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{b}, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoC_{3-8}heterocicloalqui-
lo, NHC(=O)C_{1-3}-alquilenoHet, OC_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{b}, C(=O)C_{1-4}alquilenoHet, y NHC(=O)halo
C_{1-6}alquilo;

R^{3} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno opcionalmente sustituido, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}ciclo-alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-4}alquilenocicloalquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{1-3}alquilenoarilo, arilC_{1-3}alquilo, C(=O)R^{a}, arilo, heteroarilo, C(=O)OR^{a}, C(=O)N(R^{a})_{2}, C(=S)N(R^{a})_{2}, SO_{2}R^{a}, SO_{2}N(R^{a})_{2}, S(=O)R^{a}, S(=O)N(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alqui-
lenoOR^{a}, C(O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, C(=O)C_{1-4}alquilenoarilo, C(=O)C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoarilo opcionalmente sustituido por uno o más halos, SO_{2}N(R^{a})_{2}, N(R^{a})_{2}, C(=O)OR^{a}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, CN, NO_{2}, C(=O)R^{a}, OR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}-alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquilenoC(=O)-C_{1-4}
alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquilenohetero-arilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)Het, C_{1-4}alquilenoC(=O)N(R^{a})_{2},
C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoO-C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}alqui-
lenoC(=O)-OR^{a}, y C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a};

R^{a} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-3} alquilenoN(R^{a})_{2}, arilo, arilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, heteroarilo, heteroariloC_{1-3}alquilo, y C_{1-3}alquilenoheteroarilo;

R^{b} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, ariloC_{1-3}alquilo, heteroarilo
C_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, y C_{1-2}alquilenoheteroarilo;

y sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables,

con la condición de que si X-Y es CH_{2}S, entonces R^{3} es diferente de

93

y si X-Y es CH_{2}S, entonces R^{3} es diferente de fenilo sustituidos-CH_{2}CH(OH)CH_{2}OH, donde "arilo" se define como un grupo aromático monocíclico o bicíclico, que puede ser sustituido o no sustituido por uno o más de los siguientes elementos: halo, alquilo, fenilo, hidroxialquilo, alcoxi, alxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo y donde "heteroarilo" se define como un sistema de anillo monocíclico o bicíclico que contiene uno o dos anillos aromáticos y al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, y que puede ser o no ser sustituido por uno o más de los siguientes elementos: halo, alquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo.

\global\parskip1.000000\baselineskip

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6. El compuesto de la reivindicación 5 donde X se selecciona del grupo compuesto por CH_{2}, CH_{2}CH_{2}, CH=CH, CH(CH_{3}), CH_{2}CH(CH_{3}), y C(CH_{3})_{2}.

7. El compuesto de la reivindicación 5, donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno y NH.

8. El compuesto de la reivindicación 5 donde el sistema del anillo A es sustituido por uno a tres sustituyentes seleccionados del grupo compuesto por NH_{2}, NH(CH_{3}), N(CH_{3})_{2}, NHCH_{2}C_{6}H_{5}, NH(C_{2}H_{5}), Cl, F, CH_{3}, SCH_{3}, OH, y

94

9. El compuesto de la reivindicación 5 donde R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno, OR^{a}, halo, C_{1-6}alquilo, CF_{3}, NO_{2}, N(R^{a})_{2}, NR^{a}C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-3}alquilenoOR^{a}.

10. El compuesto de la reivindicación 8 donde R^{1} y R^{2} son independientemente seleccionados de H, OCH_{3}, Cl, Br, F, CH_{3}, CF_{3}, NO_{2}, OH, N(CH3)_{2}, 95 y

\hskip0.5cm

O(CH_{2}) _{2}OCH_{2}C_{6}H_{5}.

11. El compuesto de la reivindicación 5 donde R^{1} y R^{2} se unen para formar un anillo de cinco o seis miembros.

12. El compuesto de la reivindicación 5 donde R^{3} se selecciona del grupo compuesto por C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquilenocicloalquilo, C_{1-4}alquileno-
arilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)N(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquileno
C(=O)Het, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}.

13. El compuesto de la reivindicación 5 donde R^{3} se selecciona del grupo compuesto por OR^{a}, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, NO_{2}, N(R^{a})_{2}, NR^{a}C(=O)R^{a}, C(=O)OC_{2}H_{5}, CH_{2}CH(CH_{3})_{2},

96

14. El compuesto de la reivindicación 5 donde R^{3} se sustituye por un sustituyente seleccionado del grupo compuesto por halo, OR^{a}, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, NO_{2}, N(R^{a})_{2}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, NR^{a}C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, SO_{2}N(R^{a})_{2},
CN, C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y N(R^{a})C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}.

15. El compuesto de la reivindicación 5 donde R^{3} se sustituye por un sustituyente seleccionado del grupo compuesto por Cl, F, CH_{3}, CH(CH_{3})_{2}, OCH_{3}, C_{6}H_{5}, NO_{2}, NH_{2}, NHC(=O)CH_{3}, CO_{2}H, y N(CH_{3})CH_{2}CH_{2}N(CH_{3})_{2}.

16. Una composición farmacéutica compuesta por un compuesto conforme a cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 15 y un portador farmacéuticamente aceptable.

17. Un compuesto conforme a cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 15 o una composición conforme a la Reivindicación 16 de uso terapéutico.

18. Un método in vitro o ex vivo para alterar la función leucocitaria consistente en poner en contacto los leucocitos con un compuesto que inhibe selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en dichos leucocitos con respecto a otras isoformas de fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) de tipo I en un ensayo realizado con células, donde dicho compuesto tiene la estructura:

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donde Y se selecciona del grupo compuesto por ninguno, S, y NH;

R^{8} se selecciona del grupo compuesto por H, OCH_{3}, y halógeno;

R^{9} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)OC_{2}H_{5}, y morfolinilo;

R^{d}, independientemente, se selecciona del grupo compuesto por NH_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S(C_{1-3}alquilo), OH, NH(C_{1-3}alquilo), N(C_{1-3}alquilo)_{2}, NH(C_{1-3}alquilenofenilo);

q es 1 o 2,

y sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables,

siempre que al menos uno de R^{7} y R^{8} sea distinto a los grupos 6-halo o 6,7-dimetoxi, y que R^{9} sea distinto a 4-clorofenilo.

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19. El método de la reivindicación 18 donde los mencionados leucocitos comprenden células seleccionadas del grupo compuesto por neutrófilos, linfocitos B, linfocitos T y basófilos.

20. El método de la reivindicación 18, donde dichos leucocitos comprenden neutrófilos, y donde dicho método consiste en la alteración de al menos una función del neutrófilo seleccionada del grupo compuesto por la estimulación de la liberación del superóxido, la estimulación de la exocitosis y la migración quimiotáctica.

21. El método de la reivindicación 18 donde la fagocitosis o eliminación de bacterias por parte de dichos neutrófilos no se ve sustancialmente afectada.

22. El método de la reivindicación 18 donde dichos leucocitos comprenden linfocitos B y donde dicho método consiste en la alteración de la proliferación de dichos linfocitos B o de la producción de anticuerpos por parte de dichos linfocitos B.

23. El método de la reivindicación 19 donde dicho método consiste en la alteración de la proliferación de dichos linfocitos T.

\newpage

24. El método de la reivindicación 18 donde dichos leucocitos comprenden basófilos y donde dicho método consiste en la alteración de la liberación de histamina por parte de los basófilos.

25. El método de la reivindicación 18 donde dicho compuesto demuestra al menos una selectividad 10 veces mayor para la inhibición de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K de tipo I en un ensayo realizado con células.

26. El método de la reivindicación 18 donde dicho compuesto demuestra al menos una selectividad 20 veces mayor para la inhibición de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K de tipo I en un ensayo realizado con células.

27. El método de la reivindicación 18 donde dicho compuesto demuestra al menos una selectividad 50 veces mayor para la inhibición de PI3K\delta con respecto a las demás isoformas de PI3K de tipo I en un ensayo realizado con células.

28. El método de la reivindicación 18 donde el compuesto se selecciona del grupo compuesto por:

3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-fluorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-ilo-ilsulfanilmetilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-metoxifenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-butilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

8-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-metoxifenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(3-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-piridin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

3-bencilo-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2,4-dimetoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-bifenilo-2-il-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-fluorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bencilo-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-butil-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-morfolin-4-ilo-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-fenilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona.

\vskip1.000000\baselineskip

29. Un método in vitro o ex vivo para la alteración de la función leucocitaria que consiste en poner en contacto los leucocitos con un compuesto con la estructura

98

donde A es 2000 sustituido o no sustituido por uno a tres sustituyentes seleccionados del grupo compuesto por N(R^{a})_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S(C_{1-3}alquilo), OR^{a}, halo, y

99

X se selecciona del grupo compuesto por CHR^{b}, CH_{2}CHR^{b}, y CH=C(R^{b});

\newpage

R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, halo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, NO_{2}, OR^{a}, OCF_{3}, N(R^{a})_{2}, CN, OC(=O)R^{a}, C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, arilOR^{b}, Het, NR^{a}C(=O)C_{1-3}alquilenoC(=O)OR^{a}, arilOC_{1-3}alquileno-N(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, OC_{1-4}alqui-
lenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C(=O)-NR^{a}SO_{2}R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{2-6}alquenilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)-NR^{a}C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoCH(OR^{b})
CH_{2}N(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoOR^{a}, OC_{2-4}alquileno-NR^{a}C(=O)OR^{a}, NR^{a}C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, NR^{a}
C(=O)R^{a}, NR^{a}C(=O)N(R^{a})_{2}, N(SO_{2}C_{1-4}alquilo)_{2}, NR^{a}(SO_{2}C_{1-4}alquilo), SO_{2}N(R^{a})_{2}, OSO_{2}CF_{3}, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-4}alquileno-Het, C_{1-6}alquilenoOR^{b}, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)N(R^{a})_{2}, NHC(=O)C_{1}-C_{3}alquilenoarilo, C_{3-8}ciclo-
alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, arilOC_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{b}, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoC_{3-8}heterocicloal-
quilo, NHC(=O)C_{1-3}-alquilenoHet, OC_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{b}, C(=O)C_{1-4}alquilenoHet, y NHC(=O)haloC_{1-6}alquilo;

R^{3} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno opcionalmente sustituido, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}ciclo-alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-4}alquilenocicloalquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{1-3}alquilenoarilo, arilC_{1-3}alquilo, C(=O)R^{a}, arilo, heteroarilo, C(=O)OR^{a}, C(=O)N(R^{a})_{2}, C(=S)N(R^{a})_{2}, SO_{2}R^{a}, SO_{2}N(R^{a})_{2}, S(=O)R^{a}, S(=O)N(R^{a})_{2}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alqui-
lenoOR^{a}, C(O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, C(=O)C_{1-4}alquilenoarilo, C(=O)C_{1-4}alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoarilo opcionalmente sustituido por uno o más halos, SO_{2}N(R^{a})_{2}, N(R^{a})_{2}, C(=O)OR^{a}, NR^{a}SO_{2}CF_{3}, CN, NO_{2}, C(=O)R^{a}, OR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, y OC_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}-alquilenoheteroarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquilenoC(=O)-C_{1-4}
alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)C_{1-4}alquilenohetero-arilo, C_{1-4}alquilenoC(=O)Het, C_{1-4}alquilenoC(=O)N(R^{a})_{2},
C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoNR^{a}C(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoO-C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{1-4}alquileno
C(=O)-OR^{a}, y C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a};

R^{a} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-3}
alquilenoN(R^{a})_{2}, arilo, arilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, heteroarilo, heteroariloC_{1-3}alquilo, y C_{1-3}alquilenohetero-arilo;

Het es un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, saturado o parcial o totalmente insaturado que contiene al menos un heteroátomo seleccionado del grupo compuesto por oxígeno, nitrógeno y azufre, y opcionalmente sustituido por C_{1-4}alquilo o C(=O)OR^{a}; donde "arilo" se define como un grupo aromático monocíclico o bicíclico, que puede ser sustituido o no sustituido por uno o más de los siguientes elementos: halo, alquilo, fenilo, hidroxialquilo, alcoxi, alxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; y

y donde "heteroarilo" se define como un sistema de anillo monocíclico o bicíclico que contiene uno o dos anillos aromáticos y al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre en un anillo aromático, y que puede ser o no ser sustituido por uno o más de los siguientes elementos: halo, alquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo,

y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables,

en una cantidad suficiente para inhibir la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta en dichos leucocitos.

\vskip1.000000\baselineskip

30. El método conforme a la reivindicación 29 donde el compuesto se selecciona del grupo compuesto por:

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-6,7-dimetoxi-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-o-ilmetilo)-6-bromo-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-o-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-6-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-o-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-clorofenilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-8-cloro-3-(2-clorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-bifenil-2-ilo-5-cloro-3H-quinazolin-4-ona

5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-fluorofenilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-bifenilo-2-ilo-5-cloro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

5-cloro-3-(2-metoxifenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

6-bromo-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-benzo[g]quinazolin-4-ona;

6-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

8-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-7-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona;

5-cloro-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-6-fluoro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-isopropilfenilo)-5-metilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-fluorofenilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-5-cloro-3-(2-metoxi-fenilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-ciclopropil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

3-ciclopropilmetil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclopropilmetil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-ciclopropilmetil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

5-metil-3-fenetilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-5-metil-3-fenetil-3H-quinazolin-4-ona

3-ciclopentil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclopentil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-cloropiridin-3-ilo)-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-(2-cloropiridin-3-ilo)-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

3-metilo-4-[5-metil-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo]-ácido benzoico

3-ciclopropil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclopropil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-3-(4-nitrobencilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-ciclohexil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-9-ilmetilo)-3-ciclohexil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-ciclohexil-5-metil-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-3-(E-2-fenilciclopropilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-2-[(9H-purin-6-ilamino)-metilo]-3H-quinazolin-4-ona

2-[(2-amino-9H-purin-6-ilamino)metilo]-3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-[(9H-purin-6-ilamino)metilo]-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-[(2-amino-9H-purin-6-ilamino)metilo]-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-[(2-fluoro-9H-purin-6-ilamino)metilo]-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

(2-clorofenilo)-dimetilamino-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

5-(2-benciloxietoxi)-3-(2-clorofenilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

Éster de 6-aminopurina-9-ácido carboxílico 3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilmetilo

N-[3-(2-clorofenilo)-5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilmetilo]-2-(9H-purin-6-ilsulfanilo)-acetamida

2-[1-(2-fluoro-9H-purin-6-ilamino)etilo]-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)etilo]-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-dimetilaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(2-metilo-6-oxo-1,6-dihidro-purin-7-ilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(2-metilo-6-oxo-1,6-dihidro-purin-9-ilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(amino-dimetilaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-5-metil-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(7-metil-7H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-purin-7-ilmetilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-purin-9-ilmetilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(9-metil-9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(1-metil-1H-imidazol-2-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metil-3-o-tolilo-2-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-(2-amino-6-cloro-purin-9-ilmetilo)-5-metil-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-aminopurin-7-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-amino-9H-purin-2-ilsulfanilmetilo)-5-metil-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(6-metilaminopurin-9-ilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(6-bencilaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

2-(2,6-diaminopurin-9-ilmetilo)-5-metilo-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3-o-tolilo-3H-quinazolin-4-ona

3-isobutil-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

N-{2-[5-metil-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo]-fenilo}-acetamida

5-metilo-3-(E-2-metil-ciclohexilo)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

2-[5-metil-4-oxo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-4H-quinazolin-3-ilo]-ácido benzoico

3-{2-[(2-dimetilaminoetilo)metilamino]fenilo}-5-metilo-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-5-metoxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-(2-clorofenilo)-5-(2-morfolin-4-ilo-etilamino)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona

3-bencil-5-metoxi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetilo)-3H-quinazolin-4-ona.

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31. Un método in vitro o ex vivo para alterar una función de los osteoclastos consistente en poner en contacto los osteoclastos con un compuesto que inhibe selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en dichos osteoclastos con respecto a otras isoformas de fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) de tipo I en un ensayo realizado-
con células, donde dicho compuesto tiene la estructura de la fórmula (III) como se define en la Reivindicación 18.

32. Un método in vitro o ex vivo para inhibir el crecimiento o la proliferación de células de leucemia mielogena crónica que consiste en poner en contacto las células con un compuesto que inhibe selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta en las células cancerígenas con respecto a las demás isoformas de PI3K de tipo I en un ensayo realizado con células, donde el mencionado compuesto tiene una estructura

100

donde R^{7} se selecciona del grupo compuesto por H, halógeno, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y CF_{3};

R^{8} se selecciona del grupo compuesto por H, OCH_{3}, y halógeno;

R^{9} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, éster etílico de ácido acético y morfolinilo;

X es NH o S; y

sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables,

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33. Un método in vitro o ex vivo para inhibir la actividad quinasa de un polipéptido fosfatidilinositol 3-quinasa delta consistente en poner en contacto el polipéptido con un compuesto con la estructura

101

donde A es 3000 sustituido o no sustituido por uno a tres sustituyentes seleccionados del grupo compuesto por N(R^{a})_{2}, halo, C_{1-3}alquilo, S(C_{1-3}alquilo), OR^{a}, halo, y

102

X se selecciona del grupo compuesto por CHR^{b}, CH_{2}CHR^{b}, y CH=C(R^{b});

R^{1} y R^{2}, independientemente, se seleccionan del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, halo, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, NO_{2}, OR^{a}, OCF_{3}, N(R^{a})_{2}, CN, OC(=O)R^{a}, C(=O)R^{a}, C(=O)OR^{a}, arilOR^{b}, Het, NR^{a}C(=O)C_{1-3}alquilenoC(=O)OR^{a}, arilOC_{1-3}alquileno-N(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{a}, C_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, OC_{1-4}alqui-
lenoC(=O)OR^{a}, C_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{a}, C(=O)-NR^{a}SO_{2}R^{a}, C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, C_{2-6}alquenilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)-NR^{a}C_{1-4}alquilenoOR^{a}, C(=O)NR^{a}C_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoCH(OR^{b})
CH_{2}N(R^{a})_{2}, OC_{1-4}alquilenoHet, OC_{2-4}alquilenoOR^{a}, OC_{2-4}alquileno-NR^{a}C(=O)OR^{a}, NR^{a}C_{1-4}alquilenoN(R^{a})_{2}, NR^{a}
C(=O)R^{a}, NR^{a}C(=O)N(R^{a})_{2}, N(SO_{2}C_{1-4}alquilo)_{2}, NR^{a}(SO_{2}C_{1-4}alquilo), SO_{2}N(R^{a})_{2}, OSO_{2}CF_{3}, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-6}alquilenoOR^{b}, C_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, C(=O)N(R^{a})_{2}, NHC(=O)C_{1}-C_{3}alquilenoarilo, C_{3-8}ciclo-
alquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, arilOC_{1-3}alquilenoN(R^{a})_{2}, arilOC(=O)R^{b}, NHC(=O)C_{1-3}alquilenoC_{3-8}heterocicloal-
quilo, NHC(=O)C_{1-3}-alquilenoHet, OC_{1-4}alquilenoOC_{1-4}alquilenoC(=O)OR^{b}, C(=O)C_{1-4}alquilenoHet, y NHC(=O)haloC_{1-6}alquilo;

R^{a} se selecciona del grupo compuesto por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}heterocicloalquilo, C_{1-3}
alquilenoN(R^{a})_{2}, arilo, arilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, heteroarilo, heteroariloC_{1-3}alquilo, y C_{1-3}alquilenohetero-
arilo;

y sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables.

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34. El método de la reivindicación 33, donde R1 se selecciona del grupo compuesto por H, halo, OH, OCH_{3}, CH_{3}, y CF_{3}; y

R^{3} se selecciona del grupo compuesto por C_{1}-C_{6}alquilo, fenilo, halofenilo, alquilfenilo, bifenilo, bencilo, piridinilo, 4-metilpiperazinilo, C(=O)C_{2}H_{5}, y morfolinilo;

donde al menos uno de R1 y R2 sea distinto a los grupos 6-halo o 6,7-dimetoxi, y R3 sea distinto a 4-clorofenilo.

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35. Un compuesto con la estructura de la fórmula (III) conforme a la definición de la Reivindicación 18 que inhibe la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta (PI3K\delta) en los osteoclastos de un animal con respecto a las demás isoformas de PI3K de tipo I en un ensayo realizado con células, para mejorar una alteración de la reabsorción ósea en un animal.

36. Un uso conforme a la Reivindicación 35 donde dicha alteración de la reabsorción ósea es la osteoporosis.

37. Un compuesto con una estructura

103

R^{8} se selecciona del grupo compuesto por H, OCH_{3}, y halógeno;

X es NH o S; y

sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables,

siempre que al menos uno de R^{7} y R^{8} sea distinto a los grupos 6-halo o 6,7-dimetoxi, y que R^{9} sea distinto a 4-clorofenilo,

que inhiba selectivamente la actividad de fosfatidilinositol 3-quinasa delta en las células cancerígenas con respecto a otras isoformas de PI3K de tipo I en un ensayo realizado con células, para inhibir el crecimiento o la proliferación de las células de la leucemia mielogena crónica.

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38. Un compuesto con la estructura de la fórmula (III) conforme a la definición de la Reivindicación 18 para el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre:

i): isquemia, preferiblemente resultante de un fallo cardíaco, infarto de miocardio, obstrucción de arterias coronarias, oclusión tromboembólica de un vaso cerebral, traumatismos craneoencefálicos, edema y tumor cerebral,

ii): lesión por reperfusión, preferiblemente asociada con accidente vascular, shock hemorrágico, isquemia miocárdica o infarto, transplante de órgano y vasospasmo cerebral,

iii): enfermedades óseas, preferiblemente seleccionadas entre osteoporosis, enfermedades de Paget y alteraciones de reabsorción ósea relacionadas;

iv): cáncer hematopoyético, preferiblemente:

a): linfomas, preferiblemente seleccionados entre linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkins, linfoma no Hodgkins, linfoma linfocítico;

b): mielomas múltiples;

c): leucemias, preferiblemente seleccionadas entre leucemias linfocíticas, leucemias (mielogenas) mieloides crónicas,

v): enfermedades relacionadas con la liberación de histamina, preferiblemente seleccionadas entre enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), asma, ARDS y enfisema,

vi): enfermedades artríticas, preferiblemente seleccionadas entre artritis reumatoide, artritis monoarticular, osteoartritis, artritis gotosa, espondilitis,

vii): enfermedad de Behcet,

viii): sepsis, shock séptico, shock endotóxico, sepsis por gram-negativos, sepsis por gram-positivos y síndrome del shock tóxico,

ix): síndrome de disfunción orgánica múltiple secundario a una septicemia, un traumatismo o una hemorragia,

x): alteraciones oftálmicas, preferiblemente seleccionadas entre conjuntivitis alérgica, conjuntivitis vernal, uveítis y oftalmopatía asociada con la tiroides,

xi): granuloma esinofílico,

xii): alteraciones pulmonares o respiratorias, preferiblemente seleccionadas entre asma, bronquitis crónica, rinitis alérgica, ARDS, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, silicosis, sarcoidosis pulmonar, pleuresía, alveolitis, vasculitis, enfisema, neumonía, bronquiectasis y toxicidad del oxígeno pulmonar,

xiii): fibrosis, preferiblemente fibrosis cística,

xiv): formación de queloides o formación de tejido de cicatriz,

xv): ateroesclerosis,

xvi): enfermedades autoinmunes, preferiblemente seleccionadas entre lupus sistémico eritematoso (SLE), tiroiditis autoinmune, esclerosis múltiple, algunas formas de diabetes y síndrome de Reynaud.

xvii): trastornos de rechazo de transplantes, preferiblemente seleccionados entre la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) y el rechazo de aloinjerto,

xviii): glomerulonefritis crónica,

xix): enfermedades inflamatorias del intestino, preferiblemente seleccionadas entre enfermedad de intestino inflamatoria crónica (CIBD), enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y enterocolitis necrotizante,

xx): dermatosis inflamatoria, preferiblemente seleccionada entre dermatitis por contacto, dermatitis atópica, psoriasis y urticaria,

xxi): fiebre y mialgias como consecuencia de una infección,

xxii): trastornos inflamatorios del sistema nervioso central o periférico, preferiblemente seleccionados entre meningitis, encefalitis y lesiones cerebrales o de la médula espinal provocados por un traumatismo leve,

xxiii): enfermedad de Sjögren,

xxiv): enfermedades que implican una diapédesis leucocitaria,

xxv): hepatitis alcohólica,

xxvi): neumonía bacteriana,

xxvii): enfermedades mediadas por el complejo antígeno-anticuerpo,

xxviii): shock hipovolémico,

xxix): diabetes mellitus de tipo I

xxx): hipersensibilidad aguda y retardada,

xxxi): enfermedades provocadas por discrasia leucocitaria y metástasis,

xxxii): lesiones térmicas,

xxxiii): síndromes asociados con la transfusión de granulocitos, y

xxxiv): toxicidad inducida por citoquina.