ES2362337A1

ES2362337A1 - Derivados de aminociclitoles, procedimiento de obtencion y usos.

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Publication number: ES2362337A1
Application number: ES200931193A
Authority: ES
Inventors: Lucia Diaz Bueno; Josefina Casas Brugulat; Jorge Bujons Vilas; Meritxell Egido Gabas; Antonio Delgado Cirilo; Amadeo Llebaria Soldevila
Original assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Universitat de Barcelona UB
Current assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Universitat de Barcelona UB
Priority date: 2009-12-17
Filing date: 2009-12-17
Publication date: 2011-07-01
Anticipated expiration: 2029-12-17
Also published as: ES2362337B1; WO2011073492A1

Abstract

Derivados de aminociclitoles, procedimiento de obtención y usos.La presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general (I) y a sus usos como composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la acumulación lisosomal de esfingolípidos, tales como la enfermedad de Gaucher, la enfermedad de Tay-Sachs, la enfermedad de Sandhoff, la enfermedad de Fabry, la enfermedad de Niemann-Pick, leucodistrofia metacromática y la enfermedad de Krabbe. Además, la invención se refiere al procedimiento de obtención de dichos compuestos. Por tanto, la invención se puede englobar en el campo químico y/o farmacéutico.

Description

Derivados de aminociclitoles, procedimiento de obtención y usos.

La presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general (I) y a sus usos como composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la acumulación lisosomal de esfingolípidos. Además, la invención se refiere al procedimiento de obtención de dichos compuestos. Por tanto, la invención se puede englobar en el campo químico y/o farmacéutico.

Estado de la técnica anterior

Las enfermedades causadas por desórdenes de almacenaje lisosomal son un tipo de enfermedades raras congénitas causadas por desórdenes metabólicos que provocan que determinadas proteínas se acaben acumulando en los lisosomas. Los síntomas de estas enfermedades varían dependiendo del tipo de desorden aunque se manifiestan ya en los primeros meses o años de vida de los enfermos, que suelen morir a una edad temprana. Entre los síntomas habituales destacan retraso en el desarrollo, dificultad en los movimientos, apoplejía, demencia, sordera, ceguera, disfunciones en órganos (hígado, corazón, pulmón etc.) y crecimiento óseo anormal.

Los esfingolípidos son lípidos complejos derivados de la esfingosina, un alcohol insaturado de 18 carbonos, que son muy abundantes en las membranas biológicas y algunos son precursores de compuestos implicados en procesos de señalización celular. En algunas de las enfermedades lisosomales se produce la acumulación de esfingolípidos debido a que las enzimas que hidrolizan estas moléculas están mutadas, por lo que no se pliegan correctamente y en consecuencia no son funcionales.

La enfermedad de Gaucher es una de estas enfermedades clasificadas como desórdenes de almacenaje lisosomal, caracterizada por la acumulación del esfingolípido glucosilceramida (GlcCer) en los lisosomas. La enfermedad es causada por la actividad deficiente de la enzima glucocerebrosidasa, una beta-glucosidasa que hidroliza GlcCer en glucosa y ceramida, debido a que dicha enzima presenta varias formas mutadas. Los niveles celulares de la enzima mutada y plegada incorrectamente son anormalmente bajos debido a su degradación prematura por acción de endoproteasas específicas en el retículo endoplásmico. Durante los últimos años se han desarrollado varias estrategias terapéuticas enfocadas a la enfermedad de Gaucher. Entre ellas, el uso de chaperonas farmacológicas, que son inhibidores competitivos de la enzima diana que asisten el plegado correcto de la proteína defectuosa a concentraciones sub-inhibitorias, ha llegado a ser un campo de investigación muy activo.

El documento WO2009/066069 describe el uso de una serie de compuestos, que actúan como chaperonas farmacológicas de ciertas enzimas plegadas incorrectamente, para el tratamiento de enfermedades relacionadas con desórdenes en el almacenaje lisosomal.

Durante los últimos años, se ha estado trabajando en el desarrollo de nuevos aminociclitoles con aplicabilidad potencial como chaperonas químicas de la enzima glucosilcerebrosidasa (Egido-Gabas, M.; Canals, D.; Casas, J.; Llebaria, A.; Delgado, A., Aminocyclitols as Pharmacological Chaperones for Glucocerebrosidase, a Detective Enzyme in Gaucher Disease. ChemMedChem 2007, 2, 992-994). Sin embargo, la exploración de la diversidad química mediante la funcionalización del núcleo de aminociclitol ha presentado ciertas limitaciones (Serrano, P.; Casas, J.; Zucco, M.; Emeric, G.; Egido-Gabas, M.; Llebaria, A.; Delgado, A., Combinatorial Approach to N-Substituted Aminocyclitol Libraries by Solution-Phase Parallel Synthesis and Preliminary Evaluation as Glucocerebrosidase Inhibitors. J. Comb. Chem 2007, 9, 43-52). Los resultados más prometedores surgen de la apertura regio y estereoselectiva del conduritol B epóxido con una serie de aminas alifáticas con diferente longitud de cadena.

Para explorar en profundidad el papel de la cadena lateral de aminoalquilo en la estabilización de la enzima bajo condiciones desnaturalizantes, sería deseable una rápida y conveniente metodología para la síntesis paralela de baterías de pequeño a mediano tamaño de derivados de aminociclitoles N-sustituidos. En este contexto, las aproximaciones de la "click-chemistry" basadas en las cicloadiciones de Huisgen azida-alquino 1,3-dipolar catalizadas por compuestos con Cu ha sido empleada para el diseño de fármacos. Este proceso catalizado por Cu es extremadamente rápido a temperatura ambiente y compatible con agua o sistemas con solventes ricos en agua, haciendo así innecesario el uso de grupos protectores en la mayoría de las transformaciones sintéticas.

Teniendo en cuenta que los desórdenes en el almacenaje lisosomal están causados por el incorrecto plegamiento de las enzimas implicadas en el metabolismo de ciertos sustratos como glicolípidos y glicoproteínas, sería deseable obtener compuestos capaces de conseguir que estas enzimas se plegaran correctamente, recuperando así su funcionalidad y evitando la acumulación anormal de estos sustratos en los lisosomas.

Descripción de la invención

La presente invención proporciona una serie de compuestos derivados de un aminociclitol capaces de actuar como chaperonas farmacológicas de enzimas que, a causa de mutaciones, no se pliegan correctamente.

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En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I):

1

donde

R_{1} se selecciona entre alquilo C_{1}-C_{6} sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterociclo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, hidroxilo o -A-R_{2}-(A)_{q}-R_{3}-(A)_{r}-R_{4};

donde A se selecciona entre oxígeno o azufre, R_{2}, R_{3} y R_{4} son independientemente un grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido o no sustituido,

q y r se seleccionan independientemente entre 0 ó 1;

m es un valor entre 1 y 10,

n es un valor entre 1 y 20,

o una sal, profármaco o solvato del mismo.

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El término "alquilo" se refiere, en la presente invención, a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 30 átomos de carbono. En el caso de R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y/o R_{5}, el término alquilo se refiere a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, aunque preferiblemente tienen de 1 a 3 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azida, ácido carboxílico o por un grupo, sustituido o no sustituido, seleccionado entre: arilo, hidroxilo, amino, amido, éster, ácido carboxílico, éter, tiol, acilamino o carboxamido. Cuando el grupo alquilo esta sustituido por un arilo se describe como "arilalquilo", como por ejemplo, y no limitativamente, en el caso de un grupo bencilo.

"Cicloalquilo" se refiere a un radical estable monocíclico o bicíclico de 3 a 10 miembros, que está saturado o parcialmente saturado, y que sólo consiste en átomos de carbono e hidrógeno, tal como ciclopentilo, ciclohexilo o adamantilo.

El término "heterociclo" se refiere, en la presente invención, a un radical estable monocíclico o bicíclico de 3 a 10 miembros, que está insaturado, saturado o parcialmente saturado, y que consiste en átomos de carbono y de al menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno o azufre. Preferiblemente el heteroátomo es azufre, y más preferiblemente el ciclo es un anillo de 5 ó 8 miembros. Ejemplos de heterocicloalquilos pueden ser, no limitativamente: piperidina, piperazina, indol, indazol, benzimidazol tiocano o tiano.

El término "arilo" se refiere en la presente invención a una cadena carbocíclica aromática, que tiene de 6 a 18 átomos de carbono, pudiendo ser de anillo único ó múltiple, en este último caso con anillos separados y/o condensados. Se pueden dar como ejemplos de grupo arilo, pero no limitativamente, los grupos: fenilo, naftilo, indenilo, azepina, indol, imidazol, isotiazol, tiadiazol, furano, tetrahidrofurano, benzimidazol, benzotiazol, piperidina, piperazina, purina, quinolina, etc. Preferiblemente el grupo arilo es un fenilo.

"Halógeno"es flúor, cloro, bromo o yodo.

En una realización preferida, m es 1, 2 ó 3.

En otra realización preferida, R_{1} es un arilo sustituido o sin sustituir que se selecciona entre fenilo, furano, imidazol o benzimidazol. En una realización más preferida, R_{1} es fenilo sustituido en al menos una posición por un grupo que se selecciona entre alquilo C_{1}-C_{5} sustituido o no sustituido, fenoxi sustituido o no sustituido, heterociclo sustituido o no sustituido o halógeno.

En una realización más preferida, el compuesto de la presente invención se selecciona entre:

\sqbullet: 6-((1-(3,5-bis(benciloxi)bencil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

\sqbullet: 6-((1-fenetil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

\sqbullet: 6-((1-(3-((4-metilpiperazina-1-il)metil)bencil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

\sqbullet: 6-((1-(3-iodobencil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

\sqbullet: 6-((1-(3-(5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metillamino)ciclohexano- 1,2,3,4,5-pentaol.

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En otra realización preferida, R_{1} es alquilo C_{1}-C_{5} sustituido o no sustituido. En una realización más preferida, R_{1} es -CH_{3}. En otra realización más preferida, R_{1} es metilo sustituido por al menos un grupo que se selecciona entre fenilo, metilo, etilo, propilo, metanol, propanol, piperidina, piperazina o pirrolidina.

En otra realización preferida, n es un valor entre 2 y 15.

\sqbullet: 6-((1-butil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-((1-butil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)cyclohexano-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-(2-(1-butil-1H-1,2,3-triazol-4-il)etilamino)cyclohexano-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-(3-(1-butil-1H-1,2,3-triazol-4-il)propilamino)cyclohexano-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-((1-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)benzyl)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

\sqbullet: 6-((1-(3-hidroxi-2,2-dimetilpropil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

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En otra realización preferida, A se selecciona entre O ó S, R_{1} es el grupo -A-R_{2}-(A)_{q}-R_{3}-(A)_{r}-R_{4}, donde R_{2}, R_{3} y R_{4} son alquilo C_{1}-C_{5} sustituido o no sustituido.

En una realización más preferida, A es oxígeno.

En otra realización más preferida, A es azufre.

En otra realización más preferida, R_{2}, R_{3} y R_{4} se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, propilo y butilo.

En otra realización más preferida, q es 0.

En otra realización más preferida, q es 1. En una realización aún más preferida r es 0. En otra realización aún más preferida, r es 1.

En otra realización más preferida, el compuesto de la presente invención se selecciona entre:

\sqbullet: 6-((1-(6-propoxihexil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-((1-(3-(3-(3-methoxypropoxy)propoxi)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pen- taol

\sqbullet: 6-((1-(3-(3-(3-metoxipropoxi)propoxi)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-((1-(3-butoxipropil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexane-1,2,3,4,5-pentaol

\sqbullet: 6-((1-(3-(metiltio)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5-pentaol.

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En otra realización preferida, R_{1} es cicloalquilo C_{3}-C_{8} sustituido o sin sustituir. En una realización más preferida, R_{1} es ciclohexilo.

En una realización más preferida, m es 1 y n es 4.

En otra realización preferida, R_{1} es hidroxilo.

En otra realización más preferida m es 1 y n es 10.

En otra realización más preferida, R_{1} es un heterociclo de entre 3 y 8 miembros sustituido o sin sustituir que contiene al menos un átomo de azufre. En una realización aun mas preferida R_{1} es 1,5-ditiocano, m es 1 y n es 0.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula (I) que comprende una reacción de cicloadición de un compuesto de fórmula (II)

2

con un compuesto de fórmula (III)

3

en presencia de un catalizador de cobre,

donde R_{1}, m y n se definen según la reivindicación 1.

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Otro aspecto más de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica útil para el tratamiento y/o prevención de enfermedades caracterizadas por la acumulación lisosomal anormal de esfingolípidos, en adelante composición farmacéutica de la invención, que comprende un compuesto o mezcla de compuestos de fórmula (I), en cantidad terapéuticamente efectiva, o una sal, profármaco o solvato de los mismos farmacéuticamente aceptable, junto con un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, para la administración a un paciente. En una realización preferida, esta composición puede contener otro principio activo.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según descrito anteriormente para la fabricación de un medicamento.

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Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según descrito anteriormente para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad caracterizada por la acumulación lisosomal de esfingolípidos. Preferiblemente, dicha enfermedad se selecciona entre enfermedad de Gaucher, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Sandhoff, enfermedad de Fabry, enfermedad de Niemann-Pick, leucodistrofia metacromática y enfermedad de Krabbe.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según descrito anteriormente como chaperona farmacológica de una enzima. Preferiblemente, dicha enzima es la glucocerebrosidasa.

En la presente invención se entiende como "chaperona farmacológica" o "farmacoferona" una molécula pequeña que se introduce en la célula y sirve como guía para que proteínas mutadas se plieguen correctamente. Las mutaciones en proteínas normalmente causan plegamientos incorrectos lo que hace que no puedan realizar sus funciones en la célula. Cuando se detectan proteínas plegadas incorrectamente, se almacenan, destruyen o reciclan en el retículo endoplásmico. Las chaperonas farmacológicas corrigen el plegamiento defectuoso de las proteínas, permitiendo así que la proteína pase el sistema de control de la célula y alcance el sitio donde realiza su función. Debido a esta capacidad de las chaperonas farmacológicas, estas moléculas son agentes terapéuticos potenciales para tratar enfermedades en las que se producen plegamientos incorrectos de proteínas mutadas.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E), incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención, es decir, el término isómero también se refiere a cualquier mezcla de isómeros, como diastereómeros, racémicos, etc., incluso a sus isómeros ópticamente activos o las mezclas en distintas proporciones de los mismos. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales.

Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de los compuestos de fórmula (I). El término "prodroga" o "profármaco" tal como aquí se utiliza incluye cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (I) -por ejemplo y no limitativamente: ésteres (incluyendo ésteres de ácidos carboxílicos, ésteres de aminoácidos, ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, etc.), carbamatos, amidas, etc.- que al ser administrado a un individuo puede ser transformado directa o indirectamente en dicho compuesto de fórmula (I) en el mencionado individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.

Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos. En este sentido, el término "solvato", tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por los expertos en la materia.

Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula (I), sus sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente, en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, y todavía más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% de compuesto de fórmula (I), o de sus sales, solvatos o profármacos.

Los compuestos de la presente invención de formula (I) pueden ser obtenidos o producidos mediante una vía sintética química u obtenidos a partir de una materia natural de distinto origen.

Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas.

En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar la acción terapéutica determinada por sus propiedades farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los compuestos, incluyendo la edad, estado del paciente, la severidad de la alteración o trastorno, y de la ruta y frecuencia de administración.

\newpage

Los compuestos descritos en la presente invención, sus sales, profármacos y/o solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos, o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal, profármaco o solvato del mismo.

En otra realización particular, dicha composición terapéutica se prepara en forma de una forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición terapéutica proporcionada por esta invención puede ser administrada por cualquier vía de administración apropiada, para lo cual dicha composición se formulará en la forma farmacéutica adecuada a la vía de administración elegida. En una realización particular, la administración de la composición terapéutica proporcionada por esta invención se efectúa por vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular, intravenosa, etc.).

El uso de los compuestos de la invención es compatible con su uso en protocolos en que los compuestos de la fórmula (I), o sus mezclas se usan por sí mismos o en combinaciones con otros tratamientos o cualquier procedimiento médico.

En un último aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) en ensayos biológicos, preferiblemente en ensayos enzimáticos de glucocerebrosidasas.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

Ejemplos

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la especificidad y efectividad de los compuestos de fórmula (I) de la presente invención.

A. Síntesis de los compuestos de la invención

Los aminociclitoles descritos en esta invención se obtuvieron mediante una cicloadición 1,3-dipolar catalizada por Cu (reacción de Huisgen) de los \omega-alkinil aminociclitoles 8-10 con un grupo de azidas [1-24] en H_{2}O-THF como sistema solvente (Esquema 1).

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Esquema 1

4

Reactivos y condiciones: a) Amina (propargilamina, 18 o 20), LiClO_{4}, CH_{3}CN; b) KF, DMSO; c) BCl_{3}, CH_{2}Cl_{2} (-78ºC); d) R^{3}N_{3} (ver Figura 1) Cu_{2}SO_{4}, ascorbato sódico, H_{2}O/THF (1:1).

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Los aminociclitoles 3, 4, y 6 se obtuvieron mediante la apertura regio y diastereoselectiva del epóxido 2 con las aminas 18 y 20, obtenido como se describe en el Esquema 2, y la propargil amina. La presencia de un grupo TMS en las aminas 18 y 20 incrementó al punto de ebullición, favoreciendo así su aislamiento, purificación y posterior manipulación.

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Esquema 2

Síntesis de aminas

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5

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Reactivos y condiciones: a) TMSCI, BuLi, THF, -78ºC; b) MsCl, Et_{3}N, THF, 0ºC; c) NaN_{3}, DMF; d) LiAlH_{4}, THF.

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La eliminación del grupo TMS de 4 y 6 llevó a los aminociclitoles 5 y 7, respectivamente. El tratamiento de 3, 5, y 7 con BCl_{3} a baja temperatura, permitió la obtención de los requeridos \omega-alkinil aminociclitoles 8-10 después de la eliminación del O-bencil.

Los aminociclitoles 8-10 se hicieron reaccionar con las azidas 1-24:

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6

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para dar los aminociclitoles mostrados en la Tabla 1, cuya identidad se demostró mediante análisis UPLC-MS sobre las mezclas de crudos.

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Compuestos seleccionados del "screening" primario (ver abajo) se sintetizaron independientemente para su completa caracterización y posterior ensayo biológico, como se describe en el Esquema 3. En este caso, las reacciones de cicloadición catalizadas por Cu se llevaron a cabo a partir de tetra-O-bencil aminociclitoles 3, 5 y 7 con las aminas seleccionadas [x], seguido de la eliminación del O-bencil mediante reacción con BCl_{3} a baja temperatura o hidrogenolisis sobre catalizador de Pd/C.

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Esquema 3

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7

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Reactivos y condiciones: a) Amina (propargilamina, 18 o 20), LiClO_{4}, CH_{3}CN; b) KF, DMSO; a) R^{3}N_{3}, Cu_{2}SO_{4}, ascorbato sódico, H_{2}O/THF (1:1); b) BCl_{3}, CH_{2}Cl_{2} (-78ºC) o H_{2}, Pd/C.

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B. Ensayos biológicos

Las mezclas de crudo de reacción se ensayaron como inhibidores de la glucosilcerebrosidasa, como se describe en Egido-Gabas, M.; Canals, D.; Casas, J.; Llebaria, A.; Delgado, A., Aminocyclitols as Pharmacological Chaperones for Glucocerebrosidase, a Detective Enzyme in Gaucher Disease. ChemMedChem 2007, 2, 992-994 Se llevó a cabo también un experimento en blanco con los componentes de la reacción de cicloadición (Cu_{2}SO_{4} y ascorbato sódico) para descartar efectos inespecíficos. Los resultados en la Tabla 1 muestran el valor de IC_{50}, que se usó como criterio para el screening preliminar. Los compuestos con valores de IC_{50} inferiores a 30 \muM se sintetizaron independientemente como se describe más arriba. Su constante de inhibición (Ki) y la recuperación de la actividad de la glucocerebrosidasa después de la desnaturalización térmica se midieron también, como se muestra en la Tabla 2. Este ensayo se utiliza actualmente como un ensayo in vitro para la evaluación preliminar del potencial de nuevos compuestos como chaperonas farmacológicas.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1 Datos de inhibición (IC_{50}) de los aminociclitoles seleccionados sobre glucocerebrosidasa. (*) Los compuestos se han numerado según el código "aminociclitol #[azida #]" (ver esquema 1 y Figura 1 para identificación de #); (nd) no determinado; (a) Inhibidor competitivo; (b) Actividad relativa de glucocerebrosidasa después de la desnaturalización térmica (incubación a 48ºC durante 20 min) en presencia de 100 uM de aminociclitol; (c) 2.85 a 25 uM; (d) Fibroblastos; (nt) no tóxico hasta 300 uM

8

TABLA 2 Actividad relativa de los aminociclitoles seleccionados sobre la glucocerebrosidasa después de la desnaturalización térmica, (a) Inhibidor competitivo; (b) Actividad relativa de glucocerebrosidasadespués de la desnaturalización térmica (incubación a 48ºC durante 20 min) en presencia de 100 uM de aminociclitol; (c) 2.85 a 25 uM

9

Se determinó la constante de inhibición (K_{i}) y la actividad relativa de glucocerebrosidasa después de 20 minutos de incubación a 48ºC en presencia de los aminociclitoles. La recuperación de la actividad de la glucocerebrosidasa se midió en presencia de concentraciones crecientes de los aminociclitoles diana a diferentes tiempos de incubación bajo condiciones de desnaturalización térmica. Interesantemente, ninguno de los aminociclitoles mencionados arriba mostraron actividad significativa sobe la glucosil ceramida sintasa de homogeneizados de células A549 a una concentración de 250 uM, indicando esto una selectividad hacia la enzima hidrolítica.

Claims

1. Un compuesto de fórmula (I)

10

donde

R_{1} se selecciona entre alquilo C_{1}-C_{6} sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterociclo sustituido o no sustituido arilo sustituido o no sustituido, hidroxilo o -A-R_{2}-(A)_{q}-R_{3}-(A)_{r}-R_{4};

q y r se seleccionan independientemente entre 0 ó 1;

m es un valor entre 1 y 10,

n es un valor entre 1 y 20,

o una sal, profármaco o solvato del mismo.

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2. Compuesto según la reivindicación 1 donde m es 1, 2 ó 3.

3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 donde R_{1} es un arilo sustituido o sin sustituir que se selecciona entre fenilo, furano, imidazol o benzimidazol.

4. Compuesto según la reivindicación 3 donde R_{1} es fenilo sustituido en al menos una posición por un grupo que se selecciona entre alquilo C_{1}-C_{5} sustituido o no sustituido, fenoxi sustituido o no sustituido, heterociclo sustituido o no sustituido o halógeno.

5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que se selecciona entre:

\sqbullet: 6-((1-(3-((4-metilpiperazina-1-il)metil)bencil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5- pentaol.

\sqbullet: 6-((1-(3-(5-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metillamino)ciclohe- xano-1,2,3,4,5-pentaol.

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6. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2 donde R_{1} es alquilo C_{1}-C_{5} sustituido o no sustituido.

7. Compuesto según la reivindicación 6 donde R_{1} es -CH_{3}.

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8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6 ó 7 donde n es un valor entre 2 y 15.

9. Compuesto según la reivindicación 6 donde R_{1} es metilo sustituido por al menos un grupo que se selecciona entre fenilo, metilo, etilo, propilo, metanol, propanol, piperidina, piperazina o pirrolidina.

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9 que se selecciona entre:

\sqbullet: 6-((1-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)benzyl)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5- pentaol.

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11. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 donde A se selecciona entre O ó S, R_{1} es el grupo -A-R_{2}-(A)_{q}-R_{3}-(A)_{r}-R_{4}, donde R_{2}, R_{3} y R_{4} son independientemente un alquilo C_{1}-C_{5} sustituido o no sustituido.

12. Compuesto según la reivindicación 11 donde A es oxígeno.

13. Compuesto según la reivindicación 11 donde A es azufre.

14. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 donde R_{2}, R_{3} y R_{4} se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, propilo y butilo.

15. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14 donde q es 0.

16. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14 donde q es 1.

17. Compuesto según la reivindicación 16 donde r es 0.

18. Compuesto según la reivindicación 16 donde r es 1.

19. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 18 que se selecciona entre:

\sqbullet: 6-((1-(3-(3-(3-methoxypropoxy)propoxi)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5- pentaol

\sqbullet: 6-((1-(3-(3-(3-metoxipropoxi)propoxi)propil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metilamino)ciclohexano-1,2,3,4,5- pentaol

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20. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 donde R_{1} es cicloalquilo C_{3}-C_{8} sustituido o sin sustituir.

21. Compuesto según la reivindicación 20 donde R_{1} es ciclohexilo.

22. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 20 ó 21 donde m es 1 y n es 4.

23. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2 donde R_{1} es hidroxilo.

24. Compuesto según la reivindicación 23 donde m es 1 y n es 10.

25. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 donde R_{1} es heterociclo C_{3}-C_{8} sustituido o sin sustituir que contiene al menos un átomo de azufre.

26. Compuesto según la reivindicación 25 donde R_{1} es 1,5-ditiocano, m es 1 y n es 0.

27. Procedimiento de obtención de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 que comprende una reacción de cicloadición de un compuesto de fórmula (II)

11

con un compuesto de fórmula (III)

12

en presencia de un catalizador de cobre,

donde R_{1}, m y n se definen según la reivindicación 1.

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28. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 junto con un vehículo farmacéutico.

29. Composición según la reivindicación 28 que además comprende otro principio activo.

30. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 para la fabricación de un medicamento.

31. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad caracterizada por la acumulación lisosomal de esfingolípidos.

32. Uso según la reivindicación 31 donde la enfermedad se selecciona entre enfermedad de Gaucher, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Sandhoff, enfermedad de Fabry, enfermedad de Niemann-Pick, leucodistrofia metacromática y enfermedad de Krabbe.

33. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 como chaperona farmacológica de una enzima.

34. Uso según la reivindicación 29 donde la enzima es la glucocerebrosidasa.

35. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26 como reactivo en ensayos biológicos.