ES2364561T1 - Medición de la contaminación. - Google Patents
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un procedimiento de preparación de muestras para un medio sospechoso de contener contaminantes, comprendiendo el procedimiento a) pasar un volumen conocido de dicho medio a través de un filtro desde un lado influente a un lado efluente, concentrando, de este modo, los contaminantes en el lado influente del filtro, b) poner en contacto el lado influente del filtro con un vehículo líquido que contiene al menos un sustrato que mediante la interacción con los contaminantes produce en cada caso un resto detectable y c) permitir interactuar al sustrato con los contaminantes en el lado influente del filtro durante un periodo que sea suficiente para permitir detectar en el vehículo líquido el resto detectable.
Claims (47)
1. Un procedimiento de preparación de muestras
para un medio sospechoso de contener contaminantes, comprendiendo el
procedimiento a) pasar un volumen conocido de dicho medio a través
de un filtro desde un lado influente a un lado efluente,
concentrando, de este modo, los contaminantes en el lado influente
del filtro, b) poner en contacto el lado influente del filtro con un
vehículo líquido que contiene al menos un sustrato que mediante la
interacción con los contaminantes produce en cada caso un resto
detectable y c) permitir interactuar al sustrato con los
contaminantes en el lado influente del filtro durante un periodo que
sea suficiente para permitir detectar en el vehículo líquido el
resto detectable.
2. El procedimiento según la reivindicación 1,
en el que, antes de la etapa a, el medio se pasa a través de un
filtro previo que no retiene los contaminantes, pero retiene
partículas más gruesas.
3. El procedimiento según la reivindicación 1 ó
2, seleccionándose los contaminantes del grupo que consiste en
bacterias; hongos tales como hongos filamentosos y levaduras, algas,
protozoos, esporas de bacterias, esporas de hongos y polen, y
fragmentos de los mismos.
4. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el medio es un medio
líquido.
5. El procedimiento según la reivindicación 4,
en el que el medio líquido se selecciona del grupo que consiste en
agua ambiental, agua potable, agua caliente, agua industrial, agua
de proceso, agua de limpieza in situ, en extracto líquido de
un material sólido, una muestra de superficie suspendida o
solubilizada y productos industriales líquidos tales como
cosméticos, productos farmacéuticos y productos alimentarios.
6. El procedimiento según la reivindicación
4-5, en el que la viscosidad del medio líquido se
reduce antes de la etapa a.
7. El procedimiento según la reivindicación 6,
en el que la viscosidad se reduce mediante dilución o mediante
tratamiento con un agente químico tal como un agente adyuvante de la
solubilidad o un detergente.
8. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-3, en el que el medio es un medio
gaseoso.
9. El procedimiento según la reivindicación 8,
en el que el medio gaseoso es aire, tal como aire procedente de una
instalación estéril, de un dispositivo de flujo de aire laminar o
aire ambiental.
10. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el filtro tiene un tamaño de
poro lo suficientemente pequeño como para retener sustancialmente
todos los contaminantes presentes en el medio.
11. El procedimiento según la reivindicación 10,
en el que el filtro tiene un tamaño de poro lo suficientemente
grande como para permitir que el resto detectable pase a través del
filtro.
12. El procedimiento según la reivindicación 11,
en el que el tamaño de poro es como máximo de 20 \mum.
13. El procedimiento según la reivindicación 11
ó 12, en el que el tamaño de poro es al menos de 0,1 \mum.
14. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que al menos un sustrato produce
el resto detectable, siendo escindido mediante una enzima que es
característica para los contaminantes.
15. El procedimiento según la reivindicación 14,
en el que la enzima está seleccionada del grupo que consiste en
carbohidrasas, proteasas, lipasas, esterasas, amidasas, sulfatasas,
nucleasas y fosfatasas tales como fosfatasa alcalina.
16. El procedimiento según la reivindicación 14
ó 15, en el que la enzima es expresada constitutivamente por
microorganismos.
17. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 14-16, en el que al menos un
sustrato es un sustrato fluorógeno o cromógeno que produce productos
fluorescentes azules, verdes y rojos como resto detectable.
18. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 14-17, en el que al menos un
sustrato se selecciona del grupo que consiste en sal
5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato
de disodio; sal
9H-(1,3-dicloro-9,9-dimetilacridina-2-ona-7-il)-fosfato
de amonio; sal fluoresceina-difosfato de
tetraamonio; un derivado demetilumbeliferilo tal como fosfato de
6,8-difluoro-4-metilumbeliferilo,
sal trihidrato de
4-metilumbeliferil-fosfato de
diciclohexilamonio, ácido libre de fosfato de
4-metilumbeliferilo; sal
4-metilumbeliferilfosfato de dilitio,
4-metilumbeliferil-\beta-N-acetilglucosamida
y fosfato de troflurometilumbeliferilo, sales de fosfato de
4-nitrofenilo y fosfato de resorufina.
19. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 14-18, en el que el resto
detectable es detectable en una cantidad de como máximo 100
picomoles, preferentemente como máximo de 50 picomoles, más
preferentemente como máximo de 20 picomoles e incluso más
preferentemente como máximo de 10 picomoles y del modo más
preferente de como máximo 1 picomol.
20. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones preferentes, en el que se usan al menos dos
sustratos que producen restos detectables que proporcionan señales
que pueden combinarse en un valor único de señal medida.
21. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-20, en el que se usan al menos
dos sustratos que producen restos detectables que proporcionan
señales distinguibles.
22. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que los contaminantes son
microorganismos viables.
23. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la cantidad de sustrato en
el vehículo líquido no limita la velocidad de producción del resto
detectable.
24. El procedimiento de la reivindicación 23, en
el que la velocidad de producción del resto detectable es una
función de la cantidad de contaminantes en el volumen conocido del
medio.
25. El procedimiento según la reivindicación 24,
en el que la función es linear.
26. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que varios volúmenes conocidos
diferentes del medio se pasan cada uno a través de un filtro en la
etapa a, para asegurar que al menos uno de los volúmenes contiene un
número adecuado de contaminantes.
27. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el filtro es parte de un
dispositivo de filtro estéril cerrado.
28. El procedimiento según la reivindicación 27,
en el que el dispositivo de filtro estéril cerrado es
desechable.
29. El procedimiento según la reivindicación 27
ó 28, en el que el dispositivo de filtro estéril cerrado integra al
filtro y a una carcasa de filtro en una unidad estructural cerrada
irreversible.
30. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 27-29, en el que el eje transversal
más largo del dispositivo de filtro estéril cerrado no excede los 10
cm de longitud.
31. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la interacción de la etapa c
se concluye interrumpiendo el contacto entre el sustrato y los
contaminantes.
32. El procedimiento según la reivindicación 31,
en el que la interrupción se logra evacuando el vehículo líquido
desde el dispositivo de filtro mientras se retienen los
contaminantes en el dispositivo de filtro.
33. El procedimiento según la reivindicación 32,
en el que el vehículo líquido se evacua desde el dispositivo de
filtro en la dirección que va desde el lado influente al efluente
del filtro.
34. El procedimiento según la reivindicación 33,
en el que la evacuación se logra aplicando una presión elevada sobre
el lado influente del filtro o aplicando una presión reducida sobre
el lado efluente del filtro.
35. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-30, en el que la interacción de
la etapa c se concluye sobre el filtro o en el que la interacción no
se concluye.
36. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, que comprende, después de la etapa c,
una etapa d) posterior que implica detectar, cuantitativa o
cualitativamente, el resto detectable en el vehículo líquido y
correlacionar la detección del resto con la cantidad o presencia de
contaminantes en la muestra.
37. El procedimiento según la reivindicación 36,
en el que la detección de la etapa d se realiza midiendo la
característica de fluorescencia del resto detectable.
38. El procedimiento según la reivindicación 37,
en el que la fluorescencia se mide en la etapa d directamente sobre
el vehículo líquido sin una interrupción del contacto entre el
vehículo líquido y los contaminantes.
39. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 36-38, en el que la correlación de
la etapa d comprende el uso de una curva estándar predeterminada que
expresa la relación entre la cantidad de contaminantes y la cantidad
de resto detectable en condiciones estándar.
40. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 36-39, en el que la detección se
realiza en un sistema de microvaloración.
41. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que los contaminantes se someten
a una influencia potenciadora de la señal, bien antes de la etapa a
o bien en la etapa b.
42. El procedimiento según la reivindicación 41,
en el que la influencia potenciadora de la señal aumenta la
sensitividad total en una detección subsiguiente o favorece la
detección subsiguiente de tipos específicos de contaminantes, o
reduce la detección de tipos específicos de contaminantes.
43. El procedimiento según la reivindicación 41,
en el que la influencia potenciadota de la señal está seleccionada
de una sustancia potenciadora enzimática, una temperatura selectiva
o un intervalo de temperatura selectivo, un pH selectivo, una
concentración de sal selectiva, un potenciador del crecimiento no
selectivo y una sustancia potenciadora del crecimiento
selectiva.
44. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la etapa a está precedida
por una incubación del medio.
45. El procedimiento según la reivindicación 44,
en el que la incubación implica
- el tratamiento con una sustancia inductora de
enzimas potenciando, por lo tanto, la detección del resto detectable
y/o
- someter al medio a una sustancia selectiva
para levadura, hongos o bacterias y/o
- someter al medio a un potenciador de
crecimiento no selectivo para microorganismos y/o
- someter al medio a una sustancia capaz de
extraer enzimas celulares.
46. Un kit para determinar contaminantes en un
medio, comprendiendo el kit
- al menos un dispositivo de filtro que
comprende un filtro con un tamaño de poro lo suficientemente pequeño
como para retener los contaminantes en el lado influente del
filtro,
- medios para hacer pasar un volumen conocido de
medio a través del filtro,
- al menos un agente que, después de la
interacción con los contaminantes, liberará un resto detectable,
cuya cantidad puede correlacionarse con la cantidad de contaminantes
que han interactuado con el agente e
- instrucciones que definan las etapas para a)
obtener un volumen conocido y hacerlo pasar a través del dispositivo
de filtro estéril, b) poner en contacto el lado influente del filtro
con el agente, c) permitir que el agente interactúe con
contaminantes que puedan estar en el lado influente del filtro y d)
detectar cuantitativamente el resto detectable.
47. Uso de un dispositivo de filtro estéril
cerrado tal como un recipiente de reacción para una reacción entre
contaminantes retenidos en el dispositivo y un sustrato que libera
un resto detectable cuando se pone en contacto con los
contaminantes.
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|---|---|---|---|
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| ES2364561T5 ES2364561T5 (es) | 2017-02-03 |
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| Publication number | Publication date |
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